RO128485A0 - Compoziţie cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral şi procedeu de obţinere - Google Patents
Compoziţie cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral şi procedeu de obţinere Download PDFInfo
- Publication number
- RO128485A0 RO128485A0 ROA201200665A RO201200665A RO128485A0 RO 128485 A0 RO128485 A0 RO 128485A0 RO A201200665 A ROA201200665 A RO A201200665A RO 201200665 A RO201200665 A RO 201200665A RO 128485 A0 RO128485 A0 RO 128485A0
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- parts
- peptides
- embryo
- activity
- proteins
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 84
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 64
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 42
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 40
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 38
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 31
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 29
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 28
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims abstract description 19
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000011651 chromium Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims abstract description 15
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 14
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims abstract description 10
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims abstract description 10
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 101710081722 Antitrypsin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000001475 anti-trypsic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 37
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 35
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 25
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 25
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 22
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 21
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 13
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 11
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 11
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 11
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 11
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 9
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 9
- YQDHCCVUYCIGSW-LBPRGKRZSA-N ethyl (2s)-2-benzamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoate Chemical group NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)OCC)NC(=O)C1=CC=CC=C1 YQDHCCVUYCIGSW-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 9
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 8
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000011667 zinc carbonate Substances 0.000 claims description 8
- 235000004416 zinc carbonate Nutrition 0.000 claims description 8
- 229910000010 zinc carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- FMRLDPWIRHBCCC-UHFFFAOYSA-L Zinc carbonate Chemical compound [Zn+2].[O-]C([O-])=O FMRLDPWIRHBCCC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 7
- RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L (5-hydroxy-4,6-dimethylpyridin-3-yl)methyl phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP([O-])([O-])=O)C(C)=C1O RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 6
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims description 6
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 6
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 6
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 6
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 5
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 5
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 claims description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 4
- 239000003098 androgen Substances 0.000 claims description 3
- 244000144987 brood Species 0.000 claims description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 230000005058 diapause Effects 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 3
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 2
- 229940038879 chelated zinc Drugs 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 claims description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 abstract description 12
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 abstract description 5
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 abstract description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 abstract description 2
- 229940057948 magnesium stearate Drugs 0.000 abstract 1
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 abstract 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 46
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 34
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 13
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 11
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 11
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 8
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 8
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 description 8
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 6
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 6
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 6
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001393742 Simian endogenous retrovirus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 4
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 4
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 4
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 3
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 3
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- CZWCKYRVOZZJNM-UHFFFAOYSA-N Prasterone sodium sulfate Natural products C1C(OS(O)(=O)=O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone sulfate Chemical compound C1[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N 0.000 description 3
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 3
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 150000003752 zinc compounds Chemical class 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100369915 Drosophila melanogaster stas gene Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 2
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000028416 insulin-like growth factor binding Human genes 0.000 description 2
- 108091022911 insulin-like growth factor binding Proteins 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 2
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- DZLNHFMRPBPULJ-UHFFFAOYSA-N thioproline Chemical compound OC(=O)C1CSCN1 DZLNHFMRPBPULJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 229910021555 Chromium Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 241000237536 Mytilus edulis Species 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 1
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000037328 acute stress Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000001764 biostimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000007177 brain activity Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K chromium(3+) trichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cr+3] QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000002594 corticospinal effect Effects 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000001647 gastrula Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 235000020638 mussel Nutrition 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000020250 positive regulation of endocytosis Effects 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 210000002023 somite Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000010009 steroidogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/57—Birds; Materials from birds, e.g. eggs, feathers, egg white, egg yolk or endothelium corneum gigeriae galli
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/062—Ascomycota
- A61K36/064—Saccharomycetales, e.g. baker's yeast
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
- A61K9/4858—Organic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
- A61K9/4875—Compounds of unknown constitution, e.g. material from plants or animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Botany (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Mycology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la o compoziţie utilizată ca supliment nutritiv, şi la un procedeu de obţinere a acesteia. Compoziţia conform invenţiei este alcătuită din extract embrionar heterolog, standardizat în embrio-peptide, maltodextrină, drojdie seleniată, drojdie cromiată, zinc chelat în embrio-peptide, piridoxină, amestec de peptide cationice, formate prin hidroliza enzimatică din vitelus şi albuş de ou rămase după prelevarea embrionilor, cu activitate antitripsinică şi de stimulare a endocitozei, taurocolat de sodiu, bioxid de siliciu expandat, stearat de magneziu, metilparaben şi propilparaben. Procedeul conform invenţiei cuprinde obţinerea şi dezintegrarea materialului biologic, diluarea cu apă sterilă, omogenizarea şi disocierea factorilor de creştere embrionari de pe receptorii lor solubili, concentrarea embrio-peptidelor prin ultrafiltrare tangenţială, denaturarea embrio-proteinelor şi amestecarea embrio-peptidelor cu proteinele denaturate, obţinerea peptidelor cationice şi adăugarea lor şi a celorlalte componente peste amestecul embriopeptide-embrioproteine, omogenizarea şi uscarea prin pulverizare a amestecului final.
Description
COMPOZIȚIE CU BIODISPONIBILITATE CRESCUTĂ A EMBRIO-PEPTIDELOR ADMINISTRATE ORAL SI PROCEDEU DE OBȚINERE
Invenția se referă la o compoziție standardizată în embrio-peptide heterologe active pe celulele umane, care, atunci când sunt administrate oral, ca supliment nutritiv, pentru re-echilibrarea metabolică și reglarea tulburărilor metabolice la subiecții umani, prezintă o biodisponibilitate crescută a embriopeptidelor constituente, și la un procedeu de obținere a acestei compoziții de supliment nutritiv.
Sunt cunoscute mai multe compoziții, sau procedee care conduc la obținerea unor astfel de compoziții, pe baza extractelor de embrioni heterologi, de vertebrate sau din primele stadii din ciclul de dezvoltare a insectelor. Brevetul OSIM 74872 (publicat și ca EP 0043842, W0102106, US4405602, GB2079602) descrie un procedeu pentru obținerea unui produs biologic activ din albine, prin triturarea larvelor de trântori, recoltate în a 10-a zi de când ouăle nefertilizate au fost depuse, împreună cu întreg conținutul nutritiv ale celulelor fagurelui cu puiet de trântor, prin omogenizarea și filtrarea amestecului pentru obținerea unui produs proaspăt, care, atunci când este necesar, poate fi liofilizat pentru a obține un produs standard deshidratat. Toate etapele procedeului de mai sus sunt realizate în condiții aseptice. Compoziția este revendicată ca având proprietăți de: reechilibrarea metabolismului, prin stimularea anabolismului, reglarea ciclului menstrual, creșterea libidoului și a spermatogenezei la bărbați, și îmbunătățirea proceselor cognitive (C. Mateescu, Apiterapia, Ed. Fiat Lux, București, 2005).
Brevetul OSIM 107551 se referă la un procedeu pentru obținerea unui extract biostimulator pe bază de ouă embrionate, în special ouă de găină embrionate, care este revendicat ca având o acțiune de re-echilibrare metabolică prin stimularea catabolismului. Revendicări similare referitoare la stimularea catabolismului se regăsesc în brevetul OSIM 107550 nu numai pentru extractul de ouă embrionate de găină, dar și pentru cel din ouă embrionate de fluture de mătase.
Cererea de brevet CA 2197050 dezvăluie o compoziție obținută din ouă cu coajă incubate, ouă de păsări, și în particular ouă de găină, care este utilă în prevenirea și tratamentul cancerului. O activitate similară de prevenire și tțșiagysnt .-țu depozit ............
IțlUL DE STAT PENTPum Cerere de brevet de
F? 2012-00665-ί 9 -09- 2012
al cancerelor de către extractele embrionare heterologe este descrisă de brevetul EP0929308 (publicat și ca WO9811905; ITMI 961945; ES 2181004; DE69714856; AU3258097; AT222499). Compozițiile au fost obținute din extracte embrionare prelevate de la specii care includ păstrăv în stadiile de dezvoltare embrionare de la 5 la 20 somite, pește zebră, Brachydanoi rerio, în stadiul de dezvoltare embrionară de medioblastula - gastrula și musculița de oțet, Drosophila melanogaster, în stadiul de dezvoltare embrionară blastoderma, și au fost revendicate ca fiind eficiente nu numai pentru tratarea tumorilor, dar și a altor patologii controlate de anti-oncogena p53, atunci când sunt administrate pe cale parenterală, orală sau topică.
Brevetul US 5641517 (publicat și ca NZ254859, JPH08502041, IS4057, WO9403192, FI950369, EP0656781, DE69327585, CN1098625, CN1100545,
CA2141197, AU4715093, AT188609) descrie o compoziție obținută printr-un procedeu de extracție din ouă de pasăre fertilizate incubate, uscate fără a fi preparate prin metodele uzuale de procesare a alimentelor, în care ouăle fertilizate sunt incubate de la stadiul blastodermal la stadiul protoembrionar. Această compoziție, opțional împreună cu unul sau mai mulți agenți purtători sau excipienți compatibili, este administrată oral, în cantități zilnice corespunzătoare a 1 până la circa 50 de grame de substanță uscată, și este revendicată ca având o acțiune de creștere a libidoului și/sau a nivelului de testosteron seric.
Ouăle fertilizate incubate, și în particular un extract din ouăle fertilizate incubate, au fost revendicate prin cererea de brevet internațională WO2010130980 (publicată și ca US2012107411, GB2471827, EP2429537, CA2761384) ca având beneficii fiziologice suplimentare, în special în reducerea stresului, ca stres perceput negativ, și în reducerea anxietății tuturor subiecților la care a fost administrat, în special în cazul subiecților stresați cronic, și în normalizarea nivelurilor de cortizol în subiecți stresați cronic sau ne-stresați, ca răspuns la stresul acut.
Cererea de brevet SUA US20110200737 revendică o compoziție de supliment nutritiv, obținută pe baza unui extract din ouă de găină, fertilizate și incubate, destinat îmbunătățirii activității creierului. Formularea inventivă revendicată folosește ouăle fertilizate incubate timp de 9-10 zile pentru a obține di- și tri-peptide, constituite din aminoacizi, cu o activitate fiziologică ridicată.
birocrate
Q- 2 ? U - C Ο 6 6 5 - : 9 09- 201?
Transportul rapid al acestor di- și tri-peptide prin bariera intestinală este exploatat suplimentar prin adăugarea de proteine marine care conțin cantități ridicate de glicocol, cum ar fi cartilagiul de rechin sau proteine vegetale, pentru a livra doze cu acțiune puternică în neurosistem.
Cea mai convenabilă modalitate de administrare a unor astfel de compoziții, pe bază de extracte de embrioni heterologi de vertebrate sau din primele stadii din ciclul de dezvoltare a insectelor, este calea orală, care este cea mai convenabilă pentru auto-administrare, permite notificarea ca supliment nutritiv și elimină posibilele reacții alergice, care pot apărea în cazul căilor parenterale de administrare. Ingredientele active din aceste compoziții pe bază de extracte embrionare heterologe au fost considerate ca fiind aminoacizi, prehormoni și vitamine. (Brevetul OSIM 74872, brevetul US 5641517) sau di- și tri-peptide (Cererea de brevet SUA US20110200737). Dar astfel de ingrediente nu sunt ingrediente specifice numai extractelor embrionare. In cantitățile de ordinul gramelor din extractele embrionare heterologe, administrate ca supliment nutritiv, aminoacizii, (pre)hormonii și vitaminele nu sunt în doze suficiente pentru a declanșa răspunsurile fiziologice revendicate prin brevetele care protejează diferitele compoziții pe bază de extracte embrionare heterologe și/sau a procedeelor de obținere corespunzătoare. Embrio-peptide de dimensiuni mai mari, în special cele cu activitate de factori de creștere, care sunt specific prezente embrionii de vertebrate sau din primele stadii din ciclul de dezvoltare a insectelor, au fost considerate ca fiind ingredientele active ale acestor extracte embrionare, în special a extractelor din embrioni de pui de găină / ouă fertilizate de găină incubate care explică convingător efectele fiziologice (Mihăescu G., Olinescu R., Oancea F., 2005, Rom. J. Intern. Med. 43:133-9; Mihăescu G., Olinescu R., Grigorescu A., 2006, , Rom. J. Intern. Med. 44:443-53; Schult J., Hero T., Hellhammer J., 2010, Clin. Nutr. 29:255-260). Astfel de factori de creștere, prezenți în mod specific în extractele embrionare, sunt puternic conservate în timpul evoluției (de ex. factorii de creștere similari insulinei sunt membrii ai superfamiliei insulinei, fiind puternic conservați în decursul evoluției, conform recenziei lui Rotwein P., 1991, Growth Factors 5:3-18).
Brevetul SUA 4,908,206 dezvăluie un nou procedeu de obținere a unui extract din organe de embrioni de mamifere, care este liber
” «IPOCRATE
¢^ 2 0 1 2 - 0 0 6 6 5 -1 9 -09- 2012 nepolari și de constituenți cu masă moleculară mare. Extractul este preparat conform unui nou procedeu de extracție, în care prima etapă de extracție a organelor embrionare fin divizate este realizată cu un amestec de apă și solvenți organici miscibili cu apă, sau cu un amestec de solvenți organici miscibili cu apa. In acest amestec utilizat pentru prima etapă de extracție amestecul de solvenți organici miscibili cu apa reprezintă cel puțin 70% față de volumul total al amestecului de extracție și are o valoare de pH neutră, pentru a evita degradarea proteinelor cu masă moleculară mare. Extractul recuperat conform procedeului conține numai acei constituenți polari care au o masă moleculară mai mică de 5 kDa, care au erau prezenți în organele proaspete ale embrionilor de mamifere și nu conține compuși care să fie rezultați prin degradarea structurilor proteice. Compoziția obținută prin procedeul descris de patentul 4,908,206 nu este destinată administrării orale, ci pentru uz topic, ca tratament al acneei vulgare. Limita de 5 kDa este sub valoarea masei moleculare a unora din factorii de creștere peptidici prezenți în extractele embrionare (IGF-1 are o masă moleculară calculată de 7649 Da, în conformitate cu Rinderknecht E., Humbel R.E., 1978, J. Biol. Chem. 253:2769-277), astfel încât acești factori de creștere sunt excluși din preparatele obținute prin procedeul dezvăluit de Brevetul US 4,908,206.
Brevetul OSIM 119509 descrie o compoziție pe bază de extracte embrionare de pasăre, îmbogățită în peptide cu masa moleculară mai mică de 10 kDa printr-un procedeu de gel-cromatografie batch, care conține stimulatori ai absorbției intestinale a peptidelor (taurocolat de sodiu) și inhibitori tripsinici. Această compoziție concepută pentru a asigura o mai bună rezistență a peptidelor embrionare la degradarea de către proteazele din sistemul digestiv / duoden și pentru o mai bună absorbție a embrio-peptidelor prin bariera intestinală.
In pofida prezenței inhibitorilor tripsinici și a stimulatorilor de absorbție a peptidelor compoziția prezentată prin brevetul RO115,509 continuă să prezinte o variabilitate ridicată a răspunsurilor fiziologice ale subiecților umani în cazul administrării orale. Una dintre cauze este datorată faptului că embrio-peptidele biologic active din extractul embrionar inițial, și în mod special cele cu activitate de factori de creștere, sunt legate de liganzi specifici, receptori celulari sau solubili cum sunt Proteinele de Legare a Factorului de Creștere similar Insulinei, IGFBPs Insulin like Growth Factor Binding Proteins, pentru IGF-uri. Aceste—structuri
Ori O 1 2 - O 0 6 6 5 - 1 9 -09- 2012 macromoleculare complexe, în care factorii de creștere sunt legați de liganzii lor specifici cu o afinitate ridicată, au o masă moleculară mai mare de 10 kDa, nu pot fi îmbogățite în compoziția realizată prin procedeul dezvăluit de brevetul OSIM 115,509 și determină în final o absorbție variabilă prin bariera intestinală, fiind responsabile de variabilitatea ridicată a răspunsurilor fiziologice ale subiecților umani în cazul administrării orale. Procedeul de îmbogățire prin gel-cromatografie batch determină o diluare a extractelor, înlăturarea excesului de apă determinând costuri suplimentare, astfel încât este nevoie de un procedeu care să asigure randamente superioare de îmbogățire în embrio-peptide, cu o diluare redusă a extractului final.
Este necesară deci introducerea în procedeele de obținere a extractelor embrionare standardizate în embrio-peptide a unei etape de disociere a factorilor de creștere din complexele afine cu receptorii lor, în special cu receptorii lor solubili. Factorii de creștere similari insulinei, care au fost demonstrați a fi unul dintre principalele ingrediente active ale preparatelor cu embrio-peptide (Mihăescu G., Olinescu R., Grigorescu A., 2006, Rom J Intern Med. 44:443-53) sunt disociați de receptorii lor solubili IGFB-5, prezenți în cantități semnificative în embrionul de găină, de către ionii de Zn2+ (McCusker M.H., Novafoski J., 2004, J. Endocrin. 180: 227-246). Ionii Zn2+ trebuie însă introduși în exact cantitatea stoichiometric necesară pentru disocierea IGF-urilor de IGFB-uri, cu evitarea excesului de ioni care pot determina reasocierea altor embrio-peptide cu activitate fiziologică. Folosirea compușilor insolubili de zinc, cum este oxidul sau carbonatul de zinc, ar permite evitarea excesului de ioni Zn2+. Reacția de chelatare IGF - ioni Zn2+ deplasează echilibrul produsului de solubilitate al compușilor de zinc insolubili, în special al carbonatului de zinc, dar formarea unor chelați peptidici din compuși insolubili, săruri, oxizi / hidroxizi ai metalelor necesită cantități mari de apă și o perioadă lungă pentru desfășurarea reacției, așa cum este descris procedeul protejat de patentul US 4,830,716. Timpul de reacție îndelungat și necesitatea de a usca prin pulverizare suspensii diluate determină un risc ridicat de contaminare microbiană și, respectiv, costuri mari de fabricație. Este deci necesară dezvoltarea unei etape, în cadrul procedeului de obținere a compozițiilor de embrio-peptide cu biodisponibilitate ridicată în cazul administrării orale, care să se desfășoare în soluții concentrate și care să asigure un timp mai scurt de formare a cțielaților cu
a Co/T)
2002 fi
peptide / factori de creștere pentru disocierea respectivilor factori de creștere de receptorii lor solubili, prin folosirea compușilor insolubili de zinc, ca sursă pentru exact cantitatea stoichiometric necesară de ioni Zn2+. Este de asemeneci necesară realizarea unui procedeu care să permită includerea factorilor de creștere de tip peptidic din extractele embrionare în compoziții care, atunci când sunt administrate oral și ajung în intestin, să stimuleze endocitoza ca modalitate eficientă de penetrare a barierei intestinale. Astfel de compoziții cu o biodisponibilitate crescută datorită stimulării endocitozei ar trebui să reducă variabilitatea răspunsurilor fiziologice, favorizând reproductibil re-echilibrarea metabolică și reglarea tulburărilor metabolice la subiecții umani la care sunt administrate timp de câteva săptămâni.
Invenția are ca scop soluționarea problemelor tehnice descrise mai sus, furnizând o compoziție de embrio-peptide, și un procedeu de obținere a acesteia din extracte de embrioni de vertebrate sau din primele stadii din ciclul de dezvoltare a insectelor, care, la administrarea orală, ca supliment nutritiv, pentru re-echilibrarea metabolică și reglarea tulburărilor metabolice la subiecții umani, să prezinte o biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor constituiente. îmbogățirea în embrio-peptide cu activitate de cito-stimulare și de cito-protecție a celulelor umane este realizată fără diluarea semnificativă a extractului. De asemenea invenția are și scopul de a introduce o etapă de disociere a factorilor de creștere peptidici în cadrul procesului de obținere, pentru a permite concentrarea factorilor de creștere după disocierea de receptorii solubili cu ajutorul ionilor Zn2+furnizați în exact cantitatea stoichiometric necesară, și care să se desfășoare în soluții concentrate și în timp scurt. Sub un alt aspect invenția furnizează un procedeu care duce la obținerea unor compoziții cu biodisponibilitate ridicată, din care embrio-peptidele sunt absorbite prin bariera intestinală re-echilibrând metabolismul prin mecanisme de reglare adaptative declanșate de axul neuro-endocrin hipotalamo-hipozo-adrenal.
Compoziția cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral conform invenției este următoarea: 20 părți de extract embrionar heterolog standardizat în embrio-peptide, cu un conținut de 50% proteine și 5% peptide atunci când este obținut din embrioni de pui de găină, și 50% proteine și 10% peptide atunci când este obținut din stadiile inițiale ale dezvoltării insectelor, 80
«-2 Ο 12 - Ο Ο 5 6 5 - 1 9 -D9- 2012 părți de maltodextrină, 2 părți drojdie seleniată cu un conținut de 750 mg Se per kg, 1,5 părți drojdie cromiată cu un conținut de 900 mg Cr per kg, 0,2 părți de zinc chelatat în embrio-peptide, 0,2 părți vitamina B6 (piridoxină), 0,5 părți amestec de peptide catioriice, formate prin hidroliza enzimatică din vitelusul și albușul de ou rămase după prelevarea embrionilor de pui de găină, care au o activitate antitripsinică specifică de 1.000 unități BAEE per mg de peptide și activitate de stimulare a endocitozei prin epiteliul intestinal, 0,5 părți taurocolat de sodiu, 0,01 ... 0,015 părți bioxid de siliciu expandat, 0,01 ... 0,015 părți stearat de magneziu, 0,01 ... 0,015 părți metilparaben și 0,005 ... 0,010 părți propilparaben, părțile fiind exprimate în unități de masă.
Procedeul de obținerea a compozițiilor cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral conform invenției este alcătuit din următoarele etape: obținerea materialului biologic cu o contaminare biologică foarte redusă, prin recoltarea aseptică a embrionilor de pui de găină împreună cu membrana corioalantoidă din ouăle fertilizate și incubate timp de 10 zile, dezinfecția ouălor non-diapauză de fluture de mătase, sau recoltarea aseptică de larve de trântor / larve mascul de Apis melifera, la 10 zile de la depunerea ouălor haploide, mai exact din larve cu vârsta de 7 zile; dezintegrarea materialului biologic prin intermediul unei mori coloidale și determinarea cantității de substanță uscată în extract; diluarea a 10 părți din embrionii dezintegrați, exprimați ca substanță uscată, cu 90 părți apă sterilă distilată; omogenizarea într-un omogenizator cu piston la înaltă presiune, două cicluri la 50 MPa; amestecarea a 100 părți din suspensia rezultată cu 1,25 părți de carbonat de zinc și ultrasonicarea pentru 25 min la 500W, pentru a asigura disocierea factorilor de creștere de pe receptorii lor; înlăturarea excesului de carbonat de zinc și resturilor celulare prin centrifugare; ultrafiltrarea tangențială printr-o membrană de 10 kDa a supernatantului; denaturarea proteinelor cu masa moleculară >10 kDa prin încălzire pentru 25 min la 85°C; amestecarea dializatului care conține embrio-peptide <10 kDa, cu proteinele denaturate >10kDa, în raport de 1 parte peptide la 9 părți proteine în cazul embrionilor de pui de găină, și 1 parte peptide la 4 părți proteine în cazul materialului biologic provenit din primele stadii de dezvoltare a insectelor; hidroliza enzimatică cu endo-protează și amidopeptidază a resturilor de vitelus și albuș rămase după recoltarea embrionilor de pui de găină, în raport de 2 părți endo7 /u'1 ' i/ θC··’λ (μ h^ocrate*ii 2002 SERV S*-L.Γ (λ‘2 Ο 1 2 - Ο Ο 6 6 5 - t 9 -09- 2012 protează la 100 părți resturi de vitelus și albuș, urmată de cu ultrafiltrarea tangențială a peptidelor cu masă moleculară mai mică de 10 kDa și absorbția din dializat a peptidelor cationice formate pe o rășină schimbătoare de cationi, și de eluarea peptidelor cationice de pe rășina schimbătoare de ioni și determinarea concentrației peptidice cu reactiv Folin-Ciocâlteu; adăugarea peste acea cantitate de eluat conținând 0,5 părți de peptide cationice, care au o activitate antitripsinică specifică de 980± 53,3 BAEE per mg de peptide și activitate de stimulare a endocitozei prin epiteliul intestinal, a 80 părți de maltodextrină, 2 părți drojdie seleniată cu un conținut de 750 mg Se per kg, 1,5 părți drojdie cromiată cu un conținut de 900 mg Cr per kg, 0,2 părți vitamina B6 (piridoxină), 0,5 părți amestec de peptide cationice, formate prin hidroliza enzimatică din vitelusul și albușul de ou rămase după prelevarea embrionilor de pui de găină, 0,5 părți taurocolat de sodiu, 0,01 ... 0,015 părți bioxid de siliciu expandat, 0,01 ... 0,015 părți stearat de magneziu, 0,01 ... 0,015 părți metilparaben și 0,005 ... 0,010 părți propilparaben și amestecarea cu 20 părți de amestec embrio-peptide embrionare - proteine; omogenizarea amestecului prin trecere printr-un omogenizator cu piston la înaltă presiune, 2 cicluri la 35 MPa; uscarea prin atomizare a amestecului format, la o rată de max. 10 kg/h, folosind un atomizor centrifugal operat la 20,000 rpm, la o temperatură a aerului la intrare de 14O...15O°C și la o temperatură de ieșire de
8O...85°C.
Compoziția cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral conform invenției, administrată ca supliment nutritiv în doză de 2 capsule la o oră după masa de dimineață și 2 capsule la o oră după masa de prânz, pe o perioadă de minimum 60 zile, re-echilibrează metabolismul, crește nivelul de hormoni androgeni la bărbații tineri, normalizează nivelul de cortizol, scade trigliceridele totale, colesterolul total și fracția sa LDL și crește fracția HDL a colesterolului la subiecții umani de vârsta a treia.
Prin aplicarea invenției se obțin avantajele următoare:
- se asigură o biodisponibilitate crescută a peptidelor ingrediente active prin stimularea endocitozei datorită prezenței peptidelor cationice penetrante celulare și a taurocolatului, și a absorbției prin endocitoză a embrio-peptidelor în interiorul unor structuri formate împreună cu proteinele >10 kDa degradate, care au proprietăți emulsionante;
ί\-2012-00565-1 9 -09- 2012
- se concentrează embrio-peptidele fără diluarea suplimentară a extractului
- se furnizează exact cantitatea stoichiometric necesară de ioni Zn2+ în etapa de disociere a factorilor de creștere, premergătoare etapei de separare a peptidelor prin ultrafiltrare;
- se reduce cantitatea de produse secundare și costurile de achiziționare a unor aditiv de condiționare ca agenții de emulsionare și peptide penetrante celulare prin utilizarea subproduselor pentru a produce agenți de emulsifiere prin degradarea proteinelor >10 kDa din retentat și, respectiv, prin hidroliză enzimatică și separarea concomitentă pe cationiți a peptidelor penetrante celular formate din restul de vitelus și albuș;
- se asigură o productivitate mărită;
- se reduc pierderile de substanțe active prin termodegradare și termooxidare;
- se obține un produs cu proprietăți bune de curgere;
- se favorizează formarea unui produs cu stabilitate fizico-chimică și microbiologică mărită, a cărui valabilitate este mai mare de 2 ani.
- se asigură posibilitatea adaptării la diferitele surse de embrioni heterologi.
Prezenta invenție se ilustrează prin următorul exemplu:
Exemplul 1. Se recoltează aseptic embrionii din ouă embrionate de găină, care apoi se dezintegrează coloidal la moară coloidală (Colloid Mill Karl Schell KS 030-F10-150), până la formarea unui omogenat cu particule uniforme. In omogenat se determină substanța uscată refractometric, după care se amestecă 10 părți omogenat embrionar cu 90 ... 95 părți apă distilată sterilă, se omogenizează într-un omogenizator cu piston (GEA Niro Soavi Arriete NS2006), două cicluri la 50 MPa. Suspensia rezultată este amestecată cu 1,25 părți de carbonat de zinc și se ultrasonichează pentru 25 min la 500W(cu un aparat Hielscher UIP 1OOhd), pentru a se asigura disocierea hormonilor de creștere de pe receptorii lor cu care formează complexe care ar rămâne în retentat în cazul ultrafiltrării. Excesul de carbonat de zinc și alte reziduuri insolubile, cum ar fi de exemplu debriurile celulare, sunt înlăturate prin centrifugare continuă (Alfa Laval LAPX 404, 20 litri per min, 5000 rpm, aprox. 5500 g). Supernatantul este apoi ultrafiltrat tangențial printr-o membrană de 10 kDa, folosind un echipament Millipore Pelicon 2 Maxi Cassete Biomax 10, 2,5 m2. In retentat pH-ul este ajustat
“ 2 Ο 1 2 - Ο Ο 6 6 5 - ί 9 -09- 2012 la ρΗ 7,0 folosind hidroxid de sodiu 1 M, iar proteinele cu masa moleculară >10 kDa sunt încălzite într-un reactor cu manta, timp de 25 min la 85°C, pentru a denatura legăturile nonpolare și punțile disulfhidrice și pentru a crește astfel capacitatea de emulsionare a acestor embrio-proteine. Proteinele denaturate sunt amestecate cu ultrafiltratul conținând peptide în raport de 1 parte peptide la 9 părți proteine, conținutul de proteine și peptide fiind determinat prin metoda Lowry, folosind reactivul Folin-Ciocâlteu (Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J., 1951, J. Biol. Chem. 193: 265-75.). Se omogenizează un ciclu în omogenizatorul cu piston la 30 MPa.
Resturile de vitelus și albuș rămase după recoltarea embrionilor de pui de găină, se introduc într-un vas de reacție și se tratează cu Alcalase AF 2.4 L (Novozyme, endoprotează din Bacillus licheniformis, cu subtilizină / serinendopeptidază ca principal component enzimatic, cu o activitate specifică de 2.4 unități Anson (AU) per gram; o AU este cantitatea de enzimă care, în condiții standard digeră hemoglobina cu o rată inițială care produce într-un minut o cantitate de produși de reacție solubili în acid tricloroacetic acid care formează aceeași culoare cu reactiv Folin-Ciocâlteu ca și un milliechivalent de tirozină), în raport de 2 părți endo-protează la 100 părți resturi de vitelus și albuș. Se încălzește la 50°C, se menține timp de 30 min și apoi se pompează pe un echipament de ultrafiltrare tangențială Millipore Pelicon 2 Maxi Cassete Biomax 10, 2,5 m2, prevăzut cu membrană de 10 kDa timp de 15 min. Retentantul se întoarce în vasul de reacție, iar dializatul se captează într-un vas unde se tratează sub agitare cu rășină Bio Rex 70, schimbător de catiorii, 200-400 mesh, spălată în prealabil cu 1 N HCI și apoi cu apă distilată, în proporție de 5 părți rășină la 100 părți dializat. Se repetă ciclul de hidroliză enzimatică / ultrafiltrare de 10 ori, adăugându-se rășină schimbătoare de ioni în vasul de captare a dializatului pentru a se menține proporția de 5 părți rășină la 100 părți dializat. După terminarea ciculurilor de hidroliză enzimatică dializatul se mai menține cu rășina timp de 4 ore. Se filtrează rășina, se spală abundent cu apă distilată și se împachetează într-o coloană din care se eluează peptidele cu un gradient 0,2 ...2 M NaCI, cu o viteză de eluare de 3,5 ml per min. Din eluat se îndepărtează excesul de sare prin dializă peste noapte. In dializat se determină conținutul de peptide cu reactiv FolinCiocâlteu. La un volum de dializat conținând de 0,5 părți de peptide cationice, care
^2012-00565-ί 9 -09- 2012 au ο activitate antitripsinică specifică de 980± 53,3 BAEE per mg de peptide și activitate de stimulare a endocitozei prin epiteliul intestinal, se adaugă 80 părți de maltodextrină, 2 părți drojdie seleniată cu un conținut de 750 mg Se per kg, 1,5 părți drojdie cromiată cu un conținut de 900 mg Cr per kg, 0,2 părți vitamina B6 (piridoxină), 0,5 părți amestec de peptide cationice, formate prin hidroliza enzimatică din vitelusul și albușul de ou rămase după prelevarea embrionilor de pui de găină, 0,5 părți taurocolat de sodiu, 0,01 ... 0,015 părți bioxid de siliciu expandat, 0,01 ... 0,015 părți stearat de magneziu, 0,01 ... 0,015 părți metilparaben și 0,005 ... 0,010 părți propilparaben și amestecarea cu 20 părți de amestec embrio-peptide embrionare - proteine. Se omogenizează amestecul de mai sus la înaltă prin trecere printr-un omogenizator cu piston la înaltă presiune, 2 cicluri la 35 MPa și apoi se usucă suspensia prin atomizare, la o rată de max. 10 kg apă evaporată pe oră, folosind un atomizor centrifugal operat la 20,000 rpm, la o temperatură a aerului la intrare de 14O...15O°C și la o temperatură de ieșire de
8O...85°C.
Embrio-peptidele separate prin ultrafiltrare tangențială, cu masa moleculară mai mică de 10 kDa au fost testate din punct de vedere al efectului față de celulele umane. Substratul celular utilizat a fost linia celulară diploidă umană ICP23 (INCDMI „Cantacuzino”, Gaicu, D. Petrașincu, S. Nachtigal, I. Stoian, 1997, Developm. Biol. Standardiz., 37:19-21). Substratul celular utilizat este un substrat celular uman normal, stabil genetic de-a lungul timpului de viață in vitro. Celulele au fost întreținute în laborator prin multiplicări seriale cu rata de dispersie 1:2, în mediu de creștere Eagle BME suplimentat cu 10% ser de vițel.
Testările s-au efectuat prin creșterea celulelor în tuburi Barski de 2 ml. Mediul de cultură folosit pentru testarea acțiunii embrio-peptidelor extrase din embrioni de pui de găină a fost mediu Eagle BME suplimentat cu o cantitate redusă la jumătate de ser fetal bovin (5%), care a fost suplimentat cu 1% embriopeptide din pui de găină, concentrate în dializatul ultrafiltratului. Rezultatele au fost comparate cu un standard, reprezentat de mediu Eagle BME suplimentat cu 10% ser fetal bovin, și cu un martor, în care fibroblastele au fost cultivate pe mediu Eagle BME suplimentat cu o cantitate redusă la jumătate de ser fetal bovin (5%).
Aprecierea proliferării celulare in vitro s-a efectuat prin măsurarea și notarea densității celulare la intervale de 24 ore, de-a lungul unui ciclu de
Λ 1 // O φ ' ^hipocrateT1 \\ 2002 SERV/7
S.RjLAjM
Ă- 2 Ο 1 2 - Ο Ο Ε 5 5 - Î 9 -119multiplicare (96 ore), la 37°C, în atmosferă umidificată și cu exces de bioxid de carbon (5% CO2, 95% aer). Dinamica creșterii celulare in vitro s-a alcătuit prin raportarea densității celulare (nr. celule/ cm2) la intervalul corespunzător în ore. Numărarea celulelor s-a realizat după pregătirea probelor prin desprinderea cu tripsină a celulelor, reluarea lor în volum cunoscut de mediu și adaus de colorant (albastru de tripan 0,4%). Tehnica utilizată a permis și aprecierea mortalității celulare (%; test de excluziune a colorantului). Toți reactivii folosiți au provenit de la Sigma - Aldrich (Sigma - Aldrich, St. Louis, MO, SUA). Rezultatele sunt prezentate în tab.1.
Tab.1. Efectul embrio-peptidelor din extract embrionar de pui de găină, concentrate în difuzatul ultrafiltratului, asupra creșterii și mortalității celulare a fibroblastelor ICP-23 (pasaj 23 in vitro).
| Variantă experimentală | Număr celule (x 104 cel/cm2) | Mortalitate cel. (%) | ||
| 72 h | 96 h | 72 h | 96 h | |
| Martor (Mediu Eagle BME cu 10% ser fetal bovin) | 12.43a | 13.25c | 4.20e | 5.11g |
| Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin + 1 % embriopeptide | 12.18a | 13.05c | 1.81f | 2.68h |
| Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin | 10.32b | 9.73d | 3.92e | 4.64gh |
‘Valorile urmate de aceeași literă nu diferă semnificativ pentru P<0.05%
Embrio-peptidele din embrion de pui de găină concentrate în difuzatul ultrafiltratului au dovedit o acțiune citostimulatorie și citoprotectivă pe fibroblastele umane tinere (linia ICP-23, pasajul 23 in vitro). După 96 de ore numărul de celule este mai mare cu peste o treime (Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin -
9,73.104 celule/cm2, Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin + 1% embrio-peptide - 13,05.104 celule/cm2). In același timp mortalitatea la 96 ore a celulelor tratate cu embrio-peptide (2,68%) este cu aproape 50% mai mică decât standardul cu 10% ser fetal bovin (5,11%).
Amestecul de peptidele cationice obținute din resturile de vitelus și albuș rămase după recoltarea embrionilor de pui de găină au fost testate pentru activitatea de inhibare a tripsinei și de stimulare a endocitozei.
Activitatea de inhibarea tripsinei s-a determinat prin folosirea BAEE ca substrat, prin monitorizarea continuă a absorbției în UV la 253 nm. Intr-o cuvă de cuarț cu drumul optic de 1 cm s-au introdus 3,2 ml de amestec 63 mm fosfat de f o ^HîpocrateI 2002 SEșVf <-p s.rIl/Vm
V /7 (λ- 2 Ο 1 2 - Ο Ο 5 6 5 - ί 9 -09- 2012 sodiu, 0,23 mM ester etilic de Ν-α-benzoil-L-argininei (ΒΑΕΕ - N-a-benzoil-Larginine ethyl esthei), 0,002 mM acid clorhidric, 0,005 mg tripsină și 0,005 mg de amestec de peptide cationice. S-a omogenizat amestecul prin răsturnarea cuvetei de cuarț și s-a determinat creșterea absorbanței în UV la 253 nm pe un spectrofotometru UV-VIS Pharo 300 Spectroquant Merck Millipore. S-a lucrat față de un martor de reactivi, MR, fără adăugare de tripsină și amestec de peptide cationice, și un standard MT la care s-a adăugat numai tripsină. Toți reactivii folosiți au provenit de la Sigma - Aldrich (Sigma - Aldrich, St. Louis, MO, SUA). Determinările s-au efectuat în triplicat, iar activitatea de inhibare a tripsinei s-a calculat conform formulei:
Activitatea inhibare tripsină = (D0253nm/min MT - DO253nm/iTiin Mr) (DO253nmP ~ DO253nm Mr) * 200 în care :
DO253nm/min MT este variația absorbanței în UV la 253 nm a standardului MT în care s-a adăugat numai tripsină ;
DO253nm/nnin Mr este variația absorbanței în UV la 253 nm a martorului de reactivi Mr în care s-a adăugat numai tripsină ;
DO253nm/min P este variația absorbanței în UV la 253 nm probei cu tripsină și inhibitor tripsinic din amestecul de peptide cationice;
200 este factorul de corecție pentru exprimarea activității pentru un mg de tripsină / amestec de peptide cationice care conține inhibitor tripsinic.
O unitate de activitate tripsinică / antitripsinică BAEE se definește ca fiind activitatea enzimatică de hidroliză a peptidelor specifice tripsinei, care determină într-un minut o variație de extincție la 253 nm de 0,001, atunci când substratul folosit este esterul etilic al Ν-α-benzoil-L-argininei (BAEE). Amestecul de peptidele cationice obținute din resturile de vitelus și albuș rămase după recoltarea embrionilor de pui de găină a prezentat o activitate de 980± 53,3 BAEE per mg.
Pentru stabilirea influenței peptidelor cationice obținute din resturile de vitelus și albuș rămase după prelevarea embrionilor s-a folosit tehnica monostratului de celule Caco-2, un model larg utilizat pentru bariera intestinală (Sambuy Y., De Angelis I., Ranaldi G., Scarino M.L., Stammati A., Zucco F., 2005, Ceti Biol. Toxicol., 21:1-26). Celulele Caco-2 (American Type Culture Collection, ATCC, Manassas, VA, SUA) au fost menținute în mediu Eagle modificat după whipocrate 4 * 2002 SERV U S.R.U· I (λ- 2 Ο 1 2 - Ο Ο 6 6 5 - ί 9 -09- 2012
Dulbecco, ρΗ 7,4, suplimentat cu 10% ser fetal bovin, 2 mM l-glutamină, 1% soluție de aminoacizi esențiali și soluție de 0,1% penicilină-streptomicină, în la 37°C, în atmosferă umidificată și cu exces de bioxid de carbon (5% CO2, 95% aer). Celulele au fost crescute în condiții standard până la confluență de 60..70%. Celulele din pasajele 30..40 au fost folosite în cadrul tuturor experimentelor. Celulele Caco-2 au fost inoculate în plăci cu 12 godeuri Transwell® (Costar®, Corning, Corning, NY, SUA), cu membrane filtrante de policarbonat pentru culturi celulare (dimensiunea porilor 3.0 pm), la o densitate de inoculare de 2 x 104 cel/cm2. Mediul de cultură a fost adăugat atât în compartimentul donor, cât și în cele receptor. Mediul a fost schimbat în fiecare zi. Celulele au fost lăsate pentru a se diferenția pentru 20 zile după inoculare, cu monitorizarea rezistenței electrice trans-epiteliale (TEER - TransEpithelial Electric Resistance), prin folosirea unui voltohmmetru digital EVOM (World Precision Instrument, Sarasota, FL, SUA). Pe monostratul de celule Caco-2 s-a determinat influența amestecului de peptidelor cationice obținute din resturile de vitelus și albuș asupra transportului dextranului marcat cu fluoresceină FD-4 (masă moleculară medie 5 kDa). înaintea experimentelor de transport celulele au fost spălate de două ori cu tampon fosfat salin steril și pre-echilibrate pentru o oră cu soluție salină tamponată Hank (HBSS, Hank’s Buffered Salt Solution). După spălarea mediului de creștere celulele au fost tratate cu soluția de peptide cationice, 1 mg/ml concentrație finală în HBSS, în compartimentul apical timp de 2 ore. In godeurile martor s-a aplicat numai HBSS. După 2 ore de la tratament celulele au fost spălate cu tampon fosfat salin steril și s-a adăugat în zona apicală a monostratului o soluție FD-4, în concentrație finală de 1 mg/ml. Din partea bazolaterală s-au prelevat probe de câte 1 ml la 60, 120, 180 și 240 min, completându-se cu soluție HBSS sterilă. Concentrația de FD-4 din probele prelevate din mediul bazolateral s-a determinat prin folosirea unui spectrofluorimetru Jasco FP6500 (Jasco, Easton, MD, SUA), la o lungime de undă de excitare de 400 nm și la o lungime de undă a radiației emise de 550 nm. Rezultatele au fost exprimate ca transport cumulativ în funcție de timp. Toate experimentele au fost realizate în triplicat la 37°C. Toți reactivii folosiți au provenit de la Sigma - Aldrich (Sigma - Aldrich, St. Louis, MO, SUA).
Coeficientul aparent de permeabilitate a fost calculat conform următoarei formule:
^2012-00665-î 9 -09- 2012
Pa=(dC/dt)x(1/AxC0) în care:
Pa este coeficientul aparent de permeabilitate (cm/s) <5C/$este viteza de apariție a FD-4 în compartimentul bazolateral (pg/s)
A este suprafața monostratului de celule CaCo-2
Co este concentrația inițială a FD-4 în compartimentul apical.
Viteza de apariție a FD-4 a fost calculată ca pantă a dreptei de permeație în funcție de timp. Raportul de stimulare a absorbției (R) a fost determinat din valorile Pa conform formulei:
R = Pa(probă) / Pa (martor netratat)
Rezultatele sunt prezentate în tabelul 2. Aceste rezultate demonstrează că peptidele cationice obținute prin hidroliza enzimatică a vitelusului și albușului de ou stimulează transportul FD-4 (cu masa moleculară medie de 3-5 kDa), Raportul de stimulare a absorbției R = 14,33, probabil prin stimularea endocitozei nespecifice după interacția cu mucusul polianionic din matricea extracelulară.
Tab. 2. Efectul peptidelor cationice obținute prin hidroliză enzimatică din vitelusul și albușul de ou rămase după prelevarea embrionilor de găină asupra transportului FD-4 prin monostratul de celule Caco-2.
| Variantă experimentală | Transport FD-4 cumulat la 4 ore (pg) | Coeficientul aparent de permeabilitate Pa (10-6 cm/s) | Raportul de stimulare a absorbției R |
| Martor (HBSS) | 2,23±0,8 | 0,12 | 1,00 |
| Peptide cationice | 27,86±2,2 | 1,72 | 14,33 |
Drojdia seleniată utilizată în exemplul de mai sus se obține după următorul procedeu. Se realizează următorul mediu de cultură pentru drojdii (Saccharomyces cerevisiae, Candida utilis): 30 ... 32 părți glucoză, 0,7 ... 0,8 părți clorură de magneziu (MgCl2.6H2O), 0,4 ... 0,5 părți fosfat disodic (Na2HPO4), 0,6 ... 0,75 părți fosfat monopotasic (KH2PO4), 5 ... 6 părți plasmolizat seleniat de drojdie, 1,5 ... 2 părți derivat de acid tiazolidin-4-carboxilic. Plasmolizatul seleniat de drojdie se realizează după cum urmează: 500 părți drojdie pentru panificație (STAS 985-79, 26% substanță uscată) se emulsionează cu 2 400 ... 2 500 părți apă, se menține 30 min la 70 - 75 °C, se sterilizează 20 min la 105 °C, se răcește
c\- 2 3 1 2 - O fi F 6 5 - î 9 -09- 21)1/
după 30 min se adaugă 0,16 ... 0,18 părți selenit de sodiu (Na2SeO3.5H2O). Se omogenizează la presiune medie (150 ... 200 bari) și se deshidratează prin atomizare la temperatură joasă (140 ... 150°C intrare agent uscare, 70 ... 75°C ieșire agent uscare). Derivatul de acid tiazolidin-4-carboxilic se obține după cum urmează: 1,5 părți riboză, 1,5 părți clorhidrat de cisteină și 1,1 părți carbonat de calciu (CaCO3) se dizolvă în 30 părți apă la 40 ... 50°C, apoi se lasă 24 ore la 37°C; se filtrează excesul de carbonat de calciu, se concentrează sub vacuum până la 5 .. 6 părți și se precipită cu etanol. Precipitatul se reia cu un amestec acetonă : etanol 40 : 60 și se cristalizează prin fierbere pe baie de apă.
Mediul de cultură se sterilizează prin filtrare și se trece apoi într-un bioreactor sterilizat termic și răcit la 30 ... 35°C. După atingerea temperaturii de regim de 32 ... 35°C mediul se inoculează cu 10 ... 15 părți suspensie de cultură pură de drojdie, conținând 14 ... 15 g drojdie/l, obținută prin cultivare în baloane, conform procedeelor uzuale pe mediu identic cu cel descris mai sus. Se cultivă 10 ... 12 ore în aerobioză, la o temperatură 32 ... 35°C, la un pH de 6, 4 ... 6,8 u pH și la o rată de aerare de 1,2 ... 1,4 litri aer pe litru de mediu și pe minut. După trecerea timpului de cultivare aerobă se barbotează timp de 10 ... 15 min cu azot pur, cu o rată de 1, 4 ... 1,6 litri azot pe litru de mediu și pe min și apoi se cultivă drojdiile în anaerobioză timp de 10 ... 12 ore la o temperatură de 25 ... 28°C și la un pH de 5,6 ... 6,0 u pH. La terminarea perioadei de cultivare în anaerobioză se începe aerarea cu o rată de 0,1 litri aer pe litru de mediu și pe min care crește timp de oră până la atingerea ratei inițiale de 1,2 ... 1,4 litri aer pe litru de mediu și pe minut. Se continuă cultivarea în aerobioză la o temperatură 32 ... 35°C și la un pH de 6, 4 ... 6,8 u pH timp de 10 ... 12 ore. La atingerea nivelului de 16... 18 g drojdie pe litru de mediu se separă biomasa de drojdii prin centrifugare continuă la 8 000 ... 10 000 g, iar laptele de drojdie rezultat se supune plasmolizei prin șoc termic, timp de 30 ... 35 min la 70 ... 75°C. Plasmolizatul se sterilizează timp de 20 min la 105°C, se răcește la 60 ... 65°C, se omogenizează la medie presiune (100 ... 200 bari) și se deshidratează prin atomizare la temperatură scăzută (140 ... 150°C intrarea agent uscare, 70 ... 75 °C ieșire agent uscare).
Drojdia cromiată utilizată în exemplul de mai sus se realizează după următorul procedeu. 500 părți drojdie pentru panificație (STAS 985-79, 26%
CV“ 2 Ο 1 2 - O O S 6 5 - 1 9 -09- 2012 substanță uscată) se emulsionează cu 2 400 ... 2 500 părți apă, se menține 30 min la 70 - 75 °C, se sterilizează 20 min la 105 °C, se răcește la 30 ... 35°C, iar după 30 min se adaugă 0,12 ... 0,14 părți clorură de crom. Se omogenizează la presiune medie (150 ... 200 bari) și se centrifughează 20 min la 6000 g. Sedimentul se îndepărtează iar supernatantul se deshidratează prin atomizare la temperatură joasă (max. 150°C intrare agent uscare, max. 80°C ieșire agent uscare).
Orice alte forme de drojdie seleniată sau cromiată pot fi utilizate.
Pulberea care conține embrio-peptide cu biodisponibilitate ridicată în cazul administrării orale, rezultată conform exemplului de mai sus, conține principii active din embrioni de pui de găină cu o structură oligo-peptidică, a căror acțiune fiziologică este amplificată de micro- și oligoelemente (Se, Cr, Zn) legate în compuși cu biodisponibilitate ridicată.
Produsul obținut prin aplicare exemplului de mai sus are următoarele caracteristici:
- aspect: pulbere fină, corespunzător prevederilor Internațional Pharmacopoiea;
- culoare: alb-gălbui până la verde pal;
- miros: caracteristic;
- gust: specific, cu o ușoară senzație dulceagă;
- umiditate (pierdere prin uscare la 105°C, timp de 4 ore): max. 6%;
- conținut în proteină (ca azot total x 6,25): 10%
- peptide (acido-solubile, cu reactiv Folin-Ciocâlteu): 10 mg/g;
- conținut în seleniu total: min. 15 mg/kg;
- conținut în crom total: min. 12,5 mg/kg;
- conținut în zinc total: min. 0,2%
- conținut piridoxină: min. 0,2%
Pulberea de concentrat proteic îmbogățită în peptide obținută prin aplicarea exemplului de mai sus se prelucrează în forme de suplimente nutritive cu doze unitare gastro-rezistente (de ex. capsule operculate) pentru administrare orală.
Exemplu de realizare a invenției se poate realiza și pe alți embrioni de pasăre (curcă, rață, prepeliță etc.) recoltați cu o zi înainte de jumătatea ciclului lor de dezvoltare embrionară completă până la eclozare.
Λ- 2 Ο 1 2 - Ο 9 .? Ș 5 - Î 9 -09 μ;
Exemplul 2. Ouăle non-diapauză de fluture de mătase, Bombyx mori, embrionate timp de 7 zile au fost dezinfectate prin spălări repetate de 3 ori cu o soluție cu 200 ppm de clor activ (preparată prin diluarea a 0,8 ml soluție de hipoclorit de sodiu în 0,5 litri de apă) pentru 1 min, urmată de clătire cu apa deionizată sterilă pentru 3 min. Raportul de spălare a fost de 1 parte ouă embrionate de fluture de mătase la 10 părți soluție de clor activ. Ouăle dezinfectate de fluture de mătase au fost supuse procedeului de obținere a compoziție standardizată în embrio-peptide heterologe descris în exemplul 1, cu singura diferență că etapa de amestecare a erribrio-peptidelor embrionare cu masa < 10 kDa cu embrio-proteinele degradate cu masa > 10 kDa, se realizează în raport de 1 parte embrio-peptide la 4 părți embrio-proteine.
Adăugarea unei cantități mai mari de embrio-peptide provenite din ouă embrionate de fluture de mătase este determinată de acțiunea lor cito-stimulatorie și cito-protectivă mai redusă, așa cum rezultă și din testul efectul pe fibroblaste umane linia ICP-23 prezentat în continuare.
Testările s-au efectuat așa cum au fost prezentate și în exemplu 1, prin creșterea celulelor în tuburi Barski de 2 ml. Mediul de cultură folosit pentru testarea acțiunii embrio-peptidelor extrase din ouă embrionate de fluture de mătase a fost mediu Eagle BME suplimentat cu o cantitate redusă la jumătate de ser fetal bovin (5%), care a fost suplimentat cu 1% embrio-peptide din ouă embrionate de fluture de mătase, concentrate în dializatul ultrafiltratului.
Tab. 3. Efectul embrio-peptidelor din ouă embrionate de fluture de mătase concentrate în difuzatul ultrafiltratului, asupra creșterii și mortalității celulare a fibroblastelor ICP-23 (pasaj 23 in vitro).
| Variantă experimentală | Număr celule | x 104 cel/cm^) | Mortalitate cel. (%) | |
| 72 h | 96 h | 72 h | 96 h | |
| Martor (Mediu Eagle BME cu 10% ser fetal bovin) | 12,28a | 13,40c | 4,30e | 5,24g |
| Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin + 1% embriopeptide | 11,58ab | 12,55cd | 3,35f | 3,82h |
| Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin | 10,12b | 10,89d | 3,94e | 4,52gh |
Valorile urmate de aceeași literă nu diferă semnificativ pentru P<0.05%
Rezultatele au fost comparate cu un standard, reprezentat de mediu Eagle
BME suplimentat cu 10% ser fetal bovin, și cu un martor, în care fibroblastele au
Co%X 1 ow BIROCRATE ζ' * 2002 SERV
A S.R.L.
Λ' 2 Ο 1 2 - Ο ο 5 5 5 - ' 9 - 09- 2012 fost cultivate pe mediu Eagle BME suplimentat cu o cantitate redusă la jumătate de serfetal bovin (5%). Rezultatele sunt prezentate în tab.3.
Embrio-peptidele din ouă embrionate de fluture de mătase, concentrate în difuzatul ultrafiltratului, au dovedit o acțiune citostimulatorie și citoprotectivă pe fibroblastele umane tinere (linia ICP-23, pasajul 23 in vitro) mai puțin pronunțată decât cea a embrio-peptidele din embrioni de găină. După 96 de ore numărul de celule este mai mare cu aprox. 15% (Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin -
10,89.104 celule/cm2, Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin + 1% embriopeptide - 12,55.104 celule/cm2). In același timp mortalitatea la 96 ore a celulelor tratate cu embrio-peptide (3,89%) este 72,9% din mortalitatea prezentă la standardul cu 10% serfetal bovin (5,24%).
Această activitate biologică mai redusă față de fibroblastele umane a embrio-peptidelor din ouă embrionate de fluture de mătase comparativ cu cea a embrio-peptidelor din extract embrionar de pui de găină este explicabilă având în vedere distanța evolutivă mai mare. Pentru a compensa această diferență de activitate biologică în cadrul procesului de obținere a compozițiilor pe baza extractelor embrionare din ouă embrionate de fluturi de mătase s-a procedat la o concentrare dublă a embrio-peptidelor cu masa moleculară >10 kDa, concentrate în dializatul ultrafiltratului.
Produsul obținut prin aplicare exemplului de mai sus are următoarele caracteristici:
- aspect: pulbere fină, corespunzător prevederilor Internațional Pharmacopoiea;
- culoare: alb-gălbui până la verde pal;
- miros: caracteristic;
- gust: specific, cu o ușoară senzație dulceagă;
- umiditate (pierdere prin uscare la 105°C, timp de 4 ore): max. 6%;
- conținut în proteină (ca azot total x 6,25): 10%
- peptide (acido-solubile, cu reactiv Folin-Ciocâlteu): 20 mg/g;
- conținut în seleniu total: min. 15 mg/kg;
- conținut în crom total: min. 12,5 mg/kg;
- conținut în zinc total: min. 0,3%
- conținut piridoxină: min. 0,2%
^-2012-00665-1 9 -09- 2012 ζ»
Exemplul 3. Larvele de trântor sunt recoltate aseptic din celulele fagurilor, la 10 zile de la depunerea ouălelor haploide când vârsta larvelor este 7 zile. Larvele recoltate aseptic sunt supuse procedeului conform fost supuse procedeului de obținere a compoziție standardizată în embrio-peptide heterologe descris în exemplul 1, cu singura diferență că etapa de amestecare a embriopeptidelor embrionare cu masa < 10 kDa cu embrio-proteinele degradate cu masa > 10 kDa, se realizează în raport de 1 parte embrio-peptide la 4 părți embrioproteine.
Adăugarea unei cantități mai mari de embrio-peptide provenite din ouă embrionate de fluture de mătase este determinată de acțiunea lor cito-stimulatorie și cito-protectivă mai redusă, așa cum rezultă și din testul efectul pe fibroblaste umane linia ICP-23 care va fi prezentat în continuare.
Testările s-au efectuat așa cum au fost prezentate și în exemplu 1, prin creșterea celulelor în tuburi Barski de 2 ml. Mediul de cultură folosit pentru testarea acțiunii embrio-peptidelor extrase din larve de trântori a fost mediu Eagle BME suplimentat cu o cantitate redusă la jumătate de ser fetal bovin (5%), care a fost suplimentat cu 1% embrio-peptide din ouă larve de trântori, concentrate în dializatul ultrafiltratului. Rezultatele au fost comparate cu un standard, reprezentat de mediu Eagle BME suplimentat cu 10% ser fetal bovin, și cu un martor, în care fibroblastele au fost cultivate pe mediu Eagle BME suplimentat cu o cantitate redusă la jumătate de ser fetal bovin (5%). Rezultatele sunt prezentate în tab. 4.
Tab. 4. Efectul embrio-peptidelor din larve de trântor, concentrate în difuzatul ultrafiltratului, asupra creșterii și mortalității celulare a fibroblastelor ICP23 (pasaj 23 in vitro).
| Variantă experimentală | Număr celule | x 104 cel/cm^) | Mortalitate cel. (%) | |
| 72 h | 96 h | 72 h | 96 h | |
| Martor (Mediu Eagle BME cu 10% ser fetal bovin) | 12,44a | 13,58c | 4,35e | 5,19g |
| Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin + 1% embriopeptide | 11,32ab | 12,24cd | 3,39f | 4,10h |
| Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin | 10,12b | 10,58d | 3,86ef | 4,69gh |
‘Valorile urmate de aceeași literă nu diferă semnificativ pentru P<0.05%
Embrio-peptidele din larve de trântori, concentrate în difuzatul ultrafiltratului, au dovedit și ele o acțiune citostimulatorie și citoprotectivă pe fibroblastele umane 20 02
W Sah/ c\7 2 O 1 2 - o O 5 6 5 - 1 9 -09- 2012
0) tinere (linia ICP-23, pasajul 23 in vitro). Ca și în cazul celorlalte peptide embrionare provenite din primele stadii de dezvoltare ale insectelor activitatea biologică pe celulele umane este mai puțin pronunțată comparativ cu cea a embrio-peptidele din embrioni de găină. După 96 de ore numărul de celule este mai mare cu aprox. 15% (Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin - 10,89.104 celule/cm2, Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin + 1% embrio-peptide -
12,55.104 celule/cm2). In același timp mortalitatea la 96 ore a celulelor tratate cu embrio-peptide (3,89%) este 72,9% din mortalitatea prezentă la standardul cu 10% ser fetal bovin (5,24%).
Embrio-peptidele din larve de trântor, concentrate în difuzatul ultrafiltratului, au dovedit o acțiune citostimulatorie și citoprotectivă pe fibroblastele umane tinere (linia ICP-23, pasajul 23 in vitro) mai puțin pronunțată decât cea a embriopeptidele din embrioni de găină. După 96 de ore numărul de celule este mai mare cu aprox. 15% (Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin - 10,58.104 celule/cm2, Mediu Eagle BME cu 5% ser fetal bovin + 1% embrio-peptide - 12,24.104 celule/cm2). In același timp mortalitatea la 96 ore a celulelor tratate cu embriopeptide (4,10%) este 21% mai mică decât mortalitatea prezentă la standardul cu 10% ser fetal bovin (5,19%).
Pentru a compensa această diferență de activitate biologică în cadrul procesului de obținere a compozițiilor pe baza extractelor embrionare din larve de trântori s-a procedat la o concentrare dublă a embrio-peptidelor cu masa moleculară >10 kDa, concentrate în dializatul ultrafiltratului.
Produsul obținut prin aplicare exemplului de mai sus are următoarele caracteristici:
- aspect: pulbere fină, corespunzător prevederilor Internațional Pharmacopoiea;
- culoare: alb-gălbui până la verde pal;
- miros: caracteristic;
- gust: specific, cu o ușoară senzație dulceagă;
- umiditate (pierdere prin uscare la 105°C, timp de 4 ore): max. 6%;
- conținut în proteină (ca azot total x 6,25): 10%
- peptide (acido-solubile, cu reactiv Folin-Ciocâlteu): 20 mg/g;
- conținut în seleniu total: min. 15 mg/kg;
- conținut în crom total: min. 12,5 mg/kg;
¢-10 ι 2 - Ή ? 6 5 ! 9 -09- 1011
- conținut în zinc total: min. 0,3%
- conținut piridoxină: min. 0,2%
Compozițiile rezultate prin aplicarea exemplelor de mai sus au fost testate pe loturi de câte 40 șobolani Wistar tineri (20 de masculi cântărind 97 ± 4 g și 20 femele de 95 ± 5 g). Șobolanii au fost hrăniți cu dieta standard. Compozițiile de mai sus au fost administrate oral, ca 50 mg/kg corp/zi, pentru 60 zile. La sfârșitul perioadei experimentale s-a colectat urina și sângele și s-au determinat 17cetosteroizii urinari, colesterolul total și lipidele total. S-a lucrat cu un standard obținut prin uscarea prin pulverizarea a unui amestec obținut prin omogenizarea a 20 părți ouă fertilizate și embrionate 10 zile, conținând embrionii de pui de găină, resturile de vitelus și de albuș, cu 80 părți de maltodextrină, 2 părți drojdie seleniată cu un conținut de 750 mg Se per kg, 1,5 părți drojdie cromiată cu un conținut de 900 mg Cr per kg, 0,2 părți vitamina B6 (piridoxină), 0,01 ... 0,015 părți bioxid de siliciu expandat, 0,01 ... 0,015 părți stearat de magneziu, 0,01 ... 0,015 părți metilparaben și 0,005 ... 0,010 părți propilparaben. De asemenea a fost inclus un lot martor la care s-a administrat numai maltodextrină. Rezultatele sunt prezentate în tab.5.
Tab. 5. Acțiunea compozițiilor conform exemplelor 1-3 asupra unor parametrii biochimici ai animalelor de experiență.
| Varianta experimentală | 17-cetosteroizi (mg/g creatinină) | Colesterol total (mg/dl) | Lipide totale (mg/dl) |
| Martor, femele | 0,16 ±0,05 | 88,2 ±6.4 | 189,3 ±16,2 |
| Martor, masculi | 0,11 ±0,03 | 116,7 ±5.3 | 226,4 ± 12,8 |
| Standard, femele | 0,28 ± 0,05* | 86,4 ± 7,2 | 194,3 ±15,6 |
| Standard, masculi | 0,19 ±0,04* | 111,6 ±7,4 | 216,4 ±16,4 |
| Produs ex.1 femele | 0,58 ±0,07*** | 76,2 ±4,6* | 169,3 ±16,2* |
| Produs ex.1 masculi | 0,32 ±0,08** | 105,7 ±4.2* | 194,3 ±10,2 |
| Produs ex.2 femele | 0,36 ±0,05** | 92,6 ±8,3 | 189,3 ±16,2 |
| Produs ex.2 masculi | 0,27 ± 0,06** | 114,6 ±9,4 | 226,4 ±12,8 |
| Produs ex.3 femele | 0,42 ± 0,07** | 87,5 ± 12,4 | 189,3 ±16,2 |
| Produs ex.3 masculi | 0,28 ± 0,05** | 118,9 ±8,3 | 226,4 ±12,8 |
‘Semnificativ, p<0,05; “Foarte semnificativ, p<0,01; ‘“înalt semnificativ, P<0,001
Aceste rezultate demonstrează în mod evident că produsele pe bază de extracte embrionare stimulează steroidogeneza, toate produsele, inclusiv cel standard determinând o producere crescută de 17-cetosteroizi
¢-2012-00565-ί 9 -09- 2012 precursori ai 17-cetosteroizilor urinari sunt dehidroepiandrostendionul (DHEA) si dehidroepiandrostendionul sulfat (DHEA-S) și alți hormoni corticosuprarenali, deci administrarea orală a extractelor embrionare stimulează axa hipotalamo - hipozifo - suprarenală, cel mai probabil prin acțiunea paracrină / autocrină a embriopeptidelor cu acțiune de factori de creștere.
De asemenea rezultatele demonstrează convingător creșterea biodisponibilității embrio-peptidelor administrate oral din compozițiile realizate conform invenției.
întrucât compoziția realizată conform exemplului 1, pe bază de embriopeptide extrase din embrion de pui de găină, a prezentat efectele cele mai semnificative, această compoziție a fost testată și pe subiecți umani.
Primul experiment s-a realizat pe 30 tineri sportivi (jucători de rugbi), care au participat la studiu ca voluntari. Aceștia au fost împărțiți în loturi de câte 10 subiecți. Primul lot a primit capsule umplute cu maltodextrină (placebo). La cel deal doilea lot au fost administrate 4 capsule pe zi, fiecare a câte 500 mg, administrate 2 capsule la o oră după masa de dimineață și 2 capsule la o oră după masa de prânz. Cel de-al treilea grup a primit 8 capsule pe zi, 4 capsule la o oră după masa de dimineață și 4 capsule la o oră după masa de prânz. Tratamentul a fost realizat timp de 60 zile. Pentru fiecare subiect s-a determinat nivelul unor hormonilor steroidici (DHEA, DHEA-sulfat, androstenedion, testosteron). Rezultatele sunt prezentate în tab. 6.
Tab. 6. Efectul administrării orale timp de 60 de zile a compoziției realizate conform ex.1, din embrioni de pui de găină, asupra nivelului unor hormoni din serul unor tineri sportivi.
| Hormon | Variantă experimenta | ă | |
| Placebo | 4 capsule/zi | 8 capsule/zi | |
| DHEA | 120,6 ± 15,6 | 98,7 ±11,2 | 115,2 ±13,8 |
| DHEA-sulfat | 84,3 ±12,4 | 111,5 ± 10,5 | 107,5 ±10,4 |
| Androstenedion | 87,5 ± 14,1 | 138,8 ±20,8 | 126,5 ±16,4 |
| Testosteron | 101,4 ± 15,1 | 127,3 ±16,6 | 137,4 ±19,6 |
In urma administrării orale a compoziției de embrio-peptide cu biodisponibilitate crescută, realizată conform exemplu 1, nu s-au constat modificări semnificative ale nivelului de DHEA și DHEA-sulfat, dar au fost constatate modificări semnificative ale nivelului de hormoni steroizi androgeni,
^-2012-00665-1 9 -09- 2012 androstenedion și testosteron. Administrarea unei doze duble de compoziție realizate conform exemplului 1 nu a determinat efecte suplimentare, astfel încât doza folosită în următorul experiment, realizat pe subiecți de vârsta a treia, a fost de 4 capsule pe zi.
Subiecții de vârsta a treia (32 femei și 28 bărbați) au avut vârste cuprinse între 55 și 75 ani, cu o stare de sănătate bună. S-au determinat parametrii biochimici inițiali (colesterol total; LDL-colesterol; HDL-colesterol; 17-cetosteroizi; cortizol) pentru fiecare sex. Subiecții au fost apoi împărțiți aleatoriu în două loturi, unul la care s-a administrat placebo (capsule umplute cu maltodextrină) și altul la care s-a administrat compoziția realizată conform exemplu 1, 4 capsule pe zi, fiecare a câte 500 mg, administrate 2 capsule la o oră după masa de dimineață și 2 capsule la o oră după masa de prânz. După 60 zile de administrare orală s-au determinat din nou parametrii biochimici. Rezultatele sunt prezentate în tab. 7.
Tab. 7. Influența administrării orale timp de 60 de zile a compoziției realizate conform ex.1, din embrioni de pui de găină, asupra unor parametrii biochimici ai subiecților de vârsta a treia.
| Varianta experimentală | Colesterol total (mg/dl) | LDLcolesterol (mg/dl) | HDLcolesterol (mg/dl) | 17cetosteroizi (mg/24h) | Cortizol (nmol/l) | |
| Bărbați | Inițial | 248,4 ± 6,3 | 156,5 ±5,3 | 45,2 ± 8,4 | 27,9 ±4,8 | 486,5 ± 24,2 |
| 4 caps./zi compoziție ex.1 | 216,6 ± 9,4** | 117,6± 8,5** | 54,2 ± 7,8* | 33,5 ± 4,2* | 373,6 ± 28,7* | |
| Placebo | 243,5 ± 7,4 | 154,3 ±8,1 | 48,6 ± 9,2 | 29,2 ± 7,4 | 478,4 ± 24,8 | |
| Femei | Inițial | 274,6 ± 4,3 | 174,8 ±4,3 | 48,6 ± 10,2 | 23,7 ± 5,6 | 475,8 ± 26,2 |
| 4 caps./zi compoziție ex.1 | 234,5 ± 9,2* | 140,6 ± 7,2** | 59,8 ± 8,4* | 27,2 ±5,4 | 418,5 ± 25,6* | |
| Placebo | 262,6 ± 8,9 | 184,8 ±5,8 | 47,2 ± 9,7 | 24,8 ±4,2 | 457,8 ± 32,6 |
‘Semnificativ, p<0,05; “Foarte semnificativ, p<0,01;
Compoziția cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral conform invenției, administrată ca supliment nutritiv în doză de 2 capsule la o oră după masa de dimineață și 2 capsule la o oră după masa de prânz, pe o perioadă de minimum 60 zile, re-echilibrează metabolismul, normalizează nivelul de cortizol, scade trigliceridele totale, colesterolul total și fracția sa LDL și crește fracția HDL a colesterolului la subiecții umani de vârsta a treia.
Claims (7)
- REVENDICĂRI1. Compoziția cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral caracterizată prin aceea că este alcătuită din 20 părți de extract embrionar heterolog standardizat în embrio-peptide, 80 părți de maltodextrină, 2 părți drojdie seleniată cu un conținut de 750 mg Se per kg, 1,5 părți drojdie cromiată cu un conținut de 900 mg Cr per kg, 0,2 părți de zinc chelatat în embrio-peptide, 0,2 părți vitamina B6 (piridoxină), 0,5 părți amestec de peptide cationice, formate prin hidroliza enzimatică din vitelusul și albușul de ou rămase după prelevarea embrionilor de pui de găină, care au o activitate antitripsinică specifică de 980± 53,3 unități BAEE per mg de peptide și activitate de stimulare a endocitozei prin epiteliul intestinal, 0,5 părți taurocolat de sodiu, 0,01 ... 0,015 părți bioxid de siliciu expandat, 0,01 ... 0,015 părți stearat de magneziu, 0,01 ... 0,015 părți metilparaben și 0,005 ... 0,010 părți propilparaben, părțile fiind exprimate în unități de masă.
- 2. Extract embrionar heterolog standardizat conform revendicării 1 caracterizat prin aceea că are cu un conținut de 50% proteine și 5% peptide, atunci când este obținut din embrioni de pui de găină, și 50% proteine și 10% peptide, atunci când este obținut din stadiile inițiale ale dezvoltării insectelor.
- 3. Procedeul de obținerea a compozițiilor cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral caracterizat prin aceea că este alcătuit din următoarele etape: obținerea materialului biologic cu o contaminare biologică foarte redusă, prin recoltarea aseptică a embrionilor de pui de găină împreună cu membrana corioalantoidă din ouăle fertilizate și incubate timp de 10 zile, dezinfecția ouălor non-diapauză de fluture de mătase, sau recoltarea aseptică de larve de trântor / larve mascul de Apis meliferă, la 10 zile de la depunerea ouălor haploide, mai exact din larve cu vârsta de 7 zile; dezintegrarea materialului biologic prin intermediul unei mori coloidale și determinarea cantității de substanță uscată în extract; diluarea a 10 părți din embrionii dezintegrați, exprimați ca substanță uscată, cu 90 părți apă sterilă distilată; omogenizarea într-un omogenizator cu piston la înaltă presiune, două cicluri la 50 MPa; disocierea factorilor de creștere din extractul embrionar de receptorii lor solubili; concentrarea embrio-peptidelor prin ultrafiltrarea tangențială printr-o membrană i2 0 1 2 - 0 0 6 6 5 -1 9 -09- 2012 z denaturarea proteinelor din retentant cu masa moleculară >10 kDa prin încălzire pentru 25 min la 85°C; amestecarea dializatului care conține embrio-peptide <10 kDa, cu retentantul cu proteinele denaturate >10kDa; obținerea peptidelor cationice din resturile de vitelus și albuș rămase după recoltarea embrionilor de pui de găină; adăugarea peste acea cantitate de soluție conținând 0,5 părți de peptide cationice, care au o activitate antitripsinică specifică de 1.000 unități BAEE per mg de peptide și activitate de stimulare a endocitozei prin epiteliul intestinal, a 80 părți de maltodextrină, 2 părți drojdie seleniată cu un conținut de 750 mg Se per kg, 1,5 părți drojdie cromiată cu un conținut de 900 mg Cr per kg, 0,2 părți vitamina B6 (piridoxină), 0,5 părți amestec de peptide cationice, formate prin hidroliza enzimatică din vitelusul și albușul de ou rămase după prelevarea embrionilor de pui de găină, 0,5 părți taurocolat de sodiu, 0,01 ... 0,015 părți bioxid de siliciu expandat, 0,01 ... 0,015 părți stearat de magneziu, 0,01 ... 0,015 părți metilparaben și 0,005 ... 0,010 părți propilparaben și amestecarea cu 20 părți de amestec embrio-peptide embrionare - proteine; omogenizarea amestecului prin trecere printr-un omogenizator cu piston la înaltă presiune, 2 cicluri la 35 MPa; uscarea prin atomizare a amestecului format, la o rată de max. 10 kg/h, folosind un atomizor centrifugal operat la 20,000 rpm, la o temperatură a aerului la intrare de 140... 150°C și la o temperatură de ieșire de 80.. .85°C.
- 4. Amestecarea dializatului care conține embrio-peptide <10 kDa, cu retentantul cu proteinele denaturate >10kDa conform revendicării 3 caracterizată prin aceea că este realizată în raport de 1 parte peptide la 9 părți proteine în cazul embrionilor de pui de găină, și 1 parte peptide la 4 părți proteine în cazul materialului biologic provenit din primele stadii de dezvoltare a insectelor, embriopeptidele din embrioni de pui de găină, adăugate în concentrație de 1% în Eagle BME cu 5% ser fetal bovin având o activitate citostimulatorie de minimim 30% și o activitate citoprotectivă, reliefată de scăderea mortalității, de minim 50%, iar embriopeptidele din primele stadii de dezvoltare a insectelor adăugate în concentrație de 1% în Eagle BME cu 5% ser fetal bovin având o activitate citostimulatorie de minimim 15% și o activitate citoprotectivă, reliefată de scăderea mortalității, de minim 50%.
- 5. Etapă de disociere a factorilor de creștere din extractul embrionar de receptorii lor solubili conform revendicării 3 caracterizată prin ace ^“2 012-00565-ί 9 -09- 2012 realizată prin amestecarea a 100 părți din suspensia rezultată cu 1,25 părți de carbonat de zinc și ultrasonicarea pentru 25 min la 500W, pentru a asigura disocierea factorilor de creștere de pe receptorii lor; înlăturarea excesului de carbonat de zinc și resturilor celulare prin centrifugare
- 6. Obținerea peptidelor catioriice din resturile de vitelus și albuș rămase după recoltarea embrionilor de pui de găină caracterizată prin aceea că este realizată prin hidroliza enzimatică cu endo-protează și amidopeptidază a resturilor de vitelus și albuș rămase după recoltarea embrionilor de pui de găină, în raport de 2 părți endo-protează la 100 părți resturi de vitelus și albuș, urmată de cu ultrafiltrarea tangențială a peptidelor cu masă moleculară mai mică de 10 kDa și absorbția din dializat a peptidelor cationice formate pe o rășină schimbătoare de cationi, și de eluarea peptidelor cationice de pe rășina schimbătoare de ioni și determinarea concentrației peptidice cu reactiv Folin-Ciocâlteu.
- 7. Compoziția cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oralcaracterizată prin aceea că, atunci când este administrată ca supliment nutritiv în doză de 2 capsule la o oră după masa de dimineață și 2 capsule la o oră după masa de prânz, pe o perioadă de minimum 60 zile, re-echilibrează metabolismul, crește nivelul de hormoni androgeni la bărbații tineri, normalizează nivelul de cortizol, scade trigliceridele totale, colesterolul total și fracția sa LDL și crește fracția HDL a colesterolului la subiecții umani de vârsta a treia.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200665A RO128485A0 (ro) | 2012-09-19 | 2012-09-19 | Compoziţie cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral şi procedeu de obţinere |
| PCT/RO2013/000016 WO2014104906A2 (en) | 2012-09-19 | 2013-09-17 | Composition with increased bioavailability of orally administrated embryo-peptides and process for its obtainment |
| US14/428,869 US9999654B2 (en) | 2012-09-19 | 2013-09-17 | Composition with increased bioavailability of orally administered embryo-peptides and process for its obtainment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200665A RO128485A0 (ro) | 2012-09-19 | 2012-09-19 | Compoziţie cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral şi procedeu de obţinere |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO128485A0 true RO128485A0 (ro) | 2013-06-28 |
Family
ID=48667344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201200665A RO128485A0 (ro) | 2012-09-19 | 2012-09-19 | Compoziţie cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral şi procedeu de obţinere |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9999654B2 (ro) |
| RO (1) | RO128485A0 (ro) |
| WO (1) | WO2014104906A2 (ro) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108546280A (zh) * | 2018-03-21 | 2018-09-18 | 中国地质大学（武汉） | 一种含硒植物蛋白的提取方法 |
| CN120026135A (zh) * | 2025-04-22 | 2025-05-23 | 山东多芬农业有限公司 | 生物刺激剂混合制备的双阶段控制方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RO74872A2 (ro) * | 1980-01-21 | 1983-11-01 | Cooperativa Agricola De Productie,Ro | Procedeu pentru obtinerea unui produs apicol biologic activ |
| US4830716B1 (en) | 1986-07-03 | 1999-12-07 | Albion Int | Preparation of pharmaceutical grade amino acid chelates |
| CH671516A5 (ro) | 1986-09-16 | 1989-09-15 | Amcis Ag | |
| RO107551B1 (ro) | 1991-05-28 | 1993-12-30 | Gheorghe Mihaescu | Procedeu de obținere a unui extract biostimulator, catabolîzant |
| ATE188609T1 (de) | 1992-07-29 | 2000-01-15 | Drymed A S | Befruchtete muscheleier enthaltende zusammensetzung |
| IT1284571B1 (it) | 1996-09-20 | 1998-05-21 | Adriana Carluccio | Composizione antitumorale contenente come sostanza attiva un estratto embrionale o di utero gravido e relativo procedimento di preparazione |
| CA2197050A1 (en) | 1997-02-07 | 1998-08-07 | Morton P. Shulman | Anti-cancer agents derived from fertilized incubated shell eggs |
| RO119509B1 (ro) * | 2002-08-02 | 2004-12-30 | Hipocrate 2002 Serv S.R.L. | Compoziţie de concentrat proteic, embrionar, îmbogăţit în peptide, şi procedeu de obţinere |
| GB2471827B (en) | 2009-05-11 | 2013-11-20 | Med Eq As | Treatment of stress |
| US20110200737A1 (en) | 2010-02-15 | 2011-08-18 | Winston Suyanto | Composition to enhance cognitive activity |
| US20120028891A1 (en) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Hill's Pet Nutrition, Inc. | Methods of promoting or maintaining an anabolic state in a female animal |
| IN2013MN01230A (ro) * | 2010-11-22 | 2015-04-17 | Boris Slavinovich Farber |
-
2012
- 2012-09-19 RO ROA201200665A patent/RO128485A0/ro unknown
-
2013
- 2013-09-17 US US14/428,869 patent/US9999654B2/en active Active
- 2013-09-17 WO PCT/RO2013/000016 patent/WO2014104906A2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US9999654B2 (en) | 2018-06-19 |
| WO2014104906A2 (en) | 2014-07-03 |
| WO2014104906A3 (en) | 2014-08-14 |
| US20150224171A1 (en) | 2015-08-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101228993B1 (ko) | 발효 및 배양 방법, 식물발효 엑기스, 식물발효 엑기스분말 및 이 식물발효 엑기스 배합물 | |
| EP0511970B1 (fr) | Procede pour preparer un hydrolysat enzymatique | |
| EP0374390A1 (en) | Whey protein composition, a method for producing it and application of the whey protein composition | |
| TWI516280B (zh) | 紅藜萃取物用於製備促進膠原蛋白生成及抗皮膚老化之組合物之用途 | |
| JP5154964B2 (ja) | ローヤルゼリー分解酵素含有物 | |
| CN105200105A (zh) | 一种牡蛎蛋白的保肝护肝肽制剂的制备方法 | |
| JP5213332B2 (ja) | 卵由来の骨強化組成物 | |
| RO128485A0 (ro) | Compoziţie cu biodisponibilitate crescută a embrio-peptidelor administrate oral şi procedeu de obţinere | |
| CN113999300B (zh) | 一种高效提取卵黄抗体的复合沉降剂及方法 | |
| US20220275419A1 (en) | Method for the preparation of low molecular weight porcine lympho-reticular polypeptides and formulations thereof | |
| CN100402548C (zh) | 鹿胎盘生理活性多肽的制备方法 | |
| CN103262939A (zh) | 一种源自鸡胚的抗氧化活性混合肽的制备方法 | |
| Smyth | Cestoda | |
| CN101167760B (zh) | 具有抗肿瘤活性的香菇发酵口服液及制备方法 | |
| RU2274003C2 (ru) | Способ комплексной переработки крови сельскохозяйственных животных для получения биологически активного вещества с противоанемическими свойствами на основе гемоглобина, биологически активное вещество с противоанемическими свойствами (варианты) и продукт, его содержащий (варианты). | |
| JP3172599B2 (ja) | 細胞賦活剤 | |
| KR101490656B1 (ko) | 유단백질 마이얄반응물의 발효물을 함유하는 면역활성 증강용 조성물 | |
| CN104586894A (zh) | 一种从鸡蛋中提取氨基酸的方法 | |
| KR20050003989A (ko) | 난유래 골강화 조성물 | |
| CN114568519A (zh) | 一种具有免疫力改善作用的调制乳制品组合物和应用 | |
| KR20170067949A (ko) | 오계 펩타이드 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물 및 이의 제조방법 | |
| JP2002114694A (ja) | 血中コレステロール低減用組成物 | |
| US20250222051A1 (en) | Multivitamin for adjuvant treatment of tumor, and preparation method and application thereof | |
| RO119509B1 (ro) | Compoziţie de concentrat proteic, embrionar, îmbogăţit în peptide, şi procedeu de obţinere | |
| BG61680B1 (bg) | Биологично активно средство, метод за получаването му илекарствен препарат на негова основа |