SU1228864A1 - Способ определени иммунологического статуса у больных лимфогранулематозом - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к медицине, в частности к клинической иммунологии.

Цель изобретени  - повышение точности определени  иммунологического статуса больных в активной фазе заболевани .

Указанна  цель достигаетс  тем, что лимфоциты, выделенные из периферической крови пациента, раздел ют на 2 пробы и инкубирует их с левамизолом в концентрации 1 пг/мл и 10 мкг/мл. Затем провод т реакцию Е-розеткообразовани , подсчитывают по- казатели в каждой пробе, вычисл ют разность показателей между второй и первой пробами и при положительном значении разности определ ют нарушение иммунологического статуса, а при отрицательном значении - отсутствие нарушени  статуса.

Способ осуществл ют следующим образом .

Из исследуемой периферической крови человека выдел ют лимфоциты путем центрифугировани  в градиенте плотности раствора фиколла-верографина, отмывают лим- фоциты растворов Хенкса.

Выделенные лимфоциты разливают в 6 пробирок по 0,1 мл (2X10 клеток в 1 мл). В первую пару пробирок добавл ют стандартный раствор среды 199 по 0,1 мл (конт- рольна  проба), во вторую пару - по 0,1 мл раствора левамизола на среде 199 в концентрации С| 1 пг/мл, а в третью - по 0,1 мл раствора левамизола на среде 199 в концентрации С2 10 мкг/мл. Пробы инкубируют при 36-37°С в течение 30-35 мин. После этого лимфоциты.используют в реакции спонтанного Е-розеткообразовани  с эритроцитами барана при 4°С дл  определени  числа Е- РОК. Во всех пробах с помощью светового микроскопа считают количество Е-РОК на 100 лимфоцитов, т. е. Е) - контроль, Е(С1) и Е(с2) - дл  проб с левамизолом в меньшей и большей концентраци х соответственно . Затем вычисл ют разность между количеством Е-РОК, соответствующим каждой дозе левамизола, и количеством Е-РОК контрольной пробы:

ДЕ(,1) Е(С1)- ) - разность дл  первой дозы;

ЛЕ(2) Е(С2) - E(jt) - разность дл  второй дозы.

После этого определ ют характер приращени  дл  разностей Е-РОК при меньшей и большей концентраци х левамизола по соотношению

ДЕ,

ДЕ|

lgC2-lgC,

При этом , если значение разности Е-РОК уменьшаетс , и , если значение разности Е-РОК увеличиваетс  при повышении концентрации левамизола.

Пример 1. Больна  Р-на Г. Н., 1966 года 55 рождени , истори  болезни № 7049, находилась в гематологическом отделении клиники НИИМР АМН СССР с 28.11.80 г. по 20.02.81

5

0

Q 0

0

5

с диагнозом лимфогранулематоза IA стадии с поражением подключичных лимфоузлов справа. Поступила с жалобами на увеличение лимфатических узлов справа под ключицей . Больна с 1978 г. В августе 1980 года после биопсии установлен диагноз лимфогранулематоза (узелковый склероз).

До начала терапии у больной брали из локтевой вены 5-7 мл крови в 0,7-1 .мл 2,7%-ного раствора динатриевой соли этилен диаминотетраацетата. Лимфоциты из крови выдел ли путем центрифугировани  в градиенте плотности фикол-верографина.

Дл  постановки реакции в 3 группы пробирок (по 2 пробирки в каждой группе) наливали по 0,1 мл суспензии лимфоцитов (2X10 клеток в 1, мл) Далее в первую группу пробирок наливали по 0,1 мл среды 199 (контрольные пробы), во вторую - по 0,1 мл левамизола в концентрации 1 пг/мл, в третью - по 0,1 мл левамизола в концентрации 10 мкг/.мл. Затем пробы инкубировали при 36-37° в течение 30-35 мин, после чего клетки отмывали дважды средой 199 путем центрифугировани  при 200 g 5 мин. Надосадочную жидкость сливали, а осадками лимфоцитов ставили реакцию спонтанного Е-розеткообразовани  с эритроцитами барана: к осадкам приливали по 0,1 мл среды 199 и 0,5%-ной суспензии эритроцитов барана. Далее смеси инкубировали при 36-37° в течение 10 мин, затем центрифугировали при 200 g 5 мин и инкубировали при 4°С в течение 1 ч. Затем проводили подсчет под микроскопом числа образовавшихс  Е-РОК, т. е. лимфоцитов, окруженных трем  и более эритроцитами, на 100 клеток в каждой пробе.

Получены следующие результаты анализа: число Е-РОК в пробе без левамизола (Е) 55; число Е-РОК при концентрации левамизола 1 пг/мл 36 (E(,|); число Е-РОК при концентрации левамизола 10 мкг/мл 61 ().

Разности между количеством Е-РОК при каж.дой дозе левамизола и количество.м Е-РОК контрольной пробы составили

AEi Ел- ч- Е, , -19;

с.

ДЬ2 t/c ч (к) +0

ф ДЕ2-Л4ЕГ 25.

Характер разностей Е-РОК от малой к большой концентраци .м левамизола имеет положительное приращение (). Следовательно , делаем заключение о нарушении иммунологического статуса у данной больной .

пример 2. Больной П-в А. Г., 1923 года рождени , истори  болезни Л Ь 3463. Находилс  в гематологическом отделении клиники НИИМР АМН СССР с 10.12.79 по 21.12.79 г. Был вызван дл  контрольного обследовани . Жалоб не предъ вл ет. В 1966 году был диагностирован лимфогранулематоз И А стадии с поражением шейно- надключичных и медиастинальных лимфоузлов . Прошел курс комбинированного лечени . С 1969 года наступила клиническа  ремисси . В насто щее врем  при обследовании признаков рецидива не обнаружено. Диагноз при выписке: лимфогранулематоз II А стадии в ремиссии продолжите.чьностью 10 лет.

14.12.1979 года у больного вз та периферическа  кровь. Все процедуры по выделению лимфоцитов и nocTaiiOBKe реакций проведены как описано выше.

Получены следующие результаты анали- за: число Е-РОК в пробле без левамизола (EJ 35; число Е-РОК при концентрации

левамизола 1 пг/мл (Е,- ) 45; число Е-РОК при концентрации левамизола 10 мкг/мл (Ecj) 23. Разности между количеством Е-РОК при каждой дозе левамизола и количеством Е-РОК контрольной пробы составили

ЛЕ: Е(с,)-Е(,, +10;

,4-EJ4 12; Ф ДЕг - AEfi .

Характер разностей Е-РОК от малой к боль- щой концентраци м левамизола имеет отрицательное приращение ().

Заключение: иммунологический статус в норме.

Таким образом иммунологический статус организма определ ют не по абсолютной величине Е-РОК в суспензии лимфоцитов периферической крови, а по характеру приращени  ф, исключив тем самым из рассмотрени  фоновую составл ющую Е|,-РОК. В случае если , делают заключение о нарушении иммунного статуса организма, если , суд т о норме или восстановлении иммунного статуса.

Применение предлагаемого способа позвол ет повысить эффективность контрол  иммунологического статуса больных активной формой лимфогранулематоза, в сравнении с использованием одной концентрации левамизола , с 72% до 85%, а в случае ремиссии - до 80%.

Claims (1)

1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА У БОЛЬНЫХ ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗОМ путем инкубирования лимфоцитов с левамизолом, проведения реакции розеткообразования с эритроцитами барана и подсчета розеткообразующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, осуществляют инкубирование лимфоцитов с левамизолом в концентрациях 1 пг/мл и 10 мкг/мл, подсчитывают количество розеткообразующих клеток в каждой пробе, вычисляют разность показателей второй и первой проб и при положительном значении разности определяется нарушение иммунологического статуса, а при отрицательном значении — отсутствие нарушения иммунологического статуса.

   SU „„1228864