RU2004105155A - Способ получения ацилированных полипептидов - Google Patents

Способ получения ацилированных полипептидов Download PDF

Info

Publication number
RU2004105155A
RU2004105155A RU2004105155/13A RU2004105155A RU2004105155A RU 2004105155 A RU2004105155 A RU 2004105155A RU 2004105155/13 A RU2004105155/13 A RU 2004105155/13A RU 2004105155 A RU2004105155 A RU 2004105155A RU 2004105155 A RU2004105155 A RU 2004105155A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
glu
lys
seq
ala
asp
Prior art date
Application number
RU2004105155/13A
Other languages
English (en)
Inventor
Иван ДИЕРС (DK)
Иван ДИЕРС
Пер БАЛЬШМИТТ (DK)
Пер БАЛЬШМИТТ
Ян МАРКУССЕН (DK)
Ян Маркуссен
Иб ЙОНАССЕН (DK)
Иб ЙОНАССЕН
Михи ЭГЕЛЬ-МИТАНИ (DK)
Михи ЭГЕЛЬ-МИТАНИ
Томас Берглум КЬЕЛЛЬСЕН (DK)
Томас Берглум КЬЕЛЛЬСЕН
Original Assignee
Ново Нордиск А/С (DK)
Ново Нордиск А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ново Нордиск А/С (DK), Ново Нордиск А/С filed Critical Ново Нордиск А/С (DK)
Publication of RU2004105155A publication Critical patent/RU2004105155A/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
    • C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/006—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length of peptides containing derivatised side chain amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Claims (63)

1. Способ получения полипептида, включающего, по крайней мере, один остаток лизина, ацилированный в ε-аминогруппе, который включает следующие стадии:
(i) культивирование клетки-хозяина, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую молекулу-предшественник указанного полипептида, в условиях, приемлемых для экспрессии указанной молекулы-предшественника, включающей требуемый полипептид и N-концевой удлиняющий сегмент, отщепляемый от требуемого полипептида в лизиновом сайте расщепления;
(ii) отделение экспрессированной молекулы-предшественника от культурального бульона;
(iii) избирательное ацилирование ε-аминогруппы, по крайней мере, одного остатка лизина в требуемом полипептиде без ацилирования ε-аминогруппы лизинового сайта расщепления в N-концевом удлиняющем сегменте;
(iv) удаление N-концевого удлиняющего сегмента из ацилированной молекулы-предшественника ферментативным гидролизом и
(v) выделение ацилированного полипептида приемлемыми способами.
2. Способ по п.1, в котором N-концевой удлиняющий сегмент содержит до 15 аминокислот.
3. Способ по п.1, в котором N-концевой удлиняющий сегмент имеет длину, равную 3-15, 3-12, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6 или 3-5 аминокислотам.
4. Способ по п.1, в котором полипептид является моноацилированным.
5. Способ по п.1, в котором один или несколько аминокислотных остатков N-концевого удлиняющего сегмента способны образовывать сайт связывания ионного комплекса металла вместе с одним или несколькими аминокислотными остатками N-конца полипептида.
6. Способ по п.5, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает сайт связывания ионов металлов, происходящий из N-конца сывороточного альбумина свиньи или человека.
7. Способ по п.5, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает сайт связывания ионов металлов, происходящий из сайта связывания Zn в металлоэндопептидазах.
8. Способ по п.1, в котором N-концевой удлиняющий сегмент молекулы-предшественника включает, по крайней мере, один отрицательно заряженный аминокислотный остаток, способный образовывать солевой мостик с лизиновым сайтом расщепления, являющимся N-концевым по отношению к полипептиду.
9. Способ по п.8, в котором N-концевой удлиняющий сегмент способен образовывать α-спираль.
10. Способ по п.1, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает сайт связывания Са+2 энтерокиназы, происходящий из трипсиногена.
11. Способ по п.8, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает эукариотический сайт N-гликозилирования.
12. Способ по пп.1-11, в котором требуемый полипептид восприимчив к протеолитическому гидролизу его N-конца, а N-концевой удлиняющий сегмент предотвращает или минимизирует такой протеолитический гидролиз.
13. Способ по п.1, в котором требуемый полипептид имеет Ala или Pro в качестве второго аминокислотного остатка от N-конца.
14. Способ по п.13, в котором требуемый полипептид имеет His в качестве N-концевого аминокислотного остатка.
15. Способ по п.1, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает, по крайней мере, один остаток гистидина.
16. Способ по п.15, в котором один или несколько остатков гистидина в N-концевом удлиняющем сегменте расположены на расстоянии 1-4 остатков от лизинового сайта расщепления.
17. Способ по п.15, в котором N-концевой удлиняющий сегмент выбирают из группы, состоящей из Glu-Glu-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:1); Glu-(Glu-Ala)2-His-Lys (SEQ ID NO:2); Glu-(Glu-Ala)3-His-Lys (SEQ ID NO:3); Glu-Glu-Gly-His-Lys (SEQ ID NO:4); Glu-His-Pro-Lys (SEQ ID NO:5); Glu-Glu-Gly-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:6); Glu-Glu-His-Cys-Lys (SEQ ID NO:7); Glu-Glu-His-His-Lys (SEQ ID NO:8); Glu-His-His-His-Lys (SEQ ID NO:9); Glu-His-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:10); Glu-Gly-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:11); Glu-His-Gly-His-Gly-Lys (SEQ ID NO:12); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Leu-Lys (SEQ ID NO:13); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Ile-Lys (SEQ ID NO:14); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Val-Lys (SEQ ID NO:15); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Met-Lys (SEQ ID NO:16); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Phe-Lys (SEQ ID NO:17); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Tyr-Lys (SEQ ID NO:18); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Trp-Lys (SEQ ID NO:19); Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:24); Glu-Glu-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:30); Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:34); Glu-His-His-Gly-His-Gly-Lys (SEQ ID NO:36); Asp-Ser-His-Lys (SEQ ID NO:37); Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:38); Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:39); Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:40); Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:41); Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:42); Glu-Glu-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:43); Glu-Glu-Glu-Ala-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:44); Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:47); Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:48) и Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:49).
18. Способ по п.8, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает, по крайней мере, один остаток Glu или Asp.
19. Способ по п.18, в котором остатки Glu или Asp расположены на расстоянии 1-5 остатков от лизинового сайта расщепления.
20. Способ по п.18, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает Glu-Glu-последовательность.
21. Способ по п.18, в котором N-концевой удлиняющий сегмент представляет собой Glu-Glu-Ala-Glu-Lys, SEQ ID NO:45; Glu-Glu-Gly-Glu-Pro-Lys, SEQ ID NO:46, и Glu-Glu-Lys.
22. Способ по п.9, в котором N-концевой удлиняющий сегмент выбирают из группы, состоящей из Glu-Glu-Ala-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:29); Glu-Glu-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:30); Leu-Asp-Gly-Arg-Leu-Glu-Ala-Leu-Lys (SEQ ID NO:31); Glu-Glu-Leu-Asp-Gly-Arg-Leu-Glu-Ala-Leu-Lys (SEQ ID NO:32); Glu-Glu-Leu-Asp-Ala-Arg-Leu-Glu-Ala-Leu-Lys (SEQ ID NO:33); Glu-Glu-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:43) и Glu-Glu-Glu-Ala-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:44).
23. Способ по п.11, в котором N-концевой удлиняющий сегмент выбирают из группы, состоящей из Glu-Glu-Gly-Asn-Thr-Thr-Pro-Lys (SEQ ID NO:20); Glu-Glu-Gly-Asn-Glu-Thr-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:21); Glu-Glu-Gly-Asn-Asp-Thr-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:22) и Glu-Glu-Gly-Asn-Thr-Thr-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:23).
24. Способ по п.10, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает последовательность Asp-Asp-Asp-Asp-Lys (SEQ ID NO:26).
25. Способ по п.1, в котором N-концевой удлиняющий сегмент имеет формулу:
Хn---Х1-Lys
где Lys представляет собой сайт расщепления и Хn---Х1 представляет собой пептидную последовательность длиной 2-14 аминокислотных остатка, выполняющую функцию предотвращения или минимизации ацилирования свободной ε-аминогруппы в лизиновом сайте расщепления на стадии (iii) по п.1 и дополнительную функцию защиты экспрессированного полипептида-предшественника от эндопротеолитического гидролиза при условии, что ни один из Х не является Lys и, по крайней мере, один Х является остатком His или Glu, или Asp.
26. Способ по п.25, в котором последовательность Хn---Х1 имеет длину, равную 2-12 аминокислотным остаткам.
27. Способ по п.25, в котором последовательность Хn---Х1 содержит 2-8 аминокислотных остатков, выбираемых из группы, состоящей из His, Glu, Ala, Asp, Gly и Pro.
28. Способ по п.25, в котором последовательность Хn---Х1 содержит 4-10 аминокислотных остатков, выбираемых из группы, состоящей из Glu, Asp, Ala, His, Trp, Tyr, Ile, Val, Met и Phe.
29. Способ по п.25, в котором последовательность Хn---Х1 содержит 5-8 аминокислотных остатков, выбираемых из группы, состоящей из Glu, Asp, Gly, Asn, Thr, Ser и Pro.
30. Способ по п.25, в котором первый и второй остатки Х от N-конца N-концевого удлиняющего сегмента выбирают из группы, состоящей из Glu и Asp.
31. Способ по п.25, в котором последовательность Хn---Х1-Lys выбирают из группы, состоящей из Glu-Glu-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:1); Glu-(Glu-Ala)2-His-Lys (SEQ ID NO:2); Glu-(Glu-Ala)3-His-Lys (SEQ ID NO:3); Glu-Glu-Gly-His-Lys (SEQ ID NO:4); Glu-His-Pro-Lys (SEQ ID NO:5); Glu-Glu-Gly-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:6); Glu-Glu-His-Cys-Lys (SEQ ID NO:7); Glu-Glu-His-His-Lys (SEQ ID NO:8); Glu-His-His-His-Lys (SEQ ID NO:9); Glu-His-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:10); Glu-Gly-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:11); Glu-His-Gly-His-Gly-Lys (SEQ ID NO:12); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Leu-Lys (SEQ ID NO:13); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Ile-Lys (SEQ ID NO:14); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Val-Lys (SEQ ID NO:15); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Met-Lys (SEQ ID NO:16); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Phe-Lys (SEQ ID NO:17); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Tyr-Lys (SEQ ID NO:18); Glu-Glu-Ala-His-Glu-Trp-Lys (SEQ ID NO:19); Glu-Glu-Gly-Asn-Thr-Thr-Pro-Lys (SEQ ID NO:20); Glu-Glu-Gly-Asn-Glu-Thr-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:21); Glu-Glu-Gly-Asn-Asp-Thr-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:22); Glu-Glu-Gly-Asn-Thr-Thr-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:23); Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:24); Glu-Glu-Lys; Asp-Asp-Asp-Asp-Lys (SEQ ID NO:26); Glu-Glu-Ala-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:29); Glu-Glu-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:30); Leu-Asp-Gly-Arg-Leu-Glu-Ala-Leu-Lys (SEQ ID NO:31); Glu-Glu-Leu-Asp-Gly-Arg-Leu-Glu-Ala-Leu-Lys (SEQ ID NO:32); Glu-Glu-Leu-Asp-Ala-Arg-Leu-Glu-Ala-Leu-Lys (SEQ ID NO:33); Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:34); Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:35); Glu-His-His-Gly-His-Gly-Lys (SEQ ID NO:36); Asp-Ser-His-Lys (SEQ ID NO:37); Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:38); Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:39); Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:40); Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:41); Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:42); Glu-Glu-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:43); Glu-Glu-Glu-Ala-Trp-His-Trp-Leu-Lys (SEQ ID NO:44); Glu-Glu-Ala-Glu-Lys (SEQ ID NO:45); Glu-Glu-Gly-Glu-Pro-Lys (SEQ ID NO:46); Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:47); Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:48); Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:49).
32. Способ по п.7, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает последовательность His-Z1-Z2-Lys (SEQ ID NO:51), где Z1 представляет собой Glu, Asp, Asn, Gln, Ser, Thr, Gly, Leu, Ile, Val, Met, Phe или Tyr, а Z2 представляет собой Leu, Ile, Val, Met, Phe, Tyr, Trp или Cys.
33. Способ по п.32, в котором Z1 представляет собой Glu или Asp, а Z2 представляет собой Leu, Ile, Val, Met, Phe, Tyr, Trp или Cys.
34. Способ по п.6, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает последовательность Asp-X-His-Lys (SEQ ID NO:50), где Х представляет собой Ala, Thr или Ser.
35. Способ по п.34, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает последовательность Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:34) или Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:35).
36. Способ по п.35, в котором N-концевой удлиняющий сегмент выбирают из группы, состоящей из Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:38); Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:41); Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:40); Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Thr-His-Lys (SEQ ID NO:39); Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:24); Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:47); Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:48) и Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Gln-Asp-Ala-His-Lys (SEQ ID NO:49).
37. Способ по п.1, в котором требуемый полипептид относится к семейству пептидов GRF (рилизинг-фактора гормона роста), имеющих остаток His или Tyr в положении N-конца и остаток Ser, Ala или Gly в следующем положении.
38. Способ по п.37, в котором требуемый полипептид представляет собой GLP-1 или GLP-2, либо аналог или производное GLP-1 или GLP-2.
39. Способ по п.37, в котором указанный полипептид представляет собой GLH-1(7-37), ацилированный в положении Lys26 и Lys34.
40. Способ по п.37, в которой аналог GLP-1 представляет собой Arg34GLP1(7-37), ацилированный в положении Lys26.
41. Способ по п.1, в котором ферментативный гидролиз на стадии (iv) выполняют, используя лизинэндопептидазу, такую как протеаза I Achromobacter lyticus.
42. Способ по п.1, в котором клетка-хозяин является дрожжевой клеткой.
43. Способ по п.42, в котором дрожжевая клетка является клеткой Saccharomyces cerevisiae.
44. Способ по п.43, в котором дрожжевая клетка является клеткой ΔYPS1.
45. Способ по п.1, в котором стадию ацилирования (iii) выполняют в органическом растворителе или в смеси воды и органического растворителя в присутствии ионов металла.
46. Способ по п.45, в котором ион металла представляет собой Zn, Cu, Co, Ni, Fe, Mg, Mn или Са.
47. Способ по п.45, в котором органический растворитель представляет собой CH3CN или NMP (N-метилпирролидон).
48. Способ по п.45, в котором стадию ацилирования выполняют при рН от 7 до 12.
49. Способ по п.47, в котором показатель рН находится в пределах от 8 до 11,5 или от 9,0 до 10,5.
50. Способ по п.45, в котором стадию ацилирования выполняют при температуре от минус 5 до 35°С.
51. Способ по п.50, в котором температура находится в интервале от 15 до 25°С.
52. Полипептидный предшественник для требуемого полипептида формулы
N-концевой удлиняющий сегмент-Lys-Z3-Z4-*полипептид*
где Lys представляет собой сайт расщепления, N-концевой удлиняющий сегмент имеет 2-14 аминокислотных остатков и способен предотвращать или минимизировать ацилирование лизинового сайта расщепления и защищать предшественник полипептида от протеолитического гидролиза в процессе ферментации, Z3 представляет собой His или Tyr и является N-концевым аминокислотным остатком в требуемом полипептиде, Z4 представляет собой следующий аминокислотный остаток от N-конца требуемого полипептида и является Ala, Ser или Gly, и *полипептид* представляет собой остальную последовательность требуемого полипептида.
53. Полипептидный предшественник по п.52, в котором N-концевая последовательность способна образовывать сайт связывания ионного комплекса металла вместе с одним или несколькими аминокислотными остатками N-конца полипептида.
54. Полипептидный предшественник по п.52, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает сайт связывания ионов металлов, происходящих из N-конца альбумина.
55. Полипептидный предшественник по п.52, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает сайт связывания ионов металлов, происходящий из сайта связывания Zn в металлоэндопептидазах.
56. Полипептидный предшественник по п.52, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает, по крайней мере, один аминокислотный остаток, способный образовывать солевой мостик с лизиновым сайтом расщепления.
57. Полипептидный предшественник по п.56, в котором N-концевой удлиняющий сегмент способен образовывать α-спираль.
58. Полипептидный предшественник по п.56, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает эукариотический сайт гликозилирования.
59. Полипептидный предшественник по п.52, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает, по крайней мере, один остаток гистидина.
60. Полипептидный предшественник по п.52, в котором N-концевой удлиняющий сегмент включает, по крайней мере, один остаток Glu или Asp.
61. Полипептидный предшественник по п.60, в котором требуемый полипептид представляет собой GLP-1 или GLP-2, либо аналог или производное GLP-1 или GLP-2.
62. Полипептидный предшественник по п.61, в котором полипептид представляет собой GLP-1(7-37), ацилированный в положении Lys26 и Lys34.
63. Полипептидный предшественник по п.61, в котором аналог GLP-1 представляет собой Arg34GLP1(7-37), ацилированный в положении Lys26.
RU2004105155/13A 2001-07-24 2002-07-18 Способ получения ацилированных полипептидов RU2004105155A (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200101141 2001-07-24
DKPA200101141 2001-07-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2004105155A true RU2004105155A (ru) 2005-04-20

Family

ID=8160637

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004105155/13A RU2004105155A (ru) 2001-07-24 2002-07-18 Способ получения ацилированных полипептидов

Country Status (15)

Country Link
EP (1) EP1421103B1 (ru)
JP (1) JP4386722B2 (ru)
KR (1) KR20040019361A (ru)
CN (1) CN1558912A (ru)
AT (1) ATE411337T1 (ru)
AU (1) AU2002355161A1 (ru)
BR (1) BR0211346A (ru)
CA (1) CA2452735A1 (ru)
DE (1) DE60229403D1 (ru)
ES (1) ES2316588T3 (ru)
HU (1) HUP0500057A3 (ru)
IL (1) IL159623A0 (ru)
PL (1) PL367687A1 (ru)
RU (1) RU2004105155A (ru)
WO (1) WO2003010186A2 (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005047508A1 (en) 2003-11-14 2005-05-26 Novo Nordisk A/S Processes for making acylated insulin
US20100317057A1 (en) * 2007-12-28 2010-12-16 Novo Nordisk A/S Semi-recombinant preparation of glp-1 analogues
ES2561208T3 (es) 2008-09-12 2016-02-25 Novo Nordisk A/S Método de acilación de un péptido o una proteína
CN107881187A (zh) * 2017-11-20 2018-04-06 珠海联邦制药股份有限公司 将大肠杆菌表达的融合蛋白转化为利拉鲁肽的制备方法及应用
CN111187760B (zh) * 2020-02-10 2022-09-13 中国海洋大学 一种具有酰基转移功能的酶及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6011007A (en) * 1993-09-17 2000-01-04 Novo Nordisk A/S Acylated insulin
US5646242A (en) * 1994-11-17 1997-07-08 Eli Lilly And Company Selective acylation of epsilon-amino groups
US5905140A (en) * 1996-07-11 1999-05-18 Novo Nordisk A/S, Novo Alle Selective acylation method
ATE317443T1 (de) * 1996-12-20 2006-02-15 Novo Nordisk As N-terminal verlängerte proteine exprimiert in hefe
CN1344248A (zh) * 1999-03-17 2002-04-10 诺沃挪第克公司 肽的酰化方法和新酰化剂

Also Published As

Publication number Publication date
KR20040019361A (ko) 2004-03-05
JP4386722B2 (ja) 2009-12-16
AU2002355161A1 (en) 2003-02-17
EP1421103B1 (en) 2008-10-15
PL367687A1 (en) 2005-03-07
CA2452735A1 (en) 2003-02-06
ES2316588T3 (es) 2009-04-16
IL159623A0 (en) 2004-06-01
WO2003010186A2 (en) 2003-02-06
BR0211346A (pt) 2004-09-21
CN1558912A (zh) 2004-12-29
DE60229403D1 (de) 2008-11-27
HUP0500057A3 (en) 2006-01-30
WO2003010186A3 (en) 2004-03-25
ATE411337T1 (de) 2008-10-15
JP2005504527A (ja) 2005-02-17
EP1421103A2 (en) 2004-05-26
HUP0500057A2 (hu) 2005-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7402565B2 (en) Processes for making acylated insulin
CA2443365A1 (en) Methods for the recombinant production of antifusogenic peptides
CA2392840A1 (en) Method for making insulin precursors and insulin precursor analogs
US8835132B2 (en) Method for making acylated polypeptides
KR100959549B1 (ko) 글루카곤 유사 펩타이드 1 glp-1(7-36)과 glp-1 유사체를 생산하는 방법
CA2174517C (en) Receptor specific atrial natriuretic peptides
NZ338004A (en) Process for producing peptide with glucagon like peptide-1 (GLP-1) activity by incorporating a protective and helper component to facilitate purification
US20100145033A1 (en) Novel orthogonal process for purification of recombinant human parathyroid hormone (rhpth) (1-34)
WO1995003405A2 (en) Enzymatic method for modification of recombinant polypeptides
AU2009200783B2 (en) Peptide amidation process
Inouye et al. Semisynthesis and properties of some insulin analogs
WO2010016069A1 (en) A process for preparation of insulin compounds
US7572884B2 (en) Method for making acylated polypeptides
MX2009000275A (es) Metodo para preparar analogos de insulina con extremo de cadena b dibasico.
RU2004105155A (ru) Способ получения ацилированных полипептидов
US6337194B1 (en) Method for the preparation of insulin by cleavage of a fusion protein and fusion proteins containing insulin A and B chains
CN114380903B (zh) 一种胰岛素或其类似物前体
CA2198966A1 (en) Method for cleaving chimeric protein using processing enzyme
EP0490249B1 (en) Process for the enzymatic preparation of GRF(1-44)NH2
JP2005503141A (ja) アシル化ポリペプチドを作出するための方法
Kreil The posttranslational processing of the precursors of secreted peptides
Bodenmuller Isolation and structural analysis of a new neuropeptide, the head activator
WO2005060384B1 (en) Constructs for homogenously processed preparations of beta site app-cleaving enzyme
MXPA98010361A (en) Exandin analogues, processes for preparation and medications that contains
JPH0654684A (ja) リパーゼ

Legal Events

Date Code Title Description
FA93 Acknowledgement of application withdrawn (no request for examination)

Effective date: 20050927