RS61107B1 - Glukagon i glp-1 ko-agonist jedinjenja - Google Patents

Glukagon i glp-1 ko-agonist jedinjenja

Info

Publication number
RS61107B1
RS61107B1 RS20201437A RSP20201437A RS61107B1 RS 61107 B1 RS61107 B1 RS 61107B1 RS 20201437 A RS20201437 A RS 20201437A RS P20201437 A RSP20201437 A RS P20201437A RS 61107 B1 RS61107 B1 RS 61107B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
glu
gly
lys
ser
acid
Prior art date
Application number
RS20201437A
Other languages
English (en)
Inventor
Yanyun Chen
Adam Robert MEZO
Hongchang Qu
Francisco Alcides VALENZUELA
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of RS61107B1 publication Critical patent/RS61107B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Opis
[0001] Predmetni pronalazak je u oblasti medicine. Specifičnije, predmetni pronalazak je u oblasti tretmana dijabetesa i gojaznosti i odnosi se na jedinjenja koja antagonizuju i glukagon (Gcg) receptor i glkagonu-slični peptid-1 (GLP-1) receptor. Specifično su obezbeđeni oksintomodulin/glukagon analozi sa amoinokiselinskim modifikacijama uvedenim za modulaciju aktivnosti i za Gcg receptor i GLP-1 receptor.
[0002] Tokom nekoliko proteklih decenija, prevalenca dijabetesa je nastavila da se povećava. Dijabetes melitus Tipa 2 (T2D) je najčešći oblik dijabetesa koji čini približno 90% ukupnog dijabetesa. T2D se karakteriše visokim nivoom gluokze u krvi izazvanim rezistencijom na insulin. Trenutni standardni postupak za T2D uključuje dijetu i vežbanje zajedno sa dostupnim oralnim i injektabilnim lekovima za snižavanje glukoze. Međutim, mnogi pacijenti sa T2D još uvek nisu adektvantno pod kontrolom. Nekontrolisani dijabetes dovodi do nekoliko stanja koji utiču na morbiditet i mortalitet pacijenata. Vodeći uzrok smrti za pacijente sa dijabetesom su kardiovaskularne komplikacije. Jedan od glavnih faktora rizika za dijabetes tipa 2 je gojaznost. Većina T2D pacijenata (∼90%) imaju povećanu telesnu težinu ili gojaznost. Dokumentovano je da smanjenje adipoznosti tela dovodi do poboljšanja u ko-morbiditetima povezanim sa gojaznošću uključujući hiperglikemiju i kardiovaskularne događaje. Stoga, terapije efikasne u kontroli glukoze i smanjenju težine su potrebne za bolju kontrolu bolesti.
[0003] Određen broj peptida izvedenih iz pre-proglukagona, i njegovi analozi, predloženi su kao terapeutici za tretman T2D i gojaznosti, naročito, Gcg, GLP-1 i oksintomodulin (OXM). Preproglukagon je polipeptid prekursor od 158 aminokiselina koji se diferencijalno obrađuje u tkivima da bi formirao brojne strukturno srodne proglukagon-izvedene peptide, uključujući Gcg, GLP-1, glukagon-sličan-peptid-2 (GLP-2), i oksintomodulin (OXM). Ovi molekuli su uključeni u brojne različite fiziološke funkcije, uključujući homeostazu glukoze, sekreciju insulina, -pražnjenje želudca i intestinalni rast, kao i regulaciju unosa hrane.
[0004] Gcg je peptid od 29 aminokiselina koje odgovaraju aminokiselinama 53 do 81 preproglukagona. OXM je peptid od 37 aminokiselina i sastavljen je od kompletne sekvence Gcg od 29 aminokiselina sa oktapeptid karboksi terminalnom ekstenzijom (aminokiseline 82 do 89 pre-proglukagona i nazvan "interventni peptid 1" ili IP-1). Glavni biološki aktivni fragment GLP-1 (GLP-17-36) proizvodi se kao C-terminalno amidovani peptid od 30 aminokiselina, koje odgovaraju aminokiselinama 98 do 127 pre-proglukagona.
[0005] Gcg pomaže u održavanju nivoa glukoze u krvi vezivanjem sa Gcg receptorima na hepatocitima, dovodeći do oslobađanja glukoze iz jetre – uskladištene u obliku glikogena – preko glikogenolize. Kako se ova skladišta prazne, Gcg stimuliše jetru da sintetiše dodatnu glukozu preko glukoneogeneze. Ova glukoza se oslobađa u krvotok, sprečavajući razvoj hipoglikemije.
[0006] GLP-1 ima različite biološke aktivnosti u poređenju sa Gcg. Njegove aktivnosti uključuju stimulaciju sinteze i sekrecije insulina, inhibiciju Gcg sekrecije i inhibiciju uzimanja hrane. Pokazano je da GLP-1 smanjuje hiperglikemiju kod dijabetesa. Nekoliko GLP-1 agonista je odobreno za upotrebu u tretmanu T2D kod ljudi, uključujući eksenatid, liraglutid, liksisenatid, albiglutid i dulaglutid. Takvi GLP-1 agonisti su efikasni u kontroli glikemije sa povoljnim efektima na težinu bez rizika od hipoglikemije. Međutim, gubitak težine je skroman usled dozno zavisnih gastrointestinalnih sporednih efekata.
[0007] OXM se oslobađa zajedno sa GLP-1 iz L-ćelija tankog creva proprcionalno ingestiji nutrijenata. OXM aktivira i Gcg i GLP-1 receptore, sa nešto višom potencijom za Gcg receptor u odnosu na GLP-1 receptor. Manje je potentan od nativnog Gcg i GLP-1 na njihovim nativnim receptorima. Humani Gcg je takođe sposoban da aktivira oba receptora, iako sa snažnom preferencom za Gcg receptor u odnosu na GLP-1 receptor. GLP-1 nije sposoban da aktivira Gcg receptore. OXM je uključen u regulaciju uzimanja hrane i telesnu težinu. Pokazano je da suprimira apetit i inhibira uzimanje hrane kod ljudi. U studiji od 4-nedelje sa subjektima sa većom telesnom težinom i gojaznim subjektima, tri puta dnevno preprandijalnom potkožnom primenom OXM proizveden je gubitak težine od 2.3 kg u poređenju sa 0.5 kg u placebo grupi. U ovoj studiji, mučnina, najčešći sporedni efekat povezan sa GLP-1 zasnovanom terapijom (kao što je eksenatid i liraglutid), bila je ređa. U drugoj kraćoj studiji, pokazano je da OXM smanjuje kalorijski unos i povećava potrošnju energije vezanu za aktivnost kod subjekata sa povećanom telesnom težinom i gojaznih subjekata.
[0008] Ovi podaci sugerišu da OXM ima potencijal da bude anti-dijabetes/gojaznost sredstvo sa dobrom tolerancijom. OXM, međutim, ima nekoliko problema kod razvoja u komercijalno vijabilno terapeutsko sredstvo. Endogeni OXM se brzo degradira in vivo sa dipeptidil peptidazom IV i drugim peptidazama i ima rapidni bubrežni klirens usled njegove male veličine. Stoga je poželjno identifikovati peptide koji aktiviraju Gcg i GLP-1 receptore sa poboljšanom metaboličkom stabilnošću i smanjenom stopom klirensa.
[0009] OXM peptidi sa aminokiselinskim supstitucijama za poboljšanje stabilnosti i sa dodatnim modifikacijama za usporavanje klirensa, kao što je PEGilacija ili lipidacija su opisani u tehnici. Za druge peptide se tvrdilo da se vezuju za i aktiviraju i Gcg receptor i GLP-1 receptor i da suprimiraju dobijanje telesne težine (videti na primer, WO 2011/075393 A2 i WO 2012/177444 A2).
[0010] Uprkos dostupnosti različitih peptida koji agonizuju i Gcg i GLP-1 receptore, ostaje potreba za potentnijim, stabilnim, se dugotrajnim dejstvom, i/ili dobro tolerisanim jedinjenjima koja imaju odnos Gcg receptor (Gcg-R)/GLP- 1 receptor (GLP-1-R) aktivnosti koij je tako optimizovan da potencija i insulinotropna aktivnost jedinjenja obezbeđuje efikasne tretmane za dijabetes, poželjno T2D, i povezane poremećaje. Naročito, ostaje potreba za jedinjenjima sa balansiranim odnosom Gcg-R/GLP-1-R ko-agonist aktivnosti koja smanjuju telesnu težinu. Takođe, ostaje potreba za obezbeđivanjem jedinjenja sa balansiranim odnosnom Gcg-R/GLP-1-R ko-agonist aktivnosti koji podržava potencijalno dnevno, dva puta nedeljno, jednom nedeljno ili mesečno doziranje kod ljudi. Shodno tome, predmetni pronalazak teži da obezbedi efikasni tretman za dijabetes, gojaznost, bolest nealkoholne masne jetre (NAFLD) i/ili nealkoholni steatohepatitis (NASH).
[0011] U jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde
Xaa2 je Aib;
Xaa28 je Glu ili Ser;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline, gde je linker ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana,
ili njegova farmacceutski prihvatljiva so.
[0012] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly gde
Xaa2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline, gde je linker ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0013] U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly gde
Xaa2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline, gde je linker ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0014] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline.
[0015] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, linker je izabran iz grupe koja se sastoji od:
(a) amino polietilen glikol karboksilat Formule I:
gde m je bilo koji ceo broj od 1 do 12, n je bilo koji ceo broj od 1 do 12, i p je 1 ili 2;
(b) aminokiseline izabrana iz grupe koja se sastoji od arginin (Arg), asparagin (Asn), asparaginska kiselina (Asp), glutamin (Gln), glutaminska kiselina (Glu), histidin (His), lizin (Lys), serin (Ser), treonin (Thr), citrulin (Cit), ornitin (Orn), sarkozin (Sar), glicin (Gly), γaminobuterna kiselina (γ-Abu) i γ-glutaminska kiselina (γ-Glu);
(c) dipeptida izabranog iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Glu-Glu, Gly-Gly, Leu-Leu, Ser-Ser, Thr- Thr, γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu, γ-Glu-Glu, γ-Abu-γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina-6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina-5- aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina-7- aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina-8-aminooktanska kiselina;
(d) tripeptida izabranog iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala-Ala, β-Ala-β-Ala-β-Ala, Glu-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu-γ-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-Glu-γ-Glu, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Ser, Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Glu, Glu-Gly-Gly, Gly-Glu-Gly, Gly-Gly-γ-Glu, γ-Glu-Gly-Gly, Gly-γ-Glu-Gly, Leu-Leu-Leu i γ-Abu-γ-Abu-γ-Abu;
(e) polipetida izabranog iz grupe koja se sastoji od (Gly-Gly-Ser)q (Gly-Gly-Gly-Ser)r i (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)r, (6- aminoheksanska kiselina)s, (5- aminovalerinska kiselina)s, (7-aminoheptanska kiselina)s, i (8-aminooktanska kiselina)s, gde q je bilo koji ceo broj od 2 do 5, r je bilo koji ceo broj od 1 do 3, i s je bilo koji ceo broj od 4 do 15; i
(f) konjugatnog linkera gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I kao što je definisan u (a) je konjugovan sa :
(i) aminokiselinom izabranom iz grupe koja se sastoji od Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys, Ser, Thr, Cit, Orn, Sar, Gly, γ-Abu i γ-Glu;
(ii) dipeptidom izabranim iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Glu-Glu, Gly-Gly, Leu-Leu, Ser-Ser, Thr-Thr, γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu, γ-Glu-Glu, γ-Abu-γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina-6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina-5-aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina-7-aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina-8-aminooktanska kiselina;
(iii) tripeptidom izabranim iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala-Ala, β-Ala-β-Ala-β-Ala, Glu-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu-γ-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-Glu-γ-Glu, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Ser, Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Glu, Glu-Gly-Gly, Gly-Glu-Gly, Gly-Gly-γ-Glu, γ-Glu-Gly-Gly, Gly-γ-Glu-Gly, Leu-Leu-Leu i γ-Abu-γ-Abu-γ-Abu; ili
(iv) polipeptidom izabrnim iz grupe koja se sastoji od (Gly-Gly-Ser)q (Gly-Gly-Gly-Ser)r i (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)r, (6-aminoheksanska kiselina)s, (5-aminovalerinska kiselina)s, (7-aminoheptanska kiselina)s, i (8-aminooktanska kiselina)s, gde q je bilo koji ceo broj od 2 do 5, r je bilo koji ceo broj od 1 do 3, i s je bilo koji ceo broj od 4 do 15.
[0016] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, linker je amino polietilen glikol karboksilat Formule I:
gde m je bilo koji ceo broj od 1 do 12, n je bilo koji ceo broj od 1 do 12, i p je 1 ili 2.
[0017] Za određena jedinjenja opisana ovde, n je 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 i m je 1 i p je 1 za amino polietilen glikol karboksilat Formule I.
[0018] Za određena jedinjenja opisana ovde, n je 2, m je 1 i p je 1 za amino polietilen glikol karboksilat Formule I.
[0019] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, linker je aminokiselina izabrana iz grupe koja se sastoji od Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys, Ser, Thr, Cit, Orn, Sar, Gly, γ-Abu i γ-Glu.
[0020] Za određena jedinjenja opisana ovde, aminokiselina je γ-Glu.
[0021] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, linker je dipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Glu-Glu, Gly-Gly, Leu-Leu, Ser-Ser, Thr-Thr, γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu, γ-Glu-Glu, γ-Abu-γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina-6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina-5-aminovalerinska kiselina, 7aminoheptanska kiselina-7-aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina-8-aminooktanska kiselina.
[0022] Za određena jedinjenja opisana ovde, dipeptid je γ-Glu-γ-Glu.
[0023] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, linker je tripeptid izabran iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala-Ala, β-Ala-β-Ala-β-Ala, Glu-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu-γ-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-Glu-γ-Glu, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Ser, Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Glu, Glu-Gly-Gly, Gly- Glu-Gly, Gly-Gly-γ-Glu, γ-Glu-Gly-Gly, Gly-γ-Glu-Gly, Leu-Leu-Leu i γ-Abu-γ-Abu-γ-Abu.
[0024] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, linker je polipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od (Gly-Gly-Ser)q (Gly-Gly-Gly-Ser)r i (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)r, (6-aminoheksanska kiselina)s, (5-aminovalerinska kiselina)s, (7-aminoheptanska kiselina)s, i (8-aminooktanska kiselina)s, gde q je bilo koji ceo broj od 2 do 5, r je bilo koji ceo broj od 1 do 3, i s je bilo koji ceo broj od 4 do 15.
[0025] Za određena jedinjenja opisana ovde, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, linker je konjugatni linker, gde je amino polietilen glikol karboksilat Formule I:
gde m je bilo koji ceo broj od 1 do 12, n je bilo koji ceo broj od 1 do 12, i p je 1 ili 2, je konjugovan sa:
(i) aminokiselinom izabranom iz grupe koja se sastoji od Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys Ser, Thr, Cit, Orn, Sar, Gly, γ-Abu i γ-Glu;
(ii) dipeptidom izabranim iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Glu-Glu, Gly-Gly, Leu-Leu, Ser-Ser, Thr-Thr, γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu, γ-Glu-Glu, γ-Abu-γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina-6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina-5-aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina-7-aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina-8-aminooktanska kiselina;
(iii) tripeptidom izabranim iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala-Ala, β-Ala-β-Ala-β-Ala, Glu-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu-γ-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-Glu-γ-Glu, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Ser, Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Glu, Glu-Gly-Gly, Gly-Glu-Gly, Gly-Gly-γ-Glu, γ-Glu-Gly-Gly, Gly-γ-Glu-Gly, Leu-Leu-Leu i γ-Abu-γ-Abu-γ-Abu; ili
(iv) polipeptidom izabranim iz grupe koja se sastoji od (Gly-Gly-Ser)q (Gly-Gly-Gly-Ser)r i (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)r, (6-aminoheksanska kiselina)s, (5-aminovalerinska kiselina)s, (7-aminoheptanska kiselina)s, i (8-aminooktanska kiselina)s, gde q je bilo koji ceo broj od 2 do 5, r je bilo koji ceo broj od 1 do 3, i s je bilo koji ceo broj od 4 do 15.
[0026] Za određena jedinjenja opisana ovde, n je 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 i m je 1 i p je 1 za amino polietilen glikol karboksilat Formule I.
[0027] Za određena jedinjenja opisana ovde, n je 2, m je 1 i p je 1 za amino polietilen glikol karboksilat Formule I.
[0028] Za određena jedinjenja opisana ovde, aminokiselina je γ-Glu.
[0029] Za određena jedinjenja opisana ovde, dipeptid je γ-Glu-γ-Glu.
[0030] U poželjnom aspektu jedinjenja prema predmetnom pronalasku, linker je ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2.
[0031] Poželjno, t je 1.
[0032] Dodatno poželjno, t je 2.
[0033] U dodatno poželjnom aspektu jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, C14-C24 masna kiselina je zasićena monokiselina ili zasićena dikiselina.
[0034] Poželjno, masna kiselina je zasićena monokiselina ili zasićena dikiselina izabrana iz grupe koja se sastoji od miristinske kiseline (tetradekanska kiselina)(C14 monokiselina), tetradekanske dikiseline (C14 dikiselina), palmitinske kiseline (heksadekanska kiselina)(C16 monokiselina), heksadekanske dikiseline (C16 dikiselina), margarinske kiseline (heptadekanska kiselina)(C17 monokiselina), heptadekanske dikiseline (C17 dikiselina), stearinske kiseline (oktadekanska kiselina)(C18 monokiselina), oktadekanske dikiselina (C18 dikiselina), nonadekanske kiseline (nonadekanska kiselina)(C19 monokiselina), nonadekanske dikiseline (C19 dikiselina), arahidonske kiseline (eikozanska kiselina)(C20 monokiselina), eikozanske dikiseline (C20 dikiselina), heneikozilinske kiseline (heneikozanska kiselina)(C21 monokiselina), heneikozanske dikiseline (C21 dikiselina), behenske kiseline (dokozanska kiselina)(C22), dokozanske dikiseline (C22 dikiselina), lignocerinske kiseline (tetrakozanska kiselina)(C24 monokiselina) i tetrakozanske dikiseline (C24 dikiselina).
[0035] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je miristinska kiselina
[0036] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je tetradekanska dikiselina.
[0037] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je palmitinska kiselina.
[0038] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je heksadekanska dikiselina.
[0039] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je stearinska kiselina.
[0040] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je oktadekanska dikiselina.
[0041] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je nonadekanska dikiselina.
[0042] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je arahidonska kiselina.
[0043] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je eikozanska dikiselina.
[0044] Dodatno poželjno, C14-C24 masna kiselina je dokozanska dikiselina.
[0045] U dodatno poželjnom aspektu jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, C-terminalna aminokiselina je amidovana.
[0046] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)-CO-(CH2)16CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 5),
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0047] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)-CO-(CH2)18CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 6);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0048] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)2-CO-(CH2)16CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 7);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0049] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)2-CO-(CH2)18CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 8);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0050] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje prema predmetnom pronalasku, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ili ekscipijent.
[0051] Ovde je opisana farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema predmetnom pronalasku, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, razblaživačem, ili ekscipijentom i drugim terapeutskim sastojcima.
[0052] Dodatno je ovde opisan postupak za tretiranje dijabetesa tipa 2 kod subjekta kojme je to potrebno, koji sadrži primenu efikasne količine jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na subjekta.
[0053] Dodatno je ovde opisan postupak za tretiranje gojaznosti kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu efikasne količine jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na subjekta.
[0054] Dodatno je ovde opisan postupak za tretiranje bolesti nealkoholne masne jetre (NASH) kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu efikasne količine jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na subjekta.
[0055] Dodatno je ovde opisan postupak za tretiranje nealkoholnog steatohepatitisa kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu efikasne količine jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na subjekta.
[0056] Dodatno je ovde opisan postupak za indukovanje gubitka težine kod subjekta, koji sadrži primenu efikasne količine jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0057] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje prema predmetnom pronalasku za upotrebu u terapiji.
[0058] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje prema predmetnom pronalasku za upotrebu u tretmanu dijabetesa tipa 2.
[0059] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje prema predmetnom pronalasku za upotrebu u tretmanu gojaznosti.
[0060] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje prema predmetnom pronalasku za upotrebu u tretmanu bolesti nealkoholne masne jetre (NAFLD).
[0061] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje prema predmetnom pronalasku za upotrebu u tretmanu nealkoholnog steatohepatitisa (NASH).
[0062] Ovde je opisana upotreba jedinjenja prema predmetnom pronalasku za proizvodnju medikamenta za tretman type 2 dijabetes.
[0063] Dodatno ovde je opisana upotreba jedinjenja prema predmetnom pronalasku za proizvodnju medikamenta za tretman gojaznosti.
[0064] Dodatno ovde je opisana upotreba jedinjenja prema predmetnom pronalasku za proizvodnju medikamenta za tretman bolesti nealkoholne masne jetre (NAFLD).
[0065] Dodatno ovde je opisana upotreba jedinjenja prema predmetnom pronalasku za proizvodnju medikamenta za treatment nealkoholnog steatohepatitisa (NASH).
[0066] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje intermedijerno jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib;
Xaa28 je Glu ili Ser (SEQ ID NO: 9);
i C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana,
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0067] Poželjno, predmetni pronalazak obezbeđuje intermedijerno jedinjenje sledeće formule: His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana (SEQ ID NO: 10);
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0068] Dodatno poželjno, predmetni pronalazak obezbeđuje intermedijerno jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib;
i C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana (SEQ ID NO: 11),
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0069] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za proizvodnju jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa 2 je Aib;
i Xaa28 je Glu ili Ser;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline, gde je linker ([2-(2- aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu pomenuti postupak sadrži korak: (i) modifikovanja intermedijernog jedinjenja sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp- Leu-Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
gde Xaa2 je Aib; Xaa28 je Glu ili Ser; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana (SEQ ID NO: 9), konjugovanjem epsilonamino grupe Lys bočnog lanca na položaju 20 inetermedijernog jedinjenja sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera, gde je linker ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2.
[0070] Lys na položaju 20 intermedijernog jedinjenja je modifkovan konjugacijom sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline.
[0071] Ovde je opisano jedinjenje proizvedeno prethodno opisanim postupkom.
[0072] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku su sposobna da se vezuju za i aktiviraju i GLP-1 receptor i Gcg receptor. Jedinjenja prema predmetnom pronalasku su sposobna da dovedu do smanjenja uzimanja hrane kod osoba sa povećanom telesnom težinom i gojaznih subjekta. Jedinjenja prema pronalasku imaju potencijal da obezbede superiorni efekat gubitka težine nasuprot divljem tipu humanog OXM.
[0073] Jedinjenja prema pronalasku mogu poboljšati toleranciju na glukozu i lipidni profil kod subjekata sa T2D i/ili povezanim metaboličkim poremećajima i mogu to učiniti efikasnije od divljeg tipa humanog OXM
[0074] Specifična prednost jedinjenja prema predmetnom pronalasku je da učestalost sporednih efekata, kao što je mučnina, koja je uobičajeno povezana sa GLP-1 terapijom, kao što je eksenatid i liraglutid, može biti smanjena ili eliminisana. Jedinjenja prema predmetnom pronalasku stoga mogu imati smanjene sporedne efekte u poređenju sa GLP-1 terapijom.
[0075] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku sadrže polipeptid konjugovan sa masnom kiselinom. Masne kiseline, preko njihovih albumin vezujućih motiva, mogu poboljšati farmakokinetiku peptida produžavanjem polu-života u plazmi i smanjivanjem stope klirensa. Dok bi se očekivalo da jedinjenja prema predmetnom pronalasku pokazuju poboljšan farmakokinetički profil u odnosu na divlji tip humanog OXM, veličina poboljšanja nije predvidljiva. Pronalazači su otkrili da dužina, sastav i položaj masne kiseline, i izborno, linkera, u jedinjenjima prema predmetnom pronalasku rezultuju u jedinjenjima sa poželjnim farmakokinetičkim profilom koji podržava dnevno, dva puta nedeljno, jednom nedeljno ili mesečno doziranje.
[0076] Dodatno poboljšanom farmakokinetičkom profilu, pronalazači predmetnog pronalaska su takođe otkrili da dužina, sastav i položaj masne kiseline, i izborno, linkera, su kritični za optimizaciju odnosa Gcg- R/GLP-1-R ko-agonističke aktivnosti.
[0077] Divlji tip humanog OXM ima punu efikasnost i potenciju na humanom GLP-1-R i humanom Gcg-R. Aminokiselinska sekvenca divljeg tipa humanog OXM je obezbeđena u nastavku:
His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-Ile-Ala (SEQ ID NO: 1)
[0078] Određena jedinjenja prema predmetnom pronalasku imaju balansirani odnos Gcg-R/GLP-1-R ko-agonističke aktivnosti. Balansirana Gcg i GLP-1 aktivnost kao što je ovde korišćeno odnosi se na jedinjenje koje ima afinitet za Gcg i GLP-1 receptore u in vitro analizi vezivanja koja je bliska 1:1, kao što je 1:1 GLP-1/Gcg, 2:1 GLP-1/Gcg, 3:2 GLP-1/Gcg, 1:2 GLP-1/Gcg, ili 2:3 GLP-1/Gcg. Istraživanje izvedeno od strane pronalazača otkrilo je da su dužina, kompozicija i položaj masne kiseline kritični za postizanje balansiranog odnosa Gcg-R/GLP-1-R ko-agonističke aktivnosti koja je karakteristična za jedinjenja prema predmetnom pronalasku, kao i uticaj na polu-život u plazmi, fizička stabilnost, rastvorljivost i in vivo stabilnost jedinjenja prema predmetnom pronalasku.
[0079] Dok konjugacija peptida sa masnom kiselinom ima prednosti u odnosu na poboljšani farmakokinetički profil i/ili balansirani odnos Gcg-R/GLP-1-R ko-agonističke aktivnosti, takođe bi se očekivalo da jedinjenje može izgubiti aktivnost jer postoji potencijal za interferenciju sa ili Gcg receptorom ili GLP-1 receptorom. Nađeno je, međutim, da konjugacija ostatka lizina na položaju 20 sa masnom kiselinom zadržava aktivnost in vitro i in vivo na oba receptora u višem stepenu nego što je to slučaj kada su aminokiseliname na drugim položajima konjugovane sa masnim kiselinama.
[0080] Dodatno, nekoliko aminokiselinskih supstitucija u odnosu na divlji tip humanog OXM u jedinjenjima za koja se traži zaštita sposobno je da poboljša potenciju na Gcg-R i/ili GLP-1-R, čime se poništava gubitak potencije usled konjugacije sa masnim kiselinama uz održavanje odgovarajućeg odnosa Gcg-R/GLP-1-R ko-agonističke aktivnosti. Važno je napomenuti da supstitucija jednog aminokiselinskog ostatka u specifičnom proteinu može uticati na karakteristike proteina kao celine, i da ukupni efekat može biti koristan ili štetan po farmakološku potenciju i/ili farmaceutsku stabilnost. Određene aminokiselinske supstitucije mogu povećati potenciju ali imati štetan efeakt na stabilnost efekta i obrnuto. Aminokiselinske supstitucije u jedinjenjima prema predmetnom pronalasku u odnosu na divlji tip humanog OXM (SEQ ID NO: 1) uključuju S2Aib, S16E, R17K, R18K, Q20K, D21E, Q24E, M27L, N28E ili N28S i T29G. Dodatno, C-terminalna sekvenca OXM, KRNRNNIA, zamenjena je sa GPSSG C-terminalnom sekvencom.
[0081] S2Aib supstitucija štiti peptid od degradacije sa peptidazama, naročito, dipeptidil peptidazom IV. S16E, R17K, R18K i Q20K supstitucije su sposobne da poboljšaju potenciju jedinjenja prema pronalasku u in vitro analizama i in vivo životinjskim modelima. D21E i Q24E supstitucije su sposobne za poboljašnje stabilnosti jedinjenja prema pronalasku i modulisanje in vitro aktivnosti. M27L supstitucija je sposobna da zaštiti peptid od oksidacije metioninskog ostatka. N28E supstitucija je sposobna da poboljša rastvorljivost jedinjenja koja sadrže tu supstituciju. N28S supstitucija je takođe sposobna da poboljša rastvorljivost jedinjenja koja sadrže tu supstituciju, ali ne do istog stepena kao N28E supstitucija. Međutim, rastvorljivost jedinjenja koja sadrže N28S supstituciu može se poboljšati izborom odgovarajućeg linkera. Supstitucija asparaginskog ostatka na položaju 28 izbegava mogućnost deamidacije koja se dešava na ovom položaju.
[0082] Uklanjanje ostataka C-terminalne sekvence OXM, KRNRNNIA, može poboljšati stabilnost, koja se može pripissati uklanjanju argininskih ostataka. Pronalazači su procenili jedinjenja koja (i) nemaju C-terminalnu sekvencu, (ii) jedinjenja sa GPSSG C-terminalnom sekvencom i (iii) jedinjenja sa GPSSGAPPPS C-terminalnom sekvencom. Iznenađujuće je pronađeno da određena jedinjenja sa GPSSG C-terminalnom sekvencom pokazuju poboljšanu in vivo potenciju u životinjskim modelima u odnosu na divlji tip humanog OXM, jedinjenja bez C-terminalne sekvence i jedinjenja sa GPSSGAPPPS C-terminalnom sekvencom. GPSSG C-terminalna sekvenca takođe je poboljšala stabilnost i rastvorljivost jedinjenja prema pronalasku u odnosu na divlji tip humanog OXM i jedinjenja bez C-terminalne sekvence.
[0083] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku stoga sadrže aminokiselinske supstitucije koje, zasebno ili zajedno, ne samo da su sposobna da poboljšaju potenciju, već su takođe sposobna da obezbede poboljšanu fizičku stabilnost i karakteristike rastvaranja i povećanu in vivo stabilnost.
[0084] Za određena jedinjenja opisana ovde, C14-C24 masne kiseline su konjugovane sa epsilon-amino grupom lizina bočnog lanca preko linkera, gde je linker izabran iz grupe koja se sastoji od: (a) amino polietilen glikol karboksilata Formule I:
H-{NH-CH2-CH2-[O-CH2-CH2]m-O-(CH2)p-CO}n-OH (I)
gde m je bilo koji ceo broj od 1 do 12, n je bilo koji ceo broj od 1 do 12, i p je 1 ili 2; (b) amino kiselina izabrana iz grupe koja se sastoji od Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys, Pro, Ser, Thr, Cit, Orn, Sar, Gly, γ-Abu i γ-Glu; (c) dipeptida izabranog iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala, β-Alaβ-Ala, Glu-Glu, Gly-Gly, Leu-Leu, Pro-Pro, Ser- Ser, Thr-Thr, γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu, γ-Glu-Glu, γ-Abu-γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina-6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina-5-aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina-7-aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina-8-aminooktanska kiselina; (d) tripeptida izabranog iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala-Ala, β-Ala-β-Ala-β-Ala, Glu-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu-γ-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-Glu-γ-Glu, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Ser, Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Glu, Glu-Gly-Gly, Gly-Glu-Gly, Gly-Gly-γ-Glu, γ-Glu-Gly-Gly, Gly-γ-Glu-Gly, Leu-Leu-Leu, Pro-Pro-Pro i γ-Abu-γ-Abu- γ-Abu; (e) polipeptida izabrnog iz grupe koja se sastoji od (Gly-Gly-Ser)q (Gly-Gly-Gly-Ser)r i (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)r, (6-aminoheksanska kiselina)s, (5-aminovalerinska kiselina)s, (7-aminoheptanska kiselina)s, i (8-aminooktanska kiselina)s, gde q je bilo koji ceo broj od 2 do 5, r je bilo koji ceo broj od 1 do 3, i s je bilo koji ceo broj od 4 do 15; i (f) konjugatni linker gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I kao što je definisan u (a) je konjugovan sa: (i) amino kiselina izabrana iz grupe koja se sastoji od Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys, Pro, Ser, Thr, Cit, Orn, Sar, Gly, γ-Abu i γ-Glu; (ii) dipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Glu-Glu, Gly-Gly, Leu-Leu, Pro-Pro, Ser-Ser, Thr-Thr, γ-Gluγ-Glu, Glu-γ-Glu, γ-Glu-Glu, γ-Abu-γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina-6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina-5-aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina-7-aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina-8-aminooktanska kiselina; (iii) tripeptid izabran iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala-Ala, β-Ala-β-Ala-β-Ala, Glu-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Gluγ-Glu, Glu-γ-Glu-γ-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-Glu-γ-Glu, Gly-Gly-Gly, Gly-Gly-Ser, Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Glu, Glu-Gly-Gly, Gly-Glu-Gly, Gly-Gly-γ-Glu, γ-Glu-Gly-Gly, Gly-γ-Glu-Gly, Leu-Leu-Leu, Pro-Pro-Pro i γ-Abu-γ-Abu-γ-Abu; ili (iv) polipeptida izabranog iz grupe koja se sastoji od (Gly-Gly-Ser)q (Gly-Gly-Gly- Ser)r i (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)r, (6-aminoheksanska kiselina)s, (5-aminovalerinska kiselina)s, (7-aminoheptanska kiselina)s, i (8-aminooktanska kiselina)s, gde q je bilo koji ceo broj od 2 do 5, r je bilo koji ceo broj od 1 do 3, i s je bilo koji ceo broj od 4 do 15.
[0085] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker je amino polietilen glikol karboksilat Formule I, ili konjugat linker gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I je konjugovan sa aminokiselinom, dipeptidom, tripeptidom ili polipeptidom, kao što je prethodno dedfinisano, gde n je 1, 2, 3, 4, 5 ili 6, m je 1 i p je 1.
[0086] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker je amino polietilen glikol karboksilat Formule I, ili konjugat linker gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I je konjugovan sa amino kiselinom, dipeptidom, tripeptidom ili polipeptidom, kao što je prethodno definisano, gde n je 2, m je 1 i p je 1.
[0087] Za određena jedinjenja opisana ovde, amino polietilen glikol karboksilat linker Formule I, ili konjugat linker gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I je konjugovan sa aminokiselinom, dipeptidom, tripeptidom ili polipeptidom, kao što je prethodno definisano, sadrži mali polietilen glikol deo (PEG) koji sadrži strukturu [-O-CH2-CH2-]m, gde m je ceo broj između 1 i 12, (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12). Takvi mali PEGs su ovde označeni kao "mini-PEG". U poželjnim aspektima, mini-PEG ima strukturu Formule I:
H-{NH-CH2-CH2-[O-CH2-CH2]m-O-(CH2)p-CO}n-OH (I)
gde m je bilo koji ceo broj od 1 do 12, n je bilo koji ceo broj od 1 do 12 i p je 1 ili 2. Poželjno, mini-PEG ima strukturu Formule I, gde n je 1, 2, 3, 4, 5 ili 6, m je 1 i p je 1. Dodatno poželjno, miniPEG ima strukturu Formule I gde n je 1, m je 1 i p je 1. Pogodni reagensi za upotrebu u acilovanju aminokiselina sa mini-PEG su komercijalno dostupni od dobavljača, kao što su Peptides International (Louisville, KY) i ChemPep, Inc. (Wellington, FL). Takođe, pogodne tehnike za acilovanje aminokiselina sa mini-PEG su ovde opisane (videti Primere 1-4).
[0088] Mini-PEG Formule I je funkcionalizovani miniPEG koji sadrži funkcionalnu amino grupu i karboksilnu funkcionalnu grupu. Karboksilna funkcionalna grupa reaguje sa epsilonamino grupom bočnog lanca lizina da bi formirala amidnu vezu. Funkcionalna amino grupa reaguje sa karboksilnom grupom masne kiseline. Lizin na položaju 20 peptida iz SEQ ID NO: 2 je stoga konjugovan sa C14-C24 masnom kiselinom preko mini-PEG Formule I.
[0089] Alternativno, za određena jedinjenja opisana ovde, kada mini-PEG Formule I je seo konjugat linkera (tj. mini-PEG Formule I konjigovan sa aminokiselinom, dipeptidom, tripeptidom ili polipeptidom kao što je prethodno definisano), funkcionalna amino grupa mini-PEG Formule I reaguje sa funkcionalnom grupom aminokiseline, dipeptida, tripeptida ili polipeptida. Dodatno funkcionalna grupa aminokiseline, dipeptida, tripeptida ili polipeptida reaguje sa karboksilnom grupom masne kiseline. Lizin na položaju 20 peptida iz SEQ ID NO: 2 je stoga konjugovan sa C14-C24 masnom kiselinom preko konjugat linkera kao što je prethodno definisano.
[0090] Hidrofilna priroda mini-PEG Formule I služi da poveća rastvorljivost jedinjenja prema pronalasku koje sadrži linker koji sadrži amino polietilen glikol karboksilat Formule I ili konjugat linker gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I je konjugovan sa aminokiselinom, dipeptidom, tripeptidom ili polipeptidom, kao što je deifnisano.
[0091] Za određena jedinjenja opisana ovde, poželjni linkeri koji sadrže mini-PEG Formule I uključuju, ali nisu ograničeni na, ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2 i 8-amino-3,6-dioksaoktansku kiselinu.
[0092] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker talkođe može biti jedan aminokiselina postavljena između epsilon-amino grupe bočnog lanca lizina i C14-C24 masne kiseline. U nekim poželjnim aspektima, aminokiselina je hidrofilna amino kiselina. Pogodne aminokiseline uključuju Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys, Pro, Ser, Thr, Cit, Orn, Sar, Gly, γ-Abu i γ-Glu.
[0093] Za određena jedinjenja opisana ovde, aminokiselina je γ-Glu.
[0094] Alternativno, za određena jedinjenja opisana ovde, linker je dipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Glu-Glu, Gly-Gly, Leu-Leu, Pro-Pro, Ser-Ser, Thr-Thr, γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu, γ-Glu-Glu, γ-Abu- γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina-6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina-5-aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina- 7-aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina-8-aminooktanska kiselina.
[0095] Dodatno alternativno, za određena jedinjenja opisana ovde, svaka aminokiselina dipeptida može biti ista ili različita od drugih aminokiselina dipeptida, i može biti nezavisno izabrana iz grupe koja se sastoji od Ala, β-Ala, Glu, Gly, Leu, Pro, Ser, Thr, γ-Glu, γ-Abu, 6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina i 8-aminooktanska kiselina.
[0096] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker je γ-Glu-γ-Glu.
[0097] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker je tripeptid gde aminokiseline tripeptida su nezavisno izabrane iz grupe koja se sastoji od: Ala, β-Ala, Glu, Gly, Leu, Pro, Ser, Thr, γaminobutyric kiselina (γ-Abu), γ-glutamic kiselina (γ-Glu), 6-aminoheksanska kiselina, 5-aminovalerinska kiselina, 7-aminoheptanska kiselina, i 8-aminooktanska kiselina.
[0098] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker je tripeptid izabran iz grupe koja se sastoji od Ala- Ala-Ala, β-Ala-β-Ala-β-Ala, Glu-Glu-Glu, γ-Glu-γ-Glu-γ-Glu, Glu-γ-Glu-γ-Glu, γ-Glu-γ-Glu-Glu, γ-Glu-Glu-γ-Glu, Gly-Gly- Gly, Gly-Gly-Ser, Ser-Gly-Gly, Gly-Ser-Gly, Gly-Gly-Glu, Glu-Gly-Gly, Gly-Glu-Gly, Gly-Gly-γ-Glu, γ-Glu-Gly-Gly, Gly-γ- Glu-Gly, Leu-Leu-Leu, Pro-Pro-Pro i γ-Abu-γ-Abu-γ-Abu.
[0099] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker je polipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od (Gly- Gly-Ser)q (Gly-Gly-Gly-Ser)r i (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)r, (6-aminoheksanska kiselina)s, (5-aminovalerinska kiselina)s, (7-aminoheptanska kiselina)s, i (8-aminooktanska kiselina)s, gde q je bilo koji ceo broj od 2 do 5, r je bilo koji ceo broj od 1 do 3, i s je bilo koji ceo broj od 4 do 15.
[0100] Za određena jedinjenja opisana ovde, linker je konjugat linker gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I:
H-{NH-CH2-CH2-[O-CH2-CH2]m-O-(CH2)p-CO}n-OH (I)
gde m je bilo koji ceo broj od 1 do 12, n je bilo koji ceo broj od 1 do 12, i p je 1 ili 2, je konjugovan sa aminokiselinom, dipeptidom, tripeptidom ili polipeptidom, kao što je prethodno definisano.
[0101] U poželjnom aspektu, amino polietilen glikol karboksilat konjugat linkera je ([2-(2-aminoetoksi)- etoksi]-acetil)2.
[0102] U poželjnijem aspektu, linker sadrži ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t (takođ eoznačen kao (AEEA)2--(γ-Glu)t), gde t je 1 ili 2. Masne kiseline i gama-glutaminska kiselina u linkeru deluju kao sredstva za vezivanje albumina, i obezbeđuju potencijal za generisanje jedinjenja sa dugotrajnim dejstvom in vivo. U najpoželjnijim aspektima, jedinjenja prema predmetnom pronalasku sadrže lizin na položaju 20 koji je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe bočnog lanca lizina sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t-CO-(CH2)d-CO2H, gde t je 1 ili 2 i d je 16 ili 18.
[0103] Kao što je prikazano na hemijskim strukturama Primera 1-4, prva jedinica [2-(2-Aminoetoksi)-etoksi]-acetil je vezana sa epsilon-amino grupom bočnog lanca lizina. Druga jedinica [2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-acetil je zatim vezana sa aminogrupom prve jedinice [2-(2-Aminoetoksi)-etoksi]-acetil. Zatim, prva jedinica γ-Glu je vezana sa aminogrupom druge jedinice [2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-acetil preko γ-karboksilne grupe bočnog lanca. Kada t = 2, druga jedinica γ-Glu je vezana sa α-aminogrupom prve jedinice γ-Glu preko γ-karboksilne grupe bočnog lanca. Konačno, masna kiselina je vezana sa α-aminogrupom prve (kada t = 1) ili druge (kada t = 2) jedinice γ-Glu.
[0104] Za određena jedinjenja opisana ovde, kada linker je aminokiselina, dipeptid, tripeptid, ili polipeptid, kao što je prethodno definisano, poželjno je da aminokiselina, ili najmanje jedna aminokiselina dipeptida, tripeptida ili polipeptida, je hidrofilna aminokiselina.
[0105] Slično, za određena jedinjenja opisana ovde, kada linker je konjugat linker gde amino polietilen glikol karboksilat Formule I:
H-{NH-CH2-CH2-[O-CH2-CH2]m-O-(CH2)p-CO}n-OH (II)
gde m je bilo koji ceo broj od 1 do 12, n je bilo koji ceo broj od 1 do 12, i p je 1 ili 2; je konjugovana sa aminokiselinom, dipeptidom, tripeptidom ili polipeptidom, kao što je prethodno definisano, poželjno je da aminokiselina/najmanje jedna aminokiselina od aminokiseline/dipeptida/tripeptida/polipeptida je hidrofilna aminokiselina.
[0106] Pogodne aminokiseline uključuju, ali nisu ograničene na, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Lys, Pro, Ser, Thr, Cit, Orn, Sar, Gly, γ-Abu i γ-Glu.
[0107] Pronalazači predmetnog pronalaska otkrili su da prisustvo jedne ili više hidrofilnih aminokliselina u linkeru kompenzuje gubitak rastvorljivosti koji se može normalno očekivati da se desi kao posledica aminokiselinske supstitucije u peptidu SEQ ID NO: 1. Na primer, u primeru izvođenja gde linker sadrži ([2-(2-aminoetoksi)- etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2, Xaa28 peptida iz SEQ ID NO: 1 može biti serin ili glutaminska kiselina. Izbor glutaminske kiseline na položaju 28 peptida iz SEQ ID NO: 2 poboljšava rastvorljivost takvih jedinjenja. Može se očekivati da izbor serina na položaju 28 peptida iz SEQ ID NO: 2 smanji rastvorljivost takvih jedinjenja u odnosu na ona jedinjenja koja se razlikuju samo po tome što imaju ostatak glutaminske kiseline na položaju 28. Međutim, druga γ-Glu aminokiselina u prethodno opisanon linkeru (tj. t je 2) kompenzuje ovo očekivano smanjenje rastvorljivosti.
[0108] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku koriste C14-C24 masne kiseline hemijski konjugovane sa epsilon amino grupom bočnog lanca lizina ili direktnim vezivanjem ili sa linkerom. Termin "C14-C24 masne kiseline" kao što je ovde korišćeno označava karboksilnu kiselinu sa između 14 i 24 atoma ugljenika. C14-C24 masne kiseline pogodne za korišćenje ovde mogu biti zasićena monokiselina ili zasićena dikiselina. Pod "zasićenom" označava se da masna kiselina ne sadrži ugljenik-ugljenik dvogube ili trogube veze.
[0109] Primeri specifičnih zasićenih C14-C24 masnih kiselina koje su pogodne za jedinjenja i njihove upotrebe opisane ovde uključuju, ali nisu ograničeni na, miristinska kiselina (tetradekanska kiselina)(C14 monokiselina), tetradekanska dikiselina (C14 dikiselina), palmitinska kiselina (heksadekanska kiselina)(C16 monokiselina), heksadekanska dikiselina (C16 dikiselina), margarinska kiselina (heptadekanska kiselina)(C17 monokiselina), heptadekanska dikiselina (C17 dikiselina), stearinska kiselina (oktadekanska kiselina)(C18 monokiselina), oktadekanska dikiselina (C18 dikiselina), nonadecilinska kiselina (nonadekanska kiselina)(C19 monokiselina), nonadekanska dikiselina (C19 dikiselina), arahidonska kiselina (eikozanoinska kiselina)(C20 monokiselina), eikozanska dikiselina (C20 dikiselina), heneikozilna kiselina (heneikozanska kiselina)(C21 monokiselina), heneikozanska dikiselina (C21 dikiselina), behenska kiselina (dokozanska kiselina)(C22), dokozanska dikiselina (C22 dikiselina), lignocerinska kiselina (tetrakozanska kiselina)(C24 monokiselina), tetrakozanska dikiselina (C24 dikiselina), uključujući njihove granate i supstituisane derivate.
[0110] U poželjnim aspektima jedinjenja opisanih ovde, C14-C24 masna kiselina je izabrana iz grupe koja se sastoji od zasićene C14 monokiselina, zasićena C14 dikiselina, zasićena C16 monokiselina, zasićena C16 dikiselina, zasićena C18 monokiselina, zasićena C18 dikiselina, zasićena C19 dikiselina, zasićena C20 monokiselina, zasićena C20 dikiselina, zasićena C22 dikiselina, i njihovi granati i supstituisani derivati.
[0111] U poželjnijim aspektima jedinjenja prema predmetnom pronalasku, C14-C24 masna kiselina je izabrana iz grupe koja se sastoji od miristinske kiseline, tetradekanske dikiseline, palmitinske kiseline, heksadekanske dikiseline, stearinske kiseline, oktadekanske dikiseline, nonadekanske dikiseline, arahidonske kiseline, eikozanske dikiseline i dokazanske dikiseline.
[0112] Poželjno, C14-C24 masna kiselina je oktadekanska dikiselina ili eikozanska dikiselina.
[0113] Pronalazači predmetnog pronalaska su pronašli da je položaj masne kiseline kritičan za dobijanje jedinjenja sa željenim odnosom Gcg-R/GLP-1-R ko-agonističke aktivnosti. Dužina i sastav masne kiseline utiče na polu-život jedinjenja u plazmi, potenciju jedinjenja u in vivo životinjskim modelima i takođe utiče na rastvorljivost i stabilnost jedinjenja. Konjugacija peptida definisanog u SEQ ID NO: 2 sa C14-C24 zasićenom monokiselinom ili dikiselinom rezultuje u jedinjenjima koja pokazuju željeni polu-život u plazmi, željenu potenciju u in vivo životinjskim modelima i takođe poseduju željene karakteristike rastvorljivosti i stabilnosti. Miristinska kiselina, tetradekanska dikiselina, palmitinska kiselina, heksadekanska dikiselina, stearinska kiselina, oktadekanska dikiselina, nonadekanska dikiselina, arahidonska kiselina, eikozanska dikiselina i dokozanska dikiselina su naročito poželjne masne kiseline.
[0114] Naročito, konjugacija peptida definisanog u SEQ ID NO: 2 na lizinskom ostatku na položaju 20 sa oktadekanskom dikiselinom ili eikozanskom dikiselinom rezultuje u jedinjenju koje je: (i) sposobno da postigne željene odnose Gcg-R/GLP-1-R ko-agonističke aktivnosti, (ii) je sposobno da poboljša potenciju u in vivo životinjskim modelima i/ili (iii) je sposobno da poboljša karakteristike fizičke stabilnosti i rastvorljivosti.
[0115] Jedinjenja prema pronalasku su poželjno formulisana kao farmaceutske kompozicije primenjene parenteralnim putevima (npr., potkožno, intravenski, intraperitonealno, intramuskularno, ili transdermalno).
[0116] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku tipično će biti primenjena parenteralno. Parenteralna primena uključuje, na primer, sistemsku primenu, kao što je intramuskularna, intravenska, potkožna, intradermalna, ili intraperitonealna injekcija. Poželjni put primene je potkožna injekcija. Jedinjenje prema predmetnom pronalasku je primenjeno na subjekta zajedno sa prihvatljivim farmaceutskim nosačem, razblaživačem, ili ekscipijentom kao delom farmaceutske kompozicije za tretiranje dijabetesa tip 2, gojaznosti, NAFLD i/ili NASH. Farmaceutska kompozicija može biti rastvor ili suspenzija kao ona u kojoj je jedinjenje prema predmetnom pronalasku u kompleksu sa dvovalentnim metalnim katjonom kao što je cink. Jedinjenje prema predmetnom pronalasku može se takođe formulisati u čvrstoj formulaciji kao što je sa liofilizacijom ili sušenjem sprejem, koja je zatim rekonstituisana u pogodnom rastvoru razblaživača pre primene. Pogodni farmaceutski nosači mogu sadržati inertne sastojke koji ne interaguju sa peptidom ili peptidnim derivatom. Pogodni farmaceutski nosači za parenteralnu primenu uključuju, na primer, sterilnu vodu, fiziološki rastvor, bakteriostatski fiziološki rastvor (fiziološki rastvor koji sadrži oko 0.9% mg/ml benzil alkohola), fofsfatno-puferovan fiziološki rastvor, Hank-ov rastvor, Ringer-laktat i slično. Neki primeri pogodnih ekscipijenata uključuju laktozu, dekstrozu, saharozu, trehalozu, sorbitol, i manitol i konzervanse kao što su fenol i mkrezol.
[0117] Mogu se koristiti standardne tehnike farmaceutske formulacije, kao što su one opisane u Remington: Science i Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006). Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu se laternativno formulisati za primenu preko bukalnog, oralnog, transdermalnog, nazalnog, ili pulmonalnog puta.
[0118] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu reagovati sa bilo kojim neorganskim i organskim kiselinama da formiraju farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli. Farmaceutski prihvatljive soli i uobičajena metodologija za njihovo pripremanje su dobro poznati u tehnici. Videri, npr., P. Stahl, et al. Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection i Use, 2nd Revised Edition (Wiley-VCH, 2011). Farmaceutski prihvatljive soli prema predmetnom pronalasku uključuju trifluoroacetat, hidrohlorid, i acetat soli.
[0119] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu se upotrebiti za tretiranje dijabetesa, specifično dijabetesa tipa 2. Dodatni subjekti koji mogu imati koristi od tretmana sa jedinjenjima prema predmetnom pronalasku, uključuju one sa poremećenom tolerancijom na glukozu ili poremećenom glukozom pri gladovanju, subjekti čija je telesna težina oko 25% ili više u odnosu na normalnu telesnu težinu za visinu i telesnu građu subjekta, subjekti koji imaju jednog ili više roditelja sa dijabetesom tipa 2, subjekti koji su imali gestacioni dijabetes, i subjekti sa metaboličkim poremećajima kao što su oni koji su rezultat smanjene endogene sekrecije insulina. Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu se koristiti za prevenciju da subjekti sa poremećenom tolerancijom na glukozu nastave da razvijaju dijabetes tipa 2, sprečavanje uništavanja pankreasnih β-ćelija, indukciju proliferacije β-ćelija, poboljšanje funkcije β-ćelija, aktiviranje dormantnih β-ćelija, promociju diferencijacije ćelija u β-ćelije, stimulaciju replikacije β-ćelija, i inhibiciju apoptoze β-ćelija. Druge bolesti i stanja koja se mogu tretirati ili sprečiti korišćenjem jedinjenja prema pronalasku u postupcima prema pronalasku uključuju: dijabetes koji počinje sa zrelošću kod mladih (MODY) (Herman, et al., Dijabetes 43:40, 1994); latentni adultni autoimuni dijabetes (LADA) (Zimmet, et al., Dijabetes Med. 11:299, 1994); oštećena tolerancija na glukozu (IGT) (Expert Committee on Classification of Dijabetes melitus, Dijabetes Care 22 (Supp. 1):S5, 1999); oštećena glukoza pri gladovanju (IFG) (Charles, et al., Dijabetes 40:796, 1991); gestacioni dijabetes (Metzger, Dijabetes, 40:197, 1991); metabolički sindorm X, dislipidemija, hiperglikemija, hiperinsulinemija, hipertrigliceridemija, i rezistencija na insulin.
[0120] Jedinjenja prema pronalasku se takođe mogu koristiti u postupcima prema pronalasku za tretiranje sekundarnih uzroka dijabetesa (Expert Committee on Classification of Dijabetes melitus, Dijabetes Care 22 (Supp. 1):S5, 1999). Takvi sekundarni uzroci uključuju višak glukokortikoida, višak hormona rasta, feohromocitom, i dijabetes izazvan lekovima. Lekovi koji mogu indukovati dijabetes uključuju, ali nisu ograničeni na, piriminil, nikotinsku kiselinu, glukokortikoide, fenitoin, tiroidni hormon, β-adrenergička sredstva, α-interferon i lekovi koji se koriste za tretiranje HIV infekcije.
[0121] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu biti efikasna u supresiji uzimanja hrane i tretmanu gojaznosti.
[0122] "Efikasna količina" jedinjenja prema predmetnom pronalasku je količina koja rezultuje u željenom terapeutskom i/ili profilaktičkom efektu bez izazivanja neprihvatljivih sporednih efekata kada je primenjena na subjekta. "Željeni terapeutski efekat" uključuje jedno ili više od sledećeg: 1) ublažavanje siptoma (ili više njih) povezanih sa bolešću ili stanjem; 2) odlaganje pojave simptoma povezanih sa bolešću ili stanjem; 3) povećan životni vek u poređenju sa odsustvom tretmana; i 4) bolji kvalitet života u poređenju sa odsustvom tretmana. Na primer, "efikasna količina" jedinjenja prema predmetnom pronalasku za tretman T2D je količina koja bi rezultovala u većoj kontroli koncentracije glukoze u krvi nego u odsustvu tretmana, čime rezultuje u odlaganju pojave dijabetičkih komplikacija kao što su retinopatija, neuropatija, ili bolest bubrega. "Efikasna količina" jedinjenja prema predmetnom pronalasku za prevenciju dijabetesa tipa 2, na primer kod subjekata sa poremećenom tolerancijom na glukozu ili poremećenom glukozom pri gladovanju, je količina koja bi odložila, u poređenju sa odsustvom tretmana, pojavu povošenih nivoa glukoze u krvi koji zahtevaju tretman sa antihiperglikemijskim lekovima kao što su sulfoniluree, tiazolidindioni, insulin, i/ili bisguanidini.
[0123] "Efikasna količina" jedinjenja prema predmetnom pronalasku primenjena na subjekta takođe se zavisiti od tipa i težine bolesti i od karakteristika subjekta, kao što su opšte zdravstveno stanje, starost, pol, telesna težina i tolerancija na lekove. Doza jedinjenja prema predmetnom pronalasku efikasna da normalizuje glukozu u krvi subjekta zavisiće od brojnih faktora, među kojima su uključeni, bez ograničenja, pol subjekta, težina i starost, težina nesposobnosti da reguliše glukozu u krvi, put primene i bioraspoloživost, farmakokinetički profil peptida, potencija, i formulacija.
[0124] Određena jedinjenja prema predmetnom pronalasku su generalno efikasna u širokom doznom opsegu. Na primer, doze za doziranje jednom nedeljno mogu spadati u okvir opsega od oko 0.05 do oko 30 mg po osobi po nedelji. Određena jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu se dozirati dnevno. Dodatno, određena jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu se dozirati dva puta nedeljno, jednom nedeljno ili mesečno.
[0125] "Subjekt" je sisar, poželjno čovek, ali takođe može biti životinja, uključujući kućne ljubimce (npr., psi, mačke, i slično), domaće životinje (npr., krave, ovce, svinje, konji, i slično) i laboratorijske životinje (npr., pacovi, miševi, zamorci, i slično).
[0126] Kao što je ovde korišćeno, termin "tretiranje" ili "tretirati" uključuje držanje po kontrolom, usporavanje, zaustavljanje, ili reverziju progresije ili težine postojećeg simptoma ili poremećaja.
[0127] Termin "polu-život u plazmi" odnosi se na vreme neophodno da se polovina relevantnih jedinjenja ukloni iz plazme. Alternativno korišćeni termin je "polu-život eliminacije". Termin "produženo" ili "duže" korišćen u kontekstu polu-života u plazmi ili polu-života eliminacije označava da postoji značajno povećanje polu-života jedinjenja prema predmetnom pronalasku u odnosu na ono referentnog molekula (npr. ne-masna kiselina-konjugovani oblik peptid, divlji tip humanog OXM ili semaglutid) kao što je određeno pod uporedivim uslovima.
[0128] Klirens je mera sposobnosti tela da eliminiše lek iz cirkulacije. Kako se klirens smanjuje usled, na primer, modifikacija leka, očekivalo bi se da se polu-život poveća. Međutim, ovaj recipročni odnos je egzaktan samo kada nema promene u distribuiranoj zapremini. Korisni približni odnos između terminalnog log-linearnog polu-života (T1/2), klirensa (C) i distributivne zapremine (V) dat sa jednačinom: T1/2≈ 0.693 (V/C). Kliren ne ukazuje na to koliko je leka uklonjeno već, se pre odnosi na zapreminu biološke tečnosti kao što je krv ili plazma koja bi trebalo da bude potpuno slobodna od leka da bi se uračunala za eliminaciju. Klirens je izražen kao zapremina po jedinici vremena.
[0129] Kao što je ovde korišćeno, termin "hidrofilno" odnosi se na osobinu sposobnosti da lako apsorbuje vlagu i ima snažne polarne grupe koje lako interaguju sa vodom.
[0130] Kao što je ovde korišćeno, "semaglutid" se odnosi na hemijski sintetisani GLP-1 analog koji ima peptidnu kičmu i kompletnu strukturu jedinjenja kao ona koja se nalazi u CAS Registry Number 910463-68-2.
[0131] Aminokiselinske sekvence prema predmetnom pronalasku sadrže standardne kodove od jednog slova ili tri slova za dvadeset prirodnih aminokiselina. Dodatno, "Aib" je alfa amino izobuterna kiselina, "Abu" je aminobuterna kiselina, "Orn" je ornitin, "Cit" je citrulin i "Sar" je sarkozin.
[0132] Kao što je ovde korišćeno, termin "C-terminalna aminokiselina" odnosi se na zadnju aminokiselinu u sekvenci peptida koja sadrži slobodnu karboksilnu grupu. C-terminalna aminokiselina jedinjenja prema predmetnom pronalasku je Gly na položaju 34.
[0133] Predmetni pronalazak takođe obuhvata nove intermedijere i postupke korisne za sintezu jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Intermedijeri i jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu se pripremiti različitim procedurama poznatim u tehnici. Naročito, postipak koji koristi hemijsku sintezu je ilustrovan u Primerima u nastavku. Specifični koraci sinteze za svaki od opisanih puteva mogu se kombinovati na različite načine da bi se pripremila jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njihove soli. Reagensi i početni materijali su lako dostupni stručnjaku.
PRIMER 1
[0134] HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG
gde Xaa2 je Aib;
K na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom sa epsilon-amino grupom K bočnog lanca sa ([2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-acetil)2-(γGlu)1-CO-(CH2)16-CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana kao C-terminalni primarni amid (SEQ ID NO: 5).
[0135] Prethodni dijagram prikazuje strukturu jedinjenja SEQ ID NO: 5 (nadalje označeno kao "Jedinjenje 1") korišćenjem standardnog aminokiselinskog koda od jednog slova sa izuzetkom ostataka Aib2 i K20 gde su strukture ovih aminokiselina proširene.
[0136] Peptidna komponenta Jedinjenja 1 je sintetisana automatizovanom sintezom čvrste faze korišćenjem fluorenilmetiloksikarbonil (Fmoc)/terc-butil (t-Bu) hemije na Symphony 12-channel multiplex peptide synthesizer (Protein Technologies, Inc. Tucson, AZ).
[0137] Sintetička smola se sastoji od 1% DVB unakrsno vezanog polistirena (Fmoc-Rink-MBHA Low Loading resin, 100-200 mesh, EMD Millipore, Temecula, CA) na supstituciji 0.3-0.4 meq/g. Standardne zaštitne grupe bočnog lanca su kao što sledi: terc-butilooksikarbonil (Boc) za Trp i Lys; terc-butil estar (OtBu) za Asp i Glu; tBu za Ser, Thr i Tyr; i trifenilmetil (Trt) za Gln; N-α-Fmoc-N-ε-4-metiltricil-L-lizin (Fmoc-Lys(Mtt)-OH) je korišćen za lizin na položaju 20 iz SEQ ID NO: 3 i Nα,N(im)-di-Boc-L-histidin (Boc-His(Boc)-OH) je korišćen za histidin na položaju 1. Fmoc grupe su uklonjene pre svakog koraka kuplovanja (2 x 7 minuta) korišćenjem 20% piperidina u dimetilformamidu (DMF). Sva standardna aminokiselinska kuplovanja su izvedena u trajanju od 1 čas, korišćenjem jednakog molernog odnosa Fmoc aminokiseline (EMD Millipore, Temecula, CA), diizopropilkarbodiimida (DIC)(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) i oksima (Oxyma Pure, Iris Biotech, Marktredwitz, Germany), na 9-strukom molerno višku u odnosu na teoretsko punjenje peptida i na finalnoj koncentraciji od 0.18 M u DMF.
[0138] Dva izuzetka su glutaminski ostatak položaju 3 SEQ ID NO: 5, koji je dvostruko kuplovan (2 x 1 čas), i histidinski ostatak na položaju 1 iz SEQ ID NO: 5, koji je kuplovan na 6-strukom molarnom višku korišćenjem 1-hidroksi-7-azabenzotriazol (HOAt) umesto oksima u trajanju od 18 časova. Naokn završetka sinteze linearnog peptda, smola je preneta u fritovani 25 mL polipropilenski špric za jednokratnu upotrebu (Torviq, Niles, MI) opremljen sa politetrafluoroetilen (PTFE) graničnikom (Biotage, Charlotte, NC) i 4-Metiltricil (Mtt) zaštitnom grupom na lizinu na položaju 20 SEQ ID NO: 5 je selektivno uklonjena iz peptidne smole korišćenjem tri tretmana sa 20% heksafluoroizopropanolom (Oakwood Chemicals, West Columbia, SC) u DCM (2 x 10 minuta i 1 x 45 minuta) da bi se izložio slobodni epsilon amin lizina na položaju 20 i učinio dostupnim za dodatnu reakciju.
[0139] Naknadno vezivanje masna kiselina-linker dela je postignuto izvođenjem dva uzastopna kuplovanja [2-(2-(Fmoc-amino)etoksi)etoksi]sirćetne kiseline (Fmoc-AEEA-OH) (ChemPep, Inc. Wellington, FL; 3-struki višak aminokiseline (AA):1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum-3-oksid heksafluorofosfat (HATU): N,N-diizopropiletilamin (DIPEA) [1:1:5 mol/mol] kuplovanje u trajanju od 3 časa), praćeno sa kuplovanjem sa α-t-butil estrom Fmoc glutaminske kiselin (Fmoc-Glu-OtBu)(Ark Pharm, Inc. Libertyville IL, 3-struki višak AA:HATU:DIPEA [1:1:5 mol/mol] kuplovanje u trajanju od 3 časa). U svakom slučaju, Fmoc deo je uklonjen kao što je prethodno opisano. Konačno, mono- OtBu-oktadekanska dikiselina (WuXi AppTec, Shanghai, China) je kuplovana sa smolom tokom 18 časova korišćenjem 3-strukog viška kiselina:HATU:DIPEA (1:1:5 mol/mol).
[0140] Nakon završetka sinteze, peptidna smola je isprana sa dihlorometanom (DCM), dietil etrom i temeljno osušena na vazduhu primenom vakum sukcije u špric u trajanju od 5 minuta. Suva smola je tretirana sa koktelom za isecanje (trifluorosirćetna kiselina (TFA): anizol: voda: triizopropilsilan, 88:5:5:2 zapr/zapr) 2 časa na sobnoj temepraturi da bi se oslobodio peptid sa čvrste podloge i uklonile sve zaštitne grupe bočnog lanca. Smola je otfiltrirana, isprana dva puta sa čistom TFA, i kombinovani filtrati su tretirani sa hladnim dietil etrom da bi se istaložio sirovi peptid. Peptid/etar suspenzija je centrifugirana na 4000 rpm da bi se formirao čvrsti pelet, supernatant je dekantovan, i čvrst pelet je triturisan sa etrom dva dodatna puta i osušen in vacuo. Sirovom peptidu je povećana rastvorljivost u 20% acetonitril/voda i prečišćen je sa RP-HPLC na C8 preparativnoj koloni (Luna 21 x 250 mm, Phenomenex, Torrance, CA) sa linearnim gradijentima acetonitrila i vode korišćenjem tri različita puferska sistema: 1) 0.1 M amonijum acetat u vodi, pH 5.0; 2) 0.1 % TFA u vodi; i 3) 5% sirćetna kiselina u vodi.
[0141] Naknadna liofilizacija finalnog glavnog pula proizvoda dala je liofilizovanu acetatnu so peptida.
[0142] U sintezi izvedenoj suštinski kao što je opisano prethodno, čistoća Jedinjenja 1 je procenjena korišćenjem analitičke RP-HPLC i pronađeno je da je >97%.
[0143] Molekulska težina je određena analitičkom elektrosprej MS. Izračunato je da je molekulska težina Jedinjenja 1 4535.0 Daltona dok je uočena nesavijena prosečna molekulska težina određena kao 4535.0 Daltona i sledeći joni su uočeni: 1512.3 (M+3H), 1134.3 (M+4H), 908 (M+5H).
PRIMER 2
[0144] HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG
gde Xaa2 je Aib;
K na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom sa epsilon-amino grupom K bočnog lanca sa ([2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-acetil)2-(γGlu)1-CO-(CH2)18-CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana kao C-terminalni primarni amid (SEQ ID NO: 6).
[0145] Prethodni dijagram prikazuje strukturu jedinjenja SEQ ID NO: 6 (nadalje označeno kao "Jedinjenje 2") korišćenjem standardnog aminokiselinskog koda od jednog slova sa izuzetkom ostataka Aib2 i K20 gde su strukture ovih aminokiselina proširene.
[0146] Jedinjenje 2 je sintetisano kao u Primeru 1, izuzev što je mono-OtBu-eikozanska dikiselina (WuXi AppTec, Shanghai, China) kuplovana sa smolom tokom 18 časova korišćenjem 3-strukog viška AA:HATU:DIPEA (1:1:5 mol/mol), pre nego mono-OtBu-oktadekanska dikiselina kao u Primeru 1.
[0147] Izračunato je da je molekulska težina Jedinjenja 2 4563.1 Daltona dok je uočena nesavijena prosečna molekulska težina određena kao 4562.9 Dalton i sledeći joni su uočeni: 1521.7 (M+3H), 1141.3 (M+4H), 913.5 (M+5H).
PRIMER 3
[0148] HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLSGGPSSG
gde Xaa2 je Aib;
K na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom sa epsilon-amino grupom K bočnog lanca sa ([2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-acetil)2-(γGlu)2-CO-(CH2)16-CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana kao C-terminalni primarni amid (SEQ ID NO: 7).
[0149] Prethodni dijagram prikazuje strukturu jedinjenja SEQ ID NO: 7 (nadalje označeno kao "Jedinjenje 3") korišćenjem standardnog aminokiselinskog koda od jednog slova sa izuzetkom ostataka Aib2 i K20 gde su strukture ovih aminokiselina proširene.
[0150] Jedinjenje 3 je sintetisano kao u Primeru 1, izuzev što je dodatni Fmoc-Glu-OtBu deo dodat u ciklus sinteze linkera.
[0151] Izračunato je da je molekulska težina Jedinjenja 3 4622.1 Daltona dok je uočena nesavijena prosečna molekulska težina određena kao 4621.9 Dalton i sledeći joni su uočeni: 1541.3 (M+3H), 1156.2 (M+4H), 925.2 (M+5H).
PRIMER 4
[0152] HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLSGGPSSG
gde Xaa2 je Aib;
K na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom sa epsilon-amino grupom K bočnog lanca sa ([2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-acetil)2-(γGlu)2-CO-(CH2)18-CO2H;
i C-terminalna aminokiselina je amidovana kao C-terminalni primarni amid (SEQ ID NO: 8).
[0153] Prethodni dijagram prikazuje strukturu jedinjenja SEQ ID NO: 8 (nadalje označeno kao "Jedinjenje 4") korišćenjem standardnog aminokiselinskog koda od jednog slova sa izuzetkom ostataka Aib2 i K20 gde su strukture ovih aminokiselina proširene.
[0154] Jedinjenje 4 je sintetisano kao u Primeru 1, izuzev što je mono-OtBu-eikozanska dikiselina (WuXi AppTec, Shanghai, China) kuplovana sa smolom tokom 18 časova korišćenjem 3-strukog viška AA:HATU:DIPEA (1:1:5 mol/mol), pre nego mono-OtBu-oktadekanska dikiselina korišćena u Primeru 1. Dodatno, dodatni aminokiselinski Fmoc-Glu-OtBu deo je dodat u ciklusu sinteze linkera.
[0155] Izračunato je da je molekulska težina peptida 4650.1 Daltona dok je uočena nesavijena prosečna molekulska težina određena kao 4650.1 Daltona i sledeći joni su uočeni: 1550.7 (M+3H), 1163.3 (M+4H), 930.8 (M+5H).
FIZIČKE KARAKTERISTIKE
Viskoznost
[0156] Viskoznost jedinjenja prema predmetnom pronalasku je merena u Rheosense mVroc Viscometer sa sledećim podešavanjima:
(a) Veličina šprica: 500 µL špric
(b) Stopa protoka: 100 µL/min stopa protoka
(c) Prosečna temperatura: 25°C
(d) Stopa smicanja: 1934 s<-1>
[0157] Suvi prašak (jedinjenje) je izmeren, rastvoren u vodi kao tamni talog, i titriran do približno pH 8.0 sa 1N NaOH. Rastvor je obrađen ultrazvukom i promešan ručno dok je peptid u rastvoru. Uzorci su sterilno filtrirani (0.22 µm PVDF filteri). Uzorci su zatim analizirani sa UV-Vis da bi se procenile koncentracije stok rastvora. Rastvori su razblaženi do finalne koncentracije korišćenjem 3x m-krezola u 10 mM Tris pH 8.0 puferu do finalnih koncentracija od približno 10 mg/mL peptida po težini u 10 mM Tris 3 mg/mL m-krezola na pH 8.0. Uzorci su filtrirani preko 0.22 µm filtera neposredno pre analize viskoznosti. 25 µL uzorka je uklonjeno da bi se potvrdila koncentracija sa RP-HPLC pre i posle analize.
[0158] Voda i kontrolni uzorci sa puferom su mereni pre i posle analize svakog uzorka. Instrument je ispran sa puferom (3x) između analiza svakog uzorka. Uzorci su napunjeni u pojedinačne špriceve i analizirani. Prvo merenje nije uključeno u finalno izračunavanje da bi se dozvolilo ekvilibrisanje sistema. Uzorci su zatim analizirani u triplikatu (n=3).
[0159] Viskoziteti Jedinjenja 1-4 su mereni suštinski kao što je opisano u ovoj analizi. Podaci za viskoznost za Jedinjenja 1-4 su rezimirani u Tabeli 1.
Tabela 1: Podaci za viskoznost za Jedinjenja 1-4
Rastvorljivost
[0160] Rastvorljivost jedinjenja prema predmetnom pronalasku je merena u Agilent 1100 HPLC, Agilent 1200 HPLC i Nanodrop 2000. Sledeće HPLC kolone su korišćene:
(a) RP-HPLC: Waters Symmetry Shield C18, 3.6 um, 4.6 x 100 mm
(b) HPLC-SEC: Tosoh Biosciences, TSK2000SWXL7.8 cm x 30 mm
[0161] Sve koncentracije peptida su napravljene na 10 mg/mL u sledećem: (a) 10 mM Tris pH 8.0 3 mg/mL m-krezol (b) 10 mM Tris pH 8.0 3 mg/mL m-krezol 150 mM NaCl (c) 10 mM Tris pH 8.0 3 mg/mL m-krezol 0.02% Tween-20 (d) PBS pH 7.4
[0162] 5mL 10 mg/mL peptida rastvorenog u 10 mM Tris na pH 8.0 je koncentrovano do približno 20 mg/mL korišćenjem Amicon-ultra 3kDa MWCO uređaja. Rastvor je filtriran korišćenjem Millivex 0.22 µ M filtera (PVDF membrana) i finalna koncentracija je merena sa NanoDrop spektrometrom. Ovaj stok rastvor je korišćen za formulaciju u finalnim uslovima navedenim prethodno korišćenjem stok rastvora 3x m-krezola, 10x NaCl, i 100x Tween-20. 10 mg/mL PBS rastvor je takođe pripremljen rastvaranjem direktno na 5 mg/mL i koncentrovanjem korišćenjem Amicon-ultra 3kDa MWCO uređaja.
[0163] Svaki rastvor je stavljen u frižider na 4°C 1 nedelju, sa analizom sa RP-HPLC da bi se procenila koncentracija i HPLC-SEC da bi se procenilo formiranje HMW vrsta. Analize su završene na T-0 nedelju i T-1 nedelju.
[0164] Rastvorljivost Jedinjenja 1-4 je merena suštinski kao što je opisano u ovoj analizi. Podaci za rastvorljivost za Jedinjenja 1-4 je rezimirana u Tabelama 2(a)-(d).
Tabela 2(a): Podaci za rastvorljivost za Jedinjenje 1
Tabela 2(b): Podaci za rastvorljivost za Jedinjenje 2
Tabela 2(c): Podaci za rastvorljivost za Jedinjenje 3
Tabela 2(d): Podaci za rastvorljivost za Jedinjenje 4
IN VITRO FUNKCIJA
Afinitet vezivanja Jedinjenja 1-4 za rekombinantni humani Gcg receptor (hGcg-R) i humani GLP-1 receptor (hGLP-1-R)
[0165] Radioligand analize kompetitivnog vezivanja korišćenjem postupaka analize scincilacione blizine (SPA) i membrana pripremljenih od 293HEK stabilno trensfektovanih ćelija koje prekomerno eksprimiraju hGcg-R ili hGLP-1-R izvedene su da bi se odredile ravnotežne konstante disocijacije (Ki) za Jedinjenja 1-4. Eksperimentalni protokoli i rezultati su opisani u nastavku.
hGLP-1R analiza vezivanja
[0166] Analiza vezivanja GLP-1 receptora koristi klonirani hGLP-1-R (Graziano MP, Hey PJ, Borkowski D, Chicchi GG, Strader CD, Biochem Biophys Res Commun. 196(1): 141-6, 1993) izolovan iz 293HEK ćelija koje eksprimiraju rekombinantni hGLP-1R. hGLP-1R cDNK je subklonirana u ekspresioni plazmid phD (Trans-activated expression of fully gammakarboksilatd recombinant human protein C, an antithrombotic factor. Grinnell, B.W., Berg, D.T., Walls, J. i Yan, S.B. Bio/Technology 5:1189-1192, 1987). Ova plazmid DNK je transfektovana u 293HEK ćelije i selektovana sa 200 µg/mL higromicinom.
[0167] Sirove plazma membrane su pripremljene korišćenjem ćelija iz pripadajuće kulture. Ćelije su lizirane na ledu u hipotoničnom puferu koji sadrži 50 mM Tris HC1, pH 7.5 i Roche Complete™ inhibitore proteaze sa EDTA. Suspenzija ćelija je disruptovana korišćenjem staklenog Potter-Elvehjem homogenizatora opremljenog sa Teflon® tučkom sa 25 udaraca. Homogenat je centrifugiran na 4 °C na 1100 x g 10 minuta. Supernatant je sakupljen i uskladišten na ledu dok je pelet resuspendovan u hipotoničnom puferu i rehomogenizovan. Smeša je centrifugirana na 1100 x g 10 minuta. Drugi supernatant je kombinovan sa prvim supernatantom i centrifugiran na 35000 x g 1 čas na 4 °C. Membranski pelet je resuspendovan u homogenizacionom puferu koji sadrži inhibitore proteaze, brzo zamrznut u tečnom azotu i uskladišten kao alikvoti u frižideru na -80 °C do upotrebe.
[0168] GLP-1 je radiojodovan sa I-125-laktoperoksidaza procedurom i prečišćen reverzno faznom HPLC na Perkin- Elmer (NEX308). Specifična aktivnost je 2200 Ci/mmol. Određivanje KDje izvedeno homologom kompeticijom umesto zasićenim vezivanjem usled visokog sadržaja propanola u 1-125 GLP-1 materijalu. Procenjeno je da KD je 1.24 nM i korišćena je da se izračunaju Kivrednosti za sva testirana jedinjenja.
[0169] Analiza vezivanja receptora je izvedena korišćenjem formata analize scincilacione blizine (SPA) sa perlicama aglutinina iz klice pšenice (WGA) (Perkin Elmer). Pufer za vezivanje sadrži 25 mM 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonsku kiselinu (HEPES), pH 7.4, 2.5 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 0.1% (tež/zapr) bacitracin (Affymetrix), 0.003% (tež/zapr) polioksietilensorbitan monolaurat (TWEEN®-20) i Roche Complete™ inhibitori proteaze bez EDTA. GLP-1 je rastvoren u DMSO na 0.339 mg/mL (0.1 mM) i uskladišten zamrznut na -20 °C u 100 mL alikvotama. GLP-1 alikvot je razblažen i korišćen u analizama vezivanja unutar jednog časa. Peptidni analog je rastvoren u dimetil sulfoksidu (DMSO) i 3-struko serijski razblažen u 100% DMSO. Sledeće, 5 µL serijski razblaženog jedinjenja ili DMSO je preneto na Corning® 3632 analitičke ploče sa providnim dnom koje sadrže 45 µL vezujućeg pufera za analizu ili neobeležene GLP-1 kontrole (ne-specifično vezivanje (NSB) na 0.25 µM finalno). Zatim, 50 µL hGLP-1R membrana (0.5 µg/bunarčić), 50 µL 1-125 GLP-1 (0.15 nM finalno), i 50 µL WGA perlica (150 µg/bunarčić) su dodati, ploče su zapečaćene i mešane na šejkeru za ploče (podešavanje 6) 1 minut. Ploče su očitavane sa PerkinElmer Trilux MicroBeta® scincilacionim brojačem nakon 12 časova od vremena kada su se prilagodile na sobnu temperaturu.
[0170] Rezultati su izračunati kao procenat specifičnog I-125-GLP-1 vezivanja u prisustvu jedinjenja. Apsolutna IC50koncentracija jedinjenja je izvedena sa ne-linearnom regresijom procenta specifičnog vezivanja I-125-GLP-1 nasuprot koncentracije dodatog jedinjenja. IC50koncentracija je pretvorena u Kikorišćenjem Cheng-Prusoff jednačine (Cheng, Y., Prusoff, W. H., Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108, (1973)).
[0171] KiJedinjenja 1-4, humanog Gcg i humanog GLP-1(7-36)NH2na hGLP-1-R su prikazani u Tabeli 3 u nastavku. Broj replika (n) je naznačen u zagradama. Znak (>) označava da % inhibicije nije dostigao 50% i izračunata Kije dobijena korišćenjem najveće testirane koncentracije. n=1/n označava da prosečne vrednosti nisu izračunate kada sve vrednosti imaju znak > i prikazna vrednost je najveća izračunata vrednost.
Tabela 3. Ki Jedinjenja 1-4, humanog Gcg i humanog GLP-1(7-36)NH2 na hGLP-1-R
Analiza vezivanja hGcg-R
[0172] Analiza vezivanja Gcg receptora koristi klonirani hGcg-R (Lok, S, et. al., Gene 140 (2), 203-209 (1994)) izolovan iz 293HEK ćelija koje prekomerno eksprimiraju rekombinantni hGcg-R. cDNK hGcg-R je subklonmirana u ekspresioni plazmid phD (Trans-activated expression of fully gamma-karboksilatd recombinant human protein C, an antithrombotic factor. Grinnell, B.W., et. al., Bio/Technology 5: 1189-1192 (1987)). Ova plazmid DNK je transfektovana u 293HEK ćelije i selektovana sa 200 µg/mL higromicina.
[0173] Sirove plazma membrane su pripremljene korišćenjem ćelija iz pripadajuće kulture. Ćelije su lizirane na ledu u hipotoničnom puferu koji sadrži 50 mM Tris HCl, pH 7.5 i Roche Complete™ inhibitore proteaze sa EDTA. Ćelijska suspenzija je disruptovana korišćenjem staklenog Potter-Elvehjem homogenizatora opremljenog sa Teflon® tučkom sa 25 udaraca. Homogenat je centrifugiran na 4 °C na 1100 x g 10 minuta. Supernatant je sakupljen i uskladišten na ledu dok je pelet resuspendovan u hipotoničnom puferu i rehomogenizovan.
Smeša je centrifugirana na 1100 x g 10 minuta. Drugi supernatant je kombinovan sa prvim supernatantom i centrifugiran na 35000 x g 1 čas na 4 °C. Pelet mebrane je resuspendovan u homogenizacionom puferu koji sadrži inhibtore proteaze, brzo zamrznut u tečnom azotu i uskladišten kao alikvoti u frižideru na -80 °C do upotrebe.
[0174] Gcg je radiojodovan sa I-125-laktoperoksidaza procedurom i prečišćen reverzno faznom HPLC na Perkin- Elmer (NEX308). Specifična aktivnost je 2200 Ci/mmol. Određivanje KDje izvedeno homologom kompeticijom umesto zasićenim vezivanjem usled visokog sadržaja propanola u 1-125 Gcg materijalom. Procenjeno je da KD je 3.92 nM i i korišćena je da se izračunaju Kivrednosti za sva testirana jedinjenja.
[0175] Analiza vezivanja receptora je izvedena korišćenjem formata analize scincilacione blizine (SPA) sa perlicama aglutinina iz klice pšenice (WGA) (Perkin Elmer). Pufer za vezivanje sadrži 25 mM 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonsku kiselinu (HEPES), pH 7.4, 2.5 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 0.1% (tež/zapr) bacitracin (Affymetrix), 0.003% (tež/zapr) polioksietilensorbitan monolaurat (TWEEN®-20) i Roche Complete™ inhibitori proteaze bez EDTA. Gcg alikvot je razblažen i korišćen u analizama vezivanja unutar jednog časa. Peptidni analog je rastvoren u dimetil sulfoksidu (DMSO) i 3-struko serijski razblažen u 100% DMSO. Sledeće, 5 µL serijski razblaženog jedinjenja ili DMSO je preneto na Corning® 3632 analitičke ploče sa providnim dnom koje sadrže 45 µL vezujućeg pufera za analizu ili neobeleženu Gcg kontrolu (NSB na 1 mM finalno). Zatim, 50 µL hGLP-1R membrana (0.5 µg/bunarčić), 50 µL 1-125 Gcg (0.15 nM finalno), i 50 µL WGA perlica (150 µg/bunarčić) su dodati, ploče su zapečaćene i mešane na šejkeru za ploče (podešavanje 6) 1 minut. Ploče su očitavane sa PerkinElmer Trilux MicroBeta® scincilacionim brojačem nakon 12 časova od vremena kada su se prilagodile na sobnu temperaturu.
[0176] Rezultati su izračunati kao procenat specifičnog I-125-Gcg vezivanja u prisustvu jedinjenja. Apsolutna IC50koncentracija jedinjenja je izvedena sa ne-linearnom regresijom procenta specifičnog vezivanja I-125-Gcg nasuprot koncentracije dodatog jedinjenja. IC50koncentracija je pretvorena u Kikorišćenjem Cheng-Prusoff jednačine (Cheng, Y., Prusoff, W. H., Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108, (1973)). KiJedinjenja 1-4, humanog Gcg i humanog GLP-1(7-3 6)NH2na hGcg-R su prikazane u Tabeli 4 u nastavku. Broj replika (n) je naznačen u zagradama. Znak (>) označava da % inhibicije nije dostigao 50% i izračunata Kije dobijena korišćenjem najveće testirane koncentracije. n=1/2 označava da prosečne vrednosti nisu izračunate kada sve vrednosti imaju znak > i prikazana vrednost je najveća izračunata vrednost.
Tabela 4: Ki Jedinjenja 1-4, humanog Gcg i humanog GLP-1(7-36)NH2 na hGcg-R
Funkcionalne analize hGLP-1-R i hGcg-R
[0177] Funkcionalna aktivnost je određena u hGLP-1-R i hGcg-R eksprimirajućim HEK-293 klonskim ćelijskim linijama. Eksperimentalni protokoli i rezultati su opisani u nastavku.
[0178] Svaka ćelijska linija koja prekomerno eksprimira receptor tretirana je sa peptidom u DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium, Gibco Cat# 31053) sa dodatkom 1X GlutaMAX™ (L-alanil-L-glutamin dipeptid u 0.85% NaCl, Gibco Cat# 35050), 0.25% FBS (dijaliziran fetalni goveđi serum, Gibco Cat# 26400), 0.05% frakcija V BSA (frakcija V goveđeg albumina, Gibco Cat# 15260), 250 mM IBMX (3-izobutil-1-metilksantin) i 20 mM HEPES [N-(2-hidroksietil)piperazin- N’-(2-etansulfonska kiselina), HyClone Cat# SH30237.01] u 40 µl analitičkoj zapremini. Nakon 60 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, rezultujuće povećanje u intracelularnom cAMP (adenozin 3’,5’-ciklični monofosfat) je kvantitativno određen korišćenjem CisBio cAMP Dynamic 2 HTRF Assay Kit (62AM4PEJ). cAMP nivoi unutar ćelije su detektovani dodavanjem cAMP-d2 konjugata u puferu za lizu ćelija (20 µl) nakon čega je dodato antitelo anti-cAMP-Eu3+-Cryptate, takođe u puferu za lizu ćelija (20 µl). Rezultujuća kompetitivna analiza je inkubirana najmanje 60 min na sobnoj temperaturi, zatim je detektovana korišćenjem PerkinElmer Envision® instrumenta sa ekscitacijom na 320 nm i emisijom na 665 nm i 620 nm. Envision jedinice (emisija na 665nm/620nm∗10,000) su obrnuto proporcionalne količini prisutnog cAMP i konvertovane su u nM cAMP po bunarčiću korišćenjem cAMP standardne krive. Količina cAMP stvorena (nM) u svakom bunarčiću je pretvorena u procenat maksimalnog odgovora uočenog ili sa 10 nM humanog GLP-1(7-36)NH2 ili 10 nM humanog Gcg.
[0179] Relativna EC50vrednost i procenat najveće vrednosti (Emax) su izvedeni ne-linearnom regresionom analizom korišćenjem procenta maskimalnog odgovora nasuprot koncentraciji dodatog peptida, fitovanog na četvoro-parametarslu logističku jednačinu (Genedata Screener ®).
[0180] Funkcionalni podaci za Jedinjenja 1-4, humani GLP-1(7-36)NH2, humani Gcg i divlji tip humanog OXM su prikazane u Tabeli 5 u nastavku. Srednje vrednosti za EC50su izražene kao geometrijske sredine ± standardna grteška srednje vrednosti (SEM) sa brojem replika (n) naznačenim u zagradama. Srednje vrednosti za Emaxsu izražene kao aritmetička sredina ± standardna greška. ND označava da agonistička aktivnost nije detektovana. Sve prikazane vrednosti su sa (3) značajne cifre.
Tabela 5: Funkcionalna potencija (EC50) i efikasnost (Emax) za Jedinjenja 1-4 humani GLP-1(7-36)NH2, humani Gcg i divlji tip humanog OXM
Funkcionalna aktivacija GLP-1-R pacova u ćelijskoj liniji INS1 832-3 insulinoma
[0181] Beta ćelijska linija pankreasa pacova, INS1 832-3 ćelija, korišćena je za određivanje funkcionalne aktivnosti Jedinjenja 1-4 na stimilaciju proizvodnje cAMP na endogenim GLP-1 receptorima. Ćelije su održavane u RPMI 1640 medijumu (HyClone, Cat# SH30027) sa dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma, 10 mM HEPES, 1 mM natrijum piruvata, 2 mM L-Glutamina, 50 mM 2-Merkaptoetanola, i 100U/ml penicilina /100 µg/ml streptomicina na 37°C, 5% CO2inkubatoru i i pasažirane su dva puta nedeljno.
[0182] Performansa analize zahteva odvajanje ćelija od boca za kulturu korišćenjem Enzyme Free Cell Stripper i peletiranje centrifugiranjem na 1000 rpm 5 minuta na sobnoj temperaturi. Ćelijski pelet je resuspendovan u Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS) sa dodatkom 11.2 mM glukoze & 0.1% BSA. 40 µl ćelijske suspenzije na gustini od 1x10<6>/ml postavljeno je u crne ploče sa pola površine sa 96-bunarčića (Costar 3875) i inkubirano u 37°C, 5% CO2inkubatoru 2 časa za rekuperaciju & gladovanje. Serijska razblaženja test jedinjenja su pripremljena na 100X finalne koncentracije za testiranje u 100% DMSO, i dodatno razblažena 20 puta u EBSS sa dodatkom 11.2 mM glukoze, 0.1% BSA, i 1.25 mM IBMX (Sigma 1-7816). Nakon 2 časa gladovanja, ćelije su tretirane sa jedinjenjem dodavanjem 10 µl 5X razblaženja jedinjenja u ćelijske ploče (n = 2) i inkubirane na 37°C, 5% CO2inkubatoru 30 minuta.
[0183] cAMP koncentracija je merena korišćenjem HTRF cAMP analitičkog kompleta (Cisbio): cAMP-d2 konjugat u puferu za lizu ćelija (20 µl) nakon čega je dodato antitelo anti-cAMP-Eu3+-Cryptate, takođe u puferu za lizu ćelija (20 µl), dodato je ćelijama na ploči. Rezultujuća kompetitivna analiza je inukubirana najmanje 60 minuta na sobnoj temperaturi i nakon toga je detektovana korišćenjem PerkinElmer Envision® instrumenta sa ekscitacijom na 320 nm i emisijom na 665 nm i 620 nm. Envision jedinice (emisija na 665nm/620nm∗10,000) su obrnuto proporcionalne količini prisutnog cAMP i pretvorene su u nM cAMP po bunarčiću korišćenjem cAMP standardne krive.
[0184] Koncentracija cAMP u svakom bunarčiću (nM) je izračunata korišćenjem cAMP standardne krive i konvertovana je u procenat maksimalnog odgovora uočenog sa nativnim GLP-1 peptidom na 300 nM za fitovanje krive.
[0185] Relativna EC50vrednost i procenat najveće vrednosti (% Emax) su izvedeni ne-linearnom regresionom analizom korišćenjem procenta maksimalnog odgovora nasuprot koncentracije dodatog peptida, fitovani na četvoro-parametarsku logističku jednačinu (GraphPad Prism (Version 6.05) softver). Analiza je izvedena sa pločama u duplikatu. Broj replika (n) je naznačen u zagradama.
[0186] EC50i % Emaxza divlji tip humanog OXM, semaglutid i Jedinjenja 1 i 2 izračunati su suštinski kao što je prethodno opisano. EC50i % Emaxpodaci za ova jedinjenja su obezbeđeni u Tabeli 6. Dodatno, Jedinjenja 1 i 2 povećala su proizvodnju cAMP na dozno zavisan način (podaci nisu prikazani).
Tabela 6: EC50 divljeg tipa humanog OXM, semaglutida i Jedinjenja 1 i 2 na GLP-1-R pacova u ćelijskoj liniji INS1832-3 insulinoma
Funkcionalna aktivacija hGcg-R u primarnim humanim hepatocitima
[0187] Primarni humani hepatociti su korišćeni za određivanje funkcionalne aktivnosti jedinjenja na stimulisanje proizvodnje cAMP na endogenim Gcg receptorima.
[0188] Vijalice humanih primarnih hepatocita su zamrznuti u rezorvoaru sa tečnim azotom. Nakon uklanjanja, vijalice su odmah odmrznute u vodenom kupatilu sa temperaturom od 37°C. Suspenzija ćelija je zatim preneta u 50 ml CHRM (Gibco/Life Technologies cat# CM7000 Cryopreserved Hepatocyte Recovery Medium).
[0189] Suspenzija ćelija je centrifugirana na 1,000 x g 10 min. Ćelijski peleti su resuspendovani u 5 ml medija za postavljanje na ploče nakon uklanjanja CHRM aspiracijom. Medijum za postavljanje na ploče je pripremljen dodavanjem celog sadržaja CM3000 Supplement Packs u 500 ml Williams Media (Gibco/Life Technologies), nakon čega je sledila sterilna filtracija preko 0.22 µm membrane.
[0190] Gustina ćelija je određena hemocitometrom, dodavanjem 100 ml ćelijske suspenzije u 100 µl Trypan Blue (HyClone Trypan Blue 0.04%, catalog number SV30084.01). Ćelijska suspenzija je dodatno razblažena u medijumu za postaljanje na ploče do finalne gustine ćelija od 0.8 X 10<6>ćelija po ml. 65 ml medijuma za postavljanje na ploče je dodato u svaki bunarčić Collagen coated 96- bunarčić plate (Corning BioCoat, catalog number 354649, Lot# 22314033).
65 ml ćelijske suspenzije je zatim dodato u svaki bunarčić kolagen obložene ploče sa 96-bunarčića do finalne gustine ćelija od 50,000 ćelija po bunarčiću. Ćelijska ploča je inkubirana na 37°C, 5% CO2inkubatoru 3-4 časa.
[0191] Nakon 3-4 časa inkubacije, medijum je aspiriran i zamenjen sa 100 ml medijuma za održavanje. Medijum za održavanje je pripremljen dodavanjem celog sadržaja CM4000 Supplement Packs u 500ml Williams Media (Gibco/Life Technologies), nakon čeg aje sledila sterilna filtracija preko 0.22 µm membrane. Ćelijska ploča je vraćena na 37°C, 5% CO2inkubator preko noći u pripremi za cAMP analizu.
[0192] U pripremi za analizu, jedinjenja 1 i 2 i divlji tip humanog OXM su podvrgnuti 3-strukom serijskom razblaženju u analitičkom puferu za jedinjenje (HBSS koji sadrži 20 mM HEPES i 1% toplotno inaktiviranog FBS) za 10 koncentracija.
[0193] Ćelijska ploča je uklonjena iz inkubatora i medijum je uklonjen nežnom aspiracijom bez uznemniravanja čelijskog monosloja. Ćelije su tretirane dodavanjem 40 ml anlitičkog ćelijskog pufera i 40 ml test rastvora (tj. Jedinjenje 1, Jedinjenje 2 ili divlji tip humanog OXM razblažen u analitičkom puferu za jedinjenje) u ćelijske ploče i inkubiranjem na sobnoj temperaturi 1 čas uz nežnu agitaciju.
[0194] Koncentracija cAMP je merena korišćenjem HTRF cAMP analitičkog kompleta (Cisbio): cAMP-d2 konjugat u puferu za ćelijsku lizu (40 µl) nakon čega je dodato antitelo anti-cAMP-Eu3+-Cryptate, takođe u puferu za lizu ćelija (40 µl), je dodat ćelijama na ploči. Rezultujuća kompetitivna analiza je inkubirana najmanje 60 minuta na sobnoj temperaturi, zatim je detektovana korišćenjem PerkinElmer Envision® instrumenta sa ekscitacijom na 320 nm i emisjiom na 665 nm i 620 nm. Envision jedinice (emisija na 665nm/620nm∗10,000) su obrnuto [0195] proporcionalne količini prisutnog cAMP i pretvorene su u nM cAMP po bunarčiću korišćenjem cAMP standardne krive.
[0196] Koncentracija cAMP u svakom bunarčiću (nM) je izračunata korišćenjem cAMP standardne krive i pretvorena je u procenat maksimalnog odgovora uočenog sa Gcg analogom konjugovanim sa zasićenom C18 masnom kiselinom (dikiselina) za fitovanje krive.
[0197] Relativna EC50vrednost i procenat najveće vrednosti (% Emax) su izvedeni ne-linearnom regresionom analizom korišćenjem procenta maksimalnog odgovora nasuprot koncentracije dodatog peptida, fitovana na četvoro-parametarsku logisdtičku jednačinu (GraphPad Prism (Version 6.05) softver).
[0198] EC50i % Emaxza Jedinjenja 1 i 2 i divlji tip humanog OXM su izračunati suštinski kao što je prethodno opisano. EC50i % Emaxpodaci za ova jedinjenja su obezbeđeni u Tabeli 7. Dodatno, Jedinjenja 1 i 2 povećala su proizvodnju cAMP na dozno zavisan način (podaci nisu prikazani). Broj replika (n) je naznačen u zagradama.
Tabela 7: EC50 Jedinjenja 1 i 2 i divljeg tipa humanog OXM na hGcg-R u primarnim humanim hepatocitima
FARMAKOKINETIKA
Farmakokinetika kod makaki majmuna
[0199] Farmakokinetičke osobine in vivo za jedinjenja prema predmetnom pronalasku su pokazane korišćenjem makaki majmuna.
[0200] Jedinjenja su primenjena jednom intravenskom ili potkožnom dozom od 50 nmole/kg ili 250 nmole/kg. Krv je sakupljena od svake životinje na 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 240, 288, 208, 480, 576 i 672 časova nakon doziranja.
[0201] Koncentracije jedinjenja u plazmi su određene LC/MS postupkom. Ukratko, jedinjenje prema predmetnom pronalasku je ekstrahovano iz 100% plazme majmuna (25 µl) korišćenjem acetonitrila. Dva razdvojena sloja su se formirala nakon centrifugiranja sa jedinjenjem lociranim u tečnom sloju.80 µl slikvot supernatanta je prenet u ploču sa 96-bunarčića, razblažen sa 150 µl vode i 25 µl mravlje kiseline. Razblaženi uzorak (10 µl) je injektiran u Supelco Analytical Discovery BIO Wide Pore C5-3, 5 cm X 1 mm, 3 mm kolonu. Izlaz kolone je usmeren u Thermo Q-Exactive maseni spektrometar za detekciju i kvantifikaciju.
[0202] U eksperimentima izvedenim suštinski kao što je opisano za ovu analizu, na makaki majmune je primenjena jedna potkožna (50 nmole/kg) doza Jedinjenja 1 u 40 mM Tris HCl (pH 8.0) u zapremini od 0.20 mL/kg. Krv je sakupljena od svake životinje na 2 (samo IV), 7, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 192, 240, 336, 480, 576, i 672 časova nakon doze.
[0203] Na druge makaki majmune je primenjena jedan intravenska (50 nmole/kg) ili potkožna (50 ili 250 nmole/kg) doza Jedinjenja 2 u 40 mM Tris HCl (pH 8.0) u zapremini od 0.20 mL/kg. Krv je sakupljena od svake životinje na 2 (samo IV), 7, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 192, 240, 336, 480, 576, i 672 časova nakon doze.
[0204] Podaci za Jedinjenje 1 su obezbeđeni u Tabeli 9 i podaci za Jedinjenje 2 su obezbeđeni u Tabeli 10.
[0205] Jedinjenje 1 dostiglo je srednje vrednosti maksimalne koncentracije u plazmi približno 12 časova nakon 50 nmol/kg potkožne doze. Srednja vrednost polu-života je 57 časova i srednja vrednost klirensa je 2.16 mL/čas/kg (Tabela 8).
[0206] Jedinjenje 2 dostiglo je srednje vrednosti maksimalne koncentracije u plazmi približno 24 časa nakon 50 nmol/kg potkožne doze. Srednja vrednost polu-života je 122 časova i srednja vrednost klirensa je 0.55 mL/čas/kg (Tabela 9).
Tabela 8: Individualna i srednja vrednost farmakokinetičkih parametara nakon jedne 50 nmol/kg potkožne doze Jedinjenja 1 na mužjaka makaki majmuna.
Tabela 9: Individualna i srednja vrednost farmakokinetičkih parametara Jedinjenja 2 nakon jedne intravenske ili potkožne doze na mužjaka makaki majmuna
IN VIVO STUDIJE
Test tolerancije oralne glukoze (OGTT) u DIO miševima
[0207] Mišji model gojaznosti izazvane ishranom (DIO) je model insulinske rezistencije. Pet do šest meseci stari mužjaci DIO miševa (C57BL/6) od Taconic Biosciences su korišćeni u ovoj studiji. Životinje su pojedinačno smeštene u prostoriji sa kontrolisanom temperaturom (24°C) sa 12 časovnim ciklusom svetlo/tama (svetla upaljena u 06:00), i slobodnim pristupom hrani i vodi. Aklimatizacioni period na prostoriju je dve nedelje. Dan pre studije, životinje su randomizovane u grupe na osnovu njihove telesne težine. Istog tog popodneva, životinje su izgladnjivane u čistim kavezima i dozirane sa vehikulumom (40 mM Tris-HCl, pH 8.0) ili test jedinjenjima potkožnom injekcijom. Sledećeg jutra, 16 časova nakon injekcije peptida, dobije su telesne težine pri izgladnjivanju da bi se izračunale doze glukoze. Uzorci krvi su uzeti da bi se izmerilo nulto vreme glukoze. Životinjama je zatim data oralna gavaža glukoze (2 g/kg). Dva očitavanja glukoze preko glukometara dobijena su 15, 30, 60 i 120 minuta nakon oralne glukoze. Prosek dva očitavanja glukoze je zabeležen na svakoj vremenskoj tački i izračunata je površina pod krivom. Statistike su analizirane korišćenjem ANOVA sa Dunnett poređenjem sa JMP 6; značajnost je označena na p ≤ 0.05 nasuprot vehikulumu.
[0208] U eksperimentima izvedenim suštinski kao što je opisano u ovj analizi, Jedinjenje 2 pokazalo je dozno zavisno smanjenje glukoze tokom testa tolerancije, i AUC glukoze je smanjena na sve tri testirane doze 1, 3 i 10 nmol/kg (Tabela 10).
Tabela 10: AUC glukoze mižjaka DIO miševa tretiranih sa Jedinjenjem 2 i semaglutidom kao odgovor na OGTT (2g/kg)
OGTT kod streptozotocin (STZ)-tretiranih DIO miševa
[0209] Model STZ-tretiranog miša je model ranog dijabetesa. Pet do šest meseci stari mužjaci DIO miševa (C57BL/6) od Taconic Biosciences su korišćeni u ovoj studiji. Životinje su pojedinačno smeštene u prostoriji sa kontrolisanom temperaturom (24°C) sa 12 časovnim ciklusom svetlo/tama (svetla upaljena u 06:00), i slobodnim pristupom hrani i vodi. Nakon dve nedelje aklimatizacije na prostoriju, miševima je intraperitonealno injektiran 50mg/kg STZ u utorak i petak. Dve nedelje nakon injekcije, životinje sa nivoima glukoze između 180-300 mg/dL na 09:00 izabrane su za OGTT studiju. Dan pre studije, životinje su randomizovane u grupe na osnovu telesne težine i njihovih nivoa glukoze. Životinje su tretirane sa vehikulumom ili test jedinjenjima potkožnom injekcijom pre uklanjanja hrane preko noći (16:00). Sledećeg jutra u 08:00, 16 časova nakon injekcije jedinjenja, uzeti su uzorci krvi da bi se izmerilo nulto vreme glukoze. Životinjama je data oralna doza glukoze od 2 g/kg. Glukoza je merena 15, 30, 60, i 120 minuta nakon oralne provokacije sa glukozom. Statistike su analizirane korišćenjem ANOVA sa Dunnett poređenjem sa JMP 6; značajnost je označena na p ≤ 0.05 nasuprot vehikulumu.
[0210] U eksperimentima izvedenim suštinski isto kao što je opisano u ovj analizi, Jedinjenje 2 pokazalo je dozno zavisno smanjenje u izletima glukoze tokom testa tolerancije. AUC glukoze bila je smanjena na sve tri testirane doze 1, 3 i 10 nmol/kg (Tabela 11).
Tabela 11: AUC glukoze mužjaka STZ miševa tretiranih sa Jedinjenjem 2 i semaglutidom kao odgovor na OGTT (2g/kg)
Kontrola glikemije kod DIO miševa
[0211] Pet do šest meseci stari mužjaci DIO miševa (C57BL/6) od Taconic Biosciences su korišćeni u ovoj studiji. Životinje su pojedinačno smeštene u prostoriji sa kontrolisanom temperaturom (24°C) sa 12 časovnim ciklusom svetlo/tama (svetla upaljena u 06:00), i slobodnim pristupom hrani i vodi. Nakon dve nedelje aklimatizacije na prostoriju, miševi su randomizovani u grupe za tretman (n=7/grupi) na osnovu njihove telesne težine i glukoze u krvi. Miševima je potkožno jednom injektiran vehikulum ili jedinjenja (25 nmol/kg). Glukoza u krvi je praćena 2 i 8 časova nakon injekcije i zatim jednom dnevno u 08:00 4 dana. OGTTs su izvedeni 44 i 78 časova nakon injekcije peptida. Statistike su analizirane korišćenjem ANOVA sa Dunnett poređenjem sa JMP 6; značajnost je označena na p ≤ 0.05 nasuprot vehikulumu.
[0212] U eksperimentima izvedenim suštinski kao što je opisano u ovoj analizi, miševi tretirani Jedinjenjem 2 i Jedinjenjem 4 imali su nižu glukozu od vehikulum kontrola do 96 časova nakon injekcije. Miševi tretirani Jedinjenjem 2 i Jedinjenjem 4 imali su manje izlete glukoze nakon oralne provokacije glukoze u obe vremenske tačke kada je izveden OGTT.
[0213] Jedinjenje 1 i Jedinjenje 3 smanjili su glukozuu krvi do 72 časa (Tabela 12). Miševi tretirani Jedinjenjem 1 i Jedinjenjem 3 imali su manje izlete glukoze nakon oralne provokacije sa glukozom 44 časa nakon injekcije peptida (Tabela 13).
Tabela 12: Glukoza u krvi merena 2, 8, 24, 48, 72 i 96 časa nakon injekcije kod mužjaka DIO miševa
Tabela 13: Izleti glukoze tokom OGTTs 44 časa i 78 časa nakon injekcije jedinjenja
Hronični tretman kod DIO miševa
[0214] Efekti uzimanja hrane i telesne težine/masti procenjivani su kod DIO miševa. Pet do šest meseci stari mužjaci DIO miševa (C57BL/6) od Taconic Biosciences su korišćeni u ovoj studiji. Životinje su pojedinačno smeštene u prostoriji sa kontrolisanom temperaturom (24°C) sa 12 časovnim ciklusom svetlo/tama (svetla upaljena u 06:00), i slobodnim pristupom hrani i vodi. Miševi su aklimatizovani na prostoriju dve nedelje. Dan pre početka studije, masa masti merena nuklearnom magnetnom rezonancom (NMR) korišćenjem Echo Medical System (Houston, TX) instrumenta. Miševi su randomizovani u grupe za tretman (N=7/grupi) na osnovu telesne težine i mase masti tako da je svaka grupa imala sličnu početnu srednju vrednost telesne težine i mase masti. Vehikulum (40mM Tris-HCl, pH 8.0), test jedinjenja, ili pozitivna kontrola semaglutida su primenjeni potkožnom (SC) injekcijom na ad libitum miševe između 8-10 pre podne svaka tri dana tokom 15 dana. SC injekcije su urađene na Dan 1, 4, 7, 10, i 13. Telesna težina i uzimanje hrane su mereni neposredno pre svake injekcije tokom studije. Procenat promene u telesnoj težini izračunat je kao što sledi:
[0215] Na završetku studije, ukupna masa masti je ponovo merena sa NMR. Statistike su analizirane korišćenjem ANOVA sa Dunnett poređenjem sa JMP 6; značajnost je označena na p ≤ 0.05 nasuprot vehikulumu.
[0216] U eksperimentima izvedenim suštinski kao što je opisano u ovoj analizi, Jedinjenja 1-4 smanjuju unos hrane i telesnu težinu/mast kao što je prikazano u Tabeli 14 u nastavku:
Tabela 14: % promene telesne težine i % promene telesne masti kod DIO miševa
Akutni tretman kod DIO miševa
[0217] Da bi se istražili metabolički putevi uključeni u tretman jedinjenja prema predmetnom pronalasku nezavisno od gubitka težine, jedinjenja su akutno testirana na DIO miševima (C57BL/6). Korišćeni miševi su tri do četiri meseca stari na ishrani sa visokim sadržajem masti najmanje 4 nedelje. Životinje su pojedinačno smeštene u prostoriji sa kontrolisanom temperaturom (24°C) sa ciklusom od 12 časova svetlo/tama (svetla uključena u 6:00), i slobodnim pristupom hrani i vodi. Vehikulum ili test jedinjenje su primenjeni na miševe potkožnom injekcijom u 16:00 dan pre dana studije. Životinje su žrtvovane 16 časova kasnije da bi se sakupila krv preko srčane pumkcije. Statistike su analizirane korišćenjem ANOVA sa Dunnett poređenjem sa JMP 6; značajnost je označena na p ≤ 0.05 nasuprot vehikulumu..
[0218] U eksperimentima koji su suštinski izvedeni kao što je opisano u analizi, Jedinjenja 1-3 smanjuju nivoe holesterola i PCSK9 u serumu i povećavaju nivoe FGF-21 kao što je prikazano u Tabeli 15. Nasuprot tome, tretman sa semaglutidom ne smanjuje nivoe holesterola i PCSK9 u serumu i povećava nivoe FGF-21. Uzimanje hrane je bilo smanjeno do sličnog nivoa u svim grupama tretmana, što može ukazivati da su promene u holesterolu, PCSK9 i FGF-21 nezavisne od uzimanja hrane.
Tabela 15: Akutni efekti na PCSK9, FGF-21 i nivoe holesterola
Efekti na potrošnju energije kod DIO miševa
[0219] Sedam do osam meseci stari mužjaci DIO miševa (C57BL/6) težine 45-50g su korišćeni uovoj studiji za procenu efekata jedinjenja prema predmetnom pronalasku na energetski metabolizam. Životinje su pojedinačno smeštene u prostoriju sa kontrolisanom temperaturom (24°C) sa 12 časovnim ciklusom svetlo/tama (svetla uključena u 22:00), i slobodnim pristupom hrani (TD95217)(Teklad) i vodi. Nakon 2 nedelje aklimatizacije na prostoriju, miševi su randomizovani u grupe tretmana (N=6/grupi) na osnovu telesne težine tako da svaka grupa ima istu početnu srednju vrednost telesne težine. Životinje su stavljene u PhenoMaster/LabMaster kalorimetar (TSE Systems, Chesterfield, MO) za 8 dana aklimatizacije. Vehikulum (40 mM Tris HCl pufer na pH 8.0, 10 ml/kg), test jedinjenje (15 nmol/kg) ili semaglutid (60 nmol/kg) su potkožno primenjeni na ad libitum hranjene DIO miševe 30-90 minuta pre početka tamnog ciklusa svaka tri dana tokom 15 dana.
[0220] Toplota i respiratorni koeficijent (RER) su mereni indirektnom kalorimetrijom kao što je opisano korišćenjem kalorimetrijskog sistema otvorenog kola. RER je odnos proizvedene zapremine CO2(VCO2) prema zapremini utrošenog O2(VO2). Toplota je računata sa uzimanjem u obzir telesnu težinu pri mršavosti. Potrošnja energije je kcal/kg/3 dan i eksprimirana je kao srednja vrednost ± SEM za 6 miševa po grupi. Statistička značajnost je procenjena sa dvofaktorskom ANOVA nakon čega je urađen Tukey test za višestruka poređenja.
[0221] U eksperimentima koji su suštinski izvedeni kao što je opisano u analizi, miševi tretirani sa Jedinjenjima 1 i 2 povećali su njihovu metaboličku stopu počinjući od Nedelje 2 i zadržali su efekat tokom perioda tretmana kao što je pokazano u Tabeli 16. Međutim, semaglutid nije imao efekat na metaboličku stopu. Ovo povećanje u metaboličkoj stopi može doprineti dodtnom gubitku težine uočenom sa primenom Jedinjenja 1 i 2 u poređenju sa primenom semaglutida.
Tabela 16: Efekat hroničnog tretmana sa Jedinjenjem 1, Jedinjenjem 2 ili semaglutidom na metaboličku stopu u DIO miševima
AMINOKISELINSKE SEKVENCE
[0222]
SEQ ID NO: 1 (Humani OXM)
His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-AspPhe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-Ile-Ala
(HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA)
SEQ ID NO: 2 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLXaa28GGPSSG)
gde Xaa2 je Aib;
Xaa28 je Glu (E) ili Ser (S);
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko (i) direktne veze ili (ii) linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana.
SEQ ID NO: 3 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko (i) direktne veze ili (ii) linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana.
SEQ ID NO: 4 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLSGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko (i) direktne veze ili (ii) linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana.
SEQ ID NO: 5 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)-CO-(CH2)16CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana.
SEQ ID NO: 6 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib; Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)-CO-(CH2)18CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana.
SEQ ID NO: 7 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLSGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)2-CO-(CH2)16CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana.
SEQ ID NO: 8 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLSGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)2-CO-(CH2)18CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana.
SEQ ID NO: 9 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLXaa28GGPSSG)
gde Xaa2 je Aib;
Xaa28 je Glu (E) ili Ser (S); i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana.
SEQ ID NO: 10 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
(HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana.
SEQ ID NO: 11 (Veštačka sekvenca)
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly (HXaa2QGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLSGGPSSG)
gde Xaa2 je Aib; i C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana.

Claims (24)

Patentni zahtevi
1. Jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa2 je Aib;
Xaa28 je Glu ili Ser;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline, gde je linker ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2;
i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da Xaa28 je Glu.
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da Xaa28 je Ser.
4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da t je 1.
5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da t je 2.
6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da C14- C24 masna kiselina je zasićena monokiselina ili zasićena dikiselina.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da masna kiselina je zasićena monokiselina ili zasićena dikiselina izabrana iz grupe koja se sastoji od miristinske kiseline (tetradekanska kiselina)(C14 monokiselina), tetradekanske dikiseline (C14 dikiselina), palmitinske kiselina (heksadekanska kiselina)(C16 monokiselina), heksadekanske dikiseline (C16 dikiselina), margarinske kiseline (heptadekanska kiselina)(C17 monokiselina), heptadekanske dikiseline (C17 dikiselina), stearinske kiseline (oktadekanske kiseline)(C18 monokiselina), oktadekanske dikiseline (C18 dikiselina), nonadecilinske kiseline (nonadekanske kiseline)(C19 monokiselina), nonadekanske dikiseline (C19 dikiselina), arahidonske kiseline (eikozanska kiselina)(C20 monokiselina), eikozanske dikiseline (C20 dikiselina), henikozanske kiseline (heneikozanska kiselina)(C21 monokiselina), heneikozanske dikiseline (C21 dikiselina), behenske kiseline (dokozanska kiselina)(C22), dokozanske dikiseline (C22 dikiselina), lignocerinske kiseline (tetrakozanska kiselina)(C24 monokiselina) i tetrakozanske dikiseline (C24 dikiselina).
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6 ili 7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da C14-C24 masna kiselina je oktadekanska kiselina.
9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6 ili 7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da C14-C24 masna kiselina je eikozanska dikiselina.
10. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da C-terminalna aminokiselina je amidovana.
11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 i 10, naznačeno time da jedinjenje ima sledeću formulu:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)-CO-(CH2)16CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 5),
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 i 10, naznačeno time da jedinjenje ima sledeću formulu:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)2-CO-(CH2)16CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 7);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7 i 9-10, naznačeno time da jedinjenje ima sledeću formulu:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočni lanac sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)-CO-(CH2)18CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 6);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
14. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7 i 9-10, naznačeno time da jedinjenje ima sledeću formulu:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-GluPhe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Ser-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa 2 je Aib;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočni lanac sa ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)2-CO-(CH2)18CO2H; i
C-terminalna aminokiselina je amidovana (SEQ ID NO: 8);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
15. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ili ekscipijent.
16. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u terapiji.
17. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu dijabetesa tipa 2.
18. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu gojaznosti.
19. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu bolesti nealkoholne masne jetre (NAFLD).
20. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu nealkoholnog steatohepatitisa (NASH).
21. Intermedijerno jedinjenje sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa2 je Aib;
Xaa28 je Glu ili Ser; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana (SEQ ID NO: 9),
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
22. Intermedijerno jedinjenje prema patentnom zahtevu 21, naznačeno time da Xaa28 je Glu.
23. Intermedijerno jedinjenje prema patentnom zahtevu 21, naznačeno time da Xaa28 je Ser.
24. Postupak za proizvodnju jedinjenja sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu- Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa2 je Aib;
Xaa28 je Glu ili Ser;
Lys na položaju 20 je hemijski modifikovan konjugacijom epsilon-amino grupe Lys bočnog lanca sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera između Lys na položaju 20 i C14-C24 masne kiseline, gde je linker ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana,
Pri čemu pomenuti postupak sadrži korak: (i) modifikovanja intermedijernog jedinjenja sledeće formule:
His-Xaa2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Lys-Lys-Ala-Lys-Glu-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Leu-Xaa28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly
naznačeno time da
Xaa2 je Aib;
Xaa28 je Glu ili Ser; i
C-terminalna aminokiselina je izborno amidovana (SEQ ID NO: 9) konjugovanjem epsilonamino grupe Lys bočnog lanca na položaju 20 intermedijernog jedinjenja sa C14-C24 masnom kiselinom preko linkera, gde je linker ([2-(2-aminoetoksi)-etoksi]-acetil)2-(γ-Glu)t, gde t je 1 ili 2.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20201437A 2015-06-22 2016-06-16 Glukagon i glp-1 ko-agonist jedinjenja RS61107B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562182847P 2015-06-22 2015-06-22
PCT/US2016/037818 WO2016209707A1 (en) 2015-06-22 2016-06-16 Glucagon and glp-1 co-agonist compounds
EP16733268.3A EP3310371B1 (en) 2015-06-22 2016-06-16 Glucagon and glp-1 co-agonist compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61107B1 true RS61107B1 (sr) 2020-12-31

Family

ID=56289604

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201437A RS61107B1 (sr) 2015-06-22 2016-06-16 Glukagon i glp-1 ko-agonist jedinjenja

Country Status (38)

Country Link
US (1) US9938335B2 (sr)
EP (2) EP3310371B1 (sr)
JP (4) JP6585197B2 (sr)
KR (2) KR102034607B1 (sr)
CN (2) CN107735100B (sr)
AR (1) AR104932A1 (sr)
AU (1) AU2016283984B2 (sr)
CA (1) CA2987489A1 (sr)
CL (1) CL2017003185A1 (sr)
CO (1) CO2018000078A2 (sr)
CR (1) CR20170534A (sr)
CY (1) CY1123591T1 (sr)
DK (1) DK3310371T3 (sr)
DO (1) DOP2017000303A (sr)
EA (1) EA038720B1 (sr)
EC (1) ECSP17084280A (sr)
ES (1) ES2833458T3 (sr)
HR (1) HRP20201881T1 (sr)
HU (1) HUE052684T2 (sr)
IL (4) IL285231B (sr)
JO (1) JO3686B1 (sr)
LT (1) LT3310371T (sr)
MA (2) MA54407A (sr)
MD (1) MD3310371T2 (sr)
MX (1) MX380322B (sr)
MY (1) MY190210A (sr)
NZ (1) NZ737050A (sr)
PE (2) PE20180523A1 (sr)
PH (1) PH12017502359A1 (sr)
PL (1) PL3310371T3 (sr)
PT (1) PT3310371T (sr)
RS (1) RS61107B1 (sr)
SI (1) SI3310371T1 (sr)
SV (1) SV2017005594A (sr)
TN (1) TN2017000531A1 (sr)
TW (3) TWI669309B (sr)
UA (1) UA122692C2 (sr)
WO (1) WO2016209707A1 (sr)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI669309B (zh) * 2015-06-22 2019-08-21 美商美國禮來大藥廠 升糖素及ｇｌｐ－１共激動劑化合物
SG11201805255TA (en) 2015-12-23 2018-07-30 Amgen Inc Method of treating or ameliorating metabolic disorders using binding proteins for gastric inhibitory peptide receptor (gipr) in combination with glp-1 agonists
JOP20170153A1 (ar) * 2016-07-15 2019-01-30 Lilly Co Eli نظائر urocortin-2 جديدة معدلة بحمض دهني لعلاج داء السكري وأمراض الكلى المزمنة
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
JOP20190177A1 (ar) * 2017-01-17 2019-07-16 Amgen Inc طريقة لعلاج أو تحسين اضطرابات أيضية باستخدام مساعدات مستقبل glp-1 مقترنة بمناهضات لمستقبل ببتيد مثبط معوي (gipr)
AU2018288854B2 (en) 2017-06-20 2025-06-26 Amgen Inc. Method of treating or ameliorating metabolic disorders using binding proteins for gastric inhibitory peptide receptor (GIPR) in combination with GLP-1 agonists
CA3263567A1 (en) 2017-06-21 2025-10-30 Amgen Inc. Method of treating or ameliorating metabolic disorders using antagonistic binding proteins for gastric inhibitory peptide receptor (gipr)/glp-1 receptor agonist fusion proteins
JP6984923B2 (ja) * 2017-09-19 2021-12-22 イミュンワーク インク.Immunwork Inc. アルブミンとの強化された結合親和性を有する医薬構築物
CN111278853B (zh) * 2017-11-06 2022-06-21 深圳市图微安创科技开发有限公司 基于胃泌酸调节素类似物glp-1r/gcgr双靶点激动剂多肽治疗胆汁性肝硬化
AR113486A1 (es) * 2017-12-21 2020-05-06 Lilly Co Eli Análogos de incretina y sus usos
TWI767095B (zh) * 2017-12-21 2022-06-11 美商美國禮來大藥廠 腸促胰島素(incretin)類似物及其用途
WO2019140025A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Eli Lilly And Company Combination therapy
CN111171135B (zh) * 2018-11-12 2023-04-07 天津药物研究院有限公司 具有双重受体激动作用的胰高血糖素衍生肽及其用途
KR102779458B1 (ko) * 2018-11-12 2025-03-12 톈진 인스티튜트 오브 파마슈티컬 리서치 씨오., 엘티디. 글루카곤 유도 펩티드 및 이의 용도
PH12021553215A1 (en) * 2019-07-01 2022-11-07 Medimmune Ltd Pharmaceutical compositions for glucagon and glp-1 co-agonist peptides
CN111423506B (zh) * 2019-11-08 2023-06-27 成都奥达生物科技有限公司 一种glp-1化合物
MX2022009149A (es) * 2020-01-23 2022-12-15 Lilly Co Eli Compuestos coagonistas de gip/glp1.
CN113336840B (zh) * 2020-03-02 2022-09-23 武汉帕肽生物医药有限责任公司 订书肽、其制备方法和用途
JP7526804B2 (ja) * 2020-03-11 2024-08-01 エニジェン カンパニー リミテッド 新規化合物を含む抗糖尿病及び抗肥満用組成物
CN111410686B (zh) * 2020-03-18 2021-02-26 南京枫璟生物医药科技有限公司 Glp-1r激活剂的分子改构及其二聚体在治疗代谢病中的应用
WO2021205388A2 (en) * 2020-04-10 2021-10-14 Fresenius Kabi Oncology Limited An improved process for the preparation of semaglutide side chain
WO2021221482A1 (ko) 2020-04-29 2021-11-04 주식회사 원진바이오테크놀로지 신규한 단백질 결합체, 및 이의 비알콜성 지방간염, 비만 및 당뇨 질환의 예방 또는 치료 용도
CR20220641A (es) * 2020-05-15 2023-01-19 Lilly Co Eli Compuestos de insulina acilada de acción temporal prolongada
AR122579A1 (es) * 2020-06-12 2022-09-21 Lilly Co Eli Proceso para preparar un agonista dual glp-1 / glucagón
JP2023534949A (ja) * 2020-07-15 2023-08-15 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド グルカゴン誘導体又はその結合体の肝臓疾患に対する治療的用途
PE20240116A1 (es) * 2020-12-22 2024-01-22 Lilly Co Eli Formulaciones de peptidos terapeuticos
CN112898405B (zh) * 2021-01-22 2023-02-28 深圳市图微安创科技开发有限公司 多肽化合物及其在预防或治疗糖尿病或糖尿病并发症中的应用
AU2022267568A1 (en) * 2021-04-30 2023-11-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Oxm3 storage agent, oxm3 preparation, and preparation method
CN117597135A (zh) * 2021-06-25 2024-02-23 信达生物制药(苏州)有限公司 Mazdutide的应用
CN113429471B (zh) * 2021-07-19 2022-12-23 青岛博睿精创科技有限公司 长效glp-1多肽类似物及其制备方法和应用
WO2023016346A1 (zh) * 2021-08-10 2023-02-16 南京明德新药研发有限公司 含内酰胺桥的多肽化合物
KR20230037391A (ko) * 2021-09-09 2023-03-16 애니젠 주식회사 신규한 화합물을 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 조성물
AU2022390313A1 (en) * 2021-11-19 2024-06-06 Soter Biopharma Pte. Ltd. Staple-containing polypeptides and application thereof
TW202404996A (zh) 2022-04-04 2024-02-01 美商美國禮來大藥廠 製備glp-1/升糖素雙重促效劑之方法
CN116970064A (zh) * 2022-04-29 2023-10-31 苏州星洲生物科技有限公司 Glp-1/gcg受体共激动剂、包含其的药物组合物及其用途
JP2025518758A (ja) 2022-06-01 2025-06-19 イーライ リリー アンド カンパニー 療法のためのｇｃｇ／ｇｌｐ１コアゴニストを使用する方法
AU2023281591A1 (en) * 2022-06-01 2025-01-02 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Treatment method using mazdutide
CN115490760B (zh) * 2022-07-04 2023-04-14 北京惠之衡生物科技有限公司 一种glp-1受体和gcg受体共激动多肽衍生物
CN117586373A (zh) * 2022-08-10 2024-02-23 成都奥达生物科技有限公司 一种长效双激动剂化合物
EP4580608A1 (en) 2022-08-29 2025-07-09 Eli Lilly And Company Compositions for oral delivery
KR20250096895A (ko) * 2022-10-05 2025-06-27 일라이 릴리 앤드 캄파니 인크레틴 합성을 위한 펩티드
KR20250110330A (ko) * 2022-11-21 2025-07-18 일라이 릴리 앤드 캄파니 Gip/glp1 이중 효능제의 제조 방법
PE20252287A1 (es) 2023-01-31 2025-09-18 Lilly Co Eli Agonistas del trirreceptor gip/glp1/gcg y usos de estos
KR20260022948A (ko) * 2023-06-09 2026-02-20 썬 파마슈티컬 인더스트리스 리미티드 Glp-1/gip 이중 수용체 작용제, glp-1/gcg 이중 수용체 작용제, 및 glp-1/gip/gcg 삼중 수용체 작용제
WO2025073288A1 (en) * 2023-10-03 2025-04-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Methods of treating adolescent obesity
CN119912532A (zh) * 2023-10-30 2025-05-02 成都奥达生物科技有限公司 一种双激动剂化合物
WO2025098464A1 (en) * 2023-11-10 2025-05-15 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Intermediate for preparing glucagon and glp-1 dual agonist and preparation method therefor
CN121064327A (zh) * 2024-06-03 2025-12-05 信达生物制药(苏州)有限公司 Gipr、glp1r和/或gcgr的调节剂及其用途

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR021576A1 (es) * 1998-12-07 2002-07-24 Ipsen Pharma Sas Analogos del peptido 1-similar al glucagon, uso de los mismos para la manufactura de un medicamento y composiciones farmaceuticas que los contienen.
CA2852177A1 (en) * 2008-06-17 2009-12-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
AU2009260302B2 (en) 2008-06-17 2014-10-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
WO2011075393A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
RU2012136450A (ru) * 2010-01-27 2014-03-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Конъюгаты антагонист глюкагона - агонист gip и композиции для лечения метаболических расстройств и ожирения
BR112013032717A2 (pt) 2011-06-22 2017-01-24 Univ Indiana Res & Tech Corp coagonistas do receptor de glucagon/glp-1
US9944687B2 (en) * 2011-07-04 2018-04-17 Imperial Innovations Limited Compounds and their effects on feeding behaviour
CA2847246A1 (en) * 2011-11-17 2013-05-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting glucocorticoid receptor activity
EP2895506A1 (en) * 2012-09-17 2015-07-22 Imperial Innovations Limited Peptide analogues of glucagon and glp1
TWI608013B (zh) 2012-09-17 2017-12-11 西蘭製藥公司 升糖素類似物
UA116217C2 (uk) * 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
EP2986314A4 (en) * 2013-03-15 2016-04-13 Univ Indiana Res & Tech Corp PRODRUGS WITH EXTENDED EFFECT
TWI669309B (zh) * 2015-06-22 2019-08-21 美商美國禮來大藥廠 升糖素及ｇｌｐ－１共激動劑化合物

Also Published As

Publication number Publication date
HRP20201881T1 (hr) 2021-01-22
WO2016209707A1 (en) 2016-12-29
PH12017502359B1 (en) 2018-06-25
IL285231B (en) 2022-08-01
CR20170534A (es) 2018-02-27
IL294099A (en) 2022-08-01
MA54407A (fr) 2021-10-13
SI3310371T1 (sl) 2020-11-30
IL294099B2 (en) 2024-03-01
US9938335B2 (en) 2018-04-10
ECSP17084280A (es) 2018-02-28
ES2833458T3 (es) 2021-06-15
HK1245669A1 (en) 2018-08-31
EA201792562A1 (ru) 2018-05-31
CN113956348B (zh) 2025-03-14
IL255723B (en) 2021-08-31
LT3310371T (lt) 2020-12-28
KR20180004276A (ko) 2018-01-10
US20160368960A1 (en) 2016-12-22
EP3310371B1 (en) 2020-09-30
AU2016283984B2 (en) 2018-11-29
AU2016283984A1 (en) 2017-11-23
BR112017024684A2 (pt) 2018-09-11
PT3310371T (pt) 2020-12-15
SV2017005594A (es) 2018-04-24
CA2987489A1 (en) 2016-12-29
JP6585197B2 (ja) 2019-10-02
CN113956348A (zh) 2022-01-21
EA038720B1 (ru) 2021-10-11
TW201906857A (zh) 2019-02-16
JP7739384B2 (ja) 2025-09-16
IL294099B1 (en) 2023-11-01
TWI783244B (zh) 2022-11-11
KR102034607B1 (ko) 2019-10-22
JP7386218B2 (ja) 2023-11-24
KR102544419B1 (ko) 2023-06-19
CN107735100B (zh) 2021-11-05
TWI669309B (zh) 2019-08-21
IL307657A (en) 2023-12-01
DOP2017000303A (es) 2018-01-15
AR104932A1 (es) 2017-08-23
PH12017502359A1 (en) 2018-06-25
TW201716431A (zh) 2017-05-16
CL2017003185A1 (es) 2018-06-01
UA122692C2 (uk) 2020-12-28
MD3310371T2 (ro) 2020-12-31
JP2020007338A (ja) 2020-01-16
JP2024016243A (ja) 2024-02-06
HUE052684T2 (hu) 2021-05-28
TN2017000531A1 (en) 2019-04-12
KR20190119676A (ko) 2019-10-22
NZ737050A (en) 2019-08-30
IL255723A (en) 2018-01-31
EP3785724A1 (en) 2021-03-03
CO2018000078A2 (es) 2018-03-28
IL285231A (en) 2021-09-30
EP3310371A1 (en) 2018-04-25
JO3686B1 (ar) 2020-08-27
JP2022031787A (ja) 2022-02-22
TWI700291B (zh) 2020-08-01
MA46219B1 (fr) 2020-12-31
CN107735100A (zh) 2018-02-23
JP6985345B2 (ja) 2021-12-22
DK3310371T3 (da) 2020-10-12
JP2018521043A (ja) 2018-08-02
MX2017016198A (es) 2018-03-01
MX380322B (es) 2025-03-12
MA46219A (fr) 2018-04-25
MY190210A (en) 2022-04-05
CY1123591T1 (el) 2022-03-24
PE20180523A1 (es) 2018-03-14
TW202118775A (zh) 2021-05-16
PE20231639A1 (es) 2023-10-16
PL3310371T3 (pl) 2021-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7739384B2 (ja) グルカゴン及びｇｌｐ－１共アゴニスト化合物
AU2018388962B2 (en) Incretin analogs and uses thereof
TWI622596B (zh) 升糖素受體促效劑
HK1245669B (en) Glucagon and glp-1 co-agonist compounds
EA048990B1 (ru) Коагонист рецептора glp-1 и рецептора глюкагона для лечения диабета 2 типа, ожирения, неалкогольной жировой болезни печени и/или неалкогольного стеатогепатита
BR112017024684B1 (pt) Compostos coagonistas de glucagon e glp-1, composição farmacêutica, uso, processo de produção e composto intermediário dos mesmos