RU2002110116A - Гибридные белки, оптимизированные по субъединицам - Google Patents

Claims (19)

1. Способ получения гибридного белка, имеющего первый компонент, гибридизованный со вторым компонентом, включающий выбор первого компонента и второго компонента таким образом, что первый компонент, или гибридный белок, собирается в комплекс, имеющий число субъединиц, которое оптимизирует активность мультимерной формы второго компонента; получение гибридного белка; и создание возможности для сборки гибридного белка в комплекс, имеющий число субъединиц, которое оптимизирует активность мультимерной формы второго компонента.

2. Способ по п.1, где первый компонент, или гибридный белок, собирается в форму, имеющую такое же число субъединиц, какое присутствует в активной форме второго компонента.

3. Способ по п.1, где первый компонент включает субъединицу Ig.

4. Способ по п.1, где второй компонент отличается от субъединицы Ig.

5. Способ по п.1, где первый компонент модифицируют по сайту, который модулирует образование или сохранение мультимера из субъединиц.

6. Способ по п.1, где первый компонент образует димер.

7. Способ по п.1, где первый компонент включает Ig субъединицу, модифицированную так, чтобы ингибировать образование мультимерной формы.

8. Способ по п.7, где модификация представляет собой замену, вставку или делецию одного или нескольких аминокислотных остатков, и приводит к получению субъединицы, которая не образует мультимер, или которая образует мультимер более низкого порядка, чем в норме.

9. Способ по п.7, где модификации подвергается шарнирный участок иммуноглобулина.

10. Способ по п.7, где модификация приводит к получению димерной структуры Ig.

11. Способ по п.10, где димер включает гибрид тяжелой цепи и гибрид легкой цепи.

12. Способ по п.1, где второй компонент включает бета-глюкуронидазу.

13. Способ по п.1, где первый компонент представляет собой тяжелую или легкую цепь иммуноглобулина (Ig), а второй компонент представляет собой гибридный белок человеческой бета-глюкуронидазы.

14. Способ по п.1, где гибридный белок получают в трансгенном животном.

15. Способ получения трансгенно продуцирующегося гибридного белка по п.1, включающий получение молока от трансгенного животного, которое включает трансген, кодирующий гибридный белок, что приводит к экспрессии белок-кодирующей последовательности гибридного белка в клетках эпителия молочной железы и в результате этого к секреции гибридного белка в молоко млекопитающего.

16. Конструкция нуклеиновой кислоты, которая включает

(a) необязательно, изолирующую последовательность;

(b) промотор, например, промотор, характерный для эпителия молочной железы, например, промотор белка молока;

(c) нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальную последовательность, которая может направлять секрецию гибридного белка, например, сигнальную последовательность специфического белка молока или иммуноглобулина;

(d) необязательно, нуклеотидную последовательность, которая кодирует достаточную часть аминоконцевого кодированного района секретируемого белка, например, белка, секретируемого в молоко, или иммуноглобулина, для обеспечения секреции гибридного белка, например, в молоко трансгенного млекопитающего;

(e) одну или несколько нуклеотидных последовательностей, которые кодируют гибридный белок, например, гибридный белок, описанный в данном документе; и

(f) необязательно, 3’-нетранслируемый участок специфического гена эпителия молочной железы, например, гена молочного белка.

17. Конструкция из нуклеиновой кислоты, которая включает молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гибридный белок по п.1.

18. Гибридный белок, описанный в п.1.

19. Трансгенное животное, которое включает трансген, кодирующий гибридный белок по п.1.