PT98321A - Processo para a preparacao de uma dispersao de lipossomas injectavel - Google Patents

Description

O presente invento diz respeito a um processo novo, vantajoso, para a produção de uma composição para dispersão injectável de lipossomas. Ela pode ser empregada, essencialmente para a administração intravenosa.

As composições para dispersão de lipossomas injectáveis, que contêm diversos ingredientes activos e fosfolipidos, tais como a lecitina e a fosfatidil-serina como adjuvantes, encontram-se descritas em numerosas publicações e têm sido já experimentadas clinicamente. Para se esclarecer a técnica do antecedente, faz-se referência ao Pedido de Patente Europeia NQ 178 624 no qual se descreve uma composição para dispersão de lipossomas contendo 1,2-di-(9-cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfatidil-S-serina de sódio, puridicada, sintética, e l-n-hexadecanoíl-2-(9-cis--octadecenoíl)-3-sn-fosfatidilcolina, como fosfolipidos, e N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglutarninil-L-alanina-2--(1,2-dipalmitoíl-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)etilamida como o ingrediente activo encapsulado. Esta composição para dispersão pode ser administrada, de entre diversas maneiras intravenosamente.

As composições para dispersão de lipossomas injectáveis não obstante, são desvantajosas, visto que, como uma fase preliminar, elas exigem a produção de uma composição seca, por exemplo o liofilisato ou um residuo em pelicula que é dispersa em água, para se formarem os lipossomas, no próprio local, antes da sua administração.

De acordo com a Memória Descritiva da patente NQ 4 687 661, dos Estados Unidos da América, as composições para dispersão de lipossomas podem, também, ser produzidas sem a fase preliminar da composição \ -4-

seca, dissolvendo os componentes de líquidos em solventes orgânicos, não voláteis, seleccionados, tais como o glicerol ou o etileno de glicol e aquecendo e dispersando a solução orgânica em água. Devido ao conteúdo elevado de solventes orgânicos aos possíveis produtos de degradação térmica, estas soluções são inaceitáveis, fisiologicamente, para soluções para injecção, em particular para a administração intravenosa. 0 objectivo do invento presente é produzir uma composição para dispersão de lipossomas injectjá vel misturando os componentes, ao mesmo tempo que se evita a fase preliminar da composição seca, escolhendo-se um solvente não tóxico, adequado farmacêuticamente. Este objectivo é alcançado pelo invento presente, que diz respeito a um processo novo, vantajoso, para a produção de uma composição para dispersão de lipossomas injectável. 0 invento diz respeito a um processo para a produção de uma composição para dispersão de lipossomas injectável, que compreende: a) um fosfolípido da fórmula

CH 2-O-Ri 3CH2—0— p—O ίθ

R2—o —CH e/Ra (CnH2n)-N-Rb

V (I), -5- Η

em que R-^ é um acilo de C^q 2o * R2 ® hidrogénio ou um acilo C10-20 ' Ra' Rb e Rc s®° hidrogénio ou um alquilo ^, e n é um número de dois a quatro, combinado, facultativamente com um suplemento de b) um fosfolípido da fórmula > ÇH2—o—R, R4—o—2ch (H), 4h o 11 H2~0—P—o—Rc le

em que é um acilo ciq_20< R4 ® hidrogénio ou um acilo C10-20 e R5 ® hidrogénio, um alquilo C^_4, um alquilo C1_5 substituído por carboxi, um alquilo C2_,_ substituído por hidroxi, um alquilo C2_5 substtiuido por carboxi e hidroxi ou um alquilo C2_,_ substituído por carboxi e amino. c) o ingrediente activo a ser injectado ou uma combinação de ingredientes activos, e -6-

d) um veiculo liquido, farmaceuticamente aceitável e feculta-tivamente, outros adjuvantes adequados às composições para injecção.

O processo é caracterizado por a solução, ou a suspensão, dos componentes a) e c), ou a), b) e c) no ácido acético concentrado ser dispersa no veiculo liquido c) e a composição para dispersão, obtida deste modo, ser levada a um grau de pH, fisiologicamente aceitável, e facultativamente, os adjuvantes adequados para as composições para injecção serem adicionados e, facultativamente uma parcela dos lipcssomas, que têm uma dimensão do diâmetro desejada, ser separada. A composição para dispersão

de lipossomas vantajosa, que pode ser produzida por este processo, é livre de partículas sólidas e de conjuntos de lípidos relativamente grandes, é estável à temperatura ambiente durante pelo menos diversas horas, é reproduzivel no que respeita â proporção da quantidade dos componentes é toxicologicamente aceitável e por isso, é particularmente adequável à administração intravenosa aos entes humanos. 0 processo tem, em particular a vantagem de que o ácido acçtico, solvente orgânico, pode ser transformado no sal de acetato, fisiologicamente aceitável, depois da dispersão por adição de uma base aquosa diluida, tal como uma solução de hidróxido de sódio diluída. No caso de uma neutralização completa, a solução da injecção está, por isso, livre de solventes orgânicos, e não constitui um problema para a administração intravenosa. A fase complicada da remoção do solvente orgânico, da composição para dispersão, torna-se desnecessária. -7-

Os termos, mencionados no precedente e no que se segue, são definidos, de preferência como se segue no contexto da descrição do invento: A composição para dispersão de lipossomas injectável pode ser administrada parenteral-mente, e de preferência intravenosamente, mas também intramuscularmente, por exemplo para a formação de um depósito ou subcutaneamente por exemplo para a administração de anestésicos locais. A composição para dispersão

de lipossomas injectável contém liposdomas na modalifede de lipossomas unilaminares, de preferência multilaminares grandes e pequenos, que abrangem um conjunto de camadas duplas dos fosfolipidos de fórmula I, e, se for apropriado da fórmula II tendo um espaço interno e uma forma esférica (unilaminar) ou que abrangem diversas disposições de camadas duplas concêntricas dos fosfolipidos (I) e, se for apropriado (II), tendo um espaço interior e uma forma esférica (construção "semelhante à pele de cebola" das camadas duplas ou de memebranas multilaminares). A ordem de grandeza dos lipossomas é variável entre 1,0 x 10 até _5 cerca de 1,0 x 10 m. O emprego terapêutico de lipossomas como veículos de ingredientes activos dos diversos tipos é conhecido. Os lipossomas têm, além disso, sido propostos como veículos de proteínas, por exemplo de anticorpos ou de enzimas, de hormonas, de vitaminas ou de genes, ou para fins analíticos como veículos de compostos classificados

As composições para dispersão injectável de lipsomas encontram-se descritas na revista de Gregoriadis G. (editor) Tecnologia de Lipossomas Volume -8-

II, Incorporação de Medicamentos, de Proteinas e de Material Genético, Imprensa de CRC, 1984. Na revista de Knight, C.G. (editor) Lipossomas: Sobre a Estrutura Fisica até as Aplicações Terapêuticas Elsevier 1981, as \antagens de uma tal modalidade de administração, baseada nos lipossomas, encontram-se resumidas no capitulo 16, na pág. 166. A expressão "inferior", utiliza da em ligação com os radicais orgânicos, por exemplo alquilo inferior, âlquileno inferior, alcoxi inferior, alcanoílo inferior, etc., designa que tais radicais orgânicos se não for expressamente definido de modo contrário, contêm até e incluindo 7, e de preferência até e incluindo 4 átomos de carbono. A nomenculatura dos fosfoli-pidos das fórmulas I e II, e a numeração dos átomso de carbono seguem as recomendações (nomenculatura sn, numeração estereoespecifica) estabelecidas na Revista Europeia de Bioquimica N2 79, pág. 11 a 21 (1977) "Nomenculatura de Lípidos" pela Comissão de IUPAC-IUB sobre a Nomenculatura Bioquimica (CBN).

Num fosfolípido da fórmula I, R^ e R2 com as designações de acilo ^^q_20 s^° Prefe" rência alcanoílos de cadeia linear com um número par de átomos de carbono, e alquenoílos c^q_2q de cadeia linear com uma ligação dupla e um número par de átomos de carbono. R^ e R2 de alcanoílo C^q_2q de cadeia linear, com um número par de átomos de carbono são por exemplo, n-dodecanoílo, n-tetradecanoílo, n-hexadeca noílo ou n-octadecanoílo. -9-

e R2 de alquenoílo c^q-20 de cadeia linear, com uma ligação dupla e com um número par de átomos de carbono são, por exemplo β-cis-, 6-trans-, 9--cis ou 9-trans-dodecenoílo, -tetradecenoílo, -hexadecenoílo -octadecenoílo ou -icosenoílo em particular 9-cis-octadece-noílo (oleoilo).

Num fosfolipido da fórmula I n é um número inteiro de dois até quatro de preferênia dois. 0 grupo da fórmula -(cnH2n^ ® um al(3u;^eno não ramifica do ou ramificado por exemplo 1,1-etileno, 1,1-, 1,2-ou 1,3-propileno ou 1,2-, 1,3- ou 1,4-butileno, sendo preferido 1,2-etileno (n=2).

Os fosfolípidos da fórmula I são, por exemplo cefalinas que se desenvolvem naturalmente em que R , R, e R são" hidrogénio, ou lecitinas que se

3 D O desenvolvem naturalmente em que R R, e R são o metilo, por exemplo cefalina ou lecitina de favas de soja, do cere bro bovino, do figado bovino ou da gema de ovo, tendo diferentes ou idênticos grupos acilo R^ e R2 ou suas misturas .

Os fosfolípidos puros essencialmente e sintéticos, da fórmula I, tendo diferentes ou idênticos grupos acilo R^ e R2, são os preferidos. 0 termo fosfolipido "sintético" da fórmula I designa os fosfolípidos que têm uma composição uniforme, no que respeita a R^ e R2. Tais fosfoli-pidos sintéticos são, de preferência as lecitinas e as cefalinas designadas no precedente, cujos grupos acilo R-j^ e R2 têm uma estrutura definida e são deriados de um ácido gordo definido, tendo um grau de pureza mais elevado do que cerca de 95%. R^ e R2 podem ser idênticos ou diferentes e insaturados ou saturados. R^ é de preferência, saturado por exemplo n-hexadecanoílo, e R2 é insaturado, por exemplo 9-cis-octadecenoílo (=oleoilo). 0 termo fosfolípidos "desenvolvendo-se naturalmente11 da fórmula I designa os fosfoli-pidos que, no que respeita a R1 e R2, não têm uma composição uniforme. Tais fosfolípidos naturais são de igual modo lecitinas e cefalinas, cujos grupos acilo R1 e R2 são estruturalmente indefeniveis e são derivados de misturas de ácidos gordos desenvolvendo-se naturalmente. A exigência fosfolipido "essencialmente puro" designa um grau de pureza de mais do que 95% (em peso) do fosfolipido (I), o qual pode ser verificado por processos analiticamente adequados, por exemplo pela cromatografia de papel.

Os fosfolípidos, essencialmente puros, sintéticos, particularmente preferidos, da fórmula I, são aqueles em que R^ tem a designação de alcanoílo c^q-20 de cadeia linear tendo um número de par de átomos de carbono, e em que R2 tem a designação de alquenoílo C^q_2q de cadeia linear tendo uma ligação dupla e um número par de átomos de carbono, e em que R , R^ e Rc são metilo e n é dois.

Num fosfolipido, particularmente preferido, da fórmula I, R^ é n-dodecanoílo, n-tetra-decanoílo, n-hexadecanoílo ou n-octadecanoílo e R2 é 9-cis-dodecenoílo, 9-cis-tetradecenoílo, 9-cis-hexadecenoí-lo, 9-cisoctadecenoílo ou 9-cis-icosenoílo. R2 é tetradece-noílo, 9-cis-hexadecenoílo, 9-cis-octadecenoílo ou 9-cis- -icosenoílo, R , R, e R são metilo e n é dois. ' a' b c -11

Um fosfolipido, muito particularmente preferido da fórmula I, é uma l-n-hexadecanoíl-2-- (9-cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfatidilcolina sintética, tendo uma pureza de mais de 95%.

Num fosfolipido da fórmula II, e são definidos com a mesma designação acilo de c^q_2q e que R-^ e R£ num fosfolipido da fórmula I.

Os grupos acilo e podem ser diferentes ou idênticos.

Rg, tendo a designação alquilo Ci 4 é, por exemplo, o metilo ou o etilo. R,-, tendo as designações alquilo substituído por carboxilo, alquilo C2-5 substi- tuido por hidroxilo ou alquilo ^2-5 substituído por carboxi ou hidroxi, são por exemplo 2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxi--n-propilo, carboximetilo, 1- ou 2-carboxietilo, dicarboxi-metilo, 2-carboxi-2-hidroxietilo ou 3-carboxi-2,3-dihidroxi--n-propilo. Rçj tendo a designação alqui-1° substituído por carboxi e amino é, por exemplo 3-amino-3-earboxi-n-propilo ou 2-amino-2-carboxi-n-propilo e, de preferência, 2-amino-2-carboxietilo. Os fosfolipidos da fórmula II, contendo estes grupos, podem existir na forma de um sal, por exemplo como o sal de sódio ou de potássio.

Os fosfolipidos, essencialmente puros, sintéticos, da fórmula II, tendo os grupos acilo R^ e R4 diferentes ou idênticos, são os preferidos. -12-

As definições, estipuladas para os fosfolipidos da fórmula I, mencionadas no precedente aplicam-se no que respeita à definição de "sintético" e à exigência de "essencialmente puro".

Num fosfolipido, particularmenti preferido, da fórmula II, e têm a acepção alquenoílo Cio 20 óe cadeia linear, com uma ligação dupla e um número par de átomos de carbono. R5 é 2-amino-2-carboxietilo. )

No fosfolipido preferido da fórmula II, R^ e R^, tendo a acepção alquenoilo 20 com uma ligação dupla e um número par de átomos de carbono são, de preferência, 9-cis-dodecenoílo, 9-cis-tetradecenoílo 9-cis-hexadecenoílo, 6-cis-octadecenoílo, 6-trans-octadece-noílo, 9-cis-octadecenoílo, 9-trans-octadecenoílo, 11-cis--octadecenoílo ou 9-cis-icosenoílo.

Num fosfolipido , particularmente preferido, da fórmula II, R^ e R^ têm acepções idêntica por exemplo 9-cis-dodecenoílo, 9-cis-tetradecenoílo, 9dis--hexadecenoílo, 9-cis-octadecenoílo ou 9-cis-icosenoílo.

Um fosfolipido, muito particularmente preferido, da fórmula II, é a 1,2-di(9-cis-octade-cenoíl)-3-sn-fosfatidil-S-serina de sódio sintética, com uma pureza de mais de 95%. os nomes, dados em parênteses são também, os habituais para os radicais de acilo, nos fosfolipidos das fórmulas I e II: -13- *

9-cis-dodecenoílo(lauroleoílo ) , 9-cis-tetradecenoílo (miris-toleoílo), 9-cis-hexadecenoílo (palmitoleoílo) , 6-cis-octa-decenoílo (petroseloílo), 6-trans-octadecenoílo(petroselaí-doílo), 9-cis-octadecenoílo(oleoílo ), 9-trans-octadecenoílo (elaidoílo), 11-cis-octadecenoílo (vacenoílo ),9-cis-icosenoílo (gadoleoílo), n-dodecanoílo(lauroilo), n-tetradecanoílo (miristoilo), n-hexadecanoflo(palmitoílo) , n-octadecanoílo (estearoílo), n-icosanoílo(araquidoílo). )

Os ingredientes activos lipo- filicos, cristalinos se adequados solúveis em água, mas tambái parcamente solúveis, que podem ser administrados por meio de soluções para injecção, são essencialmente adequados como o ingrediente activo injectável, ou como uma solução de ingredientes activos.

Os ingredientes activos, parcamente solúveis, encontram-se existentes, por exemplo, como sais, aceitáveis farmaceuticamente solúveis em água por exemplo como o bromohidrato, o cloridrato, o mesilato o acetato, o succinato, o lactato, o tartarato, o fumarato o sulfato, o maleato, etc.

Os ingredientes activos, farmaceuticamente adequados são, por exemplo os agentes anti--inflamatórios, por exemplo a indometacina, o ácido acetil-salicílico, o cetoprofeno, o ibuprofeno, o ácido mefenâmico a dexametasona, o sulfato de dexametsona de sódio, a hidrocortisona ou a prednisolona, os dilatadores coronários por exemplo a nifedipina, o dinitrato de isosorbida, a nitro-glicerina, a diltiazema, o trapidilo, o dipiridamol ou o dilazepo, as prostaglandinas, por exemplo a prostaglandina

El' E2 ou F2 ' os vasod;i-lata^ores / Por exemplo o ifenpro-dilo, o maleato de cinepazeto, o ciclandelato, a cinarizina ou a pentoxifilina, os antibióticos, por exemplo a ampicili-na, a amoxicilina, a cefalexina, a cefradina, a cefroxadina, -14-

)

o cefactor, a critromicina, a fcacampicilina, a minociclina ou o cloramfenicol, os agentes antiespasmódicos, por exemplo a propantelina, a atropina ou a escopolamina, os anti-tossivos e os antiasmáticos, por exemplo a teofilina, a aminofilina, a metilefredina, o procatecol, o trimetoquinol a codeína, o clofedanol ou o dextrometorfano, os diuréticos por exemplo a furosemida ou a acetazolamida, os agentes relaxadores dos musculos, por exemplo o carbamato de clor-fenesina, a tolperisona, a eperisona ou o baclofeno, os tranquilisadores débeis, por exemplo o oxazolamo, a diazepame o clotiazepama, a medazepama, a temazepama ou a fludiazepama os tranquilisadores enérgicos, por exemplo a sulpirida, a clocapramina, ou a zotepina, os beta-bloqueadores, por exemplo o pindobl, o propanodol, o cartelol, o oxprenolol, o metoprolol ou o labetalol, os antiaarritmicos, por exemplo a procainamida, a disopiramida, a ajimalina ou a quinidi na, os agentes antiartriticos tais como o alopurinol, os anti^ coagulantes tais como a ticlopidina, os antiepilépticos por exemplo a fenitoína, o valproato ou a carbamazepina, os antihistaminicos, por exemplo a clorfeniramina, a cle-mastina, a mequitazia, a alimemazina, a ciproheptadina, os agentes contra a náusea e a vertigem, por exemplo o defeni-dol, a metoclopramida, a domperidona ou a betahistina, os agentes hipotensivos, por exemplo a reserpina, a rescina-mina, a metildopa, a prazosina, a clonidina ou a budralazi-na, os simpatomimétricos por exemplo a dihidroergotamina, o isoproterenol ou a etilefrina, os expectrorantes, por exemplo a bromhexiH, a carbocisteina, a L-etilcisteína ou a L-metilcisteína, os antibióticos orais, por exemplo a glibenclamida ou a tolbutamida, e os agentes cardiovasculares por exemplo a ubidecarenona ou aadenosina.

Os antihipercalcaémicos preferidos são os da série de calcitonina, por exemplo o salmão preparável sinteticamente a calcitonina humana e porcina e a composição de calcitonina de enguia por exemplo a 1,7-Asu-calcitonina de enguia (elcatonina) ou os imuno-moduladores lipofilicos ou hidrofilicos da série de péptidos de muramilo, por exemplo, a N-acetil-D-muramil-L-alanil-D--isoglutaminil-L-alanina-2-(1, 2-dipalmitoíl-sn-glicerol--3-hidroxifosforiloxi )etilamida, a (C^*-L-alanina-2-(1,2--dipalmitoíl-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)etilamida do ácido N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-glutâmico de disódio a N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglutamina de sódio, a N-acetildesmetil-muramil-L-alanil-D-isoglutamina de sódio, o éster de N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-glutamina-_oC_n-butilo, a N **-(N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglu-taminil)-N V-estearoíl-L-lisina ou a 6-0- estearoíl-N-ace-til-D-muramil-L-alanil-D-isoglutamina. 0 veiculo liquido d) aceitável farmacêuticamente é água, o qual tem sido submetido a determinado tratamento livre de microorganismo e de pirogénio, de acordo com as directivas das farmacopeias nacionais.

Os componentes a), b) e c) ou a) e c) estão contidos no veiculo liquido d) como lipos-somas de um tal modo que nenhuns sólidos ou nenhuns agregados de sólidos, tais como as micelas, se modificam durante vários dias a algumas semenas, e o liquido limpido ou possivelmente ligeiramente opalescente, contendo os componentes mencionados, se adequados depois da filtração pode ser administrado como uma solução para injecção de preferência intravenosamente.

Os adjuvantes não tóxicos, que podem ser empregados para as composições para injecção podem existir no veiculo liquido d) por exemplo os adjuvantes solúveis em água, que se tornam necessários para a produção de situações isotónicas, por exemplo aditivos -16-

iónicos tais como o cloreto de sódio, ou aditivos não ió-nicos (agentes de formação da estrutura) tais como o sorbi-tol o manitol ou a glucose, ou os estabilizadores solúveis em água, para a composição para a dispersão de lipossomas, tais como a lactose, a frutose, ou a sacarose. Estes aditivos por exemplo o cloreto de sódio ou o manitol, encontram--se em particular, existentes em quantidades descritas no precedente, que se tornam necessárias para a produção de situações isotónicas, nas soluções para a injecção.

Em complemento dos auxiliares

solúveis em água, os agentes de emulsificação ou de humedecimento que podem ser empregados para as composições liquidas farmacêuticas, podem existir no veiculo liquido, em particular os agentes de emulsificação, tais como o ácido oleico os surfactantes não iónicos do tipo de éster de polihidro-xi álcool de ácido gordo, tal como o monolaurato, o oleato, o estearato ou o palmitato, de sorbitano, o triestearato ou o trioleato de sorbitano, os auxiliares de polioxietileno dos éteres de álcool de polihidroxi de ácidos gordos, tais como o monolaurato, o oleato, o estearato, o palmitato o triestearato ou o trioleato, de sorbitano de polioxietileno, os ésteres de ácidos gordos de polietilenoglicol, tais como o estearato de polioxietilo, o estearato 400 de polieti-leno glicol e estearato 2.000 de polietileno glicol, em particular os polímeros do bloco de óxido de etileno/óxido (R) de propileno do tipo Pluronic (Wyandotte Chemical Corp. ( r ) ou Sinperonic (ICI). O ácido acético concentrado tem um conteúdo de mais do que 90% (em peso) sendo a água o conteúdo restante em peso. O ácido acético purificado concentrado, tendo um conteúdo de mais do que 95% em particu lar mais do que 99% é o preferido, e é conhecido sob o nome trivial de ácido acético cristalizado.

Dependente da solubilidade dos componentes a) e c), ou a) b) e c), no ácido acético concentrado, uma solução se forma. Ela é em seguida, dispersa no veiculo liquido d), ao qual, se for desejado, os auxiliares adequados para as composições para injecção se tem adicionado . A composição para dispersão ela própria, é realizada, por exemplo, vibrando-se (por exemplo um misturador de vórtice) ou agitando o veiculo liquido. A formação dos lipossomas, que podem ser grandes, pequenos, unilaminares ou multilaminares, realiza-se espontaneamente isto é, sem fornecimento adicional de energia do exterior e a um ritmo elevado. 0,1 a 50 por cento, em peso (em relação ao peso total da composição para dispersão aquosa) de preferência 2 a 20 por cento, da solução ou da composição para dispersão do ácido acético podem ser dispersos na fase aquosa.

Os componentes mencionados podem, também, ser dispersos, empregando-se um homogenisador de elevada pressão, por exemplo como o descrito em Pharm. Ind. 52, NQ 3 (1990) nas páginas 343 a 347, e como um resultado pode produzir-se uma composição para dispersão de lipossomas, particularmente uniforme. A dispersão é levada a efeito a temperaturas inferiores a cerca de 36SC e, de preferência, à temperatura ambiente. Se for apropriado, o processo é levado a efeito com arrefecimento e/ou sob uma atmosfera de gás inerte, por exemplo uma atmosfera de azoto ou de argon. Os lipossomas obtidos são estáveis na fase aquosa durante um tempo muito longo (até várias semanas ou meses). -18-

A dimensão dos lipossomas formados depende, entre outros factores, da quantidade do ingrediente activo e dos componentes lipidos, e da sua proporção de misturação e da sua concentração na composição para dispersão aquosa. Deste modo, as parcelas aquosas, com um conteúdo elevado de pequenos, ou grandes, lipossomas, podem ser produzidas, aumentando-se, ou reduzindo-se a concentração dos componentes lipidos individuais. > A dimensão e a estrutura (multi-laminar ou unilaminar) dos lipossomas formados é, também dependente da escolha do processo em questão. Agitando-se ou vibrando, por exemplo, com os vibradores convencionais providos com um propulsor ou pá, ou com um vibrador magnético, as composições para dispersão são obtidas com um conteúdo elevado de lipossomas grandes multilaminares. Um aumento na frequência de vibração, ou mudando-se para os misturadores de fase, tendo potências elevadas de corte, dá origem a um aumento no conteúdo de lipossomas pequenos, multilaminares. o tratamento com as ondas ultrassónicas dá erigem a um conteúdo elevado de lipossomas unilaminares na composição para dispersão.

As composições para dispersão aquosa de reacção ácida, são de preferência, providas com um tampão para pH 7,0 até 7,8 de preferência 7,2 até 7,4. as soluções providas com um tampão, aceitáveis farmaceutica-mente podem, de preferência, ser empregadas para este efeito cuja produção encontra-se descrita nas diversas farmacopeias nacionais, por exemplo na farmacopeia Europeia, dos Estados Unidos da América, Alemão ou Inglesa. A composição para dispersão pode, também ser neutralizada por adição de uma base aquosa, diluida aceitável farmaceuticamente por exemplo uma solução diluida de hidróxido de sódio. A composição para dispersão é habitualmente neutralizada com pH simultâneo de controlo.

Se for adequado, a composição para dispersão é produzida até o volume necessário para a injecção com água esterilizada, livre de microorganismos e de pirogénio. A composição para a injecção pode ser administrada directamente, por exemplo subcutâneamente, e de preferência intravenosamente.

Uma distribuição de dimensão particularmente uniforme, dos lipossomas pode ser obtida pelo pós-tratamento da composição para dispersão de lipossomas, por exemplo pela irradiação acústica com ultrassons, ou pela extrusão através de filtros de poros uniformes (por (R) exemplo Nucleoporo ). A separação e o isolamento de uma parcela de lipossomas grandes, de uma parcela contendo lipossomas pequenos, se de todo fossem necessários, são levadas a efeito por meio de processos de separação convencionais, por exemplo por filtração de gel, ou por ultrafil- (R) tração, por exemplo empregando-se Sepharose 4B ou (R)

Sephacryl (Farmacia SE) como veiculos, ou pela sedimentação dos lipossomas no ultracentrifugador, por exemplo empregando-se um campo gravitacional de 160.000 x g. 0 sedimento dos lipossomas por exemplo, depois de várias horas, por exemplo cerca de três horas de centrifugação no campo gravitacional, enquanto os lipossomas pequenos permanecem dispersos e podem ser decantados, uma separação completa dos lipossomas grandes, dos lipossomas pequenos, é obtida, depois de uma centrifugação por diversas vezes.

Em todos os lipossomas na parce- —8 la aquosa, tendo um diâmetro superior cerca de 6,0 x 10“ e os componentes não encapsulados em excesso, os lipidos dispersos que se encontram existentes, em agregados de peso molecular elevado, podem ser separados, em particular por filtração de gel, e uma composição para dispersão aquosa, contendo uma parcela de lipossomas, com uma dimensão relativamente uniforme, pode, deste modo, ser preparado. A composição resultante de lipossomas e o seu conteúdo, na parcela aquosa, pode ser analisada de uma maneira conhecida "per se" aplicando-se diversos processos analíticos, fisicos, por exemplo empregando-se protótipos de fractura por congelamento e secções delgadas no microscópio electrónico ou por difracção de raio X, pela disseminação de luz dinâmica pela determinação da massa do filtrado no ultracentrifugador analítico e essencialmente pela espectroscopia, por exemplo pelo espectro 1 13 31 da ressonância magnética nuclear ( H, Ce P). A dispersão de liposomas pode ser administrada directamente, mas por secagem por congelamento pode, também, ser transformada num liofilisato, que é reconsttiuido pelo volume de injecção pretendido, por adição de água imediatamente antes da administração. 0 invento diz respeito, essencialmente a um processo para a produção de uma composição para dispersão de lipossomas, administrável intravenosamente que compreende: a) a l-n-hexadecanoíl-2-(9-cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfati-dilcolina, (I), essencialmente pura, sintética se adequada combinada com b) a l,2-di-(9-cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfatidil-S-serina) de sódio (II), essencialmente pura sintética, c) o ingrediente activo, a ser administrado intravenosamente e d) um veiculo liquido, aceitável farmaceuticamente, e se for adequado auxiliares, apropriados para as composições para injecção. 0 invento diz respeito, em particular a um processo para a produção de uma composição para dispersão de lipossomas, administráveis intravenosamente que compreende: a) uma l-n-hexadecanoíl-2-(9-cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfa-tidilcolina (I), essencialmente pura, sintética, se adequada combinada com b) uma 1,2-di-(9-cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfatidil-S-serina de sódio (II) essencialmente pura, sintética c) uma carbamazepina, uma calcitonina humana sintética, ou N-acetil-D-muramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina--2-(1,2-dipalmitoíl-sn~glicero-3-hidroxifosforiloxi) etilamida, e d) um veiculo liquido aceitável farmaceuticamente, e se forem adequados auxiliares apropriados para as composições para injecção.

Os inventos que se seguem, esclarecem o invento. EXEMPLO 1 250 mg de uma mistura de fosfo-lipidos, contendo l-n-hexadecanoíl-2-(9-cis-octadecenoíl)--3-sn-fosfatidilcolina, pelo menos 95% pura e l,2-di-(9--cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfatidil-S-serina, pelo menos 95% pura, numa proporção em peso de 7:3, e 1 mg de N-acetil D-muramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1,2-dipal-mitoíl-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)etilamoida são dissolvidos em 0,25 ml de ácido acético cristalizado num balão de fundo redondo. Adiciona-se com agitação, uma quantidade equimolar de uma solução de NaOH de 2N (=2,075 ml). Uma composição para dispersão de lipossomas se forma, que se completa até o volume desejado (50 ml) com uma solução de tampão adequada (pH = 7,2). A solução de tampão é escolhida de tal modo que um pH da composição para dispersão de cerca de 7,2 até 7,4 se obtenha e uma osmolaridade de cerca de 290 mosmoles. A composição para dispersão pode ser liberta de microrganismos, num autoclave antes da administração. EXEMPLO 2 80 mg de l-n-hexadecanoil-2-li-so-3-sn-fosfatidil-colina pura pelo menos 95%, 1,2-di(9-cis--octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-etanolamina pura pelo menos 95% e 80 mg de ácido oleico, em conjunto com 15 mg de carba-mazepina são pesados num frasco pequeno de vidro. Esta mistura é dissolvida em 0,5 ml de ácido acético cristalizado com agitação. Uma quantidade equimolar de uma solução de NaOH de 2N (4,15 ml) é adicionada, com agitação. Uma composição para dispersão de liposomas se forma. As outras fases são conduzidas de um modo análogo ao do Exemplo 1. EXEMPLO 3 250 mg da mistura fosfolipida de acordo com o Exemplo 1, são dissolvidos em 250 yl de ácido acético cristalizado, contendo 310 yg de caleitonina humana sintética, num balão de fundo redondo. A solução é tratada com 2,08 ml de uma solução de NaOH de 2 N com agitação e homogeneizada a um grau 10 empregando-se um dispositivo de vórtice. A composição para dispersão de liposomas formada é diluida a um volume de 20 ml, por adição de água livre de microorganismos e livre de pirogénio, para injecção. Esta composição para dispersão é ·. adequada para administração intramuscular .

Claims (2)

1. R Ε I V INDICAÇÕES: li. - Processo para a produção de uma dispersão de lipossomas injectável, compreendendo a) um fosfolipido da fórmula CH, R2—O—2CH I 3ch 0 2—0—p—0!© 0/R® (CnH2n)—N—Rb V (D, em que é acilo C20-20' R2 ® hidrogénio ou acilo ^g· R&, Rb e Rc s^° hidrogénio ou alquilo C^_4 e n é um número inteiro de um a quatro, combinado facultativamente, com b) um fosfolipido adicional da fórmula CHo—O—FU R4—o—2CH CH2—0— p—0—R,le l5 . (Π), -25- A

   em que é um acilo C^q ^ * R4 é hidrogénio ou acilo C^q_ -20 e R5 ® hidrogénio, alquilo , alquilo substi tuído por carboxi, alquilo C2_g substituído por hidroxi, alquilo C2_5 substituído por carboxi e hidroxi, ou alquilo C2-5 substituído por carboxi e amino, c) o ingrediente activo a ser injectado ou uma combinação de ingredientes activos e d) um veiculo farmaceuticamente aceitável e, se for apropriado, outros adjuvantes adequados para preparação para injecção, caracterizados por uma solução, ou uma suspensão dos componentes a) e c), ou a), b) e c) em ácido acético concentrado ser dispersa no veiculo liquido d, e a dispersão obtida ser levada a um nivel de pH fisiologicamente aceitável e, facultativamente se adicionarmos adjuvantes adequados para preparações para injecção e, facultativamente se separar uma fracção de lipossomas, tendo uma gama de diâmetros desejada.
2. 2§. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a produção de uma dispersão de lipossomas administrável intravenosamente, compreendendo a) l-n-hexadecanoil-2-(9-cis-octadecenoíl)-3-sn-fosfatidil-colina (16 sintética essencialmente pura se apropriado combinada com b) 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-S-serina de sódio (II) sintética, essencialmente pura, c) o ingrediente activo, a ser administrado intravenosamente e d) um veiculo liquido farmacêuticamente aceitável, e se apropriado adjuvantes adequados para preparações para in-jecção, caracterizado por se levar a cabo o processo mencionado na reivindicação 1. 3ã. - processo de acordo com a reivindicação 1, para a produção de uma dispersão de li-possomas administravel intravenosamente, compreendendo a) l-n-hexadecanoil-2-(9-cis-octadecenoil-3-sn-fosfatidil-colina (I) sintefica, essencialmente pura, se apropriado combinada com b) 1,2-di-(9-cis-octadecenoil)-3-sn-fosfatidil-S-serina de sódio (II) sintética, essencialmente pura c) carbamezepina, calcitonina humana sintética, ou N-acetil -D-muramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1,2-dipal-mitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi)etilamida, e d) um veiculo liquido farmaceuticamente aceitável e, se apropriado, adjuvantes adequados para preparações para injecÇão, caracterizado por se levar a cabo o processo, de acordo com a reivindicação 1. 4 V -27- 4 4§. - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por uma solução ou suspensão dos componentes a) e c) ou a), b) e c), em ácido acético cristalizado ser dispersa no veiculo liquido d), e a dispersão obtida ser levada até um nivel de pH de 7,2 a 7,4.

   Lisboa, 15 de Julho de 1991

   J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficiai da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 10-A 3“ 1200 LISBOA