RS58666B1 - Formulacije konjugata leka anti-egfr antitela - Google Patents

Formulacije konjugata leka anti-egfr antitela

Info

Publication number
RS58666B1
RS58666B1 RS20190452A RSP20190452A RS58666B1 RS 58666 B1 RS58666 B1 RS 58666B1 RS 20190452 A RS20190452 A RS 20190452A RS P20190452 A RSP20190452 A RS P20190452A RS 58666 B1 RS58666 B1 RS 58666B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
egfr
formulation
adc
antibody
storage
Prior art date
Application number
RS20190452A
Other languages
English (en)
Inventor
Markus Tschoepe
Katharina Kaleta
Vineet Kumar
Original Assignee
Abbvie Deutschland
Abbvie Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbvie Deutschland, Abbvie Inc filed Critical Abbvie Deutschland
Publication of RS58666B1 publication Critical patent/RS58666B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39516—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum from serum, plasma
    • A61K39/39525—Purification
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
Uvod
[0001] Receptor ljudskog epidermalnog faktora rasta (takođe poznat kao HER-1 ili Erb-B1, koji se ovde označava kao „EGFR“) je transmembranski receptor od 170 kDa kodiran c-erbB protoonkogenom, i pokazuje intrinzičnu aktivnost tirozin kinaze (Modjtahedi i dr., Br. J. Cancer 73:228-235 (1996); Herbst i Shin, Cancer 94:1593-1611 (2002)). Unos P00533 baze podataka SwissProt daje sekvencu EGFR. EGFR reguliše brojne ćelijske procese preko puteva prenosa signala posredovanih tirozin-kinazom, uključujući, ali ne ograničavajući se na, aktivaciju puteva transdukcije signala koji kontrolišu proliferaciju ćelija, diferencijaciju, preživljavanje ćelija, apoptozu, angiogenezu, mitogenezu i metastaze (Atalay i dr., Ann.
Oncology 14:1346-1363 (2003); Tsao i Herbst, Signal 4:4-9 (2003); Herbst and Shin, Cancer 94:1593-1611 (2002); Modjtahedi i dr., Br. J. Cancer 73:228-235 (1996)).
[0002] Prekomerno eksprimiranje EGFR je zabeleženo u brojnim malignim stanjima kod ljudi, uključujući rak bešike, mozga, glave i vrata, pankreasa, pluća, dojke, jajnika, debelog creva, prostate i bubrega. (Atalay i dr., Ann. Oncology 14:1346-1363 (2003); Herbst and Shin, Cancer 94:1593-1611 (2002) Modjtahedi i dr., Br. J. Cancer 73:228-235 (1996)). U mnogim od ovih stanja, prekomerno eksprimiranje EGFR korelira ili je povezano sa lošom prognozom za pacijente. (Herbst i Shin, Cancer 94:1593-1611 (2002) Modjtahedi i dr., Br. J. Cancer 73:228-235 (1996)). EGFR se takođe eksprimira u ćelijama normalnih tkiva, posebno epitelnih tkiva kože, jetre i gastrointestinalnog trakta, mada na generalno nižim nivoima nego kod malignih ćelija (Herbst i Shin, Cancer 94:1593-1611 (2002)).
[0003] Značajna proporcija tumora koji sadrže amplifikacije EGFR gena (tj. višestruke kopije EGFR gena) takođe ko-eksprimiraju skraćenu verziju receptora (Wikstrand i dr. (1998) J. Neurovirol. 4, 148-158) poznat kao de2-7 EGFR, ΔEGFR ili Δ2-7 (izrazi koji se ovde koriste kao sinonimi) (Olapade-Olaopa i dr. (2000) Br. J. Cancer.82, 186-94). Preuređenje koje se pogledati u de2-7 EGFR rezultuje zreloj mRNK unutar okvira kojoj nedostaje 801 nukleotida koji pokrivaju egzone 2-7 (Wong i dr. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.89, 2965-9;
Yamazaki i dr. (1990) Jpn. J. Cancer Res. 81, 773-9; Yamazaki i dr. (1988) Mol. Cell. Biol.8, 1816-20; Sugawa i dr. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 8602-6). Odgovarajući EGFR protein ima brisanje od 267 aminokiselina koje sadrže ostatke 6-273 ekstracelularnog domena i novi glicinski ostatak na fuzionom spoju (Sugawa i dr., 1990). Ovo brisanje, zajedno sa umetanjem ostatka glicina, proizvodi jedinstveni spojni peptid na interfejsu brisanja (Sugawa i dr., 1990).
[0004] DE2-7 EGFR je zabeležen u brojnim tipovima tumora, uključujući gliom, rak dojke, pluća, jajnika i prostate (Wikstrand i dr. (1997) Cancer Res.57, 4130-40; Olapade-Olaopa i dr. (2000) Br. J. Cancer.82, 186-94; Wikstrand, i dr. (1995) Cancer Res.55, 3140-8; Garcia de Palazzo i dr. (1993) Cancer Res.53, 3217-20). Dok ovaj skraćeni receptor ne vezuje ligand, on poseduje nisku konstitutivnu aktivnost i daje značajnu prednost rastu ćelijama glioma koje su uzgajane kao tumorski ksenografti kod golih miševa (Nishikawa i dr. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.91, 7727-31) i sposoban je da transformiše NIH3T3 ćelije (Batra i dr. (1995) Cell Growth Differ.6, 1251-9) i MCF-7 ćelije. Ćelijski mehanizmi koje koristi de2-7 EGFR u ćelijama glioma nisu u potpunosti definisani, ali se navodi da uključuju smanjenje apoptoze (Nagane i dr. (1996) Cancer Res.56, 5079-86) i malo povećanje proliferacije (Nagane i dr., 1996).
[0005] Pošto je eksprimiranje ovog skraćenog receptora ograničeno na tumorske ćelije, predstavlja visoko specifičan cilj za terapiju antitelima. Prema tome, postoji potreba u struci za anti-EGFR antitelima i formulacijama koje mogu da pruže efikasno tretman onima kojima je to potrebno.
[0006] Konjugati antitelo-lek (ADC) predstavljaju novu klasu terapeutika koja sadrži antitelo konjugovano za citotoksičnim lekom putem hemijskog veznika. Danas se u kliničkim ispitivanjima testiraju brojni ADC, uključujući trastuzumab (Herceptin (anti-HER2 antitelo) vezan za DM1; Genentech/Roche) i glembatumumab vedotin (CDX-011; anti-GPNMB antitelo vezano za MMAE; Celldex Therapeutics). Terapeutski koncept ADC je da koristi antitelo kao nosač za isporuku citotoksičnog leka u tumorsku ćeliju pomoću vezivanja za ciljani površinski antigen. ADC imaju složenije i heterogenije strukture nego nekonjugovana antitela. Prema tome, ADC predstavljaju izazov za formulisanje u terapeutske svrhe.
[0007] US 2005/232929 opisuje postupke za detektovanje, skeniranje i kvantifikovanje bioloških uzoraka nakon primene konjugata antitela, antitela i njihovih fragmenata i metabolita, afinitetnom separacijom, hromatografijom i masenom spektrometrijom.
SAŽETAK PRONALASKA
[0008] predmetni pronalazak pruža formulacije koje sadrže anti-receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) konjugate antitelo-lek (ADC) i takve formulacije za upotrebu u postupcima za tretman poremećaja koji zahtevaju tretman sa anti-receptor epidermalnog faktora rasta (anti-EGFR) ADC, kao što je kao rak. predmetni pronalazak i njegova otelotvorenja su prikazani u priloženim patentnim zahtevima.
[0009] Pronalazak pruža formulaciju koja sadrži anti-receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) konjugat antitelo-lek (ADC), šećer, histidin i surfaktant, gde formulacija ima pH od oko 5 - 7, i gde anti-EGFR ADC sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za auristatin gde anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22.
[0010] U jednom otelotvorenju, formulacija je liofilizovana.
[0011] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži surfaktant koji je polisorbat, npr., polisorbat 80, ili poloksamer. U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 0,05-0,15 mg/ml polisorbata.
[0012] U još jednom otelotvorenju, formulacija sadrži oko 60-80 mg/ml šećera. U jednom otelotvorenju, šećer se bira iz grupe koju čine manitol, sorbitol, saharoza i trehaloza.
[0013] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži oko 5-25 mM histidina.
[0014] U jednom otelotvorenju, formulacija je liofilizovana i šećer je saharoza. U još jednom otelotvorenju pronalaska, liofilizovana formulacija ne sadrži laktobionsku kiselinu. U još jednom otelotvorenju pronalaska, liofilizovana formulacija ne sadrži šećernu kiselinu.
[0015] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska je vodena i sadrži oko 1-40 mg/ml anti-EGFR ADC.
[0016] U sledećem otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži 1-150 mg anti-EGFR ADC. U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži 90-110 mg anti-EGFR ADC.
[0017] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska ima pH od oko 5 do 7. U sledećem otelotvorenju, formulacija ima pH od oko 5,5 do 6,5.
[0018] U jednom otelotvorenju, auristatin je Monometilauristatin F (MMAF). U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži anti-EGFR ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo, konjugovano za Monometilauristatin F (MMAF). U još jednom otelotvorenju, MMAF je konjugovan sa antitelom sa maleimidokaproil veznikom.
[0019] Pronalazak dalje pruža liofilizovanu formulaciju koja sadrži anti-receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) konjugat antitelo-lek (ADC) koji sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za auristatin, šećerom, npr., saharoza, surfaktant, npr., polisorbat, kao što je polisorbat 80, i histidin. U jednom otelotvorenju, liofilizovana formulacija sadrži 1-20 mg histidina, oko 320-410 mg šećera, oko 0,1 do 0,9 mg surfaktanta, i oko 1-150 mg anti-EGFR ADC.
[0020] Pronalazak takođe pruža vodenu formulaciju koja sadrži oko 1 - 100 mg/ml antireceptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) konjugat antitelo-lek (ADC) koji sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za auristatin, oko 1 - 10 mg/mL histidina, oko 50 -90 mg/ml šećera, npr., saharoza, i oko 0,01 - 0,2 mg/ml surfaktanta, npr., polisorbata 80.
[0021] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži anti-EGFR ADC gde je anti-EGFR antitelo humanizovano.
[0022] U još jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži anti-EGFR ADC gde anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18.
[0023] U još jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži anti-EGFR ADC gde anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, konstantni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 14, varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18, i konstantni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 19 ,
[0024] Formulacija pronalaska sadrži anti-EGFR ADC gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i sadrže varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR-e koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22.
[0025] U sledećom otelotvorenju predmetnog pronalaska, anti-EGFR ADC sadrži CDR (tj, CDR1, CDR2 i CDR3 lakog lanca) opisane u varijabilnom regionu lakog lanca koji je prikazan u aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 18, i CDR (tj., teški lanac CDR1, CDR2 i CDR3) opisan u aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 13.
[0026] Pronalazak dalje pruža liofilizovanu formulaciju koja sadrži saharozu, polisorbat 80 i histidin, gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16, i 17, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR-e koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22. U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 1-110 mg anti-EGFR ADC.
[0027] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži ADC smešu koja sadrži anti-EGFR ADC koji ima prosečan DAR od oko 3 ili smešu ADC koja sadrži anti-EGFR ADC koji imaju DAR od oko 2-4.
[0028] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži anti-EGFR ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za monometil-auristatin F (MMAF), gde navedeni ADC 1-MMAF sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR-e koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22, saharoza, histidin, i polisorbat 80, gde formulacija sadrži ADC mešavinu koja ima prosečan DAR od oko 3 ili ADC mešavinu koja ima DAR od oko 2-4. U još jednom otelotvorenju, anti-EGFR antitelo je vezano za MMAF putem maleimidokaproilskog veznika. U još daljem otelotvorenju, anti-EGFR antitelo, sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18.
[0029] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska sadrži anti-EGFR ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za monometil-auristatin E (MMAE), gde pomenuti ADC 1-MMAE sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR-e koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22, saharoza, histidin, i polisorbat 80, gde formulacija sadrži ADC mešavinu koja ima prosečan DAR od oko 3 ili ADC mešavinu koja ima DAR od oko 2-4. U sledećem otelotvorenju pronalaska, formulacija je liofilizovana. U još daljem otelotvorenju, anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18.
[0030] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska je farmaceutska formulacija.
[0031] Pronalazak takođe opisuje postupak za pripremu formulacije, gde postupak uključuje liofilizaciju vodene formulacije koja ima pH u rasponu od oko 5 do 7 i sadrži 1-20 mg histidina, oko 320-410 mg šećera, oko 0,1 do 0,9 mg surfaktanta, i oko 1-150 mg anti-EGFR ADC.
U još jednom aspektu, predmetni pronalazak pruža formulacije pronalaska za upotrebu u postupku tretmana poremećaja koji zahtevaju tretman sa anti-EGFR ADC. U jednom otelotvorenju, poremećaj koji zahteva tretman sa anti-EGFR ADC je rak, npr., glioblastom, rak pluća, rak pluća, rak debelog creva, rak glave i vrata, rak dojke, tumori skvamoznih ćelija, rak analnog tkiva, rak kože i rak vulve.
[0032] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska se koristi za tretman čvrstih tumora koji verovatno prekomerno eksprimiraju receptore epidermalnog faktora rasta (EGFR) ili skvamozni rak ne-malih ćelija pluća (NSCLC).
[0033] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska se koristi za tretman raka izabranog iz grupe koja se sastoji od skvamoznih tumora (uključujući, skvamozne tumore pluća, glave i vrata, cervikalne itd.), glioblastoma, glioma, raka ne-malih ćelija pluća, rak pluća, raka debelog creva, raka glave i vrata, raka dojke, tumora skvamoznih ćelija, raka analnog tkiva, raka kože i raka vulve.
[0034] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska se koristi za tretman multiform glioblastoma.
[0035] U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska se koristi za tretman čvrstog tumora koji ima prekomerno eksprimiranje EGFR. U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska se koristi za tretman pacijenta koji ima napredan čvrsti tumor koji verovatno ima prekomerno eksprimiranje EGFR.
[0036] U jednom otelotvorenju, formulacije iz predmetnog pronalaska se daju intravenozno.
[0037] Pronalazak takođe pruža komplete koji sadrže ovde opisane formulacije.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0038]
Slika 1 Slika 1 je dijagram koji prikazuje strukturu MMAE uparenog sa antitelom od interesa (mAb) pomoću veznika (GN veznici Auristatin: vcMMAE).
Slika 2 Slika 1 je dijagram koji prikazuje strukturu MMAF uparenog sa antitelom od interesa (mAb) pomoću povezivača (Veznici Auristatin: mcMMAF).
Slika 3 (A i B) grafički prikazuju početak razvijanja temperature kao što je određeno dinamičkom fluorescencijom skeniranja (A) i diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (B). ◆ antitelo 1; ■ Konjugat antitelo-lek (ADC) 1- MMAF; ▲ADC 1- MMAE.
Slika 4 (A i B) grafički prikazuje prisustvo nestrukturiranih elemenata u antitelu 1, ADC 1- MMAF i ADC 1- MMAE korišćenjem Fourier-ove transformacije
infracrvene spektroskopije (FTIR) (A) i blizu UV-cirkularnog dikroizma (CD) (B). ◆ antitelo 1; ■ ADC 1- MMAF; ▲ ADC 1-MMAE.
Slika 5 grafički opisuje sklonost agregacije ADC 1- MMAE u niskim koncentracijama, u poređenju sa ADC 1- MMAF i antitelom 1.
Slika 6 grafički prikazuje sklonost agregacije ADC 1- MMAE u visokim koncentracijama, u poređenju sa ADC 1- MMAF i antitelom 1.
Slika 7 prikazuje šematsku analizu serumske stabilnosti i opisuje in vitro serumsku stabilnost broja molekula, uključujući antitelo 1, ADC 1- MMAF i ADC 1-MMAE.
Figura 8 (A i B) grafički prikazuje stabilnost zamrzavanja/odmrzavanja, naznačeno kao procenat prisutnog monomera, kao što je određeno pomoću SEC između formulacija antitela 1, ADC 1- MMAF i ADC 1-MMAE u 15 mM histidinskom puferu na pH 5,75 (A) i 1 mg/ml pH 7,010 mM citrata i 10 mM fosfatnog pufera.
Slika 9 (A i B) je grafik koji kvantifikuje formiranje sub-vidljivih čestica tokom zamrzavanja-odmrzavanja, što je određeno mikro-protočnim prikazom (MFI).
DETALJAN OPIS
I. Definicije
[0039] Kako bi se predmetni pronalazak lakše razumeo, prvo su definisani određeni izrazi. Pored toga, treba napomenuti da kad god se navede vrednost ili opseg vrednosti parametra, podrazumeva se da vrednosti i opsezi neposredni navedenim vrednostima takođe treba da budu deo predmetnog pronalaska.
[0040] Izrazi „anti-receptor epidermalnog faktora rasta konjugat antitelo-lek“ ili „anti-EGFR konjugat antitelo-lek“ i „anti-EGFR ADC“, ovde korišćeni naizmenično, odnose se na konjugat antitelo-lek koji sadrži antitelo koje se specifično vezuje za EGFR, gde je antitelo konjugovano za lek, npr., citotoksični agens kao što je auristatin (npr., monometil auristatin F). U jednom otelotvorenju, anti-EGFR konjugat antitelo-lek je ADC 1-MMAF, koji je antitelo 1 konjugovano za MMAF preko maleimidokaproil (mc) veze. Aminokiselinske sekvence koje odgovaraju lakim i teškim lancima antitela 1 date su u SEQ ID NO: 13 do 22. Osim ako nije drugačije naznačeno, izraz „ADC1-MMAF“ kad se ovde koristi, uključuje prečišćeni ADC1-MMAF (takođe označen kao ADC1-MMAFp).
[0041] Izraz „auristatin“, kad se ovde koristi, odnosi se na porodicu antimitotičkih agenasa. Derivati auristatina su takođe uključeni u definiciju izraza „auristatin“. Primeri auristatina uključuju, ali nisu ograničeni na, auristatin E (AE), monometil-auristatin E (MMAE), monometil-auristatin F (MMAF) i sintetičke analoge dolastatina.
[0042] Izraz „anti-EGFR antitelo“ označava antitelo koje se specifično vezuje za EGFR. Antitelo „koje vezuje“ antigen od interesa, tj. EGFR je ono koje je sposobno da veže taj antigen sa dovoljnim afinitetom, tako da je antitelo korisno u ciljanju ćelije koja eksprimira antigen.
[0043] Izraz „ADC mešavina“, kad se ovde koristi, odnosi se na sastav koji sadrži heterogenu DAR distribuciju ADC. U jednom otelotvorenju, ADC mešavina sadrži anti-EGFR ADC koji ima distribuciju DAR od 1 do 8, npr., 2, 4, 6, i 8 (tj. vrste koje imaju sadržaj leka od 2, 4, 6 i 8). U još jednom otelotvorenju, ADC mešavina sadrži anti-EGFR ADC koji ima DAR manje od 4, npr., DAR od 2-4. Značajno, proizvodi degradacije mogu biti takvi da DAR od 1, 3, 5 i 7 mogu takođe biti uključeni u smešu. Dalje, ADC unutar smeše mogu takođe imati DAR veće od 8. ADC mešavina je rezultat redukcije disulfida između lanaca, praćeno konjugacijom.
[0044] Izraz „ADC1-MMAFp“, kad se ovde koristi, odnosi se na molekul ADC1-MMAF koji se nalazi unutar ADC mešavine koja je prečišćena tako da je DAR ADC unutar željenog opsega, npr., (DAR od 2-4) ili je ADC uključen u ADC mešavinu koja ima željeni prosek, (npr., prosečan DAR od 3).
[0045] Izraz „formulacija“, kad se ovde koristi, označava vodenu formulaciju ili liofilizovanu formulaciju. U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska je liofilizovana. U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska je vodena. U jednom otelotvorenju, formulacija pronalaska ne uključuje helator. U jednom otelotvorenju, liofilizovana formulacija pronalaska ne uključuje helator.
[0046] Izraz „vodena formulacija“ se odnosi na rastvor u kom je rastvarač voda. U jednom otelotvorenju, izraz „vodena formulacija“ se odnosi na tečnu formulaciju u kojoj je rastvarač voda, gde formulacija nije prethodno liofilizovana (tj. ne nastaje rekonstitucijom liofilizovane formulacije). U još jednom otelotvorenju, izraz „vodena formulacija“ se odnosi na tečnu formulaciju u kojoj je rastvarač voda, gde je formulacija prethodno liofilizovana (tj. rekonstituisana formulacija).
1
[0047] Izraz „liofilizovan“ kad se ovde koristi u vezi sa formulacijom prema pronalasku označava formulaciju koja se suši zamrzavanjem formulacije i zatim sublimacijom leda iz smrznutog sadržaja bilo kojim postupkom sušenja zamrzavanjem poznatim u struci, na primer komercijalno raspoloživim uređajima za sušenje zamrzavanjem.
[0048] „Rekonstituisana“ formulacija je ona koja je pripremljena rastvaranjem liofilizovane formulacije koja sadrži protein, npr., ADC, u razređivaču tako da se protein raspršuje u rekonstituiranoj formulaciji. Rekonstituisana formulacija je pogodna za primenu (npr., intravenozna primena) pacijentu koji se tretira proteinom od interesa (npr., anti-EGFR konjugat antitelo-lek).
[0049] „Rastvarač“ koji je ovde interesantan je onaj koji je farmaceutski prihvatljiv (bezbedan i netoksičan za primenu čoveku) i koristan je za dobijanje tečne formulacije, kao što je formulacija rekonstituisana posle liofilizacije. Primeri razređivača uključuju sterilnu vodu, bakteriostatičnu vodu za injekcije (BVFI), pH puferisan rastvor (npr.. fiziološki rastvor koji je puferisan fosfatom), sterilni rastvor soli, Ringerov rastvor ili rastvor dekstroze. U alternativnom otelotvorenju, razblaživači mogu da uključuju vodene rastvore soli i/ili pufera.
[0050] Izraz „pufer“ se odnosi na jedinjenje koje se odupire promenama pH dejstvom njegovih komponenti kiselo-baznog konjugata kada je u rastvoru. U jednom otelotvorenju, pufer koji se koristi u ovom pronalasku ima pH u opsegu od oko 4,5 do oko 7,5. Primeri pufera koji će kontrolisati pH u ovom opsegu uključuju acetat (npr., natrijum acetat), sukcinat (kao što je natrijum sukcinat), glukonat, metionin, imidazol, histidin, glicin, arginin, citrat, fosfat, citrat i fosfat, Tris, i druge pufere organskih kiselina. U jednom otelotvorenju, pufer koji se koristi u formulaciji sadrži histidin, sukcinat ili citratni ili fosfatni pufer. U jednom otelotvorenju pronalaska, formulacija sadrži oko 1 - 10 mg/mL pufera koji sadrži histidin. U sledećom otelotvorenju pronalaska, formulacija sadrži 1-20 mg pufera koji sadrži histidin.
[0051] Izraz „šećer“, kad se ovde koristi, označava monosaharid ili oligosaharid.
Monosaharid je monomerni ugljeni hidrat koji se ne hidrolizuje kiselinama, uključujući jednostavne šećere i njihove derivate, npr.. aminošećere. Primeri monosaharida uključuju, ali nisu ograničeni na, glukozu, fruktozu, galaktozu, manozu, sorbozu, ribozu, deoksiribozu, neuraminsku kiselinu. Oligosaharid je ugljeni hidrat koji se sastoji od više od jedne monomerne saharidne jedinice koja je povezana preko glikozidne veze, bilo razgranate ili u lancu. Jedinice monomernih saharida unutar oligosaharida mogu biti identične ili različite. U zavisnosti od broja monomernih saharidnih jedinica, oligosaharid je di-, tri-, tetra-, penta- i tako dalje saharid. Primeri oligosaharida uključuju, ali nisu ograničeni na, maltozu, saharozu, laktozu, melezitozu, trehalozu, sorbozu i rafinozu. Za razliku od polisaharida, monosaharidi i oligosaharidi su rastvorljivi u vodi. Primeri šećera uključuju, ali nisu ograničeni na, redukcioni šećer, neredukcioni šećer, šećerni alkohol i šećernu kiselinu. „Redukcioni šećer“ je šećer koji sadrži slobodnu aldehidnu ili ketonsku grupu i može redukovati metalne jone ili reagovati kovalentno sa lizinom i drugim amino grupama u proteinima. „Neredukcioni šećer“ je šećer koji nema slobodnu aldehidnu ili ketonsku grupu i nije oksidisan blagim oksidacionim sredstvima kao što su Fehling-ov ili Benedikt-ov rastvor. Primeri redukcionih šećera su fruktoza, manoza, maltoza, laktoza, arabinoza, ksiloza, riboza, ramnoza, galaktoza i glukoza. Neredukcioni šećeri uključuju saharozu, trehalozu, sorbozu, melezitozu i rafinozu. Manitol, ksilitol, eritritol, treitol, sorbitol i glicerol su primeri šećernih alkohola. U jednom otelotvorenju pronalaska, šećer je manitol, sorbitol, saharoza ili trehaloza. U sledećem otelotvorenju pronalaska, formulacija sadrži oko 50 -90 mg/ml šećera, npr., saharoza. U sledećem daljem otelotvorenju pronalaska, formulacija sadrži oko 60-80 mg/ml šećera, npr., saharoza. U sledećem daljem otelotvorenju pronalaska, formulacija sadrži oko 70 mg/ml šećera, npr., saharoza. U još jednom daljem ostvarenju pronalaska, liofilizovana formulacija sadrži oko 320-410 mg šećera.
[0052] Izraz „surfaktant“ se generalno odnosi na organske supstance koje imaju amfipatske strukture; naime, oni su sastavljeni od grupa suprotnih tendencija rastvorljivosti, tipično uljano rastvorljivog ugljovodoničnog lanca i jonske grupe rastvorljive u vodi. Surfaktanti se mogu klasifikovati, u zavisnosti od naboja površinski aktivnog dela, na anjonske, katjonske i nejonske surfaktante. Surfaktanti se često koriste kao agensi za vlaženje, emulgovanje, solubilizaciju i dispergovanje za različite farmaceutske sastave i preparate bioloških materijala. Primeri pogodnih surfaktanata uključuju, ali nisu ograničeni na, natrijum lauril sulfat, polisorbate kao što je polioksietilen sorbitan monooleat, monolaurat, monopalmitat, monstearat ili drugi estar polioksietilen sorbitana (npr., komercijalno dostupni TWEENS, kao što su TWEEN 20 i TWEEN 80 (ICI Speciality Chemicals)), natrijum dioktilsulfosukcinat (DOSS), lekitin, stearilni alkohol, cetostearilni alkohol, holesterol, polioksietilen ricin ulje, gliceridi polioksietilen masne kiseline, poloksameri (npr., Pluronics F68™ i F108™, koji su blok kopolimeri etilen oksida i propilen oksida); polioksietilenski derivati ricinusovog ulja ili njihove smeše.
[0053] Izraz „polisorbat“, kad se ovde koristi, odnosi se na oleatne estere sorbitola i njegovih anhidrida, tipično kopolimerizovanih sa etilen oksidom. U jednom otelotvorenju, polisorbat ima molekulsku težinu u rasponu od oko 1200 Da (približna molekulska težina polisorbata 20) do oko 1350 Da (približna molekulska težina polisorbata 80). U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži polisorbat 20, polisorbat 40, polisorbat 60, ili polisorbat 80. U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži oko 0,1 do 0,9 mg polisorbata. U još jednom otelotvorenju, formulacija sadrži oko 0,01 - 0,2 mg/ml polisorbata. U još jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 0,05-0,15 mg/ml polisorbata.
[0054] Izraz „farmaceutska formulacija“ se odnosi na pripreme koji su u takvom obliku da dozvoljavaju da biološka aktivnost aktivnog sastojka bude efikasna i, prema tome, može se davati pacijentu za terapeutsku upotrebu.
[0055] „Stabilna“ formulacija je ona u kojoj anti-EGFR konjugat antitelo-lek u suštini zadržava svoju fizičku stabilnost i/ili hemijsku stabilnost i/ili biološku aktivnost tokom skladištenja. Različite analitičke tehnike za merenje stabilnosti proteina su dostupne u struci i pregledane su u npr., 247-301, Peptide and Protein Drug Delivery, pp.247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) i Jones (1993) Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90. U jednom otelotvorenju, stabilnost anti-EGFR konjugata antitelo-lek je određena prema procentu monomernog proteina u rastvoru, sa niskim procentom degradiranog (npr., fragmentisani) i/ili agregiranog proteina. Na primer, formulacija koja sadrži stabilan anti-EGFR konjugat antitelo-lek može da obuhvati najmanje 95% monomerni anti-EGFR konjugat antitelo-lek. Alternativno, formulacija može da sadrži ne više od 5% agregiranog i/ili degradiranog anti-EGFR konjugata antitelo-lek.
[0056] Anti-EGFR konjugat antitelo-lek „zadržava svoju fizičku stabilnost“ u farmaceutskoj formulaciji ako suštinski ne pokazuje znakove agregacije, taloženja i/ili denaturacije nakon vizuelnog ispitivanja boje i/ili bistroće, ili mereno rasipanjem UV svetlosti ili pomoću hromatografija isključivanja po veličini. U jednom otelotvorenju, stabilna vodena formulacija je formulacija koja ima manje od oko 5% agregacije anti-EGFR konjugata antitelo-lek u formulaciji.
1
[0057] Anti-EGFR konjugat antitelo-lek „zadržava svoju hemijsku stabilnost“ u farmaceutskoj formulaciji ako je hemijska stabilnost u datom vremenu takva da se smatra da anti-EGFR konjugat antitelo-lek još uvek zadržava svoju biološku aktivnost kao što je definisano u daljem tekstu. Hemijska stabilnost se može proceniti detektovanjem i kvantifikovanjem hemijski izmenjenih oblika anti-EGFR konjugata antitelo-lek. Hemijska izmena može uključivati modifikacije veličine (npr., kliping) koje se mogu proceniti korišćenjem hromatografije isključivanja veličine, SDS-PAGE i/ili matrično-asistirane laserske desorpcione jonizacije/vremena leta masene spektrometrije (MALDI/TOF MS), na primer. Druge vrste hemijske izmene uključuju promenu napona (npr., koje nastaju kao rezultat deamidacije), koje se može proceniti, npr., jonoizmenjivačkom hromatografijom.
[0058] Anti-EGFR konjugat antitelo-lek „zadržava svoju biološku aktivnost“ u farmaceutskoj formulaciji, ako je protein u farmaceutskoj formulaciji biološki aktivan za svoju namenu. Na primer, biološka aktivnost anti-EGFR konjugata antitelo-lek je zadržana ako je biološka aktivnost anti-EGFR konjugata antitelo-lek u farmaceutskoj formulaciji unutar oko 30%, oko 20%, ili oko 10% (unutar grešaka testa) biološke aktivnosti ispoljene u vreme pripreme farmaceutske formulacije (npr., kao što je određeno u testu vezivanja antigena). U jednom otelotvorenju, biološka aktivnost je citotoksičnost ćelija epidermoidnog raka.
[0059] Izraz „antitelo“ se široko odnosi na molekul imunoglobulina (Ig), koji se obično sastoji od četiri polipeptidna lanca, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca, ili bilo koji funkcionalni fragment, mutant, varijanta ili njegov derivat, koji zadržava esencijalne ciljane karakteristike vezivanja Ig molekula.
[0060] Kod antitela pune dužine, svaki teški lanac se sastoji od varijabilnog regiona teškog lanca (ovde skraćeno kao HCVR ili VH) i konstantnog regiona teškog lanca. Konstantni region teškog lanca se sastoji od tri domena, CH1, CH2 i CH3. Svaki laki lanac se sastoji od varijabilnog regiona lakog lanca (ovde skraćeno kao LCVR ili VL) i konstantnog regiona lakog lanca. Konstantni region lakog lanca se sastoji od jednog domena, CL. VH i VL regioni mogu biti dalje podeljeni na regione hipervarijabilnosti, koji se nazivaju regioni za određivanje komplementarnosti (CDR), isprepleteni sa regionima koji su više konzervirani, nazvani okvirni regioni (FR). Svaki VH i VL je sastavljen od tri CDR i četiri FR, raspoređena od amino-terminusa do karboksi-terminusa sledećim redom: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Molekuli imunoglobulina mogu biti bilo kog tipa (npr., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgY) i klase (npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili potklasa.
[0061] Izraz „deo koji vezuje antigen“ antitela (ili jednostavno „deo antitela“), kad se ovde koristi, odnosi se na jedan ili više fragmenata antitela koji zadržavaju sposobnost specifičnog vezivanja za antigen (npr., hIL-13). Pokazano je da se antigen-vezujuća funkcija antitela može izvesti fragmentima antitela pune dužine. Takva otelotvorenja antitela mogu takođe biti bispecifični, dvostruko specifični ili multi-specifični formate; specifično vezivanje za dva ili više različitih antigena. Primeri vezujućih fragmenata obuhvaćenih unutar izraza „deo koji vezuje antigen“ antitela obuhvataju (i) Fab fragment, monovalentni fragment koji se sastoji od VL, VH, CL i CH1 domena; (ii) F(ab')2fragment, bivalentni fragment koji sadrži dva Fab fragmenta povezana sa disulfidnim mostom u zglobnom regionu; (iii) Fd fragment koji se sastoji od VH i CH1 domena; (iv) Fv fragment koji se sastoji od VL i VH domena jednog kraka antitela, (v) fragment dAb (Ward i dr., (1989) Nature 341:544-546, Winter i dr., PCT publication WO 90/05144 A1), koji sadrži jedan varijabilni domen; i (vi) izolovano region za određivanje komplementarnosti (CDR). Dalje, iako su dva domena Fv fragmenta, VL i VH, kodirana za odvojene gene, oni se mogu spojiti, koristeći rekombinantne postupke, pomoću sintetičkog veznika koji im omogućava da budu napravljeni kao jedan lanac proteina u kom se VL i VH regioni uparuju kako bi formirali monovalentne molekule (poznate kao jednolančani Fv (scFv); pogledati npr., Bird i dr. (1988) Science 242:423-426; i Huston i dr. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Takva jednolančana antitela su takođe obuhvaćena izrazom „deo koji vezuje antigen“ antitela. Takođe su obuhvaćeni i drugi oblici jednolančanih antitela, kao što su dijatela. Dijatela su bivalentna, bispecifična antitela u kojima su VH i VL domeni eksprimirani na jednom polipeptidnom lancu, ali koristeći veznik koji je prekratak da bi omogućio uparivanje između dva domena na istom lancu, na taj način primoravajući domene da se uparuju sa komplementarnim domenima drugog lanca, čime se stvaraju dva mesta vezivanja antigena (pogledati npr., Holliger, P., i dr. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., i dr. (1994) Structure 2:1121-1123). Takvi delovi vezivanja antitela su poznati u struci (Kontermann and Dubel eds., Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York.790 pp. (ISBN 3-540-41354-5).
[0062] „Izolovano antitelo“, kad se ovde koristi, treba da se odnosi na antitelo koje je suštinski bez drugih antitela koje imaju različite antigenske specifičnosti (npr., izolovano antitelo koje specifično vezuje EGFR je u suštini slobodno od antitela koja specifično vezuju
1
antigene osim EGFR). Izolovano antitelo koje se specifično vezuje za EGFR može, međutim, imati unakrsnu reaktivnost na druge antigene, kao što su EGFR molekuli iz drugih vrsta. Štaviše, izolovano antitelo može biti suštinski bez drugih ćelijskih materijala i/ili hemikalija.
[0063] Izraz „humanizovano antitelo“ odnosi se na antitela koja sadrže sekvence varijabilnog regiona teškog i lakog lanca iz vrste koja nije čovek (npr., miš), ali kod kojih je barem deo VH i/ili VL sekvenci promenjen da bude više „sličan ljudskim“, tj. sličniji ljudskim germlinijskim varijabilnim sekvencama. U posebnom otelotvorenju, izraz „humanizovano antitelo“ se odnosi na antitelo ili varijantu, derivat ili fragment antitela, koji se specifično vezuje za antigen koji je od interesa, i sadrži okvirni (FR) region koji ima suštinski aminokiselinsku sekvencu ljudskog antitela, i sadrži CDR koji imaju suštinski aminokiselinsku sekvencu antitela koje nije ljudsko. Kad se ovde koristi, izraz „suštinski“ u kontekstu CDR se odnosi na CDR koji ima aminokiselinsku sekvencu najmanje 80%, poželjno najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 98% ili najmanje 99% identičnosti sa aminokiselinskom sekvencom od CDR antitela koje nije ljudsko. U jednom otelotvorenju, jedan tip humanizovanog antitela je CDR-graftovano antitelo, u kom su ljudske CDR sekvence uvedene u ne-ljudske VH i VL sekvence da zamene odgovarajuće CDH sekvence.
[0064] Kad se ovde koristi, izraz „CDR“ se odnosi na region za određivanje komplementarnosti unutar sekvenci varijabli antitela. Postoje tri CDR u svakom od varijabilnih regiona teškog lanca i lakog lanca, i oni su označeni kao CDR1, CDR2 i CDR3, za svaki od varijabilnih regiona. Izraz „CDR komplet“, kad se ovde koristi, odnosi se na grupu od tri CDR koja se javljaju u jednom varijabilnom regionu koji je sposoban da vezuje antigen. Tačne granice ovih CDR definisane su različito prema različitim sistemima. Sistem opisan od strane Kabata (Kabat i dr., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) i (1991)) ne samo da pruža jednoznačni sistem numerisanja ostataka koji je primenljiv na bilo koji varijabilni region antitela, već takođe pruža precizne granice ostataka koji definišu tri CDR. Ovi CDR mogu biti označeni kao CDR po Kabatu. Chothia i saradnici (Chothia &Lesk, J. Mol. Biol.196:901-917 (1987) and Chothia i dr., Nature 342:877-883 (1989)) otkrili su da određeni pod-delovi unutar CDR po Kabatu usvajaju gotovo identične konformacije peptidne osnove, uprkos velikoj raznolikosti na nivou aminokiselinske sekvence. Ovi pod-delovi su označeni kao L1, L2 i L3 ili HI, H2 i H3 gde „L“ i „H“ označavaju regione lakog lanca i teškog lanca, respektivno. Ovi
1
regioni mogu biti označeni kao CDR po Chothia, koji imaju granice koje se preklapaju sa CDR po Kabatu. Ostale granice koje definišu CDR koji se preklapaju sa CDR po Kabatu opisane su od strane Padlan (FASEB J.9:133-139 (1995)) i MacCallum (J Mol Biol 262(5):732-45 (1996)). Još neke druge definicije granica CDR ne mogu strogo slediti jedan od gore navedenih sistema, ali će se ipak preklapati sa CDR po Kabatu, mada se mogu skratiti ili produžiti u svetlu predviđanja ili eksperimentalnih nalaza da pojedini ostaci ili grupe ostataka ili čak čitavi CDR ne utiču značajno na vezivanje antigena. Ovde korišćeni postupci mogu koristiti CDR definisane u skladu sa bilo kojim od ovih sistema, mada poželjna otelotvorenja koriste CDR definisane po Kabatu ili Chothia.
[0065] Izraz „poremećaj“ se odnosi na bilo koje stanje koje bi imalo koristi od tretmana sa formulacijama iz predmetnog pronalaska, npr., poremećaja koji zahteva tretman sa anti-EGFR antitelom u formulaciji. Ovo uključuje hronične i akutne poremećaje ili bolesti uključujući i patološka stanja koja predisponiraju pacijenta za dotični poremećaj.
[0066] Izraz „rak“ označava ili opisuje fiziološko stanje kod sisara koje se tipično karakteriše neregulisanim rastom ćelija. Primeri raka uključuju, ali nisu ograničeni na, rak, limfom, blastom, sarkom, i leukemiju ili limfoidne malignitete. Posebni primeri takvih rakova su glioblastom, rak ne-malih ćelija pluća, rak pluća, rak debelog creva, rak glave i vrata, rak dojke, tumori skvamoznih ćelija, rak analnog tkiva, rak kože i rak vulve. U jednom slučaju, formulacija se daje pacijentu koji ima tumor koji sadrži amplifikaciju EGFR gena, gde tumor eksprimira skraćenu verziju EGFR de2-7. U jednom slučaju, formulacija koja sadrži ADC1-MMAF može se primenjivati pacijentu za tretman kolorektalnog raka, raka glave i vrata (uključujući, ali ne ograničavajući se na, hipofaringealni rak, orofaringealni rak, rak jednjaka, rak larinksa i usnu duplju). Rak pluća, rak pankreasa, rak želuca, rak dojke, čvrsti tumor, npr., čvrsti tumor koji verovatno prekomerno eksprimira receptore epidermalnog faktora rasta (EGFR), ili multiform glioblastoma.
[0067] Izraz „primena“, kad se ovde koristi, označava primenu supstance (npr., anti-EGFR konjugat antitelo-lek) za postizanje terapeutskog cilja (npr., tretman poremećaja povezanog sa EGFR). Načini primene mogu biti parenteralni, enteralni i topikalni. Parenteralna primena je obično injekcijom, i uključuje, bez ograničenja, intravensku, intramuskularnu, intraarterijsku, intratekalnu, intrakapsularnu, intraorbitalnu, intrakardijalnu, intradermalnu, intraperitonealnu,
1
transkostačnu, subkutanu, intraartikularnu, subkapsulnu, intraspinalnu i intrasternalnu injekciju i infuziju.
[0068] Izraz „terapeutski efikasna količina“ ili „efikasna količina“ ADC, kad se ovde koristi, odnosi se na količinu koja je efikasna u prevenciji ili tretmanu ili ublažavanju simptoma poremećaja za tretman za koji je ADC efikasan.
[0069] Izraz „tretman“ se odnosi i na terapeutski tretman i na profilaktičke ili preventivne mere. Pacijenti kojima je potreban tretman uključuju one koji već imaju poremećaj, kao i one kod kojih se poremećaj treba sprečiti.
[0070] Različiti aspekti pronalaska su detaljnije opisani u narednim pod-odeljcima.
II. Formulacije anti-EGFR konjugata antitelo-lek prema pronalasku
[0071] Predmetni pronalazak karakterišu formulacije koje sadrže anti-EGFR antitelo, gde je pomenuto EGFR antitelo konjugovano za jedan ili više lekova, npr., auristatin (npr., MMAF). Predmetni pronalazak se zasniva, bar delimično, na saznanju da formulacija koja sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek (ADC), (gde je anti-EGFR antitelo, ili njegov deo koji se vezuje za antigen, konjugovano za jedan ili više molekula auristatina, kao što je MMAF), sposobna da održava biološku aktivnost ADC nakon rekonstitucije i održavanja odnosa lek prema antitelima posle rekonstitucije, nakon skladištenja formulacije do 6 meseci na 5°C i 25°C.
[0072] Ovde opisane formulacije mogu biti liofilizovane ili vodene. Ukoliko nije drugačije naznačeno, izraz „formulacija“ označava i liofilizovanu i vodenu.
[0073] Određene formulacije poželjno sadrže anti-receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) konjugat antitelo-lek (ADC), šećer, pufer i polisorbat, gde formulacija ima pH od oko 5 - 7. U određenim aspektima, formulacija dalje obuhvata anti-EGFR ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo, kao što je antitelo 1, koje je konjugovano za jedan ili više molekula auristatina, kao što je MMAF.
[0074] U jednom otelotvorenju, pronalazak pruža liofilizovanu formulaciju koja sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek, šećer, npr., saharozu, surfaktant, npr., polisorbat (kao što je
1
polisorbat 80), i histidin, gde formulacija ima pH od oko 5 - 7, i gde anti-EGFR konjugat antitelo-lek sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za Monomfilauristatin F (MMAF).
[0075] U jednom otelotvorenju, pronalazak pruža liofilizovanu formulaciju koja sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek, saharozu, surfaktant, i pufer, gde formulacija ima pH od oko 5 -7, i gde konjugat anti-EGFR antitela leka sadrži anti-EGFR antitelo, npr., antitelo 1, konjugovano putem maleimidokaproilskog veznika za Monometilauristatin F (MMAF) (mc-MMAF).
[0076] U jednom otelotvorenju, pronalazak pruža liofilizovanu formulaciju koja sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek, saharozu, polisorbat i histidin, gde formulacija ima pH od oko 5 -7, i gde anti-EGFR konjugat antitelo-lek obuhvata anti-EGFR antitelo npr., antitelo 1, konjugovano putem maleimidokaproilskog veznika za Monometilauristatin F (MMAF) (mc-MMAF).
[0077] Formulacije koje su ovde opisane poželjno imaju pH od oko 4,0 do oko 8,0. U jednom otelotvorenju, pH formulacije se kreće od oko 5,0 do oko 7,0; alternativno pH može biti u opsegu od oko 5 do oko 6,5; alternativno, pH formulacije može biti u opsegu od oko 5,5 do oko 6,5. Područja neposredna gore navedenim pH vrednostima, npr., od 5,6 do 6,4, takođe treba da budu deo pronalaska. Područja vrednosti koja koriste kombinaciju bilo koje od gore pomenutih vrednosti kao gornje/donje granice takođe treba da budu uključena, npr., pH opseg od oko 5,5 do oko 6,2.
[0078] Formulacije pronalaska poželjno sadrže anti-EGFR ADC, šećer, surfaktant i histidin.
[0079] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 1-20 mg/ml histidinskog pufera (npr., oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 10; oko 1 do oko 5; ili oko 1 do oko 3 mg/ml) sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu.
[0080] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži oko 5-25 mM histidina (npr., oko 2 do oko 25 mM; oko 5 do oko 25 mM; oko 10 do oko 25 mM; ili oko 20 do oko 25 mM), i kreće se u tom rasponu.
[0081] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 1-20 mg/ml sukcinatnog pufera (npr., oko
1
1 do oko 20, oko 1 do oko 10; oko 5 do oko 20; ili oko 5 do oko 10 mg/ml) sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu. U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži oko 1-10 mg/ml sukcinatnog pufera sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu.
[0082] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 1-20 mg/ml citratnog pufera (npr., oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 10; oko 5 do oko 20; ili oko 5 do oko 10 mg/ml) sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu. U jednom otelotvorenju, pufer koji se koristi u formulaciji sadrži oko 1-10 mg/ml citratnog pufera sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu.
[0083] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 1-20 mg/ml fosfatnog pufera (npr., oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 10; oko 5 do oko 20; ili oko 5 do oko 10 mg/ml) sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu. U jednom otelotvorenju, pufer koji se koristi u formulaciji sadrži oko 1-10 mg/ml fosfatnog pufera sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu.
[0084] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži 1-20 mg/ml citratnog/fosfatnog pufera (npr., oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 10; oko 5 do oko 20; ili oko 5 do oko 10 mg/ml) sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5. U jednom otelotvorenju, pufer koji se koristi u formulaciji sadrži oko 1-10 mg/ml citratnog/fosfatnog pufera sa pH od oko 5,0 do oko 7,0; pH od oko 5 do oko 6,5; ili pH od oko 5,5 do oko 6,5, i kreće se u tom rasponu.
[0085] Pored pufera, šećer je uključen u formulaciju. Primeri šećera koji se mogu koristiti u formulaciji uključuju, ali nisu ograničeni na manitol, sorbitol, saharozu i trehalozu. U jednom otelotvorenju, šećer koji se koristi u formulaciji je saharoza.
[0086] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži šećer u koncentraciji od oko 50 do oko 90 mg/ml, oko 50 do oko 85 mg/ml, oko 50 do oko 80 mg/ml, oko 50 do oko 75 mg/ml, oko 50 do oko 70 mg/ml, oko 50 do oko 65 mg/ml, oko 50 do oko 60 mg/ml, oko 60 do oko 90
2
mg/ml, oko 60 do oko 85 mg/ml, oko 60 do oko 75 mg/ml, oko 60 do oko 70 mg/ml, ili oko 60 do oko 75 mg/ml, i rasponi između, npr., oko 55 do oko 85 mg/ml šećera, i kreće se u tom rasponu.
[0087] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži saharozu u koncentraciji od oko 50 do oko 90 mg/ml, oko 50 do oko 85 mg/ml, oko 50 do oko 80 mg/ml, oko 50 do oko 75 mg/ml, oko 50 do oko 70 mg/ml, oko 50 do oko 65 mg/ml, oko 50 do oko 60 mg/ml, oko 60 do oko 90 mg/ml, oko 60 do oko 85 mg/ml, oko 60 do oko 75 mg/ml ml, oko 60 do oko 70 mg/ml, ili oko 60 do oko 75 mg/ml, i rasponi između, npr., od oko 55 do oko 85 mg/ml saharoze, i kreće se u tom rasponu.
[0088] Surfaktant se takođe dodaje formulaciji, npr., za dodatnu stabilnost. Primeri surfaktanata uključuju, ali nisu ograničeni na, nejonske deterdžente kao što su polisorbati (npr., polisorbati 20, 80) ili poloksameri (npr., poloksamer 188).
[0089] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži polisorbat, npr., polisorbat 80, u koncentraciji od oko 0,05-0,20 mg/ml (npr. oko 0,05-0,19, 0,05-0,18, 0,05-0,17, 0,05-0,16, 0,05-0,15, 0,05-0,14, 0,05-0,13, 0,05-0,12, 0,05- 0,11, ulu 0,05-0,10 mg/ml, i kreće se u tom rasponu). U jednom otelotvorenju, vodena formulacija sadrži 0,05-0,15 mg/ml polisorbata, npr., polisorbat 80.
[0090] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek u koncentraciji od oko 1-150 mg/ml (npr., oko 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 120, 125, 130, 135, 140, 145, ili 150 mg/ml, i vrednosti u tom rasponu, anti-EGFR konjugata antitelo-lek).
[0091] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek u količini od oko 1-150 mg, oko 10-150 mg, oko 20-150 mg, oko 30-150 mg, oko 40-150 mg, oko 50-150 mg, oko 60-150 mg, oko 70-150 mg, oko 80-150 mg, oko 90-150 mg, oko 100-150 mg, oko 10-140 mg, oko 20-140 mg, oko 30-140 mg, oko 40-140 mg, oko 50-140 mg, oko 60-140 mg. oko 70-140 mg, oko 80-140 mg, oko 90-140 mg, oko 100-140 mg, oko 10-130 mg, oko 20-130 mg, oko 30-130 mg, oko 40-130 mg, oko 50-130 mg, oko 60-130 mg oko 70-130 mg, oko 80-130 mg, oko 90-130 mg, oko 100-130 mg, oko 10-120 mg, oko 20-120 mg, oko 30-120 mg, oko 40-120 mg, oko 50-120 mg, oko 60-120 mg, oko 70-120 mg, oko 80-120 mg, oko 90-120 mg, oko 100-120 mg, oko 10-110 mg, oko 20-110 mg, oko 30-110 mg, oko 40-110 mg, oko 50-110 mg, oko 60-110 mg, oko 70-110 mg, oko 80-110 mg, oko 90-110 mg, i oko 100-110 mg, i kreće se u tom rasponu.
[0092] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek pri koncentraciji od 1 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 11 mg/ml, 12 mg/ml, 13 mg/ml, 14 mg/ml, 15 mg/ml, 16 mg/ml, 17 mg/ml, 18 mg/ml, 19 mg/ml, 20 mg/ml, 21 mg/ml, 22 mg/ml, 23 mg/ml, 24 mg/ml, 25 mg/ml, 26 mg/ml, 27 mg/ml, 28 mg/ml, 29 mg/ml, 30 mg/ml, 31 mg/ml, 32 mg/ml, 33 mg/ml, 34 mg/ml, 35 mg/ml, 36 mg/ml, 37 mg/ml, 38 mg/ml, 39 mg/ml, 40 mg/ml, 41 mg/ml, 42 mg/ml, 43 mg/ml, 44 mg/ml, 45 mg/ml, 46 mg/ml, 47 mg/ml, 48 mg/ml, 49 mg/ml, 50 mg/ml, 51 mg/ml, 52 mg/ml, 53 mg/ml, 54 mg/ml, 55 mg/ml, 56 mg/ml, 57 mg/ml, 58 mg/ml, 59 mg/ml, 60 mg/ml, 61 mg/ml, 62 mg/ml, 63 mg/ml, 64 mg/ml, 65 mg/ml, 66 mg/ml, 67 mg/ml, 68 mg/ml, 69 mg/ml, 70 mg/ml, 71 mg/ml, 72 mg/ml, 73 mg/ml, 74 mg/ml, 75 mg/ml, 76 mg/ml, 77 mg/ml, 78 mg/ml, 79 mg/ml, 80 mg/ml, 81 mg/ml, 82 mg/ml, 83 mg/ml, 84 mg/ml, 85 mg/ml, 86 mg/ml, 87 mg/ml, 88 mg/ml, 89 mg/ml, 90 mg/ml, 91 mg/ml, 92 mg/ml, 93 mg/ml, 94 mg/ml, 95 mg/ml, 96 mg/ml, 97 mg/ml, 98 mg/ml, 99 mg/ml, 100 mg/ml, 101 mg/ml, 102 mg/ml, 103 mg/ml, 104 mg/ml, 105 mg/ml, 106 mg/ml, 107 mg/ml, 108 mg/ml, 109 mg/ml, 110 mg/ml, 111 mg/ml, 112 mg/ml, 113 mg/ml, 114 mg/ml, 115 mg/ml, 116 mg/ml, 117 mg/ml, 118 mg/ml, 119 mg/ml, 120 mg/ml, 121 mg/ml, 122 mg/ml, 123 mg/ml, 124 mg/ml, 125 mg/ml, 126 mg/ml, 127 mg/ml, 128 mg/ml, 129 mg/ml, 130 mg/ml, 131 mg/ml, 132 mg/ml, 133 mg/ml, 134 mg/ml, 135 mg/ml, 136 mg/ml, 137 mg/ml, 138 mg/ml, 139 mg/ml, 140 mg/ml, 141 mg/ml, 142 mg/ml, 143 mg/ml, 144 mg/ml, 145 mg/ml, 146 mg/ml, 147 mg/ml, 148 mg/ml, 149 mg/ml ili 150 mg/ml antitela. Rasponi koji uključuju bilo koji od gore navedenih brojeva su takođe uključeni u pronalazak, npr., 10-150 mg/ml, 10-100 mg/ml, 20-90 mg/ml, 10-70 mg/ml, 10-40 mg.ml, i 1-70 mg/ml.
[0093] U jednom aspektu, pronalazak karakteriše vodena formulacija koja je rekonstituisana iz liofilizovane formulacije koja sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek, gde rekonstituisana vodena formulacija sadrži oko 1 - 100 mg/ml anti-EGFR ADC, oko 1 - 10 mg/mL histidina, oko 50 -90 mg/ml šećera (npr., saharoza), i oko 0,01 - 0,2 mg/ml polisorbata (npr., polisorbat 80), i ima pH od oko 5-7, i gde navedeni anti-EGFR konjugat antitelo-lek sadrži anti-EGFR antitelo (npr., antitelo 1) konjugovano za auristatin (npr., MMAF).
[0094] Liofilizovana formulacija je inicijalno napravljena kao pre-liofilizovana formulacija, koja je formulacija pre procesa liofilizacije. Količina anti-EGFR konjugata antitelo-lek prisutnog u pre-liofilizovanoj formulaciji je određena uzimajući u obzir željene zapremine doze, načine primene itd.
[0095] U jednom aspektu, pronalazak prikazuje liofilizovanu formulaciju koja sadrži konjugat anti-EGFR antitela, šećer, (npr., saharozu), surfaktant, (npr., polisorbat 80) i histidin, gde formulacija ima pH od oko 5,0 do 7,0, i gde anti-EGFR konjugat antitelo-lek sadrži anti-EGFR antitelo, (npr., antitelo 1), konjugovano za auristatin, (npr., MMAF).
[0096] U jednom otelotvorenju pronalaska, liofilizovana formulacija sadrži anti-EGFR ADC, npr., ADC1-MMAF, saharozu, polisorbat, npr., polisorbat 80, i histidin, i ne obuhvata, ili je suštinski bez manitola i/ili serina. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, liofilizovana formulacija sadrži anti-EGFR ADC, npr., ADC1-MMAF, saharoza, polisorbat, npr., polisorbat 80, i histidin, i ne uključuje ili je suštinski bez dvovalentnog katjona. U još jednom otelotvorenju pronalaska, liofilizovana formulacija ne uključuje laktobionsku kiselinu. U još jednom otelotvorenju pronalaska, liofilizovana formulacija ne uključuje šećernu kiselinu.
[0097] U određenim primernim aspektima, pronalazak karakteriše liofilizovana formulacija koja ima pH u rasponu od oko 5,0 do 7,0 i sadrži 1-20 mg histidina, oko 320-410 mg šećera (npr., saharoze), oko 0,1 do 0,9 mg surfaktanta (npr., polisorbata 80), i oko 50-150 mg anti-EGFR konjugata antitelo-lek, gde anti-EGFR konjugat antitelo-lek sadrži anti-EGFR antitelo, (npr., antitelo 1), konjugovano za auristatin, (npr., MMAF).
[0098] U jednom otelotvorenju, liofilizovana formulacija sadrži oko 320-410 mg, oko 330-400 mg, oko 340 do 390 mg, oko 350 do 380 mg, ili oko 360 do 370 mg šećera. (npr., saharoza), i opsezi (npr., 355 između 375 mg).
[0099] U jednom otelotvorenju, liofilizovana formulacija sadrži oko 0,1-0,9 mg surfaktanta (npr. oko 0,1-0,8, 0,1-0,7, 0,01-0,6, 0,01-0,55, 0,2-0,6, 0,3-0,6, 0,4-0,6, i kreće se u tom rasponu).
2
[0100] U jednom otelotvorenju, liofilizovana formulacija sadrži anti-EGFR konjugat antitelolek u količini od oko 1-150 mg, oko 10-150 mg, oko 20-150 mg, oko 30-150 mg, oko 40-150 mg, oko 50-150 mg, oko 60-150 mg, oko 70-150 mg, oko 80-150 mg, oko 90-150 mg, oko 100-150 mg, oko 10-140 mg, oko 20-140 mg, oko 30-140 mg, oko 40-140 mg, oko 50-140 mg, oko 60-140 mg, oko 70-140 mg, oko 80-140 mg, oko 90-140 mg, oko 100-140 mg, oko 10-130 mg, oko 20-130 mg, oko 30-130 mg, oko 40-130 mg, oko 50-130 mg, oko 60-130 mg oko 70-130 mg, oko 80-130 mg, oko 90-130 mg, oko 100-130 mg, oko 10-120 mg, oko 20-120 mg, oko 30-120 mg, oko 40-120 mg, oko 50-120 mg, oko 60-120 mg, oko 70-120 mg, oko 80-120 mg, oko 90-120 mg, oko 100-120 mg, oko 10-110 mg, oko 20-110 mg, oko 30-110 mg, oko 40-110 mg, oko 50-110 mg, oko 60-110 mg, oko 70-110 mg, oko 80-110 mg, oko 90-110 mg, i oko 100-110 mg, i kreće se u tom rasponu.
[0101] U jednom otelotvorenju, liofilizovana formulacija sadrži 1-20 mg/ml histidina, ili alternativno, 2-18 mg, 3-17 mg, 4-16 mg, 5-15 mg, 6-14 mg, ili 7-13 mg i kreće se u tom rasponu.
[0102] Liofilizacija se može izvesti prema postupcima poznatim u struci. Na primer, za ovu namenu je dostupno mnogo različitih sušača zamrzavanjem, kao što su HULL50 (Hull, USA) ili GT20 (Leybold-Heraeus, Germany) sušači zamrzavanjem. Liofilizacija se postiže zamrzavanjem formulacije i potom sublimacijom leda iz smrznutog sadržaja na temperaturi pogodnoj za primarno sušenje. Pod ovim uslovima, temperatura proizvoda je ispod eutektičke tačke ili temperature kolapsa formulacije. Tipično, fabrička temperatura za primarno sušenje će se kretati od oko -30 do 25°C. (pod uslovom da proizvod ostaje zamrznut tokom primarnog sušenja) pod pogodnim pritiskom, koji se obično kreće od oko 50 do 250 mTorr. Formulacija, veličina i tip posude koja sadrži uzorak (npr., staklena bočica) i zapremina tečnosti će uglavnom diktirati vreme potrebno za sušenje, koje može biti u rasponu od nekoliko sati do nekoliko dana (npr., 40-60 sati). Opciono, sekundarna faza sušenja se takođe može izvesti u zavisnosti od željenog nivoa rezidualne vlage u proizvodu. Temperatura na kojoj se vrši sekundarno sušenje kreće se u opsegu od oko 0-40°C, u zavisnosti prvenstveno od tipa i veličine kontejnera i tipa upotrebljenog proteina. Na primer, fabrička temperatura tokom cele faze uklanjanja vode liofilizacije može biti od oko 15-30°C (npr., oko 20°C). Vreme i pritisak koji je potreban za sekundarno sušenje će biti oni koji proizvode odgovarajući liofilizovani kolač, zavisan, npr., od temperature i drugih parametara. Sekundarno vreme sušenja je diktirano željenim nivoom preostale vlage u proizvodu i obično traje najmanje oko 5 sati (npr., 10-15 sati). Pritisak može biti isti kao i onaj koji se koristi tokom primarnog koraka sušenja. Uslovi za sušenje zamrzavanjem mogu varirati u zavisnosti od formulacije i veličine bočice.
[0103] Pre primene pacijentu, liofilizovana formulacija je rekonstituisana sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem tako da je koncentracija anti-EGFR antitela konjugata u rekonstituisanoj formulaciji, na primer, neophodna za tretman, npr., najmanje oko 1-150 mg/ml. Rekonstitucija se generalno odvija na temperaturi od oko 25°C kako bi se osigurala potpuna hidratacija, iako se mogu koristiti i druge temperature po želji. Vreme potrebno za rekonstituciju zavisiće, npr., od tipa razblaživača, količini ekscipijensa i proteina. Primeri razređivača uključuju sterilnu vodu, bakteriostatičnu vodu za injekcije (BVFI), pH puferisan rastvor (npr., fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom), sterilni fiziološki rastvor (npr., 0,9% rastvor soli), Ringer-ov rastvor ili rastvor dekstroze. U jednom otelotvorenju, liofilizati se rastvaraju u sterilnoj vodi za injekcije i razblažuju se u sterilnom rastvoru normalnog slanog rastvora. Rastvarač opciono sadrži konzervans. Primeri konzervansa su gore opisani, sa aromatičnim alkoholima kao što su benzil ili fenol alkohol koji su poželjni konzervansi.
Količina upotrebljenog konzervansa određena je procenom različitih koncentracija konzervansa za kompatibilnost sa testom efikasnosti proteina i konzervansa. Na primer, ako je konzervans aromatski alkohol (kao što je benzil alkohol), može biti prisutan u količini od oko 0,1-2,0%, od oko 0,5-1,5%, ili oko 1,0-1,2%.
III. Anti-EGFR konjugati antitelo-lek za upotrebu u formulacijama iz pronalaska [0104] Formulacije i postupci koji su ovde opisani obuhvataju upotrebu konjugata antitelo-lek (ADC) koji sadrže anti-EGFR antitela, ili njihove delove koji se vezuju za antigen, koji se specifično vezuju za EGFR. Anti-EGFR konjugati antitelo-lek koji se koriste u formulacijama opisanog pronalaska su konjugovani sa terapeutskim agensom, gde terapeutski agens vrši citotoksični, citostatički ili imunosupresivni efekat na ćelije koje eksprimiraju EGFR.
[0105] Naročito, predmetni pronalazak se odnosi na formulacije koje sadrže anti-EGFR konjugat antitelo-lek koji sadrži antitelo koje prepoznaje EGFR epitop koji se nalazi u tumorogenim, hiperproliferativnim ili abnormalnim ćelijama, gde se epitop ne može detektovati u normalnim ili divljim tipovima ćelija. Poželjno, antitelo ne vezuje niti prepoznaje normalne ili divlje ćelije koje sadrže normalni ili divlji tip epitopa EGFR u
2
odsustvu prekomernog eksprimiranja i u prisustvu normalne EGFR post-translacione modifikacije.
[0106] Anti-EGFR antitela pogodna za upotrebu u skladu sa ovim formulacijama i postupcima su tipično monoklonska i mogu uključivati, na primer, himerne (npr., koji imaju ljudski konstantni region i mišji varijabilni region), humanizovana ili ljudska antitela; jednolančana antitela; ili slično. Molekuli imunoglobulina mogu biti bilo kog tipa (npr., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgY), klase (npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili podklase molekula imunoglobulina. Na primer, anti-EGFR antitelo koje se koristi u anti-EGFR konjugatu antitelo-lek prema pronalasku može biti anti-EGFR antitelo 1 ili 2, ili an. Sekvence i karakteristike antitela 1 i 2 su opisane u nastavku (pogledati takođe WO 2011/041319 i US20110076232 (pogledati, npr., sekvencu antitela na Slici 55). Antitela 1 i 2 ciljaju prekomerno eksprimirani oblik receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) prisutan u 50% svih vrsta raka epitelnog porekla.
[0107] U posebnom otelotvorenju predmetnog pronalaska, anti-EGFR antitelo koje se koristi u anti-EGFR konjugatu antitelo-lek prepoznaje amplifikovani EGFR divljeg tipa i de2-7 EGFR. Anti-EGFR antitelo (ili anti-EGFR ADC) pokazuje korisnu specifičnost, po tome što prepoznaje de2-7 EGFR i pojačava EGFR, ali ne prepoznaje normalni, divlji tip EGFR ili jedinstveni spojni peptid koji je karakterističan za de2-7 EGFR. Primeri antitela koja imaju ove karakteristike vezivanja su antitelo 1, antitelo 2 i antitelo 3. Sekvence za antitelo 1 i antitelo 2 su date u nastavku.
[0108] Antitelo 2 je monoklonsko mišje anti-EGFR antitelo. VH anac antitela 2 sadrži sekvencu nukleinske kiseline (SEQ ID NO: 1) i aminokiselinsku sekvencu, sa signalnim peptidom (SEQ ID NO: 2) kao što je prikazano u nastavku (signalni peptid podvučen u SEQ ID NO: 2).
SEQ ID NO: 1
2
[0109] VL lanac antitela 2 sadrži sekvencu nukleinske kiseline (SEQ ID NO: 3) i aminokiselinsku sekvencu (SEQ ID NO: 4) kao što je prikazano u nastavku (signalni peptid podvučen u SEQ ID NO: 4).
[0110] Regioni koji određuju komplementarnost CDR1, CDR2 i CDR3 (SEQ ID NO: 5, 6 i 7, respektivno) sekvence VH lanca SEQ ID NO: 2, bez signalnog peptida (SEQ ID NO: 11) su u nastavku naznačeni podvlačenjem. Ključni ostaci sekvence VH lanca (SEQ ID NO: 11) su 24, 37, 48, 67 i 78.
SEQ ID NO: 11
2
[0111] Regioni koji određuju komplementarnost CDR1, CDR2 i CDR3 (SEQ ID NO: 8, 9 i 10, redom) sekvence VL lanca SEQ ID NO: 4, bez signalnog peptida (SEQ ID NO: 12) u u nastavku naznačeni podvlačenjem. Ključni ostaci sekvence VH lanca (SEQ ID NO: 12) su 36, 46, 57 i 71.
SEQ ID NO: 12
[0112] Antitelo 3 je himerno antitelo koje se sastoji od varijabilnih domena lakih i teških lanaca antitela 2 i ljudskih konstantnih regiona.
[0113] U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, anti-EGFR antitelo koje se koristi u formulacijama i postupcima pronalaska je antitelo 1. Kao što je gore opisano, antitelo 1 je humanizovano anti-EGFR antitelo koje uključuje CDR od antitela 2. Varijabilni (VH) i konstantni (CH) regioni teškog lanca antitela 1 su prikazani u nastavku kao SEQ ID NO: 13 i 14, respektivno. VH regioni CDR1, CDR2 i CDR3 (SEQ ID NO: 15, 16, i 17, respektivno) su označeni podvlačenjem.
SEQ ID NO: 13
SEQ ID NO: 14
2
[0114] Varijabilni (VL) i konstantni (CL) regioni lakog lanca antitela 1 prikazani su u nastavku kao SEQ ID NO: 18 i 19, respektivno. VL regioni CDR1, CDR2 i CDR3 (SEQ ID NO: 20, 21 i 22, respektivno) su označeni podvlačenjem.
SEQ ID NO: 18
[0115] U jednom otelotvorenju, pronalazak karakteriše liofilizovana formulacija koja sadrži anti-EGFR konjugat antitelo-lek, saharozu, polisorbat 80 i histidin, gde formulacija ima pH od oko 5 -7, gde anti-EGFR konjugat antitelo-lek sadrži anti-EGFR antitelo, ili njegov deo koji se vezuje za antigen, konjugovano je za monometil-auristatin F (MMAF), i gde navedeno antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16, i 17, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR, koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22.
[0116] U jednom otelotvorenju, pronalazak pruža liofilizovanu formulaciju koja ima pH od oko 5-7 i sadrži anti-EGFR ADC koji sadrži antitelo, ili njegov deo koji se vezuje za antigen, koji sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu iznetu u SEQ ID NO: 13 i konstantni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 14, i varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u
2
SEQ ID NO: 18 i konstantu lakog lanca region koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 19, histidin, šećer, npr., saharoza i polisorbat, npr., polisorbat 80.
[0117] U jednom otelotvorenju, pronalazak pruža formulaciju koja sadrži ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo (konjugovano za auristatin, npr., MMAF) koji ima varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR, kao što je opisano u aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 18, varijabilnom regionu teškog lanca koji sadrži CDR, kao što je opisano u aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 13.
[0118] Anti-EGFR antitela koja se mogu koristiti da bi se napravili anti-EGFR konjugati antitelo-lek mogu biti generisana bilo kojim pogodnim postupkom poznatim u struci. Na primer, monoklonska antitela mogu da se pripreme korišćenjem širokog spektra tehnika, uključujući, npr., upotrebu hibridomskih, rekombinantnih i tehnologija prikazivanja faga, ili njihovim kombinacijama. Tehnike hibridoma se uopšteno diskutuju u, na primer, Harlow i dr., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed., 1988); i Hammerling, i dr., In Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, pp.563-681 (Elsevier, N.Y., 1981). Primeri postupaka prikazivanja faga koje se mogu koristiti za stvaranje anti-CD70 antitela uključuju, npr., one objavljene u Brinkman i dr., 1995, J Immunol Methods 182:41-50; Ames i dr., 1995, J Immunol Methods 184:177-186; Kettleborough i dr., 1994, Eur J Immunol 24:952-958; Persic i dr., 1997, Gene 187:9-18; Burton i dr., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; PCT Publication WO 92/01047 ; PCT Publications WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/15982; WO 95/20401; i U.S. Pat. Nos.5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 5,821,047; 5,571,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780,225; 5,658,727; 5,733,743 i 5,969,108.
[0119] Tehnike za generisanje fragmenata antitela koje prepoznaju specifične epitope su takođe opšte poznate u struci. Na primer, Fab i F(ab')2fragmenti mogu biti proizvedeni proteolitičkim cepanjem molekula imunoglobulina, koristeći enzime kao što je papain (kako bi se proizveli Fab fragmenti) ili pepsin (kako bi se proizveli F(ab')2fragmenti). F(ab')2fragmenti sadrže varijabilni region, konstantni region lakog lanca i CH1 domen teškog lanca. Tehnike rekombinantne proizvodnje Fab, Fab' i F(ab')2fragmenata se takođe mogu koristiti, npr., postupci obelodanjeni u PCT publication WO 92/22324; Mullinax i dr., 1992, BioTechniques 12(6):864-869; i Sawai i dr., 1995, AJRI 34:26-34; and Better i dr., 1988, Science 240:1041-1043.
[0120] Primeri tehnika koje se mogu koristiti za proizvodnju jednolančanih Fv i antitela obuhvataju one opisane u U.S. Pat. Nos.4,946,778and 5,258,498; Huston i dr., 1991, Methods in Enzymology 203:46-88; Shu i dr., 1993, Proc Natl Acad Sci USA 90:7995-7999; i Skerra i dr., 1988, Science 240:1038-1040.
[0121] Antitela se mogu proizvesti bilo kojom od brojnih tehnika koje su poznate u struci. Na primer, eksprimiranje iz ćelija domaćina, gde su vektori eksprimiranja koji kodiraju teške i lake lance, transfektovani u ćeliju domaćina standardnim tehnikama. Namera je da različiti oblici izraza „transfekcija“ obuhvataju širok spektar tehnika koje se obično koriste za uvođenje egzogene DNK u prokariotsku ili eukariotsku ćeliju domaćina, npr., elektroporacija, taloženje kalcijum-fosfata, transfekcija DEAE-dekstrana i slično.
[0122] Ćelije domaćini sisara za eksprimiranje rekombinantnih antitela prema pronalasku uključuju ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO ćelije) (uključujući dhfr-CHO ćelije, opisane u Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, koji se koristi sa DHFR selektivnim markerom, npr., kao što je opisano u Kaufman i Sharp (1982) J. Mol. Biol.
159:601-621) i DG44 ili DUXB11 ćelije (Urlaub i dr. (1986) Som. Cell Molec. Genet.
12:555; Haynes i dr. (1983) Nuc. Acid. Res.11:687-706; Lau i dr. (1984) Mol. Cell. Biol. 4:1469-1475), NS0 ćelije mijeloma, linija bubrega majmuna (npr., CVI i COS, kao što je COS 7 ćelija), SP2 ćelije, ćelije ljudskog embrionog bubrega (HEK), kao što je HEK-293 ćelija, fibroblast kineskog hrčka (npr., R1610), ćelije ljudskog raka grlića materice (npr., HELA), mišji fibroblast (npr., BALBc/3T3), mišji mijelom (P3x63-Ag3.653; NS0; SP2/O), linija bubrega hrčka (npr., HAK), mišja L ćelija (npr., L-929), ljudski limfociti (npr., RAJI), ljudski bubreg (npr., 293 i 293T). Linije ćelija domaćina su obično komercijalno dostupne (npr., od BD Biosciences, Lexington, Ky.; Promega, Madison, Wis.; Life Technologies, Gaithersburg, Md.) ili od American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, Va.).
[0123] Kada se rekombinantni vektori eksprimiranja koji kodiraju antitelo uvode u ćelije domaćina sisara, antitela se proizvode kultivisanjem ćelija domaćina u periodu vremena dovoljnom da omogući eksprimiranje antitela u ćelijama domaćina ili izlučivanje antitela u medijum kulture u kom rastu ćelije domaćini. Antitela se mogu izolovati iz medijuma kulture korišćenjem standardnih postupaka za prečišćavanje proteina.
1
[0124] U primernom sistemu za rekombinantno eksprimiranje antitela, rekombinantni vektor eksprimiranja koji kodira i teški lanac antitela i laki lanac antitela je uveden u dhfr-CHO ćelije putem transfekcije posredovane kalcijum fosfatom. U rekombinantnom vektoru eksprimiranja, cDNK teškog i lakog lanca antitela su operativno vezani na regulacione elemente promotera CMV pojačivača/AdMLP-a da podstaknu visoke nivoe transkripcije cDNK. Rekombinantni vektor eksprimiranja takođe nosi cDNK koji kodira DHFR, što omogućava selekciju CHO ćelija koje su transfektovane sa vektorom upotrebom selekcije/amplifikacije metotreksata. Izabrane ćelije domaćina transformanta su kultivisane da omoguće eksprimiranje teških i lakih lanaca antitela i netaknuto antitelo je izolovano iz medijuma kulture. Standardne tehnike molekularne biologije se koriste za pripremu rekombinantnog vektora eksprimiranja, transfekciju ćelija domaćina, selekciju za transformante, kultivisanje ćelija domaćina i dobijanje antitela iz medijuma kulture. Dalje, predmetni pronalazak pruža postupak za sintezu antitela uzgojem ćelije domaćina obelodanjenja u pogodnom medijumu kulture sve dok se antitelo ne sintetiše. Postupak može dalje da sadrži izolovanje antitela iz medijuma kulture.
[0125] Anti-EGFR konjugat antitelo-lek koji je korišćen u opisu sadrži anti-EGFR antitelo, ili njegov deo koji se vezuje za antigen, konjugovan sa citotoksičnim ili imunosupresivnim agensom, tako da rezultujući ADC ispoljava citotoksični ili citostatički efekat na EGFR-eksprimirajuću ćeliju raka. Tako, anti-EGFR konjugat antitelo-lek pokazuje citotoksični ili citostatički efekat na ćelije raka koje eksprimiraju EGFR. U jednom slučaju, anti-EGFR ADC se internalizuje i akumulira u EGFR-eksprimirajućoj ćeliji, gde ADC pokazuje terapeutski efekat (npr., citotoksični, citostatički ili imunosupresivni efekat).
[0126] Primeri pogodnih grupa za konjugovanje sa antitelima obuhvataju hemoterapeutske agense, enzime za konvertovanje proleka, radioaktivne izotope ili jedinjenja ili toksine. U primerima otelotvorenja, anti-EGFR antitelo je konjugovano za auristatin, npr., MMAF ili MMAE. Bilo koji agens koji pokazuje terapeutski efekat na ćelije raka ili aktivirane imune ćelije može se koristiti kao terapeutski agens za konjugovanje sa anti-EGFR antitelom ili njegovim derivatom. (Pogledati, npr., WO 2004/010957, „Drug Conjugates and Their Use for Treating Cancer, An Autoimmune. Disease or an Infectious Disease“ (supra) i SAD Provizorna prijava br.60/400,403 (supra)). Tipično, terapeutski agens je citotoksični agens. U
2
nekim slučajevima, anti-EGFR konjugat leka sadrži više od jednog terapeutskog agensa po konjugatu, na primer od oko 1 do oko 20 terapeutskih agenasa po konjugatu.
[0127] U poželjnom otelotvorenju, anti-EGFR antitelo je konjugovano za auristatin (jedan ili više). Pokazalo se da auristatini ometaju dinamiku mikrotubula, GTP hidrolizu i/ili nuklearnu i ćelijsku podelu i imaju antikancerogenu i/ili antifungalnu aktivnost.
[0128] Anti-EGFR antitelo prema pronalasku može biti konjugovano za najmanje jedan auristatin. Auristatini predstavljaju grupu analoga dolastatina za koje je generalno pokazano da poseduju antitumorsku aktivnost interferišući sa dinamikom mikrotubula i GTP hidrolizom, čime inhibiraju ćelijsku podelu. Na primer, Auristatin E (opisan u U.S. Patent No.
5,635,483) je sintetički analog morskog prirodnog proizvoda dolastatina 10, jedinjenja koje inhibira polimerizaciju tubulina vezivanjem za isto mesto na tubulinu kao antirkancerogeni lek vinkristin (G. R. Pettit, Prog. Chem. Org. Nat. Prod, 70: 1-79 (1997)). Dolastatin 10, auristatin PE i auristatin E su linearni peptidi koji imaju četiri aminokiseline, od kojih su tri jedinstvene za klasu jedinjenja dolastatina. Primeri otelotvorenja auristatinske podklase mitotičkih inhibitora uključuju, ali nisu ograničeni na, monometil-auristatin D (MMAD ili auristatin D derivat), monometil-auristatin E (MMAE ili derivat auristatina E), monometilauristatin F (MMAF ili derivat auristatina F), auristatin F fenilenediamin (AFP), auristatin EB (AEB), auristatin EFP (AEFP), i 5-benzoilvalerična kiselina-AE estar (AEVB). Sinteza i struktura derivata auristatina su opisani u U.S. Patent Application Publication Nos. 2003-0083263, 2005-0238649 i 2005-0009751; International Patent Publication No. WO 04/010957, International Patent Publication No. WO 02/088172, i U.S. Pat. Nos.6,323,315; 6,239,104; 6,034,065; 5,780,588; 5,665,860; 5,663,149; 5,635,483; 5,599,902; 5,554,725; 5,530,097; 5,521,284; 5,504,191; 5,410,024; 5,138,036; 5,076,973; 4,986,988; 4,978,744; 4,879,278; 4,816,444; i 4,486,414.
[0129] U jednom otelotvorenju, anti-EGFR antitelo, kao što je antitelo 1, konjugovano je za najmanje jedan MMAF (monometil-auristatin F) pomoću veznika kao što je, ali bez ograničavanja na, maleimidokaproil (mc-MMAF). Struktura MMAF je data na Slici 2. Anti-EGFR-antitelo ADC može imati odnos lek-antitelo (DAR) od 2, 4, 6 ili 8. Naročito, DAR od ADC može da se kreće od 0 do 8, iako su veći sadržaji leka, npr., 10, takođe moguća.
Monometil auristatin F (MMAF) inhibira deobu ćelija blokirajući polimerizaciju tubulina. Ima naelektrisani C-terminalni ostatak fenilalanina koji umanjuje njegovu citotoksičnu aktivnost u poređenju sa njegovim nenaelektrisanim pandanom MMAE. Zbog svoje toksičnosti, ne može se koristiti kao lek sam po sebi, ali može biti vezan za monoklonsko antitelo (mAb) koje ga usmerava na ćelije raka. U jednom otelotvorenju, veznik za anti-EGFR antitelo je stabilan u ekstracelularnoj tečnosti, ali se otcepljuje pomoću katepsina kada konjugat uđe u tumorsku ćeliju, čime se aktivira anti-mitotički mehanizam.
[0130] U jednom otelotvorenju, anti-EGFR antitelo prema pronalasku je konjugovano za najmanje jedan MMAE (mono-metil auristatin E). Struktura MMAE je data na Slici 1, kao što je primer ADC koji sadrži MMAE. Monometil auristatin E (MMAE, vedotin) inhibira deobu ćelija blokiranjem polimerizacije tubulina. Zbog svoje super toksičnosti, takođe se ne može koristiti kao lek sam po sebi. U nedavnom razvoju terapije raka, on je povezan sa monoklonskim antitelom (mAb) koji prepoznaje specifično eksprimiranje markera u ćelijama raka i usmerava MMAE na ćelije raka. U jednom otelotvorenju, veznik koji povezuje MMAE sa anti-EGFR antitelom je stabilan u ekstracelularnoj tečnosti (tj. medijumu ili okolini koja je spoljašnja prema ćelijama), ali se otcepljuje pomoću katepsina kada se ADC veže za specifični antigen ćelija raka ušao u ćeliju raka, oslobađajući toksični MMAE i aktivirajući snažan anti-mitotički mehanizam.
[0131] U jednom otelotvorenju, anti-EGFR antitelo je konjugovano za auristatin koji je MMAF. U jednom otelotvorenju, anti-EGFR ADC je ADC 1-MMAF. ADC 1-MMAF sadrži antitelo 1 (opisano iznad i u SEQ ID NO: 13 do 22) kovalentno vezano za jedan ili više molekula monometil-auristatina F (MMAF) (pogledati Sliku 2 za strukturu). Kako bi se proizveo ADC 1-MMAF, međulančane disulfidne veze antitela 1 redukuju se do sulfhidrilnih grupa. MMAF se zatim povezuje sa antitelom preko ovih sulfhidril grupa. ADC 1-MMAF se generiše korišćenjem nerazdvojivog veznika, tj. nerazdvojive maleimidokaproilske (mc) veze, kao što je prikazano na Slici 2.
[0132] U jednoj posebnom otelotvorenju, formulacije iz pronalaska sadrže anti-EGFR ADC koji su obeleženi sa detektabilnom ili funkcionalnom oznakom. Oznake koje se mogu detektovati uključuju, ali nisu ograničene na radioaktivne oznake kao što su izotopi<2>H,<3>H, 11C, 13C, 14C, 32P, 33S, 34S, 35S, 36S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 90Y, 121I, 124I, 125I, 131I, 211At, 198Au, 67Cu, 225Ac, 213Bi, 99Tc i 186Re, koji mogu biti vezani za antitela prema pronalasku upotrebom konvencionalne hemije poznate u struci snimanja antitela. Oznake takođe uključuju fluorescentne etikete i etikete koje se konvencionalno koriste u tehnici za MRI-CT
4
snimanje. Oni takođe uključuju enzimske oznake kao što je peroksidaza hrena. Oznake dalje uključuju hemijske delove kao što je biotin koji se može detektovati vezivanjem za specifičnu srodnu detektabilnu grupu, npr., označeni avidin.
[0133] Funkcionalne oznake mogu takođe uključivati supstance koje su dizajnirane da budu usmerene na mesto tumora da izazovu razaranje tumorskog tkiva. Takve funkcionalne oznake uključuju citotoksične lekove kao što su 5-fluorouracil ili ricin i enzime kao što je bakterijska karboksipeptidaza ili nitroreduktaza, koji su sposobni da pretvore prolekove u aktivne lekove na mestu tumora.
[0134] Kao što će biti razumljivo stručnjacima u oblasti, gore navedeni agensi, kao i drugi pogodni agensi, mogu biti konjugovani ili vezani za anti-EGFR antitelo, npr., antitelo 1, na bilo koji pogodan način za proizvodnju anti-EGFR ADC korisnog u ovom pronalasku. Na primer i bez ograničenja, u različitim otelotvorenjima predmetnog pronalaska, anti-EGFR antitelo i agensi mogu biti kovalentno vezani i/ili mogu biti konjugovani korišćenjem veznika, odstojnike i/ili nosača, koji su u različitim varijantama predmetnog pronalaska razdvojivi ili su nerazdvojivi, tako da terapeutski agensi budu internaliziran od strane ciljane ćelije.
[0135] U jednom otelotvorenju, antitelo 1 je konjugovano za MMAF korišćenjem nerazdvojive maleimidokaproilske veze (antitelo 1-mc-MMAF).
[0136] Tehnike konjugovanja terapeutskih agenasa sa proteinima, i posebno sa antitelima, su dobro poznate. (Pogledati, npr., Arnon i dr., „Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy,“ u Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy (Reisfeld i dr. eds., Alan R. Liss, Inc., 1985); Hellstrom i dr., „Antibodies For Drug Delivery,“ i Controlled Drug Delivery (Robinson i dr. eds., Marcel Dekker, Inc., 2nd ed.1987); Thorpe, „Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,“ u Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (Pinchera i dr. eds., 1985); „Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy,“ u Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy (Baldwin i dr. eds., Academic Press, 1985); i Thorpe i dr., 1982, Immunol. Rev.62:119-58. See also, e.g.,PCT publication WO 89/12624.)
[0137] U jednom otelotvorenju, ADC sadrži veznik region između citotoksičnog agensa i antitela. Na primer, takva jedinjenja za povezivanje, odstojnika i/ili nosači obuhvataju, ali nisu ograničeni na sledeće: odstojnike amino benzojeve kiseline (pogledati, na primer i bez ograničenja, U.S. Patent Nos.7,091,186 i 7,553,816,); maleimidokaproil; paminobenzilkarbamoil (PAB); lizosomski vezujuće enzime (pogledati, na primer i bez ograničenja, U.S. Patent No.6,214,345,); maleimidokaproil-polietilen 20 glikol (MC(PEG)6-OH); N-metil-valin citrulin; N-sukcinimidil 4-(N-maleimidometil) cikloheksan-1-karboksilat (SMCC) (pogledati, na primer i bez ograničenja, Yoshitake i dr. (1979) Eur. J. Biochem., 101, 395-399,); N-sukcinimidil 4-(2-piridilditio) butanoat (SPDB) (pogledati, na primer i bez ograničenja, U.S. Patent No.4,563,304,); N-sukcinimidil 4-(2-piridiltio) pentanoat (SPP); valin-citrulin; i druga jedinjenja veznike, odstojnike i/ili nosače (pogledati, na primer i bez ograničenja, U.S. Patent Nos.7,090,843, 7,223,837, i 7,659,241, i U.S. Patent Publication Nos. 2004/0018194, 2004/0121940, 2006/0116422, 2007/0258987, 2008/0213289, 2008/0241128, 2008/0311136, 2008/0317747, i 2009/0010945). Uopšteno govoreći, tehnike za vezivanje i/ili konjugovanje agensa navedenih gore, kao i drugih agenasa, za specifične vezujuće članove predmetnog pronalaska su poznate u struci. Pogledati, na primer i bez ograničenja, Amon i dr., „Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy“, u Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld i dr. (eds.), pp.243-56 (Alan R. Liss, Inc.1985); Hellstrom i dr., „Antibodies For Drug Delivery“, u Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson i dr. (eds.), pp.623-53 (Marcel Dekker, Inc.1987); Thorpe, „Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review“, u Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera i dr. (eds.), pp.475-506 (1985); „Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy“, u Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin i dr. (eds.), pp.303-16 (Academic Press 1985), i Thorpe i dr., „The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates“, Immunol. Rev., 62:119-58 (1982).
[0138] Dostupan je veliki broj različitih reakcija za kovalentno vezivanje lekova za antitela. Ovo se često postiže reakcijom aminokiselinskih ostataka molekula antitela, uključujući aminske grupe lizina, grupe slobodne karboksilne kiseline glutaminske i asparaginske kiseline, sulfhidrilne grupe cisteina i različite grupe aromatičnih aminokiselina. Jedan od najčešće korišćenih ne-specifičnih postupaka kovalentnog vezivanja je karbodiimidna reakcija za povezivanje karboksi (ili amino) grupe jedinjenja sa amino (ili karboksi) grupama antitela. Dodatno, bifunkcionalni agensi kao što su dialdehidi ili imidoesteri su korišćeni za vezivanje amino grupe jedinjenja za amino grupe molekula antitela. Takođe dostupna za vezivanje lekova za antitela je reakcija Schiff-ove baze. Ovaj postupak uključuje perjodatsku oksidaciju leka koji sadrži glikol ili hidroksi grupe, formirajući tako aldehid koji zatim reaguje sa molekulom antitela. Vezivanje se dešava preko formiranja Schiff-ove baze sa amino grupama molekula antitela. Izotiocijanati se takođe mogu koristiti kao agensi za povezivanje za kovalentno vezivanje lekova za antitela. Druge tehnike su poznate iskusnom stručnjaku i unutar su obima ovog otelotvorenja. Neograničavajući primeri takvih tehnika su opisani u, npr., U.S. Pat. Nos. 5,665,358; 5,643,573; i 5,556,623.
[0139] U određenim aspektima, međuproizvod, koji je prekursor veznika, reaguje sa lekom pod odgovarajućim uslovima. U određenim aspektima, reaktivne grupe se koriste na leku i/ili međuproizvodu. Proizvod reakcije između leka i međuproizvoda, ili derivatizovanog leka, zatim reaguje sa anti-EGFR antitelom pod odgovarajućim uslovima.
[0140] Drugi primeri postupaka konjugovanja su opisani u US Patent No.7,837,980 (Seattle Genetics), Carter and Senter (2008) Cancer J, 14(3):154, kao i U.S. Published Application Nos. 2004-0157782 A1 i 2005-0238649 i PCT Publication No, WO 05/081711.
[0141] U određenim otelotvorenjima, anti-EGFR ADC mogu biti prečišćeni kako bi se dobili ADC koji imaju željeni odnos leka prema antitelu (DAR). U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, formulacija sadrži anti-EGFR ADC smešu koja sadrži anti-EGFR ADC koji ima prosečnu željenu količinu leka u odnosu na antitelo (DAR), npr., prosečni DAR od oko 3. U jednom otelotvorenju pronalaska, formulacija sadrži ADC mešavinu koja sadrži anti-EGFR ADC koji imaju željeni DAR opseg, npr., DAR od oko 2-4.
[0142] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži ADC mešavinu gde 70% prisutnih ADC ima vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje, i gde ADC sadrži anti-EGFR antitelo i auristatin. Alternativno, 75% prisutnih ADC ima vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje; 80% prisutnih ADC ima vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje; 85% prisutnih ADC ima vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje; 90% prisutnih ADC ima vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje; ili 95% prisutnih ADC ima vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje.
[0143] U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, formulacija sadrži anti-EGFR ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za monometil-auristatin F (MMAF), gde navedeni ADC 1-MMAF sadrži varijabilni region teškog lanca koja sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22, saharoza, histidin, i polisorbat 80, gde formulacija sadrži ADC mešavinu koja ima prosečan DAR od oko 3 ili ADC mešavinu koja ima DAR od oko 2-4. U sledećem otelotvorenju pronalaska, formulacija je liofilizovana. U još jednom otelotvorenju, anti-EGFR antitelo je vezano za MMAF preko maleimidokaproilskog veznika. U daljem otelotvorenju, anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18.
[0144] U jednom otelotvorenju, formulacija sadrži anti-EGFR ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za monometil-auristatin E (MMAE), gde navedeni ADC 1-MMAE sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinu sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22, saharoza, histidin i polisorbat 80 gde formulacija sadrži ADC mešavinu koja ima prosečan DAR od oko 3 ili ADC mešavinu koja ima DAR od oko 2-4. U sledećem otelotvorenju pronalaska, formulacija je liofilizovana. U još daljem otelotvorenju, anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18.
[0145] Pročišćavanje ADC može se postići na takav način da se sakupljaju ADC koji imaju određene DAR. Na primer, HIC smola može da se koristi za odvajanje ADC sa visokim sadržajem leka od ADC koji imaju optimalan odnos leka i antitela (DAR), npr., DAR od 4 ili manje. U jednom otelotvorenju, hidrofobna smola se dodaje u ADC smešu tako da neželjeni ADC, tj. ADC sa većim sadržajem leka, vezuju smolu i mogu se selektivno ukloniti iz smeše. U nekim otelotvorenjima, odvajanje ADC može se postići dovođenjem u dodir ADC mešavine (npr., smeša koja sadrži ADC vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i ADC vrstu sa sadržajem leka od 6 ili više) sa hidrofobnom smolom, gde je količina smole dovoljna da omogući vezivanje vrsta sa visokim sadržajem leka koja je uklonjena iz ADC mešavine. Mešavina smole i ADC se meša zajedno, tako da se ADC vrste koje se uklanjaju (npr., vrsta sa sadržajem leka od 6 ili više) vezuju za smolu i mogu se odvojiti od drugih ADC vrsta u ADC mešavini. Količina smole koja se koristi u postupku se zasniva na težinskom odnosu između vrsta koje treba ukloniti i smole, gde količina upotrebljene smole ne dozvoljava značajno vezivanje vrste sa visokim sadržajem leka koja je poželjna. Prema tome, postupci mogu da se koriste da se smanji prosečan DAR 5,5 na manje od 4. Dalje, postupci prečišćavanja se mogu koristiti za izolovanje ADC koji imaju bilo koji željeni opseg vrsta sa visokim sadržajem leka, npr., vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje, vrsta sa sadržajem leka od 3 ili manje, vrsta sa sadržajem leka od 2 ili manje, vrsta sa sadržajem leka od 1 ili manje.
[0146] Određene vrste molekula se vezuju za površinu na osnovu hidrofobnih interakcija između vrste i hidrofobne smole. U jednom slučaju, obelodanjenje se odnosi na postupak prečišćavanja koji se zasniva na mešanju hidrofobne smole i ADC mešavine, gde količina smole koja je dodata smeši određuje koje vrste (npr., ADC sa DAR od 6 ili više) će se vezati. Nakon proizvodnje i prečišćavanja antitela iz sistema eksprimiranja (npr., sistem eksprimiranja sisara), antitelo je redukovano i povezano sa lekom preko reakcije konjugovanja. Dobijena ADC mešavina često sadrži ADC koji imaju raspon DAR, npr., 1 do 8. U jednom slučaju, ADC mešavina sadrži vrste sa sadržajem leka od 4 ili manje i vrste sa sadržajem leka od 6 ili više. U skladu sa postupcima iz opisa, ADC mešavinom se može prečistiti korišćenjem procesa, kao što je, ali ne ograničavajući se na, serijski proces, tako da su odabrani ADC koji imaju vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i odvojeni od ADC koji imaju veći sadržaj leka (npr. ADC koji imaju vrsta sa sadržajem leka od 6 ili više). Značajno, ovde opisani postupci prečišćavanja mogu se koristiti za izolovanje ADC koji imaju bilo koji željeni opseg DAR, npr., DAR od 4 ili manje, DAR od 3 ili manje, DAR od 2 ili manje.
[0147] Prema tome, u jednom slučaju, ADC mešavina koja sadrži vrstu sa sadržajem leka 4 ili manje i vrstu sa sadržajem leka od 6 ili više, može biti u dodiru sa hidrofobnom smolom kako bi se formirala smolasta smeša, gde je količina hidrofobne smole u dodiru sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 6 ili više za smolu, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje; i uklanjanje hidrofobne smole iz ADC mešavine, tako da se dobija sastav koji sadrži ADC, gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin. U odvojenom slučaju, postupak može uključivati dovođenje u dodir ADC mešavine koja sadrži vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje, i vrstu sa sadržajem leka od 6 ili više sa hidrofobnom smolom kako bi se formirala smolasta smeša, gde je količina hidrofobne smole dovedena u dodir sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 6 ili više za smolu, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje; i uklanjanje hidrofobne smole iz ADC mešavine, tako da se dobija sastav koja sadrži ADC, gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin, gde je težina hidrofobne smole 3 do 12 puta veća od težine vrste sa sadržajem leka od 6 ili više u ADC mešavini.
[0148] Postupak ADC separacije može se izvesti korišćenjem postupka za serijsko prečišćavanje. Proces serijskog prečišćavanja obično uključuje dodavanje ADC mešavine u hidrofobnu smolu u posudi, mešanje, i zatim odvajanje smole od supernatanta. Na primer, u kontekstu serijskog prečišćavanja, može se pripremiti hidrofobna smola ili uravnotežiti do željenog pufera za uravnoteženje. Tako se može dobiti suspenzija hidrofobne smole. ADC mešavinom se zatim može dovesti u dodir sa suspenzijom kako bi se adsorbovale specifične vrste ADC koje će biti razdvojene hidrofobnom smolom. Rastvor koji sadrži željene ADC koji se ne vezuju za hidrofobni materijal smole može se zatim odvojiti od suspenzije, npr., filtracijom ili ostavljanjem suspenzije da se slegne i uklanjanjem supernatanta. Dobijena suspenzija se može podvrgnuti jednom ili više koraka pranja. Kako bi se eluirali vezani ADC, koncentracija soli se može smanjiti. U jednom slučaju, postupak koji se koristi u opisu obuhvata ne više od 50 g hidrofobne smole.
[0149] Prema tome, serijski postupak se može koristiti za dovođenje u dodir ADC mešavine koja obuhvata vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i vrstu sa sadržajem leka 6 ili više sa hidrofobnom smolom kako bi se formirala smolasta smesa, gde je količina hidrofobne smole u dodiru sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 6 ili više za smolu, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje; i uklanjanje hidrofobne smole iz ADC mešavine, tako da se dobija sastav koja sadrži ADC, gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin. U posebnom slučaju, serijski postupak se koristi za dovođenje u dodir ADC mešavine koja obuhvata vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i vrstu sa sadržajem leka 6 ili više sa hidrofobnom smolom kako bi se formirala smolasta smeša, gde je količina hidrofobne smole dovedena u dodir sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 6 ili više za smolu, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje; i uklanjanje hidrofobne smole iz ADC mešavine, tako da se dobija sastav koja sadrži ADC, gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka od 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin, gde je težina hidrofobne smole 3 do 12 puta veća od težine vrste sa sadržajem leka od 6 ili više u ADC mešavini.
4
[0150] Alternativno, prečišćavanje se može izvesti upotrebom cirkulacionog procesa, gde se smola pakuje u kontejner i ADC mešavina se prenosi preko sloja hidrofobne smole dok se određene vrste ADC koje treba odvojiti ne uklone. Supernatant (koji sadrži željene vrste ADC) se zatim pumpa iz kontejnera i sloj smole može biti podvrgnut koracima ispiranja.
[0151] Proces cirkulacije se takođe može koristiti da se dovede u dodir ADC mešavina koja obuhvata vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i vrstu sa sadržajem leka 6 ili više sa hidrofobnom smolom kako bi se formirala smolasta smeša, gde je količina hidrofobne smole koja je dovedena u dodir sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 6 ili više za smolu, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje; i uklanjanje hidrofobne smole iz ADC mešavine, tako da se dobija sastav koja sadrži ADC, gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin. U odvojenom slučaju, cirkulacioni proces se koristi za dovođenje u dodir ADC mešavine koja obuhvata vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i vrstu sa sadržajem leka 6 ili više sa hidrofobnom smolom kako bi se formirala smolasta smesa, gde je količina hidrofobne smole dovedena u dodir sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrste sa sadržajem leka od 6 ili više za smolu, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrste sa sadržajem leka od 4 ili manje; i uklanjanje hidrofobne smole iz ADC mešavine, tako da se dobija sastav koja sadrži ADC, gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin, gde je težina hidrofobne smole 3 do 12 puta veća od težine vrste sa sadržajem leka od 6 ili više u ADC mešavini.
[0152] Alternativno, prečišćavanje se može izvesti upotrebom protočnog procesa, gde se smola pakuje u kontejner, npr., kolonu, i ADC mešavina se prenosi preko upakovane smole tako da se željene ADC vrste ne vezuju suštinski za smolu i teku kroz smolu, i neželjene vrste ADC su vezane na smolu. Proces protoka može se izvesti u jednom prolaznom režimu (gde se ADC vrste od interesa dobijaju kao rezultat jednog prolaska kroz smolu kontejnera) ili u režimu sa više prolazaka (gde su ADC vrste od interesa dobijene kao rezultat višestrukih prolaza kroz smolu kontejnera). Protočni proces se izvodi tako da se težina odabrane smole veže za neželjenu ADC populaciju i željene ADC (npr., DAR 2-4) teku preko smole i sakupljaju se u protoku kroz jedan ili više prolaza.
[0153] U jednom slučaju obelodanjenja, protočni proces može biti korišćen za dovođenje u dodir ADC mešavine koja obuhvata vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i vrstu sa sadržajem leka od 6 ili više sa hidrofobnom smolom, gde je količina hidrofobne smole dovedena u dodir sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrste sa sadržajem leka od 6 ili više na smolu, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrste sa sadržajem leka od 4 ili manje, gde vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje prolazi preko smole i nakon toga se sakuplja nakon jednog ili više prolaza, tako da se dobije sastav koja sadrži željene ADC (npr. DAR 2-4), gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka od 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin. U odvojenom slučaju, protočni proces se koristi da se dovede u dodir ADC mešavina koja obuhvata vrstu sa sadržajem leka od 4 ili manje i vrstu sa sadržajem leka od 6 ili više sa hidrofobnom smolom propuštanjem ADC mešavine preko smole, gde je količina hidrofobne smole u dodiru sa ADC mešavinom dovoljna da omogući vezivanje vrste sa sadržajem leka od 6 ili više sa smolom, ali ne dozvoljava značajno vezivanje vrsta sa sadržajem leka od 4 ili manje, gde vrsta sa sadržajem leka 4 ili manje prelazi preko smole i zatim se sakuplja, tako da se dobija sastav koji sadrži ADC, gde sastav sadrži manje od 15% vrste sa sadržajem leka 6 ili više, i gde ADC sadrži antitelo konjugovano za auristatin, gde je količina težine hidrofobne smole 3 do 12 puta veća od težine vrste sa sadržajem leka od 6 ili više u ADC mešavini.
[0154] Postupci za prečišćavanje mogu da se zasnivaju na upotrebi hidrofobne smole za razdvajanje ADC vrsta visokog sadržaja leka od ADC vrsta niskog sadržaja leka. Hidrofobna smola sadrži hidrofobne grupe koje interakuju sa hidrofobnim svojstvima ADC. Hidrofobne grupe na ADC stupaju u interakciju sa hidrofobnim grupama unutar hidrofobne smole. Što je protein hidrofobniji, jače će reagovati sa hidrofobnom smolom.
[0155] Hidrofobna smola normalno sadrži baznu matricu (npr., umreženi agarozni ili sintetski kopolimerni materijal) na koji su vezani hidrofobni ligandi (npr., akilne ili arilne grupe). Mnoge hidrofobne smole su komercijalno dostupne. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, Phenyl Sepharose™ 6 Fast Flow sa niskom ili visokom supstitucijom (Pharmacia LKB Biotechnology, AB, Sweden); Phenyl Sepharose™ High Performance (Pharmacia LKB Biotechnology, AB, Sweden); Octyl Sepharose™ High Performance (Pharmacia LKB Biotechnology, AB, Sweden); Fractogel™ EMD Propil ili Fractogel™ EMD Fenil kolone (E. Merck, Nemačka); Germany-Prep™ Metil ili Makro-Prep™. T-Butil Supports (Bio-Rad, California); VP HI-Propyl (C3)™ (J. T. Baker, New Jersey); i Toyopearl™ eter, heksil, fenil ili butil (TosoHaas, PA). U jednom otelotvorenju, hidrofobna smola je butil hidrofobna smola. U drugom slučaju, hidrofobna smola je fenil hidrofobna smola. U drugom slučaju, hidrofobna smola je heksil hidrofobna smola, oktil hidrofobna smola ili decil hidrofobna smola. U jednom slučaju, hidrofobna smola je metakrilni polimer koji ima n-butil ligande (npr., TOYOPEARL® Butyl-600M).
[0156] Dodatni postupci za prečišćavanje i razdvajanje ADC niske i visoke DAR su opisani u SAD Provizorna prijava br.61/792,834 i SAD prijava br.14/210,602, podneto 14. marta 2014.
IV. Primene formulacije
[0157] U skladu sa ovim postupcima, formulacija koja sadrži anti-EGFR ADC se daje pacijentu koji ima (ili je pod rizikom da razvije) poremećaj koji zahteva tretman sa anti-EGFR antitelom ili anti-EGFR-ADC. Formulacija koja sadrži anti-EGFR ADC može se primenjivati bilo samostalno ili u kombinaciji sa drugim sastavima u prevenciji ili tretmanu poremećaja koji zahteva tretman sa anti-EGFR antitelom.
[0158] Kad se ovde koristi, izraz „poremećaj u kom je aktivnost EGFR štetna“ treba da obuhvati bolesti i druge poremećaje u kojima je prisustvo EGFR kod pacijenta koji pati od poremećaja pokazano da je, ili se sumnja da je, odgovorno za patofiziologija poremećaja ili je faktor koji doprinosi pogoršanju poremećaja. Prema tome, poremećaj u kom je aktivnost EGFR štetna je poremećaj kod kog se očekuje da će inhibicija aktivnosti EGFR ublažiti simptome i/ili progresiju poremećaja. Takvi poremećaji se mogu dokazati, na primer, povećanjem aktivnosti EGFR ili povećanjem količine EGFR prisutnog u biološkom uzorku od pacijenta koji pati od poremećaja (npr., povećanje koncentracije EGFR u uzorku tkiva, u serumu, plazmi, sinovijalnoj tečnosti, itd. pacijenta), što se može detektovati, na primer, korišćenjem anti-EGFR antitela.
[0159] Formulacije prema pronalasku mogu se koristiti za tretman raka. Primeri raka koji se mogu tretirati uključuju, ali nisu ograničeni na, glioblastom, rak ne-malih ćelija pluća, rak pluća, rak debelog creva, rak glave i vrata, rak dojke, tumore skvamoznih ćelija, rak analnog tkiva, rak kože i rak vulve.
4
[0160] U jednom slučaju, formulacija koja sadrži ADC1-MMAF može se primenjivati pacijentu za tretman raka debelog creva, raka glave i vrata (uključujući, ali ne ograničavajući se na, hipofaringealni rak, orofaringealni rak, rak jednjaka, rak larinksa, i rak oralne šupljine), rak pankreasa i rak želuca. U jednom slučaju opisa, formulacija koja sadrži ADC1-MMAF se primenjuje pacijentu za tretman čvrstog tumora koji verovatno ima prekomerno eksprimiranje receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), raka skvamoznih ne-malih ćelija pluća (NSCLC), ili multiform glioblastoma. Dodatni primeri takvih rakova koji se mogu tretirati sastavima prema pronalasku uključuju skvamozne tumore (uključujući, skvamozne tumore pluća, glave i vrata, cervikalne, itd.), glioblastom, gliom, rak ne-malih ćelija pluća, rak pluća. raka debelog creva, raka glave i vrata, raka dojke, tumora skvamoznih ćelija, raka analnog tkiva, raka kože i raka vulve.
[0161] Jedinstvena specifičnost anti-EGFR ADC pruža dijagnostičke i terapeutske upotrebe za identifikaciju, karakterizaciju, ciljanje i tretman, smanjenje ili eliminaciju određenog broja tipova tumorskih ćelija i tipova tumora, na primer, ali bez ograničavanja na, glioblastom, rak ne-malih ćelija pluća, rak pluća, rak debelog creva, rak glave i vrata, rak dojke, tumori skvamoznih ćelija, rak analnog tkiva, rak kože i rak vulve, bez problema povezanih sa unosom normalnog tkiva koji se može primetiti sa prethodno poznatim EGFR antitelima. Prema tome, ćelije koje prekomerno eksprimiranju EGFR (npr., amplifikacijom ili eksprimiranjem mutanta ili varijante EGFR), i u određenim varijantama, oni koji pokazuju aberantnu post-translacijsku modifikaciju mogu se prepoznati, izolovati, karakterisati, ciljati i tretirati ili eliminisati upotrebom anti-EGFR ADC.
[0162] U jednom slučaju opisa, pružen je postupak za tretman pacijenta koji se sastoji od primene terapeutski efikasne količine anti-EGFR ADC u bilo kojoj od ovde opisanih formulacija, gde pacijent ima poremećaj koji zahteva tretman sa anti-EGFR antitelom u formulaciji (npr., tumor, kancerogeno stanje, prekancerogeno stanje i bilo koje stanje koje je povezano ili je rezultat rasta hiperproliferativnih ćelija), kao što je, ali nije ograničeno na, čvrsti tumor koji verovatno prekomerno eksprimira receptore epidermalnog faktora rasta (EGFR) ili multiform glioblastoma.
[0163] Postupci za detektovanje eksprimiranja EGFR u tumoru poznati su u struci, npr., EGFR pharmDx™ Kit (Dako). Nasuprot tome, „EGFR negativni tumor“ je definisan kao tumor koji ima odsustvo EGFR membranskog bojenja iznad pozadine u uzorku tumora kao što je određeno imunohistohemijskim tehnikama.
[0164] Formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC mogu se tako specifično koristiti za kategorizaciju prirode EGFR tumora ili tumorigenih ćelija, bojenjem ili drugačijim prepoznavanjem onih tumora ili ćelija u kojima je prisutno prekomerno eksprimiranje EGFR, posebno amplifikacija i/ili EGFR mutacija, posebno de2-7 EGFR. Dalje, pokazano je da anti-EGFR ADC pokazuju značajnu in vivo anti-tumorsku aktivnost protiv tumora koji sadrže pojačani EGFR i protiv de2-7 EGFR pozitivnih ksenografta.
[0165] Prema tome, u sledećem slučaju obelodanjenja, pružen je postupak za tretman tumora, kancerogenog stanja, prekancerogenog stanja i bilo kog stanja koje je povezano ili je rezultat rasta hiperproliferativnih ćelija koji obuhvata primenu anti-EGFR ADC u ovde opisanoj formulaciji.
[0166] Poznati su različiti sistemi isporuke i mogu se koristiti za primenu formulacija koje sadrže anti-EGFR ADC. Postupci unošenja uključuju, ali nisu ograničeni na intradermalni, intramuskularni, intraperitonealni, intravenski, subkutani, intranazalni, epiduralni i oralni put. ADC se mogu primenjivati, na primer, infuzijom ili bolus injekcijom, apsorpcijom kroz epitelne ili mukokutane obloge (npr., oralne sluzokože, rektalne i intestinalne mukoze, i slično) i mogu se primenjivati zajedno sa drugim biološki aktivnim agensima kao što su hemoterapijski agensi. Primena može biti sistemska ili lokalna. U jednom slučaju, formulacija otelotvorenja se dostavlja pacijentu intravenozno. U drugom slučaju, formulacija otelotvorenja se dostavlja pacijentu subkutano. U jednom slučaju, pacijent primenjuje formulaciju sam sebi (samo-primena).
[0167] Količina ADC koja je efikasna u tretmanu ili prevenciji poremećaja koji zahteva tretman sa anti-EGFR ADC u formulaciji, npr., rak, može se odrediti standardnim kliničkim tehnikama. Dodatno, in vitro testovi se opciono mogu koristiti za identifikaciju optimalnih opsega doziranja. Precizna doza će takođe zavisiti od puta primene, i od stadijuma imunog poremećaja ili EGFR-eksprimirajućeg raka, i može se odrediti prema proceni lekara i okolnosti svakog pacijenta. U jednom slučaju, terapeutski efikasna količina anti-EGFR ADC u formulaciji se daje pacijentu kom je to potrebno. Izraz „terapeutski efikasna količina“ ili „efikasna količina“ anti-EGFR ADC, kad se ovde koristi, odnosi se na količinu koja je
4
efikasna u prevenciji ili tretmanu ili ublažavanju simptoma poremećaja za tretman za koji je ADC efikasan. Primer terapeutski efikasne količine anti-EGFR ADC u formulaciji je količina koja je dovoljna da inhibira štetnu EGFR aktivnost ili da tretira poremećaj u kom je EGFR aktivnost štetna.
[0168] Doza anti-EGFR ADC može da se primeni, na primer, dnevno, jednom nedeljno (nedeljno), dva puta nedeljno, tri puta nedeljno, četiri puta nedeljno, pet puta nedeljno, dvonedeljno, svake tri nedelje, mesečno ili svake četiri nedelje, ili na drugi način po potrebi.
[0169] U izvesnim slučajevima, anti-EGFR ADC može se pacijentu primenjivati zajedno sa jednim ili više dodatnih terapeutskih agenasa za tretman raka. Izraz „primenjen zajedno“ označava primenu dva ili više različitih farmaceutskih agenasa ili tretmana (npr., tretman zračenjem) koji se daje pacijentu kombinacijom u istom farmaceutskom sastavu ili u odvojenim farmaceutskim sastavima. Prema tome, primenjivanje zajedno uključuje primenu u isto vreme jednog farmaceutskog sastava koji sadrži dva ili više farmaceutskih agenasa ili primenu dva ili više različitih sastavu istom pacijentu istovremeno ili u različitim vremenskim tačkama.
[0170] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, gde primeri agenasa uključuju, kao što je zračenje, alkilirajući agensi, inhibitori angiogeneze, antitela, antimetaboliti, antimitotici, antiproliferati, antivirusni lekovi, inhibitori aurora kinaze, inhibitori apoptoze (npr., Bcl-kL, Bcl-v i Bfl-1) inhibitori, aktivatori puta smrtnog receptora, inhibitori Bcr-Abl kinaze, BiTE (Bi-Specifični T-ćelijski aktivator) antitela, konjugati antitelo-lek, modifikatori biološkog odgovora, inhibitori ciklin-zavisne kinaze, inhibitori ćelijskog ciklusa, inhibitori ciklooksigenaze-2, DVD (antitela dualnog varijabilnog domena), inhibitori receptora za viruse leukemije virusnog onkogena (ErbB2), inhibitori faktora rasta, inhibitori proteina toplotnog šoka (HSP)-90, inhibitori histon deacetilaze (HDAC), hormonske terapije, imunologici, inhibitori apoptoznih proteina (IAP), interkalacioni antibiotici, inhibitori kinaze, inhibitori kinezina, inhibitori Jak2, sisarski cilj inhibitora rapamicina, inhibitori kinaze mikroRNK, ekstracelularni signalno regulisani mitogeni, multivalentni vezujući proteini, nesteroidni anti-upalni lekovi (NSAID), inhibitori poli ADP (adenozin difosfat)-riboza polimeraze (PARP), hemoterapeutici platine, inhibitori polo-sličnih kinaza (Plk), inhibitori fosfoinozitid-3 kinaze (bromodomain), inhibitori proteozoma, analozi purina,
4
pirimidinski analozi, inhibitori receptora tirozin kinaze, etinoidi/deltoidi biljni alkaloidi, male inhibitorne ribonukleinske kiseline (siRNK), inhibitori topoizomeraze, inhibitori ubikvitin ligaze i slično, i u kombinaciji sa jednim ili više ovih agenasa.
[0171] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući BiTE antitela, koja su bi-specifična antitela koja usmeravaju T-ćelije da napadaju ćelije raka istovremeno vezujući dve ćelije. T-ćelija zatim napada ciljanu ćeliju raka. Primeri BiTE antitela uključuju adekatumumab (Micromet MT201), blinatumomab (Micromet MT103) i slično. Bez ograničavanja teorijom, jedan od mehanizama kojim T-ćelije izazivaju apoptozu ćelije ciljanog raka je egzocitoza komponenti citolitičkih granula, koje uključuju perforin i granzim B. U tom smislu je pokazano da Bcl-2 ublažava indukciju apoptoze i perforinom i granzimom B. Ovi podaci ukazuju da bi inhibicija Bcl-2 mogla povećati citotoksične efekte izazvane T-ćelijama kada su ciljane na ćelije raka (V.R. Sutton, D.L. Vaux and J.A. Trapani, J. of Immunology 1997, 158 (12), 5783).
[0172] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući siRNK. SiRNK su molekuli koji imaju endogene RNK baze ili hemijski modifikovane nukleotide. Modifikacije ne ukidaju celularnu aktivnost, već uvećavaju stabilnost i/ili povećavaju ćelijsku potenciju. Primeri hemijskih modifikacija uključuju fosforotioatne grupe, 2'-deoksinukleotid, ribonukleotide koji sadrže 2'-OCH3, 2'-F-ribonukleotide, 2'-metoksietil ribonukleotide, njihove kombinacije i slično. siRNK može biti različite dužine (npr., 10-200 bps) i strukture (npr., ukosnica, jednostruki/dvostruki lanci, izbočine, udubljenja/praznine, neusklađenosti) i obrađuju se u ćelijama kako bi se omogućilo aktivno utišavanje gena. Dvolančana siRNK (dsRNK) može imati isti broj nukleotida na svakoj liniji (tupi krajevi) ili asimetrične krajeve (prepusti). Prepusti od 1-2 nukleotida mogu biti prisutni u sens i/ili antisens lancu, kao i prisutni na 5'- i/ili 3'-krajevima datog lanca.
[0173] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući DVD i druge multivalentne vezujuće proteine. Multivalentni vezujući proteini su vezujući proteini koji sadrže dva ili više mesta vezivanja antigena. Multivalentni vezujući proteini su konstruisani tako da imaju tri ili više mesta vezivanja antigena i generalno nisu
4
antitela koja se javljaju u prirodi. Izraz „multispecifični vezujući protein“ označava vezujući protein koji može da veže dva ili više srodnih ili nepovezanih ciljeva. Vezujući proteini dvostrukog varijabilnog domena (DVD) su tetravalentni ili multivalentni vezujući proteini koji vezuju proteine koji sadrže dva ili više mesta za vezivanje antigena. Takvi DVD mogu biti monospecifični (tj. sposobni za vezivanje jednog antigena) ili multispecifični (tj. sposobni da vežu dva ili više antigena). DVD vezujući proteini koji sadrže dva DVD polipeptida teškog lanca i dva DVD polipeptida lakog lanca se nazivaju DVD Ig. Svaka polovina DVD Ig sadrži DVD polipeptid teškog lanca, DVD polipeptid lakog lanca i dva mesta vezivanja antigena. Svako mesto vezivanja sadrži varijabilni domen teškog lanca i varijabilni domen lakog lanca sa ukupno 6 CDR koji su uključeni u vezivanje antigena po mestu vezivanja antigena.
Multispecifični DVD uključuju proteine za vezivanje DVD koji vezuju DLL4 i VEGF, ili C-met i EGFR ili ErbB3 i EGFR.
[0174] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući agense za alkilaciju. Agensi za alkilaciju uključuju altretamin, AMD-473, AP-5280, apazikuon, bendamustin, brostalicin, busulfan, karbukon, karmustin (BCNU), klorambucil, CLORETAZINE® (laromustin, VNP 40101M), ciklofosfamid, decarbazin, estramustin, fotemustin, glufosfamid, iframfamin, KW-2170, lomustin (CCNU), mafosfamid, melfalan, mitobronitol, mitolaktol, nimustin, azotni senf N-oksid, ranimustin, temozolomid, tiotepa, TREANDA® (bendamustin), treosulfan, rofosfamid i slično.
[0175] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore angiogeneze. Inhibitori angiogeneze uključuju inhibitore tirozin kinaze (Tie-2) endotelijalnih specifičnih receptora, inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), inhibitore receptora za rast insulina (2), inhibitore matrične metaloproteinaze-2 (MMP-2), inhibitore matrične metaloproteinaze-9 (MMP-9), inhibitore receptora faktora rasta (PDGFR), trombospondinske analoge, inhibitore tirozin kinaze (VEGFR) vaskularnog endotelnog faktora rasta i slično.
[0176] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući antimetabolite. Antimetaboliti uključuju ALIMTA® (pemetreksed dinatrijum,
4
LY231514, MTA), 5-azacitidin, XELODA® (kapecitabin), karmofur, LEUSTAT® (kladribin), klofarabin, citarabin, citarabin okfosfat, citozin arabinozid, decitabin, deferoksamin, doksifluridin, eflornitin, EIKAR (5-etinil-1-β-D-ribofuranosilimidazol-4-karboksamid), enocitabin, etenilcitidin, fludarabin, 5-fluorouracil sam ili u kombinaciji sa leukovorinom, GEMZAR® (gemcitabin), hidroksiurea, ALKERAN® (melfalan), merkaptopurin, 6-merkaptopurin ribozid, metotreksat, mikofenolna kiselina, nelarabin, nolatreksed, ocfosfat, pelitreksol, pentostatin, raltitreksed, Ribavirin, triapin, trimetreksat, S-1, tiazofurin, tegafur, TS-1, vidarabin, UFT i slično.
[0177] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući antivirusne agense. Antivirusni agensi uključuju ritonavir, hidroksiklorokin i slično.
[0178] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući aurora inhibitore kinaze. Aurora inhibitori kinaze uključuju ABT-348, AZD-1152, MLN-8054, VX-680, Aurora A-specifične inhibitore kinaze, Aurora B-specifične inhibitore kinaze i pan-Aurora inhibitore kinaze i slično.
[0179] Anti-EGFR ADCs (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući, inhibitore Bcl-2 proteina. Inhibitori Bcl-2 protein uključuju AT-101 ((-)gosipol), GENASENSE® (G3139 ili oblimersen (Bcl-2-ciljajući antisens oligonukleotid)), IPI-194, IPI-565, N-(4-(4-((4'-hloro(1,1'-bifenil)-2-il)metil)piperazin-1-il)benzoil)-4-(((1R)-3-(dimetilamino)-1-((fenilsulfanil)metil)propil)amino)-3-nitrobenzensulfonamid) (ABT-737), N-(4-(4-((2-(4-hlorofenil)-5,5-dimetil-1-cikloheks-1-en-1-il)metil)piperazin-1-il)benzoil)-4-(((1R)-3-(morfolin-4-il)-1-((fenilsulfanil)metil)propil)amino)-3-((trifluorometil)sulfonil)benzensulfonamid (ABT-263), GX-070 (obatoklaks), ABT-199, i slično.
[0180] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka,
4
uključujući inhibitore Bcr-Abl kinaze, kao što je DASATINIB® (BMS-354825), GLEEVEC® (imatinib) i slično.
[0181] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore CDK. Inhibitori CDK obuhvataju AZD-5438, BMI-1040, BMS-032, BMS-387, CVT-2584, flavopiridol, GPC-286199, MCS-5A, PD0332991, PHA-690509, seliciklib (CYC-202, R-roskovitin), ZK-304709 i slično.
[0182] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore COX-2. Inhibitori COX-2 uključuju ABT-963, ARCOXIA® (etorikoksib), BEXTRA® (valdekoksib), BMS347070, CELEBREX® (celekoksib), COX-189 (lumirakoksib), CT-3, DERAMAXX® (derakoksib), JTE-522, 4-metil-2-(3,4-dimetilfenil)-l-(4-sulfamoilfenil-lH-pirol), MK-663 (etorikoksib), NS-398, parekoksib, RS-57067, SC-58125, SD-8381, SVT-2016, S-2474, T-614, VIOXX® (rofekoksib) i slično.
[0183] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući druge EGFR inhibitore. EGFR inhibitori uključuju EGFR antitela, ABX-EGF, anti-EGFR imunolipozome, EGF-vakcinu, EMD-7200, ERBITUX® (cetuksimab), HR3, IgA antitela, IRESSA® (gefitinib), TARCEVA® (erlotinib ili OSI-774), TP-38, EGFR fuzioni protein, TYKERB® (lapatinib) i slično.
[0184] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore HER2. Inhibitori ErbB2 receptora uključuju CP-724-714, CI-1033 (canertinib), HERCEPTIN® (trastuzumab), TYKERB® (lapatinib), OMNITARG® (2C4, petuzumab), TAK-165, GW-572016 (ionafarnib), GW-282974, EKB-569, PI-166, dHER2 (HER2 vakcina), APC-8024 (HER-2 vakcina), anti-HER/2neu bispecifično antitelo, B7.her2IgG3, AS HER2 trifunkcionalno bispecifično antitelo, mAB AR-209, mAB 2B-1 i slično.
[0185] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore histon deacetilaze, kao što je depsipeptid, LAQ-824, MS-275, trapoksin, suberoilanilid hidroksamska kiselina (SAHA), TSA, valproična kiselina i slično.
[0186] Inhibitori HSP-90 uključuju 17-AAG-nab, 17-AAG, CNF-101, CNF-1010, CNF-2024, 17-DMAG, geldanamicin, IPI-504, KOS-953, MYCOGRAB® (ljudsko rekombinantno antitelo na HSP- 90), NCS-683664, PU24FCl, PU-3, radicicol, SNX-2112, STA-9090 VER49009 i slično.
[0187] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore apoptoze proteina, kao što je HGS1029, GDC-0145, GDC -0152, LCL-161, LBW-242 i slično.
[0188] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući i druge ADC, kao što je anti-CD22-MC-MMAF, anti-CD22 -MC-MMAE, anti-CD22-MCC-DM1, CR-011-vcMMAE, PSMA-ADC, MEDI-547, SGN-19Am SGN-35, SGN-75 ADC i slično
[0189] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući aktivatore puta smrtnog receptora, kao što su TRAIL, antitela ili drugi agensi koji ciljaju TRAIL ili smrtne receptore (npr., DR4 i DR5) kao što su Apomab, conatumumab, ETR2-ST01, GDC0145, (lexatumumab), HGS-1029, LBI-135, PRO-1762 i trastuzumab.
[0190] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore kinezina, kao što su Eg5 inhibitori kao što je AZD4877, ARRY-520; CENPE inhibitori kao što su GSK923295A i slično.
[0191] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka,
1
uključujući inhibitore JAK-2, kao što su CEP-701 (lesaurtinib), XL019 i INCB018424 i slično.
[0192] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore MEK, kao što je ARRY-142886, ARRY-438162 PD-325901, PD-98059 i slično.
[0193] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore mTOR, kao što su AP-23573, CCI-779, everolimus, RAD -001, rapamicin, temsirolimus, ATP-kompetitivni TORC1/TORC2 inhibitori, uključujući PI-103, PP242, PP30, Torin 1 i slično.
[0194] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući nesteroidne anti-upalne lekove (NSAID), kao što je AMIGESIC® (salsalat), DOLOBID® (diflunisal), MOTRIN® (ibuprofen), ORUDIS® (ketoprofen), RELAFEN® (nabumeton), FELDENE® (piroksikam), ibuprofen krema, ALEVE® (naproksen) i NAPROSYN® (naproksen), VOLTAREN® (diklofenak), INDOCIN® (indometacin), CLINORIL® (sulindak), TOLECTIN® (tolmetin), LODINE® (etodolak), TORADOL® (ketorolak), DAIPRO® (oksaprozin) i slično.
[0195] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore PDGFR, kao što su C-451, CP-673, CP-868596 i slično.
[0196] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući platinumske hemoterapeutike, kao što su cisplatin, ELOXATIN® (oksaliplatin) eptaplatin, lobaplatin, nedaplatin, PARAPLATIN® (karboplatin), satraplatin, pikoplatin i slično.
[0197] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati
2
zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore kinaze nalik polo, npr., BI-2536 i slično.
[0198] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore fosfoinozitid-3 kinaze (PI3K), kao što je vortmannin, LY294002, XL -147, CAL-120, ONC-21, AEZS-127, ETP-45658, PX-866, GDC-0941, BGT226, BEZ235, XL765 i slično.
[0199] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući analoge trombospondina, kao što je ABT-510 (trombospondinski mimetik), ABT-567, ABT-898 (trombospondin-1 mimetički peptid), TSP-1 i slično.
[0200] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore VEGFR, kao što je AVASTIN® (bevacizumab), ABT-869, AEE-788, ANGIOZIME™ (ribozim koji inhibira angiogenezu (Ribozyme Pharmaceuticals (Boulder, CO.) i Chiron, (Emeryville, CA)), aksitinib (AG-13736), AZD-2171, CP-547,632, IM-862, MACUGEN (pegaptamib), NEXAVAR® (sorafenib, BAY43-9006), pazopanib (GW-786034), vatalanib (PTK-787, ZK-222584), SUTENT® (sunitinib, SU-11248), VEGF trap, ZACTIMA™ (vandetanib, ZD-6474), GA101, ofatumumab, ABT-806 (mAb-806), ErbB3 specifična antitela, BSG2 specifična antitela, DLL4 specifična antitela i C-met specifična antitela, i slično. Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti- EGFR ADC) mogu se primeniti zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući antibiotike, kao što su interkalacijski antibiotici aklarubicin, aktinomicin D, amrubicin, annamicin, adriamicin, BLENOXANE® (bleomicin), daunorubicin, CAELYX® ili MYOCET® (lipozomski doksorubicin), elsamitrucin, epirbucin, glarbuicin, ZAVEDOS® (idarubicin), mitomicin C, nemorubicin, neokarzinostatin, peplomicin, pirarubicin, rebekkamicin, stimaler, streptozocin, VALSTAR® (valrubicin), zinostatin i slično.
[0201] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore topoizomeraze, kao što su aklarubicin, 9-aminokamptotecin, amonafid, amsakrin, bekatekarin, belotecan, BN-80915, CAMPTOSAR® (irinotekan hidrohlorid), kamptotecin, CARDIOXANE® (deksrazoksin), diflomotekan, edotecarin, ELLENCE® ili PHARMORUBICIN® (epirubicin), etopozid, egzatekan, 10-hidroksikamptotecin, gimatecan, lurtotekan, mitoksantron pirarbucin, piksantron, rubitekan, sobuzoksan, SN-38, taflupozid, topotekan i slično.
[0202] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući terapeutska antitela, kao što su AVASTIN® (bevacizumab), CD40-specifična antitela, chTNT-1/B, denosumab, ERBITUX® (cetuksimab), HUMAX-CD4® (zanolimumab), IGF1R-specifična antitela, lintuzumab, PANOREX® (edrecolomab), RENCAREX® (WX G250), RITUXAN® (rituksimab), ticilimumab, trastuzimab, CD20 antitela tipa I i II i slično.
[0203] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući hormonske terapije, kao što su ARIMIDEX® (anastrozol), AROMASIN® (egzemestan), arzoksifen, CASODEX® (bikalutamid), CETROTIDE® (cetroreliks), degareliks, deslorelin, DESOPAN® (trilostan), deksametazon, DROGENIL® (flutamid), EVISTA® (raloksifen), AFEMA™ (fadrozol), FARESTON® (toremifen), FASLODEX® (fulvestrant), FEMARA® (letrozol), formestan, glukokortikoidi, HECTOROL® (doksercalciferol), RENAGEL® (sevelamer karbonat), lasofoksifen, leuprolid acetat, MEGACE® (megesterol), MIFEPREX® (mifepriston), NILANDRON™ ( nilutamid), NOLVADEX® (tamoksifen citrat), PLENAXIS™ (abarelik), prednizon, PROPECIA® (finasterid), rilostan, SUPREFACT® (buserelin), TRELSTAR® (hormon za oslobađanje luteinizirajućeg hormona (LHRH)), VANTAS® (Histrelin implant), VETORIL® (trilostan ili modrastan), ZOLADEX® (fosrelin, goserelin) i slično.
[0204] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući deltoide i retinoide, kao što su seokalcitol (EB1089, CB1093), leksakalcitrol (KH1060), fenretinid, PANRETIN® (aliretinoin), ATRAGEN® (lipozomski tretinoin), TARGRETIN® (beksaroten), LGD-1550 i slično.
4
[0205] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore PARP, kao što su veliparib, olaparib, KU-59436, AZD-2281, AG-014699, BSI-201, BGP-15, INO-1001, ONO-2231 i slično.
[0206] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući biljne alkaloide, kao što su, ali bez ograničavanja na, vinkristin, vinblastin, vindesin, vinorelbin i slično.
[0207] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore proteasoma, kao što su VELCADE® (bortezomib), MG132, NPI-0052, PR-171 i slično.
[0208] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući imunološke agense. Primeri imunoloških agenasa uključuju interferone i druge agense za poboljšanje imuniteta. Interferoni uključuju interferon alfa, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon beta, interferon gama-la, ACTIMMUNE® (interferon gama-lb) ili interferon gama-nl, njihove kombinacije i slično. Drugi agensi uključuju ALFAFERONE®, (IFN-a), BAM-002 (oksidovani glutation), BEROMUN® (tasonermin), BEXXAR® (tositumomab), CAMPATH® (alemtuzumab), CTLA4 (citotoksični limfocitni antigen 4), decarbazin, denileukin, epratuzumab, GRANOCYTE® (lenograstim), lentinan, alfa interferon leukocita, imikvimod, MDX-010 (anti-CTLA-4), vakcinu za melanom, mitumomab, molgramostim, MILOTARG™ (gemtuzumab ozogamicin), NEUPOGEN® (filgrastim), OncoVAC-CL, OVAREX® (oregovomab), pemtumomab (Y-muHMFG1), PROVENGE® (sipuleucel-T), sargaramostim, sizofilan, teceleukin, THERACYS® (Bacillus Calmette-Guerin), ubenimeks, VIRULIZIN® (imunoterapijski, Lorus Pharmaceuticals), Z-100 (specifična supstanca od Maruyama (SSM)), WF-10 (Tetraklorodecaoksid (TCDO)), PROLEUKIN® (aldesleukin), ZADAXIN® (timalfasin), ZENAPAX® (daclizumab), ZEVALIN® (90I-Ibritumomab tiuketan) i slično.
[0209] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući modifikatore biološkog odgovora, kao što su agensi koji modifikuju odbrambene mehanizme živih organizama ili biološki reakcije, kao što su preživljavanje, rast ili diferencijacija ćelija tkiva, da ih se usmeri da imaju anti-tumorsku aktivnost i uključuju krestin, lentinan, sizofiran, picibanil PF-3512676 (CpG-8954), ubenimeks i slično.
[0210] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući analoge pirimidina, kao što su citarabin (ara C ili arabinozid C), citozin arabinozid, doksifluridin, FLUDARA® (fludarabin), 5-FU (5-fluorouracil), floksuridin, GEMZAR® (gemcitabin), TOMUDEX® (ratitreked), TROXATIL™ (triacetiluridin troksacitabin) i slično.
[0211] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući purinske analoge, kao što su LANVIS® (tioguanin) i PURI-NETHOL® ( merkaptopurin).
[0212] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući antimitotičke agense, kao što je batabulin, epotilon D (KOS-862), N-(2-((4-hidroksifenil)amino)piridin-3-il)-4-metoksibenzensulfonamid, iksabepilon (BMS 247550), paklitaksel, TAXOTERE® (docetaksel), PNU100940 (109881), patupilon, XRP-9881 (larotaksel) vinflunin, ZK-EPO (sintetički epotilon) i slično.
[0213] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući inhibitore ubikvitin ligaze, kao što su inhibitori MDM2, kao što su nutlini, NEDD8 inhibitori kao MLN4924 i slično.
[0214] Jedinjenja predmetnog pronalaska se takođe mogu koristiti kao radiosenzitizatori koji povećavaju efikasnost radioterapije. Primeri radioterapije uključuju radioterapiju spoljnog snopa, teleterapiju, brahiterapiju i zapečaćenu, radioterapiju nezapečaćenog izvora i sl.
[0215] Anti-EGFR ADC (ili formulacije koje sadrže anti-EGFR ADC) mogu se primenjivati zajedno sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više agensa za tretman raka, uključujući hemoterapeutske agense kao što je ABRAXANE™ (ABI-007), ABT-100 (inhibitor farnesil transferaze), ADVEXIN® (Ad5CMV-p53 vakcina), ALTOCOR® ili MEVACOR® (lovastatin), AMPLIGEN® (poli I: poli C12U, sintetička RNK), APTOSIN® (ekisulind), AREDIA® (pamidronska kiselina), arglabin, L-asparaginaza, atamestan (1-metil-3,17-dion-androsta-1,4-dien), AVAGE® (tazaroten), AVE-8062 (derivat kombreastatina) BEC2 (mitumomab), kahektin ili kaheksin (faktor nekroze tumora), canvakin (vakcina), CEAVAC® (vakcina protiv raka), CELEUK® (celmoleukin), CEPLENE® (histamin dihidrohlorid), CERVARIX® (vakcina protiv ljudskog papiloma virusa), CHOP® (C:
CITOXAN® (ciklofosfamid); ADRIAMICIN® (hidroksidoksorubicin); O: Vincristin (ONCOVIN®); P: prednizon), CYPAT™ (ciproteron acetat), combrestatin A4P, DAB(389)EGF (katalitički i translokacioni domeni difterijskog toksina fuzionisani preko His-Ala veznika za ljudski epidermalni faktor rasta) ili TransMID-107R™ (difterijski toksini), dakarbazin, daktinomicin, 5,6-dimetilksantenon-4-sirćetna kiselina (DMXAA), eniluracil, EVIZON™ (skvalamin laktat), DIMERICINE® (lipozomski losion T4N5), diskodermolid, DX-8951f (egzatekanski mezilat), enzastaurin, EPO906 (epitilon B), GARDASIL® (rekombinantna vakcina za kvadrivalentni ljudski papiloma virus (tipovi 6, 11, 16, 18)), GASTRIMMUNE®, GENASENSE®, GMK (konjugovan gangliozidna vakcina), GVAX® (vakcina protiv raka prostate), halofuginon, histerelin, hidroksikarbamid, ibandronska kiselina, IGN-101, IL-13-PE38, IL-13-PE38QQR (cintredekin besudotok) IL-13-pseudomonas egzotoksin, interferon-a, interferon-y, JUNOVAN™ ili MEPACT™ (mifamurtid), lonafarnib, 5,10-metilentetrahidrofolat, miltefozin (heksadecilfosfoholin), NEOVASTAT® (AE-941), NEUTREXIN® (trimetreksat) glukuronat), NIPENT® (pentostatin), ONCONASE® (enzim ribonukleaze), ONCOPHAGE® (melan) tretman vakcinacijom protiv oma), ONCOVAX® (IL-2 vakcina), ORATHECIN™ (rubitekan), OSIDEM® (ćelijski lek na bazi antitela), OVAREX® MAb (mišja monoklonska antitela), paklitaksel, PANDIMEX™ (aglikon saponini iz ginsenga koji sadrže 20(S)protopanaksadiol (aPPD) i 20(S)protopanaksatriol (aPPT)), panitumumab, PANVAC®-VF (istraživačka vakcina protiv raka), pegaspargaza, PEG Interferon A, fenoksodiol, procarbazin, rebimastat, REMOVAB® (katumaksomab), REVLIMID® (lenalidomid), RSR13 (efaproksiral), SOMATULINE® LA (lanreotid), SORIATANE® (acitretin), staurosporin (Streptomices staurospores), talabostat (PT100), TARGRETIN® (beksaroten), TAXOPREXIN® (DHA-paklitaksel), TELCITA® (canfosfamid, TLK286), temilifen, TEMODAR® (temozolomid), tesmilifen, talidomid, THERATOPE® (STn-KLH), timitak (2-amino-3,4-dihidro-6-metil-4-okso-5-(4-piridiltio)kinazolin dihidrohlorid), TNFERADE™ (adenovektor: DNK nosač koji sadrži gen za faktor-α nekroze tumora), TRACLEER® ili ZAVESCA® (bosentan), tretinoin (Retin-A), tetrandrin, TRISENOX® (arsen trioksid), VIRULIZIN®, ukrain (derivat alkaloida iz Chelidonium majus), vitaksin (anti-alfavbeta3 antitelo), XCITRIN® (motekafin gadolinium), XINLAI™ (atrasentan), XIOTAX™ (paclitakel poliglumek), YONDELIS® (trabektedin), ZD-6126, ZINECARD® (deksrazoksan), ZOMETA® (zolendronska kiselina), zorubicin i slično.
[0216] U jednom slučaju, formulacija koja sadrži anti-EGFR-ADC se intravenozno primenjuje pacijentu koji ima glioblastom u kombinaciji sa zračenjem i/ili TEMODAR® (temozolomid).
[0217] Dalje, u jednom otelotvorenju, formulacija se može pružiti kao farmaceutski komplet koji sadrži (a) kontejner koji sadrži anti-GFR ADC u liofilizovanom obliku i (b) drugi kontejner koji sadrži farmaceutski prihvatljiv razblaživač (npr. sterilnu vodu) za injekcije.. Farmaceutski prihvatljivi razblaživač se može koristiti za rekonstituciju ili razblaženje liofilizovanog ADC. Opciono se može povezati sa takvim kontejnerima u obliku koji je propisala vladina agencija koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih ili bioloških proizvoda, što ukazuje na odobrenje agencije za proizvodnju, upotrebu ili prodaju za ljudsku primenu.
[0218] Pronalazak je dalje opisan u sledećim primerima, koji nisu namenjeni da ograniče obim pronalaska.
PRIMERI
Primer 1: Testiranje stabilnosti konjugata antitelo-lek (ADC)
[0219] Sledeći primer opisuje testove koji se koriste za ispitivanje stabilnosti određenih ADC (u tečnom obliku) u poređenju sa nekonjugovanim antitelima. Antitela koja su konjugovana bilo na MMAF (pogledati Sliku 2) (u daljem tekstu „ADC 1-MMAF“, koji je konjugat humanizovano anti-EGFR antitelo-1-MMAF) ili MMAE (pogledati Sliku 1) (u daljem tekstu „ADC 1-MMAE“, koji je konjugat humanizovano anti-EGFR antitelo-1-MMAE) su testirani i upoređeni sa samim humanizovanim anti-EGFR antitelom 1. Među ispitivanim svojstvima bila je početna temperatura pri dinamičkom skeniranju fluorescencije i DSC, analiza sekundarne i tercijarne strukture FTIR i blizu UV-CD, respektivno, ubrzana stabilnost pri niskim i visokim koncentracijama, stabilnost u serumu, stabilnost zamrzavanja/odmrzavanja na niskoj i visokoj koncentracije i rastvorljivosti. Formulacije opisane u ovom primeru su tečne formulacije.
Analiza početka razvijanja pomoću dinamičke fluorescencije skeniranja (DSF) i diferencijalne kalorimetrije skeniranja (DSC)
[0220] Dve različite tehnike, dinamička fluorescencija skeniranja (DSF) i diferencijalna kalorimetrija skeniranja(DSC), korišćene su za određivanje početka razvijanja i konformacione stabilnosti antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE tokom termalne denaturacije. Kao što je prikazano na Slici 3A, promena intenziteta fluorescencije je bila povezana sa nivoima i temperaturama koje se odvijaju u proteinima. Rezultati merenja termostabilnosti su upoređeni sa podacima dobijenim korišćenjem DSC (Slika 3B). Kao mera stabilnosti korišćeno je proteinsko razvijanje na temperaturi većoj od 55°C. Kao što je prikazano na Slici 3A i B, početak razvijanja dogodio se na nižoj temperaturi u ADC 1-MMAE (46°C) u poređenju sa ADC 1-MMAF (55°C), i bio je najveći za antitelo 1 (61°C), što pokazuje da je antitelo 1 najstabilnije od tri molekula. Prema tome, ADC su pokazali smanjenje termodinamičke stabilnosti, kao što se odrazilo u nižim temperaturama za ADC 1-MMAF i ADC-1 MMAE naspram samog antitela 1.
Analize sekundarne i tercijarne strukture antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE [0221] Stabilnost antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE određena je korišćenjem Fourier-ove transformacione infracrvene spektroskopije (FTIR) i blizu UV-cirkularnog dikroizma (CD). Pokazano je da se CD spektri između 260 i 180 nm mogu analizirati za različite tipove sekundarnih struktura: alfa spirala, paralelni i antiparalelni beta list, skretanje i drugo. Promene u sekundarnoj strukturi antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE u citratnom/fosfatnom puferu samom pri pH 5/6/7 praćene su pomoću FTIR (Slika 4A) i CD (Slika 4B). Kao što je prikazano na Slikama 4A i 4B, fizičke karakteristike ADC 1-MMAE i ADC 1-MMAF su blago izmenjene u nestrukturiranim elementima u poređenju sa antitelom 1. Bilo je i malo izmenjenih nestrukturiranih elemenata u ADC 1-MMAE i ADC 1-MMAF u poređenju sa samim antitelom 1, kao što su pokazali FTIR podaci na Slici 4A. Uopšteno, međutim, svaki od tri molekula pokazao je prisustvo od >40% β lista na 1638 cm<-1>. Rezultati CD-a pokazali su različit profil za ADC 1-MMAE u poređenju sa ADC 1-MMAF i antitelom 1 (Slika 4B). Generalno, međutim, svaki od molekula je imao profil u obliku slova S sa negativnom eliptičnosti na 280 nm.
Ubrzane studije stabilnosti antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE
[0222] Ubrzane studije stabilnosti mogu pomoći u pružanju informacija o efektu kratkoročne izloženosti uslovima koji se inače obično javljaju tokom dužeg perioda. Antitelo 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE su formulisani na niskoj koncentraciji (1 mg/ml) u 10 mM citrat/fosfatnom puferu, pH 6, i na visokoj koncentraciji (60 mg/ml) u 15 mM histidinu, pH 5,75. Stabilnost je definisana kao manje od 5% gubitka monomera na 40°C nakon 7 dana pri najstabilnijem pH
[0223] Rezultati ovih studija su prikazani na Slici 5 i Slici 6. Slika 5 prikazuje agregaciju (kao% agregata; određeno SEC analizom) u početnoj vremenskoj tački (T0), i nakon skladištenja na 40°C tokom 7 dana. Slika 5 pokazuje da je u koncentraciji od 1 mg/ml došlo do povećane sklonosti agregacije ADC 1-MMAE na niskim koncentracijama, u poređenju sa ADC 1-MMAF i antitela 1. Slika 6 prikazuje agregaciju (kao % agregata) u početnoj vremenskoj tački (T0), i nakon skladištenja na 40°C tokom 7 dana. Slika 6 pokazuje da u koncentraciji od 60 mg/ml postoji značajno povećana sklonost agregacije ADC 1-MMAE na visokim koncentracijama, u poređenju sa ADC 1-MMAF i antitelom 1. Dalje, nije bilo uticaja poznatih stabilizatora kao što je hidroksipropil beta ciklodekstrin (označen kao „HPBCD“ u „Slici 6“) na agregaciji.
Stabilnost antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE u plazmi
[0224] Stabilnost u plazmi igra važnu ulogu u otkrivanju i razvoju lekova, jer nestabilna jedinjenja imaju brzi klirens i kratak poluživot, što rezultuje lošim in vivo performansama. In vitro serumska stabilnost antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE je procenjena u testu stabilnosti u serumu. Ukratko, antitela su obeležena sa Aexa Flur® (Life Technologies). Obeleženo antitelo 1 i ADC-1-MMAF i ADC-1-MMAE su zatim inkubirani u filtriranom serumu. Uzorci su sakupljeni 0, 1, 3, 5, 7 dana, i analizirani hromatografijom za isključivanje veličine (SEC). Nagib procenta agregata visoke molekularne mase (HMW) izračunat je između dana 0-7. Stabilnost je definisana kao manje od 1% HMW vrste po danu. Dakle, što je niži nagib, bilo je manje agregacije. Konkretnije, grafik na Slici 7 pokazuje da je nagib ADC 1-MMAF (0,5%) bio niži od antitela 1 (1,10%) i ADC 1-MMAE (2,30), što ukazuje na manje agregacije i bolju stabilnost u plazmi. Slika 7 takođe opisuje nagibe procenata HMW agregata za niz drugih molekula, npr., antitela i DVD-Ig, za svrhe poređenja.
Stabilnost zamrzavanja/odmrzavanje visokih i niskih koncentracija antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE
[0225] Agregacija antitela može biti indukovana zamrzavanjem-odmrzavanjem i povišenom temperaturom, tipičnim faktorima stresa tokom razvoja, proizvodnje i skladištenja. Antitelo 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE su podvrgnuti 0, 1 ili 2 ciklusa zamrzavanja i odmrzavanja, i karakterisani spektroskopskim tehnikama (SEC). Visoke koncentracije antitela 1 (210 mg/ml), ADC 1-MMAF (135 mg/ml) i ADC 1-MMAE (145 mg/ml) su formulisane u 15 mM histidinskom puferu na pH 5,75. Rezultati koji pokazuju % monomera (određeno SEC-om) su opisani na Slici 8A, i sugerišu da nije bilo promene u agregaciji (definisano kao <2% povećanja HMW vrsta posle 2 F/T ciklusa) među tri molekula. U eksperimentima prikazanim na Slici 8B, antitelo 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE u istim koncentracijama su formulisani u koncentraciji od 1 mg/ml u 10 mM citrata i 10 mM fosfatnom puferu pri pH od 7,0. Kao što je prikazano na Slikama 8A i 8B, nije bilo značajne promene u stabilnosti zamrzavanja/odmrzavanja posle jednog ili dva ciklusa zamrzavanja/odmrzavanja između antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE, bilo pri visokim ili niskim koncentracijama.
[0226] Formiranje čestica je takođe testirano za tri molekula pri koncentraciji od 1 mg/ml u samom citratnom/fosfatnom puferu pri pH 6, tokom zamrzavanja-odmrzavanja (0, 1 ili 2 ciklusa zamrzavanja). Sub-vidljive čestice (>= 10 µm i >= 25 µm, respektivno) su određene ispod granica farmakopeje (>= 10 µm i manje ili jednake 600/Ml (>= 25 µm), respektivno (Slika 9A). Slikanje mikrotoka (MFI) je takođe korišćeno za detektovanje i kvantifikovanje sub-vidljivih čestica (manje od 10 mikrona) (Slika 9B). Slike 9A i 9B opisuju ukupno povećanje sub-vidljivih čestica za antitelo 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE tokom vremena.
Rastvorljivost antitela 1 u odnosu na ADC 1 sa MMAF ili MMAE
[0227] Rastvorljivost antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE u formulaciji koja sadrži 10 mM citrat i 10 mM sistem fosfatnog pufera na pH 6 ispitana je na 5 stepeni C. Rastvorljivost je definisana kao rastvor koji nema talog kada je formulisan na najmanje koncentraciju od 50 mg/ml. Rastvorljivost svakog od antitela 1, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE je određena kao
1
sledeće: antitelo 1 > 210 mg/mL; ADC 1-MMAF: > 135 mg/mL (Izvor 1); ADC 1-MMAF: > 92 mg/mL A (Izvor 2); ADC 1-MMAE: > 145 mg/mL (Izvor 1); i ADC 1-MMAE: > 116 mg/mL (Izvor 2). Primećeno je da rastvorljivost može premašiti gore navedene koncentracije, pošto ograničeni materijal sprečava dalju koncentraciju.
Zaključak
[0228] Sveukupno, ADC 1-MMAF i ADC 1-MMAE su pokazali manju stabilnost od nekonjugovanog antitela 1, kao što je opisano, na primer, u ubrzanim studijama i testu razvijanja koji je ovde opisan.
Primer 2: ADC 1-MMAF stabilna liofilizovana formulacija
[0229] ADC 1-MMAF je anti-EGFR konjugat antitelo-lek koji sadrži antitelo 1 kovalentno vezano za MMAF. ADC 1-MMAF je formulisan kao liofilizovani prašak za injekcije nakon rekonstitucije i pakovan je u staklene bočice. Liofilizovani prah je rekonstituisan sa 5 mL sterilne vode za injekcije (SWFI) i dato je 20 mg/mL rastvora ADC 1-MMAF za injekciju. Formulacija lekovitog proizvoda je bila za jednokratnu upotrebu i nije sadržala konzervans. Sastav ADC 1-MMAF po bočici (liofilizovani prah) i po mL (rekonstituisani rastvor) je opisan u Tabeli 1, u nastavku. Rekonstituisani lek je razblažen sa 0,9% rastvorom soli (natrijum hlorid injekcijom, USP) za doziranje infuzijom.
Tabela 1. Sastav praška ADC 1-MMAF za rastvor za injekcije, 20 mg/mL
2
[0230] Formulacija opisana u Tabeli 1 je reprezentativna za liofilizovanu formulaciju za anti-EGFR ADC gde je konjugat derivat auristatina, kao što je MMAF. Formulacija sadrži pufer, šećer, surfaktant i anti-EGFR konjugat antitelo-lek.
[0231] Primeri 3-5 opisuju studije stabilnosti testiranja liofilizovane formulacije ADC 1-MMAF opisane u Primeru 2. Primeri 6-8 opisuju studije stabilnosti testiranja prečišćene liofilizovane formulacije ADC 1-MMAF opisane u Primeru 2. Za studije stabilnosti, ADC 1-MMAF ( ili ADC1-MMAFp) je čuvan kao liofilizat u 20 ml bezbojnim staklenim bočicama, zatvoren sa siivim gumenom čepom i sivom plastičnom kapom. ADC 1-MMAF (ili ADC1-MMAFp) je čuvan pod sledeća tri odvojena uslova: 5°C; 25°C (60% relativne vlažnosti); 40°C (75% relativne vlažnosti) za ispitivanje stabilnosti.
Primer 3: Stabilnost ADC 1-MMAF u liofilizovanoj formulaciji na 5°C
[0232] Sledeći eksperimenti su izvedeni nakon rekonstitucije sa SWFI u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja liofilizata do osamnaest meseci na 5°C.
Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0233] Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora je vizuelno procenjen kako bi se potvrdilo da je liofilizat praktično bez vidljivih stranih čestica i bez vlage u ambalažnom materijalu. U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C do dvanaest meseci, izgled liofilizata je u skladu sa gore navedenim kriterijumima. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na temperaturi od 5°C do dvanaest meseci, rekonstituisani rastvor je bio bezbojni do blago žuti rastvor i praktično je bio bez vidljivih čestičnih materija.
Boja rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0234] Boja rekonstituisanog rastvora (vizuelna) je procenjena korišćenjem plavo/žute skale (BY skala), gde su uzorci testirani u odnosu na referentni rastvor i prijavljene su vrednosti. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C do dvanaest meseci, svi rekonstituisani rastvori su imale BY skala merenje manje ili jednako 7. Dakle, skladištenje nije uticalo na boju rastvora.
Jasnoća i opalescencija rastvora nisu pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C [0235] Jasnoća i opalescencija rekonstituisanog rastvora mereni su standardnim nefelometrom koristeći princip raspršivenja svetlosti i sledili su odgovarajuće Ph. Eur. ili USP postupke (kao što je takođe učinjeno za Primere 4 do 8). U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C do dvanaest meseci, izgled rekonstituisanog rastvora nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po European Pharmacopeia, ph. Eur) (< = RSII).
Sadržaj proteina u rastvoru nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0236] Određen je sadržaj proteina u rekonstituisanom rastvoru. Koncentracija proteina ADC određena je spektrofotometrijski korišćenjem talasne dužine od 280 nm i koeficijenta ekstinkcije ADC1-MMAF (1,43) (kao što je takođe učinjeno za Primere 4 do 8). U početnoj vremenskoj tački sadržaj proteina rekonstituisanog rastvora bio je 18,8 mg/ml. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, sadržaj proteina u rekonstituisanom rastvoru bio je 20,2 mg/ml.
Biološka aktivnost rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0237] Za ispitivanje biološke aktivnosti (%) rekonstituisanog rastvora u poređenju sa kontrolom ADC1-MMAF, za koju je ranije potvrđeno da ima citotoksičnu aktivnost (kontrola sa 100% aktivnosti), korišćena je analiza citotoksičnosti pomoću ćelijske linije ljudskog epidermoidnog raka. U početnoj vremenskoj tački relativna biološka aktivnost bila je 109%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, relativna biološka aktivnost je bila 105%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, relativna biološka aktivnost je bila 97%. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, relativna biološka aktivnost je bila 108%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom devet meseci, relativna biološka aktivnost je bila 105%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom 12 meseci, relativna biološka aktivnost je bila 99%. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom 18 meseci, relativna biološka aktivnost je bila 112%.
4
Veličina molekula i/ili molekularnih kompleksa nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0238] Hromatografija isključivanja po veličini rekonstituisanog rastvora je izvedena korišćenjem tečne hromatografije sa visokim performansama (SE-HPLC). SE-HPLC je odredio čistoću ADC1-MMAF korišćenjem HPLC sa isključivanjem veličine. Makromolekuli se izokratno razdvajaju tokom gel filtracione HPLC prema smanjenoj molekulskoj veličini. Čistoća je određena poređenjem površine glavnog vrha ADC1-MMAF sa ukupnom površinom hromatograma uzorka, isključujući vrhove povezane sa puferom. Postupak je sposoban da razdvoji agregate visoke molekularne mase i skraćene vrste antitela sa glavnog vrha ADC1-MMAF. Ovaj postupak je takođe korišćen u Primerima 4 do 8.
[0239] Glavni vrh (%) je meren pored vrsta visoke molekularne mase (%) i vrsta niske molekularne mase (%). U početnoj vremenskoj tački, glavni vrh je bio 98,9%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%.
[0240] Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%.
[0241] Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 1,0%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%.
[0242] Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, glavni vrh je bio 99,0%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom devet meseci, glavni vrh je bio 98,9%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase 0,3%.
[0243] Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom 12 meseci, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,8%, i vrste niske molekularne mase 0,4%.
[0244] Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom 18 meseci, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase 0,3%.
[0245] Prema tome, sve vremenske tačke su pokazale malo ili nimalo promene u % glavnog vrha, i vrstama sa visokom i niskom molekularnom masom u početnoj vremenskoj tački, i u merenjima nakon jednog, tri, šest, devet, dvanaest i osamnaest meseci.
Hromatografski vrh rastvora nije promenjen dugotrajnim skladištenjem na 5°C
[0246] Hromatografija katjonske izmene (CEX) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru korišćenjem tečne hromatografije visoke performanse (CEX-HPLC). U hromatografiji katjonske izmene, pozitivno naelektrisani molekuli su privučeni negativno naelektrisanim čvrstim nosačem. Hromatografska analiza katjonske izmene (CEX-HPLC) je postupak za razdvajanje na bazi naelektrisanja, koji je korišćen za praćenje stabilnosti ADC1-MMAF u test uzorcima kroz poređenje sa referentnim standardom (ADC1-MMAF koji je prethodno karakterisan). Postupak je sposoban da reši glavni vrh od kiselih i baznih vrsta.
[0247] U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C do osamnaest meseci, izgled rekonstituisanog rastvora je okarakterisan dominantnim hromatografskim vrhovima uzorka koji je odgovarao kontroli koja je bila ADC1-MMAF koji su prethodno okarakterisani. Prema tome, hromatografski vrh je ostao relativno nepromenjen tokom osamnaest meseci na 5°C.
Čistoća rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0248] Elektroforeza kapilarnog gela (CE-SDS-R) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C do 18 meseci kako bi se odredila čistoća rastvora. U početnoj vremenskoj tački, procenat čistoće je bio 97,4%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, procenat čistoće je bio 97,6%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, procenat čistoće je bio 96,9%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, procenat čistoće je bio 97,1%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom devet meseci, procenat čistoće je bio 96,7%. Posle rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom dvanaest meseci, procenat čistoće je bio 97,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom osamnaest meseci, procenat čistoće je bio 97,3%. Prema tome, čistoća rekonstituisanog rastvora nije se značajno promenila između početne vremenske tačke i do osamnaest meseci nakon rekonstitucije.
Odnos leka prema antitelima rastvora nije promenjen posle dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0249] Hromatografija hidrofobne interakcije (HIC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio odnos leka i antitela (DAR) tokom perioda od osamnaest meseci. HIC se koristi za razdvajanje proteina na osnovu relativne hidrofobnosti. HIC postupak je mera hidrofobnosti ADC1-MMAF. Vezane komponente su eluirane sa liganda u redosledu rastuće hidrofobnosti korišćenjem gradijenta da se smanji koncentracija soli u mobilnoj fazi. Za ADC1-MMAF, prvi vrh eluiran iz kolone je nekonjugovano antitelo. Preostali vrhovi su predstavljali sve veći broj molekula leka-veznik po jednom antitelu. Prema tome, broj lekveznika po antitelu je određen vremenom zadržavanja vrha i relativnom površinom vrha. Ovaj postupak je takođe korišćen u Primerima 4 do 8. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C do osamnaest meseci, odnos leka i antitela (DAR) je izmeren kao 4,1-4,2 za sve rekonstituisane rastvore.
Procenat nekonjugovanog antitela u rastvoru nepromenjen posle dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0250] Rekonstituisani rastvor je takođe analiziran kako bi se odredio procenat nekonjugovanog antitela za ADC1-MMAF koristeći HIC postupak opisan gore za određivanje DAR (i takođe korišćen za Primere 4 do 8). U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, procenat nije bio veći od 3,9. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom devet meseci, procenat nije bio veći od 4,0. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom dvanaest meseci, procenat nije bio veći od 4,0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom osamnaest meseci, procenat nije bio veći od 4,0. Tako je procenat u svakom trenutku bio sličan.
Procenat ugašenog lek veznika u rastvoru nije promenjen dugotrajnim skladištenjem na 5°C
[0251] Hromatografija obrnute faze (RP-HPLC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio procenat ugašenog lek veznika. RP-HPLC je razdvajanje molekula zasnovano na njihovoj interakciji sa hidrofobnom matricom koja se u velikoj meri zasniva na njihovom polaritetu. Ovaj postupak određuje količinu ugašenog lek-veznika i ukupne nečistoće u rastvoru. ADC1-MMAF je uklonjen iz uzorka taloženjem sa metanolom, i zatim centrifugiranjem. Analiza supernatanta za ugašeni lek-veznik i ukupne nečistoće je izvedena pomoću RP-HPLC koristeći C-18 kolonu sa UV detekcijom na 214 nm. Ovaj postupak je takođe korišćen u Primerima 4 do 8.
[0252] U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, procenat nije bio veći od 0,006. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom devet meseci, procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstituisanja nakon 12 meseci skladištenja na 5°C, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom osamnaest meseci, procenat nije bio veći od 0,005. Prema tome, procenat u svim vremenskim tačkama bio je sličan za procenat ugašenog lek veznika.
Ukupne nečistoće u rastvoru nisu promenjene nakon dugotrajnog skladištenja na 5°C [0253] Rekonstituisani rastvor je takođe analiziran kako bi se odredio procenat ukupnih nečistoća upotrebom RP-HPLC, koristeći postupak opisan gore u odnosu na procenat ugušenog veznika (koji se takođe koristi za Primere 4 do 8). U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, procenat nije bio veći od 0,006. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom devet meseci, procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstituisanja nakon 12 meseci skladištenja na 5°C, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C tokom osamnaest meseci, procenat nije bio veći od 0,005. Tako je procenat u svim vremenskim tačkama bio sličan za ukupne nečistoće.
Kontaminacija čestica rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C [0254] Kontaminacija čestica je određena određivanjem sub-vidljivih čestica. Kriterijumi prihvatljivosti su ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 10 µm po kontejneru, sa ne više od 6000 (USP (US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 33. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 33. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 25. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 73. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom dvanaest meseci, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 20. Tako su sve vremenske tačke ispunile kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 10 µm.
[0255] Kriterijumi prihvatljivosti su takođe ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 25 µm po kontejneru, sa NMT od 600 (USP (US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 2. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 2. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom šest meseci, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 10 Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom dvanaest meseci, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 3. Tako su sve vremenske tačke zadovoljile kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 25 µm.
Sadržaj vode u rastvoru nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0256] Sadržaj vode je procenjen Karl-Fischer titracijom. Karl-Fischer titracija koristi kulometrijsku ili volumetrijsku titraciju kako bi se odredili tragovi vode u uzorku, koji je prikazan kao procenat. U početnoj vremenskoj tački, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 2,0%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,7%. Nakon rekonstituisanja nakon 6 meseci skladištenja na 5°C, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,7%. Nakon rekonstituisanja posle 12 meseci skladištenja na 5°C, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,8%. Tako, u početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog, tri, šest i dvanaest meseci, sadržaj vode u rekonstituisanom rastvoru je bio zanemarljiv.
pH rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0257] pH rekonstituisanog rastvora je određen u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog, tri, šest i dvanaest meseci. U početnoj vremenskoj tački, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 6,0. Nakon skladištenja na 5°C tokom tri meseca, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Nakon 6 meseci skladištenja na 5°C, pH vrednost rekonstituisanog rastvora je 5,9. Nakon 12 meseci skladištenja na 5°C, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9.
Osmolalnost rastvora nije bila pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0258] Osmolalnost rekonstituisanog rastvora određena je u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom jednog meseca merenjem srednje vrednosti miliosmola rastvorene materije po kilogramu rastvarača (mOsmol/kg). U početnoj vremenskoj tački, osmolalnost je bila 235 mOsmol/kg. Nakon jednog meseca, osmolalnost je bila 251 mOsmol/kg.
Primer 4: Stabilnost ADC 1-MMAF u liofilizovanoj formulaciji na 25°C
[0259] Sledeći testovi su izvedeni nakon rekonstitucije sa SWFI u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja liofilizata za jedan, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti):
Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0260] Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora je vizuelno procenjen da se potvrdi da je liofilizat praktično bez vidljivih stranih čestica i bez vlage u ambalažnom materijalu. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), izgled liofilizata je u skladu sa gore navedenim kriterijumima. Nakon rekonstituisanja, rekonstituisani rastvor je bio bezbojni do blago žuti rastvor, praktično bez vidljivih čestičnih materija. Tako, u početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), izgled rekonstituisanog rastvora je bio da je rastvor bezbojan do blago žutog rastvora, praktično slobodan od vidljivih čestičnih materija.
Boja rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0261] Boja rastvora (vizuelna) je procenjivana korišćenjem skale plavo/žuto (Blue/Yellow BY) gde su uzorci testirani prema referentnom rastvoru i prijavljene su vrednosti. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), svi rekonstituisani rastvori su imali merenja na BY skali manja ili jednaka 7. Dakle, skladištenje nije uticalo na boju rastvora.
Jasnoća i opalescencija rastvora nisu pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C [0262] Procenjene su jasnoća i opalescencija rekonstituisanog rastvora. Kriterijumi prihvatljivosti rekonstituisanog rastvora su ispunjeni ako rekonstituisani rastvor nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po European Pharmacopeia, ph. Eur.). U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), izgled rekonstituisanog rastvora nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po European Pharmacopeia, ph. Eur.) (< = RSII).
Biološka aktivnost rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0263] Za ispitivanje biološke aktivnosti (%) rekonstituisanog rastvora u poređenju sa kontrolom ADC1-MMAF, za koju je ranije potvrđeno da ima citotoksičnu aktivnost (kontrola sa 100% aktivnosti), korišćena je analiza citotoksičnosti pomoću ćelijske linije ljudskog epidermoidnog raka. U početnoj vremenskoj tački relativna biološka aktivnost bila je 109%. Nakon početnog vremena skladištenja na 25°C (60% relativne vlažnosti) u toku jednog meseca, relativna biološka aktivnost je bila 113% Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C/60% relativne vlažnosti tokom tri meseca relativna biološka aktivnost je bila 103% Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C/60% relativne vlažnosti tokom šest meseci, relativna biološka aktivnost je bila 109%.
Veličina molekula i/ili molekularnih kompleksa nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0264] Hromatograf sa isključivanjem veličine je izveden pomoću tečne hromatografije visokih performansi i isključivanja veličine (SE-HPLC). Glavni vrh (%) je meren, pored vrsta visoke molekularne mase (%) i vrsta niske molekularne mase (%). U početnoj vremenskoj tački, glavni vrh je bio 98,9%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C (60% relativne vlažnosti) jedan mesec, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 1,0%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C (60% relativne vlažnosti) tri meseca, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 1,0%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C (60% relativne vlažnosti) tokom šest meseci, glavni vrh je bio 98,9%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Prema tome, bilo je malo ili nimalo promena u % glavnog vrha i vrstama
1
sa visokom i niskom molekularnom masom između početnih, jednomesečnih, tromesečnih i šestomesečnih merenja.
Hromatografski vrh rastvora nije promenjen dugotrajnim skladištenjem na 25°C [0265] Hromatografija sa izmenom katjona (CEX) je izvedena pomoću tečne hromatografije visoke performanse (CEX-HPLC). U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C/60% relativne vlažnosti tokom jednog meseca, tri meseca i šest meseci, izgled rekonstituisanog rastvora je okarakterisan dominantnim hromatografskim vrhovima uzorka koji je odgovarao tome. referentnog standarda.
Čistoća rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0266] Elektroforeza kapilarnog gela (CE-SDS-R) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti). U početnoj vremenskoj tački, procenat čistoće je bio 97,4%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca, procenat čistoće je bio 97,4%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca, procenat čistoće je bio 96,9%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci, procenat čistoće je bio 97,1%. Prema tome, čistoća rekonstituisanog rastvora nije se značajno promenila između početne vremenske tačke, ni nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti).
Odnos leka prema antitelima rastvora nije promenjen posle dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0267] Hromatografija hidrofobne interakcije (HIC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru. U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), DAR je meren kao 4,2 za sve rekonstituisane rastvore.
Procenat nekonjugovanog antitela u rastvoru nepromenjen posle dugotrajnog skladištenja [0268] Rekonstituisani rastvor je analiziran kako bi se odredio procenat nekonjugovanog antitela. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C (60% relativne
2
vlažnosti), procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 3,9.
Procenat ugašenog lek veznika u rastvoru nije promenjen dugotrajnim skladištenjem na 25°C
[0269] Hromatografija obrnute faze (RP-HPLC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio procenat ugašenog veznika. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,006. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Prema tome, procenat u svim vremenskim tačkama bio je sličan za procenat ugašenog lek veznika.
Ukupne nečistoće u rastvoru nisu promenjene nakon dugotrajnog skladištenja na 25°C [0270] Rekonstituisani rastvor je analiziran kako bi se odredio procenat ukupnih nečistoća. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,006. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Tako je procenat u svim vremenskim tačkama bio sličan za ukupne nečistoće.
Kontaminacija čestica rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C [0271] Kontaminacija čestica je određena određivanjem sub-vidljivih čestica. Kriterijumi prihvatljivosti su ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 10 µm po kontejneru, sa ne više od 6000 (USP (US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm je bio 33. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 18. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 25. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 50. Prema tome, sve vremenske tačke zadovoljavaju kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 10 µm.
Kriterijumi prihvatljivosti su takođe zadovoljeni određivanjem broja čestica većih od 25 µm po kontejneru, sa ne više od 600. U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po posudi veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 2. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 2. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 2. Tako su sve vremenske tačke ispunile kriterijume prihvatljivosti za broj čestice po kontejneru veće od 25 µm.
Sadržaj vode u rastvoru nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0272] Sadržaj vode je procenjen Karl-Fischer titracijom. U početnoj vremenskoj tački, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 2,0%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na temperaturi od 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat vode u rekonstituisanom rastvoru nije se mogao detektovati. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat vode u rekonstituisanom rastvoru je bio 0,8%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti), procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,9%. Tako, u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci, sadržaj vode u rekonstituisanom rastvoru je bio zanemarljiv.
pH rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 25°C
[0273] pH rekonstituisanog rastvora je određen u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri i šest meseci na 25°C (60% relativne vlažnosti). U početnoj vremenskoj tački, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 6,0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti), pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C (relativna vlažnost od 60%), pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9.
Primer 5: Stabilnost ADC 1-MMAF liofilizovane formulacije na 40°C
[0274] Sledeći testovi su izvedeni nakon rekonstitucije liofilizovane formulacije ADC1-MMAF opisane u Primeru 2, sa SWFI u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja liofilizata za jedan, tri i šest meseci na 40°C/(75% relativna vlažnost):
4
Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C
[0275] Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora je vizuelno procenjen da se potvrdi da je liofilizat praktično bez vidljivih stranih čestica i bez vlage u ambalažnom materijalu. U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), izgled liofilizata je u skladu sa gore navedenim kriterijumima. Nakon rekonstituisanja, rekonstituisani rastvor je bio bezbojni do blago žuti rastvor, praktično bez vidljivih čestičnih materija. U početnom vremenskom trenutku, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), izgled rekonstituisanog rastvora je bezbojan do blago žuti rastvor, praktično bez vidljivih čestičnih materija.
Boja rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C
[0276] Boja rastvora (vizuelna) je procenjena korišćenjem BY skale, gde su uzorci testirani u odnosu na referentni rastvor i vrednosti su prijavljene. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), svi rekonstituisani rastvori su imali merenja na BY skali manja ili jednaka 7. Dakle, skladištenje nije uticalo na boju rastvora.
Jasnoća i opalescencija rastvora nisu pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C [0277] Ocenjivana je jasnoća i opalescencija rekonstituisanog rastvora. Kriterijumi prihvatljivosti rekonstituisanog rastvora su ispunjeni ako rekonstituisani rastvor nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po European Pharmacopeia, Ph. Eur. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), izgled rekonstituisanog rastvora nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po European Pharmacopeia, Ph. Eur.) (< = RSII).
Biološka aktivnost rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C [0278] Za ispitivanje biološke aktivnosti (%) rekonstituisanog rastvora u poređenju sa kontrolom ADC1-MMAF, za koju je ranije potvrđeno da ima citotoksičnu aktivnost (kontrola sa 100% aktivnosti), korišćena je analiza citotoksičnosti pomoću ćelijske linije ljudskog epidermoidnog raka. U početnoj vremenskoj tački biološka aktivnost je bila 109%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C (75% relativne vlažnosti) tokom jednog meseca, relativna biološka aktivnost je bila 117%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C (75% relativne vlažnosti) tokom tri meseca, relativna biološka aktivnost je bila 113%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C (75% relativne vlažnosti) tokom šest meseci, relativna biološka aktivnost je bila 110%. Prema tome, procenat biološke aktivnosti u svim vremenskim tačkama imao je biološku aktivnost preko 100%.
Veličina molekula i/ili molekularnih kompleksa nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C
[0279] Hromatograf sa isključivanjem veličine je izveden pomoću tečne hromatografije visokih performansi i isključivanja veličine (SE-HPLC). Glavni vrh (%) je meren pored vrsta visoke molekularne mase (%) i vrsta niske molekularne mase (%). U početnoj vremenskoj tački, glavni vrh je bio 98,9%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,9%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C (75% relativne vlažnosti) jedan mesec, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 1,0%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C (75% relativne vlažnosti) tokom tri meseca, glavni vrh je bio 98,7%. Vrste visoke molekularne mase bile su 1,1%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C (75% relativne vlažnosti) šest meseci, glavni vrh je bio 98,8%. Vrste visoke molekularne mase bile su 1,0%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Prema tome, bilo je malo ili nimalo promena u % glavnog vrha i vrstama sa visokom i niskom molekularnom masom između početnih, jednomesečnih, tromesečnih i šestomesečnih merenja.
Hromatografski vrh rastvora nije promenjen dugotrajnim skladištenjem na 40°C [0280] Hromatografija sa izmenom katjona (CEX) je izvedena pomoću tečne hromatografije visoke performanse (CEX-HPLC). U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C (75% relativne vlažnosti) tokom jednog meseca, tri meseca i šest meseci izgled rekonstituisanog rastvora je karakterisao dominantni hromatografski vrh uzorka koji odgovara referentnom standardu.
Čistoća rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja
[0281] Elektroforeza kapilarnog gela (CE-SDS-R) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti) i korišćena je za određivanje procenta čistoće rastvora. U početnoj vremenskoj tački, procenat čistoće je bio 97,4%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca, procenat čistoće je bio 97,5%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca, procenat čistoće je bio 96,9%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci, procenat čistoće je bio 97,2%. Prema tome, čistoća rekonstituisanog rastvora nije se značajno promenila između početne vremenske tačke, ni nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti).
Odnos leka prema antitelima rastvora nije promenjen posle dugotrajnog skladištenja na 40°C
[0282] Hromatografija hidrofobne interakcije (HIC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstituisanja posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), DAR je meren kao 4,2 za sve rekonstituisane rastvore.
Procenat nekonjugovanog antitela u rastvoru nije promenjen nakon dugotrajnog skladištenja na 40°C
[0283] U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 4,1. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 3,9. Tako je procenat u svakom trenutku bio sličan.
Procenat ugašenog lek veznika u rastvoru nije promenjen dugotrajnim skladištenjem na 40°C
[0284] Hromatografija obrnute faze (RP-HPLC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio procenat ugašenog lek veznika. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,006. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Prema tome, procenat u svim vremenskim tačkama bio je sličan za procenat ugašenog lek veznika.
Ukupne nečistoće u rastvoru nisu promenjene nakon dugotrajnog skladištenja na 40°C [0285] Rekonstituisani rastvor je analiziran kako bi se odredio procenat ukupnih nečistoća pomoću RP-HPLC. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 0,007. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,006. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat nije bio veći od 0,005. Tako je procenat u svim vremenskim tačkama bio sličan za ukupne nečistoće.
Kontaminacija čestica rastvoru nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C [0286] Kontaminacija čestica je određena određivanjem sub-vidljivih čestica. Kriterijumi prihvatljivosti su ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 10 µm po kontejneru, sa ne više od 6000 (USP (US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 33 µm bio je 5. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 10. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 12. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 10 µm je bio 32. Prema tome, sve vremenske tačke ispunile su kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 10 µm. Kriterijumi prihvatljivosti su takođe zadovoljeni određivanjem broja čestica većih od 25 µm po kontejneru, uz ne više od 600. U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po posudi veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), broj čestica po kontejneru bio veći od 25 µm bio je 2. Tako su sve vremenske tačke ispunile kriterijume prihvatljivosti za broj čestice po kontejneru veće od 25 µm.
Sadržaj vode u rastvoru nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C
[0287] Sadržaj vode je procenjen Karl-Fischer titracijom. Karl-Fischer titracija koristi kulometrijsku ili volumetrijsku titraciju kako bi se odredili tragovi vode u uzorku, koji je prikazan kao procenat. U početnoj vremenskoj tački, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 2,0%. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat vode u rekonstituisanom rastvoru nije se mogao detektovati. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,9%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), procenat vode u rekonstituisanom rastvoru je bio 1,0%. Tako, u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci, sadržaj vode u rekonstituisanom rastvoru je bio zanemarljiv.
pH rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 40°C
[0288] pH rekonstituisanog rastvora je određen u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja jedan, tri i šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti). U početnoj vremenskoj tački, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 6,0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C (75% relativne vlažnosti), pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C (75% relativne vlažnosti), pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9.
[0289] Prečišćavanje ADC 1-MMAF je izvedeno u skladu sa ovde opisanim postupkom serijskog prečišćavanja i opisano u SAD Provizorna prijava br.61/792834 i SAD prijava br.
14/210,602, podnetoj 14. marta 2014. Prosečan DAR za ADC mešavine koje sadrže ADC1-MMAFp opisan u Primerima 6 do 8 bio je oko 3,0.
[0290] Eksperimenti stabilnosti opisani u Primerima 6 do 8 izvedeni su nakon rekonstitucije sa SWFI u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja liofilizata koji sadrži ADC1-MMAPp tri meseca na 5°C, i jedan i tri meseca na oba 25°C (60% relativne vlažnosti) i 40°C/(75% relativne vlažnosti).
Primer 6: Stabilnost prečišćenog ADC 1-MMAF (ADC1-MMAFp) u liofilizovanoj formulaciji na 5°C
[0291] Naredni testovi su izvedeni nakon rekonstituisanja liofilizovane formulacije ADC1-MMAFp opisane u Primeru 2, sa SWFI u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije formulacije nakon skladištenja liofilizata do tri meseca na 5°C.
Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0292] Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora je vizuelno procenjen kako bi se potvrdilo da je liofilizat praktično bez vidljivih stranih čestica i bez vlage u ambalažnom materijalu. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, izgled liofilizata je u skladu sa gore navedenim kriterijumima. Posle rekonstituisanja, rekonstituisani rastvor je bio bezbojni do blago žuti rastvor i praktično je bio bez vidljivih čestičnih materija.
Boja rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0293] Boja rekonstituisanog rastvora (vizuelna) je procenjena korišćenjem plavo/žute skale (BY skala), gde su uzorci testirani u odnosu na referentni rastvor i prijavljene su vrednosti. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, svi rekonstituisani rastvori imali su merenja BY skale manja ili jednaka 7. Dakle, skladištenje formulacije ADC1-MMAFp nije uticalo na boju rastvor.
Jasnoća i opalescencija rastvora nisu pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C [0294] Procenjene su jasnoća i opalescencija rekonstituisanog rastvora. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, izgled rekonstituisanog rastvora nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po European Pharmacopeia, ph. Eur) (< = RSII).
Biološka aktivnost rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0295] Za ispitivanje biološke aktivnosti (%) rekonstituisanog rastvora u poređenju sa kontrolom ADC1-MMAF, za koju je ranije potvrđeno da ima citotoksičnu aktivnost (kontrola sa 100% aktivnosti), korišćena je analiza citotoksičnosti pomoću ćelijske linije ljudskog epidermoidnog raka. U početnoj vremenskoj tački relativna biološka aktivnost bila je 102%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C u liofilizovanom obliku tokom tri meseca, relativna biološka aktivnost je bila 98%.
Veličina molekula i/ili molekularnih kompleksa nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0296] Hromatografija isključivanja po veličini rekonstituisanog rastvora je izvedena korišćenjem tečne hromatografije sa visokim performansama (SE-HPLC). Glavni vrh (%) je meren pored vrsta visoke molekularne mase (%) i vrsta niske molekularne mase (%). U početnoj vremenskoj tački, glavni vrh je bio 99,5%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,2%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C u liofilizovanom obliku tokom tri meseca, glavni vrh je bio 99,6%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,2%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2% u početku i kada su rekonstituisani posle tri meseca skladištenja u liofilizovanom obliku.
[0297] Tako su sve vremenske tačke pokazale malo ili nimalo promene u % glavnog vrha i visokim i niskim molekularnim težinama među merenjima u početnim i tromesečnim vremenskim tačkama.
Hromatografski vrh rastvora nije promenjen dugotrajnim skladištenjem na 5°C [0298] Hromatografija katjonske izmene (CEX) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru korišćenjem tečne hromatografije visokih performansi (CEX-HPLC). U hromatografiji katjonske izmene, pozitivno naelektrisani molekuli su privučeni negativno naelektrisanom čvrstom podlogom. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstituisanja posle skladištenja na 5°C u liofilizovanom obliku tokom tri meseca, izgled rekonstituisanog rastvora je karakterisan dominantnim hromatografskim vrhovima uzorka koji je odgovarao kontroli koja je bila ADC1- MMAF koji je prethodno okarakterisan. Prema tome, hromatografski vrh je ostao relativno nepromenjen tokom tri meseca na 5°C.
Čistoća rastvora nije pod uticajem dugotrajnog skladištenja na 5°C
[0299] Elektroforeza kapilarnog gela (CE-SDS-R) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca kako bi se odredila čistoća rastvora. U početnoj vremenskoj tački, procenat čistoće je bio 97,4%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C u liofilizovanom obliku tokom tri meseca, procent čistoće je bio 97,6%. Tako, čistoća rekonstituisanog rastvora nije se značajno promenila između početne vremenske tačke i tri meseca skladištenja.
Odnos leka prema antitelima (DAR) ADC1-MMAF ostao je nepromenjen nakon skladištenja na 5°C
1
[0300] Hromatografija hidrofobnih interakcija (HIC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio odnos leka i antitela (DAR) tokom perioda skladištenja od tri meseca. HIC se koristi za razdvajanje proteina na osnovu relativne hidrofobnosti. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja u liofilizovanom obliku na 5°C tokom tri meseca, prosečan odnos leka prema antitelima (DAR) za ADC1-MMAF je meren kao 3,0 i 2,9, respektivno.
Procenat nekonjugovanog antitela 1 u rastvoru nije promenjen nakon skladištenja na 5°C [0301] Rekonstituisani rastvor je takođe analiziran kako bi se odredio procenat nekonjugovanog antitela za ADC1-MMAF. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 7,6. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C u liofilizovanom obliku tokom tri meseca, procenat nije bio veći od 7,6. Prema tome, procenat nekonjugovanog antitela 1 je ostao isti tokom perioda od tri meseca.
Procenat ugašenog veznika leka u rastvoru nije promenjen skladištenjem na 5°C [0302] Hromatografija obrnute faze (RP-HPLC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio procenat ugašenog lek veznika. Procenat ugašenog lek veznika za lekove nije detektovan ni u početku ni nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca u liofilizovanom obliku (praktična granica detektovanja je bila 0,001%).
Ukupne nečistoće u rastvoru nisu promenjene nakon skladištenja na 5°C
[0303] Rekonstituisani rastvor je takođe analiziran kako bi se odredio procenat ukupnih nečistoća pomoću RP-HPLC. Procenat ukupnih nečistoća nije detektovan ni u početku ni nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca u liofilizovanom obliku (praktična granica detektovanja je bila 0,001%; praktična granica kvantifikacije bila je 0,003%).
Kontaminacija čestica rastvora nije pod uticajem skladištenja na 5°C
[0304] Kontaminacija čestica je procenjena određivanjem sub-vidljivih čestica korišćenjem dva različita kriterijuma prihvatljivosti.
[0305] Kriterijumi prihvatljivosti su ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 10 µm po kontejneru, sa ne više od 6000 (USP (US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 13. Nakon
2
rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca u liofilizovanom obliku, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 20. Prema tome, obe vremenske tačke zadovoljavaju kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 10 µm.
[0306] Kriterijumi prihvatljivosti su takođe ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 25 µm po kontejneru, sa NMT od 600 (USP (US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 0. Prema tome, obe vremenske tačke zadovoljavaju kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 25 µm.
Sadržaj vode u rastvora nije pod uticajem skladištenja na 5°C
[0307] Sadržaj vode je procenjen Karl-Fischer titracijom. Karl-Fischer titracija koristi kulometrijsku ili volumetrijsku titraciju kako bi se odredili tragovi vode u uzorku, koji je prikazan kao procenat. U početnoj vremenskoj tački, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru je bio 0,8%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca u liofilizovanom obliku, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,8%. Tako, u početnom vremenskom trenutku i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca, sadržaj vode u rekonstituisanom rastvoru je bio zanemarljiv.
pH rastvora nije pod uticajem skladištenja na 5°C
[0308] pH rekonstituisanog rastvora je određen u početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 5°C tokom tri meseca. U početnoj vremenskoj tački, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Nakon skladištenja na 5°C tokom tri meseca, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Prema tome, skladištenje ADC1-MMAFp sastava tokom tri meseca na 5°C nije uticalo na pH.
Primer 7: Stabilnost ADC 1-MMAFp u liofilizovanoj formulaciji na 25°C
[0309] Sledeći eksperimenti su izvedeni nakon rekonstitucije liofilizovane formulacije ADC1-MMAPp (pogledati Primer 2) sa SWFI u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja liofilizata za jedan i tri meseca na 25°C (60% relativne vlažnosti).
Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25° C
[0310] Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora je vizuelno procenjen da se potvrdi da je liofilizat praktično bez vidljivih stranih čestica i bez vlage u ambalažnom materijalu. U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 25°C, izgled liofilizata je u skladu sa gore navedenim kriterijumima. Nakon rekonstituisanja, rekonstituisani rastvor je bio bezbojni do blago žuti rastvor, praktično bez vidljivih čestičnih materija. Tako, u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 25°C, izgled rekonstituisanog rastvora je bio bezbojan do blago žuti rastvor, i praktično bez vidljivih čestičnih materija.
Boja rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25°C
[0311] Boja rastvora (vizuelna) je procenjivana korišćenjem plavo/žuto skale (BY) gde su uzorci testirani prema referentnom rastvoru i prijavljene su vrednosti. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 25°C, svi rekonstituisani rastvori su imali merenja na BY skali manja ili jednaka 7. Dakle, skladištenje nije uticalo na boju rastvora.
Jasnoća i opalescencija rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25°C
[0312] Procenjene su jasnoća i opalescencija rekonstituisanog rastvora. Kriterijumi prihvatljivosti rekonstituisanog rastvora su ispunjeni ako rekonstituisani rastvor nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po Evropskoj farmakopeji, Ph. Eur.) U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 25°C, izgled rekonstituisanog rastvora nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po Evropskoj farmakopeji, Ph. Eur.) (< = RSII).
Biološka aktivnost rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25°C
[0313] Za ispitivanje biološke aktivnosti (%) rekonstituisanog rastvora u poređenju sa kontrolom ADC1-MMAF, za koju je ranije potvrđeno da ima citotoksičnu aktivnost (kontrola sa 100% aktivnosti), korišćena je analiza citotoksičnosti pomoću ćelijske linije ljudskog epidermoidnog raka. U početnoj vremenskoj tački, relativna biološka aktivnost bila je 102% Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C u toku jednog meseca, relativna biološka aktivnost je bila 101%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C tokom tri meseca, relativna biološka aktivnost bila je 97%.
Veličina molekula i/ili molekularnih kompleksa nije pod uticajem skladištenja na 25°C
4
[0314] Hromatograf sa isključivanjem veličine je izveden pomoću tečne hromatografije visokih performansi i isključivanja veličine (SE-HPLC). Glavni vrh (%) je meren, pored vrsta visoke molekularne mase (%) i vrsta niske molekularne mase (%). U početnoj vremenskoj tački, glavni vrh je bio 99,5%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,2%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C tokom jednog meseca, glavni vrh je bio 99,5%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,3%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C tokom tri meseca, glavni vrh je bio 99,6%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,3%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Prema tome, bilo je malo ili nimalo promena u % glavnog vrha i vrstama sa visokom i niskom molekularnom masom između početnih, jednomesečnih i tromesečnih merenja.
Hromatografski vrh rastvora nije promenjen skladištenjem na 25°C
[0315] Hromatografija sa izmenom katjona (CEX) je izvedena pomoću tečne hromatografije visoke performanse (CEX-HPLC). U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 25°C tokom jednog meseca i tri meseca, izgled rekonstituisanog rastvora je okarakterisan dominantnim hromatografskim vrhovima uzorka koji je odgovarao referentnom standardu.
Čistoća rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25°C
[0316] Elektroforeza kapilarnog gela (CE-SDS-R) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri na 25°C. U početnoj vremenskoj tački, procenat čistoće je bio 97,4%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca, procenat čistoće je bio 97,5%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca, procenat čistoće je bio 97,6%. Prema tome, čistoća rekonstituisanog rastvora nije se značajno promenila između početne vremenske tačke i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 25°C.
Odnos leka prema antitelima (DAR) ADC1-MMAFp u rastvoru ostao je nepromenjen nakon skladištenja na 25°C
[0317] Hromatografija hidrofobne interakcije (HIC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru. U početnoj vremenskoj tački, DAR je meren kao 3,0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C, DAR je meren kao 3,0. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C, DAR je meren kao 2,9. Prema tome, DAR ADC1MMAPp se nije značajno promenio između početne vremenske tačke i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 25°C.
Procenat nekonjugovanog antitela 1 u rastvoru nije promenjen nakon skladištenja na 25°C [0318] Rekonstituisani rastvor je analiziran kako bi se odredio procenat nekonjugovanog antitela 1. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije bio veći od 7,6. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C, procenat nije bio veći od 7,6. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C, procenat nije bio veći od 7,6.
Procenat ugašenog lek veznika u rastvoru nije promenjen skladištenjem na 25°C [0319] Hromatografija obrnute faze (RP-HPLC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio procenat ugašenog veznika. U početnoj vremenskoj tački, vremenskoj tački nakon jednog meseca, i vremenskoj tački nakon tri meseca, procenat ugašenog veznika nije bio detektovan (praktična granica detektovanja je bila 0,001%; praktična granica kvantifikacije bila je 0,003%).
Ukupne nečistoće u rastvoru nisu promenjene nakon skladištenja na 25°C
[0320] Rekonstituisani rastvor je analiziran kako bi se odredio procenat ukupnih nečistoća. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije detektovan. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C, procenat nečistoća bio je manji od 0,003. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C, procenat nije detektovan (praktična granica detektovanja je 0,001%; praktična granica kvantifikacije je 0,003%). Tako je procenat u svim vremenskim tačkama bio sličan za ukupne nečistoće.
Kontaminacija čestica rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25°C
[0321] Kontaminacija čestica je određena određivanjem sub-vidljivih čestica prema dva kriterijuma prihvatljivosti.
[0322] Kriterijumi prihvatljivosti su ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 10 µm po kontejneru, sa ne više od 6000 (USP (US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio 13. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 12. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm je bio 17. Prema tome, sve vremenske tačke su ispunile kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 10 µm. Kriterijumi prihvatljivosti su takođe zadovoljeni određivanjem broja čestica većih od 25 µm po kontejneru, uz ne više od 600. U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 7. Prema tome, obe vremenske tačke zadovoljavaju kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 25 µm.
Sadržaj vode u rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25°C
[0323] Sadržaj vode je procenjen Karl-Fischer titracijom. U početnoj vremenskoj tački, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru je bio 0,8%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 25°C, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,8%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,8%. Tako, u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca, sadržaj vode u rekonstituisanom rastvoru je bio zanemarljiv.
pH rastvora nije pod uticajem skladištenja na 25°C
[0324] pH rekonstituisanog rastvora je određen u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 25°C. U početnoj vremenskoj tački, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja tokom tri meseca na 25°C, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja tokom šest meseci na 25°C, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9.
Primer 8: Stabilnost ADC 1-MMAFp liofilizovane formulacije na 40°C
[0325] Sledeći testovi su izvedeni nakon rekonstitucije liofilizovane formulacije ADC1-MMAFp opisane u Primeru 2, sa SWFI u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja liofilizata za jedan i tri meseca na 40°C/(75% relativne vlažnosti).
Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C [0326] Izgled liofilizata i rekonstituisanog rastvora je vizuelno procenjen da se potvrdi da je liofilizat praktično bez vidljivih stranih čestica i bez vlage u ambalažnom materijalu. U početnoj vremenskoj tački i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 40°C, izgled liofilizata je u skladu sa gore navedenim kriterijumima. Nakon rekonstituisanja, rekonstituisani rastvor je bio bezbojni do blago žuti rastvor, praktično bez vidljivih čestičnih materija. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 40°C, izgled rekonstituisanog rastvora je bio da je rastvor bio bezbojan do blago žuti rastvor, praktično bez vidljivih čestičnih materija.
Boja rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C
[0327] Boja rastvora (vizuelna) je procenjena korišćenjem BY skale, gde su uzorci testirani u odnosu na referentni rastvor i vrednosti su prijavljene. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 40°C, svi rekonstituisani rastvori su imali merenja na BY skali manja ili jednaka 7. Dakle, skladištenje nije uticalo na boju rastvora.
Jasnoća i opalescencija rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C
[0328] Procenjene su jasnoća i opalescencija rekonstituisanog rastvora. Kriterijumi prihvatljivosti rekonstituisanog rastvora su ispunjeni ako rekonstituisani rastvor nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po Evropskoj farmakopeji, Ph. Eur. U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 40°C, izgled rekonstituisanog rastvora nije bio više opalescentan od referentne suspenzije IV (po Evropskoj farmakopeji, Ph. Eur.) (< = RSII).
Biološka aktivnost rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C
[0329] Za ispitivanje biološke aktivnosti (%) rekonstituisanog rastvora u poređenju sa kontrolom ADC1-MMAF, za koju je ranije potvrđeno da ima citotoksičnu aktivnost (kontrola sa 100% aktivnosti), korišćena je analiza citotoksičnosti pomoću ćelijske linije ljudskog epidermoidnog raka. U početnoj vremenskoj tački biološka aktivnost je bila 102%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C tokom jednog meseca, relativna biološka aktivnost je bila 101%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C tokom tri meseca, relativna biološka aktivnost je bila 105%. Prema tome, procenat biološke aktivnosti u svim vremenskim tačkama ima biološku aktivnost preko 100% u formulaciji iz Primera 2.
Veličina molekula i molekularnih kompleksa nije pod uticajem skladištenja 40°C
[0330] Hromatograf sa isključivanjem veličine je izveden pomoću tečne hromatografije visokih performansi i isključivanja veličine (SE-HPLC). Glavni vrh (%) je meren pored vrsta visoke molekularne mase (%) i vrsta niske molekularne mase (%). U početnoj vremenskoj tački, glavni vrh je bio 99,5%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,2%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C tokom jednog meseca, glavni vrh je bio 99,5%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,3%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C tokom tri meseca, glavni vrh je bio 99,5%. Vrste visoke molekularne mase bile su 0,3%, i vrste niske molekularne mase bile su 0,2%. Prema tome, bilo je malo ili nimalo promena u % glavnog vrha i vrstama sa visokom i niskom molekularnom masom između početnih, jednomesečnih i tromesečnih merenja.
Hromatografski vrh rastvora nije promenjen skladištenjem na 40°C
[0331] Hromatografija sa izmenom katjona (CEX) je izvedena pomoću tečne hromatografije visoke performanse (CEX-HPLC). U početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja na 40°C tokom jednog meseca i tri meseca, izgled rekonstituisanog rastvora je okarakterisan dominantnim hromatografskim vrhovima uzorka koji odgovara referentnom standardu.
Čistoća rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C
[0332] Elektroforeza kapilarnog gela (CE-SDS-R) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog, tri i šest meseci na 40°C i korišćena je za određivanje procenta čistoće rastvora. U početnoj vremenskoj tački, procenat čistoće je bio 97,4%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca, procenat čistoće je bio 97,5%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca, procenat čistoće je bio 97,6%. Prema tome, čistoća rekonstituisanog rastvora nije se značajno promenila između početne vremenske tačke, ni nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 40°C.
Odnos leka prema antitelima (DAR) ADC1-MMAFp nije promenjen nakon skladištenja na 40°C
[0333] Hromatografija hidrofobne interakcije (HIC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru. U početnoj vremenskoj tački, DAR je meren kao 3,0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C, DAR je meren kao 3,0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, DAR je mereno kao 2,9. Prema tome, DAR nije se značajno promenio između početne vremenske tačke i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 40°C.
Procenat nekonjugovanog antitela 1 u rastvoru nije promenjen nakon skladištenja na 40°C [0334] U početnoj vremenskoj tački, procenat nekonjugovanog antitela 1 nije bio veći od 7,6. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C, procenat nekonjugovanog antitela 1 nije bio veći od 7,6. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, procenat nekonjugovanog antitela 1 nije bio veći od 7,6. Tako je procenat u svakom trenutku bio sličan.
Procenat ugašenog lek veznika u rastvoru nije promenjen skladištenjem na 40°C [0335] Hromatografija obrnute faze (RP-HPLC) je izvedena na rekonstituisanom rastvoru kako bi se odredio procenat ugašenog lek veznika. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije detektovan. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C, procenat nije detektovan. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, procenat nije detektovan. Prema tome, procenat ugašenog leka za lekove u svim vremenskim tačkama nije detektovan.
Ukupne nečistoće u rastvoru nisu promenjene nakon skladištenja na 40°C
[0336] Rekonstituisani rastvor je analiziran kako bi se odredio procenat ukupnih nečistoća pomoću RP-HPLC. U početnoj vremenskoj tački, procenat nije detektovan. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C, procenat je bio manji od 0,003. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, procenat nije detektovan. Tako je procenat u svim vremenskim tačkama bio sličan za ukupne nečistoće.
Kontaminacija čestica rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C
[0337] Kontaminacija čestica je određena određivanjem sub-vidljivih čestica prema dva kriterijuma prihvatljivosti.
[0338] Kriterijumi prihvatljivosti su ispunjeni određivanjem broja čestica većih od 10 µm po kontejneru, sa ne više od 6000 ((US Farmakopeja) i Standardna evropska farmakopeja). U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 13. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm bio je 5. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, broj čestica po kontejneru veći od 10 µm je bio 8. Prema tome, sve vremenske tačke su ispunile kriterijume prihvatljivosti za broj čestica po kontejneru većih od 10 µm.
[0339] Kriterijumi prihvatljivosti su takođe zadovoljeni određivanjem broja čestica po kontejneru većih od 25 µm, uz ne više od 600. U početnoj vremenskoj tački, broj čestica po posudi veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm je bio 0. Nakon rekonstituisanja posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, broj čestica po kontejneru veći od 25 µm bio je 2. kriterijum prihvatanja za broj čestica po kontejneru veći od 25 µm.
Sadržaj vode u rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C
[0340] Sadržaj vode je procenjen Karl-Fischer titracijom. Karl-Fischer titracija koristi kulometrijsku ili volumetrijsku titraciju kako bi se odredili tragovi vode u uzorku, koji je prikazan kao procenat. U početnoj vremenskoj tački, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru je bio 0,8%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog meseca na 40°C, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru bio je 0,8%. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, procenat vode u rekonstituisanom rastvoru je bio 0,8%. Tako, u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca, sadržaj vode u rekonstituisanom rastvoru je bio zanemarljiv.
pH rastvora nije pod uticajem skladištenja na 40°C
[0341] pH rekonstituisanog rastvora je određen u početnoj vremenskoj tački, i nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom jednog i tri meseca na 40°C. U početnoj vremenskoj tački, pH vrednost rekonstituisanog rastvora je bila 5,9. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom tri meseca na 40°C, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9. Nakon rekonstitucije posle skladištenja tokom šest meseci na 40°C, pH vrednost rekonstituisanog rastvora bila je 5,9.
Primer 9: Proizvodnja u velikoj razmeri liofilizovane formulacije ADC 1-MMAF [0342] Za pripremu rastvora u velikoj razmeri, histidin je rastvoren u vodi za injekcije, pH je podešen sa 10% w/w hlorovodonične kiseline, i voda za injekcije je dodata konačnoj masi. Ekscipijenti formulacije pufera (saharoza i polisorbat 80) su izmereni i rastvoreni u 15 mM rastvoru histidina. Dobijenom rastvoru je zatim ispitan izgled.
1
[0343] ADC 1-MMAF je otopljen na 30°C u vodenom kupatilu, ispitan mu je izgled, sakupljen je i izmeren.15 mM histidinskog pufera, polisorbata 80 i saharoze su dodati u ADC 1-MMAF. Ispitan je izgled rastvora i određeni su njegov pH i gustina, praćeno sterilnom filtracijom. Rastvor je zatim liofilizovan u kontrolisanim uslovima.
[0344] Kritični testovi u procesu koji su sprovedeni tokom proizvodnje ADC 1-MMAF praha za injekcioni rastvor, 20 mg/mL, navedeni su u Tabeli 2, u nastavku.
Tabela 2. Kontrolni testovi unutar procesa i ograničenja prihvatljivosti
[0345] Količina ADC 1-MMAF i puferskog rastvora koji se koristi za tipičnu seriju ADC 1-MMAF rastvora za liofilizaciju su prikazani u Tabeli 3, u nastavku. Lista komponenti i količine koje se koriste za proizvodnju formulacije pufera su opisane u Tabeli 4 i Tabeli 5.
Tabela 3. Formula za seriju za ADC 1-MMAF rastvor za lekove
2
Tabela 4. Serijska formula za rastvor formulacije
Tabela 5. Serijska formula za 15 mM rastvor histidina
SAŽETAK SEKVENCI
4
1
11
12
�
14
1
1

Claims (26)

Patentni zahtevi
1. Liofilizovana formulacija koja sadrži anti-receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) konjugat antitelo-lek (ADC), šećer, histidin i surfaktant, gde navedeni anti-EGFR ADC sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za auristatin, gde anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22.
2. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, gde je auristatin Monometilauristatin F (MMAF).
3. Formulacija prema patentnom zahtevu 2, gde je MMAF konjugovan za antitelo sa maleimidokaproil veznikom.
4. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, gde je surfaktant polisorbat.
5. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, gde formulacija sadrži oko 1-120 mg od anti-EGFR ADC.
6. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, gde se šećer bira iz grupe koju čine manitol, sorbitol, saharoza i trehaloza.
7. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, gde je šećer saharoza i surfaktant je polisorbat.
8. Formulacija prema patentnom zahtevu 4 ili patentnom zahtevu 7, gde je polisorbat polisorbat 80.
9. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, gde je navedena formulacija rekonstituisana i sadrži oko 1 - 100 mg/ml anti-EGFR ADC, oko 1 - 10 mg/mL histidina, oko 50 - 90 mg/ml od šećera, i oko 0,01 - 0,2 mg/ml surfaktanta.
10. Formulacija prema patentnom zahtevu 9, gde je šećer saharoza, opciono gde je surfaktant polisorbat 80, i/ili formulacija ima pH od oko 5,5 do 6,5.
11. Formulacija prema patentnom zahtevu 9 ili patentnom zahtevu 10, koja sadrži 10-100 mg/ml anti-EGFR ADC.
12. Formulacija prema patentnom zahtevu 9 ili patentnom zahtevu 10, koja sadrži 1-40 mg/ml anti-EGFR ADC.
13. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-12, gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18.
14. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13, gde formulacija sadrži ADC mešavinu koja ima prosečan DAR od oko 3 ili ADC mešavinu koja ima DAR od oko 2-4.
15. Liofilizovana formulacija koja sadrži
anti-EGFR ADC koji sadrži anti-EGFR antitelo konjugovano za monometilauristatin F (MMAF), gde navedeni ADC sadrži varijabilni region teškog lanca koja sadrži regione domena komplementarnosti (CDR) koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 15, 16 i 17, i obuhvata varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR koji sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 20, 21 i 22,
saharozu,
histidin, i
polisorbat 80,
gde formulacija sadrži ADC mešavinu koja ima prosečan DAR od oko 3 ili ADC mešavinu koja ima DAR od oko 2-4.
16. Formulacija prema patentnom zahtevu 15, gde anti-EGFR antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 18.
1
17. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-16, koja je farmaceutska formulacija.
18. Postupak za pripremu formulacije prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3 ili 15, gde navedeni postupak uključuje liofilizaciju vodene formulacije koja ima pH u rasponu od oko 5 do 7 i sadrži 1-20 mg histidina, oko 320-410 mg šećera oko 0,1 do 0,9 mg surfaktanta i oko 1-150 mg anti-EGFR ADC.
19. Formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-17 za upotrebu u postupku tretmana poremećaja koji zahtevaju tretman sa anti-EGFR ADC.
20. Formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 19, gde je poremećaj koji zahteva tretman sa anti-EGFR ADC rak.
21. Formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 20, gde je rak izabran iz grupe koja se sastoji od glioblastoma, raka ne-malih ćelija pluća, raka pluća, raka debelog creva, raka glave i vrata, raka dojke, tumora skvamoznih ćelija, raka analnog tkiva, raka kože, rak vulve, skvamoznih tumori i gliom.
22. Formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, gde je skvamozni tumor izabran iz grupe koja se sastoji od skvamoznog tumora pluća, skvamoznog tumora glave ili vrata i skvamoznog cervikalnog tumora.
23. Formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, gde je rak glioblastom ili multiform glioblastoma.
24. Formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 20, gde je rak čvrsti tumor koji ima prekomerno eksprimiranje EGFR.
25. Formulacija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 19-24, gde se formulacija primenjuje intravenozno.
26. Komplet koji sadrži formulaciju prema bilo kom od patentnih zahteva 1-17.
1
RS20190452A 2013-03-15 2014-03-14 Formulacije konjugata leka anti-egfr antitela RS58666B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361790490P 2013-03-15 2013-03-15
EP14722450.5A EP2968588B1 (en) 2013-03-15 2014-03-14 Anti-egfr antibody drug conjugate formulations
PCT/US2014/027868 WO2014143765A1 (en) 2013-03-15 2014-03-14 Anti-egfr antibody drug conjugate formulations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58666B1 true RS58666B1 (sr) 2019-06-28

Family

ID=50680154

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190452A RS58666B1 (sr) 2013-03-15 2014-03-14 Formulacije konjugata leka anti-egfr antitela

Country Status (28)

Country Link
US (2) US20140286969A1 (sr)
EP (2) EP3517132A1 (sr)
JP (4) JP6382935B2 (sr)
KR (4) KR102305226B1 (sr)
CN (2) CN110433139A (sr)
AU (4) AU2014228172B2 (sr)
BR (1) BR112015023391A8 (sr)
CA (1) CA2906130A1 (sr)
CY (1) CY1121949T1 (sr)
DK (1) DK2968588T3 (sr)
ES (1) ES2727134T3 (sr)
HK (1) HK1219044A1 (sr)
HR (1) HRP20190672T1 (sr)
HU (1) HUE044071T2 (sr)
IL (2) IL241009A0 (sr)
LT (1) LT2968588T (sr)
ME (1) ME03457B (sr)
MX (2) MX2015012549A (sr)
NZ (1) NZ630826A (sr)
PL (1) PL2968588T3 (sr)
PT (1) PT2968588T (sr)
RS (1) RS58666B1 (sr)
RU (2) RU2020125266A (sr)
SG (2) SG11201507430RA (sr)
SI (1) SI2968588T1 (sr)
TR (1) TR201905313T4 (sr)
TW (3) TW201945032A (sr)
WO (1) WO2014143765A1 (sr)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9707302B2 (en) * 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US10570211B2 (en) 2011-01-24 2020-02-25 Gilead Sciences, Inc. Antibodies selective for cells presenting EGFR at high density
US20130116404A1 (en) 2011-11-08 2013-05-09 Case Western Reserve University Targeted non-invasive imaging probes of egfr expressing cells
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
TWI731535B (zh) 2014-03-21 2021-06-21 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
KR101628872B1 (ko) 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
CA2965362A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-06 Formation Biologics Inc. Egfr antibody-based combination therapy
US10195175B2 (en) * 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
WO2017051254A1 (en) * 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-egfr antibody drug conjugates
WO2017051249A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
CA3006242A1 (en) 2015-11-25 2017-06-01 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
CA3006247A1 (en) 2015-11-25 2017-06-01 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising peptide groups and methods related thereto
EP3380126A4 (en) 2015-11-25 2019-07-24 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATES WITH BRANCHED LINKERS AND ASSOCIATED METHODS
CN114177308B (zh) * 2016-05-17 2024-07-09 艾伯维生物制药股份有限公司 抗cMet抗体药物偶联物及其使用方法
AU2017277534A1 (en) * 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
JP7054529B2 (ja) * 2016-06-21 2022-04-14 エックス４ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｃｘｃｒ４阻害剤およびその使用
AU2018246806B2 (en) 2017-03-29 2022-05-12 Ligachem Biosciences Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer precursor and ligand-linker conjugate compound thereof
BR112019025591A2 (pt) * 2017-06-06 2020-06-16 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Composição farmacêutica compreendendo conjugado de fármaco-anticorpo c-met e uso do mesmo
BR112020003474A2 (pt) * 2017-08-23 2020-10-20 Daiichi Sankyo Company, Limited composição farmacêutica, e, método para produzir uma composição farmacêutica
AU2018327171B2 (en) 2017-08-31 2023-03-09 Daiichi Sankyo Company, Limited Improved method for producing antibody-drug conjugate
WO2019183633A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Case Western Reserve Univeristy Psma targeted conjugate compounds and uses thereof
CA3099680A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
IL281344B2 (en) 2018-09-10 2025-09-01 Mirati Therapeutics Inc Combination of adagrasib and cetuximab for cancer treatment
DK3852617T3 (da) * 2018-09-20 2025-10-20 Sfj Pharma X Inc Anvendelse af antistof fragmenter til revertering af ticagrelor-aktivitet
CN110960490A (zh) * 2018-09-28 2020-04-07 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗egfr抗体偶联药物组合物及其用途
SG11202108627SA (en) 2019-02-18 2021-09-29 Lilly Co Eli Therapeutic antibody formulation
AU2020231509A1 (en) * 2019-03-04 2021-08-19 Amgen Inc. In vivo reversibility of high molecular weight species
EP4316521B1 (en) * 2019-03-26 2025-06-18 RemeGen Co., Ltd. Anti-her2 antibody drug conjugate pharmaceutical preparation
CN111939267B (zh) * 2019-05-17 2024-12-20 百奥泰生物制药股份有限公司 抗体-药物偶联物制剂、制备方法及应用
AU2019341066B1 (en) * 2019-08-07 2021-04-01 Mabplex International Co., Ltd. Antibody-drug conjugates and uses thereof
KR20210028544A (ko) 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
CN112516090B (zh) * 2019-09-18 2023-06-20 上海复旦张江生物医药股份有限公司 抗体偶联药物的药物组合、冷冻干燥剂及制备方法、用途
TWI885105B (zh) * 2020-03-25 2025-06-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 一種含抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途
CN115605191A (zh) * 2020-04-10 2023-01-13 蓝腾制药公司（Us） 用于治疗脑癌或cns癌症的羟基脲甲基-酰基富烯
KR102683876B1 (ko) * 2020-11-11 2024-07-11 가톨릭대학교 산학협력단 표적 치료제의 치료 효과 증진을 위한 항체 기반 컨쥬게이트
EP4245319A4 (en) * 2020-11-11 2025-07-02 Catholic Univ Korea Ind Academic Cooperation Foundation ANTIBODY-BASED CONJUGATE FOR ENHANCING THE THERAPEUTIC EFFECT OF A TARGETED THERAPEUTIC AGENT
CN116761632A (zh) * 2020-11-11 2023-09-15 加图立大学校产学协力团 用于增强靶向治疗剂的治疗效果的基于抗体的缀合物
CN116635064A (zh) 2020-12-18 2023-08-22 世纪治疗股份有限公司 具有适应性受体特异性的嵌合抗原受体系统
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CN115300623B (zh) * 2021-05-08 2024-06-21 盛禾(中国)生物制药有限公司 抗egfr融合蛋白或其抗原结合片段的组合物及其用途
WO2022240757A1 (en) 2021-05-10 2022-11-17 Entrada Therapeutics, Inc. Antigen-binding and antigen degradation constructs
CN115721732B (zh) * 2021-08-27 2025-03-07 上海复旦张江生物医药股份有限公司 抗体偶联药物的药物组合物、制剂及其制备方法、用途
AU2022388735A1 (en) 2021-11-09 2024-05-30 Case Western Reserve University Psma targeted conjugate compounds and uses thereof
CN114740108B (zh) * 2022-03-28 2023-07-14 天津键凯科技有限公司 一种聚合物修饰抗体类药物的修饰度的测定方法
IL317567A (en) * 2022-06-10 2025-02-01 Acelyrin Inc ANTI-IGF-1R antibody compounds
US20250367311A1 (en) * 2022-06-15 2025-12-04 Shanghai Hansoh Biomedical Co., Ltd. Pharmaceutical composition containing an antibody-drug conjugate and use thereof
EP4353220A1 (en) * 2022-10-12 2024-04-17 Pierre Fabre Medicament Use of a liquid aqueous composition for solubilization and stabilization of an antibody-drug conjugate
TW202434307A (zh) 2023-01-18 2024-09-01 大陸商泰勵生物科技（上海）有限公司 抗體偶聯藥物及其用途
WO2025113442A1 (zh) * 2023-11-29 2025-06-05 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗体制剂

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
EP0428534B1 (en) 1988-06-14 1995-03-29 Cetus Oncology Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
EP1541682A3 (en) 1988-09-02 2005-07-06 Dyax Corp. Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
FI903489A0 (fi) 1988-11-11 1990-07-10 Medical Res Council Ligander med en enda sektion, receptorer innehaollande naemnda ligander, foerfaranden foer deras framstaellning samt anvaendning av liganderna och receptorerna.
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
ATE414768T1 (de) 1991-04-10 2008-12-15 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer rezeptoren mittels phagemiden
CA2110799A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Arnold H. Horwitz Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
ATE463573T1 (de) 1991-12-02 2010-04-15 Medimmune Ltd Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5556623A (en) 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
WO1995015982A2 (en) 1993-12-08 1995-06-15 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
EP0659439B1 (en) * 1993-12-24 2001-10-24 MERCK PATENT GmbH Immunoconjugates
DE69531148T2 (de) 1994-01-31 2004-04-29 Trustees Of Boston University, Boston Bibliotheken aus polyklonalen antikörpern
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
EP0973540B1 (en) 1997-02-25 2005-11-02 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US7090843B1 (en) 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
WO2004043493A1 (en) 2002-11-14 2004-05-27 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
WO2004074163A1 (en) * 2003-02-14 2004-09-02 Rubbermaid Commercial Products Llc Liquid dispenser
CN107213469A (zh) 2003-11-06 2017-09-29 西雅图基因公司 能够与配体偶联的单甲基缬氨酸化合物
JP4942643B2 (ja) 2004-03-02 2012-05-30 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 部分的に付加された抗体およびそれらの結合体化方法
EP1740954B1 (en) * 2004-04-07 2015-08-19 Genentech, Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
KR101270829B1 (ko) * 2004-09-23 2013-06-07 제넨테크, 인크. 시스테인 유전자조작 항체 및 접합체
DK1912671T3 (da) 2005-07-18 2017-11-27 Seattle Genetics Inc Beta-glucuronid-linker-lægemiddelkonjugater
CA2617907A1 (en) 2005-08-05 2007-02-15 Syntarga B.V. Triazole-containing releasable linkers and conjugates comprising the same
KR20120060877A (ko) * 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US20110076232A1 (en) 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
US20110256135A1 (en) * 2010-03-17 2011-10-20 Wolfgang Fraunhofer Anti-nerve growth factor (ngf) antibody compositions
EP2566512A1 (en) * 2010-05-04 2013-03-13 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Antibodies against epidermal growth factor receptor (egfr) and uses thereof
UA116189C2 (uk) * 2011-05-02 2018-02-26 Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. КОМПОЗИЦІЯ АНТИ-α4β7 АНТИТІЛА
HK1219056A1 (zh) * 2013-03-15 2017-03-24 艾伯维公司 抗体药物偶联物(adc)纯化
ES2866044T3 (es) * 2014-02-18 2021-10-19 Illumina Inc Métodos y composiciones para la elaboración de perfiles de ADN

Also Published As

Publication number Publication date
EP3517132A1 (en) 2019-07-31
RU2015144287A3 (sr) 2018-03-19
MX2015012549A (es) 2016-06-21
ES2727134T3 (es) 2019-10-14
TR201905313T4 (tr) 2019-05-21
JP2020143152A (ja) 2020-09-10
KR20150131366A (ko) 2015-11-24
JP6382935B2 (ja) 2018-08-29
KR102305226B1 (ko) 2021-09-29
ME03457B (me) 2020-01-20
US20200282072A1 (en) 2020-09-10
TW202146054A (zh) 2021-12-16
HK1217644A1 (en) 2017-01-20
JP2022126754A (ja) 2022-08-30
EP2968588B1 (en) 2019-01-09
AU2018267662A1 (en) 2018-12-13
RU2015144287A (ru) 2017-04-24
JP2018184468A (ja) 2018-11-22
WO2014143765A8 (en) 2015-09-11
CN110433139A (zh) 2019-11-12
MX2020000333A (es) 2020-07-13
KR20220041957A (ko) 2022-04-01
NZ630826A (en) 2017-06-30
SG10201707633VA (en) 2017-11-29
HRP20190672T1 (hr) 2019-08-23
EP2968588A1 (en) 2016-01-20
CN105163763B (zh) 2019-07-02
TW201519903A (zh) 2015-06-01
CA2906130A1 (en) 2014-09-18
IL274881A (en) 2020-07-30
DK2968588T3 (en) 2019-04-23
BR112015023391A2 (pt) 2017-11-28
US20140286969A1 (en) 2014-09-25
IL241009A0 (en) 2015-11-30
WO2014143765A1 (en) 2014-09-18
PL2968588T3 (pl) 2019-08-30
HUE044071T2 (hu) 2019-09-30
SG11201507430RA (en) 2015-10-29
JP2016515511A (ja) 2016-05-30
KR20220139443A (ko) 2022-10-14
TWI689313B (zh) 2020-04-01
AU2014228172A1 (en) 2015-09-24
PT2968588T (pt) 2019-05-08
AU2020277164A1 (en) 2020-12-24
BR112015023391A8 (pt) 2018-01-30
HK1219044A1 (zh) 2017-03-24
AU2023200432A1 (en) 2023-03-02
RU2020125266A (ru) 2020-09-24
AU2014228172B2 (en) 2018-12-06
LT2968588T (lt) 2019-05-10
TW201945032A (zh) 2019-12-01
NZ732015A (en) 2022-01-28
CN105163763A (zh) 2015-12-16
SI2968588T1 (sl) 2019-05-31
KR20210118238A (ko) 2021-09-29
CY1121949T1 (el) 2020-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2023200432A1 (en) Anti-EGFR antibody drug conjugate formulations
US20190262417A1 (en) Antibody drug conjugate (adc) purification
RS61659B1 (sr) Konjugati antitelo lek anti-cmet i metode za njihovu upotrebu
AU2016365114A1 (en) Anti-huLRRC15 antibody drug conjugates and methods for their use
HK40012192A (en) Anti-egfr antibody drug conjugate formulations
HK1217644B (en) Anti-egfr antibody drug conjugate formulations
NZ732015B2 (en) Anti-EGFR antibody drug conjugate formulations