RO59685B1 - PROCEDEU DE OBȚINERE A UNUI PRODUS ANALOG ANTICORPILOR lgG - Google Patents

Abstract

; Invenția se referă la un procedeu de obținere a unui reactiv imunoehlmlc destinat Identlăeâfil și dozării imunoglobulinelor serice lgG umane șl animale. Pro- ®® cedeui conform inventa: consta m aceea câ folosește ca matele porno eoap cărnoasa îjf> verde sau coaja uscată de nuci, care se O macină, se supune extracției cu o soluție apoasă tamponată- la pH~8s după care extractul obținut se centrifugbează, supematantul se precipită cu alcool etilic la 50X, Iar precipitatul se resolubiiizează în soluție tampon.

Description

Invenția de fața se referă ia un procedeu de obținere a unui reactiv imunochiroic destinat identificării și dozării imunoglobulinslor serice IgG, umane și animale.

în prezent, în scopul identificării și dozării imungiobulinei G de ia om și animale, se folosesc seruri monospecifîce. Aceste seruri se obțin prin hiperimunizarea unor animale potrivite pentru acest scop, care sunt hiperimunizate cu antigenui respectiv după o anumită schemă, sângsrarea animalului făcându-se când sa obținut un titru corespunzător în anticorpi.

Deoarece în diferite afecțiuni virotioe și bacteriene la om șs animale, imunoglobulinele normale - y g lo bul inele polivalente - suferă modificări mari și din punct de vedere cantitativ, determinarea lor oferă un spectru larg de indicații în scopul punerii diagnosticului. Folosirea ca reactivi a serurilor animale monospeoifice prezintă dezavantaje, datorită faptului că acești reactivi sunt scumpi, specifici de specie. Iar procedeul lor de obținere este lung și laborios.

Invenția de față elimină -dezavantajele arătate, prin aceea că, în scopul detectării și determinării cantitative a imunoglobuiinci G (IgG) ia om șl animale, folosește un reactiv obținut prin extragere din învelișul cărnos, verde, de nuci aflate în faza finală de coacere, precum și coaja lemnoasă a nualor măcinate, extracția făcându-se cu ajutorul unei soluții de tampon veronal - veronal sodic (ester diefil· malonic al acidului barbifuric - sarea sodică a esterului dietilmaionic al acidului barbifuric), după care extractul obținut se centrifughează, supernatantul se precipita în soluție tampon veronal - veronal sodic.

Se dă, în continuare, un exemplu de realizare a invenției,

a) Se recoltează Învelișul cărnos, verde, de la nuci (Jugfens reg/a) aflate în faza finală de coacere, când acest înveliș se detașează ușor de nuca propriu-zisă Materialul recoltat se fragmentează cu ajutorul unei mașini de tocat, în vederea extragerii materialul fragmentat, se încarcă într-un extractor prevăzut cu mijloace de agitare șl se toarnă soluție tampon-veronal sodic cu pH~8, folosind pentru flecare gram de materie primă

5.,.30 ml soluție tampon. După extracție, reziduul insolubil se sedimentează ușor sau este separat prin centrifugare. Epuizarea materiei prime se face prin extracții repetate. Extractele obținute se amesteca șl, pentru a obține un produs standardizat, se precipită în gradient de etanol șl se reia în volum de soluție tamponată ca pentru extracție.

Dacă materia prima (coaja verde de nucă) nu se supune imediat extracției, se supune uscării pe tăvi în curent de aer caid la 70.,.80^0, apoi se face extracția în condițiile de mai sus, folosind un raport materie primă ·· soluție extractiva : 1:4.

b) Pentru obținerea produsului din coaja lemnoasă a fructului, după îndepărtarea miezului, coaja se macină fin și se supune extracției cu același reactiv ca în cazul colilor verzi, folosind rapoartele ma~ terie-primâ - soluție extractivă : 1.2

Purificarea și standardizarea se realizează ca și în cazul produsului obținut din cojile verzi.

Pentru utilizare, în scopul determinării calitative ș· cantitative a Irouooglobulinelor G, preparatul este încorporat în gel de agar la cald, în jur de 50’C, ia pH~8,8, în proporție de 1:3 ie concentrația standardizată a substanței active, in acest gel se practica, apoi godeunie ce vor fi încărcate cu probele de ser sangvin, care urmează a fi analizate, șl lamele respective se Introduc în aparatul de eiectroforeză. Sub acțiunea curentului electric șl în condițiile date, Imunoglobulinsie G migrează spre catod. Substanța activa, indiferent de proveniența sa, din coji verzi sau uscate, de nucă, migrează în aceelași condiții spre

snod, fiind, astfel, favorizată o întâlnire treptată a reactanților șl, astfel, se reali» zeazâ reacția de precipitare urmărită. Această reacție reprezintă și controlul de calitate al reactivului, inclusiv standardiza» rea lui, atunci când reacția se face cu o soluție pură șl cunoscută de imunoglobuline G, invenția prezintă următoarele avantaje:

- realizează un reactiv nou de utilizare largă în biologia și clinica umană șl veterinară, auxiliar prețios in diagnostic șl lucrări de cercetare privind hnunoglobulinele G.

Claims (1)

1. Procedeu de obținere a unui reactiv imunochimic destinat identificării șl dozării imunoglobulinelor serice G umane, caracterizat prin aceea că folosește ca materie primă coaja cărnoasă, verde, sau coaja uscată de nuci, care se macină, se supune extracției cu o soluție apoasă tamponată, pH~8, după care extractul obținut se centrifughează, supematantul se precipită cu alcool etilic la 50°C, iar precipitatul se resolubilizează în soluție tampon.