PT86374B - Processo para a preparacao de novos inibidores iii de renina e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Processo para a preparacao de novos inibidores iii de renina e de composicoes farmaceuticas que os contem Download PDF

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Joseph Thomas Repine
James Stanley Kaltenbroun
James Perry Hudspeth
Michael Andrew Stier
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Description

A renina é uma enzima natural que é libertada para o sangue a partir do rim. Esta enzima hidrolisa o seu substracto natural, o angiotensiogénio, dando origem a um decapeptídeo, a angiotensina I. Esta é por sua vez hidrolisada pela enzima conversora no pulmão, no rim e em outros tecidos dando origem a um octapeptídeo, a angiotensina II. A angioten sina II provoca um aumento da pressão sanguínea tanto directa mente mediante uma constrição das artérias como indirectamente por meio do estímulo da libertação de aldosterona, uma hor
N.
mona que contribui para a retenção de sódio causando um aumen to do volume do fluido extracelular,a partir da glândula adre nal. Tem sido considerado que os inibidores da renina podem constituir agentes para o combate da hipertensão e do hiperal do steronismo.
A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de novod peptídeos inibidores da renina. Diz respeito também a um processo para a preparação de composições farmacêuticas contendo estes novos peptídeos úteis para o tratamento de hipertensão associada à renina, de hiperal dost eronistno e da congestão do coração, bem como a um processo para a preparação de agentes de diagnóstico usando os novos peptídeos.
A patente dos Estados Unidos 4 479 941 diz respeito a certos inibidores de renina da fórmula
pedido de Patente Europeia N® 85/308759 diz
respeito a certos dipeptxdeos inibidores de renina da fórmula
R2* í
RZ 0 R3 0 , . . 1 « 1 II 1 CELOH 0 i 2 II ,
R1-(o) -Cli-C-NH-GH-C-NH-CH-CH-CHn-C-R5 m 2 f 1 5 m » em que m e O ou 1 e R a JC são vários grupos orgânicos.
pedido de Patente Europeia 184 855 diz • respeito a peptádeos inibidores de renina da fórmula
em que À é um grupo cadeias laterais de protector de amina; R^, R^, R^ e R? são ácidos aminados alquílicos inferiores ou lípofílicas ou aromáticas e podem ser iguais ou diferentes; Rg, R^ e Rg são hidrogénio ou alquilo inferior e podem ser iguais ou diferentes; X è hidrogénio, alquilo inferior ou -CHg-ORg, em que Rg é hidrogénio, alquilo inferior ou aralqui lo; R^ é alquilo inferior, hidroxilo, hidroxialquilo, alcoxi, alilo, alcariloxi ou tioalquilo, e os seus sais farmaceuticament e aceitáveis.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a novos peptídeos da fármula
ACIL -X-Y-W-U (l) e aos respectivos sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis em que ACIL, X, Y, W e U possuem os significados definidos seguidamente.
âmbito da presente invenção abrange um pro cesso para a preparação dos novos peptídeo» de formula I acima definida.
A presente invenção inclui também um processo para a preparação de composições farmacêuticas úteis para o tratamento de hipertensão associada a renina, caracterizado por se incorporar uma quantidade efectiva de um peptídeo da fármula I acima definido em mistura com uma substância veicu lar ou um excipiente farmaceuticamente aceitável.
Para além disso, a presente invenção inclui um
processo para a preparação de composições farmacêuticas úteis para o tratamento de hiperaldosteronismo, caracterizado por se incorporar uma quantidade efectiva de um peptfdeo da fórmu la I acima definido em mistura com uma substância veicular ou um excipiente farmaceuticamente aceitável.
A presente invenção também inclui um processo para a preparação de agentes de diagnostico para a identificação de casos de hipertensão devidos a excesso de renina caracterizado por se incorporar um peptádeo da fórmula I.
Para além disso, a presente invenção inclui ainda um processo para a preparação de composições farmacêuti cas úteis para o tratamento de ataques do coração por congestão, caracterizado por se incorporar uma quantidade efectiva de um peptídeo da fórmula I acima definido em mistura com uma substância veicular ou um excipiente farmaceuticamente aceita vel.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA quadro que se segue contém um dicionário dos termos usados na descrição da presente invenção.
QUADRO I
Abreviatura
HIS
D-HIS
LEU
D-LEU
STA
PHSTA
CYSTA
Ácido aminado
L-histidina
D-histidina
L-leucina
D-leucina ácido 4(s)-amino-3(s)-hidroxi-6-metil-heptanoico ácido 4(s)-amino-3(s)-hidroxi-5-fenilpentanói co ácido 4(s)-amino-3(S)-hidroxi-5-ciclo-hexanopentanóico
Quadro I (continuação )
Abreviatura Ácido aminado
ILE L-isoleucina
D-ILE D-isoleucina
M-MeHIS N-Metil-histidina
N-Me LEU N-Metil-leucina
N-MelLE N-Metil-i soleucina
PHE L-f enilalanina
HOMOPHE ho mof enilalanina
HOMOHIS homo-histidina
NLE no rl euc ina
VAL L-valina
A SP ácido L-aspártico
Grupo protector
Z benziloxicarbonilo
BOC t -b ut i lo xi c a rb oni lo
TRT tritilo
TOS to silo
Grupo acilo
DNMA di-(1-naftilmetil)-acetilo
Amldas com b enzilamina
-NHCHgPh ciclo-hexilmetilamina
-KH2
-NHCH
ch2nhz (BOC)
-NHCH
m-xileno-di-amina (Z ou BOC) m-xileno-di-amina amónia
- 5 QUADRO I (continuaçao
-NHCHOCHCHCH
2 3 ch3
-nhch-ch(ch„)choch„ I 3 2 J
CHgOH
-OCH^
-oc2h5
4-amino-N-benzilpiperidina
4-aminopiperidina
4-aminometilpiridina
2-metilbutilamina
1-hidroximetil-2-metilbutilamina
Ésteres com metanol etanol
Os peptídeos da presente invenção são representados pela fórmula
ACIL -X-Y-W-U (i) bem como dos seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis, em que ACIL é DNMA (di-(1-naftilmetil)-acetilo),
em que R é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior de cadeia linear ou ramificada com um a seis átomos de carbono,
ou ο
Η
PhCH2CH-Ô-5
SCHgPh
X é HIS, HOMOHIS, PHE, HOMOPHE, ILE, LEU, NLE,
N-MeHIS, N-MeLEU ou
O
-NHCHC-;
Y é STA, CYSTA ou PH STA;
W 4 LEU, ILE, N-MeLEU, Ν-MeILE, VAL ou está ausente com a condição de que, quando ACIL é DNMA, W está pre s ent eí e
U é -NHCH2CH(CH3)CH2CH3, -NHCHgPh,
-NHCHCH(CH3)CH2CH3, -NHCH2CH( OH )CH2SCH(CH3)g, ch2oh
-NHCH2CH(OH)CH2SOCH(CH3)2I -NHCH2CH(OH)CH2SO2CH(CH3)2,
-NHCH2CH=CH2>
-°c2 h 5,
São considerados preferidos de entre os compostos da presente invenção da fármula I aqueles em que U 4
-NHCH2Ph, -NHCH2
-nhch2ch=ch2, -nhch2ch(oh)ch2sch(ch3)2,
-NHCH2CH(OH)CH2SOCH(CH3) 2 f
-NHCH2CH(OH)CH2SO2CH(CH3)2, ou -NHGH2CH(CH3)CH2CH3.
São considerados particularmente interessantes os seguintes compostos abrangidos no âmbito da presente invenção» bem como os respectivos isomeros e sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis:
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCH2Ph ,
C-HIS-QTA-LEU-NHCH2Ph, i2Et , . , o \ / 11
X,—Ç-C-HIS- STA-LEU-NHCH2Ph, C02H p
PhCHgCH-J-HIS-CYSTA-NHCHgCH(CH3)CH2CH3, SCHgPh
PhCH2CH-C-HIS-STA-LEU-NHCH2Ph,
SCH2Ph
li
CH-C-HIS-STA-NHCH CH(CH„)CH CH„, I -5
COg-t-Bu
DNMA-HIS-STA-NHCH2CH=CH2,
DNMA-HIS- STA-NHCH2CH ( OH) 0Η£ SCH (CH^ ) £,
DNMA-HIS- SYA-NHCH2C H( OH ) CHg SOgC H (CH^ ) g,
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCHg
DNMA-(D-HIS)-STA-LEU-NHCH^h, DNMA-HIS-STA-(D-LEU)-NHCHgPh,
DNMA- (N-MeHIS)-STA-LEU-NHCHgPh, DNMA-HIS-STA-(N-MeLEU)-NHCHgPh, DNMA-HIS-CYSTA-LEU-NHCHgPh,
BOC-NH CO2CH3
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCHg
DNMA-ASP(OCH2Ph)-CYSTA-LEU-NHGHgPh, DNMA-ASP-CYSTA-LEU-NHCH Ph, íC
DNMA-ASP(N7 ^O)-CYSTA-LEU-NHCH Ph, \ / 2
DNMA-HIS-STA-NHCH2
ou
DNMA-HIS- STA-NHCH
Outros compostos da presente invenção incluem os seguintes:
DNMA-HIS-STA-ILE-BHCHgPh,
DNMA-HIS-STA-ILE-NHCH
4*
DNMA-LEU-STA-NHCHgCH ( OHjCHgSOgCH (CH3 ) 0 dnma-his-sta-nhch2ch(oh)ch2soch(ch3)2,
DNMA- (N-MeHIS) - STA-LEU-NHCHg CHgNHg,
DNMA- (N-MeHIS)-CYSTA-LEU-NHCH2Ph,
DNMA-(N-MeHIS)-CYSTA-LEU-NHCH2
t
DNMA-(N-MeHIS)-CYSTA-LEU-NHCH2 DNMA-HIS-STA-(N-MeILE)-NHCH^Ph,
ch2nh2,
DNMA,HIS-STA-(N-MelLE)-NHCH
C-C-LEU-STA-LEU-NHCHgPh, (!o2Et
ο
C02H
DNMA-HIS- STA-LEU-NHCH2CH=CH2,
DNMA-HIS-CYSTA-LEU-NHCH2CH=CH2
DNMA-HIS-STA-ILE-NHCHgCHsCHg,
DNMA-HIS-STA-ILE-NHCH2
DNMA-HIS-STA-VAL-NHCH Ph,
ÍZ»
DNMA-HIS-STA-VAL-NHCH2
DNMA-HIS-STA-VAL-NHCHg
DNMA-HIS-STA-(D-ILE)-NHCH^Ph, e DNMA-HOMOPHE- STA-LEU-NHCHgPh.
Os compostos da presente invenção incluem os solvatos, os hidratos e os sais de adição de ácido farmaceuti camente aceitáveis dos compostos da formula I acima referidos que sejam básicos.
A expressão sal de adição de ácido farmaceuti camente aceitável pretende significar um sal de adição de áci do relativamente não toxico formado tanto com ácidos inorgâ-
nicos como com ácidos orgânicos, como sejam, por exemplo, áci do clorídrico, bromídrico, iodídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, oxálico, malónico, salicílico, málico, benzdico, glucónico, fumárico, succínico, ascórbico, maleico, tertárico, metanossulfónico e semelhantes. Os sais são preparados fazendo reagir a forma de base livre com uma quantidade suficiente do ácido pretendido de modo a obter um sal de acor do com as técnicas habituais. As formas de base livre podem ser regeneradas por tratamento do sal com uma base.
Os peptídeos modificados da presente invenção possuem um ou mais centros quirais e cada centro pode existir sob a configuração r(d) ou s(l), A presente invenção inclui todas as formas enantioméricas e epiméricas bem como as mistu ras apropriadas destas formas.
Alguns dos novos peptídeos referidos podem ser preparados de acordo com o processo da presente invenção utilizando técnicas bem conhecidas de síntese de peptídeos a partir dos ácidos aminados constituintes. Outros dos novos pe ptídeos da presente invenção são preparados por um procedimen to faseado ou por um procedimento de acoplamento de fragmentos, dependendo do produto final pretendido.
Os esquemas que se seguem ilustram formas de concretização do processo da presente invenção mediante novas vias sintéticas aplicáveis à preparação de alguns do peptídeos da presente invenção.
- 14 ESQUEMA I
BOC-NHCHgCHxCHg (D ácido m-cloroperbenzoico —--->
.0
BOC-NHCH2CH ;'CII (2) (ch3) chsh
---£_±------> boc-nhch2ch(oh)ch2sch(ch3)2 (3)
HC1 -->
H2NCH2CH ( OH ) CH2 SCH (CH3) 2 (M
DNMA-HIS (TRT) - STA
DNMA-HIS (TRT ) - STA-NHCH2C H ( OH ) CH2SCH (CH3 ) 2 (5)
HOAc --> DNMA-HIS- STA-NHCH CH ( OH)CH„SCH (CH„ ).
H,0 2 2 3 *- 2 (6)
De acordo com o esquema I anterior, faz-se reagir um alceno protegido por BOC e substituído em NH com a dupla ligação em 1 (1), por exemplo uma alil-amina, com um agente de epoxidação de modo a que se obtenha o epóxido prote gido correspondente (2). Saz-se reagir o epoxido com um merca ptano para formar o tioéter protegido (3). 0 tioéter 6 em seguida feito reagir com HC1 a fim de eliminar o grupo protector, obtendo-se o composto (U) correspondente com uma extremi dade de amina livre. A amina é feita reagir com um ácido aminado ou com um peptídeo contendo um ácido carboxílico livre terminal, por exemplo DNMA-HIS(TRT)-STA, a fim de dar origem ao peptídeo correspondente possuindo uma fracção de amida con tendo uma função tio (5)» o qual é em seguida feito reagir com ácido acético aquoso a fim de eliminar o grupo TRT, dando ori gem ao composto (6) pretendido da formula I de acordo com a presente invenção. Este composto pode ser convertido, se assim se pretender, num sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.
São agentes de epoxidação úteis na reacção o : ácido m-cloroperbenzóico, o ácido benzóico e o ácido perftáli co. 0 agente preferido é o ácido m-cloroperbenzóico.
i
A reacção tem lugar num solvente inerte» tal ! como diclorometano, tetra-hidrofurano, clorofórmio » dioxano ou acetato de etilo. 0 solvente preferido é o diclorometano. I i
Entre os mercaptanos cuja utilização é possí- j vel nesta sequência estão todos os alquil-mercaptanos, arai- | quil-mercaptanos ou aril-mercaptanos, 0 mercaptano preferido ! é o isopropil-mercaptano .
grupo protector é eliminado com um ácido forte, tal como ácido trifluoroac ético, HC1 ou HBr. De preferência usa-se HC1.
A eliminação do grupo TRT é levada a efeito com ácido acético aquoso, com HC1 diluido ou com H^SO^ diluído. De preferência esta operação é levada a efeito com ácido acético diluído.
A reacção de epoxidação é moderadamente exotérmica e pode ser realizada a temperaturas entre 0 e 25°C. A temperatura de reacção preferida é próxima da temperatura ambiente.
período de reacção varia de 4 a 48 horas.De preferência este período demora cerca de 24 horas.
A expressão grupo protector refere-se a grupos destinados a proteger as extremidades N-terminais contra reacçães inconvenientes durante a síntese ou a aumentar a solubilidade dos produtos finais pretendidos e inclui os grupos Z e BOC, sem contudo ser limitada a estes grupos.
A expressão alquilo inferior refere-se a radi cais alquilo de cadeia linear ou ramificada contendo de 1 a |
- 16 i
átomos de carbono, incluindo metilo, etilo, n-propilo, propilo, n-butilo, iso-butilo, s-butilo, 2-metil-hexilo, -pentilo, 1-metilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 2-metilpentilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo e outros grupos similares, embora não seja limitada aos grupos referidos.
ESQUEMA II
BOC-NHCH CH=CH (Ϊ) (2) ácido m-cloroperbenzoico ·>
Λ
BOC-NHC^CILCH (CH ) CHSH
---·*-*------> BOC-NHCH2CH(OH)CH2SCH(CH3)2 (3) ácido m-cloroperbenzáico ----- —.----->
BOC-NHCH2CH(OH)CH2SO2CH(CH3)2 (M
HC1 , K , DNMA -HIS(TRT)-STA
H2NCH2CH(OH)CH2SO2CH(CH3)2 -(5)
DNMA-HIS (TRT) - STA-NHCHgCII ( OH ) CH2SO2CH (CH^ ) (6)
HOAc
--------> DNMA-HIS-STA-NHCH CH(OH)CH SO-CH(CH_)
H_0 J * 2 2 (7)
Em alternativa, alguns dos compostos da presente invenção tendo uma ligação de sulfona podem ser prepados de acordo com o Esquema II representado acima. 0 tio éster (3) do Esquema I é oxidado de forma a que se obtenha a sulfona correspondente por reacção com um perácido. As sulfonas protegidas de (4) acima representadas são feitas reagir com HC1 a fim de produzir os compostos com a extremidade amina li vre (5)· Estes compostos são feitos reagir com DNMA-HIS(TRT)-STA dando origem a um peptídeo contendo uma sulfona (6). Esta é feita reagir com ácido acético aquoso dando origem a pe- 17
ptídeos (7) da fórmula I da presente invenção. Estes podem ser convertidos em sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis.
A estratégia de síntese da cadeia peptídica e j a selecção e eliminação dos grupos protectores são discutidos 1 no Capítulo 1» The Peptide Bond , de The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, E. Gross and J. Meienhofer, Eds., Acadamic Press, Nova Iorque, Ny, 1979» Vol. 1, pp. 42-44.
I método de DCC/HOBT de acoplamento é bem conhecido dos especialistas na matéria e é discutido no Capítulo 5» The Carbodiimide Method por D. H. Rich e J. Singh em The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, E. Gross e J. Meienhofer, Eds», Academic Press, Nova Iorque, NY, 1979, Vol. 1, pp. 241-261.
O acoplamento de peptídeos depende da actividade do grupo carboxílico do ácido aminado protegido antes da condensação de outro peptídeo contendo uma extremidade com uma amina livre terminal. Além do método de acoplamento por DCC descrito acima, outros métodos de activação do grupo carboxílico dum ácido aminado protegido incluem:
1) 0 método da azida - descrito no Capítulo 4 da referência ' anterior.
2) 0 método do anidrido misto - descrito no Capítulo 6 da re- i i ferência anterior,
3) 0 método do éster activado - descriti no Capítulo 4 da re- } ferência anterior. '
I t
Os compostos da presente invenção têm utilida de para o tratamento de hipertensão associada a renina,de ata ques de coração por congestão e de hiperaldosteronismo, Estes compostos também são úteis para a preparação de agentes de dia gnóstico para a determinação da presença de hipertensão associada a renina ou de hiperaldosteronismo.
âmbito da presente invenção abrange igualmente um processo para a preparação de composições farmacêuti cas que contêm uma quantidade efectiva do composto em combina ção com uma substância veicular farmaceuticamente aceitável. Estas composições têm utilidade para o tratamento de hiperten são em mamíferos.
Estas composições farmacêuticas têm igualmente utilidade para o tratamento de hiperaldosteronismo em mamí feros.
Estas composições farmacêuticas são ainda de utilidade para o tratamento do ataque do coração por congestão em mamíferos.
A eficácia do composto referido é determinado por um ensaio para a actividade inibidora da renina in vitro. Esta actividade é determinada por uma análise radioimunológi ca normal para a angiotensina I. Neste ensaio, a enzima, reni na, incubada durante duas horas a 37° 0 na presença de um substrato, angiotensiogénio, dá origem ao produto, angiotensina
I. Os compostos a ensaiar são adicionados à mistura de incuba ção. A actividade relativa é descrita como a 1C
50’ a qual é a concentração molar do composto em ensaio que provoca uma ini bição de 50$» na actividade da renina.
Exemplo
Actividade
IC50 (M) 1.3x1O8
5.6x107
4.3x1O-7
I i
!l / \
ΌΗ-C-HIS- STA-NHCH CH (CH„) CH_CH„ j d j ά j
C02-t-Bu
DNMA-HIS- STA-NHCH2CH=CH2
DNMA-HIS-STA-NHCH2CH (0H)CH2SCH(CH3)2
DNMA-HIS- STA-NHCH2CH ( OH JCH^ SOgC H (CH^)
---C-CO-HlS-STA-NHCH CH(CH-)CHOCH_ /! 2 o 2 0
BOC-NH COgCH^
-C-CO-HlS-STA-NHCH CH(CH_)CH_CH„ /1 4 Á -5
BOC-NH CONHg
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCH
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCH
PhCH-CHC O-HIS-STA-LEU-NHCH Ph
Λ j
SCH2Ph
PhCH2CHCO-HIS-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
SCHgPh
z
3.2x10
1.9x107
2.2X1O-7
8.2x10-8
1.5x1 o 6
8,6x10 7
5.7x19 8
6.9x10-9
2.2x10 &
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCHO J 2 n 2.8x109
DNMA-(D-HIS)-STA-LEU-NHCHgPh 5.9x1o6
DNMA-HIS-STA-(D-LEU)-NHCH2Ph 3.2x10
DNMA-ASP(OCH2Ph)-CYSTA-LEU-NHCHgPh 4,6χ1θΖ 9.8x19 7
DNMA-ASP-CYSTA-LEU-NHCH.^Ph
DNMA-ASP(N \)-CYSTA-LEU-NHCHoPh \__/ 1.3x1 o5 Q
DNMA-HIS-CYSTA-LEU-NHCHgPh 1.2x10
DNMA-(N-MeHIS)-STA-LEU-NHCH2Ph 4.1x19°
DNMA-HIS-STA-(N-MeLEU)-NHCHgPh 3.6x1O8
DNMA-HIS-STA-NHCH2
CHNHZ
DNMA-HIS-STA-NHCH
4.0x10
8.6x10 7
A eficácia dos compostos referidos in vivo 4 determinada pelo efeito na redução da pressão sanguínea manti da por meio de renina num rato anestesiado a que se retirou o vago e com os gânglios bloqueados. Administra-se então por in fusão renina de suíno a fim de levar a pressão sanguínea a um nível observado antes da vagotomia e do bloqueamento dos gânglios. 0 composto em ensaio é então administrado por via i. v. e a queda da pressão sanguínea é anotada.
„ . Redução da pressão
Composto / * , sanguínea em percentagem
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCH2Ph 65% composto foi administrado a uma dose de 1 mg/kg.
As substâncias veiculares para a preparação de composições farmacêuticas a partir dos compostos descritos de acordo com o processo da presente invenção podem ser substanciai veiculares inertes farmaceuticamente aceitáveis sólidas ou líquidas. As formas sólidas incluem pós, comprimidos, grânulos, cápsulas e supositórios. Uma substância veicular só lida pode ser uma substância simples ou misturas que podem também actuar como diluentes, agentes aromáticos, solubilizan tes, lubrificantes, agentes de suspensão, agentes de ligação ou agentes de desintegração de comprimidos. A substância veicular sólida também pode ser o material de encapsulação. Em pós, a substância veicular é um sólido finamente dividido mis turado com o composto activo também finamente dividido. Em comprimidos, o composto activo é misturado com a substância veicular, que deve ter as necessárias propriedades de ligação, em proporções adequadas, sendo compactado na forma e dimensão pretendidas. Os pós e os comprimidos contêm de preferência de
a 10 até cerca de 7θ por cento do ingrediente activo. São substâncias sólidas adequadas carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco, açúcar, lactose, pectina, dextrina,ami do, gelatina, goma adragante, metilcelulose, uma cera de baixo ponto de fusão, manteiga de cacau, etc.. 0 termo preparação inclui a formulação do composto activo com o material de encapsulamento como substância veicular de forma a formar uma cápsula na qual o composto activo (com ou sem outras substâncias veiculares) está rodeado pela substância veicular, estan do assim em associação com ela. Também se consideram cápsulas de gelatina dura. Os comprimidos, os pás e as cápsulas podem ser usados como formas sólidas de apresentação adequadas para administração oral.
Os compostos da presente invenção podem ser administrados por via oral, bucal ou parenteral, por pulverização para inalação, por via rectal ou de modo tópico em formulações de dosagem unitária contendo aditivos, adjuvantes e substâncias veiculares farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos habituais conforme pretendido. 0 termo parenteral tal co- . mo usado na presente descrição inclui injecções subcutâneas bem como técnicas de injecção ou de infusão intravenosa, intramuscular ou intraestemal.
Para a preparação de supositórios, funde-se em primeiro lugar uma cera de baixo ponto de fusão, como por exemplo uma mistura de glicerídeos de ácidos gordos ou mantei ga de cacau, e em seguida dispersa-se na massa fundida o ingrediente activo com agitação até homogeneidade. A mistura fundida homogénea é então deitada em moldes de dimensão e for ma conveniente, sendo em seguida arrefecida até solidificar.
Os preparados sólidos incluem soluções, suspensões e emulsões. Como exemplo podem mencionar-se soluções em água ou em água/propilenoglicol para injecção parenteral. As preparações líquidas podem também ser formuladas em solução em polietilenoglicol aquoso. As suspensões aquosas adequa
das para administração oral podem ser preparadas por dispersão do componente activo finamente dividido em água com um ma terial viscoso, como sejam gomas naturais e sintéticas, resinas, metilcelulose, carboximetilcelulose e outros agentes de suspensão bem conhecidos.
Também se consideram incluídos os preparados sólidos destinados a serem convertidos imediatamente antes da utilização em preparados sob forma líquida para administracção oral ou parenteral. Estas formas líquidas incluem soluções, suspensões e emulsões. Este preparados sólidos específi cos são de modo conveniente produzidos sob a forma de doses unitárias e são usados sob esta forma para a preparação duma única forma líquida de dose unitária.. Em alternativa, a formulação pode conter sólido suficiente de tal modo que após conversão na forma líquida são obtidas múltiplas doses líquidas individuais por medida de volumes pré-determinados no pre parado sob forma líquida por meio de uma seringa, duma colher de chá ou de outro contentor volumétrico. Quando se preparam deste modo múltiplas doses líquidas, é preferível manterapor ção não usada do preparado líquido a baixa temperatura (isto é, à temperatura do frigorífico) de modo a retardar uma possí vel decomposição. Os preparados sólidos destinados para conversão em formas líquidas podem conter, além do material acti vo, aromatizantes, corantes, estabilizadores, tampões, edulco rantes artificiais ou naturais, dispersantes, espessantes, so lubilizantes, etc.. 0 líquido utilizado para a preparação do preparado sob forma líquida pode ser água, água isotónica,eta nol, glicerina, propileno-glicol, etc., bem como misturas des tes líquidos. Naturalmente, o líquido utilizado deverá ser es colhido tendo em atenção a via de administração, por exemplo preparados líquidos contendo grandes quantidades de etanol nao são adequados para uso parenteral.
De preferência, o preparado farmacêutico é apresentado sob a forma duma dose unitária. Nesta forma,o pre parado está subdividido em doses unitárias contendo quantida23
des apropriadas do componente activo. A forma de dosagem unitária pode ser um preparado embalado, contendo a embalagem quantidades discretas do preparado, por exemplo, comprimidos embalados, cápsulas e pás em frascos ou em ampolas. A forma de dosagem unitária pode também ser a própria cápsula ou o proprio comprimido ou pode ser um numero apropriado da qual quer destas formas numa embalagem.
A quantidade de composto activo num preparado de dose unitária pode variar ou ser ajustada de 1 mg a 500 mg, de preferência de 5 a 100 mg, de acordo com a aplicação específica e com a actividade do composto activo. As composições podem, se assim se pretender, conter também outros agentes te rapêuticos compatíveis.
Para uso terapêutico como inibidores de renina, a gama de dosagem para mamíferos, para um paciente de 70 kg, é de 1 a 1500 mg de peso corporal por dia ou, de preferên cia, de 25 a 750 mg de peso corporal por dia, opcionalmente em porçSes divididas. As dosagens podem contudo variar de acor do com as necessidades do caso, a gravidade da afecção em tra tamento e o composto utilizado. A determinação da dosagem ade quada para uma situação particular pode ser feita de acordo com as técnicas habituais. Geralmente o tratamento é iniciado com doses manores que são menos do que a dose óptima do compos to. Em seguida a dosagem é aumentada por pequenos incrementos até se atingir o efeito áptimo nas circunstâncias. Pode ser conveniente dividir a dosagem diária total e administrá-la em porções durante o dia, se assim se pretender.
Os exemplos que se seguem destinam-se a permi tir que um especialista na matéria possa reproduzir o processo da presente invenção. Estes exemplos não significam de qual quer modo alguma limitação do âmbito da presente invenção, ilustrando apenas esta.
EXEMPLO 1
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCH^Ph
Di sso1veu-se DNMA-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCHgPh (1,30 g, 1,20 mmole) em 80 ml de HOAc a 80% e aqueceu-se num banho de vapor durante cinco minutos. Deixou-se arrefecer a solução até 25°C durante uma hora, depois do que se removeu o solvente sob vácuo. Dissolveu-se o resíduo em EtgO ao qual se adicionou dalmoura, dando um precipitado oleoso do produto bruto. Separou-se a fase etérea e lavou-se a suspensão aquosa do óleo com éter etílico para remover o álcool tritílico resi dual.
ção d e Et OAc.
o pH das fases e extraíram-se aquosa e oleosa a 12 por as fases exaustivamente adiAjustou-se . NaOH 1 N,
Lavou-se a fase orgânica
MgSO^, filtrou-se e lavou-se o bolo do filtro com CHgClg. Reuniram-se os filtrados e evaporaram-se até um óleo que foi re tomado numa quantidade mínima de EtOAc. Precipitou um sólido por adição de EtgO, que se filtrou, se lavou com Et^O ® s® s® cou até se obter um sólido branco, 0,64 g. A estrutura duto foi confirmada por análises espectrais de NMR, de massa.
Calculado para
Det erminado C51HÓON6°5 c, 72,62;
C, 72,62;
com com salmoura, secou-se sobre
O.OóCHCl^ (p.m. 844,54):
H, 7,17;
H, 7,18;
N, 9,95
N, 9,97.
do
IV pro e de
EXEMPLO 2
c-his-sta-nhchoch(cho)chocho I 2 3Z 2 3
C0,-t-Bu ch-c-his(trt)-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3 éo2-t-Bu (3,53 g, 3,88 mmole) foi dissolvido em ml de HOAc a 80$> e aquecido num hanho de vapor durante dois minu tos. Removeu-se o solvente sob vácuo e dissolveu-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a solução de EtOAc com NaOH e depois com salmoura. Depois de seco sob sulfato de magnésio e filtrado» reduziu-se o filtrado a um quarto do seu volume sob vácuo,dan do um gel. Diluindo com Et^O deu 2,41 g de produto como um sá lido branco. A estrutura foi confirmada por análises espectrais de NMR, de IV e de massa.
EXEMPLO 3
DNMA-HIS- STA-NHCH2CH ( OH JCHgSCH (CH3 ) %
Aqueceu-se num banho de vapor uma solução de 0,5 g (0,5 mmole) de DNMA-HIS(trt)-STA-NHCH2CH(OH)CH2SCH(CH3)2 em 15 ml de HOAc a 8θ;ο, durante 10 minutos, depois deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. Removeu-se o solvente sob vácuo, adicionou-se água e evaporou-se a solução outra vez sob vácuo. Retomou-se o resíduo em EtOAc, lavou-se com sal moura, secou-se sob MgSO^ e filtrou-se. A adição de EtgO ao filtrado deu o produto bruto como um sálido. A cromatografia em sílica gel, eluindo com MeOH em CHCl^ a 2$> deu 0,22 g do produto como uma espuma branca. A estrutura foi confirmada por análises espectrais de NMR e de massa.
Calculado para C^H^N^O^S. 0, ÍÓCHGI^ í c, 67,50; H, 7,07; N, 8,91 Determinado C, 67,29; Η, 7,02; N, 8,83.
EXEMPLO 4
DNMA-HIS-STA-NHCH CH(OH)CíT S9nCH (CH„ ) & £ d J £
Aqueceu-se num banho de vapor DNMA-HIS(TRT)-STA-NHCH2CH(OH)CH2SO2CH(CH3)._ (0,63 g, 9,61 mmole) durante 5 minutos em 15 ml de HOAc a 90%. Depois de arrefecer até 25° durante trinta minutos evaporou-se o solvente e retomou-se o resíduo em água. Evaporou-se a mistura, retomou-se em EtOAc e secou-se sobre MgSO^. Eiltrou-se a solução e reduziu-se o vo-
lume. A adição de EtgO fez precipitar um sólido que se recolheu e secou para dar 0,37 g ào produto. A estrutura do produ to foi confirmada por análises espectrais de NMR e de massa.
Aqueceu-se uma solução de 0,5 g (0,51 mmole)
de C-CO-HIS(TRT)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 10 ml boc-nh'co2ch3 de HOAc a 8orfo num banho de vapor durante cinco minutos, depois deixou-se arrefecer à temperatura ambiente durante trinta mi nutos. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e retomou-se o óleo residual em EtOAc. Lavou-se o EtOAc com NaHCO^ saturado e com NaCl saturado e secou-se. Concentrou-se a solução de EtOAc até um pequeno volume e deitou-se num grande excesso de EtgO. Rec°lheu-se o precipitado sólido e lavou-se com EtgO. Obtiveram-se 0,22 g de produto como um sólido branco . A estrutura foi confirmada por análises espectrais de NMR e de espectroscopia de massa.
Calculada para C^H^N^Og (PM 736,92)i
C, 63,57» H, 7,66; N, 11,40 Determinado C, 63,20; H, 7,64; N, 11,10.
EXEMPLO 6
C-CO-HIS-STA-NHCH CH(CH„)CH CH d «2 J
C0NH2
Aqueceu-se uma solução de 0,22 g (0,228 mmole) de I---C-CO-HIS(TRT)-STA-NHCHCH(CH„)CH CH em 5 ml de
J 2 J
BOC-NH CONH
HOAc a 80% num banho de vapor durante trinta minutos, removeu -se então o solvente sob pressão reduzida e retomou-se o sóli do residual em EtOAc. Filtrou-se a solução, concentrou-se atê um pequeno volume sob pressão reduzida e deitou-se num excesso de Et^O. Recolheu-se o precipitado sólido e lavou-se com EtgO. Obtiveram-se 0,08 g de produto como um sólido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa. Calculado para CjgH^N^.0,75HOAc (PM 766,92):
C, 61,86; Η, 7,62; N, 12,78
Determinado C, 61,95; H, 7.63; N, 13.77.
EXEMPLO 7
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCH
H2NHZ
Aqueceu-se uma solução de 1,80 g (1,5 mmole) de DNMA-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCH2-X^jLcH2NHZ em 30 ml de HOAc a 80% num banho de vapor durante cinco minutos. Depois de arrefecer atê à temperatura ambiente durante uma hora, evaporou-se a solução sob pressão reduzida e retomou-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a solução com NaCl saturado, NaOH 1 N e clore to de sódio saturado. Depois de secar, evaporou-se a solução sob pressão reduzida atê um volume de 15 ml e adicionou-se a 200 ml de EtgO. Filtrou-se o precipitado resultante, lavou-se com Et2O e secou-se para dar 1,19 g de produto como um sólido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para Ο^θΗ^Ν^ .HgO (PM 1018,28);
c, 70,77; h, 7,03; n, 9,62; h2o, 1,77 Determinado C, 71,14; H, 6,82; N, 9,61; HO, 1,79.
- 28 EXEMPLO 8
DNMA-HIS-âTA-LEU-NHCH
A uma solução de 1,04 g (1,04 mmole) de DNMA-
—CHONHZ em 70 ml de MeOH adicionaramborbulhar hidroge filtrou-se e eva-HIS-STA-LEU-NHCH - .
se 0,15 g de catalisador Pd/C a 20JÓ. Fez-se nio na suspensão durante duas horas e meia, porou-se sob pressão reduzida para dar 3,87 Triturou-se a espuma com Et^O, filtrou-se e Obtiveram-se 0,84 g de produto como um solido, foi confirmada por espectroscopia de NMR e de Calculado para C^gH^N^O^.HgO (PM 884,14):
C, 70,64;
C, 70,54;
Determinado
H, 7,41;
H, 7,42;
EXEMPLO 9 g de uma espuma, lavou-se com Et^O.
A estrutura
N, 11,09;
N, 11,37;
1,03 em 25 ml d e HOAc massa.
h2°, H2°>
2,10.
g de a 8C$ num banho de vapor durante cinco minutos, depois deixou -se em repouso durante trinta minutos a temperatura ambiente. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e triturou-se síduo com água. Retomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se NaCl saturado, NaHCO^ saturado e depois NaCl saturado. A gem e a remoção do solvente sob pressão reduzida deixou áleo. Este foi retomado em EtOAc e precipitou-se o produto com o re com seca um
EtgO. Obtiveram-se 0,5 g de produto puro como um sólido branco . A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para C^H^N^O? (PM 909,15);
C, 71,34; H, 7.09; N, 9.24
Determinado C, 71.34; Η, 7,θ3» N, 9.11·
Aqueceu-se uma solução de 0,5θ g (0,52 mmole) de
C-CO-HIó(TRT)-STA-LEU-NHCH Ph em 20 ml de HCKc έο,Η a 80$ num banho de vapor durante cinco minutos depois deixou
-se estar à temperatura ambiente durante duas horas. Filtrou
-se a mistura para remover algum sólido precipitado e concentrou-se o filtrado sob vácuo. Retomou-se o resíduo em CHCl^ quente, lavou-se NaCl saturado e secou-se. Concentrou-se o fâl trado e precipitou-se o produto por adição de EtgO. Obtiveram -se 0,36 g de produto como um sólido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para ¢^6(^6^7 *°*75H2° (PM 8?4,5ó/s
C, 69,81; H, 6,93; N, 9,4o
Determinado C, 69.68; H, 6,82; N, 9,41.
EXEMPLO 11
Ph-CH-CHCO-HIS-STA-LEU-NHCH Ph
SCHgPh
Arrefeceu-se uma solução de 0,22 g (0,8 mmole)
de ácido 2-benzilmercapto-3-fenilpropiánico, 0,4 g (0,8 mmole) de HIS-STA-LEU-NHCHgPh e 0,13 g (1.0 mmole) de HOBT em 40 ml de CHgClg/DMF (50/30) em gelo e adicionaram-se 0,16 g (0,8 mmole) de DCC. Agitou-se a mistura durante dois dias.à tempe ratura ambiente. Filtrou-se a mistura e diluiu-se com EtOAc, lavou-se com ácido cítrico 1 N e depois com solução de Na^CO^ e a seguir secou-se. A remoção do solvente sob pressão reduzi da deu o produto bruto como um solido. A trituração com EtOAc deu 0,35 g do produto puro. A estrutura foi confirmada p>or es pectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para (PM 769.02):
C, 67,16; H, 7,3^1 N, 10,93
Determinado C, 66,80; H, 7,60; N, 10,85.
EXEMPLO 12
Ph-CH2CH-CO-HIS-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
SCH2Ph
Aqueceu-se uma solução de 0,47 g (0,5 mmole) de Ph-CH2-CH-CO-HIS(TRT)-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH. CH^ em 35 ml SCHgPh de HOAc a 80% num banho de vapor durante sete minutos e depois deixou-se arrefecer à temperatura ambiente dutante uma hora. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e retomou-se o resíduo em pois com NaCl
EtOAc. Lavou-se o EtOAc com NaCO^ saturado e d esaturado. A secagem e a remoção do solvente sob pressão reduzida deram o produto bruto. A cromatografia em sí lica gel, eluindo com CHCl^/MeOH (95/5), deu 0,22 g de produto . A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa. Calculado para C^gH^N^S.O,12CHC13 (PM 69 0, 17) s
C, 66,335 H, 7,76; N, 13,15
Determinado C, 66,J9í H, 7,86; N, 9,88.
EXEMPLO 13
DNMA-HIS-STA-LEU-NHCH
Aqueceu-se uma solução de 2,0 g (1,85 mmole) de DNMA-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCH2X^ em 15 ml de HOAc a 80$ num banho de vapor durante sete minutos e deixou-se arrefecer à temperatura ambiente durante trinta minutos. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e retomou-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a solução com NaOH 1 N e NaCl saturado seguido de se cagem e evaporação até a um volume de 10 ml sob pressão reduzida, Adicionou-se este com agitação rápida a EtgO dando um precipitado que foi filtrado, lavado com Et 0 e seco. Obteve-se 1,2 g de produto como um sálido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa. Calculado para O, 5H£ J (PM 847,o4)j
C, 70,895 H, 7,14; N, 11,575 h2, 1,06
Determinado C, 71.16; H, 7,04; N, 11,62; Hg, 1,34.
EXEMPLO 14
DNMA-(D-HIS)-STA-LEU-NHCH2Ph
Tratou-se uma solução de 0,38 g (0,38 mmole) de DNMA-(D-HIS)(TOS)-STA-LEU-NHCHgPh em MeOH com 0,3 8 (1.9 mmole) de HOBT e agitou-se à temperatura ambiente durante 15 hCras, Adicionaram-se 0,3 g (1.9 mmole) de HOBT adicionais e agitou-se a solução por mais seis horas. Removeu-se o solven te sob pressão reduzida e suspendeu-se o resíduo Lavou-se o CH2C12 duas vezes com NagCO^ saturado NaCl saturado. A secagem e a remoção do solvente em CH2C12 .
e depois com sob pressão reduzida deram o produto bruto como um so lido. A cromatogra fia em sílica gel, eluindo com CH2Cl2/MeOH (97/3) deu 0,2g de produto como um solido 128-131 · A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para g 51 hóoN6°5‘°*5H2° (PM 846,05):
C, 72,40; H, 7,27; N, 9,93
Determinado C, 72,43; H, 7.31; N, 9.86.
EXEMPLO 15
DNMA-HIS-STA-(D-LEU)-NHCHgPh
Tratou-se uma solução de 0,67 g (o,68 mmole) de DNMA-HIS (TOS) -STA- (D-LEU) -NHCH Ph em 50 ml de Me OH com 0,58 g (3,8 mmole) de HOBT e agitou-se à temperatura ambiente du rante quinze horas. Adicionou-se depois uma quantidade adicio nal de 0,5θ g (3»8 mmole) de HOBT e agitou-se a solução por mais quinze horas. Evaporou-se então a solução sob pressão re duzida, tendo resultado um sálido. Este e lavado duas vezes com Na^CO^ turado. A secagem e remoção do foi retomado em CH^Clg e depois com NaCl sasob pressão reduzida saturado solvent e deu o produto bruto. A cromatografia em sílica gel, eluindo com CH^Clg/MeOH (97)3) deu 0,72 g de produto, p.f. 186-190°C. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de mas sa.
Calculado para C^H^N^l .0,5^0 (PM 846,05) C, 72,4o; Η, 7»27; N, 9,93
Determinado C, 72,25; Η, 7»24; N, 9,98,
EXEMPLO 16
DNMA-ASP(0CH2Ph)-CYSTA-LEU-NHCHgPh
Arrefeceu-se com gelo uma solução de 3»69 g (10,8 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)acético, 6,74 g (10,8 mmole) de ASP(0CH2Ph)-CYSTA-LEU-NH2Ph, e 1,47 g (10,8 mmole) de HOBT em 70 ml de DMF e tratou-se com 2,26 g (10,8 mmole) de DCC em 10 ml de DMF. Depois de meia hora a 0°, deixou-se a mis tura em agitação à temperatura ambiente durante toda a noite. Retirou-se a ureia por filtração e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Retomou-se o resíduo em EtOAc, filtrou-se, lavou-se comffil 1 N, H20, NaHCO^ saturado depois com NaCl saturado. A secagem e a remoção do solvente sob pressão reduzida deram o produto bruto. A cromatografia em 350 g de sílica gel, eluindo com CHCl^/MeOH (98/2) deu 9»38 g de produto. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para C^H^gN^O?.0, ÓCHCI^ (PM 1016,80):
C, 70,40·, H, 6,80; N, 5,51 Determinado C, 70,59; H, 6,93; N, 5,58.
EXEMPLO 17
DNMA-ASP-CYSTA-LEU-NHCH^Ph
Tratou-se um solução de 9,1 g (9,6 mmole) de DjNMA-ASp(0CH2Ph J-CYSTA-LEU-NHCH^Ph em 230 ml d e MeOH com l,Og de Pd/C a 20$ e agitou-se sob atmosfera de hidrogénio durante seis horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida dando 7,29 g de produto como uma espuma. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa.
EXEMPLO 18 z r.......\ λ
DNMA-ASP (N^__^0) -CYSTA-LEU-NHCHgPh
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,5 g (0,6 mmole) de DNMA-ASP-CYSTA-LEU-NHCH2Ph em 15 ml de DMF e adicio naram-se 80 mg (0,6 mmole) de HOBT seguidos por 122 mg (0,6 mmole) de DCC. Depois de agitar durante dez minutos adicionaram-se 0,06 ml (1,6 mmole) de morfolina. Agitou-se a solução por mais meia hora a 0°, depois à temperatura ambiente toda a noite. Filtrou-se a mistura e a DMF foi removida sob alto vá cuo. Retomou-se o resíduo em EtOAc, filtrou-se e lavou-se com HC1 1 N, águaiiyaHCO^ saturada e NaCl saturada. A remoção do solvente sob pressão reduzida d eu o produto bruto como um sálido. A cromatografia em sílica gel, eluindo com EtOAc deu o produto que se recristalizou a partir de EtOAc/hexano. Obteve-se 0,2 g do produto. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para C 6H6gN 0 .H 0 (PM 942,17):
C, 71,38; H, 7,60; N, 7,43
Det erminado C, 71,43; H, 7,49; N, 7,52.
EXEMPLO 19
DNMA-HIS-CYSTA-LEU-NHCHgPh
Adicionaram-se a 2,2 g (1,97 mmole) de DNMA-HIS(TRT)-CYSTA-LEU-NHCHgPh 100 ml de HOAc a 80%. Aqueceu-se a solução num banho a vapor durante uma hora, arrefeceu-se removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Diluiu-se o duo com EtOAc, lavou-se com NaHCO^ saturada, secou-se e centrou-se para dar o produto bruto, ca gel, eluindo com umgmdiente de 1,55 g de produto.
A cromatografia em
O a 5% de MeOH/CHCl^
Calculado para
Det erminado c 54h64k6°5
C, 72,25;
C, 71,98;
N,rOr. ,O,2CHC13
H, 7,18;
(PM 900,98):
N, 9,33
H, 7,275
N, 9,12.
e resíconsílideu
EXEMPLO 20
DNMA-(N-MeHIS)-STA-LEU-NHCH Ph
Adicionaram-se a 580 mg (O,58 mmole) de DNMA-(N-MeHIS)(TOS)-STA-LEU-NHCHgPh em 5 ml de CE^OH 234 mg (1,73 mmole) de HOBT. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente du rante quarenta e oito horas e concentrou-se sob pressão reduzida. Diluiu-se o resíduo com EtOAc, lavou-se com NaHCO^ satu rada, secou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para dar o produto bruto. A cromatografia em sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a 2% de MeOH em CHCl^ deu 400 mg de produto. Calculado para (PM 851,06):
c, 73,38; H, 7,34; n, 9,87 Determinado C, 73,45; H, 7,76; N, 9,47.
EXEMPLO 21
DNMA-HIS-STA-(h-MeLEU)-NHCHgPh
Adicionaram-se a 2,8 g (2,56 mmole) de DNMA-HIS(TRT)-STA-(N-MeLEU)-NHCH Ph 100 ml de HOAc a 80%. Aqueceu
-se a mistura num banho de vapor durante uma hora e removeu-se depois o solvente sob pressão reduzida. Diluiu-se o resíduo sob co m Et OAc , lavou-se com NaHCO
3’ secou-se e pressão reduzida para dar o produto bruto.
conc entrou-s e
A cromatografia em sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a 5¾ de MeOH em CHCl^ deu 2,0 g de produto.
Calculado para . 0,3501101^ (PM 892,85):
C, 70,42; Η, 7,θ4; N, 9,41
Determinado C, 70,46; Η, 7»14; N, 9»28.
EXEMPLO 22
DNMA-HIS-STA-NHCH
NHZ
Aqueceu-se uma solução
CH„NHZ de DNMA-HIS
- STA-NHCH, de 1,85 g (1,64 mmole) em 15 ml de HOAc a 80;ó num banho de vapor durante cinco minutos e depois deixoú-se arrefecer à remperatura ambiente durante uma hora. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e retomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com NaOH 1 N e depois com NaCl saturada. Depois de secar, concentrou-se a solução a um pequeno volume e deitou-se num excesso de Et^O. Recolheu-se o precipitado sóli do e lavou-se com EtgO. Obtiveram-se 1,25 S de produto como um solido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para Ο^Η^θΝ^ (PM 887,10):
C, 73,111 H, 6,59; N, 9.47 Determinado C, 72,89; H, 6,65; N, 9,42.
EXEMPLO 23
DNMA-HIS-STA-NHCH
ch2nh2
-HIS-aTA-NHCHo-U. \
A uma solução de 970 mg (1,09 mmole) de DNMA-CHONHZ em 100 ml de MeOH e 50 ml THF adi
- 36 cionaram-se 100 mg de Pd/C a 20$ e fez-se borbulhar hidrogénio na solução durante très horas. Adicionaram-se 100 mg adicionais de Pd/C a 20$ e continuou-se a borbulhar hidrogénio por mais quatro horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida* dando 880 mg de produto sob a forma de espuma branca. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para C^H^N^.1, OC^OH (PM 785.01):
C, 71,91; H, 7,19) N, 10,70
Determinado C, 71,82) H, 7,08} N, 10,56.
EXEMPLO 24
DNMA-HIS-STA-NHCH2C H=CH2
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 6,86 g (20,2 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)acético e 2,87 g(21,2 mmole) de HOBT em 4o ml de DMF e tratou-se com 4,37 g (21,2 mmole) de DCC seguido de HIS-STA-NHCH2CH=CH2. Manteve-se a so lução a 4° durante a noite, filtrou-se e removeu-se o solvente sob alto vácuo, retomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico 1 N, NaCl saturada, NaHCO^ e NaCl saturada. A secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto. A cromatografia em sílica gel, eluindo com CHCl^/MeOH (3/1), deu 4,38 g de produto. 0 NMR indicava que este continha um grupo DNMA adicional que tinha acilado a por ção de imidazolo da HIS. Dissolveu-se este produto em 100 ml de MeOH e tratou-se com 2 ml de NaOH a 50$. Agitou-se o produ to à temperatura ambiente durante uma hora, ajustou-se o pH a 7 e removeu-se o solvente sob pressão reduzida, Retomou-se o resíduo com EtOAc e lavou-se com NaHCO^ saturada e depois com NaCl saturada. A secagem e remoção do solvente sob pressão re duzida deram um resíduo què se retomou em CHCl^ quente e deitou-se sobre excesso de EtgO. 0 precipitado sólido foi separa do e deu 2,19 g de produto como um sólido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Calculado para 0^^^0^.0,250^1^ (PM 703,67): C, 70,40; H, 6,77; N, 9,95
Determinado C, 70,34; H, 6,95; N, 9,46.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 1
B OC-STA-LEU-NHCH2 Ph
Dissolveram-se 1,80 g de LEU-NHCHgPh.HC1 /Japão 83/59952?, 2,27 g de BOC-STA (Patente U.S. 4 397 786) e 1,04 g de HOBT em 125 ml de diclorometano e arrefeceu-se a O . Adicionou-se em seguida 1,07 ml de Et^N. Adicionou-se uma solução fria de 1,59 g de DCC em 20 ml de diclorometano, seguida da adição de 50 ml de DMF fria. Agitou-se a mistura a 0° durante duas horas, e em seguida a 12° dum dia para o outro. Filtrou-se então a mistuta, evaporou-se até uma consistência pastosa e ressuspendeu-se em EtOAc, Filtrou-se a suspensão, lavou-se o filtrado com ácido cítrico 1 N, com solução satura da de cloreto de sódio, com solução saturada de bicarbonato de sodio e com solução saturada de cloreto de sodio e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro. Filtrou-se a suspensão e evaporou-se até uma espuma branca com o peso de 3,77 g, a qual foi cristalizada a partir de éter dietílico e de hexano, dando origem a um sólido branco com o peso de 3,41 g (rendimento de 92%), de p.f. 89-92°. A estrutura foi confirmada por análises espectral e elementar. /X7q^* “34,2° (c, 1,06, MeO$
STA-LEU-NHCHgPh . HC1
Dissolveram-se 2,77 g de BOC-STA-LEU-NHCH^Ph em 100 ml de diclorometano, saturando-se em seguida a mistura com gás cloreto de hidrogénio anidro. Depois de agitar a 25° durante uma hora, eliminou-se o solvente sob vácuo e ressuspendeu-se o resíduo em diclorometano, dando origem a um sólido cristalino. Diluiu-se a suspensão com éter dietílico, filtrou-se e secou-se o sólido sob vácuo, obtendo-se 2,24 g com um rendimento de 93%· A estrutura foi confirmada por análises
espectral e elementar. /7x7^- -19»1° (c, 1,06, MeOH). z-his(trt)-och3
Dissolveu-se Z-HIS-OCH^ / J, Ch em. Soc.. Perkin I, 2261 (1979)7 (7θ s) em diclorometano (500 ml) e arrefe ceu-se a 0°. Adicionaram-se trietilamina (32 ml) e em seguida cloreto de tritilo (64,3 g) e a solução foi agitada à tempera tura ambiente dum dia para o outro. Lavou-se a mistura com bi carbonato de sódio e com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e evaporou-se. 0 resíduo foi recristalizado a partir do acetato de etilo, obtendo-se 100 g de produto.
z-his(trt)
Dissolveu-se Z-HIS(TRT)-OCH^ (30 g) em 300 ml de dioxano e arrefeceu-se a 0°. Adicionou-se hidróxido de sódio (2,7 g) em 80 ml de água. A mistura foi agitada durante uma hora e em seguida acidificada com ácido cítrico 1 N, até pH 2. Extraiu-se a mistura com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e evaporou-se, obtendo-se 27 g de produto.
Z-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCH2Ph
Dissolveram-se Z-HIS(TRT) (4,65 g» 8,75 mmole) e HOBT.HgO (1,24 g, 9»18 mmole) em 5 ml de DMSO, diluiu-se até 150 ml com CHgClg e arrefeceu-se a -5°· Adicionou-se uma solução de DCC (1,9 g» 9»18 mmole) em 3θ ml de CH Clr, Adicio nou-se uma solução de STA-LEU-NHCHgPh.HC1 (3»62 g, 8,75 mmole) e Et^N (1,28 ml, 9»18 mmole) em 50 ml de CH^Cl^ frio e agitou-se a mistura a -5°» deixando-se aquecer a 25° durante 3 dias. Em seguida separaram-se os sólidos por filtração e eva porou-se o filtrado até se obter um óleo. Suspendeu-se o óleo em EtOAc, lavou-se com salmoura, com ácido cítrico 1 N, com salmoura, com solução saturada de NaHCO^ e com salmoura. Secou -se a fase orgânica sobre JígSO^, filtrou-se e evaporou-se até se obter um óleo. 0 óleo foi dissolvido em Et )Ac e filtrou-se
o precipitado formado. 0 filtrado foi diluido com EtgO e evaporado, obtendo-se 8,17 g do produto sob a forma duma espuma. A estrutura foi confirmada por análise de NMR. 0 produto era suficientemente puro para ser usado nas fases seguintes.
HIS(TRT)-STA-LEU-NHCHgPh
Dissolveu-se Z-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCHgPh (8,0 g, 8,98 mmole) em 200 ml de MeOH ao qual se tinha adicionado 0,50 g de catalisador de Pd sobre carvão a 20^o. A suspensão foi purgada com durante 3,5 horas, filtrada e evaporada, obtendo-se 7>31 g duma substância vítrea. 0 material bruto foi cromatografado através de gel de sílica e eluído com um gradiente de 2 a 5% de MeOH em CHCl^, dando 5>74 g duma espuma branca. A estrutura foi confirmada por análise de NMR.
DNMA-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCHgPh
Dissolveram-se ácido di-(1-naftilmetil)-acéti co (0,65 g, 1>91 mmole) e H0BT.H23 (0,271 gt 2,0 mmole) em 4 ml de DMF, diluiu-se até 30 ml com CHgClg e arrefeceu-se a 0°. Adicionou-se DCC (1,414 g, 2,0 mmole), seguida por uma solução de HIS(TRT)-STA-LEU-NHCH2Ph (1,52 g, 1,91 mmole) em 20 ml de CH^Clg. Agitou-se a mistura e deixou-se aquecer até 25 dum dia para o outro. Filtrou-se a mistura e eliminou-se o solven te sob vácuo. Dissolveu-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico 1 N, com salmoura, com solução saturada de
NaHCO^ e com salmoura. A fase orgânica foi seca sobre MgSO^. filtrada e evaporada, obtendo-se 2,05 g duma espuma. A espuma foi purificada por cromatografia através de gel de sílica e eluição com um gradiente de 0 a 2¾ de MeOH em CHCly Por combinação das fracções apropriadas usando EtOg obteve-se 1,47 g do produto sob a forma duma espuma branca. A estrutura foi confirmada por análise de NMR, IV e de espectro de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 2 boc-sta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
Dissolveram-se BOC-STA (27>53 g> 0,1 mole, Pa tente U.S. k 397 786) e HOBT.HgO (14,2 g, 0,105 mole) em 40 ml de DMF. Adicionaram-se 300 ml de CH^Clg e arrefeceu-se a mistura a 0o. Adicionou-se uma solução de DCC (21,66 g, 0,105 mole) em 50 ml de diclorometano, seguida da adição de S-2-metilbutilamina (12 ml, 0,1 mole). Após agitar a mistura a 0o durante duas horas, deixou-se aquecer até 25° durante 1,5 horas. Filtrou-se a mistura e evaporou-se o solvente sob vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em EtOAc e a solução resultante foi lavada com ácido cítrico 1 N, com solução saturada de cloreto de sódio, com solução saturada de bicarbonato de sódio e com solução saturada de cloreto de sodio. A fase orgânica foi seca sobre MgSO^, filtrada e evaporada, obtendo-se uma goma com o peso de 36,9 g· A goma foi dissolvida em éter dietílico e tratada com carvão activo a fim de remover impurezas coradas. A suspensão foi filtrada e evaporada, obtendo-se uma goma com o peso de 35>2 g, a qual era adequada para ser utilizada nas fases seguintes sem qualquer purificação adicional.
STA-NHCH2C H(CH^)CH^CH^.HC1
Dissolveu-se BOC-STA-NHCHgCHÍCH^JCHgCH (34,4 g, 0,1 mole) em 250 mlde CH^Cl^ e a solução foi purgada ocasionalmente com gás HC1 anidro durante três horas. Precipitou um sólido da solução, o qual se filtrou, lavou com CHgClg e secou-se a 40° sob vácuo, obtendo-se um sólido higroscópico com o peso de 21 g. 0 sólido foi triturado com uma mistura de CHgClg/Et 0, filtrado e seco a 4o° sob vácuo, obtendo-se um sólido branco numa quantidade de 19>34 g. A estrutura foi con firmada por análise espectral.
Z-HIS(TRT)-STA-NHCH2CH(CHj)CHgCH^
Dissolveram-se Z-HIâ(TRT) (4,37 g> 8,22 mmole) e H0BT.H20 (1,17 g> 8,63 mmole) em 10 ml de DMF, diluiu-se até 50 ml com CHgC^ e arrefeceu-se até -2 . Adicionou-se uma • solução de DCC (1,78 g, 8,63 mmole) em 20 ml de CHgClg, adi. cionou-se em seguida uma solução de STA-NHCH2CH(CH^ ) CH^CH^.HC1
(1,72 g, 6,12 mmole) numa mistura de 10 ml de DMF, 10 ml de CHgClg e Et^N (1,20 ml, 8,63 mmole). Agitou-se a mistura a 0° e deixou-se aquecer até 25° dum dia para o outro. A mistura foi filtrada e evaporada até se obter um óleo e o resíduo foi dissolvido numa mistura de EtOAc e de Et^O. A solução foi lavada com ácido cítrico 1 N, salmoura, solução saturada de
NaHCO^ e salmoura, seguindo-se uma secagem sobre MgSO^, uma filtração e evaporação à secura até se obter uma espuma numa quantidade de 5,62 g. A espuma foi submetida a cromatografia através de gel de sílica e eluida com um gradiente de 0 a 3$>
de MeOH em CHCl^. 0 produto foi puma numa quantidade de 3>15 g. por análise espectral de IV, de obtido sob a forma de uma esA estrutura foi confirmada
NMR e de massa.
His(trt)-sta-nhch2ch(ch^)ch2ch3
Tratou-se uma solução de Z-HIS(TRT)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 (2,91 g, 3,84 mmole) em 80 ml de MeOH com Pd sobre carvão a 20¾ (0,13 g) e em seguida purgou-se com Hg durante sete horas. A mistura foi filtrada, evaporada até se obter um óleo, redissolvida em Et^O/hexano e evaporada à secu ra, obtendo-se 2,39 g duma espuma. O produto obtido era suficientemente puro para ser utilizado na fase seguinte. A estru tura foi confirmada por análise espectral de IV, de NMR e de massa.
Lavou-se NaH (10,46 g, emulsão em óleo a 50/o> 0,218 mole) com THF seco para eliminar o óleo. Suspendeu-se o resíduo em 500 ml de THF ao qual tinha sido adicionada uma so lução de malonato de t-butilo e de metilo (34,5 g, 0,198 mole) em 50 ml de THF. Ocorreu uma reacção vigorosa, obtendo-se um precipitado pastoso. Após aquecer a refluxo durante trinta mi- 42 -
nutos, arrefeceu-se a mistura a 35° e adicionou-se 1-clorometilnaftaleno (35,0 g, 0,198 mole). A mistura foi agitada a 4-0° dum dia para o outro e evaporada até obtenção duma pasta e o resíduo foi retomado em EtOAc. A suspensão foi lavada com áci do cítrico 1 N, salmoura* solução saturada de NaHCO^ e salmou ra, seguindo-se uma secagem sobre MgSO^. Filtrou-se e evaporou-se â secura, obtendo-se um óleo amarelo numa quantidade de 58,84 g. 0 produto foi usado na fase seguinte sem qualquer purificação adicional
Tratou-se uma solução de 61 g
-CH-COgCH^ bruto em 250 ml de MeOH C02-t-Bu lução de NaOH a 53% e agitou-se durante cinco (0,194 mole) de com 4o g de sohoras até formar uma pasta. A mistura foi filtrada e lavada com MeOH e o filtrado foi evaporado até se obter uma pasta. A pasta foi re tomada em H^O e lavada com Et^O. 0 pH foi ajustado a 2,0 com HC1 diluido e a mistura foi extraida com Et^O. O extracto foi lavado com salmoura, seco sobre MgSO^, filtrado e evaporado, obtendo-se um óleo numa quantidade de 22,19 g. Este óleo foi dissolvido em CHCl^ e eliminou-se por filtração um sólido cris talino. Por eliminação do solvente sob pressão reduzida foram obtidos 13,8 g dum produto com consistência xaroposa. Por cro matografia através de gel de sílica e eluição com EtOAc/hexano (lil) obteve-se o produto sob a forma duma espuma. A estru tura foi confirmada por analise espectral de IV, de NMR e de massa.
-CH-C-HIS (TRT) -STA-NHCH CH(CH„ )CH_CHq
CO2-t-Bu
Dissolveram-se
(1,50 g, mmole), HIS(TRT)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH (3,12 g, 5,0 mmoe HOBT.HgO (0,21 g, 5,25 mmole) em 80 ml de DMF e arrefe5,25 mmole) e agitouo . . . „ . „. ,
5,0 !e) ceu-se a 0°. Adicionou-se DCC (1,08 g,
-se a mistura dum dia para o outro a 25· A mistura foi filtrada e evaporada sob vácuo até se obter um produto de consis tência lavada
NaHCO3 rou-se xaroposa, o qual foi retomado em EtOAc. A solução foi com ácido cítrico 1 N, salmoura, solução saturada de e salmoura. Secou-se sobre MgSO^, filtrou-se e evapoà secura, resultando uma espuma numa quantidade de 4,85
g. A espuma foi purificada por cromatografia de sílica e eluição com 2% de MeOH em EtOAc. tido sob a forma duma espuma numa quantidade trutura foi confirmada por análise espectral através de gel produto foi ob de 3,50 g. A esde massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 3 boc-nhch2ch=ch2
Dissolveu-se dicarbonato de di-t-butilo (43,65 gt 0,2 mole) em 250 ml de CHgClg a que se adicionou alil-amina (15,0 ml, 0,2 mole) gota a gota. Depois de agitar dum dia para o outro, evaporou-se a mistura até obter um óleo, dissol veu-se em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico 1 N, salmoura, solução saturada de NaHCO^ e salmoura. Secou-se a solução sobre MgSOjp filtrou-se e evaporou-se até se obter um óleo que cristalizou, dando 3θ,Ο2 g. A estrutura foi confirmada por NNR.
ο /\
BOC-NHCH2CH-CH2
Tratou-se uma solução de 21,72 g (0,138 mole) de BOC-alilamina em 250 ml de CH2C12 com 29 g (0,138 mole) de ácido m-cloroperbenzóico, dando origem a uma reacção fracamen te exotérmica. Depois de agitar um dia para o outro, filtrou-se a mistura e lavou-se o filtrado com solução de sulfito de sádio a 10%, ácido cítrico 1 N, solução saturada de NaHCO^ e salmoura. Por secagem sobre tfeSO^, filtração e eliminação do solvente sob pressão reduzida, foram obtidos 25»0 g do produto bruto sob a forma de um oleo. Por cromatografia através de gel de sílica e eluição com hexano/EtOAc 75/25 foram obtidos 17,1 g do produto sob a forma dum oleo límpido. A estrutura foi confirmada por análise espectral de NMR, de IV e de massa.
BOC-NHCH2CH(OH)CH2SCH(CH3)2
Lavou-se NaH (3»18 g, emulsão em oleo a 50%, 0,066 mole) com THF seco para eliminar o áleo e suspendeu-se em 100 de DMF. Adicionou-se lentamente isopropil-mercaptano (14,0 ml, 0,151 mole). Verificou-se a dissolução completa depois de agitar durante trinta minutos. Arrefeceu-se a mistura
I z° a 25 e adicionou-se BOC-NHCH CH-CH (11,5 g 0,066 mole) sob a forma duma solução em 30 ml de THF. A mistura foi agitada dum dia para o outro e o pH foi em seguida ajustado a 7 com HC1 a 12%. 0 solvente foi eliminado sob vácuo. 0 resíduo foi retomado em EtOAc e lavado com ácido cítrico 1 N, salmoura,so lução saturada de NaHCO^ e salmoura. A solução em EtOAc foi seca sobre MgSO^, filtrada e evaporada à secura, obtendo-se um oleo numa quantidade de 15,84 g. 0 produto foi submetido a cromatografia através de gel de sílica e eluidõ com hexano/ /EtOAc 50/50, obtendo-se 14,85 g de um oleo. A estrutura foi confirmada por análise espectral de NMR, de IV e de massa.
’ H2 N-C H2C H ( OH ) C H2 SC H ( Cfí3o . HC1
Dissolveu-se BOC-NHCH2CH(OH)CH2SCH(CH3)g (3,74 g, 0,015 mole) em 75 ml de CH2C12 e purgou-se a solução ocasionalmente com gás HC1 anidro durante duas horas. 0 solvente foi eliminado sob vácuo e o resíduo foi triturado com EtgO. Decantou-se o solvente e evaporou-se o resíduo até que se obtiveram 2,83 g de produto sob a forma duma espuma. A estrutura foi confirmada por análise espectral de IV, de NMR e de massa.
BOC-STA-OCH^
Dissolveu-se BOC-STA (35,9 g, 0,13 mole, Patente U.S. 4 397 786) em 1 1 de EtOAc. Adicionou-se uma solução etérea de diazometano (preparado a partir de 52 g de p-tolilsulfonilmetilnitrosamida de acordo com Organic Synthesis, Collective Volume 4, pp. 251-3) à solução em EtOAc até obtenção duma coloração ligeiramente amarela persistente.Apos agitação a 25° durante duas horas, adicionou-se HOAc até desaparecimento da cor amarela. Depois de agitar durante trinta minutos, eliminou-se o solvente sob vácuo dando origem ao pro duto sob a forma dum solido cristalino numa quantidade de 4o,l g.
STA-OCH^.HCl
Dissolveu-se BOC-STA-OCH^ (37,4 g, 0,13 mole) em 6θθ ml de CH2C12, purgando-se ocasionalmente com gás HC1 anidro durante quatro horas. Quando se verificou por cromatografia em camada fina que a matéria prima estava completamente consumida, eliminou-se o solvente sob vácuo e ressuspendeu -se o resíduo em CH^Clg/EtgO, obtendo-se 33,8 g dum sálido cristalino. 0 material era suficientemente puro para ser usado nas fases seguintes,
Z-HIS(TRT)-STA-OCH^
Dissolveram-se Z-flIS(TRT) (28,97 g, 0,0545 mo le) e H0BT.H2O (7,73 g, 0,0572 mole) em 250 ml de DMF e arre- 46 -
feceu-se a 0°. Adicionou-se STA-OCH^.HCl (12,3 g, 0,0545 mole) sob a forma duma solução em 75 ml de DMF contendo Et^N (7,97 ml, 0,0572 mole). Adicionou-se à mistura uma solução fria de DCC (11,81 g, 0,0572 mole) em 50 ml de DMF. Após aquecimento desde 0° até 25° durante cinco horas, a mistura foi mantida sob arrefecimento dum dia para o outro a 4°. A mistura foi fil trada e evaporada até obtenção dum óleo que foi retomado em EtOAc. A solução foi lavada com ácido cítrico 1 N, salmoura, solução saturada de NaHCO^ e salmoura. A solução foi seca sobre MgSOjp filtrada e evaporada a secura, obtendo-se um óleo. 0 óleo foi submetido a cromatografia através de gel de sílica e eluido com um gradiente de 0 a 5% de MeOH em CHCl^, dando origem ao produto sob a forma dum sólido branco numa quantida de de 30,7 g.
HIS(TRT)-STA-OCH^
Adicionaram-se Z-HIS(TRlJ-STA-OCH^ (10,0 g, 0,0142 mmole) e catalisador de Pd sobre carvão a 20$ (θ,5 g) a 200 ml de MeOH e em seguida purgou-se com gás hidrogénio du rante cinco horas. A mistura foi filtrada e evaporada até se obter uma espuma numa quantidade de 8,03 g. A estrutura foi confirmada por análise espectral de IV, de NMR e de massa.
DNMA-HIS (TRT) - STA-OCH^
Dissolveram-se ácido di-(1-naftilmetil)-acéti co (2,63 g, 7,73 mmole), H0BT.H20 (0,834 g, 8,25 mmole), HIS(TRT)-STA-OCH3 (4,32 g, 7,73 mmole) e DCC (1,70 g, 8,25 mmole) em 100 ml de DMF, agitando-se a 25° durante dezasseis horas. Filtrou-se a mistura, eliminou-se o solvente até obten ção dum óleo e retomou-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a solu ção com ácido cítrico 1 N, com solução saturada de NaHCO^ e com salmoura e em seguida secou-se sobre MgSO^, filtrou-se e evaporou-se, obtendo-se 7,19 g duma espuma amarela. A espuma foi purificada por cromatografia através de gel de sílica e eluição com EtOAc, obtendo-se 4,60 g duma espuma. A estrutura foi confirmada por análise de NMR e de espectro de massa.
DNMA-HI S (TRT ) - ST A
Dissolveram-se DNMA-HIS(TRT)-STA-OCH^ (3,1 g, 3,44 mmole) e NaOH (0,20 g, 5»16 mmole) numa mistura de 50 ml de dioxano e $6 ml de HgO. Após cinco horas ajustou-se o pH a 7 com HC1 1 N. 0 solvente foi eliminado sob vácuo e o resíduo foi retomado em EtOAc. Lavou-se a solução com ácido cítrico 1 N e com salmoura, secou-se sobre MgSO^, filtrou-se e evaporou -se até um pequeno volume. Por adição de Et^O foi obtido um precipitado, que foi separado por filtração e seco, obtendo-se 2,15 g dum sólido. A estrutura foi confirmada por análise de espectro de massa.
DNMA-HIS (TRT) - STA-NHCHgCH ( OHjCHgSCH (CH3 ) 2
Dissolveram-se DNMA-HIS(TRT)-STA (0,65 g, 0,74 mmole) e H0BT.H20 (3,105 g, 0,78 mmole) em 10 ml de DMF. Adicionou-se KH CH CH(0H)CH SCH(CHJ (θ»138 g, 0,74 mmole) sob tf* Á hr J £ a forma duma solução numa mistura de 5 ml de DMF e Et^N (0,109 g, 0,78 mmole). Adicionou-se DCC (θ,16 g, 0,78 mmole) e agitou-se a mistura dum dia para o outro. A mistura foi filtrada e evaporada à secura e o resíduo foi retomado em EtOAc. A solução foi lavada com ácido cítrico 1 N, salmoura, solução saturada de NaHCO^ e salmoura. A solução foi seca sobre MgSO^, filtrada e evaporada à secura, obtendo-se uma espuma numa quan tidade de 0,81 g. A espuma foi submetida a cromatografia atra vés de gel de sílica e a eluição com 2% de MeOH em CHCl^, dan do origem ao produto sob a forma duma espuma branca numa quan tidade de 0,5) g. A estrutura foi confirmada por análise de espectro de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 4 boc-nhch2ch(oh)ch2so2ch3)2
Dissolve ram-se BOC -NHC H2CH ( OH ) C Hg SC H (CH^ ) (3>74 g, 0,015 mole) e ácido m-cloroperbenzóico (7>76 g 3,045
mole) com arrefecimento em 100 ml de CH^Clg· Agitou-se a mis tura a 25° dum dia para o outro e evaporou-se à secura, obten do-se um solido. Dissolveu-se o sólido em EtOAc, lavou-se com solução de sulfito de sódio a 10$, com solução saturada de NaHCO^ e com salmoura. A solução foi seca sobre MgSO^, filtra da e evaporada â secura, obtendo-se um óleo numa quantidade de 4,15 g· 0 óleo foi submetido a cromatografia através de gel de sílica e a eluição com hexano/EtOAc 50/50, dando origem ao produto sob a forma dum óleo numa quantidade de 3,66 g. A estrutura foi confirmada por análise de espectro de NMR e de massa.
H2N-CH2CH(OH)CH2S02CH3)2.HC1
Dissolveu-se B0C-NHCH2CH(0H)CH2S02CH3)2 (3,19 g, 11,35 mmole) em 75 ml de CH2C12 e purgou-se com gás HC1 du rante duas horas. A mistura foi evaporada à secura, triturada com éter dietílico e filtrada. 0 sólido obtido foi lavado com éter dietílico e seco, dando 2,21 g de produto.
DNMA-HIS (TRT ) - STA-NH-CH2CH ( OH ) C HL, SO^H^ ) 2
Dissolveram-se DNMA-HIS(trt)-STA (0,59 g, 0,61 mmole) e HOBT.H20 (0,095 g, 0,71 mmole) em 10 ml de DMF. Adicionou-se uma solução de H2H-CH2CH(0H)CH2S02CH3)2.HCl (o,146g, 0,67 mmole) em 10 ml de DMF e Et^N (o,ll ml, 0,71 mmole), seguidos de DCC (0,15 g, 0,71 mmole). Agitou-se a mistura dum dia para o outro a 25°, evaporou-se à secura e retomou-se o resíduo em EtOAc. A suspensão foi lavada com ácido cítrico 1 N, salmoura, solução saturada de NaHCO^ e salmoura. A solução foi seca sobre MgSO^, filtrada e evaporada à secura, obtendo-se uma espuma numa quantidade de 0,81 g. A espuma foi submetida a cromatografia através de gel de sílica e a eluição com 2% de MeOH em CHCl^, dando origem ao produto sob a forma duma espuma branca numa quantidade de 0,63 g· A estrutura foi confirmada por análise de espectro de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 5 E 6
Aminomalonato de metilo e de benzilo
Preparou-se isonitrosomalonato de metllo e de benzllo a partir de 97 g de malonato de metllo e de benzllo pelo método descrito em Org. Syn. Coll. Vol. 5» p. 373· 0® 100 g de produto bruto obtido foram reduzidos pelo método des crito em J. Am Chem. Soc., 75» 1970 (1953) obtendo-se o respe ctivo derivado de amina. Usaram-se os 94 g do produto bruto na fase seguinte sem qualquer purificação adicional.
Boc-aminomalonato de metilo e de benzllo
Arrefeceu-se a 5° uma solução de 94 g de aminomalonato de metilo e de benzllo em 750 ml de Et^O e tratou-se com 91>66 g de dicarbonato de di-t-butilo. Depois de deixar em repouso dum dia para o outro a 4o, eliminou-se o solvente sob pressão reduzida, obtendo-se um óleo. Por cromatografia através de gel de sílica e eluição com hexano/EtOAc (85/15) foram obtidos 66,97 g (rendimento 49/í) do produto sob a forma dum óleo que solidificou depois de deixado em repouso. A estrutura foi confirmada por análise de espectro de massa.
xco2ch3
X
CO2CH2Ph
A uma solução de 6,87 g (21,25 mtnole) de BOC-aminomalonato de metilo e de benzilo em 75 ml de THF adicionou-se 1,02 g (21,25 mmole) de NaH em emulsão em óleo a
A mistura foi agitada durante uma hora, dando uma solução.Adi cionou-se uma solução de 4,93 g (22,3 mmole) de 1-bromometilnaftaleno em 33 ml de THF e agitou-se a mistura dum dia para o outro à temperatura ambiente. Eliminou-se o solvente sob pressão reduzida, retomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com ácido cítrico 1 N, solução saturada de NaCl, solução satu rada de NaHCO^ e solução saturada de NaCl. Por secagem e eliminação do solvente sob pressão reduzida foram obtidos 9»21 g do produto bruto. Por cromatografia através de gel de sílica e eluição com hexano/EtOAc (85/15) foram obtidos 4,55 g do produto sob a forma duma espuma. A estrutura foi confirmada por espectroecopia de massa.
A uma solução de 4,35 g (9,38 mmole) de BOC-amino-íX.-(l-naftilmetil)-malonato de metilo e benzilo em 200 ml de MeOH adicionaram-se 0,3^ g de Pd/C a 20% e em seguida purgou-se com hidrogénio durante duas horas. A mistura foi filtrada e evaporada sob pressão reduzida, obtendo-se 3,33 g do produto sob a forma duma espuma, que foi considerada apropriada para utilização na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa.
C-CO-HIS(TRT)-STA-NHCH-CH(CHQ)CH_CHq
BOC-NH C02CH^
Tratou-se uma solução de 0,75 g (2,0 mmole)de BOC-amino->X-(l-naftilmetil)-malonato de metilo em 40 ml de DMF com 1,25 g (2,0 mmole) de HIS(TRT)-STA-NHCH2CH(CH3)CH9CH3, 3,283 g (2,1 mmole) de HOBT e 0,43 g (2,1 mmole) de DCC. Apás uma hora de agitação a 12°, deixou-se a mistura aquecer até à temperatura ambiente dum dia para o outro. Evaporou-se a mistura sob pressão reduzida, obtendo-se um óleo que se retomou em EtOAc. A solução foi lavada com ácido cítrico 1 N, solução saturada de NaCl, solução saturada de NaHCO3 e solução satura
da de NaCl. A fase orgânica foi seca e evaporada sob pressão, dando origem a l,9ó g do produto bruto sob a forma duma espuma. Por cromatografia através de gel de sílica e eluição com MeOH a 0 a 5% em CHCl^, foram obtidos 1,48 g do produto sob a forma duma espuma. A estrutura foi confirmada por espectros copia de massa.
C-CO-ms(TRT)-STA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 0 uma solução de 0,36 g 0,368 mmole) de conh2
C -C 0-HIS (TRT ) - sta-nhch2c H (CH^ ) CHgCH^ e com NH^ gás, deixando em seguida aquecer até à tem vezes saturou-se peratura ambiente. Repetiu-se este procedimento várias até se verificar por cromatografia em camada fina que o produ to de partida tinha sido inteiramente consumido. Eliminou-se o solvente sob pressão reduzida e submeteu-se o resíduo a cro matografia através de gel de sílica, eluindo com CHCl^/MeOH (99/1)· Foram obtidos 0,22 g do produto sob a forma dum sólido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 7, 8, 22 E 23
Arrefeceu-se a -78° uma solução de 20,4 g (150 mmole) de m-xililenodiamina em 500 ml de diclorometano e adicionou-se no decurso de duas horas uma solução de 4o,4 g (162 mmole) de N-(benziloxicarboniloxi)- succinimida em 200 ml de CH2C12· A mistura foi agitada e deixada aquecer até à tempera
tura ambiente no decurso de três dias. Evaporou-se a mistura sob pressão reduzida até se obter uma pasta, retomou-se em EtOAc e lavou-se com HC1 1 N. Ajustou-se a fase aquosa a pH 12 por adição de NaOH a 50% e extraiu-se com EtOAc. A fase or gânica foi lavada com solução saturada de NaCl e seca e o sol vente foi eliminado sob pressão reduzida, obtendo-se 28,7 g do produto sob a forma dum óleo. A estrutura foi confirmada por NMR e por espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 7 E 8 boc-leu-nhch2
ch2nhz
Secou-se sobre MgSO^ anidro uma solução de 7,48 g (30 mmole) de BOC-LEU.H2O em 100 ml de THF/CH2C12 (50/ 50), filtrou-se e evaporou-se, obtendo-se um óleo. Dissolveu-se o óleo em 100 ml de DMF a que se tinha adicionado 8,11 g (30 mmole) de HgNCHg-O-CHgNHZ, e 4,26 g (31 mmole) de HOBT. Arrefeceu-se a solução a -5° e adicionaram-se com agitação 6,5 g (31 mmole) de DCC, deixando a mistura aquecer até à tempera tura ambiente. Filtrou-se a mistura, evaporou-se o solvente sob alto vácuo e retomou-se o resíduo em EtOAc. A solução foi lavada com ácido cítrico 1 N, solução saturada de NaCl, solução saturada de NaQC0q e solução saturada de NaCl. Após secagem, o
-se um do com pureza
A estrutura
3 solvente foi eliminado sob pressão reduzida, obtendoóleo. 0 sólido foi triturado com Eto0, filtrado e lava EtgO. Foram obtidos suficiente para ser confirmada foi 2V, C
9,85 g do produto com um grau de usado no passo de reacção seguinte, por NMR e por espectroscopia de massa.
LEU-NHCH
ch2nhz.hci
Purgou-se uma solução de 5»0 g (10,3 mmole) de
CHgNHZ em 150 ml de CH2C12 com HC1 gasoso ocasionalmente durante duas horas. 0 solvente foi eliminado sob pressão reduzida, e o resíduo triturado com EtgO. A suspensão foi filtrada e os sólidos foram de novo triturados, filtrados e secos, obtendo-se uma espuma frágil com 4,76 g. 0 produto tinha um grau de pureza suficiente para ser usado na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
DNMA-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCH2
ch2nhz
Arrefeceu-se a -5° uma solução de 1,70 g (1,9^ mmole) de DNMA.-HIS(TRT)-STA e de 0,27 g (2,03 mmole) de HOBT em 25 ml de DMF. Arrefeceu-se e adicionou-se à solução preparada prèviamente uma solução de 0,81 g (1,94 mmole) de
LEU-NHCH2-4^>L-CH2NHZ .HC1 em 20 ml de DMF e 0,3 ml (2,03 mmo le) de Et^N. Adicionou-se 0,42 g (2,03 mmole) de DCC, e a mis tura foi agitada a 0°, aquecida a 25° durante três horas, e depois armazenada a 4° durante a noite. A mistura foi filtrada, e o solvente eliminado sob alto vácuo. 0 resíduo foi reto mado em EtOAc, e lavado com ácido cítrico 1 N, solução de Nad saturada, solução de NaHCO^ saturada, e solução de NaCl saturada. Depois de secar, a mistura foi evaporada sob pressão duzida obtendo-se uma espuma, A espuma foi cromatografada gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a CHCl^. Deste modo obteve-se 1,81 g do produto uma espuma branca. A estrutura foi confirmada ; pia de massa.
5% sob por re em de MeOH a forma em de espectro sco
INTERMEDIÁRIOS PARA EXEMPLOS 9 E 10
\co2c2h5
Agitou-se uma suspensão de 2,45 g (61,2 mmole) de hidreto de sódio (6o$> de dispersão em óleo mineral) em 5 ml de THF e o THF foi decantado. Uma quantidade adicional de 150 ml de THF foi então adicionada à suspensão. Adicionou-se uma solução de 11,46 g (61,2 mmole) de malonato de t-butilo e de metilo em 50 ml de THF e a mistura foi agitada. A solução ocorreu depois de 45 minutos. Esta foi então tratada com 13,54 g (61,2 mmole) de 1-bromometilnaftaleno em 100 ml de THF e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. 0 THF foi eliminado sob pressão reduzida, o resíduo retomado em EtOAc, e lavado com solução de NaCl saturada, ácido cítrico saturado 1 N, solução de NaHCO saturada, e depois solução de
NaCl saturada. Por secagem e eliminação do solvente sob pres são reduzida obteve-se um óleo. Depois de cromatografia em sí lica-gel, eluindo com hexano/EtOAc (95/5)» foram obtidos 12,9 g do produto sob a forma de um óleo. A estrutura foi confirma da por espectroscopia NMR e de massa.
CO„-t-Bu / 2
C X'C02C2H5
Uma suspensão de hidreto de sódio (a 6Op/o em dispersão em óleo mineral) em 15 ml de DMSO foi aquecida a 7^ durante uma hora obtendo-se uma solução . A solução foi dilui da com 200 ml de THF, adicionaram-se 12,4 g (37>9 mmole) de ÍX.-(1-naftilmetil)malonato de t-butilo e de etilo e a solução foi agitada durante 15 minutos. Esta foi então tratada com uma solução de 8,38 g (37»9 mmole) de 1-bromometilnaftaleno em 100 ml de THF e agitada à temperatura ambiente durante a noite. Adicionou-se HOAc glacial até pH 5» filtrou-se a mistu ra e eliminou-se o THF sob pressão reduzida. O resíduo foi re tomado em Et^O e lavado com ácido cítrico 1 N, solução de NaHCO^, e depois solução de NaCl saturada. Depois de secagem e eliminação do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi recristalizado a partir de Et^O/hexano. Deste modo foram obti
dos 12,54 g do produto sob a forma de um solido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
x C02H Xco2c2h5
Saturou-se uma solução de 12,3 g de di- ,-(l-naftilmetil)malonato de t-butilo e de etilo em 100 ml de EtgO e 50 ml de THF com HC1 gasoso e agitou-se à temperatura ambiente durante a noite. 0 solvente foi eliminado sob pres são reduzida e o resíduo cristalizado a partir de CHCl^/hexano tendo-se obtido 9,66 g do produto sob a forma de um solido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
C02C2H5
Arrefeceu-se a -5° uma solução de 1,24 g (3,0 mmole) de mono di-θς-(l-naftilmetil)malonato de etilo e 425 mg (3,0 mmole) de HOBT em 4 ml de DMF e 3θ ml de CH 2 C12 e tratoí? -se com uma solução de 650 mg (3,0 mmole) de DCC em 5 ml de CH^Cl^ seguida por uma solução de 2,4 g (3,0 mmo 1 e ) de HIS(TRT)-STA-LEU-NHCHgPh em 20 ml de CHgClg. Deixou-se aquecer a solução à temperatura ambiente durante a noite. A mistu ra foi filtrada e o solvente foi eliminado sob pressão reduzi da. 0 resíduo foi retomado em EtOAc e lavado com ácido cítrico 1 N, solução de NaCl saturada, solução de NaHCO^ saturada e em seguida solução de NaCl saturada. Por secagem e eliminação do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto. Depois de cromatografia em sílica-gel, eluindo com CHCl^/ MeOH (95/5) foram obtidos 2,91 g de produto puro sob a forma
de uma espuma branca. A estrutura foi confirmada por espectros copia de NMR e de massa.
Tratou-se uma solução de 1,44 g (1,25 mmole)
C-CO-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCH^Ph em 30 ml de MeOH Ao2c2h5 com 3»1 g de NaOH e deixou-se misturar à temperatura ambiente durante a noite. A solução foi filtrada e o produto bruto foi precipitado por acção de HC1 1 N. 0 produto bruto foi recolhido e recristalizado a partir de acetona/H^O tendo-se obtido 1,17 g de produto sob a forma de um sólido branco. A estru tura foi confirmada por espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 11 E 12
Ph-CH2CHCO2H
SCH2Ph
Tratou-se gota a gota uma solução de 12,5 ml de benzilmercaptano em 75θ ml de amoníaco líquido adicionado com 22,8 g de Ácido 2-bromo-3-fenilpropiónico, tendo-se agita do depois a solução enquanto se deixou o amoníaco evaporar. 0 resíduo foi retomado em solução de carbonato de sódio a 10yò e lavado com CHgClg. A fase aquosa foi acidificada com HC1 diluido e extraida com CH^Clg. Por secagem e eliminação do solvente a pressão reduzida obteve-se o produto bruto. Após cromatografia em gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 2$ de MeOH em CH2C12 obtiveram-se 22,4 g do produto sob a for ma de um sólido branco, de p.f. 53-55°» A estrutura foi con- 57 firmada por espectroscopia de NMR.
BOC-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCHgPh
Arrefeceu-se uma solução de 2,5 g (4,8 mmole) de BOC-HIS(TRT), 0,65 g (4»8 mmole) de HOBT, e 2,0 g (4,8 mmo le) de STA-LEU-NHCH2Ph.HCl em 20θ ml de CH2C12/DMF (5O/5O) em gelo e adicionaram-se 0,8 ml (5»7 mmole) de Et^N, seguidos por 1,0 g (4,8 mmole) de DCC. Depois de agitar a 0° durante uma hora, deixou-se a mistura a agitar à temperatura ambiente durante toda a noite. Filtrou-se a mistura e removeu-se o sol vente sob alto vácuo. Retomou-se o resíduo com EtOAc, lavou-se com ácido secou-se. Por
matografia do resíduo em sílica gel, eluindo com CHgClg/MeOH (9O/IO) foram obtidos 4,1 g de produto como uma espuma branca.
A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de mas sa.
HlS-STA-LEU-NHCH2Ph
Deixou-se repousar por duas horas uma solução de 2,0 g (2,3 mmole) de BOC-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCH2Ph em 30 ml de TFA, e depois removeu-se o TFA sob pressão reduzida. Retomou-se o resíduo com EtOAc e lavou-se com NaOH 1 N. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto. Por cromatografia em sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a 5O;o de MeOH em CH2C12 obteve-se 0,47 g de produto como uma espuma branca. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Ph-CHoCHC0-HIS-0CHo 2i 3
SCHgPh
Arrefeceu-se a 0J uma solução de 6,13 g (22,5 mmole) de ácido 2-benzilmercapto-3-fenilpropionico, 3>03 g (22,4 mmole) de HOBT e 5>44 g (22,5 mmole) de HIS-OCH^.2HC1
em 300 ml de CH^Cl^ e adicionaram-se 8,0 ml (57,4 mmole) de Et^N seguidos de 4,66 g (22,6 mmole) de DCC. Depois de agitar uma hora a 0° deixou-se a mistura a agitar à. temperatura am biente durante dois dias. Filtrou-se a mistura e evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida. Retomou-se o resíduo com EtOAc e lavou-se com HgO, solu?ão de NagCO^ depois com NaCl saturada. Depois da secagem e da remoção do solvente sob pres são reduzida, cromatografou-se o resíduo em gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 5% d® MeOH em CH^Clg. Obtiveram-se 9,28 g de produto como um óleo que se cristalizou. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
Ph-CHoCHC0-HIS(TRT)-0CHo
1 3
SCHgPh
Tratou-se uma solução de 1,45 g (3,4 mmole)de Ph-CHoCHC0-HIS-0CHo em 50 «nl de CHOC1O com 0,7 ml (5,0 mmole)
Á j J 4 4
SCHgPh de Et^N seguidos de 1,07 g (3,8 mmole) de cloreto de trifenil metilo. Agitou-se a solução à temperatura ambiente durante dois dias e depois lavou-se com NaHCO^ saturada e secou-se. A remoção do solvente sob pressão reduzida deu um óleo que se cromatografou em sílica gel, eluindo com GHgClg/MeOH (99/1)· Obtiveram-se 2,06 g do produto como uma espuma. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR.
Ph-CHnCH-CO-HIS(TRT) 2 I
SCHgPh
Tratou-se uma solução de 1,86 g (2,8 mmole)de Ph-CH2ÇH-C0-HIs(TRT)-OCH^ em 20 ml de MeOH com 3,3 ml (3,3
SCHgPh mmole) de NaOH 1 N e agitou-se à temperatura ambiente durante duas horas. Removeu-se então o solvente sob pressão reduzida e retomou-se o resíduo em H^O e lavou-se com EtOAc. Acidificou-se a fase aquosa com ácido cítrico 1 N e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se o EtOAc com NaCl saturada e secou-se. A remo- 59 -
ção do solvente sob pressão reduzida deu o produto que foi cromatografado em gel de sílica, eluindo-se com CH^Cl^/MeOH (9/1). Obtiveram-se 0,89 g de produto como uma espuma. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
boc-cysta-nhch2ch(ch3)ch2ch3
Arrefeceu-se em banho de gelo uma solução de 6,78 g (21,5 mmole) de BOC-CYSTA e 2,9 g (21,5 mmole) de HOBT em 100 ml de DMF e adicionaram-se 4,48 g (21,5 mmole) de DCC em 10 ml de DMF, seguidos por 1,88 g (21,5 mmole) de S-(-)-l-amino-2-metilbutano. Manteve-se a 0° durante meia hora e em seguida deixou-se subir à temperatura ambiente dum dia para o outro. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Retomou-se o resíduo com EtOAc e lavou-se com HC1 1 N,
NaHCO^ saturada e vente sob pressão
NaCl saturada. Por secagem e remoção do sol reduzida foi obtido o produto bruto.Por cro matografia em sílica gel, eluindo com CHCl^/MeOH (99/1) obtiveram-se 8,2 g de produto como um óleo, A estrutura foi con firmada por espectroscopia de massa.
cysta-nhch2ch(ch3)ch2ch3.hci
Saturou-se uma solução de 8,2 g (21,3 mmole) de BOC-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 em 85 ml de C^Clg com HC1 ga soso, agitou-se durante uma hora, e deixou-se a agitar por mais três horas. Diluiu-se a solução com EtgO, rec°lheu-se o precipitado sólido e secou-se. Obtivera-n-se 5,47 g de produto como um sólido branco. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa.
Ph-CH2CH-CO-HIS(TRT)-CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2CH3
SCHgPh
350 mg
Arrefeceu-se em banho de gelo uma solução de (o,53 mmole) de Ph-CH2CH-CO-HIS(TRT), 172 mg (θ,53 mmoSCH2Ph
le) de CYSTA-NHCH2CH(CH3)CH2GH3.HC1, e 72,6 mg (0,53 mmole) de HOBT em 15 ml de DMF e adicionou-se 0,8 ml (0,6 mmole) de Et^N seguido por 110 mg (0,53 mmole) de DCC em 5 ml de DMF. Manteve-se a solução a 0o por uma hora e em seguida à tempera tura ambiente durante a noite. 0 solvente foi eliminado sob alto vácuo e o resíduo foi retomado em EtOAc. Filtrou-se a so lução de EtOAc, e lavou-se então com HC1 1 N, solução de NaHCO^ saturada, e depois solução de NaCl saturada. Por secagem e eliminação do solvente sob pressão reduzida o produto bruto. Por cromatografia em sílica-gel, eluindo com CHCl^/èfeOH (99/1) obteve-se 0,47 g de produto de suficiente pureza para ser usado na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 13 boc-leu-nhch2
Secou-se sobre MgSO^ anidro uma solução de 15,52 g (62,2 mmole) de B0C-LEU.Ho0 em 200 ml de THF/CH Clo (50/50), filtrou-se e evaporou-se resultando num óleo, 0 óleo foi dissolvido em 200 ml de DMF, ao qual se adicionou 8,82 g (65,4 mmole) de HOBT. Depois de arrefecimento a -5°, adicionou-se uma solução de 13»48 g (65 mmole) de DCC em 3θ ml de DMF, seguida por 6,8 ml (62,2 mmole) de 2-aminometilpiridina. A mistura foi agitada e deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. Filtrou-se a mistura e eliminou-se o solvente sob alto vácuo. 0 resíduo foi retomado em EtOAc e la vado com ácido cítrico 1 N, solução de NaCl saturada, solução de NaHCO^ saturada, e cagem, o solvente foi solução de NaCl saturada. Depois de seeliminado sob pressão reduzida, e o re síduo foi cromatografado através de gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 5¾ de MeOH em CHCl^. Deste modo foram obtidos 16,8 g de um sólido de suficiente pureza para ser usa do na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espec tro sco pia de NMR e de massa.
- 61 LEU-NHCH
.2HC1
Purgou-se ocasionalmente com HC1 gasoso duran te trés horas uma solução de 6,41 g (19,9 mmole) de
BOC-LEU-NHCH em 80 ml de CHgCl^, e depois evaporada sob pressão reduzida resultando num sólido. 0 sólido foi triturado com EtgO, filtrado, lavado com Et^O e seco, obtendo-se 5,85 g de um sólido branco de suficiente pureza para ser usado na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
BOC-STA-LEU-NHCH
Arrefeceu-se uma solução de 1,84 g (6,05 mmo(6,35 mmole) de HOBT em 20 ml de DMF solução de 1,78 g (6,05 mmole) de le) de BOC-STA e 0,86 g a 5° · Arrefeceu-se uma
LEU-NHCH
Et^N a O · cionaram-se ml de UME e 1,8 ml (12,9 mmole) de
Adi .2HC1 em adicionou-se à solução prèviamente descrita, às soluçães reunidas 1,31 g (6,35 mmole) de DCC, solução e deixou-se aquecer à temperatura ambienFiltrou-se a mistura e removeu-se o Retomou-se o resíduo com EtOAc e laagitou-se a te durante toda a noite, solvente sob alto vácuo, vou-se com ácido cítrico, NaCl saturada, NaHCO^ saturada e NaCl saturada. Depois de seca, evaporou-se a solução e cromatografou-se o resíduo através de gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 10% de MeOH em CHCl^. Obtiveram-se 2,89 g de produto como uma espuma com pureza suficiente para ser usa do na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectro sco pia de massa.
STA-LEU-NHCH2
♦ 2HC1
Fez-se borbulhar HC1 gasoso de vez em quando numa solução de 2,2 g (4,46 em 150 ml de C^Clg durante mmole) de três horas
BOC-STA-LEU-NHCHg
. Evaporou-se a solução sob pressão reduzida e triturou-se o resíduo com Et^O. Filtraram-se os sólidos, lavaram-se com Et^O, e secaram-se para dar 2,05 g de um sólido branco, de pureza suficiente para se usar na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
DMF.
-5 uma
2HC1 e sta-leu-nhch2
Arrefeceu-se a -5° uma solução de 2,32 g(4,36 mmole) de Z-HIS(TRT e 0,62 g (4,59 mmole) de HOBT em 45 ml de solução de 1,99 g (4,36 mmole) de
1,28 ml (9,17 mmole) de Et^N em à solução prèviamente preparada, mmole) de DCC às soluções reuni das e deixou-se aquecer a mistura até a temperatura ambiente ml de DMF e adicionou-se Adicionaram-se 0,90 g (4,59 durante a noite. Filtrou-se a mistura, e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Retomou-se o resíduo com EtOAc e lavou-se com ácido cítrico, H20, NaHCO^ saturada e NaCl saturada. Depois de secar, evaporou-se a solução e cromatografou-se o iiesí duo através de gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 10% de MeOH em CHCl^. Obteve-se 3,41 g de produto como uma es puma branca de pureza suficiente para se usar na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa .
HlS(TRT)-STA-LEU-NHCH2
A uma solução
Z-HlS(TRT)-STA-LEU-NHC H^
de 3,4 g (3,81 mmole) de em 75 ml de MeOH adieionaram-se 0,35 g de catalisador de Pd/C a 2O/o e fez-se borbulhar hi
drogénio na mistura. Depois de cinco horas, filtrou-se a mistura, adicionaram-se ao filtrado 0,37 g de catalisador de RJ/C a 20$> e fez-se borbulhar novamente hidrogénio na mistura. Depois de duas horas, filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida, dando uma espuma, 2,75 g, de pure za suficiente para se usar na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa.
DNMA-HIS(TRT)-STA-LEU-NHCHg
Arrefeceu-se uma solução de 1,23 g (3,63 mmole) de ácido di-(1-naftil-metil)acético, 2,75 g (3,63 mmole)
e 0,52 g (3,81 mmole) de HOBT em
100 ml de DMF a -5°. Adicionaram-se 0,79 g (3,81 mmole) de DCC e guardou-se a mistura durante a noite a 4o. Removeu-se o sol vente sob alto vácuo e retomou-se o resíduo em EtOAc. Filtrou
-se a suspensão e lavou-se o filtrado com ácido cítrico 1 N ,
NaCl saturado, NaHCO^ saturada e NaCl saturada, Depois de secar, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e cromatogra fou-se o resíduo através de gel de sílica, eluindo com um gra diente de 0 a 5% de MeOH em CHCl^. Obtiveram-se 2,06 g de pro duto como uma espuma, de pureza suficiente para ser usada na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 14
BOC-(D-HIS)(TOS)-STA-LEU-NHCH2Ph
Arrefeceu-se em gelo uma- solução de 0,98 g (2,4 mmole) de BOC-(D-HIS)(TOS) em 100 ml de CHgClg e adicionaram-se 0,5 g (2,4 mmole) de DCC. Passados cinco minutos adi cionou-se STA-LEU-NHCH^Ph /preparado por neutralização de 1,0 g (2,4 mmole) de STA-LEU-NHCHgPh.HC1 com 0,24 g (2,4 mmole)de Et^N/ e manteve-se a mistura a 4° durante sessenta e três ho64 ras. Filtrou-se então a da, ácido cítrico 1 N e
mistura e lavou-se com NaHCO^ saturaNaCl saturada. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida foi obtido o produto bruto.
Por cromatografia através de gel de sílica, eluindo com
CHgClg/MeOH (98/2) foi obtido 1,4 g do produto, de p.f. 97-101°. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
(D-HIS)(TOS)-STA-LEU-NHCH2Ph
Deixou-se descansar a temperatura ambiente uma solução de 0,95 g (1.24 mmole) de BOC-(D-HIS)(TOo)-STA-LEU-NHCHgPh em 50 ml de TFA durante 15 minutos e depois remo veu-se o solvente sob pressão reduzida. Retomou-se o resíduo em CH^Cl^ e lavou-se com NaHCO^ saturada e depois com NaCl sa turada. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida obteve-se 0,94 g do produto.
DNMA-(D-HIS)(TOS)-STA-LEU-NHCH^Ph
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 0,422 g (1,24 mmole) de ácido di-(1-naftil-metil)acético em 200 ml de CHgCl^ e adicionaram-se 0,26 g (1,24 mmole) de DCC. Passados cinco minutos adicionaram-se 0,94 g (1,24 mmole) de (ΰ-HIã)(TOS)-STA-LEU-NHC^2Ph e manteve-se a mistura durante quinze horas a 4°. Filtrou-se a mistura e extraiu-se o filtrado com NaHCO^ saturada e depois com NaCl saturada. A secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida deu o produto bruto. A cromatografia em sílica gel, eluindo com CH^Cl^/MeOH (98/2) deu 0,95 g de produto, de p.f. 113-116°. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
BOC-(D-LEU)-NHCHgPh
Arrefeceu-se em banho de gelo uma solução de
10,0 g (0,04 mmole) de BOC-(D-LEU) e 6,13 g (θ,θ4 mmole) de
HOBT em 200 ml de DMF e adicionaram-se 8,3 g (θ,θ4 mmole) de
- 65 DCC em 4θ ml de DMF, seguidos de 4,3 g (0,34 mmole) de benzil amina. Manteve-se a mistura a 0° durante duas horas e em seguida a 4° durante quinze horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob alto vácuo. Retomou-se o resíduo com
EtOAc, filtrou-se e extraiu-se com HC1, NaCl saturada. Por secagem e remoção do reduzida foi obtido o produto bruto que hexano para dar 11,4 g de produto puro,
NaHCO^ saturada e solvente sob pressão foi recristalizado do de p.f. 85-87°· A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
BOC-STA-(D-LEU)-NHCH2Ph
Deixou-se em repouso à temperatura ambiente uma solução de 3,0 g (9,4 mmole) de BOC-(D-LEU)-NHCH2Ph em 20 ml de TFA durante quinze minutos e em seguida evaporou-se sob pressão reduzida. Retomou-se o resíduo com 100 ml de CH2C12 , arrefeceu-se e neutralizou-se com 0,95 S (9,4 mmole) de Et^N, Adicionou-se à mistura reaccional uma solução fria de 2,6 g (9,4 mmole) de BOC-STA, 1,44 g (9,4 mmole) de HOBT e 1,94 g (9,4 mmole) de DCC em 15θ ml de DMF. Manteve-se a mistura a 4° durante 15 horas, filtrou-se e evaporou-se sob alto vácuo. Re tomou-se o resíduo em EtOAc e lavou-se com HC1 1 N, Na^O^ sa turada e NaCl saturada. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida foi obtido um sálido branco. Por cromatografia em sílica gel, eluindo com CH2Cl2/MeOH (98/2), obtiveram-se 3,31 g de produto, de p.f. 129-130,5°· A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
STA-(D-LEU)-NHCH2Ph.HC1
Tratou-se uma solução de 2,37 g (4,96 mmole) de BOC-STA-(D-LEU)-NHCH2 em 100 ml de CHgClg com 330 ml de CH2C12 saturado com HC1 gasoso. Depois de deixar em repouso durante duas horas e meia à temperatura ambiente, evaporou-se a solução sob pressão reduzida, tendo-se obtido um sálido branco. Suspendeu-se o solido em EtgO e evaporou-se sob pressão reduzida, para dar 2,17 g do produto, de p.f. 100-104°. A
estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
BOC-HlS(TOS)-STA-(D-LEU)-NHCHgPh
Arrefeceu-se em banho de gelo uma solução de 2,0 g (4,96 mmole) de BOC-HIS(TOS) em 200 ml de CH^Clg e adicionou-se 1,0 g (4,96 mmole) de DCC. Depois de cinco minutos, adicionou-se uma solução de STA-(D-LEU)-NHCH^Ph /preparada por neutralização de 2,0 g (4,96 mmole) de STA- (D-LEU)-NHCí-ígPh.HCl com 0,5 g (4,96 mmole) de Et^N/ em 100 ml de CH2C12 e manteve-se a mistura a 4° durante quinze horas. Filtrou-se a mistura e lavou-se com NaHCO^ saturada, ácido cítrico 1 N e NaCl saturada. Por secagem e remoção do solvente foi obtido um óleo. Por cromatografia em sílica gel, eluindo com CHgClg/ MeOH (98/2), obteve-se 1,0 g de produto, de p.f· 102-105°. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
HIS(TOS)-STA-(D-LEU)-NHCHgPh
Deixou-se em repouso à temperatura ambiente uma solução de 1,3 g (1,69 mmole) de B0C-HIS(T0S)-STA- (D-LEU)-NHCHgPh em 50 ml de TFA durante vinte minutos e em seguida evaporou-se sob pressão reduzida até um óleo. Retomou-se o óleo com CH^Clg e lavou-se com NaHCO^ saturada e NaCl saturada. Por secagem e a remoção do solvente sob vácuo obteve-se 1,2 g de produto como um semi-sólido. 0 produto era suficientemente puro para ser usado na fase seguinte.
DNMA-HIS(TOS)-STA-(D-LEU)-NHCHgPh
Arrefeceu-se em banho de gelo uma solução de 0,575 g (1,69 mmole) de ácido di-(1-naftil-metil)acético em 100 ml de CHgClg e adicionaram-se 0,35 g (1,69 mmole) de DCC. Depois de cinco minutos adicionaram-se 1,13 g (1,69 mmole) de HIS(TOS)-STA-(D-LEU)-NHCH Ph e manteve-se a mistura a 4° durante sessenta horas. Filtrou-se a mistura e lavou-se o fil trado com NaHCO^ saturada e NaCl saturada. Por secagem e remo
- 67 ção do solvente sob oressão reduzida foi obtido o produto bru, to. Por cromatografia em sílica gel, eluindo com CH^Clg/MeOH (98/2) obtiveram-se 0,8 g do produto, de p.f. 153-156°. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR e de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 16 A 18
BOC-CYSTA-LEU-NHCHgPh
Arrefeceu-se em gelo uma solução de 8,0 g (25,4 mmole) de BOC-CYSTA, 6,7 g (25,4 mmole) de LEU-NHCHgPh.HCl e 3,43 g (25,4 mmole) de HOBT em 100 ml de DMF e tratou-se com 3,6 ml (25,4 mmole) de Et^N seguido de 5,29 g (25,4 mmole) de DCC em 10 ml de DMF. Depois de agitar a 0° durante meia hora, deixou-se a mistura em agitação à temperatura anbiente durante a noite.
Retirou-se a ureia por filtração e removeu-se o solvente sob alto vácuo a 40°. Retomou-se 0 resíduo em EtOác, filtrou-se e lavou-se com HC1 1 N, H^O, NaHCO^ saturada e em seguida com NaCl saturada. Depois da remoção do solvente sob pressão reduzida cromatografou-se o resíduo em 520 g de gem de sílica, eluindo com CHCl^/MeOH (98/2). Reunindo as fracções convenientes deu 13,1 g de produto, adequado para ser usado na reacção seguinte. A estrutura foi confirmada por espectros copia de massa.
CYSTA-LEU-NHCH^Ph.HC1
Tratou-se uma solução de 13,1 g (25,4 mmole) de BOC-CYSTA-LEU-NHCH2Ph em 100 ml de C^Clg com HC1 gasoso durante uma hora. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, retomou-se o resíduo com CH^Cl^ e removeu-se outra vez o solvente sob pressão reduzida, obtendo-se 8,2 g de uma espuma. A estrutura foi confirmada por espectro de massa, Calculado para C^H^N^ .HC1.0, 2^0 (PM 457,64):
C, 62,98} H, 8,905 N, 9,18 Determinado C, 62,92} Η, 8,83í N, 9,14
BOC -ASP ( 0CH2Ph ) -CYSTA-LEU-NHCH2Ph
Arrefeceu-se em banho de gelo uma solução de 5,0 g (10,9 mmole) de CYSTA-LEU-NHCHgPh.HC1, 3,54 g (10,9 mmo le) de ácido BOC-Z^-benzilaspártico e 1,48 g (10,9 mmole) de HOBT em 50 ml de DMF e tratou-se com 1,53 ml (10,9 mmole) de Et^N seguido de 2,28 g (10,9 mmole) de DCC em 10 ml de DMF. Depois de agitar durante uma hora a 0°, deixou-se ficar a mis tura a agitar à temperatura ambiente durante a noite.
Retirou-se a ureia por filtração e removeu-se a DMF sob alto vácuo. Retomou-se o resíduo com EtOAc, filtrou -se e lavou-se com HC1 1 N, HgO, NaHCO^ saturada.e em seguida com NaCl saturada. Por secagem e a remoção do solvente sob pressão reduzida foram obtidos 7*8 g de produto de pureza suficiente para ser usado nas reacçães subsequentes. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de massa.
ASP(0CH2Ph)-CYSTA-LEU-NHCH2Ph
Tratou-se uma solução de 7,8 g (10,8 mmole) de B0C-ASP(0CH2Ph)-CYSTA-LEU-NHCH2Ph em 75 ml de CH2C12 com 50 ml de TFA e agitou-se à temperatura ambiente durante uma hora. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, adicionou-se CHgClg e removeu-se outra vez o solvente sob pressão redu zida. Retomou-se o resíduo com EtOAc, lavou-se duas vezes com
NaHCO^ saturada e em seguida com NaCl saturada. Por secagem e remoção do solvente sob pressão reduzida foram obtidos de produto como uma espuma. A estrutura foi confirmada
6,7 g por es pectroscopia de massa.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 19
Z-HIS(TRT)-CYSTA-LEU-NHCH2Ph
Adicionaram-se a uma solução de 1,59 g (3,0 mmole) de Z-HIS(TRT), 1,36 g (3,0 mmole) de CYSTA-LEU-NHCHg- 69 -
Ph.HCl, 0,44 ml (3,15 mmole) de Et^N e 426 mg (3,15 mmole) de HOBT em 30 ml de DMF a 0o 650 mg (3,15 mmole) de DCC. Deixou-se a mistura aquecer à temperatura ambiente durante a noite.
Retirou-se a ureia por filtração e diluiu-se o filtrado concentrado com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com NaHCO H^O e salmoura. Por secagem sobre MgSO^ e concentração
3* sob pressão reduzida foi obtido o produto bruto. Por cromatogra fia em sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a 2% de MeOH em CHCl^ obteve-se 1,9 g de produto. A estrutura foi confirma da por espectroscopia de NMR.
HIS(TRT)-CYSTA-LEU-NHCH2Ph
Tratou-se uma solução de 1,68 g (1,81 mmole) de Z-HIS(TRT)-CYSTA-NHCH2Ph em 200 ml de MeOH com 170 mg de Pd/C a 20% e agitou-se sob atmosfera de hidrogénio durante dez horas. Filtrou-se a mistura e removeu-se o solvente sob pressão reduzida.
Retomou-se o resíduo em CHCl^, η2ο, secou-se e concentrou-se para dar 1,22 g de lavou-se com produto. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR.
DNMA-Hl8(TRT)-C YSTA-LEU-NHCH 2Ph
Adicionaram-se a uma solução de 1,16 g (1,46 mmole) de HIS(TRT)-CYSTA-LEU-NHCHgPh, 495 mg (1,46 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)acético e 207 mg (1,53 mmole) de HOBT em 15 ml de DMF a 0° 316 mg (1,53 mmole) de DCC. Deixou-se a mistura aquecer à temperatura ambiente durante a noite. Retirou-se a ureia por filtração e concentrou-se o filtrado, diluiu-se com EtOAc e lavou-se duas vezes com NaHCO^ saturada. Por secagem sobre Mg 80^ e concentração sob pressão reduzida foi obtido o produto bruto. Por cromatografia em sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a 2% de MeOH em CHCl^ obteve-se 1,6 g de produto. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR.
INTERMEDIÁRIOS PARA 0 EXEMPLO 20
BOC-(N-MeHIS)(TOS)-STA-LEU-NHCH^Ph
Adicionaram-se a uma solução de 1,27 S (3,0 mmole) de BOC-(N_MeH!S)(TOS) (j. Med. Chem. 1986, 22» 2088) , 1.13 g (3.0 mmole) de STA-LEU-NHCHgPh e 0,46 ml (3,30 mmole) de dietilcianofosfonato. Agitou-se a solução e deixou-se aque cer à temperatura ambiente durante a noite. Diluiu-se então com CH^Clg, lavou-se com NaHCO^, secou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para dar o produto bruto. Por cromatografia em sílica gel, eluindo com um gradiente de O a 2> de MeOH em
CHCl^ obteve-se 1,2 g de produto, por espectroscopia de NMR.
A estrutura foi confirmada (N-MeHIS)(TOS)-STA-LEU-NHCH^Ph
Adicionaram-se a uma solução de 1,75 g (2,24 mmole) de BOC-(N-MeHIS)(TOS)-STA-LEU-NHCHgPh em 33 ml de CHgClg, 3θ ml de TFA. Agitou-se a solução à temperatura ambien te durante uma hora e concentrou-se sob pressão reduzida. Di luiu-se o resíduo com CHC1„, lavou-se com NalICCL· saturada,
3 cou-se e concentrou-se sob pressão reduzida, para dar 1,53 de produto. A estrutura foi confirmada por espectroscopia se g
de
NMR.
DNMA-(N-MeHIS)(TOS)-STA-LEU-NHCH2Ph
Adicionou-se a uma solução de 1,68 g (2,46 mmole) de (N-MeHIS)(TOS)-STA-LEU-NHCH Ph, 837 mg (2,46 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil)-acético e 0,38 ml (2,71 mmole) de Et^N em 25 ml de CH^Clg a 0° 0,41 ml (2,71 mmole) de cianofos fonato de dietilo. A solução foi agitada durante dezoito ho ras à temperatura ambiente. Foi em seguida diluida com ΟΙΙ^ΟΙθ, lavada com solução de NaHCO^, seca e concentrada sob pressão reduzida, para dar o produto bruto. Por cromatografia em síli ca-gel, eluindo com um gradiente de 0 a 2'o de MeOH em CHCl^ obteve-se o produto. A estrutura foi confirmada por espectros copia de NMR.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 21
Z-(N-MeLEU)-NHCHgPh
Adicionou-se a uma solução de 4,0 g (14,3 mmo le de Z-(N-MeLEU) (Can. J. Chem. 1973, JÃ, 1915) em 50 ml de CH^CN, 3,1 g (15,1 mmole) de DCC seguidos por 2,03 g (15,1 mmole) de HOBT. A mistura foi agitada durante 15 minutos à temperatura ambiente e adicionou-se 1,64 ml (15,1 mmole) de benzilamina. A mistura foi agitada por mais quinze horasàtem peratura ambiente, filtrada, concentrada sob pressão reduzida e diluida com EtOAc. A solução orgânica foi lavada com uma so lução âleo.
saturada de NaHCO
Por cromatografia
3’ seca, e concentrada, em sílica-gel, eluindo obtendo-se um com hexano/
EtOAc (8O/2O) obtiveram-se 4,6o g de produto. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR.
(N-MeLEU)-NHCH2Ph
Adicionaram-se a uma solução de 4,6 g (12,5 mmole) de Z-(N-MeLEU)-NHCH2Ph em 200 ml de MeOH, 460 mg de Pd/C a 20$>. A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante doze horas e filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluido com CH^lg, seco e concentrado lavado com uma solução de NaHCO^ saturada sob pressão reduzida, obtendo-se 2,60 g do produto. A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR
BOC-STA- (N-MeLEU) -NHC^Ph
Adicionou-se a uma solução de 2,22 g (8,08mmo le) de BOC-STA, 1,89 g (8,08 mmole) de (N-MeLEU)-NHCH Ph e 1,15 g (8,48 mmole) de HOBT em 15 ml de CH^CN a 0°, 1,75 g (8,48 mmole) de DCC. A mistura foi agitada e deixada atingir a temperatura ambiente durante um período de quinze horas. Re tirou-se a ureia por filtragem e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e diluido com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de NallC J,,, seca e concen-
trada sob pressão reduzida, obtendo-se o produto bruto. Por cromatografia em sílica-gel, eluindo com hexano/EtOAc (50/50), obtiveram-se 3,20 g do produto. A estrutura foi confirmada por cromatografia de NMR.
STA-(N-MeLEU)-NHCHgPh
Adicionaram-se a uma solução de 3»2 g (6,52 mmole) de BOC-STA- (N-MeLEU)-NHCHgPh em 50 ml de CH^lg, 50 ml de TFA. A solução foi agitada durante uma hora e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com CHCl^, lavado com uma solução saturada de NaHCO^, seca e concentrada sob pressão reduzida, para se obter 2,44 g do produto. A estrutu ra foi confirmada por espectroscopia de NMR.
Z-HIS(TRT)-STA-(N-MeLEU)-NHCHPh
Adicionou-se a uma solução de 3,31 g(6,24 mmo le) de Z-HIS(TRT), 2,44 g de (6,24 mmole) de STA-(K-MeLEU)-NHCHgPh e 880 mg (6,55 mmole) de HOBT em 60 ml de DM? a 0°, 1,35 g (6,55 mmole) de DCC. A mistura foi agitada e foi deixa da aquecer à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e diluído com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com uma solução duzida.
saturada de NaHCO
3’ seca e concentrada sob pressão re resíduo foi cromatografado através de gel de sílica eluindo com um gradiente de 0 a 2% de MeOH em CHCl^ para se obter o produto. A estrutura foi confirmada por espectrosco pia de NMR.
HlS(TRT)-STA-( N- Me LEU)-NHCH Ph
Adicionaram-se a uma solução de 2,85 g (3>15 mmole) de Z_HIS (TRT)- STA (MeLEU) -NHCH Ph em 20<> ml de MeOH, 300 mg de Pd/C a 20%. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante dez horas. A mis tura foi filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão redu
zida, para se obter 2,43 g do produto, A estrutura foi confir mada por espectroscopia de NMR.
DNMA-HIS(TRT)-STA-(N-MeLEU)-NHCH^Ph
Adicionaram-se a uma solução de 1,18 g (3,47 mmole) de ácido di-(1-naftilmetil) acético, 2,43 g (3,16 mmole) de HIS(TRT)-STA-(N-MeLEU)-NHCH Ph e 469 mg (3.47 mmole) de HOBT em 25 ml de DMF a 0°, 716 mg (3,47 mmole) de DCC. A mistura foi agitada e deixada aquecer à temperatura ambiente durante um período de quinze horas. Seguidamente filtrou-se a mistura e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e diluida com EtOAc. A camada orgânica foi lavada duas vezes com uma solução saturada de NaHCO^, seca e concentrada sob pressão reduzida para se obter o produto bruto. Por cromatografia em sílica-gel, eluindo com um gradiente de 0 a 2;ó de MeOH em CHCl^, obtiveram-se 2,80 g do produto, A estrutura foi confirmada por espectroscopia de NMR.
INTERMEDIÁRIOS PARA OS EXEMPLOS 22 E 23
DNMA-HIS(TRT)-STA-NHCH
NHZ
Adicionaram-se a uma solução
1,86 mmole) de DNMA-HIS(TRT)-STA, 260 mg de fria de 1,63 g (1,95 mmole) de
HOBT, e 0,5 g (1,86 mmole) de H2NCH
DMF, 0,4 g (1,95 mmole) de DCC e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi em seguida fil trada e o solvente foi eliminado sob alto vácuo. 0 resíduo foi retomado em EtOAc e lavado com ácido cítrico 1 N, solução saturada de NaCl, solução saturada de NaHCO^, e solução saturada de NaCl. Por secagem e eliminação do solvente sob pressão reduzida obteve-se o produto bruto. Apos cromatografia em síl ica-gel, eluindo com um gradiente de 0 a 5/ó de MeOH em CHCl^, obteve-se 1,87 g do produto sob a forma de uma espuma branca.
INTERMEDIÁRIOS PARA O EXEMPLO 24
BOC- STA-NHCH2CH=CH2
Adicionaram-se a uma solução de 27,5 g (100 mmole) BOC-STA e 14,2 g (105 mrnole) de HOBT em 40 ml de DMF, 350 ml de CH2C12 arrefecendo-se seguidamente a -5°. Adicionaram-se 7*5 ml (100 mmole) de alilamina e 21,7 g (105 mmole) de DCC e deixou-se a mistura aquecer até à temperatura ambien te durante a noite. A mistura foi filtrada e o solvente foi eliminado sob alto vácuo, retomando-se o resíduo em EtOAc. La vou-se a solução com uma solução saturada de NaCl, solução sa turada de e solução
NaHCO^, solução saturada saturada de NaCl. Depois de NaCl, ácido cítrico 1 N de secagem, a solução foi evaporada até metade do volume e o produto foi isolado por adição de hexano à solução, obtendo-se um solido cristalino, com 28,9 g· A estrutura foi confirmada por espectroscopia de
NMR e de massa.
STA-NHCH CHeCH.
z
Adicionaram-se a uma solução de 28,6 g (91 mmole) de BOC-STA-NHCH2CH=CH. em 100 ml de CH2C12, 125 ml de TFA e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante seis horas. 0 solvente foi eliminado sob pressão reduzida e o resí duo foi retomado em EtOAc e lavado com uma solução saturada de NaCl ajustada a pH 12 com NaOH 5 N e em seguida com uma so lução saturada de NaCl. Por secagem e eliminação do solvente sob pressão reduzida obtiveram-se 21,07 g do produto sob a for ma de um óleo de um grau de pureza suficiente para ser usado na reacção seguinte.
BOC-HIS-STA-NHCH CHsCH
Arrefeceu-se em banho de gelo uma solução de 23.23 g (0,091 mole) de BOC-HIS, 12,9 g (0,095 mole) de HOBT, e 19,5 g (0.091 mole) de STA-NHCH,CH=CH em 300 ml de DM?, e
adicionaram-se 19,7 g (0,095 mole) de DCC. Deixou-se então a solução atingir a temperatura ambiente durante a noite. A mis tura foi filtrada e o solvente foi eliminado sob alto vácuo.
resíduo foi retomado em EtOAc e lavado com ácido cítrico 1 N. A lavagem de ácido cítrico foi tornada básica com uma solu ção de carbonato de sódio e extraida com EtOAc. 0 EtOAc foi lavado com solução saturada de NaCl, seco e concentrado sob pressão reduzida. 0 concentrado foi vertido sobre um excesso de EtgO* precipitando 26,5 g de um solido branco. Uma vez que a análise por cromatografia em camada fina após formação adicional de BOC-HIS sugeriu a presença de apreciável quantidade de material acilado na porção de imidazolo do produto, dissol veram-se os 26,5 g de produto em 250 ml de MeOH e trataram-se com 2,8 g de solução de NaOH a 50%. Agitou-se a solução duran te duas horas à temperatura ambiente, ajustou-se o pH a 7,0 com HC1 diluido e eliminou-se o solvente sob pressão reduzida 0 resíduo foi retomado em CHCl^ e lavado com solução saturada de NallCO^ e solução saturada de NaCl. Após secagem, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e vertida sobre um exces so de Et20. θ precipitado g de produto. A estrutura de NMR e de massa.
foi foi recolhido, confirmada tendo-se obtido 17,6 por espectroscopia
Hl S- STA-NHCHOCH=CH,
Tratou-se uma solução de 12,5 g (27,7 mmole) de BOC-HIS-STA-NHCH2CH=CH2 em 50 ml de 0Η£012 com 50 ml de TF A e agitou-se à temperatura ambiente durante uma hora. Eliminou-se em seguida o solvente sob pressão reduzida e misturou-se o resíduo com H20. tendo-se ajustado o pH a 13 com solução de NaOH 5 N. Extraiu-se com EtOAc e em seguida com CHD^ Combinaram-se as fases orgânicas e lavaram-se com solução sa turada de NaCl, secaram-se e eliminou-se o solvente sob pres são reduzida. 0 resíduo foi retomado em EtJAc e precipitado por adição a excesso de Et^O. Uma vez que o sólido ainda continha trifluoroaoetato de sódio, retomou-se em HgO e extraiu-se repetidamente com EtOAc. Os extractos de EtOAc foram se- 76 -
cos e o solvente foi eliminado sob pressão reduzida, obtendo-se 7»O8 g de produto, suficientemente puro para se usar na reacção seguinte.

Claims (1)

  1. REIVINDICAÇÕES
    - 1* Processo para a preparação de novos peptídeos da fórmula
    ACIL - X-Y-W-U (I) bem como dos seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis, em que ACIL é DNMA (di-(1-naf tilmetil)-ac etilo ) , em que R é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior de cadeia linear ou ramificada com um a seis átomos de carbono.
    COg-t-Bu ou PhCHgCH-C- ;
    SCHgPh • X é HIS, HOMOHIS, PHE, HOMOPHE, ILE, LEU, NLE, K-MeHIS, ο
    N-MeLEU ou -NHCHC-;
    Y é STA, CYSTA ou PHASTA;
    W é LEU, ILE, N-MeL£U, Ν-MeILE, VAL ou está ausente com a con dição de que, quando ACIL é DNMA, W está presente; e
    U é NHCH2CH(CH ICHgCH^, -NHCHgPh,
    -nhçhch(ch3)ch2ch3, -nhch2ch(oh)ch2sch(ch3)2,
    CHgOH
    -NHCH2CH ( OH) CH2 SOCH (CH3) 2, -NHCHgCH ( OIi) CHg SOgCH (CH^ ) 2, caracterizado por compreender as fases de formação de ligações peptídicas entre os ácidos aminados constituintes, eventualmente protegidos, por meio dum método habitual da química dos peptídeos, como seja o método da ciclo-hexilcarbodiimida, da azida, do anidrido misto, do éster activado, eventual eliminação dos grupos protectores eventualmente existentes no pe ptídeo protegido deste modo obtido e, se assim se pretender, conversão do peptídeo num seu sal de adição de ácido farmaceu ticamente aceitável.
    Processo de acordo com a reivindicação 1, caract erizado por no peptídeo obtido
    -NHCHgPh,
    -NHCHgCH=CH2, -NHCHgCH(OH)CH2 SCH(CH^)g,
    -NHCHgCH(OH)CH2SOCH(CH^) £, -NHCHgCH (OH)CH2SOgCH(CH^) 2, ~NHCHCH(CH3)CH2CH3 ou -NHCH2CH(CH3)CH2CH3.
    ch2oh
    Processo de acordo com a reivindicação 1, racterizado por o peptídeo obtido ser escolhido de entre grupo cao ii
    PhCH2CH-C-HIS-CYSTA-NHCH2CH (CH3 ) CH2CH3,
    SCH2Ph fi
    PhCH2(jH-C-HIS-STA-LEU~NHCH2Ph,
    79 DNMA-HIS-STA-LEU-NHCHg
    DNMA-HIS-STA-LEU-NHCHg »
    cVH2
    DNMA-(D-HIS)-STA-LEU-NHCH2Ph, DNMA-HIS-STA-(D-LEU)-NHCHgPh,
    DNMA-(N-MeHIS)-STA-LEU-NHCH2Ph,
    DNMA-HIS-STA-(N-MeLEU)-NHC^ Ph,
    DNMA-HIS-CYSTA-LEU-NHCHgPh, ch(ch3)ch2ch3>
    ΙΪΊ '--e-C0-HIS-STA-NHCHoCH(CH„)CH9CH„, /1 2 3' 2 3
    BOC-NH CONH
    DNMA-HIS-STA-LEU-NHCHg
    DNMA-ASP(OCH2Ph)-CYSTA-LEU-NHCH2Ph,
    DNMA-ASP-CYSTA-LEU-NHCH2Ph e
    DNMA-ASP
    -CYSTA-LEU-NHCH2Ph.
    Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o peptídeo obtido ser DNMA-HIS-STA-NHCH2CH(OH)CH2SO2CH(CH )2.
    Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação dum peptídeo contendo uma função amida com um grupo tio caracterizado por compreender as seguintes fases:
    (a) reacção dum alceno protegido substituído em NH com a dupla ligação na posição 1 com um agente de epoxidação com formação do respectivo epóxido, (b) reacção do epoxido com um mercaptano com formação do tioéter protegido correspondente» (c) remoção do grupo protector com formação do composto correspondente com uma extremidade formada por uma amina livre , (d) reacção da amina com um ácido aminado ou com um peptídeo contendo um grupo carboxílico terminal livre com formação do peptídeo correspondente contendo uma função amida com um grupo tio e, se assim se pretender, conversão do peptí deo num seu sal de adição de ácido farmaceuticamente acei tável.
    - 6S Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 4 caracterizado por compreender as seguintes fases:
    (a) reacção dum alceno protegido substituido em NH com a dupla ligação na posição 1 com um agente de epoxidação com formação do respectivo epoxido, (b) reacção do epoxido com um mercaptano com formação do tioéter protegido correspondente, (c) oxidação do tioéter com formação da sulfona correspondente, (d) reacção do composto contendo a sulfona com HC1 com formação do composto contendo uma extremidade com uma função . amina livre, . (e) reacção da amina com um ácido aminado ou com um peptídeo contendo um grupo carboxílico terminal livre com formação dum peptídeo contendo uma função amida com um grupo sulfo nilo e, se assim se pretender, conversão do peptídeo num seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.
    - 7« Processo para a preparação duma composição farmacêutica caracterizado por se incorporar como princípio activo uma quantidade efectiva para inibição de renina dum composto preparado de acordo com o processo de qualquer das reivindicações 1 a 6 em conjunto com um veículo farmaceuticament e aceitável.
    - > Processo para a preparação duma composição far macêutica caracterizado por se incorporar como princípio acti vo uma quantidade efectiva para inibição de renina dum compos to preparado de acordo com o processo da reivindicação 4 em conjunto com um veículo farmaceuticamente aceitável.
    - 9- Processo para a preparação duma composição far macêutica caracterizado por se incorporar como princípio acti vo uma quantidade efectiva para inibição de hiperaldosteronis mo dum composto preparado de acordo com o processo de qualquer das reivindicações 1 a 6 em conjunto com um veículo farmac euticament e aceitável.
    - 105 _ ι
    Método de diagnostico para determinar a presença de hipertensão associada a renina num paciente caracterizado por compreender as fases de administrar ao referido pa ciente numa única dose e a um nível de dosagem hipotensivo 'um peptídeo obtido de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 6 e por se verificar de modo contínuo a pressão sanguínea do referido paciente.
    - 11» _
    Processo para a preparação duma composição far macêutica caracterizado por se incorporar como princípio acti vo uma quantidade efectiva para tratamento do ataque do coração por congestão dum composto preparado de acordo com o processo de qualquer das reivindicações 1 a 6 em conjunto com um veículo farmaçeuticamente aceitável.
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