PT99483A

PT99483A - Processo para a preparacao de antagonistas de oxitocina de piperidinilcanfro- -sulfonilo

Info

Publication number: PT99483A
Application number: PT99483A
Authority: PT
Inventors: Mark G Bock; Ben E Evans; Roger M Freidinger; Kevin Gilbert; Doug W Hobbs; George F Lundell; Douglas J Pettibone; Kenneth E Rittle
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1990-11-13
Filing date: 1991-11-12
Publication date: 1992-09-30
Also published as: EP0486280A2; IE913933A1; AU8780191A; NO914429L; FI915329A0; EP0486280A3; CA2055024A1; KR920009822A; JPH0532634A; FI915329A; IL99957A0; NO914429D0; MX9102028A; JPH0751564B2

Description

CAMPO DO INVENTO O presente invento é tuna continuação em parte do pedido de patente anterior com o Número de Série 07/612.344, depositado em 13 de Novembro de 1990. O presente invento proporciona novos compostos, novas composições, métodos para a sua utilização e métodos para o seu fabrico. Estes compostos são regra geral farmacologicamente úteis como agentes da terapia obstétrica e ginecológica. As actividades farmacológicas atrás mencionadas são úteis para o tratamento de mamíferos. Mais concretamente, os compostos do presente invento podem ser utilizados no tratamento do trabalho pré-termo, na paragem do trabalho preparativo da Cesariana e no tratamento da dismenorreia. Nesta data, existe a necessidade de agentes como estes na área da terapia obstétrica e ginecológica.

ANTECEDENTES DO INVENTO

No campo dos obstétricos, um dos problemas mais importantes é a "gestão" do trabalho de pré-termo. Um número significativo de gravidezes com mais de 20 semanas de gestação, experimentam trabalho e parto permaturos, os quais são uma das principais causas da morbidade e mortalidade neonatais. Apesar dos grandes avanços nos cuidados neonatais, a retenção do feto in utero é preferida na maioria dos casos.

Os agentes tocolíticos (relaxantes uterinos) que são correntemente utilizados incluem os agonistas B2~adrenérgicos, sulfato de magnésio e etanol. A ritodrina, o aganista B2~adre-nérgico, causa uma número de efeitos secundários cardiovasculares e metabólicos na mãe, incluindo a taquicardia, uma maior secreção da renina, hiperglicémia (e hipoglicémia reactiva na criança). Outros agonistas J32-adrenérgicos, incluindo a terbutalina e o -4-

albuterol produzem efeitos secundários semelhantes aos da rito-drina. O sulfato de magnésio nas concentrações de plasma acima da gama terapêutica de 4 a 8 mg/dl pode causar a inibição da condução cardíaca e da transmissão neuromulcular, depressão respiratória e prisão cardíaca, o que faz que este agente não seja adequado nos casos em que a função renal está enfraquecida. 0 etanol é tão eficaz como a ritodrina na prevenção do trabalho prematuro, mas não produz a redução correspondente na incidência do esgotamento respiratório fetal que a administração da ritodrina proporciona.

Foi sugerido que um antagonista de oxitocina selectivo é o agente tocolítico ideal. Nos últimos anos, foram acumuladas provas que sugerem fortemente que a oxitocina é o iniciador fisiológico do trabalho de parto em várias espécies mamíferas, incluindo seres humanos. Acredita-se que a oxitocina exerce este efeito, em parte, por contracção directa do miométrio uterino e, em parte, por aumento da síntese e libertação das prostaglandinas contráteis do endometrio/caduco uterino. Estas prostaglandinas podem, além disso, ser importantes no processo de amadurecimento cervical. Por meio destes mecanismos, o processo de trabalho (termo e pré-termo) é iniciado devido a uma sensibilidade elevada do útero à oxitocina, resultante em parte de um aumento bem documentado do número de receptores de oxitocina neste tecido. Esta "regulação acima" dos receptores de oxitocina e a maior sensibilidade uterina parece ser devido a efeitos tróficos da elevação dos níveis de plasma do estrogénio em direcção ao termo. Devido ao bloqueamento dos efeitos directos (contrátil) e indi-rectos (síntese aperceiçoada da prostaglandina) da oxitocina no útero, um antagonista selectivo da oxitocina será provavelmente mais eficaz para o tratamento do trabalho de pré-termo do que os regímens correntes. Além disso, uma vez que a oxitocina no termo tem apenas efeitos significativos no útero, será de esperar que um tal composto tenha efeitos secundários pouco significativos, se os tiver.

Os compostos do presente invento podem também ser úteis para o tratamento da dismenorreia. Esta doença é caracterizada por dor cíclica associada às menstruações durante os ciclos ovulatórios. Pensa-se que a dor resulta de contracções uterinas e de isquemia, provavelmente mediada pelo efeito das prostaglan-dinas produzidas no endometrio secretor. Devido ao bloqueamento dos efeitos directo e indirecto da oxitocina sobre o útero, um antagonista selectivo da oxitocina pode ser mais eficaz para o tratamento da dismenorreia que os regímens correntes.

Uma utilização adicional para o presente invento consiste na interrupção do trabalho preparatório na cesariana. Determinadas espiroindanilpiperidinas e espiroindenilpiperidinas são já conhecidas (Patentes Norte Americanas 3.654.287 e 3.666.764). No entanto, elas são referidas como úteis como agentes anestésicos, o que é muito diferente da utilidade do presente invento. É, por isso, um objectivo do presente invento identificar substâncias que antagonizem mais eficazmente a função da oxitocina em estados doentios em animais, de preferência mamíferos, especialmente em seres humanos. É outro objectivo deste invento prepararem-se novos compostos que inibem mais selectiva-mente a oxitocina. É ainda outro objectivo deste invento desenvolver um método para antagonizar as funções da oxitocina em estados doentios em mamíferos. É também um objectivo deste invento desenvolver-se um método para a prevenção ou tratamento de perturbações relacionadas com a oxitocina, em particular o trabalho pré-termo e a dismenorreia. -6-

SUMÃRIO DO INVENTO

Foi agora descoberto que os compostos de fórmula I são antagonistas da oxitocina e que se ligam ao receptor de oxitoci-na. Estes compostos são úteis para o tratamento e prevenção de perturbações relacionadas com a oxitocina em animais, de preferência mamíferos e especialmente seres humanos. Estas perturbações são essencialmente o trabalho pré-termo e a dismenorreia. os compostos também encontram utilidade na interrupção da preparação de trabalho para a cesariana.

Os compostos do presente invento são aqueles com a seguinte fórmula estrutural geral I:

e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que: X é C=0, CH , P02H' 0, P02H-0-Y, em que Y é alquilo S, SO, so2/ 0, C-NH-, e S02NH; m é um inteiro de zero a três; n é um inteiro de zero a dois; p é um inteiro de zero a dois; q é um inteiro de zero a um; r é um inteiro de zero a cinco; 1 2 R e R são mdependentemente hidrogénio, halogénio, hidróxi, alquilo alcóxi C1_1Q e trifluorometilo; 3 R é hidrogénio, alquilo halogénio, hidróxi, e -8- οχο a ligaçao 2,3 está satura- . 3 com a condição de que quando R e oxo, da; R^ é hidrogénio, fenilo, hidroxialquilo C1_1Q e alquilo C^^;

R^ e R^ são independentemente hidrogénio, e alquilo Cj_1Q; ainda em que R5 e R6 em conjunto formam 0X0, fenilo fundido e cicloalquilo C3_g não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são hidróxi, alquilo C1_10, hidroxialquilo c1_10/ alcôxi C1_10, alcoxialcoxialcoxialquilo 7 8 9 R , R e R são mdependentemente hidrogénio, alquilo não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são ciano, guando C é dois a dez, hidroxilo, carboxilo, alcóxi C1_1Q, alcoxicarbonilo C1_1Q e -9-

aneis heteroclclicos de 5 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1 heteroátomo, em que o referido heteroãtomo é N e os referidos substituintes são oxo, amino, alquilamino

*Vl·· carboxialquilcarbonilamino C1_10, dicarboxialquilamino C1_1Q e dialcoxicarbonilalquilamino ; dialquilo Cl_10, alcóxi C7_1Q, alcoxicarbonilo alcoxicarbonilalquilaminocarbonilo r fenilo fundido, ciano, cianoalquilo c2_io' fosfato, fosfonato substituído por alquilo sulfonato, sulfonato substituído por alquilo sulfonato substituído por alquilo substituído por halogênio,

-(CH_) -N-R10, em que R10 é z r hidrogénio, alquilsulfonilo ' alcarilsulfonilo C^.^, aralquilsulfonilo alcoxiarilsulfonilo aminosulfonilo, alquilaminossulfonilo dialquilaminossulfonilo -10-

cicloalquilalquilo, bicicloalquilo ou tricicloalquilo não substituído ou substituído, em que o referido substituinte é oxo e

sulfonilo substituído por cicloalquilalquilo, bicicloalquilo ou tricicloalquilo C3_^g n^° substituído ou substituído, em que o referido substituinte é oxo, oxima e hidróxi; e em que R^ é hidrogénio, alquilo C1_1Q, carboxialquilo e alcoxicarbonilalquilo CL ,n;

12 11 X—-LU - (CH„) -N-CO-R , em que R é como definido anteriormente e z r 2.1 ΈΓΧ „12 . R e hidrogénio, amino, alquilamino C^_^0,

alquilo Q não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são cicloalquilo C^_g não substituído ou substituído, em que o referido substituinte é hidróxi e carbóxi; bi e tricicloalquilo c^o-i5f halogénio, hidróxi, carbóxi, oxo, oxima, -11-

alquiltio C1_1Q, alquilsulfinilo alquilsulfonilo C1_1Q/ alcoxicarbonilo aneis heterocíclicos de 4, 5, 6 e 7 membros não substituídos ou substituídos com 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos ou metades, em que os referidos hetero átomos ou metades são N, S, SO, SC>2 e 0, em que os referidos substituin-tes são

alquilo C1_1Q/ aralquilo aralcóxi C1_1Q, alcarilo C1-10, amino, alquilamino C1_1Q/ oxo, oxima, fenilo fundido, alcoxicarbonilo carbonato de alquilo c1_10/ ureído de alquilo carmato de alquilo e aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros não

substituídos ou substituídos, com 1, 2, 3 e 4 hetero átomos, em que os referidos hetero átomos são N, 0 e S e em que os referidos substituintes são oxo e fenilo fundido; fenilo não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são halogénio, hidróxi, carbóxi, alquilo carboxialquilo alcóxi C1-1(), sulfato e aneis heteroclclicos de 5, 6 e 7 membros, com l, 2, 3 e 4 hetero átomos, em que os referidos hetero átomos são N, O e S amino, aminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo alquilamino dialquilamino alquilcarbamato alquilcarbonato C1->10, alquilureído aralquilcarmato C1-10, arilõxi não substituído ou substituído em que os referidos substituintes são amino, alquilo e aminoalquilo c1_10/ aralquilóxi C1_1Q, aralquilóxi 01-10 não substituído ou substituído em que o referido substituinte é carmato de alquilo Ν,Ν-alquil C1_1()-carboxialquilo e Ν,Ν,Ν-dialquilo C^^g-alcoxicarbonilalquilo c^_^q/ cicloalquilo C_ _ não substituído ou substituído em que os

J "O referidos substituintes são alquilo C1_1Q e carbóxi; Ν,Ν-dialquilo C^.^g/ -13-

bicicloalquilo e tricicloalquilo C= ,_ não substituído ou 0*10 substituído em que o referido substituinte é carbóxi; alcóxi C1_1Q,

I fenilo não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são amino, halogénio, alquilo alcóxi C1_10, nitro, fenil carbonilo e aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1, 2, 3 ou 4 átomos heterocíclicos, em que os referidos hetero átomos são 0, N e S e em que o referido substituinte é oxo; aneis heterocíclicos mono e bicíclicos de 5, 6, 7 ou 8 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1, 2, 3 ou 4 átomos ou metades hetero, em que os referidos átomos ou metades hetero são O, N, S e S02 e em que os referidos substituintes são oxo, hidróxi, carbóxi, amino, carboxialquilo alquilo C1_1Q, alcóxi C1-1Q, aralcóxi alcarilóxi ^_10, alcóxicarbonilo alcoxicarbonilamino c^_10/

alcoxicarbonilalquilo c1_10/ aralcoxicarbonilo C1-10 e aralcoxicarbonilo C1-1Q e arilo substituído ou não substituído em que os referidos substituintes são alquilo C^, carbôxi e halogénio; g e R são juntos para formarem aneis heterocíclicos de membros que contêm 2, 3 ou 4 heteroátomos, em que os hetero átomos são N, 0 e S e 7 em que R 5, 6 e 7 referidos - (CH2) r“C0-NH-;Rl31 em Sue r13 é alquilo C1_10, aminoalquilo c^_-lq/ alcoxicarbonilalquilo 01-10, carboxialquilo C1-10, aneis heterocíclicos bicíclicos de 8 membros que contêm 1 ou 2 hetero átomos em que os referidos hetero átomos são N, -(CH2)rNH-CO-NH-R14, em que R14 é hidrogénio, alquilo ^_10 substituído ou não substituído e bi- e tricicloalquilos C7_15/ em que os referidos substituintes são carbóxi, alcoxicarbonilo c1_10f aminocarbonilo e carboxialquilo e aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros substituídos e não substituídos com l ou 2 átomos ou metades hetero em que os referidos átomos ou metades hetero são N, O, S, SO e S02 e em que os referidos substituintes são 0X0, carbóxi, amino, carboxialquilo C1_>10, alquilo C^^q e alcoxicarbonilamino C^_^Q.

Os sais abrangidos dentro do termo "sais farmaceutica-mente aceitáveis" são sais não tóxicos dos compostos deste invento, os quais são geralmente preparados por reacção da base livre com um ácido orgânico ou inorgânico. Os sais representativos são os seguintes sais:

Acetato Lactobionato Benzenossulfonato Laurato Benzoato Malato Bicarbonato Maleato Bissulfato Mandelato Bitartrato Mesilato Borato Met ilbrometo Brometo Metilnitrato Edetato de cálcio Metilsulfato Camsilato Mucato Carbonato Napsilato Cloreto Nitrato Clavulanato Oleato Citrato Oxalato dicloridrato Pamoato (Embonato) Edetato Palmitato Edisilato Pantotenato Estolato Fosfato/difosfato Esilato Poligalacturonato Fumarato Salicilato -16-

Estearato Subacetato Succinato Tanato Tartarato Teoclato Tosilato Trietiodeto Valerato

Gluceptato Gluconato Glutamato Glicolilarsanilato Hexilresorcinato Hidrabamina Hidrobrometo Cloridrato Hidroxinaftoato Iodeto Isotionato Lactato 0 termo "quantidade farmacologicamente eficaz" pretende significar aquela quantidade de um medicamento ou de um agente farmacêutico que vai provocar a resposta biológica ou medicinal de um tecido, sistema, animal ou ser humano pretendida pelo investigador ou clinico. 0 termo "alquilo" pretende significar alcanos, alquenos e alquinos de cadeia linear ou ramificada, com um ou mais graus de insaturação em qualquer posição na cadeia. 0 termo "arilo" pretende significar fenilo.

Nvj*' O termo "cicloalquilo" pretende significar aneis cíclicos de alcanos, alquenos ou alquinos com um ou mais graus de insaturação em qualquer posição do anel.

Sempre que os termos "alquilo" ou "arilo" ou então as respectivas raízes de prefixo apareçam no nome de um substituinte (por exemplo aralcoxiarilóxi), deve-se interpretar que eles estão abrangidos pelas limitações dadas anteriormente para "alquilo" e "arilo". Os números designados de átomos de carbono (por exemplo, devem-se referir independentemente ao número de átomos de carbono num alquilo ou numa metade alquilo cíclica ou na porção alquilo de um substituinte maior onde o alquilo aparece como uma raiz de prefixo. 0 termo "oxo" deve referir-se ao substituinte =0. O termo "halogénio" deve incluir iodo, bromo, cloro e flúor. 0 termo "trabalho de pré-termo" significa a expulsão de um útero de uma criança viável antes do tempo normal de gestação, ou mais particularmente, início do trabalho com desaparecimento e dilatação do cérvix antes da 37â semana de gestação. Pode ser ou não associado ao sangramento vaginal ou à roptura das membranas, O termo "dismenorreia" significa menstruação dolorosa. 0 termo "cesariana" significa incisão das paredes abdominal e uterina para remoção de um feto.

Conforme é aqui utilizado, a definição de cada expressão, quando ocorre mais do que uma vez em qualquer estrutura, pode ser independente da sua definição noutra parte da mesma estrutura. A capacidade dos compostos de fórmula I em antagonizarem a oxitocina torna estes compostos úteis como agentes farmacológicos em mamíferos, especialmente em seres humanos, para o tratamento e prevenção de perturbações onde a oxitocina esteja envolvida. Exemplos destas perturbações compreendem o trabalho de pré-termo e especialmente a dismenorreia. Estes compostos podem também encontrar utilidade na interrupção do trabalho preparatório para a cesariana. Devido à relação conhecida entre a vasopressina e a oxitocina, os compostos do presente invento são também úteis como antagonistas da vasopressina. Eles são úteis para o tratamento ou prevenção de estados doentios que envolvem perturbações da vasopressina, incluindo a sua utilização como diuréticos e no colapso cardíaco congestivo.

Os compostos do presente invento podem ser administrados na forma de dosagem oral, tal como em comprimidos, cápsulas (cada compreendendo formulações de libertação retardada e de libertação sustida), pílulas, pós, grânulos, elixires, tinturas, suspensões, xaropes e emulsões. Da mesma maneira, eles podem ser administrados pela via intravenosa (bolus e infusão), intraperito-neal, subcutânea, ou intramuscular, todas empregando formas bem conhecidas dos especialistas das artes farmacêuticas. Uma quantidade eficaz, mas não tóxica, do composto desejado pode ser empregue como agente tocolítico. O regímen de dosagem que utiliza os compostos do presente invento é seleccionado de acordo com uma variedade de factores, que incluem o tipo, espécie, idade, peso, sexo e estado do ponto de vista médico do doente; a gravidade da doença a tratar; a via de administração; a função renal e hepática do paciente; e o composto particular ou o respectivo sal empregue. Um médico ou veterinário medianamente especializados podem determinar e prescrever facilmente a quantidade eficaz do medicamento necessário para evitar, contrariar ou suspender o progresso da doença.

As dosagens orais do presente invento, quando utilizadas para os efeitos indicados, variarão entre cerca de 0,3 e 6,0 g/dia, oralmente. Intravenosamente, as doses mais preferidas variarão entre 0,1 e cerca de 10 mg/minuto, durante uma infusão a taxa constante. Vantajosamente, os compostos do presente invento podem ser administrados numa dose diária individual, ou então, a dose diária total pode ser administrada em doses divididas por duas, três ou quatro vezes ao dia. Além do mais, os compostos preferidos para o presente invento podem ser administrados na forma intranasal, via utilização tópica de veículos intranasais adequados, ou através de vias transdérmicas, utilizando formas de emplastros transdérmicos para aplicação à pele, os quais são bem conhecidos dos especialistas na arte. Para ser administrado na forma de um sistema de administração transdérmico, a administração da dosagem será, evidentemente, contínua em vez de intermitente, ao longo do regímen de dosagem.

Nos métodos do presente invento, os compostos aqui descritos em pormenor podem formar o ingrediente activo, e são tipicamente administrados em mistura com diluentes, excipientes ou veículos farmacêuticos adequados (referidos colectivamente como materiais "veículo··), os quais são seleccionados adequadamente em função da forma de administração pretendida, isto é, comprimidos orais, cápsulas, elixires, xaropes, etc., e das práticas farmacêuticas convencionais.

Por exemplo, para administração oral na forma de um comprimido ou cápsula, o componente de medicamento activo pode ser combinado com um veículo inerte farmaceuticamente aceitável, não-tóxico, oral, tal como etanol, glicerol, água, etc. Além do mais, quando desejado ou necessário, podem-se também incorporar na mistura agentes ligantes, lubrificantes, desintegrantes e corantes. Ligantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais tais como glicose ou beta-lactose, adocicantes de milho, gomas naturais e sintéticas tais como acácia, tragacanto ou alginato de sódio, carboximetilcelulose, polietileno glicol,

ceras, etc. Os lubrificantes utilizados nestas formas de dosagem podem ser oleato de sódio, estearato de sódio, estearato de magnésio, benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de sódio, etc. Os desintegrantes podem ser, sem limitação, amido, metil celulose, agar, bentonite, goma de zantan, etc.

Os compostos do presente invento podem também ser administrados na forma de sistemas de administração de liposomas, tais como pequenas vesículas unilamelares, grandes vesículas unilamelares e vesículas multilamelares.

Os liposomas podem ser constituídos a partir de uma variedade de fosfolípidos, tais como colesterol, estearilamida ou fosfatidilcolinas.

Os compostos do presente invento podem também ser administrados por utilização de anticorpos monoclonais como veículos individuais aos quais as moléculas são ligadas. Os compostos do presente invento podem também ser ligados a polímeros solúveis como veículos adequados para os medicamentos. Estes polímeros podem incluir a polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihidroxietilas-partamida-fenol, ou polietilenooxidepolilisina substituída por resíduos de palmitol. Além do mais, os compostos do presente invento podem ser ligados a uma classe de polímeros biodegradáveis úteis para obtenção de libertação controlada de um medicamento, por exemplo, ácido poliáctico, caprolactona de polepsilon, ácido butírico de polihidróxi, poliortoésteres, poliacetais, polihidropiranos, policianoacrilatos e copolímeros de blocos de hidrogeles de ligação cruzada ou anfiláticos.

Os compostos de fórmula I podem ser preparados facilmente de acordo com os seguintes Esquemas de reacção e Exemplos -21-

ou modificações, por utilização de materais de partida facilmente adquiríveis, reagentes e procedimentos de síntese convencionais. Nestas reacções, ê também possível empregarem-se variantes, as quais são elas próprias conhecidas dos técnicos da arte, mas que não são mencionadas com grande pormenor. Pode-se também fazer referência ao Pedido de Patente co-pendente Norte Americano do requerente, com ο N2 de Série 488343, depositado em 2 de Março de 1990, cuja totalidade da memória descritiva é aqui incorporada por referência. Podem-se fazer referências adicionais ao método de Matier, et al., J. Oro. Chem.. Vol. 36, N2 5, 650-654 (1971), cuja totalidade da memória descritiva é também aqui incorporada por referência, para elaboração dos indenos e dos seus derivados 2-oxo em análogos de espiropiperidina. É também aqui incorporada por referência uma variante deste processo descrita em Matier, et al., J. Orq. chem.. Vol. 36, NS 5, 650-654 (1971).

Os compostos com maior preferência do invento são quaisquer um dos indicados especificamente nos seguintes exemplos. Estes compostos não devem ser, contudo, entendidos como constituindo a única classe abrangida pelo invento, e qualquer combinação dos compostos ou das suas metades pode ela própria formar uma classe. Os seguintes exemplos ilustram adicionalmente e em pormenor a preparação dos compostos do presente invento. Os especialistas da arte compreenderão com facilidade que se podem empregar variações conhecidas das condições e processos dos seguintes procedimentos preparativos, para se prepararem estes compostos. Todas as temperaturas são em graus Celsius, a menos que indicado em contrário. -22- EXEMPLO 1

C1C0CH2CH=CH2

EXEMPLO 2

C1S02N(CH3)3 ψ

24-

ClC02CH2CH3

-25-

-26-

EXEMPLO 5

C1CO

-27-

EXEMPLO 6

cock /\ \

StQp 2

-28- EXEMPLO 8

H02CCH2 —N

'N

V^N

3-¾ ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE' i. EXEMPLO 9

-30-

ESOUEMAS DE REACCÃO. PARTI? 3 '

ch3ch2o2cch2ch2conh h -31-

ES0UEMA5 DE REACCÃO. PARTE 3 continuação

HOCO

ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE 3 continuação

X ESQUEMAS DE REACCÃO, PARTE 3 continuação

H -34-

χ ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE 4

ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE 4 continuação

O NH2HC1 -36-

ESOUEMAS DE REACCAO. PARTE 5

NHC02CCCH3).

ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE 5 continuação r

NHC02C( CH3) 3

NH2HC1 -38-

ESOUEMAS DE REACCÃO. PARTE 6

HOOCCHj —n O NHCOjCCCH3)3 EXAMPLE 20

H NHCOCH2 —N 0 NHC02C(CH3); EXAMPLE 21

ESQUEMAS DE REACCAO. PARTE 7 (ClÇH.jCf^N11 HC1 + [ CCH3)3COCO] 20

Et3N

( C1 CH2CH2) 2NC02-1 - BU + (C1CH2CH2)2NC02-t-Bu líni;sícch3)3]2

HC1 , EtOAC -40-

ESQUEMAS DE REACCÃO, PARTE 7 continuação

continuação ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE 7 H2NOH HC1 Pyridine

Endo Isorrer -42-

ESOUEMAS DE REACCÃO. PARTE 7 continuação

1 .

EDC, HBT, NEt 3, DMF 2. HC1

ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE 8

Benzene

X ESQUEMAS DE REACCÃO. PARTE 8 continuação

1. bh3 thf h2o2, oh 2 cloroformato de piridio ch2ci2 ·

Exarrple 31 -45-

f.sottfmas T)-F. PEACCÃO. PARTE 8_ continuação

Antraceno Tolueno

Exarrplo 32 -4 6-

ESQUEMÃS DE REACCÃO, PARTE 8 'continuação

I

Exanple 33

ESQUEMAS DE REACÇÃO. PARTE 8 continuação

Exarrple 34

ESPUMAS DE REACCÃO, PARTE 9 t

N so,

To 1 ue no

CICH2OCH2CH2OCH3

D1EA

Exarrple 35 ESPUMAS DE REACCÃO, PARTE 10

ch2nh2

1. Acido metilimidodiacético anidrido tolueno THF

THF

2. CH31, DMF

co2ch3

Exarrple 36

N

I so2 -50-

ESOUEMAS DE REACCÃO. PARTE 11

Exanrple 37 -51-

ESOUEMAS DE REACCÃO. PARTE 11 continuação 1

Zn - HO Ac '1

Exanple 38

-52- EXEMPLO A

J

Endo-(lS)-l'(((2~amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-me-til)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina)

Dicarbonato de di-t-butilo (31 g, 0,14 mole, adquirível na Aldrich) e cloridrato de bis(2-cloroetil)amina (21,6 g, 0,12 mole Aldrich) foram combinados em CH2C12 (250 ml) agitado à temperatura ambiente e adicionou-se gota a gota durante 15 minutos trietilamina (12,8 g, 0,127 mole). Ao fim de 1 hora, adicionaram-se mais 1,5 ml de trietilamina. Após um total de 2,5 horas, a mistura foi deitada sobre uma coluna de sílica gel embalada em CH2Cl2:hexano (1:1) e foi eluída com CH2C12. As fracçóes de produto combinadas foram evaporadas até à secura in vacuo. para se obter Ν,Ν-bis(2-cloroetil)-t-butil-carbamato. A uma solução de indeno (10,3 g, 89 mmoles) em tetra-idrofurano seco (THF, 18. ml) arrefecido num banho de gelo e mantido sob um cobertor de azoto, adicionou-se -53-

bis(trimetilsililo)amida de lítio (Aldrich, 177 ml de uma solução 1,0 M em THF; 177 mmoles) durante 15 minutos. A mistura foi agitada ao frio durante 30 minutos, depois foi adicionada durante 15 minutos a uma solução de Ν,Ν-bis(2-cloroetil)-t-butilcarbamato (21,2 g, 88 mmoles) agitada num banho de gelo. A mistura foi agitada durante 2 horas ao frio e durante 30 minutos à temperatura ambiente sob azoto, e depois foi evaporada in vacuo para produzir uma espuma. Adicionou-se CHC12 e a mistura resultante foi deitada sobre uma coluna de silica gel embalada com hexano a 40% em CHC12· A coluna foi eluida com hexano a 40% em CHC12, seguida por CH2C12, e as fracções de produto foram evaporadas até â secura in vacuo. para proporcionarem l'-(t-butiloxicarbonil)espiro (indeno-l,4'-piperidina). 1' - (t-Butiloxicarbonil) espiro (indeno-l, 4' -piperidina)

(16 g, 56 mmoles) em acetato de etilo (250 ml) foi agitada num banho de gelo e foi saturada com HCl (g) durante 30 minutos. A mistura foi evaporada até à secura. A mistura foi evaporada até à secura. Adicionou-se acetato de etilo e removeu-se in vacuo três vezes e o resíduo foi triturado com éter dietílico e foi filtrado para proporcionar cloridrato de espiro(1H-indeno-l,4'--piperidina). A base livre foi obtida por mistura do cloridrato numa solução aquosa de bicarbonato de sódio e extracção com CH2C12· A camada orgânica foi separada, foi seca sobre sulfato de sódio, foi filtrada e evaporada até à secura in vacuo. para proporcionar espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina) .

Espiro(1H-indeno-l,4'piperidina) (308 mg, 1,66 mmoles) e cloreto de (+)-10-canforsulfonilo (418 mg, 1,66 mmoles) foram combinados em CH2C12 e foram tratados com trietilamina (0,23 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois foi deitada sobre uma coluna de sílica gel e foi eluída com CH2C12íhexano 1:1. As fracções de produto foram combinadas e -54- evaporadas até à secura in vacuo para proporcionarem (1S)-1'--(((7/7-dimetil-2-oxobiciclo(2.2.1)hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro (ΙΗ-indeno-l,4'-piperidina) como um sólido que foi recristaliza-do a partir de éter de petróleo e que foi seco durante a noite in vacuo à temperatura ambiente. (IS)-1'-(((77,7-dimetil-2-oxobiciclo(2.2.1)hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina) (30 g, 0,075

I

mole) em piridina (500 ml) foi aquecida num banho óleo a 70°C (interna). Adicionou-se cloridrato de hidroxilamina (30 g) em três proções durante cerca de 20 minutos. Após 2 horas, adicionaram-se mais 10 g de cloridrato de hidroxilamina (durante 10 minutos). Ao fim de períodos de tempo adicionais de 30, 40 e 50 minutos, adicionaram-se lotes de 3 g de cloridrato de hidroxilamina. Após mais 30 minutos, a mistura foi deitada em água (2 1) e foi extraída 3 vezes com acetato de etilo (porções de 300 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, foram lavadas com HC1 IN (600 ml no total), foram secas sobre sulfato de sódio, foram filtradas e evaporadas até à secura in vacuo. Adicionou-se EtOH (abs; cerca 50 ml) ao xarope espesso resultante e a solução foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi filtrada e o filtrado foi fervido até ca. 80 ml. Após repouso, a mistura foi filtrada novamente e fervida até ca. 20 ml. Após uma terceira filtração, os sólidos filtrados foram combinados para proporcionarem (is)-1'-(((7,7-dimetil-2-oximino-biciclo (2.2.1) hept-l-il) -metil) sulf onil) espiro (ΙΗ-indeno-l, 4' -pi-peridino) (28 g). 0 catalisador de Níquel de Raney activado, acabado de preparar, (ca. 30 g) em água foi deixado assentar e a água foi decantada. Adicionou-se etanol abs. (300 mL) e a mistura foi agitada em turbilhão e foi novamente deixada assentar. O solvente foi decantado. Efectuaram-se a seguir, de forma semelhante,

"S mais dois ciclos de lavagem-decantação. Agitou-se (IS)-l'-(((7,7--dimetil-2-oximinobiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)espiro-(lH-indeno-l,4/-piperidina) (30 g) numa mistura de etanol abs. (450 ml) e 2-metoxietanol (900 ml), borbulhou-se azoto através da suspensão/solução e adicionou-se o catalisador de de Níquel de Raney. A mistura foi hidrogenada sob 3,515 kg/cm2 (50 psi) durante a noite. CCF (9:1 CI^C^MeOH, sílica gel) mostrou que a reacção estava completa. Removeu-se o catalisador por filtração e o filtrado foi evaporado até à secura in vacuo. O sólido em bruto (27 g) foi dividido em 7 porções e cada porção foi dissolvida em cloreto de metileno (ca. 200 ml) e foi submetida a cromato-grafia flash sobre sílica (700 g numa coluna de 100 mm, embalada e eluída com metanol a 8% (v/v) em cloreto de metileno), tomando--se fracções de 200 ml. 0 isómero exo da amina do título foi obtida nas fracções 5-7 e o isómero endo desejado nas fracções 8-16. CCF foi efectuada sobre sílica, eluída com metanol a 8% em cloreto de metileno, mancha de ácido fosfomolíbdico. As fracções de produto combinado foram evaporadas até à secura para se proporcionar o composto do título (4,5 g de cada lote de 7 g, cerca de 18 g no total) como um sólido incolor. EXEMPLO 1

Endo-(IS)-l'-(((2-(but-3-eno-l-ilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.-1)-hept-l-il)-metil)sulfoniD espiro(lH-indan-1.4-piperidina) A uma solução de endo-lS-l'-( ((2-amino-7/7-dimetilbiciclo (2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfonil) espiro(lH-indan-1,4'-pipe-ridina) (50 mg, 0,000125 M) em cloreto de metileno (3 ml) numa atmosfera de azoto adicionou-se cloreto de crotonilo (13,1 mg, 14 ml, 0,000125 M) por meio de uma seringa. Após dois minutos, adicionou-se trietilamina (50 ml) para tornar a solução básica (pH=9) . Ao fim de uma hora, a mistura de reacção foi concentrada e o óleo foi cromatografado sobre uma coluna de sílica "flash” por utilização de acetato de etilo a 40% como solvente. As fracções 27-40 continham uma mancha fluorescente. Aquelas foram concentradas e adicionou-se éter-hexano e a mistura resultante foi concentrada para produzir o composto do título sob a forma de uma espuma branca. RMN (CDC13) foi consistente com a estrutura. CLAR: 210 - 97,181% 254 - 99,386%

Espectros de Massa: Calculado, m/e=470,679;

Encontrado, m/e=471,3. Análise para C27H38N203S:

Calculado: C, 68,90; H, 8,14; N, 5,95;

Encontrado: C, 68,99; H, 8,19; N, 5,70. EXEMPLO 2

Endo-(IS)-1'-(((dimetilaminosulfonilamino) -7,7-dimetilbiciclo(2.-2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)esoiroflH-indan-1,4-pjperidina)

Num frasco seco num forno (50 ml) , sob azoto, dissol-veu-se endo-lS-l'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l--il)-metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M) em cloreto de metileno (3 ml). Adicionou-se cloreto de dimetilaminosulfonilo (17,9 mg, 0,000125 M) e, após dois minutos, adicionou-se trietilamina (50 ml). Após uma hora, a mistura de reacção foi concentrada sob pressão reduzida (20 mm). 58-

Utilizou-se uma coluna de sílica "flash", com cloreto de metileno (9) - metanol (1) como solventes, para purificar o composto do título sob a forma de um sólido cor de bronze, após adição e concentração com hexano. RMN (CDC13) foi consistente com a estrutura. CLAR: 210 - 97,47% 254 - 100%

Espectros de Massa: Calculado, 509,736; Encontrado, 510,3.

Análise para C2?H 39N3°4S2: Calculado: C, 59,51; H, 7,93; N, 8,04; Encontrado: C, 59,58; H, 7,71; N, • r- 00 EXEMPLO 3

Endo-(IS)-1'-(((2-etoxicarbonilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)--hept-l-il)-metil)sulfonillespiro(lH-indan-1.4-PÍperidina^_

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-l'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l--il)-metil)-sulfonil)espiro(ΙΗ-indan-l,4'-piperidina) (50 mg, -59- -59-

0,000125 M) em cloreto de metileno (3 ml). Adicionou-se cloro-formato de etilo (13,6 mg, 12 ml, 0,000125 M) por meio de uma seringa. Após dois minutos, adicionou-se trietilamina (50 ml) para tornar a solução básica (pH=9). Após 30 minutos, a mistura de reacção foi concentrada sob pressão reduzida (20 mm). O óleo foi cromatografado sobre uma coluna de sílica "flash” com acetato de etilo a 40% em hexano como eluente. As fracções 12-20 continham o produto. Estas fracções foram concentradas sob pressão reduzida (20 mm) . Adicionou-se hexano-éter ao óleo e removeu-se sob pressão reduzida para se obterem 17 mg do composto do título sob a forma de um pó branco. RMN (CDC13) foi consistente com a estrutura. CLAR: 210 - 99,187% 254 - 100%

Espectros de Massa: Calculado, 474,668; Encontrado, 475,3.

Análise para C26H38N204S:

Calculado: C, 65,79; H, 8,07; N, 5,90;

Encontrado: C, 66,05; H, 8,22; N, 5,77. t Ν^,,ν -60- EXEMPLO 4

Endo-(IS)-1'-(((2-tiofenocarbonilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.— 1)-heot-l-iH-metill sulfonil)espiro(IH-indan-l.4-piperidina)

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-l'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-l,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M) em cloreto de metileno (3 ml). Adicionou-se cloreto de 2-tiofeno (18 mg, 13,4 ml, 0,000125 M) por meio de uma seringa. Adicionou-se trietilamina (50 ml) para tornar a solução básica. A mistura de reacção foi concentrada para um óleo e foi cromato-grafada por utilização de uma coluna de sílica "flash" com acetato de etilo a 40% em hexano como eluente. As fracçóes 12-20 continham o produto. As fracçóes 11-18 continham o produto desejado e foram concentradas para um óleo. Adicionou-se éter--hexano e removeu-se para se obterem 27 mg do composto do título sob a forma de um pó amorfo branco. -61- -61-

Ν CLAR: 210 - 98,873% 254 - 97,931%.

Espectros de Massa: Calculado, 512,738; Encontrado, 513,3.

Análise para C28H36N2°3S2 0/72 hexano: Calculado: C, 63,97; H, 7,11; N, 5,33;

Encontrado: C, 63,59; H, 6,78; N, 5,08. EXEMPLO 5

Endo-(is)-l'-(((2-isonicotinilamino)-7,7-dimétilbiciclo(2.2.1)— -hept-l-ilV-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1.4-pjperidinal

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M) em cloreto de metileno (3 ml). Adicionou-se cloridrato de cloreto de isonicotinoílo (22,38 mg, 0,000125 M). Após 2 minutos, adicionou-se trietilamina (50 ml), de modo que o pH fosse igual a 9. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por meio de uma coluna de sílica "flash", -62- -62-

por utilização de cloreto de metileno (9) - metanol (1) como solventes. 0 produto estava contido nas fracções 6-10 que foram concentradas. 0 óleo foi tratado com hexano-éter, o qual foi removido sob pressão reduzida. Isto proporcionou 18 mg do composto do título sob a forma de uma espuma branca. RMN (CDClg) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 95,84% 254 - 98,04%.

Espectros de Massa: Calculado, 507,7; Encontrado, 508,3.

Análise para C29H37N3°3S:

Calculado: C, 68,61; H, 7,35; N, 8,28;

Encontrado: C, 68,46; H, 6,99; N, 7,90. EXEMPLO 6

Endo-(lS)-l'-( ((2-(noradamantil-l-carbonilamiriò) -7,7-dimetilbici-clo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperi-dina)_____

Etapa 1: Cloreto de noradamantilo-l-carbonilo A uma solução de noradamantilcarboxilato (20,8 mg, 0,000125 M) em cloreto de metileno (4 ml) num frasco de fundo redondo (50 ml) sob uma atmosfera de azoto a 0°C, adicionou-se cloreto de oxalilo (120 ml) por meio de uma seringa. Adicionou--se dimetilformamida (7 ml) e a solução foi agitada a 0°C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 45 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida (20 mm). Adicionaram-se duas quantidades adicionais de cloreto de metileno e estas foram removidas sob pressão reduzida. O cloreto ácido do composto do título foi mantido sob alto vácuo (0,05 mm) durante uma hora antes de ser utilizado na etapa seguinte.

Etapa 2: Endo-(lS)-l'-(((2-(noradamantil-l-carbonilamino)-7,7- -dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espi- ro fΙΗ-indan-l.4'-niperidinal_

Dissolveu-se cloreto de adamantil-l-carbonilo em cloreto de metileno (4 ml) e adicionou-se endo-is-l'-(((2-amino--7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfonil)espiro(1H--indan-l,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M). Após dois minutos, introduziu-se trietilamina (100 ml) por meio de uma seringa. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o óleo foi cromatogra-fado sobre sílica com acetato de etilo a 40%. As fracções de produto foram recolhidas e concentradas para um óleo, que se tornou um sólido branco amorfo após a adição e remoção de éter--hexano. Isto proporcionou 10 mg do composto do título. -64-

rmn (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 98,427% 254 - 100%.

Espectros de Massa: Calculado, m/e 550,81; Encontrado, m/e 551,3. Análise para C33H46N2°3S:

Calculado: C, 71,91; H, 8,42; N, 5,09;

Encontrado: C, 71,57; H, 8,71; N, 4,77. EXEMPLO 7

J

Endo- (1S) -3/-(((2- (succinoilamino de etilo) -7,7-dimetilbiciclo(2.-2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1,4 '-pjperidina^ A uma solução de exo-(lS)-l'-(((2-(amino-7,7-dimetilbi-ciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfonil) espiro(lH-indan-1,4'-pi-peridina) (50 mg, 0,000125 M) em cloreto de metileno (3 ml) sob um cobertor de azoto adicionou-se cloreto de succinoílo de etilo (20,6 mg, 0,000125 M). Após dois minutos, adicionou-se trietil-amina (50 ml) com uma seringa. O pH da solução foi de 9. Após 15 minutos, observou-se uma nova mancha na ccf (sílica-acetato de etilo em hexano a 40%) . A mistura de reacção foi concentrada e o óleo foi cromatografado sobre uma coluna de sílica "flash" com acetato de etilo como solvente. As fracções 24-48 continham o produto. Estas fracções foram recolhidas e concentradas. 0 éter-hexano foi adicionado e removido para produzir 21,3 mg do composto do título sob a forma de um pó branco. RMN (CDCl^) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 99,190% 254 - 96,914%.

Espectros de Massa: Calculado, m/e 530,732;

Encontrado, m/e 531,5.

Análise para C2gH42N205S " 0,25 H20 Calculado: C, 65,08; H, 8,00; N, 5,23;

Encontrado: C, 65,16; H, 8,03; N, 5,09. EXEMPLO 8

Endo-(lS)-l'-(((2-(tetrazole-l-acetilamino)-7,7-dimetilbici-clo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1,4-piperi dina^_

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M) , ácido tetrazole-l-acético (16 mg, 0,000125 M) e benzotriazol-1--ilóxitris(dimetilamino)fosfónio-hexafluorofosfato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitrilo (3 ml). Adicionou-se diisopropil-etilamina (50 ml) para tornar a solução básica. Depois da ccf (sílica-cloreto de metileno (9) - metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. 0 óleo foi dissolvido em cloreto de metileno - éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicabornato de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Apôs secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada num óleo, o qual foi cromatografado sobre uma coluna de sílica "flash" com -67-

metanol a 10% em cloreto de metileno. As fracções 5-10 continham o produto e foram recolhidas e concentradas. Adicionou-se éter-hexano e removeu-se a seguir para produzir o composto do título sob a forma de um pó branco. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 98% 254 - 100%.

Espectros de Massa: Calculado, 513,679; Encontrado, 513,3.

Análise para C26H36N6°3S " 0,25 H20 Calculado: C, 60,37; H, 7,11; N, 16,25;

Encontrado: C, 60,28; H, 6,96; N, 16,18. EXEMPLO 9

Endo-(IS)-1'-(((2-(2-furoilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)--heot-l-ill-metil^sulfonill espiro(lH-indan-1,4-piperidina)

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, -68- -68-

dissolveu-se endo-lS-1' - (((2-amino-7,7-dimetilbiciclo (2.2.1) -hept--1-il)-metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M) em cloreto de metileno (3 ml) e adicionou-se cloreto de 2-furoílo (16,3 mg, 0,000125 M). Após 2 minutos, adicionou-se trietilamina (150 ml), de modo que o pH fosse igual a 9. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por meio de uma coluna de sílica "flash", por utilização de acetato de etilo a 40% em hexano como solventes. O produto estava contido nas fracções 6-10 que foram concentradas. 0 óleo foi tratado com hexano-éter, o qual foi removido sob pressão reduzida. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CIAR: 210 - 99,341% 254 - 99,576%.

Espectros de Massa: Calculado, 496,674; Encontrado, 497,3. §

Análise para COQH Z O _,N_0.S 36 2 4 • * Calculado: C, 67,71; H, 7,31; N, 5,64; Encontrado: C, 67,41; H, 7,39; N, 5,46. EXEMPLO 10

Endo-(IS)-1'-(((2-(s-(l)-2-oxo-pirrolidin-5-il-carbonil)amino)--7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(1H--indan-1,4-piperidina)_

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M), ácido S-(l)-2-oxo-pirrolidina-5-carboxílico (16,1 mg, 0,000125 M), e benzotriazol-l-ilóxitris(dimetilamino)fosfónio-hexafluorofos-fato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitrilo (3 ml). Adicionou-se diisopropiletilamina (50 ml) para tornar a solução básica. Depois da ccf (sílica-cloreto de metileno (9) - metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. 0 óleo foi dissolvido em cloreto de metileno -éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicabornato de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Após secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada num óleo. Adicionou-se éter-hexano e removeu-se a -70-

seguir sob pressão reduzida para produzir o composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN (CDClg) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 93,102% 254 - 92,292%.

Espectros de Massa: Calculado, 513,705; Encontrado, 514,3. EXEMPLO 11

Endo-(IS) -l'-( ((2-(L-N-(tert.-butoxicarbonil)-4-benziloxi-proli-noilamino) -7,7-dimetilbiciclo (2.2.1) -hept-l-il) -metil) sulfonil) -espiroílH-indan-1,4-piperidina)_

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissol-veu-se endo-lS-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M), L-N (tert.-butoxicarbonil)-4-benzilóxi-prolina (40,2 mg, 0,000125 M) , e benzotriazol-l-ilóxitris(dimetilamino) fosfónio-hexa-fluorofosfato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitrilo (3 ml). Adicionou-se diisopropiletilamina (50 ml) para tornar a solução básica. Depois da ccf (silica-cloreto de metileno (9) metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. 0 óleo foi dissolvido em cloreto de metileno - éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicabor-nato de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Após secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada num óleo, o qual foi purificado por cromatografia de sílica "flash” com acetato de etilo a 40% em hexano como solvente. As fracções 15-24 continham o produto e foram recolhidas e concentrádas. O tratamento com éter-hexano proporcionou um sólido branco que era o composto do título. Empregou-se uma amostra de 10 mg para caracterização, tendo sido o ensaio do remanescente utilizado nas etapas subsequentes. RMN (CDClg) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 99,003% 254 - 100%.

Espectros de Massa: Calculado, 705,965; Encontrado, 706.

Análise para C40H55N306S:

Calculado: C, 67,62; H, 7,87; N, 5,91;

Encontrado: c, 67,56; H, 8,11; N, 5,59. EXEMPLO 12

Endo-(IS) -1'-(((2 -(L-N-(tert.-butoxicarbonil) -4-hidrôxi-proli-noilamino) -7,7-dimetilbiciclo(2.2.1) -hept-l-il) -metil) sulfonil) -espiro(lH-indan-1.4-pjperidina)_

Uma mistura de Endo-(IS)-l'-(((2-(L-N-(tert.“butoxicarbonil) -4-benzilóxi-prolinoilamino) -7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1,4-piperidina), etanol (5 ml) e Pd (OH) _ (60 mg) foi hidrogenada num aparelho de Parr a 2 ^ 3,515 kg/cm (50 psi) durante 18 horas. 0 catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido sob pressão reduzida para produzir o composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 93,5% 254 - 97,381%.

Espectros de Massa: Calculado, 615,840; Encontrado, 616.

Análise para C33H4gN3OgS " 1,5 H20:

Calculado: C, 61,65; H, 8,15; N, 6,53;

Encontrado: C, 61,46; H, 7,88; N, 6,90. -73- -73-

Cloridrato de Endo-(ls)-l,-(((2-(L-4-hidroxiprolinoilamino)-7,7-dimétilbiciclo (2.2.1) -hept-l-il) -metil) sulf onilj espiro (1H-indan-l,4-oiperidina)_

Uma mistura de Endo-(lS)-l/-(((2-(L-N-(tert.-butoxicar-bonil) -4-hidróxi-prolinoilamino) -7,7-dimetilbiciclo (2.2.1)-hept-l-il) -metil) sulfonil) espiro (lH-indan-1,4-piperidina) foi dissolvida em acetato de etilo (5 ml) e arrefecida até -5eC. Esta foi colocada sob uma atmosfera de azoto e borbulhou-se na mesma gás cloreto de hidrogénio durante 10 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Adicionou-se éter e removeu--se sob pressão reduzida para produzir 15,48 mg do composto do título sob a forma de um sólido branco. v 74-

RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 93,50% 254 - 93,812%.

Espectros de Massa: Calculado, 515,721 (base livre);

Encontrado, 516,4.

Análise para C Calculado: Encontrado: 28H41N3°4S HC1 0,25 H20: C, 60,41; H, 7,69; N, 7,54; C, 60,08; H, 7,73; N, 7,35. EXEMPLO 14

J

Endo-(IS)-1'-(((2-(3-indolilacetilamino) -7,7-dimetilbiciclo(2.2. -1)-heot-l-iD-metiD sulfoniD espiro(lH-indan-1.4-pioeridina^_

Num frasco seco num forno (50 ml) , sob azoto, dissol-veu-se endo-lS-l'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M), ácido acético de 3-indolilo (21,9 mg, 0,000125 M) e benzotria-zol-l-ilóxitris (dimetilamino) fosfônio-hexafluorofosfato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitrilo (3 ml). Adicionou-se diisopro-piletilamina (50 ml) para' tornar a solução básica. Depois da ccf (sílica-cloreto de metileno (9) - metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. 0 óleo foi dissolvido em cloreto de metileno - éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicabornato de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Após secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada num óleo, o qual foi purificado por cromatografia de sílica "flash" com metanol a 10% em cloreto de metileno como solvente. As fracções 12-19 continham o produto e foram recolhidas e concentradas. O tratamento com éter-hexano proporcionou um sólido branco que era o composto do título. Empregou-se uma amostra de 10 mg para caracterização, tendo sido o ensaio do remanescente utilizado nas etapas subsequentes. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 99,829% 254 - 92,699%.

Espectros de Massa: Calculado, 559,777; Encontrado, 560,3 Análise para C33H41N303S " 0,5 H20:

Calculado: C, 69,69; H, 7,44; N, 7,51;

Encontrado: C, 69,70; H, 7,57; N, 7,20. EXEMPLO 15

Endo-(IS)-l'-(((2-(S-3-(terc.-butoxicarbonil)amino)-2-oxo-l-pir-rolidinoacetilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulf oniU espiro(lH-indan-1.4-pjperidina^_

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-1' - (((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil) -sulfonil) espiro (lH-indan-1,4 '-piperidina) (50 mg, 0,000125 M), ácido S-3-((tert.-butoxicarbonil)amino)-2-oxo-l-pirrolidoacé-tico (32,2 mg, 0,000125 M) e benzotriazol-l-ilóxitris(dimetilami-no)fosfónio-hexafluorofosfato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitriío (3 ml). Adicionou-se diisopropiletilamina (50 ml) para tornar a solução básica. Depois da ccf (sílica-cloreto de metileno (9) - metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. O óleo foi dissolvido em cloreto de metileno - éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicabornato de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Após secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada num óleo, o qual foi purificado por cromatografia de sílica "flash" com metanol a 10% em cloreto de metileno como solvente. As fracções 15-28 continham o produto e foram recolhidas e concentradas. O tratamento com éter-hexano proporcionou um sólido branco que era o composto do título. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 94,005% 254 - 96,33%.

Espectros de Massa: Calculado m/e, 642,859;

Encontrado m/e, 643,4

Análise para C-.H^-N-O-S " 0,1 Hexano: c 34 50 4 6

Calculado: C, 63,79; H, 7,95; N, 8,59;

Encontrado: C, 63,66; H, 8,32; N, 8,29. EXEMPLO 16

Cloridrato de Endo-(lS)-l'-(((2-(S-3-amino)-2-oxo-l-pirrolidino-acetilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfo-ηϋϊ espiro(lH-indan-1.4-pjperidina)_

Endo-(IS)-l/-(((2-(S—3—(tert.-butoxicarbonil)amino)-2--oxo-l-pirrolidinoacetilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)- -78- -78-

-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) foi dissolvida em acetato de etilo (5 ml) e arrefecida até -5°C. Esta foi colocada sob uma atmosfera de azoto e borbulhou-se na mesma gás cloreto de hidrogénio durante 10 minutos. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida. Adicionou-se éter e este foi removido sob pressão reduzida para produzir 23,7 mg do composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 99,562% 254 - 95,493%.

Espectros de Massa: Calculado para a base livre m/e, 542;

Encontrado m/e, 543,3. Análise para C29H 42N4°4S "H 2°" HCl: Calculado: c, 58,32; H, 7, 59; N, 9/38; Encontrado: c, 58,14; H, 7, 97; N, 9,21. EXEMPLO 17

O

Etapa 1: Endo-(IS) -l'-( ((2-(L-N-tercbutoxicarbonil-histidinoila-mino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulf onill espiro (lH-indan-1.4-pjperidina^_

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-l'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-l,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M), histidina de L-N-tertbutoxicarbonilo (29,9 mg, 0,000125 M) e benzotriazol-i-ilóxitris(dimetilamino) fosfónio-hexafluorofosfato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitrilo (3 ml). Adicionou--se diisopropiletilamina (50 ml) para tornar a solução básica. Depois da ccf (silica-cloreto de metileno (9) - metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. o óleo foi dissolvido em cloreto de metileno - éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicabornato de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Após secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada num óleo, o qual foi purificado por cromatografia de sílica "flash" com metanol a 10% em cloreto de metileno como solvente. As fracçóes 15-28 continham o produto e foram recolhidas e concentradas. 0 tratamento com éter-hexano proporcionou um sólido branco que era o composto do título. RMN (CDClg) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 97,822% 254 - 100%.

Espectros de Massa: Calculado m/e, 639,859;

Encontrado m/e, 640,3 80- 80-

Etapa 2: Cloridrato de Endo-(IS)-l'-(((2-(S-3-amino)-2-oxo-l--pirrolidinoacetilamj.no) -7,7-dimetilbiciclo (2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1,4-piperi-dina)_

Endo-(lS)-l'-(((2-(L-N-(tert.-butoxicarbonil-histidi-noilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)-espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) foi dissolvida em acetato de etilo (5 ml) e arrefecida até -5°C. Esta foi colocada sob uma atmosfera de azoto e borbulhou-se na mesma gás cloreto de hidrogénio durante 10 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Adicionou-se éter e este foi removdo sob pressão reduzida para produzir 27,5 mg do composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 98,652% 254 - 100%.

Espectros de Massa: Calculado para a base livre m/e, 539,7; t

Encontrado m/e, 540,3

Análise para C„.H δ y 41N5°3S 2HC1 2H 2°* Calculado: C, 53,69; H, 7,30; N, 10,79; Encontrado: C, 53,58; H, 7,45; N, 11,00. EXEMPLO 18

Endo-(IS)-l'-(((2-(D-N-tercbutoxicarbonil)-im-benzilhistidinoila-mino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro-(lH-indan-l, 4-pjperidina)__

Num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-l'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)--metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M), D-N-tert.butoxicarbonilim-benzil-histidina (43 mg, 0,000125 M) e benzotriazol-l-ilóxitris(dimetilamino)fosfónio-hexafluoro-fosfato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitrilo (3 ml). Adicionou-se diisopropiletilamina (50 ml) para tornar a solução básica. Depois da ccf (sílica-cloreto de metileno (9) - metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. 0 óleo foi dissolvido em cloreto de metileno -éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicabornato de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Após secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada. O tratamento com éter-hexano proporcionou um sólido branco que era o composto do título. -82- -82-

RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 99,551%

Espectros de Massa: Calculado m/e, 730,062;

Encontrado m/e, 730,6

Análise para C^Hj-gNgOgS: 0,5 I^O 0,4 hexano: Calculado: C, 67,15; H, 8,04; N, 9,02;

Encontrado: C, 67,18; H, 7,73; N, 9,02.

Cloridrato de Endo-(IS)-l'-(((2-(D-im-benzilhistidinoilamino) -7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il) -metil)sulfonil)espiro(1H-indan-1.4-PÍoeridina)_

Endo- (IS) -1'- (((2- (D-N- (tert. -butoxicarbonil) -im-ben-zilhistidinoilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) foi dissolvida em acetato de etilo (5 ml) e arrefecida até -5°C. Esta foi colocada sob uma atmosfera de azoto e borbulhou-se na mesma gás cloreto de hidrogénio durante 10 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Adicionou-se éter e removeu-se sob pressão -83- -83-

reduzida para produzir o composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 100%

Espectros de Massa: Calculado m/e, 629,879;

Encontrado m/e, 630.

Análise para C36H42N5°3S: HC1 0,1 acetato de etilo 1,4 H^O:

Calculado: C, 59,33; H, 7,20; N, 9,51;

Endo- (IS) -l ' - (((2- (S-3-tert.butoxicarbonilamino-2-oxo-l-azepinoa-ce+-mo; - - 7-dimetilbiciclo (2.2.1) -hept-l-il) -metil) sulfonil) -esniroflH-indan-i.*-piperidina)_

Num frasco sec·, num forno (50 ml), sob azoto, dissolveu-se endo-lS-l'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept--l-il)-metil)-sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (50 mg, 0,000125 M), ácido S-3-tert.butoxicarbonilamino-2-oxo-l-azepina (32,8 mg) e benzotriazol-l-ilóxitris(dimetilamino)fosfônio-he-xafluorofosfato (Sequalog) (55 mg, 0,000125 M) em acetonitrilo (3 ml). Adicionou-se diisopropiletilamina (50 ml) para tornar a solução básica. Depois da ccf (silica-cloreto de metileno (9) - metanol (1)) ter mostrado uma nova mancha, a reacção foi concentrada para se obter um óleo. 0 óleo foi dissolvido em cloreto de metileno - éter (1:3) e a solução foi lavada com água, bicaborna-to de sódio (sat., aquoso), água, bissulfato de potássio a 10% e salmoura. Após secagem com sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada para um óleo, o qual foi purificado por cromatografia de sílica "flash" com metanol a 10% em cloreto de metileno como solvente. As fracções que continham o produto foram recolhidas e concentradas. O tratamento com éter-hexano proporcionou um sólido branco que era o composto do título. Uma amostra de 10 mg foi guardada para caracterização e ensaio. RMN (CDC13) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 100%

Espectros de Massa: Calculado m/e, 670,918;

Encontrado m/e, 671. Análise para C36H c .N.CKS: 54 4 6 Calculado: c, 64,44; H, 8,11; N, 8,35; Encontrado: c, 64,12; H, 8,23; N, 8,03. EXEMPLO 21

Cloridrato de Endo-(IS)-l'-(((2-(S-3-amino-2-oxo-l-azepina acetilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfo-nil)espiro(lH-indan-1.4-pjperidina^_

Endo-(IS)-l'-(((2-(S-3-tert-butoxicarbonilamino-2-oxo--l-azepina acetilamino)-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil) sulfonil)espiro(lH-indan-l/4/-piperidina) foi dissolvida em acetato de etilo (5 ml) e arrefecida até -5°C. Esta foi colocada sob uma atmosfera de azoto e borbulhou-se na mesma gás cloreto de hidrogénio durante 10 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Adicionou-se éter e este foi removido sob pressão reduzida para produzir o composto do título sob a forma de um sólido branco. RMN (CDCl3) foi compatível com a estrutura. CLAR: 210 - 100%

Espectros de Massa: Calculado m/e, 570,802;

Encontrado m/e, 571. Análise para C31H 46N4°4S II HC1 1,10 H20 " 0,40 acetato de etilo Calculado: c, 59,11; H, 7, 97; N, , 8,46; Encontrado: c, 59,09; H, 8, 00; N, , 8,45. EXEMPLO 22

Ή

Cloridrato de Endo-(IS)-3/-(((2-(4-imidazoleacetilamino)-7,7-dime-tilbiciclo(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil) espiro(lH-indan-1. 4-pí-peridina)_ N.N-bis(2-cloroetil)-t-butilcarbamato

Di-t-butilcarbonato (62 g, 0/28 mole, adquirível na Aldrich) cloridrato de bis(2-cloroetil)amina (55 g, 0,21 mole, adquirível na Aldrich) foram agitados em conjunto em cloreto de metileno (400 ml). Adicionou-se trietilamina (42 ml, 0,3 mole) gota a gota, mas activamente, â suspensão agitada. Ao fim de 10 minutos, adicionou-se uma quantidade adicional de trietilamina (ca. 5-6 ml) para ajustar o pH da mistura (como determinado por revelação de uma amostra em varetas de colorpHast pH 5-10 da E. Merck, humidificadas com água) para 9-9,5. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e depois foi filtrada. 0 filtrado foi divido ao meio, cada metade (ca. 300 ml) foi submetida a cromatografia Flash sobre uma coluna de sílica separada com 381 mm e com 50,8 mm de diâmetro, embalada com 3:2 (v:v) de cloreto de metileno:hexano e eluída com 9:1 de cloreto de metileno :hexano. Recolheram-se fracções de 100 ml e o produto foi obtido em fracções de ca. 6-12. O ensaio foi efectuado por CCF sobre placas de sílica gel, eluídas com cloreto de metileno e visualizadas com mancha de ácido fosfomolíbdico (R^ ca. 0,75). A evaporação das fracções de produto combinadas a partir de ambas as colunas in vacuo produziu o composto do título (70 g) sob a forma de um óleo incolor. 0 óleo foi dissolvido duas vezes em THF seco e foi evaporado in vacuo para remover o cloreto de metileno. l'-(t-Butiloxicarbonil)espiro(lH-indeno-1,4'-pjperidina) A uma solução de indeno (36,2 g, 310 mmoles) em tetraidrofurano seco (THF, 40 ml) arrefecido num banho de gelo e mantido sob um cobertor de azoto, adicionou-se (funil de goteja-mento) lítio bis(trimetilsilil)amida (620 ml de uma solução 1,0 M em THF; 620 mmoles, adquirível na Aldrich) durante 30 minutos. A mistura foi agitada ao frio durante 30 minutos, depois foi transferida por meio de uma cânula durante 20 minutos para uma solução de Ν,Ν-bis(2-cloroetil)-t-butilcarbamato (70 g, 290 mmoles) em THF (40 ml), e foi agitada num banho de gelo. A mistura foi agitada durante 2 horas ao frio e durante 30 minutos à temperatura ambiente sob azoto, e depois foi evaporada in vacuo para se obter uma espuma. Adicionou-se CH2C12 (400 ml) e a mistura resultante foi dividida duas metades. Cada metade foi deitada sobre uma coluna de sílica gel (381 mm, di = 50,8 mm (15", di = 2")) embalada e eluída com 1:1 hexano:CH2Cl2 (2 1), seguida de 1:4 de hexano:CH2Cl2. As fracções de produto (frac-ções 3-9 de fracções de 200 ml) foram evaporadas até à secura in vacuo para se oter l'-(t-butiloxicarbonil)espiro(indeno-1,4'-pipe-ridina, 90 g no total, sob a forma de um sólido amarelo em bruto. 0 sólido foi recolhido em hexano fervente (400 ml), foi arrefecido e o sólido cristalizado foi filtrado. O filtrado foi fervido repetidamente até se obter metade do seu volume, foi arrefecido e filtrado para se obterem colheitas sucessivas, proporcionando-se um total de 54 g de produto puro. O resíduo foi recromatografado para se obterem mais 6,7 g (60,7 g no total).

Cloridrato de Espiro(ΊΗ-indeno-l.4'-piperidina) 1' -(t-Butiloxicarbonil)espiro(indeno-l,4'-piperidina) (60,7 g) em acetato de etilo (700 ml) foi agitada num banho de gelo e foi saturada com HC1 (g) durante 30 minutos, mantendo-se a temperatura interna < 12°C. A mistura foi agitada ao frio durante mais 30 minutos e depois foi evaporada até à secura. Adicionou-se acetato de etilo e removeu-se in vacuo três vezes e

o resíduo foi triturado com éter dietílico é foi filtrado para produzir cloridrato de espiro(1H-indeno-l,4'-piperidina). (IS)-l'-(((7-dimetil-2-oxobiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfo-nil)espiro(1H- indeno-l.4'-nineridina^_ 0 cloridrato de espiro(1H-indeno-l,4'-piperidina) (45,4 g, 0,2 mole) e o cloreto de (+)-10-canforsulfonilo (62,5 g, 0,25 mole, adquirível na Aldrich) foram combinados em CR^Cl^ (700 ml) e foram tratados com trietilamina (68,5 ml, 0,5 mole). Adicio-^ nou-se mais trietilamina na medida do necessário para se ajustar w o pH da mistura para 9-9,5 (varetas humidificadas colorpHast da E. Merck). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e depois foi deitada sobre uma coluna de sílica gel (25,4 cm, di = 5,08 cm (10”, di =2”)) embalada com CH2C12 e eluída com 1:1 de Et20:CH2Cl2· As fracções de produto foram combinadas e evaporadas até â secura in vacuo. para se proporcionar o composto do título sob a forma de um sólido que foi recristalizado a partir de éter de petróleo e foi seco durante 6 horas in vacuo à temperatura ambiente: (p.f. 146-147°C). CCF: Rf=0,44 sílica gel (CH2C12). RMN: Compatível com a estrutura. CLAR: > 99,7% puro EM: Iões moleculares a m/e, 399;

Análise para C23H29N03S:

Calculado: C, 69,14; H, 7,32; N, 3,51;

Encontrado: C, 68,97; H, 7,20; N, 3,38.

(IS)-1'-(((7-dimetil-2-oximinobiciclo(2.2.1) hépt-l-il)metil)sul-fonil)espiro(lH-indeno-1,4'-pioeridina^_ (IS)-1'-(((7-dimetil-2-oxobiciclo(2.2.1)hept-l-il)me-til)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina) (30 g, 0,075 mole) em piridina (500 ml) foi aquecida num banho de óleo a 70°C (interna). Adicionou-se Cloridrato de hidroxilamina (30 g) em três porções durante ca. 20 minutos. Ao fim de 2 horas, adicionaram-se mais 10 g de cloreto de hidroxilamina (durante 10 minutos). Ao fim de espaços de tempo de 30, 40 e 50 minutos, adicionaram-se lotes de 3 g de cloreto de hidroxilamina. Depois de mais 3 0 minutos, a mistura foi deitada em água (2 1) e extraída 3x com acetato de etilo (porções de 300 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com HC1 IN (600 ml no total), foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas até à secura in vacuo. Adicionou-se EtOH (abs; ca. 250 ml) ao xarope espesso resultante e a solução foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi filtrada e o filtrado foi fervido até ca. 80 ml. Após assentamento, a mistura foi novamente filtrada e fervida até ca. de 20 ml. Após uma terceira filtração, os sólidos filtrados foram combinados para se obter o composto do título (28 g).

Endo-(IS)-1'(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)-sulfonil^ espiro(lH-indeno-1,4’-piperidina ^_ O calalizador de Níquel de Raney activado, acabado de preparar (ca. 30 g) em água foi deixado assentar e decantou-se a água. Adicionou-se etanol absoluto (300 ml) e a mistura foi misturada por turbilhão e foi novamente deixada assentar. O solvente foi decantado. Efectuaram-se de forma semelhante mais dois ciclos de lavagem-decantação com 150 ml de etanol. (1S)-1'(((7-dimetil-2-oximinobiciclo(2.2.1) hept-l-il)metil)sulfo- nil)espiro(ΙΗ-indeno-l,4'-piperidina) (30 g) foi agitada numa mistura de etanol abs. (450 ml) e de 2-metoxietanol (900 ml), borbulhou-se azoto através da suspensão/solução e adicionou-se o catalisador de Níquel de Raney. A mistura foi hidrogenada sob 3,515 kg/cm (50 psi) durante a noite. CCF (9:1 CH2Cl2:-MeOH, sílica gel) mostrou que a reacção estava completa. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado até à secura in vacuo. 0 sólido em bruto (27 g) foi dividido em 7 porções e cada porção foi dissolvida em cloreto de metileno (ca. 200 ml) e foi submetida a cromatografia de "flash" sobre sílica (700 g numa coluna de 100 mm, embalada e eluída com metanol a 8% (v/v) em cloreto de metileno), tomando-se fracções de 200 ml. O isómero exo da amina do título foi obtido em fracções ca. 5-7 e o isómero endo desejado em fracções ca. 8-16. CCF sobre sílica, eluída com metanol/cloreto de metileno a 8%, mancha de ácido fosfomolíbdico. As fracções de produto combinadas foram evaporadas até à secura para se obter o composto do título (4,5 g de cada lote de 7 g, ca. 18 g no total) na forma de um sólido incolor.

Cloridrato de Endo-(lS)-l'(((2-(4-imidazoleacetilamino)-7,7-dime-tilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'--pjperidina)_ 4,56 g (11,3 mmoles) de Endo-(IS)-1'(((2-amino-7,7-di-metilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indeno--1,4'-piperidina) foram dissolvidos em 50 ml de DMF e a solução foi tratada com 2,30 g (14,1 mmoles) de ácido acético 4-imi-dazole, 1,9 g (14,1 mmoles) de hidrato de 1-hidroxibenzotriazole (HBT) e com 2,7 g (14,1 mmoles) de l-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida HC1 (EDC). 0 pH da suspensão foi ajustado para 9,5 com 4,65 ml (33,4 mmoles) de trietilamina e a mistura de reacção foi agitada a 25°C durante 18 horas. A DMF foi removida in vacuo e o resíduo arroxeado em bruto foi tratado com água e foi extraído com EtOAc (3x). Os orgânicos foram combinados, lavados com H20 (IX), salmoura (IX)/ secos sobre Na2S04, filtrados e separados até à secura in vacuo. A cromatografia "flash" do produto em bruto sobre sílica gel (114/10/1 de CH2Cl2/MeOH/conc. NH^OH) produziu 5,29 g (92%) do produto desejado sob a forma de uma espuma branca. 5,17 g (10,1 mmoles) deste produto foram dissolvidos em 100 ml de EtOAc. Ao mesmo tempo que se agitou vigorosamente, adicionou-se gota a gota uma solução de HC1 (g) em EtOAc, até a precipição terminar. A mistura ligeiramente gomosa foi agitada durante 15 minutos a 25°C, e depois foi evaporada até à secura in vacuo. O resíduo foi novamente separado 3x por meio de EtOAc e depois 3x por meio de Et20. 0 sólido branco foi raspado das paredes do frasco, foi triturado com Et20 e recolheram-se 5,3 g do sal cloridrato. P.F.: 93-167°C (pouca espuma) CLAR: 99,4% RMP: Compatível com a estrutura, mais 0,30 de acetato de etilo, 0,05 de éter e H20. Ε.Μ.ϊ M+H + 511 (FAB)

Análise para C28H3gN403S "HCl" 0,30 C4Hg02" 0,05 C4H1()0" 0,4 H20. (P.M. 584,48:

Calculado: C, 60,41; H, 7,36; N, 9,59;

Encontrado: C, 60,38; H, 7,46; N, 9,33. EXEMPLO 23

1- [ [6-bromo-l,7-dimetil-2-oxobiciclo(2.2.1)hept-7-il)metil]sulfo-nil1 espiro(lH-indan-1,4'-pjperidina)_

Dissolveram-se 100 mg de sal de amónio do ácido (+)-3--bromocanforsulfõnico (0,304 mM) em 15 ml de DML. Adicionaram-se 5 eq. de SOCl2 (PM=118,97; d=l,631; 1,52 mM; 120 ml). A mistura foi deixada reagir durante a noite e depois foi concentrada para se obterem 92,7 mg do cloreto de sulfonilo em bruto. Os 92,7 mg de cloreto de sulfonilo foram dissolvidos em 25 ml de THF seco. A esta mistura, adicionou-se 1,1 eg. do sal de indeno (68,59 mg) e 2 eq. de TFA, os quais foram deixados reagir à temperatura ambiente durante 3 horas. 0 produto foi concentrado e lavado com HCl, H20 e salmoura. Cromatografia "flash” em EtOAc a 20%/éter de petróleo. CLAR 97,7% a 13,52 min. EXEMPLO 24

(lR-sin)-1'-[[(1,7-dimetil-2-oxobiciclo(2.2.1)hept-7-il)metil]-sulfonillespiro(IH-indan-l.4'-pjperidina)_ A uma solução do produto do Exemplo 23 (107 mg, 0,300 mmoles) em ácido acético glacial (10 ml) adicionou-se pó de zinco (24 mg, 0,367 mmoles). A temperatura foi então aumentada até ao refluxo. Após 30 minutos, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, foi filtrada e depois foi concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia "flash” (acetato de etilo a 35% em éter de petróleo como eluente) produziu 80 mg do produto sob a forma de uma espuma amorfa branca. RMN (300 MHz, CDCl3): Compatível com a estrutura. CLAR (Coluna Vydac C18, gradiente de 95/5 para 0/100. H^O/CHLCN com TFA a 0,1%, gradiente de 15 min., caudal = 1,5 ml/min): pureza = 98%, t.a. = 12,67 min. FABEM: [M+l]+ a 400,91 9 -95- 3 Ο

Análise para C23H29N03S Calculado: C, 69,13; Encontrado: C, 69,25; H, 7,32; N, 3,51; H, 7,30; N, 3,48. EXEMPLO 25

(IS)-1'-(((2-(trifluorometil)sulfonil)oxi)2,3-eno-7,7-dimetilbi-ciclo(2.2.1)hept-l-il)metil]sulfonil]espiro(lH-indan-1,4'-piperi-dina]_ Á uma solução de (1S)-1(((7,7-dimetil-2-biciclo(2.2.1) -hept-l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina) (2 mg, 5,0 mmoles) 2,6-di-tert-butil-4-metilpiperidina) (1,5 g, 7,5 mmoles) em CH2Cl2 (25 ml) adicionou-se anidrido tríflico (1,3 ml, 7,5 mmoles) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi então diluída com CH2C12 (30 ml) e filtrada. 0 filtrado foi então lavado com HC1 a 5% (2 x 50 ml), foi saturada com NaHC03 (2 x 50 ml) e salmoura, foi seca sobre Na2S0^ e foi evaporada. -96- 3 c

O triflato em bruto foi purificado por cromatografia "flash”, eluindo-se com etilacetato a 20% em hexanos, para se obter 1,7 g do produto do título sob a forma de uma espuma branca (64%). CLAR TA = 12,75 min. RMN (CDClg) em acordo com o composto do título. FAB EM: 532 [M+l]

Análise para C^gNS^^: ·

Calculado: C, 54,22; H, 2,63; N, 2,63;

Encontrado: C, 54,42; H, 5,34; N, 2,37. EXEMPLO 26

(IS)-1'-(((2-(dimetilfosfonil)oxi)2,3-eno-7,7-dimetilbiciclo-(2.2.1)hept-l-il)metillsulfonillespiro(lH-indan-l.4/-piperidina)

Uma mistura do produto triflato do Exemplo 25 (50 mg, 0,097 mmoles), fosfito de dimetilo (13 ml, 0,14 mmoles), trietil-amina (61 ml, 0,44 mmoles) e tetrakis(trifenilfosfina)paládio (5 mg, 0,005 mmoles) em DMF (3 ml) foi agitada sob uma atmosfera de árgon durante 1 hora. A reacção foi então diluída com CHC13 (25 ml) . 0 clorofórmio foi lavado com HC1 a 5% (2 x 25 ml) e salmoura, foi seco sobre Na2S04 e foi evaporado até â secura. A purificação por meio de cromatografia flash (acetato de etilo a 25% em hexanos) produziu 40 mg do composto do título sob a forma de um sólido branco (86%). CLAR TA = 10,15 min. RMN (CDC13) em acordo com o composto do título. FAB EM: 492 [M+l]

Análise para C25H34NS05P 0,5 H20:

Calculado: N, 2,80; C, 59,99; H, 7,05;

Encontrado: N, 2,71; C, 59,90; H, 7,49. EXEMPLO 27

Éster do ácido-1,l-dimetiletílico de [l-[ [ [ [exo^-hidroxi^^-di-metil-l-C espiro[ΙΗ-indeno-l,4-piperidina]-1-il-sulfonil)metil]bi-ciclo]2.2.l]hept-2-il]metil]amino]carbonil]-3-(metiltio)propil]-carbâmico_ A uma solução agitada de (lS)-l'-<((exo-2-hidróxi-endo--2-aminometil-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)-espiro(lH-indeno-l,4'-piperidina) (600 mg, 1,39 mmoles) em 5 ml de Ν,Ν-dimetilformamida desgaseifiçada e seca adicionou-se Boc-L-metionina (381 mg, 1,53 mmoles) e 743 mg (1,68 mmoles) de hexafluorofosfato de benzotriazol-l-ilóxi tris (dimetilamino)fos-fónio (BOP) â temperatura ambiente. A mistura de reacção resultante foi protegida da humidade e o pH foi ajustado para 8-9 com diisopropiletilamina. Ao fim de uma hora, todos os componentes voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em 250 ml de acetato de etilo. Esta solução foi lavada sucessivamente com ácido cítrico aquoso a 10%, solução de bicarbonato de sódio a 50% e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. A cromatografia do produto de -99-

reacção em bruto sobre sílica gel (solução 1:1 de acetato de etiloshexano) produziu o composto do título sob a forma de um sólido amorfo: p.f. 82-92°C.

CLAR: > 92% puro a 214 nM RMN: Compatível com a estrutura e verificou a presença do solvente. FAB EM: 670 [M++ tioglicerol]

Análise para 5CHClg:

Calculado: C, 57,42; H, 7,19; N, 5,82;

Encontrado: C, 57,58; H, 7,50; N, 5,83. EXEMPT.O 28

2-amino-N-[[exo-2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-indeno-1,4'--piperidina]1'ilsulfonil)metil]biciclo]2.2.1]hept-2-il]metil]-4--metiltio)-butanamida_

Uma corrente contínua de gás HC1 seco foi passada durante 5 minutos numa solução gelada de acetato de etilo (2 ml) -100- 3 c

que continha 20 mg do produto do Exemplo 27. Ao fim de 30 minutos a 0*0, a mistura de reacção foi concentrada e o resíduo foi cromatografado sobre duas placas de sílica gel pré-revestidas de 0,25 mm (clorofórmio-metanol-hidróxido de amónio, eluição 93:7:0,7 v/v). O composto do título foi obtido sob a forma de um sólido (10,7 mg): p.f. 78-80°C. CCF: Rf=0,28 (CHCl3-CH3OH-NH4OH, 95:5:0,5) RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. FAB EM: 562 [M++ H)

Análise para c29H43N304S2â0'75CHC13:

Calculado: C, 54,86; H, 6,77; N, 6,45;

Encontrado: C, 54,52; H, 6,90; N, 6,32. EXEMPLO 29

O 5-(l,3-diidro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-il)-N-[[2-hidróxi-7,7-dime-til-1-[(espiro[lH-indeno-1,4'-piperidina]-1'-ilsulfonilo)metil]-biciclo[2.2.l]hept-2-il]metil]diidro-4-oxo-2H-l,3-tiazina-3(4H)--acetamida_ A uma solução agitada de (lS)-l'-((exo-2-hidróxi-2-ami-nometil-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)sulfonil)espiro(lH-in-deno-l,4'-piperidina) (67 mg, 0,16 mmoles),em 1,5 ml de N,N-dime-tilformamida desgaseifiçada seca, adicionou-se o ácido 4-oxo-5-fta-lil-1,3-tiazinaacético (62 mg, 0,192 mmoles) e 88 mg (0,20 mmoles) de hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris(dimetil-amino)fosfõnio (BOP) à temperatura ambiente. A mistura de reacção resultante foi protegida da humidade e o pH foi ajustado para 8-9 com diisopropiletilamina. Após 24 horas, removeram-se todos os componentes voláteis sob pressão reduzida e o resíduo foi suspenso em 5 ml de tolueno. A concentração desta suspensão produziu o produto em bruto que foi cromatografado sobre sílica gel (96:4:0,4 de CHCl3-CH3OH-NH4OH) para proporcionar o composto do título (109 mg): p.f. 134-137°C. RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente; CLAR: > 94% puro a 214 nM; FAB EM: 733 (M+ + H)

Análise Calculada para C__H..N.0„S_âl,1CHC1-: c 38 44 4 7 2 3

Calculado: C, 54,34; H, 5,26; N, 6,48;

Encontrado: C, 54,12; H, 5,22; N, 6,42. -102- -102-

5-amino-N-[[1-[[espiro[lH-indeno-1,4'-piperidina]-1-il)sulfonil]-metil]exo-2-hidróxi-7,7-dimetilbiciclo[l.l.l]hept-2-il]metil]dii-dro-4-oxo-2H-l.3-Tiazina-3(4H^-acetamida_ 0 produto do Exemplo 29 (60 mg) foi dissolvido em 3 ml de metanol e foi tratado com 50 ml (1,59 mmoles) de hidrazina a 95% a 23°c. Após 24 horas, o solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi suspenso em tolueno. A rotoevaporação desta suspensão produziu o produto em bruto, o qual foi cromatografado em quatro placas de 0,5 mm de sílica gel pre-revestidas (eluição de clorofórmio-metanol-hidróxido de amónio, 92:8:0,8 v/v). 0 composto do título foi obtido como um sólido amorfo (27 mg): p.f. 103-106°C; RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. CLAR: > 97% puro a 214 nM; FAB EM: 605 (M+ + H) -103- Β β

Análise Calculada Calculado: C, Encontrado: c, para C^H^O^âO^CHCl^: 54,33; H, 6,64; N, 8,28; 54,12; H, 6,60; N, 8,20. EXEMPLO 31 i

l'-[(5-oxoespiro[biciclo[2.2.l]heptano-7,l'-ciclopropan]]-2-il) -sulfonillespiro ΓlH-indano-1.4'-oloeridinal_

Cloridrato de espiro(lH-indano-1,4'-piperidina) (3 g, 13,5 imoles) foi dissolvida em 30 ml de cloreto de metileno. A solução resultante foi arrefecida até 0°C e foi tratada com 3,6 ml de trietilamina. Seguiu-se a adição gota a gota de cloroetil-sulfonilcloreto (1,57 ml, 15 mmoles). A mistura de reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante uma hora e foi filtrada. O filtrado foi lavado com água, bicarbonato de sódio e salmoura. As lavagens orgânicas secas foram concentradas e o resíduo foi cromatografado em coluna sobre sílica gel (eluição de 98:2 de cloreto de metileno-éter) para se obterem 1,88 g de (p.f. 1'-(vinilsulfonil)espiro(lH-indano-1,4'-piperidina) 114-115°C). 1'-(Vinilsulfonil)espiro(ΙΗ-indano-l,4'piperidina) (185 mg, 0,67 mmoles) foi combinado com 5,1 g (55 mmoles) de espiro-heptadieno em 4 ml de benzeno e foi aquecido até ao refluxo durante 48 horas. 0 solvente e o reagente em excesso foram removidos sob pressão reduzida e o óleo residual foi cromatogra-fado sobre sílica gel (eluição de 4:1 de hexano-acetato de etilo) para proporcionar 216 mg de um sólido que foi recristalizado a partir de metanol para proporcionar agulhas brancas (p.f. 176-177°C). Deste material, 110,7 mg foram dissolvidos em 5 ml de THF sob azoto. Esta solução foi arrefecida até 0°C e foi tratada com 0,1 ml do complexo borano-THF. Após agitação durante uma hora, adicionou-se mais 0,1 ml do complexo de Borano-THF à mistura de reacção e a agitação continuou à temperatura ambiente durante mais uma hora. A mistura de reacção foi novamente arrefecida até 0°C e foi temperada através da adição gota a gota de água. Ao fim de 10 minutos, adicionaram-se 0,3 ml de uma solução de hidróxido de sódio 3N e 0,3 ml de uma solução a 30% de peróxido de hidrogénio. A mistura resultante foi aquecida até 50°C durante uma hora e foi deixada em repouso a 23 °C durante a noite. A mistura de reacção foi dividida entre acetato de etilo e salmoura. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo e os extractos orgânicos combinados foram secos (MgSC>4) e concentrados. A purificação do produto de reacção em bruto por CCF preparativa sobre sílica gel (2:1 de hexano-acetato de etilo) produziu dois componentes. 0 produto mais polar (p.f. 232-233°C, a partir de metanol) (0,15 mmoles) foi dissolvido em 5 ml de cloreto de metileno e oxidado com cloroformato de piridínio (2 mmoles) a 23°c. A mistura de reacção foi filtrada através de celite e o filtrado foi aplicado a 0,25 mm de placas de sílica gel pré-revestidas. A eluição com 2:1 de hexano-acetato de etilo -105-

e a recristalização a partir de metanol produziu o composto do título sob a forma de um sólido branco, p.f. 210-212°C; RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. CLAR: > 96% puro a 214 nM; FAB EM: 386 (M+ + H) i

Análise Calculada para C^H^NC^SâO^CI^O:

Calculado: C, 67,59; H, 7,12; N, 3,58;

Encontrado: C, 67,66; H, 7,22; N, 3,53.

I EXEMPLO 32

t 1'-[(9,10-dihidro-9,10-etanoantracen-l]-il)sulfonil]espiro[lH-in-dano-i.4'-pjperidinal_ l'-(Vinilsulfonil)espiro(lH-indano-l,4/piperidina) (152 mg) foi combinada com 350 mg de antraceno em 15 ml de tolueno e foi aquecida até ao refluxo durante 8 dias. O solvente e o reagente em excesso foram removidos sob pressão reduzida e o óleo

residual foi cromatografado sobre sílica gel (eluição de 4:1 de hexano-acetato de etilo) para proporcionar o composto do título sob a forma de um sólido amorfo. RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. CLAR: > 99% puro a 214 nM; FAB EM: 456 (M+ + H)

Análise Calculada para C29H29NO2Sâ0/05 H20â0,25 HC13:

Calculado: C, 72,23; H, 6,08; N, 2,88;

Encontrado: C, 72,23; H, 5,92; N, 2,67. EXEMPLO 33

1'-(espiro[biciclo[2.2.1]hept-5-eno-7,1'-ciclopentan]-2-ilsulfo-nillesoiro ΓlH-indano-1.4'-piperidinal_ 1'-(Vinilsulfonil)espiro(lH-indano-1,4'piperidina) (100 mg) foi combinada com 500 mg de espirononadieno em 3 ml de tolueno e foi aquecida até ao refluxo durante 17 horas. 0 solvente e o reagente em excesso foram removidos sob pressão reduzida e o ôleo residual foi cromatografado sobre sílica gel (eluição de 4:1 de hexano-acetato de etilo) para proporcionar o composto do título sob a forma de um sólido amorfo: 115-119°c. RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. CLAR: > 9.9% puro a 214 nM; FAB EM: 398 (M+ + H)

Análise Calculada para C24Hi9NO2Sâ0/05CHC13:

Calculado: C, 71#53; H, 7,76; N, 3,47;

Encontrado: C, 71,94; H, 7,81; N, 3,42. EXEMPLO 34

-108-

1' - (biciclo [2.2.1] hept-5-en-2-ilsulf onil) espiro [ lH-indano-1,4' -pjperidinal_ 1'-(Vinilsulfonil)espiro(lH-indano-1,4'piperidina) (100 mg) foi combinada com 10 equivalentes de ciclohexadieno em 10 ml de tolueno e foi aquecida ao refluxo durante 30 horas. O solvente e o reagente em excesso foram removidos sob pressão reduzida e o óleo residual foi cromatografado sobre sílica gel (eluição de 4:1 de hexano-acetato de etilo) para proporcionar o composto do título sob a forma de um sólido amorfo: 162-166°C. RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. CLAR: > 99% puro a 214 nM; FAB EM: 358 (M+ + H)

Análise Calculada para C2iH27N02S^°''LH20:

Calculado: C, 70,19; H, 7,63; N, 3,90;

Encontrado: C, 70,30; H, 8,03; N, 3,61. EXEMPLO 35

I

l/-[[2'-[[(2-metoxietóxi)metóxi ] metil]espiro]biciclo[2.2.1]hept--5-eno-7,l'-ciclopropan]-2-il]sulfonil]espiro[lH-indano-1,4'-pi-peridinal____ l'-(Vinilsulfonil) espiro (lH-indano-1,4 'piperidina) (2,45 g) foi combinada com 2,2 g de hidroximetilespirociclohepta-dieno e com 3 mg de hidroquinona em 8 ml de tolueno e foram aquecidos ao refluxo durante 17 horas. O solvente e o reagente em excesso foram removidos sob pressão reduzida e o óleo residual foi cromatografado sobre sílica gel (eluição de 1:2 de hexano--acetato de etilo) para proporcionar três componentes. O menos polar destes produtos (80 mg) foi dissolvido em cloreto de metileno que contém 78 mg de diisopropiletilamina e foi tratado com 49 mg de cloreto de 2-metoxietoximetilo. A mistura de reacção foi protegida da humidade e foi agitada a 23°C durante a noite. A mistura de reacção foi concentrada e o material residual foi aplicado a placas de sílica gel pre-revestidas de 0,5 mm. A eluição com 1:1 de hexano-acetato de etilo produziu o composto do título. RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. CLAR: > 90% puro a 214 nM; FAB EM: 488 (M+ + H) -110- -110-

Sal de (lS)-2-[[[exo-2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-indeno--1,4'-piperidin]-1'-ilsulfonil)metil]biciclo[2.2.1]hept-2-il]me-til] amino] -N- (2-metóxi-2-oxoetil) -N,N-dimetil-2-oxo-etanamínio com ácido trifluoroacético (1:1)_ A uma solução agitada de (IS)-l'-(((exo-2-hidróxi-endo--2-aminometil-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)-espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina) (108 mg, 0,25 mmoles) em 5 ml de tolueno foi adicionada a 1 ml de tolueno que contém 0,5 mmole de anidridido do ácido metilamino-diacético. Adicionou-se tetraidrofurano (2 ml) e a suspensão branca foi agitada a 23°C durante a noite. A mistura de reacção foi filtrada e concentrada. O resíduo foi dissolvido em 5 ml de Ν,Ν-dimetilformamida e foi tratado sucessivamente com iodeto de metilo (0,5 ml) e diisopropiletilamina (0,2 ml). A solução resultante foi protegida da humidade e foi aquecida durante 5 horas a 50eC. Adicionou--se mais 0,5 ml de iodeto de metilo e o aquecimento continuou durante mais 5 horas. A mistura de reacção foi concentrada e o resíduo foi purificado por CLAP preparativa de fase invertida -111-

(coluna Vydac Protein & Peptide C-18, fase móvel = ácido trifluo-roacético a 0,1% (TFA) em ãgua-acetonitrilo). As fracções que contêm o composto do título foram reunidas e concentradas. 0 resíduo foi dissolvido em dioxano e esta solução foi seca por congelação para produzir o sal de TFA do composto do título sob a forma de um pó branco: RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença do solvente. CLAR: > 99% puro a 214 nM; FAB EM: 588 (M+ + H)

Análise Calculada para C3iH46N3°6Sâ1'8CF3C02Hâl,0 dioxano: Calculado: C, 52,61; H, 6,27; N, 4,77;

Encontrado: C, 52,58; H, 6,40; N, 4,76. EXEMPLO 37

-112- <5 e

(lR-sin)-1'-[[(l,7-dimetil-2-oxobiciclo[2.2.1]hept-7-il)metil]-sulfonill-espiro ΓlH-indeno-1.4 '-piperidina)_

Dissolveram-se 100 mg (0,204 mM; PM=328,23) de sal de amónio do ácido 3-bromocanfosulfónico em 15 ml de DCM. Adicionaram-se 5 eq de tionilcloreto (FW=118,97; d=l,631; l,52mM; 120 ml) e a mistura foi deixada reagir a 0°C sob um balão de ^ durante 1 hora. Após 1 hora, a mistura foi concentrada para se obter 63,12 mg de cloreto ácido em bruto (0,191).

Dissolveram-se 47,13 mg de indeno do sal HC1 em 20 ml de THF. 0 cloreto ácido foi adicionado em silmutâneo com 2 eq de DIEA, e foi deixado reagir à temperatura ambiente durante 1 hora e depois foi concentrado e lavado com 2 x 200 ml de NC1 IN, 2 x 200 ml de H^O e 2 x 200 ml de salmoura. Depois foi concentrado e seco sobre sulfato de sódio. Cromatografia "flash” em EtOAc/éter de petróleo a 25%. EXEMPLO 38

A ruma solução do produto do Exemplo 37 (107 mg, 0,300 mmole) em ácido acético glacial (10 ml adicionou-se pó de zinco (24 mg, 0,367 mmoles). A temperatura foi então aumentada até ao refluxo. Ao fim de 30 minutos, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, foi filtrada e depois foi concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia "flash” (acetato de etilo a 35% em éter de petróleo como eluente) produziu 80 mg do produto sob a forma de um sólido amorfo branco. KMN (300 MHz, CDC13) : Compatível com a estrutura: CLAR: (coluna Vydac C18, gradiente de 95/5 a 0/100 de H20/CH3CN com TFA a 0,1%, gradiente de 15 min., caudal = 1,5 ml/min.): Pureza: 98%, t.a. = 12,67 min. FAB EM: [M + 1]+ a 400,91

Análise Calculada para C 23H 29N°3S • Calculado: c, 69,13; H, 7,32; N Encontrado: c, 69,25; H, 7,30; N 3,51; 3,48. EXEMPLO 39

0 l'-[[(7,7-dimetil-2-oxobiciclo[2.2.1] hept-l-il)metil]sulfonil]--3'-fenil-espiro ΓlH-indeno-1,4·-piperidina]_

Colocou-se etanolamina (6,66 ml, 0,1103 mmoles) num frasco de fundo de redondo de 3 tubuladuras e aqueceu-se até ao refluxo. Uma vez ao refluxo, adicionou-se gota a gota óxido de estireno (6,28 ml, 0,0557 mmoles) à mistura de reacção durante 15 minutos. A mistura de reacção foi submetida a refluxo durante mais 2 horas e depois foi deixada arrefecer. O produto, N--(2-hidroxietil)-N-(2-hidróxi-2-feniletil)amina, foi obtido sob a forma de um óleo transparente por destilação no vácuo.

Dissolveu-se N-(2-hidroxietil)-N-(2-hidróxi-2-feniletil) amina (1,30 g, 7,16 mmoles) em clorofórmio e depois, sob um cobertor de azoto, adicionou-se gota a gota durante 10 minutos cloreto de tionilo (1,05 ml, 14,32 mmoles). A mistura de reacção foi então submetida ao refluxo durante uma hora e depois foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente. Adicionou-se então água à mistura e deixou-se agitar durante 1 hora. A mistura de reacção foi separada e a camada orgânica foi lavada três vezes com HC1 3N. As camadas aquosas foram combinadas e depois basifi-cadas com hidróxido de sódio a 40%. A camada aquosa foi extraída 3 vezes com éter, os orgânicos foram combinados e secos sobre sulfato de sódio. A camada orgânica foi filtrada e o filtrado foi concentrado para se obter um óleo amarelo. O óleo amarelo foi dissolvido em éter e depois adicionou-se bicarbonato de di-t-butilo (1,50 g, 6,87 mmoles), conjuntamente com trietilamina (500 ml, 3,59 mmoles). A mistura foi deixada em agitação durante a noite e depois foi lavada com H20 (2x) e com bicarbonato de sódio (2x). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, foi filtrada e o filtrado concentrado para um óleo amarelo. 0 óleo amarelo foi dissolvido em CH„C1 e -115-

foi deitado sobre uma coluna de sílica gel. A coluna foi eluída com 1:1 de CH2Cl2/hexano. As fracções de produto foram combinadas e concentradas até à secura para produzir o produto, N--(2-hidroxietil)-N-(2-hidróxi-2-feniletil)-t-butil-carbamato. A uma solução de indeno (268 ml, 2,30 mmoles) em THF seco (2 ml), arrefecida num banho de gelo e mantida sob um cobertor de azoto, adicionou-se bis(trimetilsilil)amida de lítio (solução 1M em THF, 4,6 ml, 4,60 mmoles) durante 10 minutos. A mistura foi agitada no banho frio durante 30 minutos e depois foi adicionada durante 10 minutos a uma solução de N-(2-hidroxietil)-—N-(2-hidróxi-2-feniletil)-t-butilcarbamato (694 mg, 2,30 mmoles), agitada num banho de gelo. A mistura foi agitada durante 2 horas no frio e durante 30 minutos a 25°C sob azoto e depois foi concentrada até se obter um óleo alaranjado. Adicionou-se acetato de etilo a 10% em hexano e a mistura resultante foi deitada sobre uma coluna de sílica gel embalada com acetato de etilo a 10% em hexano. A eluição foi efectuada com o mesmo solvente e a fracção de produto foi concentrada para se proporcionar 1'-(t-butiloxicarbonil)-espiro-(indeno-3'-fenil-1,4'--piperidina.

1'-(t-Butiloxicarbonil)espiro(indeno-3'-fe-nil-1,4'-piperidina) (290,9 mg, 0,842 mmoles) em acetato de etilo foi agitada num banho de gelo e foi saturada com HC1 (g) durante 30 minutos. A mistura foi concentrada até à secura e reconcen-trada a partir de éter três vezes, para produzir espiro (lH-in-deno-3-fenil-1,4'-piperidina)-cloridrato.

Cloridrato de espiro(lH-indeno-3'-fenil-1,4'-piperidina) (205,2 mg, 0,690 mmoles) e cloreto de (+)-10-canforsulfonilo (196 mg, 0,782 mmoles) foram combinados em THF e o pH foi ajustado até 9 com trietilamina (196 ml, 1,41 mmoles). A mistura de reacção foi agitada durante a noite a 25°C, depois foi concentrada até à secura e redissolvida em CH2C12, a seguir foi deitada sobre uma coluna de sílica gel e foi eluída com CH2C12. As fracções de produto foram combinadas e evaporadas até à secura para se proporcionar o composto do título que foi cristalizado a partir de éter e foi seco in vacuo durante a noite.

p.f.: 183 - 215°C RMN: Compatível com a estrutura CLAR: > 95% puro Ε.Μ.ϊ Μ + H 476,3 (FAB)

Análise Calculada para C29H33N03S^0/50H20:

Calculado: C, 71,86; H, 7,02; N, 2,89;

Encontrado: C, 71,88; H, 7,03; N, 2,87. EXEMPLO 40

-117-

Ácido (IS(la,2a,4a))-2-hidróxi-7,7-dimetil-l-((èspiro-(lH-indeno--1,4'-piperidin)-1'-il-sulfonil)metil)biciclo(2.2.1)heptano-2--acético_

Azeto de difenilfosforilo (100 mg, 0,217 mmole) e trietilamina (66,2 ml, 0,471 mmole) foram combinados em DMF. A mistura foi deixada em agitação durante a noite e depois foi concentrada até à secura. 0 resíduo resultante foi dissolvido em CH2C12, foi deitado sobre uma coluna de silica gel e foi eluído com metanol a 5% em CH2C12. As fracções de produto foram combinadas e concentradas até à secura. 0 composto do título foi obtido como um sólido branco a partir de éter e foi seco in vacuo durante a noite. RMN: Compatível com a estrutura CLAR: > 93% puro E.M.: Μ + H 457,3 (FAB)

Análise Calculada para C 25H 32N2°4S: Calculado: C, 65,76; H, 7,06; N Encontrado: C, 65,76; H, 7,42; N 6,14; 5,80.

i ->* EXEMPLO 41

Éster de 1,1-dimetiletilo do ácido (lS-exo)-[[2-hidróxi-7,7-dime-til-1-[(espiro[lH-indeno-1,2'-piperidin]-1'-ilsulfonil)metil]bi-ciclo-2.2 . nhept-2-illcarbâmico_ (lS)-l'-(((7,7-dimetil-2-oxobiciclo-(2.2.1)-hept-l-il)--metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-l,4'-piperidina) (1,92 g, 4,81 mmoles) foi combinada com iodeto de zinco (47 mg, 0,15 mmole) em 2 ml de tolueno. Enquanto sob uma atmosfera de azoto, a mistura foi tratada com cianeto de trimetilsililo (960 ml, 7,21 mmoles) gota a gota, A mistura de reacção foi então aquecida até 100°C e foi aí mantida durante 3,5 horas. A mistura foi deixada arrefecer e foi diluída com 10 ml de THF seco. Então, adicionou-se gota a gota hidreto de alumínio e lítio (1M em THF; 8,6 ml, 8,6 mmoles) durante 5 minutos e a mistura foi deixada em agitação a 25°C durante 2 horas. A mistura de reacção foi então diluída com éter (50 ml) e adicionou-se gota a gota uma solução de hidróxido de sódio a 10%, até à paragem da formação de um precipitado cinzento. A mistura foi então filtrada, o filtrado foi lavado com bicarbonato de sódio e salmoura e a camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de sódio. A cãirtàda orgânica foi filtrada, o filtrado foi concentrado e o resíduo foi dissolvido em CH2C12· Este foi deitado sobre uma coluna de sílica gel, foi eluído com 97/3/0,3 de CH2Cl2/metanol/hidróxido de amónio e as fracções de produto foram recolhidas. As fracções de produto foram combinadas e concentradas até à secura. O produto desejado, a (lS)-l'-(((7,7-dimetil-(2-endo-aminometil-2-exo-hidróxi)-bi-ciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'-pipe-ridina), foi obtida sob a forma de uma espuma branca a partir de éter. (IS)-l'-(((7,7-dimetil-(2-endo-aminometil-2-exo-hidró-xi)-biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil) sulfonil)espiro(lH-indeno--l,4'-piperidina) (44,9 mg, 0,104 mmole) e dicarbonato de di-t--butilo (25 mg, 0,115 mmoles) foram combinados em 5 ml de CH2C12. A mistura de reacção foi tratada com trietilamina (18,1 ml, 0,13 mmole) e então foi agitada durante 30 minutos a 25°C. A mistura de reacção foi deitada sobre uma coluna de sílica gel e foi eluída com acetato de etilo a 15% em hexano. As fracções de produto foram combinadas e evaporadas até à secura. O composto do título foi obtido sob a forma de um sólido branco a partir de CH2Cl2/hexano e foi seco in vacuo durante a noite.

p.f.: 71 - 115°C RMN: Compatível com a estrutura CLAR: > 95% puro

Análise Calculada para C29H42N2°5S^°,45:

Calculado: C, 66,14; H, 8,73; N, 5,03;

Encontrado: C, 66,21; H, 8,52; N, 4,75. EXEMPLO 42

OH (lS-exo)-3-hidróxi-N-[[2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-inde-no-1,4'-piperidin]-1'-ilsulfonil) metil]biciclo[2.2.l]hept-2-il]-metill-2-(hidróximetil^-2-metil-propanamida_ (IS)-l'-(((7,7-dimetil-(2-endo-aminometil-2-exo-hidró-xi)-biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil) -sulfonil)espiro(lH-indeno--l,4'-piperidina) (51 mg, 0,118 mmole), ácido 2,2-bis(hidroxime-til)-propiónico (19 mg, 0,142 mmole), hidrato de 1-hidroxibenzo-triazole (HBT) (10 mg, 0,142 mmole) e l-etil-3-(dimetilaminopro-pil)carbodiimidaâHCl (EDC) (27 mg, 0,142 mmole) foram combinados em 5 ml de DMF. Depois, adicionou-se trietilamina (46 ml, 0,33 mmole) para ajustar o pH para 9 e a mistura foi deixada em agitação durante a noite a 25°C. A mistura de reacção foi concentrada até à secura e foi tratada com uma solução'de ácido cítrico a 5%. A camada de água foi então basifiçada com bicarbonato de sódio saturado e foi extraída 3 vezes com acetato de etilo. 121-

Os orgânicos foram combinados e secos sobre sulfato de sódio. A camada orgânica foi filtrada, o filtrado foi concentrado e o resíduo resultante foi dissolvido em CH2C12. Este foi então deitado sobre uma coluna de sílica gel e foi eluído com metanol a 3% em CH2C12· As fracções de produto foram combinadas e evaporadas até à secura. 0 composto do título foi obtido sob a forma de um sólido branco a partir de CH2Cl2/hexano e foi seco in vacuo durante a noite.

p.f.: 167 - 170eC

RMN: Compatível com a estrutura CLAR: > 99% puro E.M.: Μ + H 547,3 (FAB) * 29 2 b C, 63,71; H, 7,74; N, 5,12; C, 63,65; H, 7,59; N, 4,88.

Análise Calculada para „N„0,.S:

Calculado:

Encontrado: EXEMPLO 43

(lS-exo)-4-benzoil-N-[[2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-inde-no-l,4'-piperidin]-1'-ilsulfonil)metil]biciclo[2.2.1]hept-2-il]-metil! -benzamida_______ ► O processo do Exemplo 42 foi efectuado por utilização de 49,6 mg, 0,115 mmole de (lS)-(((7,7-dimetil-(2-endo-aminome-til-2-exo-hidróxi)-biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfonil)espiro (lH-indeno-1,47-piperidina), 26,5 mg, 0,138 mmole de EDC, 18,7 mg, 0,138 mmole de HBT, 48 ml, 0,345 mmole de trietilamina e por substituição do ácido 2,2-bis-(hidroximetil)-propiónico pelo ácido 4-benzoilbenzóico (31,3 mg, 0,138 mmole). A eluição cromatográfica foi efectuada com metanol a 2% em CH2C12· O composto do título foi obtido e seco in vacuo. durante a noite.

p.f.: 110 - 135°C RMN: Compatível com a estrutura CLAR: > 94% puro E.M.: Μ + H 639 (FAB)

Análise Calculada para C_oH._N_01_Sâ0,40Cí.H1 .: Calculado: C, 72,06; H, 7,13; N, 4,16;

Encontrado: c, 72,01; H, 7,14; N, 4,18.

I 123- 123-

1'-(Biciclo[2.2.1]hept-5-en-2-ilsulfonil) espiro[lH-indano-1,4'--pjperidinal_ 0 processo do Exemplo 42 foi efectuado por utilização dé 94,5 mg, 0,22 mmole de (IS)-(((7,7-dimetil-(2-endo-aminome-til-2-exo-hidróxi)-biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfonil)espiro (lH-indeno-l,4'-piperidina), 49,8 mg, 0,26 mmole de EDC, 35,2 mg, 0,26 mmole de HBT, 90 ml, 0,66 mmole de trietilamina e por substituição do ácido 2,2-bis-(hidroximetil)-propiónico por t-boc-L-serina(bzl) (76,8 mg, 0,26 mmole). A eluição cromatográ-fica foi efectuada com 98/2 de CH2Cl2/metanol/hidróxido de amónio. 0 composto do título foi obtido sob a forma de um sólido branco a partir de éter e foi seco in vacuo durante a noite.

p.f.: 50 - 95°C RMN: Compatível com a estrutura CLAR: > 98% puro E.M.: Μ + H 639 (FAB)

Análise Calculada para C 39H 53N3°7S: Calculado: c, 66,16; H, 7,55; N, 5,94 Encontrado: c, 66,04; H, 7,68; N, 5,84 EXEMPLO 45

[lS-[l.alfa., 2 Beta., 2(R*), 4. beta.]]-2-amino-N[[l-[[(2,3-dii-droespiro[lH-indeno-l, 4 '-piperidin] il) sulfonil]metil] -2-hidróxi--7.7-dimetilbiciclo Γ 2 ♦ 2 ♦ 11hept-2-il~|metin-3-hidróxi-propanamida O produto do Exemplo 44 (120 mg, 0,17 mmole) foi dissolvido em ácido fórmico a 4% em metanol. Adicionou-se o catalisador de hidróxido de paládio (25 mg) à solução e esta foi 2 colocada num aparelho de PARR sob 3,515 kg/cm (50 p.s.i.), durante a noite. A mistura de reacção foi filtrada sobre "solka floc" e o filtrado foi concentrado num óleo transparente. Este óleo transparente foi dissolvido em 2 ml de acetato de etilo e foi arrefecido até 0°C. Neste ponto, adicionaram-se gota a gota 5 ml de uma solução pré-arrefecida saturada de HCl/acetato de etilo. A mistura de reacção foi deixada em agitação durante 1 hora e depois foi concentrada até à secura. O resíduo resultante foi dividido entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado, e após extracção 3 vezes com acetato de etilo, os orgânicos foram combinados e secos sobre sulfato de sódio. A camada orgânica foi filtrada, o filtrado foi concentrado e o resíduo resultante foi dissolvido em CH2C12· Este foi então deitado sobre uma coluna de sílica gel e foi eluído com 95/5/0,5 de CH2Cl2/metanol/hidróxido de amónio. As fracções de produto foram combinadas e evaporadas até à secura. O composto do título foi obtido sob a forma de um sólido branco a partir de éter e foi seco in vacuo durante a noite.

p.f.: 70 - 110°C RMN: Compatível com a estrutura CLAR: > 93% puro E.M.: Μ + H 520,3 (FAB)

Análise Calculada Calculado: C, Encontrado: C, para ^,Η^Ο,^Ο, 25 CjH^: 61,31; H, 8,20; N, 7,67; 61,35; H, 8,11; N, 7,58. EXEMPLO 46

Ácido 3-[[[[2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-indeno-l,4'-pipe-ridin]-l'-ilsulfonil)metil]biciclo[2.2.1]-hept-2-il]metii;|amino]-carbonillbiciclor2.2.11hept-5~eno-2-carboxílico_ (IS)-(((7,7-dimetil-(2-endo-aminometil-2-exo-hidróxi)--biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4,-piperidina) (98,5 mg, 0,23 mmole) foi combinada com anidrido biciclo(2.2.1)-5-hepteno-2,3-dicarboxílico (43 mg, 0,26 mmole) em 5 ml de THF. Adicionou-se trietilamina (50 ml, 0,36 mmole) gota a gota à mistura de reacção para ajustar o pH a 9. A mistura de reacção foi agitada durante a noite e depois foi concentrada até à secura. O resíduo resultante foi dissolvido em CH2C12, foi deitado sobre uma coluna de sílica gel e foi eluído com 97/3/0,3 de clorofórmio/metanol/ácido acético. As fracções de produto foram combinadas e concentradas até à secura. O composto do título foi obtido sob a forma de um sólido branco a partir de éter e foi seco in vacuo durante a noite. -127-

p.f.: 128 - 165eC RMN: Compatível com a estrutura CLAR: >95% puro E.M.: Μ + H 595 (FAB)

Análise Calculada para C33H42N2°6S^0/10 CH2C12: Calculado: C, 64,74; H, 7,12; N, 4,56; , Encontrado: C, 64,76; H, 7,07; N, 4,66. EXEMPLO 47 >

P (IS)-1'-(((2-endo-cianometil-7,7-dimetil-exo-2-hidroxibiciclo--(2.2.1)-hept-l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'-piperidi-na)_

Bis(trimetilsilil)amida de lítio (21,3 ml de uma solução de THF 1,0 M, 21,3 mmoles) foi arrefecida até -78°C sob N2, foi tratada com acetonitrilo (1,07 ml, 20,4 mmole) e foi agitada durante 15 minutos. Uma solução de THF (30 ml) de (1S)-1'- (((7,7-dimetil-2-oxobiciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil)-sulfoni- 128-

.·< 1)espiro(ΙΗ-indeno-l,4'-piperidina) (40 gm, 10 mmoles) foi adicionada gota a gota e agitada durante 10 minutos, dedpois da adição estar concluída. Adicionou-se HC1 6N (2,8 ml) à reacção fria, tudo de uma vez, e a mistura foi deixada aquecer até 25°c. A mistura foi diluída com H20 (25 ml) e foi extraída com EtOAc (3 x 100 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com HO (25 ml) e salmoura (25 ml), foram secas sobre £»

Na2S04, filtradas e concentradas até à secura in vacuo. A trituração com éter produziu o composto do título (4,17 gm, 93% de rendimento) sob a forma de um sólido cristalino (p.f. 199-202 °C). CCF: Rf = 0,69, Sílica GF (Et20 a 7% em CH2C12) RMP: Compatível com a estrutura (lS)-l'-( ((2-endo-aminoetil-7,7-dimetil-2-exo-hidroxibiciclo--(2.2.1)-hept-l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina)_

Sob um cobertor de azoto, Hidreto de Alumínio e Lítio (8,0 ml, 8,0 mmoles, de uma solução de THF 1,0 M) foi arrefecido até 0°C, e foi tratado gota a gota com uma solução de THF (37 ml) de (lS)-l'-(((2-endo-cianometil-7,7-dimetil-2-hidroxibiciclo-(2.-2.1)-hept-l-il)metil)-sulfonil)espiro(ΙΗ-indeno-l,4'-piperidina) (4,4 gm, 10,0 mmoles) e a reacção foi agitada durante 10 minutos. Com agitação rápida, a reacção foi tratada com H20 (0,37 ml), NaOH a 20% (aq) (0,40 ml) e H20 (1,46 ml), seguida de extracção com EtOAc (3 x 150 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, foram lavadas com H20 (25 ml) e salmoura (25 ml) , foram secas sobre Na2SO^, foram filtradas e concentradas até à secura in vacuo. A cromatografia flash sobre sílica gel (90//10/1/1 de CH2Cl2/Me0H/H20/H0Ac) proporcionou fracções de produto que foram reunidas e concentradas até à secura. O resíduo foi tratado com Na2C03 saturado (aq) e foi extraído com EtOAc (3 x 100 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, foram lavadas com H20 (25 ml) e salmoura (25 ml), foram secas sobre Na2SO^, foram filtradas e concentradas até à secura para se proporcionar o composto do título (2,55 gm, rendimento de 57%) sob a forma de uma espuma branca/sólido. CCF: Rf = 0,27 Sílica GF (90/10/1/1 de CH2Cl2/Me0H/H20/H0Ac) RMP: Compatível com a estrutura (IS)—1' -(((2-endo-aminometil-7,7-dimetil-2-exo-hidroxi-biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)metil)-sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'--piperidina) (60 mg, 0,135 mmole) foi dissolvida em CH2C12 (1 ml), foi tratada com cloreto de 4-iodobenzoilo (36,0 mg, 0,135 mmole) e com Et3N para ajustar o pH para 9,5. A reacção foi agitada durante 30 minutos a 25°C e submeteu-se a cromatografia "flash" sobre sílica gel (Et20 a 8% em CH2C12) para se proporcionar o composto do título (45 mg, rendimento de 50%) sob a forma de uma espuma branca a partir de Et20 (p.f. 98-138°C, diminui de volume). CCF: Rf - 0,35 Sílica GF (Et20 a 10% em CH2C12) RMP: Compatível com a estrutura CLAR: 95,8% puro E.M.: (FAB) Μ + H + Tioglicerol = 783

Análise Calculada para c32H3gIN2O4Sâ0,30 C4H10O; â0,35 H20: Calculado: C, 56,70; H, 6,12; N, 3,98;

Encontrado: C, 56,73; H, 6,11; N, 4,01. EXEMPLO 48

(lS-exo-N- [ 2 - [ 2 -hidróxi-7,7-dimetil-1- [ (espiro [ lH-indeno-1,4' -pi-peridin]-1'-ilsulfonil)metil]biciclo[2.2.l]hept-2-il]etil]-ciclo-propanocarboxairdda_ 0 composto do título foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 47, excepto que o cloreto de 4-iodobenzoilo foi substituído por cloreto de ciclopropilcarbonilo (12,4 ml, 0,135 mmole). A cromatofrafia "Flash" da mistura de reacção sobre sílica gel (Et2<0 a 15% em CH2C12) produziu o composto do título (36,6 mg, rendimento a 53%), sob a forma de uma espuma branca a partir de éter (p.f. 93-105°C, com retraimento + formação de espuma). CCF: Rf = 0,22 Sílica GF (Et20 a 15% em CH2C12) KMP: Compatível com a estrutura CLAR: 96,8% puro E.M.: (FAB) Μ + H + Tioglicerol = 621

Análise Calculada para C-_H.nN_O.Sâ0,20 C.H1ftO: 29 40 2 4 4 10

Calculado: C, 67,84; H, 8,03; N, 5,31;

Encontrado: C, 67,69; H, 8,06; N, 5,06. EXEMPLO 49

O (lS-exo-N-[2-[2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-indeno-1,4'-pi-peridin[-1'-ilsulfonil(metil]biciclo[2.2.1]hept-2-il]etil]-2,2--dimetil-oropanamida_ O composto do título foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 47, excepto que o cloreto de 4-iodobenzoilo foi substituído por cloreto de acetilo (16,6 ml, 0,135 mmole). A cromatofrafia "Flash" da mistura de reacção sobre sílica gel (Et20 a 13% em CH2C12) produziu o composto do título (32,8 mg, rendimento de 46%), sob a forma de uma espuma branca a partir de Et20 (p.f. 78-104°C, com retraimento + formação de espuma). CCF: Rf = 0,29 Sílica GF (Et20 a 15% em CH2C12) RMP: Compatível com a estrutura CLAR: 97,6% puro E.M.: (FAB) Μ + H + Tioglicerol = 637

Análise Calculada para C3oH44N2°4Sâ0/2° C4H10OâO,30 H20: Calculado: C, 67,38; H, 8,56; N, 5,10;

Encontrado: C, 67,37; H, 8,52; N, 5,02. EXEMPLO 50

O (lS-exo-N-[2-[2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-indeno-1,4'-pi-peridin]-1'-ilsulfonil)metil]biciclo[2.2.l]hept-2-il]etil]-4-me-tôxi-benzamida_ O composto do título foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 47, excepto que o cloreto de 4-iodobenzoilo foi substituído por cloreto de 4-nitrobenzoilo (25,1 ml, 0,135 mmole). A cromatofrafia "Flash" da mistura de reacção sobre sílica gel (Et20 a 10% em CH2C12) produziu o composto do título -133- -133-

(41/6 mg, rendimento de 52%), sob a forma de uma espuma branca a partir de Et20 (p.f. 118-33°C, com retraimento + formação de espuma). CCF: Rf = 0,26 Sílica GF (Et20 a 10% em CH2C12) RMP: Compatível com a estrutura CLAR: 97,1% puro E.M.: (FAB) Μ + H + Tioglicerol = 702

Análise Calculada para C32H3gN3OgSâ0,30 C4H1()OâO,20 H20: Calculado: C, 64,35; H, 6,90; N, 6,78;

Encontrado: C, 64,32; H, 6,98; N, 6,63. EXEMPLO 51

(lS-exo-N-[2-[2-hidróxi-7,7-dimetil-l-[(espiro[lH-indeno-1,4'-pi-peridin]-1'-ilsulfonil)metil]etil]biciclo[2.2.1]hept-2-il]etil]--4-metóxi-benzamida_ 0 composto do título foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 47, excepto que o cloreto de 4-iodobenzoilo -134-

foi substituído por cloreto de 4-anisoilo (18,3 ml, 0,135 mmole). A cromatofrafia "Flash" da mistura de reacção sobre sílica gel (Et20 a 15% em CH2C12) produziu o composto do título (36 mg, rendimento de 46%), sob a forma de um sólido branco a partir de Et20 (p.f. 98-121°C, com retraimento).

I CCF: Rf = 0,26 Sílica GF (Et20 a 15% em CH2C12) RMP: Compatível com a estrutura CLAR: 95,5% > Ε.Μ.Ϊ (FAB) Μ + H + Tioglicerol = 687 Análise Calculada para C33H42N2°5S^0'25 C^H^qO: Calculado: C, 68,36; H, 7,51; N, 4,69;

Encontrado: C, 68,14; H, 7,67; N, 4,55. EXEMPLO 52

-135- -135-

(lS-exo)-1,“[[[2-[2-[[[(1,1-dimetiletil)amino]carbonil]amino]e-til]-2-hidróxi-7,7-dimetilbiciclo[2.2.l]hept-l-il]metil]sulfo-nillespiro ΓlH-indeno-1,4'-piperidinal_ (lS)-l'-[[ [endo-aminoetil-7,7-dimetil-exohidroxibici-clo(2.2.1)-hept-l-il]metil]sulfonil]espiro(lH-indeno-1,4'-piperi-dina) (60 mg, 0,135 mmoles) foi dissolvida em THF (2 ml), foi tratada com isocianato de t-butilo (15,4 ml, 0,135 mmole) e foi agitada durante 30 minutos a 25°C.

Apôs remoção do solvente in vacuo. o resíduo foi submetido a cromatografia "flash" sobre sílica gel (Et2<0 a 25% em CH2C12), para produzir o composto do título (27,9 mg, rendimento de 38%) sob a forma de um sólido branco a partir de Et20 (p.f. 97-119°C, com retracção e formação de espuma). CCF: Rf = 0,21 sílica GF (Et20 a 20% em CH2C12) RMP: Compatível com a estrutura CLAR: 95,1% E.M.: (FAB) Μ + H + Tioglicerol = 652

Análise Calculada para C^QH^N^O^SâO,25 C^H^QOâ0,30 H20: Calculado: C, 65,58; H, 8,54; N, 7,40;

Encontrado: C, 65,70; H, 8,74; N, 7,05. EXEMPLO 53

A uma solução agitada de 10 ml de Ν,Ν-dimetilformamida seca que contém o ácido (IS)-l,-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.-2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)-espiro(lH-indano-1,4'-piperidina) (670 mg, 1,66 mmoles) e Na-tert-butiloxicarbonil-5,5-dimetil-L--tiazolidina-4-carboxílico (500 mg, 1,91 mmoles) adicionaram-se 932 mg (2,11 mmoles) de hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitris(dimetilamino)fosfónio. O pH da mistura de reacção foi ajustado para 8,5 com diisopropiletilamina e a mistura de reacção foi agitada a 23°C durante a noite. A mistura de reacção foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e esta solução foi lavada sucessivamente com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (3 x 25 ml) e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada para produzir um sólido castanho que foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (clorofórmio-metanol-eluição de hidróxido de amónio concentrado, 98:2:0,2 v/v), para produzir um sõlido branco. Este material foi dissolvido em 10 ml de clorofórmio. A solução foi arrefecida num banho de gelo e foi tratada gota a gota com uma solução de 5 ml de clorofórmio que continha 2,2 equivalentes de ácido m-cloroperóxi-benzóico. Depois da adição estar concluída, o banho de gelo foi removido e a agitação continuou durante 24 horas. A mistura de reacção foi diluída com 100 ml de clorofórmio e foi lavada com uma solução de hidróxido de sódio 1M (2 x 30 ml) e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e foi concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (clorofórmio-metanol-eluição de hidróxido de amónio concentrado, 98:2:0,2 v/v) para produzir o composto do título: RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença de solvente; CLAR: 94% puro a 214 nM; FAB EM: 678 (M+ + H)

Análise Calculada para c34H5iN3°7S2·0,8 CHC13:

Calculado: C, 54,04; H, 6,75; N, 5,43;

Encontrado: C, 54,11; H, 6,64; N, 5,48. EXEMPLO 54

Endo(IS)-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-1--il)metil) sulfonil) espiro (lH-indano-1,4'-piperidina) (600 mg, 2,05 mmoles) e o ácido (S)-3-[(tert-butiloxicarbonil)amino]-2--oxo-l-pirrolidina-(R)-2-metilcarboxissuccínico (826,5 mg, 2,05 mmoles) foram combinados com 392 mg (2,05 mmoles) de cloridrato de carbodiimida de l-etil-3-(3-dimetilaminopropilo) e com 275 mg (2,05 mmoles) de hidrato de 1-hidroxibenzotriazole em 20 ml de cloreto de metileno seco à temperatura ambiente sob azoto. 0 pH da mistura de reacção foi ajustado para 8,5 com trietilamina e a solução resultante foi agitada durante 12 horas. A mistura de reacção foi diluída com cloreto de metileno (150 ml) e a solução resultante foi lavada com uma solução de bicarbonato de sódio saturada (2 x 40 ml) , com uma solução de ácido cítrico a 10% (2 x 40 ml) e com salmoura e depois foi seca (sulfato de magnésio) e foi concentrada para produzir o produto em bruto. O material analiticamente puro foi obtido por meio de cromatografia de CLAR preparativa, empregando-se uma coluna de Vydac C-18 (4,5 x 150 -139- -139-

mm, água-acetonitrilo-ácido trifluoroacético a 1%, gradiente de 45 minutos). As fracções homogéneas que contêm o produto foram reunidas e concentradas. O resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno que contém ácido trifluoroacético (50%) à temperatura ambiente. Ao fim de 2 horas, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para se produzir o composto do título sob a forma de um sal trifluoroacetato: RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença de solvente; CLAR: 97% puro a 214 nM; FAB EM: 615 (M+ + H)

Análise Calculada para C34H47F3N4OgS·0,3 H2O*0,8TFA: Calculado: C, 51,59; H, 5,88; N, 6,74;

Encontrado: C, 51,59; H, 5,89; N, 6,81, EXEMPLO 55

-140-

Endo-(is)-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbÍGiclo(2.2.1)hept--l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indano-1,4'-piperidina) (216 mg, 0,53 mmole) e Na-tert-butiloxicarbonil-D, L- (3-tienil)alanina (160 mg, 0,59 mmole) foram combinados com 113 mg (0,59 mmole) de cloridrato de carbodiimida de l-etil-3-(3-dimetilaminopropilo) e com 79 mg (0,59 mmole) de 1-hidroxibenzotriazole em 6 ml de cloreto de metileno seco à temperatura ambiente sob azoto. 0 pH da mistura de reacção foi ajustado para 9 com trietilamina e a solução resultante foi agitada durante 12 horas. Adicionaram-se mais 20 mg de tert-butiloxicarbonil-D,L-(3-tienil)alanina, 11 mg de cloridrato de l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida e a agitação foi mantida durante mais 6 horas para manter o pH do meio entre 8 e 9. A mistura de reacção foi diluída com cloreto de metileno (150 ml) e a solução resultante foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sõdio (2 x 40 ml), solução de ácido cítrico a 10% (2 x 40 ml) e salmoura, foi seca (sulfato de magnésio) e concentrada para produzir o produto em bruto. 0 material analiticamente puro foi obtido por meio de cromatografia de coluna •'flash" sobre sílica gel (eluição de clorofórmio-metanol-hidróxido de amónio concentrado, 95:5:0,5 v/v) : EMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença de solvente; CLAR: 99% puro a 214 nM; FAB EM: 656 (M+ + H)

Análise Calculada para C35H49N305S2·0,5 H20:

Calculado: C, 63,22; H, 7,58; N, 6,32;

Encontrado: C, 63,26; H, 7,54; N, 6,10. EXEMPLO 56

Endo-(IS)-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept--l-il)metil)sulfonil) espiro (lH-indano-1,4 '-piperidina) (67 mg, 0,156 mmole) e o ácido N-etil-carboximetil-5,5-dimetil-L-tiazoli-dina-4-icarboxílico (57 mg, 0,23 mmole) foram combinados com 44 mg (0,23 mmole) de cloridrato de carbodiimida de l-etil-3-(3-dimetil-aminopropilo) e com 31 mg (0,23 mmole) de hidrato de 1-hidroxiben-zotriazole em 5 ml de cloreto de metileno seco, à temperatura ambiente sob azoto. O pH da mistura de reacção foi ajustado para 8,5 com trietilamina e a solução resultante foi agitada durante 3 horas. A mistura de reacção foi diluída com cloreto de metileno (50 ml) e a solução resultante foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 40 ml) , solução de ácido cítrico a 10% (2 x 40 ml) e salmoura, foi seca (sulfato de magnésio) e concentrada para produzir o produto em bruto, o material analiticamente puro foi obtido por meio de cromatografia de camada-fina preparativa (2 x 20 x 20 mm, placas pré-revestidas de Si02, -142- -142-

eluição de hexano-acetato de etilo, 2:1 v/v). 0 produto analíti co foi isolado na forma homogénea como um sólido: RMN: Compatível com a estrutura e confirma a presença de solvente; FAB EM: 660 (M+ + H)

Análise Calculada para C34H47N30gS2·0,85 H2O*0,lEtOAc:

Calculado: C, 60,40; H, 7,59; N, 6,14;

Encontrado: C, 60,37; H, 7,36; N, 6,13. EXEMPLO 57

A uma solução agitada de 50 ml de N,N-dimetilformamida seca que contém endo-(IS)-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo-(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indano-1,4'-piperidina) (4,0 g, 9,9 mmoles) e Να-tert-butoxicarbonil-L-metioninasulfona -(2,84 g, 11,9 mmoles) adicionaram-se 5,65 g (12,87 mmoles) de hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris:(dimetilamino) fosfó-nio. O pH da mistura de reacção foi ajustado para 8,5 com diisopropiletilamina e a mistura de reacção foi agitada a 23°C durante 2 horas. A mistura de reacção foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir um sólido. Este material foi dissolvido em acetato de etilo e esta solução foi lavada sucessivamente com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (3 x 25 ml), com uma solução de ácido cítrico a 10% (3 x 25 ml) e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada para produzir 2-tert-butiloxicarbonilamino-N-[l-[[(2,3-dihidroes-piro[lH-indeno-1,4'-piperidin]-1'-il)sulfonil]metil]-7,7-dimetil-biciclo[2.2.1]hept-2-il]-4-(metilsulfonil)-butanamida que foi purificada por cromatografia sobre sílica gel (eluição de clorofórmio-metanol-hidróxido de amónio concentrado, 95:5:0,5 v/v) para produzir um sólido. Este material foi dissolvido em 50 ml de acetato de etilo e a solução resultante foi arrefecida até 0°C e foi tratada com uma corrente contínua de gás cloreto de hidrogénio durante 15 minutos. 0 banho de gelo foi removido, o recipiente da reacção foi tapado e a agitação foi mantida durante mais 45 minutos à temperatura ambiente. 0 solvente e o excesso de cloreto de hidrogénio foram removidos sob pressão reduzida para se produzir o cloridrato de 2-amino-N-[l-[[(2,3-dihidroespi-ro[lH-indeno-l,4'-piperidin]-1'-il)sulfonil]metil]-7,7-dimetilbi-ciclo[2.2.1]hept-2-il]-4-(metilsulfonil)-butanamida sob a forma de um sólido quase branco (6,5 g).

ο para Ο cloridrato de 2-amino-N-[l-[[(2,3-dihidroespiro[lH--indeno-1,4'-piperidin]-l'-il)sulfonil]metil]-7,7-dimetilbi-ciclo[2.2.l]hept-2-il]-4-(metilsulfonil)-butanamida foi cromato-grafado sobre sílica gel (eluição de clorofórmio-metanol-hidróxi-do de amónio concentrado, 90:10:1 v/v) para produzir um sólido branco que foi dissolvido em 15 ml de metanol que contém ácido acético a 1%. A esta mistura de reacção adicionaram-se 3 ml de uma solução aquosa de formaldeído e 1,56 g (24,8 mmoles) de cianoboroidreto de sódio. A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reacção foi concentrada no vácuo e o resíduo foi dividido entre acetato de etilo e uma solução saturada de bicarbonato de sódio. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com salmoura, foi seca (sulfato de sódio) e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (eluição de clorofórmio-metanol-hidróxido de amónio concentrado, 95:5:0,5 v/v) para produzir: -145- -145-

2-dimetilamino-N-[1-[[(2,3-dihidroespiro[lH-indeno-1,4'-piperi-din]-l'-il)sulfonil]metil]-7,7-dimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il]-4--(metilsulfonil)-butanamida: RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença de solvente; CLAR: 98% puro a 214 nM; FAB EM: 594 (M+ + H)

Análise Calculada para ConH._No0_Sn*0.1 CHCl,: c 30 47 3 5 2 3

Calculado: C, 59,67; H, 7,84; N, 6,94;

Encontrado: C, 59,90; H, 7,24; N, 6,93. EXEMPLO 58

A uma solução agitada de (IS)-l'-(((2-exo-hidrôxi-2-en-do-aminometil-7,7-dimetilbiciclo (2.2.1) hept-l-il) metil) sulfonil) -espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina) (300 mg, 0,694 mmoles) em 10 ml -146-

de Ν,Ν-dimetilformamida desgaseifiçada adicionaram-se Na-tert-buti-loxicarbonil-S-metil-L-cisteína (212 mg, 0,832 mmoles) e 398 mg (0,902 mmoles) de hexafluorofosfato de tris(dimetilamino)fosfónio de benzotriazol-l-ilóxi (BOP) à temperatura ambiente. A mistura de reacção resultante foi protegida da humidade e o pH foi ajustado para 8-9 com diisopropiletilamina. Ao fim de 24 horas, todos os componentes voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre acetato de etilo e uma solução de bicarbonato de sódio. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de k sódio (3 x 40 ml) e salmoura, foram secas (sulfato de magnésio) e " concentradas. 0 produto em bruto foi cromatografado sobre sílica gel (eluição de hexano-acetato de etilo, 3:1 v/v) para produzir o composto do título: RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença de solvente; CLAR: 98% puro a 214 nM; FAB EM: 650 (M+ + H)

Análise Calculada para C_oH,_nNo0-S-: JJ DU j Ο δ

Calculado: C, 61,07; H, 7,71; N, 6,47;

Encontrado: C, 61,24; H, 7,98; N, 6,13. EXEMPLO 59

A uma solução agitada de (IS)-1'-(((2-exo-hidróxi-2-en-do-aminometil-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)-espiro(lH-indeno-l,4'-piperidina) (125 mg, 0,311 mmoles) em 7 ml de Ν,Ν-dimetilformamida seca e desgaseifiçada adicionaram-se ácido S-hidantoinaacético (59 mg, 0,372 mmole) e 178 mg (0,404 mmole) de hexafluorofosfato de tris(dimetilamino)fosfónio de benzotriazol-l-ilóxi (BOP) à temperatura ambiente. A mistura de reacção resultante foi protegida da humidade e o pH foi ajustado para 8-9 com diisopropiletilamina. Ao fim de 24 horas, todos os componentes voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre acetato de etilo (100 ml) e uma solução de bicarbonato de sódio. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (3 x 40 ml) e salmoura, foram secas (sulfato de magnésio) e concentradas, o produto em bruto foi cromatografado sobre sílica gel (eluição de clorofórmio-metananol, 96:4 v/v) para produzir o material semi-puro, a partir do qual o composto do S -148-

título foi obtido sob a forma de um sólido branco após cromato-grafia de camada fina sobre sílica gel (eluição de clorofórmio-metanol-hidróxido de amónio concentrado, 96:4:0,4, v/v) e trituração com éter-éter de petróleo: solven RMN: Compatível com a estrutura e verifica a presença de

te; FAB EM: 534 (M+ + Análise Calculada Calculado: C,

Encontrado: C, H) para C28H48H405S: 61,96; H, 7,00; N, 61,70; H, 7,36; N, 10,32; 10,09. -149-

EXEMPLO 60

(IS)-l'-(((7,7-dimetil-2-endo-(4-nitrofeniloxicarbonilamino)-bi-ciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indan-1,4'-pi-peridina_ (IS)-l'-(((7,7-dimetil-2-endoamino)-biciclo-(2.2.1)--hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4-piperidina (3,47 mmoles) e cloroformato de 4-nitrofenilo (3,64 mmoles) foram combinados em THF. A mistura de reacção foi tratada com trietil-amina (4,54 mmoles) e foi deixada agitar durante 3 horas. A mistura de reacção foi concentrada até à secura e o resíduo v. resultante foi purificado por meio de uma coluna de sílica gel,

ao mesmo tempo que se eluiu com acetato de etilo a· 1% em cloreto de metileno. As fracções de produto foram combinadas e concentradas até à secura in vacuo. (lS)-l'-(((7,7-dimetil-(4-nitrofe-niloxicarbonilamino-2-endoamino)-biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-me-til)sulfonil)espiro(lH-indeno-1,4'-piperidina foi obtida sob a forma de um sólido branco a partir de éter. (IS)—1/—(((7,7-dimetil-2-endo-(4-nitrofeniloxicarbonil-amino)-biciclo-(2.2.1)-hept-l-il)-metil)sulfonil)espiro(lH-inde-no-1,4'-piperidina (0,278 mmoles) e o ácido (benziloxicarbonil)pi-perázico (0,334 mmoles) foram combinados em DMF. A mistura de reacção foi tratada com trietilamina (0,401 mmole) e foi deixada em agitação durante 2 horas. A mistura de reacção foi concentrada até à secura e o resíduo resultante foi dissolvido em CH2C12· Esta solução foi colocada sobre uma coluna de sílica gel e foi eluída com metanol a 5% em CH2C12 e depois com 96/4/0,4 de CH2Cl2/metanol/ácido acético. As fracções de produto foram combinadas e evaporadas até à secura. O composto do título foi obtido sob a forma de um sólido branco a partir de éter e foi seco in vacuo durante a noite. p.f.: RMN: CLAR: EM: CHN:

90-120eC

Compatível com a estrutura > 98% puro M ->H+=693,6

Calculado para C37H4gN407S♦0,20 mole C4H10°*0,25 mole H20; C-63,74; H-7,15; N-7,87.

Encontrado: C-63,78; H-7,08; N-7,81. i EXEMPLO 61

0 processo do Exemplo 60, segundo parágrafo, foi efectuado por utilização de (lS)-l'-(((7,7-dimetil-2-endo-(4-ni-trofeniloxicarbonilamino)biciclo(2.2.1) -hept-l-il)metil)sulfo-nil)espiro(lH-indan-1,4'-piperidina) (0,193 mmole), trietilamina (0,290 mmole) e substituindo o ácido (benzilôxicarbonil)piperázi-co por 3-(t-butoxicarbonilaminometil)piperidina (0,212 mmole). A eluição cromatogrãfica foi efectuada com éter a 5% em CH2C12, com éter a 10% em CH2C12, e depois com metanol em CH2Cl2. O composto do título foi obtido a partir de éter e foi seco in vacuo. durante a noite. C -152-

p.f.: 95-105°C RMN: compatível com a estrutura CLAR: > 97% puro EM: M+H+=643,4 CHN: Calculado para C^H^N^gS·©/20 H20 C—65,02; H-8/48; N-8,67.

Encontrado; C-64,98; H-8/43; N-8/86. EXEMPLO 62

Endo- (IS) -1'- (((2- (L-4 (tert/butoxicarbonilamino) glutaramil) amino--7/7-dimetilbiciclo(2.2.l)hept-l-il)metil)sulfonil)espiro-(1H)--indan-1,4'-pjperidina_

o

Num frasco seco num forno (50 ml) sob azoto dissolveu--se endo-(IS)-1'-(((2-amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)me-til)sulfonil)espiro-(1H)-indan-1,4'-piperidina (50 mg, 0,125 mmole) , ácido L-4(tert-butoxicarbonil)glutarâmico (34 mg, 0,14 mmole), cloridrato de l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (30 mg, 0,15 mmole) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazole (20 mg, 0,15 mmole) em dimetil formamida (l ml). Adicionou-se a trietil-amina (50 μΐ) e separou-se um sólido branco. Após agitação durante 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em éterrcloreto de metileno (3:1). A solução turva foi lavada com bicarbonato de sódio (sat., aquoso), água, hidrogeno sulfato de potássio (10%, aquoso) e salmoura. Após secagem sobre sulfato de sódio, o material orgânico foi filtrado e concentrado. A cromatografia "flash” de sílica por utilização de cloreto de metileno:metanol (9:1) produziu o produto que foi isolado como um óleo após evaporação dos solventes. A adição de hexano:éter e a remoção sob pressão reduzida produziu o composto do título sob a forma de uma espuma branca. CLAR: > 99% puro EM: M+H+=631,3 RMN: Compatível com a estrutura

Análise para C33H5oN4°6S’0'5 H20

Calculado C-61,26; H-8,12; N-9,32.

Encontrado C-61,27; H-8,05; N-9,31. EXEMPLO 63

Cloridrato de Endo-(IS)-l'-(((2-(4(imidazole-2-etilacetil)amino--7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)espiro-(1H)-indan-1,4'--pjperidina___________

Etapa 1: Endo-(13)-3/-(((2-(4(3-metilbenziloxi)imidazole)-2[etil acetil)amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)-sulfonil)espiro-(1H3-indan-1,4'-pjperidina_

Colocou-se dimetilformamida (4 ml) num frasco seco num forno (50 ml), sob azoto,. Adicionaram-se-lhe Endo(lS)-l'-((2--amino-7,7-dimetilbiciclo(2.2.1)hept-l-il)metil)sulfonil)espiro-(lH)-indan-(l,4')-piperidina (300 mg, 0,74 mmoles), ácido 4(3-me-tilbenzilóxi)imidazole-2-etilacético (219 mg, 0,8 mmole), cloridrato de l-etil-3-metil-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (153 mg, 0,8 mmole) e hidrato de 1-hidroxibenztriazole (108 mg, 0,83 mmole) e a mistura foi agitada até se obter uma solução. Adicionou-se trietilamina (400 μΐ) para tornar a solução básica (pH 9) e separou-se um sólido. Após agitação durante a noite à temperatura ambiente, removeu-se o solvente sob pressão reduzida. A goma resultante foi dissolvida em cloreto de metileno:éter (1:3) e a solução turva foi extraída com bicarbonato de sódio (saturado, aquoso) e salmoura. Após secagem das camadas orgânicas sobre sulfato de sódio, a solução foi filtrada e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia "flash’' em sílica gel por utilização de cloreto de metileno, metanol, hidróxido de amónio (9:1:1) como solventes. As fracções de produto foram concentradas para se proporcionar o composto do título sob a forma de uma espuma branca. CLAR: >95% (42% + 53%) EM: M+H+ = 659,3 RMN (CDC13) compatível com a estrutura

Análise para CooH,_nN.0.S*0,65 H_0 e 38 50 4 4 ' 2

Calculado C-68,05; H-7,71; N-8,36.

Encontrado C-68,03; H-7,87; N-8,60. o azoto foi borbulhado numa solução de Endo(lS)-l'-(((2--4-(3-metilbenzolóxiimidazole)-2-etilacetilamino-7,7-dimetilbici-clo (2.2.1) hept-l-il) -metil) sulf onil) espiro- (1H) -indan- (lm4') piperi-dina (50 mg, 0,076 mmole) em etanol absoluto (20 ml) - ácido acético (5 ml). Após 5 minutos, adicionaram-se Pd a 10%/C (50 mg) e a mistura foi hidrogenada a 55 psi durante a noite. 0 catalisador foi removido por filtração e os solventes foram concentrados até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel por utilização de cloreto de metileno, metanol e hidróxido de amónio (9:1:1) como solvente. As fracções de produto foram recolhidas e 156- 156-

concentradas. A goma foi redissolvida em cloreto de metileno e foi filtrada através de um funil sinterizado. Depois da solução ter sido concentrada, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (5 ml). A solução foi arrefecida até 0°C e foi saturada com gás cloreto de hidrogénio (borbulhou-se durante 5 minutos). o solvente foi removido sob pressão reduzida, adicionou-se éter e este foi depois removido para proporcionar o composto do título sob a forma de um sólido branco. CLAR: >90% (42% + 45%) EM: M+H+ = 539,2 (base livre) RMN (CDC13) compatível com a estrutura Análise para C30H42N4O3S*HCl*0,25 éter*130H20 Calculado C-60,33; H-7,86; N-9,08.

Encontrado C-60,33; H-7,48; N-9,04.

157-

EXEMPLO 64

So2CH3 A uma solução agitada do produto do Exemplo A (500 mg, 1,24 mmoles) em DMF (10 ml) adicionou-se o sal de HC1 do ácido 2-(l-benziloximetilimidazolin-5-il)-4-metilsulfonilbutanóico (506 mg; 1,30 mmoles), DIEA (0,70 ml; 4,0 mmoles) e BOP (600 mg; 1,35 mmoles). Depois de se ter agitado à temperatura ambiente durante 14 horas, o solvente foi removido sob pressão reduzido. 0 residuo foi dissolvido em EtOAc (75 ml) e foi lavado com NaHCC>3 aquoso (3 x 50 ml) . A fase orgânica foi seca (MgSO^), foi filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O grupo -158- -158-

de protecção de benziloximetilo foi removido por dissolução do resíduo numa solução de 4:1 de EtOH-HOAc (10 ml) e por hidrogena-ção sobre negro de paládio (75 mg), sob 1 atm de hidrogénio durante 24 horas. o catalisador foi removido por filtração através de Celite e os solventes filtrados foram removidos sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel por utilização de uma mistura em volume de 50:50:7 de CHC13, EtOAc e NH^OH a 4%-MeOH, como eluente. Obtiveram-se dois diastereómeros e cada um foi liofilizado a partir de água que contém TFA a 1%. O composto do título é o isómero Rf inferior.

Isômero Rf superior

Análise para (c31H44N405S2)-lf0 TFA*1,1H2<>

Calculado C-52,45; H-6,24; N-7,37.

Encontrado C-52,69; H-6,12; N-7,32. CCF: Rf 0,33 (50:50:7 CHC13:EtOAc:4%NH4OH-MeOH) CLAP (método A): tempo retenção 8,96 min FAB EM: m/z 617 (M+ + H) 1H RMN (300 MH ,CDC1_): base livre: d 7,70 (s, 1H), 7,55 (br d, 1H), 7,15-7,25 (m, 4H), 7,00 (s, 1H), 4,35 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 1,00 (S, 3H), 0,98 (s, 3H)

Isómero Rf inferior

Análise para (C31H44N405S2)·1,0 TFA‘1,3H20 Calculado C-52,55; H-6,36; N-7,43.

Encontrado C-52,89; H-6,13; N-7,43. CCF: Rf 0,28 (50:50:7 CHCl3:EtOAc:4%NH4OH-MeOH) CLAP (método A): tempo retenção 9,15 min FAB EM: m/z 617 (M+ + H) -159-

RMN (300 ΜΗζ, CDC13): base livre: d 7,72 (s, 1H) , 7,34 (br d, 1H), 7,15-7,25 (m, 4H), 6,98 (s, 1H), 4,35 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,96 (S, 3H). EXEMPLO 65

A uma solução agitada a 0°C do produto do Exemplo A (1,10 g; 2,74 mmoles) em CHCl^ (100 ml) adicionaram-se DIEA (0,75 ml, 4,3 mmoles) e cloroformato de benzilo (0,51 g; 3,0 mmoles). A solução foi agitada a 0°C durante 1 hora e depois à temperatura -160- -160- ft ambiente durante 14 horas. A mistura de reacção foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em 25 ml de uma solução de 10:1 de MeOH-NH^OH. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em CHC13 (100 ml) e foi lavado com HCl aquoso a 5% (2 x 50 ml) e NaHCC>3 (100 ml) . A fase orgânica foi seca (MgS04), filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato-grafia de coluna em sílica gel pressurizada, por utilização de 1:4 de EtOAc-hexanos sob a forma de uma espuma branca. CCF: Rf 0,40 (1:3 EtOAc:hexanos) CLAR (método A): tempo de retenção de 12,25 min FAB EM: m/z 537 (M+ + H) A uma solução agitada a 0°C do uretano de benzilo (1,25 g; 2,33 mmoles) em DMF (20 ml) adicionaram-se iodometano (0,435 ml; 7,00 mmoles) e hidreto de sódio (0,140 mg de uma dispersão a 60% em óleo mineral; 3,50 mmoles). A solução foi agitada a 0°C durante 1 hora e depois à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi tratada com HOAc (1 ml) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 ml) e foi lavado com NaHC03 aquoso (2 x 50 ml). A fase orgânica foi seca (MgS04), foi filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel pressurizada por utilização de 1:5 de EtOAc-hexanos como eluente. O uretano de benzilo de N-metilo foi obtido sob a forma de uma espuma branca. CCF: Rf 0,34 (1:4 EtOAc:hexanos) CLAR (método A): tempo de retenção de 12,71 min FAB EM: m/z 551 (M+ + H) A uma solução agitada, purgada de árgon, de uretano de

benzilo de N-metilo (1,00 g; 1,82 mmoles) em 96:4 de MeOH-HCO H 6

(25 ml) adicionou-se negro de paládio (0,37 g) . A mistura de reacção foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e os solventes filtrados foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel pressurizada, por utilização de 95:5:0,5 de CHCl^:MeOH:NH^OH, como eluente. 0 produto de endo-amina de N-metilo foi obtido sob a forma de uma espuma branca. CCF: Rf 0,35 (92:8:0,8 CHC13:MeOH:NH4OH) CLAR (método A): tempo de retenção de 7,88 min FAB EM: m/z 417 (M+ + H) A uma solução agitada da endo-amina de N-metilo (0,650 g; 1,56 mmoles) em CHC13 (50 ml) adicionaram-se fluoreto ácido de sulfona de Na-Boc-L-metionina (510 mg; 1,80 mmoles) e DIEA (0,35 ml; 2,0 mmoles). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas e depois foi extraída com uma solução de ácido cítrico aquosa a 10% (2 x 30 ml), água (30 ml) e NaHC03 (2 x 30 ml) . A fase orgânica foi seca (MgS04), foi filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em CH2C12 (10 ml) e adicionou-se à solução TFA (6 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por CLAR de fase invertida preparativa, por utilização de um gradiente de água-acetonitrilo que contém TFA a 0,1%. 0 sal de TFA do composto do título foi obtido sob a forma de um pó liofili-zado.

Análise para (C2gH45N305S2)·0,4 TFA*0,5 EtOAc calculado C-57,04; H-7,44; N-6,28.

Encontrado C-52,04; H-7,55; N-6,28. CCF: Rf 0/18 (95:5:0,5 CHC13:MeOH:NH4OH) CLAR (método A): tempo retenção 9,80 min FAB EM: m/z 580 (M+ + H) 1H RMN (300 MHz, CDC13): d 7,15-7,25 (m, 4H), 5,20 (m, 2H), 3,17 (S, 3H), 2,92 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,96 (s, 3H). EXEMPLO 66 A uma solução agitada de endo-(lS)-1'(((2-amino-7,7-di-metilbiciclo(2,2.1)-hept-l-il)metil)sulfonil)espiro(lH-indan--l,4'-piperidina (94 mg; 0,17 mmole) em etanol (20 ml), adicionou-se N-(3-bromopropil)ftalimida (69 mg; 0,255 mmole), seguida por diisopropileyil amina (0,044 ml; 0,255 mmole). A temperatura foi então aumentada até 50°C. Após aproximadamente 18 horas, a solução foi arrefecida e depois foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno (150 ml), foi lavado com HC1 1M (2 x 150 ml), e depois foi seco sobre sulfato de sódio e foi concentrado. A purificação por cromato-grafia "flash" (metanol a 5% em cloreto de metileno) produziu o composto do título (45 mg; 40%) sob a forma de um sólido branco.

Análise para (C3gH5()N406S) *0,10 H20*0,15 CH2C12 Calculado C-65,54; H-7,10; N-7,81.

Encontrado C-65,52; H-7,09; N-7,71. CLAR: (Coluna Vydac C18; gradiente de 95/5 a /100 de H20/CH3CN com 0,1% de TFA. 15 min. gradiente, caudal = 1,5 ml/min.) -163-

.·<

Rt = 13,81 min. Pureza = 100% n HRMN: Compatível com a estrutura FAB EM: m/z 703 (M+ + H)

Para além dos compostos especificamente exemplificados aqui, apresentam-se ainda a seguir outros compostos do presente invento na forma tabular. Estes compostos são preparados por utilização de vias e métodos sintéticos descritos nos Esquemas e Exemplos anteriores e variações dos mesmos são bem conhecidas dos técnicos da especialidade e não requerem experimentação indevida. Todas as variáveis listadas nos Quadros seguintes estão posicionadas de acordo com a seguinte estrutura genérica: -164- »

-165- &

Quadro 1 variavel.· =

-F

O

/SO, \ NH 2 N

Quadro 1 (Cont.)

-167- e

Quadro 1 (Cont.^ i

0

-168- Quadro 2_

-169- c

Quadro 2 f Cont.Ί

O

o -170-

Quadro 3

Ο

-171- Ouadro 3 (Cont.)

R

O

-172-

Quadro 4

-173-

Quqdro 4 ÍCont.^

Quadro 5

O COOH -175- Ouadro 5 (Cont.)

Quadro 6

R' Ο Ο

Rn

NH

O

Rn

NH

177-

Quadro 6 (Cont.) i

>

. 0

I

o

nuadro 7

O

-179-

Quadro 7 (Cont.^

O

-180-

Quadro 8

Quadro 8 fCont.l

O

Ν=γλ JM-

O O R' NH'

O R' NH

/Nx

-182- C

Quadro 9

-183- C

Quadro 9 fCont.l

Rn ΝΉ °\ /° V V

0

I

0N /0 V V

R \JNH· 'NHn

O -184- Ouadro 10

Quadro 10( Cont.^

-NH

O

ENSAIOS DE LIGAÇÃO DE RADIOLIGANDOS1 2 3 A elevada ligação de afinidade da [ H] Oxitocin(OT) ([tirosil, 3,5- [ H]OT; 30-60 Ci/mmole; New England Nuclear, Boston, MA) para com os receptores OT uterinos foi baseada no ensaio(1) que empregou uma preparação crua de membrana de úteros retirados de ratazanas tratadas com dipropionato de dietilstilbes-trol (DES) (0,3 mg/kg, ip; 18-24). Os estudos de comparação foram conduzidos no equilíbrio (60 minutos; 22°C), por utilização de 1 nm [ H]0T no seguinte tampão de ensaio: 50 mM de Tris-HCl, 5 mM de MgCl2 e BSA a 0,1%, pH 7,4. A ligação não específica (10% da ligação total) foi determinada por utilização de 1 mM de OT não referenciado e a reacção de ligação terminou por filtração através de filtros de fibra de vidro, por utilização de uma máquina de colher celular (modelo 7019, Skatron, Inc., Sterling, VA) . 3 A medição da ligação de [ H]Vasopressma (AVP) ([fenil- 3 alanil-3,4,5- H]AVP; 80-90 Ci/mmole; New England Nuclear) a uma preparação crua de membrana de fígado de ratazana macho (locais AVP-V^) ou de medula de rim (locais AVP-V2) foi determinada de acordo com o método de Butlen, et al.(2) . Os ensaios comparativos foram conduzidos no equilíbrio (30 minutos a 30°C) por utilização de 1 nM de [3H]AVP (fígado) ou 2 nM de [3H]AVP (rim) no seguinte tampão de ensaio: 100 nM de Tris-HCl, 5 mM de MgCl2, BSA a 0,1%, 50 mM de fenilmetilsulfonilfluoreto e 50 mg/ml de bactracina, pH 8,0. A ligação não especifica (5-10% da ligação (2) 1

Fuchs, A-R; Fuchs, F; Soloff, MS. 1985 J. Clin. Endocrinol. 2

Metab. 60:37. 3

Butlen, D; Guillon, 6; Rajerison, R.M.; Jard, S; Sawyer, W.H.; Manning, M. 1978 Mol Pharmacol 14:1006. -187-

V

total) foi determinada por utilização de 10 mM de AVP não referenciado e a reacção de ligação foi concluída por filtração da maneira descrita anteriormente para o ensaio de ligação [ H]0T. K^; os valores foram obtidos para cada composto a partir de três a seis determinações separadas dos valores cig0 (K^ = CI5Q/1 + c/Kd)(3) , por utilização de valores de obtidos do ensaio de ligação de saturação: [1H]OT (útero), 0,7 nM; [1H]AVP (fígado), 0,4 nM; [1H] (rim), 1,4 nM.

Embora o invento tenha sido descrito e ilustrado com referência a determinados modelos de realização preferidos, os especialista na arte constatarão que se poderão fazer várias alterações, modificações e substituições sem se sair do espírito e âmbito do presente invento. Por exemplo, podem-se aplicar dosagens eficazes diferentes das dosagens preferidas referidas atrás como consequência das variações de reacção do mamífero que está a ser tratado para prevenção do trabalho pré-termo, ou para outras indicações para os compostos do invento referidos atrás. Igualmente, as respostas farmacológicas específicas observadas podem variar de acordo com e dependem do composto activo particular seleccionado, ou se estão presentes veículos farmacêuticos, bem como do tipo de formulação e modo de administração empregue, e estas variações ou diferenças esperadas nos resultados estão contempladas de acordo com os objectivos ou práticas do presente invento. Pretende-se, por isso, que o invento esteja apenas limitado pelo âmbito das reivindicações que se seguem e estas reivindicações devem ser interpretadas num sentido tão amplo quanto seja razoável. 1

Cheng, Y-C; Prusoff, W.H.; 1973 Biochem Pharmacol 22:3099

Claims

Reivindicações: ia. - processo para a preparação de um composto da fórmula estrutural:

Rs e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que: X é C=0, CH. , po2h, Ο, P02H-0Y, em que Υ é alquilo C1_1()/ S, so, so2, O, C-NH-, e S02NH; m é um inteiro de zero a três; n é um inteiro de zero a dois; p é um inteiro de zero a dois; q é um inteiro de zero a um; r é um inteiro de zero a cinco; 1 2 R e R são mdependentemente hidrogénio, halogénio, hidróxi, alquilo C1_1Q, alcóxi C1_10 e tr i fluorometilo; 3 „ R e hidrogénio, halogénio, hidróxi, e oxo . 3 . com a condição de que quando R é oxo, a ligação 2,3 esta saturada; 4-. R e hidrogénio, fenilo, e alquilo C1-15; R5 e são independentemente hidrogénio, alquilo c1_10 e hidroxialquilo C- n; c g —iU ainda em que R e R em conjunto formam oxo, fenilo condensado e cicloalquilo C„ _ não substituído ou substituído, J "'O em que os referidos substituintes são hidróxi, alquilo C^q, hidroxialquilo C1_1Q, alcõxi C1-10, alcoxialcoxialcoxialquilo 7 8 9 R , R e R são independentemente hidrogénio, alquilo C^-io nâ0 substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são ciano, quando C é dois a dez, hidroxilo, carboxilo, alcóxi C1_10, alcoxicarbonilo e aneis heterocíclicos de 5 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1 heteroãtomo, em que o referido heteroátomo é N e os referidos substituintes são oxo, -191-

amino, alquilaiaino 0χ_10, carboxialquilcarbonilami.no dicarboxialquilamino C1-1Q e dialcoxicarbonilalquilamino c1-10' dialquilo C1-1Q/ alcóxi C?_10, alcoxicarbonilo c1_10' I alcoxicarbonilalquilaminocarbonilo 01-10, fenilo condensado, ciano, cianoalquilo c2_io' fosfato, fosfonato substituído por alquilo C1_1Q, sulfonato, sulfonato substituído por alquilo sulfonato substituído por alquilo substituído por halogénio, 1 Ω 1 n -(CH_) -N-R , em que RAU é 2 r | 111 R hidrogénio,

alquilsulfonilo C^-IO' alcarilsulfonilo ^ , aralquilsulfonilo alcoxiarilsulfonilo aminossulfonilo, alquilaminossulfonilo ci_iq# dialquilaminossulfonilo cicloalquilalquilo, bicicloalquilo ou tricicloalquilo C^_15 não substituído ou substituído, em que o referido substituinte é . oxo e sulfonilo substituído por cicloalquilalquilo, biciclo- alquilo ou tricicloalquilo C3_15 não substituído ou substituído, em que o referido substituinte é oxo, oxima e hidroxilo; 11 e em que R é hidrogénio, alquilo carboxialquilo c1_10» e alcoxicarbonilalquilo C. ; 12 11 1—J-U (CH_) -N-CO-R , em que R é como definido anteriormente e R11 12« hidrogénio, amino, alquilamino c1_10' alquilo C-j^q não substituído ou substituído, em que os substituintes são cicloalquilo C4_g não substituído ou substituído, em que o referido substituinte é hidróxi e carbôxi; bi e tricicloalquilo C10-15' halogénio, hidróxi, carbóxi, oxo, oxima, alquiltio alquilsulfinilo alquilsulfonilo alcoxicarbonilo C1_10; c

aneis heteroclclicos de 4, 5 e 7 membros não substituídos ou substituídos com 1,2,3 ou 4 heteroátomos ou porções, em que os referidos heteroátomos ou porções são N, S, SO, S02 e 0, em que os referidos substituin-tes são alquilo aralquilo C1-10# aralcóxi C1_1Q, alcarilo amino, > alquilamino C^-IO' dialquilamino oxo, oxima, fenilo condensado, alcóxicarbonilo alquilcarbonato c1>10/ alquilureído alquilcarbamato e aneis heteroclclicos de 5, 6 e 7 membros não substituídos ou substituídos, com 1, 2, 3 e 4 I heteroátomos, em que os referidos heteroátomos são N, O e S e em que os referidos substituintes são oxo e fenilo condensado; 1-10' fenilo não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são halogénio, hidróxi, carbóxi, alquilo C^, carboxialquilo C1_10, alcóxi C 4 -194-

sulfato e aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros, com 1, 2, 3 e 4 heteroátomos, em que os referidos hetero-átomos são N, 0 e S amino, aminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo / alquilamino c^_2.of dialquilamino alquilcarbamato C1_1Q/ alquilcarbonato , alquilureído C1_1Q/ aralquilcarmato arilóxi não substituído ou substituído em que os referidos substituintes são amino, alquilo C1_10 e aminoalquilo aralquilóxi C1_1Q, aralquilóxi não substituído ou substituído em que o referido substituinte é alquilcarbamato

Ν,Ν-alquil C^^-carboxialquilo C1_1Q e Ν,Ν,Ν-dialquil C^^-alcoxicarbonilalquilo cicloalquilo C_ _ não substituído ou substituído em que os J"0 referidos substituintes são alquilo e carbóxi; Ν,Ν-dialquilo C 1Q, bicicloalquilo e tricicloalquilo c7_^g não substituído ou substituído em que o referido substituinte é carbóxi; alcôxi C1_10, fenilo não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são amino, halogénio, alquilo 0±_10, alcóxi C1_1Q, nitro, fenilcarbonilo e aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1, 2, 3 ou 4 átomos heterocíclicos, em que os referidos heteroátomos são O, N e S e em que o referido substituinte é oxo; aneis heterocíclicos mono e bicíclicos de 5, 6, 7 ou 8 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos ou porções, em que os referidos heteroátomos ou porções são 0, N, S e S02 e em que os referidos substituintes são oxo, hidróxi, carbóxi, amino, carboxialquilo alquilo C1_1Q, alcóxi Cl.10, aralcõxi C^, alcarilóxi C1_10, alcóxicarbonilo alcoxicarbonilamino C1_1Q, alcoxicarbonilalquilo aralcoxicarbonilo C1->10 e aralcoxicarbonilo e arilo substituído ou não substituído em que o referido substituinte é α -196-

alquilo carbóxi e halogénio; 7 8 ainda em que R e R são juntos para formarem aneis heterocícli-cos de 5, 6 e 7 membros que contêm 2, 3 ou 4 heteroãtomos, em que os referidos hetero átomos são N, 0 e S e -(CH2)r-CO-NH-R13, em que R13 é alquilo C1_1Q, aminoalquilo c1_10/ alcoxicarbonilalquilo c1_10/ carboxialquilo C^.^, aneis heterocíclicos biciclicos de 8 membros que contêm 1 ou 2 hetero átomos em que os referidos heteroãtomos são Nf -(CH ) NH-CO-NH-R14, em que R14 é b JT hidrogénio, alquilo c1_10 substituído ou não substituído e bi- e tricicloalquilos C7_15, gue os referidos substituin-tes são carbóxi, alcoxicarbonilo aminocarbonilo e mono e dialquilaminocarbonilo fenilo substituído e não substituído em que os referidos substituintes são hidróxi, carbóxi, halogénio, alquilo C1_1Q e carboxialquilo C1_1Q; e aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros substituídos e não substituídos com 1 ou 2 heteroãtomos ou porções em -197- -197-

que os referidos heteroátomos ou porções são N, 0, S, SO e SC>2 e em que os referidos substituintes são oxo, carbóxi, amino, carboxialquilo C1_1Q/ alquilo C1-1Q e alcoxicarbonilamino C1_1Q; caracterizado por compreender: a) a reacção de um composto de fórmula:

i) com um composto de fórmula: cicoch2ch=ch2, ii) ou com um composto de fórmula: ciso2n(ch3)3, iii) ou com um composto de fórmula: C1C02CH2CH3, iv) ou com um composto de fórmula: Clco—(/ v) ou com um composto de fórmula: Clco· -N vi) ou com um composto de fórmula: coci^ -v vii) ou com um composto de fórmula:

V^JNT viii) ou com um composto de fórmula:

ix) ou com um composto de fórmula: HNCO J

> x) ou com um composto de fórmula: cicoch2ch2co2ch2ch3 xi) ou com um composto de fórmula: HOCO co2cCch3)3 n^XocH2 ΓΛ

xii) ou com um composto de fórmula:

xiii) ou com um composto de fórmula:

HOOCCH2 —/ I nhco2c(ch3); xiv) ou com um composto de fórmula: CL) HOOCCHCH-, N=\ NH I NHC02C(CH3): xv) ou com um composto de fórmula: nhco2c(ch3)3 -NCH.

2 \\ /j 12 \\ I N-hqqcchch, —(x I CD) xvi) ou com um composto de fórmula:

t HOOCCHj —n OU fórmula: O NHCOaCCCH3)3 b) a remoção de um grupo benzilo de um composto de c-

ou c) a transformação de um composto de fórmula:

num composto de fórmula: I -202-

num composto de fórmula: »

ou e) a transformação de um composto de fórmula:

H NHCOCHCH, I Ν=Λ nhco2ccch353 I num composto de fórmula:

ou f) a transformação de um composto de fórmula: Nv S02CH2

NHn02CCCH3)3 num composto de fórmula:

NH2HC1 ou g) a transformação de um composto de fórmula:

num composto de fórmula:

ou h) a reacção de um composto de fórmula:

NH ££C1 com um composto de fórmula: 206-

seguido de reacção com trietilamina; > ou i) a reacção de um composto de fórmula:

com H^NOH.HCl na presença de piridina; ou j) a hidrogenação de um composto de fórmula: -207- -207-

Ο Η

ou k) a reacção de um composto de fórmula:

i) com um composto de fórmula: na presença de benzeno; ii) ou com antraceno e tolueno; iii) ou com um composto de fórmula: I -208- Ο

iv) ou com um composto de fórmula: v) ou com um composto de fórmula: Γ7 OH na presença de tolueno; ou 1) a conversão de um composto de fórmula: I

por oxidação, num composto de fórmula

ou m) a reacção de um composto de fórmula:

com um composto de fórmula: cich2och2ch2och3 ou n) a conversão de um composto de fórmula

num composto de fórmula:

C02CK3 ou o) a reacção de um composto de fórmula V X ο •ÍS ΝΗ2 com um composto de formula:

ou p) a conversão de um composto de fórmula:

por redução, num composto de fórmula: -212- •G

I

2â. - Processo de acordo com a reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um composto com a fórmula estrutural:

e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis, em que X é c=o, CH , po2h, 0, P02H-0Y7 em que Y é alquilo C1_1Q/ S, SO e S°2; m é um inteiro de zero a três; n é um inteiro de zero a dois; p é um inteiro de zero a dois; q é um inteiro de zero a um; r é um inteiro de zero a cinco; 1 2 R e R são mdependentemente hidrogénio, halogénio e alquilo 3 R é hidrogénio, halogénio, hidróxi, e oxo com a condição de que quando R é oxo, a ligação 2,3 está satura da; R4 é hidrogénio ou fenilo; R5 e R6 são independentemente hidrogénio e alquilo C ; ainda em que Rs e R® em conjunto formam oxo, fenilo condensado e cicloalquilo C1_1Q não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são hidróxi, hidroxialquilo C^-io' e alcoxialcoxialcoxialquilo 7 8 9 R , R e R são independentemente hidrogénio, alquilo C^-io não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são ciano, quando C é dois a dez, hidroxi, carboxilo, alcóxi C1-1(J, alcoxicarbonilo C1_1Q e aneis heterocíclicos de 5 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1 heteroátomo, em que o referido heteroátomo é N e os referidos substituintes são oxo, amino, alquilamino carboxialquilcarbonilamino C1-10, dicarboxialguilamino e dialcoxicarbonilalquilamino ; dialquilo

-215- alcóxi C7_10, . ,. . alcoxicarbonilo C1->10, alcoxicarbonilalquilaminocarbonilo 01-10, fenilo condensado, fosfato, fosfonato substituído por alquilo sulfato, sulfonato substituído por alquilo c1_10/ sulfonato substituído por alquilo substituído por halogénio, I -(CH_) -N-R10, em que R10 é 2 r , ill R hidrogénio, alquilcarbonilo halogénio, sulfonilo, alquilsulfonilo C1_10, alcarilsulfonilo alcoxiarilsulfonilo c1-1Q, aminossulfonilo, dialquilaminossulfonilo,

cicloalquilalquilo C3_15 não substituído ou substituí-do, em que o referido substituinte é oxo e sulfonilo substituído por cicloalquilalquilo C3_^g não substituído ou substituído, em que o referido substituinte é oxo; 11 - e em que R e hidrogénio, alquilo C1-1Q, carboxialquilo C1-10, e 9

-216- alcoxicarbonilalquilo c ; 12 11 J.-J.U (CH_) -N-CO-R , em que R é como definido anteriormente e E11 12 . e hidrogénio, amino, alquilamino C1-1£),

alquilo C1_1Q não substituído ou substituído, em que os substituintes são cicloalquilo C5_6 não substituído ou substituído, em que o referido substituinte é hidróxi; tricicloalquilo halogénio, hidróxi, carbóxi, oxo, alquiltio C1_1Q, alcoxicarbonilo aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros não substituídos ou substituídos com 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos, em

que os referidos heteroátomos são N, S e 0, em que os referidos substituintes são alquilo C1_1Q, aralquilo C1-10, aralcóxi amino, oxo, fenilo condensado, alcóxicarbonilo C1_10, carmato de alquilo C1-10 e aneis heterocíclicos de 5, 6 e 7 membros não substituídos ou substituídos, com 1 heteroãtomo, * -217-

em que o referido heteroátomo é N e em que os referidos substituintes são oxo e fenilo condensado;

fenilo não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são hidróxi, carbóxi, alquilo C1-10, carboxialquilo C^^g/ alcóxi C1_1Qf sulfato e aneis heterocíclicos de 5 e 6 membros, com 1 ou 2 hetero átomos, em que os referidos heteroátomos são N e S amino, alquilamino, dialquilamino, alquilcarbamato aralquilcarmato C-j^g/ arilóxi não substituído ou substituído em que os referidos substituintes são amino,

alquilo C1-10 e aminoalquilo ; aralquilóxi aralquilóxi não substituído ou substituído em que o referido substituinte é alquilcarbamato Ν,Ν-alquil C^^-carboxialquilo C1_ e Ν,Ν,Ν-dialquilo C^^-alcoxicarbonilalquilo c1-10f cicloalquilo C3_6 não substituído ou substituído em que os referidos substituintes são 9

alquilo C1-1Q e carbóxi; N, N-dialquilo bicicloalquilo C? não substituído ou substituído em que o referido substituinte é carbóxi; alcóxi I fenilo não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são amino, halogénio, alquilo alcóxi C1_10, nitro, fenilcarbonilo e aneis heterocíclicos de 5 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1 átomo heterocíclico, em que o referido heteroãtomo é 0 e em que o referido substituinte é oxo;

aneis heterocíclicos mono e bicíclicos de 4, 5, 6, 7 ou 8 membros não substituídos ou substituídos que contêm 1 ou 2 heteroátomos, em que os referidos heteroátomos são N, O e S e em que os referidos substituintes são oxo, hidróxi, carbóxi, carboxialquilo c1_10» alquilo C1-1Qf alcóxi C1-1Q, aralcóxi 1-10' alcoxicarbonilalquilo C1-10 e alcóxicarbonilo C heterocícli-os referidos aralcoxicarbonilo 7 8 ainda em que R e R são juntos para formarem aneis cos de 5 membros que contêm 2 heteroátomos, em que hetero átomos são N e 0 e -(CH2)r~C0“NH_R13, em que R13 é alquilo C1-1Qf aminoalquilo C1_1Q e alcoxicarbonilalquilo c1-10· 3§. - Processo apara a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se incluir na referida composição um composto de acordo com a reivindicação 1 numa quantidade farmacologicamente eficaz para antagonizar a ligação da oxitocina ao seu local receptor, e um veículo farmaceuticamente aceitável. 4a. - Método para a prevenção do trabalho de parto prematuro num mamífero que necessite do mesmo, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante. 5a. - Método para o tratamento da dismenorreia num mamífero que necessite desse tratamento, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante. 6a. - Método para a interrupção do trabalho de parto preparatório para cesariana num mamífero que necessite do mesmo, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante.
73. - Método para antagonização da ligação da oxitocina ao seu local receptor, caracterizado por compreender a etapa de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante.
83. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto com a fórmula: SN

9â. - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se incluir na referida composição um composto de acordo com a reivindicação 8, numa quantidade farmacologicamente eficaz para antagonizar a ligação da oxitocina ao seu local de receptor, e um veiculo farmaceuticamente aceitável. 10a. - Método para a prevenção do trabalho de parto prematuro num mamífero que necessite do mesmo, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 8, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante. 11a. - Método para o tratamento da dismenorreia num mamífero que necessite desse tratamento, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 8, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante. 12â. - Método para a interrupção do trabalho de parto preparatório para cesariana num mamífero que necessite do mesmo, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 8, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante. 13§. - Método para antagonização da ligação da oxitoci-na ao seu local receptor, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 8, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oral, de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante. 14a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto a fórmula: -223- -223-

15a. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto com a fórmula:

e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 16a. - Método para antagonizar a ligação da vasopressi-na ao seu local receptor num mamífero com necessidade do mesmo, caracterizado por compreender o passo de administração ao referido mamífero de uma quantidade farmacologicamente eficaz de um -224- composto de acordo com a reivindicação 1, sendo a gama de dosagem de composto activo, quando a administração é por via oralf de desde cerca de 0,3 a cerca de 6,0 g por dia, e quando a administração é por via intravenosa, de desde cerca de 0,1 a cerca de 10,0 mg por minuto durante uma infusão a velocidade constante. Lisboa, 12 de Novembro de 1991

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