PT98697B

PT98697B - Processo para a preparacao de compostos macrociclicos e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT98697B
Application number: PT98697A
Authority: PT
Inventors: Mark Furber; David Keith Donald
Original assignee: Fisons Plc
Priority date: 1990-08-18
Filing date: 1991-08-16
Publication date: 1999-01-29
Also published as: CN1060846A; JPH06500102A; US5384316A; PT98697A; AU8394291A; WO1992003441A1; IE912886A1; EP0543879A1

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS MACROCÍCLICOS E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM¹¹.

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se a compostos macrocíclicos, e a processos para a sua preparação, e refere a sua utilização como medicamentos, e a composições que os contêm.

Pedido de Patente Europeia 184162 (àtribuída a Fujisawa Pharmaceuticals Co Ltd) refere vários compostos macrocíclicos isolados de microorganismos que pertencem ao género Streptomyces. Os compostos estão numerados por FR-900506, FR-900520, FR-900523 e FR-900525, e é também descrita a preparação de alguns dos seus derivados. Os compostos são referidos como agentes imunossupressores.

Os pedidos de Patente Internacional nss WO/89/05304 e WO 91/02736 e o Pedido de Patente Europeia Ne 413532 (atribuído a Fisons plc), Pedido de Patente Europeia 353678 (atribuída a Fujisawa Pharmaceuticals Co Ltd),

CR

Pedido de Patente Europeia 349049, 349061, 358508 e 388153 (atribuído a Mersk & Co Inc) e Pedido de Patente Europeia 356399 e Pedido de Patente Internacional WO 90/15805 (atribuído a Sandoz AG) também referem vários compostos macrocíclicos cujas indicações incluem a actividade imunossupressora.

Foi agora descoberto um novo grupo de compostos macrocíclicos que possuem propriedades vantajosas em relação aos referidos anteriormente.

De acordo com a invenção, é proporcionado um composto com a fórmula I (CH,

R

CH, f ^N<°>® k

OH

CH

na qual

R¹ representa OH ou OCH₃, o

R representa OH ou H,

R³ representa metilo, etilo, propilo ou alilo,

X representa 0, (H,OH) ou (Η,Η), m representa 0 ou 1, n representa 1 ou 2, ou um seu derivado farmacêuticamente aceitável, desde que quando n for 1, então R³ seja alilo ou propilo.

Os compostos com a fórmula I e os seus derivados farmacêuticamente aceitáveis (compostos da in venção), têm a vantagem de serem menos tóxicos, serem mais eficazes, terem uma maior duração, terem uma maior gama de actividade, serem mais potentes, serem mais estáveis, produzirem menos efeitos laterais,serem mais facilmente absor vidos, serem mais solúveis, ou terem mais propriedades físicas ou farmacológicas, do que os compostos da técnica anterior.

Os grupos preferidos dos compostos são aqueles em que:

R¹ representa OCH₃;

R representa OH;

X representa 0;

m representa 1; e n representa 2.

Os derivados farmacêuticamente aceitáveis dos compostos com a fórmula incluem pró-medicamentos de compostos da fórmula I, isto é compostos que podem ser metabolizados in vivo para compostos com a fórmula I. Estes com postos incluem compostos que diferem dos compostos com a fórmula I pelo facto de alguns ou todos os grupos OH (por exemplo aqueles que R^ e podem representar) serem derivados para ésteres ou carbamatos. Estes ésteres podem ser preparados por processos convencionais, por exemplo por reacção com um ácido carboxílico e um agente de acoplamento, ou um cloreto de acilo. Esses carbamatos podem também ser preparados por processos convencionais, por exemplo reacção com um isocianato. Os ésteres e carbamato específicos são CH₃CO₂-, CgH₅CO₂-, H₂NCO₂- e CH₃NHCO₂“.

É também proporcionado um processo para a preparação de um composto da invenção, que compreende ciclizar-se um composto com a fórmula II,

na qual ι o 3 ...

R , R , R , X e n sao como acima definidos, ou um seu derivado farmaceuticamente aceitável, pela acção de um agente oxidante adequado, e quando necessário converter-se o compos4

to com fórmula I resultante num seu derivado farmacêuticamente aceitável.

Os compostos da invenção em que m é 0 podem ser preparados a partir de um composto com a fórmula II correspondente pela acção de um reagente de sulfurano de Martin, num solvente que não afecte prejudicialmente a reacção (por exemplo diclorometano), a temperaturas inferiores ao ambiente (por exemplo 0 a ÍOSC). 0 reagente de sulfurano de Martin produz compostos da invenção que possuem uma estereoquímica-S em C14 (isto é a mesma estereoquímica de FR-900506) das Z-oximas com a fórmula II, e compostos com a estereoquímica-R em C14 do E-oximas com a fórmula II.

Os compostos da invenção em que m é

I podem ser preparados a partir de um composto com a fórmula

II correspondentes por acção de tetraacetato de chumbo, num solvente, que não afete prejudicialmente a reacção (por exemplo um clorometano), à temperatura ambiente ou próximo dela. O tetraacetato de chumbo produz compostos da invenção que pos suem uma estereoquímica-S em C14 das E- e Z-oximas com a fórmula II. Os compostos da invenção que possuem a estereoquí mica-R em C14 e em que m é 1 podem ser preparados a partir de um composto correspondente em que m é 0 por oxidação, por exemplo utilizando um perãcido por exemplo o ácido perclorobenzóico.

Os compostos com a fórmula II em que R² representa H podem ser preparados a partir de um composto correspondente com a fórmula II em que R² representa OH por conversão do grupo OH para um grupo substituível (por exemplo por reacção de um composto com a fórmula II com l,l'-tiocarbonildiimidazole para se obter um grupo imidazol-l-il(tiocarbonil)oxi, seguido por substituição do grupo substituível por hidrogénio, por exemplo por reacção com um agente redutor de tipo hidreto por exemplo o hidreto de tributil estanho na presença de AIBN (2,2'-azobisisobutironitrilo).

Os compostos com a fórmula II em que X representa (H,H) podem ser preparados a partir de um composto correspondente com a fórmula II em que X representa 0 por redução selectiva do grupo C2-carbonilo. A redução pode

ser conseguida por acção de H₂S, de preferência na presença de piridina ou uma amina (por exemplo morfolina), num solvente que não afecte prejudicialmente a reacção (por exemplo a dimetilformamida, piridina ou metanol), à temperatura ambiente ou próximo dela (ver WO 91/02736).

Outros compostos com a fórmula II são conhecidos ou podem ser preparados utilizando técnicas conhecidas, por exemplo as referidas em WO 89/05304.

Quando necessário, os grupos hidroxi em compostos intermediários podem ser produzidos utilizando a química da protecção de grupos convencionais (tal como descrito em Protective Groups in Organic Chemestry, ed: J W F McOmie, Plenum Press (1973) , e Protective Groups in Organic Synthesis, T W Greene, Wiley-Interscience (1981)). Um grupo particularmente útil e o ^butildimetilsililo.

Os compostos da invenção podem ser isolados das suas misturas reaccionais utilizando processos convencionais.

Os ensinamentos de todos documentos acima mencionados são aqui incorporados como referência.

Os compostos da invenção são úteis dado que possuem afinidades farmacológicas em animais; em par ticular são úteis porque possuem actividade imunossupressora, tal como indicado nos exemplos A, B, C e D seguintes.

Assim os compostos da invenção são indicados para a utilização no tratamento ou prevenção da resistência aos órgãos ou tecidos transplantados, como por exem pio rim, coração, pulmão, espinal medula, pele, córnea, fígado, medula óssea, pâncreas, intestino, membros,músculo, ner vos, etc. e de doença autoimune, inflamatória, proliferativa e hiperproliferativa, e de manifestações cutâneas de doenças mediadas imunologicamente, por exemplo a artrite reumatóide, lupus eritematoso, lupus eritematoso sistémico, tiroidite de Hashimoto, esclerose múltipla, miastenia grave, diabetes do tipo 1, uveite, síndroma nefrótico, psoríase, dermatite atópi ca, dermatite de contacto e outras dermatites de equizemas, dermatite seborreíca, Lichen planus, Pemphigus, bullous Pemphigoid, Epidermólise, Epidermólise bulosa, urticãria, angioe demas, vasculidites, eritemas, eosinophilias cutâneas, acne, Alopecia areata, fasciti eosinofílica, ateroesclerose e doenças semelhantes.

Os compostos da invenção são também indicados para o tratamento de doenças respiratórias, por exemplo sarcoidose, pulmão fibróide, pneumonia intersticial idiopãtica e doença da obstrução reversível das vias aéreas em que a última doença inclui condições como por exemplo a asma (por exemplo asma brônquica, asma alérgica, asma intrínseca, asma extrínseca e asma dos fenos), particularmente a as ma crónica ou inveterada (por exemplo a asma tardia e a hiper-vesposta das vias áreas),bronquite e doenças semelhantes.

Os compostos da invenção podem também ser indicados en certas doenças do olho como por exemplo a queratoconjuntivite, conjuntivite vernal, uveite associada com a doença de Behcet, queratite, queratite herpética, córnea cónica, distrofia do epitélio da córnea, leucoma da córnea, pemphigus ocular, úlcera de Mooren, Esclerite, oftalmopatia de Graves e doenças semelhantes.

Os compostos da invenção são também indicados no tratamento da inflamação da mucosa e dos vasos sanguíneos tal como as úlceras gástricas, danos vasculares causados por doenças isquémicas e trombose, doença esquémica do baço, doença inflamatória do baço, enterocolite necrotizante, lesões do intestino associadas com queimaduras e doenças mediadas pelo leucotrieno B4.

Os compostos da invenção são também indicados no tratamento de doenças renais incluindo a nefrite intersticial, sindroma de Googpasture, síndroma hemolítico-urémico e nefropatia diabética; doenças dos nervos incluindo a miosite múltipla, sindroma de Guillain-Barré doença de Memière e radiculopatia, doenças endõcrinas incluindo hipertiroidismo e doença de Basedow ; doenças hemáticas incluindo a aplasia de células vermelhas puras, anemia aplástica, anemia hipoplãstica, anemia hemolítica, agranulocitose e aneritoplastia; doenças dos ossos tais como a osteoporose; doenças da pele incluindo a dermatomiosite, leucoderma vulgar, ictio se vulgar, sensibilidade fotoalérgica e linfoma das células T

cutâneas; doenças circulatórias escolhidas de entre arterio esclerose, ateroesclerose, sindroma da aortite, poliarterite nodosa e miocardose; doenças do colagénio incluindo escleroderma, sindroma de Wegener e sindroma de Sjogren; adipose; doença periodontal; sindroma nefrótico; sindroma hemoli ticourémico; e alopecia de padrão masculino e alopecia senil.

Além disso, os compostos da invenção são indicados no tratamento de doenças que incluem inflamações/alergias do intestino como por exemplo doença de Coeliac, proctite, gastroentrite eosinofílica, mastocitose, doença de Crohn e colite ulcerativa; e doenças alérgicas relacionadas com alimentos que têm manifestação sintomática remota do sistema gastro-intestinal, por exemplo cefaleia, rinite e equizema.

Os compostos da invenção têm também uma actividade regeneradora do fígado e/ou actividade de esti mulação da hipertrofia e hiperplasia de hepatócitos. Assim, eles são úteis no tratamento e prevenção de doenças hepáticas (por exemplo imunogénicas (por exemplo doenças do fígado autoimunes crónicas incluindo a hepatite autoimune, cirrose biliar primária e colangite esclerosante), ressecção parcial do fígado, necrose aguda do fígado (por exemplo a necrose cau sada por toxinas, hepatite virai, choque ou anoxia), hepatite do virus B, hepatite não-A/não-B e cirrose.

Os compostos da invenção são também indicados para a utilização como agentes anti-microbianos, e podem assim ser utilizados no tratamento de doenças causadas por microorganismos patogênicos e semelhantes.

É assim proporcionada a utilização de um composto da invenção como composição farmacêutica.

Além disso, é referida a utilização de um composto da invenção na preparação de um medicamento pa ra a utilização como agente imunossupressor.

Para as utilizações terapêuticas aci ma mencionadas a dosagem administrada variará,obviamente, com o composto utilizado, forma de administração, tratamento pretendido (por exemplo tópico, parentérico ou oral), e a doença indicada. Além disso, em geral, são obtidos resultados satis8

fatórios quando os compostos são administrados a uma dosagem diária de 0,01 a 20 mg por kg de peso corporal animal.

Para o homem a dosagem diária total indicada está na gama de 0,01 mg a 1000 mg e de preferência de 0,5 mg a 100 mg,que pode ser administrada,por exemplo duas vezes por semana, ou em doses divididas de 1 a 6 vezes ao dia ou numa forma de libertação sustida. Assim as formas de dosagem unitária adequada para administração por exemplo ao esófago, compreendem 0,1 mg a 500 mg e de preferência de 0,5 mg a 100 mg do composto de preferência misturado com um diluente, veículo ou adjuvante sólido ou líquido farmacêuticamente aceitável.

De acordo com a invenção é proporcionada uma composição farmacêutica que compreende de preferência menos de 80% e mais de preferência menos de 50% em peso, de um composto da invenção em combinação com um adjuvante, diluente, ou um veículo farmacêuticamente aceitável. É também proporcionado um processo para a preparação dessa composição farmacêutica que compreende misturarem-se os ingredientes. Exemplos de adjuvantes, diluentes ou veículos adequa dos são: para comprimidos, cápsulas e drageias - celulose microcristalina, fosfato de cálcio, terra de diastomácea, um açúcar como por exemplo a lactose, dextrose ou manitol, talco, ácido esteárico, amido, bicarbonato de sódio e/ou gelatina; para supositórios - óleos ou ceras naturais ou endurecidos; e para composições para inalação - lactose grosseira. 0 composto da invenção está de preferência numa forma que possui um diâmetro médio em massa de 0,01 a 10 /xm. As composições podem também conter um conservante, estabilizante e molhantes adequados, solubilizantes (por exemplo um polímero de celulose solúvel em água como por exemplo a hidroxipropil metilcelulose, ou um glicol solúvel em água como por exemplo propileno glicol), agentes edulcorantes e corantes e aromatizantes. As composições podem,se desejado, ser formuladas numa forma de libertação sustida.

Para o tratamento das doenças das obstruções reversíveis das vias aéreas, é preferível que o

composto da invenção seja administrado por inalação ao pulmão, especialmente sob a forma de um pó.

De acordo com um outro aspecto da invenção é proporcionado um processo para efectuar a imunossupressão que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente activa de um composto da invenção a um paciente.

Os compostos da invenção têm um certo número de centros quirais e podem existir sob a forma de vários estereoisómeros. A invenção proporciona todos os isómeros ópticos e estereoisómeros, bem como as misturas racémicas. Os isómeros podem ser resolvidos ou separados por meio de técnicas convencionais.

Contudo, a estereoquímica preferida dos vários átomos quirais é mostrada na fórmula Ia,

na qual

R ate R , X, m e n são como acima definidos.

Quando m é 0,é preferível que o átomo de carbono em C14 tenha uma estereoquímica-S.

Ensaio A

Reacção de Limfócitos Mistos (MLR) I ensaio de MLR foi efectuado em placas de microtitulação contendo cada uma 5 x 10⁵ C57BL/6 de células de resposta (H-2^), 5 x 10^ de mitomicina C tratada com (25 Mg/ml de mitomicina C a 37 sc durante 30 minutos e lavadas por três vezes com meio RPMI 1640) , células estimuladoras BALC (Η-2^) em 0,2 ml de meio RPMI 1640 suplementado com soro de vitela fectal a 10%, hidrogeno carbonato de sódio 2 mM, penicilina (50 Mg/ml) e estreptomicina (50 Mg/ml). As células foram incubadas a 37 sc numa atmosfera humidificada com 5% de dióxido de carbono e 95% de ar durante 60 horas e pulsadas com ³H-timidina (0,5 pci) durante 4 horas antes das células terem sido recolhidas. 0 composto que constitui o objectivo desta invenção foi dissolvido em etanol e foi diluído em meio RPMI 1640 e adicionado às culturas para se obterem concentrações finais de 0,1 /ig/ml ou menores.

Ensaio B

Reacção de Limfócitos Mistos (MLR) II

O ensaio de MLR foi efectuado em placas de microtitulação de 96 furos em que cada furo continha 3 x 10⁵ células de cada um dos dadores respondentes num volume final de 0,2 ml em meio RPMI 1640 suplementado com soro humano a 10%, L-glutamina e penicilina/estreptomicina. O composto em ensaio foi dissolvido até 10 mg/ml em etanol e depois diluído em meio RPMI 1640. As células foram incubadas a 372c numa atmosfera humidificada com 5% de dióxido de carbono durante 96 horas. Foi adicionada ³H-timidina (0,5 /xCi) nas últimas 24 horas do período de incubação para se obter uma medida da proliferação.

Ensaio C

Ensaio de Enxerto em Função do Hospedeiro (GVH)

Foram preparadas células da medula óssea de ratos hibridos DA e DAxLewis F1 a um valor aproximado de 10⁸ células/ml. Foram injectados 0,1 ml destas suspensões nas patas traseiras de ratos DAxLewis F1 (esquerda e direita respectivamente). Os animais recipientes são doseados com o composto em ensaio, quer oralmente quer sob cutaneamente, nos dias 0 a 4. 0 ensaio é terminado no dia 7 quando são removidos e pesados os nodos da linha popliteal dos animais. 0 aumento de peso do nodo esquerdo em relação ao peso do direito é uma medida da resposta de GVH.

Ensaio D

Inibição da Secreção da Interleucina-2 (IL-2) ensaio foi efectuado segundo o método de Sawada e Col, J immunol (6), Vol 139, pág. 1797-1803, mas utilizando a linha de células Jurkat.

A invenção é agora ilustrada pelos seguintes Exemplos.

Exemplo 1 (14R)-18-Alil-l-hidroxi-12-Γ 2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinill-24,26-dimetoxi-13,20,22,28-tetrametil-ll,15,29

-trioxa-4,16-diazatetraciclo-Γ 23,3,1,l¹⁴'¹⁷,0⁴'⁹1triaconta-16 -19-dieno-2,3,10-triona

A uma solução agitada fria (52C) de 17-alil-l,14-dihidro xi-12-[2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinil]-23,25-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-ll,28-dioxa-4-aza triciclo[22,3,1,0^4,9]octacos-18-eno-2,3,10,16-tetraona C16 E-oxima (tal como preparada no Exemplo 25, WO 89/ /05304, e separada da 2-oxima por cromatografia em sílica) (250 mg) em diclorometano anidro (25 ml) em atmosfera de azoto foi adicionado em porções o reagente sulfurano de Martin em porções até todo o material de partida ter desaparecido. A mistura reaccional foi em seguida arrefecida com isopropanol (3 ml) , e foi adicionada solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. O extracto orgânico foi em seguida separado, seco (MgSO₄) filtra do e evaporado em vazio para se obter um óleo. A cromatograf ia em sílica eluindo com hexano um gradiente cres12

cente de acetato de etilo produziu em seguida o composto do título sob a forma de uma espuma (220 mg).

¹³C RMN (CDC1₃) $: 196,8 (C2); 169,4 (CIO); 164,8 (C3) ;

160.6 (C17); 138 (C20); 125,6 (C19); 97 (Cl);83,3 (C14);

77.6 (C12); 75,5 (C24); 56,7 (C9); 48,4 (C21);39,2 (C5) ;

28.7 (C8); 27 (C22); 24,7 (C6)

EM (FAB): 886 [M+Rb]⁺;

784 [M-OH]⁺

Exemplo 2 (14S)-18-Alil-l-hidroxi-12-Γ2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinill-24,26-dimetoxi-13,20,22,28-tetrametil-ll,15,29

-trioxa-4,16-diazatetraciclo-[23,3,1.I¹⁴'¹⁷,O⁴·⁹1triaconta-16 -19-dieno-2,3,10-triona

A uma solução agitada,fria (52C) de 17-alil-l,14-dihidro xi-12-[2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil) -1-metilvinil]-23,25-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-ll,28-dioxa-4-aza triciclo-[22,3,1,O⁴'⁹]octacos-18-eno-2,3,10,16-tetraona Cl6 E-oxima (tal como preparada no Exemplo 25, WO 89/ /05304, e separada da E-oxima por cromatografia em sílica) (260 mg) em diclorometano anidro (25 ml) em atmosfera de azoto foi adicionado em porções o reagente sulfurano de Martin até todo o material de partida ter desaparecido. A mistura reaccional foi em seguida arrefecida com isopropanol (3 ml), e foi adicionada solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. O extracto orgânico foi em seguida separado, seco (MgSO₄) filtrado e evaporado em vazio para se obter um óleo. A cromatograf ia em sílica eluindo com hexano um gradiente crescente de acetato de etilo produziu em seguida o composto do título sob a forma de uma espuma (230 mg).

¹³C RMN (CDC1₃) f : 194 (C2); 168,5 (CIO); 165,6 (C3) ;

161,2 (C17);138,2 (C20);124,l (C19);97,3 (Cl); 82 (C14); 78,4 (C12); 56,6 (C9); 52,1 (C21);

EM (FAB):

886 [M+Rb]⁺;

824 [M-Na]⁺;

802 [M+H]⁺;

784 [M+0H]⁺

Exemplo 3 (14R)-l-Hidroxi-12-Γ2- (4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinill-24,26-dimetoxi-18-etil-13,20,22,28-tetrametil-ll,15,29

-trioxa-4,16-diazatetraciclo-Γ 23,3,1,l¹⁴'¹⁷, O⁴'⁹1triaconta-16,19-dieno-2,3,10-triona

a) 1,14-ditiidroxi-12“ Γ2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil) -1metilvinill-23,25-dimetoxi-13.19,21,27-tetrametil-ll,28-dioxa-4-azatriciclo-Γ22,3,1,O⁴'⁹1 actacos-18-eno-2,3,10, 16-tetraona C16 E-oxima

Foi submetida a refluxo numa atmosfera de azoto durante 2 horas uma solução de 1,14-dihidroxi-12-[2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinil]-23,25-dimetoxi-13,19,

21,27-tetrametil-ll,28-dioxa-4-azatriciclo-[22,3,1,0^4,9] octacos-18-eno-2,3,10,16-tetraona (FR-900520, EP 184162) (71 mg) , cloridrato de hidroxilamina (80 mg) e piridina (0,2 ml) em etanol seco (5 ml). A mistura reaccional foi em seguida arrefecida e deitada numa mistura de solução aquosa diluída de ácido clorídrico (IN) e acetato de etilo. 0 extracto de acetato de etilo foi lavado com solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio, seca (MgSO₄), filtrada evaporada em vazio para se obter um óleo. A cromatografia em síli ca eluindo em hexano/acetona (2:1) produziu em seguida a Z-oxima (7 mg) seguida da E-oxima (10 mg).

EM (FAB); (E- e Z-oximas) 981 [M+Rb]⁺;

829 [M-Na]⁺;

807 [M+H]⁺;

(CDCl₃)<f :

E-oxima 197,1 (C2); 169,3 (CIO); 165,3 (C3); 162 (C16);

138,1 (C19); 132,7 (C29); 128 (C31); 125,8 (C18); 97,3 (Cl); 84,2 (C34); 39,7 (C13); 39,1 (C5); 24,3 (C8); 21,4 (C6); 21 (C7); 12 (C44); 9,9 (C39);

Z-oxima 169,5 (C2);169 (C10);165,3 (C3);161,7 (C16); 138 (C19); 132,6 (C29); 128 (C31); 125,8 (C18); 97,3 (Cl);

84,2 (C34); 9,5 (C39)

b) (14R)-Hidroxi-12-r 2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-l-metilvinill-24,26-dimetoxi-18-etil-13,20,22,28-tetrametil-11,15,29-trioxa-4,16-diazatetraciclo[23,3,1,l¹⁴',

ο⁴'⁹1triaconta-16.19-dieno-2,3.10-triona

A uma solução agitada e arrefecida (5sc) das E- e Z-oximas preparada de acordo com o processo descrito na fase (a) (250 mg) em diclorometano anidro (25 ml) em atmosfera de azoto foi adicionado em porções o reagente de sulfurano de Martin até toda a E-oxima ter sido consumida (o que foi detectado por cromatografia de camada fina. A mistura reaccional foi em seguida arrefecida e foi adicionado isopropanol (3 ml) , e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. 0 extracto orgânico foi em seguida separado, seco (MgSO₄), filtrado e evaporado em vazio para se obter um óleo. A cromatografia em sílica eluindo com hexano num gradiente crescente de acetato de etilo produziu em seguida, para além da Z-oxima recuperada (30 mg) , o composto do título sob a forma de uma espuma (20 mg) .

¹³C RMN (CDC1₃) cf : 196,6 (C2); 169,3 (CIO); 164,6 (C3) ; 160,8 (C17); 137,5 (C20); 126,1 (C19); 96,8 (Cl); 82,9 (C14); 77,8 (C12); 75,4 (C24); 56,5 (C9); 48,3 (C21);

EM (FAB): 874 [M+Rb]⁺;

772 [M-OH]⁺

Exemplo 4 (14R)-18-Alil-l-hidroxi-12-Γ2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinill-24,26-dimetoxi-13,20,22,28-tetrametil-ll,15,29

-trioxa-4,16-diazatetraciclo-r23,3,1,l¹⁴'¹⁷,0⁴'⁹1triaconta-16 19-dieno-2,3,10-triona 16-N-óxido

Foi adicionado tetraacetato de chumbo (0,32 g) a uma solução de 17-alil-l,14-dihidroxi-12-[2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinil]-23,25-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-11,28-dioxa-4-azatriciclo-[22,3,1,O⁴,⁹]octacos-18-eno-2,3,10,16-tetraona C16 oxima (tal como preparada no Exemplo 25, WO 89/05304 (0,5 g) em diclorometano anidro (2 ml) em atmosfera de azoto. Após agitação durante 5 minutos à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio, e a mistura reaccional foi extraída com éter dietílico. 0 extracto orgânico foi lavado com uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio

seco (MgSO^) filtrado e evaporado em vazio para se obter um óleo.A cromatografia em sílica eluindo com hexano num gradiente crescente de acetona produziu o composto do título sob a forma de uma espuma (220 mg).

¹³C RMN (CDCI3) : 196,7 (C2); 168,6 (CIO); 166,4 (C3);

138,2 (C19); 134,9 (C41); 131,5 (C29); 128,4 (C31);119,l (C18); 117,9 (C16) : 116,9 (C42); 98,8 (Cl); 83,9 (C34) ; 57,4 (C9); 48,1 (C20); 38,7 (C13); 38,5 (C5);32,4 (C26) ; 31,1 (C36); 30,3 (C37); 27,8 (C21); 26,3 (C8);24,3 (C6);

5,6 (C39)

EM: 901,4 [M+Rb]⁺;

839.7 [M+Na]⁺;

817.7 [M+H]⁺;

799.7 [M+H-H₂O]⁺

Exemplo 5

O composto do título do Exemplo 1 foi ensaiado segundo o processo de ensaio A anterior, e a concentração pretendida para inibir a resposta a 50 % (IC^q) revelou ser de 6 x 10¹⁰M.

Claims

- ia Processo para a preparação de um com posto com a fórmula I ir

CH, ! * o.

_(CH? l '

A, i° \ ⁰Lr' ΟΪΪ

CH»

CH oí;h₃ cch₃ na qual

R¹ representa OH ou OCH₃,

R² representa OH ou H,

R³ representa metilo, etilo, propilo ou alilo, X representa 0, (H,OH) ou (H,H), m representa 0 ou 1, ou de um seu derivado farmacêuticamente aceitável, desde que quando n for 1, então R³ é alilo ou propilo, caracterizado por se ciclizar um composto com a fórmula II, na qual

1 O *3

R , R , R , X e n são como acima definidos, ou um seu derivado farmacêuticamente aceitável, pela acção de agente oxidante adequado, e quando necessário converter-se o composto com a fórmula I resultante num seu derivado farmacêuticamente aceitável.

_ ₂â Processo de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por se obter um composto em que R¹ representa OCHg.

_ ₃a _

Processo de acordo com as reivindica ções 1 ou 2 caracterizado por se obter um composto em que R²representa OH.

- 43 Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado por se obter um composto em que X representa 0.

- 5a Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado por se obter um composto em que m representa 1.

- 6ã Processo para a preparação de uma composição farmacêutica caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um composto com a fórmula I ou um seu derivado fãrmaceuticamente aceitável quando preparado de acordo com a reivindicação 1 em associação com um adjuvante, diluente ou veículo fãrmaceuticamente aceitável.

A requerente reivindica as prioridades dos pedidos de patente britânicos apresentados em 18 de Agosto de 1990 e em 2 de Fevereiro de 1991, sob os n^s.

9018196.7 e 9102305.1, respectivamente.