RO119862B1

RO119862B1 - Formulare stabilă neapoasă şi procedeu pentru prepararea acesteia

Info

Publication number: RO119862B1
Application number: RO98-01769A
Authority: RO
Inventors: Cynthia L. Stevenson; Sally A. Tao; Steven J. Prestrelski; James B. Eckenhoff (Decedat); Jeremy C. Wright; Joe Leonard
Original assignee: Alza Corporation
Priority date: 1996-07-03
Filing date: 1997-07-01
Publication date: 2005-05-30
Also published as: JP2008195739A; BR9710130A; ZA975942B; CN1224356A; DK0909175T3; AU3407397A; NO986209D0; CZ433898A3; EP0909175B1; NZ333580A; CO4890854A1; SK284490B6; ID19165A; DE69722620D1; PL330869A1; RU2203085C2; NO986209L; CN1231256C; IL127769A0; JP2001504802A

Abstract

Invenţia se referă la o formulare stabilă neapoasă, a unui compus peptidic, care cuprinde cel puţin un compus peptidic care cuprinde cel puţin un solvent protic, neapos fiind stabilă la 37°C, cel puţin 3 luni şi la un procedeu pentru prepararea unei astfel de formulări care cuprinde dizolvarea a cel puţin unui compus peptidic, într-un solvent protic neapos. ŕ

Description

Invenția se referă la o formulare stabilă, neapoasă, a compușilor peptidici, pentru a asigura formulări ale compușilor peptidici de concentrații ridicate.

Se cunoaște din: Zoladex (implant acetat de goserelin), Physicians’s Desk Reference, a 5-a Ediție, pag. 2858-2861 (19969) US 3914412, eliberat pe 21 octombrie, 1975; US 4547370, eliberat pe 15 octombrie, 1985; US 4661472, eliberat pe 28 aprilie, 1985; US 4689396, eliberat pe 25 august, 1987; US 4851385, eliberat pe 25 iulie, 1989; US 5198533, eliberat pe 30 martie, 1993; US 5480868, eliberat pe 2 ianuarie, 1996; WO 92/20711, publicată pe 26 noiembrie, 1992; WO 95/00168, publicată pe 5 ianuarie, 1995; WO 95/04540, publicată pe 26 noiembrie, 1992; “Stability of Gonadorelin and Triptorelin in Aqueous Solution, V.J. Helm, B.W. Muller, Pharmaceutical Research, 7/12, pag. 1253-1256 (1990); “New Degradation Product of Des-Gly¹⁰ -NH₂-LH-RH-Ethylamide (Fertirelin) in Aqueous Solutiori', J.Okada, T. Seo, F.Kasahara, K. Takeda, S. Kondo, J. of Pharmaceutical Sciences, 80/2, pag. 167-170 (1991); “Characterization of the Solution Degradation Product ofHistrelin, a Gonadotropin Releasing Hormone (LHRH) Agonisi’, A.R. Oyler, R.E. Naldi, J.R. Lloyd, D.A. Graden, C.J. Shaw, M.L. Cotter, J. of Pharmaceutical Sciences, 80/3, pag. 271 - 275 (1991); “Parenteral Peptide Formulations: Chemical and Physical Properties of Native Luteinizing Hormone-Releasing Hormone (LHRH) and Hydrophobic Analogues in Aqueous Solutiori', M.F. Powell, L.M. Sanders, A. Rogerson, V. Si, Pharmaceutical Research, 8/10, pag. 1258-1263 (1991); faptul că hormonul de eliberare a hormonului luteinizant (LHRH), cunoscut, de asemenea, ca hormonul care eliberează gonadotropină, (GnRH), este o decapeptidă cu structura:

pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂.

Acesta este secretat de către hipotalamus și se leagă la receptori pe glanda pituitară, eliberând hormonul luteinizant (LH) și hormonul stimulator al foliculului (FSH). LH și FSH stimulează gonadele să sintetizeze hormoni steroizi. Sunt cunoscuți numeroși analogi ai LHRH, incluzând peptide înrudite LHRH care acționează ca agoniști și cele care acționează ca antagoniști. în US 5480868 se prezintă analogii LHRH, cunoscuți ca fiind utili pentru tratarea bolilor dependente de hormoni cum ar fi cancerul de prostată, prostatomegalia benignă, endometrioza, histeromiomul, metofibromul, pubertatea precoce sau cancerul mamar și drept contraceptive. Administrarea cu eliberare susținută este preferată atât pentru compuși agoniști înrudiți LHRH, care reduc numărul receptorilor accesibili după administrare repetată, astfel că producerea hormonilor steroizi este suprimată, cât și pentru compușii antagoniști înrudiți LHRH, care trebuie să fie administrați continuu, pentru inhibarea persistentă a LHRH endogen.

Eliberarea parenterală susținută a medicamentelor, în special medicamente peptidice, asigură numeroase avantaje. Utilizarea dispozitivelor implantabile pentru eliberarea susținută a unei largi diversități de medicamente sau a altor agenți benefici este bine cunoscută în domeniu. Dispozitive tipice sunt descrise, de exemplu, în brevetele US 5034229, US 5057318 și US 5110596. Descrierea fiecăruia dintre aceste brevete este încorporată aici ca referință.

în general, bioaccesibilitatea peptidelor, inclusiv compușilor înrudiți LHRH este redusă și este prezentată în Degradation of the LHRH Analog Nafareli Acetate in Aqueous

Solution, D.M. Johnson, R.A. Pritchard, W.FTaylor, D. Conley, G. Zuniga, K.G. McGreevy,

Intl. JofPharmaceutics, 31, pag. 125-129 (1986) și “PercutaneousAbsorption Enhancement of Leuprolide M.Y. Fu Lu, D. Lee, G.S. Rao, Pharmaceutical Research, 9/12, pag. 15751576 (1992).

RO 119862 Β1

Lutrepulse (gonadorelin acetate for IV injection), Physician's Desk Reference, a 50-a 1

Ediție, pag. 1980-982 (1996), Factrel (gonadorelin HCI for subcutaneous or IV injection), Physician's Desk Reference, a 50-a Ediție, pag. 2877-2878 (1996) și Lupron (leuprolide 3 acetate for subcutanate injection), Physician's Desk Reference, a 50-a Ediție, pag. 25552556 (1996) sunt prezentate formulări LHRH comercializate curent, analogii săi și compuși 5 înrudiți care sunt folosiți pentru injectare parenterală sunt soluții apoase care conțin concentrații relativ scăzute ale compușilor înrudiți LHRH (0,05 la 5 mg/ml) și pot să conțină, 7 de asemenea, excipienți precum manitol sau lactoză. Astfel de formulări ale compușilor înrudiți LHRH trebuie să fie depozitați, fie refrigerați, fie la temperatura camerei pentru 9 perioade scurte de timp.

Formulări ale compușilor înrudiți LHRH accesibile pentru depozitare, administrate 11 pentru eliberare susținută pentru o perioadă de 1 - 3 luni, includ o formulare care cuprinde 15% compus înrudit LHRH dispersat într-o matrice copolimerică de acizi D,L-lactic și glicolic 13 prezentată ca un cilindru pentru a fi injectată subcutanat sunt prezentate în “Soladei” (implant acetat de goserelin), Physicians’s Desk Reference a 50-a Ediție, pag. 2858-2861 15 (1996) și o formulare care cuprinde microparticule cuprinzând un miez de compus înrudit LHRH și gelatină înconjurat de o cochilie copolimerică de acizi D,L-lactic și glicolic. 17

Pharmaceutical Manipulation of Leuprorelin Acetate to Improve Clinical Performance, H. Toguchi, J. oflntl. Medical Reserach, 18, pag. 35-41 (1990) “Long-Term 19 Stability ofAgueous Solutions of Luteinizing Hormone-Releasing Hormone Assessed by an In-Vitro Bioassay and Liquid Chromatigraph/, Y.F. Shi, R.J. Sherins, D. Grightwell, J.F. 21 Gallelli, D.C. Chatterji, J. of Pharmaceutical Sciences, 7316 pag. 819-821 (1984); “Peptide Liquid Crystals: Inverse Correlation of Kinetic Formation and Thermodynamic Stability in 23 Aqueous Solutiorf, M.F. Powell, J. Fleitman, L.M. Sanders, V.C. Si, Pharmaceutical Research, 11/9, pag. 1352 - 1354 (1994).; “Solution Behaviour of Leuprolide Acetate, an 25 LHRHAgonisi, as Determinedby CircularDichroism Spectroscop/, Μ. E. Powers, A. Adejei, M.Y. Fu Lu, M.C. Manning, Intl. J. of Pharmaceutics, 108, pag. 49-55 (1994) prezintă cazul 27 în care microparticulele sunt suspendate într-un diluant fie subcutanat, fie intramuscular.

Aceste produse trebuie să fie depozitate la temperatura camerei sau mai scăzută. 29 Formulările apoase ale compușilor înrudiți LHRH sunt cunoscute ca prezentând atât instabilitate chimică cât și fizică, precum și degradare după iradiere. 31

Formulările care s-au dovedit a fi stabile (t₉₀ aproximativ 5 ani) au fost soluții apoase de concentrație foarte scăzută (25 pg/ml), tamponate (10 mM, tărie ionică de 0,15), depo- 33 zitate la temperaturi nu mai ridicate decât temperatura camerei (25°C) “Parenteral Peptide Formulations: Chemical and Physical Properties of Native Luteinizing Hormone-Releasing 35 Hormone (LHRH) and Hydrophobic Analogues in Aqueous Solution, M.F. Powell, L.M. Sanders, A. Rogerson, V. Si, Pharmaceutical Reserarch, 8/10 paginilel258-1263 (1991) 37

Problema pe care o rezolvă invenția este de a prezenta o formulare stabilă, neapoasă a unui compus peptidic și un procedeu pentru prepararea unei formulări stabile, 39 neapoase.

Formularea stabilă neapoasă, a unui compus peptidic, înlătură dezavantajele de mai 41 sus prin aceea că cuprinde:

a) cel puțin un compus peptidic; și 43

b) cel puțin un solvent protic neapos, formulare care este stabilă la 37° C cel puțin luni. 45

Procedeul pentru prepararea unei formulări stabile neapoase înlătură dezavantajele de mai sus prin aceea că cuprinde dizolvarea a cel puțin unui compus peptidic în cel puțin 47 un solvent protic neapos.

RO 119862 Β1

Prezenta invenție asigură formulări neapoase, stabile, care sunt soluții de compușii peptidici în solvenți protici neapoși. în special, sunt asigurate formulări de cel puțin 10% peptidă. Aceste formulări stabile pot fi depozitate la temperaturi ridicate (de exemplu, 37°C) pentru perioade lungi de timp și sunt utile în special în dispozitive implantabile pentru eliberarea medicamentului pe termen lung (de exemplu, 1-12 luni sau mai mult).

într-un aspect, invenția furnizează formulări neapoase, stabile ale compușilor peptidici, numitele formulări cuprinzând cel puțin un compus peptidic în cel puțin un solvent protic neapos. Formulări preferate includ cel puțin aproximativ 10% (g/g) compus peptidic.

în alt aspect, invenția furnizează un procedeu pentru prepararea unei formulări stabile, neapoase, ale unui compus peptidic, cuprinzând dizolvarea cel puțin a unui compus peptidic în cel puțin un solvent protic neapos. Formulări preferate cuprind cel puțin aproximativ 10% (g/g) compus peptidic.

într-un alt aspect suplimentar, invenția asigură utilizarea formulării stabile, neapoase, pentru tratarea unui subiect care suferă de o afecțiune care poate fi ameliorată prin administrarea formulării stabile, neapoase, care cuprinde cel puțin un compus peptidic în cel puțin un solvent protic neapos.

Prezenta invenție este determinată de descoperirea neașteptată că dizolvând compuși peptidici în solvenți protici neapoși rezultă formulări stabile. Formulări ale compușilor peptidici, cunoscute anterior, care sunt soluții apoase diluate tamponate conținând excipienți cum ar fi EDTA sau acid ascorbic care trebuie depozitate la temperaturi scăzute (4-25’C), formează produse de degradare pe căi de degradare cum ar fi hidroliza catalizată acid/bază, deamidarea, racemizarea și oxidarea. în contrast, formulările revendicate acum stabilizează compuși peptidici la temperaturi ridicate (de exemplu, 37°C la 80’C) și la concentrații ridicate (adică, la cel puțin aproximativ 10%).

Formulări standard de peptidă și proteină constau din soluții apoase diluate. Două aspecte critice ale formulării peptidei includ solubilizarea și stabilizarea moleculei medicamentului.

Solubilizarea peptidei în condiții apoase este cunoscută și întâlnită în natură. Totuși, solubilizarea în condiții neapoase nu este cunoscută. Noi am găsit că este posibil să se formuleze peptide în solvenți protici neapoși.

Stabilitatea peptidei este obținută de obicei prin varierea unuia sau mai multor condiții alese dintre: pH, tipul tamponului, tăria ionică, excipienți (EDTA, acid ascorbic, etc.). Pentru aceste formulări, căile de degradare care în prezență de apă (hidroliza, deamidare, racemizare) nu pot fi stabilizate în întregime. în contrast, în prezenta invenție, peptide foarte concentrate formulate în soluții neapoase cum ar fi propilen glicol și polietilen glicol s-au dovedit a fi stabile chimic și fizic. Astfel de solvenți sunt considerați solvenți protici neapoși. Unii solvenți protici neapoși pot acționa pentru scăderea ratei degradării, deoarece ei nu au momentul de dipol mare necesar pentru stabilizarea etapelor care determină rata. Invenția constă în folosirea solvenților protici neapoși cum ar fi propilen glicol și polietilen glicol pentru stabilizarea formulărilor foarte concentrate de peptidă și proteină împotriva degradării atât chimice, cât și fizice. Descoperirea constă în realizarea că utilizarea propilen glicolului sau polietilen glicolilor îmbunătățește solubilitatea și stabilitatea globală a peptidelor într-o gamă largă de condiții de formulare, incluzând concentrații ridicate și temperaturi ridicate, făcând astfel posibilă eliberarea peptidelor din dispozitive de eliberare implantabile, care nu ar fi în alt mod fezabile. '

RO 119862 Β1

A. Definiții 1

Așa cum s-au folosit aici, termenii care urmează au următoarele înțelesuri:

Termenul “stabilitate chimică înseamnă că se formează un procent acceptabil de 3 produse de degradare chimică, cum ar fi oxidarea sau hidroliza. în particular, o formulare este considerată stabilă chimic dacă nu se formează mai mult de 20% produse de degradare 5 după 2 luni la 37°C.

Termenul stabilitate fizică înseamnă că se formează un procent acceptabil de agre- 7 gate (de exemplu, dimeri, trimeri și forme mai mari); în particular, o formulare este considerată stabilă fizic dacă nu se formează mai mult de 15% agregate după 2 luni la 37°C. 9

Termenul formulare stabilă înseamnă că cel puțin aproximativ 65% compus peptidic rămâne stabil chimic și fizic după 2 luni la 37°C (sau condiții echivalente la o temperatură 11 ridicată). Formulări preferate, în mod deosebit, sunt cele care rețin cel puțin aproximativ 80% compus stabil chimic și fizic în aceste condiții. Formulări stabile preferate, în mod deosebit, 13 sunt cele care nu prezintă degradare după sterilizare prin iradiere (de exemplu, flux gamma, beta sau electronic). 15

Termenii peptidă și/sau compus peptidic înseamnă polimerii de până la aproximativ 50 resturi aminoacide legate împreună prin legături amidice (CONH). în acești termeni 17 sunt incluși analogi, derivați, agoniști, antagoniști și săruri acceptabile farmaceutic ale oricărora dintre acestea. De asemenea, termenii includ peptide și/sau compuși peptidici care 19 au D-aminoacizi, aminoacizi modificați sau derivați sau aminoacizi care se întâlnesc în configurația D- sau L- și/sau unități peptomimetice ca parte a structurii lor. 21

Termenul compus înrudit LHRH înseamnă hormon de eliberare al hormonului luteinizant (LHRH) și analogii și sărurile sale acceptabile farmaceutic. Agoniști octa-, nona- 23 și decapeptidici ai LHRH și antagoniștii sunt incluși în termenul compuși înrudiți LHRH, deoarece sunt LHRH nativ. Compuși înrudiți LHRH preferați, în mod deosebit, includ LHRH, 25 leuprolidă, goserelină, nafarelină și alți agoniști și antagoniști activi cunoscuți.

Termenul concentrație ridicată înseamnă cel puțin aproximativ 10% (g/g) și până 27 la solubilitatea maximă a compusului particular.

Termenul excipient înseamnă o substanță mai mult sau mai puțin inertă dintr-o for- 29 mulare care se adaugă ca diluent sau vehicul sau pentru a da formă sau consistență. Excipienții se deosebesc de solvenți cum ar fi EtOH, care sunt folosiți pentru a dizolva medi- 31 camentele din formulări, de surfactanți neionici cum ar fi Tween 20, care sunt folosiți pentru solubilizarea medicamentelor în formulări și de conservanți cum ar fi alcooli benzilici și metil 33 sau propil parabeni, care sunt folosiți pentru împiedicarea creșterii microbilor.

Termenul solvent protic neapos înseamnă un solvent neapos care conține un atom 35 hidrogen atașat la un atom de oxigen sau azot, astfel că el este capabil să formeze punți de hidrogen sau să doneze un proton. Exemple de solvenți protici neapoși sunt polietilen glicoli 37 (PEG), propilen glicol (PG), polivinilpirolidonă (PVP), metoxipropilen glicol (MPEG), glicerol și glicofurol. 39

Termenul solvent aprotic polar înseamnă un solvent polar care nu conține hidrogen acid și nu acționează ca un donor de punte de hidrogen. Exemple de solvenți aprotici polari 41 sunt dimetilsulfoxidul (DMSO), dimetilforamida (DMF), hexametil-fosforotriamidă (HMPT) și n-metil pirolidonă. 43

B. Prepararea formulărilor

Prezenta invenție este exemplificată prin formulări neapoase de compuși peptidici 45 în solvent protic neapos care sunt stabile pentru perioade prelungite de timp la temperaturi ridicate. Formulări de peptidă și proteină apoase diluate standard necesită~âlegerea tipului 47

RO 119862 Β1 de tampon, tăriei ionice, pH-ului și excipienților (de exemplu, EDTA și acid ascorbic) pentru a obține stabilitatea. în contrast, formulările revendicate obțin stabilizarea compușilor peptidici prin utilizarea solvenților protici neapoși, în special, prin formularea prezentei invenții, s-a asigurat stabilitatea concentrațiilor ridicate (cel puțin aproximativ 10% g/g) a compusului.

Exemple de peptide și compuși peptidici care pot fi formulați folosind prezenta invenție includ acele peptide care au activitate biologică sau care se pot folosi pentru tratarea unei boli sau altei afecțiuni patologice. Ei includ, dar nu sunt limitați la, hormon adrenocorticotrop, angiotensină I și II, peptida natriuretică atrială, bombesină, bradichinină, calcitonina, cerebelină, dinorfina A, alfa și beta endorfină, endotelină, encefalină, factorul de creștere epidermală, fertirelina, peptida de eliberare a gonadotropinei foliculare, galanină, glucagon, gonadorelina, gonadotropină, goserelină, peptida de eliberare a hormonului creșterii, histrelină, insulina, leuprolidă, LHRH, motilină, nafarelină, neurotensină, oxitocină, somatostatină, substanța P, factorul necrozei tumorii, triptorelină și vasopresină. De asemenea, se pot folosi analogi, derivați, agoniști și săruri acceptabile farmaceutic ale celor menționate mai sus.

Compușii peptidici utili în formulările și procedeul prezentei invenții se pot folosi sub forma unei sări, de preferință o sare acceptabilă farmaceutic. Săruri utilizabile sunt cunoscute celor cu pregătire în domeniu și includ săruri cu acizi anorganici, acizi organici, baze anorganice sau baze organice. Sărurile preferate sunt sărurile acetat.

Pentru folosire, în prezenta invenție, sunt preferate peptidele și compușii peptidici care sunt solubili cu ușurință în solvenți protici neapoși. Un specialist în domeniu poate să determine imediat care compuși vor fi utilizați pe baza solubilității lor, adică, compusul trebuie să fie solubil în solventul protic neapos cel puțin într-o cantitate acceptabilă, care poate fi o cantitate eficientă farmaceutic. Solubilități preferate sunt de cel puțin aproximativ 10% (g/g). Compușii peptidici preferați în mod deosebit sunt compușii înrudiți LHRH, incluzând leuprolidă și acetat de leuprolidă.

Proporția peptidei poate varia depinzând de compus, condiția de tratat, solubilitatea compusului, doza așteptată și durata administrării. (Vezi, de exemplu, The Pharmacological Basis of Therapeutics, Gilman și colab., a 7-a ediție (1985) și Pharmaceutical Sciences, Remington, a 18-a ediție (1990), ale căror descrieri sunt încorporate aici ca referințe). Concentrația peptidei în formulări cu concentrație ridicată poate varia de la cel puțin aproximativ 10% până la solubilitatea maximă a compusului. Un domeniu preferat este de la aproximativ 20% la aproximativ 60% (g/g). în mod curent domeniul mai preferat este de la aproximativ 30% la aproximativ 50% (g/g) și domeniul cel mai preferat este de la aproximativ 35% la aproximativ 45% (g/g).

în general, formulările stabile ale prezentei invenții pot fi preparate prin dizolvarea simplă a cantității dorite din compusul peptidic dorit în solventul protic neapos, selectat. Noi am găsit că, pentru solvenții polimerici cum ar fi PEG, solubilitatea tinde să fie invers proporțională cu greutatea moleculară a solventului. Solvenți protici neapoși preferați, includ propilen glicol (PG), polietilen glicol (PEG), metoxipropilen glicol (MPEG), glicerol și polivinilpirolidonă (PVP).

Se cunoaște de către cei cu pregătire în domeniu că apa, tamponul, dizolvanții cum ar surfactanții neionici, excipienți cum ar fi EDTA și conservanții cum ar fi alcolii benzilici, metil și propil parabenii se pot adapta benefic la formulări farmaceutice de peptide. (Vezi, de exemplu, Pharmaceutical Sciences, Remington, a 18-a ediție (1990).) Astfel de agenți pot fi adăugați opțional la formulările revendicate.

RO 119862 Β1

C. Metodologie 1

Noi am găsit că se pot prepara formulări neapoase stabile ale compușilor peptidici prin dizolvarea compusului peptidic care trebuie formulat în solvenți protici neapoși. 3

Noi am testat aceste formulări de compus peptidic, formulări specifice ale compusului leuprolidă, înrudit LHRH, pentru stabilitate prin supunere la îmbătrânire accelerată la tempe- 5 ratură ridicată și măsurarea stabilității chimice și fizice a formulărilor. Rezultatele acestor studii (prezentate, de exemplu, în tabelul III și în fig. 1, 2, 6 și 7) demonstrează că aceste 7 formulări au fost stabile în condiții care aproximează sau depășesc depozitarea pentru 1 an la 37’C. 9

De asemenea, noi am testat formulările de compus peptidic preparate cum s-a descris aici pentru stabilitate după iradiere gamma de 2,5 megarad. Rezultatele, prezentate 11 în tabelul IV, arată că aceste formulări au rămas chimic și fizic stabile după asemenea iradiere. Formulările supuse la iradiere cu flux de electroni, de asemenea, s-au dovedit a fi 13 stabile.

Așa cum s-a prezentat în tabelul I, noi am testat o mare varietate de formulări de 15 peptidă, în mod specific leuprolidă, goserelin, LHRH, bradichinină, insulină și tripsinogen, pentru stabilitate prin dizolvarea (sau încercarea de dizolvare) lor în apă, apoi supunerea lor 17 la îmbătrânire accelerată la temperaturi ridicate. S-a măsurat stabilitatea formulărilor. Rezultatele sunt prezentate în tabelul I ca durată de înjumătățire la 37°C asumând un 19 E_a=22,2 kcal/mol. O gamă largă de peptide testate au fost solubile în solvenții protici neapoși testați și au rămas stabile în condițiile testului. Solubilitatea unei peptide, anume în apă, și 21 stabilitatea soluției rezultate sunt determinate cu ușurință folosind procedurile de rutină cunoscute celor cu pregătire obișnuită in domeniu. 23

Tabelul I

Stabilitatea peptidelor în solvenți protici neapoși 25

FORMULARE	TIMP-ÎNJUMÂTĂȚIRE*
40% leuprolidă în PG	5,2 ani (37’C)
40% goserelină în PG	6,2 ani (80’ C)
20% LHRH în PG	1,2 ani (65’ C)
20% bradichinină în PG	3,2 luni (65’ C)
20% insulină în PG	degradată w/în 24 ore (65’C
40% tripsinogen în PG	insolubil
40% tripsinogen în PEG	insolubil
20% tripsinogen în PEG	7,7 luni (65’C)
*Timp de înjumătățire la 37’C asumând E_a=22,2 kcal/mol.

Formulări de 40% leuprolidă în propilen glicol, păstrate timp de 6 luni la 37’C, au prezentat degradare lineară cum s-a măsurat prin pierderea globală a peptidei din soluție. Ana- 39 liza acestor date a dat o energie de activare (EJ de 16,6 kcal/mol și un t₉₀ de 9,6 luni, demonstrând stabilitatea acestor formulări la temperaturi ridicate. 41

De asemenea, noi am găsit în mod neașteptat, că anumite formulări de peptidă ale prezentei invenții sunt bacteriostatice (adică, inhibă creșterea bacteriană), bactericide (adică, 43

RO 119862 Β1 produc moartea bacteriilor) și sporicide (adică, omoară spori). în special, formulările leuprolidă de 50...400 mg/ml au prezentat activitate bacteriostatică, bactericidă și sporicidă. Stabilitatea probelor nu a fost afectată prin înțepare cu bacterii, arătând că enzimele eliberate din bacteriile omorâte și lizate nu afectează în mod advers stabilitatea produsului. Aceasta demonstrează că aceste formulări nu sunt favorabile pentru activitatea enzimatică.

Unele peptide, de exemplu, calcitonina și leuprolida, sunt cunoscute a fi fizic instabile, prezentând agregare, gelifiere și formarea de fibrile când sunt formulate în soluție în solvenți protici neapoși precum și în soluție apoasă. De exemplu, leuprolida poate fi indusă, la gel prin creșterea concentrației peptidei, introducerea sărurilor sau agitarea blândă. Stabilitatea fizică îmbunătățită poate permite administrarea parenterală mai ușoară, inclusiv administrarea care folosește sisteme implantabile de eliberare a medicamentului.

în mod neașteptat s-a dovedit că adăugarea de solvenți aprotici polari cum ar DMSO la o formulare de solvent protic neapos a anumitor peptide, cum ar fi leuprolida, goserelina și calcitonina, previne gelifierea formulării. Aceasta este aparentă, deoarece solvenți aprotici polari neapoși determină faptul că peptidele să formeze o conformație o structură spi ral ăl alfa helix oarecare, care nu se repliază într-o structură de bandă beta și, prin urmare, nu se gelifică. Astfel, acești solvenți au un efect antigelifiant.

Suplimentar, stabilitatea formulărilor de leuprolida lichide și gelifiate (prin agitare) în solventul protic neapos PG (370 mg/ml) s-a studiat in vitro la 37°C și, respectiv in vivo, la șobolani. Rezultatele sunt prezentate în tabelul II, și arată că ambele formulări, gelifiată și lichidă, au rămas stabile pe o perioadă de 12 săptămâni.

Tabelul II

Studii de stabilitate ale formulărilor lichide și gelifiate de leuprolidă în PG

STUDIU	TIMP (săptămâni)	LICHIDĂ (rămasă %)	GELIFIATĂ (rămasă %)
Ștab, termen lung	6	98,50
Ștab, termen lung	12	98,00
Șobolan	6		97,40
Șobolan	12		95,90

Un aspect principal al invenției este că soluțiile neapoase, care conțin compușii peptidici în solvenți protici neapoși, sunt stabile la temperaturi ridicate pentru perioade lungi de timp. Astfel de formulări sunt stabile chiar când sunt folosite concentrații ridicate. Astfel, aceste formulări sunt avantajoase prin aceea că ele pot fi păstrate pentru perioade lungi de timp la temperatura camerei, sau peste această temperatură. De asemenea, ele sunt adecvate pentru utilizare în dispozitive implantabile de eliberare.

Metodele care urmează s-au folosit pentru realizarea studiilor din exemplele care urmează.

1. Prepararea soluțiilor acetat de leuprolidă

Acetatul de leuprolidă (achiziționat, de exemplu, de la Mallnckrodt, St. Louis, Missouri) s-a cântărit și s-a dizolvat folosind căldură (80’C), turbionare, agitare și/sau centrifugare după cum a fost nevoie, în vehicul (PG, MPEG, PG/H,O, PG/H₂O, PEG/PG, MPEG/H₂O sau PG cu EDTA) la concentrația corespunzătoare (g/g). Unde nu este precizat altfel, termenul PEG înseamnă PEG 300. Termenul PG uscat se referă la formulări PG preparate într-un mediu cu umiditate redusă (adică, atmosferă N₂ uscat).

RO 119862 Β1

Cu excepția cazului când se precizează altfel, conținutul de leuprolidă bază liberă s-a calculat din certificatul de analiză al valorilor puterii ca fiind 37% bază liberă. Aceasta a fost

40% acetat de leuprolidă, cu excepția cazului unde s-a notat altfel.

2. Prepararea rezervoarelor

Rezervoarele dispozitivelor implantabile de eliberare a medicamentului (cum s-a descris în cererea de brevet US 08/595761, încorporată aici ca referință) s-au umplut cu soluție corespunzătoare de acetat de leuprolidă. Dispozitivele umplute au fost supuse apoi testării stabilității. Formularea s-a încărcat în rezervoare de titan sau polimer, cu un tampon polimeric de blocare la fiecare capăt. Apoi rezervorul umplut a fost sigilat într-un ambalaj de folie polimerică și plasat într-un cuptor pentru testarea stabilității.

Ar fi de precizat că formulările din interiorul rezervoarelor acestor dispozitive sunt complet izolate de mediul exterior.

3. HPLC-fază inversă (RP-HPLC)

Toate probele testate pentru stabilitate s-au analizat pentru concentrația leuprolidei și % suprafața maximului folosind o analiză HPLC cu eluție în gradient folosind un dispozitiv automat de prelevare a probelor menținut la 4°C pentru reducerea degradării probei. Condițiile cromatografice folosite sunt listate mai jos.

Condițiile cromatografice ale RP-HPLC

Descriere	Parametru
Coloană	HaiSil C18, 4,6 x 250 mm, S/N5103051
Rată de curgere	0,8 ml min'¹
Volum de injectare	20 μΙ
Detecție	210 nm
Timp de retenție leuprolidă	între 25-30 min
Fază mobilă	A = 100 nM fosfat de sodiu, pH 3,0 B = 90% acetonitril/apă
Gradient	Minute 0 5 25 40 41 46 46,1 50 %B 15 25,5 26,5 65 85 85 15 15

Standarde leuprolidă (în apă) de la 4 la 6 nivele diferite de concentrație, de obicei 33 între 0,1 și 1,2 mg/ml, au migrat împreună cu probele de stabilitate. Probele de stabilitate s-au introdus în paranteze prin seturi standard, cu nu mai mult de 40 probe între seturile 35 standard. Au fost integrate toate picurile dintre volumul golului și 45 min de migrare. Suprafețele picurilor integrate pentru standardele de leuprolidă au fost marcate în funcție de con- 37 centrație. Concentrațiile de leuprolidă pentru proba de stabilitate s-au calculat folosind regresia lineară. Suprafața procentuală a picului pentru picul de leuprolidă suma tuturor picurilor 39 care eluează înaintea leuprolidei (marcate altele) și suma tuturor picurilor după leuprolidă (marcate agregate) au fost, de asemenea, înregistrate și marcate ca o funcție a momen- 41 telor de timp ale probei.

4. Cromatografie de excludere după mărime (SEC) 43

Probe de stabilitate selectate, au fost analizate pentru procentul suprafeței picului și a greutăților moleculare folosind un test SEC cu soluție izocratică și un dispozitiv automat 45 de prelevare a probelor (4’C). Condițiile de cromatografiere utilizate sunt prezentate mai jos.

RO 119862 Β1

Condiții cromatografice SEC

Descriere	Parametru
Coloană	Pharmacia peptide, HR 10/30, 10 x 300 mm
Rată de curgere	0,5 ml min'¹
Volum de injectare	20 pl
Detecție	210 nm
Timp de retenție leuprolidă	Aproximativ 25 min
Fază mobilă	100 mM fosfat de amoniu, pH 2,0, 200 mM clorură de sodiu, 30% acetonitril

Volumul golului și volumul total pentru coloana de excludere după mărime a fost necesar pentru calcularea greutăților moleculare. S-au folosit standardul de greutate moleculară ridicată BiocRad și acetonă 0,1% pentru determinarea volumului golului și respectiv volumului total. Timpii de retenție pentru primul pic din standardul BiocRad și picul pentru acetonă s-au înregistrat și s-au transformat în unități de volum folosind ecuațiile de mai jos. Deoarece aceste valori sunt constante pentru o coloană SEC specifică și sistem HPLC, s-au redeterminat volumul golului și volumul total acolo unde s-au făcut schimbări la coloana SEC sau sistemul HPLC. Apoi s-a făcut o migrare standard urmată de probele de stabilitate. Amestecul standard a conținut aproximativ 0,2 mg/ml din următoarele peptide: Bursin (GM=449), peptidă WLFR (GM=619), Angiotensină (GM=1181), GRF (GM=5108) și Citocrom C (GM=12394). S-au ales aceste standarde deoarece ele determină greutatea moleculară a leuprolidei și toate au pi bazic (9,8-11,0), similar leuprolidei.

Suprafața procentuală a picului a fost înregistrată pentru toate picurile. Greutățile moleculare pentru speciile separate s-au calculat folosind ecuațiile de mai jos.

V_s = rata de curgere (ml/min) x timpul de retenție al maximului probei (min)

V_o = rata de curgere (ml/min) x timpul de retenție al maximului volumului golului (min) V_r = rata de curgere (ml/min) x timpul de retenție al maximului volumului total (min)

V _y

Kd=—^—2 v_t-v₀

Unde:

V_s = volum probă sau standard

V_o = volum gol

V, = volum total

V_s s-a calculat pentru fiecare pic peptidă standard. Apoi s-a calculat Kd pentru fiecare peptidă standard folosind valorile pentru V_t și V_o determinate mai devreme. S-a folosit linia regresiei lineare de la graficul logGM în funcție de Kd’¹ pentru determinarea fiecărui pic din proba de stabilitate. Suprafața procentuală a picului pentru probele de stabilitate a fost, de asemenea, înregistrat.

5. Instrumente și materiale

Instrumentele și materialele folosite pentru RP-HPLC și SEC au fost după cum urmează:

-sistem Waters Milleninium constând din dispozitiv de prelevare automată a probelor

717, pompă 626, controler 6000S, detector de rețea fotodiodă 900 și detector de indice de refracție (Waters Chromatography, Milford, MA);

RO 119862 Β1

- flacoane HPLC, pentru 48 poziții și 96 poziții (Waters Chromatography, Milford, MA) 1

120A, 5 pm;

- 4,6 x 250 mm (Higgins Analytical, Mountain View, CA) Coloană SEC Peptide 3 Pharmacia, HR 10/30 (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ).

6. Puritate 5

Probele de stabilitate s-au analizat folosind RP-HPLC. Suprafața de sub curba pentru picul de leuprolidă împărțită prin suma suprafețelor sub curba tuturor picurilor a dat puritatea 7 procentuală. (Ar fi de remarcat că datele pentru concentrația procentuală prezentate în funcție de datele pentru puritatea procentuală (exemplele 6,8,9 și 10) sunt neconcludente. 9

Metodele de analiză folosite pentru determinarea concentrației % în aceste experimente nu au fost sigure). 11

Următoarele 11 exemple sunt date pentru ilustrarea acestei invenții și nu se va înțelege că pot să fie interpretate în vreun mod care să limiteze întinderea acestei invenții, 13 exemple care sunt în legătură cu fig. 1... 11, care reprezintă:

- fig. 1, stabilitatea soluției 40% acetat de leuprolidă în propilen glicol (PG) după două 15 luni la 80’C cum s-a măsurat prin HPLC în fază inversă (RP-HPLC);

- fig. 2, RP-HPLC a aceleiași probe ca în fig. 1 injectată pe cromatografie de 17 excludere după mărime (SEC) ilustrând formarea a 3% dimer și trimer fără detectarea de agregate de mărimi de ordin mai mare;19

- fig. 3, un grafic Arrhenius care arată pierderea de leuprolidă din soluții 40% de acetat de leuprolidă în propilen glicol (PG);21

- fig. 4, pierderea de leuprolidă dintr-o soluție 40% leuprolidă în PG pe o perioadă de la 6 luni la 37°C, 50’C, 65’C sau 80’C;23

- fig. 5, stabilitatea chimică și fizică a soluției 40% leuprolidă în PG după 4 luni la

80’C;25

- fig. 6, stabilitatea chimică a soluției 40% leuprolidă în PG după 9 luni la 37’ C;

- fig. 7, stabilitatea chimică a unei soluții 40% acetat de leuprolidă în soluție 27 PG/tampon acetat (30:70) după un an la 37’C;

- fig. 8, stabilitatea fizică a unei soluții 40% acetat de leuprolidă în soluție PG/tampon 29 acetat după 1 an la 37’C;

- fig. 9, stabilitatea a unei soluții 40% acetat de leuprolidă în PG/apă cu conservanți 31 (30:70) după 6 luni la 60°C după iradiere;

- fig. 10, stabilitatea pe termn lung a unei soluții 40% acetat de leuprolidă în PG/apă 33 (30:70) pe o perioadă de 6 luni la 37°C după iradiere;

- fig. 11, stabilitatea unei soluții 30% goserelină în PEG/tampon acetat (30:70) după 35 14 zile la 80°C.

Exemplul 1. Studii accelerate de stabilitate ale formulărilor acetat de leuprolidă 37

S-au preparat formulări de 40% (g/g) (echivalente la 37% leuprolidă bază liberă) în vehicul cum s-a descris mai sus și s-au folosit pentru umplerea rezervoarele dispozitivelor 39 implantabile de eliberare a medicamentelor, descrise de asemenea mai sus. Unele rezervoare s-au făcut din materiale-polimerice, în timp ce altele au fost din titan. 41

Dispozitivele umplute au fost supuse la îmbătrânire accelerată prin păstrarea lor la temperaturi ridicate (80-88°C) timp de 7 zile într-un incubator (Precision Scientific orThelco). 43

Aceasta este echivalentă cu 6.luni la 37°C sau aproximativ 1 an la temperatura camerei (25’C), fiind necesară o energie de activare (E_a) de 16,6 kcal/mol. 45

Probele au fost analizate folosind RP-HPLC și SEC așa cum s-a descris mai sus pentru determinarea stabilității chimice și fizice a formulărilor îmbătrânite. 47

RO 119862 Β1

Rezultatele, prezentate în tabelul III, demonstrează că aceste formulări au fost capabile să mențină stabilitatea compusului leuprolidă înrudit LHRH. în fiecare caz, s-a reținut cel puțin 65% leuprolidă.

Tabelul III

Stabilitatea formulărilor protice neapoase de acetat de leuprolidă după 7 zile la temperaturi ridicate

Temperatură CC)	Material rezervor	Formulare	Leuprolidă % în ziua 7
88	Polimer	40% în PG	70
88	Polimer	40% în PG/H₂O (70/30)	73
88	Polimer	40% în PEG/H₂O (90/10)	77
88	Titan	40% în PG	87
88	Polimer	20% în PEG/PG (50/50)	74
88	Polimer	20% în PEG/H₂O (88/12)	68
80	Polimer	40% în PG	74
80	Titan	40% în PG	80
80	Titan	40% în PEG/H₂O (90/10)	86
80	Titan	40% în PG	87
80	Titan	40% în PG	80
80	Titan	40% în 1%EDTA în PG	80
80	Polimer	40% în MEPG 350/H₂0(50/50)	83
80	Titan	40% în PG uscat	76

Exemplul 2. Studii de stabilitate ale formulărilor de acetat de leuprolidă iradiate

S-au preparat formulări de 40% (g/g) acetat de leuprolidă (echivalent la 37% leuprolidă bază liberă) în PG, așa cum s-a descris mai sus, și s-au folosit pentru umplerea dispozitivelor de eliberare a medicamentului, de asemenea, descrise mai sus. Toate rezervoarele au fost făcute din materiale polimerice.

Dispozitivele umplute au fost supuse la iradiere gamma 2,5 megarad. Probele s-au expediat la Sterigenics (Tustin, California) și au fost iradiate gamma (Cobalt 60) în sistem șarjă. Sondele marcate rece s-au expediat și iradiat pe zăpadă carbonică. Apoi probele s-au supus la îmbătrânire accelerată ca în exemplul 1. S-au luat probe în ziua 0 și 7 și s-au analizat folosind RP-HPLC și SEC cum s-a descris mai sus pentru a determina stabilitatea chimică și fizică a formulărilor iradiate.

Rezultatele prezentate în tabelul IV, demonstrează că aceste formulări acetat de leuprolidă au fost stabile după iradiere. în fiecare caz, s-a reținut cel puțin 65%, cu niveluri scăzute de formare de agregate.

RO 119862 Β1

Tabelul IV 1

Stabilitatea formulărilor protice de acetat de leuprolidă 40% (g/g) după iradiere gamma

2,5 megarad în rezervoare de polimer 3

Formulare	Iradiere	Leuprolidă% în ziua 7	SEC
			Ziua 0	Ziua 7
			% monomer	% dimer/ trimer	O/ /0 monomer	% dimer /trimer
40% în PG	Da	88	97,4	0,9	94,5	3,7
40% în PG	Nu	75	98,8	0,03	91,9	5,9
40% în PG	Rece	75	98,3	0,2	92,2	5,6

Exemplul 3. Studii de solubilitate a acetatului de leuprolidă în PG 13

Fromulări acetat de leuprolidă în PG s-au preparat cum s-a descris mai sus. Formulările s-au încălzit la 80’C pentru accelerarea dizolvării leuprolidei în PG. Datele sunt prezen- 15 tate în tabelul V de mai jos.

Tabelul V 17

Leuprolidă % în PG

Gr. Acetat de leuprolidă (mg)	Greutate PG (mg)	Greutate totală	Acetat de leuprolidă %
148,6	225,7	374,3	39,70
154	183,7	337,7	45,60
146,8	147,2	294	49,93

Exemplul 4. Studii de stabilitate accelerată pe termen lung, ale acetatului de 25 leuprolidă în PG

S-au preparat soluții 40% (g/g) de acetat de leuprolidă în PG, s-au încărcat în rezer- 27 voare, s-au depozitat timp de 2 luni la 80°C și s-au analizat cum s-a descris mai sus. Rezultatele, prezentate în fig. 1 (RP-HPLC) și 2 (SEC) arată că s-a recuperat 55,9% leuprolidă, 29 cu numai 37,2% degradare chimică și 15,2% agregare fizică după o perioadă de 2 luni. Aceste formulări au fost stabile (cum s-a definit mai sus) după 7 zile la 80*C, ceea ce 31 corespunde la 2 luni la 37°C.

S-au preparat soluții 40% (g/g) de acetat de leuprolidă în PG, s-au încărcat în rezer- 33 voare, s-au depozitat la 80’C timp de 4 luni și s-au analizat folosind RP-HPLC cum s-a descris mai sus. Fig. 5 este un grafic al leuprolidei a produselor sale de degradare, chimice și 35 fizice, recuperate pe o perioadă de timp de 4 luni. Suma acestor 3 elemente este prezentată, de asemenea, ca balanță a masei. Rezultatele arată că am cuantificat materialul peptidic fie 37 ca leuprolidă intactă, fie ca specie de degradare, indicând că din studiile de stabilitate nu a lipsit vreun proces sau produs de degradare necunoscut. 39

S-au preparat soluții 40% (g/g) de acetat de leuprolidă în PG, s-au încărcat în rezervoare, s-au depozitat la 37’C, 50’C, 65’C sau 80’C timp de 4 la 6 luni și s-au analizat folo- 41 sind RP-HPLC cum s-a descris mai sus. Rezultatele, prezentate în fig. 4, arată că degradarea leuprolidei se potrivește pseudo cineticilor de prim ordin. Mai mult, așa cum s-a discutat 43

RO 119862 Β1 mai sus, fig. 3 arată că degradarea leuprolidei în PG se potrivește linear cineticilor Arrhenius.

Prin urmare, studiile de stabilitate accelerată sunt o tehnică validă pentru cercetarea stabilității leuprolidei și extrapolare înapoi la 37’C.

S-au preparat soluții 40% (g/g) în PG, s-au încărcat în rezervoare, s-au depozitat la 37’C, 50’C, 65’C sau 80°C și s-au analizat folosind RP-HPLC cum s-a descris mai sus. Rezultatele sunt calculate cum s-a descris în Physical Pharmacy: Physical Chemical Principles in Pharmaceutical Sciences, a 3-a ediție, Martin și colab., Capitol 14 (1983) și sunt prezentate E_a ale acestor soluții ca fiind 16,6 kcal/mol cu un t₉₀ de 9,6 luni la 37’C. Datele sunt prezentate mai jos și este prezentat un grafic Arrhenius al datelor în fig. 3.

PG
’C	Kobs (luni^-1)	t_1/2 (luni)
37	1,12 x 10²	61,6
50	3,13 x 10’²	22,2
65	8,64 x 10‘²	8,0
80	0,322	2,4

E_a = 16,6 kcal/mol

Exemplul 5. Studii de stabilitate pe termen lung, ale acetatului de luprolidă în PG Stabilitatea chimică a soluțiilor acetat de leuprolidă 40%, preparate și analizate cum s-a descris mai sus este prezentată în fig. 6. După 9 luni la 37’C a fost prezentă mai mult de 90% (90,1%) ieuprolidă, fiind formate mai puțin de 5% (3,1%) produse de degradare chimică (arătate ca timpuriu) și mai puțin de 10% (5,6%) agregare fizică (arătată ca “târziu) pe baza datelor RP-HPLC, dar în concordanță cu datele SEC.

Exemplul 6. Studii de stabilitate pe termen lung, ale acetatului de leuprolidă în PG/tampon acetat

S-au preparat soluții de acetat de leuprolidă 30% (g/g) în tampon PG/acetat (pH 5,0, 0,0282 M) (30:70) cum s-a descris mai sus, apoi s-au încărcat în fiole de sticlă, s-au iradiat cum s-a descris mai sus și s-au depozitat la 37’C timp de 1 an. Analiza (așa cum s-a descris mai sus) prin RP-HPLC (fig. 7) și SEC (fig. 8) a arătat că aceste formulări au fost stabile. După 9 luni, RP-HPLC a arătat că în formulări a fost prezentă peste leuprolidă 70% activă chimic. Rezultatele SEC au arătat că leuprolidă 90% stabilă fizic a fost prezentă după 9 luni la 37’C.

Exemplul 7. Studii accelerate de stabilitate pe termen lung, ale acetatului de leuprolidă în PG/apă

S-au preparat formulări de acetat de leuprolidă 40% (g/g) în PG/apă cu. conservanți (30:70) prin amestecarea a metil paraben 0,18% și propilparaben 0,025% cu apă, preparând o soluție 30:70 cu conservant și dizolvând acetat de leuprolidă în această soluție cum s-a descris mai sus.

S-a analizat puritatea pe o perioadă de 6 luni cum s-a descris mai sus. Rezultatele sunt prezentate în fig. 9. Aceste date arată că aceste formulări au avut puritate de peste

90% la 45 zile și aproximativ 65% la 6 luni. La punctul ziua 90 datele au prezentat o deviație standard foarte crescută. —————

RO 119862 Β1

Exemplul 8. Studii de stabilitate pe termen lung, ale acetatului de leuprolidă în 1

PG/apă

S-au preparat formulări de acetat de leuprolidă 40% (g/g) în PG/apă (30:70) cum s-a 3 descris mai sus, s-au încărcat în fiole de sticlă, s-au iradiat și s-au depozitat la 37°C timp de luni cum s-a descris mai sus, apoi s-au analizat folosind HPLC. Rezultatele prezentate în 5 fig. 10, au arătat că a rămas peste leuprolidă 70% după 6 luni.

Exemplul 9. Studii accelerate de stabilitate ale goserelinei în pEG 600/tampon acetat7

Formulări de gosorelină 30% (g/g) în PEG 600/tampon acetat (30:70), preparate cum s-a descris mai sus pentru acetat de leuprolidă, au fost depozitate în fiole de sticlă timp de9 zile la 80”C și s-au analizat pentru puritate cum s-a descris mai sus.

Rezultatele din fig. 11 arată că după 9 zile a rămas peste 65% goserelină.11

Exemplul 10. Studii de stabilitate ale formulărilor goserelină

Formulări de (g/g) goserelină 40-45% în fie PEG 600, fie PG/tampon acetat (30:70)13 s-au preparat cum s-a descris mai sus și s-au plasat în containere polimerice. Containerele s-au depozitat la 37° timp de 1 lună într-un incubator. Probele s-au analizat folosind RP- 15 HPLC pentru a determina stabilitatea chimică a formulărilor îmbătrânite.

Rezultatele, prezentate mai jos, demonstrează că aceste formulări au fost capabile17 să mențină stabilitatea compusului înrudit LHRH, goserelină. în fiecare caz, cel puțin 98% goserelină a fost reținută, așa cum s-a indicat prin datele de puritate.19

MEDICAMENT	VEHICUL	PURITATE %	CONCENTRAȚIE % t
goserelină	PEG 600	99,3	23,6
goserelină	PG/tampon acetat (30:70)	98,2	49,7

Exemplul 11. Studii de stabilitate ale formulărilor nafarelină25

S-au preparat formulări de 15% (g/g) nafarelină în fie PEG 600, fie propilen glicol, cum s-a descris mai sus pentru leuprolidă și s-au plasat în containere polimerice.27

Containerele s-au depozitat la 37°C timp de 1 lună într-un incubator.

Probele s-au analizat folosind RP-HPLC pentru a determina stabilitatea chimică a 29 formulărilor îmbătrânite.

Rezultatele prezentate mai jos, au demonstrat că aceste formulări au fost capabile 31 să mențină stabilitatea compusului înrudit LHRH, nafarelină. în fiecare caz, s-a înregistrat cel puțin 99% nafarelină, așa cum s-a indicat prin datele de puritate. 33

MEDICAMENT	VEHICUL	PURITATE %	CONCENTRAȚIE %
naferelină	PEG 600	99,4	15,8
naferelină	PG	99,4	12,9

Modificarea modurilor de realizare, descrise mai sus a diverselor realizări ale acestei 39 invenții vor fi evidente celor cu pregătire în domeniu urmând expunerile acestei invenții așa cum s-au menționat aici. Exemplele descrise mai sus nu sunt pentru limitarea, ci doar exem- 41 plificarea acestei invenții a cărei întindere este definită prin revendicările care urmează. ---------

Claims

Revendicări

1. Formulare stabilă, neapoasă, a unui compus peptidic, caracterizată prin aceea că aceasta cuprinde:

a) cel puțin un compus peptidic; și

b) cel puțin un solvent protic neapos, formulare care este stabilă la 37°C cel puțin 3 luni.
2. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, compusul peptidic este selectat din grupul care constă din leucoprolidă, LHRH, nafarelină și goserelină.
3. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, compusul peptidic este un compus înrudit cu LHRH.
4. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că aceasta cuprinde cel puțin 10%, în greutate, compus peptidic.
5. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că aceasta cuprinde cel puțin 30%, în greutate, compus peptidic.
6. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că este stabilă la 37’C timp de cel puțin un an.
7. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că aceasta cuprinde în plus un solvent aprotic, polar, neapos.
8. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că solventul aprotic polar, neapos, este selectat din grupul care constă din DMSO și DMF.
9. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că aceasta constă, în principal, din 30 până la 50%, în greutate, din compusul acetat de leucoprolidă înrudit cu LHRH în DMSO.
10. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că aceasta constă, în principal din leucroprolidă și DMSO în proporție de 370 mg de leucoprolidă la 1 ml DMSO.
11. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că este stabilă după iradiere.
12. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că este adaptată pentru un dispozitiv implantabil de eliberare a unui medicament.
13. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că cel puțin un solvent protic, neapos, este selectat din grupul constând din PG, PEG și glicerol.
14. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că formează un gel.
15. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, în plus, cuprinde cel puțin un component selectat din grupul constând dintr-un excipient, un agent activ de suprafață, un dizolvant și un conservant.
16. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că aceasta constă, în principal, din aproximativ 30% până la 50%, procente în greutate, acetat de leucoprolidă, compus înrudit LHRH, în PEG sau un amestec al acestora.
17. Formulare conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că prezintă o activitate bactericidă sau sporicidă.
18. Procedeu pentru prepararea unei formulări stabile, neapoase, definită în oricare din revendicările de la 1 la 17, caracterizat prin aceea că acesta cuprinde dizolvarea a cel puțin unui compus peptidic în cel puțin un solvent protic neapos.
19. Procedeu conform revendicării 18, caracterizat prin aceea că, în plus, cuprinde etapa de adăugare a cel puțin unui solvent aprotic polar.