SU768399A1 - Способ определени чувствительности организма к антигену - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к области медицины, а именно иммунологии, и может быть использовано в диагностической практике аллергических заболеваний. Известен способ определени  чувствительности организма к антигену путем постановки реакции взаимодействи  антигена или гаптена с антителами исследуемой крови с последующим учетом степени i емолиза 1 . Однако известный способ  вл етс  недостаточно точным. Целью изобретени   вл етс  повышение точности способа. Эта цель достигаетс  тем, что антиген или гаптен внос т непосредственно в цельную кровь определ ют выдел емый в процесс гемолиза гемоглобин и по его концентрации определ ют чувствительность организма. Пример 1. Отбирают 2 мл крови из вены больного бронхиальной астмой, вызванной гаптеном-шестивалентным хромом, и наливают по I мл в центрифужные пробирки 1 и 2. Дл  предотвращени  спонтанного гемолиза кровь отбирают щприцом, предварительно промытым физиологическим раствором . Пробирка 1 контрольна , пробирка 2 - опытна . В обе пробирки добавл ют по 0,4 мл 5%-ного раствора цитрата натри , который предотвращает свертывание крови. В пробирку 2 наливают 0,1 f раствора гаптена, в качестве которого используют 0,5%-ный раствор бихромата кали , приготовленный на 5%-ном растворе цитрата натри . Концентрацию антигена подбирают опытным путем таким образом, чтобы в контрольной группе здоровых людей отсутствоВал гемолиз неспецифического повреждени  эритроцитов, св занный с физико-химическими свойствами самого антигена, а в опытной группе (больные) наблюдалс  бы максимальный эффект (гемолиз ) . Далее содержимое пробирок осторожно, но тщательно перемещивают встр хиванием и помещают в термостат при 37° С на 2 ч. Через каждые 15 мин пробирки, не вынима  из термостата , осторожно встр хивают. При наличии в цельной крови исследуемого специфических антител, во врем  инкубировани  крови с антигеном в пробирке 2 наблюдают специфичес7 кий гемолиз. При отсутствии специфических антител гемолиз не происходит. Через 2 ч пробирки вьшимают из термостата и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин дл  осаждени  клеток крови. Затем в пробирку 1 добавл ют 0,1 мл раствора соответствующего гаптена дл  получе1ш  идентичных проб, немедленно отбирают из пробирок 1 и 2 по 0,7 мл надосадочной жидкости и перенос т в другие пробирки, куда добавл ют по 2 мл трансформирующего реактива дл  переведени  гемоглобина плазмы крови в окрашенный гемиглобинцианид . Трансформирующий реактив содержит в 1 Л воды 200 мг кали  железосинеродистого, г натри  двууглекислого, 0,47 г ацетонциангидрина . Содержимое пробирок тщательно перемешивают и оставл ют не менее чем на 10 NmH. Затем пробы фотоэлектроколориметрируют при длине волны 500-600 т(зеленый светофильтр) в кювете с толщиной сло  5 мм против трансформирующего реактива. ДлинаВолны на спектрофотометре - 540 w. Относительный прирост гемоглобш1а в процентах между контрольной И опытной пробами говорит о степени гемолиза. Расчет степени гемолиза производ т по формуле on JK 100%,: - величина экстинции плотности в опытной пробе (пробирка 2) Е - величина экстинции плотности в контрольной пробе (пробирка 1). степень гемолиза превышает +10%, то это указывает на наличие сенсибилизации организма . Если степень гемолиза находитс  в интервале - 10% - +10%, то сенсибшшзации нет (отрицательные показатели степени гемолиза, как правило, наблюдались при добавлении раствора гаптена Сг в контрольной группе) , Пример расчета: больной Н. . . пробирка 1 - Ец 0,05, пробирка 2 - ЕОП 0,08. 0,08 . 100 60% 0,05 П р и м е р ,2. Отбирают 2 мл крови боль ного бронхиальной астмой, вызванной белковы аллергеном. Дл  предотвращени  спонтанного гемо1шза кровь отбирают шприцом, предварительно про мытым физиологическим раствором. Кровь ра ливают по 1 мл в две центрифужшме пробирки 1 и 2. В обе пробирки добавл ют по 0,4 5%-ного раствора цитрата натри , который пре дотвращает свертывание крови. В пробирку 2 наливают 0,1 мл раствора антигена, приготовленного на 5% растворе цитрата натри , содер 4 жащсго 20 мг/мл азота. Дальнейшие операции производ т аналогично изложенному в примере 1. Предлагаемый способ был апробирован на двух группах больных атонической формой профеесиональной бронхиальной астмы. В первой группе (37 человек) бронхиальна  астма была обусловлена воздействием шестивалентного хрома , во второй (74 больных) - белкового аллергена . Дл  каждой из этих групп были вз ты две контрольных-здоровые лица и больные атопической профессиональной формой бронхиальной астмы, вызванной воздействием другого этиологического фактора. Одна группа больных  вл лась контролем по .отношению к другой. Так, возможность гемолиза при воздействии на кровь шестивалентного хрома изучалась ® только в группе больных бронхиальной астмой, вызванной шестивалентным хромом, но также в двух контрольных группах - здоровых лиц и больных бронхиальной астмой, обусловленной белковым аллергеном. Изучение гемолиза под вли нием белкового аллергена проводилось как в группе больных бронхиальной астмой, вызванной белковым аллергеном, так и в контрольных группах здоровых людей и больных бронхиальной астмой, вызванной шестивалентным хромом. Результаты обследовани  больных первой группы и соответствующих ей контрольных групп представлены в табл 1. Как видно из табл. 1 при бронхиальной астме , вызванной шестивалентным хромом, у 35 из 37 больных (т.е. у 94,6/о) инкубирование крови с шестивалентным хромом приводило к увеличению гемоглобина в плазме крови. Из 35 больньгх у 16 (45,7%) прирост гемоглобина превышал 60%, у 19 (54,3%) он был в пределах 10-60%. В контрольной группе больных бронхиальной астмой, вызвашюй белковым аллергеном, а также у здоровых людей гемолиз после инкубировани  крови с хромом, как правило, не наблюдалс . Так в первой грутше он отсутствовал у 23 из 30 больных (т.е. у 76,7%), во второй у 9 из 12 (75%) Небольшой прирост гемолиза у отдельных представителей контрольных групп, по-видимому, можно объ снить особенност ми их профессиональной де тельности в прошлом (хромирование металлов, электросварочные работы ). Особешю четко вы вилась специфичность способа при оценке средних результатов: если под вли нием хрома средний прирост гемолиза в основной группе составил 55,6%, то в контрольной группе здоровых людей он был всего 0,42%, а в контрольной группе больных

бронхиальной астмой, вызванной белковым аллергеном , отсутствовал вообще.

При обследовании больных профессиональной бронхиальной астмой, обусловленной воздействием белкового аллергена, инкубирование крови со специфическим антигеном вызывало прирост гемолиза у 66 человек из 74 (89,2%), причем . у 47 из 66 больных (71,2%) прирост гемолиза был свыше 40% (табл. 2).

В контрольных группах здоровых людей и больных бронхиальной астмой, вызванной шестивалентным хромом, гемолиз под вли нием белкового аллергена наблюдалс  соответственно у 28 из 48 и у 8 из 12 человек что составл ет 58,3% и 66,7%. Следует подчеркнуть, что степень его в контрольных группах была небольшой (у здоровых не превышала +20%, у боль ,ных +40%). Поэтому средний показатель прироста гемолиза у больных основной группы был значительно выше, чем в контрольных (соот ветственно 56,1%, 9,9% и 11,1%).

Наличие нерезко выраженной положительной реакции у значительной части лиц контрольных групп объ сн етс  распространенностью данного аллергена не только на производстве, но ив быту.

При легких формах и стойкой ремиссии профессиональной бронхиальной астмы, вызванной белковым аллергеном, увеличение плазменного гемоглобина под вли нием специфического антигена не превьпиало, как правило, 50% при бронхиальной астме средней т жести колебалось в пределах 50-70%, при т желом течении превышало 70%, иногда достига  100-125%.

Таким образом, отмечалась коррел ци  между степенью гемолиза и выраженностью клинических про влений бронхиальной астмы.

Показатели гемолиза после инкубировани  крови с шестивалентным хромом

В группе больных бронхиальной астмой, вызванной шестивалентным хромом, показатели гемолиза были сопоставлены с результатами определени  (по методу Zowry) убыли белка в сыворотке крови после инкубации ее со специфическим антигеном, В качестве последнего был вз т нерастворимый сорбент шестивалентного хрома на бычьем альбумине.

В табл. 3 приведены сравнительные данные определени  гемолиза и специфической убыли белка в сыворотке крови у 25 больных.

Сравнительные данные определени  прироста плазменного гемоглобина и убыли белка в сыворотке крови под вли нием специфического антигена у больных бронхиальной астмой, вызванной шестивалентным хромом,

Из табл. 3 видно, что специфическа  убыль белка определ5у1ась лишь у 13 из 25 больных, т.е. у 52,0, в то врем  как гемолиз имел место у 23 из 25 больных (у 92,0%). Средний показатель убыли белка по группе всего 8,3% а гемолиза 50,8%., Из 12 больных, у которых убыль белка вообще не определ лась, отсутстви гемолиза имело место лишь в двух случа х . У остальных 10 больных с нулевыми результатами убыли белКа определ лс  прирост плазменного гемоглобина которьгй колебалс  от 8,1 до 75,09(, в среднем составл л 32,9. Таким образом, показатель гемолиза  вл етс  значительно более чувствительным чем определение специфической убыли белка в сыворотке крови

Предлагаемый способ обеспешвает повьш1ение точности определени  чувствительности организма к антигену.

Таблица 1

10-0 1-20 21-40

23

2 5 3

37

ИТОГО:

Показатели гемолиза после инкубировани  крсдаи с белковым аллергеном

Продолжение табл. 1

3012

Таблица 2

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  чувствительности организма к антигену путем постановки реакции взаимодействи  антигена или гаптена с антителами исследуемой крови с последующим уче. том степени гемолиза, отличающийс   тем, что, с целью повышени  точности способа, антиген или. гаптен внос т непосред768399

   10 Таблица 3

   ственно в цельную кровь, определ ют выдел емый в процессе гемолиза гемоглобин и по его концентрации определ ют чувствительность организма.

   Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Лабораторна  иммунологи . Под ред. О. В зова, М., 1967, с. 156.