PT93144A

PT93144A - Processo para a preparacao de polipeptideos que contem fosforo uteis como inibidores da renina

Info

Publication number: PT93144A
Application number: PT93144A
Authority: PT
Inventors: Ronald Thure Wester
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1989-02-16
Filing date: 1990-02-14
Publication date: 1990-08-31
Also published as: CA2009982A1; WO1990009172A1; JPH03163094A; JPH0694477B2; EP0385593A1

Description

O enzima renina proteolitico, que tem um peso molecular de cerca de 40.000, é produzido em e é secretado no sangue, através do rim. Ê conhecido como sendo activo in vivo na clivagem do angiotensinogene, uma glico-proteina do plasma, que ocorre naturalmente. No caso da angic_ tensionogene humana, a clivagem dá-se na ligação entre a leucina (lOã) e a valina (llâ) em residuos de aminoácidos, na extremidade terminal de N da angiotensionogene:

Asp-Arg-Val-Tir-Ile-His-Pro-Pe-His-Leu-V al-123456789 10 11

Ile-His-Ser-Glu-12 13 14 15 A circulação do decapeptideo N-terminal (angiotensina I) formado através da acção de clivagem anterior da renina, é subsequentemente quebrada, pelo corpo, a um octapeptideo conhecido como a angiotensina II. A angiotensina II é conhecida como sendo uma substância pres-sora potente, i.e., uma substância que é capaz de induzir um aumento significativo na pressão sanguínea, e acredita-se que actua causando a contracção dos vasos sanguíneos e na libertação da aldosterona, a hormona que retém sódio, da glândula de adrenalina. Por conseguinte, o sistema de renina--angiotensionogene tem vindo a ser implicado como um factor causador de algumas formas, de hipertensão e da falha cardíaca por congestão.

Um meio para alivio dos efeitos sdrersos no funcionamento do sistema renina-angiotensionogene é a 5-

administração de uma substância capaz da inibição da acção de clivagem do angiotensionogene da renina. Um número destas substâncias são conhecidas, incluindo os anticorpos da an-tirrenina, pepstanina e compostos fosfolipidos, que ocorrem naturalmente.

Dellaria et al. f~ Tetrahedron Lett. 2337 (1986) 7 descreve a sintese de vários ésteres de fos-fonato como agentes anti-hipertensivos. O pedido da Patente Europeia 249 445 A reivindica uma série de agentes anti-hipertensores de fosfo-nato, que actuam como inibidores de enzima.

Descobriu-se agora, que alguns poli-peptideos que contem fósforo, são úteis como agentes inibidores da renina e têm aplicação no tratamento da hipertensão e na falha cardíaca por congestão.

Esta série de novos compostos consiste em peptideos de fórmula

J X -6- J J e um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que 8^ á (CHgOjgPO-, (CHg JgOgPO- ou X-Y_/ onde X é morfolino, N--metilpiperazino, piperidino, pirrolidin-l-ilo, pirrolilo, 3-oxopirrolidin-l-ilo, imidaaolilo, cis-4-hidroxiciclo-he-xilo, trans-4-hidroxiciclo-hexilo, acetilálquilo tendo três a seis átomos de carbono, alquilo tendo um a três átomos de carbono, 4-oxopiperidino, 4-oxociclo-hexilo, alcoxi tendo um a cinco átomos de carbono ou 4-hidroxipiperidino e Y é CHgCsO ou C=0; R2 é hidrogénio ou metoxi; Rg é alquilo tendo um a quatro átomos de carbono, metoxialquilo tendo 0 referido alquilo um a três átomos de carbono, metiltioalqui-lo tendo 0 referido alquilo um a três átomos de carbono, hidroximetilo, imidazol-4-ilmetilo, metilsulfonilmetilo, metilsulfinilmetilo ou carbamiletilo; e Rg, quando considerados separadamente, são cada um alquilo com um a três átomos de carbono, benzilo, alcoxi tendo um a quatro átomos de carbono, dimetilamino ou hidroxi; e e Rj, quando tomados em conjunto, são alquileno com quatro a seis átomos de carbono, alquilenodioxi tendo três a quatro átomos de carbono ou mono- ou dimetilalquilenodioxi tendo quatro a seis átomos de carbono. Um grupo preferido dos compostos são aqueles onde R^ é X-Y- onde X é morfolino, Y é C=0, Rg é hidrogénio e Rg é metiltioalquilo, tendo 0 referido alquilo um a três átomos de carbono. Especialmente preferido neste grupo são compostos, onde Rg é metiltiometilo e R^ é metoxi e Rg é isopropoxi, onde R^, e Rg em conjunto são butileno e onde R4 e Rg em conjunto, são propilenodioxi. Um segundo grupo dos compostos preferidos são aqueles onde R^ é X-Y-, onde X é 4-oxopiperidino, Y é C=0, Rg é hidrogénio e Rg é metiltioalquilo tendo 0 referido alquilo um a três átomos de carbono. Especialmente preferido neste grupo são compostos onde Rg ® metiltiometilo -7-

e e 8, são cada um metoxi, onde R& e Rg em conjunto são propilenodioxi e onde R^ e Rg em conjunto são pentileno.

Um terceiro grupo dos compostos preferidos são aqueles onde R1 é X-Y-, onde X é morfolino, Y é C=0, R£ é hidrogénio e R3 é alquilo tendo um a quatro átomos de carbono. Especialmente preferido reste grupo é o composto onde Rg é n-butilo e R^ e Rg são cada um metoxi, 0 presente invento também inclui um método de tratamento da hipertensão num mamifero, que compreende a administração ao referido mamifero, de uma quantidade eficaz do anti-hipertensor dos compostos do presente invento e de uma composição farmacêutica que compreende os compostos do presente invento numa forma de dosagem unitária e num suporte.

Como previamente indicado, o presente invento engloba os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos biologicamente activos. Esses sais são aqueles que são não tóxicos, nas dosagens administradas. Visto que, os compostos do invento podem conter ambos grupos acidico e básico, ambos sais por adição ácida e por adição alcalina são possíveis. Sais por adição ácida farmaceuticamente aceitável incluem e.g. o sal de hidrocloreto, de hidrobrometo, de hidroiodeto, de sulfato, de bissulfato, de fosfato, de fosfato de ácido, de acetato, de lactato, de maleato, de mesi-lato, de fumarato, de citrato, de citrato de ácido, de tar-tarato, de bitartarato, de succionato, de gluconato e sais de sacarato. Sais por adição alcalina farmaceuticamente aceitável, incluem, e.g., sais de sódio, de potássio, de cálcio e sais de magnésio. Métodos convencionais de formação de sais por adição ácida e de adição alcalina podem ser empregues. -8- t

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Para abreviar o assunto, o nome abreviado normalmente aceite dos amino-ácidos individuais são empregues quando possíveis. Por exemplo, as abreviações seguintes são usadas:

Phe - fenilalanina SMeCys - S-metil-L-cisteina

OmeHse - 0-metiÍ-homoserina

Etg - L-etilglicina

Nva - L-norvalina OMeTyr - 0-metil-L-tirosina HACPP - (l-hidroxi-2-amino-3-ciclo-hexilpropil)fosforilo

HBT - hidroxibenzotriazole DEC - carbodiimida de etilo de dimetilaminopropilo BOC - t_ butoxicarbonilo OBN - o-benzilo, etc.

Todos os amino-ácidos naturais contidos nas estruturas dos compostos imediatamente reivindicados são os de configuração L, a configuração que ocorre naturalmente, a menos que seja dito o contrário. -9-

Os compostos deste invento exibem actividade antihipertensora in vivo, em mamíferos, incluindo humanos. Pelo menos uma porção substancial desta actividade resulta da suã capacidade para inibir a clivagem do angiotensinogene, pela renina. Embora não seja desejável limitar a teoria de mecanismo seguinte, é provável que o mecanismo da actividade de inibição da renina dos compostos do invento seja a sua ligação selectiva (quando comparada com o angiotensinogene) à renina. Os compostos do invento exibem uma actividade de inibição da enzima, que é selectiva para a renina, contra outros enzimas beneficos, como a catepsina D. Devido aos seus pesos moleculares baixos, eles exibem caracteristicas de solubilidade favoráveis em meio aquoso destemodo torna a administração oral praticável, e podem ser sintetizados a um preço comercialmente realista. Os compostos do presente invento são também úteis contra falha cardíaca por congestão.

Os compostos do invento podem ser preparados por métodos familiares para aqueles que são peritos no ramo. A sub-unidade básica da sintese quimica preferida é a acilação do grupo alfa-amino não protegido de um residuo de amino-ácido, com um aminoácido com uma função carboxilica activada (para fins da acilação) e um grupo protector adequado ligado ao seu alfa-azoto, para formar uma ligação peptidea entre os dois resiudos de amino-ácido, seguido por a remoção do referido grupo· protector. Esta sub-unidade de sintese de acoplamento-desbloqueamento é realizada repetidamente para construir o polipeptideo, partindo da extremidade terminal C de estrutura molecular e trabalhar na extremidade terminal N.

Em alternativa, uma porção de dipeptidec preparado pode ser acoplada com um único amino-ácido, usando técnicas de acoplamento de polipeptideo ou o tripeptideo -10-

λ preparado pode ser acilado com R^, usando métodos de acila-ção conhecidos. Os amino-ácidos utilizados, para sintetizar os compostos do presente invento, estão comercialmente disponíveis (como ácidos livres, sais ou ésteres etc.) em ambas formas de alfa-amino protegido e alfa-amino não protegido

As amidas ou ésteres, quando sujeitos a cloreto de hidrogénio em dioxano, perdem o grupo protector t-butoxicarbonilo da porção amino. As acilações dos ésteres amino resultantes ou dos ésteres amidas resultantes são realizadas usando 1-hidroxibenzotriazole e um carbodiimida. A remoção do grupo de bloqueamento no imidazole com ácido acético-água origina o produto final. A actividade dos compostos do presente invento como inibidores da actividade de clivagem da angiotensinogene da renina, pode ser determinada por estudo (1) da sua capacidade para inibir a actividade de clivagem da angiotensionogene da renina in vitro e (2) da sua capacidade para se opor à resposta do pressor induzido pela renina exogenousa, in vivo.

Os compostos do presente invento podem ser administrados como agentes anti-hipertensores tanto por vias oral ou parenteral de administração, sendo o primeiro preferido por razões de conveniência do doente e do comfor-to do doente. Em geral, estes compostos anti-hipertensores são normalmente administrados oralmente em dosagens na gama desde cerca de 0,5 mg a cerca de 50 mg por kg do peso corporal por dia e 0,1 mg a cerca de 5 mg por kg do corpo corporal por dia, quando dados parenteralmente; variações necessariamente ocorrerão, dependendo nas condições do sujeito a ser tratado e do composto particular a ser administrado. Normalmente, o tratamento é iniciado a uma dosagem diária -11-

baixa e aumentada pelo médico unicamente se necessário. É de notar que, estes compostos podem ser administrados em combinação com suportes farmaceuticamante aceitáveis por as ambas vias préviamente indicadas, e que essa administração pode ser realizada em ambas dosagens múltipla ou simples.

Os novos compostos do invento podem ser oralmente administradas numa larga variedade de diferentes formas de dosagem, i.e. eles podem ser formulados com vários suportes inertes farmaceuticamente aceitáveis na forma de comprimidos, cápsulas, pastilhas expectorantes r trociscos, pastilhas duras , pés , pulverizadores , suspensões aquosas, elixires, xaropes e semelhantes.

Estes suportes incluem diiuentes sólidos ou agentes de enchimento, meio aquoso estéril e vários solventes orgânicos não tóxicos, etc. Além disso, estas formulações farmacêuticas orais podem ser adequadamente adoçadas e/ou adquirir gosto, por meio de vários agentes do tipo normalmente empregue para estes fins. Em geral, os compostos deste invento estão presentes nessas formas de dosagem orais a niveis de concentração na gama desde cerca de 0,5% a cerca de 90% em peso da concentração total, em quantidafes que são suficientes para fornecer as dosagens unitárias desejadas.

Para fins da administração oral, comprimidos que contêm vários excipientes como citrato de sódio carbonato de cálcio e fosfato de cálcio podem ser empregues com vários agentes de desintegração como amido e preferencialmente amido de batata ou de tapioca, ácido alginico e alguns complexos de silicatos, em conjunto com agentes de aglutinação como polivinilpirrolidona, sacarose, gelatina e acácia.

Em adição, agentes de lubrificação como estearato de magnésio lauril-sulfato de sódio e talco são normalmente muito úteis para fins de compressão. Composições sólidas de um tipo idêntico podem ser empregues como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina duras e macias cheias; materiais preferidos relacionados, também podem incluir lactose ou açúcar do leite, assim como glicois de polietileno de peso molecular elevado. Quando suspensões aquosas e/ou elixires são desejados para administração oral, o ingrediente activo essencial pode ser combinado com vários adoçantes ou agentes de gosto material de coloração ou tintas, e, se desejado, agentes de emulsão e/ou de suspensão também, em conjunto com diluen-tes como água, etanol, propileno-glicol, glicerina e as suas várias combinações semelhantes.

Os Exemplos seguintes ilustram o invento, mas não são construídos para limitar o mesmo.

Todos os dados de RMN são parciais. Quando dois diastereoisómeros são formados, os dados de RMN são dados unicamente para o produto principal. EXEMPLO 1

Morfolinocarbonil-PheNLe-HACPP (OCH3)2

n-C^Hg; e R4, R5 = OCH3 ) A. BocHACPP(OCH3)2

Uma solução que contém 100 mg de Boc--L-ciclohexilalanalo, 86 mg de fosfito de dimetilo e 183 mg de fluoreto de potássio raono-hidratado em 0,25 ml de dimetilformamida foi agitada, à temperatura ambiente, sob uma atmosfera de azoto, durante 20 horas. A mistura reaccio-nal foi diluida com 15 ml de cloreto de metileno e foi lavada com água (3 x 5 ml). A fase orgânica foi separada, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada. O residuo foi cromatografado (acetato de etilo-hexano, 3:1, v:v) para obter 120 mg do produto, na forma de uma mistura 3.1 de epimeros do grupo hidroxilo. RMN (300 Hz, CDClg) delta 1,44 (s, 9H); 3,78 (d, J =10 Hz, 3H), 3,81 (d, J = 10 Hz, 3H) e 3,94 (m, 2H). -14-

β. hacpp(och3)2.hcl

Uma solução do produto do Exemplo IA (100 mg) em 2 ml de cloreto de hidrogénio 4N, em dioxano foi agitada à temperatura ambiente, durante 45 minutos. A solução foi concentrada in vacuo para dar 90 mg do hidroclo reto desejado. RMN (300 MHz, DMSO-dg) delta 3,74 (d, J * 11 Hz, 3H) e 3,78 (d, J =11 Hz, 3H), C. Morfolinocarbonil-Phe A uma solução de 166 g de fenilalanina em 500 ml de hidróxido de sódio 2M e 2 litros de dioxano, aos 03C, foi adicionada a 150 g de cloreto de morfolinocar-bonilo, durante um período de 5 minutos. Hidróxido de sódio foi adicionado ocasionalmente para manter o pH a cerca de 11. Depois de 4 horas a mistura foi concentrada e lavada com cloreto de metileno (3 x 500 ml). A camada aquosa foi separada, acidificada com ácido clorídrico 12N e extractada com cloreto de metileno. (4 x 500 ml), os extractos foram coibi nados, secos sobre sulfato de magnésio e concentradas para obter 238 g do produto desejado. RMN (300 Mhz, DMSO-dg) delta 3,26 (m, 4H) j 3,52 (m, 4H); 4,25 (m, 1H) e 6,75 (d, J = 8 Hz, 1H). -15- ι

D. Morfolinocarbonil-PheNLeO-Bn A uma solução de 3,0 g do produto do Exemplo 1C e de 2,9 g de éster benzilico de L-norleucina em 50 ml de cloreto de metileno, foi adicionado a 1,6 ml de trietilamina, a 2,19 g de HBT e a 2,3 g de DEC, e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente, durante 16 horas. A mistura foi diluída com 400 ml de acetato de etilo lavada com ácido clorídrico 0,1N (1 x 40 ml) com uma solução de bicarbonato de sódio (2 x 40 ml) e com uma solução de salmoura saturada (1 x 40 ml). A fase orgânica foi separada, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada. O residuo foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 1:19, v:v) para obter 4,23 g do produto desejado. RMN (300 MHz, CDC13) delta 0,80 (t, J « 7 Hz, 3H); 4,49 (m, 1H), 4,59 (m, 1H) e 5,03 (s, 2H). E. Morfolinocarbonil-PheNle

Uma mistura de 4,32 g do prpduto do Exemplo 1D e de 1,05 g de carvão com 10% de paládio em 200 ml de metanol, foi agitada vigorosamente numa atmosfera de hidrogénio, a uma pressão de 50 psi, durante 4 horas. A mistura foi filtrada e concentrada para dar 3,78 g de ácido em bruto. RMN (300 MHz, DMSO-dg) delta 0,88 (largo, 3H); 4,15 (m, 1H) e 4,33 (m, 1H). 16-

F. Morfoninocarbonil-PheNLe-HACPP(OCH3)^ A uma solução de 120 mg do produto do Exemplo 1E e de 84 mg de produto do Exemplo 1B em 2 ml de cloreto de metileno seco, foi adicionado 31 mg de trietil-amina seca, 70 mg de HBT e 59 mg de DEC. Depois de agitação durante a noite à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 20 ml de cloreto de metileno e foi lavada com ácido clorídrico 0,1N (1 x 10 ml) e solução de hidróxido de sódio 0,1N (1 x 10 ml). A fase orgânica foi separada, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado (metileno:cloreto de metileno, 7,5:92,5, v:v) para obter 90 mg do produto desejado na forma de uma mistura de epímeros do grupo hidroxilo 3:1. RMN (300 MHz, CDC13) delta 3,75 (d, J = 10 Hz, 3H); 3,78 (d, J = 10 Hz, 3H); 3,99 (m, 1H); 4,25 (m, 1H); 4,35 (m, 1H) e 4,61 (m, 1H). EXEMPLOS 2-9

Empregando os procedimentos do Exemplo 1 e partindo com o fosfito de dialquilo apropriado e com o S-metil-L-cisteína apropriado em vez do L-norleucina, os compostos seguintes foram preparados: -17

18

RMN (300 MHz)delta

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EXEMPLO 10 3-Oxopirrolidin-l-ilcarbonil-PheSMeCys-HACPP(OCH3)2 (Rj^ = 3-oxopirrolidin-l-ilcarbonilo, R2 = H; R3 = CH3SCH2; e R4, R5 = OCHg)

Seguindo o procedimento do Exemplo 1 mas substituindo o morfolinocarbonilo por 3-oxopirrolidin--1-ilcarbonilo e o L-norleucina pelo S-metil-cisteina, o composto em epígrafe foi preparado. RMN (300 MHz, CDC13) delta 2,14 (s, 3H), 3,78 (d, J =11 Hz, 3H), 3,81 (d, J =10 Hz, 3H), 4,20 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 4,54 (m, 1H) e 4,80 (m, 1H). EXEMPLO 11

Imidazol-4-ilcarbonil-PheSMeCys-HACPP(OCH3)2 (R.^ = imidãBDl-4-ilcarbonil· R2 = H; R3 = CH3SCH2; e R4, R5 = OCH3) A. BocMeCys-HACPP(OCH3)2

Empregando o procedimento do Exemplo 10, 1,2 g de Boe-S-metil-L-cisteina foi acoplado com 1,0 g de HACPP(OCH3)2,HC1 usando o procedimento do DEC. O produto em bruto foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno -22-

1:19, v:v) para obter 1,2 g do produto na forma de uma mistura de epímeros de hidroxilo 3:1. RMN (300 MHz, CDCl.3)delta 1,44 (s, 9H); 2,15 (s, 3H); 3,78 (d, J = 10 Hz, 3H) e 3,89 (d, J = 10 Hz, 3H).

B. SMeCys.HACPP(OCH3)2.HCL O produto do Exemplo 11A (1,2 g) foi tratado com cloreto de hidrogénio 4N em dioxano, à temperatura ambiente, durante 2 horas, para obter 1,1 g do produto desejado. RMN (300 MHz, DMSO-dg)delta 2,14 (s, 3H); 3,63 (d, J =10 Hz, 3H) e 3,68 (d, J = 10 Hz, 3H). C. BocPheSMeCys-HACPP(OCH3)2

Fenilalanina de Boc (1,14 g) foi acoplado com 1,0 g do produto do Exemplo 11B, usando o procedimento do DEC do Exemplo 11B, usando o procedimento do DEC do Exemplo 10. O produto em bruto foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 1:19, v:v) para obter 1,04 g de material puro. -23-

RMN (300 MHz, CDCl3)delta 1,37 (s, 9H); 2,10 (s, 3H); 3,78 (d, J = 12 Hz, 6H), 3,93 (dd, J = 4, 11Hz, 1H); 4,18 (m, 1H), 4,35 (m, 1H) e 4,52 (m, 1H).

D. PheSMeCys-HACPP(OCH3)2.HCL

Uma solução de 1,04 g do produto do Exemplo 11C foi agitada em 15 ml de cloreto de hidrogénio 4N, em dioxano durante 30 minutos, à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada e o resíduo seco sob alto vácuo, para originar 1,01 g de produto em bruto. RMN (300 MHz, DMS0-dg) delta 2,06 (s, 3H); 3,80 (m, 1H); 4,04 (m, 2H) e 4,50 (m, 1H). E. Imidazol-4-ilcarbonil-PheSMeCys-HACPP(OCH3)2

Acido imidazole-4-carboxilico (34 mg) foi acoplado com 166 mg do produto do Exemplo 11D, usando o procedimento do DEC, padrão, em dimetilformaroida, como descrito no Exemplo 10. O material em bruto foi cromatografa-do (metanol -cloreto de metileno, 1:9, v:v) para obter 79 mg de produto na forma de uma mistura de epímeros de hidró-xilo. -24-

RMN (300 MHz, 3H), 3,85 (d, 4,36 (m, 1H); CDCl3)delta 2,06 (s, 3H), 3,77 (d, J =10 Hz, J = 10 Hz, 3H); 3,97 (d largo, J =13 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,60 (m, 1H) e 4,80 (m, 1H). EXEMPLOS 12-16

Empregando o procedimento do Exemplo 11E e partindo com o ácido apropriado e com o produto do Exemplo 11D, os compostos seguintes foram preparados:

-25-

_ΡΜΜ (300 ΜΗζ)delta_ (DMSO-dg) 2;07 (s, 3Η), 3,59 (dd, J=10 Ηζ, 3Η), 3,62 (d, J=10 Hz, 3H) , 3,80 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,44 (m, lfl), 4,64 (m, 1H). 10 O O ch3c(ch2)3c- (CDC13) 2,00 (s, 3H) , 2,04 (s, 3H), 4,72 (d, J=12 Hz, 3H), 4,76 (d, J=12 Hz, 3H), 4# 06 (dd 11 Hz, 1H) , 4,30 (m, 1H) , m, 1H) , 4,80 (m, 1H) , 4,94 1H) .

O II lC- (DMSO-dg) o CM (S, 3H) , 3,60 ím 6H), 3,79 (m, 1H) , 4,10 (m, 1H) 4,45 (m, 2H) .

HO (DMSO-dg) 2,03 (s 6H), 3,79 (m, 1H) 4,44 (m, 3H) . 3H), 3,60 (m, 4,18 (m, 1H), 9 15 -26-

RMN (300 ΜΗζ)delta ο «ο 0 (CH2)4C- (CDC13) 2,10 (s, 6H), 3,78 (d, J=12 Hz, 3H), 3,82 (d, J*12 Hz, 3H), 4,10 («, 1H), 4,35 (a, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,92 (m, 1H), 5,45 (m, 1H). EXEMPLOS 17-18

Usando o procedimento do Exemplo 11 e substituindo HACPP(OCH3>2 por HACCP e Partindo com o ácido requerido, os compostos análogos seguintes foram preparados:

_R1_ _RMJf .(300 MH2) delta_

O O CH3C(CH2)3C- CDC13) 2,01 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 4,28 fm, 1H) , 4,67 (m, 1H) , 4,87 (m, 1H) , 5,18 (m, 1H). O n -C- (CDC13) 1,28 (t, J=7 Hz, 3H), 2,13 (s, 3H), 3,80 (m, 1H), 4,06 (ra, 4H) , 4,18 (m, 1H) , 4,50 (m, 1H) , 4,71 (m, 1H) . 23-

EXEMPLO 19 (R^ = morfolinocar- r5 = och3)

Morfolinocarbonil-PheSer-HACPPÍOGH^ bonil; R2 = Hí R3 = HOCHg-T © R4, A. Ser-HACPP(OCH3>2 de Boc usando o procedimento de acoplamento de BEC do Exemplo 1D, 210 mg de BocSerOH foi reagido com 278 mg de HACPP(OCH3)2.HC1 para dar, depois de cromatografia (metanol:cloreto de metileno, 1;19, v:v) 105 mg do produto desejado, como o produto menos polar, e 41 mg do epímero de hidróxilo. RMN (300 MHz, CDC13) delta 1,41 (s, 9H); 3,70 (d, J =10 Hz, 3H) e 3,82 (d, J - 10 Hz, 3H).

B. Ser-HACPP(OCH3)2.HCL O produto do Exemplo 19A (159 mg) foi desprotegido usando cloreto de hidrogénio de acordo cora o procedimento do Exemplo 1B, para originar 79 mg do produto. RMN (300 MHz, DMSO-dg) delta 3,61 (d, J = 10 Hz, 3H) e 3,65 (d, J = 10 Hz, 3H). C. Morfolinocarbonil-PheSer-HACPP(OCH3)2 0 morfolinocarbonil-Phe (61 mg) foi acoplado com 74 mg de Ser-HACPP(OCH3)2.HCL, usando o procedimento do DEC do Exemplo 1D, para obter, depois de cro-matografado (metanolcloreto de metileno, 1:9, v:v) 47 mg do produto desejado. RMN (300 MHz, CDClg) delta 3,62 (d, J = 10 Hz, 3H); 3,83 (d, J = 10 Hz, 3H) e 4,20 (m, 3H). EXEMPLO 20

Morfolinocarbonil-PheHis-HACPPÍOCH-Jg (R·^ = morfolino-carbo-nil; = H; R3 = imidazol-4-ilmetilo; e Rg = OCH3 O composto em epigrafe foi preparado de acordo com o procedimento do Exemplo 19, substituindo BocSer por BocHis. RMN (300 MHz, acetona-dg) delta 3,72 (d, J = 13 Hz, 3H); 3,76 (d, J = 13 Hz, 3H); 3,87 (dd, J = 5, 10 Hz, 1H); 4,27 (m, 1H), 4,38 (m, 1H) e 4,54 (m, 1H). EXEMPLO 21 4-oxopiperidinocarbonil-PheSMeCys-HACPP(OCH3)2 (R^ * 4-oxopiperidinocarbonilo; Rg = H; Rg = CH2SCH3; e R4 = Rg = ogh3) A. Cetal de etileno-glicol de 4-oxopiperidinocarbonil-PheOBn A uma solução de PheOBn-isocianato (450 mg) em 20 ml de cloreto de metileno aos OQC, foi adicionado 2L5 μΕ de cetal de etileno-glicol de 4-oxopiperidina e a msitura reaccional resultante foi deixada a agitar durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi diluida com acetato de etilo (200 ml) e foi lavada com 20 ml de uma solução de hidróxido de sódio 0,1N. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e foi concentrada in vacuo para originar, depois de cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 1:19, v:v) 490 mg de produto puro. RMN (300 MHz, CDC13) delta 3,94 (s, 4H); 3,84 (m, 2H) e 5,12 (AB, 2H).

B. Cetal de etileno-glicol de 4-oxopiperidinocarbonil-PheOH

Uma mistura de 480 mg do produto de éster benzilico do Exemplo 21A e de 500 mg de carvão com 10y6 de paládio, em 30 ml de metanol foi agitada vigorosamente numa atmosfera de hidrogénio, a uma pressão inicial de 50 psi durante 3 horas. O catalisador foi filtrado edo filtrado foi concentrado in vacuo para originar 400 mg de produto. -31- RMN (300 MHz, DMSO-dg)delta 3,87 (s, 4H) e 4,18 (m, 2H). C. Cetal de etileno-glicol de 4-oxopiperidinocarbonil- -PheSMeCys-HâCPP(OCH3)2 O produto do Exemplo 21B (251 mg) foi acoplado com 200 mg do produto do Exemplo 11B, usando o procedimento de OEC do Exemplo 1D. O produto em bruto foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 1:19, v:v) para originar 147 mg do material desejado na forma de uma mistura de epimeros de hidroxilo 3:1. RMN (300 MHz, CDC13) delta 2,14 (s, 3H), 3,82 (d, J=10 Hz, 3H), 3,83 (d, J = 10 Hz, 3H) e 3,96 (s, 4H). D. 4-oxopiperidinocarbonil-PheSMeCys-HACPP(OCH3

Uma solução do cetal do Exemplo 21C em 5 ml de tetrahidrofurano e 5 ml de ácido clorídrico a 10% foi agitada à temperatura ambiente, durante 6 horas. A mistura foi tratada com 200 ml de acetato de etilo e a camada orgânica foi lavada com uma solução de bicarbonato sódio saturada (2 x 20 ml). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e concentrada in vacuo. O residuo, depois de cromatografado (metanol-cloreto de metileno 1:19, v:v) originou 100 mg do material desejado como uma mistura de epimeros de hidroxilo de 3:1. -32-

RMN (300 MHz, CDCI3) delta 2,10 (a, 3H), 3,76 (d, J =11 Hz, 3H); 3,79 (d, J = 11 Hz, 3H), 4,20 (m, 1H), 4,5 (m, 3H) e 4,72 (m, 1H). EXEMPLOS 22-27

Empregando os procedimentos do Exemplo 21 & substituindo o Boc-SMeCys pelo amino-ácido como Boc protegido apropriado, os compostos seguintes foram preparados :

OH -33-

rmn pop MHz)delta

3 0 H2NC(CH2)2- CH3(CH2)2-

CH CH30(CH2)2- CH3CH2“ (CDC1 3» 3 /73 (d. J*13 Hz , 3H), 3,77 (d, J*12 Hz, 3H), 3 ,92 (m, 1H), 4,3S (®, 2H) , 4,54 (m, 1H) (CDC1 3' 3 ,80 (m, 6H), 4, 08 (m, 1H), 4,40 (m, 3H) , 4,78 (m, 1H) (DMSO -d6> 3,64 (d , J=ll Hz, 3H) 3,66 (d. J*ll Hz, 3H) , 3 ,78 ím, 1H) , 4,12 (m, 1H) , 4,32 (m, 1H) 4,45 (m, 1H) . • (CDC1 3> 1 ,36 (d, J=8 Hz, 3H) , 3,73 (d. J=13 Hz, 3H), 3 ,76 (d, J=12 Hz, 3H) , 3,97 (dd, J=3 , 12 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H), 4 ,42 (m, 1H), 4,61 (m, 1H) . (CDC1 3> 3,22 (s. 3H) , 3,78 (d, J=12 HZ, 3H) , 3, 80 (d, J=12 Hz, 3H) , 3,94 (dd 4 J =3 4 11 Hz, 1H) , 4,28 (m, 1H) , 4, 39 (m, 1H) 4 4,52 (m, 1H). (CDCl 3> 3,79 (d, J =12 Hz, 3H) , 3,82 (d, J=12 Hz t 3H) , 4,05 {dd, J=4, 12 Hz, 1H) , 4 ,30 (m, 1H) , 4,38 (m, 1H) , 4; 70 ím, 1H) « -34-

J3XEMPL0S 28-32 usando os procedimentos do Exemplo 21 e substituindo derivado de fenilalanina requerido, os compostos foram preparados;

OH RM,n (300 MHz)delta 0 ch3£- (CDC13) 0/97 (s, 3H)/ 2,11 (br.s, 3H), 3,75 (d, J=10 Hz, 3H) , 3,79 (d, J=10 Hz, 3H), 3,98 fdd, J=2, 12 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,68 (m, 1H).

HO

O N-C (CDC13) 2,12 (s, 3H), 3,81 (d, J= 12 Hz, 3H), 3,83 (d, J=12 Hz, 3H), 3,95 (dd, J=2, 12 Hz, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,58 (m, 1H). C= O -c- (CDC13) 2,12 (s, 3H), 3,79 (d, J= 10 Hz, 3H), 3,83 (d, J=10 Hz, 3H), 4,12 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,90 (m, 1H) , 5,08 (m, 1H) .

R 1 rmn (300 MHz)delta

ΓΛ · CHJ N-C- 3W (CD013) 2,12 (s, 3H), 3,79 (d, J* 11 H2, 3H), 3,81 (d, J»ll Hz, 3H), 3,95 (η, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,57 (*, 1H). 0 (CDC13) 2/ 09 (s, 3H), 3 ,48 (d, J 12 Hz, 3H) , 3 /52 íd, J= 12 Hz, 3H), 3, 76 (d, J= 12 Hz 9 6H), 3,98 (dd, J= 3/ 11Hz, 1H), 03 (m, 1H), 4, 23 (m, 1H), 4, 68 (m, 1H) .

(CH30)2P EXEMPLO 33 3-Oxopirrolidinoacetil-PheSHeCys~HACPP(OCHg)^ (R^ = 3-oxopirrolidinoacetilo; Rg - Rg - C^SCB^; e R4, Rg = OCH3) A. Cloroacetil-PheOBn A uma solução agitada de 2,0 g de hidrocloreto do éster de benzilo de fenilalanina e de 2,0 ml de trietilamina em 40 ml de cloreto de metileno aos 06C. foi adicionado, gota a gota, uma solução de 0,53 ml de cloreto de cloroacetilo em 10 ml de cloreto de metileno, e a solução foi deixada agitar à temperatura ambiente, durante 3 horas. A mistura foi vagada, em 200 ml de água e extracta-da com acetato de etilo (2 x 200 ml). Os extractos foram combinados, lavados com ácido clorídrico 0,1N (2 x 40 ml) e secos sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi triturado com hexano, para originar 1,97 g de produto. RMN (300 Mhz, CDC13) delta 3,16 (d, J = S Hz, 2H); 4,0 3 (s, 2H) e 4,91 (m, 1H). B, 3-hidroxipirrolidinoacetil-PheOBn

Oma mistura de 510 mg de produto do Exemplo 33A e de 300 mg de 3-hidroxipirrolidina em 15 ml da tetra-hidrofurano foi aquecida aos 559C, durante 16 horas. A mistura foi vazada em 100 ml de água e extractada cora acetato de etilo (2 x 100 ml). Os extractos combinados foram lavados com água, secos sobre sulfato de magnésio e foram concentrados. O produto em bruto foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 1:9, v:v) para originar 500 mg do produto em bruto na forma de uma mistura de epímeros de hidróxilo. 37-

C. 3-oxopirrolidinoacetil-PheOBn A uma solução de 0 ,2 ml de dimetil-sulfóxido em 3 ml de cloreto de metileno aos -60SC foi adicionado 0,14 ml de cloreto de oxalilo e a solução resultante foi agitada, durante 20 minutos, aos -60SC. Uma solução de 0,49 g do produto do Exemplo 33B em 10 ml de cloreto de metileno foi adicionado, gotaa gota, e a solução foi deixada aquecer aos -30SC. A mistura foi arrefecida aos -78SC e 0,89 ml de trietilamina foi adicionada. A mistura reaccio-nal foi deixada aquecer â temperatura ambiente durante 1 hora, e depois foi vazada em 100 ml de água. A mistura reac-cional extinta foi extractada com acetato de etilo (2 x 200 ml) e os extractos foram combinados, lavados com uma solução de bicarbonato de sódio saturada e secos sobre sulfato de magnésio. O produto em bruto foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 1:9, v:v) para dar 460 mg de matériaL puro. RMN (300 MHz, CDCl3)delta 2,34 (t, J = 7 Hz, 2H); 4,92 (m, 1H) e 5,17 (AB, 2H). D. 3-oxopirrolidinoacetil-Phe

Uma mistura de 460 mg do produto do Exemplo 33C e de 460 mg de carvão com 10% de paládio foi agitada vigorosamente numa atmosfera de hidrogénio a uma pressão inicial de 50 psi. O catalisador utilizado foi filtrado e o filtrado concentrado para dar 340 mg do produto desejado. —33—

ΗΜΝ (300 ΜΗζ, CDC13)delta 2,30 (t, J =6 Hz, 2H); 4,42 (m, 13) e 7,20 (m, 5H). S. 3-Qxopirrolidinoacetil-PheSMeCys-HACPP(OCH^ O produto do Exemplo 33D (100 mg) foi acoplado com 125 mg do produto do Exemplo 113, usando o procedimento do DEC do Exemplo 1D. 0 prpoduto em bruto foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 1:19, v: v) para dar 36 mg do produto na forma de uma mistura de epímeros de hidróxilo. ΛΜΝ (300 MHz, CDCl3)delta 2,14 (s, 3H); 3,78 (d, J=ll Hz, 3H); 3,79 (d, J = 11 Hz, 3H); 4,00 (m, 1H); 4,17 (m, 1H) e 4,57 (m, 2H). EXEMPLOS 34-36 o procedimento do Exemplo 33 foi empregue, usando a amina apropriada em vez de 3-hidroxi-pirrolidina para dar os produtos seguintes:

—39 — HO

"Λ 1 J

RMNi(300 MHz)delta Ο NCH2C- (CDC13) 2,11 (s, 3H); 3,78 (d, J= 11 Hz, 3H), 3,80 (d, J=ll Hz, 3H), 3,98 (m, 1H), 4,18 (m, 1H) , 4,57 (m, 2H).

rmn (300 MHz)delta (CDC13) 2,14 (s, 3H), 3,78 (d, J= 12 H2, 6H), 4,00 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,60 (m, 2H). / \ \_y NCH2C- (CDC13) 2,12 (s, 3H), 3,77 (d, J= 11 Hz, 3H), 3.78 (d, J=ll Hz, 3H), 3,98 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,57 (m, 2H). EXEMPLO 37 4-oxopiperidinocarbonil-PheSMeCys-HACPP(QCE^CHgC^O)

= 4-oxopiperidinocarfoonilo; Rg , Rg em conjunto = -OCHgCH^CHgO- = H; R3 ) = CH„SCHn; 2 3' e

Empregando o procedimento do Exemplo 21, mas substituindo o dimetilfosfito por HP(OCH2CH2CH20) originou o composto em epígrafe. 41-

(300 Μ Hz, CDC13) delta 2,09 (s, 3H); 4,10 (m, 2H); 4,37 (m, 2H)· 4,46 (m, 1H); 4,60 (m, 1H) e 4,72 (m, 2H). EXEMPLOS 38-42

Empregando os procedimentos dos Exemplos 21/37 e substituindo o 4-oxopiperidinocarbanil-Phe pelo derivado de fenilalanina requerido, os compostos análogos seguintes foram preparadoss

1

1 R RMN(300 MHz)delta 0 (CDC13) 1,97 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 4,29 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 4,68 (m, 3H) # 4,88 (m, 1HJ . (DMSO -v 2,06 (s, 3H) , 3,88 (m, 1H) , 4;10 (Π1/ 1H) , 4,29 (m, 3H) , 4,42 (m, 1H) , 4,53 (m, 2H) . (DMSO-dg) 2,04 (s, 3H) , 3,90 (is, 1H), 4,09 (m, 1H) , 6,39 (s, 1H), 6,86 (s, 1H) . ch3-c- / \ -

) N-C v_/ o Ο

Ν H

O (CH30)2P- (CDC13) 2,12 (s, 3H) , 3,52 (d, J* 12 Hz, 6H), 4,12 (m, 3H), 4,42 {m, 2H) , 4,69 (m, 3H) . r°4 y (CDC13) 2,15 (br, 3H), 3,65 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,76 (m, 1H). EXEMPLOS 43-45 usando o procedimento do Exemplo 21/37 mas substituindo o BocSMsCys pelo arnino ácido de Boc protegi do apropriado, os compostos seguintes foram preparados:

R OH 3

RMN {3Q0 MHz)delta (CDCl-j) 4,14 (m, 2H) , 4,43 (n, 3H), 4,60 (m, 1H) , 4,76 (m, 2H). (CDC13) 3,38 (s, 3H), 3,92 (dd, j=4, 10 Hzt 1H), 4,13 (m, 2H) , 4,82 (in/ 1H) . (CDC13) 2,04 (s, 3H), 4,00 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,40 (m, 3H), -44-

EXEMPLO 46

Morfolinocarbonil-PheSMeCys-HACPP(O-nC^H^ >2 (R^ = morfolinocarbonilo, R2 = H; R3 = CH^SCHg* 3 , Rg = = och2ch2ch3) O composto em epígrafe foi preparado usando o procedimento do Exemplo 19, substituindo o Boc-Ser por Boc-SmeCys e o dimetilfosfito por di-n-propilfos£ito. RMN (300 Mhz, CDC13)delta 2,13 (s, 3H); 3,58 (m, 4H); 3,82 (m, 1H) e 4,02 (m, 4H) „ EXEMPLO 47 4-Oxopiperidinocarbonil-PheSMeCys-BACPP (OCH^) (R^ = 4-oxopiperidinocarbonilo; R2 = H; = CH2SCH3; e R, R4 = OCH3; o-í-c3h7) O composto em epígrafe foi preparado empregando o procedimento do ExenpLo 21, mas substituindo o dimetilfosfito por metil-isopropilfosfito. RMN (300 MHz, CDCl^) delta 1,36 (d, J = 6 Hz, 6H); 2,14 (s, 3H)*f 4,28 (m, 1H)· 4,52 (m, 3H) e 4,75 (α, 1H). EXEMPLO 43 4-Oxopiperidinocarbonil-OtíeTyrSMeCys-BACPP (OCHg (R^ = 4-oxopiperidinocartoonilo; Rg - CH^O; Rg = CHgSCHg-í e , Rg ~ OCHg)

Por substituição do L-fenilalanina por O-metil-L-tirosina e usando o procedimento do Exemplo 21, o composto em epígrafe foi preparado. RHN (300 MHz, CDClg) delta 2,12 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 4,93 (dd, J =4, 12 Hz, 1H); 4,26 (m, 1H) e 4,50 (m, 2H). EXEMPLO 49

Morfolinocarbonil-OMeTyrSMSCys-HACPP(OCHg)^ (R^ = morfolinocarbonilo; Rg = OCH^; Rg= ÇHgSCHgj e , r5 - och3) O composto em epigrafe foi preparado através dos procedimentos dos Exemplos 21/48, por substituição do 4-oxopiperidina por morfolina. RMN (300 MHz, CDClg) delta 2,09 (s, 3H) j 3,74 (s, 3H); 3,93 (m, 1H); 4,30 (m, 1H); 4,48 (m, 1H) e 4,55 (m, 1H). EXEMPLO 50 (och2ch2ch2o) R3 = CH2SCH3; 4-Oxopiperidinocarbonil-OMeTySMeCys-HACPP (R^ » 4-oxopiperidinocarbonilo; R2 = CH^O; e R^, Rg em conjunto = -OÍCE^ÍgQ-)

Por substituição da L-fenilalanina com OMe-L-tirosina nos procedimentos dos Exemplos 21/37, o composto em epigrafe foi preparado. RHN (300 MHz, CDClg) delta 2,12 (s, 3H); 3,78 (s, 3H); 4,13 (m, lfl); 4,26 (m, 1H); 4,39 (m, 3H); 4,58 (m, 1H) e 4,72 (m, 2H). EXEMPLO 51 CH2302CH3· 4-oxopiperidinocarbonil-PheS02MeCys~HACPP(QCH2CH2CH20) (R^ = 4-oxopiperídinocarbonilo; R2 = H; R3 e R^, Rg em conjunto =» -0(CH2)30-)

Ao produto do Exemplo 37 (50 mg) em 15 ml de clorofórmio foi adicionado 33 mg de ácido m-clo-roperbenzoico, aos OQC. Depois de agitação durante 1 hora a mistura foi diluida com 50 mi de acetato de etilo e lava da com uma solução de sulfito de sódio a 10% (2 x 50 ml) e uma solução de hidróxido de sódio Q,1N. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, concentrada e cromato-grafada (metanol-cloreto de metileno, 8:92, v:v) para dar 18 mg de sulfona desejada. -47-

R'4N (300 lAhz, CH3OH-d4) delta 3,05 (s, 3H), 4,08 (m, 1H); 4,49 (m, 3H) e 4,73 (m, 2H). EXEMPLO 52 4-Oxopiperidinocarbonil-PheSOMeCys-HÃCPP (0CHrtCHoCHr,0) e (R^ = 4-oxopiperidinocarbonilo; R2 = H; R^ = CHgSOCH^ R4 "' RS em donjunto = -QÍCí^igG-) O produto do Exemplo 37 (50 mg) em 5 ml de clorofórmio, aos OSC, foi tratado com 16 mg de ácido m-cloroperbenzoico e a mistura foi deixada agitar, durante 1 hora. Sulfito de sódio sólido (200 mg) foi adicionado , a mistura foi concentrada e o residuo foi cromatogra fado (metanol-cloreto de metileno, 8:92 v:v) para originar 32 mg de uma mistura de sulfóxidos. RMN (300 MHz, CH3OH-d4) delta 2,74 (2xs, 3H); 4,08 (m, 1H) 4,49 (m, 4H) e 4,75 (m, 3H).

EXEMPLO 53

Morfolinocarbonil-PheNLe-HACPP(OCH^) (ONa) (R^ = morfolinocarbonilo; Rg = H, - OCH3 e Rg = ONa)

Uma mistura de 31 mg do produto do Exemplo 1 e de 8 mg de iodeto de sódio em 2 ml de acetona foi refluxada durante 18 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter dietilico para obter 35 mg do sal desejado. RMN (300 Mhz, D20) delta 3,62 (d, 3H); 3,70 (m, 1H); 4,18 (m, 1H); 4,28 (m, 1H) e 4,54 (m, 1H). EXEMPLO 54

Morfolinocarbonil-PheSMeCys-HACPP(CH^)^ (R^= morfolinocarbonilo; Rg = H; R^ = CHjSCH^; e R^, Rg * = ch3> A. Boo-HACPP(CHj)2

Uma mistura de 3,23 g de óxido de dimetilfosfina, de 3,52 g de Boc-ciclo-hexilalanala e de 4,0 g de fluoreto de potássio em 10 ml de dimetilformamida foi agitada à temperatura ambiente sob azoto, durante 36 49-

horas. A mistura foi diluída com 500 ml de acetato de etilo e lavada com água (5 x 100 ml). A camada orgânica foi seca concentisda e o residuo foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 7i93, v:v) para originar 3,28 g do intermediário desejado. RMN (300 MHz, CDC13) delta 1,46 (s, 9H)j 1,53 (d, J =12 Hz, 6H); 3,86 (m, 1H) e 3,93 (m, 1H), 3. hacpp(gh3)2.hcl 0 produto do Exemplo 54A (230 mg) foi desprotegido com cloreto de hidrogénio em dioxano, como no Exemplo 1, para dar 230 mg de produto em bruto. 5ΜΛ (300 MHz, DMSO-dg) delta 1,54 (d, J = 13 Hz, 3H)j 1,58 (d, J a 14 Hz, 3H) e 3,86 (m, 1H). C. Boc-SMeCys-HACPP(CH3)2 usando o procedimento de DEC padrão 197 mg de Boc-SMeCys foi acoplado com 180 mg do produto do Exemplo 54B. Um trabalho em fase aquosa originou 245 mg do produto na forma de uma mistura de epimeros de hidroxilo de 3:1. -50

RMN (30 0 Mhz, GDCl^) delta 1,46 (s, 9H); 2,15 (s, 3H), 3,90 (m, 1H); 4,16 (m, 1H) e 4,34 (ra, 1H). D.

SMeCys-HACPP(CH3)2.HCL O produto do Exemplo 54C (230 mg) foi desprotegido usando cloreto de hidrogénio em dioxano, como no Exemplo 1, para dar 240 mg de produto em bruto. RMN (300 Mhz, DMSO-dg)delta 1,38 (d, J = 12 Hz, 3H); 1,43 (d, J - 13 hz, 3H); 2,14 (s, 3H) e 3,72 (m, 1H). E. Morfolinocarbonil-PheSMeCys-HACPP(CH^)g

Morfolinocarbonil-Phe (200 mg) foi acoplado com 230 mg do produto do Exemplo 54D, usando o procedimento do DEC padrão do Exemplo 1D para dar, depois de cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 7,5:92,5, v;v) 102 mg do produto desejado. RMN (300 Mhz, CDC13) delta 1,50 (d, J = 12 Hz, 3H); 1,52 (d, J = 12 Hz, 3H); 2,08 (s, 3H), 3,79 (m, 1H); 4,37 (m, 1H) e 4,48 (m, 2H). EXEMPLOS 55-57

Empregando o procedimento do Exemplo 54 e empregando o derivado de fenil-alanina apropriado, os compostos análogos foram preparados:

-52- R 1 Ο Ο Ν Η Ο ch3Í-

RMN (300 ΜΗζ)delta (CH3OH-d4) 1,52 (d, J*12 Hz, 3H), 1,54 (d, J«12 Hz, 3H), 2#01 (s, 3H), 3,85 (dd, J=3, 6Hz, 1H), 6,51 (m, 1H), 6,73 (m, 1H). (CDC13) 1,51 (d, J=12 Hz, 6H), 1,92 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 3,84 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,77 (m, 1H). (CDC13) 1,52 (d, J=13 Hz, 3H), 1,56 (d, J=14 Hz, 3H), 2,12 (s, 3H) , 3,80 (m, 1H), 4,36 (m, 1H) , 4,54 (ra, 2H). EXEMPLOS 58-59 Partindo com o derivado do óxido de dialquilfosfina requerido e do raorfolinocarbonil-PheSMeCys e usando o procedimento do Exemplo IP, os compostos seguintes foram preparados: • > <

C2H5 C2H5 (CDC13) 2.14 (br s, 3H) , 3.90 (m, 1H) , 4.42 (m, 2H), 4.51 (m, 1H). - (CH2)4 - (CDC13) 2,08 (S| 3H), 4,06 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,44 (m, 1H) , 4,52 (m, 1H). EXEMPLOS 60-61

Por substituição do HACPPÍCH^)2 pelo derivado de fosfito de alquilo apropriado nos Exemplos 54 e 57, os compostos seguintes foram preparados; R,

—4 RMN (300 MHz)delta / \ -O N-C- \_y - (CH2)5- (CDC13) 2,01 (s, 3H), 3, 82 (m, 1H), 4,34 (m, 1H) , 4,47 (m, 2H) . 0=/ N-C - (CH2)5- (CDC13) 2,08 (s, 3H) , '-' 2,32 (m, 4H), 3,80 (br 1H), 4,27 (m, 1H), 4,4 (m, 2H) . -55-

JSXEMPLO 62

Morfolinocarbonil-PheSMeCys-HACPP/”N(CH3)2 J 2 (R^ « morfolinocarbonilo; = H; = CH2SCH3; e R^, Rg = = n(ch3)2) A. CBZ-HAGPP/~N(CH3)2 J2

Uma solução de 734 mg de HPO/“N(CH3 em 10 ml de tetra-hidrofurano foi adicionado aos -78SC, a 1,1 equivalentes de diisopropilamina de litio, em 10 ml de mesmo solvente, e a solução foi deixada aquecer aos -50SC, durante 3 horas. CBZ-ciclo-hexilalanala (740 mg) em 10 ml do mesmo solvente foi adicionado gota a gota à mistura reaccional e a mistura reaccional foi agitada, durante 4 horas. A reacção foi extinta com uma solução de cloreto de amónio e vazada em 200 ml de água e extrcatada com acetato de etilo (2 x 200 ml). Os extratos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e foram concentrados. 0 resíduo foi cromatografado (metanol-cloreto de metileno, 5:95, v:v) para originar 528 mg do intermediário desejado. RMN (300 Mhz, CDC13) delta 2,60 (m, 12H), 3,91 (m, 1H) e 4,02 (m, 1H). -56- '« i

3. HACPP/ N(CH3 )2 J2

Uma mistura de 355 mg do produto do Exemplo 62A e de 355 mg de carvão com 10% de paládio, em 25 ml de metanol foi agitada vigorosamenter numa atmosfera de hidrogénio a uma pressão de 50 psi, durante 3 horas. O catalisador foi utilizado, foi filtrado e o filtrado foi concentrado, para originar 255 mg do produto. KMN (300 Mhz, CDC13) delta 2,64 (m, 12H), 3,06 (m, 1H) e 3,28 (m, 1H). C. Morfolinocarbonil-PheSMeCys-HACPP/ N(CH3)2 1^ O produto do Exemplo 62B (255 mg) foi acoplado com 381 mg de morfolino carfoonil-PheSMeCys, usando o procedimento geral do Exemplo 1F para dar, depois de croma tografia (metanol-cloreto de metileno, 5:95, v:v) 35 mg do isómero mais polar desejado. SMN (300 MHz, CDC13) delta 2,13 (s, 3H), 2,65 (d, J =13 Hz, 6H), 2,68 (d, J = 13 Hz, 6H), 4,17 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,43 (m, 1H) e 4,51 (m, 1H). ííXèMPJjQ 63

Boc-PheSMeCys-HACPP(OCH2CH2CH20) (R1 = (CH3)3COCO-; R2 = H; R3 = CH3SCH2; s ^ e Rg em conjunto « -OCHgCHgCHgO-) O composto em epigrafe foi preparado por substituição do 4-oxopiperidinocarbonilo por Boc-Phe no Exemolo 37, RMN (300 Mhz) CDC13) delta 1,32 (s, 9H), 2,05 (s, 3H); 4,00 (m, 2H), 4,30 (m, 2H), 4,45 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,72 (m, 1H) e 4,85 (m, 1H). EXEMPLO 64 4-oxopiperidinocarbonil-PheNLe-HACPP(OCE^CHgCHgO) (R^ = 4-oxopiperidinocarbonilo; R2 = H; R3 = CH3(CH2)3-; e R^ e Rj em conjunto = -0CH2CH2CH20-) O composto em epigrafe foi preparado por substituição do Βοσ-SMeCys por Boc-NLe no Exemplo 37, RMN (300 MHz, CDClg) delta 3,54 (m, 4H); 4,08 (m, 2H), 4,32 (m, 2H); 4,47 (m, 1H) e 4,67 (3H).

Claims

-58-

R Ε I V INDICAÇÕES: 1§. - Processo para a preparação do composto de fórmula ,R

3 ou de um seu sal farmacêuticamente aceitável, em que (CHgOgP^O), (CH2 )302P(=0) ou Χ-Ϋ-, onde X é, morfolino, N-metilpiperazino, piperidino", pirrolidin-l-ilo ou pirro-lilo, 3-oxopirrolidin-l-ilo, imidazolilo, cis 4-hidroxici-clo-hexilo, trans-4-hidroxiciclohexilo, acetilalquilo tendo três a seis átomos de carbono, alquilo tendo um a três átomos de carbono, 4-oxopiperidino, 4-oxociclo-hexilo, alcoxi tendo um a cinco átomos de carbono ou 4-hidroxipiperidino e X é -CH2C(=0) ou -C(=0)-; R2 é hidrogénio ou metoxi; Rg é alquilo tendo um a quatro átomos de carbono, metoxialqui-lo tendo o referido alquilo um a três átomos de carbono, metiltioalquilo tendo o referido alquilo um a três átomos de carbono, hidroximetilo, imidazol-4-il-metilo, metilsul-fonilmetilo, metilsulfinilmetilo ou carbamiletilo; R^ e Rg quando considerados separadamente, são cada um alquilo com um a três átomos de carbono, benzilo, alcoxi tendo um a três átomos de carbono, dimetilamino ou hidroxi; e R^ e Rg quando tomados em conjunto, são ákjuileno tendo três a -59- Λ Η ¢. -59- Λ Η ¢.

quatro átomos de carbono ou mono- ou di-metilalquilenodioxi tendo quatro a seis átomos de carbono, caracterizado pela formação de uma ligação amida, CON, por acoplamento com desidratação entre os fragmentos

-SO-

em que os grupos funcionais não envolvidos na reacção podem ser bloqueados, num solvente inerte à reacção até que a reacção esteja substancialmente completa, seguido por remoção selectiva de quaisquer dos grupos de bloqueamento e, se desejado, formação de um sal farmaceuticamente aceitável do produto. 2â„ - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o solvente inerte de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o solvente inerte à reacção ser o cloreto, de metileno e a temperatura reac-cional ser de cerca de 25°C. Lisboa, 14 de Fevereiro de 1990

).. PENEIRA DA CRUZ Afsnte Oficiai da Prspríedads tòstrial SUA YICTOR CCRD&N, 10-A, 1.* 1200 LISBOA