RU2003133652A - Способ детекции микроорганизмов с помощью изотермической реакции амплификации-ера (экзонуклеазно-полимеразная амплификация (exonuclease- polimerase amplification) - Google Patents

Claims (1)

1. Способ детекции микроорганизмов с помощью изотермической реакции амплификации, включающий подготовку одноцепочечной пробы исследуемой ДНК, внесение указанной пробы в реакционную смесь, состоящую из буферной системы, дезоксирибоолигонуклеотидных праймеров, полимеразы и dNTPs, инкубацию реакционной смеси при температуре 37°С в термостате в течение 4-6 ч и анализ продуктов реакции методом гель-электрофореза на предмет выявления специфичного для определенного микроорганизма амплифицированного фрагмента, отличающийся тем, что осуществляют изотермическую реакцию амплификации, обозначаемую как ЕРА, которая предусматривает, что в качестве dNTPs применяют α-S-dNTPs, в реакционную смесь добавляют экзонуклеазу Т7 и используют четыре дезоксирибоолигонуклеотидных праймера “А”, “а”, и “В”, “b”, где праймер “а” отличается от “А”, а праймер “b” - от “В” наличием дополнительных нуклеотидов на их 3'-конце, причем праймеры “А” и “а” идентичны 5'-концевой последовательности смысловой цепи исследуемой нуклеиновой кислоты, а “В” и “b” комплементарны ее 3'-концевой последовательности.