PT98000B

PT98000B - Metodo de utilizacao de complexos de acido aminofosfonico como agentes produtores de imagens

Info

Publication number: PT98000B
Application number: PT98000A
Authority: PT
Inventors: Jaime Simon; Joseph R Garlich
Original assignee: Dow Chemical Co
Priority date: 1990-06-18
Filing date: 1991-06-17
Publication date: 1998-11-30
Also published as: HU912010D0; JPH06340556A; CA2044737A1; ZA914616B; PT98000A; SG43906A1; AU648315B2; HUT59229A; EP0468634A1; KR920000335A; HU211735B; BR9102490A; AU7846891A; IL98534A0; IE912054A1

Description

presente invento refere-se à utilização de complexos de ácido amínofosfínico macrocíclico como agentes produtores de imagens.

Os complexos de iões metálicos paramagnéticos têm recebido uma atenção considerável ao longo dos últimos cinco anos, especialmente em relação à sua capacidade em aumentar a imagem obtida através de sondas produtoras de imagens de ressonância magnética ÍMRI) em doentes. Os chelantes de maior interesse para esta utilização foram os análogos de aminooarboxilato tais como o ácido dietilenotriaminopentaacético CADTP), o qual é o único farmacêutico MRI comercial disponível nos Estados Unidos TM (marca registada MASNEVIST da Schering). Os metais de maior interesse para utilizações em MRI são iões paramagnéticos de +3 +3 +·? 4-3 gadolínio (GD , de ferro (Fe ) e de manganês (Mn * ou Mn )«

Estes iões reduzem eficazmente a taxas de relaxamento da água em virtude das interacções dipolares fortes com o metal chelado.

Para que um chelato paramagnético seja útil como um agente de contraste MRI, ele deve alterar a taxa de relaxamento da água em vários tecidos, deve ser cineticamente inerte e sair do corpo rapidamente (algumas horas após injecção). Recentemente, o ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-í,4,7,10-tetraacético

TM

ÍADOT) foi introduzido na Europa (marca registada DOTAREM de Guerbet) como um chelato Sd eficaz para aplicações MRI; no entanto, o composto não se encontra disponível nos Estados unidos» Análises sobre os complexos Gd-ADOT podem ser encontradas nas Patentes Norte Americanas 4.877.600 e 4.885.363»

Recentemente, descobriu-se que os chelatos Sd do ácido

1,4,7,10-tetraazac.iclododecano-í ,4,7,10-tetrametilenofosfónico (DOTMP) comportam-se da mesma maneira que o ADOT relativamente às características necessárias para um agente de contraste MRI. Os

chelatos de DOTMP mostram um nível elevado de inércia cinética, apresentam uma biodistribuição muito favorável e aumentam o relaxamento da água.

Além disso, o Pedido de Patente Europeia publicado 375.376 divulga a utilização dos ligantes do presente invento como complexos com nuciidos radioactivos da série lantanido para o tratamento de tumores cálcicos e para o alívio da dor dos ossos. Os complexos mostraram preferência em se ligar aos locais de calcificação, por exemplo, ossos, tumor ósseo metastático e primário e tecido macio calcificado. 0 tecido macio calcificado pode ser uoí resultado de um ataque cardíaco, em que o tecido que é afsctado sofre um processo de calcificação. Estes complexos podem também fornecer o radionuclido à superfície de calcificação sem a necessidade ds ligando em excesso. Deste modo, é possível obter-se uma dose menor do complexo e é também possível uma menor relação de metal para ligando» presente invento refere-se a complexos do ácido aminofosfónico macrocíclico para utilização como agentes produtores de imagens de ressonância magnética (MRI) de animais e a composições e formulações que possuem como ingrediente activo um nuclido paramagnético com um ácido aminofosfónico macrocíclico.

Especificamente, o presente invento refere-se a um método de diagnóstico para utilização na produção de imagens de ressonância magnética de um animal que compreende a administração ao animal de uma composição procuradora de locais de calcificação constituída por um complexo que compreende (í) um ácido aminofosfónico macrocíclico de fórmula;

em que: os substituintes A, .8, Ce D são independentemente hidrogénio, radicais ds bidrocarboneto de 1 a <3 átomos de carbono, ou uma metade com a fórmula

COOH

PO3H2 , or

X* í

—4- c 1

Y'

OH;

e os seus sais fisiologicamente aceitáveis dos radicais ácidos, em que; X, Y ε n são como definidos anteriormente? X' e Y' são independentemente hidrogénio, ou radicais metilo ou etilo? n’ é 2 ou 3, com a condição de pelo menos dois dos referidos substituintes ds azoto serem um grupo que contém fósforo? e C2> pelo menos um nuclido pararoagnético; em que a relação molar de (1) para C2) é de 1s i.

As composições podem ser utilizadas com uma dose inferior e/ου com uma relação inferior de ligando para metal do que as dos agentes MRI procuradores de locais de calcificação.

As presentes composições podem fornecer o nuclido paramagnético especificamente às superfícies de calcificação, com uma relação de ligando para metal igual ou próxima da relação estequiométrica» A característica de especificidade procurada torna um complexo DOTMP particularmente atractivo agente de contraste MRI, devido ao facto deste complexo criar uma forte imagem de contraste de um osso ou de qualquer zona no corpo onde residam tecidos calcifiçados» Por exemplo, a imagem do coração onde se saiba que tenha havido calcificação após um ataque cardíaco»

Além disso, o presente invento também compreende formulações para utilização no método que possuam pelo menos um doCs) nuclidoCs) paramagnéticoCs) dos ácidos aminofosfónicos macrocíclicos de fórmula ÍI) e um seu. veiculo ou excipiente farmaceuticamente aceitável» processo para a preparação destas formulações são bem conhecidos» As formulações são esterilizadas e podem estar na forma de uma suspensão, de uma solução injectável ou de outras formulações adequadas farmaceuticamente aceitáveis» Podem-se empregar meios de suspensão farmaceuticamente aceitáveis, com ou sem ad j uvan tes« presente invento compreende a utilização do complexo, composição ou formulação descrita aqui, em combinação com um ou mais de outros agentes, os quais funcionam também como agentes

MRI.

Surpreendentemente, descobriu-se agora que os complexos do ácido aminofosfónico macrocíclico, por exemplo Gd-DOTMP, apresentam capacidades excelentes de procura dos locais de calcificação, associadas a uma localização fraca do tecido macio in. yiyo, segundo relações molares de ligando para metal baixas, metal de 15 i .

inclusive relações molares de ligando para está em contradição com outros complexos Gd de aminofosfonatos, tais como o 8d-EDTMP, os quais são descritos por I.K« Adzamli et al. em J. Med» Chem. 52, 139-144 (1989). A inércia dos complexos DOTMP com elementos terrosos raros foi

Isto inesperada demonstrada

Europeia 375.376) e nós pH entre de 1s1.

e 13 e a uma Pelo contrário.

no Sm-DOTM (ver o Pedido de Patente sabemos que é estável a um valor de relação molar de ligando para metal descobrimos que, mesmo a uma relação molar de ligando para metal de 7sí, o Sm-EDTMP é estável apenas em torno de pH 7 e tornar-se-á rapidamente descomplexado para superiores. Assim, por analogia terrosos raros, tais como o Gd, similar.

valores de pH inferiores e com outros iões metálicos deve comportar-se de forma

Embora não se queira estar limitado pela teoria, acredita-se que os resultados vantajosos do presente invento são obtidos devido ás excelentes relações de tecido alvo para tecido não-alvo in vivo para o complexo Sd-DQTMP que é um resultado do grau de inactividade e da elevada estabilidade do complexo DOTMP com um ião metálico Gd»

Especificamente, este invento refere-se a um método de diagnóstico para utilização na produção de imagens magnéticas de um animal que compreende a administração ao animal de uma composição procuradora de locais de calcificação de um complexo que possui um composto de fórmula (I) e de um nuclido paramagnético como definido anteriormente» ácido aminofosfónico macrocíclico preferido é o ácido

1,4,7,10—tetraazaciclododecano-l ,4,7,10—tetrametilenofosfó>nico (DOTMP). A composição pode ser administrada como uma formulação com veículos farmaceuticamente aceitáveis adequados,

Uns nuclida paramagnético” deste invento significa um ião metálico que possui momento angular giratório e/ou momento angular orbital. Os dois tipos de momento combinam-se para proporcionarem o momento paramagnético observado de uma maneira que depende fortemente dos átomos que suportam o electrão desirmanado e, numa extensão menor, do ambiente de tais átomos.

nuclidos paramagnéticos que se mostraram úteis para o invento o gadolínio (Sd‘), o ferro CFe '‘) e o manganês CMn ou Mn +3 sendo o Bd o preferido.

Os

SãO nuclido paramagnético e o ligando podem ser combinados sob quaisquer condições que permitam que ambos formem um complexo. Beralmente, a mistura em água a um pH controlado Ca escolha do pH está dependente da escolha do ligando e do nuclido paramagnético) ê tudo o que ê necessário. 0 complexo é formado por meio de uma ligação química e resulta numa composição de nuclido paramagnética relativamente estável, por exemplo estável para a dissociação do nuclido paramagnético do ligando.

i

As composições do presente invento podem ser utilizadas com uma dose menor e/ou com uma relação menor de ligando para metal, relativamente aos agentes MR1 conhecidos procuradores de locais de calcificação. As presentes composições podem administrar oCs) nuclidoCs) paramagnéticoCs) especificamente ás superfícies de calcificação a uma relação de ligando para metal igual ou próxima da relação estequornétrica. Uma das vantagens desta relação estequiométrica proporcionada pelas presentes composições consiste no facto de que permite o fornecimento de grandes quantidades de metal ao local de calcificação alvo.

Os complexos de ácido aminofosfónico macrocíclicos, quando administrados segundo uma relação molar de ligando para metal de pelo menos cerca de Isí, de preferência de isí a com maior preferência de isl a. l,5sí, proporcionam biodistribuiçSes que são consistentes de agentes esqueléticos excelentes. Pelo contrário, determinados outros· complexos de ácido aminofosfónico não-macrocíclicos resultam na sua localização em tecida macio (por exemplo, no fígado), se não se utilizarem quantidades em excesso de ligando. Um grande excesso de ligando é indesejável, dado que o ligando descomplexado pode ser animal ou pode resultar em prisão cardíaca ou hipocalcémicas. Além disso, os ligandos de ácido

tóxico para o em c onvu1sSes am i ηofosf ónico macrocíclicos são úteis, quando são necessárias grandes quantidades de metal. Neste caso, os ligandos de ácido aminofosfónico macrocíclicos têm a capacidade de depositar maiores quantidades de metal nos ossos do que é possível quando se utiliza a mesma quantidade de ligandos de ácido aminofosfónico não-cíclico.

Os ácidos aminofosfónicos podem ser preparados por meio de uma série de técnicas de síntese conhecidas. De particular importância é a reacção de um composto que contém pelo menos um hidrogénio de amina reactivo com um composto de carbonilo (aldeído ou cetona) e com ácido fosforoso ou com um seu derivado» 0 percursor de amina (1,4,7,l®~tetrazaciclododecano) empregue na produção dos ácidos aminofosfónicos macrocíclicos é uma substância que se encontra disponível comercialmente.

Os métodos de carboxilação para se obterem os derivados de amina que contêm um grupo carboxialquilo são bem conhecidos (Patente Norte Americana 3,726.912), bem como o são os métodos que proporcionam os substituintes fosfónicos de alquilo e de hidroxialquilo (Patente Norte Americana 3,398.198) nos azotos de amina.

Os ligandos deste inventa foram preparadas de acorda com a processo descrito no nossa Pedido de Patente Europeia 375«376.

As composições e formulações do presente invento são adequadas para utilização como agentes de contraste de MRI, especialmente nos locais de calcificação.

Além disso, o presente invento também compreende formulações que possuem pelo menos um dos nuclido(s) paramagnéticoís) complexados com pelo menos um das ácidas aminofosfónicas macrocíclicos como definidos anteriormente, especialmente aqueles ácidos aminofosfónicos macrocíclicos de fórmula <II), e um seu veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Os métodos de preparação destas formulações são bem conhecidos. As formulações são esterilizadas e podem estar na forma de uma suspensão, de uma solução para injecção ou de outras formulações adequadas farmaceu ticamente aceitáveis» Podem-se empregar meios de suspensão farmaceuticamente aceitáveis, com ou sem adjuvantes. As composições esterilizadas são adequadas para administração a um animal.

Por motivos de conveniência, as composições que possuem um complexo de nuclido paramagnético-écido aminofosfónico macrocíclico do presente invento são normalmente referidas como composições de nuclido paramagnético ou composições e o derivado de ácido aminofosfónico macrocíclica é referido como o “ligando ou como o chelante.

Como é aqui utilizado, o termo animais” significa mamíferos de sangue quente, incluindo seres humanos, e pretende abranger todos os animais que necessitem de produção de imagens para fins de diagnóstico.

Para, fins do presente invento, os complexos descritos aqui s os seus sais farmaceuticamente aceitáveis são considerados equivalentes nas composições» Qs sais fisiologicamente aceitáveis referem-se aos sais de adição de ácido daquelas bases que formam um sal com pelo menos um grupo ácido do ligando ou ligandos empregues e que não causam um efeito fisiológico secundário adverso significativo, quando administrados a um animal com dosagens compatíveis com a boa prática farmacológica» Bases adequadas compreendem, por exemplo, hidróxidos de metais alcalinos e aIcalino-terrosos, carbonatos e bicarbonatos tais como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio, carbonato de potássio, bicarbonato de sódio, carbonato de magnésio, etc», amónia, aminas primárias, secundárias e terciárias, etc» Os sais fisiologicamente aceitáveis podem ser preparados por tratamento do ácido aminofosfónico macrocíclico como definido anteriormente, especialmente aqueles de fórmula C1I>, com a base apropriada»

As formulações do presente invento estão na forma sólida ou líquida & contêm o nuclido psramagnético complexado com o ligando» Estas formulações podem estar na forma ds um kit, de tal modo que os dois componentes são misturados na altura apropriada antes de utilização» Quer como uma pré-mistura, quer como um kit, as formulações requerem normalmente um veículo farmaceuticamente aceitável» Frequentsmente, é desejável que um tampão esteja presente na formulação» Exemplos de tampões adequados sãos fosfato, bicarbonato e ácido Ν-2-hidroxietilpiperasina-N'-2-etanossulfónico ÍHEPES)»

As composições injectáveis do presente invento podem estar ou na forma de uma suspensão ou de uma solução» Na preparação de formulações adequadas, é reconhecido que, de uma maneira geral, a solubilidade em água do sal é maior do que a do ácido livre. Na forma de solução, o complexo (ou. quando desejado os componentes separadas) é dissolvido num veículo farmaceuticamente aceitável. Estes veículos compreendem um solvente adequado, preservativos tais como álcool benzílico, se necessário, e tampões. Os solventes úteis incluem, por exemplo, água, álcoois aquosos, glicóis e ésteres de fosfonato ou de carbonato. Estas soluções aquosas contêm não mais do que 50% do solvente orgânico em volume.

As suspensões injectáveis sob a forma de composições do presente invento requerem um meio de suspensão líquido, com ou sesm adjuvantes, como veículo. 0 meio de suspensão pode ser, por exempla, palivinil-pirralidana aquosa, óleos inertes tais como óleos vegetais ou óleos minerais altamente refinados, ou carboximetilcelulose aquosa» Os adjuvantes fisiologicamente aceitáveis adequados, se for necessário manter o complexo em suspensão, podem ser escolhidos entre variados espessant.es tais como a carboximetilcelulose, a polivinilpirrolidona, a gelatina, e os aIginatos» Muitos agentes tensio-activos são também úteis como agentes de suspensão, por exemplo, lecitina, alquilfenol, adutos de óxido de polietileno, naftalenossulfonatos, alquilbenzenossulfonatos, e os ésteres de sorbitano de polioxietileno» Muitas substâncias que proporcionam a hidrofobicidade, a densidade ε a tensão de superfície do meio de suspensão líquido, podem auxiliar a realização de suspensões injectáveis em casos individuais. Por exemplo, os anti-espumantes de silicone, o sorbitol e os açúcares são todos agentes de suspensão úteis.

As combinações dos vários nuclidos paramagnéticos referidos anteriormente podem ser administrados como agentes MRI, quer sequencialmente quer concorrentemente, se desejado, para se obter o contraste ou a informação de diagnóstico desejada. A utilização de diferentes nuclídos paramagnéticos complexados co® um dos ligandos do presente invento pode desejavelmente proporcionar informação da diagnóstico de confirmação. As combinações podem ser complexadas como aqui descrito por complexação das mesmas em simultâneo, por mistura em separado de dois nuclidos paramagnéticos complexadas, ou par administração sequencial de dois nuclidos paramagnêticos complexadas diferentes» A composição ou a formulação pode ser administrada como uma dose individual ou como doses múltiplas ao longo de um período de tempo mais prolongado.

As composições do presente invento podem ser utilizadas conjuntamente com outros agentes e/ou ingredientes activos que aumentem a eficácia de diagnóstico das composições e/ou que facilitem uma administração mais fácil das composições»

Estudos para determinar a biodistríbuição qualitativa das várias complexas da invento foram conduzidos por injecção das composições em ratazanas e obtenção de imagens de raios gama do animal inteiro, ao fim de várias períodos até duas horas após injecção»

As biodistrihuiçõss quantitativas foram obtidas por injecção de 50-100 microlitros da composição na veia da cauda de ratazanas Sprague Dawley machos anestesiadas. As ratazanas foram então colocadas em gaiolas forradas com papel absorvente a fim de se recolher toda a urina excretada antes de serem sacrifiçadas» Após um determinado período de tempo, as ratazanas foram sacrificadas por deslocação cervical e os vários tecidos foram dissecados. As amostras foram então lavadas com salmoura, foram secas sobre papel absorvente e pesadas. A radioactivida.de das amostras foi medida com um contador de cintilação de Nal.

ϊ I

Ο invento será esclarecido cora raaior pormenor através dos seguintes exemplos, os quais se destinara a exemplificar apenas o presente invente»

MATERIAIS DE PARTIDA

Exemplo As Preparação de DOTMP

Adicionaram-se 3,48 g (2©,2 mMole) de 1,4,7,10-tetraazaciclododecano e 14 ml de água a um frasco de 1©© ml de fundo redondo de três tubuladuras, equipado com um termómetro, com um condensador de refluxo e com uma camisa de aquecimento» Esta solução foi tratada com 17,2 ml de HC1 concentrado e com 7,2 g de H^PO^. (87,8 Moles) e foi aquecida até 105^C'C» A suspensão sob refluxo foi agitada vigorosamente e foi tratada gota a gota com 13 g <16©,2 mMoles) de formaldeído (37% em peso de água) durante um período de uma hora» No fim deste período de tempo, a reacção foi aquecida ao refluxo durante mais 2 horas, após o que o calor foi removido e a solução de reacção foi deixada arrefecer e estabilizar à temperatura ambiente durante 62,5 horas. A solução de reacção foi então concentrada in vacuo a 4©°C para se obter um semi-sólido castanho avermelhado viscoso. Adicionou-se uma porção de 3© ml de água ao semi-sólido que começou a dissolver-se, mas que depois solidificou. A totalidade da suspensão foi então deitada em 4©© ml de acetona com agitação vigorosa. 0 precipitado quase branco resultante foi filtrado no vácuo e foi seco durante a noite para se obterem 1©,69 ç (97% de rendimento) de DOTMP em bruto» Uma amostra de 2,0 g (3,65 mMoles) de DOTMP em bruto foi dissolvida em 2 ml de água por adição de 7€í© μΐ de hidróxido de amónio concentrado íl©,0 mMoles) em porçSes de 10© μ.1, para produzir uma solução com um pH de 2-3» Esta solução foi então adicionada toda de uma vez a 4,5 ml de HC1 3N (13,5 mMoles), foi bem misturada e foi deixada em precipitação. Ao fim de uma hora, começaram-se a formar pequenos cristais quadrados em ambos os lados do vidro debaixo da superfície do líquido» □ crescimento dos cristais foi deixado continuar sem perturbação durante mais 111 horas, após o que os cristais foram retirados suavemente das paredes do reservatório, -foram filtrados, foram lavados quatro vezes com porçSes de 3 ml de água, foram secos ao ar para um peso constante de modo a se obter 1,19 g (rendimento de 60%> de DOTMP sólido cristalino branco»

Exemplo Bs Preparação de DOTMP

Um frasco de 250 ml de fundo redondo de três tubuladuras foi carregado com ó,96 g (0,04 moles) de 1,4,7,10-tetraa.zaciclododecano. A este frasco adicionaram-se 14,5 g (0,177 moles) de ácido fosforoso, 30 ml de água desionizada. e 28 ml de ácido clorídrico concentrado Í0,33é moles)» frasco foi ligado a um condensador de refluxo ε foi equipado com uma barra de agitação e com um termómetro dotado de um controlador tipo termorelógio» Uma solução separada de 26,0 g (0,32 moles) de uma solução de formaldeído aquosa a 37% foi adicionada a. um funil de adição de 100 ml que foi adaptado ao frasco» D frasco foi levado até á temperatura de refluxo (cerca de 105*0 com agitação vigorosa» A solução de formaldeído foi adicionada gota a gota durante um intervalo de 30-40 minutos» A solução foi aquecida e agitada durante mais três horas e depois foi arrefecida lentamente até è temperatura ambiente»

A solução de reacção foi transferida para um frasco de fundo redondo ds 500 ml e foi passada para um aparelho de evaporação rotativo» A solução foi então reduzida a um semi-sólido âmbar e viscoso (note-se que a temperatura nunca excedeu os 40*0. Este semi-sólido foi tratado com aproximadamente 300 ml de acetona de grau CLAR, para produzir um óleo viscoso e castanho claro» Este óleo foi dissolvido em 22 ml de água e foi adicionado lentamente com agitação vigorosa a 1 1 de acetona» A acetona foi decantada, e o óleo de cor clara foi seco sob vácuo para.

produzir 16,6 g (76% de rendimento) de DOTMP em bruto. A 13,1 g deste DOTMP em bruto adicionaram-se 39,3 g de água desíonizada conjuntamente com um cristal de germinação e a solução foi deixada em repouso durante a noite. 0 precipitado resultante foi filtrado no vácuo, foi lavado com água fria e foi seco sob vácuo para produzir 4,75 g de DOTMP (rendimento de 36%).

Uma etapa de purificação adicional foi realizada por dissolução de 3,© g (5,47 mMoles) do DOTMP anterior em 3 ml de água por meio da adição de 2,2 ml (31,5 mMoles) de hidróxido de amónio concentrado. Esta solução foi tornada ácida pela adição de 2,4 ml (29,8 mMoles) de HC1 concentrado, altura em que se precipitou um sólido branco. Este precipitado foi filtrado no vácuo e foi seco para, se obter 2,42 g (81% de rendimento) de DOTMP purificado, caracterizado por um singleto a 11,5 ppm (relativo a 95% de H^PO^) no espectro de RMN dissociada '^P.

Exempla Ci Preparação ds DOTMP

Um frasco de 50 ml de fundo redondo de três tubuladuras foi carregado com 2,® g <11,6 mMoles) de 1,4,7,l®~fcetraazadodecano. A amina foi tornada solúvel através da adição de 5,56 g de

HC1 concentrado e 3,85 g de ácido fosforoso. 0 frasco foi equipado com um termómetro e com um condensador de refluxo e depois foi colocado sobre um aquecedor/agitador. Sob agitação constante, a solução foi levada até à temperatura de refluxo. TM

Uma. bomba de seringa Sage foi carregada com 4,33 g de uma solução de formaldeído a 37% (vol/vol). A solução foi bombada lentamente para dentro do frasco de reacção a um caudal de ®,1 ml/min. A reacção foi aquecida a esta temperatura durante mais 6 horas. A solução de reacção foi então arrefecida, foi filtrada através de um funil filtrante de vidro médio fritado e foi rotoevaporada até è secura. 0 sólido foi então lavado duas vezes com água desionizada. e depois foi rotoevaporado para se obter um semi-sólido âmbar e viscoso. 0 produto foi triturado em metanol e foi filtrado para se proporcionar 1,6 g de um sólida cor de bronze» A camada de metanol foi recolhida até à secura (um líquido viscoso âmbar escuro) e foi seca durante a noite num forno de vácuo» 0 peso total de produto foi de 6,17 g«

As duas fracções anteriores foram colocadas num frasco de fundo redondo de ml e o processo de fosfonomet.il ação foi realizado novamente durante a noite, ft solução foi arrefecida e tratada como anteriormente» A quantidade total de produto foi de

4,3 g» Uma RMN '“'r do produto foi compatível com a do DQTMP»

Exemplo í; Preparação de Sd-DQTMP

Um frasco foi tarado e carregado com 200 mg (0,36 mMoles) de DQTMP, preparada pelo processo do Exemplo C, e com 3,0 ml de água desiorsizada« Adicionou-se NH^OH concentrado ao frasco com incrementos de um mícrolitro até que todo o sólido se tornasse solúvel» A solução foi então aquecida até 80'^:‘C· com agitação» Adicionou—se então à solução gota a gota com agitação í,5 ml de uma solução 0,2M de triacetato de gadolínio (0,300 mMoles). A solução resultante foi mantida a S0*C durante 10 minutos. A solução foi arrefecida e o pH foi ajustado para 7,0 por utilização de 0,5 ml de HC1 6N» Adicionou-se a 100 μΐ do complexo, para diluição, 1,0 ml de D„0 e 3,9 ml de água desionizada para se obter uma. concentração de complexo final de 680 μΜοΙar. Esta, solução contém 20% de D_?Q (vol/vol).

Exemplo 2; Determinação do Tempo de Relaxamento T₁ complexo do Exemplo 1 foi desoxigenado por

borbulhamento de gás de azoto seco através do mesmo durante 20 minutos, A amostra foi então colocada num tubo de RMN de 5 mm e este foi posicionado num espectróroetro de 270 MHz para determinação do tempo de relaxamento protónico da água»

A experiência de RMN utilizada para medir o tempo de relaxamento consistiu na técnica de recolha de inversão normal para medição dos tempos de relaxamento CTj) de uma rede giratória» Nesta técnica, a intensidade da ressonância RMN protónica é medida como função de um tempo de atraso variável entre as pulsações da radiofrequência durante o qual o sistema giratório relaxa até ao equilíbrio» Os valores finais, os quais consistiram nos picos de intensidade versus tempo de atraso, foram traçados e associados a uma função exponencial. 0 tempo característico para a magnetização giratória para o seu restabelecimento CTj) é obtido a partir da constante de tempo da função exponencial associada. O valor para Tj para o complexo do Exemplo i foi de 244 mS» Este valor è favorável relativamente aos valores de 422 mS para o Gd-ADTP e 540 mS para o Gd-ADQT, quando a experiência foi repetida com estes complexos» D Gd-ADTP e o Gd-ADOT são agentes MRI conhecidos comercialmente.

Exemplo 5s Biodistribuição de ^lu9Gd-D0TMP

Uma amostra de 1,45 mg de DOTMP, preparada pelo processo do Exemplo B, foi colocada nu.m frasco e foi dissolvida em 760 μΐ de água e em 5 pl de NaOH a 502 CpesoZpeso)» Um volume de 1000 μΐ da solução Gd (0,3 mM em HC1 0,1N), que continha quantidades vestigiais de '^Gd, foi colocada num frasco separado e adicionaram-se 15 pl da solução DOTMP. 0 pH da solução foi ajustado para 7-3 por utilização de NaOH» A quantidade de Gd como complexo foi determinada por cromatografia de permuta catiónica ser de 997. Esta molar de ligando para metal de formulação apresenta unja relação

Uma ratazana Sprague Dawley foi injectada com a formulação preparada anteriormente s a biodistribuição foi determinada. ft ratazana foi deixada aclimatar-se durante cinco dias e depois foi injectada com 10® pl da solução Gd descrita anteriormente através de uma veia, da cauda. A ratazana pesava entre 15© g e 20® g na altura da injecção. Após 2 horas, a ratazana foi morta por deslocação cervical» Os tecidos foram recolhidos, pesados e a quantidade de radioactivida.de em cada tecido foi determinada por contagem num contador de cintilação de Hal associado a um analisador multicanal. As contagens de cada tecido foram comparadas com as contagens de padrões de 10© μΐ, a fim de se determinar a percentagem da dose injectada em cada tecido ou órgão. A percentagem da dose injectada em vários tecidos é dada no Quadro 1. A relação molar de ligando ÍBOTMP) para metal ÍGd) é igual a 1,5»

QUADRO i

7. DE DOSE INJECTADA C¹⁵⁹Cd) EM VÁRIOS TECIDOS

r j Tecido l	7 1 ( Ηα-DOTMP j \| (fet,32 mg/ml) j
\| Ossos	1 ⁵⁰ 1
\| Fígado	I 0,08 J
\| Rim	i íA ‘'JET \| 1 tf jL-t—í ?
j Músculo	I N.D»¹ \|
j Sangue	\| 0,08 j
í	J .........

N»D. significa que as contagens no baço foram inferiores aos valores de fundo»

Exemplo 4s Preparação do omplexo

Sd-DOTMP

Uma amostra de 54,3 mg (86,3 pMoles) de DQTMP, preparada pelo processo do Exemplo E, foi dissolvida em 4 ml de água por adição de 0,04? ml de NHjOH concentrado. Isto produziu uma solução 0,02ÍM de DOTMP a um pH = 6,33. Uma porção de 3 ml (64 píloles) desta solução de ligando foi aquecida até 82°C e foi tratada com 291 μΐ (58 pMoles) de uma solução de triacetato de gadolínio. A adição do gadolínio foi feita durante um período de 20 minutos em pequenas porções C20-50 μ1), Durante a adição, o pH foi mantido num valor maior do que 6,0 pela adição de porções de 5 μΐ de NbLOH concentrado» Depois da adição de toda a solução de triacetato de gadolínio estar completa, o pH foi ajustado de

6,56 para 7,53 pela adição de mais 2& μΐ de NH^OH» Esta solução do complexo foi arrefecida até á temperatura ambiente, onde o pH foi de 8,11« A análise de CLAR de permuta aniónica desta solução mostrou uma presença de 12% de ligando (por integração de UV) e de 88% de complexo Gd-DOTMP (por integração de UV) na solução. Este resultado apresenta vantagens em comparação com o produto com 10% de ligando e 90% de complexo que poderia teoricamente ter sido apresentado.

Exemplo 5¾ Biodistribuição do Complexo de Gd-DOTMP numa Ratazana

Uma ratazana Sprague Dwaley com um peso de 15® g foi injectada com porções de 10® pl de Gd-DOTMP, preparado no Exemplo 4, durante um período de 4 dias. Esta ratazana foi então sacrificada e um dos seus ossos femurais foi removido e mostrou pesar 0,690 g. Este osso foi dissolvido em 5 ml de HC1 concentrado e foi analisado rslativamente ao Sd por espectroscopia de plasma, ligado indutivamente. A quantidade de Gd encontrada no osso do fémur foi de 16,76 pg, a qual corresponde a 419 pg no esqueleto total da ratazana, assumindo-se que o fémur é 1/25 avos do esqueleto total. Isto significa que 25,5% da dose injectada atinge aos ossos. Este resultado assemelha-se favoravelmente a um trabalho idêntica feita com uma quantidade vestigial radioactiva de em que, a estes níveis elevados de doses injectadas, cerca de 25-30% da dose injectada se localizam nos ossos. Assim, o comportamento do Sm-DOTMP e do Gd-DOTMP são muito semelhantes in vivo,

Outros modelos de realização do presente invento serão evidentes para os técnicos da especial idade, face às considerações feitas nesta memória descritiva ou è. prática do invento aqui divulgada. Note-se que a memória descritiva e exemplos devem ser entendidos como apenas exemplificativos. 0 verdadeiro âmbito e espírito do presente invento encontra-se definido nas seguintes reivindicações.

Claims

REIVINDICAÇÕES?

íã.- Método de diagnóstico para utilização na produção de imagens de ressonância magnética de um animal caracterizado por compreender a administração ao animal de uma composição procuradora de locais de calcificação constituída por um complexo que compreende (1) um ácido aminofosfónico macrocíclico de fórmulas em que: os substituintes A, B, Ce Ό hidrogénio, radicais de hidroçarboneto de no, ou uma metade com a fórmula são independentemente 1 a 8 átomos de carbo-

COOH

X

I

C

I

Y

PO3H2 , or

X'

I οι

Y'

OH;

e os seus sais fisiologicamente aceitáveis dos radicais ácidos, em que: X, Y e n são como definidos na reivindicação 1; X' e Y' são independentemente hidrogénio, radicais metilo ou etilo? n' é
2 ou 3, com a condição de pelo menos dois dos referidos substituintes serem um grupo que contém fósforo? e (2) pelo menos um nuclido paramagnético; em que a relação molar de (15 para (2) é de pelo menos Isí.

21.~ Método de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por o ácido aminofosfónico macrocíclico ser o ácido

1,4,7,lO-tetraazaciclododecano-l,4,7,lO-tetrametilenofosfónico»
3ã«— Método de acordo com a Reivindicação 1, caracteriψ-ττ -I»tj -j-ς? * :ado por o nuclido paramagnético ser Gd '‘, Fe Mn ou Mn .
4ã«~ Método de acordo com a Reivindicação 3, caracteri·4~ζ :ado por o nuclido paramagnético ser Gd .
5â.- Método de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por o complexo compreender um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

ôã.~ Método de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado por apresentar um nível elevado de inércia cinética.

71.- Método de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por o complexo compreender o ácido i,4,7,í@-tetraazaciclododecano-1,4,7, IC-tetrametilenofosfónico com Gd*'-'.

Sâ.~ Método de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por a relação molar de (15 para (25 ser de desde 1:1 a 3sl.

91.- Método de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por a relação molar de (15 para (25 ser de desde 1;1 a

1,5sl.

l®ã.- Processo para a preparação de uma composição caracterizado por se misturar um complexo que compreende (i) um ácido aminofosfónico macrocíclico de fórmula

C

D (I) em ques os substituintes A, B, Ce D são independentemente hidrogénio, radicais de hidrocarfooneto com 1 a 8 átomos de carbono, ou uma metade com a fórmula

X'

COOH

PO3H2 , or οι

Y'

OH;

n' >

e os seus sais fisiologicamente aceitáveis dos radicais ácidos, em ques X, Y e n são como definidos na reivindicação 1; X' e Y' são independentemente hidrogénio, radicais metilo ou etilo; n' é 2 ou 3, com a condição de pelo menos dois dos referidos substituintes serem um grupo que contém fósforo, para utilização como um agente de diagnóstico para procura de um local de calcificação na produção de imagens de ressonância magnética de um animal, e <2> peio menos um nuclido paramagnético; em que a relação molar de <1) para (2) é de pela menos 1:1, com um veículcr Tarmaceutica·mente aceitável.

iíâ«- Processo de acordo com a Reivindicação 10, caracterizado por o ácido aminofosfónico macrocíclico ser o ácido

1,4,7,10-tetraazaciclododecano-í,4,7,10-tetrametilenofosfónico, para utilização como um agente de diagnóstica para procura de um local de calcificação na produção de imagens de ressonância magnética de um animal,

12ã„- Processo de caracterizado Mn⁺'-‘ „ por o nuclido acordo com a Reivindicação 10 ou *ί* *·» í* **t paramagnético ser Gd , Fe ”, Mn

11, ou

Í3ã.“ Processo de acordo comi a Reivindicação 12, caracterizado por o compreender um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

14®.- Processo de acordo com a Reivindicação 12, caracterizado por a relação molar de (1) para (2) ser de desde

1.1 a ·.>.!«

15®»- Método de acordo com a Reivindicação 12, caracterizsdo por a relação molar de íí) para (2) ser de desde 1:1 a