JPH04282456A - アルコール性肝硬変の検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は肝疾患の検出方法に関し
、更に詳細にはアルコール性肝硬変の確定診断方法に関
する。

【０００２】

【従来の技術】高等動物の生体内には糖タンパク質や糖
脂質等、様々な形態の複合糖質が存在する。これらの複
合糖質はその糖鎖の構成糖としてＬ−フコースを含むも
のが多い。糖鎖中にＬ−フコースを含む複合糖質の代表
的な例としては、例えば、胃粘膜を防御する粘液糖タン
パク質や顎下腺から分泌される粘液糖タンパク質、肝臓
で合成、分泌されるα１　−酸性糖タンパク質、β２−
糖タンパク質、骨髄で形成される赤血球膜表面の糖タン
パク質、γ−グロブリン、あるいは細胞膜表面に存在す
る糖タンパク質や糖脂質が挙げられる。このように、生
体内にはＬ−フコースを含む複合糖質が多量に存在する
。 一方、特定の疾病において、Ｌ−フコースを含む複合糖
質糖鎖の構造が変化を起こしたり、体液中の複合糖質の
量が変化することが知られている。例としては、胃潰瘍
、胃ガンにおける粘液糖タンパク質の分泌量の低下、肝
硬変、肝ガンにおけるα１　−酸性糖タンパク質等の糖
タンパク質の分泌量の低下、細胞のガン化に伴う細胞膜
表面の糖タンパク質及び糖脂質の糖鎖構造の変化等の報
告がある。また、Ｌ−フコースの代謝異常を伴う特定の
疾病、例えば胃潰瘍、胃ガン、肝硬変、肝ガン及びその
他のガン患者由来の生体試料中には、正常人の生体試料
中よりも多量の遊離型Ｌ−フコースが存在することも知
られている（特開平１−２４４７４１号公報）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】Ｌ−フコースの代謝異
常を伴う疾病の一つの肝硬変は、進行性の経過を示す重
篤な疾病であり、その病因はウイルス性、アルコール性
に区分される。肝硬変と診断された患者の治療法はその
病因により大きく異なり、その病因別早期診断方法の確
立が望まれている。本発明の目的は、肝硬変の簡便な病
因別確定診断方法を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明はアルコール性肝硬変の検出方法に関し、尿試料中
の遊離型Ｌ−フコース量を対照値と比較測定することを
特徴とする。

【０００５】本発明において使用するアルコール性肝硬
変検出用試料は、ヒト尿から得られるものであり、通常
は尿そのものを、また場合によっては一定量のろ紙など
の吸着材に染みこませ、ここから抽出する方法などによ
って調製し用いることもできる。該試料の採取には採血
の操作も不要であり、大量試料が処理される集団検診に
おいても、その簡便性、大量処理能力、コストの点など
で好適である。

【０００６】尿試料中の遊離型Ｌ−フコース量は例えば
前出特開平１−２４４７４１号公報に記載の方法、クリ
ニカル　　ケミストリー（　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ　）、第３６巻、第４７４〜４７６頁（１
９９０）に記載の方法で行えば良く、また、ＨＰＬＣを
用いる方法、例えば特開昭６４−１０１７７号公報に記
載の方法に準じ、尿試料中の遊離型Ｌ−フコースの２−
アミノピリジル化を行い、次いでＨＰＬＣで検出する方
法でもよい。前出クリニカル　　ケミストリーに記載の
方法は、尿中に存在する遊離型Ｌ−フコースにＮＡＤ＋
　及びフコースデヒドロゲナーゼを作用させ、産生する
ＮＡＤＨの増加量を波長３４０ｎｍの吸光度変化として
測定し、遊離型Ｌ−フコースの定量を行うものであり、
尿試料にＮＡＤ＋　及びフコースデヒドロゲナーゼを反
応させ、同様にフコース標準液を用いて操作し、吸光度
変化を自動分析装置にて分析するという簡便かつ迅速な
方法である。また尿量の補正を行うために同時に尿試料
中クレアチニン（Ｃｒ）値をヤッフェ（　Ｊａｆｆｅ′
）法〔クリニカル　　ケミストリー、第１７巻、第６９
６〜７００頁（１９７１）〕で測定し、尿試料中遊離型
Ｌ−フコース値として、μ　ｍｏｌ／ｇ・Ｃｒで表示す
る。

【０００７】上記方法を用い、例えば健常人５８例、ウ
イルス性肝硬変患者１７例、アルコール性肝硬変患者７
例の尿中遊離Ｌ−フコース量を測定した場合、Ｌ−フコ
ース値は対照の健常人においては１４４±３０（平均値
±標準偏差値：以下同様）、対照のウイルス性肝硬変患
者においては２６８±４１、アルコール性肝硬変患者に
おいては３５０±８４であり、肝硬変患者が健常人に比
して有意に高値を示すのみならず、その病因によっても
、Ｌ−フコース値に顕著な差が認められ、アルコール性
肝硬変の診断が可能である。

【０００８】アルコール性肝疾患の治療方法には禁酒、
栄養改善があるが、例えば２週間の禁酒において尿試料
中遊離型Ｌ−フコース量は３例の平均で２４２±３９か
ら１６８±４１へと低下し、尿試料中遊離型Ｌ−フコー
ス量の測定は、治療のモニタリングにも有用である。

【０００９】

【実施例】以下に本発明を、実施例をもって説明するが
、本発明が以下の実施例の範囲のみに限定されるもので
はない。

【００１０】実施例１ 健常人５８例、ウイルス性肝硬変患者１７例、アルコー
ル性肝硬変患者７例の尿を用いて遊離型Ｌ−フコース量
を測定した。遊離型Ｌ−フコースの測定は自動分析装置
（日立７１５０型）を用い下記のように行った。尿１０
μｌをＡ試薬〔１００ｍＭ　　リン酸カリ緩衝液（ｐＨ
８．０）、０．１％ブリジ（　Ｂｒｉｊ　）　３５界面
活性剤、０．０５％　　ＮａＮ３　〕３００ｍｌに混合
し、３７℃に５分間保温し、次に３４０ｎｍの吸光度を
測定する（吸光度：Ａ１　）。次にこれにＢ試薬〔Ａ試
薬１ｍｌ中に６０単位のＬ−フコースデヒドロゲナーゼ
（宝酒造社）、５μＭのＮＡＤ＋　を含有〕１００μｌ
を添加し、更に３７℃、５分間保温し、次に３４０ｎｍ
の吸光度を測定する（吸光度：Ａ２　）。尿中Ｌ−フコ
ースの存在による３４０ｎｍの吸光度の増加（Ａ３　）
は下記式（数１）により求められる。

【数１】 　　Ａ３　＝Ａ２　−（３００＋１０）Ａ１　／（１０
＋３００＋１００）前記の反応系において尿の代りに、
水及び１ｍＭのＬ−フコースを用い、３４０ｎｍの吸光
度を測定し、Ｌ−フコースの検量線を測定し、その検量
線と求めたＡ３　より尿中Ｌ−フコース量を求める。尿
中遊離型Ｌ−フコースの測定結果を表１に示す。

【００１１】

【表１】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　表　　１──────────────
──────────────────────　　　
　　　　　試　　　　料　　　　　　　　　　　　　　
　　尿中遊離型Ｌ−フコース量（μｍｏｌ／ｇ・Ｃｒ）
　────────────────────────
────────────　　由　　来　　　　　　　
　　　　　　　　　　　例数　　　　　　　　　　　　
平均値±標試偏差値────────────────
────────────────────　　健常人
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５８例　　　　
　　　　　　１４４　　±　　３０　　ウイルス性肝硬
変患者　　　　１７例　　　　　　　　　　２６８　　
±　　４１　　アルコール性 　　　　肝硬変患者　　　　　　　　　　　　　　７例
　　　　　　　　　　３５０　　±　　８４─────
─────────────────────────
──────表１に示すように、アルコール性肝硬変患
者においては、ウイルス性肝硬変患者よりも尿中遊離型
Ｌ−フコース量が高値を示すことが見出された。

【００１２】

【発明の効果】本発明により尿試料を用いるアルコール
性肝硬変の簡便な診断方法が提供され、尿中Ｌ−フコー
スの測定は、該肝硬変の治療効果のモニタリングにも有
用である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　尿試料中の遊離型Ｌ−フコース量を対
   照値と比較測定することを特徴とするアルコール性肝硬
   変の検出方法。