RU2001132075A - Способ повышенной стабилизации белков и получения клеточных линий, применимых для получения таких стабилизированных белков - Google Patents
Способ повышенной стабилизации белков и получения клеточных линий, применимых для получения таких стабилизированных белковInfo
- Publication number
- RU2001132075A RU2001132075A RU2001132075/13A RU2001132075A RU2001132075A RU 2001132075 A RU2001132075 A RU 2001132075A RU 2001132075/13 A RU2001132075/13 A RU 2001132075/13A RU 2001132075 A RU2001132075 A RU 2001132075A RU 2001132075 A RU2001132075 A RU 2001132075A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cell line
- stress
- cells
- eukaryotic
- expression vector
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 4
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 title 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims 51
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims 48
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims 25
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims 25
- 230000003612 virological Effects 0.000 claims 17
- 239000000047 product Substances 0.000 claims 16
- 230000035882 stress Effects 0.000 claims 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 14
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 claims 11
- 230000001965 increased Effects 0.000 claims 11
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims 8
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 claims 8
- 230000002068 genetic Effects 0.000 claims 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 6
- 101710011585 GRPEL1 Proteins 0.000 claims 5
- 102100019137 GRPEL1 Human genes 0.000 claims 5
- 101710013836 HSPD1 Proteins 0.000 claims 5
- 102100003681 HSPD1 Human genes 0.000 claims 5
- 101710013938 HSPE1 Proteins 0.000 claims 5
- 102100011903 HSPE1 Human genes 0.000 claims 5
- 101710006465 MOD-E Proteins 0.000 claims 5
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims 5
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 claims 5
- 108060003523 dnaK Proteins 0.000 claims 5
- 101710025516 hsp90a.1 Proteins 0.000 claims 5
- 101700015965 hspD Proteins 0.000 claims 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims 4
- 108060003412 GRP Proteins 0.000 claims 3
- 108060008763 UCMA Proteins 0.000 claims 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 claims 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 claims 3
- 230000002458 infectious Effects 0.000 claims 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims 3
- 230000002269 spontaneous Effects 0.000 claims 3
- 101710023137 HSP90B1 Proteins 0.000 claims 2
- 101710006403 HSPA5 Proteins 0.000 claims 2
- 210000003501 Vero Cells Anatomy 0.000 claims 2
- 210000002845 Virion Anatomy 0.000 claims 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims 2
- 239000001963 growth media Substances 0.000 claims 2
- 230000000644 propagated Effects 0.000 claims 2
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 claims 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 claims 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 claims 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 claims 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 claims 1
- 210000000941 Bile Anatomy 0.000 claims 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims 1
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 claims 1
- 102000006303 Chaperonin 60 Human genes 0.000 claims 1
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 claims 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 claims 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims 1
- 229940088597 Hormone Drugs 0.000 claims 1
- 206010024324 Leukaemias Diseases 0.000 claims 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 claims 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 claims 1
- 108009000578 Oxidative Stress Proteins 0.000 claims 1
- 229940067631 Phospholipids Drugs 0.000 claims 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 claims 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 claims 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 claims 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 1
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims 1
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 claims 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims 1
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 claims 1
- 108060002309 dnaJ Proteins 0.000 claims 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims 1
- 230000001605 fetal Effects 0.000 claims 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 claims 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 claims 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 1
- 201000000582 retinoblastoma Diseases 0.000 claims 1
- 230000001177 retroviral Effects 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 claims 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 claims 1
- -1 vaccines Proteins 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 claims 1
- 238000010451 viral insertion Methods 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N β-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 claims 1
Claims (68)
1. Способ увеличенного получения вирусного агента, включающий следующие стадии: отбор и размножение пермиссивных эукариотических клеток, временное подвергание стрессу указанных клеток в течение периода времени для получения подвергнутых стрессу эукариотических клеток, проявляющих увеличенное продуцирование по меньшей мере одного стрессового белка, введение исходного вирусного материала для инфицирования указанных подвергнутых стрессу эукариотических клеток, инкубирование указанных подвергнутых стрессу эукариотических клеток; и сбор полученного вирусного агента, продуцируемого указанными инфицированными подвергнутыми стрессу эукариотическими клетками.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная стадия временного подвергания стрессу индуцируется стрессом, выбранным из группы, состоящей из теплового стресса, химического стресса, стресса окислительного уровня, модификации питания и стресса токсичности.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную стадию временного подвергания стрессу указанных клеток осуществляют подверганием указанных клеток стрессу при 43°С в отсутствие CO2.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную стадию временного подвергания стрессу указанных клеток осуществляют в течение периода времени между приблизительно 1 и 5 ч.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную стадию временного подвергания стрессу указанных клеток осуществляют для клеток Vero в течение периода времени между приблизительно 1 и 3 ч при приблизительно 43°С с приблизительно 0% CO2.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные стрессовые белки выбраны из группы, состоящей из hsp27, hsp40, hsp60, hsp70, hsp72, hsp73, hsp90, GroEL, GroES, GrpE, grp 78, grp 94, DnaJ и Dnak.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные пермиссивные эукариотические клетки являются клетками Vero.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный исходный вирусный материал вводят при множественности инфицирования между 0,001 и 1000 вирионов на клетку.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанный исходный вирусный материал вводят при множественности инфицирования между 1 и 4 вирионами на клетку.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную стадию введения исходного вирусного материала осуществляют в течение периода до приблизительно 24 ч после указанной стадии временного подвергания стрессу указанных клеток.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанную стадию введения исходного вирусного материала осуществляют сразу же после временного подверганию стрессу указанных клеток.
12. Способ по п.1, отличающийся тем, что полученный вирусный агент собирают приблизительно через 1-21 дня после инфицирования.
13. Способ по п.1, отличающийся тем, что полученный вирусный агент собирают приблизительно через 5 дней после инфицирования.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что оптимальные условия для сбора полученного вирусного агента определяют измерением титра вируса как функции от времени сбора.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные вирусные агенты выбраны из группы, состоящей из вируса чумы собак, вируса чумы норки, вируса кори человека, вируса бешенства, парврвируса, агента Марека, ВИЧ, HTLV, HSV, коронавируса и вируса коровьего лейкоза.
16. Способ получения клеточных линий, проявляющих постоянную генетическую модификацию, включающий следующие стадии: отбор и размножение пермиссивных эукариотических клеток, введение реагента трансфекции в указанные пермиссивные эукариотические клетки для получения трансфецированных эукариотических клеток, инкубирование указанных трансфецированных эукариотических клеток, и отбор из указанных трансфецированных эукариотических клеток по меньшей мере одной первой клеточной линии, проявляющий высокий выход белка, экспрессируемого в результате трансфекции указанным реагентом трансфекции.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что, по меньшей мере, одну вторую клеточную линию получают из по меньшей мере одной первой клеточной линии отбором части указанной первой клеточной линии, проявляющей спонтанную рекомбинацию экспрессирующего вектора стрессового белка в ДНК хозяина.
18. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный реагент трансфекции представляет собой реагент трансфекции ДНК.
19. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный реагент трансфекции образуется из экспрессирующего вектора стрессового белка и, по меньшей мере, одного липида или фосфолипида.
20. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный реагент трансфекции имеет концентрацию приблизительно 0,01-100 мкг вектора на 104-106 клеток-мишеней.
21. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный экспрессирующий вектор стрессового белка выбран из группы, состоящей из вируса, космиды, плазмиды, фага, транспозона и другой нуклеиновой кислоты, которая способна встраиваться в эукариотическую клеточную ДНК.
22. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанный липид или фосфолипид включает липид, выбранный из группы, состоящей из катионных липидов и фосфолипидов.
23. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанный липид или фосфолипид включает диолеоилфосфатидилэтаноламин.
24. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанные трансфецированные эукариотические клетки инкубируют в течение периода времени приблизительно 10-60 мин.
25. Способ по п.16, дополнительно включающий стадии удаления супернатанта из указанных трансфецированных эукариотических клеток и добавления свежей культуральной среды и дополнительного инкубирования указанных трансфецированных эукариотических клеток.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанная свежая культуральная среда является фетальной телячьей сывороткой в концентрации приблизительно 10% об./об.
27. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанное дополнительное инкубирование проводят в течение нескольких часов.
28. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанную стадию введения реагента трансфекции повторяют.
29. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанный экспрессирующий вектор стрессового белка выбран из группы, состоящей из hsp70, hsp72, hsp73, hsp90, GroEL, GroES, GrpE, grp 78, grp 94, DnaJ и Dnak.
30. Способ получения пермиссивных эукариотических клеточных линий, включающий следующие стадии: встраивание экспрессирующего вектора стрессового белка в непермиссивную эукариотическую клеточную линию для образования по меньшей мере одной пермиссивной эукариотической клеточной линии; и отбор по меньшей мере одной первой клеточной линии из указанной пермиссивной эукариотической клеточной линии.
31. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанную по меньшей мере одну первую выбранную клеточную линию используют для получения вирусного агента, причем указанный способ дополнительно включает следующие стадии: введение инфекционного материала в указанную выбранную клеточную линию для получения по меньшей мере одной инфицированной пермиссивной эукариотической клеточной линии, инкубирование указанной по меньшей мере одной инфицированной клеточной линии, и сбора по меньшей мере одного полученного вирусного агента из указанной инфицированной клеточной линии.
32. Способ по п.31, отличающийся тем, что указанное получение проводят для обнаружения по меньшей мере одного неизвестного вирусного агента.
33. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанную непермиссивную эукариотическую клеточную линию выбирают из группы, состоящей из клеточных линий нейробластомы, астроцитомы и ретинобластомы.
34. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная стадия встраивания осуществляется трансфекцией.
35. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанный экспрессирующий вектор стрессового белка выбран из группы, состоящей из hsp70, hsp72, hsp73, hsp90, GroEL, GroES, GrpE, grp 78, grp 94, DnaJ и Dnak.
36. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна пермиссивная эукариотическая клеточная линия является рекомбинантной в отношении указанного экспрессирующего вектора стрессового белка.
37. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна пермиссивная эукариотическая клеточная линия является клональной в отношении указанного экспрессирующего вектора стрессового белка.
38. Способ по п.31, отличающийся тем, что указанный инфекционный материал является потрохами животного происхождения, содержащими инфекционный агент.
39. Способ увеличения выхода функционального рекомбинантного продукта, где генетический материал был предварительно введен в прокариотическую клеточную линию для образования указанного рекомбинантного продукта, включающий следующие стадии: встраивание по меньшей мере одного экспрессирующего вектора стрессового белка в указанную прокариотическую клеточную линию таким образом, чтобы образовать модифицированную клеточную линию, и отбора из указанной модифицированной клеточной линии по меньшей мере одной первой клеточной линии, проявляющей увеличенный выход желательного функционального рекомбинантного продукта.
40. Способ по п.39, отличающийся тем, что по меньшей мере одну вторую клеточную линию получают из указанной первой клеточной линии отбором части указанной первой клеточной линии, проявляющей спонтанную рекомбинацию экспрессирующего вектора стрессового белка в ДНК хозяина.
41. Способ по п.39, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один экспрессирующий вектор стрессового белка включает по меньшей мере один индуцибельный промотор.
42. Способ по п.41, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор выбран из группы, состоящей из промотора β-галактозы, ретровирусных чувствительных к стероидам промоторов и индуцибельных промоторов тяжелых металлов.
43. Способ по п.39, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один экспрессирующий вектор стрессового белка включает конститутивный промотор.
44. Способ по п.39, отличающийся тем, что указанную стадию встраивания осуществляют способом, выбранным из группы, состоящей из трансфекции, электропорации и способа с использованием вирусного инсерционного вектора.
45. Способ по п.39, отличающийся тем, что указанный экспрессирующий вектор стрессового белка выбран из группы, состоящей из hsp70, hsp72, hsp73, hsp90, GroEL, GroES, GrpE, grp78, grp94, DnaJ и Dnak.
46. Способ по п.39, отличающийся тем, что прокариотическая клеточная линия является линией Escherichia coli.
47. Способ по п.39, отличающийся тем, что по меньшей мере одну вторую клеточную линию получают из указанной первой клеточной линии отбором части указанной первой клеточной линии, проявляющей эписомное встраивание экспрессирующего вектора стрессового белка в хозяина.
48. Способ увеличения выхода функционального рекомбинантного продукта, где генетический материал, кодирующий такой продукт, вводят в прокариотическую клеточную линию, проявляющую увеличенную экспрессию стрессовых белков.
49. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанная экспрессия является индуцибельной.
50. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанная прокариотическая клеточная линия включает экспрессирующий вектор, который включает по меньшей мере один индуцибельный промотор.
51. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанная экспрессия является конститутивной.
52. Способ по п.48, отличающийся тем, что указанная прокариотическая клеточная линия включает экспрессирующий вектор, который включает по меньшей мере один конститутивный промотор.
53. Способ увеличения выхода функционального рекомбинантного продукта, включающий следующие стадии: встраивание по меньшей мере одного экспрессирующего вектора стрессового белка в указанную эукариотическую клеточную линию таким образом, чтобы образовать модифицированную клеточную линию; отбор из указанной модифицированной клеточной линии по меньшей мере одной первой клеточной линии, проявляющей увеличенный выход желательного функционального рекомбинантного продукта, причем генетический материал добавляют к указанной эукариотической клеточной линии для образования указанного рекомбинантного продукта.
54. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанная стадия встраивания по меньшей мере одного экспрессирующего вектора стрессового белка в эукариотическую клеточную линию имеет место после того, как указанный генетический материал был добавлен к указанной эукариотической клеточной линии.
55. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанная стадия встраивания по меньшей мере одного экспрессирующего вектора стрессового белка в эукариотическую клеточную линию имеет место перед тем, как указанный генетический материал был добавлен к указанной эукариотической клеточной линии.
56. Способ по п.53, отличающийся тем, что по меньшей мере одну вторую клеточную линию получают из указанной первой клеточной линии отбором части указанной первой клеточной линии, проявляющей спонтанную рекомбинацию экспрессирующего вектора стрессового белка в ДНК хозяина.
57. Способ по п.53, отличающийся там, что указанный экспрессирующий вектор стрессового белка включает по меньшей мере один индуцибельный промотор.
58. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанный экспрессирующий вектор стрессового белка включает конститутивный промотор.
59. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанная эукариотическая клеточная линия выбрана из группы, состоящей из клеточных линий млекопитающего и насекомого.
60. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанный экспрессирующий вектор стрессового белка выбран из группы, состоящей из hsp70, hsp72, hsp73, hsp90, GroEL, GroES, GrpE, grp78, grp94, DnaJ и Dnak.
61. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанный способ используют для получения выходов функциональных рекомбинантных продуктов, выбранных из группы, состоящей из пептидов, белков, диагностических зондов нуклеиновых кислот, вакцин, антигенов, ферментов, гормонов, факторов роста, структурных белков, агентов ингибирования опухолей, антибиотиков, липидов, нуклеиновых кислот, простых углеводов, сложных углеводов, спиртов и растворителей.
62. Вирусный агент, получаемый посредством следующих стадий: отбор и размножение пермиссивных эукариотических клеток, временное подвергание стрессу указанных клеток в течение периода времени для получения подвергнутых стрессу эукариотических клеток, проявляющих увеличенное продуцирование по меньшей мере одного стрессового белка, введение исходного вирусного материала для инфицирования указанных подвергнутых стрессу эукариотических клеток, инкубирование указанных инфицированных подвергнутых стрессу эукариотических клеток, и сбор полученного вирусного агента, продуцируемого указанными инфицированными подвергнутыми стрессу эукариотическими клетками.
63. Клеточная линия, выбранная для проявления постоянной генетической модификации, включающая: пермиссивную эукариотическую клеточную линию, проявляющую высокий выход трансфицированного стрессового белка как результат трансфекции одним или более векторами для экспрессии такого белка.
64. Клеточная линия, проявляющая перманентную генетическую модификацию, полученная посредством следующих стадий: отбор и размножение пермиссивных эукариотических клеток, введение реагента трансфекции в указанные пермиссивные эукариотические клетки для получения трансфецированных эукариотических клеток, инкубирование указанных трансфецированных эукариотических клеток и отбор из указанных трансфицированных эукариотических клеток по меньшей мере одной первой клеточной линии, проявляющей высокий выход стрессового белка как результат указанной трансфекции.
65. Пермиссивная эукариотическая клеточная линия, включающая: непермиссивную эукариотическую клеточную линию, в которую был встроен экспрессирующий вектор стрессового белка.
66. Пермиссивная эукариотическая клеточная линия, полученная посредством следующих стадий: встраивание экспрессирующего вектора стрессового белка в непермиссивную эукариотическую клеточную линию с образованием по меньшей мере одной пермиссивной эукариотической клеточной линии, и отбор указанной пермиссивной эукариотической клеточной линии.
67. Функциональный рекомбинантный продукт, полученный посредством следующих стадий: введение генетического материала в прокариотическую клеточную линию, кодирующую экспрессию указанного рекомбинантного продукта, встраивание по меньшей мере одного экспрессирующего вектора стрессового белка в указанную прокариотическую клеточную линию таким образом, чтобы образовать модифицированную клеточную линию, отбор из указанной модифицированной клеточной линии по меньшей мере одной первой клеточной линии, проявляющей увеличенный выход желательного функционального рекомбинантного продукта, размножение указанной первой клеточной линии, и сбор функционального рекомбинантного продукта, продуцируемого указанной размноженной первой клеточной линией.
68. Функциональный рекомбинантный продукт, полученный посредством следующих стадий: встраивание по меньшей мере одного экспрессирующего вектора стрессового белка в указанную эукариотическую клеточную линию, чтобы образовать модифицированную клеточную линию, отбор из указанной модифицированной клеточной линии по меньшей мере одной первой клеточной линии, проявляющей увеличенный выход желательного функционального рекомбинантного продукта, размножение указанной первой клеточной линии, и сбор функционального рекомбинантного продукта, продуцируемого указанной размноженной первой клеточной линией.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US60/136,676 | 1999-05-28 | ||
| US09/543,479 | 2000-04-06 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001132075A true RU2001132075A (ru) | 2003-06-20 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR0179994B1 (ko) | 칠면조의 재조합 포진바이러스 및 이로부터 유도된 생존상태의 벡터 백신 | |
| JPH08510325A (ja) | 生物学的に活性なペプチド配列の選択方法 | |
| NO20022500L (no) | Fremgangsmåte ved fremstilling av virus eller viralproteiner til anvendelse i vaksiner | |
| JPH02109985A (ja) | 細菌染色体上ヘの目的遺伝子の組み込み方法及び該方法によって得られた細菌 | |
| US10513542B2 (en) | Minicircle DNA vector vaccine platform for foot-and-mouth disease and methods thereof | |
| Flaegstad et al. | Inoculation with BK virus may break immunological tolerance to histone and DNA antigens. | |
| JPS62501537A (ja) | リンパ球細胞を電気的に不滅化するための方法 | |
| RU94046095A (ru) | Векторы, плазмида, клетка млекопитающего, клетка человека, система вектор-хозяин, способ снижения токсических эффектов, способы введения селектируемого маркера, способы отбора клеток, нуклеиновые кислоты, способы обнаружения экспрессии, способы продукции полинентида, антитела, способы иммуноанализа, трамегенные животные | |
| Dickson | Assembly of bacteriophage T4 tail fibers: IV. Subunit composition of tail fibers and fiber precursors | |
| US6541223B2 (en) | Method for enhanced protein stabilization and for production of cell lines useful for production of such stabilized proteins | |
| RU2001132075A (ru) | Способ повышенной стабилизации белков и получения клеточных линий, применимых для получения таких стабилизированных белков | |
| Karlsson et al. | Delivery and expression of heterologous genes in mammalian cells using self-replicating alphavirus vectors | |
| Sari‐Ak et al. | VLP‐factory™ and ADDomer©: Self‐assembling Virus‐Like Particle (VLP) Technologies for Multiple Protein and Peptide Epitope Display | |
| JPH06506357A (ja) | トランスジェニック哺乳動物またはトランスジェニック哺乳動物細胞の変異検出方法、および変異特性に対する作用剤または条件の試験方法 | |
| Schleef et al. | Production of plasmid DNA as pharmaceutical | |
| RU2812347C1 (ru) | Способ получения бактериального продуцента рекомбинантного белка нуклеокапсида nc вируса sars-cov-2 | |
| WO1997027742B1 (en) | Method of protein production using mitochondrial translation system | |
| Apinda | Novel insertion site in duck enteritis virus genome for generation of the DEV-OmpH recombinant virus using CRISPR/Cas9 editing | |
| Nogueira-Dantas et al. | Cloning and expression of chicken anemia virus VP3 protein in Escherichia coli | |
| Tremblay et al. | Immunocytochemical localization of nuclear antigens in the unicellular green alga, Chlamydomonas reinhardtii, processed by cryofixation and freeze-substitution | |
| KR0142210B1 (ko) | 돼지파보바이러스 vp2 단백질의 대량 생산방법 및 돼지파보바이러스 감염증용 백신용 백신의 제조방법 | |
| KR100267750B1 (ko) | 사람 아데노바이러스 2형으로부터 제작한 재조합 발현벡터 및 그를 이용한 돼지 오제스키병 바이러스 gp50 유전자 재조합 사람아데노바이러스를 선발하는 방법 | |
| CN113564165A (zh) | 一种胞内编辑伪狂犬病毒关键基因的细胞株及其构建方法和应用 | |
| CN117603921A (zh) | 一种重组腺相关病毒及轻链型淀粉样变动物模型的构建方法 | |
| CN114990078A (zh) | 带有His标签的重组新城疫病毒的构建方法及用途 |