RU1803869C - Способ определени периодов гипертонической болезни - Google Patents

Abstract

Использование:.медицина, диагностика периодов (криз, вне криза) течени  гипертонической болезни (ГБ). Сущность изобретени : измер ют величину активности каталазы или супероксиддисмутазы эритроцитов . Способ позвол ет упростить, ускорить и обезопасить процесс диагностики различных периодов течени  ГБ, не снижа  точность и надежность диагностики-.

Description

Изобретение относитс  к медицине, в частности к кардиологии, преимущественной областью его использовани   вл етс  диагностика различных периодов клинического течени  гипертонической болезни (ГБ) - гипертонического криза и внекризового периода.

Цель изобретени  - упрощение способа диагностики различных клинических периодов течени  ГБ за счет сокращени  трудоемких операций путем определени  у больных ГБ активности каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов.

Способ осуществл етс  следующим образом .

Из локтевой вены больного в пробирку с раствором цитрата натри  отбирают 5 мл крови, центрифугируют 10 мин (4000 об/мин) и затем отдел ют эритромассу от плазмы. Эритромассу дважды промывают физиологическим раствором (перемешиванием и центрифугированием по 5, мин при 2000 об/мин). После второго центрифугировани  надосадок сливаетс . Дл  определени  активности каталазы 0,1 мл промытой эритромассы гемолизируют дистиллированной водой и получают гемолизат разведени 

1:2000.0,1 мл полученного гемолизата переноситс  в пробирку, доводитс  0,05 М Трис- HCI буфером рН 7,4 до 1 мл, прибавл етс  2 мл 0,03% Н202 и инкубируетс  в термостате при 25°С в течение 10 мин. После инкубации вноситс  2 мл 4% раствора молибдата аммони . Полученную пробу спектрофотометри- руют при длине волны 410 нм. Экстинцию Опытной пробы сравнивают с экстинцией контрольной пробы, которую получают таким же образом, только 0,1 мл гемолизата добавл етс  в пробирку после инкубации в термостате, непосредственно перед добавлением молибдата аммони . По разнице между экстинци ми контрольной и опытной проб суд т о величине катализной активности . Расчеты производ т, исход  из коэффициента миллимол рнойзкстинции перекиси водорода, и результаты выражают в мМ инактивированной Н202 1 л эритромассы за 1 секунду. Дл  определени  активности СОД брали 0,1 мл отмытой эритромассы, как это рекомендовано Е.Ё Дубининой и соавт, при подготовке эритроцитов дл  исследовани  СОД в системе феназинметасульфат- НАД н-нитросиний тетразолий (Лаб. дело, 1983, 10, 30-33). Эти 0,1 мл отмытой эритро в

Ё

С

СО

о

со

00 Os sO

.массы гемолизируют и разбавл ют 0,9 мл 5 мМ трис-HCI буфера (рН 7,4), перенос т в центрифужную пробирку, добавл ют 0,25 мл этанола, 0,15 мл хлороформа и 0,6 г кристаллического КН2Р04. Все это перемешиваетс  стекл нной палочкой в течении 15 мин, выдерживаетс  в холодильнике при 4°С 30 мин и центрифугируетс  при 5000 об/мин 15 мин. Затем отбираетс  надоса- дочна  жидкость. В пробирку последовательно внос т 1,7 мл фосфатного буфера (0,15 М, рН 7,8), 2 мл раствора нитросинего тетразоли  (0,01 г на 100 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8), 0,5 мл раствора фена- зинметасульфата (0,003 г на 150 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8). 0,1 мл надоса- дочной жидкости И 0,9 мл раствора НАД Н (0,01 г на 24 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8). Содержимое перемешивали стекл нной палочкой, и пробирку помещали в темноту и термостатирвали при 25°С в течении 10 мин. После чего, сразу на фотоэлек- троколориметре при длине волны 450 нм определ ли величину зкстинции и сравнивали с экстинцией контрольной пробы, которую получали таким же образом, только в пробирку не вносили надосадочную жидкость . О величине активности СОД суд т по разнице экстинций контрольной и опытной проб и выражают в процентах (от экстинций контрольной пробы).

При рассмотрении изучаемых показателей в исследуемых группах было вы влено, что у 90% больных 1Б во врем  криза активность каталазы составила от 165 мМ Н202/л.с до 235 мМ Н202/Л.С, тогда как во внекризовом периоде у 90% больных этот показатель находилс  в пределах 240-314 мМН202/л.с. Активность СОД от 32% до 44% отмечена у 90,5% больных ГБ во врем  криза, а от 47- до 64% - у 90,5% больных во внекризовом периоде.

П р и м е р 1. Больна  Г,, 50 лет, была госпитализирована в терапевтическое отделение предварительным диагнозом: гипертоническа  болезнь II стадии.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 165 мМ Н202/л«с, активность СОД - 34%. Был сдален вывод о наличии у больной гипертонического криза.

В дальнейшем комплексное клинико- лабораторное исследование и наблюдение за течением болезни подтвердили предположение о наличии у больной гипертонического криза.

П. р и м ё р 2. Больной М., 47 лет, был впервые госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышени  АД с

диагнозом: гипертоническа  болезнь II стадии .

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 183 мМ НзОа/л.с., активность СОД-32%, На основании этих данных было высказано мнение о наличии у больного гипертонического криза.

Детальное изучение анамнеза, клиникоО лабораторные данные, наблюдение за динамикой процесса и эффективностью терапии подтвердили данное предположение.

П р и м е р 3. Больна  К,, 48 лет, поступила в терапевтическое отделение в плано5 вом пор дке при отсутствии значительных жалоб с умеренно повышенным АД (170- 175/100-105 мм рт.ст.). Диагноз при поступлении: гипертоническа  болезнь Н.стэдии. При исследовании антиоксидантных

0 ферментов обнаружено: активность каталазы составила 221 мМ Н202/л.с, активность СОД - 41 %. На основании этих данных был сделан вывод о наличии у больной гипертонического криза.

5 Тщательное изучение анамнеза, эффективность терапии и динамика реабилитации больной подтвердили наличие у нее гипертонического криза.

П р и м е р 4. Больна  Л., 43 года, посту0 пила в терапевтическое отделение по пово-- ду повышенного АД. Диагноз при поступлении: гипертоническа  болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных

5 ферментов обнаружено: активность каталазы составила 235 мМ Н202/л.с., активность СОД - 40%. Полученные данные позволили сделать вывод о наличии у больной гипертонического криза.

0 В дальнейшем данный клинический диагноз изменен не был.

П р и м е р 5. Больной С., 50 fleTk был впервые госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышени  АД.

5 Диагноз при поступлении: гипертоническа  болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 230 мМ НаОз/л с, активность

0 4%. Был сделан вывод 6 наличии у больного гипертонического криза.

Дополнительное изучение анамнеза, наблюдение за динамикой процесса, эффективностью терапии и реабилитации под5 твердили первоначальный диагноз.

Примерб. Больной В., 50 лет, поступил в терапевтическое отделение с резким повышением АД на фоне эмоционального стресса. Диагноз при поступлении: гипертоническа  болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катала- зы составила 240 мМ Н202/л.с., активность СОД - 47%. Н А основании этих данных был сделан вывод об отсутствии у больного гипертонического криза.

В дальнейшем динамика состо ни  больного, быстра  нормализаци  АД при поддерживающей терапии позволили отказатьс  от предварительного диагноза наличи  у больного гипертонического криза.

Пример. Больна  Ф„ 45 лет, обследована амбулаторно по поводу повышени  АД. Диагноз: гипертоническа  болезнь II стадии,

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катэла- зы составила 259 мМ с, активность СОД - 52 %. Был сделан вывод об отсутствии у ббльной гипертонического криза.

В дальнейшем при динамическом наблюдении данное предположение было подтверждено.

П р и м е р 8. Больной С., 53 гида, поступил в терапевтическое отделение с диагнозом: гипертоническа  болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катала- зы составила 314 мМ Н202/Л с, активность СОД - 60%. На основании этих данных было высказано мнение об отсутствии у больного .гипертонического криза.

В, дальнейшем, наблюдение за больным , быстра  нормализаци  его состо ни  с переходом на поддерживающую гипотен- зивную терапию, а также выписка больного на 8-й день подтвердили предположение об отсутствии гипертонического криза у данного больного.

П р и м е р 9. Больна  Н., 40 лет, находитс  на диспансерном учете по поводу гипертонической болезни II стадии в течении 4 лет. При профилактическом осмотре обследована .

Активность каталазы составила 297 мМ Н202/Л с, активность СОД - 64%.

Отсутствие гипертонического криза и стабильное течение гипертонической болезни было подтвержено.

П р и м е р 10. У служащей Е,. 37 лет, при проведении профосмотра какой-либо патологии обнаружено не было.

Исследование антиоксидантных ферментов показало: активность каталазы составила 322 мМ Н202/Л с, активность СОД - 67%.

Таким образом было подтверждено, что обследуема  практически здорова.

Предлагаемый способ диагностики различных периодов клинического течени  ГБ позвол ет сократить (по сравнению с прототипом ) врем  проведени  методики в 11,3 раза при определении активности каталэзы и - В 3,8 раза при определении активности

СОД. Значительно сокращаетс  количество трудоемких операций, таких как получение мембран, экстрагирование липидов. Кроме того, устран етс  вли ние токсичных веществ (гептан, серна  кислота по Савалю) и

необходимость дополнительных рассчетов (вычисление ди агностического коэффициента ). Разработанный способ  вл етс  простым , надежным и доступным дл  обычной клиникобирхимической лаборатории, при

этом точность диагностики различных периодов клинического течени  ГБ в сравнении с известным способом не снижаетс .

30

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  периодов гипертонической болезни, включающий отбор венозной крови, получение эритроцитов и последующий их бихимический анализ, о тличающийс  тем, что, с целью упрощени  способа за счет сокращени  трудоемких операций,провод т гемолиз эритроцитов, в гемолизате определ ют активность каталазы или супероксиддисмутазы и при активности каталазы 165-235 ммолей Н202/Л хс или активности супероксиддисмутэзы 32 - 44% ступени ингибировани  восстановлени  нитросинего тетразолиевого определ ют наличие гипертонического криза а при активности каталазы 240-313 ммолей Н202/Л- с или активности супероксиддисмутазы 47- 64% определ ют внекризовый период гипертонической болезни.