RS58768B1 - Inhibitori glikozidaze - Google Patents

Inhibitori glikozidaze

Info

Publication number
RS58768B1
RS58768B1 RS20190638A RSP20190638A RS58768B1 RS 58768 B1 RS58768 B1 RS 58768B1 RS 20190638 A RS20190638 A RS 20190638A RS P20190638 A RSP20190638 A RS P20190638A RS 58768 B1 RS58768 B1 RS 58768B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
atoms
thiazol
mmol
tau
denotes
Prior art date
Application number
RS20190638A
Other languages
English (en)
Inventor
Henry Yu
Lesley Liu-Bujalski
Theresa L Johnson
Original Assignee
Merck Patent Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Patent Gmbh filed Critical Merck Patent Gmbh
Publication of RS58768B1 publication Critical patent/RS58768B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/38—Nitrogen atoms
    • C07D277/44—Acylated amino or imino radicals
    • C07D277/46—Acylated amino or imino radicals by carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)

Description

u kојој X<1>, Х<2>, W, R<1>do R<5>, L i m imaju značenja prema zahtevima, i/ili njegove fiziološki prihvatljive soli. Jedinjenja formule (I) mogu se upotrebiti kao inhibitori glikozidaze. Predmet pronalaska su takođe i farmaceutske kompozicije koje kao aktivne sastojke sadrže lek koji sadrži jedinjenja formule (I), i lek koji sadrži jedinjenja formule (I) za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti.
[0002] Širok opseg ćelijskih proteina, i nuklearnih i citoplazmatskih, su posttranslaciono modifikovani dodavanjem monosaharida 2-acetamido-2-dezoksi- β -D-glukopiranozida (β -N-acetil glukozamina) koji je vezan preko O -glikozidne veze. Ova modifikacija se generalno naziva O-vezanim N-acetilglukozaminom ili O-GlcNAc. Enzim odgovoran za posttranslaciono povezivanje β -N-acetilglukozamina (GlcNAc) sa specifičnim serinskim i treoninskim ostacima brojnih nukleocitoplazmatskih proteina je O-GlcNAc transferaza (OGTaza). Drugi enzim, poznat kao O-GlcNAkaza, uklanja ovu posttranslacionu modifikaciju radi oslobađanja proteina, čineći O-GlcNAc-modifikaciju dinamičkim ciklusom koji se javlja nekoliko puta tokom životnog veka proteina.
[0003] O-GlcNAc-modifikovani proteini regulišu širok opseg vitalnih ćelijskih funkcija uključujući, na primer, transkripciju, proteazomalnu degradaciju i ćelijsku signalizaciju. O-GlcNAc se takođe nalazi na mnogim strukturnim proteinima. Na primer, nađen je na brojnim citoskeletnim proteinima, uključujući proteine neurofilamenta, sinapsine, sinapsin-specifičan klatrin povezan protein AP-3 i Ankirin-G. Utvrđeno je da, u mozgu, dolazi do obilne modifikacije O-GlcNAc. Takođe je pronađeno na proteinima koji su jasno uključeni u etiologiju nekolicine bolesti uključujući Alchajmerovu bolest (AD) i karcinom.
[0004] Na primer, dobro je utvrđeno da AD i broj povezanih tauopatija uključujući Daunov sindrom, Pikovu bolest, Niman - Pikovu bolesti C tipa i amiotrofnu lateralnu sklerozu (ALS) karakterišu, delom, razvoj neurofibrilarnih čvorova (RNČ/NFT). Ovi NFT-ovi su agregati uparenih spiralnih filamenata (USF/PHF) i sastavljeni su od citoskeletnog proteina "tau"abnormalnog oblika. Normalno, tau stabilizuje ključnu ćelijsku mrežu mikrotubula koja je neophodna za distribuciju proteina i nutrijenata unutar neurona. Međutim, kod pacijenata sa AD, tau postaje hiperfosforilovan, narušavajući njegovu normalnu funkciju, formirajući PHF i konačno objedinjuje u obliku NFT. Šest izoforma tau se nalazi u ljudskom mozgu. Kod pacijenata sa AD, svih šest izoforma tau se nalazi u NFT, i sve su izrazito hiperfosforilovane. Tau u zdravom moždanom tkivu nosi samo 2 ili 3 fosfatne grupe, dok oni koji se nalaze u mozgu bolesnika sa AD imaju u proseku 8 fosfatnih grupa. Jasna paralela između NFT nivoa u mozgu pacijenata sa AD i ozbiljnosti demencije snažno podržava ključnu ulogu za disfunkciju tau u AD. Tačni uzroci ove hiperfosforilacije tau ostaju nedostižni. Shodno tome, značajan napor je posvećen: a) razjašnjavanju molekularno fiziološke osnove hiperfosforilacije tau; i b) identifikovanje strategija koje bi mogle da ograniče hiperfosforilaciju tau u nadi da bi one mogle zaustaviti ili čak preokrenuti napredovanje Alchajmerove bolesti. Nekoliko dokaza ukazuje na to da ushodna regulacija određenog broja kinaza može biti uključena u hiperfosforilaciju tau, iako je nedavno napredovala alternativna osnova za ovu hiperfosforilaciju.
[0005] Posebno, nedavno se pokazalo da su nivoi fosfata tau proteina regulisani nivoima O-GlcNAc na tau. Prisustvo O-GlcNAc na tau stimulisalo je studije koje koreliraju nivoe O-GlcNAc sa nivoima tau fosforilacije. Skorašnji interes za ovu oblast proizilazi iz zapažanja da je modifikacija O-GlcNAc nađena na mnogim proteinima kod aminokiselinskih ostataka za koje se takođe zna da su fosforilovani. U skladu sa ovim zapažanjem, utvrđeno je da povećanje nivoa fosforilacije dovodi do smanjenja nivoa O-GlcNAc i obrnuto, povećanje nivoa O-GlcNAc je u korelaraciji sa smanjenim nivoima fosforilacije. Ova recipročna veza između O-GlcNAc i fosforilacije nazvana je "Yin-Yang hipoteza" i stekla je snažnu biohemijsku podršku nedavnim otkrićem da enzim OGTaza formira funkcionalni kompleks sa fosfatazama koje deluju da uklone fosfatne grupe iz proteina. Kao i fosforilacija, O-GlcNAc je dinamička modifikacija koja se može ukloniti i ponovo instalirati nekoliko puta tokom životnog veka proteina. Dakle, gen koji kodira O-GlcNAkazu je mapiran na hromozomski lokus koji je povezan sa AD. Hiperfosforilovani tau u ljudskim mozgovima sa AD ima značajno niže nivoe O-GlcNAc od onih koji se nalaze u zdravom ljudskom mozgu. Nedavno je pokazano da su nivoi O-GlcNAc rastvorljivog tau proteina iz ljudskih mozgova koji su pogođeni sa AD, značajno niži od onih iz zdravog mozga. Dalje, za PHF iz bolesnog mozga je sugerisano da gotovo da nema nikakvu modifikaciju O-GlcNAc. Molekularna osnova ove hipoglikozilacije tau nije poznata, mada može da vodi poreklo od povećane aktivnosti kinaza i / ili disfunkcije jednog od enzima uključenih u procesiranje O-GlcNAc. Podržavajući ovo poslednje gledište, i u PC-12 neuronskim ćelijama i u sekcijama moždanog tkiva miševa, upotrebljen je neselektivni inhibitor N-acetilglukozaminidaze da se povećaju nivoi tau O-GlcNAc, nakon čega je primećeno da se nivoi fosforilacije smanjuju. Implikacija ovih kolektivnih rezultata je da održavanjem zdravih nivoa O-GlcNAc kod pacijenata sa AD, kao što je inhibicija dejstva O-GlcNAkaze (OGA), bi trebalo da bude u stanju da blokira hiperfosforilaciju tau i sve povezane efekte tau hiperfosforilacija, uključujući formiranje NFTs i nishodnih efekata. Međutim, pošto je kritično pravilno funkcionisanje izozomalnih β -heksozaminidaza, svaka potencijalna terapeutska intervencija za lečenje AD koja blokira dejstvo O-GlcNAkaze bi morala da izbegne prateću inhibiciju obe izozomske heksozaminidaze A i B.
[0006] U skladu sa poznatim svojstvima biosintetičkog puta heksozamina, enzimskim svojstvima O-GlcNAc transferaze (OGTaze) i recipročnim odnosom između O-GlcNAc i fosforilacije, pokazalo se da smanjena dostupnost glukoze u mozgu dovodi do hiperfosforilacije tau. Postepeno narušavanje transporta i metabolizma glukoze dovodi do smanjenja O-GlcNAc i hiperfosforilacije tau (i drugih proteina). U skladu s tim, inhibicija O-GlcNAkaze treba da kompenzuje oštećenje metabolizma glukoze povezano sa starošću unutar mozga zdravih pojedinaca, kao i pacijenata koji pate od AD ili srodnih neurodegenerativnih bolesti.
[0007] Ovi rezultati ukazuju na to da nepravilnost u mehanizmima koji regulišu nivoe tau O-GlcNAc mogu biti vitalno važni u formiranju NFT i povezane neurodegeneracije. Dobra podrška za blokiranje hiperfosforilacije tau kao terapeutski korisne intervencije dolazi iz studija koje pokazuju da kada se transgeni miševi koji nose tau čoveka tretiraju inhibitorima kinaze, oni ne razvijaju tipične motoričke defekte i, u drugom slučaju, pokazuju smanjeni nivo nerastvornog tau. Ove studije pružaju jasnu vezu između snižavanja nivoa tau fosforilacije i ublažavanja AD-sličnih simptoma ponašanja u mišjem modelu ove bolesti.
[0008] Takođe postoji veliki broj dokaza koji ukazuju da povećani nivoi modifikacije O-GlcNAc proteina obezbeđuju zaštitu od patogenih efekata stresa u srčanom tkivu, uključujući stres izazvan ishemijom, krvarenjem, hipervolemijskim šokom i paradoksom kalcijuma. Na primer, pokazalo se da aktivacija putanje biosinteze heksozamina (HBP) davanjem glukozamina ima zaštitni efekat u životinjskim modelima ishemije / reperfuzije, traumatskog krvarenja, hipervolemijskog šoka i paradoksa kalcijuma.
Štaviše, jaki dokazi ukazuju da su ovi kardioprotektivni efekti posredovani povišenim nivoima modifikacije proteina O-GlcNAc. Takođe postoje dokazi da modifikacija O-GlcNAc igra ulogu u različitim neurodegenerativnim bolestima, uključujući Parkinsonovu bolest i Hantingtonovu bolest.
[0009] Ljudi imaju tri gena koji kodiraju enzime koji otcepljuju terminalne ostatke P - N-acetil-glukozamina od glikokonjugata. Prvi od njih kodira enzim O-glikoprotein-2-acetamido-2-dezoksi-p-D-glukopiranozidazu (O-GlcNAkazu). O-GlcNAkaza je član porodice 84 glikozidnih hidrolaza. O-GlcNAkaza deluje tako da hidrolizuje O- GlcNAc iz serinskih i treoninskih ostataka post-translacijski modifikovanih proteina. U skladu sa prisustvom O-GlcNAc na mnogim intracelularnim proteinima, čini se da enzim O-GlcNAkaza ima ulogu u etiologiji nekolicine bolesti uključujući dijabetes tipa II, AD i karcinom. Mada je O-GlcNAkaza verovatno ranije izolovan, prošlo je oko 20 godina pre nego što je shvaćena njegova biohemijska uloga u njegovom delovanju da se otcepi O-GlcNAc iz serinskih i treoninskih ostataka proteina. Nedavno je klonirana delimično okarakterisana O-GlcNAkaza i predloženo je da ima dodatnu aktivnost kao histon acetiltransferaza.
[0010] Međutim, glavni izazov u razvijanju inhibitora za blokiranje funkcije glikozidaza sisara, uključujući O-GlcNAkazu, je veliki broj funkcionalno srodnih enzima koji su prisutni u tkivima viših eukariota. Shodno tome, upotreba neselektivnih inhibitora u proučavanju ćelijske uloge i fiziološke uloge u organizmu jednog određenog enzima je komplikovana, jer kompleksni fenotipovi nastaju usled istovremene inhibicije takvih funkcionalno povezanih enzima. U slučaju β -N- acetilglukozaminidaze, postojeća jedinjenja koja deluju tako da blokiraju funkciju O- GlcNAkaze su nespecifična i deluju snažno da inhibiraju izozomalne β - heksozaminidaze.
[0011] US 2009/0163545 jedinjenja koja menjaju životni vek, kao što je metil estar (5-piperidin-l-ilmetil-tiazol-2-il) -karbaminske kiseline. WO 2010/108115 generalno opisuje derivate heterocikličnih amida kao inhibitore alosterične Janus kinaze. WO 2010/101949 opisuje dobijanje 8-supstituisanih hinolina kao modulatora sirtuina. N- [5- (4-fenilpiperidin-l-ilmetil) -tiazol-2-il] -acetamid je komercijalno dostupan sa nedefinisanom svrhom. Inhibitori OGA male molekulske mase opisani su u međunarodnoj prijavi WO 2008/025170. Postoji potreba za molekulima male molekulske mase koji selektivno inhibiraju OGA.
[0012] Pronalazak je imao za predmet pronalaženje novih jedinjenja koja imaju važna svojstva, naročito ona koja se mogu koristiti za pripremu lekova.
[0013] Iznenađujuće je otkriveno da jedinjenja koja su ovde opisana i njihove soli imaju veoma važna farmakološka svojstva. Posebno, oni deluju kao inhibitori glikozidaze. Pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I) kao lek
А označava nerazgranat ili razgranat acikličan alkil sa 1-10 atoma C, gde 1-7 atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal; Alk označava nerazgranat ili razgranat alkenil sa 2-10 atoma C; gde 1 -4
atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal; Cik označava cikloalkil sa 3-7 atoma C; pri čemu 1-4 atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal;
Ar označava nezasićen ili aromatičan mono- ili bicikličan karbocikl sa 3-12 atoma C, koji može da budu supstituisan barem sa jednim supstituentom odabranim iz grupe koju čine Hal, A, (CY2)n-OY, (CY2)n-NY2, COOY, SO2Y i CN, ili može da bude kondenzovan sa zasićenim, nezasičenim ili aromatičnim monocikličnim heterocikom sa 1-5 atoma C i 1-4 N, O i/ili S atoma;
Hal označava F, Cl, Br ili I; i
m, n, p, q označavaju nezavisno jedno od drugog 0, 1, 2 ili 3;
i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli;
pod uslovom da je izuzet metil estar (5-piperidin-l-ilmetil-tiazol-2-il)-karbaminske kiseline.
R<6>označava Y, OY, Hal ili CN;
L označava -CY2-, -CO- ili -SO2-;
Y označava H ili A;
A označava nerazgranat ili razgranat acikličan alkil sa 1-10 atoma C,
gde 1 -7 atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal;
Alk označava nerazgranat ili razgranat alkenil sa 2-10 atoma C;
gde 1-4 atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal;
Cik označava cikloalkil having 3-7 C atoma;
gde 1-4 atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal;
Ar označava nezasićen ili atomatičan mono- ili bicikličan karbocikl sa 3-12 atoma C, koji može da bude supstituisan najmanje jednom supstituentom odbaranim od Hal, A, (CY2)n-OY, (CY2)n-NY2, COOY, SO2Y i CN;
Hal označava F, Cl, Br ili I; i
m, n, p, q označavaju nezavisno jedno od drugog 0, 1, 2 ili 3; i/ili
njihove fiziološki prihvatljive soli;
pod uslovom da je izuzet metil estar (5-piperidin-l-ilmetil-tiazol-2-il)-karbaminske kiseline.
[0015] Jedinjenje je definisano tako da uključuje njegove farmaceutski upotrebljive derivate, solvate, tautomere, enantiomere, racemate i stereoizomere, uključujući njihove smeše u svim odnosima.
[0016] Izraz "farmaceutski upotrebljivi derivati" podrazumeva, na primer, soli ovde opisanih jedinjenja. Pod pojmom "solvati" jedinjenja podrazumevaju se adukti molekula inertnog rastvarača sa jedinjenjima, koji se formiraju zbog međusobne privlačne sile. Solvati su, na primer, mono- ili dihidrati ili alkoksidi. Takođe su obuhvaćeni i solvati soli jedinjenja koja su ovde opisana.
[0017] Ovde opisana jedinjenja mogu biti prisutna u obliku svojih izomera dvostruke veze kao čisti E ili Z izomeri, ili u obliku sineša ovih izomera. Kada je moguće, jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti u obliku tautomera, kao što su keto-enolni tautomeri. Svi stereoizomeri ovde opisanih jedinjenja su razmatrani, bilo u smeši ili u čistom ili u suštini čistom obliku. Ovde opisana jedinjenja mogu imati asimetrične centre na bilo kojem od atoma ugljenika. Prema tome, oni mogu da postoje u obliku njihovih racemata, u obliku čistih enantiomera i / ili dijastereomera ili u obliku smeša ovih enantiomera i / ili dijastereomera. Smeše mogu imati bilo koji željeni odnos mešanja stereoizomera. Tako, na primer, ovde opisana jedinjenja koja imaju jedan ili više hiralnih centara i koja se javljaju kao racemati ili kao dijastereomerne smeše mogu se frakcionisati postupcima poznatim per se u svoje optički čiste izomere, tj. enantiomere ili dijastereomere. Razdvajanje ovde opisanih jedinjenja može da se odvija razdvajanjem na koloni na hiralnim ili nehiralnim fazama ili rekristalizacijom iz po izboru optički aktivnog rastvarača ili upotrebom optički aktivne kiseline ili baze ili derivatizacijom sa optički aktivnim reagensom kao što je kao, na primer, optički aktivan alkohol, a zatim eliminacijom radikala.
[0018] Smeše jedinjenja koja su ovde opisana mogu da se koriste, na primer smeše dva diastereomera, na primer u odnosu 1: 1, 1:2, 1:3, 1:4, 1: 5, 1:10, 1 : 100 ili 1: 1000. Ovo su naročito poželjne smeše stereoizomernih jedinjenja.
[0019] Nomenklatura koja se ovde koristi za definisanje jedinjenja se generalno zasniva na pravilima IUРАС organizacije za hemijska jedinjenja i posebno organska jedinjenja. Termini naznačeni za objašnjenje gornjih jedinjenja uvek, osim ako nije drugačije naznačeno u opisu ili patentnim zahtevima, imaju sledeća značenja:
Izraz "nesupstituisan" označava da odgovarajući radikal, grupa ili ostatak nema supstituenata. Izraz "supstituisan" označava da odgovarajući radikal, grupa ili ostatak ima jedan ili više supstituenata. U slučaju kada radikal ima veći broj supstituenata i određen je izbor različitih supstituenata, supstituenti se biraju nezavisno jedan od drugog i ne moraju biti identični. Iako radikal ima veći broj specifično označenog supstituenta (npr. Y2), značenje za takav supstituent se može razlikovati jedan od drugog (npr. metil i etil). Podrazumeva se, shodno tome, da višestruka supstitucija bilo kojim od ovde opisanog radikala, može da uključi identične ili različite radikale. Stoga, ako se pojedinačni radikali pojavljuju nekoliko puta unutar jedinjenja, radikali imaju naznačena značenja, nezavisno jedan od drugog.
[0020] Izrazi "alkil" ili "A" se odnose na aciklične zasićene ugljovodonične radikale, koji mogu biti sa razgranatim ili pravim lancem i poželjno imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 atoma ugljenika, tj. C1-C10-alkanili. Primeri odgovarajućih alkil radikala su metil, etil, n-propil, izopropil, 1,1-, 1,2- ili 2,2-dimetilpropil, 1-etilpropil, 1-etil-l- metilpropil, l-etil-2- metilpropil, 1,1,2- ili 1,2,2-trimetilpropil, n-butil, izobutil, sek- butil, terc-butil, 1-, 2-ili 3-metilbutil, 1,1-, 1,2- 1,3-, 2,2-, 2,3- ili 3,3-dimetilbutil, 1
ili 2-etilbutil, n-pentil, izo-pentil, neo-pentil, terc-pentil, 1-, 2-, 3- ili -metil-pentil, nheksil, 2-heksil, izoheksil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, n-decil, n-undecil, n-dodecil, ntetradecil, n-heksadecil, n-oktadecil, n-ikozanil, n-dokozanil.
[0021] U pronalasku, A označava nerazgranati ili razgranati aciklični alkil koji ima 1-10 atoma C atoma, pri čemu se 1 -7 atoma H mogu nezavisno jedan od drugog zameniti sa Hal. Poželjna realizacija za A označava nerazgranati ili razgranati aciklični alkil koji ima 1-6 atoma C, pri čemu se 1 -4 atoma mogu zameniti nezavisno jedan od drugog sa Hal. U poželjnijoj realizaciji pronalaska, A označava nerazgranati ili razgranati aciklični alkil koji ima 1 -4 atoma C, pri čemu 1 -3 atoma H mogu da se zamene nezavisno jedan od drugog sa Hal, posebno sa F i / ili Cl. Najpoželjnije je da A označava nerazgranati ili razgranati aciklični alkil koji ima 1-6 atoma C. Veoma poželjan je Cl -4-alkil. C1-4-alkil radikal je na primer metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, terc-butil, sec-butil, terc- butil, fluormetil, difluormetil, trifluormetil, pentafluoretil, 1,1,1-trifluoretil ili brommetil, naročito metil, etil, propil ili trifluormetil. Podrazumeva se da je odgovarajuća oznaka A nezavisna jedne od druge u bilo kom radikalu ovde opisanih jedinjenja.
[0022] Izrazi "alkenil" ili "Alk" se odnose na nerazgranati ili razgranati alkenil koji ima 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 atoma C, tj. C2-C10-alkenili. Alkenili imaju najmanje jednu dvostruku C-C vezu.
[0023] Primer pogodnih alkenila su alil, vinil, propenil, -CH2CH=CH2, -CH=CH-СН3,-С(=СН2)-СН3), 1-, 2- ili 3-butenil, izobutenil, 2-metil-l - ili 2-butenil, 3-metil- 1-butenil, 1,3-butadienil, 2-metil- 1, 3-butadienil, 2,3-dimetil-l, 3-butadienil, 1-, 2-, 3- ili 4-pentenil i heksenil.
[0024] U pronalasku, Alk označava nerazgranati ili razgranati alkenil koji ima 2-10 atoma C, pri čemu se 1-4 atoma H mogu zameniti nezavisno jedan od drugog sa Hal. Poželjna realizacija Alk označava nerazgranati ili razgranati alkenil koji ima 2-6 atoma C, pri čemu 1-3 atoma H mogu da se zamene nezavisno jedan od drugog sa Hal, naročito sa F i / ili Cl. U poželjnijoj realizaciji pronalaska, Alk označava nerazgranati ili razgranati alkenil koji ima 2-6 atoma C. U najpoželjnijoj realizaciji pronalaska, Alk označava nerazgranati ili razgranati alkenil koji ima 2-4 atoma C, naročito poželjno, vinil.
[0025] Izrazi "cikloalkil" ili "Cik" se odnose na zasićene i delimično nezasićene nearomatične ciklične ugljovodonične grupe / radikale, koji imaju 1 do 3 prstena, koji sadrže 3 do 20, poželjno 3 do 12, poželjnije 3 do 9 atoma ugljenika. Cikloalkil radikal može takođe biti deo bi- ili policikličnog sistema, gde je, na primer, cikloalkil radikal
1
kondenzovan sa aril, heteroaril ili heterociklil radikalom kao što je ovde definisano bilo kojim mogućim ili poželjnim članom (članovima) prstena. Vezivanje za jedinjenja opšte formule (I) može biti izvedeno preko bilo kojeg mogućeg člana prstena cikloalkil radikala. Primeri odgovarajućih cikloalkilnih radikala su ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, ciklodecil, cikloheksenil, ciklopentenil i ciklooktadienil.
[0026] U pronalasku, Cik označava cikloalkil koji ima 3-7 C- atoma, u kome 1-4 atoma H mogu biti zamenjeni nezavisno jedan od drugog sa Hal. Poželjan je C3-C7- cikloalkil. Još bolje, C4-C7-cikloalkil. Najbolje, C5-C7-cikloalkil, tj. ciklopentil, cikloheksil ili cikloheptil, veoma poželjno cikloheksil. Podrazumeva se da je odgovarajuća oznaka za Cik nezavisna jedna od druge u bilo kom radikalu jedinjenja koja su ovde opisana.
[0027] Izraz "aril" ili "karboaril" se odnosi na mono- ili policiklične aromatske ugljovodonične sisteme koji imaju 3 do 14, poželjno 3 do 12, bolje 4 do 12, najbolje 5 do 10, naročito poželjno 6 do 8 atoma ugljenika, koji mogu da budu po izboru supstituisani. Izraz "aril" takođe uključuje sisteme u kojima je aromatski prsten deo bi- ili policikličnog zasićenog, delimično nezasićenog i / ili aromatičnog sistema, kao slučaj kada je aromatski prsten kondenzovan sa aril, cikloalkil, heteroaril ili heterociklil grupom kao što je ovde preko bilo kojeg željenog i mogućeg člana u prstenu aril radikala. Vezivanje sa jedinjenjima opšte formule (I) može se izvesti preko bilo kojeg mogućeg člana u prstenu aril radikala. Primeri pogodnih aril radikala su fenil, bifenil, naftil, 1-naftil, 2-naftil i antracenil, ali isto tako in-danil, in-denil ili 1,2,3,4-tetrahidronaftil. Poželjni karboarili su po izboru supstituisani fenil, naftil i bifenil, poželjnije po izboru supstituisani monociklični karboaril koji ima 6 do 8 C- atoma, najbolje po izboru supstituisani fenil.
[0028] Karbocikl, uključujući, ali ne ograničavajući se na karboaril, je takođe definisan kao "Ar". Primeri odgovaraućih Ar radikala su fenil, o-, m- ili p-tolil, o-, m- ili p-etilfenil, o-, m- ili p-propilfenil, o-, m- ili p-izopropilfenil, o-, m- ili p-terc-butilfenil, o-, m- ili phidroksifenil, o-, m- ili p-metoksifenil, o-, m- ili p-etoksifenil, o-, m- ili p-fluorfenil, o-, m- ili p-bromfenil, o-, m- ili p-hlorfenil, o-, m- ili p-sulfonamidofenil, o-, m- ili p- (N-metil-sulfonamido) fenil, o-, m- ili p- (N, N-dimetil-sulfonamido) -fenil, o-, m- ili p- (N-etil-N-metil-sulfonamido) fenil, o-, m- ili p- (N, N-dietil-sulfonamido) -fenil, naročito 2.3- , 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- ili 3,5-difluorfenil, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- ili 3,5-dihlorfenil, 2.3- , 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- ili 3,5 -dibromfenil, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6- ili 3,4,5trihlorfenil, 2,4,6-trimetoksifenil, 2-hidroksi -3,5-dihlorfenil, p-jodfenil, 4-fluor-3-hlorfenil, 2-fluor-4-bromfenil, 2,5-difluor-4-bromfenil, 3-brom-6-metoksifenil, 3-hlor-6 -metoksifenil ili 2,5-dimetil-4-hlorfenil.
[0029] Ar poželjno označava nezasićeni ili aromatični mono- ili biciklični karbocikl koji ima 3 do 12 atoma C, koji može biti supstituisan sa najmanje jednim supstituentom izabranim iz grupe Hal, A, (CY2)n-OY, (CY2)n-NYY, COOY, SO2Y i CN. U poželjnijoj realizaciji pronalaska, Ar označava nezasićeni ili aromatični mono- ili biciklični karbocikl koji ima 4 do 12 atoma C, koji može biti supstituisan sa najmanje jednim supstituentom izabranim iz grupe Hal, A, OY, COOY i CN. Najpoželjnije je da Ar označava aromatični mono- ili biciklični karbocikl koji ima 5 do 10 atoma C, koji može biti mono- ili disupstituisan sa najmanje jednim supstituentom izabranim iz grupe Hal, A, OY, COOH i CN. U veoma poželjnom izvođenju pronalaska, Ar označava aromatični monociklični karbociklični prsten sa 6 do 8 atoma, koji može biti monosupstituisan sa Hal, A ili OY. Naročito je poželjno da Ar označava fenil, koji može biti para- ili metasupstituisan sa A ili OY. Podrazumeva se da je odgovarajuća oznaka za Ar nezavisna jedna od druge u bilo kom radikalu jedinjenja koja su ovde opisana.
[0030] U pronalasku, Ar može biti kondenzovan sa zasićenim, nezasićenim ili aromatičnim monocikličnim heterociklom koji ima 1-5 atoma C i 1-4 atoma N, O i / ili S. Još poželjnije, Ar može biti kondenzovan sa zasićenim ili aromatičnim monocikličnim heterociklom koji ima 2-4 atoma C i 1-3 atoma O i / ili N. Najpoželjnije, Ar može biti kondenzovan sa zasićenim ili aromatičnim monocikličnim heterociklom koji ima 3-4 atoma C i 2 atoma O ili N.
[0031] Pojam "heterocikl" ili "heterociklil" se odnosi na monociklični sistem od 3-9 atoma u prstenu, poželjno 3-7 atoma u prstenu, poželjnije 3-6 atoma u prstenu, koji sadrže atome ugljenika i 1, 2, 3, 4 ili 5 heteroatoma koji su identični ili različiti, naročito azot, kiseonik i / ili sumpor. Ciklični sistem može da bude zasićen ili mono- ili poli-nezasićen, poželjno nezasićen, poželjnije heteroaril. U slučaju cikličnog sistema koji se sastoji od najmanje dva prstena, prstenovi mogu biti kondenzovani ili spiro ili na drugi način povezani. Takvi heterociklil radikali mogu biti vezani preko bilo kojeg člana prstena. Pojam "heterociklil" takođe uključuje sisteme u kojima je heterocikl deo bi- ili policikličnog zasićenog, delimično nezasićenog i / ili aromatičnog sistema, kao kada je heterocikl kondenzovan sa aril, cikloalkil, heteroaril ili heterociklil grupom kao što je ovde definisano preko bilo kojeg željenog i mogućeg
člana u prstenu heterociklil radikala. Vezivanje sa jedinjenjima opšte formule (I) može se izvesti preko bilo kojeg mogućeg člana u prstenu heterociklil radikala. Primeri pogodnih heterociklil radikala su pirolidinil, tiapirolidinil, piperidinil, piperazinil, oksapiperazinil, oksapiperidinil, oksadiazolil, tetrahidrofuril, imidazolidinil, tiazolidinil, tetrahidropiranil, morfolinil, tetrahidrotiofenil, dihidropiranil.
[0032] Pojam "heteroaril" se odnosi na 3-9, poželjno 4-, 5- ili 6-člani monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji sadrži najmanje 1, gde je pogodno i 2, 3, 4 ili 5 heteroatoma, poželjno azota, kiseonika i / ili sumpor, gde su heteroatomi identični ili različiti. Broj heteroatoma poželjno je 1 ili 2, a bolje 2. Pojam "heteroaril" takođe obuhvata sisteme u kojima je aromatični prsten deo bicikličnog zasićenog, delimično nezasićenog i / ili aromatičnog sistema, kao slučaj gde je aromatični prsten kondenzovan sa aril, cikloalkil, heteroaril ili heterociklil grupi kao što je ovde definisano preko bilo kojeg željenog i mogućeg člana prstena heteroarilnog radikala. Povezivanje sa jedinjenjima opšte formule (I) može se izvršiti preko bilo kojeg mogućeg člana prstena heteroaril radikala. Primeri pogodnih heteroarila su pirolil, tienil, furil, imidazolil, tiazil, izotiazil, oksazil, oksadiazil, izoksazil, pirazil, piridil, pirimidil, piridazinil, pirazil, indolil, hinolil, izohinolinil, imidazolil, triazolil, triazinil, tetrazil, ftalazinil, triazinil, tetrazil, ftalazinil, triazinil, tetrazil, ftalazinil, indazolil indolizinil, hinoksalinil, hinazolinil, pteridinil, karbazolil, fenazinil, fenoksazinil, fenotiazinil i akridinil.
[0033] Pojam "halogen", "atom halogena", "halogeni supstituent" ili "Наl" se odnosi na jedan ili, gde je pogodno, veći broj atoma fluora (F, fluor), broma (Br, brom), hlora (С1 hlor) ili joda (I, jod). Oznake "dihalogen", "trihalogen" i "perhalogen" odnose se na dva, tri i četiri supstituenta, gde svaki supstituent može biti nezavisno izabran iz grupe koju čine fluor, hlor, brom i jod. Halogen prvenstveno označava atom fluora, hlora ili broma. Fluor i hlor su više poželjni, naročito kada su halogeni supstituisani na alkil (haloalkil) ili alkoksi grupi (npr. CF3i CF3O). Podrazumeva se da je odgovarajuća oznaka za Hal nezavisna jedna od druge u bilo kom radikalu jedinjenja koja su ovde opisana.
[0034] U predmetnom pronalasku,, X<1>i označava S ili O, poželjno S.
[0035] U predmetnogm pronalaska X<2>označava CR<6>ili N, poželjno CR<6>,bolje CY, najbolje CH.
1
[0036] U predmetnom pronalasku, W označava N ili CR<6>, poželjno N ili CY, poželjnije N ili CH, najpoželjnije N.
[0037] Poželjna realizacija ovog pronalaska je da X<2>označava CY i / ili W označava N ili CH.
[0038] U predmetnom pronalasku, R<1>označava H ili A, poželjno H.
[0039] U predmetnom pronalasku, R<2>označava COY, Y, Alk, Cik, (CY2)nAr, COAlk, CO(CY2)nAr, CONY2, CONYAlk, COOY, COOAlk, COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alk, SO2(CY2)nAr, CY2OY ili CY2NY2; bolje COY, Y, Cik, (CY2)nAr, COAlk, CO(CY2)nAr, CONY2, COOY, COO(CY2)nAr, SO2Y, CY2OY ili CY2NY2; bolje COY, Y, Cik, (CY2)nAr, COAlk, COAr, CONYY, COOY, COO(CY2)nAr ili SO2Y; još boje COY, COAlk, CONY2ili COOY; veoma poželjno COA, COAlk, CONHA ili COOA; posebno poželjno COY; i najbolje COA.
[0040] U drugom poželjnom aspektu, izuzeto je da R<1>i R<2>istovremeno označavaju H.
[0041] U predmetnom pronalasku, R<3>označava H ili A, poželjnije A.
[0042] U predmetnom pronalasku, R<4>označava H ili A, poželjnije H.
[0043] U ovom pronalasku, R<3>i R<4>zajedno takođe označavaju -(CY2)P-, poželjno - (CH2)P-, još poželjnije -(CH2)2-,
[0044] Poželjno, R<5>označava (CY2)qAr, Cik, Y ili NY2; još poželjnije (CY2)qAr, Cik H ili A; najpoželjnije (CH2)qAr, Cik ili A; veoma poželjno (CH2)qAr ili Cik; posebno visoko poželjno (CH2)qAr; i naročito posebno poželjno Ar.
[0045] U predmetnom pronalasku, R<6>označava Y, OY, Hal ili CN; poželjno H, A, OY ili Hal; još poželjnije H, A, OH ili Hal; najpoželjnije H, OH ili Hal; i nabolje H.
[0046] U predmetnom pronalasku, L označava-CY2-, -CO- ili -SO2-; poželjno CY2; poželjnije CHY i najpoželjnije CH2
[0047] Još jedna poželjna realizacija predmetnog pronalaska je ta gde W označava N; R<2>označava COY, COAlk, CONY2ili COOY; i / ili L označava CY2još je poželjnija realizacija pronalaska kada W označava N; R<2>označava COY; i L označava CHY.
[0048] U pronalasku, Y označava H ili A. Podrazumeva se da je odgovarajuća oznaka Y nezavisna jedna od druge u bilo kom radikalu jedinjenja koja su ovde opisana.
[0049] U predmetnom pronalasku, indeks m označava 0, 1, 2 ili 3; poželjno 0, 1 ili 2; još poželjnije 1 ili 2; i najbolje 1.
[0050] U predmetnom pronalasku, indeks n označava 0, 1, 2 ili 3; poželjno 0, 1 ili 2; još poželjnije 0 ili 1; i najpoželjnije 0. Treba napomenuti da odgovarajuća oznaka
indeksa n je nezavisna jedna od druge u bilo kom radikalu jedinjenja koja su ovde opisana.
[0051] U predmetnom pronalasku, indeks p označava 0, 1, 2 ili 3; poželjno 1, 2 ili 3; još bolje 1 ili 2; i najbolje 2.
[0052] U predmetnom pronalasku, indeks q označava 0, 1, 2 ili 3; poželjno 0, 1 ili 2; još bolje 0 ili 1; i najbolje 0.
[0053] Realizacija predmetnog pronalaska je da indeksi m i p označavaju nezavisno jedno od drugog 1 ili 2, i / ili indeksi n i q označavaju nezavisno jedno od drugog 0 ili
1.
[0054] Shodno tome, predmet pronalaska se odnosi na jedinjenja formule (I) kao lek, u kojima bar jedan od gore pomenutih radikala ima bilo koje značenje, posebno ostvarujući bilo koju poželjnu realizaciju, kao što je gore opisano. Radikali, koji nisu eksplicitno specificirani u kontekstu bilo koje realizacije formule (I), njihovih bliže opisujućih formula ili drugih radikala, treba tumačiti tako da predstavljaju bilo koja odgovarajuća značenja u skladu sa formulom (I) kako je ovde opisano za rešavanje problema pronalaska. To znači da gore pomenuti radikali mogu da imaju sva naznačena značenja kao što je opisano u prethodnom ili narednom toku ove specifikacije, bez obzira na kontekst koji se treba naći, uključujući, ali ne ograničavajući se na, bilo koje poželjne realizacije. Posebno treba razumeti da bilo koja realizacija određenog radikala može biti kombinovana sa bilo kojom realizacijom jednog ili više drugih radikala.
[0055] U još jednom poželjnijem izvođenju predmetnog pronalaska, jedinjenja bliže opisujuće formule (IA) su obezbeđena kao lek
1
R<3>, R<4>označava nezavisno jedno od drugog Y;
R<3>, R<4>zajedno takođe označavaju -(СY2)р-;
R<5>označava (СY2)qАr, Cik ili Y;
R<6>označava Y, OY ili Hal;
Y označava H ili A;
A označava nerazgranat ili razgranat acikličan alkil sa 1-10 atoma C,
gde se 1-7 atoma H može zameniti nezavisno jedan od drugog sa Hal;
Alk označava nerazgranat ili razgranat alkenil sa 2-6 C-atoma; gde se 1 -3 atoma H može zameniti nezavisno jedan od drugog sa Hal;
Cik označava cikoalkil sa 3-7 atoma C;
gde se 1-4 atoma H može zameniti nezavisno jedan od drugog sa Hal;
Ar označava nezasićen ili aromatičan mono- ili bicikličan karbocikl sa 4-12 atoma C, koji se može supstituisati sa najmanje jednim supstituentom odabranim iz grupe Hal, A, OY, COOY i CN;
Hal označava F, Cl, Br ili I;
m, q označava nezavisno jedno od drugog 0, 1 ili 2;
i
p označava 1, 2 ili 3;
i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli;
pod uslovom da je izuzet metil estar (5-piperidin-l-ilmetil-tiazol-2-il) -karbaminske kiseline.
[0056] U narednoj najpoželjnijoj realizaciji predmetnog pronalaska, jedinjenja bliže opisujuće formule (IB) su obezbeđena kao lek
1
R<3>, R<4>zajedno takođe označavaju -(СН2)р-;
R<5>označava (CH2)qAr, Cik ili A;
Y označava H ili A;
A označava nerazgrantili razgranat acikličan alkil sa 1-6 atoma C,
gde 1 -4 atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal; Cik označava cikloalkil sa 4-7 atoma C;
Ar označava aromatičan mono- ili bicikličan karbocikl sa 5-10 atoma C, koji može da bude mono- ili disupstituisan barem jednim supstituentom odabranim iz grupe koju čine Hal, A, OY, COOH i CN;
Hal označava F, Cl, Br ili I;
m označava 0, 1 ili 2;
p označava 1 ili 2; i
q označava 0 ili 1;
i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0057] U drugom veoma poželjnom ostvarenju predmetnog pronalaska, jedinjenja bliže opisujuće formule (IC) su obezbeđena kao lek
1
Hal označava F, Cl, Br ili I;
m, p označava nezavisno jedno od drugog 1 ili 2; i
q označava 0 ili 1;
i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0058] U drugom aspektu formula (I) ili (IA) do (IC), izuzeto je da R<3>i R<5>označavaju A u isto vreme.
[0059] U još jednoj veoma poželjnoj realizaciji predmetnog pronalaska, jedinjenja bliže opisujuće formule (ID) su obezbeđena kao lek
1
�
�
�
�
�
reakcionim uslovima koji su poznati i pogodni za pomenute reakcije. Mogu se koristiti i varijante koje su same po sebi poznate, ali ovde nisu detaljnije navedene. Po želji, polazni materijali mogu takođe da se formiraju in-situ ostavljajući ih u neizolovanom stanju u sirovoj reakcionoj smeši, ali se odmah dalje konvertuju u jedinjenje koje je ovde opisano. S druge strane, moguće je izvršiti reakciju u koracima.
[0063] Reakcije se poželjno izvode pod baznim uslovima. Pogodne baze su oksidi metala, npr. aluminijum oksid, hidroksid alkalnih metala (kalijum hidroksid, natrijum hidroksid i litijum hidroksid, između ostalih), hidroksid zemnoalkalnog metala (barijum hidroksid i kalcijum hidroksid, između ostalih), alkoholati alkalnih metala (kalijum etanolat i natrijum propanolat, između ostalih), alkalni metalni karbonati (npr. natrijum bikarbonat) i nekoliko organskih baza (npr., N, N-diizopropiletilamin, piperidin ili dietanolamin, između ostalih).
[0064] Reakcija se generalno izvodi u inertnom rastvaraču. Pogodni inertni rastvarači su, na primer, ugljovodonici, kao što su heksan, petrol-etar, benzen, toluen ili ksilen; hlorisani ugljovodonici, kao što su trihloretilen, 1,2-dihloretan, ugljentetrahlorid, hloroform ili dihlormetan; alkoholi, kao što su metanol, etanol, izopropanol, n- propanol, n-butanol ili terc-butanol; etri, kao što je dietil etar, diizopropil etar, tetrahidrofuran (THF) ili dioksan; glikol etri, kao što je etilen glikol monometil ili monoetil etar, etilen glikol dimetil etar (diglim); ketoni, kao što su aceton ili butanon; amidi, kao što su acetamid, dimetilacetamid ili dimetilformamid (DMF); nitrili, kao što je acetonitril; sulfoksidi, kao što je dimetil sulfoksid (DMSO); ugljendisulfid; karboksilne kiseline, kao što je mravlja kiselina, sirćetna kiselina ili trifluorsirćetna kiselina (TFA); nitro jedinjenja, kao što je nitrometan ili nitrobenzen; estri, kao što je etil acetat, ili smeše navedenih rastvarača. Posebna prednost se daje TFA, DMF, dihlormetanu, THF, H2O, metanolu, terc- butanolu, terc-amilalkoholu, trietilaminu ili dioksanu.
[0065] U zavisnosti od uslova korišćenja, reakciono vreme iznosi između nekoliko minuta i 14 dana, reakciona temperatura je između oko -80<0>C i 140<0>C, normalno između -50<0>C i 120<0>C, poželjno između -20<0>C i 100<0>C.
[0066] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na postupak za proizvodnju jedinjenja formule (I) koji obuhvata korake:
2
gde X<1>, X<2>, W, R<1>do R<5>, L i m imaju značenja kao što je prethodno definisano; i po izboru
(b) konverziju jedinjenja formule (I), gde R2je H, u drugo jedinjenje formula (I), gde R<2>ima druga značenja izuzev H kao što je prethodno definisano; (c) konverziju baznog ili kiselog jedinjenja formule (I) u njegovu fiziološki prihvatljivu so;
i/ili
(d) jednostavno podešavanje jedinjenja formule (I) ili njegove fiziološki prihvatljive soli kao lek.
[0067] Sledeće reakcije, uključujući bez ograničenja sheme, uslove i jedinjenja, su naročito poželjne. Radikali imaju značenje kao što je gore definisano.
2
�
�
�
gde X<1>, X<2>, W, R<1>, R<3>do R<5>, L i m imaju značenja kao što je prethodno definisano, uz uslov da je izuzet 5-pirolidin-l-ilmetil-tiazol-2-ilamin. Ona poželjno mogu da se koriste kao intermedijeri za dobijanje drugih ovde opisanih jedinjenja formule (I).
[0069] Poželjan aspekt intermedijernih jedinjenja formule (IE) je da W označava N ili CH; i X<1>ima značenje kao što je gore definisano. Bez obzira na aktivnost inhibiranja glukozidaze, posebno su poželjni intermedijeri dati u primerima u daljem tekstu koji se mogu koristiti za dobijanje drugih jedinjenja prema shemama 5 do 7.
[0070] Još poželjniji intermedijati su jedinjenja bliže opisujuće formule (IEl)
�
R<1>označava H;
R<2>označava Y, Alk, Cik, (CY2)nAr, COY, COAlk, CO(CY2)nAr, CONHY, CONHAlk, CONH(CY2)nAr, COOY, COOAlk, COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alk ili SO2(CY2)nAr; i
W i X<1>imaju značenja kao što je prethodno definisano;
i po izboru
(b) reakciju jedinjenja formule (IF) dobijeno u koraku (a) sa alkil halogenidom pri čemu se dobija drugo jedinjenje formule (IF), gde R<1>ima značenje različito od H kao što je prethodno definisano; i / i l i
(c) konverziju baze ili kiseline jedinjenja formule (IF) u njegovu fiziološki prihvatljivu so.
[0072] Jedinjenja formule (I) i njihove bliže definišuće formule su dostupne preko gore navedenih puteva. Polazni materijali, uključujući jedinjenja formule (II) do (VIII), obično su poznati stručnjacima, ili se mogu lako pripremiti poznatim postupcima. Prema tome, bilo koje jedinjenje formule (II) do (VIII) može da bude prečišćeno, obezbeđeno kao intermedijer i upotrebljeno kao polazni materijal za dobijanje jedinjenja formule (I).
[0073] Jedinjenja formule (I) mogu biti modifikovana, na primer hidrogenizovana ili redukovana metalom, radi uklanjanja hlora, ili da se podvrgne reakciji supstitucije, i / ili da se transformiše dodatkom kiseline ili baze u so, poželjno jakom kiselinom. Brojni radovi i postupci su dostupni i korisni za stručnjake u ovoj oblasti u pogledu organske hemije, hemijskih strategija i taktika, puteva sinteze, zaštite intermedijera, postupka otcepljivanja i prečišćavanja, izolovanja i karakterizacije. Opšte hemijske modifikacije su poznate stručnjaku u ovoj oblasti. Halogenizovanje arila ili hidroksi supstitucija kiselina, alkohola, fenola i njihovih tautomernih struktura sa halogenima može se poželjno izvoditi upotrebom POCl3, ili SOCl2, PCl5, SO2C12, U nekim slučajevima oksalil hlorid je takođe koristan. Temperature mogu varirati od 0<0>C do temperature refluksa u zavisnosti od cilja da se halogenizuje piridonska struktura ili karboksilna kiselina ili sulfonska kiselina. Vreme će takođe biti podešeno od nekoliko minuta do nekoliko sati ili čak preko noći. Slično tome, alkilovanje, formiranje etra, formiranje estara, formiranje amida su poznati stručnjaku. Arilovanje sa aril bornom kiselinom može se izvesti u prisustvu Pd katalizatora, odgovarajućeg liganda i baze, poželjno karbonatne, fosfatne, boratne soli natrijuma, kalijuma ili cezija. Takođe se mogu koristiti organske baze, kao što su Et3N, DIPEA ili viša bazna DBU. Rastvarači takođe mogu da variraju, od toluena, dioksana, THF, diglima, monoglima, alkohola, DMF, DMA, NMP, acetonitrila, u nekim slučajevima čak i vode, i drugi. Često korišćeni katalizatori kao što su Pd (PPh3)4, ili Pd(OAc)2, PdCl2tip prekursora PdO katalizatora napredovali su do složenijih sa efikasnijim ligandima. U arilovanjima C-C, umesto boronskih kiselina i estara, mogu se koristiti aril-trifluorboratne kalijumove soli (Suzuki-Miyaura kuplovanje), organo-silani (Hiyama-kuplovanje), Grignard-ovi reagensi (Kumada), organocink jedinjenja (Negishi kuplovanje) i stanani (Stilovo kuplovanje). Ovo iskustvo se može preneti na N- i O-aralovanja. Brojni radovi i postupci su dostupni i korisni za stručnjake u ovoj oblasti u pogledu N-arilovanja, pa čak i anilina sa manjkom elektrona, i sa aril-hlorida i anilina, kao i za O-arilovanje primenom katalize sa Cu i Pd.
[0074] U završnom koraku gore navedenih postupaka, po izboru se obezbeđuje so jedinjenja, poželjno soli jedinjenja formule (I). Navedena jedinjenja koja su ovde opisana mogu se koristiti u njihovom konačnom obliku bez soli. S druge strane, ovaj pronalazak takođe obuhvata upotrebu ovih jedinjenja u obliku svojih farmaceutski prihvatljivih soli, koje se mogu dobiti iz različitih organskih i neorganskih kiselina i baza prema postupcima poznatim u tehnici. Farmaceutski prihvatljivi oblici soli ovde opisanih jedinjenja su uglavnom pripremljeni konvencionalnim postupcima. Ako ovde opisano jedinjenje sadrži karboksil grupu, jedna od njegovih pogodnih soli može da se formira reakcijom jedinjenja sa pogodnom bazom da bi se dobila odgovarajuća adiciona so baze. Takve baze su, na primer, hidroksidi alkalnih metala, uključujući kalijum hidroksid, natrijum hidroksid i litijum hidroksid; hidroksidi zemnoalkalnih metala, kao što su barijum hidroksid i kalcijum hidroksid; alkoksidi alkalnih metala, na primer kalijum etoksid i natrijum propoksid; i različite organske baze, kao što su piperidin, dietanolamin i N-metilglutamin. Soli aluminijuma ovde opisanih jedinjenja su takođe obuhvaćene. U slučaju nekih jedinjenja koja su ovde opisana, adicione soli kiselina mogu da se formiraju tretiranjem ovih jedinjenja sa farmaceutski prihvatljivim organskim i neorganskim kiselinama, na primer halogenovodoničnim kiselinama, kao što su hlorovodonična, bromovodonična ili jodovodonična kiselina, druge mineralne kiseline i njihove odgovarajuće soli, kao što su sulfat, nitrat ili fosfat i slično, i alkil- i monoarilsulfonati, kao što su etansulfonatba, toluensulfonatna i benzensulfonatna kiselina, i druge organske kiseline i njihove odgovarajuće soli, kao što je acetat, trifluoracetat, tartarat, maleat, sukcinat, citrat, benzoat salicilat, askorbat i slično. Prema tome, farmaceutski prihvatljive adicione soli kiselina jedinjenja koje su ovde opisane obuhvataju sledeće: acetat, adipat, alginat, arginat, aspartat, benzoat, benzensulfonat (bezilat), bisulfat, bisulfit, bromid, butirat, kamforat, kamforsulfonat, kaprilat, hlorid, hlorbenzoat, citrat, ciklopentanpropionat, diglukonat, dihidrogenfosfat, dinitrobenzoat, dodecilsulfat, etansulfonat, fumarat, galakterat (iz galaktarinske kiseline), galakturonat, glukoheptanoat, glukonat, glutamat, glicerofosfat, hemisukcinat, hemisulfat, heptanoat, heksanoat, hipurat, hidrohlorid, hidrobromid, hidrojodid, 2-hidroksietansulfonat, jodid, izetionat, izobutirat, laktat, laktobionat, malat, maleat, malonat, mandelat, metafosfat, metansulfonat, metilbenzoat, monohidrogenfosfat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oksalat, oleat, palmoat, pektinat, persulfat, fenilacetat, 3-fenilpropionat, fosfat, fosfonat, fitalat ali ova lista ne predstavlja ograničenje.
[0075] S obzirom na gore navedeno, može se videti da izrazi "farmaceutski prihvatljiva so" i "fiziološki prihvatljiva so", koje se ovde koriste, podrazumevaju aktivni sastojak koji sadrži ovde opisano jedinjenje u obliku jedne od njegovih soli, naročito ako ovaj oblik soli daje poboljšane farmakokinetičke osobine aktivnog sastojka u poređenju sa slobodnom formom aktivnog sastojka ili bilo kojim drugim oblikom soli aktivnog sastojka koji je ranije korišćen. Oblik farmaceutski prihvatljive soli aktivnog sastojka može takođe da obezbedi ovaj aktivni sastojak po prvi put sa željenim farmakokinetičkim svojstvom koje nije ranije imalo i može čak imati pozitivan uticaj na farmakodinamiku ovog aktivnog sastojka u pogledu njegove terapeutske efikasnosti u telu.
[0076] Dalje, predviđeno je da jedinjenje formule (I) obuvhatai njegove izotopno obeležene oblike. Izotopno obeleženi oblik jedinjenja formule (I) je identičan ovom jedinjenju, osim činjenice da je jedan ili više atoma jedinjenja zamenjeno atomom ili atomima koji imaju atmosku masu ili maseni broj koji se razlikuje od atmoske mase ili masenog broja atoma koji se obično javlja u prirodi. Primeri izotopa koji su komercijalno dostupni i koji se mogu dobro inkorporirati u jedinjenje formule (I) poznatim postupcima uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, na primer<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F i<36>C1.
Jedinjenje formule (1) obeleženo izotopom može se koristiti na brojne korisne načine. Na primer, izotopno obeleženo jedinjenje formule (I) u koje je, na primer, inkorporiran radioizotop, kao što je<3>H ili<14>C, je pogodan za testiranje distribucije medikamenta i / ili supstrata u tkivu. Ovi radioizotopi, t.j. tricijum (<3>H) i ugljenik-14 (<14>С), su posebno poželjni zbog jednostavne pripreme i odlične detekcije.
Inkorporacija težih izotopa, na primer deuterijuma (<2>H), u jedinjenje formule (I) ima terapeutske prednosti zbog veće metaboličke stabilnosti ovog izotopno obeleženog jedinjenja. Viša metabolička stabilnost se direktno prevodi u povećan poluživot in vivo ili u niže doze, što bi u većini slučajeva predstavljalo poželjan aspekt otkrića. Jedinjenje formule (I) obeleženo izotom obično se može pripremiti sprovođenjem postupaka opisanih u shemama sinteze i odgovarajućem opisu, u delu sa primerima i u delu pripreme u ovom tekstu, zamenjujući ne-izotopno- označen reaktant sa lako dostupnim izotopski obeleženim reaktantom.
[0077] Deuterijum (<2>H) može takođe biti inkorporiran u jedinjenje formule (I) u svrhu manipulacije oksidativnim metabolizmom jedinjenja putem primarnog kinetičkog izotopskog efekta. Primarni kinetički izotopski efekat je promena brzine za hemijsku reakciju koja je rezultat izmene izotopnih jezgara, što je pak izazvano promenom energije osnovnog stanja neophodnog za formiranje kovalentne veze nakon ove izotopske razmene. Zamena težeg izotopa obično rezultira u snižavanju energije osnovnog stanja za hemijsku vezu i na taj način dovodi do smanjenja brzine raskidanja veze ognraničene brzinom. Ako se raskid veze odvija u regionu ili u blizini regiona sedlastih tačaka duž koordinate reakcije sa više proizvoda, odnosi raspodele proizvoda mogu se značajno promeniti. Objašnjenje: ako je deuterijum vezan za atom ugljenika na nerazmenjivoj poziciji, razlike u brzini od kм/kD= 2-7 su tipične. Ako je ova razlika u brzini uspešno primenjena na jedinjenje formule (I) koje je podložno oksidaciji, profil ovog jedinjenja in vivo može se drastično modifikovati i rezultirati poboljšanim farmakokinetičkim svojstvima.
[0078] Prilikom otkrivanja i razvijanja terapeutskih sredstva, prosečan stručnjak pokušava da optimizuje farmakokinetičke parametre zadržavajući poželjna in-vitro svojstva. Razumljivo je pretpostaviti da su mnoga jedinjenja sa slabim farmakokinetičkim profilima podložna oksidativnom metabolizmu. In-vitro testovi mikrosoma jetre koji su trenutno dostupni pružaju važne informacije o toku oksidativnog metabolizma ovog tipa, što zauzvrat dozvoljava racionalno formiranje deuteriranih jedinjenja formule (I) sa poboljšanom stabilnošću preko otpornosti na takav oksidativni metabolizam. Time se dobijaju značajna poboljšanja u farmakokinetičkim profilima jedinjenja formule (I) i mogu se izraziti kvantitativno u smislu povećanja polu-života in vivo (t/2), koncentracije pri maksimalnom terapeutskom efektu (Cmaks), površine pod krivom odgovora na dozu (AUC), i F; u smislu smanjenja troškova klirensa, doze i materijala.
[0079] Sledeće je predviđeno da ilustruje gore navedeno: jedinjenje formuie (I), koje ima višestruka potencijalna mesta napada za oksidativni metabolizam, na primer atome vodonika benzila i atome vodonika vezane za atom azota, pripremljeno je kao niz analoga u kojima su različite kombinacije atoma vodonika zamenjene atomima deuterijuma, tako da su neki, većina ili svi ovi atomi vodonika zamenjeni atomima deuterijuma. Određivanja poluživota omogućavaju povoljno i tačno određivanje obima u kojoj je poboljšanje poboljšanja otpornosti na oksidativni metabolizam. Na ovaj način, određeno je da se poluživot matičnog jedinjenja može produžiti do 100% kao rezultat izmene deuterijum-vodonik, ovog tipa.
[0080] Zamena deuterijuma vodonikom u jedinjenju formule (I) može takođe da se koristi da bi se postigla povoljna modifikacija metabolitnog spektra polaznog jedinjenja u cilju smanjenja ili eliminisanja neželjenih toksičnih metabolita. Na primer, ako se otrovni metabolit javlja preko oksidativnog cepanja vezom ugljenikvodonik (C-H), može se s razlogom pretpostaviti da će deuterisani analog u velikoj meri umanjiti ili eliminisati proizvodnju neželjenog metabolita, čak i ako određena oksidacija nije korak određivanja brzine.
[0081] Jedinjenja prema formuli (I) i / ili njihove fiziološki prihvatljive soli mogu da se koriste za inhibiranje glikozidaze. Izraz "inhibicija" označava bilo kakvo smanjenje aktivnosti glikozidaze, koje se zasniva na dejstvu specifičnih jedinjenja koja su ovde opisana i koja su sposobna da vrše intereakciju sa ciljnom glikozidazom na takav način da omogućava prepoznavanje, vezivanje i blokiranje. Podrazumeva se da jedinjenja koja su ovde opisana konačno stupaju u interakciju sa ciljem kako bi se efekat ispoljio. Jedinjenja su okarakterisana tako značajnim afinitetom za najmanje jednu glikozidnu hidrolazu koja obezbeđuje pouzdano vezivanje i poželjno potpuno blokiranje glikozidazne aktivnosti. Još poželjnije, supstance su mono-specifične da bi se garantovalo ekskluzivno i usmereno prepoznavanje sa izabranom pojedinačnom ciljnom glikozidazom. Izraz "prepoznavanje" - bez ne ograničavajući se na isti -odnosi se na bilo koji tip interakcije između specifičnih jedinjenja i cilja, naročito kovalentnog ili nekovalentnog vezivanja ili asocijacije, kao što su kovalentna veza, hidrofobne / hidrofilne interakcije, van der Valsove sile , jonski parovi, vodonične veze, interakcije ligand-receptor i slično. Takva asocijacija može takođe da obuhvati prisustvo drugih molekula kao što su peptidi, proteini ili nukleotidne sekvence. Ova interakcija receptora / liganda je poželjno karakterisana visokim afinitetom, visokom selektivnošću i minimalnom ili čak manjkom unakrsne reaktivnosti na druge ciljne molekule da bi se isključili nezdravi i štetni uticaji na tretiranog subjekta.
[0082] Poželjno, glikozidaza sadrži glikozidne hidrolaze, poželjnije familiju 84 glikozidne hidrolaze, najpoželjnije 0-glikoprotein-2-acetamido-2-dezoksi--β -D-glukopiranozidazu (OGA), veoma poželjno O-GlcNAcase sisara. Posebno je poželjno da se ovde opisano jedinjenje formule (I) selektivno vezuje za O-GlcNAcase, npr. time selektivno inhibirajući cepanje 2-acetamido-2-dezoksi-β -D-glukopiranozida (O-GlcNAc), dok u suštini ne inhibiraju izozomalnu β -heksozaminidazu.
[0083] Ovde opisana jedinjenja poželjno pokazuju povoljnu biološku aktivnost, koja je lako demonstrirana u analizama enzimske aktivnosti kao što je ovde opisano ili poznato iz prethodnog stanja tehnike. U takvim in vitro testovima, jedinjenja poželjno pokazuju i izazivaju inhibitorni efekat. IC50 je koncentracija jedinjenja koje proizvodi 50% maksimalne inhibicije za to jedinjenje. Cilj glikozidaze je posebno poluinhibirana jedinjenjima koja su ovde opisana, ako koncentracija jedinjenja iznosi manje od 100 μM, poželjno manje od 10 μM, poželjnije manje od 1 μM, najpoželjnije manje od 0,2 μM.
[0084] Pogodna biološka aktivnost ovde opisanih jedinjenja može se takođe pokazati u analizama zasnovanim na ćelijskoj kulturi, npr. testovima opisanim u WO 2008/025170, kada se testiraju jedinjenja koja su ovde opisana u ćelijskom testu, povećanje O-GlcNAcilovanja (zbog merenja inhibicije OGA). EC50je efektivna koncentracija jedinjenja koja proizvodi 50% maksimuma mogućeg odgovora za to jedinjenje. Ovde opisana jedinjenja pokazuju vrednosti EC50u opsegu od 0,1 μM do 100 μM. Poželjno je da ovde opisana jedinjenja imaju aktivnost, izraženu sa EC50standardom, manju od 100 uM, poželjnije manje od 10 μM, najpoželjnije manje od 1 μM, veoma poželjno manje od 0,2 μM.
[0085] Drugi predmet ovog pronalaska se odnosi na postupak inhibicije glikozidaze, gde je sistem koji je sposoban da eksprimira glikozidazu, posebno eksprimirajući pomenutu glikozidazu, doveden u kontakt sa najmanje jednim jedinjenjem formule (I) koje je ovde opisano i / ili njegovim fiziološki prihvatljivim solima pod in-vitro uslovima, tako da je navedena glikozidaza inhibirana. Poželjno, glikozidaza se dovodi u kontakt sa jedinjenjem koje selektivno inhibira O-GlcNAcase i poželjnije ima IC50 manje od 0,2 μM. Takođe je poželjno da se postupak izvodi in-vitro i da se postupak ne praktikuje na ljudskom telu. Ćelijski sistem se preferira u okviru postupka. Ćelijski
4
sitem је definisan da bude bilo koji subjekt, pod uslovom da subjekat sadrži ćelije. Ćelija se odnosi na bilo koji tip primarnih ćelija ili genetski modifikovanih ćelija, bilo u izolovanom statusu, u kulturi, kao ćelijska linija, skupljena u tkivu, organima ili intaktnim laboratorijskim sisarima, pod uslovom da su sposobni za ekspresiju glikozidaze. Takođe treba razumeti da ćelija eksprimira glikozidazu kao inherentni preduslov da se postupci inhibicije stave u praksu. Iako je naročito poželjno da su ćelije sposobne da eksprimiraju ili eksprimiraju glikozidazu, neće biti isključeno da se mogu koristiti ćelije deficijentne glikozidazom i da je glikozidaza veštački dodata u ćelijski sistem. Test ovog pronalaska može čak biti potpuno izveden in vitro, tako da se odustane od ćelije, ali se glikozidaza dovodi u kontakt sa najmanje jednim jedinjenjem formule (I) koje je ovde opisano i / ili njegovim fiziološki prihvatljivim solima. Prema tome, količina izolovane glikozidaze je obezbeđena u sirovom ili prečišćenom obliku za tu svrhu. Prethodno saznanje ove specifikacije koje se odnosi na jedinjenja formule (I), uključujući bilo koju njegovu poželjnu realizaciju, je validno i primenjivo bez ograničenja na jedinjenja prema formuli (I) i njihove soli kada se koriste u postupku inhibicije glikozidaze.
[0086] Kao što je ovde diskutovano, putevi signaliziranja glikozidaze su relevantni za različite bolesti, poželjno neurodegenerativne bolesti i karcinom. Shodno tome, jedinjenja koja su ovde opisana su korisna u profilaksi i / ili tretmanu bolesti koje zavise od navedenih signalnih puteva interakcijom sa jednim ili više njih. Prema tome, jedinjenja koja su ovde opisana su inhibitori signalnih puteva koji su ovde opisani, poželjno OGA-posredovane signalizacije.
[0087] Ovde opisana jedinjenja se mogu koristiti in-vitro ili in-vivo. Osetljivost određene ćelije na tretman ovde opisanim jedinjenjima može biti posebno određena in-vitro testovima, bilo u toku istraživanja ili u kliničkoj primeni. Tipično, kultura ćelije je kombinovana sa ovde opisanim jedinjenjem u različitim koncentracijama u periodu vremena koji je dovoljan da omogući aktivnim agensima da moduliraju aktivnost glikozidaze, obično između oko jednog sata i jedne nedelje. In-vitro tretman se može izvesti korišćenjem kultivisanih ćelija iz bilo kog uzorka ili ćelijske linije.
[0088] Domaćin ili pacijent mogu pripadati bilo kojoj vrsti sisara, na primer vrsti primata, naročito ljudi; glodari, uključujući miševe, pacove i hrčke; zečevi; konji, krave, psi, mačke itd. Životinjski modeli su od interesa za eksperimentalna istraživanja, obezbeđujući model za lečenje bolesti ljudi.
[0089] Za identifikaciju putanje transdukcije signala i za detekciju interakcija između različitih puteva prenosa signala, različiti naučnici su razvili odgovarajuće modele ili sisteme modela, na primer modele ćelijskih kultura i modele transgenih životinja. Za određivanje određenih faza u kaskadi transdukcije signala, mogu se koristiti interaktivna jedinjenja da bi se signal modulirao. Ovde opisana jedinjenja se takođe mogu koristiti kao reagensi za testiranje puteva prenosa signala zavisnih od OGA na modelu životinja i / ili kultura ćelija ili u kliničkim bolestima pomenutim u ovoj prijavi.
[0090] Upotreba prema prethodnim pasusima predmetnog opisa, može biti izvedena ili na in-vitro ili na in-vivo modelima. Inhibicija može biti kontrolisana tehnikama opisanim u predmetnoj specifikaciji. In vitro upotreba se pre svega primenjuju na uzorcima ljudi koji pate od neurodegenerativnih bolesti i raka. Testiranje više specifičnih jedinjenja i/ili njihovih derivata, čini selekciju potencijalnog aktivnog sastojka, koji je najpogodniji za lečenje čoveka. In vivo procenjena doza odabranih derivata je za svaki slučaj prethodno prilagođena u odnosu na osetljivost glukozidaze i/ili ozbiljnost bolesti datog subjekta, u poređenju sa in vitro podacima. Prema tome, terapijska efikasnost je znatno povećana. Takođe, naredno proučavanje predmetne specifikacije uzimajući u obzir upotrebu jedinjenja prema formuli (I) i njegovih derivata, za proizvodnju leka za profilaksu ili terapeutsko lečenje i/ili praćenje, smatra se validnim i primenljivim bez ograničenja na upotrebu jedinjenja za inhibiciju aktivnosti glikozidaze, pre svega OGA aktivnosti, ukoliko je svrsishodno.
[0091] Pronalazak se odnosi na lek koji obuhvata najmanje jedno jedinjenje ovde opisano i/ili njegove farmaceutski upotrebljive soli. "Lek" je svako sredstvo na polju medicine, koje obuhvata jedno ili više jedinjenja formule (I) ili njihovih preparata (npr. farmaceutska kompozicija ili farmaceutska formulacija ) i može biti upotrebljen u profilaksi, terapiji, praćenju ili kontroli pacijenata koji pate od bolesti, koje su povezane sa aktivnošću OGA, na takav način da patogena modifikacija njihovog opšteg stanja ili stanja pojedinačnih regija organizma može biti uspostavljena barem privremeno.
[0092] Shodno tome, pronalazak se takođe odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži aktivni lekoviti sastojak prema pronalasku zajedno sa farmaceutski podnošljivim pomoćnim sredstvima i/ili ekscipijensima.
[0093] "Pomoćno sredstvo/adjuvans" označava svaku supstancu koja omogućava, pojačava ili menja specifični odgovor na aktivni sastojak , ukoliko se primenjuje zajedno, istovremeno, ili uzastopno. Poznati adjuvansi za injekcione rastvore su, na primer, jedinjenja aluminijuma, kao što je aluminijum hidroksid ili aluminijum fosfat, saponini, kao što su QS21, muramil dipeptid ili muramil tripeptid, proteini, kao što su interferon gama ili TNF, M59, skvalen ili polioli.
[0094] Dalje, aktivni sastojak se može primeniti sam ili u kombinaciji sa ostalim tretmanima. Sinergistički efekat može biti dostignut koristeći više od jednog jedinjenja u farmaceutskoj kompoziciji, tj. jedinjenje formule (I) je kombinovano sa još najmanje jednim sredstvom kao aktivnom supstancom, koje je ili još jedno jedinjenje formule (I) ili jedinjenje drugačije strukture. Aktivni sastojci mogu biti upotrebljeni ili istovremeno ili uzastopno. Postojeća jedinjenja su pogodna za kombinaciju sa sredstvima poznatim u oblasti tehnike ( na primer, WO 2009/025170) i korisna su sa ovde opisanim jedinjenjima.
[0095] Komplet (kit) sadrži zasebna pakovanja efektivne količine ovde opisanog jedinjenja i/ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, derivata, rastvora i stereoizomera uključujući njihove smeše u svim odnosima i efektivnu količinu dodatnog aktivnog lekovitog sastojka. Set obuhvata odgovarajuće kontejnere, kao što su kutije, pojedinačne boce, kese ili ampule. Set može, na primer, da obuhvata zasebne ampule, gde svaka sadrži efektivnu količinu ovde opisanog jedinjenja i/ili njegove farmaceutski prihvatljve soli, derivate, rastvore ili stereoizomere, uključujući njihove smeše u svim odnosima, i efektivnu količinu dodatnog aktivnog lekovitog sastojka u rastvorenoj ili liofilizovanoj formi.
[0096] Farmaceutske formulacije mogu biti prilagođene za primenu bilo kojim poželjnim pogodnim načinom, na pirimer oralnom (uključujući bukalno ili sublingvalno), rektalnom, nazalnom, topikalnom (uključujući bukalno, sublingvalno ili transdermalno ), vaginalnom ili parenteralnom (uključujući subkutano, instramuskularno, intravenski ili intradermalno) metodom. Ove formulacije mogu biti pripremljene koristeći procese poznate u farmaceutskoj tehnici, na primer kombinujući aktivni sastojak sa ekscipijensom (ekscipijensima) ili adjuvansom (adjuvansima).
[0097] Farmaceutska kompozicija pronalaska je proizvodena na poznati način koristeći opšte poznate čvrste ili tečne nosače, rastvarače i/ili aditive i uobičajene adjuvanse za farmacetski inženjering i u odgovarajućoj dozi. Količina ekscipijenasa koja je kombinovana sa aktivnim sastojkom za izradu jednodoznog oblika, varira zavisno od tretiranog domaćina i određenog načina primene. Pogodni ekscipijensi,
4
uključuju organske ili neorganske supstance koje su odgovarajuće za različite puteve primene, kao što je enteralna (npr. oralna), parenteralna ili topikalna primena, i koje ne reaguju sa jedinjenjima formule (I) i njihovim solima. Primeri odgovarajućih ekscipijenasa su voda, biljna ulja, benzil alkohol, alkilen glikoli, polietilen glikoli, glicerol triacetat, želatin, ugljeni hidrati, npr. laktoza ili skrob, magnezijum stearat, talk i vazelin.
[0098] Farmaceutske formulacije prilagođene za oralnu upotrebu, mogu se primenjivati kao zasebne jedinice, kao što su, na primer, kapsule ili tablete; praškovi ili granule; rastvori ili suspenzije u vodenim ili nevodenim tečnostima; jestive pene ili penasta hrana ; ili tečne emulzije ulje-u-vodi ili tečne emulzije voda-u-ulju.
[0099] Farmaceutske formulacije prilagođene za parenteralnu primenu, uključuju vodene i nevodene sterilne injekcione rastvore, koji sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostatike i rastvorene supstance, od kojih je svaka formulacija izotonična sa krvlju tretiranog primaoca; i vodene i nevodene sterilne suspenzije, koje mogu da sadrže suspenzione medijume i ugušćivače. Formulacije mogu biti primenjene u jednodoznim ili višedoznim pakovanjima, na primer zatvorene ampule i bočice, i uskladištene forme osušene zamrzavanjem (liofilizovane), gde se dodaje samo sterilni tečni nosač, na primer voda namenjena za injekcije, neposredno pre primene. Injekcioni rastvori i suspenzije pripremljene u skladu sa receptom, mogu se pripremiti od sterilnih praškova, granula i tableta.
[0100] Podrazumeva se da, osim gore pomenutih sastojaka, formulacije mogu sadržati i ostala sredstva, uobičajena u oblasti tehnike što se tiče pojedinih tipova formulacije; stoga, na primer, formulacije koje su pogodne za oralnu primenu mogu da sadrže arome.
[0101] Poželjno, farmaceutska kompozicija je prilagođena za oralnu primenu. Preparati mogu biti sterilni i/ili mogu da sadrže pomoćna sredstva, kao što su proteini nosači (npr. serumski albumin), lubrikanti, konzervansi, stabilizatori, punioci, helatni agensi, antioksidansi, rastvarači, vezivna sredstva, sredstva za suspendovanje, sredstva sa kvašenje, emulgatori, soli ( uticaj na osmotski pritisak ), puferi, boje, arome i jedna ili više aktivnih supstanici, na primer jedan ili više vitamina. Aditivi su dobro poznati u oblasti tehnike, i upotrebljeni su u različitim formulacijama.
[0102] Poželjno je da farmaceutska kompozicija sadrži kao aktivni sastojak efektivnu količinu najmanje jednog ovde opisanog jedinjenja formule (I) i/ili njegovih fiziološki prihvatljivih soli, zajedno sa famraceutski podnošljivim pomoćnim sredstvima za oralnu primenu, opciono u kombinaciji sa najmanje jednom farmaceutski aktivnim sastojkom. Prethodno proučavanje predmetne specifikacije razmatra puteve primene i kombinovan proizvod, odnosno, validno je i primenljivo bez ograničenja na kombinaciju oba svojstva, ako je potrebno.
[0103] Izrazi "efektivna količina" ili "efektivna doza" ili "doza" su ovde naizmenično korišćeni i označavaju količinu farmaceutskog jedinjenja koje ima profilaktički ili terapijski relevantan efekat na bolest ili patološka stanja, odnosno koje izaziva u tkivu, sistemu, životinji ili čoveku biološki ili medicinski odgovor koji je tražen ili željen, na primer, od strane istraživača ili lekara. "Profilaktički efekat'' smanjuje mogućnost razvoja bolesti ili čak sprečava početak bolesti. "Terapijski relevantan efekat" olakšava u određenoj meri, jedan ili više simptoma bolesti ili vraća na normalu delimično ili kompletno jedan ili više fizioloških ili biohemijskih parametara, povezanih sa uzročnicima bolesti ili patološkim stanjima. Osim toga, izraz "terapijski efektivna količina" označava količinu koja, u poređenju sa odgovorom subjekta koji nije primio ovu količinu, ima sledeću posledicu: poboljšano lečenje, ozdravljenje, prevenciju ili eliminaciju bolesti, sindroma, stanja, poteškoća, poremećaja ili nuspojava ili takođe smanjenje uznapredovanja bolesti, poteškoće ili poremećaja.
Izraz "terapijski efektivna količina" takođe obuhvata količine koje su efikasne za povećanje normalne fiziološke funkcije.
[0104] Odgovarajuća doza ili opseg doza za primenu farmaceutske kompozicije, u skladu sa pronalaskom je dovoljno visoka sa ciljem da dostigne željeni profilaktički ili terapijski efekat smanjenjem simptoma navedenih bolesti. Biće jasno da će specifični nivo doze, učestalost i vreme primene svakom čoveku posebno, zavisiti od različitih faktora uključujući aktivnost specifičnog primenjenog jedinjenja, godine starosti, telesnu masu, opšte zdravstveno stanje, pol, ishranu, vreme i put primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova i ozbiljnost pojedinačnih bolesti na koje se specifična terapija primenjuje. Koristeći dobro poznata sredstva i metode, prosečan stručnjak može da odredi tačnu dozu kao deo rutinskog eksperimentisanja. Prethodno proučavanje predmetne specifikacije je validno i primenjivo bez ograničenja na farmaceutsku kompoziciju, koja obuhvata jedinjenja formule(l), ukoliko je potrebno.
[0105] Farmaceutske formulacije se mogu primeniti u formi doziranih jedinica koje sadrže prethodno utvrđenu količinu aktivnog sastojka po jedinici doze. Koncentracija profilaktičkog ili terapijski aktivnog sastojka u formulaciji može varirati od 0,1 do 100 tež.%. Pre svega, jedinjenje formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli
4
su primenjene u dozama približno od 0,5 do 1000 mg, poželjnije između 1 i 700 mg, najpoželjnije između 5 i 100 mg po jedinici doze. Generalno, takav opseg doza je prihvatljiv za ukupan dnevni unos. Drugim rečima, poželjna je dnevna doza između 0,02 i 100 mg/kg telesne težine. Specifična doza za svakog pacijenta zavisi od različitih faktora već opisanih u predmetnoj specifikaciji (npr. zavisno od stanja koje se leči, načina primene i godina starosti, telesne mase i stanja pacijenta).
Poželjne formulacije jedinične doze su one koje obuhvataju dnevnu dozu ili delimičnu dozu, kako je gore navedeno, ili odgovarajuću frakciju aktivnog sastojka. Pored toga, farmaceutske formulacije ovog tipa mogu biti pripremljene koristeći postupak koji je opšte poznat u farmaceutskoj oblasti tehnike.
[0106] Iako terapijski efektivna količina ovde opisanog jedinjenja mora biti krajnje određena od strane doktora ili veterinara razmatranjem različitih faktora (npr. godine starosti i telesna masa životinja, tačno određeno stanje koje zahteva lečenje, ozbiljnost stanja, priroda formulacije i način primene), efektivna količina ovde opisanog jedinjenja koje je namenjeno lečenju neurodegenerativnih bolesti, na primer Alchajmerove bolesti, najčešće je u opsegu od 0,1 do 100 mg/kg telesne mase primaoca (sisar) i posebno tipično u rasponu od 1 do 10 mg/kg telesne mase na dan. Tako, efektivna količina na dan za odraslog sisara težine 70 kg je uobičajeno između 70 i 700 mg, gde ova količina može biti primenjena kao pojedinačna dnevna doza ili obično u serijama podeljenih doza (kao što su, na primer, dve, tri, četiri, pet ili šest) na dan, tako da ukupna dnevna doza bude ista.
Efektivna količina soli ili rastvorene supstance ili njenog fiziološki funkcionalnog derivata može biti određena kao frakcija efektivne količine ovde opisanog jedinjenja. Može se pretpostaviti da su slične doze pogodne za lečenje drugih gore navedenih stanja.
[0107] Farmaceutska kompozicija prema pronalasku, može se koristiti kao lek u humanoj i veterinarskoj medicini. Jedinjenja formule (I) i/ili njihove fiziološke soli su odgovarajuće za upotrebu u profilaksi ili terapijskom lečenju i/ili praćenju bolesti, uzrokovanih, posredovanih i/ili širenjem OGA aktivnosti. Posebno je poželjno da su bolesti, neurodegenerativne bolesti i rak, poželjnije neurodegenerativne bolesti, najpoželjnije tauopatije, a veoma poželjno Alchajmerova bolest.
[0108] Neurodegenerativne bolesti ili stanja koje su odabrane iz grupe su Alchajmerova bolest, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), kortikobazalna degeneracija (CBP), Frontotemporalna demencija sa parkinsonizmom povezanih sa hromozom 17 (FTDP-17), Niman-Pikova bolest (tip C), Parkinsonizam-demencija
4
Guamov kompleks, Pikova bolest (PiD), progresivna supranuklearna paraliza (PSP) i Parkinsonova bolest. Najveća prednost se daje Alchajmerovoj bolesti.
[0109] Jedinjenja prema formuli (I) i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli mogu biti upotrebljene u profilaksi ili terapijskom lečenju i/ili praćenju bolesti, uzrokovanih, posredovanih sa i/ili širenjem OGA aktivnosti. Dalje, jedinjenja prema formuli (I) i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli mogu da se upotrebe za proizvodnju leka za profilaksu ili terapijsko lečenje i/ili praćenje bolesti, uzrokovanih, posredovanih sa i/il širenjem OGA aktivnosti. Jedinjenja formule (I) i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli mogu dalje da budu upotrebljene za pravljenje dodatnih aktivnih lekovitih sastojaka. Poželjno je da se lek priprema na nehemijski način, npr. kombinujući aktivni sastojak sa najmanje jednim čvrstim, tečnim i/ili polutečnim nosačem ili pomoćnim sredstvom, i opciono zajedno sa jednom ili više aktivnih supstanci u odgovarajućem doziranom obliku.
[0110] Obezbeđena su ovde opisana jedinjenja formule (I) i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli za upotrebu u profilaksi ili terapijskom lečenju i/ili praćenju bolesti, uzrokovanih, posredovanih sa i/ili širenjem OGA aktivnosti. Drugi predmet pronalaska, odnosi se na lek prema pronalasku za upotrebu u profilaksi ili terapijskom lečenju i/ili praćenju neurodegenerativnih bolesti i raka. Prethodno proučavanje predmetne specifikacije odnosi se na jedinjenja formule (I), koje uključuje svaku njegovu poželjnu realizaciju, validno je i primenjlivo bez ograničenja na lek koji obuhvata jedinjenja prema formuli (I) i njihove soli za upotrebu u profilaksičkom i terapijskom lečenju i/ili praćenju neurodegenerativnih bolesti i raka.
[0111] Ovde opisana jedinjenja formule (I), mogu biti primenjena pre ili nakon početka bolesti, jednom ili više puta delujući kao terapija. Navedena jedinjenja i medicinski proizvodi za upotrebu kao što je ovde opisano, posebno su korišćeni u terapijskom lečenju. Terapijski relevantan efekat olakšava obim jednog ili više simptoma poremećaja, ili vraća na normalu, delimično ili potpuno, jedan ili više fizioloških ili biohemijskih parametara povezanih ili sa uzročnikom bolesti ili patološkim stanjem. Monitoring se smatra kao vrsta lečenja pod uslovom da su jedinjenja primenjena u vremenski odvojenim intervalima, na primer u cilju ubrzanja odgovora i potpunog uklanjanja patogena i/ili simptoma bolesti. Mogu biti primenjena ili identična ili različita jedinjenja. Lek se takođe može upotrebiti za smanjenje mogućnosti unapred za razvijanje poremećaja ili prevenciju iniciranja poremećaja koji je povezan sa OGA aktivnošću ili za lečenje proizilazećih i kontinuiranih simptoma.
4
Poremećaji kao što su razmatrani predmetnim pronalaskom pre svega su neurodegenerativne bolesti, dijabetes, rak i stres.
[0112] Lečenje profilaksom je preporučljivo ukoliko subjekat poseduje neke predispozicije za pomenuta fiziološka ili patološka stanja, kao što je porodična anamneza, genetska greška, ili prethodno preležana bolest.
[0113] Još jedan poželjan predmet pronalaska, je obezbediti lek prema izumu, za primenu u lečenju tauopatije. Poželjna upotreba jeste oralna primena.
[0114] U okviru predmetnog pronalaska, lekovi koji sadrže jedinjenja formule (I) obezbeđeni su po prvi put. Ovde opisana jedinjenja male molekulske mase su snažni i selektivni inhibitori glikozidaze sa poboljšanom pasivnom permeabilnošću. Pokazalo se da su jedinjenja formule (I) kompetitivna sa PUGNAc, poznatim inhibitorom OGA koji se vezuje u džepu supstrata. Endogeni supstrat je O-GlcNAcilovani protein. O-GlcNAcilovanje nuklearnih i citoplazmatskih proteina je jedna od najčešćih posttranslacionih modifikacija kod životinja i biljaka. O-GlcNAc ciklizacija modulira brojne ćelijske procese, i dokaz je da se povećava disregulacija O-GlcNAcilovanja u etiologiji nekoliko bolesti, uključujući Alchajmerovu bolest. O-GlcNAc transferaza (OGT) i O-GlcNAkaze (OGA) su dva enzima koji regulišu ciklizaciju O-GlcNAc. Novi podaci ukazuju da inhibitori koji blokiraju OGA mogu da pomognu u održavanju nivoa zdravih O-GlcNAc kod pacijenata sa Alchajmerovom bolešću i time inhibiraju stvaranje neurofibrilarnih čvorova. Prema tome, upotreba jedinjenja formule (I) u regulaciji, modulaciji i / ili inhibiciji kaskade signala glikozidaze može se povoljno primeniti kao istraživački alat, za dijagnostiku i / ili tretman bilo kojih poremećaja koji reaguju na signalizaciju i inhibiciju OGA.
[0115] Inhibitori male molekularne težine mogu se primeniti sami ili u kombinaciji sa fizičkim merenjima za dijagnostiku efikasnosti lečenja. Lekovi i farmaceutske kompozicije koje sadrže pomenuta jedinjenja i upotreba pomenutih jedinjenja za tretiranje stanja posredovanih glikozidazom obećavaju, novi pristup za širok spektar terapija koje izazivaju direktno i neposredno poboljšanje zdravstvenog stanja, bilo kod ljudi i kod životinja. Uticaj je posebno koristan za efikasnu borbu protiv Alchajmerove bolesti, bilo samostalno ili u kombinaciji sa drugim neurodegenerativnim tretmanima.
[0116] Usled iznenađujuće značajne inhibitorne aktivnosti na OGA, zajedno sa pasivnom permeabilnošću, jedinjenja koja su ovde opisana mogu se povoljno primenjivati u nižim dozama u poređenju sa drugim manje potentnim ili selektivnim
4
inhibitorima iz prethodnog stanja tehnike, dok još uvek postižu ekvivalentne ili čak superiorne željene biološke efekte. Pored toga, takvo smanjenje doze povoljno dovodi do manjih ili čak bez medicinskih neželjenih efekata.
[0117] Jedinjenja formule (I), njihove soli, izomeri, tautomeri, enantiomerni oblici, dijastereomeri, racemati i / ili derivati odlikuju se visokom specifičnošću i stabilnošću, niskim troškovima proizvodnje i praktičnim rukovanjem. Ove karakteristike čine osnovu za ponovljivo delovanje, pri čemu je uključen nedostatak unakrsne reaktivnosti i za pouzdanu i sigurnu interakciju sa ciljnom strukturom.
[0118] Podrazumeva se da ovaj pronalazak nije ograničen na konkretna jedinjenja, farmaceutske kompozicije, primene i metode opisane ovde, jer takva materija može, naravno, varirati. Takođe treba razumeti da se ovde korišćena terminologija koristi samo za opisivanje određenih izvođenja i nije namenjena da ograniči obim ovog pronalaska, koji je samo definisan priloženim patentnim zahtevima. Kao što je ovde korišćeno, uključujući priložene zahteve, jedinični oblici reči (prim.prev., u tekstu na engleskom) kao što su "a”, "an" i "the” obuhvataju odgovarajuće množine, osim ako kontekst jasno nalaže drugačije. Tako, npr., upućivanje na "jedinjenje" uključuje jedno ili više različitih jedinjenja, a referenca na "postupak" uključuje referencu na ekvivalentne korake i postupke poznate stručnjaku iz struke, i tako dalje. Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini koji su ovde korišćni imaju isto značenje kao što je obično shvaćeno od strane stručnjaka u struci kojoj ovaj pronalazak pripada.
[0119] Tehnike koje su esencijalne prema pronalasku su detaljno opisane u specifikaciji. Druge tehnike koje nisu detaljno opisane odgovaraju poznatim standardnim metodama koje su dobro poznate stručnjacima, ili su tehnike detaljnije opisane u citiranim referencama, patentnim prijavama ili standardnoj literaturi. Iako postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu da se koriste u praksi ili testiranju ovog pronalaska, odgovarajući primeri su opisani u nastavku. Primeri koji slede su dati kao ilustracija, a ne kao ograničenje. U okviru primera koriste se standardni reagensi i puferi koji ne sadrže kontaminirane aktivnosti (kad god je to praktično). Primeri su posebno konstruisani tako da nisu ograničeni na eksplicitno demonstrirane kombinacije karakteristika, ali obeležja koja su navedena kao primeri mogu se ponovo neograničeno kombinovati pod uslovom da je rešen tehnički problem pronalaska. Slično tome, karakteristike bilo kojeg patentnog zahteva mogu se kombinovati sa karakteristikama jednog ili više drugih patentnih zahteva.
4
�
[0120] Nuklearna Magnetna Rezonanca:<1>Н NMR je snimljena na Bruker 400 MHz spektrometru, koristeći rezidualni deuterisani rastvarač kao unutrašnju referencu. Hemijska pomeranja (δ) su data u ppm u odnosu na tetrametilsilan.<1>H NMR podaci su kao: hemijsko pomeranje (multiplicitet, konstante kuplovanja i broj vodonika). Multiplicitet je skraćen na sledeći način: s (singlet), d (dublet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet), br (širok).
[0121] LC/MS Metoda A: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde je mobilna faza A 0,1% TFA u H2O i mobilna faza B je 0,1% TFA u ACN. Brzina protoka iznosila je 2,0 mL/min. Kolona je XBridge C8 (50 х 4,6 mm, 3,5 μm). MS detektor je upotrebljen u pozitivnom režimu.
[0122] LC/MS Metoda B: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde je mobilna faza A iznosila 10 mM NH4HCO3u H2O, i mobilna faza B je ACN. Brzina protoka iznosila je 0,8 mL/min. Kolona je XBridge C8 (150 х 4,6 mm, 3,5 μm). Korišćen je MS detektor u negativnom režimu.
[0123] LC/MS Metoda C: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 0,1 % TFA u H2O i mobilna faza B je 0,1 % TFA u ACN. Brzina protoka iznosila je 2,0 mL/min. Kolona je XBridge C8 (50 х 4,6 mm, 3,5 μm).
Korišćen je MS detektor u pozitivnom režimu.
[0124] LC/MS Metoda D: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde je mobilna faza A iznosila 10 mM NH4HCO3u H2O, i mobilna faza B je ACN. Brzina protoka iznosila je 1,0 mL/min. Kolona je XBridge C8 (50 х 4,6 mm, 3,5 μm).
Korišćen je MS detektor u pozitivnom režimu.
[0125] HPLC Metoda A: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 0,1% TFA u H2O, i mobilna faza B je 0,1% TFA u ACN. Brzina
2
protoka iznosila je 2,0 mL/min. Kolona je XBridge C8 (50 х 4,6 mm, 3,5 μm).
Korišćen je UV detektor.
[0126] HPLC Metoda B: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 10 mM NH4HCO3 u H2O, i mobilna faza B je ACN. Brzina protoka iznosila je 0,8 mL/min. Kolona je XBridge C8 (150 х 4,6 mm, 3,5 μm). korišćen je UV detektor.
[0127] HPLC Metoda C: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 0,1 % TFA u H2O, i mobilna faza B je 0,1 % TFA u ACN. Brzina protoka iznosila je 2,0 mL/min. Kolona je XBridge C8 (50 х 4,6 mm, 3,5 μm).
Korišćen je UV detektor.
[0128] HPLC Metoda D: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 10 mM NH4HCO3 u H20, i mobilna faza B je ACN. Brzina protoka iznosila je 1,0 mL/min. Kolona je XBridge C8 (50 х 4,6 mm, 3,5 μm). Korišćen je UV detektor.
[0129] Hiralna HPLC Metoda A: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde je mobilna faza A iznosila 0,1% DEA u n-HEKSANE: IPA 60:40, Brzina protoka iznosila je 1,0 mL/min. Kolona je CHIRALPAK AD-H (250 х 4,6 mm, 5 μm). korišćen je UV detektor.
[0130] MD Auto-Prep Metoda B: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 0,1% TFA u H2O, B-MeOH ili ACN Kolona: Symmetry C8 (300 х 19 mm, 7μm). Korišćeni su PDA i UV detektori.
[0131] Opšte Preparativne HPLC Metode: Preparativna HPLC je izvedena primenom ili Symmetry C8 preparativne kolone (19 х 300 mm, 7 μm) ili Sunfire C8 kolone (19 х 250 mm, 5 μm). Mobilna faza A je ili 10 mM amonijum acetat u vodu, ili 0,1% TFA u vodi. Mobilna faza B je ili metanol ili acetonitril.
[0132] Preparativna HPLC Metoda C: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 0,1% TFA u H2O, i mobilna faza B MeOH ili ACN. Kolona: Sunfire C8 (19 х 250 mm, 5 μm) ili Sunfire C18 (30 х 250 mm, 10 μm). Krišćen je UV detektor.
[0133] Preparativna HPLC Metoda B: Ova metoda je sledila opšti analitički LC program, gde mobilna faza A je 10 mM NH4HCO3u H2O, i mobilna faza B MeOH ili ACN. Kolona: Sunfire C8 (19 х 250 mm, 5 μm) ili Sunfire 08 (30 х 250 mm, 10 μm) ili Sunfire C18 (30 х 250 mm, 10 μm). Korišćen je UV detektor.
[0135] Korak 1: U mešani rastvor etil 2-((terc-butoksikarbonil)amino) tiazol-5-karboksilat (5 g, 0,0183 mol) u suvom THF (80 mL) na 0°C dodat je LiAlH4(15 mL, 0,0309 mol, 2,0 M rastvor u THF) pod N2u kapima. Reakciona smeša je potom mešana na s.t. u trajanju od lh. Po završenoj reakciji, reakciona smeša je ohlađena na -10°C do 0°C. Reakcija je prekinuta dodatkom u kapima 10% NaOH (5 mL). Posle 10 min, smeša je profiltrirana kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući sirov terc-butil (5-(hidroksimetil)tiazol-2-il)karbamat (6 g) kao svetlo žut čvrsti ostatak. Sirov proizvod je upotrebljen u narednoj reakciji bez dodatnog prečišćavanja. LC/MS: (Metoda A) 231,0 (M+H).
<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 6,78 (s, 1H), 4,38 (s, 2H), 1,38 (s, 9H).
4
[0136] Korak 2: U rastvor terc-butil (5-(hidroksimetil)tiazol-2-il)karbamata (6 g, 0,026 mol) u DCM (60 mL) na 0°C dodat je tionil hlorid (6,3 mL, 0,103 mol) u N2, u kapima. Reakciona smeša je potom mešana na 0°C tokom 2h. Reakciona smeša je praćena sa TLC. Po završenoj reakciji, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući sirov terc-butil (5-(hlormetil)tiazol-2-il)karbamat (7 g) kao braon tečnost. Sirov proizvod je upotrebljen u narednoj reakciji bez dodatnog prečišćavanja.
[0137] Korak 3: Rastvor terc-butil (5-(hlormetil)tiazol-2-il)karbamata (7 g, 0,028 mol) u DCM (70 mL) dodat je u smešu 4-fenilpiperidina (4,5 g, 0,028 mol) i Et3N (12 mL, 0,0704 mol) u DCM (50 mL). Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 30 min. Po završetku reakcije, reakciona smeša je rablažena dodatkom DCM (200 mL), i isprana prvo vodom pa zatim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom . Sirov proizvod je re-kristalisan iz acetonitrila, zatim osušen pod vakuumom dajući terc-butil (5-((4-fenilpiperidin-l- il)metil)tiazol-2-il)karbamat ((3,8 g) kao belu čvrstu susptancu. LC/MS: (Metoda A)
374,3 (M+H).
<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,09 (bs, 1H), 7,28-7,21 (m, 4H), 7,18-7,14 (m, 2H), 3,61 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,50-2,42 (m, 1H), 2,06-2,0 (m, 2H), 1,73-1,67 (m, 4H), 1,45 (s, 9H).
[0138] Korak 4: U rastvor terc-butil (5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2- il)karbamata (3,8 g) u suvom dioksanu (60 mL) dodat je HCl u dioksanu (200 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući hidrhloridnu so 5- ((4-fenilpiperidin-lil)metil)tiazol-2-amina kao beli čvrsti ostatak. Prinos : (2,9 g, 92%).
<1>H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ 9,46 (bs, 2H), 7,50-7,45 (d, J= 19,2 Hz, 1H), 7,34-7,30 (t, J= 15 Hz, 2H), 7,23-7,20 (m, ЗН), 4,39 (s, 2H), 3,55-3,45 (m, 2H), 3,04-2,99 (m, 2H), 2,83-2,77 (m, 1H), 2,12-2,06 (m, 2H), 2,03-1,94 (m, 2H).
PRIMER 1-3: Dobijanje N-(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)propionamida [0139] U mešani rastvor 5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amin hidrohlorida (100 mg, 1 ekv.) u dihlormetanu (5 mL) na 0°C dodat je propionil hlorid (29 mg, 1 ekv.), i Et3N (96 mg, 3 ekv.). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. tokom 2h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom ,
dodata je voda, i proizvod je ekstrahovan dihlormetanom. Organska faza je odvojena, osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući trifluoracetatnu so N-(5-((4- fenilpiperidin-lil)metil)tiazol-2-il)propionamida kao beličastog čvrstog ostatka. Prinos: 35% (41 mg).
LC/MS: (Metoda A) 330,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.:
3,3 min, 98,9%, (Maks.), 96,9% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,9 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 6H), 3,6 (s, 2H), 3,1 (t, J= 4,0 Hz, 1H), 2,9 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 2,43-2,37 (m, 2H), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,78- 1,56 (m, 4H), 1,25-1,02 (m, ЗН).
PRIMER 1-7: Dobijanje 2-metil-5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazola
[0140] Korak 1: U mešani rastvor etil 2-metiltiazol-5-karboksilata (1 ekv) u suvom THF (5 mL) na 0°C) pod N2dodat je LiAlH4(1,1 ekv., 2,0 M rastvor u THF) u kapima. Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom l h. Tok reakcije praćen je pomoću TLC. Po završetku reakcije, reakciona smeša je ohlađena na -10°C do 0°C i zatim je u kapima dodat 10% vodeni rastvor NaOH (5 mL). Nakon 10 min mešanja, smeša je profiltrirana kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući (2-metiltiazol-5-il)metanol (6 g) kao svetlo žut čvrsti ostatak. Sirov proizvod je upotrebljen u narednom koraku bez prečišćavanja.
LC/MS: (Metoda A) 130,0 (M+H).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 7,4 (s, 1H), 5,5 (s, 1H), 4,6 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 2,6 (s, ЗН).
[0141] Korak 2: U rastvor (2-metiltiazol-5-il)metanola (1 ekv) u DCM (10 mL) na 0°C pod N2dodat je tionil hlorid (3 ekv), u kapima. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 2h. Tok reakcije praćen je pomoću TLC. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući 5-(hlormetil)-2-metiltiazol kao braon tečnost.
[0142] Korak 3: Rastvor 5-(hlormetil)-2-metiltiazola (400 mg, 1 ekv.) u DCM (5 mL) dodat je u smešu 4-fenilpiperidina (480 mg, 1,1 ekv.) i DIPEA (1,2 ekv.) u DCM (2,5 mL).
Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 1 h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je razblažena dihlormetanom, i zatim isprana redom sa vodom i rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući 2-metil-5-((4- fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol kao svetlo žut čvrst, gumeni proizvod. Prinos: 16% (140 mg). LC/MS: (Metoda A) 273,0 (M+H).
HPLC: (Metoda A) RT.: 2,71 min,
[0144] Korak 1: U rastvor etil estra 2-brom-tiazol-5-karboksilne kiseline (1 ekv.) u 1,4-dioksan (5 mL) dodat je tributil(vinil)kalaj (1,1 ekv.), pa zatim i PdCl2(PPh3)2(10 mol %). Reakciona smeša je zagrevana na 100°C tokom 14h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je profiltrirana kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući etil 2-viniltiazol-5- karboksilat kao svetlo žut čvrst gumeni proizvod. Prinos: 65%. LC/MS: (Metoda A)
184,3 (M+H).
[0145] Korak 2: U rastvor etil 2-viniltiazol-5-karboksilata (1 ekv.) u metanol : etil acetatu (5 mL 1:1) dodat je 10% Pd/C. Reakciona smeša je zatim tretirana vodonikom (14 psi) na s.t. tokom lh. Po završetku reakcije, reakciona smeša je profiltrirana kroz sloj Celita, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući etil 2-etiltiazol -5-karboksilat svetlo žuto ulje, lepljiva tečnost. Prinos: 60%. LC/MS: (Metoda A) 186,0 (M+H).
[0146] Korak 3: U mešani rastvor etil 2-etiltiazol-5-karboksilata (1 ekv.) u suvom THF (5 mL) na 0°C pod N2u kapima je dodat LiAlH4(1,1 ekv., 2,0 M rastvor u THF).
Reakciona smeša je potom mešana na s.t. u trajanju od lh. Po završetku reakcije (što je praćno sa TLC), reakciona smeša je ohlađena na -10°C do - 0°C, Reakciona smeša je razblažena dodatkom 10% NaOH (5 mL). Nakon 10 min, smeša je profiltfiltrirana kroz sloj Celita, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom
dajući (2-etiltiazol-5-il)metanol (6 g) kao svetlo žut čvrsti ostatak. U sirov proizvod (1 ekv.) u DCM (5 mL) na 0°C pod N2dajući time tionil hlorid (3 ekv.) u kapima. Reakciona smeša je je potom mešana na 0°C na s.t. tokom 2h. Po završenoj reakciji, kao što je praćeno pomoću TLC, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući 5-(hlormetil)-2-etiltiazol kao braon tečnost. Sirov proizvod je upotrebljen u narednoj reakciji bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 40%. LC/MS: (Metoda A) 148,0 (M+H).
[0147] Korak 4: Rastvor 5-(hlormetil)-2-etiltiazola (300 mg, 1 ekv.) u DCM (5 mL) dodat je u smešu 4-fenipiperdina (328 mg, 1,1 ekv.) i DIPEA (526 mg, 2 ekv.) u DCM (5 mL). Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 1h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je razblažena dodatkom DCM, i zatim isprana redom vode i redom rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući 2-etil-5-((4- fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol kao svetlo žut gumeni proizvod. Prinos: 27% (145 mg). LC/MS: (Metoda A) 287,0 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 3,02 min, 99,8%, (Maks.), 99,5% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,5 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 5H), 3,7 (s, 1H), 2,95- 2,80 (m, 4H), 2,50-2,43 (m, 1H), 2,08-2,02 (m, 2H), 1,73-1,59 (m, 4H), 1,3 (t, J = 8 , 0 Hz, ЗН).
PRIMER 2: Shema 2 (Procedura A)
[0148] KORAK 1: U mešani rastvor 2-formil-5-amino tiazola (1 ekv.) u suvom piridinu na 0°C dodat je CH3COCI (1,2 ekv.) u kapima tokom 10 min. Po završenom dodavanju, reakcija je ostavljena da se meša na s.t. tokom 12h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom i dodata je H2O dajući tako talog koji je profiltriran i osušen na vazduhu dajući proizovd.
[0149] Korak 2: U mešani rastvor N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida (1 ekv.) u THF/metanolu (1:1) s.t., dodata je katalitička količina CH3COOH, supstituisan amin (1,1 ekv.), K-10 Montmorillonit i Nа(ОАс)зВН (1 ekv.). Reakciona smeša je zatim zagrevana na 90°C tokom 12h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je profiltrirana kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan dajući sirov proizvod koji je prečišćen hromatografijom na koloni dajući željeni proizvod.
[0150] PRIMER 2-15: Dobijanje N-[5-(4-metil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]- acetamida sledeći proceduru A, upotrebljeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1
g, 0,58 mmol) i 4-metilpiperidin (172 mg, 1,76 mmol) dajući N-[5-(4-metil-piperidnl- ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamid. Prečišćavanjem proizvoda preparativnom HPLC dobijena je trifluoracetatna so N-[5-(4-metil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]- acetamida kao beli čvrsti ostatak. Prinos: 20% (46 mg). LC/MS: (Metoda A) 254,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 1,72 min, 99,8%, (Maks.), 99,4% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,30 (s, 1H), 9,50 (s, 1H), 7,58 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 4,58-4,47 (m, 2H), 3,48-3,35 (m, 2H), 2,90-2,82 (m, 2H), 2,15 (s, ЗН), 1,81-1,78 (m, 2H), 1,56-1,55 (m, 1H), 1,36-1,32 (m, 2H), 0,97-0,94 (m, ЗН).
PRIMER 2-19: Dobijanje N-[5-(4-fenil-piperazin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamida [0151] Sledeći proceduru A, korišćeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 4-fenilpiperazin (234 mg, 1,76 mmol) dajući N-[5-(4-fenil-piperazin-l- ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamid kao beli čvrsti ostatak. Prinos: 7% (10 mg). LC/MS: (Metoda A) 317,3 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,41 mm, 98,5%, (Maks.), 97,4% (254 nm).
<1>HNM R (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,96 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,20-7,16 (m, 2H), 6,90 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 6,76-6,73 (m, 1H), 3,66 (s, 2H), 3,10 (d, J = 8,0 Hz, 4H), 2,50-2,48 (m, 4H), 2,10 (s, ЗН).
PRIMER 2-20: Dobijanje N-{5-[(3-Fenil-propilamino)-metil]-tiazol-2-il}-acetamida [0152] Sledeći proceduru A, korišćeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 3-fenil-propil-amin (234 mg, 1,76 mmol) dajući N-{5-[(3-fenil- propilamino)-metil]-tiazol-2-il}-acetamid. Prečišćavanjem proizvoda preparativnom HPLC dobijena je trifluoracetatna so N-{5-[(3-fenil-propilamino)-metil]-tiazol-2-il}- acetamida kao beličasta čvrsta supstanca. Prinos: 13% (16 mg). LC/MS: (Metoda A) 290,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,41 min, 98,2%, (Maks.), 94,8% (254 nm).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,22 (s, 1H), 8,78 (s, 2H), 7,51 (s, 1H), 7,31-7,18 (m, 5H), 4,35 (s, 2H), 2,89-2,86 (m, 2H), 2,65-2,61 (m, 2H), 2,15 (s, ЗН), 1,90-1,86 (m, 2H).
PRIMER 2-21: Dobijanje N-(5-{[metil-(3-fenil-propil)-amino]-metil}-tiazol-2-il)- acetamida [0153] Sledeći proceduru A, N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i metil-(3-fenil-propil)-amin (261 mg, 1,76 mmol) su upotrebljeni dajući N-(5-{[metil(3-feml-propil)-amino]-metil}-tiazol-2-il)-acetamid. Prečišćavanje proizvoda preparativnom HPLC dalo je trifluoracetatnu so N-(5-{[metiI-(3-fenil-propil)-amino]- metil}-tiazol-2-il)-acetamida kao bele čvrste supstance. Prinos: 13% (29 mg). LC/MS: (Metoda A) 304,3 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,62 mm, 99,2%, (Maks.), 97,4% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,94 (s, 1H), 7,26-7,12 (m, 6H), 3,60-3,58 (m, 2H), 2,58-2,48 (m, 2H), 2,32-2,28 (m, 2H), 2,13-2,10 (m, 6H), 1,73-1,70 (m, 2H).
PRIMER 2-22: Dobijanje N-[5-(3-fenil-azetidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamida
[0154] Sledeći proceduru A, korišćeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g,
0,58 mmol) i 3-fenilazetidin (231 mg, 1,76 mmol) dajući N-[5-(3-fenil-azetidin-l- ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamid kao svetlo žut čvrsti ostatak. Prinos: 31% (48 mg). LC/MS: (Metoda A) 288,0 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,26 min, 97,7%, (Maks.), 98,9% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,74 (s, 1H), 7,35-7,23 (m, 6H), 3,83-3,76 (m, 5H), 3,26-3,23 (m, 2H), 2,32 (s, ЗН).
PRIMER 2-23: Dobijanje N-[5-(4-cijano-4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]- acetamida [0155] Prema Proceduri A, korišćeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 4-fenil-piperidin-4-karbonitril (323 mg, 1,76 mmol) dajući N-[5-(4-cijano-4- fenilpiperidin-1-ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamid kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 27% (48 mg). LC/MS: (Metoda A) 341,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,66 min, 99,6%, (Maks.), 99,8 % (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,98 (s, 1H), 7,54-7,51 (m, 2H), 7,44-7,40 (m, 2H), 7,37-7,30 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 2,98 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,36-2,30 (m, 2H), 2,12-2,10 (m, 5H), 2,09-2,02 (m, 2H).
PRIMER 2-24: Dobijanje N-[5-(4-hidroksi-4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]- acetamida [0156] Prema Proceduri A, upotrebljeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 4-fenil-piperidin-4-ol (307 mg, 1,76 mmol) dajući N-[5-(4-hidroksi-4- fenilpiperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamid kao svetlo braon čvrsti ostatak. Prinos: 31% (16 mg). LC/MS: (Metoda A) 332,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,11 min,
96,2%, (Maks.), 96,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,47 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,31-7,17 (m, ЗН), 4,77 (s, 1H), 3,66 (s, 2H), 2,66-2,62 (m, 2H), 2,49-2,40 (m, 2H), 2,10 (s,
ЗН), 1,92-1,87 (m, 2H), 1,58-1,55 (m, 2H).
PRIMER 2-25: Dobijanje N-(5-piperidin-l-ilmetil-tiazol-2-il)-acetamida
[0157] Prema Proceduri A, korišćeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i piperidin (370 mg, 1,76 mmol) dajući A-(5-piperidm-l-ilmetil-tiazol-2-il)-acetamid kao čvrsti ostatak svetlo braon bolje. Prinos: 14% (18 mg). LC/MS: (Metoda A) 240,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,31 min, 97,7%, (Maks.), 98,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,94 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 3,57-3,52 (m, 2H), 2,32-2,31 (m, 4H), 2,11 (s, ЗН), 1,90-1,36 (m, 6H).
PRIMER 2-26: Dobijanje N-[5-(4-isopropilpiperidin-l-ilmetil)tiazol-2-il]-acetamida [0158] Prema Proceduri A, korišćeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 4-izopropilpiperidin (220 mg, 1,76 mmol) dajući N-[5-(4-izopropilpiperidin- lilmetil)tiazol-2-il]-acetamid beličast svtsti ostatak. Prinos: 23% (33 mg). LC/MS: (Metoda A) 282,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,57 min, 98,8%, (Maks.), 96,6% (254 nm).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,93 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 3,56 (s, 2H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2,09 (s, ЗН), 1,87-1,81 (m, 2H), 1,58-1,55 (m, 2H), 1,40-1,33 (m, 1H), 1,24- 1,23 (m, 2H), 0,96-0,85 (m, 7H).
PRIMER 2-27: Dobijanje N-(5-((4-cikloheksilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2- il)acetamida [0159] Prema Proceduri A, upotrebljeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 4-cikloheksilpiperdin (290 mg, 1,76 mmol) dajući N-(5-((4- cikloheksilpiperidin-lil)metil)tiazol-2-il)acetamid. Proizvod je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući trifluoracetatnu so N-(5-((4-cikloheksilpiperidin-l- il)metil)tiazol-2-il) kao beličast čvrsti ostatak. Prinos: 10% (19 mg). LC/MS: (Metoda A) 322,3(М+Н). HPLC: (Metoda A) RT.: 3,34 min, 98,2%, (Maks.), 95,2% (254 nm)<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,30 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), 7,60-7,55 (m, 1H),
1
4,47 (d, J - 4,0 Hz, 2H), 3,40-3,37 (m, 2H), 2,88-2,50 (m, 2H), 2,15 (s, ЗН), 1,84- 1,81 (m, 2H), 1,74-1,61 (m, 6H), 1,39-1,32 (m, 8H), 0,98-0,96 (m, 2H).
PRIMER 2-28: Dobijanje N-(5-((4-benzilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida [0160] Prema Proceduri A, upotrebljeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 4-benzilpiperdin (304 mg, 1,76 mmol) dajući N-(5-((4-benzilpiperidin- 1-il)metil)tiazol-2-il)acetamid kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 18 % (31 mg). LC/MS: (Metoda A) 330,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 3,00 min, 98,9%, (Maks.), 98,1% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,92 (s, 1H), 7,26-7,12 (m, 6H), 3,55 (s, 2H), 2,79-2,76 (m, 2H), 1,97 (s, ЗН), 1,86-1,81 (m, 2H), 1,52-1,42 (m, ЗН), 1,32-1,22 (m, 2H).
PRIMER 2-29: Dobijanje N-(5-((3-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida [0161] Prema Proceduri A, upotrebljeni su N-(5-fonnil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g , 0,58 mmol) i 3-fenilpiperdin (280 mg, 1,76 mmol) dajući N-(5-((3-fenilpiperidin-lil)metil)tiazol-2-il)acetamid kao braon čvrstu supstancu. Prinos: 13% (22 mg). LC/MS: (Metoda A) 316,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.2,68 min, 99,3%,
(Maks.), 98,2% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,94 (s, 1H), 7,28-7,17 (m, 6H), 3,64 (s, 2H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2,74-2,71 (m, 1H), 2,09 (s, ЗН), 2,00-1,95 (m, 2H), 1,77-1,68 (m, 2H), 1,54-1,42 (m, 2H).
PRIMER 2-34: Dobijanje N-(5-((4-(dimetilamino)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0162] Prema Proceduri A, N-(5-((4-(dimetilamino)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida (0,1 g, 0,58 mmol) i N,N-dimetilpiperidin-4-amina (222 mg, 1,76 mmol) kao bela čvrsta gumena supstanca. Prinos: 15% (20 mg, bela gumena čvrsta susptanca). LC/MS: (Metoda A) 283,3 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 3,20 min, 98,4 %, (Maks.), 97,9 % (254 nm).<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,96 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 3,61 (s, 2H), 2,89 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,31 (s, ЗН), 2,10-1,81 (m, 4H), 1,47-1,42 (m, 2H), 0,56-0,10 (m, 6H).
2
PRIMER 2-41: Dobijanje N-[5-(4-fluor-4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]- acetamida [0163] Prema Proceduri A, upotrebljeni su N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamid (0,1 g, 0,58 mmol) i 4-fluor-4-fenil-piperidin (311 mg, 1,76 mmol) dajući N-[5-(4-fluor-4- feniI-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-acetamid kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 25% (10 mg). LC/MS: (Metoda A) 334,0 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,80 min, 99,8 %, (Maks.), 99,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,97 (s, 1H), 7,43-7,29 (m, 6H), 3,70 (s, 2H), 2,79 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,35-2,30 (m, 2H), 2,10-2,09 (m, 5H), 1,87-1,86 (m, 2H).
PRIMER 3: Shema 3 (Procedura B)
[0164] Korak 1: U mešani rastvor terc-butil estra 4-trifluormetansulfoniloksi-3, 6- dihidro-2H-piridin-l -karboksilne kiseline (1 ekv.) u suvom degasiranom dioksanu dodat je supstituisana boronska kiselina (1,2 ekv.), CS2CO3(1,5 ekv) i na kraju PdCl2(dppf)2(6 mol%). Reakciona smeša je zagrevana na 100°C tokom 14h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je profiltrirana kroz sloj Celita i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i prečišćen hromatografijom na koloni dajući proizvod.
[0165] Koraci 2 i 3: U mešani rastvor 4-supstituisanog terc-butil estra fenil-3,6- dihidro-2H-piridin-l-karboksilne kiseline (1 ekv.) u dioksanu na 0°C dodat je Dioksan/HCl (2 mL) i ostavljen na mešalici na s.t. tokom 4h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana dajući proizvod koji je upotrebljen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. Sirova reakciona smeša je (1 ekv.) rastvorena u THF: MeOH (1:1), dodati su : CH3COOH u katalitičkoj količini, sirov 4-supstituisani fenil-l,2,3,6-tetrahidro-piridin (1,1 ekv.), K-10 Montmorillonit (1 ekv.) i Na(OAc)3BH (1,2 ekv.) i zagrejana na 90°C , 12h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je profiltrirana kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan dajući sirov proizvod.
[0166] Korak 4: Proizvod iz Procedure B korak 3 je rastvoren u metanolu (10 mL) i podvrgnut hidrogenizaciji primenom 10% Pd/C i H2(14 psi) tokom 4h do 12h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je profiltrioran kroz sloj Celita; filtrat je uparen i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni i preparativnom HPLC dajući proizvod.
PRIMER За: Dobijanje terc-butil 4-(2-fluorfeniI)-5,6-dihidropiridin-l(2H)- karboksilata (intennedijer)
�
[0196] Terc-butil estar 4-(3-hidroksi-fenil)-3,6-dihidro-2//-piridin-l-karboksilne kiseline je pripremljen od 3-hidroksifenilboronske kiseline (300 mg, 1 mmol) i t e r c -butil 4-estar trifluormetansulfoniloksi-3,6-dihidro-2//-piridin-l-karboksilne kiseline (790 mg, 1,1 mmol) kao bezbojna tečnost (420 mg, 72%) prema Proceduri B Korak 1, LC/MS: (Metoda A) 276,2 (M+H).
PRIMER 3-14: Dobijanje N-(5-((4-(p-tolil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida [0197] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(p-tolil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-p-tolil-3,6-dihidro-2//-piridin-l -karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 26% (34 mg). LC/MS: (Metoda A) 330,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 3,20 min, 98,7%, (Maks.), 96,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,94 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,11-7,05 (m, 4H), 3,63 (s, 2H), 2,92 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,49-2,48 (m, 1H), 2,23 (s, ЗН), 2,05 (s, ЗН), 2,02-1,97 (m, 2H), 1,67-1,58 (m, 4H).
PRIMER 3-16: Dobijanje N-(5-((4-(4-metoksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0198] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(4-metoksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-(4-metoksi-fenil)-3,6-dihidro-2//-piridin-1-karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida. Prečišćavanjem preparativnom HPLC dobijena je trifluoracetatna so jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta susptanca. Prinos: 25% (67 mg). LC/MS: (Metoda A) 346,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,83 min, 97,1%, (Maks.), 95,7% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,32 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 7,65-7,60 (m, 1H), 7,13-7,10 (m, 2H), 6,91-6,86 (m, 2H), 4,56 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 3,73 (s, ЗН), 3,53-3,52 (m, 2H), 3,03-2,97 (m, 2H), 2,75-2,72 (m, 1H), 2,15 (s, ЗН), 1,99-1,95 (m, 2H), 1,78-1,72 (m, 2H).
PRIMER 3-30: Dobijanje N-(5-((4-(2-fluorfenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0199] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(2-fluorfenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil 4-(2-fluorfenil)-5,6-dihidropiridin-l(2H)-karboksilata i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao svetlo žut čvrsti ostatak. Prinos: 5% (3 mg). LC/MS: (Metoda A) 334,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,80 min, 97,4%, (Maks.), 97,4% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,36-7,32 (m, 1H), 7,26-7,20 (m, 2H), 7,15-7,09 (m, 2H), 3,64 (s, 2H), 2,96-2,88 (m, 2H), 2,77-2,72 (m, 1H), 2,09-1,98 (m, 5H), 1,84-1,75 (m, 4H).
PRIMER 3-31: Dobijanje N-(5-((4-(m-tolil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida [0200] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(m-tolil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil 4-(m-tolil)-5,6-dihidropiridin-l(2H)-karboksilata i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 17% (32 mg).
LC/MS: (Metoda A) 330,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 3,07 min, 98,7 %, (Maks.), 98,9 % (254 nm).
<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,13 (d,J = 8,0 Hz, 1H), 7,04-6,98 (m, ЗН), 3,63 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,49-2,48 (m, 1H), 2,2 (s, ЗН), 2,10 (s, ЗН), 2,02-2,01 (m, 2H), 1,78-1,64 (m, 4H).
PRIMER 3-32: Dobijanje N-(5-((4-(3-metoksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0201] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(3-metoksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-(3-metoksi-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 14% (29 mg). LC/MS: (Metoda A) 346,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,73 min, 98,9%, (Maks.), 98,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,25-7,15 (m, 2H), 6,81-6,71 (m, 2H), 3,71 (s, ЗН), 3,63 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,49-2,43 (m, 1H), 2,10 (s, ЗН), 2,05-1,97 (m, 2H), 1,72-1,65 (m, 4H).
1
PRIMER 3-33: Dobijanje N-(5-((4-(2-metoksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0202] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(2-metoksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od t e r c -butil estra 4-(2-metoksi-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao beličasta čvrsta supstanca. Prinos: 30% (62 mg). LC/MS: (Metoda A) 346,0 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,89 min, 97,9%, (Maks.), 97,6% (254 nm).
<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6):δ 11,95 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,18-7,12 (m, 2H), 6,93-6,85 (m, 2H), 3,75 (s, ЗН), 3,63 (s, 2H), 2,93-2,80 (m, ЗН), 2,05 (s, ЗН), 2,03- 1,97 (m, 2H), 1,67-1,54 (m, 4H).
PRIMER 3-35: Dobijanje N-(5-((4-(2-cijanofenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0203] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(2-cijanofenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od t e r c -butil estra 4-(2-cijano-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-lkarboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao svetlo žut čvrsti ostatak. Prinos: 29% (54 mg). LC/MS: (Metoda A) 341,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,45 min, 93,8%, (Maks.), 95,3% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,97 (s, 1H), 7,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,67-7,63 (m, 1H), 7,55 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,41 (d,J=4,0 Hz, 1H), 7,27-7,26 (m, 1H), 3,68 (s, 2H), 2,99-2,97 (m, 2H), 2,81 (s, 1H), 2,10-2,08 (m, 5H), 1,74-1,72 (m, 4H).
PRIMER 3-36: Dobijanje N-(5-((4-(4-cijanofenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0204] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(4-cijanofenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od t e r c -butil estra 4-(4-cijano-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-lkarboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 2% (3 mg). LC/MS: (Metoda A) 341,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,59 min, 94,6%, (Maks.), 89,0% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,73 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,26 (s, 1H), 3,65 (s, 2H), 2,95-2,88 (m, 2H), 2,58 (s, 1H), 2,10-2,02 (m, 5H), 1,74-1,62 (m, 4H).
2
PRIMER 3-37: Dobijanje N-(5-((4-(2-hidroksifeniI)piperidin-l-il)metiI)tiazol-2-il)acetamida
[0205] Prema Proceduri B, 7/-(5-((4-(2-hidroksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-(2-hidroksi-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida. Prečišćavanjem prepartivnom HPLC dobijena je trifluoracetatna so jedinjenja iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca. Prinos: 7% (19 mg). LC/MS: (Metoda A) 332,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,28 min, 98,9%, (Maks.), 98,6% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,29 (s, 1H), 9,56-9,51 (m, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,05-7,01 (m, 2H), 6,82-6,74 (m, 2H), 4,54 (m, 2H), 3,49-3,47 (m, 2H), 3,09-3,00 (m, ЗН), 2,15 (s, ЗН), 1,96-1,85 (m, 4H).
PRIMER 3-38: Dobijanje N-(5-((4-(4-hidroksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0206] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(4-hidroksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-(4-hidrоksi-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 6% (5 mg). LC/MS: (Metoda A) 332,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 1,90 min, 96,5%, (Maks.), 97,9% (254 nm).
<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,01 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,65 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,62 (s, 2H), 2,92-2,89 (m, 2H), 2,32-2,31 (m, 1H), 2,10 (s, ЗН), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,68-1,53 (m, 4H).
PRIMER 3-39: Dobijanje N-(5-((4-(3-hidroksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0207] Prema Proceduri B, A-(5-((4-(3-hidroksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-(3-hidroksi-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida. Prečišćavanjem preparativnom HPLC dobijena je trifluoracetatna so N-(5-((4-(3-hidroksifenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 9% (24 mg). LC/MS: (Metoda A) 332,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,11 min, 98,9%, (Maks.), 98,8% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,32 (s, 1H), 9,55-9,37 (m, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,12-7,08 (m, 1H), 6,62-6,58 (m, ЗН), 4,55 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 3,50-3,47 (m, 2H), 3,03-2,97 (m, 2H), 2,72-2,66 (m, 1H), 2,16 (s, ЗН), 1,98-1,82 (m, 2H), 1,79-1,74 (m, 2H).
PRIMER 3-42: Dobijanje N-(5-((4-(4-fluorfenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0208] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(4-fluorfenil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-(4-fluor-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-lkarboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida svetlo braon čvrst supstanca.
Prinos: 35% (41 mg). LC/MS: (Metoda A) 334,0 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,98 min, 98,2%, (Maks.), 96,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,29-7,26 (m, ЗН), 7,10-7,06 (m, 2H), 3,64 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,49-2,48 (m, 1H), 2,10 (s, ЗН), 2,05-2,00 (m, 2H), 1,72-1,63 (m, 4H).
PRIMER 3-43: Dobijanje N-(5-((4-(o-tolil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida [0209] Prema Proceduri B, N-(5-((4-(o-tolil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan od terc-butil estra 4-o-tolil-3,6-dihidro-2H - piridin-l-karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida. Prečišćavanjem preparativnom HPLC dobijena je trifluoracetatna so traženog jedinjenja kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 40% (76 mg).
LC/MS: (Metoda A) 330,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 3,01 min, 99,4%, (Maks.), 98,8% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,96 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,26-7,03 (m, 5H),
3,66 (s, 2H), 2,96-2,93 (m, 2H), 2,67-2,61 (m, 1H), 2,26 (s, ЗН), 2,11-2,06 (m, 5H), 1,65-1,62 (m, 4H).
PRIMER 3-44: Dobijanje 2-(l-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoeve kiseline [0210] Prema Proceduri B, etil 2-(l-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoat je sintetisan od terc-butil estra N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida i 4-(2-etoksikarbonil-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-l-karboksilne kiseline. U mešani rastvor etil 2-(l-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoata (1 ekv.) u THF/MeOH/H2O (1:1:1) (3 mL) dodat je LiOH.H2O (1 ekv.). Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 3 h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je neutralisana dodatkom limunske kiseline i zatim ekstrahovana sa DCM-om. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, profiltriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom . Sirov
4
proizvod је prečišćen preparativnom HPLC dajući hidrohloridnu so 2-(l-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoeve kiseline kao svetlo braon čvrsti ostatak. Prinos: 10% (9 mg). LC/MS: (Metoda A) 360,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,35 min, 99,0%, (Maks.), 98,6% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13,05 (s, 1H), 12,32 (s, 1H), 9,63 (s, 1H), 7,76- 7,70 (m, 1H), 7,60-7,53 (m, 1H), 7,35-7,31 (m, ЗН), 4,56 (s, 2H), 3,60-3,49 (m, ЗН), 3,11-3,05 (m, 2H), 2,15 (s, ЗН), 2,00-1,86 (m, 4H).
PRIMER 3-45: Dobijanje 4-(l-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoeve kiseline
[0211] Prema Proceduri B, etil 4-(l-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoat je sintetisan od Zerc-butil estra 4-(4-etoksikarbonil-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridin-l-karboksilne kiseline i N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida. U mešani rastvor etil 4-(l-((2-acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoata (1 ekv./) u THF/MeOH/H2O (1:1:1) (3 mL), dodat je LiOH.H2O (1 ekv.) i reakciona smešaje ostavljena da se meša na s.t. tokom 3h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je neutralisana limunskom kiselinom i ekstrahovan dodatkom DCM. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, profiltriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC dajući hidrohloridnu so 4-(l-((2- acetamidotiazol-5-il)metil)piperidin-4-il)benzoeve kiseline kao braon čvrsti ostatak. Prinos: 26% (37 mg). LC/MS: (Metoda A) 360,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 1,96 min, 99,0%, (Maks.), 97,8% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,89 (s, 1H), 12,31 (s, 1H), 10,54 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,34 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 4,53 (s, 1H), 3,49-3,47 (m, 2H), 3,01-2,88 (m, ЗН), 2,88 (s, ЗН), 1,99-1,96 (m, 4H).
PRIMER 4-12: Dobijanje N-ciklopropil-5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amina
[0212]
[0213] Korak 1: U ledeno hladan, mešani rastvor benzoil izotiocijanata (1 ekv., 17,5 mmol) u suvom hloroformu (20 mL), dodat je ciklopropilamin (1 ekv., 17,5 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da na mešalici na s.t. tokom 45 min. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak, sirova lbenzoil-3-ciklopropil-tiourea, je upotrebljena u narednoj reakciji bez dodatnog prečišćavanja. U ledeno hladan, mešani rastvor l-benzoil-3-ciklopropil-tiouree (1 ekv., 17,2 mmol) u metanolu (35 mL) dodat je NaOH (4N, lekv.). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 60°C u trajanju od l,5h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dodata je ledeno hladna voda. Čvrsti ostatak je sakupljen filtracijom dajući 1-ciklopropiltioureu kao belu čvrstu supstancu, koja je upotrebljena u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 74% (1,16 g).
<1>Н NMR: (400 MHz, CD3OD): δ 2,47 (bs, 1H), 0,81-0,76 (m, 2H), 0,60-0,58 (m, 2H).
[0214] Korak 2: U mešani rastvor 1-ciklopropiltiouree (1 ekv, 9,2 mmol) u etanolu (25 mL), dodat je DMF-DMA (l,5ekv, 14,9 mmol). Reakciona smeša je zatim zagrevana na 90°C uz mešanje od 3h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je triturisan dodatkom etil acetata dajući lciklopropil-3-[l-dimetilamino-metiliden]-tioureu kao belu čvrstu supstancu, koja je upotrebljena u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 78% (1,61 g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,6 (s, 1H), 3,21-3,16 (m, 1H), 3,1 (s, ЗН), 3,0 (s, ЗН), 0,68-0,63 (m, 2H), 0,58-0,56 (m, 2H).
[0215] Korak 3: U mešani rastvor 1 -ciklopropil-3-[ 1 -dimetilamino-metiliden)-tiouree (1 ekv.) u CH3CN (15 mL), dodat je etil hloracetat (1,1 ekv). Reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 14h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana
pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan (sprašen) dodatkom zasićenog, vodenog rastvora NaHCO3. Čvrsti ostatak je sakupljen filtracijom dajući etil estar 2-ciklopropilamino-tiazol-5-karboksilne kiseline kao braon čvrstu supstancu, koja je upotrebljena u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 55% (0,85 g). LC/MS: (Metoda A) 213,0 (M+H).
[0216] Korak 4: U mešani rastvor etil estra 2-ciklopropilamino-tiazol-5-karboksilne kiseline (lg, 1 ekv.) u etanolu (15 mL) na 0°C dodat je NaOH (2N, 1,1 ekv.). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na s.t. tokom 14h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i neutralisana dodatkom vodenog rastvora HCl (1 N). Čvrsti ostatak je sakupljen filtracijom dajući 2-(ciklopropilamino)tiazol-5-karboksilnu kiselinu kao belu čvrstu supstancu koja je upotrebljena u narednom koraku bez prečišćavanja. Prinos: 98% (0,85 g). LC/MS:
(Metoda B) 183,0 (M-H).
[0217] Korak 5: U mešani rastvor 2-(ciklopropilamino)tiazol-5-karboksilne kiseline (800 mg, 1 ekv.) u DCM(15 mL) na 0°C dodati su Et3N (870 mg, 1,1 ekv.), 4-fenilpiperidin (760 mg, 1,1 ekv.) i T3P (2,76 g, 2ekv.). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. tokom 4h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući (2-(ciklopropilamino)tiazol-5-il)(4-fenilpiperidin-l-il)metanon kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 45% (0,64 g). LC/MS: (Metoda A) 328,0 (M-H).
[0218] Korak 6: U mešani rastvor (2-(ciklopropilamino)tiazol-5-il)(4-fenilpiperidin-lil)metanona (100 mg, 1 ekv.) u THF (15 mL) na 0°C dodat je boran-metil sulfidni kompleks uTHF (2 M, 0,75 mL, 2 ekv.). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 60°C tokom 4h, tretirana metanolom (5 mL), i zatim zagrevana uz mešanje na 60°C još lh. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom . Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući N-ciklopropil-5-((4- fenilpiperidinl-il)metil)tiazol-2-amin kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 28% (34,4 mg). LC/MS:
(Metoda B) 314,3 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,49 min, 98,1%, (Maks.), 98,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,30-7,16 (m, 5H), 6,87-7,05 (m, 1H), 3,70-3,68 (m, 2H), 3,11-3,09 (m, 4H), 2,30-2,25 (m, 2H), 1,84-1,80 (m, 2H), 1,68-1,64 (m, 2H), 0,71-0,65 (m, 2H), 0,50-0,46 (m, 2H).
[0220] Nastavno Primeru 1, korak 3, u mešani rastvor terc-butil (5-((4-fenilpiperidin- lil)metil)tiazol-2-il)karbamata (200 mg, 1 ekv.) u THF (10 mL) na 0°C dodat je LiAlH4(2,0 M rastvor u THF, 0,8 mL, 1,5 ekv). Reakciona smeša je zatim zagrevana na 65°C u trajanju od 90 min. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dodata je voda i proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je odvojena, osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući metil-5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amin kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 80% (120 mg). LC/MS: (Metoda B) 288,3 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,23 min, 99,9%, (Maks.), 99,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,31-7,21 (m, 4H), 7,18-7,14 (m, 1H), 6,8 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 2,9 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,76-2,75 (m, ЗН), 2,45-2,42 (m, 1H), 2,02-1,96 (m, 2H), 1,73-1,70 (m, 2H), 1,64-1,57 (m, 2H).
beličast čvrst ostatak. Prinos: 79%
(1,3 g). LC/MS: (Metoda A) 257,0 (M+H).<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): 11,3 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 4,29-4,27 (m, 2H), 1,5 (s, 9H), 1,3 (t, J = 8,0 Hz, ЗН).
[0223] Korak 2: U rastvor etil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)oksazol-5-karboksilata (500 mg, 1 ekv) u THF/MeOH/H2O (3:1:1, 15 mL) dodat je LiOH (165 mg, 2 ekv.) i reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 4h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dodata je voda. Smeša je neutralisana dodatkom vodenog rastvora HCl (1N). Beličasta čvrsta susptanca je sakupljena filtracijom i osušena dajući 2-((terc- butoksikarbonil)amino)oksazol-5-karboksilnu kiselinu, koja je upotrebljena u narednom koraku bez prečišćavanja. Prinos: 76% (880 mg).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,2 (s, 1H), 7,7 (s, 1H), 1,5 (s, 9H).
[0224] Korak 3: U rastvor 2-((terc-butoksikarbonil)amino)oksazol-5-karboksilne kiseline (320 mg, 1 ekv.) u DCM (15 mL) na 0°C dodati su Et3N (0,6 mL, 3 ekv.) i 4-fenilpiperidin (248 mg, 1,54 mmol, 1,1 ekv.). Posle 15 min hlađenja na 0°C, reakciona smeša je tretirana sa T3P (900 mg, 2 ekv.). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. tokom 14h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dodata je voda. Proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući terc- butil (5-(4-fenilpiperidin-lkarbonil)oksazol-2-il)karbamat kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 82% (430 mg). LC/MS: (Metoda B) 372,0 (M+H).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,0 (s, 1H), 7,5 (s, 1H), 7,31-7,18 (m, 5H), 4,4 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,01-2,83 (m, 2H), 1,84-1,81 (m, 2H), 1,60-1,58 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
[0225] Korak 4: U rastvor terc-butil (5-(4-fenilpiperidin-l-karbonil)oksazol-2-il)karbamata (400 mg, 1 ekv.) u suvom THF (15 mL) na 0°C dodat je LAH u THF (1 M, 1,6 mL, 1,5 ekv.). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 30 min. Po završetku reakcije, reakcionoj smeši je dodat vodeni rastvor NaOH (1N) i ekstrahovana je dihlormetanom. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfate, profiltrirana, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući terc-butil (5-((4-fenilpiperidin-l- il)metil)oksazol-2-il)karbamat kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 40% (150 mg). LC/MS: (Metoda B) 358,0 (M+H).<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10,4 (s, 1H),
7,28-7,16 (m, 5H), 6,9 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 2,92-2,89 (m, 2H), 2,45-2,43 (m, 1H), 2,08-2,03 (m, 2H), 1,73-1,60 (m, 4H), 1,6 (s, 9H).
[0226] Korak 5: U rastvor terc-butil (5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)oksazol-2- il)karbamata (50 mg, 1 ekv) u suvom DMF (5 mL) na 0°C dodati su NaH (20 mg, 1,5 ekv.) i etil jodid (0,02 mL, 1,5 ekv). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 2h. Po završetku reakcije, reakcionoj smeši je dodata ledeno hladna voda i proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući terc-butil etil(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)oksazol-2- il)karbamat kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 56% (30 mg). LC/MS: (Metoda B) 386,2 (M+H).
[0227] Korak 6: U rastvor terc-butil etil(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)oksazol-2-il)karbamata (30 mg, 1 ekv.) u suvom 1,4-dioksanu (1 mL) na 0°C dodat je dioksan/HCl (1 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 12h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući hidrohloridnu so N-etil-5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)oksazol-2-amina kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 80% (18,3 mg). LC/MS: (Metoda A) 286,3 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 5,41 min, 99,6%, (Maks.), 99,1% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10,9 (s, 1H), 8,6 (s, 1H), 7,35-7,30 (m, 2H), 7,26- 7,20 (m, ЗН), 4,5 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,50-3,47 (m, 2H), 3,30-3,27 (m, 2H), 3,08-3,01 (m, 2H), 2,81-2,75 (m, 1H), 2,01-2,05 (m, 4H), 1,2 (t, J= 4,0 Hz, ЗН).
PRIMER 5-1: Dobijanje N-(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0228] Nastavno Primeru 1, u rastvor 5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amin hidrohlorida (2,2 g, 0,007 mol) u DCM (30 mL) na 0°C dodat je piridin (2,86 mL, 0,0355 mol), pa zatim acetil hlorid (0,8 mL, 0,0113 mol) u kapima tokom 5 min. Reakciona smeša je mešana na s.t. u trajanju od lh. Tok reakcije praćen je pomoću TLC. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i neutralisana dodatkom 10% rastvora NaHCO3u vodi. Proizvod je ekstrahovan sa etil acetatom (200 mL). Organska faza je isprana redom sa vodom i rastvorom soli, osušena iznad natrijum sulfata, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji (MeSH silika od 60-120) koristeći petrol-etar/etil acetat kao eluent dajući N-(5-((4-fenilpiperidin-l- il)metil)tiazol-2-il)acetamid (1,2 g, 53,8%) kao svetlo žut čvrsti ostatak. TLC (petrol
etar/etil acetat, 5:5, Rf= 0,2). LC/MS: (Metoda A) 316 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,7 min, 97%.
<1>HNMR (DMSO-d6, 400MHz) δ 11,94 (bs, 1H), 7,28-7,21 (m, 5H), 7,18-7,14 (m, 1H), 3,64 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,49-2,42 (m, 4H), 2,10-1,97 (m, 2H), 1,73-1,70 (m, 4H).
PRIMER 5-4: Dobijanje N-[5-(4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-akrilamida [0229] Nastavno Primeru 1, u mešani rastvor 5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amin hidrohlorida (100 mg, 1 ekv.) u dihlormetanu (5 mL) na -20°C, dodati su akrolil hlorid (29 mg, 1 ekv.), i Et3N (96 mg, 3 ekv.). Reakciona smeša je mešana na -20°C tokom 1h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dodata je voda, i proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući trifluoracetatnu so N-[5-(4-fenilpiperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-akrilamida kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 14% (16 mg). LC/MS: (Metoda A) 328,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,96 min, 96,2%, (Maks.), 92,5% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H), 7,7 (s, 1H), 7,67-7,20 (m, 5H), 6,57-6,50 (m, 1H), 6,44-6,39 (m, 1H), 5,9 (dd, J = 4,0, 8,0 Hz, 1H), 4,6 (dd, J = 8 ,0 Hz, 2H), 3,5 (dd, J = 12,0 Hz, 2H), 3,07-3,01 (m, 2H), 2,82-2,76 (m, 1H), 2,01- 2,15 (m, 2H), 1,85-1,92 (m, 2H).
PRIMER 5-5: Dobijanje N-etil-5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amina [0230] Korak 1: Nastavno Primeru 1, korak 3, u mešani rastvor terc-butil (5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)karbamata (200 mg, 1 ekv.) u DMF (5 mL) dodat je NaH (80 mg, 1,5 ekv.). Reakciona smeša je zatim tretirana etil jodidom (0,08 mL, 1,5 ekv.) i na 65°C tokom 90 min. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dodata je voda i proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je odvojena, osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući terc-butil etil(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)karbamat kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 45% (100 mg). LC/MS: (Metoda A) 402,2 (M+H).
[0231] Korak 2: U mešani rastvor terc-butil etil(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)karbamata (50 mg) u suvom dioksanu (2 mL) dodat je HCl u dioksanu (5 mL) i
1
reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 12h. Po završenoj reakciji, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući N-etil-5-((4-fenilpiperidin-lil)metil)tiazol-2-amin kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 22% (7,3 mg). LC/MS:
(Metoda B) 302,2 (M+H). HPLC: (Metoda B) RT.: 5,89 min, 99,5%, (Maks.), 99,1% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,4 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 7,28-7,16 (m, 5H), 6,8 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 3,32-3,14 (m, 2H), 2,9 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 2,46-2,45 (m, 1H), 2,0 (t, J = 4,0 Hz, 2H), 1,7 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 1,63-1,57 (m, 2H), 1,1 (t, J= 12,0 Hz, ЗН).
PRIMER 5-6: Dobijanje 5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)-N-propiltiazol-2-amina [0232] 5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)-N-propiltiazol-2-amin je pripremljen na način sličan onom opisanom za N-etil-5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amin (primer 5-5), polazeći od terc-butil (5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)karbamata i 1-jodpropana. Prinos: 14% (8 mg, beličast čvrst ostatak). LC/MS: (Metoda B) 316,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,59 min, 99,6%, (Maks.), 99,2% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,4 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,28-7,14 (m, 5H), 6,8 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 3,13-3,08 (m, 2H), 2,9 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 2,45-2,42 (m, 2H), 2,01-1,96 (m, 2H), 1,73-1,70 (m, 2H), 1,64-1,48 (m, 4H), 0,9 (t, J= 12,0 Hz, ЗН).
PRIMER 5-9: Dobijanje N-metil-N-(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0233] Nastavno Primeru 5a, u mešani rastvor N-metil-5-((4-fenilpiperidin-lil)metil)tiazol-2-amina (50 mg, 1 ekv.) u piridinu (3 mL) na 0°C dodat je acetil hlorid (0,05 mL, 6 ekv.) i DMAP (katalitička količina). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 12h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dodata je voda i proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je osušena iznad Na2SO4, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući trifluoracetatnu so N-metil-N-(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 13% (10 mg). LC/MS: (Metoda A) 330,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,91 min, 98,9%, (Maks.), 95,0% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,32-7,21 (m, 4H), 7,17-7,14 (m, 1H), 3,7 (s, 2H), 3,6 (s, ЗН), 2,9 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,49-2,45 (m, 1H), 2,4 (s, ЗН), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,73-1,60 (m, 4H).
2
PRIMER 5-10: Dobijanje 1 -metil-3-(5-((4-fenilpiperidm-l-il)metil)tiazol-2-iI)uree [0234] Nastavno Primeru 1, u mešani rastvor 5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amin hidrohlorida (400 mg, 1 ekv.) u suvom THF (5 mL) na 0°C dodati su Et3N (261 mg, 2,0 ekv.) i fozgen (0,35 ekv.). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 30 min. Reakciona smeša je ponovo ohlađena na 0°C, i zatim tretirana sa CH3NH2u THF (2M, 1,2 ekv,). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. tokom 2h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dodata je voda i proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom . Ostatak je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući trifluoracetatnu so 1-metil-3-(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)uree kao svetlo žut čvrsti ostatak. Prinos: 5% (16 mg). LC/MS: (Metoda A) 331,0 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,87 min, 95,2%, (Maks.), 95,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,2 (s, 1H), 7,28-7,22 (m, 4H), 7,18-7,14 (m, 1H), 7,1 (s, 1H), 6,4 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,6 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,67-2,66 (m, ЗН), 2,46-2,43 (m, 1H), 2,05-2,02 (m, 2H), 1,73-1,57 (m, 4H).
PRIMER 5-13: Dobijanje N-[5-(4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-oksazol-2-il]-acetamida [0235] Korak 1: Nastavno Primer u 5b, korak 4, u rastvor terc-butil (5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)oksazol-2-il)karbamata (80 mg, 1 ekv.) u suvom DCM (10 mL) na 0°C dodati su DMAP (12 mg, 0,5 ekv.) i acetil hlorid (0,02 mL, 1,5 ekv.). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. tokom 12h. Po završetku reakcije, reakcionoj smeši je dodata ledeno hladna voda i ekstrahovana je sa DCM. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući terc-butil acetil(5-((4- fenilpiperidin-l-il)metil)oksazol-2-il)karbamat kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 48% (80 mg). LC/MS: (Metoda A) 400,2 (M+H).
[0236] Korak 2: U rastvor terc-butil acetil(5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)oksazol-2-il)karbamata (1 ekv) u suvom 1,4-dioksan (5 mL) na 0°C dodat je dioksan/HCl (1 mL). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na s.t. tokom 2 h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut preparativnoj HPLC dajući trifluoracetatnu so N-(5-((4-fenilpiperidin-lil)metil)oksazol-2-il)acetamida kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 19% (12,2 mg).
LC/MS: (Metoda A) 300,3 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,36 min, 97,5%, (Maks.), 98,7% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,1 (s, 1H), 7,28-7,14 (m, 5H), 6,9 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 2,9 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,41-2,40 (m, 1H), 2,09-1,99 (m, 5H), 1,73-1,57 (m, 4H).
PRIMER 6-17: Dobijanje l-[5-(4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-propan-2-ona [0237] Nastavno Primeru 1-7, u mešani rastvor 2-metil-5-((4-fenilpiperidin-lil)metil)tiazola (200 mg, 0,73 mmol) u suvom THF na -78°C dodat je n-BuLi (1,6 M u heksanu, 0,5 mL, 0,807 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana 15 min. Potom je dodat EtOAc (0,12 mL, 1,7 ekv.) i ostavljena da se meša na -78°C tokom 3 h. Po završetku reakcije, reakcionoj smeši je dodat zasićen, vodeni rastvor NH4Cl, ekstrahovana sa DCM (10 mL), osušena, i uparena pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni dajući svetlo žut čvrsti ostatak. Prinos: 35% (75 mg). LC/MS: (Metoda A) 315,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,66 min, 93,7%, (Maks.), 90,7% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,54 (s, 1H), 7,28-7,14 (m, 5H), 4,21 (s, 2H), 3,70 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,46-2,45 (m, 1H), 2,19 (s, ЗН), 2,08-2,03 (m, 2H), 1,73-1,65 (m, 4H).
PRIMER 6-18: Dobijanje l-[5-(4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-butan-2-ona [0238] Nastavno Primeru 1-7, u mešani rastvor 2-metil-5-((4-fenilpiperidin-liI)metil)tiazola (150 mg, 0,5 mmol) u suvom THF na -78°C dodat je n-BuLi (1,6 M u heksanu, 0,5 mL, 0,807 mmol) i mešan 15 min. Potom je dodat metil propionat (0,12 mL, 1,1 mmol) i reakciona smeša je ostavljena da se meša na -78°C tokom 3 h. Po završetku reakcije, reakcionoj smeši je dodat zasićen vodeni rastvor NH4C1, smeša je ekstrahovana sa DCM (10 mL), osušena i uparena pod sniženim pritiskom. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni dajući svetli žut čvrst ostatak. Prinos: 44% (57 mg). LC/MS: (Metoda A) 329,0 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,96 min, 98,7%, (Maks.), 97,7% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,54 (s, 1H), 7,28-7,16 (m, 5H), 4,19 (s, 2H), 3,70 (s, 2H), 2,94-2,91 (m, 2H), 2,59-2,43 (m, ЗН), 2,08-2,02 (m, 2H), 1,73-1,65 (m, 4H), 1,84 (t, J = 4,0 Hz, ЗН).
4
PRIMER 7-2: Dobijanje metil estra [5-(4-feniI-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-karbaminske kiseline
[0239] Metil estar [5-(4-Fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-karbaminske kiseline je pripremljen na način sličan onom opisanom u Primer 5-1, uz dodatak detalja iz Sheme 7.
PRIMER 7-11: Dobijanje N-[5-(4-fenil-piperidin-l-ilmetil)-tiazol-2-il]-metansulfonamida
[0240] U mešani rastvor 5-((4-fenilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-amin hidrohlorida (20 mg, 1 ekv.) u piridinu (2 mL) na 0°C dodati su metan sulfonil hlorid (10 mg, 1,1 ekv.) i DMAP (katalitička količin). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na s.t. tokom 3h. Po završetku reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dodata je voda. Proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organska faza je osušena iznad natrijum sulfata, profiltrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut brzoj fleš hromatografiji dajući N-[5-(4-fenilpiperidin-l- ilmetil)-tiazol-2-il]-metansulfonamid kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 80% (19,4 mg). LC/MS: (Metoda A) 352,2 (M+H). HPLC: (Metoda A) RT.: 2,55 min, 94,2%, (Maks.), 92,0% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,2 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 6H), 3,5 (s, 2H), 2,96-2,87 (m, 5H), 2,09-2,04 (m, 2H), 1,75-1,62 (m, 4H).
PRIMER 8: Dobijanje N-(5-(l-(4-fenilpiperidin-l-il)etil)tiazol-2-il)acetamida (jedinjenje br.40)
[0241] Korak 1: U mešani rastvor N-(5-formil-tiazol-2-il)-acetamida (1 g, 0,58 mmol) u suvom THF (20 mL) na -78°C dodat je MeMgBr (11,7 mL, 11,7 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. tokom 5 h. Po završetku reakcije, reakcionoj smeši je dodat zasićen vodeni rastvor NH4C1 i smeša je potom ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je odvojen i osušen iznad Na2SO4, profiltriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući sirov proizvod, N-[5-(l-Hidroksi-etil)-tiazol-2-il]-acetamid, koji je upotrebljen u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja.
<1>H NMR: (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,90 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 5,47 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 4,92-4,86 (m, 1H), 2,10 (s, ЗН), 1,40 (d, J = 4,5 Hz, ЗН).
[0242] Korak 2: U mešani rastvor N-[5-(l-hidroksi-etil)-tiazol-2-il]-acetamida (0,27 g, 1,34 mmol) u suvom THF (10 mL) dodati su PPh3(0,52 g, 1,20 mmol) i DIAD (0,4 mL, 2,01 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t. u trajanju od 12h. Po završetku reakcije, reakcionoj smeši je dodata H2O i ekstrahovana je sa DCM. Organski sloj je odvojen, osušen sa Na2SO4, profiltriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na koloni dajući N-(5-(l-(4-fenilpiperidin-l-il)etil)tiazol-2-il)acetamid kao bezbojna lepljiva tečnost. Prinos: 54% (22 mg). LC/MS: (Metoda A) 330,2 (M+H). HPLC: Metoda A) RT.: 2,83 min, 98,5%, (Maks.), 98,8% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,91 (s, 1H), 7,29-7,14 (m, 6H), 3,97-3,92 (m, 1H), 2,96-2,81 (m, 2H), 2,50-2,49 (m, 1H), 2,20-2,10 (m, 5H), 1,76-1,60 (m, 4H), 1,32-1,29 (m, ЗН).
PRIMER 9: Shema 9 (Procedura C) - Opšta procedura za adiciju amina na intermedijere 5-(hlormetil)tiazol-2-ila
[0243] U mešani rastvor amina (0,5 do 1,2 ekv.) u suvom acetonitrilu (5 do 10 mL), dodati su (5-(hlormetil)tiazol-2-il) intermedijer (1 do 2 ekv.) i TEA ili DIPEA (2 do 4 ekv.) na st. Dobijeni rastvor je zagrevan na 80°C tokom 6 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i dobijeni ostatak je razblažen sa DCM (20 do 50 mL). Sloj DCM je ispran sa rastvorom soli (5 do 10 mL), vodom (5 do 10 mL), osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, kristalizacijom i precipitacijom dajući čist proizvod.
<1>Н NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,10 (s, 1H), 4,24 (q, J = 6,2, 2H), 2,17 (s, ЗН), 1,26 (t, J = 6,2 Hz, ЗН).
[0246] Korak 2: U mešani rastvor etil 2-acetamidotiazol-5-karboksilata (4,0 g 18,6 mmol) u suvom toluenu (110 mL), pažljivo na 0°C je dodat litijum trietilborohidrid (36,0 mL, 37,3 mmol, 1 M rastvor u THF). Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 2 h. Završetak reakcije je praćen sa TLC. Reakcionoj smeši je dodat MeOH (2,0 mL). Dodata je voda (20 mL) i rastvor je mešan 10 min. Dva sloja su odvojena i vodeni sloj je ispran heksanom (3 х 25 mL). Vodeni sloj je zakišeljen dodatkom AcOH (4 mL). Dobijeni talog je regenerisan filtracijom, ispran vodom (10 mL) i heksanom (20 mL) dajući N-(5-(hidroksimetil)tiazol-2-il)acetamid kao belu čvrstu supstancu.
Prinos:
84% (2,7 g). LCMS: (Metoda C) 173,0 (M+H), RT.2,02 min, 99,89% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,86 (s, 1H), 7,23 (br.s, 1H), 5,32 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 2,09 (s, ЗН).
[0247] Korak 3: U mešani rastvor N-(5-(hidroksimetil)tiazol-2-il)acetamida (10,0 g, 58,1 mmol) u suvom DCM (27 mL), pažljivo na 0°C je dodat tionil hlorid (12,9 mL, 174,4 mmol) i refluksovano 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ko-destilovan sa DCM (2 х 50 mL) i Et2O (50 mL) dajući N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid kao svetlo žut čvrsti ostatak. Prinos: 92% (10,2 g). LCMS: (Metoda C) 187,0 (M+H), RT.1,77 min, 90,36% (Maks.) (analitički uzorak je priremljen u MeOH, pri čemu je formiran metoksi adukt koji se vidi u MS).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,18 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 5,02 (s, 2H), 2,14 (s, ЗН).
PRIMER 9-46: Dobijanje N-(5-((4-(4-hlorbenzil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0248] N-(5-((4-(4-hlorbenzil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamid je sintetisan prema opštoj proceduri C, od N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (139 mg, 0,73 mmol), 4-[(4-hlorfenil) piperidin hidrohlorida (150 mg, 0,61 mmol, HDH Phanna), DIPEA (315 mg, 2,44 mmol) i ACN (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen sa Prep. HPLC (Metoda C) dajući očekivano jedinjenje kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 9% (20 mg). LC/MS: (Metoda C) 364,0 (M+H). HPLC: (Metoda C) RT.3,40 min, 95,9% (Maks.), 97,1% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,93 (s, 1H), 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,19 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 7,1 (s, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,58-2,51 (m, 2H), 2,11 (s, ЗН), 1,88-1,83 (m, 2H), 1,51-1,45 (m, ЗН), 1,24-1,15 (m, 2H).
PRIMER 9-48: Dobijanje N-(5-((4-(4-fluorbenzil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0249] Jedinjenje iz naslova je sintetisano prema opštoj proceduri C, koristeći N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid (300 mg, 1,57 mmol), 4-[(4-fluorfenil) metilpiperidin (152 mg, 0,786 mmol, ISDI Inc. Chemicals), TEA (636 mg, 6,29 mmol) i ACN (4,5 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući traženo jedinjenje kao žut čvrst ostatak. Prinos: 15% (84 mg). LC/MS: (Metoda C) 348,0 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.3,07 min, 97,6% (Maks.), 95,6% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,93 (s, 1H), 7,21-7,16 (m, ЗН), 7,01-7,05 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,50-2,47 (m, 2H), 2,10 (s, ЗН), 1,88-1,82 (m, 2H), 1,52-1,44 (m, ЗН), 1,19-1,15 (m, 2H).
PRIMER 9-55: Dobijanje N-(5-((4-(4-metoksibenzil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0250] Jedinjenje iz naslova je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (240 mg, 1,24 mmol), 4-(4-metoksibenzil)piperidin hidrohlorida (300 mg, 1,24 mmol, Gencore Biopharma), DIPEA (518 mg, 3,73 mmol) i ACN (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući traženo jedinjenje kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 5% (22 mg). LC/MS: (Metoda C) 360,2 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.2,93 min, 97,6% (Maks.), 96,5% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,92 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,71 (s, ЗН), 3,56 (s, 2H), 2,81-2078 (m, 2H), 2,42 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 2,11 (s, ЗН), 1,88-1,82 (m, 2H),1,52-1,40 (m, ЗН), 1,15-1,13 (m, 2H).
rastvoren u vodi (50 mL) u kapima na 0°C i reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 min. Zatim je dodat bakar(I)bromid (6,66 g, 46,45 mmol) u 48% HBr (75 mL) u kapima na 0°C i dobijena reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 4 h.
Reakciona smeša je razblažena sa DCM (200 mL) i isprana vodom (50 mL), rastvorom soli (50 mL), osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom . Dobijen sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom (100% CHCl3) dajući etil 2- bromotiazol-5-karboksilat kao žutu tečnost. Prinos: 50% (5,5 g). LCMS: (Metoda A) 235,9 (M+H), RT.3,85 min, 98,6% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,16 (s, 1H), 4,38 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,39 (t, J = 7,1 Hz, ЗН).
[0253] Korak 2: U mešani rastvor etil 2-bromotiazol-5-karboksilata (0,75 g, 3,17 mmol) u suvom DMF (6 mL), dodati su 2-oksapiperazin (0,318 g, 3,17 mmol) i trietil amin (0,642 g, 6,3 mmol) na sobnoj temperaturi i reakciona smeša je mešana na 90°C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i dobijeni sirov proizvod je rastvoren u 5% MeOH-DCM. Organski sloj je ispran vodom, rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan dajući etil 2-(3-oksopiperazin-l-il)tiazol-5- karboksilat kao beličast čvrst proizvod. Prinos: 75% (0,61 g). LCMS: (Metoda A) 256,0 (M+H), RT. 2,38 min, 99,4% (Maks.).
<1>Н NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,26 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 4,24-4,17 (m, 2H), 4,00 (s, 2H), 3,70-3,67 (m, 2H), 3,35-3,30 (m, 2H), 1,23 (t, J = 7,0 Hz, ЗН).
[0254] Korak 3: U mešani rastvor etil 2-(3-oksopiperazin-l-il)tiazol-5-karboksilata (0,5 g 1,95 mmol) u suvom THF (10 mL), pažljivo je dodat litijum trietilborhidrid (3,9 mL, 3,91 mmol, 1 M rastvor u THF) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 2 h. Završetak reakcije je praćen sa TLC. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C i dodat je metanol (10 mL) i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući 4-(5-(hidroksimetil)tiazol-2-il)piperazin-2-on kao beličast čvrst proizvod. Prinos: 50% (210 mg). LCMS: (Metoda A) 214,0 (M+H), RT.0,39 min, 92,9% (Maks.).
<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,13 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,26-5,22 (m, 1H), 4,42 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,87 (s, 2H), 3,58-3,54 (m, 2H).
[0255] Korak 4: U mešani rastvor 4-(5-(hidroksimetil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona (180 g, 0,84 mmol) u suvom DCM (1,8 mL), pažljivo je dodat tionil hlorid (0,12 mL, 1,68 mmol) na 0°C i rastvor refluksovan 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ko-destilovan sa DCM ( 2x10 mL) dajući 4(5-(hlonTietil)tiazol-2-il)piperazm-2-on kao žutu gumu i koji je upotrebljen u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 92% (0,18 g). LCMS:
(Metoda A) 228,0 (M+H, MeOH adduct), RT.0,85 min, 84,7% (Maks.).
PRIMER 9-59: Dobijanje 4-(5-((4-(l-(Benzo[d][l ,3]dioksol-5-il)etil)piperazin-lil)metil)tiazol-2-il)piperazin-2-ona
[0256] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, sa 4-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)piperazin-2-onom (0,18 g, 1,17 mmol), 1-(1-(benzo[d][l,3]dioksol-5-il)etil)piperazin hidrohloridom (0,139 g, 0,62 mmol), TEA
(0,235 g, 2,33 mmol) i ACN (3,6 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom pri čemu je dobijeno jedinjenje iz naslova kao beličast čvrst
proizvod. Prinos: 24% (87,49 mg). LC/MS: (Metoda C) 430,0 (M+H), HPLC:
(Metoda C) RT 1,86 min, 97,1% (Maks.), 98,2% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7,06 (s, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,83 (s, 2H), 5,97 (s, 2H), 4,06 (s, 2H), 3,71-3,68 (m, 5H), 3,48-3,46 (m, ЗН), 2,85-2,52 (m, 7H), 1,50 (s, ЗН).
PRIMER 9-61: Dobijanje N-(5-((4-fenoksipiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida [0257] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5- (hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (500 mg, 2,9 mmol), 4-fenoksipiperidina (250 mg,
1.45 mmol, Gencore Biopharma), TEA (1,17 g, 11,62 mmol) i ACN (8 mL). Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni dajući jedinjenje iz naslova kao
žutu čvrstu supstancu. Prinos: 5% (43 mg). LC/MS: (Metoda A) 332,0 (M+H),
HPLC: (Metoda A) RT.2,77 min, 96,8% (Maks.), 95,1% (254nm).
<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,27-7,23 (m, ЗН), 6,93-6,87 (m,
ЗН), 4,38-4,35 (m, 1H), 3,64 (s, 2H), 2,69-2,66 (m, 2H), 2,31-2,23 (m, 2H), 2,10 (s,
ЗН), 1,93-1,90 (m, 2H), 1,63 (m, 2H).
PRIMER 9-62: Dobijanje N-(5-((4-fenetilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0258] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5- (hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (500 mg, 2,9 mmol), 4-fenetilpiperidina (270 mg,
1.45 mmol, Fchemicals), TEA (1,17 g, 11,62 mmol) i ACN (8 mL). Sirov proizvod
je prečišćen titracijom dajući jedinjenje iz naslova kao braon čvrstu supstancu.
Prinos: 12% (12 mg). LC/MS: (Metoda C) 344,2 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.
3,45 min, 98,9% (Maks.), 96,7% (254 nm).
[0260] Korak 1: U mešani rastvor 5-(brommetil)benzo[d][l,3]dioksola (1 g, 4,65 mmol) u toluenu (10 mL), dodat je trifenil fosfin (1,2 g, 4,65 mmol). Reakciona smeša je refluksovana 2 h. Završetak reakcije praćen je sa TLC. Potom je reakciona smeša koncentrovana u vakuumu i triturisana dodatkom dietil etra. Dobijeni čvrsti ostatak je profiltriran, ispran dietil etrom, osušen i upotrebljen u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Izolovan je (benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetil)bromtrifenilfosfan kao bela čvrsta suspstanca. Prinos: 82% (1,8 g). LCMS: (Metoda C) 397,0 (M-Br), RT.4,21 min, 97,2% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,94-7,90 (m, ЗН), 7,79-7,74 (m, 6H), 7,70-7,64 (m, 6H), 6,81-6,79 (m, 1H), 6,47-6,44 (m, 2H), 5,98 (s, 2H), 5,07-5,03 (m, 2H).
[0261] Korak 2: U mešani rastvor (benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetil)bromotrifenilfosfana (1,0 g, 4,65 mmol) u THF (10 mL), dodat je kalijum terc-butoksid (423 mg, 3,77 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 2 h. Dodat je 1-boc piperidin-4-on (375 mg, 1,88 mmol) u THF (10 mL) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 2 h. Završetak reakcije praćen je sa TLC. Potom je reakciona smeša koncentrovana u vakuumu i sirova smeša je rastvorena u etil acetatu, isprana vodom, osušena iznad natrijum sulfata i uparena. Prečišćena je brzom fleš hromatografijom dajući terc-butil 4-(benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetilen)piperidin-lkarboksilat kao svetlo braon čvrsti ostatak. Prinos: 58%. LCMS: (Metoda C) 262,0 (M-t-Bu+H), RT.5,58 min, 95,9% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6,88 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,69 (dd, J = 1,2, 8,0 Hz, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,00 (s, 2H), 3,39 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,33-3,31 (m, 2H), 2,37 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,24 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).
1
[0262] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetilen)piperidin-l-karboksilata (350 mg, 1,10 mmol) u metanolu (10 mL), dodat je 10% Pd/C (100 mg). Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Zatim je profiltrirana kroz celit, koncentrovana u vakuumu i sirova smeša je potom upotrebljena u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Izolovan je terc-butil 4-(benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetil)piperidin -1-karboksilat kao beličast čvrst proizvod . Prinos: 80% (280 mg). LCMS: (Metoda C) 264,0 (M-t-Bu+H), RT. 5,61 min, 95,7% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6,80-6,74 (m, 2H), 6,60-6,57 (m, 1H), 5,94 (s, 2H), 3,90-3,86 (m, 2H), 2,71-2,49 (m, 2H), 2,41-2,38 (m, ЗН), 1,52-1,48 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 0,98-0,94 (m, 2H).
[0263] Korak 4: Terc-butil 4-(benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetil)piperidin-l-karboksilat (280 mg, 319,4 mmol) je rastvoren u rastvoru HCl u dioksanu (1 mL, 4 M).
Reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 1 h. Po završetku reakcije, koncentrovana je pod sniženim pritiskom dajući hidrohloridnu so, 4-(benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetil)piperidin hidrohlorid kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 99% (220 mg).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6,82-6,76 (m, 2H), 6,63-6,58 (m, 1H), 5,97 (s, 2H), 3,94-3,89 (m, 2H), 2,73-2,51 (m, 2H), 2,41-2,38 (m, ЗН), 1,52-1,48 (m, 2H), 0,98-0,94 (m, 2H).
PRIMER 10-47: Dobijanje N-(5-((4-(benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetil)piperidin-lil)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0264] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (149 mg, 0,78 mmol), 4-(benzo[d][l,3]dioksol-5-ilmetil)piperidin hidrohlorida (220 mg, 0,78 mmol), DIPEA (302 mg, 2,34 mmol) i DMF (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatograifjom dajući jedinjenje iz naslova kao svetlo braon čvrsti proizvod. Prinos: 7% (20 mg). LCMS: (Metoda C) 374,0 (M+H). HPLC: (Metoda C) RT.2,91 min, 95,9% (Maks.), 97,1% (254 nm).
<1>HNM R (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,93 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,79 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,59 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,95 (s, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,41-2,40 (m, 2H), 2,11 (s, ЗН), 1,85-1,77 (m, 2H), 1,53-1,41 (m, ЗН), 1,18-1,10 (m, 2H).
2
[0266] Korak 1: U l-(brommetil)-4-(trifluormetil)benzen (4,0 g, 16,7 mmol), dodat je trietil fosfit (3,7 mL, 22,0 mmol) na sobnoj temperaturi i smeša je refluksovana na 150°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena i uparena pod vakuumom. Sirov proizvod je upotrebljen u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Trietoksi(4-(trifluormetil)benzil)fosfonijum bromid je izolovan kao bezbojna tečnost. Prinos: 91% (6,1 g). LCMS: (Metoda C) 297,0 (M+H), RT.4,35 min, 96,92% (Maks.).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,66 (d, J=12,0 Hz, 2H), 7,48 (d, J=8,0 Hz, 2H), 3,97-3,94 (m, 6H), 2,49-2,48(m, 2H), 1,23-1,21 (m, 9H).
[0267] Korak 2: U mešani rastvor trietoksi(4-(trifluormetil)benzil)fosfonijum bromida (6,1 g, 15,0 mmol), 15-kruna-5 etra (0,27 g, 1,2 mmol) u suvom THF (35 mL), dodat je NaH (60%, 0,59 g, 14,4 mmol) na 0°C i mešano 1 h. Potom je dodat 1-Boc piperdin-4-on (2,5 g, 12,6 mmol) u THF (25 mL) na istoj temperaturi i smeša je mešana na s.t. preko noći. Reakcionoj smeši je dodata ledena voda i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (120 mL). Organski sloj je ispran sa 10% NaHCO3(20 mL), vodom (20 mL), rastvorom soli (15 mL) i osušen iznad Na3SO4 i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni dajući terc-butil 4-(4- (trifluormetil) benziliden)piperidin-1-karboksilat kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 84% (4,3 g). LCMS: (Metoda C) 242,0 (M+H), RT.6,24 min, 98,79% (Maks.).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,66 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,43 (s, 1H), 3,43-3,39 (m, 2H), 3,35-3,31 (m, 2H), 2,40-2,36 (m, 2H), 2,31-2,28 (m, 2H), 1,22 (s, 9H).
[0268] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(4-(trifluormetil) benziliden)piperidin-1-karboksilata (3,8 g, 11,1 mmol) u suvom MeOH (100 mL), dodat je Pd/C (0,380 g, 10%) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana pod u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim profilitrirana kroz celit i koncentrovana dajući terc-butil 4-(4-(trifluormetil)benzil)piperidin-lkarboksilat kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 84% (3,2 g). LCMS: (Metoda C) 244,0 (М+Н), RT.6,25 min, 99,66% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,09-4,05 (m, 1H), 3,89-3,86 (m, 2H), 3,20-3,14 (m, 2H), 2,59-2,57 (m, 4H), 1,51-1,47 (m,2H), 1,36 (s, 9H).
[0269] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-(4-(trifluormetil)benzil)piperidin-lkarboksilata (3,2 g, 9,3 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL), dodat je rastvor HCl u dioksanu (30 mL, 4 M) na s.t. i rastvor je mešan 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni sirov proizvod je ispran dietil etrom i upotrebljen kao takav bez dodatnog prečišćavanja u sintezi PRIMERA 10-49, Izolovan je 4-(4-(trifluonnetil)benzil)piperidin hidrohlorid kao beličast čvrst proizvod. Prinos: 85% (2 g). LCMS: (Metoda C) 244,0 (M+H), RT.3,41 min, 99,20% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3,36 (m, 2H), 2,77-2,73 (m, ЗН), 2,61 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 1,84-1,81 (m, 1H), 1,68-1,63 (m, 2H), 1,39-1,35 (m, 2H).
PRIMER 10-49: Dobijanje N-(5-((4-(4-(trifluonnetil)benzil)piperidin-l -il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0270] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (490 mg, 2,57 mmol), 4-(4-(trifluormetil)benzil)piperidin hidrohlorida (600 mg, 2,15 mmol), DIPEA (867 mg, 6,89 mmol) i ACN (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući jedinjenje iz naslova kao braon čvrst proizvod. Prinos: 1% (8 mg). LC/MS: (Metoda C) 398,0 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.3,71 min, 97,6% (Maks.), 96,9% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): б 11,93 (s, 1H), 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,21 (s, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,59 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 2,11 (s, ЗН), 1,88-1,83 (m, 2H), 1,52-1,49 (m, ЗН), 1,23-1,18 (m, 2H).
4
Reakciona smeša je ohlađena na s.t. i uparena pod vakuumom. Sirov proizvod je upotrebljen u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Izolovan je trietoksi (3-fluorbenzil)fosfonijum bromid kao bezbojna tečnost. Prinos: 76% (3,2 g). LCMS: (Metoda C) 247,0 (M-Et-Br+H), RT.3,67 min, 97,58% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,35-7,34 (m, 1H), 7,10-7,09 (m, ЗН), 3,96-3,95 (m, 6H), 3,31-3,24 (m, 2H), 1,23-1,20 (m, 9H).
[0273] Korak 2: U mešani rastvor trietoksi (3-fluorbenzil)fosfonijum bromida (3,2 g, 9,03 mmol) i 15-kruna-5 etra (0,16 g, 0,7 mmol) u suvom THF (25 mL), dodat je NaH (60%, 0,33 g, 8,1 mmol) na 0°C i mešan 1 h. Potom je dodat rastvor 1-boc piperdin-4- ona (1,5 g, 7,71 mmol) u THF (15 mL) i smeša je mešana na s.t. preko noći. Reakcionoj smeši je dodata ledena voda, pa je ekstrahovan etil acetatom (100 mL). Organski sloj je ispran sa 10% NaHCO3(20 mL), vodom i rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni dajući terc-butil 4-(3-fluorbenziliden)piperidin-1-karboksilat kao bezbojnu tečnost. Prinos: 55% (1,5 g). LCMS: (Metoda C) 192,2 (M-Boc+H), RT.5,79 min, 98,67% (Maks.).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): б 7,38-7,36 (m, 1H), 7,07-7,02 (m, ЗН), 6,3 (s, 1H), 3,42-3,40 (m, 2H), 3,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,40-2,39 (s, ЗН), 2,40-2,39 (s, ЗН). 2,40-2,37 (s, 2H).2,30-2,27 (s, 2H), 1,41 (s, 9H).
[0274] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(3-fluorbenziliden)piperidin-lkarboksilata (1,5 g, 11,1 mmol) u suvom MeOH (75 mL), dodat je Pd/C (0,150 g, 10%) u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Profiltriran je kroz celit, koncentrovan, dajući terc-butil 4-(3-fluorbenzil)piperidin-l-karboksilat kao bezbojnu tečnost. Prinos: 73% (1,1 g). LCMS: (Metoda C) 194,2 (M-Boc+H), RT.5,82 min, 98,76% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,33-7,25 (m, 1H), 7,01-6,96 (m, ЗН), 3,90-3,58 (m, 2H), 2,61-2,51 (m, 4H), 1,76-1,65 (m, ЗН), 1,30 (s, 9H) 0,90-0,81 (m, 2H).
[0275] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-(3-fluorbenzil)piperidin-l-karboksilata (1,1 g, 3,7 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL), dodat je rastvor HCl u dioksanu (10 mL, 4 m) na s.t. i smeša je mešana 2 h. Zatim je koncentrovana. Sirov proizvod je ispran dietil etrom (5 mL) i upotrebljen kao takav bez dodatnog prečišćavanja za sintezu PRIMERA 10-50. Izolovan je 4-(3-fluorbenzil)piperidin hidrohlorid kao beličast čvrst proizvod. Prinos: 90% (0,9 g). LCMS: (Metoda C) 194,0 (M+H), RT.2,77 min, 90% (Maks.).
<1>н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,35-7,28 (m, 1H), 7,04-6,98 (m, ЗН), 3,21-3,16 (m, 2H), 2,79-2,71 (m, 2H), 2,51 (d, J = 9,4Hz, 2H), 1,81-1,75 (m, 1H), 1,68-1,63 (m, 2H) 1,30-1,25 (m, 2H).
PRIMER 10-50: Dobijanje N-(5-((4-(3-fluorbenzil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0276] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (300 mg, 1,57 mmol), 4-(3-fluorbenzil)piperidin hidrohlorida (350 mg, 1,53 mmol), DIPEA (740 mg, 4,6 mmol) i ACN (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući traženo jedinjenje kao braon čvrstu susptancu. Prinos: 13% (67 mg). LC/MS: (Metoda C) 348,2 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.3,09 min, 98,5% (Maks.), 96,1% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,93 (s, 1H), 7,33-7,27 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,01-6,97 (m, ЗН), 3,57(s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,51-2,50 (m, 2H), 2,11 (s, ЗН),1,89-1,84 (m, 2H),1,52-1,49 (m, ЗН),1,21-1,13 (m, 2H).
[0279] Korak 2: U mešani rastvor terc-butil 4-benziliden-2-metilpiperidin-lkarboksilata (1,4 g, 4,87 mmol) u suvom MeOH (10 mL), dodat je Pd/C (200 mg, 10%, Aldrich) pod azotom. Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana i osušena pod vakuumom dajući terc-butil 4-benzil-2-metilpiperidin-l-karboksilat kao braon tečnost. Prinos: 80% (1,2 g). LCMS: (Metoda C) 234 (M-t-Bu+H), RT.6,07 min, 96,68% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): б 7,26-7,24 (m, 2H), 7,27-7,23 (d, ЗН), 3,68-3,51 (m, 1H), 3,51-3,49 (d, 1H), 3,33-3,11 (m, 1H), 2,58-2,55 (m, 1H), 2,47-2,44 (m, 1H), 1,76-1,55 (m, 4H),1,35 (s, 9H),l,12(s, ЗН), 0,98-l,01(m, 1H).
[0280] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-benzil-2-metilpiperidin-l-karboksilata (1,2 g, 4,15 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL), dodat je HCl rastvor u dioksanu (20 mL, 4 M) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana. Sirov proizvod je ispran dietil etrom (5 mL) i upotrebljen kao takav u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja u sintezi PRIMERA 10-51. Izolovan je 4-benzil-2-metilpiperidin hidrohlorid kao svetlo plava čvrsta supstanca. Prinos: 98% (0,85 g). LCMS: (Metoda C) 190,02 (M+H), RT.2,79 mm, 95,04% (Maks.).
PRIMER 10-51: Dobijanje N-(5-((4-benzil-2-metilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0281] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, koristeći N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid (300 mg, 1,57 mmol), 4-benzil-2-metilpiperidin hidrohlorid (350 mg, 1,56 mmol), DIPEA (740 mg, 4,6 mmol) i ACN (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni dajući jedinjenje iz naslova kao braon čvrsti ostatak. Prinos: 7% (32 mg). LC/MS: (Metoda C) 344,2 (M H), HPLC: (Metoda C) RT.3,11 min, 98,9% (Maks.), 97,2% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,93 (s, 1H), 7,28-7,22 (m, ЗН), 7,18-7,13 (m, ЗН), 3,95 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 3,55 (d, J = 14,0 Hz, 1H), 2,77-2,74 (m, 1H), 2,50-2,44 (m, 2H), 2,11 (br. s, 5H), 1,97-1,91 (m, 1H), 1,49-1,39 (m, ЗН), 1,08-1,06 (m, 4H).
PRIMER l0g: Dobijanje 4-benzil-3-fluorpiperidin hidrohlorida (intermedijer)
[0282]
[0283] Korak 1: U mešani rastvor 1 -boc piperidin-4-ona (20,0 g, 0,10 mol, spektrohemijski) u suvom DMF (50 mL) dodat je trietil amin (33,5 mL, 0,24 mol) pa zatim trimetil silil hlorid (15,2 g, 0,12 mol, chempure), reakciona masa je dodata u dobro zatvoren sud i zagrevana na 80°C tokom 20 h. Reakciona masa je uparena, rastvorena u etil acetatu, isprana vodom, osušena iznad natrijum sulfata i uparena. Sirov proizvod je upotrebljen u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja.
Izolovan je terc-butil 4-((terc-butilsilil)oksi)-3,6-dihidropiridin-l(2H)-karboksilat kao braon tečnost. Prinos: 92% (25,0 g).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 3,98-3,95 (m, 1H), 3,72 (t, J = 8,16 Hz, 2H), 2,96-2,89 (m, 1H), 1,51-1,47 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 0,16 (s, 9H).
[0284] Korak 2: U mešani rastvor terc-butil 4-((terc-butilsilil)oksi)-3,6-dihidropiridin- 1 (2H)-karboksilata (25,0 g, 0,09 mol) u suvom acetonitrilu (200 mL) dodat je 1- (hlormetil)-4-fluor-l ,4-diazoniabiciklo[2,2,2]oktan ditetrafluorborat (select fluor) (35,8 g, 0,101 mol). Reakciona masa je mešana na s.t. tokom 1h.
Reakciona masa je razblažena dodatkom etil acetata, isprana vodom, osušena iznad natrijum sulfata i uparena. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni dajući terc- butil 3-fluor-4-oksopiperidin-l-karboksilat kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 73%
(8,1 g). LCMS: (Metoda C) 118,2 (M-Boc+H), RT.2,53 min, 96,5% (ELSD).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,92-4,89 (m, 1H), 4,76-4,73 (m, 1H), 4,21-4,17 (m, 1H), 3,30-3,20(m, 2H), 2,60-2,45 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
[0285] Korak 3: U mešani rastvor benziltrifenilfosfonijum bromida (10,0 g, 18,3 mmol) u suvom THF (20 mL), dodat je kalijum terc-butoksid (2,0 g, 9,21 mmol) na s.t. i u trajanju od lh. Zatim je dodat terc-butil 3-fluor-4-oksopiperidin-l-karboksilat (1,8 g, 18,3 mmol) na istoj temperaturi i reakciona smeša je mešana 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana. U dobijenu sirovu smešu, dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM (80 mL). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (5% EtOAc u heksanu) dajući terc-butil 4-benziliden-3-fluorpiperidin-l-karboksilat kao žut čvrst ostatak. Prinos: 57% (1,6 g).
<1>н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7, 39-7,32 (m, 2H), 7,30-7,24 (m, ЗН), 6,68 (s, 1H), 5,36 (d, J = 46 Hz, 1H), 4,43-4,07 (m, 2H), 3,11 -2,60 (m, 4H), 1,50 (s, 9H).
[0286] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-benziliden-3-fluorpiperidin-lkarboksilata (1,6 g, 5,4 mmol) u suvom MeOH (10 mL), dodat je Pd/C (200 mg, 10%, Aldrich) u azotu. Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2kg/cm<3>) na s.t. u trajanju od 2 h. Reakciona smeša je profiltrirana i koncentrovana. Dobijena sirova smeša je prečišćena brzom fleš hromatografijom (2 do 5 % EtOAc u petrol etru) dajući dva izomera. Ukupan prinos: 33%.
Prvi eluiran izomer: 14% (0,55 g, bezbojna tečnost).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,31-7,28 (m, 2H), 7,23-7,14 (m, ЗН), 4,08 (d, J = 13,2Hz, 1H), 2,68-2,61(m, 2H), 2,55 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,68-1,57 (m, ЗН), 1,46 (s, 9H), 1,27-1,15 (m, 2H).
Drugi eluiran izomer: 19% (0,29 g, bezbojna tečnost).<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6) Izomer 2: δ 7,32-7,29 (m, 2H), 7,23-7,13 (m, ЗН), 4,45 (d, J = 46,8Hz, 1H), 2,90-2,80 (m, 2H), 2,65-2,63(m, 2H), 2,54-2,50 (m, 2H), 1,37 (s, 9H), 1,37-1,36 (m, 2H). Drugi eluiran izomer je upotrebljen u narednom koraku.
[0287] Korak 5: U mešani rastvor terc-butil 4-benzil-3-fluorpiperidin-l-karboksilata (drugi eluirani izomer) (0,29 g, 1,5 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL), dodat je HCl rastvor u dioksanu (10 mL, 4 M) na s.t. i mešan tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni sirov proizvod je ispran dietil etrom (5 mL) i kao takav upotrebljen, kao pojedinačan izomer, u sintezi PRIMERA 10-52, Izolovan je 4-benzil-3-fluorpiperidin hidrohlorid kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 98% (0,18 g). LCMS: (Metoda C) 194,2 (M+H), RT.2,5-2,6 min, 95,3% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,42 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,33-7,14 (m, 5H), 4,77- 4,61 (s, 1H), 3,54-3,28 (m, 4H), 3,17-2,99 (m, 5H), 2,56-2,42 (m, 2H), 1,57-1,15 (m, 2H).
PRIMER 10-52: Dobijanje N-(5-((-4-benzil-3-fluorpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0288] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, koristeći N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid (190 mg, 0,98 mmol), 4-benzil-3-fluorpiperidin hidrohlorid kao pojedinačan izomer (150 mg, 0,65 mmol), DIPEA (125 mg, 1,98 mmol) i ACN (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom pa zatim sa MD Autoprep (Metoda B) dajući jedinjenje iz naslova kao braon čvrstu supstancu kao pojedinačan izomer. Prinos: 2% (15 mg). LCMS: (Metoda C) 348,0
[0290] Korak 1: U mešani rastvor benziltrifenilfosfonijum bromida u suvom THF (20 mL), dodat je kalijum terc-butoksid (2,0 g, 17,8 mmol) na s.t. i dobijena smeša je mešana 1 h. Zatim je dodat terc-butil 3-metil-4-oksopiperidin-l-karboksilat (2,0 g, 9,3 mmol) na s.t. i reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana. U dobijenu sirovu smešu, dodata je voda (20 mL) i smeša je ekstrahovana sa DCM (80 mL). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni dajući terc-butil 4- benziliden-3-metilpiperidin-l-karboksilat kao svetlo žutu tečnost. Prinos: 63% (1,7 g). LCMS: (Metoda C) 232,0 (M-t-Bu+H), RT.6,03 min, 95,27% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,34-7,29 (m, 2H), 7,21-7,17 (m, ЗН), 6,32 (s, 1H), 3,37-3,31 (m, 2H), 2,38-2,25 (m, 5H), 1,45 (s, 9H), 1,08 (d, J = 9,2 Hz, ЗН).
[0291] Korak 2: U mešani rastvor terc-butil 4-benziliden-3-metilpiperidin-lkarboksilata (1,7 g, 5,9 mmol) u suvom MeOH (10 mL), dodat je Pd/C (0,180 g, 10%). Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Reakciona smeša je profiltrirana i koncentrovana. Dobijeni sirov proizvod je upotrebljen kao takav u narednom koraku. Izolovan je terc-butil 4-benzil-3- metilpiperidin-l-karboksilat kao braon čvrst proizvod. Prinos: 82% (1,4 g).
LCMS: (Metoda C) 234,0 (M-t-Bu+H), RT.6,01 min, 60,01% (Maks.).
1Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,28-7,23 (m, 2H), 7,18-7,12 (m, ЗН), 2,97-2,93 (m, 2H), 2,48-2,47 (m, 2H), 1,88-1,83 (m, 2H), 1,40 (s, ЗН), 1,34-1,32 (m, 4H), 0,9 (d, J = 9,2 Hz, ЗН).
1
[0292] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-benzil-3-metilpiperidin-l-karboksilata (1,4 g, 4,8 mmol) u 1,4-dioksanu (80 mL), dodat je HCl rastvor u dioksanu (20 mL, 4 M) na s.t. i mešan je 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni sirov proizvod je ispran dietil etrom (5 mL) i upotrebljen kao takav u sintezi PRIMERA 10-53 bez dodatnog prečišćavanja. Izolovan je 4-benzil-3-metilpiperidin kao beličast čvrst proizvod. Prinos: 98% (0,85 g). LCMS: (Metoda C) 234,0 (M+H), RT.
2,85 min, 63,36% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,30-7,27 (m, 2H), 7,25-7,14 (m, ЗН), 3,02-2,82 (m, 4H), 2,56-2,54 (m, 2H), 1,89-1,88 (m, 2H), 1,60-1,40 (m, ЗН), 0,9 (d, J = 9,2 Hz, ЗН).
PRIMER 10-53: Dobijanje N-(5-((4-benzil-3-metilpiperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0293] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, koristeći N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid (400 mg, 2,1 mmol), 4-benzil-3-metilpiperidin hidrohlorid (300 mg, 1,3 mmol), DIPEA (740 mg, 4,6 mmol) i ACN (20 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući jedinjenje iz naslova kao beli čvrst proizvod. Prinos: 5% (21 mg). LC/MS: (Metoda D) 344,0 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.3,27 min, 98,7% (Maks.), 98,6% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,92 (s, 1H), 7,28-7,24 (m, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,18-7,16 (m, ЗН), 3,58 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,48 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 2,76-2,73 (m, 1H), 2,46-2,43 (m, ЗН), 2,11 (s, ЗН), 2,04-2,02 (m, 1H), 1,94-1,90 (m, 1H), 1,68 (br s, 2H), 1,42-1,37 (m, lH), 1,31-1,28 (m, 1H), 0,95-0,94 (d, J = 4,0 Hz, ЗН).
1 1
<1>н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,77 (d, J =10,68 Hz, 2H), 7,46(d, J = 10,68 Hz, 2H), 3,99-3,88 (m, 6H), 3,40 (s, 2H), 1,24-1,02 (m, 9H).
[0296] Korak 2: U mešani rastvor (4-cijanobenzil)trietoksifosfonijum bromida (3,1 g, 8,56 mmol), 15-kruna-5 etra (0,15 g, 0,68 mmol) u suvom THF (25 mL), dodat je NaH (60%, 0,31 g, 7,7 mmol) na 0°C i mešan je 1 h. Zatim je dodat 1-boc piperidin-4-on (1,43 g, 7,1 mmol) u THF (15 mL) i rastvor je mešan na s.t. preko noći.
Reakcionoj smeši je dodata voda i ekstrahovana etil acetatom (80 mL). Organski sloj je ispran sa 10% NaHCO3(10 mL), vodom (10 mL) i rastvorom soli (10 mL).
Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni dajući terc-butil 4-(4-cijanobenziliden)piperidin- 1-karboksilat kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 56% (4,3 g, bela čvrsta susptanca). LCMS: (Metoda C) 199,2 (M-Boc+H), RT.5,39 min, 98,42% (Maks.).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 6,42 (s, 1H), 3,38-3,35 (m, 4H), 2,34-2,32 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
[0297] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(4-cijanobenziliden)piperidin-lkarboksilata (1,4 g, 4,69 mmol) u suvom MeOH/THF (60 mL, 1:1), dodat je Pd/C (0,15 g, 10%) pod azotom. Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 1 h. Reakciona smeša je profiltrirana kroz celit, koncentrovana dajući terc-butil 4-(4-metilbenzil)piperidin-l-karboksilat kao beličast čvrst proizvod. Prinos: 78% (1,1 g). LCMS: (Metoda C) 190,2 (M-Boc+H), RT.6,11 min, 75,33% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,35-7,30 (m, 1H), 7,04-7,03 (m, ЗН), 3,86 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,59 (m,2H), 2,49-2,48 (m, ЗН), 2,23 (s, ЗН), 1,59-1,56 (m, ЗН), l,367(s, 9H).
[0298] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-(4-metilbenzil)piperidin-l-karboksilata (1,1 g, 3,6 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL), dodat je HCl rastvor u dioksanu (10 mL, 4 M) na s.t. i mešan je 2h. Reakciona smeša je koncentrovana. Sirova smeša je isprana dietil etrom (10 mL) dajući 4-(4-metilbenzil)piperidin kao beličast čvrst proizovd. Upotrebljen je kao takav u sintezi PRIMERA 10-54, Prinos: 88% (0,75 g). LCMS: (Metoda C) 190,2 (M+H), RT.3,00 min, 86,43% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,56 (s, 1H), 7,06-7,04 (m, 4H), 3,20-3,16 (m, ЗН), 2,76-2,72 (m, ЗН), 2,24 (s, ЗН), 1,72-1,63 (m, 4H), 1,35-1,32 (m, 2H).
1 2
PRIMER 10-54: Dobijanje N-(5-((4-(4-metilbenzil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0299] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, korsiteći N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid (290 mg, 1,53 mmol), 4-(4-metilbenzil)piperidin hidrohlorid (300 mg, 1,27 mmol), DIPEA (518 mg, 3,82 mmol) i ACN (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući jedinjenje iz naslova
kao beličast čvrst proizvod. Prinos: 3% (14 mg). LC/MS: (Metoda C) 344,2 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.3,33 min, 97,1% (Maks.), 95,7% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,92 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,06 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,02 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 3,56 (s, 2H), 2,80-2,78 (m, 2H), 2,44 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 2,25 (s, ЗН), 2,11 (s, ЗН), 1,87-1,82 (m, 2H), 1,52-1,42 (m, ЗН), 1,19-1,1 l(m, 2H).
[0301] Korak 1: U mešani rastvor 2-brommetilnaftalena (2,5 g, 11,3 mol, Spectrochem) u suvom toluenu (25 mL), dodat je trifenilfosfm (2,66 g, 10,1 mmol, Spectrochem) na s.t. i refluksovan 16 h. Reakciona smeša je ohlađena s.t., i uparena pod vakuumom. Sirov proizvod je ispran dietil etrom i osušen u vakuumu. Sirov proizvod je izolovan kao beli čvrsti ostatak. Upotrebljen je narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 70% (5 g). LCMS: (Metoda C) 403,2 (M-Br), RT. 4,66 min, 99,07% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,91-7,89 (m, 4H), 7,88-7,75 (m, 13H), 7,73-7,68 (m, 4H), 7,07-7,05 (m, 1H), 5,37-5,34 (m, 2H).
[0302] Korak 2: U mešani rastvor naftiltrifenilfosfonijum bromida (4,8 g, 10,0 mmol) u suvom THF (10 mL), dodat je kalijum terc-butoksid (1,0 g, 10,0 mmol) na s.t. i smeša je mešana 1 h. Potom je dodat 1-boc piperdin-4-on (1,0 g, 5,02 mmol, GLR scientific) i reakciona smeša je mešana 3 h. Zatim je koncentrovana. Dodata je voda (20 mL) i smeša je ekstrahovana sa DCM (50 mL). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (3% EtOAc u heksanu) dajući terc-butil 4-(naftalen-2-ilmetilen) piperidin-1-
1
karboksilat kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 56% (0,91 g). LCMS: (Metoda C) 268 (M-t-Bu+H), RT.6,18 min, 95,39% (Maks.).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,84 (t, J = 7,8 Hz, ЗН), 7,72 (s, 1H), 7,50-7,39 (m, 2H), 7,38-7,35 (m, 1H), 6,51 (m, 1H), 3,45-3,31 (m, 4H), 2,34-2,25 (m, 4H), 1,40 (s, 9H).
[0303] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(naftalen-2-ilmetilen) piperidin-1-karboksilata (0,91 g, 2,8 mmol) u suvom MeOH (10 mL), dodat je Pd/C (0,09 g, 10%, Aldrich) pod azotom. Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana i osušena u vakuumu. Sirov proizvod je izolovan kao bela čvrsta susptanca. Upotrebljen je u narednom koraku bez bilo kakvog dodatnog prečišćavanja. Prinos: 55% (0,55g). LCMS: (Metoda C) 270,0 (M-t-Bu+H), RT.6,22 min, 95,4% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,87-7,82 (m, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,50-7,43 (m, 2H), 7,43-7,37 (m, 1H), 3,91 (s, 2H), 2,67-2,51-1,57 (m, ЗН), 1,58-1,55 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,11-1,03 (m, 2H).
[0304] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-(naftalen-2-ilmetil) piperidin-1-karboksilata (0,55 g, 1,6 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL), dodat je rastvor HCl u dioksanu (20 mL, 4 M) na s.t. i smeša je mešana 2 h. Zatim je koncentrovana. Sirov proizvod je ispran dietil etrom (5 mL) i izolovan kao beličasta čvrsta susptanca. Sirov 4-(naftalen-2-ilmetil)piperidin hidrohlorid je upotrebljen u sintezi PRIMERA 10-56 bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 90% (0,5 g).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,74 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,83(d, J = 9,0Hz, ЗН), 7,45(s, 1H), 7,35 (d, J =11,2 Hz, 1H), 7,02-6,82 (m, 1H), 3,22-3,18 (m, ЗН), 2,83-2,67 (m, 4H), 1,86(s, 1H), 1,73-1,68 (m, 2H),1,42-1,25 (m, 2H).
PRIMER 10-56: Dobijanje N-(5-((4-(naftalen-2-ilmetil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0305] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, koristeći N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid (180 mg, 0,95 mmol), 4-(naftalen-2-ilmetil)piperidin hidrohlorid (250 mg, 0,95 mmol), DIPEA (365 mg, 2,8 mmol) i DMF (10 mL). Sirov proizvod je prečišćen pomoću MD autoprep (Metoda B) dajući jedinjenje iz naslova kao braon čvrsti proizvod. Prinos: 5% (12 mg). LC/MS: (Metoda C) 380,2 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.3,64 min, 97,9% (Maks.), 98,5% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,90 (s, 1H), 7,86-7,81 (m, ЗН), 7,65 (s, 1H),
1 4
[0307] Korak 1: U mešani rastvor metil trifenil fosfonijum bromida (14,3 g, 40,02 mmol) u suvom THF (40 mL) pod azotom, dodat je n-BuLi (12,0 mL, 30,15 mmol) na -78°C u kapima i smeša je mešana 1 h na istoj temperaturi. Zatim je dodat 1-boc piperdin-4-on (4,0 g, 20,l mmol) u THF (20 mL) i srneša je mešana na s.t. tokom 1h. Reakciona smeša je ohlađena na 0°C i dodat je zasićen rastvor NH4C1. Proizvod je eksrahovan etil acetatom (100 mL). Organski sloj je ispran rastvorom soli (50 mL), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Dobijeni sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni dajući terc-butil 4-metilenpiperidin-lkarboksilat kao bezbojnu tečnost. Prinos: 67% (2,6 g). LCMS: (Metoda C) 98,2 (M-Boc+H), RT.4,83 min, 93,41% (Maks.).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,73 (s, 2H), 3,30 (t, J= 12,0 Hz, 4H), 2,08 (t, J = 12,0 Hz, 4H), 1,38 (s, 9H).
[0308] Korak 2: U degasirani uzorak terc-butil 4-metilenpiperidin-l-karboksilata (0,6 g, 3,04 mmol) u suvom THF (10 mL) dodat je 9-BBN (6,1 mL, 3,04 mmol).
Dobijena smeša je refluksovana 1 h. Nakon hlađenja na s.t. , dodati su 6-bromhinoksalin (0,55 g, 2,78 mmol), Pd(dppt)Cl2,CH2C12(0,15g, 0,18 mmol), DMF (10 mL), voda ( l mL) i K2СОз(0,6 g, 4,5 mmol) na s.t.. Dobijena smeša je zagrevana na 60°C tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena na s.t., razblažena vodom (20 mL). pH je podešeno na 11 dodatkom 10% vodenog rastvor NaOH i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan dajući sirov proizvod kao bezbojnu tečnost. Terc-butil 4-(hinoksalin-6-ilmetil)piperidin-l- karboksilat je upotrebljen u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 24% (0,23 g).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,89-8,86 (m, 2H), 8,04-8,01 (m, ЗН), 2,73-2,67 (m, 2H), 2,25 (m, 9H), 1,13 (s, 9H).
1
[0309] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(hinoksalin-6-ilmetil)piperidm-lkarboksilata (0,3 g, 0,7 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL), dodat je HCl rastvor u dioksanu (10 mL, 4 M) na s.t. i dobijena smeša je mešana 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni sirov proizvod je ispran dietil etrom (5 mL), dajući 6-(piperidin-4-ilmetil)hinoksalin hidrohlorid kao siv čvrst ostatak. Upotrbeljen je u sintezi PRIMERA 10-63 bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 77% (0,2 g). LCMS: (Metoda C) 228,2 (M+H), RT.1 min, 96,98% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,90 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 8,02-7,90 (m, ЗН), 3,24-3,20 (m, 2H), 2,82-2,80 (m, 4H), 2,25 (m, 4H).
PRIMER 10-63: Dobijanje N-(5-((4-(hinoksalin-6-ilmetil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0310] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od 6-(piperidin-4-ilmetil)hinoksalin hidrohlorida (0,1 g, 0,38 mmol), (10 mL), DIPEA (0,3 mL,l,14 mmol), N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (0,11 g, 0,57 mmol) u suvom acetonitrilu. Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući traženo jedinjenje kao braon čvrst proizvod. Prinos: 16,8% (75 mg). LCMS: (Metoda C) 382,2 (M+H). HPLC: (Metoda C) RT. 2,21 mm, 99,69% (Maks.), 99,01% (254 nm).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,98 (s, 1H), 8,02 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,88 (s, 1H), 7,72 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 3,58 (br.s, 2H), 2,79 (d, J = 5,6 Hz, ЗН), 2,12 (s, 3Н), 2,09 (s, 1H), 1,99-1,88 (m, 2H), 1,58 (m, 3Н), 1,26-1,23 (m, 2H).
1
[0313] Korak 2: U mešani rastvor (3,5-difluorbenzil)trietoksifosfonijum bromida (5,2 g, 13,9 mmol) 15-kruna-5 etra (0,24 mL, 1,1 mmol) u suvom THF (35 mL), dodat je NaH (60%, 0,5 g, 12,5 mmol) na 0°C i rastvor mešan 1 h. Potom je dodat 1-boc piperdin-4-on (2,3 g, 11,7 mmol) u THF (25 mL) i smeša mešana s.t., preko noći. Reakcionoj smeši je dodata ledena voda i ekstrahovana je etil acetatom (100 mL) i isprana sa 10% NaHCO3, vodom i rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni dajući terc-butil 4-(3,5-difluorbenziliden)piperidin-l-karboksilat kao bezbojnu tečnost. Prinos: 57% (2 g). LCMS: (Metoda C) 254,0 (M-t-Bu+H), RT. 5,65 min, 99,6% (Maks.).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,11-7,06 (m, 1H), 6,94 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 3,42-3,32(m, 4H), 2,40 (t, J = 3,4 Hz, 2H), 2,39 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).
[0314] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(3,5-difluorbenziliden)piperidin-lkarboksilata (2 g, 6,4 mmol) u suvom MeOH (80 mL), dodat je Pd/C (0, 20 g, 10%) pod azotom. Reakciona smeša je mešana pod pritiskom vodonika (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Zatim je profiltrirana kroz celit, koncentrovana i upotrebljena kao takva u narednom koraku. Prinos: 95% (0,9 g, bela čvrsta supstanca). LCMS: (Metoda C) 256,0 (M-t-Bu+H), RT. 5,60 min, 99,73% (Maks.).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,04-6,98 (m, 1H), 6,94-6,91 (m, 2H), 3,89 (d, J = 10,6 Hz, 2H).2,65 (t, J = 1,8 Hz, 2H).2,50 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 1,72-1,65 (m, 1H), 1,51-1,47 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 1,05-0,95 (m, 2H).
[0315] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-(3,5-difluorbenzil)piperidin-lkarboksilata (1,9 g, 6,1 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL), dodat je rastvor HCl u dioksanu (20 mL, 4 M) na s.t. i mešano 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni sirov proizvod je ispran dietil etrom (5 mL), dajući 4-(3,5-difluorbenzil)piperidin hidrohlorid kao beličastu čvrstu supstancu. Upotrebljen je u sintezi PRIMERA 10-64 bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 93% (1,4 g). LCMS: (Metoda C) 212,0 (M+H), RT.2,84 min, 99,69% (Maks.).
PRIMER 10-64: Dobijanje N-(5-((4-(3,5-difluorbenzil)piperidin-l-il)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0316] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (0,35 g, 1,82 mmol), 4-(3,5-difluorbenzil) piperidin
1
hidrohlorida (0,3 g, 1,21 mmol), DIPEA (0,7 mL, 3,6 mmol) u suvom ACN (20 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom na koloni dajući traženo jedinjenje kao brao čvrsti ostatak. Prinos: 16,8% (75 mg). LCMS: (Metoda C) 366,0 (M+H). HPLC: (Metoda C) RT 3,27 min, 98,9% (Maks.), 96,7% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,93 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,03-6,98 (m, 1H), 6,91 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 3,57 (s, 2H), 2,81-2,78 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,11 (s, ЗН), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,51-1,48 (m, ЗН), 1,23-1,13 (m, 2H).
[0318] Korak 1: U mešani rastvor 1-brommetilnaftalena (1,97 g, 8,9 mol, Combiblocks) u suvom toluenu (25 mL), dodat je trifenil fosfin (2,1 g, 8,02 mmol, Spectrochem) na s.t. i smeša je refluksovana 16 h. Zatim je reakciona smeša ohlađena na s.t. i uparena u vakuumu. Dobijeni sirov proizvod je ispran dietil etrom i upotrebljen kao takav u narednom koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 87% (3,5 g, bela čvrsta suptanca). LCMS: (Metoda A) 403,2 (M-Br), RT.4,43 min, 97,5% (Maks.).
[0319] Korak 2: U mešani rastvor (naftalen-l-ilmetil) trifenilfosfonijum bromida (3,5 g, 7,24 mmol) u suvom THF (10 mL), dodat je kalijum terc-butoksid (0,813g, 7,24 mmol) na s.t. i mešan 1 h. Zatim je dodat 1 -boc-piperdin-4-on (0,722 g, 3,62 mmol, GLR scientific) na istoj temperaturi i mešan još 3 h. Reakcionoj smeši je dodata voda (20 mL) i ekstrahovana je sa DCM (50 mL). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan. Dobijeni sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (3% EtOAc u heksanu) dajući terc-butil 4-(naftalen-l-ilmetilen) piperidin-1-karboksilat kao beličastu čvrstu suptancu. Prinos: 34% (0,4 g). LCMS: (Metoda A) 268,1 (M-t-Bu+H), RT. 5,85 min, 45,9% (Maks.).
[0320] Korak 3: U mešani rastvor terc-butil 4-(naftalen-l-ilmetilen) piperidin-1-karboksilata (0,4 g, 1,23 mmol) u suvom MeOH (20 mL), dodat je Pd/C (0,04 g, 10%, Aldrich) pod azotom. Reakciona smeša je mešana u atmosferi vodonika pod pritiskom (2 kg/cm<3>) na s.t. tokom 2 h. Reakciona smeša je profiltriran kroz celit i
1
koncentrovana u vakuumu. Dobijeni sirov proizvod je kao takav upotrebljen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. Prinos: 87% (0,35 g, bezbojna tečnost). LCMS: (Metoda A) 270,0 (M-t-Bu+H), RT.5,78 min, 58,0% (Maks.).
[0321] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-(naftalen-l-ilmetil) piperidin-1-karboksilata (0,35 g, 1,07 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL), dodat je HCl dioksan (10 mL, 4 m) na s.t. i smeša mešana 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu. Dobijeni sirov proizvod je ko-destilovan sa dietil etrom (5 mL) i kao takav upotrebljen u narednom koraku. Prinos: 89% (0,25 g, bela čvrsta supstaca).LCMS: (Metoda A) 226,2 (M+H), RT.3,22 min, 88,8% (Maks.).
PRIMER 10-65: Dobijanje N-(2-((4-(naftalen-l-ilmetil)piperidin-l-il)metil)tiazol-5-il)acetamida
[0322] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, od N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamida (79 mg, 0,42 mmol), 4-(naftalen-l-ilmetil) piperidin hidrohlorida (110 mg, 0,42 mmol), DIPEA (0,163 mg, 1,26 mmol) i ACN (5 mL). Sirov proizvod je prečišćen pomoću MD-Auto prep. Metoda B kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 2,1 % (5,7 mg). LCMS: (Metoda A) 380,0 (M+H), RT.3,62 min, 98,8% (Maks.), 98,3 (220 nm). HPLC: (Metoda A) RT. 3,58 min, 99,22% (Maks.), 99,18% (220 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6: δ 12,6 (s, 1H), 7,92-7,86 (m, 2H), 7,74 (d, J = 3,6 Hz, 2H), 7,53-7,49 (m, 2H), 7,40 (t, J = 7,2 Hz,lH), 4,33 (s, 2H), 3,51-3,46 (m, 2H), 3,10- 3,03 (m, 1H), 2,70-2,56 (m, 2H), 2,34-2,32 (m, 2H), 2,19-2,16 (m, 2H), 1,89-1,85 (m, 2H), 1,59-1,50 (m, 2H),1,26-1,20 (m, 2H).
1
је ispran vodom, rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeni sirov alkohol je kao takav upotrebljen u narednom koraku. Prinos: 99% (10,0 g, colorless liquid). LCMS: (Metoda D) 149,0 (M-H2O+H), RT. 2,513 min, 98,6% (Maks.), 97,7% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, CDCI3): б 6,89 (s, 1H), 6,89-6,75 (m, 2H), 5,95 (s, 2H), 4,81 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 1,46 (d, J = 8,0 Hz, ЗН).
[0325] Korak 2: U mešani rastvor l-(benzo[d][l,3]dioksol-5-il)etan-l-ola (10,0, 60,2 mmol) u suvom DCM (27 mL), pažljivo je dodat tionil hlorid (23,4 g, 180,72 mmol) na 0°C i dobijena smeša je refluksovana 3 h. Zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom . Dobijeni ostatak je ko-destilovan sa DCM dajući 5-(lhloretil)benzo[d][l,3]dioksol kao braon tečnost. Prinos: 72% (6,3 g). LCMS: (Metoda D) 149,0 (M-HCl+H), RT.3,705 min, 80,15% (Maks.).
<1>Н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7,06 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,0 Hz.1H), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,01 (s, 2H), 2,49 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 1,74 (d, J = 8,9 Hz, ЗН).
[0326] Korak 3: U mešani rastvor 1-boc-piperazina (6,5 g, 34,0 mmol) u suvom ACN (100 mL), dodat je 5-(l-hloretil)benzo[d][l,3]dioksol (6,39, 34,7 mmol) i DIPEA (13,45 g, 104,0 mmol) na s.t. i smeša je zagrevana na 80°C preko noći.
Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu, a dobijeni ostatak je razblažen sa EtOAc. Organski sloj je ispran vodom, rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni dajući terc-butil 4-(l-(benzo[d][l,3]dioksol-5-il)etil)piperazin-lkarboksilat kao bezbojnu lepljivu tečnost. Prinos: 20% (2,0 g). LCMS: (Metoda C) 335,2 (M+H), RT.3,10 min, 93,15% (Maks.), 96,06% (254 nm).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6,85-6,82 (m, 2H), 6,74-6,71 (m, 1H), 5,98 (d, J = 1,6 Hz, 2H,), 3,37-3,36 (m, 1H), 3,27 (m, 4H), 2,28-2,21 (m, 4H), 1,37 (s, 9H), 1,25 (d, J = 6,8 Hz, ЗН).
[0327] Korak 4: U mešani rastvor terc-butil 4-(l-(benzo[d][l,3]dioksol-5-il)etil)piperazin-1-karboksilata (2,0 g, 5,9 mmol) u suvom dioksan (10 mL), dodat je rastvor HCL u dioksanu (20 mL, 4 M) i reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i sirov proizvod je prečišćen rekristalizacijom sa dietil etrom dajući l-(l-(benzo[d][l,3]dioksol-5-il)etil)piperazin hidrohlorid kao beličast čvrst ostatak. Prinos: 82% (1,2 g). LCMS: (Metoda D) 235,0 (M+H), RT.4,2 min, 98,56% (Maks.), 97,3% (220 nm).
11
<1>н NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,09 (m, 1H), 9,43 (m, 1H), 9,20 (m, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,07-7,02 (m, 2H), 6,08 (s, 2H), 4,55 (m, 1H), 3,82(m, 1H), 3,50-3,39 (m, ЗН), 3,17-2,96 (m, 2H), 1,68 (s, 3H)„
PRIMER 11-58: Dobijanje N-(5-((4-(l-(benzo[d][l,3]dioksol-5-il)etil)piperazin-lil)metil)tiazol-2-il)acetamida
[0328] Traženo jedinjenje je sintetisano prema opštoj proceduri C, koristeći N-(5-(hlormetil)tiazol-2-il)acetamid (0,28 g, 1,48 mmol), l-(l-(benzo[d][l,3]dioksol-5-il)etil)piperazin hidrohlorid (0,4 g, 1,48 mmol), DIPEA (0,57 g, 4,44 mmol) i ACN (5 mL). Sirov proizvod je prečišćen brzom fleš hromatografijom dajući traženo jedinjenje kao braon čvrstu susptancu. Prinos: 2% (3,71 mg). LC/MS: (Metoda C) 389,0 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.2,09 min, 92,6% (Maks.), 91,1% (254 nm).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,94 (s, 1H), 6,83-6,8l(m, ЗН), 6,71 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,98 (s, 2H), 3,58 (s, 2H), 3,35-34 (m, 1H), 2,33-2,32 (m, 7H), 2,10 (s, 3H),1,23 ( d , J = 2,8 Hz, ЗН).
[0330] Dva enantiomera iz PRIMERA 58 razdvojena su hiralnom HPLC (Chiralcell OJ-H kolonom (250 х 4,6 mm, 5 μm); eluirano sa 0,1% DEA u heksanu:IPA 90:10; protok 1,0 mL/min). Prvo eluirano jedinjenje je koncentrovano dajući PRIMER 60 kao belu čvrstu susptancu. Prinos: 3% (16 mg). LC/MS: (Metoda C) 389,0 (M+H), HPLC: (Metoda C) RT.2,12 min, 98,9% (Maks.), 99,2% (254 nm). HPLC hiralna čistoća: (Metoda C) RT.16,97 min, 100,0% (Maks.).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,95 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,97 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,31-3,28 (m, 1H), 2,33-2,32 (m, 8H), 2,10 (s, ЗН), 1,22 (d, J = 8,0 Hz, ЗН).
[0331] Drugo eluirano jedinjenje je koncentrovano dajući PRIMER 57 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 2% (13 mg). LC/MS: (Metoda C) 389,0 (M+H). HPLC: (Metoda C) RT.2,12 min, 99,7% (Maks.), 99,7% (254 nm). HPLC hiralna čistoća: (Metoda C) RT.29,60 mm, 100,0% (Maks.).
<1>HNMR (400 MHZ, DMSO-d6): δ 11,91 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,96 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,30-3,29 (m, 1H), 2,32-2,31 (m, 8H), 2,09 (s, ЗН), 1,22 (d, J = 8,0 Hz, ЗН).
[0332] Inhibicija hOGA enzima (IC50) oba jedinjenja iznosila je između 1 i 10 μМ ("++").
PRIMER 12: Test inhibicije enzima humane O-GlcNAkaze
[0333] Pomoću TTP LabTech Mosquito instrumenta pipetirano je 100 nL odgovarajuće koncentracije rastvora inhibitora u 100% DMSO (za izračunavanje krive doza-odgovor) u svako ležište ploče sa 384-ležišta (Aurora Biotechnologies, Part # 30311). Dodate su sledeće reakcione komponente do konačne zapremine od 10 μL u Mcllvaine's puferur (pH 6,5): 20 nM His-markiran hOGA i 10 μМ Fluorescein mono-beta-D-(2-dezoksi-2-A-acetil) glukopiranozid (FL-GlcNAc; Marker Gene Technologies Inc, Part # M1485). Ploča je inkubirana 60 min na sobnoj temperaturi i zatim je reakcija prekinuta dodatkom 10 μL stop pufera (200 mM glicin, pH 10,75). Ploča je očitana na Envision platformi u fluorescentnom formatu koristeći gornje ogledalo sa 485 nm prigušivač kao parametar ekscitacionog filtera i 520 nm kao parametar emisionog filtera. Izmerena količina fluorescencije je odštampana u odnosu na koncentraciju inhibitora za dobijanje sigmoidalne krive doza-odgovor, sa koje je izračunata vrednost za IC50.
PRIMER 13: Test ćelijskog O-GlcNAcilovanja
[0334] B35 ćelije neuroblastoma pacova (ATCC; CRL-2754) su stavljene na ploče sa 96 ležišta (BD Falcon; 354640) tretirane poli-D-lizinom pri gustini od 10,000 ćelija po ležištu u u ukupnoj zapremini od 90 μl kompletnog medijuma. Sledećeg dana ćelije su tretirane sa odgovarajućom koncentracijom rastvora inhibitora tokom 16 h na 37 ° C u 5% CO2Ćelije su fiksirane u 100 μl 4% paraformaldehida tokom 15 min na sobnoj temperaturi, praćeno sa tri ispiranja u PBS pufem. Ćelije su zatim permeabilizovane sa 0,1% Triton Х-100 tokom 60 min na sobnoj temperaturi. Posle tri ispiranja u PBS, ćelije su blokirane sa 10% kozjeg seruma koji sadrži 1% BSA u PBS puferu tokom dva sata na sobnoj temperaturi. Ćelije su zatim inkubirane sa monoklonskim zečijim antitelima specifičnim za tau O-GlcKanzilovan u serinu 400 (Epitomics) u razblaženju od 1: 1000 preko noći na 4 ° C. Primarno antitelo je isprano i ćelije su inkubirane sa kozjim anti-zečjim AlexaFluor488-konjugovanim sekundarnim antitelom (Molecular Probes; А11034), i dodata je Hoechst 33342 nuklearna boja u koncentraciji od 1 μg / ml. Celije su očitane na čitaču ploča Acumen Explorer еХЗ. Da bi se izračunao EC50, ukupni intenzitet pikova je nacrtan u odnosu na koncentraciju inhibitora da bi se dobila kriva sigmoidnog doznog odgovora.
PRIMER 14: Farmaceutki preparati
[0335]
A) Bočice za injekcije: Rastvor 100 g aktivnog sastojka prema pronalasku i 5 g dinatrijum hidrogen fosfata u 31 bidestilovane vode je podešen na pH 6,5 dodatkom 2 N hlorovodonične kiseline, sterilno filtriran, prenet u bočice za injekcije, liofilizovan i zatvoren pod sterilnim uslovima. Svaka injekciona bočica sadrži 5 mg aktivnog sastojka.
(B) Supozitorije: Smeša 20 g aktivnog sastojka prema pronalasku je istopljena sa 100 g soja lecitina i 1400 g kakao putera, sipana u kalupe i ostavljena da se ohladi. Svaka supozitorija sadrži 20 mg aktivnog sastojka.
(C) Rastvor: Rastvor je pripremljen od 1 g aktivnog sastojka prema pronalasku, 9,38 g NaH2PO4∙ 2 H2O, 28,48 g Na2HPO4∙ 12 H2O i 0,1 g benzalkonijum hlorida u 940 ml bidestilovane vode. Podešeno je pH na 6,8, i rastvor je dopunjen do 11 i sterilisan ozračivanjem. Ovaj rastvor se može koristiti u obliku kapi za oči.
(D) Mast: 500 mg aktivnog sastojka prema pronalasku je pomešano sa 99,5 g vazelina u aseptičkim uslovima.
(E) Tablete: Smeša od 1 kg aktivnog sastojka prema pronalasku, 4 kg laktoze, 1,2 kg krompirovog skroba, 0,2 kg talka i 0,1 kg magnezijum stearata je komprimovana dajući tablete na konvencionalan način tako da svaka tableta sadrži 10 mg aktivnog sastojka.
(F) Obložene tablete: Tablete su komprimovane analogno PRIMERU E i naknadno obložene na konvencionalan način sa oblogom od saharoze, krompirovog skroba, talka, tragakanta i boje.
(G) Kapsule: 2 kg aktivnog sastojka prema pronalasku je dodato u tvrde želatinske kapsule na konvencionalan način tako da svaka kapsula sadrži 20 mg aktivnog sastojka.
11
(H) Ampule: Rastvor 1 kg aktivnog sastojka prema pronalasku u 601 bidestilovane vode je sterilno profiltriran, prenet u ampule, liofilizovan pod sterilnim uslovima i zatvoren pod sterilnim uslovima. Svaka ampula sadrži 10 mg aktivnog sastojka.
(I) Inhalacioni sprej: 14 g aktivnog sastojka prema pronalasku je rastvoreno u 10 1 izotoničnog rastvora NaCl, i rastvor je prebačen u komercijalno raspoložive sprej kontejnere sa pumpnim mehanizmom. Rastvor se može raspršiti u usta ili nos. Jedno špricanje (oko 0,1 ml) odgovara dozi od oko 0,14 mg.
PRIMER 15: Povećano O-GlcNAcilovanje redukuje patološki tau bez uticaja na njegovu noRMalnu fosforilaciju na mišjem modelu tauopatije
Slike
[0336]
Slika 1: Efekti akutnog ili subhroničnog ThiametG na O-GlcNAcilovanje i fosforilaciju kod Tg4510 miševa. Ukupni nivoi O-GlcNAcilovanja su povećani kod mišjeg hemi prednjeg mozga 4h nakon jedne primene ThiametG-a ili 4h nakon 14 dnevnih ponovljenih tretmana sa ThiametG-om. B, imunoprecipitirani tau (HT7 antitelo) je bio snažno O-GlcNAilovano na S400 kod životinja koje su tretirane 14 dana u poređenju sa kontrolama sa nosačem. Nivoi C, Tau O-GlcNAcilovanog proteina su neznatno povišeni kod mišjeg hemi prednjeg mozga 4h nakon jednog tretmana ThiametG-om (%) i značajno povećani 4h nakon poslednjeg od 14 dnevnih tretmana sa ThiametG. D, Tau fosforilacija je smanjena na epitopima S202 / 205, S262 i S3964 sata nakon pojedinačne primene ThiametG-a, ali se vratila na normalne nivoe nakon 14 dnevnih tretmana sa ThiametG. Tau fosforilacija na S356 je značajno smanjena nakon jednokratne i ponovljene (14 dana) primene ThiametG-a (Jednofaktorska analiza varijanse ANOVA * p <.05). Westarn blot podaci (N = 13-15 / grupi) su izraženi kao srednja vrednost ± s.e.m. procenat kontrola koje su tretirane nosačem. Jednofaktorska analiza varijanse ANOVA; * P < .05 u poređenju sa kontrolom.
Slika 2: Efekti hroničnog ThiametG tretmana na tau O-GlcNAcilovanje i patološki tau u Tg4510 miševima. Nivoi Tau O-GlcNAcilovanja ostaju povišeni u hemisferi prednjeg mozga kod miša, nakon 4 meseca primene ThiametG-a. B, hiperfosforilovani patološki tau (64 kD) je dramatično smanjen kod epitopa pS202 / 205, pS400, pS356 i pS262 nakon 4 meseca primene ThiametG. C, Lokalizovana ekspresija O-GlcNAc tau (Otau (S400) antitela; gornji panel) i AT8 (srednji panel), koji prepoznaje hiperfosforilovan agregat tau, detektovana je u CAl regionu hipokampusa kod Tg4510 miševa. Dvostruko-imunološko bojenje je izvršeno kako bi se pokazalo da nema kolokalizacije O-GlcNAc tau sa patološkim tau (donji panel, 63x slika). D, status fosforilacije Tau od 50-60 kD tau vrsta je nepromenjen posle 4 meseca ponovljene primene sa ThiametG. Westarn blot podaci (N = 13-15 / grupa) su izraženi kao srednja vrednost ± s.e.m. procenat kontrola koje su tretirane nosačem. Jednofaktorska analiza varijanse ANOVA; * P < .05 u poređenju sa kontrolom.
Slika 3: Efekti hroničnog ThiametG tretmana na tau distrofične neurone i čvorove u hipokampusu. A Pozitivni neuroni, AT8 su značajno smanjeni u CAl i САЗ regionu hipokampusa nakon 4 meseca primene ThiametG-a. B, Agirofilna vlakna (merena Bielschowsky bojenjem) su značajno smanjena u CAl regionu hipokampusa, ali ne i САЗ regionu posle 4 meseca primene ThiametG. IHC i Bielschowsky kvantifikacija (N = 13-15 / grupi) su izraženi kao srednja vrednost ± s.e.m. procenta kontrola koje su tretirane nosačem.
MATERIJALI I POSTUPCI
[0337] Životinje: Tg (tauP301L) 4510 miševi su generisani kao što je prethodno opisano (Santacruz et al., 2005, Science 309: 476-481). Životinje su uzgajane i smeštene u istraživačkom institutu McLaughlin (Great Falls, Montana). Svi eksperimenti su odobreni od strane MRI Institucionalnog odbora za negu i korišćenje životinja (IACUC). Akutni (1-dnevni tretman) i subhronični (14-dnevni tretman) efekti ThiametG-a procenjeni su kod muških i ženskih Tg4510 miševa od 3 meseca starosti. Hronični (4-mesečni) efekti ThiametG-a su procenjivani kod muških i ženskih miševa Tg4510 počevši od 2 meseca starosti. ThiametG je rastvoren u vodi i primenjen p.o., u koncentraciji od 500 mg / kg / dan.
[0338] O-GlcNAc tau specifično antitelo (Otau (S400)): Za pripremu zečjeg monoklonskog antitela koje je specifično za tau O-GlcNAcilovano na serinu, 400 zečeva je imunizovano peptidom (cVYKSPVV-(O-GlcNAc)S-GDTSPRH) aminokiselinama 393 do 407 na 2N4R humanom tau. Izolovani su limfociti iz zečeva sa visokim titarskim antiserumima i generisani hibridomi. IgG antitela su prečišćena iz supernatanta pozitivnih hibridomskih subklonova. Specifičnost antitela je potvrđena Western blotovima sa uzorcima rekombinantnog O-GlcNAcilovanog tau i
11
lizata iz HEK293 ćelija koje koeksprimiraju OGT i humani 2N4Rtau (podaci nisu prikazani).
[0339] Tau imunoprecipitacija: Za imunoprecipitaciju tau proteina iz lizata mozga je korišćen komplet za imunoprecipitaciju Crosslink (Pierce 26147). A / G smola je umrežena sa 10 μg HT7 tau antitela (Thermo Scientific MN1000) ili je kontrolisala mišji IgG (Santa Cruz Biotech sc-2025) prema protokolu proizvođača. 250 μg lizata mozga pripremljeno je kao što je opisano u nastavku inkubirano je sa tau antitelima koja su kuplovana sa smolom, preko noći na 4 ° C. Uzorci su eluirani sa 50 μl pufera za ispiranje sa niskim pH i odmah centrifugirani u epruvete za sakupljanje koje sadrže 5 μl 1M Tris, pH 9,5,. Imunoprecipitirani tau je podvrgnut Westarn blotingu kao što je opisano u daljem tekstu.
[0340] Western Blot: Da bi se ispitale promene u O-GlcNAcilvanju i fosforilaciji, životinje su eutanazirane 4h nakon injekcije u akutnim ili subhroničnim studijama i 24h nakon poslednje injekcije u hroničnoj studiji. Hemisfere prednjeg mozga su brzo secirane i zamrznute u suvom ledu. Uzorci tkiva su homogenizovani u Fosfosafe Buffer- u (EMD Chemicals), nakon čega je usledilo centrifugiranje na maloj brzini (15,000 g) da bi se uklonili ćelijski ostaci. Dobijeni supernatant (supernatant male brzine, Lss) je testiran da bi se odredile koncentracije proteina pomoću Lowry Metode. O- GlcNAcilovanje i fosforilacija su određeni u 20 μg proteinskih uzoraka podvrgnutih 4- 15% SDS-PAGE (Tris-HCI gelovi, Bio-Rad), nakon čega je usledio transfer na nitrocelulozne membrane (Invitrogen, IBlot sistem). Membrane su blokirane u Licor blokirajućem puferu na sobnoj temperaturi tokom 1 h i inkubirane u primarnim antitelima preko noći na 4°C. Ukupni protein O-GlcNAcilovanja je detektovana upotrebom RL2 antitela (1: 500, ThermoScientific), tau O-GlcNAcilovanjem je detektovana pomoću Otau (S400) antitela (1: 500) i tau fosforilacija je detektovana pomoću AT8 (1: 500, ThermoScientific), pS396, pS262, pS356 (1: 500, Abcam) i pS400 (1: 5000, GenScript). GAPDH (1: 1000, Abcam) ili ukupna tau (1: 50,000 ThermoScientific) antitela su služila kao unutrašnje kontrole punjenja. Membrane su inkubirane sa fluorfor-konjugovanim sekundarnim (1:
10,000; Licor) antitelima specifičnim za vrstu 1 h na sobnoj temperaturi i detektovane korišćenjem Licor Odyssey sistema.
[0341] Frakcionisanje Tau: Za analizu 50-60 kD naspram 64 kD tau, Lss frakcija koja sadrži i 50-60 kD i 64 kD tau vrste je centrifugirana pri velikoj brzini (110,000 g tokom 15 min). Supernatant (S1 frakcija) koji sadrži 50-60 kD tau proteine je
11
uklonjen i testiran da bi se odredile koncentracije proteina. Da bi se analizirale promene u 50-60 kD i 64 kD tau, Lss i S1 frakcije su bile podvrgnute 10% SDS-PAGE (Tris-HCI gelovi, Bio-Rad) praćeni prenosom kao što je gore opisano. 64 kD tau pojavljuje se kao jedna kompaktna traka sa očiglednom masom od -64 kD u celom lizatu mozga (Lss frakcija), ali ga nema u supernatantu (S1 frakcija) posle centrifugiranja pri velikoj brzini, kojm se razdvaja 50-60 kD od 64 kD tau (Slika 2B).
50-60 kD tau se pojavljuje kao nekoliko traka sa očiglednom masom u rasponu od -50-60 kD.
[0342] Imunohistohemija: Da bi se ispitale promene u patologiji čvorova, hemisfera prednjeg mozga je secirana i potopljena fiksirana u 10% neutralnom puferovanom formalinu tokom 24-48h i zatim postavljena u parafinske blokove. Serijski 10-mikronski koronalni preseci su postavljeni na Superfrost Plus pločice i obojeni koristeći Bond Intense R komplet. Da bi se detektovali distrofični AT8 neuroni, postavljene pločice su prethodno tretirane rastvorima za pretraživanje antigena tokom 10 min, a zatim isprani sa BOND puferom za ispiranje. Sekciji je zatim dodat vodonik peroksid u Bond Intense R kompletu, blokirane sa M.O.M. blokirajućim puferom (kompleti za imunodetekciju M.O.M, Vector Laboratories), i zatim inkubirani sa pS202 / 205 primarnim antitelom (1: 500; ThermoScientific). Sekcije su zatim inkubirane sekvencijalno sa biotinilovanim magarećim anti-mišjim sekundarnim antitelom (1: 200; Jackson Immunoresearch), Streptavidin-HRP i 3,3'-diaminobenzidinom (oba BOND Intense R kompleta). Da bi se detektovali agirofilni čvorovi, sekcije su deparafinizovane, rehidrirane u destilovanoj vodi i tretirane formaldehidom (4%) preko noći na 37 ° C. Sekcije su isprane u vodi iz slavine, inkubirane u 20% rastvoru srebro nitrata tokom 15 min u mraku, isprane, inkubirane sa rastvorom amonijačnog srebra u trajanju od 10 min u mraku, isprane u amonijačnoj vodi i tretirane sa razvijačem. Sekcije su zatim isprane amonijačnom vodom, destilovanom vodom, tiosulfat natrijum, dehidrirane i postavljene u medijum.
[0343] Imunofluorescencija: Da bi se ispitala kolokalizacija između O-GlcNAcilovanog tau i AT8, sekcije su blokirane sa 5% normalnim kozjim serumom (Jackson Immunoresearch) tokoml h, nakon čega je usledila sekvencijalna inkubacija sa Otau (S400); (1: 100, lh) i AT8 (1: 500, lh). Posle ispiranja, sekcije su inkubirane sa sekundarnim FITC konjugovanim kozjim anti-zečjim i Texas Red konjugovanim kozjim anti-mišjim (Invitrogen) antitelima u PBS u toku 1h. Posle ispiranja, pločice su pokrivene sa Prolong Gold anti-fade reagensom (Invitrogen).
11
[0344] Statistička analiza: Promene O-GlcNAcilovanja i fosforilacije proteina analizirane su jednofaktorskom ANOVA, nakon čega su usledila Dunnetova post hoc poređenja ili t-test za te studije sa samo dvema tretiranim grupama.
Imunohistohemija je analizirana t-testom.
REZULTATI
(i) Akutna i subhronična inhibicija OGA povećava tau O-GlcNAcilovanje i na prolazan način smanjuje fosforilaciju tau.
[0345] Da bi se istražili efekti povećanog O-GlcNAcilovanja na fosforilaciju tau, izabran je model miša Tg4510 zato što blisko oponaša ljudsku tauopatiju i predstavlja važan model za proučavanje neurodegenerativnih bolesti vezanih za tau. Tg4510 miševi su primili ili pojedinačnu ili ponovljenu injekciju inhibitora OGA ThiametG ili nosač/vehikulum. ThiametG je snažan inhibitor OGA sa IC50od ~ 5 nM. OGA katalizuje uklanjanje O-GlcNAc ostataka iz proteina i tako inhibicija OGA rezultira relativnim povećanjem O-GlcNAc modifikacije na proteine. Značajno povećanje ukupnog proteina O-GlcNAcilovanja u CNS-u zabeleženo je nakon jedne injekcije ThiametG-a (F(2,43)= 20,98; p < .01 u poređenju sa tretiranim nosačem; Slika 1A) ili 14 dana administracije (F(2,43)= 12,57; p < .01). Porast ukupnog proteina O- GlcNAcilvoanja nakon 14 dana ThiametG-a bio je značajno veći od onog nakon jedne injekcije (p < .05).
[0346] Da bi se specifično ispitalo dejstvo ThiametG tretmana na tau O-GlcNAcolovanje, generisano je zečje monoklonsko antitelo specifično za O-GlcNAcilovanje tau na serinu 400 (Otau (S400)). S400 se može modifikovati O-GlcNAcilovanjem (Yuzawa et al., 2010, Amino Acids 40: 857-868) i nalazi se između S396 i S404, koji su poznata kao fosforilaciona mesta koja su uključena u tau patologiju. Da bi potvrdili da je Otau (S400) zaista prepoznao O-GlcNAcilovan tau, tau je imunoprecipitiran sa pan-specifičnim tau antitelom (HT7) iz mozga Tg4510 miševa koji su subhronično tretirani sa ThiametG i ispitani sa Otau (S400) antitelom. Otau (S400) antitelo snažno prepoznaje imunoprecipitirani tau u životinjama koje su tretirane sa ThiametG, ali samo u mnogo manjoj meri kod životinja tretiranih nosačem (Slika 1B). Zanimljivo je da je O-GlcNAcilovani tau detektovan na nižim molekulskim masenim trakama tau, što ukazuje da je samo podgrupa tau bila O-GlcNAcilovana. Detektovano je samo malo povećanje u tau O-GlcNAcilovanju nakon jedne injekcije ThiametG-a. Međutim, ponovljena injekcija ThiametG-a
11
proizvela је 9-struko povećanje tau O-GlcNAcilovanju (F(2,42)= 22,04; p < 0.5 u poređenju sa onim tretiranim nosačem; Slika 1C). Ovo potvrđuje da je tau supstrat za O-GlcNAcilovanje i da OGA inhibicija snažno povećava O-GlcNAc na serinu 400 u tau u mišjem modelu tau patologije.
[0347] Jedna injekcija ThiametG-a smanjila je tau fosforilaciju na epitopima S202/205 (F(2,43)= 43,49; p < .05), S262 (F(2,43)= 27,36; p< .05), S356 F(2,43)= 33,31; p < .05 i S396 (F(2,43) = 22,48; p < .05; Slika 1D). Akutni tretman ThiametG nije promenio tau fosforilaciju na S400, sugerišući da O-GlcNAcilovanje ne reguliše tau fosforilaciju na ovom epitopu. Zanimljivo je da ponovljeni tretman sa ThiametG-om nije doveo do većeg smanjenja tau fosforilacije na ispitivanim epitopima. U slučaju S202 / 205, fosforilacija S262 i S396 se vratila prema bazalnim nivoima posle 14 dana ThiametG-a, dok je fosforilacija na S356 još uvek bila značajno smanjena (F
(2,43)= 26,72; p < .05), ali je pokazao trend povećane fosforilacije.
(ii) Hronična inhibicija OGA smanjuje tau patologiju.
[0348] Da bi se ispitalo hronično dejstvo ThiametG-a na tau patologiju, životinje Tg4510 primale su 4 meseca tretman sa ThiametG-om počevši od 2 meseca starosti. Miševi su namerno odabrani u ovom uzrastu da bi započeli paradigmu lečenja pre bilo kakvih znakova patološke akumulacije i neurodegeneracije tau. Dvadeset i četiri sata nakon poslednjeg ubrizgavanja, moždano tkivo je sakupljeno za analizu tau proteina preko Westarn blota, kao i histološku analizu čvorova. Nivoi ukupnog proteina O- GlcNAcilovanja nakon 4 meseca ThiametG-a bili su slični (185%) onima koji su proizvedeni nakon 14-dnevnog tretmana (podaci nisu prikazani). Staviše, tau O- GlcNAcilovanje je ostala povišena 9 puta nakon 4 meseca doziranja, poredeći sa nivoom tau O-GlcNAcilovanja nakon 14 dana tretmana sa ThiametG, što ukazuje da je tau O-GlcNAcilovanje dostiglo stabilno stanje već posle 2 nedelje inhibicije OGA (T27 = 18,95; p < .0001; slika 2A). Značajno je da se O-GlcNAcilovanje pojavljuje na tau u opsegu nižih molekulskih masa i da nije prisutna u opsegu od 64 kD koji predstavlja patološki tau, što sugeriše da je samo nepatološki tau O-GlcNAcilovan. Da bi potvrdili da patološki tau nije O-GlcNAcilovan, izvedeni su eksperimenti sa imunofluorescencijom sa dvostrukim obeležavanjem na rezovima mozga ThiametG tretiranih Tg4510 miševa sa Otau (S400) antitelom (Slika 2C, gornji panel) i AT8 antitelom (Slika 2C, srednji panel)), koji prepoznaje hiperfosforilirani agregisan tau. Pojedini neuroni u regionu CAl hipokampusa su pokazali jaku AT8-imunoreaktivnost
11
u somama i neuritima (Slika 2B, srednji panel), dok je O-GlcNAc-tau imunoreaktivnost uglavnom lokalizovana na telima neurona (Slika 2C, gornji panel). Nije uočena kolokalizacija O-GlcNAc-tau-a sa patološkim tauom (Slika 2C, donji panel), što je u skladu sa biohemijskom analizom da patološke tau vrste nisu О-GlcNAcilovane u mozgu Tg4510.
[0349] Hiperfosforilisani patološki tau biohemijski je identifikovan diferencijainim centrifugiranjem homogenata mozga od Tg4510 miševa i detektovan sa fosfo-tau specifičnim antitelima. Patološki tau pojavio se kao jedna kompaktna traka velike molekulske mase na oko 64 kD u celom moždanom homogenatu (frakcija spina sa malom brzinom; Lss), ali nije bio prisutan u supernatantu posle centrifugiranja na velikoj brzini (S1 frakcija), koji razdvaja normalno od patološkog taua (Slika 2B). Frakcija S1 sadrži tau vrste sa prividnom molekulskom masom u rasponu od -50-60 kD. Hronični tretman sa ThiametG značajno je smanjio 64 kD tau kako je detektovano sa antitelima specifičnim za fosforilaciju za S202/205 (T27= 2,984; p < .01), S400 (T27= 2,769; p < .01), S356 (T27= 2,132; p < .05) i S262 (T27= 3,030; p < .01; Slika 2B) tau, što ukazuje da kontinuirano povećanje tau O- GlcNAcilovanja sprečava nakupljanje patološkog tau.
[0350] Nije bilo promene u fosforilacionom stanju 50-60 kD tau vrsta (Slika 2D) kod različitih epitopa uključenih u tau agregaciju, odnosno S202 / 205, S356 i S262, što sugeriše da kontinuirano povećanje O- GlcNAcilovanja ne reguliše fosforilaciju 50-60 kD tau vrsta i tako može da spreči patološku akumulaciju taua nezavisno od nivoa fosforilacije. Ovo je u suprotnosti sa redukcijom tau fosforilacije koja je zabeležena posle jedne injekcije ThiametG-a i nije u skladu sa idejom da je tau fosforilacija direktno regulisana O-GlcNAcilovanjem kroz konkurentnu ili susednu popunjenost mesta.
[0351] Da bi se potvrdio efekat OGA inhibicije tau agregacije, tau patologija je procenjivana histološki u rezovima mozga Tg4510 miševima tretiranih sa ThiametG. U skladu sa biohemijskim analizama, hronično lečenje Thiametg-om značajno je smanjilo pS202 / 205 (AT8) pozitivno distrofične neurone u CAl T26, = 3,053, p < .01) i САЗ (T25= 3,046, p < .01) region hipokampusa ( Slika 3). Štaviše, da bi se pokazalo da AT8 imunoreaktivni neuroni zaista odražavaju neurone čvorova, izvedeno je Bielschowsky bojenje na rezovima mozga životinja koje su tretirane sa ThiametG i životinja koje su tretirane nosačem. U skladu sa imunohistohemijom AT8, utvrđeno je značajno smanjenje patologije u CAl regionu hipokampusa (т(25) = 2,309;
12
р < .05; Slika ЗВ). Međutim, nije uočena razlika u opterećenju zapletanja u САЗ regionu hipokampusa. Ovo može biti zbog razlika u osetljivosti za rane tau agregate između metodologija.
[336] Uzeti zajedno, rezultati sugerišu da povećavanje nivoa O-GlcNAc na tau atenuira formiranje patoloških tau vrsta u Tg4510 modelu miša.
DISKUSIJA
[0353] Pokazano je da hronično farmakološko lečenje Tg4510 tau modela sa jakim i selektivnim inhibitorom OGA, ThiametG, dovodi do značajnog smanjenja tau patologije kao što je mereno biohemijski i patološki. Uočeno je veoma značajno smanjenje patoloških 64 kD tau u homogenatima mozgova životinja tretiranih sa ThiametG. Ova tau vrsta predstavlja izrazito rastvorljivu, ali brzo taložnu bazu agregata tau, najverovatnije sastavljenog od tau dimera i oligomera. Ovi rani tau agregati prethode formiranju NFT i bolje koreliraju sa neuronskom disfunkcijom i degeneracijom nego sa sarkozil-nerastvorljivim tau ili NFT u Tg4510 mišjem mozgu. Slično tome, u određenim oblastima Alchajmerove bolesti (AD), gubitak neurona u mozgu i patologija NFT su topografski različiti sa brojem degenerisanih neurona daleko većim od NFT sa neuronima, što znači da je malo verovatno da će NFT biti primarni neurotoksični agens tokom napredovanja bolesti. Štaviše, abnormalni tau strukturno sličan patološkim 64 kD tau vrstama u Tg4510 miševima je nađen u humanim tauopatijama, čineći ove intermedijere tau agreagata potencijalnom metom za terapijski tretman. Ovom studijom je jasno pokazano da se patološke 64 kD vrste tau mogu smanjiti dugotrajnom inhibicijom OGA, što čini OGA atraktivnom molekularnom metom za otkrivanje leka. Ovo opažanje je takođe u bliskoj vezi sa imunohistološkim nalazima koji su pokazali značajno manje neurona imunoreaktivnih sa AT8 antitelom, marker za patološke tau agregate, kod životinja koje su tretirane sa ThiametG.
[0354] Važno je da je nađena znatno jače O-GlcNAcilovanje tau-a kao odgovor na hroničnu inhibiciju OGA, koja može objasniti izraženiji efekat na patološki tau. Razlika u tau O-GlcNAcilovanju može se objasniti upotrebom Tg4510 tau mišjeg modela u ovoj studiji, koja transgeno eksprimira tau na višem nivou od JNPL3 mišjeg modela. Pored toga, mesto-specifično O-GlcNAc-tau antitelo može imati viši afinitet za tau O-GlcNAcilovan na S400 kao 3925 antitelo. Značajno, u ovoj studiji O- GlcNAc modifikacija na S400 je pronađena samo na tau koji je migrirao sa nižom molekularnom masom na poliakrilamidnim gelovima i bio je odsutan iz AT8 imunopozitivnih neurona, sugerišući da je samo nepatološki tau O-GlcNAcilovan. Ovo se slaže sa idejom da O-GlcNAcilovanje održava tau u stanju koje ga čini manje sklonim agregaciji. Ustanovljeno je da je nepatološki tau imunoprečišćen iz mozga pacijenata sa AD bio više O-GlcNAcilovan od hiperfosforilovanog patološkog tau.
[0355] Hronična inhibicija OGA smanjila je brojnost patoloških tau agregata u mozgu Tg4510 miša bez uticaja na nivoe fosforilacije nepatološkog tau. Ovo sugeriše da O- GlcNAcilovanje ne može direktno regulisati fosforilaciju tau, već atenuirati agregaciju tau kroz mehanizam nezavisan od fosforilacije. Mada se ne može potpuno isključiti da su drugi O-GlcNAc zavisni mehanizmi odgovorni za efekat na tau agregaciju, verovatno je da O-GlcNAcilovanje tau direktno smanjuje njegovu sklonost ka oligomerizaciji, kao što je pokazano in vitro sa skraćenim oblicima O-GlcNAc -modifikovanog tau. U ovom kontekstu važno je napomenuti da O-GlcNAcilovanje na S400 ima dominantnu ulogu u inhibiranju oligomerizacije tau, što je u skladu sa visoko značajnim 9-strukim povećanjem tau O-GlcNAcilovanja na S400 i istovremenim smanjenjem agregacije tau kao odgovor na hroničnu inhibiciju OGA kao što je uočeno u ovom ispitivanju. Ovaj zaštitni efekat O-GlcNAcilovanja na agregaciju proteina nije jednak tau, jer su O-GlcNAcilovane verzije TABl i alfasinuklein peptida bile manje sklone oligomerizaciji u poređenju sa njihovim nemodifikovanim pandanima. Kako O-GlcNAcilovanje sprečava agregaciju različitih tipova amiloidogenih proteina, inhibicija OGA može da obezbedi terapeutsku strategiju za veliki broj bolesti izazvanih aberantnom agregacijom proteina izvan AD.
[0356] Ukratko, ovi podaci, po prvi put, pokazuju da hronično povećanje u O-GlcNAcilovanju tau štiti od formiranja hiperfosforilovanih tau agregata, koji su usko povezani sa neurotoksičnostima koje se primećuju kod AD i drugih tauopatija. Ova studija snažno podržava OGA kao molekularnu metu za terapiju koja modifikuje bolest kako bi ublažila progresiju tau patologije u AD i drugim tauopatijama.

Claims (4)

  1. naznačen time, što X<1>označava S ili O; X<2>, W označava nezavisno jedno od drugog N ili CR<6>; R<1>, R<3>, R<4>označava nezavisno jedno od drugog Y; R<3>, R<4>zajedno takođe označavaju -(СY2)р-; R<2>označava COY, Y, Alk, Cik, (CY2)nAr, COAlk, CO(CY2)nAr, CONY2, CONYAlk, COOY, COOAlk, COO(CY2)nAr, SO2Y, SO2Alk, SO2(CY2)nAr, CY2OY ili CY2NY2; R<1>, R<2>zajedno takođe označavaju -(CY2)p-CONY2-(CY2)p-; R<5>označava (CY2)qAr, OAr, Cik, Y ili NY2; R<6>označava Y, OY, Hal ili CN; L označava -CY2-, -CO- ili -SO2-; Y označava H ili A; A označava nerazgranat ili razgranat aciklični alkil sa 1 -10 atoma C, gde 1-7 atoma H mogu da budu zamenjeni nezavisno jedan od drugog sa Hal; Alk označava nerazgranat ili razgranat alkenil sa g 2-10 atoma C; gde 1 -4 atoma H mogu da budu zamenjeni nezavisno jedan od drugog sa Hal; Cik označava cikloalkil sa 3-7 atoma C; gde 1-4 atoma H mogu da budu zamenjeni nezavisno jedan od drugog sa Hal; Ar označava nezasićen ili aromatičan mono- ili biciklični karbocikl sa 3-12 atoma C, koji mogu da budu supstituisani barem jednim supstituentom odabranim iz grupe koju čine Hal, A, (CY2)n-OY, (CY2)n-NY2, COOY, SO2Y i CN, ili koji mogu da budu kondenzovani sa zasićenim, nezasićenim ili aromatičnim monocikličnim heterociklom sa 1 -5 atoma C i 1-4 N, O i/ili S atoma; Hal označava F, Cl, Br ili I; i m, n, p, q označavaju nezavisno jedno od drugog 0, 1, 2 ili 3; i/ili njegovu fiziološki prihvatljivu so; pod uslovom da je izuzet metil estar (5-piperidin-l-ilmetil-tiazol-2-il)-karbaminske kiseline.
  2. 2. Lek prema zahtevu 1, naznačen time, što X<1>označava S.
  3. 3. Lek prema zahtevu 1 ili 2, naznačen time, što X označava CY; i/ili W označava N ili CH.
  4. 4. Lek prema jednom od zahteva 1 do 3, naznačen time, što W označava N; R<2>označava COY, COAlk, CONY2ili COOY; i/ili L označava CY2, 5. Lek prema jednom od zahteva 1 do 4, naznačen time, što m, p označavaju nezavisno jedno od drugog 1 ili 2, i/ili n, q označavaju nezavisno jedno od drugog 0 ili 1,
    R<3>, R<4>označava nezavisno jedno od drugog Y; R<3>, R<4>zajedno takođe označavaju -(CY2)P-; R<5>označava (CY2)qAr, Cik ili Y; R<6>označava Y, OY ili Hal; Y označava H ili A; A označava nerazgranat ili razgranat aciklični alkil sa 1-10 C atoma, pri čemu 1-7 atoma H mogu da budu zamenjeni nezavisno jedan od drugog sa Hal; Alk označava nerazgranat ili razgranat alkenil having 2-6 atoma C; pri čemu 1-3 atoma H mogu da budu zamenjeni nezavisno jedan od drugog sa Hal; Cik označava cikloalkil sa 3-7 atoma C; pri čemu 1-4 atoma H mogu da budu zamenjeni nezavisno jedan od drugog sa Hal; Ar označava nezasićen ili aromatičan mono- ili bicikličan karbocikl sa 4-12 atoma C, koji može da bude supstituisan barem jednim supstituentom odabranim iz grupe Hal, A, OY, COOY i CN; Hal označava F, Cl, Br ili 1; m, q označavaju nezavisno jedno od drugog 0, 1 ili 2; i p označava 1, 2 ili 3; i/ili njegovu fiziološki prihvatljivu so; pod uslovom da je izuzeto da R<3>i R<5>označavaju A.
    12 R<3>, R<4>označava nezavisno jedno od drugog Y; R<3>, R<4>zajedno takođe označavaju -(СН2)р-; R<5>označava (CH2)qAr,Cik iliA; Y označava H ili A; A označava neragranatili razgranat aciklični alkil sa 1 -6 C atoma, gde 1-4 atoma H može da bude zamenjeno nezavisno jedan od drugog sa Hal; Cik označava cikloalkil sa 4-7 atoma C; Ar označava aromatičan mono- ili bicikličan karbocikl sa 5-10 atoma C, koji može da bude mono- ili disupstituisan barem jednim supstituentom odabranim iz grupe koju čine Hal, A, OY, COOH i CN; Hal označava F, Cl, Br ili I; m označava 0, 1 ili 2; p označava 1 ili 2; i q označava 0 ili 1; i/ili njegovu fiziološki prihvatljivu so.
    12
    ��
    ��
    ��
    �
    11
    ��
    �
    ��
    � 11. Farmaceutska kompozicija naznačena time, što sadrži kao aktivni sastojak lek prema bilo kom od zahteva 1 do 8 zajedno sa farmaceutski podnošljivim adjuvansima i / ili ekscipijentima, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih aktivnih sastojaka. 12. Lek prema bilo kom od zahteva 1 do 8 naznačen time, što je za upotrebu u profilaktičkom ili terapijskom tretmanu i / ili praćenju stanja izabranog iz grupe neurodegenerativnih bolesti i raka. 13. Lek za upotrebu prema zahtevu 12, naznačen time, što je stanje izabrano iz grupe Alchajmerove bolesti, amiotrofne lateralne skleroze (ALS), kortikobazalne degeneracije (CBP), frontotemporalne demencije sa parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17 (FTDP-17), Niman- Pikove bolesti (tip C), kompleksa Parkinsonizam-demencija Guama, Pikove bolesti (PiD), progresivne supranuklearne paralize (PSP) i Parkinsonove bolesti, poželjno Alchajmerova bolest. 14. Lek za upotrebu prema zahtevu 12, naznačen time, što stanje je tauopatija. 15. Postupak za inhibiciju glikozidaze, naznačen time, što je sistem koji eksprimira glikozidazu u kontaktu sa jedinjenjem kao što je definisano u bilo kom od zahteva 1 do 8 i / ili njegovom fiziološki prihvatljivom soli pod in-vitro uslovima, tako da je glikozidaza inhibirana. 1
RS20190638A 2013-03-14 2014-03-10 Inhibitori glikozidaze RS58768B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361782353P 2013-03-14 2013-03-14
US201361817493P 2013-04-30 2013-04-30
PCT/US2014/022630 WO2014159234A1 (en) 2013-03-14 2014-03-10 Glycosidase inhibitors
EP14724185.5A EP2970272B1 (en) 2013-03-14 2014-03-10 Glycosidase inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58768B1 true RS58768B1 (sr) 2019-06-28

Family

ID=50729762

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190638A RS58768B1 (sr) 2013-03-14 2014-03-10 Inhibitori glikozidaze

Country Status (17)

Country Link
US (2) US9879001B2 (sr)
EP (1) EP2970272B1 (sr)
JP (1) JP6360147B2 (sr)
CN (1) CN105143222B (sr)
AU (1) AU2014241065B2 (sr)
CA (1) CA2899088C (sr)
DK (1) DK2970272T3 (sr)
ES (1) ES2723883T3 (sr)
HR (1) HRP20190857T1 (sr)
HU (1) HUE043398T2 (sr)
IL (1) IL241512B (sr)
LT (1) LT2970272T (sr)
PL (1) PL2970272T3 (sr)
PT (1) PT2970272T (sr)
RS (1) RS58768B1 (sr)
SI (1) SI2970272T1 (sr)
WO (1) WO2014159234A1 (sr)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102043337B1 (ko) 2014-08-28 2019-11-11 아셰뉴론 에스아 글리코시다제 저해제
EP3389658B1 (en) * 2015-12-18 2020-11-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Glycosidase inhibitors and uses thereof
WO2017139975A1 (en) * 2016-02-19 2017-08-24 Huiru Wang Antibodies against n-acetylglucosamine and n-acetyl-galactosamine
EP3419974B1 (en) 2016-02-25 2021-05-05 Asceneuron SA Process for the separation of enantiomers of piperazine derivatives
WO2018153508A2 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Asceneuron S.A. Sulfoximine glycosidase inhibitors
US11261183B2 (en) 2016-02-25 2022-03-01 Asceneuron Sa Sulfoximine glycosidase inhibitors
CN109071526B (zh) * 2016-02-25 2023-02-28 阿森纽荣股份公司 哌嗪衍生物的酸加成盐
US11612599B2 (en) * 2016-02-25 2023-03-28 Asceneuron Sa Glycosidase inhibitors
US10556902B2 (en) * 2016-02-25 2020-02-11 Asceneuron Sa Glycosidase inhibitors
AU2017378182A1 (en) * 2016-12-16 2019-06-06 Janssen Pharmaceutica Nv Bicyclic OGA inhibitor compounds
MA47575A (fr) * 2016-12-16 2020-01-01 Janssen Pharmaceutica Nv Composés inhibiteurs d'oga monocyclique
TWI654978B (zh) * 2017-01-27 2019-04-01 美商美國禮來大藥廠 5－甲基－1,2,4－二唑－3－基化合物
JP2020509004A (ja) * 2017-02-27 2020-03-26 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． Ｏｇａ阻害剤としての、ピペリジン、モルホリンまたはピペラジンで置換されている［１，２，４］−トリアゾロ［１，５−ａ］−ピリミジニル誘導体
TWI669302B (zh) 2017-05-25 2019-08-21 美商美國禮來大藥廠 5-甲基-1,3,4-<img align="absmiddle" height="18px" width="27px" file="d10999.TIF" alt="其他非圖式 ed10999.png" img-content="tif" orientation="portrait" inline="yes" giffile="ed10999.png"></img>二唑-2-基化合物
WO2019037860A1 (en) * 2017-08-24 2019-02-28 Asceneuron S.A. LINEAR INHIBITORS OF GLYCOSIDASE
AU2019234759C1 (en) * 2018-03-14 2025-02-06 Biogen Ma Inc. O-glycoprotein-2-acetamido-2-deoxy-3-D-glycopyranosidase inhibitors
US11459324B2 (en) 2018-03-14 2022-10-04 Biogen Ma Inc. O-glycoprotein-2-acetamido-2-deoxy-3-D-glycopyranosidase inhibitors
TWI726329B (zh) 2018-06-22 2021-05-01 美商美國禮來大藥廠 2,3-二氫呋喃并[2,3-b]吡啶化合物
JP2021530552A (ja) * 2018-07-31 2021-11-11 イーライ リリー アンド カンパニー 併用療法
CA3108158C (en) 2018-07-31 2023-05-16 Eli Lilly And Company 5-methyl-4-fluoro-thiazol-2-yl compounds
US11795165B2 (en) 2018-08-22 2023-10-24 Asceneuron Sa Tetrahydro-benzoazepine glycosidase inhibitors
WO2020039029A1 (en) * 2018-08-22 2020-02-27 Asceneuron S. A. Spiro compounds as glycosidase inhibitors
MX2021002111A (es) 2018-08-22 2021-07-16 Asceneuron S A Sales de adición de ácido de succinato y fumarato de derivados de piperazina útiles como inhibidores de glucosidasa.
US12016852B2 (en) 2018-08-22 2024-06-25 Asceneuron Sa Pyrrolidine glycosidase inhibitors
US12180205B2 (en) 2018-09-19 2024-12-31 Biogen Ma Inc. O-glycoprotein-2-acetamido-2-deoxy-3-d-glucopyranosidase inhibitors
TWI716107B (zh) 2018-09-26 2021-01-11 美商美國禮來大藥廠 6-氟-2-甲基苯并[d]噻唑-5-基化合物
EP4327814A3 (en) * 2018-12-05 2024-04-24 Biogen MA Inc. Morpholinyl, piperazinyl, oxazepanyl and diazepanyl o-glycoprotein-2-acetamido-2-deoxy-3-d-glucopyranosidase inhibitors
JP7663503B2 (ja) * 2019-03-08 2025-04-16 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド アゼチジニルｏ－糖タンパク質－２－アセトアミド－２－デオキシ－３－ｄ－グルコピラノシダーゼ阻害剤
AR120324A1 (es) * 2019-10-29 2022-02-09 Biogen Ma Inc Inhibidores de o-glucoproteína-2-acetamido-2-deoxi-3-d-glucopiranosidasa espirocíclica
WO2021094312A1 (en) 2019-11-11 2021-05-20 Janssen Pharmaceutica Nv Pyrrolidine and bicycloheteroaryl containing oga inhibitor compounds
WO2021110656A1 (en) 2019-12-02 2021-06-10 Janssen Pharmaceutica Nv Oga inhibitor compounds
WO2021123291A1 (en) 2019-12-18 2021-06-24 Janssen Pharmaceutica Nv Oga inhibitor compounds
JP2023507180A (ja) 2019-12-18 2023-02-21 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． Ｏｇａ阻害剤化合物
CA3160405A1 (en) 2019-12-18 2021-06-24 Jose Manuel Bartolome-Nebreda Oga inhibitor compounds
KR102533471B1 (ko) * 2020-11-23 2023-05-19 (주) 메디프론디비티 O-GlcNAcase 저해 활성을 갖는 화합물 및 이의 용도
CN112480018B (zh) * 2020-11-30 2023-06-20 中国药科大学 一种trpv3小分子变构抑制剂及其制备方法
MX2024001155A (es) * 2021-07-30 2024-07-01 Confo Therapeutics N V Compuestos para el tratamiento del dolor, en particular el dolor neuropatico, y/u otras enfermedades o trastornos que se asocian con at2r y/o se?alizacion mediada por at2r.
CN118139880A (zh) 2021-10-22 2024-06-04 伊莱利利公司 O-连接的n-乙酰葡糖胺水解酶(oga)抑制剂联合治疗
WO2024047185A1 (en) * 2022-08-31 2024-03-07 Janssen Pharmaceutica Nv Mass spectroscopy assay for detecting o-beta-linked n-acetylglucosaminylated tau peptides
CN121405694A (zh) * 2024-07-26 2026-01-27 浙江同源康医药股份有限公司 Oga抑制剂及其应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2533923A1 (fr) * 1982-10-05 1984-04-06 Cortial Nouvelles n-(aminomethyl-5 oxazolin-2 yl-2) n'-phenylurees, leur methode de preparation ainsi que leur application therapeutique
US4600025A (en) * 1982-11-18 1986-07-15 Grigg Ronald E Smoking products comprising nicotine substitutes
RU2340605C2 (ru) * 2002-06-27 2008-12-10 Ново Нордиск А/С Арилкарбонильные производные в качестве терапевтических средств
BR0312023A (pt) 2002-06-27 2005-03-22 Novo Nordisk As Composto, composto ativador da glicose cinase, método para evitar a hipoglicemia, uso de um composto, e, composição farmacêutica
OA12937A (en) * 2002-10-09 2006-10-13 Pfizer Prod Inc Thiazole compounds for the treatment of neurodegenerative disorders.
PL1723128T3 (pl) * 2004-01-06 2013-04-30 Novo Nordisk As Pochodne heteroarylowe mocznika oraz ich zastosowanie jako aktywatory glukokinazy
US7582769B2 (en) * 2005-07-08 2009-09-01 Novo Nordisk A/S Dicycloalkyl urea glucokinase activators
EP2322529B1 (en) 2006-08-31 2017-12-06 Simon Fraser University Selective glycosidase inhibitors and uses thereof
WO2008138842A1 (en) 2007-05-10 2008-11-20 Galapagos N.V. Imidazopyrazines and triazolopyrazine for the treatment of joint degenerative and inflammatory diseases
CA2709784A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 University Of Rochester Method for altering the lifespan of eukaryotic organisms
US7863291B2 (en) * 2008-04-23 2011-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Quinuclidine compounds as alpha-7 nicotinic acetylcholine receptor ligands
EP2403833A4 (en) 2009-03-02 2012-08-29 Sirtris Pharmaceuticals Inc 8-SUBSTITUTED QUINOLINES AND RELATED ANALOGUES USED AS SIRTUINE MODULATORS
US20100240720A1 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Burnham Institute For Medical Research Allosteric jnk inhibitors
JP2010270034A (ja) 2009-05-20 2010-12-02 Sumitomo Chemical Co Ltd アミド化合物並びにその植物病害防除用途
CN103435606A (zh) 2013-08-22 2013-12-11 中国药科大学 CDK2与GSK3β双重抑制剂及用途

Also Published As

Publication number Publication date
HRP20190857T1 (hr) 2019-07-12
PL2970272T3 (pl) 2019-09-30
WO2014159234A1 (en) 2014-10-02
CN105143222B (zh) 2018-02-02
US20160031871A1 (en) 2016-02-04
US20180093977A1 (en) 2018-04-05
IL241512A0 (en) 2015-11-30
SI2970272T1 (sl) 2019-06-28
US10301299B2 (en) 2019-05-28
DK2970272T3 (en) 2019-04-23
EP2970272A1 (en) 2016-01-20
AU2014241065A1 (en) 2015-08-13
IL241512B (en) 2020-08-31
CA2899088A1 (en) 2014-10-02
CN105143222A (zh) 2015-12-09
AU2014241065B2 (en) 2017-08-31
HUE043398T2 (hu) 2019-08-28
EP2970272B1 (en) 2019-02-27
PT2970272T (pt) 2019-06-05
US9879001B2 (en) 2018-01-30
JP2016517411A (ja) 2016-06-16
JP6360147B2 (ja) 2018-07-18
LT2970272T (lt) 2019-04-25
ES2723883T3 (es) 2019-09-03
CA2899088C (en) 2022-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS58768B1 (sr) Inhibitori glikozidaze
RU2476431C2 (ru) Конденсированное производное аминодигидротиазина
KR102008032B1 (ko) 글리코시다아제 저해제로서 피라노[3,2-d][1,3]티아졸
EP3679026A1 (en) Glutarimide
CA2513631A1 (fr) Derives d&#39;uree cyclique, leur preparation et leur utilisation pharmaceutique comme inhibiteurs de kinases
JPWO2013161913A1 (ja) 含窒素複素環化合物
US20080032991A1 (en) 2, 8-disubstituted Naphthyridine Derivatives
US20250296922A1 (en) Polysubstituted pyrrolidine derivative, preparation method therefor and use thereof
WO2007115805A2 (en) Aurora kinase inhibitors
RU2389718C2 (ru) Новые производные гексафторизопропанола
CN108239073A (zh) 化合物、医药组成物及其用途
KR102681427B1 (ko) Trpm8 길항제로서의 4-하이드록시-2-페닐-1,3-티아졸-5-일 메타논 유도체
CN121127464A (zh) Lrrk2的抑制剂
KR20240046553A (ko) Sting 길항제로서의 소분자 우레아 유도체
JP2001335579A (ja) フロイソキノリン誘導体、その製造法および用途
JP2009503085A (ja) アルツハイマー病治療用の環状ケタールベータ−セクレターゼインヒビター