RS20050737A

RS20050737A - Tečne farmaceutske formulacije fsh i lh zajedno sa nejonski surfaktantom

Info

Publication number: RS20050737A
Application number: YUP-2005/0737A
Authority: RS
Inventors: Fabrizio Samaritani; Piergiorgio Donati
Original assignee: Ares Trading S.A.,
Priority date: 2003-04-02
Filing date: 2004-04-02
Publication date: 2007-11-15
Also published as: HRP20100727T1; WO2004087213A8; DK1610822T3; CY1111291T1; AR043972A1; EA200501531A1; BRPI0409532B8; AU2004226666B9; ME00217B; JP2006522072A; WO2004087213A1; US20060147480A1; KR101105486B1; HRP20100727T4; US7741268B2; PT1610822E; CA2518903C; KR20050110037A; PL1610822T5; ATE492292T2

Abstract

Ovaj pronalazak se odnosi na polje farmaceutskih formulacija hormona za stimulaciju folikula (FSH), luteinizirajućeg hormona (LH), i mešavine FSH i luteinizirajućeg hormona (LH), i na metode za proizvodnju takvih formulacija.

Description

FSH i LH farmaceutske formulacije

Polje tehnike

Ovaj pronalazak odnose se na polje farmaceutskih formulacija hormona za stimulaciju folikula (FSH), formulacije luteinizirajućeg hormona (LH), kao i mešavine FSH i luteinizirajućeg hormona (LH), kao i metode za proizvodnju takvih formulacija.

Stanje tehnike

Hormon za stimulaciju folikula (FSH), luteinizirajući hormone (LH) i horionski gonadotropin (CG) su proteini za ubrizgavanje koji spadaju u klasu gonadotropina. FSH, LH i hCG se koriste sami ili u kombinaciji za lečenje neplodnosti i reproduktivnih pormećaja kod pacijenata muškog i ženskog pola.

U prirodi, FSH i LH proizvodi hipofiza. Za farmaceutske namene, FSH i LH i varijants njihove varijante se mogu proizvoditi rekombinannto (rFSH i rLH), ili se mogu proizvoditi iz urina postmenopauzalnih žena (uFSH i uLH).

FSH se koristi kod pacijentkinja ženskog pola za indukciju ovulacije (01) kao i za kontrolisanu hiperstimulaciju ovarijuma (COH) za tehnologije asistirane reprodukcije (ART). U jednom tipičnom terapijskom režimu za indukjciju ovulacije pacijentkinji se ubrizgavaju dnevno injekcije FSH ili varijante (oko 75 do 300 IU FSH/dan) tokom perioda od oko 6 do oko 12 dana. U jendom tipičnom terapijskom režimu za kontrolisanu hiperstimulaciju ovarijuma, pacijentkinji se ubrizgavaju dnevno injekcije FSH ili varijante (oko 150-600 IU FSH/dan) tokom perioda od oko 6 do oko 12 dana.

FSH se takođe koristi za indukciju spermatogeneze kod muškaraca koji pate od oligospermije. Terapijski režim sa upotrebom 150 IU FSH 3 puta nedeljno u kombinaciji sa 2'500 IU hCG dva puta nedeljno bio je uspoešan za postizanje poboljšanja u broju spermatozoida kod muškaraca koji pate od hipogonadotropnog hipogonadizma<1>.

LH se koristi kod žena u kombinaciji sa FSH kod Ol i kod COH, posebno kod onih pacijentkinja koje imaju veoma niske endogene nivoe LH ili rezistenciju na LH, kao što je slučaj sa ženama koje pate od hipogonadotropnog hipogonadizma (HH, SZO grupa I) ili starijih pacijentkinja (t.j. 35 godina ili starije), i pacijentkinja kod kojih je problem implantacija embriona ili rani pobačaj. LH u kombinaciji sa FSH tradicionalno postoji u preparatu koji se naziva humani menopauzalni gonadotropini (hMG) I dobijaju se iz ekstrakta urina postmenopauzalnih žena. hMG ima koeficijent 1:1 aktivnosti FSH:LH.

CG deluje kao isti receptor kao i LH i izaziva isti odgovor. CG ima duži polu-život u cirkulaciji nego LH i stoga se često koristi kao izvor LH-aktivnosti sa dugim dejstvom. CG se koristi u režimima za Ol i COH da podražava prirodni maksimum LH i pokrene ovulaciju. Injekcija humanog horionskog gonadotropina (hCG) se koristi za pokretanje ovulacije na kraju stimulacije sa FSH ili mešavinom FSH i LH. CG može da se koristi i sa FSH tokom stimulacije za Ol i COH, da bi se obezbedila LH-aaktivnost tokom stimulacije kod pcijentkinja kod kojih je LH-aktivnost poželjna, kao što su one gore navedene.

FSH, LH i CG su čkanovi heterodimera, porodice glikoproteinskoh hormona koji uključuju i hormon za stimulaciju tiroideje (TSH). Članovi ove porodice su heterodimeri, koji obuhvataju jednu a- i jednu p-podjedinicu. Ove podjedinice se drže zajedno ne-kovalentnim interakcijama. Humani FSH (hFSH) heterodimer se sastoji od (i) jedne zrele 92 amino kiselinske glikoproteinske alfa podjedinice, koja je zajednička i drugim članovima humane porodice (t.j., horionski gonadotropini ("CG"), luteinizirajući hormon ("LH") i hormon za stimulaciju tiroideje ("TSH"); i (ii) jedne zrele 111 amino kiselinske beta podjedinice koja je speciifčna za FSH<2>. Humani LH heterodimer sastoji se od (i) zrele 92 amino kiselinske glikoproteinske alfa podjedinice; i (ii) zrele 112 beta podjedinice koja je specifična za LH<3>. Ove alfa i beta podjedinice glikoproteina mogu biti sklone disocijaciji u zbog interakcije sa konzervansom, surfaktantom i drugim ekscipijensima. Disocijacija podjedinica dovodi do gubitka biološke potencije<4.>

FSH se formuliše za intramuskularne (IM) ili supkutane (SC) injekcije. FSH se proizvodi u liofilizovanom (čvrstom) obliku u bočicama ili ampulama 75 lU/bočici i 150 lU/bočici sa rokom trajanja od godinu I po do dve godine kada se čuva na 2-25°C. Rastvor za injekcije se formira rekonstituisanjem ovog liofilizovanog proizvoda vodom za injekcije (WFI). Za indukciju ovulacije ili kontrolisanu hiperstimulaciju ovarijuma preporučuje se davanje injekcija svakodnevno s početnom dozom od 75 IU do 600 IU najduže do oko deset dana. Zavisno od odgovora pacijentkinje mogu se koristiti do tri ciklusa terapije sa povećanjem doza FSH. Sa liofilizovanim formulacijama, od pacijentkinje se traži da rekonstituiše novu bočicu liofilizovanog materijala razblaživačem i ubrizgava je odmah po rekonstituisanju formulacijas, svakodnevno [uputstvo za upotrebu N1700101 A, objavljeno februara 1996, za Fertinex™

(urofolitropin za injekcije, prečišćeni) za supkutane injekcije, proizvodi Serono Laboratories, Inc., Randolph, MA].

FSH je dormulisan i u tečnim formulacijama sa jednom i sa više doza (multidozni) u bočicama ili u ampulama. Formati sa jednom dozom moraju ostai stabilni i aktivni tokom skladištenja pre upotrebe. Multidozni formati moraju ostati stabilni i aktivni ne samo tokom skladištenja pre upotrebe, već ostati stabilni, snažni i relativno bez bakterija tokom perioda režima multidozne upotrebe pošto se otvori ampula, odnosno kada više nije zaptivena. Iz ovog razloga, multidozni formati često sadrže I neki bakteriostatski agens.

LH se formuliše za intramuskularne (IM) ili supkutane (SC) injekcije. LH se proizvodi kao liofilizovani (čvrsti) oblik u bočicama ili ampulama od 75 lU/bočici sa rokom trajanja od godinu I po do dve godine kada se čuva na 2-25°C. Rastvor za injekcije se dobija rekonstituisanjem ovog liofilizovanog produkta vodom za injekcije (WFI). Za indukciju ovulacije ili kontrolisanu hiperstimulaciju ovarijuma uz FSH, preporučuje se svakodnevno davanje injekcija s poetnom dozom od 75 IU do 600 IU LH u trajanju od oko desetak dana.

EP 0 618 808 (Applied Research Svstems ARS Holding N.V.) otkriva farmaceutski sastav koji obuhvata čvrstnu objedinjenu mešavinu gonadotropina u stabilizujućoj količini same saharoze ili u kombinaciji sa glicinom.

EP 0 814 841 (Applied Research Svstems ARS Holding N.V.) otkriva stabilni, tečni farmaceutski sastav koji obuhvata rekombinantni humani horionski gonadotropin (hCG) i stabilizujuću količinu manitola.

EP 0 448 146 (AKZO N.V.) otkriva stabilizovani gonadotropin koji sadrži liofilizat koji obuhvata jedan težinski deo gonadotropina; i 200 do 10,000 težinskih delova stabilizatora soli dikarboksilne kiseline povezne sa gonadotropinom.

EP 0 853 945 (Akzo Nobel N.V.) otkriva tečnu formulaciju sa sadržajem gonadotropina koja se odlikuje tima da ova formulacija obuhvata gonadotropin i stabilizujuće količine polikarboksilne kiseline ili njenih soli i tioeterskog jedinjenja. WO 00/04913 (Eli Lilly i Co.) otkriva formulaciju koja obuhvata FSH ili jednu varijantu FSH koja sadrži alfa i beta podjedinicu, i konzervans odabran iz grupe koja se sastoji iz fenola, m-kresola, p-kresola, o-kresola, hlorokresola, benzil alkohola, alkilparabena (metil, etil, propil, butil i slično), benzalkonium hlorida, benzetonijum hlorida, natrijum dehidroacetata i timerosala, ili njihovih mešavine u vodenom razblaživaču.

Postoji potreba za stabilnim tečnim formulacijama FSH ili varijanti FSH, i mešavina FSH i LH, bilo za davanje pojedinačnih doza ili za multiple doze.

Kratak prikaz pronalaska

Cilj ovog pronalaska je da se prikažu suvo zamrznute kao i tečne formulacije FSH ili varijanti FSH, LH ili varijanti LH, da se obezbede metode za njihovu primenu, i metode za njihovu farmaceutsku ili veterinarsku primenu za lečenje poremećaja fertilnosti.

Dodatni cilj ovog pronalaska je da se prikažu suvo zamrznute kao i tečne formulacije mešavina FSH i LH, da se obezbede metode za njihovu primenu, i metode za njihovu farmaceutsku ili veterinarsku primenu za lečenje poremećaja fertilnosti.

U prvom aspektu, ovaj prinalazak prikazuje suvo zamrznuti i tečni farmaceutski sastav koji obuhvata FSH ili njegove varijante, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

U drugom aspektu, ovaj pronalazak prikazuje metodu za proizvodnju tečnog farmaceutskog sastava koji obuhvata pravljenje rastvora FSH ili njegove varijante, i surfaktanta odabranog iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 i WFI.

U trećem aspektu, ovaj pronalazak prikazuje metodu za proizvodnju pakovanog farmaceutskog sastava koji obuhvata rastvor za izdavanje koji obuhvata FSH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, u jednoj posudi.

U četvrtom aspektu, ovaj pronalazak opisuje jedan proizvodni artikal za upotgrebu u himanoj farmaciji, koji obuhvata bočicu koja obuhvata rastvor FSH ili varijante FSH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 i pisni material koji kaže da se takav rastvor može čuvati tokom perioda od oko dvadesetčetiri časa ili duže, po prvoj upotrebi

U petom aspektu, ovaj pronalazak opisuje suvo zamrznuti i tečni farmaceutski sastav koji obuhvata FSH i LH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

U šestom aspektu, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju suvo zamrznutog i tečnog farmaceutskog sastava koji obuhvata pravljenje rastvora FSH i LH i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

U sedmom aspektu, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju pakovanog farmaceutskog sastava koji obuhvata izdavanje rastvora koji obuhvata FSH i LH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, u jednoj posudi.

U osmom aspektu, ovaj pronalazak opisuje jedan proizvodni artikal za upotrebu u humanoj famraciji, koji obuhvata bočicu koja obuhvata rastvor FSH i LH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 i pisani material koji kaže da se taj rastvor može čuvati tokom perioda od oko dvadesetčetiri časa ili duže po prvoj upotrebi.

U devetom aspektu, ovaj pronalazak opisuje jedan proizvodni artikal za upotrebu u humanoj famraciji, koji obuhvata prvo posudu koja obuhvata suvo zamrznuti FSH ili varijantu FSH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 i drugu posudu koja obuhvata rastvarač za rekonstituisanje, po mogućstvu vodeni rastvor koji sadrži neki bakteriostatski agens, po mogućstvu m-kresol.

In an tenth aspect, ovaj pronalazak opisuje proizvodni artikal za upotrebu u humanoj farmaciji, koji obuhvata prvu posudu koja obuhvata suvo zamrznuti LH ili varijantu LH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 i drugu posudu koja obuhvata a rastvarač za rekonstituisanje, po mogućstvu vodeni rastvor sa sadržajem bakteriostatskog agensa, po mogućstvu m-kresol.

U jedanaestom aspektu, ovaj pronalazak opisuje proizvodni artikal za upotrebu u humanoj farmaciji, koji obuhvata prvu posudu koja obuhvata suvo zamrznuti FSH kao i LH ili varijante FSH ili LH, i surfaktant odabran iz blok kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 i drugu posudu koja obuhvata rastvarač za rekonstituisanje, po mogućstvu vodeni rastvor sa m-kresolom.

Detaljni opis pronalaska

Kratak opis crteža

Slika 1 pokazuje procenata oksidisanih a-podjedinica u formulacijama FSH sa sadržajem Pluronic F68, metionina od 10 ug/ml ("Meth 10 mcg/ml") i 100 ug/ml ("Meth 100 mcg/ml") u poređenju sa formulacijom bez metionina ("No metionin"), u nultoj tačci, i posle jedne odnosno dve nedelje.

Ove tečne i suvo zamrznute FSH ili FSH i LH formulacije pronalaska imaju poboljšane ili pogodnije osobine stabilnosti, i korisne su za lečenje neplodnosti kod žena i/ili muškaraca. Ove formulacije i proizvodni artikli su dodatno pogodni za upotrebu u sistemima za injekcije ili alternativnim sistemima za davanje, na pr., ali ne ograničavajući se na, nazalni, pulmonarni, transmukozni, transdermalni, oralni, supkutani, intramuskularni ili parenteralni sa kontrolisanim oslobađanjem. U posebno preporučenom obliku ove formulacije pronalaska su za supkutane i/ili intramuskularne injekcije. Prikazani rastvori i formulacije FSH ili FSH i LH varijanti mogu, takođe, imati pojačanu potencijuin v/Vo tokomvremena u poređenju sapoznatim komercijalnim proizvodima, jer se sprečava smanjenje ili gubitak aktivnosi ili stabilnosti, ili poboljšanjem ma kog aspekta efikasnosti ili poželjnog načina davanja, na pr., najmanje jednim od načina, učestalossti, doziranja, komfora, lakoće primene, biološke aktivnostiin vitroiliin vivo,i slično.

Hormonza stiululisanje folikula, ili FSH, u smislu u kome se ovde koristi jeste FSH koji je proizveden kao zreli protein cele humani FSH ili "hFSH", bilo da se proizvodi rekombinantno ili izoluje iz humanih izvora, kao što je urin postmenopauzalnih žena. Proteinska sekvenca humane glikoprotein alfa podjedinice data je kao SEQ ID NO: 1, a proteinska sekvenca humane FSH beta podjedinice data je kao SEQ ID NO:2.

Izraz "varijants FSH" treba da obuhvati one molecule koji se razlikuju u amino kiselinskoj sekvenci, modelu glikozilacije ili in vezama između podjedinica u odnosu na humani FSH ali ispoljavaju aktivnost kao i FSH. U primere spadaju CTP-FSH, modifikovani rekombinantni FSH sa dugim dejstvom, koji se sadrži od a-podjedinica divljeg tipa i hibridnih (3-podjedinica u kojima je karboksi terminalni peptid hCG fuzionisan sa C-završetkom (3-podjedinice FSH, kako je to opisano u LaPolt ef a/.; Endocrinologv;1992,131, 2514-2520; iliKlein et al.; Development i characterization of a long-acting recombinant hFSH agonist( Razvoj i karakterizacija rekombinantih hFSH agonista sa dugim dejstvom) ;Human Reprod. 2003, 18, 50-56]. Ovde su uključeni i jednolančani CTP-FSH, jednolančani molekul, koji se sastoji od sledećih sekvenci (od N-završetka do C-završetka):

gde BFSH označava p-podjedinicu FSH, phCG CTP (113-145) označava karboksi terminalni peptid hCG i aFSH označava a-podjedinicu FSH, kako su to opisali Klein efal. 5U druge primere Varijanti FSH spadaju FSH molekuli koji imaju dodatna mesta glikozilacije inkorporisana u a- i/ili p-podjedinice, kao što je otkriveno u WO 01/58493 (Maxygen), posebno u zahtevima 10 i 11 WO 01/58493, i FSH molekuli sa S-S vezama interpodjedinica, kako je otkriveno u WO 98/58957.

Varijante FSH koje se ovde pominju uključuju i karboksi terminalne delecije beta podjedinica koji su kraći od zrelog proteina pune dužine, SEQ ID NO:2. Karboksi terminalne delecije humanih beta podjedinica opisane su u SEQ IDS NOS: 3, 4, i 5. Podrazumeva se da karboksi terminalne varijante beta lanca formiraju dimere sa poznatom alfa podjedinicom da se formira heterodimer varijante FSH.

FSH heterodimeri ili heterodimeri varijanti FSH mogu se proizvesti ma kojim primernom metodom , kao što je rekombinantnno, izolovanjem ili purifikcijom iz prirodnih izvora zavisno od slučaja, ili hemijskom sintezom, ili kombinacijom ovih metoda.

Upotreba izraza "rekombinantni" odnosi se na preparate FSH, LH ili varijanti FSH i

LH koji se proizvode upotrebom rekombinantne DNK tehnologije (vidi na primer WO 85/01958). Ove sekvence zar genomne i cDNK klone FSH poznate su za alfa i beta podjedinice nekoliko vrsta<6>. Jedan primer metode ekspresije FSH ili LH korišćenjem rekombinantne tehnologije jeste transfekcijom eukariotskih ćelija sa DNK sekvencama koje nekodiraju alfa i beta podjedinicu FSH ili LH, bilo da sun a jednom vektoru ili na dva vektora gd svaka ova podjedinica ima separatni promoter, kako je to opisano u evropskim patentima br. EP 0 211 894 i EP 0 487 512. Drugi primer upotrebe rekombinantne tehnologije da se proizvedu FSH ili LH jeste upotrebom homologne rekombinacije za inserciju heterolognog regulatornog segmenta u operativnu vezu za endogene sekvence koje enkodiraju podjedinice FSH ili LH, kako je to opisano u evropskom patentu br.. EP 0 505 500 (Applied Research Svstems ARS Holding NV).

FSH ili varijanta FSH koji se koriste u skladu sa ovim pronalaskom mogu se proizvoditi ne samo rekombinantnim načinima, uključujući I iz ćelija sisara, već se mogu prečišćavati i iz drugih bioloških izvora, kao što je urin. U prihvatljive metodologije spadaju one koje su opisane kod Hakola, K. Molecular i Cellular Endocrinologv( Molekularna ićelijska endokrinologija),127:59-69, 1997; Keene, et al., J. Biol. Chem., 264:4769-4775, 1989; Cerpa-Poljak, et al., Endocrinologv, 132:351-356, 1993; Dias, et al., J. Biol. Chem., 269:25289-25294, 1994; Flack, et al., J. Biol. Chem., 269:14015-14020, 1994; i Valove, et al., Endocrinologv, 135:2657-2661, 1994, U.S. Patent 3,119,740 i US Patent no. 5,767,067.

Luteinizirajući hormon, ili LH, onako kako se koristi ovde jeste LH proizveden kao zreli protein pune dužine, koji uključuje, ali nije ograničen na humani LH ili "hLH", bilo da se proizvodi rekombinantno ili izolovan iz humanih izvora, jao što je urin postmenopauzalnih žena. Proteinska sekvenca humane glikoprotein alfa podjedinice data je ako SEQ ID NO: 1, a proteinska sekvenca humane LH beta podjedinice<7>data je kao SEQ ID NO: 6. U preporučenom obliku LH je rekombinantni.

Izraz "varijanta LH" treba da obuhvati one molekule koji se razlikuju u amino kiselinskoj sekvenci, modelu glikozilacije ili u vezi između podjedinica humanog LH ali koji imaju aktivnosti kao i LH.

LH heterodimeri ili heterodimeri varijante LH mogu se proizvesti ma kojom pogodnom metodom, kao što je rekombinantna, izolacijom ili purifikacijom iz prirodnih izvora zavisno od slučaja, ili hemijskom sintezom, ili ma kojom kombinacijom ovih metoda.

Izraz "dati" ili "davanje" označava uvođenje formulacije ovog pronalaska u telo pacijenta kome je potrebno da se leči neka bolest ili stanje.

Izraz "pacijent" označava sisara koji se leči od bolesti ili stanja. Pacijenti su sledećeg porekla, ali ne ograničavajući se samo na to, humanog, ovce.svinje, konja, govečeta, zeca, i slično.

Izraz "potencija" u vezi sa aktivnošću FSH, odnosi se na sposobnost FSH formulacije ili mešane formulacije, da izazove biološke odgovore koji su povezani sa FSH, kao što je povećanje težine ovarijuma na eseju Steelman-Pohlev<8>, ili rast folikula kod pacijenata ženskog pola. Rast folikula kod pacijenata ženskog pola može se procnjivati ultrazvuzkom, na primer, u smislu broja folikula koji imaju srednji prečnik od ili oko 16 mm osmog dana stimulacije. Biološka aktivnost se procenjuje u odnosu na prihvaćeni standard za FSH.

Izraz "potencija" u odnosu na aktivnost LH, odnosi se na sposobnost LH formulacije ili mešane formulacije, da izazovu biološke odgovore povezane sa LH, kao što je motoda povećanja težine seminalnih vezikula.<9>Biološka aktivnost LH je procenjuje se u odnosu na prihvaćeni standard za LH.

Izraz "vodeni razblaživač" odnosi se na tečni rastvarač koji sadrži vodu. Sistemi vodenih rastvarača mogu se sastojati samo od vode, ili se mogu sastojati od vode plus jedan ili ili više mešljivih rastvarača, i I mogu sadržati rastvorene rastvorke kao što su šećeti, puferi, soli ili drugi ekscipijensi. Najčešće korišćeni ne-vodeni rastvarači su kratkolančani organski alkoholi, kao što su, metanol, etanol, propanol, kratkolačnani ketoni, kao što su aceton, i poli alkoholi, kao što je glicerol.

"Agens izotoničnosti" je jedinjenje koje se fiziološki podnosi i daje primerenu toničnost formulaciji da se spreči neto protok vode kroz ćelijske membrane koje su u kontaktu sa formulacijom. Jedinjenja kao što su glicerin, često se kroiste za takve namene u poznatim koncentracijama. U druge pogodne agense izotoničnosti spadaju, ali ne ograničavajući se na, amino kiseline ili proteini (na pr., glicin ili albumin), soli (na pr., natrijum hlorid), i šećeri (na pr., dekstroza, saharoza i laktoza).

Izraz "bakteriostatski agens" odnosi se na jedinjenje ili sastave koji se dodaju formulaciji da deluju kao anti-bakterijski agens. Konzervisani FSH ili varijanta FSH ili formulacija ovog pronalaska sa sadržajem FSH i LH po mogućstvu ispunjava zakonske ili pravne smernice za delotvornost konzervansa da bi se mogli komercijalno kosristiti u proizvodima za višekratnu upotrebu, po mogućstvu kod ljudi. U primere bakteriostatskih agenasa spadaju fenol, m-kresol, p-kresol, o-kresol, hlorokresol, benzil alkohol, alkilparaben (metil, etil, propil, butil i slično), benzalkonium hlorid, benzetonijum hlorid, natrijum dehidroacetat i timerosal.

Izraz "pufer" ili "fiziološki prihvatljiv pufer" odnosi se na rastvore jedinjenja za koje se zna da su bezbedni za farmaceutsku ili veterinarsku upotrebu u formulacijama i koji imaju dejstvo da održavaju ili kontrolišu pH ove formulacije u rasponu pH koji je poželjan za tu formulaciju. Prihvatljivi puferi za kontrolu pH pri umereno kiselom pH do umereno baznog pH uključju, ali se ne ograničavaju na jedinjenja kao što su fosfati, acetati, citrati, arginine, TRIS, i histidin. "TRIS" se odnosi na 2-amino-2-hidroksimetil-1,3,-propanediol, i to sve njegove farmaceutski prihvatljive soli. Preporučeni puferi su fosfatni pufers sa fiziološkim rastvorom ili prihvatljivom solju.

Izraz "fosfatni pufer" odnosi se na rastvore koji sadrže fosfornu kiselinu ili njene soli, podešeno do željenog pH. Po pravilu, fosfatni puferi se pripremaju iz fosforne kiseline, ili soli fosforne kiseline, uključujući ali ne ograničavajući se na natrijumove i kalijumove soli. Na ovom polju je poznato nekoliko fosfornih soli, kao što su natrijum i kalijum monobazne, dibazne, i tribazne soli ove kiseline. Soli fosforne kiseline postoje i u vidu hidrata nastajućih soli. Fosfatni puferi mogu da obuhvate raspone pH, kao što su od oko pH 4 do oko pH 10, i preporučene raspone od oko pH 5 do oko pH 9, kao I najbolji preporučeni raspon od oko 6.0 do oko 8.0, I najbolje od ili oko pH 7.0.

Izraz "bočica" odnosi se na široki spektar posuda koje mogu da sadrže FSH u

čvrstom ili tečnom obliku ali tako da ostanu u sterilnom stanju. U primere bočica

bočica kako se taj izraz ovde koristi spadaju ampule, punjenja, blister pakovanja, ili druge slične posude koje su pogodne za davanje FSH pacijentu pomoću šprica, pumpe (uključujući osmotsku), katetera, transdermalnog flaster, pulmonarnog ili transmukozalnog spreja. Bočice pogodne za pakovanje proizvoda za parenteralno, pulmonarno, transmukozalno, ili transdermalno davanje dobro su poznate I priznate u stanju tehnike.

Izraz "stabilnost" odnosi se na fizičku, hemijsku I konformacionu stabilnost FSH i LH u formulacijama ovog pronalaska (uključujući održavanje biološke potencije). Nestabilnost proteinske formulacije može biti uzrokovana henmijskom razgradnjom ili agregacijom proteinskih molekula da se formiraju polimeri višeg reda, disocijacijom heterodimera u monomere, deglikozilacijom, modifikacijom glikozilacije, oksidacijom (posebno a-podjedinica) ili ma kojom drugom strukturnom modifikacijom koja smanjuje najmanje jednu biološku aktivnost FSH polipeptida uključenog u ovaj pronalazak.

"Stabilni" rastvor ili formulacija, je onaj u kome stepen razgranje, modifikacije, agregacije, gubitka biološke aktivnosti i slično, proteina u njemu se prihvatljivo kontoliše, i ne povećava se s vremenom do neprihvatljive mere. Po mogućstvu ta formulacija zadržava najmanje ili oko 80% označene aktivnosti FSH i najmanje ili oko 80% označene aktivnosti LH tokom perioda od 6 meseci na temperaturi od ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu na ili oko 4-5°C. Aktivnost FSH može se meriti korišćenjem bioeseja Steelman-Pohlev za merenje povećanja težine ovarijuma<5.>Aktivnost LH može se meriti korišženjem bioeseja za pvoećanje težine seminalnih vezikula<10>.

Izraz "terapija" odnosi se na davanje, praćenje, zbrinjavanje i/ili negu pacijenta za koda se davanje FSH i/ili LH smatra poželjnim u cilju stimulacije folikula ili testisa ili ma kog drugog fiuziološkog odgovora koji se reguliše pomoću FSH i/ili LH. Terapija tako može da ukluči, ali se ne ograničava na davanje FSH i/ili LH za indukciju ili poboljšanje kvaliteta sperme, stimulaciju oslobađanja testosterona kod muškaraca, ili razvoj folikula ili indukicju ovulacije kod žena.

Izraz "multidozna upotreba" treba da obuhvati upotrebu pojedinačne bočice, ampule ili punjenja sa FSH formulacijom ili formulacijom FSH i LH za više od jedne injekcije, na primer 2, 3, 4, 5, 6 ili više injekcija. Ove injekcije se, po mogućstvu, daju u periodu od najmanje ili oko 12 časova, 24 časova, 48 časova, i td., po mogućstvu do perioda od ili oko 12 dana. Ove injekcije mogu biti davane u vremenskom razmaku, na primer, periodima od 6, 12, 24, 48 ili 72 časova.

" So" proteina je so sa dodatkom kiseline ili baze. Ovakve soli su po mogućstvu formirane između jedne ili više naelektrisanih grupa u proteinu i ma kod pojedinog ili više fiziološki prihvatljivih, ne-toksičnih katjona ili anjona. U organske i neorganske soli spadaju, na primer, one pripremljene iz kiselina kao što su hlorovodonična, sumporna, sumporasta, vinska, mravlja, hidrobromna, glikolna, limunska, jabučna, fosforna, sukcinilna, sirćetna, azotna, benzoična, askorbinska, p-toluenesulfonična, benzensulfonična, naftalenesulfonična, propionska, ugljena, i slično, ili na primer, amoniova, natrijumova, kalijumova, kalciumova, ili magneziumova.

Pronalazači su utvrdili da formulacijom FSH i mešavinama FSH i LH sa surfaktantom odabranim iz bloka kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic® F68, posebno po mogućstvu Pluronic F68 (BASF, Pluronic F68 je poznat i kao Poloxamer 188) dobijaju stabilne formulacije koje minimalizuju gubitak aktivnog principa (FSH ili FSH i LH) koji je uzrokovan adsorpcijom na površinama bočica i/ili naprave za davanje (na pr. špric, pumpa, kateter, i td.).

Pronalazači su dalje utvrdili da formulisanjem FSH i mešavina FSH i LH sa surfaktantom odabranim iz bloka kopolimera etilen oksida i propilen oksida, po mogućstvu Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic® F68, posebno po mogućstvu Pluronic F68 (BASF, Pluronic F68 je poznat i kao Poloxamer 188) dobijaju stabilnu formulaciju kojom se izbegava problem precipitacije u prisustvu bakteriostatskog agensa, kao što su m-kresol i fenol. Precipitacija, koja rezultira u stvaranje zamagljenih turbid ili mlečnih rastvora nastaje kada se TVVEEN 20 koristi uz m-kresol ili fenol.

Pluronic surfaktanti su blok kopolimeri etilen oksida (EO) i propilen oksida (PO). Ovaj propilen oksid blok (PO) je u sendviču između dva bloka etilen oksida (EO).

Pluronic surfaktanti se sintetizuju u jednom dvostepenom procesu:

1. Jedan hidrofob željene molekulske težine stvara se kontrolisanim dodavanjem propilen oksida u dve hidroksilne grupe propilen glicola; I

2. Etilen oksid se dodaje u sendvič hidrofoba između hidrofilnih grupa.

Kod Pluronic® F77, procenat polioksietilena (hidrofil) je 70%, a molekulska težina hidrofoba (polioksipropilen) iznosi približno 2,306 Da.

Kod Pluronic F87, procenat polioksietilena (hidrofil) je 70%, a molekulska težina hidrofoba (polioksipropilen) iznosi približno 2,644 Da.

Kod Pluronic F88, procenat polioksietilena (hidrofil) je 80%, a molekulska težina hidrofoba (polioksipropilen) iznosi približno 2,644 Da.

Kod Pluronic F68, procenat polioksietilena (hidrofil) je 80%, a molekulska težina hidrofoba (polioksipropilen) iznosi približno 1,967 Da.

Tipična svojstva Pluronic F77 navedena su dole:

Prosečna molekulska težina: 6600;

Tačka topljenja/sipanja: 48°C ;

Fizički oblik @ 20°C : čvrst;

Viskoznost (Brookfield) cps: 480 [tečnosti na 25°C, paste na 60°C i čvrsta na 77°C]; Površinski napon, dynes/cm @ 25°C;

0.1% Konc. : 47.0

0.01% Konc. :49.3

0.001% Konc: 52.8

Napetost na interfejsu, dynes/cm @ 25°C vs. Nujol;

0.1% Konc. : 17.7

0.01% Konc. : 20.8

0.01% Konc. : 25.5

Draves Kvašenje, Sekundi 25°C

1.0%Konc: > 360

0.1% Konc: > 360

Visina pene

Ross Miles, 0.1%, mm @ 50°C: 100

Ross Miles, 0.1%, mm @ 26°C: 47

Dvnamic, 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

Tačka zamagljivanja u vodenom rastvoru, °C

1% Konc: >100

10% Konc: >100

HLB (ravnoteža hidrofil-lipofil): 25

Tipična svojstva Pluronic F87 navedena su dole: Prosečna molekulska težina: 7700;

Tačka topljenja/sipanja: 49°C ;

Fizički oblik @ 20°C : čvrst;

Viskoznost (Brookfield) cps: 700 [tečnosti na 25°C, paste na 60°C i čvrsta na 77°C]; Površinski napon, dynes/cm @ 25°C;

0.1% Konc. : 44.0

0.01% Konc. : 47.0

0.001% Konc: 50.2

Napetost na interfejsu, dynes/cm @ 25°C vs Nujol;

0.1% Konc. : 17.4

0.01% Konc. : 20.3

0.01% Konc. : 23.3

Draves Kvašenje, Sekundi 25°C

1.0% Konc: > 360

0.1% Konc: > 360

Visina pene

Ross Miles, 0.1%, mm @ 50°C: 80

Ross Miles, 0.1%, mm @ 26°C: 37

Dynamic, 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

Tačka zamagljivanja u vodenom rastvoru, °C

1% Konc: >100

10% Konc: >100

HLB (ravnoteža hidrofil-lipofil): 24

Tipična svojstva Pluronic F88 navedena su dole: Prosečna molekulska težina: 11400;

Tačka topljenja/sipanja: 54°C ;

Fizički oblik @ 20°C : čvrst;

Viskoznost (Brookfield) cps: 2300 [tečnosti na 25°C, paste na 60°C i čvrsta na 77°C]; Površinski napon, dynes/cm @ 25°C;

0.1% Konc. : 48.5

0.01% Konc. : 52.6

0.001% Konc: 55.7

Napetost na interfejsu, dynes/cm @ 25°C vs Nujol;

0.1% Konc. : 20.5

0.01% Konc. : 23.3

0.01% Konc. : 27.0

Draves Kvašenje, Sekundi 25°C

1.0%Konc: > 360

0.1% Konc: > 360

Visina pene

Ross Miles, 0.1%, mm @ 50°C: 80

Ross Miles, 0.1%, mm @ 26°C: 37

Dvnamic, 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

Tačka zamagljivanja u vodenom rastvoru, °C

1% Konc: >100

10% Konc: >100

HLB (ravnoteža hidrofil-lipofil): 28

Tipična svojstva Pluronic F68 navedena su dole: Prosečna molekulska težina: 8400;

Tačka topljenja/sipanja: 52°C ;

Fizički oblik @ 20°C : čvrst;

Viskoznost (Brookfield) cps: 1000 [tečnosti na 25°C, paste na 60°C i čvrsta na 77°C]; Površinski napon, dynes/cm @ 25°C;

0.1% Konc. : 50.3

0.01% Konc. : 51.2

0.001% Konc: 53.6

Napetost na interfejsu, dynes/cm @ 25°C vs Nujol;

0.1% Konc. : 19.8

0.01% Konc. : 24.0

0.01% Konc. : 26.0

Draves Kvašenje, Sekundi 25°C

1.0% Konc: > 360

0.1% Konc: > 360

Visina pene

Ross Miles, 0.1%, mm @ 50°C: 35

Ross Miles, 0.1%, mm @ 26°C: 40

Dynamic, 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

Tačka zamagljivanja u vodenom rastvoru, °C

1% Konc: >100

10% Konc: >100

HLB (ravnoteža hidrofil-lipofil): 29

Ostali polimeri koji imaju svojstva slična onima koja su gore navedena mogu takođe da se koriste u formulacijama ovog pronalaska. Preporučeni surfaktant je Pluronic F68, i surfaktanti koji imaju slična svojstva.

Pluronic, posebno Pluronic F68, je po mogućstvu prisutan u formulacijama pri koncentraciji koja je dovoljna da se održi FSH i/ili LH stabilnost tokom željenog perioda skladištenja (na primer 6 do 12 do 24 meseci), i takođe pri koncentracijama koje su dovoljne da se spreči gubitak proteina zbog adsorpcije na površine, kao što su bočica, ampula ili punjenje ili špric.

Po mogućstvu koncentracija Pluronica, posebno Pluronic F68, u tečnim formulacijama je tačno ili oko 0.01 mg/ml do tačno ili oko 1 mg/ml, još bolje tačno ili oko 0.05 mg/ml do tačno ili oko 0.5 mg/ml, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 0.2 mg/ml do tačno ili oko 0.4 mg/ml, a najbolje tačno ili oko 0.1 mg/ml.

The hormon za stimulaciju folikula (FSH) u svojoj suvo zamrznutoj formulaciji je po mogućstvu prisutan pri koncentraciji od (tež./tež.) od ili oko 0.1 do 10 ug/mg ukupne formulacije. U jednom obliku, hormon za stimulaciju folikula (FSH) je prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.3 do 5 ug/mg ukupne formulacije. U dodatnom obliku, hormon za stimulaciju folikula (FSH) je prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.37 do 2 ug/mg ukupne formulacije.

Luteinizirajući hormon (LH) u suvo zamrznutoj formulaciji je po mogućstvu prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.1 to 3 ug/mg ukupne formulacije. U jednom obliku, luteinizirajući hormon (LH) je prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.1 do 1 ug/mg ukupne formulacije. U dodatnom obliku, luteinizirajući hormon (LH) je prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.1 do 0.6 ug/mg ukupne formulacije.

U tečnim formulacijama - uključujući i rekonstituisane formulacije - koje obuhvataju FSH, po mogućstvu koncentracija FSH u toj formulaciji je tačno ili oko 150 lU/ml do tačno ili oko 2,000 lU/ml, još bolje tačno ili oko 300 lU/ml do tačno ili oko 1,500 lU/ml, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 450 do tačno ili oko 750, a najbolje po mogućstvu tačno ili oko 600 lU/ml.

U tečnim formulacijama - uključujući i rekonstituisane formulacije - koje obuhvataju LH, po mogućstvu koncentracija LH u toj formulaciji je tačno ili oko 50 lU/ml do tačno ili oko 2,000 lU/ml, još bolje tačno ili oko 150 do tačno ili oko 1,500 lU/ml, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 300 lU/ml do tačno ili oko 750 IU/ ml, a najbolje po mogućstvu 625 I U/ml.

U formulacijama koje obuhvataju i FSH i LH, odnos FSH prema LH (FSH:LH, IU:IU, FSH meren esejem povećanja težine ovarijuma pacova i LH meren esejem povećanja težine seminalnih vezikula pacova) je po mogućstvu u rasponu od ili oko 6:1 do tačno ili oko 1:6, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 4:1 do tačno ili oko 1:2, a posebno po mogućstvu tačno ili oko 3:1 do tačno ili oko 1:1. Posebno preporučeni odnosi su 1:1 i 2:1.

U suvo zamrznutim formulacijama, surfaktant, na pr. Pluronic F 68, je po mogućstvu prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.001 do tačno ili oko 0.1 mg na mg ukupne formulacije, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 0.01 do tačno ili oko 0.075 mg/mg.

Po mogućstvu, koncentracija Pluronic, posebno Pluronic F68, u rekonstituisanim formulacijama je tačno ili oko 0.01 mg/ml do tačno ili oko 1 mg/ml, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 0.05 mg/ml do tačno ili oko 0.5 mg/ml, a posebno po mogućstvu tačno ili oko 0.2 mg/ml do tačno ili oko 0.4 mg/ml, najbolje po mogućstvu tačno ili oko 0.1 mg/ml.

Po mogućstvu FSH i LH se proizvode rekombinantno, posebno po mogućstvu oni se proizuvode u jajnim ćelijama kineskog hrčka koje su transfektovane vektorom ili vektorima koji obuhvataju DNK kodiranje za humanu glikoprotein alfa-podjedinicu i beta-podjedinicu FSH ili LH. DNK enkodiranje alfa i beta-podjedinica može biti prisutno na istim ili različitim vektorima.

Rekombinantni FSH i LH imaju nekoliko prednosti nad onima koji se dobijaju iz urina. Kultura i tehnike izolacije koje koriste rekombinantne ćelije omogućavaju doslednost između šarži. Nasuprot tome, urinarni FSH i LH u mnogome variraju od šarže do

šarže u karakteristikama kao što su čistoća, model glikozilacije, sijalilacija i oksidacija podjedinica. Zbog veće doslednosti između šarži i čistoće rekombinantnih FSH i LH, ovi hormoni se mogu odmah identifikovati i kvantifikovati korišćenjem tehnika kao što su izoelektrično fokusiranje (IEF). Lakoća sa kojom se rekombinantni FSH i LH

mogu identifikovati i kvantifikovati omogućava bočice po masi hormona (punjenje po masi) umesto punjenja po bioeseju.

Po mogućstvu formulacije FSH ovog pronalaska imaju pH između tačno ili oko 6.0 i tačno ili oko 8.0, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 6.8 do tačno ili oko 7.8, uključujući oko pH 7.0, pH 7.2, i 7.4. Preporučeni pufer je fosfatni, gde su preporučeni kontrajoni natrijumovi ili kalijumovi joni. Fosfatni slani pufers su dobro poznati u stanju tehnike, kao što su Dulbecco Fosfatni puferovani fiziološki rastvor. Puferske koncentacije u ukupnom rastvoru mogu da variraju između tačno ili oko 5mM, 9.5mM, 10mM, 50mM, 100mM, 150mM, 200mM, 250mM, i 500mM. Po mogućstvu koncentracija pufera je tačno ili oko 10mM. Posebno prporučeni je pufer 10 mM u fosfatnim jonima sa pH od 7.0.

Po mogućstvu formulacije mešavina FSH i LH ovog pronalaska imaju pH između tačno ili oko 6.0 i tačno ili oko 9.0, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 6.8 do tačno ili oko 8.5, uključujući oko pH 7.0, pH 8.0, i 8.2, najbolje po mogućstvu tačno ili oko pH 8.0.

Ovaj pronalazak je usmeren na tečne formulacije kao I na suvo zamrznute (liofilizovane) formulacije koje se mogu rekonstituisati, u kojima rastvarač (isto I za rekonstituciju) je voda za injekcije. Tečne formulacije mogu biti pojedinačne ili multiple doze. One tečne kao i suvo zamrznute FSH i/ili LH formulacije ovog pronalaska koje su namenjene za multidoznu upotrebu po mogućstvu obuhvataju bakteriostatski agens, kao što su fenol, m-kresol, p-kresol, o-kresol, hlorokresol, benzil alkohol, alkilparaben (metil, etil, propil, butil i slično), timol, benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid, natrijum dehidroacetate i timerosal. Posebno preporučeni su fenol, benzil alkohol i m-kresol, još bolji su fenol i m-kresol, a najbolji je m-kresol. Ovaj bakteriostatski agens se koristi u količini koja će da da koncentraciju koja je efektivna da obezbedi formulaciji da bude praktično bez bakterija (pogodna za injekcije) tokom perioda višekratnog doziranja, koji može biti tačno ili oko 12 ili 24 časova do tačno ili oko 12 ili 14 dana, po mogućstvu tačno ili oko 6 do tačno ili oko 12 days. Ovsj bakteriostatski agens je po mogućstvu prrisutan u koncentraciji od ili oko 0.1% (masa bakteriostatskog agensa/masa rastvarača) do tačno ili oko 2.0%, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 0.2% do tačno ili oko 1.0%. U slučaju benzil alkohola, posebno preporučena je koncentracija od 0.9%). U slučaju fenola, posebno preporučena je tačno ili oko 0.5%. U slučaju m-kresola, posebno preporučena je koncentracija od ili oko 0.3 % (na pr. tačno ili oko 3 mg/ml u WFI).

U preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje tečni farmaceutski sastav, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koji obuhvata FSH ili njegovu varijantu, jedan surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i jedan bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje tečni farmaceutski sastav, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koji obuhvata LH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje tečni farmaceutski sastav, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koji obuhvata FSH i LH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol. Po mogućstvu the FSH i LH su prisutni u odnosu (FSH.LH) od ili oko 2:1 do tačno ili oko 1:1.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju tečnog farmaceutskog sastava, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koji obuhvata formiranje vodenog rastvora FSH ili njegove varijante, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol, i WFI.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju tečnog farmaceutskog sastava, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koji obuhvata formiranje vodenog rastvora LH, surfaktanta odabranog iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol, i WFI.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju tečnog farmaceutskog sastava, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koji obuhvata formiranje vodenog rastvora FSH i LH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol, i WFI.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju pakovanja farmaceutskog sastava koji obuhvata izdavanje rastvora koji obuhvata FSH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju pakovanja farmaceutskog sastava koji obuhvata izdavanje rastvora koji obuhvata FSH i LH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje proizvodni artikal za upotrebu u humanoj farmaciji, koji obuhvata bočicu koja obuhvata rastvor FSH ili Varijantu FSH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenoal, po mogućstvu m-kresol, i pisani materijal koji potvrđuje da takav rastvor može da se čuva tokom perioda od ili oko dvadeset četiri časa ili ili duže po prvoj upotrebi. Po mogućstvu ovaj pisani materijal potvrđuje da se ovaj rastvor može držati do tačno ili oko 12 ili 14 dana po prvoj upotrebi.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje proizvodni artikal za upotrebu u humanoj farmaciji, koji obuhvata bočicu koja obuhvata rastvor FSH i LH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenola, po mogućstvu m-kresol, i pisani materijal koji potvrđuje da takav rastvor može da se čuva tokom perioda od ili oko dvadeset četiri časa ili ili duže po prvoj upotrebi. Po mogućstvu ovaj pisani materijal potvrđuje da se ovaj rastvor može držati do tačno ili oko 12 ili 14 dana po prvoj upotrebi.

U posebno preporučenom obliku, ova formulacija obuhvata m-kresol i Pluronic F68. Pronalazači su sa iznenađenjem utvrdili da formulacije koje obuhvataju Pluronic F68 se ne talože u prisustvu m-kresola, što je problem primećen sa drugim surfaktantima.

Pre prve upotrebe, odnosno pre nego što se otvori zaptiv na bočici, ampuli ili punjenju, formulacije ovog pronalaska mogu da se čuvaju najmanje tačno ili oko 6 meseci, 12 meseci ili 24 meseci. U preporučenim uslovima čuvanja, pre prve upotrebe, ove formulacije se čuvaju zaštićene od jakog svetla (po mogućstvu u mraku), na temperaturama od ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 4-5°C.

U jednom specifičnom obliku, ovaj pronalazak opisuje suvo zamrznutu formulaciju za rekonstituisanje, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koja obuhvata FSH ili njegove varijante i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, po mogućstvu Pluronic F 68.

U još jednom specifičnom obliku, ovaj pronalazak opisuje suvo zamrznutu formulaciju za rekonstituisanje, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koja obuhvata LH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, po mogućstvu Pluronic F68.

U još jednom specifičnom obliku, ovaj pronalazak opisuje suvo zamrznutu formulaciju, po mogućstvu za multidoznu upotrebu, koja obuhvata FSH i LH, surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, po mogućstvu Pluronic F68. Po mogućstvu , FSH i LH su prisutni u odnosu (FSH:LH) od ili oko 2:1 do tačno ili oko 1:1.

U još jednom specifičnom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju suvo zamrznute formulacije, po mogućstvu za multidoznu upotrebu posle rekonstituisnja, koja obuhvata pravljenje mešavine FSH ili njegove varijante sa surfaktantom odabranim iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i podvrgavanje ove mešavine liofilizaciji.

U još jednom specifičnom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju suvo zamrznute formulacije, po mogućstvu za multidoznu upotrebu posle rekonstituisanja, koji obuhvata pravljenje mešavine LH sa surfaktantom koji je odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i podvrgavanje ove mešavine liofilizaciji.

U još jednom specifičnom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju suvo zamrznute formulacije, po mogućstvu za multidoznu upotrebu posle rekonstituisanja, koja obuhvata pravljenje mešavine FSH i LH kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i podvrgavanje ove mešavine liofilizaciji.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju pakovanja farmaceutskog sastava koja obuhvata izdavanje suvo zamrznute mešavine koja obuhvata FSH i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju pakovanja farmaceutskog sastava koja obuhvata izdavanje suvo zamrznute mešavine koja obuhvata LH i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 u jednoj posudi.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje metodu za proizvodnju pakovanja farmaceutskog sastava koja obuhvata izdavanja suvo zamrznute mešavine koji obuhvata FSH kao i LH i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68 u jednoj posudi.

U još jednom preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje proizvodni artikal za upotrebu u humanoj farmaciji, koji obuhvata prvu posudu ili bočicu koja obuhvata suvo zamrznuti FSH ili varijantu FSH i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68. Druga posuda ili bočica sadrži razblaživač za rekonstituisanje, po mogućstvu vodu i bakteriostatski agens odabran iz m-kresola i fenol, po mogućstvu m-kresol. Metionin u tečnoj i/ili rekonstituisanoj formulaciji je po mogućstvu prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.01 do tačno ili oko 1.0 mg/ml, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 0.05 do tačno ili oko 0.5 mg/ml, a najbolje po mogućstvu tačno ili oko 0.1 mg/ml.

Po mogućstvu formulacije ovog pronalaska sadrže mono- ili disaharid ili šećerni alkohol kao stabilizator I agens za podešavanje toniciteta, kao što su saharoza, dekstroza, laktoza, manitol i/ili glicerol. Najbolje je saharoza, po mogućstvu pri koncentraciji od od ili oko 60 mg/ml.

Kao što je gore rečeno, ovaj pronalazak opisuje tečne formulacije za jednokratnu upotrebu i za multidoznu upotrebu, koje sadrže bakteriostatski agens, ili u koje se dodaje bakteriostatski agens kada je formulacija rekonstituisana. Formulacije ovog pronalaska su pogodne za farmaceutsku ili veterinarsku upotrebu.

Kao što je gore rečeno, u preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje proizvodni artikal, koji obuhvata materijal za pakovanje i bočicu koja obuhvata rastvor FSH ili Varijante FSH, LH, ili FSH i LH, Pluronic F68 i bakteriostatski agens odabran iz fenola i m-kresola, opciono sa puferima i/ili drugim ekscipijensima, in vodenom razblaživaču, naglašeno time da pomenuti materijal za pakovanje comprises pisani materijal koji govori da takav rastvor može da se čuva tokom perioda od dvadeset četiri časa ili duže posle prve upotrebe. Ovaj pronalazak dalje obuhvata proizvodni artikal, koji obuhvata materijal za pakovanje, a bočica koji obuhvata formulaciju FSH ili Varijante FSH u skladu sa ovim pronalaskom, naglašeno time da pomenuti materijal za pakovanje comprises pisani materijal koji upućuje pacijenta da rekonstituiše SH ili Varijantu FSH u vodenom razblaživaču da se dobije rastvor koji se može čuvati tokom perioda od dvadeset četiri časa ili duže.

Kao što je gore rečeno, u preporučenom obliku, ovaj pronalazak opisuje proizvodni artikal, koji obuhvata materijal za pakovanje i bočicu koja obuhvata suvo zamrznuti FSH ili Varijantu FSH, LH ili Varijantu LH, ili FSH i LH, Pluronic F68. Bakteriostatski agens u drugoj posudi koji sadrži razblaživač je odabran iz fenola i m-kresola, opciono sa dodatnim ekscipijensima, naglašeno time da pomenuti materijal za pakovanje uključuje pisani materijal koji govori da takav rastvor može da se čuva tokom perioda od dvadeset četiri časa ili duže posle prve upotrebe.

Raspon proteinskog hormona u tim formulacijama ovog pronalaska uključuje količine koje se dobijaju po rekonstituisanju, koncentacije od oko 1.0 ug/ml do oko 50 mg/ml, iako su i manje i veće koncentacije operabilne i zavise od nameravanog nosača za supstancu, na pr., rastvor formulacija će se razlikovati za transdermalni flaster, pulmonarni, transmukozualni, ili osmotski metod ili upotrebu mikro pumpe. Koncentracija proteinskog hormona je po mogućstvu tačno ili oko 5.0 ug/ml do tačno ili oko 2 mg/ml, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 10 ug/ml do tačno ili oko 1 mg/ml, a najbolje po mogućstvu tačno ili oko 50 ug/ml do tačno ili oko 200 ug/ml.

Po mogućstvu formulacije ovog pronalaska zadržavaju najmanje tačno ili oko 80% FSH aktivnosti i/ili LH aktivnosti u trenutku pakovanja tokom perioda od 24 meseci (pre prve upotrebe). FSH aktivnosti mogu se meriti korišćenjem Steelman-Pohlev bioeseja povećanja težine jajnika<5>. LH aktivnosti mogu e meriti korišćenjem bioeseja povećanja težine seminalnih vezikula.

Tečne formulacije ovog pronalaska mogu se pripremiti procesom koji obuhvata mešanje FSH ili Varijante FSH, LH, ili mešavinu FSH i LH i Pluronic F68 i bakteriostatskog agensa odabranog iz fenola i m-kresola kao čvrsti ili rastvaranjem FSH ili Varijante FSH, LH, ili mešavine FSH i LH ("protein") i Pluronic F68 i bakteriostatskog agensa odabranog iz fenola i m-kresola u vodenom razblaživaču. Mešanje ovih komponanti i njihovo rastvaranje u u vodenom razblaživaču obavlja se korišćenjem konvencionalnih procedura rastvaranja i mešanja. Da se pripremi pogodna formulacija, na primer, izmerena količina FSH ili Varijante FSH, LH ili mešavina FSH i LH u pufereovanom rastvoru kombinuje se sa Pluronic F68 i bakteriostatskim agensom koji je odabran iz fenola i m-kresola u puferovanom rastvoru u količinama koje su dovoljne da obezbede ovaj protein, Pluronic F68 i bakteriostatski agens u željenim koncentacijama. Dobijeni rastvor se onda deli u bočice, ampule ili punjenja. Varijacije ovog procesa dobro su poznate stručnjacima za ovu oblast. Na primer, redosled kojim se dodaju komponente, da li se koriste dodatni aditivi, temperatura i pH na kojima se priprema ova formulacija, sve predstavljaju faktore koji se moraju optimizovati za datu koncentraciju i označeni način davanja.

U preporučenom obliku, tečne formulacije ovog pronalaska se prave pripremom individualne količine osnovnog rastvora poznatih koncentracija svih komponenata ove formulacije (na pr. pufer natrijum fosfati, saharoza, TVVEEN, metionin, FSH i/ili LH), i alikvotske volumetrijske količine da se dobije "osnovni rastvor" istog sastava kao i finalna formulacija. Ovaj "osnovni rastvor" je po mogućstvu filtriran kroz Duropore® (Millipore) 0.22 mikron PDF membranu, da se uklone mikroorganizmi, i onda se alikvoti dele u pojedinačne posude, kao što su bočice, ampule ili punjenja.

Suvo zamrznute formulacije ovog pronalaska mogu se pripremiti pomoću procesa koji obuhvata mešanje FSH ili Varijante FSH, LH ili Varijantu FSH, ili mešavinu FSH i LH i Pluronic F68 kao I dodatne ekscipijense kao što je antioksidans i/ili pufer i podvrgavanje ove mešavine liofilizaciji. Mešanje ovih komponenti i njihova liofilizacija obavljaju se korišćenjem konvencionalnih procedura. Da se pripremi odgovarajuća formulacija, na primer, izmerena količina FSH ili Varijante FSH, LH ili Varijante LH ili mešavine FSH i LH kombinuje se sa Pluronic F68 i dobijena mešavina se liofilizuje I onda raspoređuje u bočice, ampule ili punjenja. Varijacije ovog procesa poznate su stručnjacima za ovu oblast. Na primer, redosled kojim se dodaju komponente, da li se koriste odatni aditivi, temperatura i pH na kojima se priprema ova formulacija, sve predstavljaju faktore koji se moraju optimalizovati za datu koncentraciju i označeni načlin davanja.

Formulacije ovog pronalaska mogu se davati I korišćenjem poznatih naprava. U primere koji obuhvataju ove ssiteme sa pojedinačnom bočicom spadaju injektori tipa olovke za davanje rastvora kao što su EasvJect®, Gonal-F® Pen, Humaject®, NovoPen®, B-D®Pen, AutoPen®, i OptiPen®.

Proizvodi koji su obuhvaćeni ovim zahtevima uključuju i materijal za pakovanje. Taj materijal za pakovanje pruža, uz informacije koje iziskuju regulatorne vlasti I agencije, uslove pod kojima se proizvod može koristiti. Taj materijal za pakovanje ovog pronalaska daje I uputstva za pacijenta da rekonstituiše FSH ili Varijantu FSH u vodenom razblaživaču da se formira rastvor i da se koristi taj rastvor tokom perioda od dvadeset četiri časa ili dužem za dve bočice, vlažnog/suvog proizvoda. Za pojedinačne bočice, proizvod u vidu rastvora, etiketa će govoriti da taj rastvor može da se čuva posle prve upotrebe tokom perioda od dvadeset četiri časa ili duže, po mogućstvu do 12 ili 14 dana. Proizvodi obuhvaćeni ovim zahtevima pogodni su za upotrebu u humanoj farmaciji.

Stabilne konzervisane formulacije mogu se pripremati za pacijente kao bistri rastvori. Takav rastvor može biti za pojedinačnu upotrebu ili se može koristiti više puta i može biti dovoljan za jedan ciklus ili više ciklusa terapije pacijenta I na taj način obezbediti pogodniji terapijski ržim od onih koji trenutno postoje.

FSH ili Varijanta FSH, LH, ili mešavine FSH i LH bilo kao stabilne ili konzerivsane formulacije ili rastvori koji su ovde opisani, mogu se davati pacijentu u skladu sa ovim pronalaskom koristeći široki spektar metoda dabanja uključujući SC ili IM injekcije; transdermalni, pulmonarni, transmukozni, implante, osmotsku pumpu, punjenje, micro pumpu, oralni, ili drugi koje označava stručnjak za ovu oblast, kao što je dobro poznato u stanju tehnike.

Sledeći primeri su dati samo da se ilustruje priprema ovih formulacija i sastava ovog pronalaska. Obim ovog pronalaska neće se tumačiti tako da obuhvata samo ove primere.

Primer 1

Komparativne formulacije

Materijali

Sledeće ispitivanje proceniivalo je sledeće parametre za veliki broj formulacija:

• Kompatibilnost surfaktanta i bakteriostatskog agensa

• Oksidaciju alfa-podjedinica

Ove formulacije su bile formulacije sa više doza i sadržale su bilo TVVEEN 20 ili Pluronic F68 kao i bakteriostatski agens. Procenjivana se sledeća tri bakteriostatska agensa:

• Benzil alkohol 0.9%

• m-Kresol 0.3%

• Fenol 0.5%

TVVEEN 20 i Pluronic F68 su korišćeni u sledećim rasponima koncentacije:

• TVVEEN 20 : raspon od 10 do 100 ug/g

• Pluronic F68 : raspon od 10 do 100 ug/g

Pripremljeni rastvori navedeni su na Tabeli 1.

Iz vizuelne inspekcije ovih formulacija, utvrđeno je da TVVEEN 20 ne može da se koristi sa m-kresolom i fenolom jer FSH formulacije koje sadrže TVVEEN 20 im-kresol ili TVVEEN 20 i fenol se pojavljuju kao bele neprozirne suspenzije. Nasuprot tome, FSH formulacije koje sadrže Pluronic F68 nisu manifestovale ovaj problem sa m-kresolom i fenolom. Upotreba Pluronic F68 omogućava korišćenje fenola im-kresola.

Kombinacija FSH i Pluronic F68 sa antioksidantima

Sledeći antioksidansi procenjivani su da se utvrdi njihova sposobnost da inhibiraju oksidaciju a-podjedinica u prisustvu Pluronic F68:

• Metionin : raspon od 10 do 100 ug/g

• Askorbinska kiselina : raspon od 10 do 100 ug/g

Saharoza i Manitol su korišćeni kao agensi za tonicitet, a TVVEEN 20 ili Pluronic su dodavani u koncentraciji od 100 ug/g.

Pripremljene formulacije navedene su na Tabeli 2.

20 g svake formulacije pripremljeno je u Falcon polipropilenskim epruvetama i filtrirano kroz 3cm<2>0.22 |am Millex-GV Špricom vođenu filtersku jedinicu Durapore, a onda su analizirane vrednosti na t=0. Ovi rastvori su onda čuvani na 40°C i testirani u skladu sa sledežom shemom:

HPLC Reverzne faze otkriva da u formulacijama sa sadržajem FSH, Pluronic F68,m-kresola i metionina (od 10 i 100 ug/ml), oksidacija a-podjedinica FSH kada se ta formulacija čuva na 40°C, je u mnogome smanjena, u poređenju sa formulacijom koja ne sadrži metionin, kao što se može videti na Slici 1. Na osnovu prošeka ova dva eksperimenta, u toj formulaciji koja ne sadrži metionin, procenat oksidizovane a-podjedinice je 2.3 u vremenu T=0, 4.0 kaa je T= 1 nedelja, i 7.1 kada je T= 2 nedelja. U formulaciji koja sadrži 10 ug/ml metionina, procenat oksidizovane a-podjedinice je 2.0 kada je T=0, 3.2 kada je T= 1 nedelja, i 3.8 kada je T= 2 nedelja. U formulaciji koja sadrži 100 ug/ml metionina, procenat oksidizovane a-podjedinice je 1.8 atT=0, 1.7 kada je T= 1 nedelja, i 1.3 kada je T= 2 nedelja.

Primer 2

Tečna jednodozna formulacija rekombinantnof FSH za supkutane ili

intramuskularne injekcije

Na osnovu rezultata Primera 1, pripremljena je sledeća formulacija.

Komponente 1 do 7 navedene na Tabeli 3 pripremljene su kao volumetrijski rastvori u WFI. ALikvoti svakog od rastvora dopdavani su u posudu za mešanje da se dobije "osnovni rastvor". Ovaj osnovni rastvor raspoređen je u bočice tako da se sadrži 10.9 mikrograma (150 IU) ili 5.45 mikrograma (75 IU) FSH.

Sa rekombinantnim FSH, bioaktivnosti i specifične aktivnosti su konzistentne, čime se omogućava da se FSH puni po masi, umesto bioesejem.

Ove bočice were su punjene I zaptivane u sterilnim uslovima. Takva formulacija ima rok trajanja do dve godine u uslovima sobne temperatures.

Primer 3

Tečne multi-dozne formulacije rekombinantnog FSH za supkutane ili

intramuskularne injekcije

Na osnovu rezultata Primera 1, pripremljena je sledeća multi-dozna formulacija.

Komponente 1 do 7 navedene na Tabeli 4 pripremljene su kao volumetrijski rastvori u WFI. Alikvoti svakog od rastvora dodati su u posudu za mešanje da se dobije "osnovni rastvor". Ovaj osnovni rastvor raspodeljen je u bočice tako da u svakoj ima po 22.2 mikrograma (305 IU), 33.3 mikrograma (458 IU) i 66.7 mikrograma (916 IU) FSH. Dobijene formulacije daju ukupno 300, 450 i 900 IU FSH.

Ova punjenja su punjena I zaptivana u sterilnim uslovima. Ovakva multi-dozna formulacija može se čuvati na tačno ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 4-5°C, sve do prve upotrebe maksimalno do dve godine. Posle prve upotrebe, punjenje treba čuvati na tačno ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 4-5°C, tokom multi-doznog perioda, koji može biti 24 časova, 2 dana, ili do 12 ili 14 dana.

Primer 4

Tečna formulacija rekombinantnog LH za pojedinačnu dozu za supkutane ili

intramuskularne injekcije

Pripremljena je sledeća formulacija.

Komponente 1 do 7 navedene na Tabeli 5 pripremljene su kao volumetrijski rastvori u WFI. Alikvoti svakog od rastvora dodavani su u posudu za mešanje da se dobije "osnovni rastvor". Ovaj osnovni rastvor raspoređen je u bočice tako da u svakoj ima po 3 mikrograma (75 IU) LH. Tako dobijena formulacija daje pojedinačnu dozu od 75

IU LH.

Sa rekombinantnim LH, bioaktivnosti i specifične aktivnosti su konzistentne I dozboljava se da se LH puni po masi, a ne po bioeseju.

Ove bočice su punjene I zaptivane u sterilnim uslovima. Ovakva formulacija ima rok trajanja od najviše dve godine.

Primer 5

Tečne multi-dozne formulacije rekombinantnih FSH i LH (2:1) za supkutane ili

intramuskularne injekcije

Sledeće multi-dozne formulacije FSH i LH pripremljene su, gde je odnos FSH:LH bio 2:1.

Komponente 1 do 8 navedene na Tabeli 6 pripremljene su kao volumetrijski rastvori u WFI. Alikvoti svakog od rastvora dodavani su u posudu za mešanje i mešani da se dobije "osnovni rastvor". Vrednost pH osnovnog rastvora podešena je na 8.0, ako je neophodno, dodavanjem NaOH ili HCI. Ovaj osnovni rastvor je presipan u punjenja tako da sadrži 18.3 mikrograma LH (457 IU) sa 66.7 mikrograma FSH (916 IU), namenjeno za 6 doza od 150 IU FSH u svakoj; 9.2 mikrograma LH (230 IU) sa 33.3 mikrograma FSH (458 IU), namenjeno za 3 doze od 150 IU FSH u svakoj; i 6.1 mikrograma LH (152.5 IU) sa 22.23 mikrograma FSH (305 IU), namenjeno za 2 doze od 150 IU FSH u svakoj.

Ova punjenja su napunjena I zaptivena u sterilnim uslovima. Takva multi-dozna formulacija može se čuvati na tačno ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 4-5°C sve do prve upotrebe najduže do dve godine. Posle prve upotrebe, punjenje treba čuvati na tačno ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 4-5°C, tokom multi-dozno perioda, koji može biti 24 časova, 2 dana, ili maksimalno do 12 ili 14 dana.

Primer 6

Tečne multi-dozne formulacije rekombinantnih FSH i LH (1:1) za supkutane ili

intramuskularne injekcije

Sledeće multi-dozne formulacije of FSH i LH pripremljene su, gde je odnos FSH:LH bio 1:1.

Komponente 1 do 8 navedene na Tabeli 7 pripremljene su kao volumetrijski rastvori u WFI. Alikvoti svakog od rastvora dodavani su u posudu za mešanje i mešani da se dobije "osnovni rastvor". Vrednost pH osnovnog rastvora podešena je na 8.0, ako je neophodno, dodavanjem NaOH ili HCI. Taj osnovni rastvor prsipan je u punjenja tako da sadrži 36.6 mikrograma LH (914 IU) sa 66.7 mikrograma FSH (916 IU), što je namenjeno za 6 doza po 150 IU FSH u svakoj; 18.4 mikrograma LH (460 IU) sa 33.3 mikrograma FSH (458 IU), namenjeno za 3 doze po 150 IU FSH u svakoj; i 12.2 mikrograma LH (305 I U) sa 22.23 mikrograma FSH (305 I U), namenjeno za 2 doze po 150 IU FSH u svakoj.

Ova punjenja su punjena i zaptivana u sterilnim uslovima. Takva multi-dozna formulacija može se čuvati na tačno ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu na tačno ili oko 4-5°C sve do prve upotrebe najduže do dve godine. Posle prve upotrebe, to punjenje treba čuvati na tačno ili oko 2-8°C, još bolje po mogućstvu tačno ili oko 2-8°C, a najbolje po mogućstvu tačno ili oko 4-5°C, tokom multi-doznog perioda, koji može biti 24 časa, 2 dana, ili do 12 ili 14 dana.

Primer 7

Eksperimentalna stabilnost za tečne multi-dozne formulacije FSH mešano sa

LH

7.1. Analiza HPLC reverzne faze da se utvrdi sadržaj proteina

Formulacija iz Primera 5 (6 doza) procenjivana je na sadržaj proteina kako FSH, tako i LH, korišćenjem metode HPLC reverzne faze.

Proteinski sadržaj (FSH i LH) meren je u nultoj vremenskoj tačci, i posle 1, 2, 3 i 6 meseci čuvanja ove formulacije na 4°C. Rezultati su navedeni na Tabeli 8 kao mikrogrami FSH ili LH na gram rastvarača.

7.2. Esej oksidizovanih alfa-podjedinica

Procenat oksidizovanih alfa-podjedinica u formulaciji Primera 5 meren je korišćenjem metode HPLC reverzne faze (RP-HPLC).

Procenat oksidizovanih alfa-podjedinica meren je u nultoj vremenskoj tačci, i posle 1, 2, 3 i 6 meseci čuvanja ove formulacije na 4°C. Rezultati su navedeni na Tabeli 8.

7.3. In vivo esej FSH

Formulacija Primera 5 (6 doza) testirana je na FSH aktivnosti korišćenjem Steelman-Pohlev bioeseja povećanja težine ovarijuma u nultoj vremenskoj tačci, i posle 1, 2, 3 i 6 meseci čuvanja ove formulacije na 4°C. Rezultati su navedeni na Tabeli 8 I izraženi u internatcaionalnim jedinicama (IU) na gram rastvarača.

7.4. In vivo esej LH

Formulacija Primera 5 (6 doza) testirana je na LH aktivnosti korišćenjem bioeseja povećanja težine seminalnih vezikula pacova u nultoj vremenskoj tačci, i posle 1, 2, 3 i 6 meseci čuvanja ove formulacije na 4°C. Rezultati su navedeni na Tabeli 8 I izraženi u internatcaionalnim jedinicama (IU) na gram rastvara.

7.5. Procena slobodnih podjedinica (rFSH+rLH)

Za formulaciju Primera 5 procenat slobodnih podjedinica procenjivan je korišćenjem

SDS-PAGE.

Merenja su obavljana u nultoj vremenskoj tačci, i posle 1, 2 ,3 i 6 meseci čuvanja na 4°C. Rezultati su izraženi kao procenat ukupnog proteina (rFSH + rLH), i navedeni su na Tabeli 8.

7.5. Procena agregata

Za formulaciju Primera 5, procenat agregata procenjivan je pomoću SDS-PAGE kako je gore opisano za procenu slobodnih podjedinica u 7.5., osim što je veća molekulska težina agregata određivana kao procenat ukupnih proteina (rFSH + rLH). Merenja su obavljana u nultoj vremenskoj tačci, i posle 1, 2 ,3 i 6 meseci čuvanja na 4°C.

Rezultati su navedeni su na Tabeli 8.

7.6. Vidljive čestice

Formulacija Primera 5 procenjivana je vizuelno na čestice u nultoj vremenskoj tačci, i posle 3 i 6 meseci čuvanja na 4°C. Rezultati su navedeni su na Tabeli 8.

7.7.pH

Vrednost pH formulacije Primera 5 merena je u nultoj vremenskoj tačci, i posle 1,2,3 i 6 meseci čuvanja na 4°C. Rezultati su navedeni su na Tabeli 8.

Primer 8

FSH i LH suvo zamrznuta multidozna formulacija

Pripremljene su dve suvo zamrznute formulacije A i B sledećeg sastava:

Proizvodni proces sastoji se od direktnog mešanja supstance leka sa sastojcima, filtracije dobijenog rastvora i liofilizacije filtrata.

Ovde je dat opis svake faze ovog procesa:

U izmerenu posudu dodati WFI, di-natrijum hidrogen fosfat dihidrat, natrijum dihidrogen fosfat monohidrat, Saharoza, Pluronic F68 5% i L-metionin i mešati

10 minuta dok se potpuno ne rastvori.

proveriti pH i eventualno korigovati do pH 7.00 ± 0.2 sa NaOH 10% ili

razblaženim H3P04

dodati FSH i LH u gore pripremljenu mešavinu i blago mešati dobijeni rastvor

10 minuta.

ponovo proveriti pH i eventualno podesiti do 7.0 ± 0.1 s 10% NaOH ili

razblaženim H3P04.

filtrirati ovaj rastvor sa 0.22[ imDurapore membranom i filtracijskim koeficijentom ne manjim od 15g/cm2, pod protokom azotnog gasa il pritiskom ne preko 1.5 atm.

rastvor prikupiti u prethodno sterilizovanu bočicu.

sipati pripremljeni rastvor u staklenu posudu, staviti zatvarač i staviti napunjene

bočice na podmetač od nerđajućeg čelika.

ove podmetače staviti u aparat za sušenje zamrzavanjem i liofilizovati proizvod koristeći sledeće cikluse za sušenje zamrzavanjm:

• Ekvilibrisati na +4°C oko 20 mins.

• temperaturu polica dovesti na -25°C i održavati 2 časa.

• temperaturu polica dovesti na -15°C i održavati 1 čas.

• temperaturu polica dovesti na -45°C i održavati 3 časa.

• dovesti temperaturu kondenzatora na -65°C.

• u komori aktivirati vakuum.

• Kada vacuum dostigne vrednot od 7x10"<2>mBar podići temperature polica do -10°C i održavati 14 časova. • Podići temperaturu polica do +35°C za 8 časova i održavati do kraja ciklusa (14 časova).

• Deaktivirajte vacuum i pustite da suvi azot uđe u komoru.

• Zatvaranje obavitepomoću automatskog sistema u aparatu za sušenje zamrzavanjem. • Zaptivanje zatvorenih bočica obavite odgovarajućim zatvaračima.

Formulacije A i B su čivane na 25 ± 2°C, i testirane na stabilnost i biološku aktivnost kao što je dole navedeno. Pre analize ovih sastava, oni se rkonstituišu korišćenjem vode za injekcije koja uključuje 0.3% m-Kresola kao bakteriostatski agens.

Vrednosti stabilnosti i biološke aktivnosti određene su na sledeći način:

• In vivo esej FSH : Ova formulacija je testirana na FSH aktivnosti korišćenjem Steelman-Pohlev bioeseja povećanja težine ovarijuma • In vivo esej LH : Ova formulacija je testirana na LH aktivnosti korišćenjem bioeseja povećanja težine semenih kesica pacova • Esej oksidizovanih alfa-podjedinica: Procenat of oksidizovanih alfa-podjedinica meren je metodom HPLC reverzne faze (RP-HPLC). • Procena slobodnih podjedinica (rFSH + rLH): Procenat slobodnih podjedinica procenjivan je pomoću SDS-PAGE. • Procena agregata : Procenat agregata procenjivan je pomoću SDS-PAGE kako je opisano gore za procenu slobodnih podjedinica.

Ovi biološki testovi obavljeni su u skladu sa propisima Evropske farmakopeje. Ovi su testovi posebno opisani u monografiji "Menotropin".

Tabela 9 rezimira rezultate analitičkih testova vezanih za stabilnost i biološku aktivnost formulacije A. Ove vrednosti suodređivane u 4 kontrolne tačke: nultoj vremenskoj tačci, posle 1 mesec, 3 meseca i 6 meseci čuvanja na temperaturi od 25 ±2°C.

Tabela 10 rezimira rezultate analitičkih testova koji se odnose na stabilnost i biološku aktivnost formulacije B. Ove vrednosti suodređivane u 4 kontrolne tačke: nultoj vremenskoj tačci, posle 3 meseca, 6 meseci i 9 meseci čuvanja na temperaturi od 25 ±2°C.

Iz TABELA 9 i 10 može se zaključiti da je biološka aktivnost formulacija A i B dobro očuvana posle 9 meseci čuvanja. Ove formulacije imaju visoku stabilnost.

Ova visoka stabilnost nije pod uticajem visoke količine rekombinantnih FSH i rekombinantnih LH.

Sekvence:

SEQ ID NO. 1: humani glikoprotein a-podjedinica;

SEQ ID NO. 2: hFSH p-podjedinica

SEQ ID NO. 3: hFSH p-podjedinica varijanta 1

SEQ ID NO. 4: hFSH p-podjedinica varijanta 2

SEQ ID NO. 5: hFSH p-podjedinica varijanta 3

SEQ ID NO. 6: hLH p-podjedinica

Claims

1. Tečni farmaceutski sastav koji obuhvata hormon za stimulaciju folikula (FSH) ili njegove varijante, kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

2. Tečni farmaceutski sastav koji obuhvata hormon za stimulaciju folikula (FSH) ili varijantu i luteinizirajući hormon (LH) ili njegove varijante, kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

3. Tečni farmaceutski sastav koji obuhvata luteinizirajući hormon (LH) ili njegove varijante, kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

4. Tečni farmaceutski sastav u skladu sa svim prethodnim zahtevima, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula (FSH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 150 lU/ml do tačno ili oko V200 lU/ml.

5. Tečni farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 4, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula (FSH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 300 lU/ml do tačno ili oko 900 lU/ml.

6. Tečni farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 5, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula (FSH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 600 lU/ml.

7. Tečni farmaceutski sastav u skladu sa zahtevima 2 ili 3, naglašeno time da luteinizirajući hormon (LH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 150 lU/ml do tačno ili oko 1'200 lU/ml.

8. Tečni farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 7, naglašeno time da luteinizirajući hormon (LH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 300 lU/ml do tačno ili oko 750 lU/ml.

9. Suvo zamrznuta formulacija koja obuhvata hormon za stimulaciju folikula (FSH) ili njegove varijante, kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

10. Suvo zamrznuta formulacija koja obuhvata luteinizirajući hormon (LH) ili njegove varijante, kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

11. Suvo zamrznuta formulacija koja obuhvata hormon za stimulaciju folikula (FSH) ili njegove varijante kao i luteinizirajući hormon (LH) ili njegove varijante, kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68.

12. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevima 9 to 11, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula (FSH) bude prisutan pri koncentraciji od (tež./tež.) od ili oko 0.1 do 10 ug/mg ukupne formulacije.

13. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevom 12, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula (FSH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.3 do 5 ug/mg ukupne formulacije.

14. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevom 13, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula (FSH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.37 do 2 ug/mg ukupne formulacije.

15. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevima 9 do 11, naglašeno time da luteinizirajući hormon (LH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.1 do 3 ug/mg ukupne formulacije.

16. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevom 15, naglašeno time da luteinizirajući hormon (LH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.1 do 1 ug/mg ukupne formulacije.

17. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevom 16, naglašeno time da luteinizirajući hormon (LH) bude prisutan pri koncentraciji od ili oko 0.1 do 0.6 ug/mg ukupne formulacije.

18. Farmaceutski sastav u skladu sa svim zahtevima od 1 do 17, naglašeno time da je surfaktant Pluronic F68.

19. Farmaceutski sastav u skladu sa svim prethodnim zahtevima, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula bude human hormon za stimulaciju folikula i/ili luteinizirajući hormon (LH) bude humani luteinizirajući hormon (LH).

20. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 19, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula bude urinarni humani hormon za stimulaciju folikula i/ili luteinizirajući hormon (LH) bude urinarni humani luteinizirajući hormon (LH).

21. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 19, naglašeno time da hormon za stimulaciju folikula bude rekombinantni humani hormon za stimulaciju folikula i/ili luteinizirajući hormon (LH) bude rekombinantni humani luteinizirajući hormon (LH).

22. Farmaceutski sastav u skladu sa svim prethodnim zahtevima, naglašeno time da odnos FSH prema LH bude u rasponu od ili oko 6:1 do tačno ili oko 1:6.

23. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 22, naglašeno time da odnos FSH prema LH bude u rasponu od ili oko 4:1 do tačno ili oko 1:2.

24. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 23, naglašeno time da odnos FSH prema LH bude u rasponu od ili oko 3:1 do tačno ili oko 1:1.

25. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 24, naglašeno time da odnos FSH prema LH bude u rasponu od ili oko 2:1 i 1:1.

26. Farmaceutski sastav u skladu sa svim prethodnim zahtevima, koji još obuhvata bakteriostatski agens odabran iz fenola i m-kresola.

27. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 26, naglašeno time da taj bakteriostatski agens bude m-kresol.

28. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 27, koji obuhvata m-kresol pri koncentraciji od tačno ili oko 0.3% (masa/masa rastvarača).

29. Farmaceutski sastav u skladu sa svim prethodnim zahtevima, koji dodatno obuhvata saharozu.

30. Farmaceutski sastav u skladu sa svim prethodnim zahtevima, koji dodatno obuhvata metionin.

31. Farmaceutski sastav u skladu sa svim prethodnim zahtevima, koji dodatno obuhvata fosfatni pufer vrednosti pH od ili oko 6.0 do tačno ili oko 8.0.

32. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 31, koji dodatno obuhvata a fosfatni pufer vrednosti pH od ili oko 7.0.

33. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 32, koji obuhvata sledećesastojke: rFSH, Pluronic F68, saharoza, metionin, m-kresol, i vodeni fosfatni pufer na pH od ili oko 7.0.

34. Farmaceutski sastav u skladu sa zahtevom 33, naglašeno time da rFSH bude prisutan pri koncentraciji od tačno ili oko 600 lU/ml, da Pluronic F68 bude prisutan pri koncentraciji od tačno ili oko 0.1 mg/ml, da saharoza bude prisutna pri koncentraciji od tačno ili oko 60 mg/ml, da metionin bude prisutan pri koncentraciji od tačno ili oko 0.1 mg/ml, da m-kresol bude prisutan pri koncentraciji od tačno ili oko 3 mg/ml, i da fosfatni pufer bude tačno ili oko 10 mM u fosfatu.

35. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevom 11, koja obuhvata 32.75 urj rekombinantnog FSH, 9.0 |ag rekombinantnog LH, 15.0 mg saharoze, 0.052 mg NaH2P04H20, 0.825 mg Na2HP042H20, 0.05 mg Pluronic F68 i 0.05 mg L-metionina.

36. Suvo zamrznuta formulacija u skladu sa zahtevom 11, koja obuhvata 65.5[ igrekombinantnog FSH, 18.0\ igrekombinantnog LH, 30.0 mg saharoze, 0.104 mg NaH2P04H20, 1.65 mg Na2HP042H20, 0.10 mg Pluronic F68 i 0.10 mg L-metionina.

37. Metoda za proizvodnju farmaceutskog sastava koji obuhvata fazu pravljenja rastvora FSH, i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i tečni razblaživač.

38. Metoda u skladu sa zahtevom 37, naglašeno time da surfaktant bude Pluronic F68.

39. Metoda u skladu sa zahtevom 37 ili 38, koja obuhvata dodatni korak dodavanja bakteriostatskog agensa odabranog iz fenola i m-kresola.

40. Metoda za proizvodnju pakovanja farmaceutskog sastava koja obuhvata stavljanje rastvora koji obuhvata FSH, i surfaktanta koji je odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, u bočicu, ampulu ili punjenje.

41. Metoda u skladu sa zahtevom 40, naglašeno time da ovaj surfaktant bude Pluronic F68.

42. Proizvodni artikal koji obuhvata prv posudu ispunjenu suvo zamrznutom formulacijom u skladu sa svim zahtevima od 9 do 11 i drugu posudu koja obuhvata rastvarač za rekonstituisanje.

43. Proizvodni artikal u skladu sa zahtevom 42, gde ta druga posuda obuhvata i vodeni razblaživač koji sadrži m-kresol.

44. Metoda za proizvodnju suvo zamrznute formulacije u skladu sa zahtevima 9 do 11, koja obuhvata korak za pravljenje mešavine FSH sa ili bez LH, ili LH sam, LH kao i surfaktant odabran iz Pluronic® F77, Pluronic F87, Pluronic F88 i Pluronic F68, i podvrgavanje ove mešavine liofilizaciji.

45. Metoda u skladu sa zahtevom 44, naglašeno time da ovaj surfaktant bude Pluronic F68.