RS65898B1 - Humanizovano bcma antitelo i bcma himerni antigenski receptor (car) t ćelije - Google Patents

Humanizovano bcma antitelo i bcma himerni antigenski receptor (car) t ćelije

Info

Publication number
RS65898B1
RS65898B1 RS20240953A RSP20240953A RS65898B1 RS 65898 B1 RS65898 B1 RS 65898B1 RS 20240953 A RS20240953 A RS 20240953A RS P20240953 A RSP20240953 A RS P20240953A RS 65898 B1 RS65898 B1 RS 65898B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
car
cells
bcma
chimeric antigen
cell
Prior art date
Application number
RS20240953A
Other languages
English (en)
Inventor
Lijun Wu
Vita Golubovskaya
Original Assignee
Caribou Biosciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Caribou Biosciences Inc filed Critical Caribou Biosciences Inc
Publication of RS65898B1 publication Critical patent/RS65898B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/4214—Receptors for cytokines
    • A61K40/4215—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR], CD30
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/804—Blood cells [leukemia, lymphoma]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj se pronalazak odnosi na humanizovani BCMA promenljivi fragment jednog lanca (scFv) (PMC306) i BCMA-CAR-T ćelije specifično smanjuju rast višestrukog mijelomnog tumora, što je korisno u oblasti adoptivne terapije imunizacije genom za tumore, kao i postupak za pravljenje anti-BCMA ćelije.
OBLAST TEHNIKE
[0002] Imunoterapija se javlja kao veoma ohrabrujući pristup lečenju kancera. T ćelije ili T limfociti, su oružane snage našeg imunog sistema, koje konstantno traže strane antigene i diskriminišu abnormalne (kancerne ili inficirane ćelije) od normalnih ćelija. Genetska modifikacija T ćelija sa CAR (himerni antigenski receptor) konstruktima je najčešći pristup projektovanju tumora. CAR-T ćelije koje ciljaju antigene povezane sa tumorom (TAA) mogu da budu dati infuzijom pacijentima (zove se adoptivni transfer ćelije ili ACT) što predstavlja efikasan pristup imunoterapije [1, 2]. Prednost CAR-T tehnologije u poređenju sa hemoterapijom ili antitelom je da reprogramirane T ćelije mogu da se umnožavaju i opstanu u pacijentu ("živi lek") [1, 2].
[0003] Himerni antigenski receptori (CAR) se najčešće sastoje od monoklonalnog iz antitela izvedenog promenljivog fragmenta jednog lanca (scFv) na delu N terminala, zgloba, domena transmembrane i jednog broja unutarćelijskih koaktivacionih domena: (i) CD28, (ii) CD137 (4-1BB), CD27, ili drugi kostimulatorni domeni, u tandemu sa aktivacijom CD3 zeta domena (SL. 1). Evolucija himernih antigenskih receptora (CAR) od prve generacije (bez ikakvih kostimulacionih domena) do druge generacije (sa jednim kostimulacionim domenom) do treće generacije himernih antigenskih receptora (CAR) (sa nekoliko kostimulacionih domena). Generisanje himernih antigenskih receptora (CAR) sa dva kostimulatorna domena (takozvana 3. generacija himernih antigenskih receptora) je dovela do povećane citolitičke aktivnosti T ćelije himernog antigenskog receptora (CAR), poboljšane postojanosti T ćelija himernog antigenskog receptora (CAR) što dovodi do njegove pojačane aktivnosti protiv tumora.
BCMA
[0004] Antigen sazrevanja B ćelije (BCMA) je receptor na površini ćelije, poznat kao CD269 i član 17 superfamilije receptora faktora nekroze tumora (TNFRSF17), koji je kodiran genom 17 članom superfamilije receptora faktora nekroze tumora (TNFRSF17). Ovaj receptor se eksprimuje izražen uglavnom u zrelim B limfocitima i u većini slučajeva je prekomerno eksprimovan u višestrukom mijelomu (MM) [4]. Sadašnje terapije za ciljanje BCMA u višestrukim mijelomima (MM) obuhvataju imunoterapije monoklonalnim antitelima, bispecifičnim antitelima i imunerapije T ćelijama, CAR T terapije [4, 5, 8, 9, 10].
[0005] Humani BCMA protein se sastoji od 184 aminokiseline: 1-54 vanćelijska domena; 55-77 domena transmembrane; 78-184 domena citoplazme. Sekvenca aminokiseline BCMA je prikazana na SL. 2. BCMA nema signalni peptid i slična je drugim receptorima BAFF receptora i aktivatora transmembrane i interaktora ciklofilin liganda i modulatora kalcijuma (TACT) [4]. Ovi receptori igraju glavnu ulogu u sazrevanju B ćelije i diferencijaciji u ćelije plazme. Njihovi ligandi obuhvataju BAFF i APRIL čije eksprimovanje se povećava kod pacijenata sa višestrukim mijelomima (MM) [4].
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0006] Ovaj pronalazak koji je definisan u patentnim zahtevima na kraju opisa, se odnosi na anti-BCMA scFv karakteriše gapromenljivi teški lanac (VH) sa SEK ID BR:3 i promenljivi laki lanac (VL) sa SEK ID BR:5. Na osnovu ovog promenljivog fragmenta jednog lanca (scFv), himerni receptor antitela (CAR) je izveden, koji treba da bude izražen u T ćelijama, koje zauzvrat mogu da se koriste za lečenje kancera.
KRATAK OPIS SLIKA
[0007]
SL. 1 pokazuje strukture himernog antigenskog receptora (CAR) [3]. Levi panel pokazuje strukturu prve generacije (nema kostimulatnih domena). Srednji panel pokazuje strukturu druge generacije (jedan kostimulatorni domen CD28 ili 4-BB). Desni panel pokazuje strukturu treće generacije (dva ili više kostimulatornih domena).
SL. 2 pokazuje sekvencu aminokiseline BCMA proteina (SEK ID BR: 1).
Vanćelijski domen je podvučen.
SL. 3 pokazuje strukturu humanizovanog BCMA CAR konstrukta.
SL. 4 pokazuje da je humanizovani BCMA-CAR konstrukt detektovan FACS analizira sa fluorescentno označenim rekombinantnim BCMA proteinom.
Humanizovane BCMA-CAR pozitivne ćelije su detektovane posle transdukcije lentivirusnog humanizovanog BCMA-CAR u T ćelije.
SL. 5A-5B pokazuju da su humanizovane BCMA-CAR-T ćelije ubile CHO-BCMA ćelije ali ne i CHO ćelije. Ogled citotoksičnosti u stvarnom vremenu XCelligence je korišćen za detektovanje citotoksičnosti humanizovane BCMA-CAR T ćelije. Normalizovan indeks ćelije je prikazan na Y osi, i vreme je pokazano na X osi. SL. 5A pokazuje CHO-BCMA ciljne ćelije. desno: Odozgo prema dnu: Kontrolne CAR-T ćelije, T ćelije, ciljne ćelije same, i humanizovane CAR-T ćelije. SL. 5B pokazuje CHO ciljne ćelije. Odozgo prema dnu desno, kontrolne Mock CAR T ćelije, humanizovane BCMA CAR T ćelije, T ćelije, i same ciljne ćelije.
SL. 6 pokazuje da su humanizovane BCMA-CAR T ćelije, izlučile visok nivo IFN gama sa CHO-BCMA pozitivnim ćelijama, ali ne sa BCMA negativnim CHO kontrolnim ćelijama. Izlučivanje p<0,05 IFN gama u CHO-BCMA ćelijama od BCMA- CAR T ćelija naspram T ćelija i kontrolnih Mock CAR T ćelija.
SL. 7 pokazuje da su humanizovane BCMA-CAR T ćelije izlučile visok nivo IFN gama naspram višestruko mijelomnih ćelija ali ne naspram BCMA negativnih K562 kontrolnih ćelija. *p<0,05, izlučivanje IFN gama u višestrukim mijelomnim ćelijama od BCMA- CAR T ćelija naspram T ćelija i kontrolnim Mock-CAR T ćelijama. ;SL. 8A pokazuje da humanizovane BCMA-CAR-T ćelije značajno smanjile RPMI8226 rast ksenograft tumora. CAR T ćelije su ubrizgane 7. dana i 20 i to intravenski (i.v) 1×10^7 ćelija/miševima. Stubičasti grafikon prikazuju prosečnu zapreminu tumora /- standardne greške. ;*p<0,05, BCMA CAR T ćelije naspram kontrolnih Mock T ćelija.
SL. 8B pokazuje da humanizovane BCMA-CAR T nisu smanjile telesnu težinu miša. Stubičasti grafikon pokazuje prosečnu telesnu težinu miševa /-standardna odstupanja.
SL. 8C pokazuje da su humanizovane BCMA-CAR T ćelije, ali ne i kontrolne T ćelije, detektovane u mišjoj krvi pomoću FACS sa BCMA rekombinantnim proteinom. Ćelije periferne krvi su analizirane protočnom citometrijom na kraju studije za vezivanje na humani BCMA protein i antitela specifična za humane T (CD4+/CD8+) ćelije. Procenat ćelija koje se vezuju na CD4 antitelo je prikazan na levom panelu SL.8C, i procenat tih humanih T ćelija koje su se takođe vezale na BCMA protein je prikazan na desnom panelu SL.8C.
DETALJAN OPIS
Definicije
[0008] Kako je ovde korišćeno, "himerni antigenski receptor (CAR)" je proteinski receptor projektovan da T ćelijama da novu sposobnost da ciljaju specifični protein. Receptor je himerni jer oni kombinuju obe funkcije i vezivanje antigena i aktivaciju T ćelije u jedan receptor. CAR je fuzionisani protein koji obuhvata vanćelijski domen koji može da se veže na antigen, transmembranski domen, i barem jedan unutarćelijski domen. "Himerni antigenski receptor (CAR)" se ponekad zove "himerni receptor", "T telo", ili "himerni receptor imunog sistema (CIR)." "Vanćelijski domen je sposoban da se veže na antigen'' znači bilo koji oligopeptid ili polipeptid koji može da se veže na neki antigen. Taj "unutarćelijski domen" znači bilo koji oligopeptid ili polipeptid poznat da funkcioniše kao domen koji prenosi signal da bi prouzrokovao aktivaciju ili inhibiciju biološkog procesa u nekoj ćeliji.
[0009] Kako je korišćeno ovde, "domen" znači jedan region u polipeptidu koji je presavijen u specifičnu strukturu nezavisno od drugih regiona.
[0010] Kako je ovde korišćeno, "humanizovana antitela" su antitela izvedena iz nehumanih vrsta čiji su sekvence proteina modifikovane da povećaju njihovu sličnost sa varijantama antitela proizvedenim prirodnim putem kod ljudi. Na primer, pošto je mišje antitelo razvijeno, DNK kodiranje za to antitelo može da bude sekvencionirano. DNK sekvenca koja odgovara CDR antitelu može zatim da se odredi. CDR sekvence mogu da se umetnu u neki konstrukt koji sadrži DNK za varijantu čovečjeg antitela da bi se pripremila humanizovana antitela.
[0011] Kako je ovde korišćeno, "promenljivi fragment jednog lanca (scFv)" znači jednolančani polipeptid izveden iz antitela koji zadržava sposobnost da se veže na antigen. Primer scFv obuhvata polipeptid antitela koji se formira rekombinantnom DNK tehnikom i u čijim su Fv regionima fragmenti teškog lanca (H lanac) i lakog lanca (L lanac) imunoglobulina povezani preko sekvence razmaka (‘spejser'). Raznorazni postupci za projektovanje scFv su poznati stručnjaku u ovoj oblasti.
[0012] Kako je ovde korišćeno "antigen tumora" znači biološki molekul koji ima antigenost, ekspresiju koja prouzrokuje kancer.
[0013] Ovaj pronalazak se definiše u priloženim patentnim zahtevima.
[0014] Pronalazači su projektovali humanizovani BCMA scFv počevši od promenljivih regiona teškog i lakog lanca mišjeg monoklonalnog antitela izvedenog iz mišjeg monoklonalnog antitela, klona 4C8A. Mišje 4C8A antitelo ispoljava jako i selektivno vezivanje na humani BCMA [6]. Pronalazači su proizveli BCMA-CAR-T ćelije na osnovu humanizovanog BCMA antitela da bi ciljali kancerne ćelije koje prekomerno eksprimuju BCMA antigen tumora. BCMA-CAR T ćelije iz ovog pronalaska imaju visoku citotoksičnu aktivnost protiv nekoliko linija ćelije kancera. Ovaj pronalazak je usmeren na humanizovani anti-humani BCMA promenljivi fragment jednog lanca (scFv) koji obuhvata VH sa aminokiselinom iz SEK ID BR: 3 i VL sa aminokiselinom iz SEK ID BR: 5.
[0015] U jednom izvođenju humanizovano anti-humano BCMA antitelo je promenljivi fragment jednog lanca (scFv). ScFv može biti VH -linker-VL ili VL-linker- VH.
[0016] Ovaj pronalazak je takođe usmeren na protein fuzije himernog antigenskog receptora koji obuhvata od N terminusa do C terminusa: (i) promenljivi fragment jednog lanca (scFv) naspram BCMA u kom VH ima sekvencu aminokiseline iz SEK ID BR 3, i VL ima aminokiselinu iz SEK ID BR: 5, (ii) transmembranski domen, (iii) najmanje jedan kostimulatorni domen, i (iv) aktivacioni domen.
[0017] U jednom izvođenju, struktura himernog antigenskog receptora (CAR) je prikazana na SL.2.
[0018] U jednom izvođenju, kostimulatorni domen je izabran iz grupe koja se sastoji od CD28, 4-1BB, GITR, ICOS-1, CD27, OX-40 i DAP10. Preporučeni kostimulatorni domen je CD28.
[0019] Preporučeni aktivacioni domen je CD3 zeta (CD3 Z ili CD3 ζ).
[0020] Transmembranski domen je moguće izvesti iz prirodnog polipeptida, ili može biti veštački projektovan. Transmembranski domen izveden iz prirodnog polipeptida moguće je dobiti iz bilo kog proteina vezivanja membrane ili proteina transmembrane. Na primer, transmembranski domen od receptora T ćelije α ili β lanca, CD3 zeta lanca, CD28, CD3 ε., CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, ICOS, CD154, ili GITR moguće je koristiti. Veštački projektovan transmembranski domen je polipeptid koji uglavnom obuhvata hidrofobne ostatke kao što je leucin i valin. Poželjno je da je trostruki fenilalanin, triptofan i valin pronađen na svakom kraju sintetičkog transmembranskog domena. Opciono, kratki oligopeptidni linker ili polipeptidni linker, na primer, linker koji ima dužinu od 2 do 10 aminokiselina može da bude raspoređen između transmembranskog domena i unutarćelijskog domena. U jednom izvođenju, može da se koristi sekvenca linkera sa glicin-serin kontinualnom sekvencom.
[0021] Ovaj pronalazak obezbeđuje nukleinsku kiselinu koja kodira BCMA-CAR. Nukleinska kiselina koja kodira himerni antigenski receptor (CAR) može da se dobije iz sekvence aminokiseline specifičnog himernog antigenskog receptora (CAR) uobičajenom metodom. Osnovna sekvenca koja kodira sekvencu aminokiseline može da se dobije iz gore pomenutog NCBI RefSek ID ili pristupnih brojeva GenBank za sekvencu aminokiseline svakog domena, i nukleinsku kiselinu iz ovog pronalaska je moguće pripremiti korišćenjem standardne molekularne biološke i/ili hemijske procedure. Na primer, na osnovu osnovne sekvence, nukleinsku kiselinu je moguće sintetisati, i nukleinsku kiselinu iz ovog pronalaska je moguće pripremiti kombinovanjem DNK fragmenata koji se dobijaju iz biblioteke cDNK korišćenjem polimerazne lančane reakcije (PCR).
[0022] Nukleinska kiselina koja kodira himerni antigenski receptor (CAR) iz ovog pronalaska možda da se umetne u vektor, i taj vektor može da se uvede u ćeliju. Na primer, može da se koristi virusni vektor kao što je retrovirusni vektor (uključujući onkoretrovirusni vektor, lentivirusni vektor, i pseudo tip vektora), adenovirusni vektor, vektor povezan sa adenovirusom (AAV), vektor virusa makaki majmuna, vakcinski virusni vektor ili Sendai virusni vektor, Epštajn-Barov (Epstein-Barr) (EBV) virusni vektor, i herpes simpleks (HSV) vektora. Poželjno se koristi virusni vektor kom nedostaje sposobnost umnožavanja tako da se ne samoreplicira u inficiranoj ćeliji.
[0023] Na primer, kada se koristi retrovirusni vektor, pogodna pakujuća ćelija koja se bazira na LTR sekvenci i pakujuća signalna sekvenca koju poseduje vektor može da se izabere za dobijanje retrovirusne čestice korišćenjem ćelije za pakovanje. Primeri pakujuće ćelije obuhvataju PG13 (ATCC CRL-10686), PA317 (ATCC CRL-9078), GP+E-86 i GP+en-vAm-12, i Psi-Crip. Retrovirusna čestica može takođe da se pripremi korišćenjem 293 ćelije ili 293T ćelije koja ima visoku efikasnost transfekcije. Brojne vrste vektora retrovirusa proizvedene na osnovu retrovirusa i pakujućih ćelija koje je moguće koristiti za pakovanje retrovirusnih vektora su komercijalno dostupne od brojnih kompanija.
[0024] CAR T ćelija se vezuje na specifični antigen preko CAR, i tako se signal prenosi u ćeliju, i kao rezultat, ta ćelija se aktivira. Aktivacija ćelije koja eksprimuje himerni antigenski virus (CAR) se varira zavisno od vrste ćelije domaćina i unutarćelijskog domena himernog antigenskog virusa (CAR), i može da se potvrdi na osnovu, na primer, otpuštanja citokina, poboljšanje brzine proliferacije, promene u molekulu na površini ćelije, ili slično kao indeks. Na primer, otpuštanje citotoksičnog citokina (faktor nekroze tumora, lifotoksin, itd.) iz aktivirane ćelije prouzrokuje destrukciju ciljne ćelije koja eksprimuje antigen. Pored toga, otpuštanje citokina ili promenu u molekulu na površini ćelije stimuliše drugoj imunoj ćeliji, na primer, B ćelija, dendritska ćelija, NK ćelije, i makrofag.
[0025] Ćelija eksprimuje himerni antigenski receptor (CAR) može da se koristi kao terapijski agens za dobijanje. Terapijski agens obuhvata ćeliju koja eksprimuje himerni antigenski receptor (CAR) kao aktivni sastojak, i može još da obuhvati pogodni ekscipijens.
[0026] Pronalazači su generisali CAR T ćelije na osnovu humanizovane BCMA ScFv sekvence specifično ciljajući BCMA. Pronalazači su proizveli humanizovane BCMA-CAR-T ćelije da ciljaju kancerne ćeije koje prekomerno eksprimuju BCMA antigen tumora. Humanizovane BCMA-CAR T ćelije iz ovog pronalaska je izlučilo visok nivo citokina naspram višestruko mijelomnih kancernih ćelija i ubija CHO-BCMA pozitivne ciljne ćelije ali ne i kontrolne roditeljske CHO ćelije.
[0027] Prednosti humanizovanih BCMA-ScFv iz ovog pronalaska u odnosu na odgovarajuće mišje ScFv obuhvataju manju imunogenost prema humanom usled humanizovane BCMA scFv sekvence. Dakle, humanizovano BCMA antitelo iz ovog pronalaska je visoko potentno i pogodno kao terapijski agensi u brojnim kliničkim primenama.
[0028] Ovaj humanizovani BCMA ScFv može da se koristi za imunoterapijske primene: toksin/lek-konjugovano antitelo, monoklonalno terapijsko antitelo, i imunoterapiju CAR T ćelijom.
[0029] Humanizovane BCMA-CAR T ćelije koje koriste ovaj humanizovani BCMA ScFv efektivno ciljni BCMA antigen u BCMA pozitivnim kancernim linijama ćelije kao što je kancer jajnika, kolona, pankreasa, melanoma, grlića materice, i drugi BCMA pozitivni kanceri.
[0030] Humanizovane BCMA-CAR T ćelije je moguće koristiti u kombinaciji sa različitim inhibitorima hemoterapije: inhibitorima kontrolne tačke, ciljanim terapijama, inhibitorima malog molekula, i antitelima.
[0031] Humanizovane BCMA-CAR T ćelije je moguće koristiti klinički za BCMA pozitivne ćelije kancera.
[0032] Modifikacije domena koaktivacije kao što je CD28, 4-1BB i drugi mogu da se koriste da se poveća efikasnost CAR T ćelija. Tag-om konjugovan humanizovani BCMA scFv može da se koristi za generisanje himernog antigenskog receptora (CAR).
[0033] Humanizovane BCMA-CAR-T ćelije je moguće koristiti sa različitim sigurnosnim prekidačima kao što je t-EGFR, RQR (Rituksimab- CD34-Rituksimab), kaspaza 9 koju je moguće indukovati (caspase-9) i drugi.
[0034] Treća generacija CAR T ili drugi koaktivacioni signalni domeni mogu da se koriste sa humanizovanim BCMA scFv da se dobije BCMA-CAR-T.
[0035] Humanizovani BCMA CAR mogu da se kombinuju sa himernim antigenskim receptorima (CAR) koji ciljaju druge antigene tumora ili mikrookruženje tumora, npr. VEGFR-1-3, PDL-1. Bispecifična antitela naspram BCMA i CD3, i drugi antigeni mogu da se generišu za terapiju.
[0036] Humanizovani BCMA-CAR može da se koristi za generisanje drugih tipova ćelija kao što su ćelije himerne antigenske receptorne (CAR) prirodne ubice (NK), BCMA-CAR-makrofagi, alogene himerne antigenske receptorne (CAR) T ćelije, genski editovane T ćelije, i druge BCMA himerne antigenske receptorne (CAR) hematopoezne) ćelije, koje mogu ciljati BCMA pozitivne kancere.
[0037] Ovaj pronalazak obezbeđuje T ćelije, NK ćelije, makrofage, ili hematopoezne ćelije, modifikovane da eksprimuju BCMA himerni antigenski receptor (CAR).
[0038] BCMA himerne antigenske receptorne (CAR) T ćelije moguće je koristiti naspram kancernih matičnih ćelija i cirkulacionih tumornih matičnih ćelija koje su najotpornije naspram hemoterapije i formiraju agresivne tumore.
[0039] BCMA himerne antigenske receptorne (CAR) T ćelije, BCMA ćelije prirodne ubice (NK), BCMA makrofag (-ne ćelije), i druge ćelije moguće je koristiti za ciljanje različitih tipova kancera.
[0040] BCMA-CAR-T ćelije mogu da se isporuče unutar tumora pacijentima radi veće bezbednosti.
[0041] Primeri dati u nastavku detaljnije ilustruju ovaj pronalazak. Ovi primeri su predviđeni prosto da ilustruju ovaj pronalazak i ne treba ih tumačiti kao ograničavajuće.
PRIMERI
Primer 1. Humanizovane BCMA VH i VL i scFv SEKVENCE
[0042] BCMA scFv je izveden iz klonova hibridoma 4C8A (WO2019/195017).
Sekvence promenljivih regiona teškog i lakog lanca mišjeg klona 4C8A su određene i korišćene da bi se sagradio humanizovan scFv.
[0043] Struktura humanizovanog BCMA (PMC306) scFv je: VH-linker-VL. Linker je G4Sx3.
[0044] Podebljani ističu sekvencu nukleotida humanizovanog BCMA PMC306 ScFv klona: teškog lanca VH; podvučeno ističe sekvencu nukleotida lakog lanca VL; između (kurzivom) je sekvenca nukleotida koja kodira linker.
(SEQ ID NO: 2 – SEK ID BR: 2)
PMC306 VH sekvenca aminokiseline: (SEK ID BR: 3)
Linker sekvenca aminokiseline (SEK ID BR: 4)
GGGGSGGGGSGGGGS
PMC306 VL sekvenca aminokiseline: (SEK ID BR: 5)
Primer 2. Humanizovane BCMA-CAR sekvence
[0045] Šema humanizovanog (PMC306) BCMA-CAR konstrukta je prikazana na SL.3. Lentivirusni vektor sa EF1a promoterom je korišćen za kloniranje humanizovanih scFv CAR sekvenci.
[0046] BCMA-CAR struktura obuhvata humani CD8 signalni peptid, humanizovani BCMA scFv (VH-Linker-VL), CD8 zglob, CD28 transmembranu, aktivacione domene CD3 zeta (SL.3).
[0047] Sekvence nukleotida i neke od sekvenci aminokiselina CD8 signaliziranja -BCMA scFv (VH-Linker-VL)-CD8 zglob-CD28 TM-CD28-CD3-zeta su prikazani dole u tekstu.
<CD8 leader>
[0048]
Nukleotid
Aminokiselina
MALPVTALLLPLALLLHAARP (SEK ID BR: 8)
<Nhe I mesto>
gctagc
<Humanizovano BCMA, PMC 306 scFv>
VH-linker-VL, videti Primer 1 za sekvence nukleinske kiseline i sekvence aminokiseline.
<XhoI mesto ograničenja>
CTCGAG
<CD8 zglob>
[0049]
Nukleotid
Aminokiselina KPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEASRPAAGGAVHTRGLDFASD (SEK ID BR: 10)
<aagccc>
<CD28 transmembrana >
[0050]
Nukleotid
Aminokiselina
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (SEK ID BR: 12)
<CD28 kostimulatorni>
[0051]
Nukleotid
Aminokiselina
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS (SEK ID BR: 14)
<CD3 zeta> zaustavni kodoni podvučeni
[0052]
Nukleotid
Aminokiselina
<EcoRI mesto ograničenja>
gaattc
Translatirana sekvenca aminokiseline humanizovanog BCMA-CAR proteina (SEK ID BR: 17)
Primer 3. Proizvodnja CAR lentivirusa
[0053] Lentivirus je proizveden standardnim postupkom korišćenjem 293T ćelija kako je opisano u [7] Pronalazači su generisali humanizovane BCMA-ScFv-CAR konstrukte unutar lentivirusnog vektora klonirane Xba I i Eco R I mesta lentivirusnog vektora. pCD510-FMC63-28z lentivirusni CAR konstrukt koji obuhvata humanizovani BCMA ScFv-CD28-CD3zeta umetak - između Xba I i Eco RI mesta kloniranja.
[0054] Lentivirusi su generisani u 293T ćelijama i titri su uspostavljeni pomoću RT-PCR. Zatim je jednaka doza lentivirusa korišćena za transdukciju T ćelija.
Primer 4. Izolacija mononuklearne ćelije iz periferne krvi (PBMC) iz cele krvi
[0055] Cela krv (Centar za krv bolnice Stenford, Stenford, Kalifornija, SAD - Stanford Hospital Blood Center, Stanford, CA) je prikupljena od pojedinačnih ili mešovitih davalaca (zavisno od količine potrebne krvi) u 10-mL-skim heparinskim vakumskim posudama (Becton Dickinson). Približno 10 ml cele antikoagulisane krvi je pomešano sa sterilnim fosfat-puferskim slanim rastvorom (PBS) za ukupnu količinu od 20ml u 50ml centrifugalnoj epruveti (PBS, pH 7,4, bez Ca+2 i Mg+2). Krv/PBS (20 ml) je raslojena povrh 15 mL supstance Fikoli Pak (Ficoll-Paque) PLUS (GE Healthcare) u konusnoj centrifugalnoj cevi, i to pažljivo, i uzorak je centrifugiran na 400xg tokom 30-40 min na sobnoj temperaturi. Sloj ćelija koji je sadržao mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) na razblaženoj plazmi/Fikol (Ficoll) interfejsu je uklonjena, oprana, i centrifugirana u 200xg tokom 10 min na sobnoj temperaturi. Ćelije su prebrojane hemocitometrom. PBMC su oprane jednom sa CAR-T sredstvima (AIM V-AlbuMAX(BSA) (Life Technologies), sa 5% AB seruma i 1,25 µg/mL amfotericin B (Gemini Bioproducts, Woodland, CA), 100 U/mL penicilin, i 100 µg/mL streptomicin) i korišćeni za eksperimente ili su zamrznuti na -80°C.
Primer 5. Aktivacija T ćelije iz PBMC-a
[0056] Izolovane PBMC ćelije su vraćene u suspenziji u CAR-T podlozi sa 300U/mL huIL2 (iz 1000x zaliha; Invitrogen) i pomešane sa CD3-CD28 perlicama u odnosu perlica prema ćeliji od 1:1. Ćelije su inkubirane na 37 °C u prisustvu CO2 tokom 24 sata pre virusne transdukcije.
Primer 6. Transdukcija i širenje T ćelije
[0057] Posle aktivacije PBMC, ćelije su inkubirane tokom 24 sata na 37 °C, 5% CO2. U svaku pregradu od 1×10<6>ćelija, 5×10<6>lentivirusA i 2 µL/mL podloga Transplus (Alstem, Richmond, CA) (konačno razblaženje od 1 :500) su dodati. Ćelije su inkubirane tokom još 24 sata pre ponovnog dodavanja virusa. Ćelije su zatim uzgajane u neprekidnom prisustvu 300 U/ML od IL-2 sveže podloge sa IL-2 tokom perioda od 12-14 dana (ukupno vreme inkubacije je bilo zavisno od konačnog broja potrebnih CAR-T ćelija). Koncentracije ćelija su analizirane svaka 2-3 dana, sa sredstvima koje se dodaju u to vreme da bi se razblažila suspenzija ćelije do 1×10<6>ćelija/mL.
Primer 7. Humanizovane BCMA-CAR-T ćelije su eksprimovale BCMA scFv
[0058] Projektovali smo humanizovane BCMA-CAR-T ćelije sa humanizovanim BCMA-CAR konstruktom prikazanim u Primeru 2. Koristili smo kontrolne scFv sa nesrodnim ScFv i generisane kontrolne Mock-CAR-T ćelije kao negativnu kontrolu. Humanizovane BCMA-CAR- pozitivne ćelije su detektovane posle transdukcije lentivirusnog humanizovanog BCMA CAR u T ćelije. (SL.4).
Primer 8. Humanizovane BCMA-CAR-T ćelije su ubile CHO-BCMA ćelije ali ne i ćelije CHO.
[0059] Inkubirali smo humanizovane BCMA-CAR-T ćelije sa ciljanim CHO-BCMA ciljnim ćelijama i CHO (BCMA-negativnim) kontrolnim ćelijama. Humanizovane BCMA-CAR T ćelije su specifično ubile CHO-BCMA ćelije (SL.5A) ali ne CHO ćelije (SL.5B). Rezultati pokazuju visoku specifičnost humanizovanih BCMA-CAR T ćelija da ciljaju BCMA antigen i da ubiju BCMA- pozitivne ćelije.
Primer 9. Humanizovane CAR-T ćelije su izlučile IFN gama naspram ciljanih CHO-BCMA ćelija značajno ali ne protiv CHO ćelija.
[0060] Prikupili smo supernatant posle istovremene inkubacije humanizovanih BCMA-CAR-T ćelija i ciljanih CHO-BCMA i roditeljskih CHO ćelija i izveden je IFN gama ogled. BCMA-CAR T ćelije su izlučile IFN gama sa CHO-BCMA ćelijama ali ne sa negativnim kontrolnim CHO ćelijama (SL. 6). Rezultati potvrđuju specifičnost humanizovanih BCMA-CAR T ćelija.
Primer 10. Humanizovane CAR-T ćelije su izlučile visoke nivoe IFN gama naspram BCMA pozitivnih RPMI8226 ćelija višestrukih mijeloma ali ne naspram BCMA negativnih K562 leukemijskih ćelija.
[0061] Inkubirali smo BCMA-CAR-T ćelije sa višestruko mijelomnim kanceroznim ćelijama RPMI8266, i BCMA negativnim K562 ćelijama (ćelijama hronične mijelogene leukemije) i izveli smo ELISA analizu sa IFN gama korišćenjem pribora iz kompanije Fisher, u skladu sa protokolom proizvođača. Humanizovane BCMA-CAR T ćelije su izlučile visok nivo IFN gama naspram BCMA pozitivnih višestruko mijelomnih kanceroznih ćelija ali ne naspram BCMA negativnih K562 ćelija (SL.7). Nivo ubijanja i izlučivanja IFN gama je bio značajno viši sa BCMA-CAR T ćelijama nego sa T ćelijama i kontrolnim Mock CAR-T ćelijama. Ovo potvrđuje osobenost humanizovanih BCMA-CAR T ćelija naspram hematoloških BCMA pozitivnih ćelija.
Primer 11. Humanizovane BCMA-CAR T ćelije su značajno smanjile RPMI8226 rast ksenograftnog tumora na modelu miša in vivo.
[0062] Višestruko mijelomne RPMI8226 ćelije su ubrizgane potkožno u NSG miševe (1×10^7 ćelija/miševima), i zatim su humanizovane BCMA-CAR T ćelije su ubrizgane dvaput intravenozno (i.v.) (1×10^7 CAR T ćelija/miševima). Humanizovane BCMA-CAR T ćelije su značajno smanjile RPMI8226 rast tumora kod miševa (SL. 8A). Kod miševa tretiranje humanizovanim BCMA-CAR T ćelije nije prouzrokovalo smanjenu telesnu težinu miševa što nagoveštava da CAR T ćelije nisu bile toksične za miševe (SL. 8B). Nikakve promene u ponašanju ili vizuelno nisu primećene tokom studije.
[0063] Ćelije periferne krvi su analizirane protočnom citometrijom na kraju studije za vezivanje na humani BCMA protein i antitela specifična za humane T (CD4+/CD8+) ćelije. Procenat ćelija koje se vezuju na CD4 mAb (monoklonalno antitelo) je prikazan na levom panelu SL. 8C, i procenat tih humanih T ćelija koje su se takođe vezale na BCMA protein je prikazan na desnom panelu SL. 8C. Rezultati pokazuju da humanizovene BCMA-CAR T ćelije, ali ne i kontrolne Car T ćelije, su detektovane u mišjoj krvi pomoću FACS sa BCMA rekombinantnim proteinom.
Reference
[0064]
1. Maus, M.V., Haas, A.R., Beatty, G.L., Albelda, S.M., Levine, B.L., Liu, X., Zhao, Y., Kalos, M., and June, C.H. (2013). T cells expressing chimeric antigen receptors can cause anaphylaxis in humans. Cancer Immunol Res 1, 26-31.
2. Maus, M.V., Grupp, S.A., Porter, D.L., and June, C.H. (2014). Antibodymodified T cells: CARs take the front seat for hematologic malignancies. Blood 123, 2625-2635.
3. Golubovskaya V, Wu L. (2016) Different Subsets of T Cells, Memory, Effector Functions, and CAR-T Immuno- therapy. Cancers, 15, 8 (3). PMID: 26999211 4. Ali, S.A., Shi, V., Marie, I., Wang, M., Stroncek, D.F., Rose, J.J., Brudno, J.N., Stetler-Stevenson, M., Feldman, S.A., Hansen, B.G., et al. (2016). T cells expressing an anti-B-cell maturation antigen chimeric antigen receptor cause remissions of multiple myeloma. Blood 128, 1688-1700.
Tai, Y.T., and Anderson, K.C. (2015). Targeting B-cell maturation antigen in multiple myeloma. Immunotherapy. 7(11):1187-99. doi: 10.2217/imt.15.77. Epub 2015 Sep 15. Review. PMID: 26370838
WO2019/195017
Berahovich R, Xu S, Zhou H, Harto H, Xu Q, Garcia A, Liu F, Golubovskaya VM, Wu L. FLAG-tagged CD19- specific CAR-T cells eliminate CD19-bearing solid tumor cells in vitro and in vivo. Front Biosci (Landmark Ed). 2017 Jun 1;22: 1644-1654
WO2016/014565
WO2018/026953
. Berahovich R, et al.. CAR-T cells based on novel BCMA monoclonal antibody block Multiple Myeloma cell growth. Cancers.2018 Sep 11: 10(9)

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Humanizovani anti-humani BCMA promenljivi fragment jednog lanca (scFv), koji obuhvata:
promenljivi region teškog lanca (VH) sa sekvencom aminokiseline iz SEK ID BR: 3 i
promenljivi region lakog lanca (VL) sa sekvencom aminokiseline iz SEK ID BR: 5.
2. Promenljivi fragment jednog lanca (scFv) iz patentnog zahteva 1, koji obuhvata linker između promenljivog regiona teškog lanca (VH) i promenljivog regiona lakog lanca(VL), pri čemu taj linker ima sekvencu aminokiseline iz SEK ID BR: 4.
3. Anti-BCMA himerni antigenski receptor (CAR), koji obuhvata deo od N terminusa do C terminusa:
humanizovani anti-humani BCMA promenljivi fragment jednog lanca (scFV) koji obuhvata
promenljivi region teškog lanca(VH) sa sekvencom aminokiseline iz SEK ID BR: 3, i
promenljivi region lakog lanca (VL) sa sekvencom aminokiseline iz SEK ID BR: 5;
transmembranski domen;
kostimulatorni domen; i
aktivacioni domen.
4. Himerni antigenski receptor (CAR) iz patentnog zahteva 3, pri čemu je taj transmembranski domen neki transmembranski domen izabran iz grupe koja se sastoji od α lanca receptora T ćelije, β lanca receptora T ćelije, zeta lanca CD3, CD28, CD3 ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, ICOS, CD154, i GITR, pri čemu je preporučljivo da je taj transmembranski domen transmembranski domen od CD8.
5. Himerni antigenski receptor (CAR) iz patentnog zahteva 3, pri čemu kostimulatorni domen jeste kostimulatorni domen izabran iz grupe koja se sastoji od CD28, 4-1BB, GITR, ICOS-1, CD27, OX-40, i DAP10, pri čemu je preporučljivo da taj kostimulatorni domen obuhvata 4-1BB kostimulatorni domen.
6. Himerni antigenski receptor (CAR) iz patentnog zahteva 3, pri čemu aktivacioni domen obuhvata aktivacioni domen zeta CD3.
7. Himerni antigenski receptor (CAR) iz patentnog zahteva 3, sa sekvencom aminokiseline iz SEK ID BR: 17.
8. Nukleinska kiselina koja kodira himerni antigenski receptor (CAR) iz patentnog zahteva 3.
9. Vektor, koji obuhvata nukleinsku kiselinu iz patentnog zahteva 8, pri čemu je preporučljivo da je taj vektor virusni vektor.
10. T ćelija himernog antigenskog receptora (CAR), koja obuhvata himerni antigenski receptor (CAR) iz patentnog zahteva 3, koja preporučljivo obuhvata himerni antigenski receptor (CAR) iz patentnog zahteva 7.
11. Postupak pravljenja anti-BCMA ćelije, koji obuhvata:
uvođenje u ćeliju vektora koji obuhvata nukleinsku kiselinu koja kodira anti-BCMA himerni antigenski receptor (CAR) koja obuhvata od N terminusa do C terminusa:
humanizovani anti-humani BCMA promenljivi fragment jednog lanca (scFv) koji obuhvata
promenljivi region teškog lanca (VH) sa sekvencom aminokiseline iz SEK ID BR: 3, i
promenljivi region lakog lanca (VL) sa sekvencom aminokiseline iz SEK ID BR: 5;
transmembranski domen;
kostimulatorni domen; i aktivacioni
domen.
12. Postupak iz patentnog zahteva 11, pri čemu je taj vektor virusni vektor.
13. Postupak iz patentnog zahteva 12, pri čemu je virusni vektor izabran iz grupe koja se sastoji od retrovirusnog vektora, adenovirusnog vektora, adeno-povezanog virusnog vektora (AAV), vektora virusa makaki majmuna, vakcinskog virusnog vektora, Sendai virusnog vektora, Epštajn-Barovog (Epstein-Barr) (EBV) virusnog vektora, i herpes simpleks (HSV) virusnog vektora.
14. Postupak iza patentnog zahteva 11, pri čemu je ćelija izabrana iz neke T ćelije, ćelije prirodne ubice (NK) i makrofaga.
RS20240953A 2019-01-16 2020-01-15 Humanizovano bcma antitelo i bcma himerni antigenski receptor (car) t ćelije RS65898B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962793274P 2019-01-16 2019-01-16
PCT/US2020/013662 WO2020150339A1 (en) 2019-01-16 2020-01-15 Humanized bcma antibody and bcma-car-t cells
EP20741851.8A EP3749338B1 (en) 2019-01-16 2020-01-15 Humanized bcma antibody and bcma-car-t cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65898B1 true RS65898B1 (sr) 2024-09-30

Family

ID=71613615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240953A RS65898B1 (sr) 2019-01-16 2020-01-15 Humanizovano bcma antitelo i bcma himerni antigenski receptor (car) t ćelije

Country Status (24)

Country Link
US (7) US10927182B2 (sr)
EP (1) EP3749338B1 (sr)
JP (2) JP7128294B2 (sr)
KR (1) KR102345941B1 (sr)
CN (1) CN112074279B (sr)
AU (1) AU2020208364B2 (sr)
CA (1) CA3098995C (sr)
DK (1) DK3749338T3 (sr)
ES (1) ES2991170T3 (sr)
FI (1) FI3749338T3 (sr)
HR (1) HRP20241133T1 (sr)
HU (1) HUE067864T2 (sr)
IL (1) IL277640B2 (sr)
LT (1) LT3749338T (sr)
MX (2) MX2020011391A (sr)
PL (1) PL3749338T3 (sr)
PT (1) PT3749338T (sr)
RS (1) RS65898B1 (sr)
RU (1) RU2762942C1 (sr)
SG (1) SG11202009283QA (sr)
SI (1) SI3749338T1 (sr)
SM (1) SMT202400408T1 (sr)
WO (1) WO2020150339A1 (sr)
ZA (1) ZA202006057B (sr)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO342533B1 (no) 2015-03-18 2018-06-11 Qinterra Tech As Oppsamlingsenhet og framgangsmåte for å løsgjøre og å samle opp forurensninger fra en brønn
SMT202400408T1 (it) * 2019-01-16 2024-11-15 Caribou Biosciences Inc Anticorpo umanizzato bcma e cellule bcma-car-t
CN114075287B (zh) 2020-08-18 2023-07-21 湖南远泰生物技术有限公司 人源化bcma抗体和bcma-car-t细胞
CN114634568B (zh) * 2020-12-16 2024-04-09 深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司 Bcma的抗体及其应用
KR20230122618A (ko) 2020-12-21 2023-08-22 알로젠 테라퓨틱스 인코포레이티드 프로테아제 활성화 cd45-게이트 car
CN113173991B (zh) * 2020-12-31 2023-03-28 北京艺妙神州医药科技有限公司 一种抗bcma的抗体及其应用
CN114149505B (zh) * 2021-01-12 2022-11-04 北京门罗生物科技有限公司 治疗b细胞相关疾病的免疫细胞、制备方法及其应用
CA3204417A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Allogene Therapeutics, Inc. Knockdown or knockout of one or more of tap2, nlrc5, ?2m, trac, rfx5, rfxap and rfxank to mitigate t cell recognition of allogeneic cell products
CN115010799A (zh) * 2021-06-01 2022-09-06 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 Bcma基因人源化非人动物的构建方法及应用
CN117916267A (zh) * 2021-07-12 2024-04-19 恩卡尔塔公司 Bcma定向细胞免疫疗法组合物和方法
WO2023109257A1 (zh) * 2021-12-16 2023-06-22 浙江瑞加美生物科技有限公司 人源化的bcma抗体和bcma-car-t/bcma-car-dnt细胞
CN116082507B (zh) * 2022-05-31 2023-10-03 山东恺悌生物制品有限公司 人源化bcma抗体和bcma-car-t细胞
CA3261440A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Allogene Therapeutics, Inc. MODIFIED CELLS WITH REDUCED GENE EXPRESSION TO MITIGATE RECOGNITION BY IMMUNE CELLS
CN116535521B (zh) * 2023-03-08 2024-12-24 深圳细胞谷生物医药有限公司 靶向bcma嵌合抗原受体及其应用
EP4704886A1 (en) 2023-05-01 2026-03-11 Caribou Biosciences, Inc. Treatment of autoimmune diseases with bcma-targeting engineered immune cells
AU2024372734A1 (en) 2023-10-30 2026-04-16 Allogene Therapeutics, Inc. Engineered cells
WO2026024468A1 (en) 2024-07-26 2026-01-29 Caribou Biosciences, Inc. Modular linked chimeric antigen receptors
WO2026072671A1 (en) 2024-09-24 2026-04-02 City Of Hope Methods comprising oncolytic viruses expressing bcmat and bcma-targeted therapies
WO2026072709A1 (en) 2024-09-25 2026-04-02 Orna Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors targeting bcma

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX341884B (es) 2009-03-10 2016-09-07 Biogen Ma Inc Anticuerpos anti-antigeno de maduracion de celulas b (bcma).
RU2766608C2 (ru) * 2012-04-11 2022-03-15 Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на антиген созревания b-клеток
KR102526945B1 (ko) 2014-04-30 2023-04-27 막스-델부뤽-센트럼 퓌어 몰레쿨라레 메디친 인 데어 헬름홀츠-게마인샤프트 Ｃｄ269에 대한 인간화 항체
BR112017001183A2 (pt) 2014-07-21 2017-11-28 Novartis Ag tratamento de câncer usando receptor de antígeno quimérico anti-bcma humanizado
EP3408297A2 (en) * 2016-01-29 2018-12-05 Med Manor Organics, (P) Ltd A chimeric antigen receptor specific to b-cell maturation antigen, a recombinant expression vector and a method thereof
CN109069537B (zh) * 2016-04-04 2022-04-15 亘喜生物科技（上海）有限公司 共刺激结构域中具有重复结合基序的car
SG10202012157QA (en) * 2016-06-07 2021-01-28 Max Delbrueck Centrum Fuer Molekulare Medizin Helmholtz Gemeinschaft Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma
CA3032498A1 (en) * 2016-08-02 2018-02-08 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
CN108373504B (zh) * 2017-01-30 2022-06-28 亘喜生物科技（上海）有限公司 Cd24特异性抗体和抗cd24-car-t细胞
JP2020524992A (ja) * 2017-06-22 2020-08-27 ユニバーシティ オブ サザン カリフォルニア キメラ抗原受容体操作ナチュラルキラー細胞を化学療法薬物担体として使用する組み合わせがん療法
WO2019195017A1 (en) 2018-04-03 2019-10-10 Promab Biotechnologies, Inc. Bcma-car-t cells
US20200190163A1 (en) 2018-10-26 2020-06-18 Lijun Wu Humanized bcma-car-t cells
SMT202400408T1 (it) * 2019-01-16 2024-11-15 Caribou Biosciences Inc Anticorpo umanizzato bcma e cellule bcma-car-t
EP4438729A3 (en) * 2019-12-09 2025-03-26 Caribou Biosciences, Inc. Crispr abasic restricted nucleotides and crispr accuracy via analogs

Also Published As

Publication number Publication date
HRP20241133T1 (hr) 2024-11-22
IL277640B1 (en) 2025-06-01
JP7492561B2 (ja) 2024-05-29
AU2020208364A1 (en) 2020-10-15
US20200399387A1 (en) 2020-12-24
SI3749338T1 (sl) 2024-09-30
US20210277136A1 (en) 2021-09-09
US20240182591A1 (en) 2024-06-06
HUE067864T2 (hu) 2024-11-28
US11142583B2 (en) 2021-10-12
JP7128294B2 (ja) 2022-08-30
PT3749338T (pt) 2024-09-20
MX2023005420A (es) 2023-05-23
KR20200138330A (ko) 2020-12-09
JP2022166199A (ja) 2022-11-01
US10927182B2 (en) 2021-02-23
US12435152B2 (en) 2025-10-07
CA3098995A1 (en) 2020-07-23
US11021542B1 (en) 2021-06-01
US20250163171A1 (en) 2025-05-22
CA3098995C (en) 2024-06-25
WO2020150339A1 (en) 2020-07-23
US11299549B2 (en) 2022-04-12
ES2991170T3 (es) 2024-12-02
US20220017633A1 (en) 2022-01-20
AU2020208364B2 (en) 2020-10-22
CN112074279A (zh) 2020-12-11
IL277640A (en) 2020-11-30
EP3749338A4 (en) 2021-12-22
MX2020011391A (es) 2020-11-24
RU2021136081A (ru) 2022-01-11
KR102345941B1 (ko) 2021-12-31
US20210155704A1 (en) 2021-05-27
EP3749338B1 (en) 2024-07-17
US11472884B2 (en) 2022-10-18
IL277640B2 (en) 2025-10-01
EP3749338A1 (en) 2020-12-16
CN112074279B (zh) 2024-01-26
JP2021525063A (ja) 2021-09-24
SMT202400408T1 (it) 2024-11-15
ZA202006057B (en) 2021-10-27
NZ768183A (en) 2024-07-05
DK3749338T3 (da) 2024-07-29
LT3749338T (lt) 2024-08-12
RU2762942C1 (ru) 2021-12-24
US20220220217A1 (en) 2022-07-14
PL3749338T3 (pl) 2024-10-14
SG11202009283QA (en) 2020-10-29
FI3749338T3 (fi) 2024-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3749338B1 (en) Humanized bcma antibody and bcma-car-t cells
US12552872B2 (en) Humanized BCMA antibody and BCMA-CAR-T cells
US20220220201A1 (en) Cs1 antibody and anti-cs1-car-t cells
US12103970B2 (en) CAR-T cells with humanized CD19 ScFv
US12227589B2 (en) Epcam antibody and Epcam-CAR-T cells
US20230227557A1 (en) Pd-l1-specific antibody and anti-pd-l1-car-t cells
US12528873B2 (en) Humanized BCMA antibody and BCMA-CAR-T cells
RU2795443C2 (ru) Гуманизированное антитело к bcma и bcma-car-nk-клетки
US12173077B2 (en) Humanized BCMA antibody and BCMA-CAR-T cells
HK40032892A (en) Humanized bcma antibody and bcma-car-t cells
HK40032892B (en) Humanized bcma antibody and bcma-car-t cells
WO2025155485A1 (en) Ror-1 antibody and ror-1-car-t cells