PT92680A - Processo para a preparacao de inibidores de renina peptidicos - Google Patents

Description

Fórmul τ

Sm que He

Fenilmetil -o-: p__ W alquil (C,-C,)

CO ,0>-· A 0 0 li !! Calquil (C . —C . ) í 1 ò i 3 f ifsnil—0 >2P· 0 0 2! ll 03P-, C fenilíiis =til-0 >2p-, Ea Iqu 0 ãí C CH.—, > 3 ^ n Γ - 1 — · « - ** · LtóiqúUi < ?r -r “1 "6 \ m p_ r - W ϊ rj b f en. E & X Q Li X 1 C Lr j Lj- .. / J L cl I Cf LI X Λ I £5 * U π iisnil' ο ο -C. ) 3Cfenilffietil~UJP-» Cfsnil-Ol-P-, R-L-orol11ο= R-L-ticíoroli- i/ 1q=, R--L~ssriIo? R-L-metioni Ios R--L~al anilo» R-L-feni lai aniles == R-L“(S-bsnzilícisteinilo* R-L-histidilo ou R-glíeilo» em que n é um número inteiro de 1 a 4s m é um número inteiro de 2 a 4 e R é ssleccionado a partir de um dor grupos definidor para R1 ρ R„ é fsnilmstilo=, -CH»,<2---iienil) ;i --CH._S C3~indol.il) s 4~metcmibsnii Io ou “-CH^-naftil | R_ é hidrogénio ou metilop R4 é 4--< imidasolil >CH^X~5 alquiloCC^-Cp) 5 -{CH0) -NH0s feni Instilo,, ciclo-hexilmetilos -X-alqu.il (C,-€*,) , -X-ciclQ-hexil, -(CH^) -X-alquil CC, -CL») , -X-CH^CH^NCalquil CC*-C^.) Conde X é --0- ou —S-> e as porçSes das fórmulas*

H R5 é hidrogénio» ou metilop é alquilo Ci;1-CA)S fenilmetilo» ciclo--hí-3Milmstilo? -(CH^) -X-alquilíC^C^) ou

onde K-, é hidrogénio, aIquiloíC1-C-j. >, 2ár, Ci , S- ou CORp:i onde R0 é H, CFV NNp, OH, -O-alquilíC.-C^}, -NH-alqui1(C,-€&), alqui-1q(C1 -~'C-c ) , CR-,OH, -NCalquil ¢0,-0^)^2 ou

-NHCH

Ha fórmula I, os asteriscos representam átomos de carbono assimétricos.

DESCRIngQ.FQRMENQRIΖΑΡΑ DO.....INVENTO r=

Dentro do grupo ds compostos definidos pele fórmula I, são preferidos certos subgrupos. Amplamente preferidos slo aqueles compostos em que os «—amino—ácidos t‘§in a configuração natural L. Deste modo, os compostos mais preferidos são aqueles em que a unidade dipeptidica ou tripeptídica na fórmula I tem a configuração L, L ou a configuração L, L, L, Slo especialmente preferidos nas unidades C-terminais os compostos em que as unidades C-terminais são seleccionadas a partir das de fórmula II

-nh-ch-ch-a

I

I

I

I

OH

[-•ormula II

Cfiífi uma relação espacial anti (treo) entre o grupo amino e o qrupc hidrojiila» Os compostos l-amino~2~hidroxi de fórmula II ma is preferidos são os diastereómeros com a configuração IS.

Os compostos mais preferidas de fórmula I? em que a grupo C-terminai ê representado pela fórmula ϊIy são os compostos Q 0

em que R é Calquil (C, ( f eni 1-0) ,,P~ , Lalquil ΙΟ Q n 5*

Calquil <C .-0/-Q3F--, C fersilmeti 1-0) 2P- ou Calqui 1 (Cj-C6 5 -03 C f e- nil-CCr-5 H0 é fsnilmetilo, <3-indclil)θΗ^5 (2-tienil)CrL· ou CH0- :.rf ti:;; R-t è hidrogénio 5 é aiquiloíC^-Cpí 5

par

Por exemplo, as produtos podem ser preparados reacçSo de um dipeptídeo N-protegido de fórmula IIIs

0

II CH *

R1 -NH-CH-C-N *

R 3

III órmuí ou de um -z-su equ i v alente quíinicD5 COfB i.tíí! composto 1 ~S;« X i í u“2' —hidroKi ds fórmula IV, r6 oh

I I nh2-ch-ch-a

í-ónsaia iV

Deste modo um dioeotídea ou t. r i ρ s o t £ d e o de fórmul· ~r=1 de peDtiaeos ΙΠ de modo a converter o grupo earboxiIo num derivado aotivado,, o qual é enttíD feito reagir com um composto de fórmula Iv,= ou com um seu equivalente químico de modo a obterem—se os produtos deste

Us reaqenies de acoplamento de peptídeos preferidos são aqueles que não causam racemisaçSo nos carbonos designados com

asteriscos. For exemplo 3 sSo reagentes apropriados de acoplamento de peptídeoss D N,N' —Di-ciclo—hexiIcarbodi—imida mais í-hidroxi- —ben 2 o triazole 2) Hsxafluorofosfato de henzotriazoi-l-iloxitrisCdi-metilamino)fosfónio (reagente BOP) 3) Cloreto Ν,Μ'—bisC2-OKO—3-oxazolidinil3fosforodi— amídico < BOP—CI) 4) Cloreto de difenilfosfinilo (DPP-Cl) 5) Cianeto de de dietoxifosforilo 6) lodeto de 2-cloro—i-metilpiridínio 7) Diclorofosfata de fenila roais imidazols

Nos compostos de fórmula 111, ero que é 4-imidazoIiI-metilo, o azoto do imidazols é bloqueado com um grupo apropriado tal como tasilo, 2?4~dinitrofsnílo, benzilo, ou benziloximetilo, antes do acoplamento com compostos de formula IV= Um grupo bloqusador adequado é escolhido de tal modo que as condiçBes para a sua remoção sao compatíveis com outras características estruturais no produto ds fórmula L

Alternativamente um dipeptídeo ou tripeptídeo de fórmula. III ê activado com um reagente de acoplamento de peptí— deos apropriado e, em seguida, feito reagir com um composto de fórmula V no qual o grupo hidroxi está protegido coro umqrupo bloqusador removível Y = Grupos bloqueadores adequados sSo representados por trxmetxlsxlxlo, t-butildimetilsililo, tstra-hidro-piranilo, acetilo, benzoilo, e análogos, A remoção do grupo bloqueador ds hidroxilo dá então origem aos compostos de fórmula Is

R, ΟΥ

NHj-CH-CH-A * · * V R2 0 R4 Ο

Ri-NH-CH-C-K-CH-C-OH + * I * *3

R2 0 0 R, OY

I II I II II

R.-NH-CH-C-N-CH-C-NH-CH-CH-A • | · · * «3 bloqueado AI ternativaraente são preparados aldeídos peptídicos N-bloqueados de fórmula VI e feitos reagir com um composto de fórmula VI I? onde ri"5' é um metal tal como sódio, potássio, li tio.

Rj ο »40 R( ο I II I II I II R.-NH-CH-C-H-CH-C-N-CH-CH + A~^MW * Λ. t Λ t Λ

VI I

VI

R

I R. 0 R4 0 R. OHI II I I! II NH-CH-C-N-CH-C-HH-CH-CH-A • I · I · *

Rj *5

I

De preferencia os aldeídos peptídicos de fórmula VI slo feitos reagir com derivados trímetilsililicos de fórmula VIII na presença ds fluorsto de tetrabutilamónio, fluoreto de césio ou de uma fonte equivalente ds anião fluoreto? ds modo a originar os derivados u-irimetilsililc? de fórmula IX*

V L

13 ** *40 R« 0 R.-NH-CH-C-N-CH-C-H-CH-CH ♦ (CH,),Slfc ' · I · I ·

VIII

VI R. 0 R< O R, OSI(CHj),

I II I II M

R.-HH-CH-C-N-CH-C-NH-CH-CH-A ’ · | · i · · A rsmoçli tais conto tΓ atamen bu.ti Iamónio3 dà or n.~* wr> inter por rSSCÇãO de um aasOu-iío du grupo t r x me L x I s x 1 x 1 o ·=-!_<t* Luiidiçoss padrão ento cosi ácido dilui. orxgsra sos compostos intsrsseoiãrxos oe tórmula

qus Rq é t-butiloKicarbonilo, benziloKicarbonilo e aná!oqosK com compostos de fórmula V 0 i òrmux ♦S j» a XI ou. são preparados • 1oqueado dè fórmula X5 em icarboni lo, t r i f en i 1 me til o ΊΙ ou VI II.

R( O ΘΘ R,NH-CH-CH + A “

R, OH

V I I

R.NH-CH-CH-A- * *4 X I

(ch3)3 SICI + RI OS 1(CHj)j

I I (CHjKSlA -► R.NH-CHCH-A ** ♦ ·

X I I

VIII

Os compostos mais preferidos de fórmula X slo aqueles com a configuração L (S>P os quais dão origema um par de diaste-reómeros na reacção com o composto VII ou VI !L 0 par de diaste--· reómeros pode ser separado por cromatografia sobre gel de sílica., e acoplado a uma porção psptítíica de fórmula 111. s como previamen--te descrito»

Como exemplos representativos do processo anterior (Esquema A). o 2-trimetilsililtiazole 1_ é feito reagir com U-t-butoxicarbonil-fenilalanal 2 ou com L;--t7-butoKicarbonilfsrsil--—leucinal 3? em diclorometano? de modo a obterem-se os diaste-reómsros 45 5 s -6 5 7? respectivamente» A remoção do grupo trime-tilsililo com sniSo fluarato dá origem aos compostos com hidroxi livre 4h? 5b e éb5 7b, respectivamente» A separação dos diaste-reómeros é levada a cabo por cramatografia. Os diastereómsros mais preferidos são o (5)-2-(terç—butoxicarbonillamino—3—fenil— -(E)-1-(2-tíazaliI)propan-l—ol 4b s o (5)-2-(terc—butoxicarbo-nillamino—4-metii—(R)—l~(2-tiazolil)pentan-l-ol 6b»

bsqugma. A CH,

Τ' / \\ i-BocNH-CH-CH + (CH3)3SI-\v

N

OM

Aa M-S 1 (CH 3)3

Tb M-H

Γ2 s_t

t-BocNH

i OM -CH-CH“^ / (S) I »

5o M-S I (CH3)3 5b M-H

hsguema A (continuação

γ ch2ch(ch3)2

6o_ M-(CH3),SI 6b M-H

çh2ch(ch3)2 I s t-BocNH-CH-CH-Λχ

(S) * N

OM

7α M- (CH3)3SI 7b M*= H

Alternativamente, os compostos de fórmula I podem ser preparados por acoplamento sequencial de «—assino—ácidos N—bloqueados de fórmula XIII a compostos de fórmula V = Os derivados (Fórmula XIV) são então desbloqueados de modo s obterem-se compostos de fórmula XV, os quais slo acoplados a unidade N-ter-_/ minai de modos, obterem-se compostos de fórmula XVI, Esquema. B. 0 grupo bloqueador da hidroxilo (Y) é então removido de modo a produzir compostos de fórmula 1= A sequência de reacçSes pode ser levada a cabo de modo que o grupo bloqueador <¥) seja removido primeiro e o derivado de fórmula XVII, contendo um grupo hidro— Hilo livre, seja acoplado á unidade M-terminal de fórmula XVIII» As reacçSes de acoplamento (Esquema B) podem ser também levadas a cabo com os compostos de fórmula V em que o grupo hidroxilo não está bloqueado CY~H) de modo a obterem—se derivados XIV <Y=H) e KV (Y=H)» fasquema fr:

HN-CH-C-N-CH-CH-A R2 0 R4 0

OY

ΠΙ UI I

XV

R,-HH-CHCOOH

> R.-NH-CH-C-N-CH-C-N-CH-CH-A

XVI or

R4 0 R- I II I HK-CH-C-N-CH-CH-A

R, -HH-CHCOOH

XVI I

OH

XVIII

R2 O R4 0

ΠΙ ΠΙ I Rj-NH-CH-C-N-CH-C-N-CH-CH-A

OH

I

Os compostos de fórmula I são convertientemente preparados sintetizando primeiro os intermediários em que R, é um grupo t-butoxicarboniio ou um grupo benziloxicarbonilo, removendo enm seguida o grupo bloquearfor e fazendo reagir o derivado fle amino livre com um diéster de ácido fosfonocloridico ou com um mono---éster de ácido fosfonoclorídico»

Os compostos de fórmula I são inibidores activos de rsnina» A renina é uma endopeptide.se que desempenha um importante papel no controla da pressão sanguínea* 0 sistema renina angiotensina é uma cascata proteolítica mui ti-regulada,, na qual a. rsnina cliva a angiotensina da substrato de proteína, tís modo a originarangiotensina I „ A enzima conversora, de angiotensina (ACE) catalisa a remoção do dineptidão terminal a partir do dscapeptí-deo angiotensina. I,, de modo a formar a angiotensina. II , a qual exiba actividade vasoconstritora potente» A renina è uma protease aspartilica com alta especificidade de substrato e é o primeiro passo proteolitico nno sistema renina-anqiotsrrsina que está envolvido no controlo da prssSo sanguínea»

Os inibidores de renina t'§'m sido apresentados como baixando a pressão sanguínea em primatas» EJ« Hypertension, 1, 399 C19B3), Hypertension i Csuppl 2), 1B9 <1983)3 e no homem, lLancet II, 148è <1983), Trans» Assoe» Am» Physicians, 96,, 365, 3* Hypertension, 3, 653 <1985)3 e, deste modo, são potencialmente úteis no controlo da hipertensão»

Os novos compostos de fórmula I são novos inibidores peptidleos de renina e são úteis na tratamento da hipertensão ©m animais da sangue quente, como estabelecido na teste que se segue,

Rastreip por Radioimunoensaio em... Relação a... Inlbirioras de Renina G .método in. vitro para o rastreio de compostos anti--rsnina involve, em primeiro lugar, a geraçSo de angiotensina I r, e em segundo lugar, a quantificação da angiotensina I produzida por radioimunoensaio»

Geração de Angiotsnsina I G meio de incubação consistiu de 2© μ! de angiotsnsina de plasma humano purificada í1)e i© μΐ de renina ds rim humano <2> s; 5 μΐ de fluoreto de fenilmetilsulfonilDj 1 © μΐ de EDTA dissõdica (1© mni s 1© μΐ de composta anti—renina (5 κ 1© " , —4 _ -s b μ 1© , o κ 1© - > em dimetxlformamida, ou etanol e uma quanti dade adequada de tampão malesto (77 mM, pH é>s©> de modo a perfazer um volume final de 5©© μΐ» A mistura reaccional foi incubada durante uma hora a 37°C e a reacção enzimàtica foi parada colocando o tubo em água arrefecida com gelo» A angiotsnsina I gerada durante a incubação foi medida por meio de um equipamento de radioimunoensaio para a actividads da renina do plasma (Clinicai Assays, Inc>»

Procedimento ds Radioimunoensaio 0 meio de incubação consistiu de partes aliquotas de 1Θ® μΐ da mistura reaccional anteriormente referida ou ds uma quantidade padrão de angiotensina Is 1Θ@ μΐ ds tampão fosfato (1Θ© inrl? pH 7,ò> e 1©© μΐ ds ('"^Ι)angiotensina num tubo, provido por raios gama» Após trãs horas ds incubação à temperatura ambiente3 os tubos foram decantados, e a ratíioactividade de cada

tubo foi determinada num contador de raios gama» Foram efectuadas determinações em duplicado relativamsnte a cada incubação» Os resultados foram expressos sn ng de angiotensina Σ gerada por ml de meio de geração por hora de incubação (ng/AI/ml/h)»

Os resultados deste teste sobre os compostos representativos deste invento aparecem na Tabela I» expressos como uma

CI5eT <i> A angiotensina do plasma humano9 derivado do sangue de uma mulher que recebeu pílulas contaceptivas orais, foi purificada por cromatografia sobre uma coluna de pepstatina—amino— -hex i1-agarose. (2 3 A renina humana, foi preparada a partir de rim humano»

TABELA χ

M-Fasf mil·

5 0 wJLijferUis- L-úiulO

Inibidores de Renina

CofilDQS to T n_. Ο (ή Concsn traçSa Molar _O Η- ZH— í Dietosif oefini 1) —L~f snila.ls.nil~ 4,Ξκ1Θ ^ ~L--1 suc 11 J — í d > — 2—s íTs i Γί d 4 ~ rns t j. 1 — \ B) — i ·~ — í 2~t.ia.sol.il) —pentan—I—ol N—CN— (Difenoxif Qsf ini 1) ~L~fsn i 1 a. I sn i 1 — -í 2—ti a só1i1)-pentan-í-q1 1y2x10 “ N~lM~CEMetoxi 3 C fancxi3fosfini1)—L-fε~ n i1a1an iI~L~1suc113 — < S)-2-amin ο-4-me-ti1-(R> -1 - <2-tiazoIiI> ~pentan-i-o1 6 , Θ >·; 10 — n N— EM— í R ou. S) C CMetoxi 3 Zfsni imetoxi j — fosfinil>-L-fenilaianil-L-leucil3-(S>-—2—antino—3—c ic1o—hexi1 — CR) — i — (2—tiaso— 1ΐ1)-propan-l-ol 5,2x10 N- l N~ i R ou. S) t Γ Me to κ i 1L f en i 1 aa to x i j -f os f i n i i > ~L— f en i I a. I a.n i I — L-1 eu o i I 3 - < S) — 1 i 1) ·-- propan—i —o 1 ^ _o

TfíEfcLA I (continuação) IC50 Concentração Composto Molar f^-LN—t CHidroxil Cf enoxi 3f osf inil) -L-fe-n i I a 1 sn i 1 ~L-1 euc i 13—< S > -2~aniino~3-e i~ o Ιο-hOKi I-- CR )-1-( 2-t.iazol i 1) -propan-l-ol 5,!4κ1Θ~/ W-CN-íDietoKifosfinil}-L-fsnilalanil-—L—1euc i13-(S > —2-amino—3"Cic1o-hexil-íR>--i-í2-tiazolil)-propan-l-ol 2,òk1€3~^ N;-CNp-íDietoxifosf inil )-L-fenilalanil--L-1 suo i 13 - (S > -2-amiriD~3~eic 1 o-hexi 1 -<R>--1-C2~furan.il)-propan-l-ol 1,7x10~V W-l N~(Dístox i fos f iηi1)-L-fsn i1a1ani1--L-Iaucil3-(S>-2-amino-3~cicio-heííil-íR>“ -l-(2-iiíiidazolil) -propan-l-ol lPÍKl®”/ N~C N — (D i s t o x i f o s f i n i 1 > — L—f e n i 1 a I a n i 1 — -L-1buc i i 3 - < 8)-2-amino-3~cic1o-hex i1 — < R >--l-(2~piridinil)-propan-l-ol 899κ1Θ~Θ N~íN-(Distox ifos f ini1)-L-fsni1a1an i1---L-1 suc i 13 - í S) ~2-amino~3---c: ic: 1 o-hex i 1 - i R) --1 - C 5-ms t o x i c a r bon í 1 -2 -1 i a z o 1 i 1) - p r o p a. η -1 -o 1 2?όχ1Θ L-omposco

-η η ·|- U Ο ΓίL..Γϊ C ί' -:::1 C. Ρ. L rtal a.r Ν-“ ί Ν- (Distoxi f osf inl 1) -L—f eni lalan.il-~ 1 — (S-aceti I “2~fu.r-3.ni I) '"proo-sn·-1 —-c 1 μ / !, k.; —Γ (D i benzi. loxif osf ini 1) —L~f erii 1-alarei 1-— i — (2—tiasQ1iI)—prapan—i —q1 w—cn—ε < 5—Meta kí—1 ?-5?2~dio κ af osf or in—2— --·5 / κ 1 €· ' —x 1} -oxida]· ~L~ t E=n i I a. 1 an l-L-lettcil 2- —(S)—2 “SÍHÍnO"”· 3—c ic 1 críiax i 1-(R)~i-< 2-tia- zolil) “propan· -i-ol -8 M--LíDxsíoxxtos. i inil )—L-i enxlslanil·· histidi I 3— < S) “2~amino—3-c ic Io—he;<: ~(R)-1-<2"Ι®Id a *a1i1)—propan—í —o1 a, iKifcí xí~ lN- (cistos itost in x I) —f sn x i sl -sn x 1 — ~L“ h i s t i d i 1 J — (S) —2··· sun i n d—3—c i c 1 o— hs κ i 1 — — \ K) — 1 — i 2-“tiazol i 1. > — propan—1—al N-LN~<Disto>;ifosf inil) ~L~fenilalsnil-—L—histid i 1 3·~ (S) -2-arnIno—3-c ic 1 o—ne kí i TASbLA I (continuação) IC50 Concentração Composta Molar N-lN-C Dieta;-; ifosfinil>-L-fenilalanil--L-leuci11-<S)-2-amíηο-3-c iclo-hexiI-—CR)~i—<ÍH-pirazol-3-iI)-propan-l-ol 258x10"9 N-íN~<Dietoxitosf inil}-!_-(4-metoxife- 1,8xl0~B n i1)a1an i1-L-1euci13-< S)-2-ami no—3- ciclo-hexil — < R > — i— ílH-pirazol-3-il)-—propan—1-o1

Os novos compostos do presente invento fim mostrado ser altamente úteis para baixar a pressão sanguínea elevada, em mamíferos quando administrados era quantidades variando dsse cerca de 5 mg até cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia.

Os compostos deste inventa sSa, de preferência, administradas per uma via parentérica tal como via intravenosa, intramuscular ou subcutânea5 mas podem ser administrados araimente ;i se desejado.

As composiçSes, de acordo com o presente invento, tendo a desejada clareza, estabilidade e adaptabilidade para utilização parentérica são obtidos por dissolução de ©,105 a í©%5 em peso, de composto activi num veículo que consiste num álcool aiifático poli-hítíricp ou misturas de tais álcoois. São especialmente satisfatórios a glicerina, o propiIsno-g1icol e os polietileno-glicois» Embora possam ser utilizadas várias misturas de polietileno-glicois, ê preferido utilizar uma mistura tendo um peso- molecular médio de desde cerca de 2ΘΘ até cerca de 40®»

Para além do composto activo, as soluções parentéricas podem também conter vários conservantes para impedir a contaminação por fungos s bactérias, bem como anti-oxidantes para promover a estabilidade»

Para injscçSo intramuscular, a concentração preferida de composto activo á 0,25 a 0,50 mg/ml das composições acabadas»

Os novos compostos deste invento são igualmente adaptados para administração intravenosa quando diluitíos com água ou dilusntes empregados na terapia intravenosa, tais como glucose isotónica» Para utilização intravenosa, são satisfatórias concentrações de desde cerca de 0,05 até cerca de 0,25 mg/ml de composto activo»

Us eKemplos específicos que se seguem ilustram a preparação dos compostos deste invento»

Exemplo de Referencia 1 M^zLtfenilwet ok i) c a r bon i,l„3 ~t- f an 1 lalanin amida

Uma porção de 18 g M^-Eífenilmetoxí)carbonil3-L-fe— nilalanina e 6só ml de N—metiImorfolina foram dissolvidos em 150 ml de tetra-hidrofurana e agitados a ~1®°C e em seguida adicionou-se 8,04 ml de cloroformato de isobutilo» Após um minuto, fez-se borbulhar gás amoníaco através da mistura até ela ficar saturada» A mistura foi agitada durante um período adicional de 3€» minutos e depois vertida em gel o-água. Recolheu— --se um sólido branco, originando ló,7ò g do composto desejado, p.f. j.64-165':’C . ÍHmBla-..de......Rejferlnçia_2 N-C f Fen 11 metoxi)carhoni 1 j-L-fenilaLanil-|h.L·--2-hidrpxi.y 1 ic.ina

Uma solução de 16,8 g de N^-E (f eni Imetoxi )carboni 1 j-L---•fenilalaninamida, e à366 g de ácido glioxllico sm 9& ml de acetona foi submetida a refluxo durante é horas, em seguida vertida em água—gelo e agitada. 0 sólido branco resultante foi recolhido a seco, originando 16,8 g do composto desejado, p.f. 137—141°C.

Exemplo de Keferãncia 5 CIEenilmetoxi)c arboni11-L-fep ilalanil-D,L- -2~C5—mstilpropoxi)q1icina, éster 2-metilpropilico

Uma mistura de 9,2 g de N—C\feniImetoxiIcarbonil3-L--fenilalaniI-D,L—2—hidroxiglicina em Í20 ml isobutanol contendo ©,5 ml de ácido sulfúrico concentrado foi agitada durante 3Θ minutos, em seguida aquecida num banho de vapor durante 4 horas, arrefecida e vertida numa solução saturada fria de bicarbonato de sódio» Esta mistura foi extraída tr'ê's vezes com acetato de etilo» Os extractos foram combinados, secos, filtrados e evaporados, originando um sólido que foi recristalizado a partir de etanol, originando 7,3 g do composto desejado» Após recrista1icação a partir de etanol o sólido fundiu a 12$-123°C. N-fl <Fenilmetoxi )carbonil j-L-fsnilaianiI-D,L·--2-< mtOgrofío>iilflUçina

Uma solução compreendendo 7,3 q de N-E CfeniImetoxi icar-bonll 3~L~fenilalanil-D5L-2-<2-metilprapQxi)glicina , éster 2~ffie-tilpropílico, 15 ml de hidróxido de sódio IN e ISO ml de metanol foi agitada durante 15 horas, em seguida acidificada com ácida clorídrico 3N e evaporada até se obter um óleo, A adição ds égua produsiu um sólido que foi recolhido, originando ó,l g do composto desej ado, p-. f, 99- í 09 °C,

Exemplo ds Referência 5

MzElgtpKi-N-iBetí Icarbonil-L-feni lalaninamida3. trifluoroacetato A 21,75 q de W—metoxi-N-metilcarbonil-L-C t-butox'icar-bonil) fenilalaninarnida, arrefecidos num banho da gel o-metanol, foram adicionados, com agitação, 50 ml de ácido trifluoroacétíco. Após três horasr, o solvente foi removida in, vácuo, Adicionou—se duas vszss éter e o solvente foi removido, em seguida adicionaram-se 100 ml de éter e a mistura foi arrefecida, 0 sólido, resultante foi recolhido, lavado com éter e seco ao ar, originando 19 g do composto desejado sob a forma ds cristais, p,f, 123-•--Í24°C»

Exemplo de Referfncia. 6. N-í < Feni 1 mstoxi) carfaoni 1 3-L-f eni 1 alani 1-L-2-(2--meti I propgxi ? glici 1 -N-metox iHMrmey,! âlamjiaaida_e N-C(FenilmetoKi)carbonil1-L-fenilalanil :~Ώ~2~(..2---meti.l propox i)η Iic i1 -N-metox irN-met. i,.l.-L-Tsriil- A uma solução de 3 g ds C feni Imetoxi >carbonA 1 j-L--fenilalanil-D*L-2-C2-iiíBt±lpropoxi>glicina* 1*73 g de ácido 2---stoxi~í í2H>-quinolinocarbaKilico* éster etílico* e 7® snl de diclorometano* foi adicionada uma solução de 2*25 g ds trifluo™ rascstato ds M-mstoxi-N-meti i-L-fenilalaninamida e L2 bí! ds trietilamina em 35 ml ds diclorometano» Esta mistura foi agitada durante 2® horas e* em seguida* evaporada» Foi adicionado clorofórmio ao óleo residual e esta solução foi então lavada trfs vszss com ácido clorídrico 3N* trfs vezes com solução saturada de bicarbonato ds sódio e trfs vezes com solução saturada de cloreto de sódio* sm seguida seca* filtrada e evaporada* originando 4*8 g de um óleo» Este óleo foi combinado com 5*7 g de óleo preparado da mesma maneira* colocado numa coluna de gel de sílica 3Θχ2 cm e aluído com acetato de etiloshexa.no <lsl>» A segunda fracção originou 1*16 g de N-EifeniimetoxiΙο ar boni11~L~ fsni1a1an i1—L—2-C 2-meti1propox i)g I ici1—N-metox i-N—me-iil-L-fenilalaninamida sob a forma de um sólido -amorfo* Rf=7*555 Ϊα1η2ΰ —11°±3 (c = & * 35 * metanol)» .Após eliminação das fracçSes intermédias* foram recolhidos i*25 g do segundo composto N—Eíf©nilmetoxi>carbonil3~L™ -feni Laianil~D~2—(2-meti 1propoxi)glici1-N-metoxi-W-meti1-L-fenil- 26 0° alaninaniida sob a forma de um sólido amorfo, Rf=0,õ3? la (c = %5 3 , metano1)»

Exemplo dg Refertncia ./ IM-C ΐ Fen i 1 metox i ).car bon 11J -.1 -formi 1 -2—feni le t i 13-L-2- (2-me.t i 1 propox i Ιοί icin-amida

Uma solução ds i5is g ds N~E Cfenilmetoxilcarbonilj-L--f en i 1 a 1 an i 1-L--2- í 2—me ti 1 propox i > g1ic i1 —N-rns tox i—N—me t i 1 ~L~f sn i 1 alaninamida em 20 ml de éter s tetra-hidrofurano suficiente para tornar possível a solução, foi adicionada, gota a gota, a. uma mistura de 0,1 g de hidreto de alumínio e litio em 20 ml de éter, com agitação sob uma atmosfera de árgon» Quando a adição ficou completa5 a agitação continuou durante 4 horas, em seguida a mistura foi arefecida e tratada com uma solução de ®,48 g de bissulfato de potássio em 20 ml ds água* Foram adicionados mais éter e àgua, as camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída tr'§'s vsses com étsr. Os extractos e a camada de éter foram combinados, lavados tris vezes cada com ácido clorídrico 3N, com solução de bicarbonato de sódio e com solução saturada ds cloreto de sódio, secos, filtrados e evaporados, originando 0,5-3 g do composto desejado sob a forma de um vidro, [α1η^ -19 °±3 C c = &,32, metanα1)«

Exempl o de H 0 í 0 r'ê π c x a H H ~L (F em i i 1 sík toxi >ca rbon il3-L-fenil ãl ___λ i _u| r di 1 X i Γ*Ι ’L e w* \ — 1 -formil- I eti l 3 --0--2- (2—me tii 1 ore do;·; i j — qlic inamida Um a porção de 1 ,2 g de N~C< f 0Π .11 me to Mi ) ca rbon i 1 D -fsni1 a 1 an á. 1 -0-2-(2- metilpr OpQK i)glici!--N~ me toxi-N-m 0 τ i. X % T £fí é .11"" ^ 1 -ΗΠ in amid foi tra QlTl hidrato de a lumínio e litio em tetra-hidruíurai no, c USIíO ÚSSL rito no Exemplo de Re ferfncia /, oriqinando 0H76 g do composto desejado sob a forma de um vidro, o qual se tornou num SÓlldO amorfo após trituração CDiTt hsxano •o r ... -| iO 0 . __ ri x. /'j „ metanol) "oi aqitadí .íii a ϊϊϊ i s t u r a de 2 g de .namida s 2@ mi de ácido ; ©°C duran 720 & horãS tt £ d U Q 01SOSQ *íox tritura 1M—HíÇ— Luxi-N-iiietiI-t-butoKicar-tri fIuaroacéti cos água (Vs1) 0 solvente foi removido in do com éter = 0 sólido resul— "C-Sin ’C(£* f Dl recolhido, lavado com éJCBr & BBCO 50 õ%f“ 3 lj τ'” x O. X Π ΐΧΠ b 1?7 g do composto desejado sob 3. XOnUB. ói:A um sólido branca

Exemplo de Refergncia t& N-C(Fenilmetoxi)carboniI3-t-fgnilaIanil~Z--L-<2--me ti 1 propox i)g 1 -1 euc i n:amid-a_e; W-C (Fen i 1 me tox i > carbon,i 1 3 ~L~f epAla Imi 2:- "metilpropQxi)gliciI-N-metoKi-M-meti1-L~ A uma solução de 3 g de N-t (f enilmetoxi Jcarbonil 3-L--fenilalanil-D9L-2-C2-s«etiIprapOHÍ)gIicina, 1,73 g de ácida 2-etoxi-l C2H>—quinalinocarhoxí lico, éster etílico». e 7Θ ml de diciarometana, foi adicionada uma solução de 2,©8 g de trifluo-roacetato de N—metoxi—N—meti 1—L—leucinamida e 1,2 ml de tríetil-amina e® 35 ml de diclorometano» Esta aiistura foi agitada durante 17 horas e, em seguida» evaporada» Foi adicionado clorofórmio ao óleo residual e esta solução foi então lavada tras vetes cada com ácido clorídrico 3M, com solução saturada de bicarbonato de sódio e com solução saturada de cloreto ide sódio, em seguida seca,, filtrada e evaporada.» O óleo residual foi colocado numa coluna de gel de sílica 30x2 cm e eluído com acetato de etiloshexano <ía 1) ? recolhendo-se fracções de 25 ml.

As fracçSes 8—1© foram combinadas e evaporadas, originando ©,7è g de N-CífeniImetoxi/csrboni13~L—fenilslsni2-L-2-C2-—metilpropoxiíglicil-N—metoxi-N-metil—L-leucinamida sob a forma de um óleo, Rf=@,éí©§ Lo:3-29°±3 (c = ©,37, metanol)«

As fracçSss 12-17 foram combinadas e evaporadas, originando 1,16 g de M-t (fsnilmetoxi)carbonilj-L-fenilalanil*-D-—2—(2~meti1propoxi)glicil—N—metoxi—N—meti1—L—1eucinamida sob a forma de um óleo, Rf~©,435 [α]ρ~6 -7°±2 (c = Θ,635, metanol). 33

Exemplo dg Kefertgncia 11 M-Γ(FenilmetpKÍ)carboniI3-L—fenilalanil-M-[(S>--1 -f ormi 1 -3.rmeti I buti I 3 -L-2- < 2-meti I propoxi )- gj icinamida

Uma solução de ©, /4 g de H-C í feni 1 metoxi ) carbon.il I! --L--f en i 1 a 1 an i I -L-2— (2—met i 1 propox iíglicil -N-sne tox i-N-sne t i I ~L~ 1 bu-cinamida em 1® ml de éter e 1® ml de tetra-hidrofurano? foi adicionada, gota a gota, a uma mistura agitada de hidrato de alumínio e lítio em 2® ml de éter, com agitação sob uma atmosfera de árqon,, Quando a adição ficou completa, a agitação continuou durante 4 horas, em seguida a mistura foi arrefecida e tratada com uma solução de ®,31 g de bissulfato de potássio em 15 ml de água. A camada aquosa foi separada, extraída com éter e os extractos de éter foram combinados com a camada de éter» A solução de éter foi lavada tr'ês veses cada com ácido clorídrico 3N5 com solução saturada de bicarbonato de sódio e com solução saturada de cloreto de sódio, seca, filtrada s evaporada. 0 vidro resultante foi triturado com hexano, originando ©,28 g do compos— to desejado sob a forma de um solida amarfo branca, Lslr/'“~ -·23°±7 < c = Φ513 3 me tan α1).

Exemplo de Referencia 12

Ur± Ureni 1 jge tox i) car bon, il3-~L~fen i 1 a 1 an i 1 -N- í(S)--· 7Ílí£m3EÍlz^ffietiIMti X.j-D-2-(2-meti 1 propoxi >- glicinamida

Uma porção de 1 = 1& g de N-l C feniImetoxi /carbonilJ--L--fsn i1a1an i1-D-2-< 2-ma fci1ρrcpox i > g i ic i1~N~me tox i ~N~ms t i1-L~1eu™ cinamida foi feita reagir com hidreto de alumínio e litio em 34 -

éter 3 como descrito no Exemplo de Referencia 7? originando Θy 75 q do composto desejado sob a forma de um sélido amorfo com hexano EcíI^" 0° ic - 0 515 metanol)»

Exemplo de Referencia 13 ÍEmlÂlietoxilcarJa^ -2—mstoxiqlicina» éster meti1ico

Uma solução de ®, 4 g de N-C < fenilmetoxi ícarbonil 3-L--fen±lalaniI~D?L~2--hidroKÍglicinas 5Θ ml de metanol e ®s3 ml de ácido sulfúrico concentrado foi agitada durante 2 dias es em seguida? vertida dentro de solução saturada fria de bicarbonato de sódio» A suspensão resultante foi extraída com acetato de stilo» 0 extracto foi seco5 filtrado s evaporado» 0 resíduo foi recristal içado a partir de metanol aquosos originando 0,25 g do composto Desejado^ p=f» 12S-132°C» iiígmplo......de Jfeíerfncia......14

MdLÍEBOiiaatPX i > c ar bon 11 „3 -1 ,rf en 11 a 1 an i 1 -P,L--2-metoxiqlicina

Uma solução de ΘΡ47 g de D»L~2“metoxi--N~i ÍN~E C fenilme-toxi)carbonil3—L—fenilalanilIglicina, éster meti1ico5 em 15 ml de metanol e S,2 ml de hidróxido de sódio IN foi agitada durante 1 horaj em seguida acidificada e evaporada» Adicionou—se é.qua ao resíduo» 0 sólido resultante foi rscristalizado a partir de metanol aquoso? originando ®2 g do composto desejado3 sob a forma de um sólidos p»f» 75-W-C» fejjemqlP·. de......Kefergnçi^JJb M-i: (FgnilmetoKi)carbQnil3~L-fenilalanil~D,Lr. ~2~etoxiq 1 icina* éster etílico

Uma solução de 3,7 g de M-ECfeniImeloxiIcarhonil3~L~ ~fenilalanil~D,L-2~hidroxiglicina s® 5Θ ml de metanol s β,3 ml de ácido sulfúrico concentrado foi agitada durante 18 horas e, em seguida, submetida a refluxo durante 48 horas. A solução transparente foi vertida dentro de solução saturada fria de bicarbonato de sódio e depois extraída três vezes com acetato de etilo. Os extractos foram combinados, lavados com água, secos, filtrados e evaporados. 0 resíduo oleosa solidificou s foi recristalizada a partir de clorofórmio/hexano, originando ís7 g do composto desejado, p.f. 99-110°C \dec.5.

Exemplo......de Referência 16 N-l(Fenilmstoxi)carbonilj-L-fenilalanil-D.L--2-etoKÍqlicina

Uma solução de 1,53 g de N-C<fenilmetoxi)carboni13-L--fenilalanil—D,L-2-etoiíiglicina, éster etílico, 5Θ ml de metanol s 3,5 ml de hidróxido de sódio IN foi agitada de um dia para o outros, em seguida acidificada com ácido clorídrico 6M e evaporada atá se obter ura óleo. Adicionou-se água e a mistura foi agitada até o óleo solidificar. Uma recrisialização a partir de clorafàrmio/hexano originou um grama ao composto desejado, sob a forma de um sólido branco, p.f. Í3B-Í43°C (dec.í.

Exemplo de Referência 1/ N~-.y. Fen 11 me tοχ1) c ar b on 113-L-fen ila 1 anil -P,L-•~Z~± Irmetijefcgxi) g 1 iç i na .L-ÉsterJj^netiJ^tillço

Uma mistura de 3S7 g de f^-E (fenilmetoxilcarbonili-L--fenilaIanil~DsL-2-hidraxiglicinas 50 ml de isopropanol e 0,3 ml de ácido sulfúrico concsntradDs foi agitada à temperatura ambiente durante 17 horas, aquecida num banho de vapor durante 1/2 hora e,= em seguida*, agitada à temperatura ambiente durante 48 horas» Esta mistura foi filtrada e o filtrado evaporado até se obter um óleo que solidificou após lavagem com solução de bicarbonato de sódio e água» Este sólido foi croroatografatío sobre uma coluna de gel de sílica 3Θχ2 or>5 aluindo com acetato de etilouhexano í i s i > s recolhendo frscções de 25 ml» As primeiras duas fracções foram combinadas e evaporadas, originando ®só g do composto desejado» p.f. 103—111 °Cp Ef ~-0 = 87 % lal^* +5°±1 Cc » i?l? metanol)» ÍHmBÍO-de^efM^0£Ía_ll N-E ..(Fenilmetoxi )c a r bon il 3-L-fenilalan.il -D, L --5-< 1.- met iletQKi)a1i c ina

Uma solução de 1,4 g de N—Cífenilmetoxi)carbonilD-L-~fsnilalanil-DgL—2—C1—meti1etoxi)glicina„ éster 1—metileti1ico? 45 nu. de metanol s 3 ml de hidróxido de sódio IN foi agitada durante 2Θ horas» em seguida acidificada com ácido clorídrico 8H e evaporada até se obter um óleo» Adicionou—se água ao resíduo e a mistura foi agitada até um sólido branco se separar» Este sólido foi recristalizado a partir de clorofórmio/hexano, originando ©..7 g do composto desejado, sob a fcírma de um sólido branco, p=f„ 122-128°C (dec»>» fc.Ksmplo de Heferência 19 N-tçraniImetoKi)carbonii 3-L-fenil.alanil-L-2-(,lr -meti 1 etoxi >gl icik=N=JDgt^ -lettcinamida

Uma soluçlo de 1=-37 g de N-metoxi-N-metil-L-leucins-mida, trifluoroacetato, ®,7 ml de trietilamina e 1Θ ml ds dielo-rometana foi adicionada a uma solução ds 1,9 g ds SM-L í fenilme-to;íi)carfaonil j-L-fsnilalariil-DsL-2-< 1-metiletoMi )glicina e 1,14 g de ácido 2-eioKÍ-i <2H)-quinolinQcarboxí].ico, éster etílico, em 25 ml ds diclorometano, Esta mistura foi agitada durante 18 horas e, em seguida, -evaporada, até ss obter unm óleo, 0 óleo em acetato de atilo foi lavado tr?s vezes cada com ácido clorídrico 3N, com solução de bicarbonato de sódio e com solução de cloreto de sódio, seco, filtrado e evaporado, 0 resíduo oleoso foi cromato-grafado sobre uma coluna de gel de sílica 4©>;3 cm, eluindo com acetato de etiloshexano (Isl), recolhendo-se fracçSss ds 5© ml«

As íracçSes 4-6 foram combinadas e evaporadas, originando 0,9 g do composto desejado sob a forma ds um sólido amorfo, Rf=®,5? Εαϋρ'"'·' -45°±2 Cc = 0,645, metanol), EKSjTigla de......Referencia 2Θ

NzIiFmyjPetoKj)çarboni 13-L~f eni lalarti l-N-C (S>- ~ Iríorjail ~2~ f sni 1 st i 1 3-1.-2- < 2-meti 1 propoKi) - glicinamida A 1,2 g ds 1,2 g de M-E C fenilir*etoKÍ >carboniI 3-L~f sni I--a lani 1 -L-2- < 2-met i 1 propox Dglicil -N-meto>í i-H-meti 1 -L-f en i 1 -alaninamida, em 2€? ml da éter, arrefecios até ®°C sob árgon. foram adicionados 8,18 q da hidrata de alumínio s lítio» Após 2Θ minutos adxcionaram-se 8,@9 g da hidrato de alumínio e lítio» Após 15 minutos» adicionou—se acetato de atilo e a mistura foi processada como descrito no Exemplo de Referência 7» 0 vidro resultante foi cristalizada a partir de hexsno contendo urna pequena quantidade de acetato de etilo, originando 8,47 g do composta desejado sota a forma de ura sólido cristalino» p»f» 164---— 165°C» A recristalizaçSo de uma. amostra a. partir de acetato de etilo/hexano originou cristais, p.f» 172-i740C= Ca3--38°±i (c = 8511; metanol)» b-xemplo de Keterãncia 21

Kr C < Fen i 1 rnetox i) carboni 1 3 -L-f anila 1 an i l-N-CC S) --1-formí1-5-ffietilbutilj-t-2-ξl-metiletoxl)-gliÇjjTLãffliáa

Uma solução os @,7 g de N-ECfenilmetoxDcarbonili-L-~f eni 1 alani 1 -L--2-(1 -meti letoxi ) g 1 ici 1 -N-metoxi-N-meti 1 -L-leu-cinamida em 1© ml de éter e 1® ml de tetra—hidrofurano, foi adicionada, gota a gota, a uma mistura agitada de @,6 g ds hidrsto as alumínio e lítio em 2& ml de éter sob uma atmosfera de árgon. A mistura foi agitada durante 4 horas, era seguida a mistura foi arrefecida e tratada com uma solução de @,3i g de hissulfato de potássio era 25 ml de água» As camadas foram separada, a camada aquosa; foi extraída uma; vez com éter e este exiracto combinado cora a camada de éter» A solução de éter foi lavada tr'@s vezes cada com ácido clorídrico 3N, com solução de bicarbonato de sódio e com solução saturada de cloreto de sódio, seca» filtrada e evaporada» 0 vidro resultante foi transiormado numa pasta fluida várias vezes cora hexano e, em seguida, complstamente seco, originando o composto desejado sob a forma de um solido amorfo branco, LaJniCS ~24°±4 íc = @,26» metanol)»

EKemglo ,de,,,.K^erlncia_^2 H~í (Fen i i roetpk i)carboni 13-L-f eni Ia 1 aní 1 --Dj.L~ •:'4:::iLf,R0-Í.l.f;t^P.KÍI.qj:^£Í.0.ãj;_ÉÍ=L^L_fgQÍ^Lg,g„fe.;ll£°·

Uma suspensão de 37 g de MpE (f eni Imetoní) carbonll J-L---•feniIalanil'"D5L-2"hidrQXÍgIicina em 250 ml de álcool benzílico foi tratada com 3 ml de ácido sulfúrico concentrado, aquecida num banho de vapor durante 1,5 horas, diluída com he>;ano e arrefecida. 0 sólido foi recolhido, lavado com éter e recristalizado a partir de acetato de etilo/éter, originando 27,5 g do composto d s se j ad o, p f« 136)— 146) °C =

Evenuglo de Rafsrencia 23 t-i-l (FenilmatoKÍ)carbonil j-t-fenilalanii-D.L--2~ <f eni Iroetox i ) qUc ípa

Uma suspensão de 29,9 g de N-E C fenilinetonDcarbonil 3~L~-”fenilalanil-D,L~2-(fenii/netoxiIglicina, éster fenilmetílico, em 500 ml de metanol, foram adicionados όβ ml de hidróKido de sódio LN, com agitação. A agitação foi continuada durante 1,5 horas, em seguida a mistura foi aquecida até à ebulição para produzir solução, filtrada s o filtrado foi acidificado até pH 1,5 com ácido clorídrico IN, seguido pela adição de água até ao ponto de torvação = A suspensão resultante foi arrefecida e o sólido foi recolhido e seco, originando 22,34 g do composto desejado, p.f. i39~i42c,C„ ^m&ÍQ-^g^Íe.gJ.0£la-2i (-)-M-C (Fenilmetox 1)carboniI 3-L-f aoiIalan 11---ER. Ipm.. S> 3--2-- < fen i 1 metox i ) g 1 ic i l,rN,~metog,i.Htimgti 1 ~L~fen i 1 - alaninapida.e -(fenilroetoxi)qlicil-N-metoxi-N-metil-L-fanilai aninamida A uma suspensão de 12547 g de N-E\fenilmetoHi)carbo~ nil3~L-"feniÍaIanil~D3L-~2-(fer?ilmetoKÍ)glicina em 14Θ ml de dicloromatano foram adicionados 7S4 g de ácido 2-eto*i-ÍC2H>— “quinQlinocarbOKíliCQ5 éster etílico^ A mistura foi agitada durante 5 minutos? em seguida foi adicionada uma solução de 8?7 g de trifluoroacetato de N-metoxi-N-metil-L—fenilalaninamida e 3.82 ml da trietilamina em 5© ml tíe diclorometano e a agitação continuou, de um dia para o outro= Esta solução foi concentrada atá se obter um óleo5 o qual foi dissolvido em 1ΘΘ ml de acetato de etilo-s, lavado com ácido clorídrico 3Ms com solução de bicarbonato de sódio e com salmoura^ seco? filtrado e evaporado,, até se obter um um óleo*

Este ólepp em dois lotesr, foi cromatografsdo por CLPE sobre uma coluna ígsl de sílica) Waters Prep 52© com acetato de etilasdiclorametano (is4) como eluente,, Após se reterem 1® volumes,, o componente menos polar foi eluído com acetato de etilosdiclorometano C1 ã í } „ Estas frscçSes foram concentradas in vácuo e o resíduo foi recristalicado primeiro a partir de diclo-rometano/éter di-isopropílico? em seguida a partir de acetato de etilo/éter di-isopropílico;, originando 4?© g de ( + )-N-Cífenilme-toKi)carbonil3-L-fenilalanil-ER (ou 3)3-2-ífsnilmetoni>glicil~N~ -metosi-N-metil-L-fenilalaninamidas, p=f = 135”14®°C| —17°±©55 <c = ©?12? clorofórmio)= 41

As fracçSes contendo α componente mais polar foram concentradas in vacuo e o resíduo foi recristalicsdo primeiro a partir éter di-isopropi 1 ico/dicioromstano, originando 5=73 g ds <-)~~N-·~Γ.(fenilmetOKi)carbonii3-L-fenilalanil-iR (ou B>3-2-Cfenilm-stoκi)q 1 ici 1 -M-metoκi-!4~metil-L-feni 1 a 1 aninamida = p-, f, 138— '1.39°C p -7.1.

Ca3p"*1' -3©°±1 <c = 1?3855 metanol), amplo de Referencia.....25 (-) -N-C ( Fani Imetoxi) carbon i 1 3 -L-fenilalani l.rP-2- ~ ΐ fenilmgtoxi )ql icí l-W-~metoKÍ--M-mstil-L-— 3, eu.c inanida e (.+ >-M -Li Fen i lme to, κ i ) c a r bon i 1 3 ~L·- f en i I a I ap i l.-D-2r - <fen 11 metoxi) q 1 ic 11 -N-rogtoxiHfc^^ -laucinamida A uma suspensão da 1359 g ds N—C ( f eniImetoxi )carbonil 3-~L-fBnilalanil~D5.L“2—ífsnilmatOKÍ)glicina em h% ml de diclorome-tano foram adicionados 7,4 g de ácido 2-etoxi-í(2H)-quinolinocar-boj{£ 1 ico5 éster etílico, Após- a solução se ter tornado completa,, foi adicionada uma solução de 8,8 g de trifluoroacstato de leucinamida e 4,1 ml de trietilamina em 58 ml de diclorometano» Estai solução foi agitada de um dia para o outro5 depois lavada trts veses cada com porçSes de é® ml tíe ácido clorídrico 2N? de bicarbonato de sédio IN e ds solução de cloreto ds sódio, A cnaraada orgânica foi seca, filtrada através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado lavado com dicloromstano e concentrada in vacuo, originando 16?1 g de um óleo, Este óleo foi cramatografado por CLPE sobre uma coluna (gel de sílica) Waters Prep 520 com acetato de etilondiclorometanD Íis4> como solvente. Foram isolados dois comp-onentes (A & B) a partir dos dois picos principais. As fracçSes contendo o componente A foram combinadas s concentradas in. vacuo, originando um

óleo, o qual foi recrista!isacio a partir de éter, originando 4,46® g de N-E í feni Imetoi-;i >carbonil 3-L-fenilaIanil-L-2-< f enilme~ toKÍ)gliciI--M;“íi3etOKÍ“N-ffletiI~L“Ieucinamidâ3 sob a forma de cristais brancos, p.f, 88-89 C,C? Εα1ρ*~& ~390±i (c = 0,96, meta nol ) =,

As fracçSes contendo o componente B combinadas e o solvente removido in, vácuooriginando 7,1. g de M~E(feniImetoxi>carhonilJ™ “L-fBnilalaniI-D-2-C f enilmetos-íi >gIicil-f^metoxí~N~mstiI-L-lsuci-namitía, sob a forma de um óleo»

Exsrnp 1 o_de ReferÍO,çi,a......26 H-l (Feni 1 mgtoxjL> carbon.i.llpi^fmilMarvilr^?-.C.<5),-"Lríormil-3-metilbutiIj-D-2-(fenilmetpxi)-glicinamida

Uma porç-lo de 8 g de N~C CfeniImetoKi ícarbonil 3™L~ -f en i 1 a 1 an i 1 -D-2- (1 -me t i 1 e tο x i) g 1 ic i 1 -H-me t o x i-M-me til ~L -1 eu.-cinamida foi dissolvida em 5® ml ds éter anidro, A 25 ml desta soluçSo, sob azoto, foram adicionados ®,38 g de hidreto de alumínio e lítio, A mistura foi agitada durante I hora, em seguida temperada com acetato de etilo, tratada com 37 ml de bissulfato de potássio, filtrada através de terra de diatomáceas e lavada com éter«era 25 ml ds água. As soluções ds éter combinadas foram em seguida lavadas trl'5 vezes com ácido clorídrico 3N, duas vesss com bicarbonato ds sódio IN e uma vez com soluçSo de cloreto de sódio, A soluçSo etérea foi seca, filtrada e evaporada. 0 sólido foi cristalizado a partir de éter, originando ®,9 g

r*L do composto desejado? Εα3^~~ +0,5*11 <c = Ι,Θο, metanol).

ExemglQ.de _Hgfgrfnc.ia,_2£ N-E. í Feni 1 metpx i)çarboniI 2-L·r.1mM-§lmÃl=ΪL·LÍMÍΣ. ---1 - formi 1 —3—metiIbutil 3-4.-2--<fenilmatoxi)~ 9lÍ£ÃnãmÀÉÊ, A uma suspensão de 3,3 g de N-C<fenilroetoKÍ)carbonilD--L-fenilalani1-L-2-Íí-metiletoxi)g'iIcil- N-metoxi-M-meti1—L—leu— cinamída em 5® ml de éter, a 3°C, sob azcto5 foram adicionados ®?52 g de hidreto de alumínio e litio. A mistura foi mantida a 0-ó°C es depois de 2® minutos, foram adicionados 0,26 g de hidreto de alumínio e 1 ítio = A mistura foi mantida a. ©°C durante ÍS minutos, em seguida adicionou-se acetato de etilo e diclorame-tano, seguido por tr£s porções de 2@ ml de ácido clorídrico 3N. A camada orgânica foi separada, lavada tr'ê's vezes com porções de 2® ml de bicarbonato de sódio e salmoura, seca, diluída, com acetato de etilo e filtrada através de um leito baixo de gel de sílica de malha. 20®—3©®. 0 gel de sílica, foi lavado com acetato de etilo e a lavagem e filtrado combinadas foram concentrados até á secura in vácuo. O resíduo foi cristalizado a partir de acetato de etilo/éter di-isopropilico, originando i,3o g do composto desejado sob a forma de cristais, p„f„ I34-13/°C§ -44°±i (c - 1,25, metanol).

Exemplo de Kefergncia 29 fcLÍEgnilM®tgx iJcarbon i 1 3 -L- fenilal ,an i 1 tP . L- < çiç 1 o-hex i 1 metox i ) q 1 ic ina, éster ciçlg-hexilcnetilico

Uma mistura de 3® g de N-ECfeniImetoxi>carboniij-L-“fsnilalar!Íi”D5L-2~hidroxigIicína, 1®® g de cicla-hexilmetanol e 2,4 ml de ácido sulfúrico concentrado foi agitada e aquecida a

9#-i0ft°C durante 4 horas» A mistura foi em seguida arrefecida e agitada de um dia para o outro è temperatura ambiente,» Foi adicionado hsxano e o sólido foi recolhido,, lavado com hsxano,, água fria, solução saturada de bicarbonato de sódio s novaments com água» Este sólido foi cromatografado sobre uma coluna de gel de sílica,, eluíndo com diclorocuetanosacstato tis stilo (98s2)= As fracçSes do produto foram combinadas? evaporadas e o resíduo triturado com hsxano,, Por filtração originaram-se 19,1 g do composto desejado sob a forma de cristais brancos, p«f, 122--125°Cs [a]„“ ~8°±í (c = í ,, 14 5 acetona)»

Exemplo de......Refertncia 29

Wzk IFeni I ^gÍ^.Íl£^EbgOÍ12zkzÍMljJ^ã.Lgílj^lzD..a.Lc: z2-ri.cicIozhsxil.ox.i ,)ql icina, . éster £Í^2lZulMiÍ£a

Uma mistura de 3,7 g de N-ECfeniImetoxi)carbonilj-L--fenilalanil-D5L~2-hidroxigIicinag 5@ ml de ciclo-hexanol s & ,3 mi de ácido sulfúrieo concentrado foiaqu.scida num banho de vapor durante 2 horas, em seguida arrefecida ds um dia para α outro» Foi adicionada uma porção tis 50 ml de acetato de etí1o, a mistura foi lavada com solução de bicarbonato de sódio, salmoura e seca» Ã solução foi foi filtrada através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratada e o filtrado foi concentrado in vacuo até se obter um óleo» 0 óleo foi cristalizado a partir de hsxano com arrefecimento e recristalizadoa partir ds metanol, originando 2,2 q do composto desejado sob a forma de cristais brancos» p=f=, 106---118°C =

«tw* ~ fc.Ksmplo de Referãncia όθ H~í <Fenilmeta.^i >carboni13-L-feniIalanil"D,,L- -2-(cic1o-he κ i1g κ i)g1ieina A uma solução de 4,,54 g de N-E CfeniImetoKi >carhonil 3-L-“fenilalanil-D5L~2-<cicla-heKÍloxi)glieina, éster l-ciclo-heKí-lica, em 4Θ ml de metanol quente foram adicionados 9,2 ml de hidréKÍdo de sódio IN = A mistura foi agitada durante 2 horas, em seguida acidificada com 5 ml de ácido clorídrico 2N e diluída com água até ao ponto de turvaçSo. A mistura foi diluída outra ves: com água, agitada, arrefecida e o sólido recolhido» Este sólido foi recristalizado a partir de elarofórmio/hexano, originando 3,28 g do composto desejado, paf„ Íi9~12Í°Cs [al^ -3*C±2 ic = 0,539, metanol)» E,KempIo_de ,..Refe,ren,c,.ia_31 <31~2~í terc-Butox icarfaopi 1) amino-3-f en i 1 --(R,S)-i-(2-tiazolilípropan-l-ol A uma solução de 3,28 g de 2—bromotiasole em 1ΘΘ ml de éter a -78GC, sob árgon, foram adicionados 21,7 ml de n-butil-1ítio em hexano» A mistura foi agitada a -78°C durante 45 minutos, e em seguida foram adicionados é,8 ml de cloreto de trimetilsililo» Esta mistura foi agitada a -78°C durante uma hora, aquecida até -3@°C durante uma hora, em seguida ©°C durante 1/2 hora e mantida a @°C durante uma hora» A reacção foi temperada com 5Θ ml de bicarbonato de sódio saturado a 5Θ% e em seguida diluída com 5Θ ml de éter» A solução de éter foi lavada com 5Θ ml de salmoura, seca, filtrada e evaporada, originando 1Θ581 g de 2--trimetlisiliitiazole sob a forma de um óleo de cor ambar,,

Uma solução de 1®, 55 q ds diclorotasfato de fenilo em 50 ml ds diclorometano foi adicionada., gota a gota* a uma solução ds 17,® g de imidssole em 15# ml de diclorometano. A suspensão resultante foi agitada; sob árgon durante 2Θ minutos, em seguida foram adicionados 13,27 g de N‘~J' - te rc - but íIokíc a r bon i 1 —L— f en i 1 a 1 a— nina em pequenas porções e a agitação continuou durante uma hora» Foi adicionada uma porção de 5,85 g de hidrocIoreto de N,D~dims— ti 1-nidroMÍlamina., a agitação continuou durante 21 horas, em seguida a mistura foi diluída com 1ΘΘ ml de diclorometano s lavada com três porções de 1®® ml de ácido clorídrico IM, 1®® ml de água, duas porções de 1®© ml de solução de bicarbonato de sódio saturada -a 5©% e 1Θ© ml ds salmoura, A mistura foi em seguida seca e evaporada, originando 15,87 g de N-metoxi-M-metii-“il" ‘"t-but-OK icar bon i 1 -L-fen i 1 alan inamida »

Uma suspensão de 2,38 g de hidreto de alumínio e lítia em 3Θ0 ml de éter a Φ°ϋ sob árgon foi preparada e agitada» A esta solução adicionou-se lentaraente uma -solução de 15,5 g ds N-me--ta«i-m;“nistil-Nu-tp-butD;{icarbonil-|_-fsnilalaninaiiiida em 80 ml ds tetra-hidroftirano, Esta mistura foi agitada a ©°C durante 2 horas, em seguida foi adicionada lentamente uma solução de 37 g de bifosfato ds potássio em 2©© ml de água» Quando a adição ficou completa a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3® minutos» A fase orgânica foi separada» A fase aquosa foi extraída com duas porções de 2©® ml de éter» As fases e extractos orgânicos combinados foram lavados com porções de 2Θ0 ml de ácido clorídrico 1M, 2ΘΘ ml de solução ds bicarbonato ds sódio e 2ΦΦ ml de salmoura, secos e evaporados» 0 resíduo foi lavado com éter ds petróleo (30—6€>°C) originando 1 ®, I g de sólido branco» A uma solução de 3,74 g deste sólido em 2@ ml de diclorometano foram adicionados 5,5 g ds 2-trimetilsililtiazole. Após agitação durante 1,5 horas, outra quantidade de 1,57 g de 2-trimetilsilil-tiacole foi adicionada e a agitação continuou durante 20,5 horas»

Uma solução de 2® rol de fluorata de tetrabutilamónio IN em tetra-hidrofurano foi adicionada, a mistura foi agitada durante 1Θ minutos e em seguida os solventes foram evaporados. 0 resídua foi retomado em i®® ml de acetato de etilo, lavado com duas porções ds 50 ml de água, aro seguida 5® ml da salmoura, seca e evaporado, originando 5,83 g do composto desejado sob a forma de uma goma de cor âmbar = Eκemp 1 o.....de ...Referfnç ia 32 < 15,.25)-2-( t-Butoxiçarbpnil)amino-5-fenil- - .1—< 2- t i as o 1 il.I or gpan-1 -o 1, 0- ben z oa to

Uma -porção de 5,6 g de 2-ít-butoKicarbonil)amino-3™ -fenil—CR,S>—i—<2—tiazoli1)propan—l—ol foi dissolvida em 30 ml de éter e tratada sucessivamente coro 2,5 ml de trietilamina e 2,i ml de cloreto de bencoilo. A suspensão resultante foi agitada durante 3 dial e sro seguida filtrada. 0 filtrado foi agitado com 3Θ ml de carbonato de potássio saturado a 50% durante 1/2 hora e em seguida diluído com 3® ml de éter, A fase de éter foi separada, lavada com duas porções de 3® ml de ácido clorídrico ®?5N, 30 rol de solução saturada -da bicarbonato de sódio e salmoura, seca e evaporada. A goma residual foi cromatoçrafada sobre gel de sílica? saba forma de uma solução em dicloromstano, e em seguida eluída com acetato de etiloshexano íisõ). A fracção 1 originou 0,9ó g do diastereómero <1S), ~24°±1 Cc = ®sèé5 clorofór mio) . A fracção 2 está descrita no hKsmpio de Keferfncia 36.

Exemplo de Haferfncia ó5 (lSg2S)-2-AfflinO"3-fgnil-i~(2-tiazoííI) "5£g.ganz.Ízg.l.

A uma. solução de <3,44 g (S)-2-í t—butoxicarbonil)assino--3--fenil“<S)-l-<2-tiasolil )propan-í~ol 5 0-~hsRzaatar, em 1Θ ml da metanol foram adicionados 2 ml ds hidróxido ds sódio 5N. A mistura foi agitada durante 1 hora* em seguida diluída com 5 ml de água e o metanolevaporado. 0 remanescente aquoso foi extraído com 2Θ ml ds acetato de -atilo* 0 extreta orgânico foi lavado com salmoura, seco e evaporado, originando Φ , 37 hg de sólido branco. Uma porção ds @?27 g deste sólido foi dissolvida -em 2 ml de dielorometano, agitada com 0SB ml de ácido trifluoroacético durante 5 horas* em seguida foram adicionados 12 ml de hidróxido de sódio IN saturado com cloreto de sódio* Após agitação durante 15 minutos, a mistura foi extraída com duas porções de 2Θ ml de diclorometa.no* Os extraetos foram combinados, lavados com 5 ml ds hidróxido da sódio IN saturado com cloreto de sódio, e 5 ml da salmoura? secos s evaporados, originando Φ*2 g do composto desejado sob a forma de uma goma incolor*

Exefflglo_de Referância 54 tr.Butoxicarbonil)-L-fenilalanilrL-leucina

Uma solução de 7 ,5 ml de diclorofosfato de difenilo em 50 ml de diclorometano foi adicionada., gota a gota * a uma solução de 17 g de imidasole em 150 ml de diclorometano* A suspensão resultante foi agitada sob àrgon durante 2Θ minutos e em seguida arrefecida num banho de gelo* Uma porção de 9,9 g de L-Ieu.cina, éster mstílico, hidrocioreto* foi adicionada em pequenas porções» Quando a adição ficou, completa, o banho de arrefecimento foi

removido e a mistura agitada à temperatura ambiente durante uma Hera» Uma solução de de 13,27 g de terc-butiloxicarbonil-L-fenil-alanina em 2© ml de diclorometano foi adicionada, a mistura foi agitada durante 15 horas, diluída com 1Θ® ml de diclorometano, lavada com tris porçSes de 1.ΘΘ ml de ácido clorídrico 2N, 1ΘΘ ml da água, duas porções de 10# ml de hidróxido de sódio ®,5N e 1fifí ml de salmoura, seca e evaporada, originando 18,55 g de t;--butiloxicarbonil---L-“fenilalanil-L“leucina? éster metílico,-.

Uma solução de 3,72 g da t-fauti 1 oxicsrfconi 1 -L-feni 1 -alanil-Lr-leucina, éster metilico, em 2Θ ml de metanol foi arrefecida até ©°C, A esta solução foram adicionados, gota a gota, durante 1/2 hora, 12 ml de hidróxido de sódio IN. A mistura foi

agitada a ©°C durante 4 horas, em seguida refrigerada a 5°C durante 14 horas, seguido por agitação a ©°C durante b horas. 0 metanol foi evaporado a pressão reduzida e à temperatura ambiente, s a suspensão aquosa aeicifiçada até pH um, com ácido clorídrico diluído. A suspensão foi extraída com duas porçSes de 4© ml de diclorometano» Os- extractos foram combinados, lavados com salmoura, secos e evaporados. 0 resíduo foi lavado com haxanos, originando 3,48 g do composto desejado.

ExernslQ-de„ Referencia, 55 t ~Bu t o x.i çar bon i 1 -L- f en ila lanil-L-leucil--(18,23)-2-amino-3-feni1-1-ΐ 2-tiazoli1)-BTopan-irPl·

Unia porção de ©,2 g de imití-azole e Θ, 13 g de dicloro— fosfato de fsnilo em 2 ml de diclorometano foi agitada durante 1/2 hora, em seguida arrefecida até -Í5*C= Uma porção de ©,23 q de U~butiloxxcarboniΙ-L—fenilalanil-L—leucina foi adicionada e a mistura foi agitada a ~Í2°C a ~15°C durante 4Θ minutos. Uma solução de ©,12 g de íIS,2S > -2-asino-3~feni X-l-(2~tiacoli 1) pra~-pan~l-~ol em um ml de diclorametano foi lentamente adicionada e a agitação continuou a ~12°C a ~15°C durante 2© horas» Uma porção de 1® mi de ácido clorídrico 1M foi adicionada a -15°C e a mistura foi agitada durante 13 minutos, em seguida extraída com 2© ml de acetato de stilo» A solução orgânica foi lavada com 1© ml de ácido clorídrico ©,5N, duas porçaes de 1© ml de hidróxido de potássio ©,5N e i© ml de salmoura, seca e evaporada originando ©;27 g do composto desejado? -47°±i <c = 1, ©,, cio rafάrm io)»

Exemplo de Referencia o6 iS.IrZ-t-Butgxiçarhonii.j^MnQrS.rfenil-l.Rl·"!::. -(2-tiazo.l il) prgpan-1-p.l,......p-.benzgato A fracç-lo cromatografada 2, a partir do Exemplo de Referância 32, originou 2,76 g do diastereómero desejado? [ajp^ -5S°±1 íc = 1,Θ, clorofórmio)»

Exemplo,,de Referencia 57 L-Bu toxicar hon 1,1 -L-f en i 1 alanil^-leucll:: rllRagS)-2-ami.nQ-.3--f en.il"l" V2-tiazoI i l)-propan—1—ol seco e evaporado» 0 A uma solução de ©, 12 g de t-butoxicarbonil-L-fenilala-n i1—L—1euci1 — (1R,2S)—2—amino—3—feni1-Ί-£ 2—tiazo1i1> propan-1—οI, □“bensoato, em 3© ml de metanol, foram adicionados ©,3 ml de hidróxido de sódio 5N» Esta mistura foi agitada durante uma hora, em seguida diluída com 5 ml de água e o metanol foi evaporado» 0 resíduo aquoso foi extraído com 2® ml de acetato de etilo» 0 sxtracto orgânico foi lavado com salmoura.

sólida foi lavado com hexano, originando ®5lih g do composto 26 desejado sob a forma, de cristais esbranquiçados? i.«3η --35c‘±2 (c = €! 5 42 5 c 1 orofórmio) =

Exemplo de Referfnçia.......38 (S) ~2~Amino~5~f sn il-CR).-!-< 2-tiazo lil) -Bmagir:lzgl3-^feMÍg.Qâto _t r if ,1, uojnoac e tato

Uma mistura de ©,,22 g de (3)-2-( t-butoxicarbonil Jamino™ --3“fenil-(R)-l-<2~tia2olil)propan-l-ol 5 0-benzoato5 e ®s4 ml de ácido trifluoroacético em um ml ds diclorometano foi agitada durante 3 horas* em seguida os produtos voláteis foram removidos in v-acuooriginando Θ=,23 g do composto desejado sob a forma de uma goma.; a qual foi utilizada sem ulterior purificação no Exemplo ds Referência 39»

Exemplo de Referlnçia,39 t.r Bu toxicar tmn il-L-f en i la 1 an iJ~k3leM.cil:: ~ <JEj»2S)r^afllinoc^r f milrr 1 ~1.2-t i azo 1 i 1) propan-l-ol, Q-bsnzoato

Uma mistura de Ô52 g de imidazole e 0,16 g de dicloro-fosfato de fenilo em 3 ml ds diclorometano foi agitada durante í/2 hora5 em seguida arrefecida até -15°C. Uma porção de ®s27 g de t-butiloxicarbonil-L-fenilalanil-L-leucina foi adicionada e a mistura foi agitada a -12°C a -15°C durante Ξ® minutos. Uma porção de €>*23 g de ÍS)-2-amino-3-fenil-(R)-l-(2-t.iazolil)pra~ pan-i-ol* 0-bsnz-oatOr, em ml de diclorometano foi lentamente adicionada e a agitação continuou, a —12°C a -15°C durante 18 horas, A reacçlo foi temperada com 1® ml de ácido clorídrico ®S5W s diluída com 3® ml de acetato de etilo, A solução orgânica foi

lavada com 1.® ml de ácido clorídrico ®55NS duas porções de 15 ml de solução saturada de carbonato de potássio, seca e evaporada, 0 resíduo foi lavado com hexano». em seguida com étershexano (1:3). 0 sólido foi extraído com dentro de ίθ ml de acetato de etilo, filtrado s evaporado» 0 resíduo foi lavado com étershexano (1=5), originando ©,25 g do composto desejado.,. sob a forma de um sólido branco? EuJn~° -ò-5°±2 (c = ôs5455 clorofórmio)»

Exemplo de Referfncia......40 t-Butox icarboni1-L-c iç1o-hexilaiani1

Uma porção de 5,13 mg de L-cicIo—hexilalanina foi dissolvida numa mistura de 6Θ ml de p—dioxano5 30 ml de água e 3© ml de hidróxido de sódio IN» A esta solução.., agitada e arrefecida num banho de gelo» foram adicionados 7,19 g de dicarbonato de ai-t-butilo, Uma suspensão formou—se depois de poucos minutos e a mistura foi agitada a ©°C durante uma hora = em seguida concentrada in vácuo até cerca de 4Θ ml» Uma porção de 15© ml de acetato de etilo foi adicionada e a mistura, foi agitada e arrefecida num banho de geIo5 enquanto o pH foi ajustado a 2 com hidrogenossulfato de potássio» A camada aquosa foi separada s extraída com duas porções de 75 ml de acetato de etilo» A camada orgânica e os extractos foram combinados., lavados com duas porções de 1ΘΘ ml Qe salmoura» secos e evaporados in vácuo» originando 85© g de N^-t-butoxicarbonii-L-ciclo-hexilalanina sob

'~>L a forma de uma goma incolor? -2°±1 Cc = !=,©=, clorofórmio)» A uma solução de 9552 g de imidazole em 8® ml de diclorometano sob árgon, foi adicionada uma solução de 6=,22 g de diclorofosfato de fenloo em 2® ml de diclorometano» Após agitação durante uma hora, a mistura foi arrefecida até ©°C e adicionou-se uma solução de 7?é g de Nw-t-butoxicarbonil-L-ciclo-hexilalanina sm 2® ml de diclorometano durante 1® minutos» Esta mistura foi

agitada durante 1,5 horas a ®°C a 5°C, em seguida foram adicionados 3s28 g de N,Q-dimeiil-hidraKÍlamina, hidrocioreto* Esta mistura foi agitada durante 19 horas a 8°C a 5°C,, em seguida diluída com 1Θ® ml de diclorometano e lavada com 1ΘΘ ml de ácido clorídrico j.N5 8Θ ml de ácido clorídrico ®, 5hi, duas porções de S® ml de solução de carbonato de potássio saturada a 5®% s 8® ml de salmoura. A camada orgânica foi seca e evaporada, originando 8.38 g# de N~msto>;i-N~metil~Nu~t~butoKícarhonil“L~ciclo-h£Xilala·--ninamida sob a forma de uma goma incolorp ~2°±1 (c = 1,8,, clorofórmio)» A uma suspensão de 1,25 g de hidreto de alumínio e litio em 10® ml de éter díetiiico sob árgon, arrefecida a 0*0, adicionou-se uma solução de 7,85 g de N-metoMi-^—metil-N^—t-bu- toxicarbonil-L—ciclo—hexilalaninamida em 2® ml de éter dietilico.

Esta mistura foi agitada a ®°C durante ®,5 horas, em seguida uma solução de 19 g de hidrogenosulfato de potássio em i®0 ml de água foi adicionada muita lentamente. Quando a adição ficou completa,,

a agitação continuou durante ®,5 horas sem arrefecimento. A camada aquosa foi separada e extraída com tr'§s porções de 5® ml de éter dietilico. A camada orgânica e os extractos orgânicos foram combinados, lavados com duas porções de 5Θ ml de ácido clorídrico IN, 5® ml de bicarbonato de sódio saturado, 5® ml de salmoura, secos e o solvente removido in vácuo, originando 6,5 g

A do composto desejado sob a forma de uma goma incolors [a]^1" •H 2°±1 Cc = 1,135, clorofórmio) . .......de_Kgj^rlacia,.^Ll < S> -2-Am iog-3-r c ie 1 ο- he x i 1 - (R) -1 -12-ti.azo 1 i II -prop-an-l-ol, e (S)--2"Afflino--5--ciclo-he.KÍl~ -(-5)-1 — C £-1 i a 2 o 1 i 1)propan—i—oi ft uma solução de «»35 g de i ? i“dimstilatil-<3}“<2~ci~ clo-henil-i-formiletil)carhamato em 15 ml de diclorometano sob árgon5 foram adicionados 5»89 g de 2~fcrimetilsililiia2als com agitação e arrefecimento num banho de gelo-água» A sqIuçIo foi em seguida agitada sob árgon à temperatura ambienta durante 2,5 dias, em seguida arrefecida num banho de gelo e adicionaram-se 38 ml de fluoreto de tetra—n-butilamónio ÍI1 em tetra~hidrafura.no» Após 15 minutos á tempeartura ambiente os produtos voláteis foram removidos in. vacuo» 0 resídua fai partilhada entre 150 ml de acetato de etilo e 5© ml de água» A camada orgânica foi separadas lavada com duas porções de 5© ml de água e 5© ml de salmoura, seca e o solvente removido in vacuo, originando 8,í9 g de goma amarela clara» Uma porção de 7,48 g desta goma foi disso!vidanuma mistura de 2® ml de diclorometano e 8,5 ml de ácido trifluoroacé-tica e agitada durante 2 dias» A mistura foi vertida dentro de 12€i ml hidróKido de sódio IN» A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com duas porções de 75 ml de diclorame-tano. A camada orgânica e os sxiractos foram combinados» lavados com 6© ml de salmoura, secos- e o solvente foi removido in. vacuo» Os 5,69 g de resíduo sólido resultantes foram submetidos a cromatografia "flash” sobre 22© g de gel de sílica (malha 23©-—60Θ)» A eluiçSo com metanol a 4% em acetato de etilo originou, na primeira fracção principal, 2»ò3 g de íS>-2-amino-~3-cicla~ -heKil~(F;)-Í“í2~tiasolí 1)propan— 1— ol sob a forma de um sólido brancos Corj^0 ~18±1 <c = ©,743, metanol)» -S,. A eluiçlo com metanol a 6% em acetato de etilo originou 0,65 g de (S)-2-amino—3-ciclo—heKil-<S)-l-í2-tiazolilípropan-l-ol sob a forma de uma goma incolor»

Exemplo de Refertncia,42 (S) -2-Am inq-4-mg 11.1<R?-1- (2-tiaggl 11) pen tap-lrol 0 2-trimstilsiliItiazole CA» Mediei et al = , Chem» Com» 655 C1981)3 foi preparado como se seguei A um bailo de trfs tubuLadur5S5 de um litro, equipado com dois septos de borracha, termómetro de baixa temperatura (-1ΘΘ°0) e agitador magnético e seco com uma pitola de aquecimento e uma corrente de azoto seco, foram adicionados, por meio da uma seringa, 15® ml de éter dietilico aberto recentemente» Uma porção de 32,8 g de 2-bromo— tiazole foi adicionada seguida por outra porção de ΞΘ ml de éter» A mistura foi arrefecida até -65°C num banho de neve carbónica--isopropanol e foram adicionados muito lentamente 87 ml de n-butil-litio 2,311 em hexano, utilizando uma seringa de 5© ml equipada com uma agulha comprida Mo» 18, enquanto se agitava a se mantinha a temperatura abaixo de -5Θ°0» A solução castanho escura resultante foi agitada a --65°C durante uma hora s em seguida tratada com 25,4 ml de cloreto de trimetilsililo por meio de uma seringa» A mistura foi agitada durante 3Θ minutos de cada vez a —60°C, -30°C e 0°C= A mistura foi lavada com 200 ml de bicarbonato de sódio 0,511, em seguida salmoura, seca, tratada com carvão vegetal, filtrado sobre um leito de silicato de magnésio hidratada s concentrada até se obter um óleo» G óleo foi lenta e cuidadosamente fraccionado sobre uma coluna Vigreux de 1® cm, originando 18 g de 2—trimetilsilil—tiazole sob a forma de um óleo incolor, p„e» 55~è#°C» A uma solução de í.0,8 g de t-butoxicarbonil-L-leucinal em 4Θ ml de diclorometano foram adicionados 9»4 g de 2-trimetil-silil-tiazols em 1© ml de diclorometano. A reacçlo foi deixada a repousar durante 48 horas„ em seguida arrefecida num banho de gelo e tratada cuidadosamsnte com 30 ml de fluoreto de ietra-n---butil amónio 1H em tetra-hidrofurano» Esta mistura foi submetida a refluxo durante 1,5 horas a em seguida concentrada até se obter um óleo» 0 óleo foi dissolvido em 1Θ® mi de acetato de etilo, lavado com 50 ml de cada de ácido cítrico 2N, bicarbonato de sódio 1M s salmoura e seco» A solução foi tratada com carvão activatío, filtrada através de uma almofada, da silicato de magnésio hidratado e concentrada até se obter um óleo» Este óleo foi dissolvido sm 50 ml de acetato de etilo a i@% em diclorometano e cromatografado sobre duas colunas no mesmo solvente» 0 índice de refracção foi monitorizado em S 2®, 250 ml/minuto. 0 pico principal nos ái-10 volumes retidos foi fraccionado em porções de um litro3 as quais foram evaporadas sepsradamente» As tris primeiras destas porções cristalizaram todas e os sólidos foram recrista— lizados a partir de éter isopropílico e hexs.no, oroginando 0,7 g de í S) -2- C t-huloxicarboni 1 > amino-4-meti 1-(8)-1 -· (2-tiazo 1 i I > pen-tan-l-ol sob a forma de cristais, p„f. 121~122°C= A partir dos líquidos mãe das tres primeiras fracções s das tr'ês últimas fracções foram obtidos 5,7 g de (3)--2-(t~hutoxicar honil íamino—4—metil—(R>—1—(2—tiazolil)pentan—1—ol sob a fornia de um óleo» A 5,2 g deste óleo foram adicionados 1ΘΘ ml de ácido clorídrico anidro 2N em acetato de etilo com agitação» Após se agitar durante uma hora a mistura foi diluída com 1ΦΦ ml de hexano, arrefecida num banho de gelo-metanol a -iΘ°C s o sólido foi então recolhido, dando origem a 4,34 g de

(S) -2-am i η o—4—sse t i 1 - í K) - i ~ í 2 -1 i a s o 1 i 1) pen tan - 1 -~α I , hidroclorato, sob a forma de cristaiss p =.· f. I34-Í44°C« A uma solução de 3,5 q deste hidrocloreto em 12 ml de água foram adicionados, gota a gota, 1,8 ml de hidróxido de amónio 15N. Q arrefecimento e a filtração originaram 1,55 g ds sólido. A recristalisaçao a partir ds isopropanol originou o composto desejado sob a fornia de cristais, p.f» 81~S2°Cp C«3n^ ~ 1.2°± 1 <c = 1,0, metanol).

Exemplo de Rsfsrfncia 43 t-Butox icarbon i 1 -L-f en. i la, 1 anil -L-leuc i 1 ---(lR,;5S)-2”aíTjj.no--3--cir ip-hgxil-l-(2--tiaãPlil)~ gjiseHizlzsl

Uma mistura de ã,26 g ds diclorofosfato de fenilo e 0,41 g de imidazole em 5 ml de diclorometano foi agitada, durante 0,5 horas e em seguida arrsfBcida até -15°C» Uma porção de 0,45 g de iÍL"'"t”'butDMÍcarbDni 1-L-fenilalanil—L-leucinafoi adicionada e a mistura agitada durante uma hora. Uma porção de €>,24 g de í 1R,2S>—2—amino—3—ciclo—hexxI-l~-C2—tiazoiil} propan—í—ol em um ml de diclorometano foi adicionada, a mistura foi agitada a -i.5°C durante 3 dias, em seguida diluida com 20 ml de ácido clorídrico 0;,5N e extraída com 40 ml de acetato de estilo. 0 extractofoi lavado com 10 ml de ácido clorídrico 0,5M, trts vezes com 1ϋ ml tíe hidróxido de sódio 0,5M a i€> ml de salmoura, seco s evaporado in vácuo0 resíduo foi submetido a cromatografia uflash!í sobre gel ds sílica, sluindo com acetato de etiloshexano ílsi), originando 0,44 g do composto desejado sob a forma de um sólido branco, íα3~48°±1 (c = l,ó8, metanol). fe.)jem,PlQ dg.....Kefertncia__44 t---ButoKicarbDnil--L-fenllal.5nii.-L~leuci.l-. - C IR, 2S > -2-aminQ-^rffletjJccÍcil2r±iamlM.Lc.

Bentçazlzal

Uma mistura de θ,41 g de imidasols e ®,25 g de dicloro-fosfato de fenilo em 5 ml de diclorometano foi agitada durante 1/2 hora, em seguida arrefecida até -15*0« Uma porção de Θ345 g de b-butiloxicarbonil-L-fenilaianil-L-ieucina foi adicionada s a mistura foi agitada a -15°C durante uma hora. Uma solução de 0;;2Θ g de ÍS>-2-âminD—4-metiI~(R>—1-Í2—tiaeol il) pentan-l-ol em um ml de diclorometano foi lentamente adicionada e a agitação continuou a -12°C a -15*0 durante 2 dias, em seguida diluída com 2Θ ml ds ácido clorídrico Θ?5Ν s extraída com 4Θ ml de acetato de stiio. 0 extracto foi lavado com 1® ml de ácido clorídrico 055IM5 tr'is x 1® ml de hidróxido de potássio ® = 5N1® ml de salmoura, seco e evaporado in vácuo. 0 resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica, eluindo com acetato de etiloshexano <lsl>, originando 0,j4ò g do composto desejado, sob a forma de cristais brancos., La-25°±i Cc = @,S, clorofórmio)»

Exemplo ds Refsrgncia 45 t-Butoxicarboni1-L-feni1a1anil-L-histid11--(ÍR.,2S)-2-amino-4-metil-t-(2-tia£olil ?-pentan-l-ol

Uma mistura de 3,44 g de N^-t-butoxicarbonil-N-imida-cole-tosil-L-histidina, 1,44 g de cianofosfato de distilo s '1,3 ml de trietilamina eeo 5@ ml de diclorometa.no foi agitada s ®°C durante uma hora. Uma porção ds 1,4 g de (S)-2—amino-4—m®ti1--CR}-í~<2~tiazolil)pentan-l-ol foi adicionada e a. agitação

continuou, a @°C durante 2Θ horas, em seguida durante uma hora à temperatura ambiente» A mistura foi diluída com diclDrometano e lavada com bicarbonato de sódio saturado a 5@% = A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano» A fase orgânica e o extracto foram combinados, lavados com água e salmoura, secos s evaporados in vácuo até se obter uma goma,. Esta goma foi dissoi-vida eo 7« ml de metanol e foram adicionados 2,34 g de I-hidroxi-benzotriazois» A mistura foi agitada durante 21 horas e o solvente removido in. vácuo„ 0 resíduo foi dissolvido em acetato de atilo, lavado com hidróxido de sódio IN, salmoura, seco e o solvente removido in vácuo» 0 resíduo foi cramatografado sobre uma coluna de gel de sílica "flash", eluindo com metanol a 5% em acetato destilo, originando 1,33 g N^-t-butoxicarbonil-L-histi-dil-í lR,2S)-2-afflino-4-mstil-l-(2“tiazolil >pentan-l~ol, Ca ~34°±1 (c = ¢7,348, metanol)»

Uma porçlo de 1,1 g do composto anterior foi dissolvida numa mistura de 5 ml de diclorometano e 1,9 ml de ácido trifluo-roacétieo e agitada durante 16 horas» A solução foi tratada com 15 ml de hidróxido de sódio IN, o qual estava saturado de cloreto de sódio e extraída com 3 x 3® ml de diclorometano» Os extractos foram combinados , secos e evaporados in vácuo» 0 resíduo foi triturado com éter-hexano, originando L-histxdiI-CiK,2S>-2-amino~ -4-metil—l-<2-tiazolil)pentan-1—ol, sob a forma de um sólido, α qual foi utilizado no passo seguinte»

Orna mistura de ¢7,65 g de diciorofosfato de fenila e 1,@2 g de imidazole em 20 ml de diclorometano foi agitada durante 1/2 hora, em seguida arrefecida até ô°C e adicionaram-se ¢7,3 g de N^-t-butiloxicarbonil—L-fenilalanina» A mistura foi agitada a ©°C durante uma hora e adicionou-se o L-histidil—<lR,2S>-2~amino~4~ --metil-i-\2-tiazolil >pentan-l-ol iantsriormente preparado) em 5 ml de tetra—hidrofura.no» Esta mistura foi agitada à temperatura

ambiente durante 16 h = θ(ΐΐ :=- equida íj x I u .1 O cl ΟϊΙϊ carbonata potássio aquoso IN ? os produtos volátei .s removidos in vacuo s suspensão : result ante filtrada» 0 precipi tado toi 1 a\ íado com âg seco xn vácuo e em seguida su DÍH0 ΈJ. ú O a c r oma t oq r a f i a l! f 1 a gel O 0 5 x I ica eluindo primeiro com ín^tanc a 5% , em acalab ilo, 0 @01 @ eguxtíâ coiii metanol & 1 %£)% 00} -SC :etato de e tilo» i do p roduto de eluição originou um sói ide? s o qual foi tritu 0 rado com he;·; ano-éter * originando ®?4 g do composto dose: a rorm-s de um bòíiqo ssbrgnquicãOD, lsj ϋ metanol) = ido, sob hKemolo de Referência 46 t— Bu tui-; ii-arbon s. L—L.—T sn a 1 al an a 1 — L.—H i:-· t. i. d i i — < íR.,2Sm) — 2~amino—5—ciclo—hexil— i — (2—tiazoiil )· prαoan-l-ol

Uma. mistura de Θ·,·45 q de diclorofosfato de fenilo e 6,71 q de imidasole em 10 ml de diclaromstana e sab árgon, foi deixada a repousar durante 1/2 hora, em seguida arrefec ,¾ adicionaram-se & = 86 q de Ν' — t—fautiloxicarboni1—N—imidasole- tosil-L-histidi ita« A mistura Toi agi LclLi ·3. d U F wan ts 2. : horas a ®°C ffi seguida adiei onou-se uma solução HáS» Çb 3 4B q i 'r\ β δΠΐίΠΟ *3 tl 1o-bex i1-(R)~1- (2-tiazoli1)propan-1- O1 Sfíi «c. M *5 líi i. do d xo i oroens r.an mistura foi ag ita.da &°C durante 17 horas e SiT: SS£} uida è. tetnp metano foi adicionada n uS um dia» i ima porç ão de 3® ml de dic letra- la e a solução x s v a. o a. com 30 ml de bi carhonato 50%» £-} c amacia aquosa. foi separada O e x t r a x d a cora 2 x 2® ffj l <j@ ^ foram COiTiO i.nados3 secos s o so 1 v en CS® de hex [•ano- éter.·, or •uaniua e ;KtractDí 30 ral de água ---- -i® ml de sa i moura3 0 resíduo foi lavado com 4 X 10 ff; 1 4 g da sólido branco» A 1,2 g do sólido anterior era 3Θ ml de metanol foram adicionados 0,77 g de l-hidroxibenzotriasole. Esta mistura foi agitada durante 2Θ horas, em seguida o solvente foi removido in vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em é>® ml de acetato de etilo, lavado com 3 x 1.Θ ml de hidróxido da sódio IN e 10 ml de salmoura, seco e o solvente removido. 0 resíduo foi submetido a croma-tografia "flash” sobre gel de sílica, eluindo com metanola 5% em acetato de etilo e originou Θ,όΙ g de ig-Buioxicarhoni I-L~histi~ dil —< lR,2S)-2-amino-3—cicia—hexil“l-í2—tiasol.il )propan-l—ol sob a forma de um sólido branco| [a]niJ -55°±2 <c = 0,46, metanol).

Uma porção de 0,48 g do composto anterior em 2 ml de diclorometano e Θ,Β ml de ácido trifluoroacètico foi agitada durante 20 horas, em seguida tratada com 15 ml de hidróxido da sódio íN saturado com cloreto de sódio e extraída com 3 x 30 ml de diclorometano. Os exfcractos foram combinados, secos e evaporados. 0 resíduo foi triturado com éter—hexano, originabndo 0,35 q L—histidil-CIR,2S)-2-amino-3~ciclo-hexil-l~<2“tia2Qlil)propan-i— ol sob a forma de um sólido brancas; —41°±3 <c = 0,288, metanol)=

Uma mistura de 0,13 g de diclorofosfato de fenilo e 0,20 g de imidazols em 4 ml de diclorometano foi agitada durante 1/2 hora, em seguida arrefecida até 0°C e adicionaram-se 0,16 g de N“'-t~buti Icuiicarboni I-L-fsni lalanina. Após se agitar durante uma hora a 0°C a 5°C, adicionou-se uma solução de Θ,28 g L—his-fcidii-í1R,2S)—2-amino—3—ciclo—hexil—i—<2—tiasolil)propan—í—ol em um ml de tetra-hidrofurano. Esta mistura foi agitada durante 1 hora a ®°C a 5°C, em seguida à temperatura ambiente durante 18 horas, diluída com 15 ml de solução de carbonata de potássio in a os produtos voláteis removidos in. vácuo. A suspensão resultante foi filtrada e o sólido lavado com 3 x ΙΦ ml de água, e em seguida seco in vácuo. Este sólido foi triturado com 5 ml de éter e filtrado, originando 0,2 g de sólido branco» Este sólida fai submetido a cromatografia !iflash" sobre gel de sílica aluindo primeiro com metanol a 5% em acetato de etilo, s em seguida com metanol a 1β% em acetato ds etilo, o que originou 25 g de — <t-butoxicarfaon i1—fenilalanil—L-hist idil — (ÍR,2S>—2—amino~3--“CiclO“hexiÍ~Í-(2-tiacolil )propan~l-oI sob a forma os um sólido branco? ~3/°±2 <c = 0;.c=8/? metanol)»

Exemplo de Referfncia 47 N-CNrC (Feni 1 metoxi)carboni 1 j-L-feni 1 aIan.il,-L-2--12-meti 1 propoxi )qlici 1 ]"llR,2S)-2-amlnD"5~ciclo-, hexi 1 -1 - j2-tiazol i,1 > -propan-1 --ol, e í±zLJ±=IÃ Feni1 metgx i ),car boni 1 3rL-teni.Lal.ani 1 ~D~2~ ~(2-meti 1 propoxi ),q 1 ici 1 3-(IR«2S) -2-aminp-3~çi_clo~ hsxi1-1-(2-tiazolill-propan-l-ol A uma solução de ΘΡ19 g de NPW-carbonildi-imidazols em 3 ml de dicloromstano sob àrgon, foram adicionados ã ,51 g de N-C (feni Imeloxi > carhon.il j-L-fenilalani1~DPL~2-(2-meti 1 propoxi >gi~ icina» A solução foi agitada durante uma hora e sm seguida foram adicionados 0,24 g de (S)-2-amino-3-ciclo—hexil-(R>—i-í2-tiaza— lil)propan-l-ol» Após agitação durante um dia = foi adicionada uma solução de @,26 g de N—C(feniImetoxiIcarbonil3-L-fenilaia-nil-'DçL~-2-\2-ms±iIpropoxi )glicina activada com Θ,Ι© g de NsN-car-bonildi—imidasole. Após agitação durante 21 horas esta adição foi repetida» A solução foi agitada de um dia para o outro, em seguida diluída com 4@ ml de acetato de atilo e lavada com 2 s 2Θ liil ds ácido clorídrico 0„5NS 2 x 2Φ ml ds solução de carbonato de potássio saturada a 5«% e 2& ml de salmoura. A camada orgânica foi seca e evaporada in vácuo» 0 resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica, eluintío com acetato de etiloshexano (2s3>, dando então origem a 0,21 g ds

W-LN— í f en i. 1 me tox i) carbon i 13 —L— f en i I aI an i 1 — L—2— C 2—metil prοραx i ) g 1 ~ i c i. 1 3 — ( 1K ? 2S)-2-amino-3-cic1 o— he κ i 1 ” 1 ~ C Z- ” 11 a i lj 111 s pv upan- -l~ol sou a forma de um sólido branco? [ j ^~ -48 U L3° (c = @5,365* metanol) e Θ = 14 q de N-EN-ífenilmeto κ I) c e. r bon i 13 - -L—feni lalani 1—D· "2“í 2—me™ ti. 1 propox i) g I ici I 3- (1R 5 2S) -2-amina-o-cic 1 a-hex i 1 -1 -< 2-1iazo 1 i 1) -

TurUí-3. oropan i ui o o Bólido Drancap i.sjn -19*±3* óòò„ me cano1i E ;< em d 1 o d e Re f e r n c 4«

Im-lm-l (terc-butoxicarhoniI 3-L-proIil·- ; Si ’ JL A · a 1 an i 1 ~L— 1 euc i 1 — C B) —2—ami no—4—met: i*í2 mg dí i. 11) -pen Lan-1 —o 1 Uma mistura de í^.j mg de dicloro Tυ'ζϊ i s. 1.0 de ϊ A. 1· * de imidazola esií ·-> ml d e d icIororos tano foi agitada à tUÍ rs ambxente * SDb P“ gon 5 durante @„5 horas Foi adiciona— -terc-butoxicarbonil-L-prolina mq f mistura í"| ,z\ fv; agitada aurante tí»5 horas» em seguida taram aaicionadas 11o mg de N— í L—f enilalani 1—L—leuci 1)—(S)—2—amino—4—meti 1 — (R) — 1 — < 2—ti ato— 115 pen ta:· s— 1“ •ol e a mistura foi ag itada à temperatura BA η H í ipp j“| Ί" pa lurante 2*5 dias» A mistura foi temperada com 5 ml de ácido > J· ’ηΐ Í ^,UÍ Xl· O ύ t, ' l1\ i e diluída com 15 ml de dicloromstano» A camada =rgSniea fo i separada„ 1avada C Dl 5 ml de ácido clorídr ico Θ 5 5 N 5

5 ml oe hidróxide 3 de sód ΐ r-* Ju w nol foi rsjsov id o =>ϋΟ v a c LiO ee 0 resíduo aquoso foi extraído com acetato de atilo= o extracto orgânico lavado com soluçSo saturada de bicarbonato de através de uma *1mofada lavada j vácuo de modo sódio* seco e filtrado» n filtrado foi passad a i oo T a d a d e si 1icato de (Ba gnèsio hidrat ado a cosi acetato de etilo» 0 f i 1 trado foi eva .porado a obterem—se 6·, 14 g de sólido branco·, 0 sólido foi lavado com hsxano e éter do modo a obter-se o composto sob a forma de um sólida branco, -64° (c = 0,421, metanol>*

Exemplo de Referencia 49 jsf~ (L-fen i la lani 1-L-1 euc i 1) - (S) -2-aminor4rmat.il--CR>—l-(2—tiazolil>pentan-l~ol

Uma solução de ©,28 g -de N-(terc-butoxicarbonil-L-fe-n i1a1ani1 -L~1euc i1)-C S >-2—amino-4-met i1-< R) — 1-(2-1 iasoli1>pentan— -i-ol em um ml de diclorometano e 39 ml de ácido trifluoroacático foi agitada à temperatura ambiente durante 2© horas* A mistura foram adicionados 5 ml de hidróxido de sódio !N e a mistura foi extraída com duas porções de 1Θ mi de diclorometano* 0 extracto foi lavado com solução saturada d cloreto de sódio, seco e o solvente removido* 0 sólido branco residual C®,23 g) foi lavado com hexsno de modo a obter—se o composto sob a forma de um sólido branco *

Enegmlo_áe.._8eJerfncia 5Θ fc:CM"<l^nilffletgxicarbQni 1)-L-<S-beneí! )cisteini 1 -L-í ml la.lani l.rL-1 euc i 1 3- IS >-2-atninp--4--met il -zíg..).rl.-(2-tiazolil )pentan-l-ol

Uma mistura de 39 mg de diclorofosfato de fenilo e 61 mg de imidazole em 2 ml de diclorometano, sob árgon, foi agitada á temperatura ambiente durante ®*5 horas* h mistura arrefecida até ©°C foram adicionados 62 mg de N^-benziloxicarbcj-nil)L-(S-benzi1Icisteina, A mistura foi agitada a ®°C durante @,5 horas e foram adicionados 6® raq de N-CL—fenilalanil-L-leucil)-· — (S)-2~amino-“4~metil-(R)-l — (2— tiazol í I) pen tan— i-ol * Depois de

agitação a @°C durante 2 horas, a mistura foi agitada à tempera- tura ambiente durante 16 horas, A mistura foi processada como descrito relativanmente ao Exemplo de Referência 48» 0 sólido bruto foi lavado com éter de modo a obter-ss 95 mg do composto 26 sob a forma de um sólido branco? Ea3p -51'-'±3 \c = 0,344, metanol)„ imaialg.... de Referência.....51 -1 - h i d r o x i - 4- tne t i 1 pen t i 13 - 2-1 i o f en oc a r bo x am ida

Uma mistura de 0,285 g de ácido 5-C(S)-2-terc-butaκi-c a r bon i 1 am i n o- (R, '3) -1 - h i d r ο x i - 4-me t i 1 pen t i 13 -2-1 i o f en oc a r bo x i I i c o s 0,36 g de N,N—carbonildi-imidazole sm 5 ml de de tetra—hidra-furano foi agitada á tenmperatura ambiente durante uma hora» A solução foram adicionados 0,4 ml de dietilamina destilada seca e a mistura foi agitada de um dia para o outro» O solvente foi removida sob vácuo e o resíduo extraído com acetato de atilo» 0 extracto foi lavado com ácido clorídrico IN, solução saturada de bicarbonato de sódio, solução saturada de cloreto de sódio e seca, 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo purificado sobre placas de gel da sílica, de camada espessa preparativas com hexano—acetato de etilo í4s 1) como solvente de modo a. obterem—se 0,21 g de composto sob a forma de uma goma»

Anál. Calcul» s C, 6Φ,3| H, 8,6? N, 7,0? B, 8,0?

Encontrados C, 6#,0s H, 8,6? N, 6,8? S, 7,7» *> ·

Exemplo de Refsrgncia......02 N „ N--D i e t i 1 -5-- CCS) -2- ben z i 1 ο κ i c a r bon i I ami η o- < K a) --l-hidroxi-4-ffletilpentil3-2~tigf.®n^arbQxaiLida

Uma mistura de 4β mg de ácido 5~C<S)—2-bensiloxicarbo— n i 1 s?sd.no-(R s S) -i -hidrox i-4-me ti 1 pen ti 13 -2-tiof enocarbox i 1 ico e Ν,Ν-carbonildi-imidazole em um ml de de tetra—hidrofurano foi agitada durante uma hora s em seguida foram adicionadas ml de tíietilamina destilada seca» APós agitação de um dia para o outro? a solução fai concentrada sob vácuo» 0 resíduo foi extraído com acetato de etilo e os extractos combinados foram lavados com ácido clorídrico 1NS solução saturada de bicarbonato de sódio» solução saturada de cloreto de sódio e secos» 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo purificado por cromatografia de camada espessa sobre placas de gel de sílica com hexano—acetato de etilo?.acido acético <1x1= Θθθ,15 como -solvente de modo a obterem-se 9% 1 mg de composto? RF 0?51? gel de sílica com solvente hexano-acetato de etilo-àcido acético <is1?0S0®5)»

Exemplo de Referfncia 53 Ácido .5-0 S ? "2-terc-bu tox icarbon i 1 ami no- (R ,.S.) -1 --hidroKi-4-metilpen t í13-2-1iofenocarboxllico

Uma solução de 359 ml de di-isopropilamina destilada seca. em 1© ml de tetra—hidrof urano sob árgon foi arrefecida até ~7©°C e à solução foram adicionadas 11,,81 ml de π-butil-lItia 253ó M em tetra-hidrofurano via seringa» A solução foi agitada durante 2© minutos e em ssguida uma solução de i.,7 g ácida 2-tiofenocarboxí 1 ico em 1€> ml de tetra-hidrof urano foi adicionada (via seringa) = Após agitação -durante 4@ minutos a ~7Θ°0 5 foi adicionada uma solução de 1,5 g de N-terc-butoxicarbonil-leucinal

em 10 ml de tetra—hidrofurano. A mistura foi agitada a ~7®°C durante uma hora s temperada com solução ds cloreto de amónio a i©%» A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e o solvente foi removido sob vácuo» 0 resíduo foi extraído com éter» Os estractos de éter combinados foram lavados com ácido clorídrico iN» solução saturada de bicarbonato tíe sódio e solução saturada de cloreto de sódio e secos» 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo cromatografado sobre uma coluna de gel de sílica com hexano-acetato de etilo-ácido acético (is Is®,©©2) como aluente» As fracçSes contendo o produto foram combinadas e o solvente removido de modo a obterem-se ®,28 g de uma gomas RF ®53ò sobre TLC (gel de sílica) com hexano-acetato de etilo-ácido acético íí=150,002) como solvente»

Exemplo......de Refergncia 54 IS) terç-Butox icarhon iIamino-4-meti1 - < R, S >- -l~(2--furanil) pentan-l-ol A ©,545 ml tíe furano em i® ml de tetra-hidrofurano seco sob árgon arrefecido a -2®°C foram adicionados 3,35 ml de n-bu~ til-lítio 2,3é- M em hexano., A soluçlo foi deixada aquecer até 1®°C e agitada durante 2 horas» A solução foi arrefecida até ~7®°C (neve carbónica-acetona) e foram adicionados 1,7® g de N-tr-butoxiearhonil-L-leucinal em 1® ml de tetra-hidrofurano» Após uma hora a -70°C, foram adicionados 1® ml de cloreto de amónio a 10%» A mistura foi concentrada sob vácuo, diluída com água e extraída com éter» Os extractos de éter combinados foram secos e concentrados» 0 resíduo foi purificado duas vssss por cromatoqra-fia de camada espessa sobre placas de gel de sílica de modo a obterem—se 0,2© g de produto sob a forma d-e uma gomar; RF 0,22 sobre cromatografia de camada fina (gel de -sílica) com hexano--acetato de stilo (4=15 como solvente» hxetnplo.de Referfncia......Sto < 6) -2-terc~ButoK icarbon i I amino—4-meti 1 - (R „ S) --t r < 2-tien i JLLpen tan-l-ol A uma solução de 1,4 g de tiofeno em 2© ml de tetra-“hidrofura.no seco sob árgon arrefecido foram adicionados 7,05 ml de n-butil-lítio 2,36 M em tetra-hidrofarano. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos e em seguida arrefecida até -7®°C (banho de neve carbónica-acetona)» Foi adicionada, via seringa, uma solução de 1,79 q de N-terc-butoκi· carbonil-L-leucinal em 1® ml de tetra-hidrofurano seco. A mistura foi agitada í~á8°C> durante uma hora s temperada com solução de cloreto de amónio a 1®%= Após aquecer até á temperatura ambiente, o solvente ítetra-hidrofurano) foi removido sob vácuo, A mistura aquosa residual foi extraída com éter» Os extrsctos de éter combifsados foram lavados com 5€? ml de ácido clorídrico IN, soluçSo saturada de bicarbonato de sódio, solução saturada de clorato de sódio e secos» 0 solvente foi removido e α resídua cramatografado sobre uma coluna de gel de sílica com hsxano—acetato de etilo (eluição gradiente) como solvente» 0 produto foi aluído com. hesíano—acetato de etilo C4sl), As fracçSes que continham o produto foram combinadas e α solvente removido sob vácuo de modo a obterem-se 1,15 g de uma goma.fi RF 0,34 sobre TLC ígel de si1ica) coro hexano-acetato de etilo (4 st)»

Exemplo da Referencia......56. Ácido......5- II.C.S.) -2~Ben £ i X ox icar bon i 1 amimo- < R» S) - í -hid rox i- -4-sTiStl 1 pen. t i.l ,3 -2-,t iof enoçai^oxíilço A uma solução de 3,74 ml de di-isopropilamina destilada seca em i® ml de tetra-hidrofurano seco a ~7®C’C sob árgon , foram adicionados ii,33 ml de n—butil-lítio 2,36 M em tetra-hidrofurano 5 via uma seringa» Após agitação durante 2® minutos foi adicionada, via seringa, uma solução de i,7t g de ácido 2-tiofenocar-boKilico em i© ml de tetra-hidrofurano seco» A mistura foi agitada a —70°C durante 4© minutos, e em seguida foram adicionadas i,òéò g de M--(henz i 1 oxicarbaní 1) —L-1 eucina 1 em 1Θ ml de tetra-hidrofurano» A mistura foi agitada a -7Θ°C durante uma hora. e temperada cora solução de cloreto de amónio a í®%» A mistura foi deixada aquecer até â temperatura ambiente, e o tetra-hidrofurano foi removido sob vácuo» A mistura aquosa residual foi extraída com éter e os extractos de éter combinados foram lavados com ácida clorídrico IN e solução saturada de cloreto de sódio» 0 extracto foi seco e o solvente foi removido» 0 resíduo foi cromatografado sobre uma coluna, de gel de sílica, com hexano—acetato de etilo Cl si) contendo 0,5% de ácido acético» As fracçSes que continham α produto foram combinadas de modo a obfcersm-ss €5,23 g de cristais, p»f» 113-117°C»

Espectro de Massa <BAR~haixa rss, ) 370 <Μi-H>

Anál« Calcul. para C19H^NS0^s C, 00,5? H, 6,1? N, 3,7? Encontrados C, 60,5§ H, 6,5? N, 4,0» h-xemplo de Referência 5/ N"CN~(terc-butPKicarboniIamino--L~feni|MaoiJ.-L--1 suei 1 3 ~<S) ~2~amino~4---meti 1 - < R.S)-í-<2--f ur s.n i 1) pen tan—1 —q 1

Uma amostra de um mmole de (5)~2~terc~butQMÍcarbonil-amino-~4-nietil“CR?S)~l“í2“-furanil )psntan~í“Dl foi agitada com 5 equivalentes de ácido trif luoroacático áu.r-3.nt& 16 horas» A mistura foi vertida dentro de 6 ml de hidróxido de sódio IN e extraída com diolarometana. O extraeto foi seco e o solvente removido,. 0 CS) ”2-amino“4~ms t i 1 - C R ? S) -1 - C 2-f uran i 1) pen tan- í -o 1 foi utilizado sem purificação e acoplado à terc-butoxicarbonil--L-fenilalanil-L-leucina como previamente descrito» 0 produto foi purificado por cromatografia de coluna sobre gel de sílica Cacetato de etilo-hexano como salvente)ae modo a obter-se um sólido»

Exemplo de Rsfertncia 58 bLNrPietil-N-CNr < terc-butoxicarbon 11 amino-L-fen 1,1 -alanll-L-leuci13"5-lCS)-2-amino-<R»5)-1-hidrpxí--4r-me til pen til 3-2 - tio f en oç arboxamida

Uma amostra de um mmole de M»N-dietil-5-E(S)-2-terc-—butox icarboni1amino— ΐ R 5 S) — 1—bidroxi—4—meti 1pen ti13-2—tiofsnocar-fooxamida foi agitada, com 5 equivalentes de ácido trifluoroacético durante 16 horas» A mistura foi vertida dentro de b ml de hidróxido de sódio IN e extraída com diclorometano» 0 extracto foi seco e a solvente removido» 0 N»N-dia11.1 -5-CCS)-2-ant ino-íE„SS-· 1 -—hidroKÍ-4—meti 1penti 13—2—tiofenocarboxamida bruto foi utilizado sem ser purificado e foi então acoplado com

.na como previ .suíSn ta por c roma toqraf i a sobre de modo a obter- -se um trí— ou uqk x c a rboi % i I. L i sn x 1 al an x I u descrito. 0 ç ÇjSl de SÍIlCc •i“. AI ido u

Iz.?i S5ftíiJ iO L!0 KSf ϊ SΓ* 8js'l.Ií?v M-~CN--( tarc-butoMicarbonilamino-L-f enllalanil; ‘"‘L,"*" 1 i-:U L. X .1 J "*** l w· y ""^"“ν^ίίΐΧΠΟ""*tl X X ***" í it -S ) 1 "*" — (*“? — i~ en i X) psn ir. a n—X —r\ i

Uma amostra de um mmole de (S)-2~terc~butoxicarboniI-s.mxno-4-írie ti 1 - < R, S) -1 -· (2-tien i 1) penfcan—1 -ο I foi aq.it a d a com 5 equivalentes de ácido trifluoroacético durante 24 horas. A mistura, foi vertida dentro de 6 ml de hidróxido de sódio IN e extraída com diclorometano. 0 extrscto foi seco e o solvente removido. 0 (S) —2— a. m i π o - 4 ~ m e i x 1 — (R „ S) — 1 — (2—tieni 1) pen t-an-Ί —o 1 bruto foi utilizado sem purificação e acoplado com terc-butoxi-carbonil—L—fenilal-an.il—L“lsucina como -previ amante descrito. 0

pÍ*"'wOi.ltC) ΟΓ*υΊΐΐ_ΐ f JX puri f xi_ado por L·. 'í uiiiatui^rsf na SDDrB L|tSÍ 1 tA w sílica í ac e ta to de et i 1 o· -hexano com solvente*) de foodo -a obter-- ‘S ► li. i"Kgmplo de Referencia 6Θ (-S) -2—Afflino—4—me t i 1 — (R ? — 1 — (1 -ene ti 1 - pLrfT são de 153 2 y hex ano) sm í && a. Isn taoento a O l s ©ffl 10-0 flfcl os qn ta9 2o cal dS iodeto as metiu f-i uma auicionaciQs, goua a gata5 de nxdretu iis sódio (ó©% -em esta solução foram du.y~.sn t©

horas =, A mistura foi agitada a ®°C durante uma hora e, em seguida, submetida a refluxo durante 15 minutos» A solução foi concen- •So reduzida até qi LÂfcr O íist' ura foi di I u i d Θ. com iodeto de sódio começou a H ICiOrCMBí Solido r f i 11. rad o. 0 f i 11 rada fui seca sobre c ri vos passado através de uf Γίβ a i. mo T ada τιπώ de s hidratada» 0 sol V | f S f οχ removido sob vácuo

Inn ml Hp rarf.a ttm Hp pter í=> 0 si dual foi triturado com didorometa.no Ciuã ml) e moleculares (3A) e α de 1—meti1—1 ao oe moa o a. obterem-se p.f. 18-2ô°C = A uma soIlcc-Sío d^f 5 ? -5 g de 1· íiitó ml 1,2, e tris: ml de te tra—hidrofurana sob azoto a — / d "=L· foram ad i) seringa 25 ?ó mi de fi buti1—1ítio» A so 1 u.ç 8o foi an te 1»5 naras a ~/Í3vC s ;í em seguida. foram a.dicxo nado- 3uí» a,-;-’ g de N—terc—butoxicarbonil—L—leucinal em 25 ml de tetra.—hitirofurano a **f2“ - /O - L-» H fil is tu ra foi ay X tad a H uran etc 1/2 h ora ae ca.d a v sz a —'75 í:=C e a -2: ;t Of; C· mi s-tur a foi trai bad a com 10 ml de so 1 u l~ di *_· turada de c lore to da amõn IO o c ncer _ i___ í t. j ada» U rm pídua SiTi 1 00 ml de aceta to Q0 s t i lo fo x la vad o c Í0 ml ÚB cada um de á qua 5 ac ido l_ !L trica 2N» O icar ato do 300 xo ín .-i s a 1moura e seco» A SO lu .çâo ai foi filtrada e concentrada de modo a ofatere- íou pai a partir de acetato de iso— propilo de modo a. produziram 1,85 q de (S)-2—(terc-bu toxicar bonil lamino·· _ -triazol-5-il)pentan-i-ol 5 p,f» 144-145°C, Ls j-2.6°±1 <c = 1,1 metanol). oleo mcoior que cristã.1 1 ^ cromatogra metano C2s As traceSe til-<R)-l-{l- ^ 1 — 1H-1,2,· 45 °C, [«3n20 —26 °± í ,e combinados (5,4' 7 g) f í iffl acetato de —dic1o r ;ada sobre gel de sílica = ) como solvente sobre um instrumento Wai í contendo o diastsreómera menos ooisr .ers- Ff bd 5©@ B combinadas rorasõ

e cristalizadas a partir de éter/hexano de modo a obterem—se Θ,67 q <7% de rendimento) de (5)-5-(terc-butoxicarbonillamino--4—meti1-(5)-1-(1-matil-iH-l2,4-trlazol-5-i1)pentan-i-ol, sob a forma de cristais, p»f = 1 í4-1 tè°Cs Lα3T~~~ -38*±1 (c = 1,2, metanol)= A uma suspensão de 2,34 g de (-5)-2-( terç-butoxicarbo-nil)araino-4”metil~(R)~l-metil-ÍH-lf. 2 , 4-triazol-5—i1)pentan-i—ol em 3,5 ml de acetato de etilo foram adicionados 25 ml de cloreto de hidrogénio anidro 2N em acetato de etilo» A solução foi agitada durante uma hora à temperatura ambiente e o solvente removida sob vácuo» 0 resíduo fax dissolvido em 3 ml de água e adicionou-se um ml de hidróxido de amónio concentrado» A mistura foi extraída com três porções de 12 ml de dicloromstano» 0 extrscto foi seco e o solvente removido sob vácuo de modo a obterem-se 1,75 g da produto sob a forma de um óleo»

Exeffl,B.lP-de ...Reíe!ltQ£Ía......fel N—EI4-( Benziloxicarbonil)-L—feni lalani 1—L--l.euc.il 3-(5) i.~o 1 A uma suspensão de 1,13 q de N-bensilaxicarbanil—L-—fenilalanil—L—leucina em 3 ml de riiclorometano foram adicionados ®,39 ml de tristilamina seguida por 1,2Í g de benzotriszoliloMi-tris(dimstilamino) fosfónio— hexaf luorofosfato» A esta solução foram adicionados β»52 g de (SJ-2~amina-4-mstil-<R)-l-íí-metil--íH-l,2,4-triazol~5—xl)pentan-i-ol» Após agitação durante 3 horas α solvente foi removido so vácuo» 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, e lavado com ácido clorídrico IN, bicarbonato de sódio 1M e com salmoura» A concentração da solução de acetato de etilo sob vácuo deu origem a 1,36 g de um óleo que foi

cromalografado sobre cinco placas de gel da sílica da camada fina preparativas de 2Θη2Θη#52 cm5 desenvolvido em acetato de etilos s eluído com metanol » A concentração e filtração através de si li ca.-·· "7 A. to de magnésio hidratado originou €>, 26 g de u.m vidro § ZalTt*"~' ~7‘:i±l (c - 1,0= metanol)» faxemplg de Referencia 62 j&r£.Mr (Jen,2ilo?d£a^gnjJJ^ .1 3-;< S )-2r^ninp-4-meti 1 -íR)-I-l~metil--iH~l,2,4rtriazol-5-il?pentan-l-ol e hS-CN"?BenziloKicarbonil )-L-fenilalanil-D-2-(2- dSiM] .RLSE2MÂ. J:riS,)z:gziãlBÍ.P^^ -(i-metii-lH-1,2,4--triaaol-5-il )pentan-l-ol A uma suspensão agitada de Í?Í3 g de N-henziloxicar-bonil~L“-fenilalanil-<DgL)-2-í2-metilpropoKÍ)glicina em 6 ml de diclorometano foram adicionadas 0»78 ml de trietilamina e 2542 g d e ben z o t r i a z o 1 1 - i 1 o x i t r i s C d i me t i 1 am i η o) f os f ón i o™ he κ a f 1 uo r o f os-fato» Após 3 minutos5 foram adicionados 1 »©4 g de <S)-2-a{nina-4--metil-CR)-i~í1-metiI-lH-l32?4-triazol—5-il>pentan-l-ol em 6 ml de diclorometano» Após agitação de ura dia para o outro., a solução foi submetida a refluxo durante 3Θ minutos e concentrada» 0 resíduo, dissolvido era 3Θ ml de acetato de etilo5 foi lavado cora 25 ml de cada um de ácido clorídrico 1N,, bicarbonato de sódio 1M e salmoura» A camada orgânica foi seca e concentrada de modo a obterem—se 4 g de uma mistura oleosa de diastereómeros» A cromatografia liquida preparativa de pressão elevada sobrei gel de sílica com hexano—acetato de eiilo 4si deu origem a uraa fracção menos polar, Φ?66 q, p.f» 7@-74°C, lcíj^'° -34':'±1

Cc = 1?2=, metanol) a qual foi identificada como ο

N~CN~’(ben2iloxicârbonii }™L™f enilalanil~L-“2-*<2—ffletilpropoKi)gli' f- · 1 'UfC \ t- ,ί. Λ -5 \ w* .-· A.

Sm Í Π D 4“';ξΊ-~ε L 3.1 ~ \ K ) — I ~'( 1—RIS t 1 •1jíl >< 4 u Γ” i s i u I “5“" j pentan-i-ol„ ρο1s. ϊ $ ©»7 g 5 p = f» 1-50-1 f “L J! i Ui IlifeM 11 i f i c ad 0 c orno N-EW- CBen- 26 [. c,i .1 v, —4vrEi ic U i-Bómera isais i 5 metano; ziloxicsrbonil)-L-fenilalanil-D~2~(2—metiIpropoxi)§1iciIJ-CS)~2 -amino~4-meti1 — (R) — i — <i —meti1—í H~1

Exemplo de Refersncia 63 N— lN— CBanzi 1oxiçarboniI) —ϊ„—fsni 1 a 1 ani 1 --L—2—(2— ~: irr- L.X X jJT iJptJ .···. _t ) Cf X X C X 1 J ( Π- -1-P·pj Õ t ΒΠΙί ( T\ .1 ~<2~tiazolil? prooan-l-Ql e 1m- £ )m í uen c 'l i ox x c ar doo jl i * l. tsh x jl a i am x 1 1/ t C p "meti 1 ΰΓθρο>· i > q 1 ic i 11 — (S) —2—amlno—5—fsn i 1 — (R > —1 -<2—tiacolil)propan—1—ol

Ui»a sdIuçíso de ©? 51 g de N-ben ώ 11 oxicarboni 1—L-· ϊ .11 alani I~< D5 L)-2-(2-met i1propo χχ Iglicina em -y m 1 d e d i cloro metano foi a W £ r” • W «Λ» w ionada a uma SO1 LiÇ -Mo prOpar a.Q-5. O0 2ò y Ossf OÍl 1 uΓu i fato de? f en i 10 e © 5 4© q de i dacole em 4 ml diclorometarno (como dsscr ~ 4-S. LU no bxamplo de Ref Z3’f ância 39)» Pi esta solução T Of HÍU adicionados ®?24 g de < S) —v—amino—f eni 1 — (R) ~i — (2~t.iacol i 1) pro— pan-l-ol e a mistura foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente. A esta mistura, foram adicionados 2® ml de ácido clorídrico @55N e 30 ml de acetato de etilo» A camada orgânica foi separada e lavada com 15 ml de ácido clorídrico Θ?5Ν3 3® ml de to de potássio satarado írf 1-w If? 1 LI w ír-a. 1 íTlOLlr'" a a Pi camada rs ·?/-> ·? W. i \mi ~L soca q 0 so1veri cs removido do modo a 0 h t e r e m—s e 1g®4 g de sólido» Este sólido foi cromatografado por cromatogra-fia "flash15 sobre gel de sílica (malha 23©-4©©> com acetato de etilo-hexano <1s1> como solvente de modo a obterem-se 0*28 q do

isómero L,L (primeira fracção)s -23°±í <c = í,@4, cloro- *7^ farraio) e 0.1© g da isómero L5D (segunda fracçãoís [a]-'"’" —43°±2 (c = 0,57, clorofórmio)

Exemplo de Referência „64 M-CN- (Ben z i !o>; icarbon i 1) --1..-f en ilaian iI -L.--2-- (2--metil propQxi,) ο I ic il ,,3,- (S > -2-amino-5-f enil - (R )-í--(S-tiasolil)propan—í—ol A uma suspensão agitada de ©, 18 g N-t(fenilmetoxi>car-b-on 113 -L- f en i 1 a. 1 an i 1 —N- C < S > -1 - f orj» i1-2-f en i1e t i X 3 —L-2- (2—me t i 1 -propoxi>glicinamida (Exemplo de Referência 2©> em 0,5 ml de diclorometano taram adicionados 51 mg 2~trimetilsiliItiazole em Θ55 ml de diclorometa.no, Após 3 horas a suspensão leitosa foi diluída com 2 ml de dicIarometano e agitada de ura dia para. o outro. A mistura foi submetida a refluxo durante 15 minutos e em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi adicionado fluoreto da tetra~-n~hutil-amónio <0,5 ml de solução 2,5 M em tetra-hidro-furano) s a solução foi submetida a refluxo durante 1,5 horas. A solução foi concentrada e o resíduo em 5 ml de acetato de etilo foi lavado cora 5 ml de cada um de ácido cítrico 2N, bicarbonato de sódio lli e salmoura. A solução foi seca, filtrada através de silicato de magnésio hidratado e concentrada de modo a obterem-se 0,13 g de uma goma. Esta goma foi cromatografada sobre três placas de gel de sílica preparativas de 20x20x0,2 cm com hexano-—-acetato de etilo Clsl) para desenvolvimento e acetato deetilo para sluição. A evaporação do solvente de eluição (acetato de etilo) originou 25 mg do produto sob a forma de uma goma, a qual ara idêntica ao isómero L,L do Exemplo de Reerência 63 (espectro de rmp). A comparação por cromatografia de camada fina sobre gel de sílica com acetato de etilo-hexano Clsl) mostrou RF's idênticos .

h-Memplo dg Kefergncla òb M-CM~(BenziIox icarfaoniI)-L-feni1a i an i1-L-2-(c iclo--hsx i ,Ι,ΟΜ i) q I ici 1 3~ (S) -2-amino-4-niet il-—(2—tiazolil )&entanr^-ol_e H~í N- C Ben z i 1 ox icar faon i 1) -L-f en i1a1ani1-D-2-, .< c iclo- -· (2-tiazo 1 i 1 )pen tanzi-oi. A uma suspensão agitada de 2?3 g de N-faenziloxicarbo-nxl-^fenilãlanil~CE>5L>-2~Cciclo-hexilo;<i>glielna sm 6 mi de dicloromeiano foram adicionados Θ?71 mi de trietilamina = A esta solução foram adicionados 0,= 7:1 ml de benzotriazol-i-iloxitris-ídimetilamino)fosfónio—hexafluorofosfato* seguido 2 minutos ma.is tarde pela adição de um g de CS)~2~ansinO“4-ffletil-CR>-l~<2-tiazo“ 1il)pentan-i-ol.

Após agitação de um dia para o outro,, a solução foi submetida a refluxo durante uma hora e concentrada sob vácuo = 0 -54°±1 resíduo? dissolvido em ml de acetato de etilo e lavado sucessivamente com ácido clorídrico 1N=, bicarbonato de sódio íli e salmoura» A solução incolor foi seca,, filtrada através tíe uma almofada fina ds silicato de magnésio hidratado e concentrada até se obter um óleo \ 455 g) ,= 0 óleo anterior em 3® ml ds hexa.no— -acetato de etilo <lsl> foi filtrado e crornatografado5 com solvente acetato de etilo—hexano í1s 1) sobre duas colunas de gel de sílica prep 5ΘΘ em série a pressão elevada» Os volumes retidas 4-7 (íracção A) e 7-12 Cfracção B> continham os redutos* As soluções foram concentradas separadamente de «todo a obterem—se? a partir da fraeção A? LI g de N-EN~íbenziloxicarbonil>-L-feniI-a 1 ani 1 -L-2- í cic 1 o-hexi loxí ) g 1 ici 1 ]-CS> -2~amino—4-íiieti 1 ~ CR) ~1 -í 2--tiazolil)pentan-l-ol sob a forma de um vidros [a] ío

íc = 1. ? 3 3 metanol) = RF €»5á9 sobre placas de gel de sílica com solvente acetato de etilo-hexano íIs i > = A concentração da fracçla B, originou 13Í1 g de N“CN~ - ( ben z i 1 ο x i c a. rbon i 1) — L~ f sn i 1 a 1 an i 1 ~ D~2~ C c i c 1 o- he x i 1 ο κ i ) g I i c i ·-1 3-ÍS)-2-aminio-4-ffletil-<R)~i-í2“tiazalil)pentan-i-ol sob a forma de um vidros Cu3r,' *" -3c'ií (c = 1545 metanol>| Kh Θ.519 sobre placas de gel de sílica com solvente acetato de etilo-hexano (lsi>,

Exemplo de Referencia 66 N^tN^ÍBengi 1 ox içar bon i 1.)-L.-f WiΛMMlL·L·Lz2zLL·^Málz.

SjPXi,.> aliJP j- 1.3-CS) ~2çaminoz4ç^nlzl,R>,zl-(2-tia z g 1 i.l .)pen tap- Iça 1 e N»·. II.IM- (Ben z i 1 ox icar bon í I) -L-f en ila 1 an i 1-D--2- C1 -meti 1 -etoKi) gl ici 11 -jS) ^.T^jJlP-4-^neti 1 - (R) -1 - A uma suspensão de 1,7 g de N—beneiloxicarbonil—L— -fenilalanil“<DjL)-2-í l-metiletoxilglicina sm 4 ml de diclo-rometano foram adicionados &,,5ó ml de trietilaminan À solução resultante foram adicionados Θ?7í ml de faencatriasol-I-iloxitris-Cdimetilamino)fosfónio-hexafluorofosfato» seguido 2 minutos maís tarde pela adição de u,8 g de < S) ---2--a mino-#-· meti 1 R) --1 - (2-ti.a-Edil>pentan-i—ol em um ml de dicloromstano» A reacção foi agitada de um dia para o outro„ foi submetida a refluxo durante 3® minutos e diluída com 5Θ ml de acetato de etilo» Após lavagem com 1Θ ml de cada um de ácido clorídrico IN=, bicarbonato de sódio 1M s salmoura, esta solução foi seca e filtrada com carvão vegetal através de uma almofada fina de silicato de .magnésio hidratado» Q filtrado foi concsntradosob vácuo de modo a obter-se 2,5 g de umagoma, A cromatografia liquida de pressão elevada

(duas colunas do çjel de sílica, prep 5©©) em acetato de etilo--hsxano C i s 1 > originou dois picos- bem separados- Cdetecçao do índice de refacção)= A concentração dos volumes retidos 6-9 CfracçSo A) originou 0^79 g de N-EN-(benziloκicarbQnil)-L·-f^nil-'-alanil—L—2~( í—metiletoxi)qlicil 3 —íS>-2-amino—4—metil-(R> ~í — í2— -tiazolí 1 >pentan-i-ol sob a forma de uma -espuma vítrea§ O A _ -Sé;°± 1 (c - 1=5.-, metanol) s RF ©?32 sobre placas de gel de sílica com acetato de etilo-hexano Clsl) como solvente» A concentração do volume retido 12--Í5 (fracçao B) , originou um sólido que foi recristalizado a partir de acetato de etilo de modo a obterem-se ©83 g de N-EH-(benziloxicarhoniI ) - -L-fenilalanil-D-2--< l-metilstoxi}gliciIj~CS)~2~aminD~4—metil-CR)-

’”JA -l-(2“tiazQlil) pentan-i-ol sob a forma de cristais^ Εα3Ώ’-·“ -8°±2 íc = ©555 metanol)? RF ®52© sobre placas de gel de sílica com acetato de etilo-hexano < 1 a 1 > como solvente»

Exemplo de Referencia 67 j±::kj±i£iFgni.lflietpxi )carbonil 3-L^fenilalanil--L-vali13-(SIrgramino-4-ffleti1)-< R)-1--(2-tiazolil)pentan—1-ol A uma mistura de © ? 42 g de N-t (f snilinstoxi) carboni 13~ -L~fenilaIanil-L-valina e ©,,15 ml de trietilamina em 2 ml de diclorometano foram adicionados ©347 g de benzotriazol-i-iloxi-trisCtíimetilamino) f osf énio-hexaf luorofosfaton Após 2 minutos,, foram adicionados © =, 2© g de (S) -2 ~a m i η o - 4 -m e t i 1 ~ C R > - i ~ < 2 -1 i s z o -lil)pentan—1—ol» Esta mistura foi agitada de um dia para o outro» em seguida concentrada i_n vácuo até á secura» 0 resíduo foi dissolvido em 4© ml de acetato de etilo e lavado duas vezes com 5 ml de cada um de ácido clorídrico 1M? bicarbonato de sódio Ir! e solução saturada de cloreto de sódio» A camada orgânica foi seca

foi disso1 vido V0*S de uma amof "ide. e o solvente removido in vácuo- 0 residi acetato de isopropilo quente e filtrado através de uma fina de silicato de magnésio hidratado- A almofada foi lavada com 05 1ΐαuidos de lavaoem foram cstato de isopropi 1 ο β U filtrado ambinados- arrefec x d 03 S o sólida omposto desejado sob a forma «Jq ’*· lc 1 ·., 082 5 metanol> : ;< em PlO d a* He i e S~ 'θΊ *ι_Χ p- f - Itíl-lh>;ξ

ÁS hí—Cri—£ (Fsn i 1 me to x i) carbon i 1 3—L-triptof.il·

-L-1 sue i 1 3 ~ < S ) —2~am ino- - < 2— tiasolil } pentan- A uma mistura de 0,47 π rl=i N~ í i1-L-1eucina e 15 ml ds tris fc .11 i ano foram adie ionados 0 ii7 π V Π i · UI -Lí B dic 1 orofiiKcaiítj torain soicaonacDS g as aenzair tris C dimeti 1 amino) f osf ónio—hexaf 1 uorof osfato ,.· Após agiisçMo durante 2 minutos- foram adicionados &P2 g de (B)-2-amino~4~iTíe-til — CR) — í — (2—tiazolil)pentan—1— ol e €>35 ml de diclorometano» Esta nustura tdx agixada ds um dx-a para o outro-, s® seguida submetida a refluxo durante 0,5 horas e concentrada in vácuo até a secura» Q resíduo foi dissolvido em 20 ml ds acs 1 avai Oiti i o ml ds cada um de ácido clorídrico 1NS bicarbonato de sód .1 o |V] g 25 Ο X UÇ w. O 25 «R fU. ΓδΟδ de cloreto ds sódio., A camada orgâni· ca foi seca e passada através de usa amofada fina de silicato de magná— • ÍD ' hiaratado* A a.i ?tio fada foi lavada com acs*ca*CD ds s tilo o filtrado s us líquidos de lavaoem combinados foram concentrados xn vácuo» u resíduo tqi partir ; eter isopropi-lico—acetato de isopropilo,, originando S52 g do composto desejado sob a forma ds cristais, puf* j.62~Í65°Cs [a3 -38°±í (c = 1,,Θ24,, metanol)-

Exemplo de Referência è¥ N'~~CN—[ (Fenilmetoxiicarfaonil3—L—fen 11 a 1 anil--L-snetionil j"í5)~2-aminG-4~mstiI —(2-tiasolil) pentan— 1 —o 1 -L-fenilalani I-L-snetionina e Θ,15 ml tnsti l bsú i n a os A 7 1 q r ame t an ο τ o ram ad i c x on ad as 04 / q d e ben z a t. r x a z a 1 — i - x 1 a κ x r. r .1 s (ú i. ff; 0 i x I anui rj ) Tos f ón xo—hexax 1 u-oouTíj^t ato -_· fipás sq i. ta.w&.o durante um minuto» foram adicionados 0,2 q de <S>-2“afflina—4-me- I 5 1 -315' aoitaos. oe um ‘C. X l K / sn muros e concent.ra.aa xn vscuq* de aceta ita ds etilo e lavada can b x c a. r bon a t u ds õb i. filtrado anco ls'l, da tr.ci‘„o de etxlo e o Q resíduo foi dissolvido em i O. 1 ! .'q m i ml ds LSua Um ds ã eido ciarí- solução sstu rada de cloreto ida através de uma asno τ ad a f x n a A aImofada foi lavada com QS líquidos d te? lavsgesj forasn um Ô1SD» ir.sniQ óleo foi cristã— 11. i ad o a partxr de s r.s r isopropilico—acetstu de xsopropilo, originando © ,35 ç do composto desejado sob a forma de cristais, p«f* 145—15®0Ct [a]„J_u — 3I°±1 (c = 1,®24, metanol).

Exemplo de Refergncia /©

M—CM- (terc-bu tox 1 c&.rboni 1 3 —L -metioni13~ (S> —2—amino—4—meti1) — (K) — 1 -<2—tiaso1i i ) pentan—1—ol A uma mistura de ~L - f en x 1 a 1 a η i 1 ] -L -me t i onin-η· ml de d x c 1 o r om e t an o

g ds N—EM—< terc—butoxl ©,29 ml de trietilamina rbuí ix 1 j — seca eis Lí'r as dlfXL i.U{ í tóU 3

QS

hsnzotriazol--l--iloxitrisCdimetilamino) fosfánio-hexatluorofosfato e 2 ml de diclorometano. Após agitação durante 2 minutos, foram adicionados Θ5ώ g de ÍS)—2—amino-4—raetil-{R)—í— <2—tiazolil)psn~ tan~l”ol em 2 ml de diclorometano. Esta. mistura foi agitada de um dia para o outro, em seguida concentrada in vacuo a tá â secura,. Ao resíduo foram adicionados 20 ml de acetato de etilo-. Esta solução foi lavada com 5 ml de cada um ds ácido clorídrico IN, bicarbonato de sódio 1M e solução saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca e evaporada. 0 resíduo foi dissolvida em diclorometano? filtrado através de uma amofada de silicato de magnésio hidratado e lavado com diclorometano. 0 filtrado a os líquidos de lavagem foram combinados, concentrados in. vacuo e o resíduo cristalizada a partir de 1Θ ml de éter isopropílico e 10 ml de acetato ds Isopropilo, originando 1,βν g do composto desejado sob a forma de cristais, p.f, 170--175°C = --ÍS°±1 (c = Θ,,87S, metanol).

Exemplo de Referencia 71 (S) .-2.rftmin.P-.3-c í c lor.hexx.1 -CR) -1- Ç2~tiazo 1 i 1) -1 -—Lí-t-butil)(rfimeti 1 )~sl 1 i 1 qkx3propano, s i^Q^c±tr;Butmdd^rbgni 1 > amino-3-c ic 1 oç-hexi 1- < R > -1 ~ 12-Ztiazolilirlrklt-butil Wcjifflgtil )-*jJÍl.PK.i.3.nropan.a A) A uma solução agitada de 14.3 g de cloreto de i--but.il--· dimetilsililo em 30 ml de NPN—dimetiltormamida, sob árqon,, foram adicionados 18,8 g de imidazole em pequenas porçSes. Esta mistura foi agitada durante 15 minutosj, em seguida foi adicionada uma solução de 15,,8 g de ÍS)-2-í t-butoxicarbonil 5 amino-3-ciclo-hexil---(R?S)~-l-(2--tiazolil )propan-í-ol (preparada como descrito no Exemplo de Referência 41) em 15 ml de NjN-dimetilformamida. Esta mistura foi agitada durante dois dias, em seguida diluída com é€>€> ml de hexa.no e lavada duas vezes com 3#@ ml de água, duas  - 83

vezes com 2ΘΘ ml de solução saturada de bicarbonato de sódio e 20® ml de solução saturada de cloreto de sódio» A camada orgânica foi seca a evaporada in vacu.o » 0 resíduo foi cromatografado por cromatografia "flash" sobre gel de sílica com acetato de eti-loshesana C1. = 1 © > como solvente» originando í ©;:28 g de < S) -2-< t---hutoxicarbonil )amino“3~ciclo~hsxil-íR>~i-C2'--tiazoIil >-l~E {t-butil )-ídimetil)—sililaxi3prapano sob a forma de uma goma incolorj ~Í2°±Í íc = 1,122s metanol), e 2»24 g de (S)-2-(t-butoxi-carbonil )amino-3-cielQ--heKiI-<S>-l-í2-tiazolil >-i-E (t-butil }-{di-mstilí-sililoxilpropano sob a forma de um sólido branco pegajoso5 [-5]^ -43°±i (c = 1,047, metanol)» B) Uma solução de 9,80 g de (8)-2-(t-butoxicarbonil>amino~ -3-ciclo-bexil—(R>-l-<2~tiazolil >-l--E (t-butil )-(d.imetil >—sili-loxi3propano em 5® ml de diclorometano foi arrefecida até ®*C s foram adicionados 16,6 ml de ácido trifluoroacâtico com agitação. A mistura foi em seguida agitada à temperatura ambiente durante 4 horas» vertida dentro de 12© ml de hidróxido de sódio 2N arrefecido com gelo, com agitação» e adicionaram-se 1©© ml de dic1oro-me t ano » A camada aquosa foi separada e extraída com 1Θ© ml de diclorometano» A camada orgânica e o extracto foram combinados», secos e o solvente removido in. vácua, originando i©;i28 g de (S>-2-amino-3-eiclD-hexil-(R>-l-(2-tiazolil)-l-Eít-butil)-(dimet-il>~sililoxilpropsno sob a forma de um sólido brancop p»f» 63™ -65°Cs Ca3p2e* +20°±1 (c = 1,11, metanol) templo......de nefer^ncia /2 N- i L-Fen i 1 a lani 1 ,-L- i suci I) - (S) -2-amina-3rçiç: lo-heail - (R )-1 - (2-1iazol i 1) -1 -C (t-buti 1 ?,- (dimg?tiI) -s±1í1okí3—propano A uma solução ds 1©,2 g ds imidazols síií 12Θ ml de diclorometano foram adicionados é,4ó g ds diclorofosfato ds fenilo em 1® ml de dicloromstano. A suspensão foi agitada durante ©»,S hora, em ssguida arrefecida até -15*0 s ad ic ionaram—se 11,34 g de t-butoxicarboni1-L-fsni1alanΐ1-L-1suc ina em porções. A mistura foi agitada a —15°C durante Lima hora, em seguida foi adicionada lentaments uma solução ds 7,08 g de ÍS>-2-amino~3~ ~cic 1 o-heKi 1 -CR»-1 -·í2-1iazo 1 i 1l-l-E (t-butil )-(dimstil }siÍiioxI3-propano em 2® ml ds diclorometano. Esta mistura. foi agitada a -15*C durante 28 horas, e em ssguida temperada com 20© ml de água. A camada orgânica foi separada s o solvente removido ±n vácuo» 0 resíduo foi dissolvido em 25® ml de acetato de stilo s lavado sucessivamente com 1©® ml de ácido clorídrico IN, 1ΘΘ ml ds ácido clorídrico ®,5N, 5® ml de cloreto de sódio saturado, duas porções de 1®® ml de hidróxido de sódio ©,5M e finalmente 5® ml de solução de cloreto de sódio saturado. A camada orgânica foi seca e o solvente removido in vácuo, originando 14,72 g de Ur E W— '· t—bu toK icarboni 1 > —L-f eni 1 al an i 1 -L—1 euc i 1 3- < S > -2-amino—3-c i-clo-hexi1-CR) --1-- í 2-ti azo 1 ΐ 1 > 1 — t < t-bu t i 1 > - (d i me t i 1) s i 1 i 1 ο κ i li p r o p -ano sob a forma de um sólido espumoso branco»

Uma porção de 3,57 g do sólido anterior foi dissolvida em 1® ml de diclorometano, a solução foi arrefecida até ©*C e adicionou-se 3,9 ml de àcido trifluoracético... 0 banho ds arrefecimento foi removido, a mistura agitada à temperatura ambiente durante 4 horas, em seguida vertida dentro de hidróxido de sódio 2M arrefecido com gelo com agitação e diluída com diclorometano.

\ A camada orgSn.iua foi separ auâ 5 solvente removido. originand o 3,04 g do composta • η 0S ejado sob a forma de um sólido espumosa branca = txemolo de Referencia ftiHino· •(2—tienil) psntano-1 --ol

Uma porção de €3,81 g de (5)-2-( terc—butoxicarboni 1 )ami-na-4-metil~(R,S)-l-(2-tienil) oentano-l-ol (Exemplo de Referencia 35) foi d isso1vida em 5 ml de dxc 1 Drooiftsnu e ad i c ionara 2,1 _ *1 iSÍ l d0 ácido trifluoroa cêtico * A mistura foi agitada duran hora s ? em S0QU1 dδ V©Γ L1 d δ com agi tacão dentro d^ e 15 ml de hi x ido de sódio 2N arrefecido cora gelo,. A mis tura foi diluída c ora 25 ml de d i c1orometano, a c amada org Λ Π i CZ δ 5-0 O-δ f** >50 δ e a cam ,sda aquosa a xtraída com 20 ml de diclororae bano» CâfilâQâ arg^nxca e o extracto foram combinados, lavados com solução s-δ txi rao δ de cloreta de sódio, secos e o solvente removido in vácuo* 0 resídua foi croraatografado sobre uma coluna de gel sílica com acetato de etxloshexa.no (ls4), originando fcí5 /2 g de (45—trans} —4— (2—meti 1— propil)—5—(2—tienil)—2—oxasolidinona sob a forma de um sólido branco lo:!!-"'0 — 141c’±2 (c = © = 57Θ metanol 1 «

Uma porção de &s23 g do sólido anterior foi dissolvida em 5 ml de etanol e adicionaram-se 5 ml de hidróxido de sódio IN» A solução foi submetida a refluxo durante 16 horas e em seguida concentrada in vácuo. 0 resíduo foi extraído com duas porções de 10 ml de diclorometano» Os extractos foram combinados, secos e o solvente removido in vácuoa originando 0,2 o do composto deseja- ^ Lqel sílicas acetato de etiloshexano C1 s 2) j Λ - X'.'

Exemplo de,,,Re.fergn,cla__/4. (S) -2"ftmingr:5z^.cl.s~hg?; i l^CR>~1~ (gztienil) prop^~ l-ol A um a solução de 1,57 g de N-ffletoMi-N-metil-N^-t-buto··· KÍc-arbonil~L-ciclo”heKÍlalaninaiiiida (preparada como descrito no Exemplo de Referência 4©) em 1© mi de éter distílico, arrefecido a -78^8, adicionaram—se sob argon 2,1 ml de n-butil-litio 2,3511 em hexano» Apés agitação durante uma hora, a mistura foi deixada a aquecer até ©°C. A esta mistura foi adicionada uma solução de 2-1 itiotiofe.no em éter (preparada a partir de ®,64 g de tiofeno em o ml de éter e 3,2 ml de n-butil-lítio 3,25M em hexano a ©°C durante uma hora)» Esta mistura foi agitada a ® °C durante 2 horas, em seguida temperada com 15 ml de ácido clorídrico IN e diluída com 25 ml de éterA camada orgânica foi separada, lavada sucessivamente com 15 ml de ácido clorídrico IN, 1© ml de água e 15 ml de bicarbonato de sódio saturado, seca e filtrada através de uma almofada, curta de silicato de magnésio hidratado» A almofada de filtração foi lavada com éter, o filtrado e o líquido de lavagem combinados e evaporados in vácuo» 0 resíduo foi lavado com haxano e em seguida cromatografado sobre 5® q de gel sílica com acetato de etiloshexano C1s2©) como solvente originando 1,2 g de sólido.-. A cristalização a partir de hexano contendo um vestígio de éter originou <8>~1,I-dimetiietil-Ll-tciclo-hexiimetil>-2--oxo-2—tieniletil Icarbamato sob a forma de cristaiss *24°± (c = 1,1€>, metanol)»

Uma solução de ®,51 g do composto anterior em 8 ml de tstra-hidrofurano seco foi arrefecida até -78°C sob árgon e foram adicionados gota a gota 3 ml de tri—sec—buti1 boro—hidreto de potássio 1,©M em tetra-hidrofurano. Esta mistura foi agitada a -78°C durante 4 horas, a. seguir temperada com 5 ml de cloreto de amónio aquoso saturado, aquecida até ã temperatura ambiente s a 87

solvente orgânico removido in vácuo, 0 resíduo aquoso foi diluído com 5 ml de água e 2® ml de acetato de etilo= A camada orgânica foi separada e lavada sucessivamente com duas porções de 5 ml de cloreto de amónio aquoso saturado, 5 ml de bicarbonato de sódio aquoso saturado e 5 ml de solução de cloreto de sódio -aquoso J saturado,, seca e o solvente removido in. vácuo de modo a obter-se í S)-2-í terç—butoxi-carbonilamino>~3~cic Io-~hexi1 — (R , S >-1-(2-1leni 1)propan-l-ol sob a forma de uma goma* A uma amostra de 18„4 q da. ctoma anterior em 33Θ ml de l x diclorometano arrefecido a ®°C foram adicionados 16,/5 ml de ácido iriíluorcacéticD, A solução foi agitada de um dia para o outro,, arrefecida até e foi adicionado hidróxido de sódio IN arrefecido com gelo Caproximatíamente 3Θ® ml>„ A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com duas porções de 350 ml de diclorometano» A camada orgânica e exiracios foram combinados, lavados com duas porções de 25® ml de salmoura, secos ÍNa^SO^) e o solvente removido no vácuo ds modo a obterem-se 14,5 g de sólido» A trituração com 2ΘΘ ml de hexano quente, arrefecimento até á temperatura -ambiente e filtração originou 7,5 g de cristais de (45-trans) 4—íciclo-hexilmetil>-5-í2~tienil)-2-oxacDlidinona sob a forma ds cristais, p=f„ 1Θ5~108*0»

Uma mistura de 7,0 g do composto anterior em 13 ml de stanol e 132 ml de hidróxido de sódio IN foi submetida a rsrfluxo / durante 17 horas» D solvente foi removido sob vácuo e o resíduo extraído duas vezes com 20# ml de diclorometano» Os extractos combinados foram secos íMa..-,S0^) e o solvente removido sob vácua de modo a obter-se 4,64 g de cristais, p„f„ 62-64*0;; -~35*±1 (c = 1,145, CH^OH).

íflípiD de Ref0r@nc.ta •DIA 110 -amxno- -ise t. i 1—1 — (2—t. i a z o 1 i 1) pen tan-

—qI d de N—(terc—butoxicarbonil>-N- i-i LUii& íííXi:; LliFS ÚB <â, 1 _ __ _ azol-i-i1okítris(dx~ 1 minuto, foram —meti 1—L— Isucina em 2 ml de diclorometans ®,15 ml de tristilamina e θ,47 g de benzotr metilamino)fosfónio—hexafluorofosfato« Aoós

·}, í"| *i o ionados ®,2Θ g de ( o } =ιΙΏ ιΠΟ- 4·—me lxí ? R)-l-(2-t J.S.2C Dl 11 } pSi!~ tan- 1 —o 1 e a mistura foi S. π X -5 0 ái -3. tempera tu ira amhien jrçg £ :!e um dia para O OU t f o, A mis tur a foi sub ^metida cí 1" 0 1 Íuo dtU minutos, diluida com 2€» ml de acetato de etilo e lavada (duas vezes) com 5 ml de cada um de ácido' clorídrico 1IM s bicarbonato de sódio 1M, A camada orgânica foi filtrada através de uma smofada fina de silicato de magnésio Hidratado e a almofada foi avada cora acetato de etilo, U filtrado foi concenti ratío modo a íb terem-se €>,41 g de uma gomai ícc3r,”& —6B°i3 (c = €>, 31 5, meta- no! !

Cxemplo ds? /o M~ CM-Heti I -™t.~ leuci 11 (S) ^2-- 8. íu i n o -4-- rn gt i ].· -(R)--l-i2-tiazplil)pentan-l-ol A Θ = 41 q de N—CH—(terc—butoxicarbonil)—N—metil—L—leu— c i 11 ··* \0) 2 aramo-# me*ci a— \ R) i— í.z xissol x 1) pen can ι o 1 τογam a o 501V ente do em águ a e adxc. ?U""S8 s sfi* SÓ lido. tDI de (nada a obter ' ***££? adicionados 4 ml de ácido clorídrico anidro 2N em acetato de etilo, A mistura foi agitada duranti do sob vácuo, 0 resíduo foi dissolvido em do e em seguida lavado com água fr. de cristais, p,f, òè~67°C;; RF ®,®5 sobre placa de gel de sílica

com acetato de etilo—metanol (9 si) cama solvente. A amostra foi destilada (num aparelho em dedo frio) sob vácuo de modo s. obterem-se cristais5 p.f. 8è~B7°C§ lo: 3 -4í°±l (c = ®s943? meta no 1 > .

Exemplo de Referãncia77 N-CL-1 euc i 13 - (S) -2-aminp-4-m.e ti 1- zSRlzl-< g-t iazo 1 ilj, pen tan-,ί Γο 1. A uma solução de 1,76 g ds imidazole em 1.5 ml de diclorometano sob asoto foram adicionados 1S1 g de diclorofosfato de fenilo (fosfodicloridato ds fenilo) em '5 ml de diclorometano e a solução arrefecida até ®°C» Um-a solução de 1,25 g ds hidrato de N^-terc-butoxicarbsnil-L-leuclna em 6 ml de diclorometano foi seca sobre sulfato ds magnésio e filtrado. 0 filtrado foi adicionada à primeira solução ea mistura foi agitada durante uma hora a 0°C. A esta mistura foram adicionados 15 ©5 g de <S> -2-amino-4--metil-CR)-l-C2-tiazolil)pentan-Í-ol. Após agitação à temperatura ambiente ds um dia para o outro a mistura foi submetida a refluxo uma hora e filtrada. 0 filtrado foi lavado com 1® ml ds cada um de ácido clorídrico 2Mbicarbonato de sódio 1M e seco sobre sulfato de magnésio. 0 filtrado foi passado através de uma almofada fina ds silicato de magnésio hidratado s a almofada foi lavada com diclorometano. 0 filtrado foi concentrado sob vácuo de modo a obter-se i?71 g ds M—EN~(tsrc-butoxicarboni1)-L-leuci13— “<S>—2-amino—4-metil~CR)-í-(2~tiasolil>pentan-l-oi sob a forma ds um óleo; Rf o=,43 sobre placa de gel de sílica com acetato de e til o- he x a ho < i ?: i ) c omo so 1 vsn t e.

Ao óleo anterior C i 571g) em um ml de acetato ds atilo foram adicionados 16 ml de ácido clorídrico anidro 2N em acetato e etilo. Após agitação durante 3 horas à temperatura ambiente.

adicionado um ml de hsxano s a ífiÍ.S-ÍUA~&. •S r r e τ ec ida (0°l;> e 1 t* rada tíe modo a obter-se Ί .= 4 g do produ to sob -5. ΤΟΓΊΓϊ-5 do dr oc 1 ore to 5 f = f 136-140°C» 0 hid roc1ore to foi di -solvido em h x d r* ώ Kido de amónio (2 ml)« Por S· "C ã X S- que fora m τ x 1 craclos· 0 1 a v a d d s —se €-* ·.= 97 g de produto sob 3. T QPÍfíw. ai-xsopropi-·· água i4 mi; s auicionou-ss arre?eeimento otativeram-5s ci com água Tris de modo -a obter p.f„ 112—ií6c'C= A reeristalisacão a partir de éter 1 ico oriqinou €>;;é>7 q d-e cristais, p.f. 112—114°Cρ (e = @„97A„ metanol) =

Lai

D templo de Referencia /8 (Ts-r^o—Ou. ta x i rbon i 1) ~ò~ < 2-tieni 1 > a 1 ari i n a -alanin íTíX sturs pi uani i mistura agi ti ada de 15 / g de C 2— tienil)—D?L— em 20 ml de dioxano for am adi c xonados 10 ml de àqua* A Ό1 arr e f ec i d o íbanho de gelo- •água) e tor am ad icionados de 2™C terç-butoKicarboniloxi-imino)-2—fenilacetanitrilo 2,4 q ÍBOC-OM) trada a.t-

Apôs agitação durante uo noras? a mistura foi hof -Oi lCSfíM :1 e acidificada até oH z a o com bidroqeno—sul fato potássio 0 3 35M = Os cristais que se separaram foram Txltrados5 . v-5 d os c om á Q U. cl ΤΓ ia s secos ao ar de modo a obterem- se 2 3 2 g de XBtSIS« D* .T« 11 *5” 114 °C« jr s/bç o de Referencia /9 c a r D u η z 1 — L— 1 euc in; maqnésio anidro durante N— {L — 1 euc i 1) - \ S > —2 - a m i n o—5—c i c 1 o— be x i 1 — (R)— j — (2—piridinil) propan-· 1— ol o de €>,75 g de mono—hidrato Na~tsrc~butox i™ :iT= dic 1 Qr“OiTi0*CcU*íD TOl -¾ Q Í‘C 3. O 3. com su1f ato tí- s horas, filtrada Tx í 'craso

concentrado até um volume de 15 ml. Esta. solução foi arrefecida até ®*C s adicionaram-se ®s488 g de M?N-carbonilGi~imidazole« h solução foi agitada a &°C durante uma hora e adicionaram-se 0,469 g de íS)-2-aininD-3-ciclo-hexil-íR>-l-í2--piridinil )propan-l--ol» A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para α outro, lavada duas vezes com bicarbonato de sódio saturado, água., salmoura e seca CMgSO^K 0 solvente foi removido sob pressão reduzida de modo a obter-se 1,0 g de uma espuma branca. Esta espuma foi dissolvida em clorofórmio-metanol C99sl> e os filtrados combinados concentrados sob vácuo de modo a obterem-se 0,9® g de M-lM-íterc-butoxtcarboniI-t-leuci13-íS)-2-amino-5-ci-clo-hexil”(R)”l~{2-piridinil>propan-l-ol sob a forma de uma espuma transparente„

Pi uma amostra do composto anterior em 5 ml de dicloro-metano foram adicionados ® 5 516 ml de ácido trifluoroacético e a mistura foi agitada de um dia para o outro. A solução foi vertida dentro de hidróxido de sódio arrefecido com gelo <1,61 ml de hidróxido de sódio 5M em 5 ml de água). agitada e a camada orgânica separada. A camada aquosa foi extraída duas vezes com dicloromatano e a camada orgânica e extractos foram combinados e secos (I1gS0„ 5. 0 solvente foi removido sob vácuo. 0 resíduo foi cristalizado a partir de éter di—isopropílico e recristalizado a partir de éter di-isopropílico de modo a obterem-se 0,102 g de cristais brancos, p.f. 98-l®®°C.

tj-íSusQ 1 q de i «r@Mí_Xcs M- ( j.„— X gUC X1 ) "" ( O ) —?~~-5;'D .ÍrsG~~3'"C XC 1 p—hg κ i 1' .5 26 g da íBOr iu~hldrâ' to da ftF- - t^TL"· ’DU ·"* sec -¾ coi*n <5 LI 1 T a f O O 0 magnésio 0|T| V |f \ 1 de trietilamina seca e Θ,47 g de henafluorofosfato de benzotria- sio ÍBGP>« Após ura minuto, ?—aÉnino“3"“CÍclo—heKil—(R) — i—(2- Lazolil>propao-l-ol e a mistura zol-l- - i 1 ti A : 4_^ / ,_4 ime LildíSii i ÍU } i uS f oram adie *1 nf~l aO€31s& 0 4 24 q fi ;b: (S a v s i t i Ui outro e submetida durante 2 horas» h mistura foi concentrada e α resíduo em acetato de etiio foi lavado cora ácida clorídrico IN, soluqSo de carbonato de sódio e salmoura» A camada oryauica roí seca nyau^ ? s concentrada de modo a oDcereia-se 05 44 g de_M-íN-í terc-butoκ icarboni1-L-1euci13 ~ í S)-2~arainα-3-ci- clo~heKÍ1—(R)~í—(2—tiazoliI)propan—1—ol bruto? sob a forma de um vidro» U composto clorídrico anidro 2N ........ durante 2 horas» A mistura (contendo sólido) foi diluídc nterior foi adicionado a ac 01 a. tio -S _ Ufc? etiio e a mist acido ora m j da sTS O ' £>w X i J.U ο I ava do com no >i-S. no» 0 só 11 .do foi ml QS a.qu a Q adi cio ηβϊ -s.m-sa s Ç--í lis i de hi .dróKido tr ado» 0 só 1 i ti O que St í sep ícèf" ou 1*Gj L T iitradoP a >bt SfSffl' -se 0, 77 q de sói ide» V- f 14í Í“1 Ά i Oi“ -VA í- r a fc.Kgmglo. ds Referfnçia^Mi N-<L-Histidil )~(bj)~2~aminp-4-ffletil- -(R)-1-(2-tiasol11?pentan—1—ol A uma suspensão de 2,4 g ds terc-butoxicarbon 1.1 -histidina em 24 ml de dic 1 orometanoforam adicionados 1,3 ml de trietilamina s 4,2 g ds hexsfluorofosfate ds benzotriazol-l-ila-xitris í dimstilamino> íosfónio CBOP>» Após agitação à temperatura ambiente durante 2 minutos, foram adicionados 1,73 g de (3)-2--amino-4~!Tretil~CR>-l“(2-tíazolil >pentan-l-ol » A mistura foi agitada durante 4 dias s submetida a. refluxo durante 1 hora e o solvente removido sob vácuo de modo a obter—se um óleo» Este óleo em 2Θ ml de acetato de etilo foi lavado com 1® ml de cada um de água e bicarbonato de sódio írf» A camada orgânica foi lavada com S ml ds ácido cítrico 2N, 2® ml de bicarbonato de sódio ÍM, salmoura e seca (HgSCLK 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a obterem—se 2,7 g de N-CM-(terc-buloxicarbonil-L.-histi-di 13 -CS> -2-amino-4-meti 1-<R) -í~i2-tiazoli 1) pentan-1 -ol brutosob a forma de uma espuma» 0 composto anterior (2,7 g> foi dissolvido em 5 ml de •acetato de etilo sob árgon e foram adicionados, por meio fle uma seringa, 3® ml de ácido clorídrico anidro 2'N em acetato de etilo» Após agitação durante 2 horas tinham-se separado cristais e a mistura foi diluída com 35 ml de hexano» A mistura foi filtraída de modo a obterem—se 4»5 g de ura sólido» Este sólido foi dissolvido em 9 ml de água e tornado básico com 3 ml de hidróxido de amónio concentrado» A mistura foi extraída cora acetato de etilo e o sxtracio seco CMgSO^)» 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a obterem-se i„23 g de um sólido (espuma)» Uma amostra, após repousa cristalizou de modo a obterem-se cristais, p=f= 118--126°C= S' fcxemplo de Referência 82 feiCLHHistid i 1) - C 5) -g-aminoró-c ic 1 o-hex i 1--< R)-1 -(2-tiazolil)propan-lj-ol· A uma suspensão de ©,59 g de M^-terc-butoxicarfaonil-·· -L-histidina em 6 ml de diclorometano, foram- adicionados ©,32 ml de iristilamina e í,®2 g de hsxafluorofosfato de benzotriazol--"i-iloxitrisCdimetilamino) fosfénio (BOP), Após agitação durante 1 minuto, foram adicionados €>,53 g de <S>-2-affiinQ~3~ciclo~heHÍl~ “(R)~l~<2-tiasolil>propan-l-σΐ e a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro= A mistura foi concentrada sob vácuo tís modo a obter-se um óleo. Este óleo em 2Φ ml de acetato de etilo foi lavado com 5 ml ds água, três veses com porções de 5 ml bicarbonato de sódio 1M e com 5 ml de salmoura» A camada orgânica foi seca íligSO^) e filtrada através de 8,0 g de silicatode magnésio hidratado, O silicato de magnésio hidratado foi lavado com três porções de 15Θ ml de de acetato de etilo» 0 filtrada e os líquidos das- lavagens foramcombinados e o solvente foi removido de modo a obter-se ϊ,θ g de um sólido» Este sólido foi dissolvido em diclorometano e a solução filtrada através de terra de diatomáceas» 0 filtrado foi evaporada sob pressão reduzida ds modo a obterem-se 0,98 g de M-CM-Cterc-butoxicarbonil-L-histi-d i 11 - (S > —2-amino—3—c ic 1 α-hsx i 1 — (R > —1 - < 2-tiacol i 1 > propan—1 —α 1 sob a forma de um vidro duro» 0 composto anterior (0,98 g) em um ml de acetato ds etilo foi tratado com 1Θ ml de ácido clorídrico anidro 2N em acetato de etilo, Após agitação durante 2 horas, foram adicionados 1Θ ml de bexano e a mistura foi filtrada da modo a obterem—se cristais, Ds cristais foram dissolvidos em 3 ml de água e adicionaram-se £>,4 ml de hidróxido de amónio Í5N. A mistura foi extraída com acetato ds etilo e o extracto seco <MgSO^)„ 0 solvente foi removido de modo a obterem-se Φ,40 g de um sólido»

L·XSiTsρlo Ote; Kef S j' âncxa (S)~z~Am i nq—3—cic1o—hgxi1 — (H) — i — — < 2—piridin i 1) praoan-'i —α 1 A uma solução Q fcf 3316 g de V — h Γ ofiio p I .ridina em 2Θ ml de dro fursno seco ar? nsfscxdo a «*** .*»* . -/suC5 sob ã 1' yon , to raiii dos í 1 ,6 ml de s l—hi itil-lítio em tetra- - h i d r o f u r an o« A pó _ E· minutos5 foram adicionados -5,14 g da N~metoxi-W-msti 1 -hP-terc-~butoxxcarfoonx1-L~cIc1o-hexxI-aianinamida em ml da tetra—hi— a--* & — 78°C durante uma sluçlo aquosa satura-até à temperatura ambiento a mistura foi vertida dentro de 5Θ ml de água e extraída com acetato de atilo» A camada orgânica foi seca (Na^SOa> e o solvente removido» 0 resíduo foi cromatografado sobre uma coluna de gsl de sílica de modo a obterem—se 25®1 g de 1?1-dimetiletil-— < S) C 1-f cicΙο-hexiImeti 1}—2—oxo—2—Í2—piridinil )et£i 3carbamato drofur •ano S-SC o„ A solução escura foi agi taj nor a.» à mi stura foram adie ionados 2® > ml li fcr da de sul fato de sódio» Após aqu 0CÍiTs ; en1 sob a forma de um óleo? Cal, metanol) 0 composto anterior <6,49 q) foi dissolvido em 8Θ ml de tetr a-hxdru i ui rano o a soluoã foi a: so 1 u çlo foram adicionados 4® _ *5 !Hi de £. . Ui 1 ;L *C X o 1»em tetra—hidrofura .no HU rsi aqitaoa >ec—huti 1 — bor o—bid reto dc 1 fsj fr£ rt π *f- nc, a A iTiis tura foi :ada aquecer a'té b. !iDO““ s toi arre Te r* ί r| ά ié iTi^SS |2 gota B. gota 5 SLlblU até ofj) o a 20 ml de água e adicionaram—se? got;a a qota, vw m-i as psràKido ae hidrogénio (a temperatura subiu até 45°C)= A mistura foi extraídí com acetato de st.iIo,, seca írlgSQ^) e o solvente removido de modo a obterem—se 6?38 g de um óleo» Este óleo foi cromatoarafado sobre gsl de silxca com acetato de etilo—hexano I3s7) de modo a obterem-se 3,,12 g de <S)—2— < terc—butoxicarboni1>amino—5~ciclo— --hexil-(R)-l-(2-piridinil )propan-i- óleo foi recristalisado a partir de hexano de mode r d í uf ίίΐ·κ> Diz? Uiíi ó 1 eo„ u no U -S (TiOy u s< obterem-se 26 26 +¥°±i (c = !5Θ/Ρ meta- J. g de cristais·;5 p„f« ôtí-6¥°C| Esj^' noi) α A uma amostra de i *Θ g do composto anterior em 2 ml de diclorometano foram adicionadas 2 ml de ácido trifluoroacético» Após agitação durante 6 horas, foram adicionados 15 ml de hidróxido da sódio 2N* A mistura foi extraída com três porções de 5 ml de diclorometano* e os extractos combinados foram secos CK^CO_r>* 0 solvente foi removido de modo a obterem-se Θ,59 g de um 6leso que foi cristalizado a partir de éter di-isopropí1ico de modoa obterem-se ©=,27 g de produto sob a forma de cristais*

Exemplo de Referência 64 H-(L-Histidi 1 >-CS/-2-amino-3-c:iclo-hexil--<R>—l-\2-tiazoliIIpropan-l-ol

A 0,,56 g de Ma-tsrc--butoKicarbon±i~t.~histidina em 2 ml de diclorometano,, foram adicionados 0*30 ml de trietilamina s ©,,97 g de hexafluorofosfato de benzotriasol-i-iloxitrisídimetil-aminc) fosfónio <BOP)= Após 2 minutoss foram adicionados €>s47 g de CS>~2-amino-3~cicIo-hexil~<R>-l~C2-tiazolil)propan-l-ol* A mistura foi agitada de um dia para o outro e submetida a refluxo durante 5 minutos* A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo em 1© ml de acetato de stilo foi lavado com água (1Θ ml), bicarbonato ds sódio 2M C6 ml) e com salmoura (2 ml)* A camada orgânica foi seca (Na^SO^) e concentrada* 0 resíduo foi dissolvido em ácido fórmico e a solução extraída com diclorometano. A camada aquosa foi tratada hidróxido ds amónio concentrado e a mistura filtrada de modo a obterem-se 257 g de Ν-ΕΝ-ΐterc-butoxi-carbonil-L-histidil 3 - (S>-2~âinino-3—ciclo-hexi l-\R>~l~C2-tiazo-lii)propan-l-ol5 sob a forma de uma sólido amorfo*

V

Ao composto anterior (1=,03 g) em 2 ml de dicloromatano arrefecido a ®C:C adicionou-se 2 ml de ácido trifluoroacético.

Após 3 horas, foram adicionados 15 ml de hidróxido de sódio 2N enquanto se arrefecia num banho de gelo» A mistura foi extraída com tr@s porções de 5 ml de diclorometano. 0 sxiracio foi seco CIMa-SO,) e o solvente removido sob vácuo de modo a obterem-se z. 4 0,4 g de um sólido. Este sólido foi cromatografado sobre cinco placas de gel de sílica de camada espessa de 20x20x0,2 cm com diclorometano-metanDl-hidróxido de amónio (9si,2s0,2) com solvente de modo a obterem-se 0,19 g do produto do Exemplo sob a forma

O A de um sólido amorfos [a3r/~“ +4° (c = 1,00, metanol).

Uma mistura de 6,41 g de N^-terc-butoxicarbonil-L-his-tidina e 0,2B g de NgN-carboniItíi—imidasole eis 2 ml de tetra—hi-drofurano foi agitada durante uma hora s aquecida brevemente. A esta solução foram adicionados 0,34 q de íS)-2-amino-3-ciclo-“hexil-íR)-l-í2-piridinil)propan-l-ol. A mistura foi agitada de um dia para o outro. A esta mistura foi adicionada uma mistura de 28 mg de uA-1erc-butοκicarborsi 1 - L - h istidina e 28 mg de N,N—car— bonildi-imidazols em θ,2 ml de tetra-hidrofurano que tinha sido agitada durante 2 horas. A mistura foi agitada durante 2 horas e o solvente removido sob vácuo. 0 resíduo em 5 ml de acetato de etiio foi lavado tr®s vezes com porções de 2 ml de carbonato de sódio 111, água e salmoura. A camada orgânica foi seca (Na^SO.,) e o solvente removido de modo a obterem-se β,&6 g de uma espuma,. Esta espuma foi dissolvida em 1,3 ml de diclorometano, arrefecida até ©°C e adicionaram-se 1,3 ml de ácido trifluoroacético. A solução foi agitada durante 2 dias e adicionaram-se 20 ml de hidróxido de sódio 2M. A mistura foi extraída com trâs porções da 10 ml de diclorometano. D extracto foi concentrado sob vácuo de modo a obterem-se 0,39 g de sólido» Q sólido foi cromatografado sobre cinco placas de gel de sílica de camada espessa de 20x20x0,2 cm com diclaroinetano-metanol— hidróxido de amónio

í93Í52s®j2) como solvente de modo a obterem—se ®, 14 g do produto do Exemplo sob a forma de um sólido amorfo.

Exemplo de Referência......85 K}— <Ν-π-ΐBenziloximetil)rL-histidil) — CS)-2-amino--5~ciclo-hs>;il-(R)-í-(2-tiasoli.l )-!-< terc-dbutilzdyjget^ A uma suspensão ds 1,1Φ g de N^-terc-butoxicarboni1-—N—ϊϊ-í benziloxiraetil í-L—histidina ara 3 ml da diclaroraetana, foram adicionados 0,41 ml de trietilamxna. A esta solução foram adicionados 1,23 g de hexafluorofosfato da benzoiriazal-l-ilaxitrisídi-metilamino) fosfónio CBOP). -Após agitação durante 1,5 minutos, foram adicionados €3,87 g da <S)~2-amina-3-cic].Q-hexil-CR)“l-(2” —tiazolil)~1—L(tsrc-butíIdimeti1isililoxiJorosano e 0,5 ml de diclorometano» A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro e o solvente removido sob vácuo. 0 resíduo em 2v ml de acetato de etilo foi lavada três vszss com cada. um ácida clorídrico 1M e bicarbonato de sódio lii. A camada orgânica foi seca (WaoS0A) e o solvente foi removido s sólido residual foi seco de modo a obterem-se 1,68 g de um sólido vítreo. 0 sólido anterior (1,68 g) em 2 ml de diclorometano arrefecido a &°C adicionou-se 2 ml de ácido trifiuoroacêiico» A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada de um dia para o outro. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e a goma residual foi dissolvida em 1Θ ml de acetato de etilo.-. A solução foi lavada duas vezes com 1Θ ml de hidróxido de amónio 7,5N s salmoura. A camada orgânica foi seca Ch^SO^} e o solvente removido de modo a obteres-se !s4 g de produto sob a forma tíe um sólido amorfo. i I ) ~ (5) —2—amino-4--me til -- < R > -1,- < 2—tiasol i ljfagnMQzlzQl

Uma mistura, de 3,44 g de N*"-terc-butoxicarboni 1 -N-imi··-dazoIe-tosil-L-histidina, í,44 g de cianofosfato de dietilo e i,, 3 ml de tris ti lamina em 5Θ ml de diclorometano foi agitada a ô*C durante uma hora, Uma porção da 1,4 g de M ""-tare-“butox icarbon il-N-imidã£oie~tosil-L-histidinaCS}“2-"amino-4-metil-<R>~Í-(2--tiasolil>-pentan-i-ol foi adicionada e a agitaçlo foi continuada a ft°C durante 2® horas-, em seguida durante uma hora à temperatura ambiente, ft mistura foi diluída com diclorometano e lavada com bicarbonato de sódio saturado a 5Θ% = A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano, A fase orgânica e o extracto foram combinados, lavados com água e salmoura, secos e evaporados i-n vácuo até se obter uma goma,, Esta goma foi dissolvida em 7Θ ml de metanol e adicionaram—se2,84 g de l-hidroxibenzotriazole. A mistura foi agitada durante 21 horas e o solvente foi removida in vácuo- 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, lavado com hidróxido de sódio 1M, salmoura, seco a o solvente removido in vácuo. 0 resíduo foi cromatografado sobre uma coluna de gel de sílica "flash", eluindo com metanol a 5% em acetato de etilo, de modo a obterem-se '1,33 g de 1Μα-terc-bu tox icarboriil-L-histidil--ílR?2S)-2-amino-4-raetil-i-(2-tiazolil)-pentan-l-ol§ Cal^"3, -34°±1 (c = @,848, metanol).

Uma porção de 1,1 o do composto anterior foi dissolvida numa mistura de 5 ml de diclorometano e 1,9 ml da ácido trifluo-roacético e agitada durante 16 horas, A solução foi tratada com 15 ml de hidróxido de sódio IN que estava saturado com cloreto da sódio e extraída com 3 x 3® ml de diclorometano. Os exiractos foram combinados, secos e evaporados in. vácuo, 0 resíduo foi triturada com éter-bexano, originando L-hisiidí 1~< ihí,2S>-2-ami--no~4~nietiI”l-C2~tiasPiil'/pentan—1-d1 ? sob a forma de um sólido»

Exemplo de ftgferfncia, 87 N- < L-Histidi 1) - C S) - 2-amino-3-c ic 1p-hexii-iR ) — 1 ~~Λ 2~ti.a;o 1 i I.) propan -1 —o 1

Uma mistura de ©?45 q de diclorofosfato de fenilo e ©,71 g de imidazole em 1Θ ml de diclarometano sab ârgon, foi deixada a repousar durante 0,5 horas, em seguida arrefecida até 0°C e foram adicionados- ©, Sé g de N**- tare-bu to κ i c a r bon i 1 —N— i m i -dazole-tosil-L-histidina, A mistura foi agitada durante 2 horas a Θ°C? em seguida foi adicionada um solução de 0 = 48 g de <S>—2-ami-nO“3-ciclO“heMil-íR)-í-í2“tiazalil)propan-l"ol 2m 2 ral de diclo-rometano. A misturai foi agitada a €?°C durante 17 horas e em seguida á temperatura ambiente durante um dia = Foi adicionada uma porçSode 3© ml de diclorometano e a solução foi lavada com 3© ml da bicarbonato de sódio saturada a 5©%» A camada aquosa foi separada e esxtraída com 2 x 2© ml de diclorometano. A camada orgânica e os extractos foram combinados, lavados com 38 ml de água e 3® ml de salmoura, secos e o solvente removido» O residuo foi lavado com 4 x 1Θ ml de hsxanoséter C4sl) de modo a obterem-—se í ,3-4 g de sólido branco» deu então A 1,2 g da sólida anterior em 3© ml de metanol foram adicionados ©377 g de i-hidroxibenzotriazole» Esta mistura foi agitada durante 2© horas, em seguida a solvente foi removido in vácuo» 0 residuo foi dissolvido em è© ml de acetato de etilo, lavado com 3 x 1© ml de hidróxido de sódio IN e 1© ml de salmoura, seco e o solvente removido» 0 resíduo foi submetido a croma-tografia !!flashn sobre gel de sílica, eluindo com metanol a 5% em acetato de etilo e deu então origem a ©,61 g de

W-r I”L “histidiI”í [ 1R ? 2S) — k‘ »amiπ0“3“Ci clo™ heκ Ί “O - r· -i Λ. O 1. κ L *_4 J __ u -55c'±2 Cc = 0 =,46;, metanol). ds £5 ~CÍI: C| dEJ c omposto ai | r 0*1. í §ίΏ /, f}| J. ml de -ácido trifluon oscético foi aqi

Uma porção de ®„4B α do com00¾to -anterior era v rnl de d i c 1 orometanos Θ durante 2Θ -horas? em seguida tratada com 15 ml de hidróxido de sódio 1.N saturada com clarsta de sódia s extraída com 3 κ 3@ ml

J d s d i c 1 orometa ,no= Os extractos for bm A __ p ΓΌΗ- JtdbJ.G i foi triturada COíS ju . t id i 1 — ( i R ? 2S ) *" •2-amino—3—c ic 10— Ho κ i 1 Ijt> sob a forma de u.?Ti sólido brsn co metanol) .« j. -41 0+3 ir — ¢4 „ VHtí , £xeuíρ 1 o de Rererencia *db 1 -2-ftmino-4-C meti 1 tio) ~ (H) -· 1 A uma mistura de 1./..,6 q de imidazole em 150 ml de dxc lorometano íoram auXí-ionaQu!: goza ·. .. Λ, .s.

:oi arrefecida até !Í>°C e foram adicionados 12?4 g de N'"---terc---butoxicarhoni 1 —L—mstion ina em de diclorometano a um ritmo que mantenhã a temperatura a 0oC

Oc‘C mi 1.li? a Tox cp.q Xf, atja. a 0°C —ss 5., i g ds hidroc1oreto de 14-i?v agi tada de um dia para 0 outro à 0°C durante uma hora e adicionaram- ϊ;·ιx~wr~mts la ã aiiixna « « susiur a tox outro à temperatura ambiente, filtrada e 0 sólido lavado com dxc 1 oroutetano = u i X I 'Crsdu i OX t X SV ci G Li f ~l0j 1@0 ml de cada um d* s ácido cítrico 2N5 bica r ha nato d sódio 1M, cloreto de sódio sa ttirado.5 s toi seco < MqSO> = *r u so 1 vente T OX removido sob pressão reduzida de modo a obterem— se 1 1 ? 3 g ds Uíli òleo incolors Caj. — 0 -45 °±3 C c ~ Φ r. 989 e metanol) *

1®2 0 composto anterior 011,3 g) foi dissolvido em 32@m]. de éter sob árgon e adicionaram-se 1,85 g de alumino-hidrsio de litio sólido (LAH> em pequenas porções (a solução torna-se quente e entra em ref luxo) » Após 0,,5 horas a solução foi arrefecida num banho de gelo e adioonaram-se, lentaieente, 320 ml de hidrogeno--sulfato de potássio CKH80^> ÍM„ A camada orgânica foi separada s a camada aquosa foi extraída tr'ê's vezes com 200 ml de éter» A camada orgânica e os extractos foram combinados e lavados com tre‘s porções de 10Θ ml de ácido clorídrico 3N, duas porções de 100 ml de bicarbonato de sódio i!i e 5Θ ml de salmoura, A camada orgânica foi seca CHgBO^, ) e o solvente rsíTiovido sob vácuo de modo a obterem-se 8,68 g de N^-terc-butoxicarboni1-L-metioninal, sob a forma de um óleo» A uma solução de 6,8 g do composto anterior em20 mlde dicloroiTretano foram adicionados 4,7 g de 2—trimstilsiliitiazole em 5 ml de diclorometano (a temperatura da reacçlo subiu para 42*0- „ A mistura foi agitada sob árgon è. temperatura ambiente de um dia para o outro» A solução foi arrefecida até ®°C e adiciona-ram-se, gota a gota, 13 ml de uma solução 150M de fluoreto de tetrabutilamónío» A mistura foi submetida a refluxo num banho de vapor durante 135 noras e o solvente foi removido sob vácuo» 0 resíduo em 40 ml de acetato de etilo foi lavado com 25 ml de cada um da ácido cítrico 2M, bicarbonato de sódio 1.M, salmoura e foi seco» 0 solvente foi removido de modo a obterem-se 10,4 g de um ώ 1 eo r.

Ao óleo anterior (10,4 g) em 10 ml de acetato de etilo foram adicionados 10 eqivalentes de ácido clorídrico anidra 2N em acetato de etilo. Após agitação â temperatura ambiente durante 2 horas, a mistura foi arrefecida até @0Cg diluída com 5Θ ml de hexanoj arrefecida e filtrada, 0 sólido foi dissolvido rapidamente era 15 ml de água e adicionaram-se, gota a gota., 4 ml ds

- l€u hidróxido de amónio concentrado» A mistura foi extraída tr®'s vezes com diclorometano e o extraeto seco (HqSO„) e o solvente removido de modo a obterem—se 1,72 g de um éIeo* Os líquidos-mãe a partir do tratamento com HC1 2N-acstato ds etilo foram extraídos com ácido clorídrico aquoso IN e a camada aquosa tratada com hidróxido de amónio concentrado* A mistura foi extraída com dicloromstano ds modo a obtsr-ss mais Θ,82 g ds óleo» 0 óleo combinado Cl?72 g mais ®s82 g> foi cromatogra-fado sobre gel de sílica por HPLC sobre um instrumento Water-prep 50© com metanol a 5% em acetato de etilo contendo 3% de N-snetil — morfolina como solvente* As fracções contendo o produto foram combinadas e uma porção de um óleo obtido foi sublimada de modo a obterem-se @,159 g de cristais? p=f» 63-òOCtC| -29°±í íc = 1,01, metanol)=

Exemplo de Referencia „,B9 N-( L-Leuc 11 )~<S) -2-aminq-4~lme t. il tio.) --rl.Rlcil:cÍ2-tiazol i 1) butan-l-ol A uma amostra de 1,6 mmol de N"A™( terc-butoxicarbonil )--L—leucina em í56 ml ds dicloraraetano (saco sobre sulfato de magnésio) s foram adicionados 6,22 ml de trietilamina e €í?71 q de hexafluorofasfato ds bsnzotriazol-l-iloxitris(dimetilamino)fos-fónio* Após um minuto* foram adicionados 0,32 g de CS)-2-amino-“4-(metiltio)~(R)—I-<2—tiszalilIbutan—1—ol= A mistura foi agitada de um dia para o outro e o solvente removido sob vácuo de modo a obterem-se ©5ó© g de N-CN~tterc-butoxicarbonil-L-leucil3-(3)-5-—amino-4-(met.il tio)-(R)-l — (2-tiazolil) butan— 1—ol bruto*, sob a forma de um óleo*

χ ι&Η

Aq compusto cu! Lte-riar (® πòt? o.) kim 2 m 1 d« acetato ds e t i1o foram a dicionados 7~5 !Tll de àc ido c lorí d rico an i dro 2W em aos ta to de et x 1 o , A o x s tu ra fo i ag i ta da 3 .¾ t 3—» 5 !: iperat ura amb : i™ ί 1 1.1- durante 2 hor as e adicionar am- se i® ml <3 © hg ;·; ano. A mi stur a foi a r rs t ecxda e f i1trada de modo a ob ter -se UOi Sg t : »* _ > 1 JLUU a oi a r _ *1 _ Θ 1 U « p\™ j- y sólido foi di ssolvidu HfjTi v ml de âqu a © í&Q X d ionar am-s yc *Tl X o © hidrÓMido de amánxo concsnt rad o o A ffiX S tU ra foi f il t rsds oe modo a obterem—se h~* 2"? q do produt o d O F V emp dO sob a forma Oísí cri s-ba.ic· = SÔ~dD "U* fcKSfflolo tís F:sf erenc 1 a y®

SiiiXnu-^ .1- < R > — 1 - x.xazoixl} pentan-í-oi *3 U ΡΟΓι '3-3.0

Kl"-

• terc-buto*i carbonx1-L -histidina ens trietilamina5 de benzotri 24 iii 1 de d xe Iorumstano 3 foram seguido pela adição de 4,2 g adicionados í?3 ml de de heKaf1uorofosfato a. z α 1 -1 - i 1 οκitris<dimeti1aaiηo> f osfóni

A C BOP mistura foi agitada fia d €33 i - 73 O ds ( —ol, A mistura foi =>ob ârgon, durante 2 mi nu tos e foram adie ιο ;)—2—amino—4- -me t i 1 ” (R > “ ί' 2—tiazoli1> pentari—l .qitada duran íte 4 dias © o solvente removido s~S _____-í U 1 duií foi disso Ivido em 2® ml de acatato de etilo e a soluç ãO lavada com i® ml de água 5 trê's DtjrCOSS der 1 0 ml de bicarbonato de sód io 1. M ? 5 m x d e à c x o o c i t r x ca 2N e 2® ml de bicarbonato de sódio 1 H _ A camada orgânica, foi seca. í MnRf! , í *1 * .3. * e em seguida filtr a- aa atrvés de um almofada, firsa de silicato de magnésio hidratado Ί 1 -sv •ada com \xi-_. i~* b-3. 'CQ de etilo) = 0 ix traúQ τui cOncsn 11r<sdG de modo a obterem— se 2,7 g d © M-EW-(terc— butοκicar bo— .AU JL 1 ί _ f c: j _ 2~amino—4 -metil-(R 5 — *| - ./O—.A." -n ~s —* ’ - f LiâSOixi írwsntan-l-

nii-L-m —ol sob a. forma Qs3 UíR3 5'S pU. i»a« Esta espuma. (2,7 g) foi d x sso1vi — da efíi i 5 ml de ac zístato de et ilo a foram adi cionados-5 â SG 1 U.ÇclO 5 3Θ ιΤι i de é.C ido exorídr i c o anidro 2N em a cetato de etilo, A

mistura foi agitada durante 2 horas (separaram-se cristais) e adicionaram-se 35 mi de hexano» A mistura foi filtrada de modo a obterem-se 4,55 g de M-CN-C terc-butoxicarbonil-L-histidil1-CS)--2-amino-4-metil-<R)-!-í2-tiaEoIil>pentan-i-ol, di-hidrocloreto, sob a forma de cristais hiçroscópicos. Os cristais foram dissolvidos em 9 ml de água e adieionaram-ss 3 ml de hidróxido de amónio concentrado, A mistura foi extraída com acetato de etilo, o sxtracto seco CMgBO^) e o solvente foi removido sob vácuo ae modo a obterem-se 1,23 g as N—ΠΜ-itsrc—butoxicarbonii—t-histi-dilj“(S)”2“amino“4-matil-CR)-l-(2-tia2olil)pentan-l-ol, sob a forma de uma espuma.

Exemplo de Referencia 91 M-C L-HistidiI)-(S)-2-amino-3--c ic I o-hex i 1 - (B) ·- i ·-- (2~ -1 i a z q1i1) — 1—(terc-butildímetilsi1iloxi)gropans

A uma solução de 25 ml de 3,9 g de imidazole em 25 ml de diclorometano foram adicionados 1,7 ml -de diciorofosfato de fenilo. Após agitação sob azoto à temperatura ambiente durante 2® ninutos, a mistura foi arrefecida até ®°C e foram adicionados 2,94 ç- de Wl~terc-butoxicarbonil-L—histidina. A mistura foi agitada a ®°C durante uma hora e adicionaram—de 3,è8 g de <S)-2-•~am i n ο-3-c i c 1 o- he κ i 1 — í R) - i — (2-1 i a z o 1 i 1) ~ í - (terc—bu tildimeti-Isililoxi)propano em 5 ml da diclcrometano. A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, filtrada e o filtrado concentrada sob vácuo, 0 resíduo em 5Θ ml de acetato de atilo foi lavado (três vezes) com 1Θ ml de carbonato de sódio, com salmoura. A camada aquosa foi extraída com acetato de atilo. A camada orgânica e os estractos de acetato de etilo . foram combinados e o solvente removido de modo a obterem—se 7,® g da uma espuma (após secagem sob vácuo). Este sólido foi dissolvido em 1® ml de diclorometano e a solução foi arrefecida até ®°C, A

esta solução foram adicionados 1Θ ml ds ácido trifluoroacático, A solução foi agitada á temperatura ambiente de um dia para o outro \ fU i CÁ'—· t A solução foi

arrefecida até e ad i c i on ad a a . 13@ sTii de hidróxido de sódio» A mistura foi filtrada s a camada u rq ãn i o a Γ c 31. E-Epat'~aGa. a H C!cdíl-lc:';□ 8. aquosa foi extraída com a.cenaco d e eti lo, A Ce.ui8.Oe. OfQHni.CS 5? OS extr actus i ursiíi u uiibmadub e ssujb í Na„SOη) » 0 ϊ=υ1 VSh Le rsiBoviao sob vacuo de modo a obterem—se 4»93 g de s*ò I ido» sólido foi cromato g rafado sobr e gel de sílica com um aparei hi Hi"‘LC da te rs—preρ 5ΘΘ„ com dicloramstano-metanol —trieti1 (95 s 4 s 1) c orno so 1 v< hs tracçoes ccsntsndo o pruouto tors® ·_ i_J 5 — 4 _ _ .j» „ _ o 1 vsí ! te re u*uv xdo s o sólido d is sulvida em acetato Π ça etilo» A 50 1 y.cSo foi lavada trfs vezes. com porçSes de 5 ml de ~S — salmoura? S sca íNa„SOΛ ) e ti 1trada atra VéS- ds terra ds d iato~ máeeas» 0 0 filtrado foi conci ©n t i~ ado e o ; í* esíduo saco soo s 'ÃCUO de •bterera-se : T :~r~ ·“’ -Ί : g ds uma espuma 5 Cal/6 —43°±i (c = 1,- fòQO ··· · -* ;i ξ espectro massa BAR - m+h = 492»

Exemplo de Referencia 92 (S) -2—Amino-5—c ic 1 g-hex i 1 - (R) -1 - < 2—f uran i 1) prooan—1 -o 1 A · (S> — t 1 — < Cic 1 o-he x i 1 met i 1 ) — 2— <2—f uranil) —oxosti 1 j-carbamato de 15l-Dimetiletilo

Usaa suluçao dtí 1,37 y de N ”fl5ts t rbonil- -L—c i c 10- he κ i 1 a 1 an i n sm ida em 15 CO TO 3. arrsfscida até -70°C sob ãrgo; luçlo. qota a gota» 5a 9 ml de butil SBC >5ano)» H u! X 3 tZUí*"*a. v* 2. ’Ξ-C O sa foi agitad a a Ί hui· βϋ! oldiLlOnadOia & °r- sqitSQí e sn seguioa aquecida atê í -do 1 uç -ão A) □urantf iinLitCí = lima solução de ©s73 ml de furano em 5 ml de tetra-hi-drofurano seco foi arrefecida até @°C e adicionaram-se 3S8 ml de n-butil·-!ítio (2S35H em hexana)» A suspensão amarela foi agitada a ®°C durante i?7 horas e, em seguida3 deixada a aquecer até á temperatura ambienta durante 15 minutos* (Solução amarela B) A solução amarela B foi adicionada á solução A e a mistura agitada s ©°C durante ls5 noras» A mistura foi temperada com 5 nu de cloreto de amónio saturado aquoso e o solvente tetra-hidrofurano removido sob vácuo» 0 resíduo foi diluído com 5© ml de acetato de etilo 2© ml de ácido clorídrico IN» A fase orgânica foi separada e lavada sucessivaroente com 2© ml de ácido clorídrico IN» 2© ml de água? 2@ ml de bicarbonato de sódio saturado» 2© ml de salmoura s seca sobre sulfata de sódio» 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a oterem-se is63 g de uma goma castanho-clara» Esta goma foi dissolvida em éter-hexano <is5> e a solução foi filtrada através de uma almofada fina de silicato ide magnésio hidratado» A almofada foi lavada cora éter--hexsno Cls5> e o filtrado concentrado» 0 resíduo foi triturado com hexano de modo a obterem-se ls23 g de cristais amarelo—cia—

-*7*A ross CaJ-"” +41°±1 íc = i5145 metanol)» B» (S) -2- (H~ terc-ButuK í carboni 1 )aminD-3-ciclo-hsxil-(RPS)--l~ -(2-furanil)propan-i-ol

Urna solução de ©PÍ6 g de CS)-lI-Cciclo-hexilmetil)-2--·(2-furanil )~2~oxoetiI Icarbamato de 15l-dimeiilstilo de 2 ml de tetra-hidrofurano e ©?2 ml de sietanol foi arrefecida até ©°C sob ârgon 3 adicionaram-se 23 mg boro-hidreto de sódio» A solução foi agitada a ©°C durante uma hora e temperada com 2 ml de cloreto de amónio aquoso saturado» 0 solvente orgânica foi removido sob vácuo e o resíduo diluído com com 5 ml de cloreto de amónio aquoso saturado» 0 solvente orgânico foi removido sob vácuo e o

X resíduodiluído com 5 ml da água e εκtraído com 10 ml ds acetato de atilo» A camada orgânica foi separada,; lavada sucessivamente com 5 ml de ácido clorídrico Ô.-,5N? 5 ml ds bicarbonato ds sódio saturadop 5 ml da· salmoura e seco sobre sulfato ds sódio» O solvente foi removido sob vácuo ds modo a obterem-se Θ,19 g ds um sólido gotoso» C ·, C 48-trans) -4·- < Cic 1 o-he.xi 1 meti 1 / -5- (2-f ursn i 1) “2-OKaso 1 idona A uma solução ds (S)-2--<N-"terc"-butoMicarbonil )amina™3~-”Clclo-hexil-ÍR,B)—l~(2-furanil)propan~l~ol em 3 ml de tíiclorome— tano foram adicionados Θ?Θ6 ml ds ácido fcrifluoroacético» A solução foi agitada durante 23 horas à temperatura ambientes lavada com hidróKido de sódio 1NS seca sobre sulfata de sódio s o solvente removido de modo a obterem—se ®,, 17 g de sólido» Este sólido foi dissolvido em diclorometano-acetato de etilo ΐ9í 1 s filtrado através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado» A almofada de filtração foi lavada com duas porções de 10 ml de diclorometano-acetato de etilo í9s15 s o fitrado s os líquidos das lavagens foram combinados» 0 solvente foi removido e o sólido residual lavado com hexano ds modo a obterem-se &:ΑΘ g de cristais brancosg -124°±2 Cc = ®?417? metanol)» D» (S)-2-Amiηο-3-cic1o-hs κ i 1 -(E} -1 - <2-furani1)propan-1-o1

Uma amostra de Θ-»15 g de \ 4S—trans) --4-t c ic 1 o—hsx i 1 me~ til )---5-(2-fu.ranil )~2—oxezolidona foi dissolvida numa· mistura de 3 ml ds etanol e 3 ml de hidróxido de sódio 1M„ A solução foi submetida a refluxo durante durante 17 horas» diluída com 3 ml de água e concentrada sob vácuo para remover o etanol» 0 resíduo aquoso foi extraído com duas porçSes de 5 ml de diclorometano e os extractos secos sobre sulfato de sódio» 0 solvente foi removido de modo a obterem—se Θ?15 g ds sói ido, o qual foi lavado com

·~?Α 'nexa.no de modo a obterem-se @? 13 g de sólida hrancop ϋα!-,'’"’- -1Θ°±2 <c = ©,5©75 metanol)»

ExgBIBlP. de Referencia 93 CS)-5-Αα}χπο-4—meti 1-< R ?-1-(2-tienil)pentap-l-Gl

Uma porção de ©s3i g de (S)-2-<terc-butoKicarbonil)ami“ na~4-®stil~(R5S)~l~<2-tieniI)pentan-l-ol foi disolvida e® 5 ml de diclorometano s adicionaram-se 2,1 ml de ácido trifluoroacético. Esta mistura fai agitada durante 3 -horas» em seguida vertida coíii agitação dentro de hidróxido de sódio 2N arrefecido com gelo, A mistura fai diluída com 25 ml de diclaramstano» a camada orgânica foi. separada e a camada aquosa foi extraída com 2© ml de diclorometano» A camada orgânica e o extracto foram combinados, lavados com solução saturada de cloreto de sódio, secos e o solvente removido in. vácuo, 0 resíduo foi cramatagrafado sobre uma coluna de gel de sílica com acetato de etiloshexano (is4), originando ©,72 g de C45-trans)-4-(2-meti1propi1)-5-<2-tieni1)-2-oxazolidona sob a forma ds u.m sólido brancos; Lal^" -141°±2 Cc = 0,57θ, metanol)»

Uma porção de © = 23 g do sólido anterior foi dissolvido em 5 ml de hidróxido da sódio IN adicionado» A solução foi submetida a refluxo durante 16 horas e em seguida concentrada, in vácuo» 0 resíduo foi extraído com duas porções de diclorometano» Os extractos foram combinados, secos e o solvente removido in vacas, originando €5,2 g do composta desejado p Rf ©,©45 Lgel de sílicap acetato de etilo-hexano <1s2)j.

11Φ hx-emplo de Referencia 94 N- (LrHi st id i 1 >-?S> -2~affiino-3rcic.lQ-heKll-lB. -(2-tienil)pentan-l-ol

Uma mistura ds 1?18 g ds N^-terc-butoxicarbonil-L-his-tidina s ®r,ó5 ml ds trietilâmina sm h ml ds clorofórmio foi agitada e aquecida num banho de vapor até a maior parte do sólido 55 ter dissolvido* A esta mistura foram adicionados 2*Θ4 g de hsxafluorofosfato de bsnzatriazol-1.“iloxi~tris<tíimetilafiãno} fos~ ^ fónio CBOP> em 2.-,5 ml de clorofórmio* A mistura foi aquecida num banho de vapor durante 3 minutos e adicionou-se 1=,® g de (S)--2--amino-3-ciclo-hexil-(R)-l-(2-tienilJprDpan-l-ol= A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e submetida a refluxo durante 5 minutos* 0 solvente foi removido sob pressão

reduzida o resíduo dissolvido em 25 ml de acetato de etilo, A solução foi lavada com 1® ml de águastr@5 porçSes de 1Θ ml de carbonato de sódio 2M e 10 ml de salmoura* A camada orgânica foi seca (Na-30,)^ o solvente removido e o resíduo seco sob vácuo de modo a obterem-se i57 g de N-lN-(terc-butoxicarbonil)-L-histi~ dilj-(S)“2~amino~3-ciclo~hexil~CR}-i-í2-tienil>propan-i-ol sob a forma de uma espuma branca* A uma amostra de @ 54θ g do composto anterior em um ml de tetra—hldrofurano arrefecido até €)°C? foram adicionados 3 ml de ácido clorídrico 4N arrefecido com gelo* A solução resultante foi arrefecida a 0°C até 4°C durante 7 dias e filtrada* Ao filtrado foram adicionados 1*5 ml de hidróxido de sódio !0N» A mistura foi extraída duas vezes com 2 ml de dicloro-metano e o sxtracto seco (f\!a..-,SOΛ > * A solução foi aplicada a duas placas de gel de sílica de 2®x20xô?2 ml e as placas desenvolvidas com diclorometano—metanol—hidróxido de -amónio Í9si?2s@?2>. A banda do produto foi removida e extraída com hidróxido de sódio concentrado a 5% em metanol, 0 extracto foi concentrado sob vácuo .'‘Ν de modo a. obterem-se Θ?22 g do produto do Exemplo sob a forma de uma goma»

Exemplo de Refsrfncia 95 <S)-2-A<bino-S-ciclp-hexil~(R)-1-2CN--L2-(triroeti.lsi 1 11I~ etoKi j.m.eti 1 j imidazpli 1)propan-l-ol

Uma solução (arrefecida até -78°C) de 17582 g de i — Π2— <trimetilsilil>etoxi3—IH-imidazole em 9® ml de tetra-hidro— furana seco sob argon foi adicionada lentamente a 36 ml da n-hutil-iítio e® tetra-hidrofurano C25 molar) e após adição completa a mistura foi agitada a -78°C durante 1 hora (Soluçlo h> „ ,s A uma soluçlo agitada de 18g84 g de N-metoni-N-metil-"W""--t-”buto>íicarbonil-L~ciclQ"hsKÍlalaninaiiíida em 18® ml de tetra-hidrofurano seco arrefecido até ~78°C sob argon foram adicionados 67 ml de butil secundário-1 itio em hsxano (©,,85 molar)« Após a adição a mistura foi agitada durante ls5 horas a -78°C (Solução B> «

Através da utilização da técnica de agulha de duas ραπ tas a soluçlo A foi adicionada à solução B com agitação a -78*0« A mistura foi agitada a -78 °C durante uma hora e deixada aquecer até ®°C e mantida (banho de gelo) a θ°ϋ durante uma hora» A mistura foi temperada com 15Θ ml de soluçlo saturada de cloreto de amónio e o solvente tetra-hidrofurano foi removido sob pressão reduzida» A camada aquosa residual foi extraída duas vezes com 15® ml de acetato de atilo» 0 extracto combinado foi lavado com cloreto de sódio saturado e seco CNa^SO») * O solvente foi removi- -jÍ. do sob vácuo de modo a obterem—se 35 g de um óleo laranja escuro» Este óleo <35 q> foi cromatografado sobre uma coluna de

gel de sílica com acetato ds etilo-hexano ílsl®) de modo a obterem-se 17,82 g de 1 s i-itíimetiletil-í S)-t l-Cciclo-hexilmetil )- ~2~oxo-2~<2~CN~L2-trimstiIsilil )-stoxijmstil 1 imidazolil )stil 3car~ 2é _ _ bamato sob a forma de um óleo viscoso amarei o | lalTi ·*·.!. o~±í ic = 1,234 5 íaetanol ) = A uma solução de 19»12 g do composto anterior esti 170 ml de tetra—nidrofurano seca arrefecida ate —7B°C foram adicionados gota a gota 85 ml de tri-sec-buti1boro-hidreto de potássio em tatra-hidrofurano C 1,011)= Após a adição» a mistura foi agitada a -7B°C durante 2 horas e foram adicionados 170 ml de solução saturada de cloreto de amónia* A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e o tetra-hidrofurano foi removido sob vácuo» 0 resíduo aquoso foi diluído com 5® ml de peréxido de hidrogénio (30% em peso em água) adicionado gota s gota (exotér— mica)» Após a adição ficar completa,, o banho de gelo foi removido e a mistura agitada durante uma hora» A mistura foi arrefecida até 0*C e adicionaram-se 93 g de sulfato de sódio em seis porções iguais» A mistura foi agitada, durante 15 minutos5 a camada orgânica separada5 e a camada aquosa extraída com 2ΘΘ ml da acetato de etilo» A camada orgânica e o extracto foram combina-dosr, secos sabre Nao30„ e a solvente removido de modo a obter—se um sólido branco» 0 sólido foi dissolvido numa mistura ds 400 ml de hexano e 50 ml de acetato de etilo por aquecimento num banho de vapor. Por arrefecimento obtiveram-se 14513 g ds (S)-2-terc~--butoKicarbonilamino-3~ciclo-hexil”<R)-l~C2-íIN-E2-ítrimetilsi“ lil jetoxilmetil jiiTiidazalil )prapan—1—ol sob a forma de cristais brancos» q»f = 97-9?°C2 *8°±1 <c = ls15s metanol)»

Uma amostra de 20 g do composto anterior foi dissolvida em 110 ml de etano!k solução agitada foram adicionados 11Θ ml de ácido clorídrico 2N e a solução aquecida num banho ds óleo a 70*C até 75°C durante duas horas» A solução foi diluída com 85 ml de água e concentrada. ssítíuo aquoso f oi a idróxido de sód Io 2 !N ©ft ml de acetato LrS e foi lavado com 25© ml removido sob vácuo= 0 r modo a obtereía-se 14 --CM—C2—í trimstilsilil )e forma de um óleo amarei

sob vácuo de modo a remover o 'ref ecido ane ©°C e tornado A mistura tos ex traída duas :ilo S OS ΒΚΪΓ ãC tOS coiHDxnados* de sal maura. ? seco C <=ΪΠ ^ P Z * 4 es I duo foi seco a o 5°C durante etanol= 0 OãSICD CQCIt vezes com 0 sxtracto o solvente g ds Cfc> }-2-~asiinD~i=-ciclD-hexi toxi 3meti 13 imidazol.11) Dropan·· 1 ·· r«3. í £ u .©5 o horas Q© 1 — í R > — 1 — € 2- ol soh a „ metanol > , Eκ om d I o d e Re f e r'ê\n c .1 &. 96 Z~an uno-d-c íc 1 o-hsx i itrimetilsi1i1)etoxi 3meti13 imidazoli1)propan—1—ol Uílító solução de sob arqon foram >··:?tia-5 g ue líísiuisxultf em 15© inl de clorofórmio sob argon foram adicionados 12,6© q de diclorofosfato a Tsnilf 5& ml de clorofórmio* A mistura foi agitada Λ *l· Γ-s &£ Οξ * W. í- U V U ϋ A mistura 1M “* LsrcH jLitu: xií_arbLíui 1 an te horas e ©m seouida 3. rret ©*—. ida ref sc ida foram dOÍC íui iSU uS 15 s 24 g ds t-IDina s=* mistura toi durante 2 horas» .4 solução foram adicionados gota a gota 14,1 q 3—cic :lo-hsxil-íH)-í- -(2-EN-C2· 11) pr •opan—1—ol em ml .da a ®°C durante 44 horasn d t a > -^-aatxncj-4-c ic .1 o-nex x i — ks~ t ím— L 2— < t rimet i 1 si 1 i 1) eto~ de clorofórmio» A t , ,,w. p ui,aída com 4©© ml de áqua e extraída com um litro de

Lr o de acetato de etilo= 0 ex Lrac tu f ol OS 350 ml ds água» ©5 0 fr íl de sol "-Hr SqQ io e seco C Ma.-.SQ) = 0 so1vsnte f 0.1

uiSSuiV do ds modo a obte reai-ss 29 s © g vido em 2ΦΘ Ifl 1 ds metanol B :ido de sódio 1M = A solução f O ie sólido* fc.ste sólido foi adicionaram-se 1©θ ml de "óxido de sódio 114= A soluç-Io foi agitada de um c outro á temperatura ambxsnce, uiiUioa itada ds um dia p. Oí=í com 1Θ0 ml de κ tr a í d a com duas doí rç 14 — 14 —

Λ 366 ml de acetato de etilo e o extracto lavado com 20® ml de salmoura e seco CNa_8CL> o solvente foi removido sob vácuo de 2 4 modo a obterem-se 24*6 g de um vidro»

Exemplo . de .Referfncia.....9,7 N-CL-Histidil)—(S)—2—amino-3-ciclo-hexil-(R)-l-(2—furanil? propan—1—ol

Como descrito relativamente ao Exemplo de Referfncia 94» a mistura de 1=28 g de {^-tgrc--butoxicarbonil-L-histidinaBem ®?72 ml de trimeti1amina e ®s®®5 mole de hexafluorofosfato de berssatriasol-l-glioíiitris<diroetilafflina>fosfónio em 10 ml de clorofórmio foi aquecida e agitada durante 3 minutos» A esta mistura foram adicionados 1=12 g de <S)-2-amino-3-cicIa~hexil-•~(R)~1 — (2-furanil) propan— i-ol e a mistura agitada durante 16 horas» 0 processamento e remoção do grupo hloqueador N-terc-bu-toxicarhonilo como descrito relativamente ao Exemplo de Rsfsrfn-cia 94 originou 0*2 g do produto sob a forma de um vidro»

Exemplo de Referencia96 jM^J^lIgngilPMlcarbgnil.)-D,L-í2-<2-meti 1 propoxi )q 1 ici 1 3--(S)-2-amino-5-cic1o-hex í1-(R)-1~(2-oiridini1)-propan-l-ol

Uma mistura de 3® = 33 g de carbonato de bsnzi 1» 26,,2 g de ácido glioxílico em 20® ml de éter foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro» A solução foi arrefecida a. ®°C durante 3x3 minutos* filtrada e o sólido lavado com éter» 0 sólido foi seco de modo a obterem-se 28*2 g de N-<bensiloxicarboni1)-2--hidroxiglicína sob a forma de cristais* ρ„f» 194-198°C»

Uma mistura do composto anterior <4»Θ g> em 8€5 ml de 2-metilpropanol e ©»4 ml de ácido suifúrico concentrado foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro» A solução foi diluída com i&& ml de acetato de etilo e lavada com bicarbonato de sódio a 10%água e salmoura» A camada orgânica foi seca CngSO,,} s o solvente removido» 0 resíduo Í5S8 g) foi dissolvido em clorofórmio e a solução filtrada através de uma coluna de gel de sílica curta» 0 filtrado foi concentrado sob vácuo tíe modo a obterem-se 3S36 g de Nç-íbenziloxicarbonil >— 2~í2-metilpropDKÍl )-glicinato de 2-metilpropilo sob a forma de um óleo transparente» 0 composto anterior (339 g) foi dissolvido em 12© ml de

metanol e adicionaram-se 11=,6 ml de hidróxido de sódio 1M. A solução foi agitada de um dia para o outro e adicionaram-se 3S9 ml de ácido clorídrico 3N» 0 solvente foi removido e o resíduo dissolvido em NaHCO^ a 1©%» A mistura foi extraída duas o vezes com éter» A camada aquosa foi acidificada com ácido clorídrico 6N» s extraída com diclorometano» Q extracto de dicloro-metano foi seco CMgSCç, ) e o solvente removido de modo a obterem--~se 2=,97 g de H-i benzi loxicarbonil )-2“(2-mstilpropoxilglicina sob a forma ds um sólido hrsnco5 p«f» 66~68C’C» A ums. solução de ©5432 g do composto anterior em 1Θ ml de tetra—hidrofurano fora»} adicionados ©=,249 g tis f45f4-carhonildIimidazaIs» Após agitação à temperatura ambiente durante 2 horas,, foram adicionados ®53Φ g de (S)~2-amino-3--ciclo-hexil-í R) - l-<2-piridinil) —propan-1—ol e a solução foi agitada de um dia para o outro» 0 solvente foi removido e o resíduo em diclorometano foi lavado com NaHCO-j- a 10¾. A camada aquosa foi extraída com diclorometano» A camada orgânica e o extracto foram combinados e lavados com saliours5 secos <Na«/30«) s o solvente removido sob vácuo» 0 resíduo foi seco sob vácuo de modo a obterem—se €> ? 653 g do produto sob a forma da uma gomas Espectro ds Ilassa <BAR)p cálculo (ivB-H) s 498,i2978o Encontrado CM-H-i}5 498=,2968 = bxemplo ds Referência, 99 {S) n o- 5--c i c i o-· hg x i 1 - (K) -,1-( a-ac e t i 1 -2--fur-an i 1) pro pan -1 -o 1 A uma solução de 055® g de (4S-trans)-4-(ciclo-hexil-metil }~-5- (2-furarsil>-2-oxazolidinona em S ml de tetra-hidrofura-no5 arrefecido até -78φ0,. foram adicionados 1.8 ml de n-butil-· -lítio em hexsno (2?2M) » Após ÍS minutos a solução foi aquecida até á temperatura ambiente e foi adicionado j^mstoxi-nf-ffletil-ace-tamida em um ml ds tetra-hidrofurano, A mistura foi agitada á temperatura ambiente durante 3 horas e temperada com 4 ml de solução saturada de cloreto de amónio e 4 ml de água» A mistura foi concentrada sob vácuo para remover o tetra-hidrofurano e em seguida extraída com 2® ml de acetato de etilo. G sxiracio foi lavado com 1® ml de cada um de ácido clorídrico 1NS bicarbonato de sódio saturado e salmoura. A camada orgânica foi seca (NaoS0^> e o solvente removido de modo a obterem-se #358 g de sólido . A cromatografia flash sobre gel de sílca com acetato ds stilo—hexa-no íIs1> como solvente originou ©.,29 g ds (4S~trans)-4-(ciclo--heMilmetil)—5—(5—acetil—2-furanil)—2—oxasolidinona sob a forma ds um sólida de cor creme5 Lm:-11 ò°± 1 (c - 0,,//.3,= metanol). 0 composto anterior foi dissolvido numa mistura de 4 ml de et-anol e 4 ml de hidróxido ds sódio 1.N s a solução foi aquecida a 80°C durante è horas. A soluçlo foi diluída com 4 ml de água5 concentrada de modo a remover o etanol, s extraída duas vezes com 8 ml de diclorometano. 0 extracto foi seco CNa^SO^) e o solvente removido de modo a obterem-se β51Ι g ds sólido. A cromatograf ia “flash51 sobre gel de sílica com metanol a 1 ®% em dícloromtano originou 85 mg de produto sob a forma de um sólido amarelos [a3,n“° +ό4°±2 <c - ©,464, metanol).

Us Exemplas de Heferêncía seguintes podem ser preparados pelo procedimento do Exemplo de Referencia 99 =

fc.xsmplo de Referencia 1ΘΘ 15i.z.2^i am i η.ρ-5-c. ic. 1 o- he x i 1 - (R) -1 - (5-tne toxicar bonilr. -2-tiaEolil)--1-(terc-butildimetil- lâMililKilfiroBarig A uma solução da N~terc-butoxicarboni1-(S)-2—amina-5--ciclo-hexil-(R)-l-(2-tiazolil)-1--(terc-butildimetilsililoxi)pro-pano em 2 ml de tetra—hidrofurano sob árgon a ~78°C3 taram adicionados 0S45 ml de n-hutil-iítio em hexano C2a2M)s Após 0,5 horas a -7S°C5 a mistura foi deixada aquecer até @°C e repousar durante Θ;i5 horas» Fec-se borbulhar gás dióxido de carbono

através da suspensão agitada durnate 1 hara a ®°c s a mistura foi diluída com 2 ml tís água. e 2 ml de cloreto de amónio saturado» A mistura foi concentrada sob vácua e a resídua extraída com i5 ml de éter dietílico» 0 extracto de éter foi lavado duas vezes com 5 ml de hidróxido de sódio ÍN e com 5 ml de salmoura» Formou-se um precipitado branco na camada de éter e foi separado por filtração e lavado cora éter» Este precipitado foi combinado com as lavagens de hidróxido de sódio e a mistura foi acidificada com ácido clorídrico óM» A mistura acidificada foi extraída com 15 ml de acetato de etilo e o sxtracto lavado com salmoura e seco CNa,,80^) * 0 solvente foi removido de modo a originar um sólido5 a qual cristalizou a partir de iso-octano de modo a obterem—se Θ?2Θ g de U~terc-butox.icarboniI-<S)~2-afflint3~5-çicIo-hsxil- iR)-1 --~C2-C5-carboxi> tiazolil 3-1-C terç-butildimetilsililoxi ) propano» 0 composto anterior í@, 13 g) sm Φ»5 ml de tetra-hidra™ furano foi adicionado a uma soiuçlo de 49 mg de M9N-carbonildi--imidazole em Θ,5 ml de tetra-hidrofurano sob árgon= A mistura foi agitada â tempeartura ambiente durante uma hora e adicionaram—se Θ;i5 ml de metanol seca» A soiuçlo foi agitada à temperatura ambiente durante 17 horas e o sovente removido» 0 resíduo em i@ ml de acetato de etilo foi lavado com porçSes ds 5 ml de ácido clorídrico ã,.5M9 5 ml de hidróxido de sódio iN5 salmoura e seco CNa.^SO^},, A soiuçlo de acetato de etilo foi filtrada através de uma almofada fina de si 1 ice.to de magnésio hidratado e a almofada lavada cora acetato ds etilo» 0 filtrado foi evaporado sob vácuo de modo a obterem-se Θ?12 g de_H--tsrc-butoxicarbonil-(S)-2-ami- no-3-ciclo—hexil-ÍR) — 1 —(5-raatoxicarbonil—2-tiazolil)-1 — ΐ terc-bu-tiIdimetilsi1iloxi)propano sob a forma de uma goma» 0 composto anterior (o»12 o5 foi dissolvido em um ml de diclorometano e adicionaram-se 0?18 ml de ácido trifluoroacético» A soiuçlo foi agitada â temperatura ambiente durante 22 horas e era seguida vertida dentro de 3 ml de hidróxido de sódio IN arrefecido com gelo» A mistura foi extraída com 1© ml de diclo-rometano e α exiraeto -seco <Na^SO^)« 0 solvente foi removido de modo a obterem-se Φ5@95 g do produto sob a forma de uma goma incolor»

Exemplo de Referência 101 íiiztrajisNzi^Nticlodlsxilm^ -2-oxasolidinona

Como descrito no Exemplo de Referência 839 2Θ,27 g de í ,, i-dimetil-ÍS)-£1-ícicio-hexilmetil }“·2“θχο-2-ί2-piridinil )etil 3-carbamato em 3ΘΘ ml de tetra—hidrofurano a -78°C foram reduzidos com 155 ml de tri—sec-butil—boro—hidreía de potássio iô5155Ivi> arrefecido a -7B°C» Após 5 horas a -78°C = a mistura foi temperada com 5© ml de água e após aquecimento até @°C5 foi adicionada mais água (2Θ0 ml)» A mistura foi extraída com duas porções de 250 ml de acetato de atilo s o extraclo seco <Ma_SO,) e o solvente é. *> removido» 0 resíduo <41 g) foi dissolvida em 30 ml de tstra-hi- drofursno e ad i c ionaram-se 15Θ ml de ácido clorídrico 6N. A mistura foi agitada á temperatura smbiente durante ϋ I í I.U f C!. t"· diluída com 4Θ ml de água e extraída com 50 ml de éter» A camada aquosa foi arrefecida e adicionaram-se 11Θ ml da hidróxido de sódio I0N» A mistura foi extraída com três porções de 2ΘΘ ml de diclorometano e o extracto lavado com salmoura <2ΘΘ ml) e seco sobre carbonato de potássio anidro» 0 solvente foi removido de modo a obterem-ss 15s@ g de sólido» Este sólido foi cromatogra-fado sobre gel de sílica com um aparelho Waters~HPL.C Prep—50© com diclorametano-metanol-tretilaraina (97s2:15 como solvente da modo a obterem—se 9,® g de (S>—2—amino—3-ciclo—hexil—(R)—í—(2-piri— dinil)propanol sob a forma de cristais, p*f» 53-55°C5 a 3,© g de <S>-2~amino--P-cicIo-heKil--CS>~l-<2-piridinil)propanol sob a forma de um óleo.

Uma amostra de 2*0 g <S>—2—amino—3—ciclo—hexil—í3>—1— -C2~piridin.il) prapan-l-ol foi dissolvida em 24 ml de dioxano-àgua C1s1> e adicionaram—se 3514 g de n—butilpirocarbonato em 13 ml de dioxano, gota a gota,, com -agitação* A solução foi agitada durante 17 horas, diluída com 2© ml de água e extraída oomduas porçSes ds 75 ml acetato de etilo* 0 extracto foi lavado com salmoura, seco CNa^SO^) e o solvente removido* 0 óleo residual foi cromatogra-fada sobre gel de sílica com acetato de etilo—hexano C4sò) como solvente de modo a obtersm-ss 3,© g de N~\ tsrc-butoxicarbonil )--· ~(S>—2—amino-3-ciclo-hexil-(S>-l— C2-piridiniJ )propan-l-ol sob a forma de cristais brancos? Ca]^ -Í4°±l Cc = ©,984* clorofórmio) , p*f* 84-85°C* Ao composto anterior (0*334) em 1Θ ml de dicloroinetano foram adicionados 0,20 ml de tristilamina e a mistura foi arrefecida até 5°C* á solução foram adicionados 0,10 ml de cloreto de metano—sulfanilo e a mistura foi agitada durante 1,5 horas a 5°C* 0 solvente foi removido e o resíduo dissolvido em metanol e deixado a repousar à temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura foi diluída com 2Θ ml de água e extraída com 5Θ ml de acetato de etilo* 0 extracto foi lavado com água, salmoura* seco (Na„S0-> ε o solvente removido de modo a £. 4 obter-se um óleo amarelo pálido* A cromatografia sobre gel de sílica com acetato de etilo-heptano (2 = 3) originou €>,195 g ds {4-S-lrans)-4-C cic1o-hexiImeti1>5—(2—pirídini1)—2—oxasolidinona, •".li sota a forma de ura óleo amarela pálida espesso ? -4à°±í

Cc = i*08, metanol). 0 composto anterior foi também preparado por rassçSo de 0,300 g de ÍS)-2-amina-3—ciclo-haxil—CR)—1—(2—piridinil)propan--l-o 1 com €4,49 g N,W—carbonildi-imidazole em tetra-hidrofurano ao refluxo (25 ml) durante lé horas*

bxemplo ds Refergncia 1Θ2 C45-trans)~4-(Clclp-heKi,lmetiI )-5- C2-tiazoIil,,)-~2-~oxazoiidinona

Um a so I u.ç ao d e (S) - 2- am i n ο-3-c i c 1 d- he κ il--CR)-í-(2-ti a- solil)propan-l-ol e ®, 11 g de W,N-carbonildi—imidazole em 5 ml de tetrs-hidrofurano foi agitada è temperatura ambiente durante 16 horas a? em seguidar, -submetida a refluxo durante 5 horas-,, 0 solvente foi removido e o resíduo dissolvido em 15 ml de acetato de atilo» A solução foi lavada duas vezes com 5 ml de ácido clorídrico IN, com 5 ml de bicarbonato de sódio, com 5 ml de salmoura e seca (SMa^SO,)» Q solvente foi removido ε o resíduo £ 4 lavado com bexano de modo a obterem-se €>,26 g ds um vidro incolor; Ca-88*±1 (c = 1,072, metanol)»

Exemplo, de Referencia 1®5 E l~XX2.-¾.tri..me.til,-. sjL.l...ilj etpxi 3 me ti 1 4zlí±limidazol-2-i 1 3--2"OHa.£qlad.ifíQna A uma solução de €>,35 g de (S)—2--amino-3—ciclo—hexil — metil-ÍR)— 1 — i2—CN—C2—Í fcrimetilsilil )etoxilmetiI iimidazolil >pro~ pan—l—ol em 2 ml de carboneto ds distilo foram adicionados 0,41 q de carbonato ds potássio e €>,16 o de imetóxido de sódio» A suspensão foi aquecida a -8ô°C durante 21 horas e a 1®0°C durante 6 dias» A mistura foi temperada com 5 ml ds água e extraída com 15 ml de acetato de etilo,, 0 extracto foi lavado com salmoura, seco íWa.-^SU/i) e o solvente removido» 0 resíduo foi crosiatoqrafado sobre gel de sílica <2® g) = A coluna foi eluída com hexano (2Θ0 ml) e em seguida com acetato de etilo—hexano (isl) de modo a 26 obterem-se ®,õ3 g de uma goma incolors Lslp' metanol>» ~138 °±1 íc 1? Φ4Ξ5 uxemplo ds Referencia 1®4 N„ < L-Leuc i 1 )- (S) ---2---aj»inp---5-ciclo--h5MÍ 1 -furanil)propan-l-ul A uma solução de íP4 o ds imidazola em 18 ml ds diclo-rorostano foram adicionados ml de diclorofosfato ds difenilo em 6 ml ds diclorometano» A mistura foi agitada durante 2Θ minutos5 arrefecida até ®*C e adicionou-se uma solução de ®?6Θ g ds imidazols5 1?6β g de N/"-E (bsnzilQKÍ)carbonii 3-L-leucina em 6 ml ds tetra-hidrofurano e 2„4 ml de NsM~dimetilformamidâ=> A mistura foi agitada a ®°C durante 4Θ minutos e em seguida adicionaram-se is3€> g ds CS)-2-amino-3-ciclo~hsKÍl~CR)-l~C2-furanil >--· propan—l-ol= A mistura foi agitada a ®°C até 25°C (banho de gelo até fundir) ds um dia para o outro s o solvente removido= 0 resíduo foi dissolvido em 2® ml de acetato de stilo e lavado com água, ácido cítrico 2N, solução de bicarbonato da sódio e seco íilgSCuK A solução foi filtrada através ds uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado e a almofada lavada com vários volumes de acetato de atilo» 0 filtrado foi concentrado sob vácuo ds modo a obterem-se 2?3 g de W—IN—(henziloKiIcarbonilJ —L-leu— cil3-(S)—2—amino—3—cicio—hex.il —<R>—1-(2-furanil)propan—l—ol sob a forma de um óleo» U composto anterior Cl,85 g) e 1,Θ g de formato de amónio em 24 ml de metanol sob azoto foi aquecido num banho de vapor e em seguida a. solução foi arrefecida, até θ°0= h mistura (sem agitação) foram adicionados (par meio de pipeta) Θ,96 g de paládio a 1®% sobre carbono suspenso em 5 ml de etanol„ A mistura Tox agitada a Ô°C durante uma hora., adicionou—s-e terra de

hidróxido ds amónio e Cl {>,.,· n 0 .... o a., seca (MçSO „) e o 50 1vente r q ds uma qonss„ A cr istalisa •opropilico originou 0 5 74 g de diatom-áceas s a -misturai foi filtrada» A almofada ds Til tração Toa lavada com metanol e o filtrado foi evaporado até à secura» 0 resíduo foi partilhado entr A camada orqSnica foi sepai do de modo a obterem-se I5 ^4. partir de 5 ml de éter di- -leucil)" íS) —âíTsiriO—-3-—C 3.C 1 O” sob a forma de cristais inc Ol:

- Ci-turaru i;propan—i—oi 3A—qA frκeffip 1 o dg Refer'§πc ia 1 @5 5'.|— i i_ -Hií -afiíina-o- —furani1)propan— i—ol A uma mistura de i,2o g ds imidazole em θ5'ο ml de diclorometano foram adicionados 1?2 g de diclorofosfato de cl i. τ cr a. 3. o em O mi de clxcloroíBecaino» Hpòs aqxcaiçao di.írainte .r o

mistura uma solução quente N""—£ (benziloxi Jcarbonil 3—L 0SP5 g - de Xffii daΐο1e __. -*n __ 1 U^ÍTI á sTt i. de N 4M· ~d imeti1formamida s eca» A mistura foi di luída a té LlrTt VO 1 uíns d © 1Θ ml com diclorome tano e c\Q X X13.D-S a W 1* durante 1 hora. B A ϊΤϊΐ s tui ra foi adicionada a 1 os g d e ( H ) ·- 2-amino-ó-ciclo-he ;< i 1 '·' (R) — 1 ”C2“furani1)propan- i — o 1 e a mistura foi agitada a ®°C •a té 25 °C (banho de gelo até fundir) :i H mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo, s® 2® m 1 Q Cr' acetato ds stiio, foi 1.av ado com ‘o ml de áqu.atris porções de 5 ml do bicarbonato de sòd xo 1M e s. almoura. A camada o rq'Sn ica foi seca (Na ..-30.»> e o solvente X. removida ds modo a obterem— _ *“ /1 JC, r: *i· O f j 0 N;~EN™ (benzi ioxi )carbonil 3- L-histidi 1 3— l tí) — 2—amxno—-3—ci C1π-ΠΒχ j 1---- íR}--Í~(2-furani 1)propan-í-oi sob a forma ds uma goma.

Hp amam

Uma mistur· Φ,37 q de U-5 yOííi*5 ãntsridr \ Z β. τ g) 1 O Qfc; í uD si-S to -ácido férmico <9Θ%) e /*ív7 ml de metanol SOD

azoto foi -arrefecida até €?°C e em seguida foi adicionada5 por meia de pipeta. uma pasta fluida de ls2 g ds paládio a 10% sobre carbono em eiancl. A mistura arrefecida foi agitada durante 2S5 horas e filtrada através de terra de diatosâcsas e evaporada. Ao resíduo foi {adicionado um ml de hidróxido de -amónio concentrado. A mistura foi extraída sucsssivamente com porções de 10 ml5 5 ml e 5 ml ds acetato ds etilo. 0 s sxtractos combinados foram secos (hla^BO,,) e o solvente removido de modo a obterem-se ls2 q de um vidro. Este vidro foi cromatografado sobre uma coluna de gel de sílica com solvente diclorometano-metanol—trietilamina <94sós2). As fracções contendo o produto foram combinadas. concentradas atê á secura e partilhadas entre 10 ml de hidróxido de sódio 2N e 5 ml ds diclorometano. A casada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com porções de 5 ml de diclorometano. A acamada orgânica s os sxtractos foram combinados^ secos CiigSO^) e o solvente removido ds modo a obterem-se θ522 g ds sólidos Espectro de massa CBAR)s calcul (M+H)? 361. Encontrado CM+H), 361.

Exemplo.de.Referfnçia l#fe jSlz^zâgyjlg=3i:ciçlo-hexil-(R)-i-C2-tiazolil)-l--C(terç-butil) (dimetilsilil,>gx,i.3propano A uma solução agitada ds 1Θ 3Θ g de (5)-2-(terc-butoxi-carboni1lamino—3—ciclo—hexi1 — <R)-1-C 2-tiazolil)-!-<terc-butildi-metilsxliloxi)propano em 50 ml de diclorometano arrefecido até 0*C sob àrgon foram adicionados 16s9 ml ds ácido trifluoroacético Durante io minutos. O solvente foi agitado â temperatura ambiente durante 4horas5 arrefecido até ®°C s adieioneram-ses lentamsnte;; 12€i ml de hidróxido de sódio 2M arrefecido com gelo. à mistura foram adicionados 100 ml de diclorometano e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída, com porções- de ΊΘΘ ml de diclorometano» A camada orgânica e os sxtractos foram combinados?

secos <ngSO^) s o solvente removida sob vácuo de modo a obterem--se 7,5 g (96%) de cristais, p»f. 63»65°Cs Εαϊ_""~' 19°± 1

Cc = 15Θ62? metanol)»

Exemplo de Referência 1Θ7 (5)-2-Amino-5-ciclQ~heKi 1-(R)-1-< lH"Pira£ol-3-i 1.)-1- -lC(1„1-dimetiletil)rfimstilsililloxilgropano

Uma mistura de 7,00 g de i , l~dimetiletiI~íS)-<2~cicIo--hexil~l~formiletilscarbamato, 4,97 g de cloreto de t-butildi-metiisililo, 7,03 q de cianeto de potássio e ¢,150 g de iodeto de cinco em 150 ml de acetonitrilo seco sob àrgon foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 48 horas» 0 solvente foi removido sob vácuo e o resíduo triturado com éter, filtrado e o sólido lavado com éter» 0 filtrado e o liquido de lavagem foram combinados- e- lavados com água e solução saturada de cloreto de sódio» A camada orgânica foi seca CNa_80^) e o solvente removido de modo a obterem—se 1 íí,7 g de uma goma» Esta goma foi crornato— grafada por HPLC num instrumento yater-Prep 56® sobre uma coluna de gel de sílica com acetato de etilo a 2,5% em haxano como sluente» As primeiras fracçSes- recolhidas foram concentradas até à secura de modo a obterem-se 3,27 g de dS,2R)-C2~ciano~í-(ci-clo-hexilmeti1>—2-ll C1,1-dimetileti1JdimetiIsi1i1jqxíDetiljcarda-mato de 1, í-dimetiletilo sob a forma de uma gomai Csl^*”1” —27°±1 íc = 1,148, metanol)» A concentração das últimas fracçSes a partir da coluna originou (iB,2S)~E2~ciano“l~(cicIo~hexiImetil>--2-C Cd, 1-dimetiletil IdimetiIsil il 3o>;iletil jcarbamato de 1,1-di-metiletilo sob a forma de uma goma? Cal^0 -57°±i íc = 1,9267, metanol)» A 1,72 g de ílb,2R)-C2—ciano—l-ícicla—hexilmetil>—z-—CC <1,1—dimetiletil)dímetilsili13oxi3etiljcarbamata de

ί51-dimetiletilo em éter anidro saca sob árqcn, arrefecido até 0°C, foram adicionados (por meio da uma. seringa) 3,74 ml de brometo de metilmagnésio em éter (CHjlqBr 2.3M era éter)= 0 banho de arrefecimento foi removido a a mistura -agitada â temperatura, ambiente durante 24 -horas» A mistura foi temperada com solução saturada de cloreto de amónio, agitada durante 3 horas, a acidificada até pH 4cora solução de ácido cítrico IN» A mistura foi agitada vigorosaments à temperatura ambiente durante 6,5 horas, a camada orgânica separada» seca (Na^SO^) e o solvente removido» 0 resíduo Cl,90 g de èleo) foi cromatografado sobre uma coluna de gel de sílica de 2,8 cm x 24 cm com acetato de etilo-hexano Cls9) como eluente (fracçães de 2® ml)» As fracçSes 5-7 foram combinadas e o solvente removido de modo a obterem-se i,4í g (ÍS52R)--£1~ -Ccíclo-hexilmetil )--2-111 C1,1-dimetiletil )dimetilsilil3qkí3-3-qkí-butiIlesrbesiato de 1,1-dimetíletilo sob a forma de uma goma amarelo pálidap [«]„*"" -44°±1 Cc = l,®7i, metanol>p anél. Calculs C, 63,9p H» 1®,5ρ í», 3,4» Encontrados 0, 63,8ρ Η, ϊθ,4ρ N, 3,4»

Uma solução do composto anterior (Í,4Ô g) em 3 ml de tsrc-butoxi-bis(dimetilamino)metano (Reagente de Bredereck) sob árqon foi agitada â temperatura ambiente durante 26,5 horas» A solução amarela foi evaporada até à secura sob um vácuo elevado de modo a obter—se uma goma amarela» Esta goma foi cromatografada sobre uma coluna de gel de sílica <2,8 cm x 21 cm) com acetato de etilo-hexano < i s1> como eluente C fracçSes de 30 ml). As fracções 4-15 foram combinadas, o solvente removido e o resíduo seco sob um vácuo elevado a 4@*C de modo a obterem—se 1,-38 g de C18,2R> — -C1-(c ic1o-he x i1me til)-5-dí me tilamino)-2-C C(i,1-dimetileti1Jdime-tiXsi 1 i 13oxl3-3-oxo-4-penteni 1 3carbamato de 1,1-dimstiletilo sob

O L a forma de um xarope espesso5 Εα3Γ/~'~ -s-3*±l Cc = 1,375, metanol)p anal» Calculs C, 64, Ip Η, l€?,3p N, 6, ® ρ Bi, 6,€*« Encontrados C, 4--' 5 8 p si, í. ra, 2, N 5 O, / , bx3 0,8 =

Ao composto anterior (ís3S g) era 11 ml de ebanal foram adicionados 0?lò2 g de hidrato de hidrazina e @?342 ml de ácido acético* A solução foi agitada sob ârgon à temperatura ambiente durante 2© horas e o solvente removido sob vácuo de modo a obterem-ss lr,29 g de (5)--2-( terc-~hutoxicarbonil )amino-3-ciclo---hexiI~<R>~< lH-pirazol-3-il )-1-1 SL (i P i~dimetiletil Jdimetilsilil j-oxijpropano sob a forma de uma goma* A cristalização a partir de hexsno originou cristais brancos ? p*f» Í3è~í38°C» 0 composto anterior íls2 g) em 1Θ ml de dicloromstano e 2,3 ml de ácido trifluoroacêtico foi agitado à temperatura ambiente durante 4 horas» A solução -foi lavada cora 16?6 ml de

hidróxido de sódio 2N e diluída com 15 ml de diclorometano» A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com duas porções de 15 ml de dic lorometano» A camada orgânica e os- extrac— tos foram combinados, secos ÍNa-SO-í e o solvente removido» 0 2 4 rsiduo foi cristalizado a partir de h-exano de modo a obterem-se ®,7Θ g de cristais (em duas colheitas)* A cromatografia sobre gel de sílica com acetato de etilo como eluente originou um sólido que foi cristalizado a partir de hexs.no de modo a obterem-se 0*379 g de ÍS>—2-affiino-3—ciclo-hexil-ÍR)—í1H—pirazol-3-il)-l— íl(1?i-dimstiletil/dimetilsililloxijpropano sob a forma de •“5i critais brancos* p„f» 125-12/°C? ·ΐ-22°±1 Cc = 1 ;ϊΘ81 5 metanol> * E->tem.BÍP-de Referfnçia 1Θ8 N-tPietPxifosfinil)-L-fenilalanina

Uma solução de 16P 5 g de L-fenilalanina e 5& ml de tnerilamina em -iu ml de agua e 2Θ ml de etanol sob ârqon foi arrefecida até 0°C» A esta solução agitada foi adicionada* gota a

gota5 uma solução de fosfito de distilo <13,8 g) em 4Θ ml de tetracloreto de carbono. Após a adição, a mistura foi agitada â temperatura ambiente durante 3 horas e acidificada com ácido clorídrico 3M (pH 2)« A mistura foi extraída com trfs porçSes de 2ΦΦ ml de acetato de etilo, o extracto seco íNa„SO„) s o solvente removido sob vácuo, 0 resíduo foi seco sob vácua de modo a obterem-se 23,5 g de uma goma cor de laranjas Εα!η~ ’ ·*·! 1°±1 (c = 1305ó3 clorofórmio)„

Exemplo de Referfncia ΊΦ9 N-< Mm D.1 Λ. 10 X. j f QSfi n i 1,

Uma solução de 8,2 g de L-fenilsíanina e 25 ml de tristilamina em 15 ml de água e i@ ml de etanal sob árgon foi arrefecida até ®°C = A esta solução agitada foram adicionados, gota a gota, 13,1 g de fosfito de dibensilo sm 2Θ ml de tetracloreto de carbono. Após a adição, a mistura foi agitada á temperatura ambiente durante 3 horas e a mistura foi concentrada sob vácuo, diluída cosacetato de etilo (ml), arrefecida até e adicionaram-se, gota a gota, 5@ ml de ácido clorídrico 3N, A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída duas vsces com 1ΘΘ ml de acetato de etilo, A camada orgânica s os Sfttrsctos foram combinados, secos <NaoS0a) e o solvente removido, D resíduo foi seco sob vácuo de modo a obterem—se 2Θ,7 g de tisna goraa ama re1a„

\V fc.xemplo de Referencia Ι1Θ N-ϊn- (Dibenz i i ox i fosf ini I) -L-f^U#lJM^ldLrlflUEÍn& A uma solução de 8,5 g de imidaazQle em 55 ml de diclorometano sob árgon foi adicionada lentamente uma soluçlo de 553 g d dicIarafosfata de difenila em Í5 ml de diclorometano» A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante €?,5 horas, arrefecida a ®*C s adicionou-se, lentamenfce, uma soluçlo de 10,62 g de N-ídíbensiloxifosfinil)-L-fenilalanina em 15 ml de diclorometano» Apés agitação a ®*C durante uma hora, foi adicionado o hidrocloreto do éster metílico de L—leucina Í4,5 g) em pequenas porçSes» A mistura foi agitada a 0*0 durante 5 horas s deixada aquecer até á temperatura ambiente» A mistura foi lavada com ácido clorídrico 1M e a camada aquosa extraída com diclaro-meta.no» A camada orgânica e o extracto foram combinados, lavados com ácido clorídrico ®»5N, água e soluçlo saturada de bicarbonato de sódio e secos CrteuStL >» 0 solvente foi removido de modo a 4 obterem-se 11,2 g de uma. goma» A cromatografia sobre gel de sílicacom solvente acetato de etilashexano ítzl) seguido por solvente acetato de etiloshexano (2sl) originou 4,54 g de sólido» A trituração com hexano <4® ml) originou 4,2 g N—CM-<dihenziIaxi-fosíinil )~L~fenilaXanil 3-Lr-leucina, éster metílico» sob a forma de cristais, p»f= V®-~92*C5 ia3„/~’ 17°±i <c = 1,Θ59, metanol)»

Ao composto anterior (4,θ g) em 5& ml de metanol foram adicionados, gota a gota, 14 ml de hidróxido de sódio IN e a mistura foi agitada durante 5 horas» Foi adicionada uma quantidade adicional de 7 ml de hidróxido de sódio IN e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 horas, arrefecida durante 2 dias a 4°C e concentrada sob vácuo» 0 resíduo aquoso foi extraído com éter (3 vezes com 2Θ ml), e a camada aquosa acidificada com ácido clorídrico 2M e extraída com 2 porçSes da

i :0 —* 50 ml ds diclararaetano» 0 extracta foi seco <Ma^SO^ ?- ε o solvente removido ds modo a. obt.erem—se 3,2 g de uíTi solido branco , A trituração com hexano originou 2,7 g de cristais brancos, p.f. 50-53«C? ία1„/~0 *11°±1 Cc = 1,384, metanol).

Exemplo de Rafersnc ia 11 í N~ C N- C < Fen i1me to x i) carban i 11 -L.~ f sn i 1 a 1 an i 1 -L~2--.(1 -metiletoKi )ql icil 3— (S)-2-amino-S-cic 1 o--jiskíIr -íR)-t,-<2-tiazoiil )propan-lrol

A urna solução de N,W-carbonildi-imidazole C @, 12 g) e® 3 sTíl de dicloroinstana sob árgon foi adicionada uma solução de N-C< fenilmetoKi}carbonil-L-fenilalanil-D,L-2—<i-metiletoxi>glici-na ίβ,3ί g) e® um ml de tetra-hidrofurano s a mistura foi agitada durante uma hora, A esta solução foram adicionados €>,18 g de (S) - 2 - ara i η o - 3 -c i c 1 o- be κ i 1 - < R) -1 - C 2 -1 i a z o 1 i 1) -1 -- (tsrc- bu. t i I d i me t i -IsililoKi) propa.no em um ml de tetra~hidrofura.no, A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, diluída com 3 ml de água. e o solvente removido, 0 resíduo foi diluído com 20 ml de acetato de etilo e 5 ml da ácido clorídrico IN, A camada orgânica foi separada, lavada com 10 ml de ácido clorídrico 0,5N, 10 ml de bicarbonato de sódio saturado, salmoura s seca A solução foi diluída com 1® ml de hexano e filtrada através de urna. almofada, fina de silicato de magnésio hidratado, A almofada foi lavada com 10 ml de acetato de etilo-hexano <1s 1) e o filtrado concentrado até à secura de modo a obterem—se 0,4 g de um sólido espumosoEste sólido (©,22 g) em um ml ds tetra-hidrofurano e €>,35 ml de fluoreto de tetraín—butil)amónio <1,0M em tetra-hidrofurano) foi agitada è. temperatura ambiente durante uma hora, diluído com 2 ml de água e o solvente foi removido, 0 resíduo foi extraído com 1© ml de acetato de etilo e o extracto lavado com 3 ml de ácido clorídrico 0,5N, 3 ml de bicarbonato de sódio

saturado, salmoura s seco ÍNaoS0^)« 0 solvente foi removida e o resíduo cramatografada sobre gel de silíca par meio ds eluiçlo gradiente com acetato de etilo-hexano (2u3) até acetato de etilo-hexano C1 s 1} » As fracções contendo o componente que se moveu mais rapidamente foram combinadas e o solvente removido de modo a obterem-se Θ, i© g do produto do Exemplo sob a forma de um sólido brancos Co:3^' -37°±i (c = 0?6ó@, clorofórmio)= As frac-çSes contendo o componente que se moveu mais lentamente originaram ®5i® g de N-CN-Cífenil!netoxi)carbonil!3-L-fersilalanil-D~2-íi--mstiletoxi )gl icil 3- <S)-2-amino-3-ciclo-hexil-ÍR>-l-í2-tiazoIi D-propan-i-ol sob a forme, de um sólido brancos L« -5-6‘:’±2 (c = 0,639, clorofórmio)«

Exemplo de Refergncia 112 N-CN-C (Fenilmetpxi Ícarbonil 3-L-fenilalanil-1.-2----(1-isopropi1tio)glici1J-(S|-2-aminor4-metil-:::.ÍB.Írin<2-tiaao 1 i 1) pen tan-i -o 1

Uma mistura de ©,5 g W-Πfenilmetoxiícarbonilj-L-fe-nilalanil-L-2-hidroxiglicinaj ’3,624 ml de 2-propanotiol, 0,15® ml de ácido sulfúrico concentrado em 5 ml de ácido acético glacial foi agitada sob árgon à temperatura ambiente durante 3 dias» A mistura foi vertida dentro de gelo—água e extraída com acetato de etilo, Os extractos combinados foram lavados com água e o solvente removido™ 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, seco CMqSO/,) e o solvente removido™ 0 resíduo foi seco sob vácuo elevado sobre hidróxido de potássio sólido de modo a obter-se um óleo viscosa» 0 óleo foi dissolvida sm acetato de etilo e o solvente removido (repetido várias vezes)» A secagem sob vácuo elevado originou 0,46 g de N-l < fenilmetoxi ícarbonil3-L-fenilala-ni I-L--2'- ( isopro-pl 11 io ? g1 icina, sob a forma de uma espumas Espectro ide Massa (BAR)f Calcul (ii+H) , 431 n Encontrada CrH H), 431 =

Ao campas ta anterior < A 515Φ g> em 5 ml de diclaromatano sob árqon foram adicionados 86,3 g de N-etoKicarhonil-2-etoxi- •-1 ,2-di-hidraquinallna (EEDQ) . Após agitação durante 15 minutas? foram adicionados 69,,8 mg de ÍS>—2-amino—4—metil—ÍR> —1—(2—tia20“ lil)pentan-i-ol em 1n3 ml de diclororoetano e a mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura foi lavada com ácido cloridrico 3N, bicarbonato de sódio a 1®%, salmoura e seca íMgSO^í. 0 solvente foi removido de modo a obterem-se 6,180 g de uma espuma. A cromatografia sobre gel de silica de uma amostra de 0,49 g com acetato de e t i1o~d ic1αrame- ta.no (2s3) separou dois diastereómeros. As frseções contendo o componente que se moveu roais rapidamente foram combinadas e o solvente removido. A secagem sob vácuo originou 0,160 -g do produto da Exemplo sob a forma de uma espuma transparente;! *?£ -5°± 1 íc = 1,097, metanol), s 0,10 g de M-EN-CCfenilmeto-xDcarbonil 3“L-fenilalanil-D-2-(isopropiltio)glicil 3-CS>-2-~amxnD~ -4-metil“ÍR)-l~(2-“tia2olil )pentan-i-ol sob a forma de um sólido •7 At brancos ig3n w -34°± 1 <c = !,€>€>, metanol). EMSj?iaÍQ...dg-RexgEl?l£l.ã.......ÃIÃ.

NrcCNHC (FeniImetoxi.)cartaoni 1 5-L-2-(l-metilstoxi ) gl ic i 1,3" C S) —2-amino—3-ciclo—hexil - C R) -1- -C2—piridinil)propan~l~ol

Uma mistura de ®,30 g os M— t E < f sr< 11 me to κ £ > c a r bon i 13— —L-feniXalanil—D,L-2-íi-metiletoKiíglicina, ®.179 g de N-sloxi- carbonil-2-etosi-i,2-di—hidroquinolina CEEDQ) em 1® rol de diclorometano foi agitada durante 3® minutos. Ã solução foram adicionados ®,169hg de CS)-2-amino-3-ciclo-hexi1-CR)-I-C2~pírídinil)-propan-i—al em 2 ml ds diclorometano e a mistura foi agitada de um dia para o outro. A solução foi lavada coro bicarbonato ds sódio a 10%, salmoura, seca CMgSO^) e α solvente removido de modo

a obterem-se β,52© g de sólido» Uma amostra de 1,40 g foi croma— tagrafada sobre gel de si 1ica num aparelho ds HPLC Watsrs-Prsp 5Θ® com solvente acetato de e t i 1 o-d ic 1 orornetano (2s3) como sluente ds modo a obterem-se ®,1® g do produto do Exemplo sob a

*7 A forma de um sólido amorfo brancog ια3^*~~ —27°±;l íc = 1,058, metanol), e ©,©93 g de M-ihl-E Cfenilmetoxi )carbonil 3-L~fenilala-ni 1-1)--2-( 1-metiletoK.i )gl icil 3™ (8) -2-amirm-3-c ic 1 o~hex i 1 - (R) -1 - (2--píridinil)propan-l~ol sob a forma ds um sólido brancos isjp"43 -í-2@°±l ic ~ 1?®55 metanol)»

Exemplo ds Referfncia 114 N-CN-C <Feni 1metoxi )„çarboni 11 -L-fenilalani. 1 .-L.-2--(isopropiltio)qlici1j-CS)-2-amino-5-ciclo-hexil--(R)-l-(2rPÍridlnil)propan-1~oi A uma sdIuçSd de M-Eífenilmetoxilcarboniij-L-fenilala— nil~D5L---2~< isopropil tio) olicina sm 15 ml de ietra-hidrofurano seco sob érgon foram adicionados ©,219 g ds U,N—carbonildi—imida— sole e a mistura foi agitada á tmperatura ambiente durante 2,5 horas» A esta solução foram adicionados 0,254 g ds (S)”2-amino- ~3-cicIo-Ioexil~CR>-í~í2-piridinil)propaR-l-ol e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro» 0 solvente foi removido e resíduo dissolvido em diclorometano e a soluçSo lavada com bicarbonato de sódio a 1Ô% e salmoura» A camada aquosa foi extraída com diclorometano e a camada orgânica s os extractos foram combinados, foram depois secos (Nâ^SO^Í e em seguida o solvente removida. 0 resíduo <0,83 g> foi cromatoqrafado sobra gel de sílica com acatato de atilo a 45% em diclorometano como solvente» As fracçSes, contendo α componente que se moveu mais rapidamente, foram então combinadas de modo a obterem—se 0,26 g

do produto do Exemplo sob a forma de uma espuma sólidas - 7 A

Ca-r· 1 η!-’± 1 =;c = 0,8óS, metanol), e 0,19 g do composto N ~ L Ν~L(fenilmetoxi)carbonil3—L-fsnilalanil—D—2—<isopropiltio)gli— ci 3.1--(-3) — 2—am i n o—3—c ir. lo—hs x i 1 — < R) — 1 — (2—pi r i d i n i 1 > p r d pan—1 —o 1 so b a forma de uma espuma sólida amarelas [α]^ -8°±í Cc = 1,2*35, metanol)»

Exemplo de Referfncia 1Í5 L <S)-1-<Ciclo-hexilmeti 1)-(R,S)-2-ÇCJ 1 a..1-jjimetijetill" d i me t i1siIi13 ox i 3-2-< 2~met i1-4-oi r i miti í n. i 1..)-etil Jcarhamalo de 1, l^ime_tile_tilo A uma suspensão de ©,Θ5Θ g de acetato de acetamidina em 2 ml de etanol foram adicionados 9 5è g de sódio. Após o sódio ter reagido, foram adicionados Φ,ΙΘΦ g de CIS,2E,B>-l1—(ciclo—hexil— iTietil )-5-dimetilamino)~2“CC < 1,1—dimetiletil /dimetilsililloxi3-—3—oxo—4—psntenilIcarbamato de 1,I—dimetiletilo e a mistura foi submetida a refluxo de um dia para o outro. 0 solvente foi removido e o resíduo cromatografado sobre uma placa de gel de sílica de camada espessa com acetato de etilo-hexano íisí) coma solvente de modo a ooterem-se 4 mg de produto sob a forma de uma gomas Espectro de Massa (ionização química)s MH+ = 464=

Exempjo.....de Referencia 116 ÍAS-trans)-5_-C4-l.Ciclg-hexilffietil)-2-oxo~5-oxazolidini13-—4-oxazoiecarbox11ato de etilo A uma solução de 1,# g de í4S-trans)-4-<ciclo-hexiIme- cii)—5—(2—furanil)—2—oxazolidinona em 24 ml de acetonitrilo e 24 ml de tetracloreto de carbono foi adicionada uma solução de 8,56 g de metaperiodato de sódio em è@ ml de água e em seguida 4© mg de mono-bitirato ao dióxida de ruténio. A mistura foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 3 horas.

filtrada através de terra de diatomáceas ε a almofada de filtração lavada com 8Φ ml de diclorometano= A camada orgânica do filtrado foi separada e a camada aquosa extraída com Sô ml da diclorometano» A camada orgânica e o extracto foram combinados, sacos íMa-BO») e o solvente emovido, 0 resíduo foi dissolvido em Z 4 acetato de etilo (3Ô ml) e extraído com duas porçSes de 15 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio, 0 sxtracto aquoso básico foi acidificado com ácido clorídrico òN s extraído com duas porções de 50 ml de acetato de etilo, 0 exlraeto de acetato de etilo foi seco CMgBO^K filtrado através de terra de diatomá-csas s o filtrado evaporado de modo a obterem-se 9 ? 91 g de ácido <45-trens)-4-(c iclo-hexi1 meti1)-Z-oxo-S-oxacolid inocarboxí1ico sob a forma de um sólido espumoso, Q composto anterior CΘ = 11 g) sm 0,5 ítí 1 de tetra-hidro-furano foi adicionado a uma solução de NsN-carbonildi-imidazole C89 mg) em um ml de tetra-hidrofurano e a solução foi agitada á temperatura ambiente durante uma hora, à solução foi adicionado isocianoacetato de etilo (71 mg) e i ,8diazahicic 1 οC5,4,,βJundsc:--7—eno e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 22 horas» 0 solvente foi removido e o resíduo dissolvido sm 1Θ ml de acetato de etilo. Esta solução foi lavada com 5 ml de cada um de ácido clorídrico IN, água, bicarbonato de sódio saturado s salmoura, seca (Ma^SO., > s o solvente removido» 0 resíduo foi triturado com hexano de modo a obterem-se 6Θ mg do produto do Exempla sob a forma de um sólido gomosop -49°±2 (c - 0,409, clorofórmio), s

Exemplo da Referencia 11./ (S) -2-Am i ηο-5-c i cl o- hexil-(R,s)-l~ (b- i sgx a z d li 1) -1- -C l(1,l-dimetilefci Ddlmetilsilil3oxq3pragana

Uma mistura de <ÍS?2R?S> — Ei-íciclG“-hexilmetil)~5~dime— ti lamino)-2-C C (1 l-dimetiletil Idimetilsilil Hoxi J"--3~oxQ~4-penis~ ni1Ucarbamaio de 1,l-dimetíletilo (Θ?1Θ g) e 14 mg de hidroclo- reto de hidroxilamina em 2,5 ml de stanal foi submetida a refluxo durante uma hora e o solvente foi removido= 0 resíduo foi croma- tografada sobre uma placa de camada espesa de gel de sílica com hexano—acetato de etiloíB5siõlcomo solvente de modo a obter-se uma goma. Esta goma foi dissolvida em 2 ml de etanol seca e

adicionaram-se 15 μΐ de cloreto de hidrogénio em dioxano <4N>. A mistura foi submetida a refluxo durante 4 horas sob árgon s a solvente foi removido. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometsno e a solução lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi seca ÍNa^SO.) e o solvebte removido de modo £. 4 a obter-se o produto do Exemplo sob a forma, de uma gomag Espectro de Massa CH!~H-) 339 =

Exemplo de Rsferfpcia.......llfa> i4S~trans?-4-(Cieio-hexiImetil)-5-(2-piridaginil)- -2-0K5501idinona A uma solução agitada sob "árgon de ®,5@ g de (4S-“ trans) - 4— < c i c 1 o— he x i 1 me t i 1) -5- í 2- f u r an i 1) — 2~o- k asolidin on a em 25 ml de metanol contendo Θ«425 g de carbonato de sódio arrefecido até --5Θ°C foram adicionados, gota a gota (durante 3€s minutos), Φ,11 ml de bromo em 1& ml de metanol. Apósa adição, a solução foi deixada aquecer até à temperatura, ambiente (3Θ minutos) e a solução foi filtrada e o filtrado concentrado até à secura de

modo a obter-se C4S-trans)~4-íciclo-hexilmetil)-D-<255-dimetoxi--2-furanil>-2-oxazoIidinona sob a forma de uma goma («3,48 g). u composta anterior C6,48 g) foi suspenso em 3 ml de metanol e adicionaram-se 1Θ ml de ácido acético aquoso a 1%= A mistura foi submetida a refluxo durante i® minutos, arrefecida até á temperatura ambiente e adicionou-se um ml de hidrato de nidrazina, A mistura foi submetida a refluxo durante 1 hora, arrefecida, neutralizada com bicarbonato de s6dio e extraída com acetato de atilo, A camada orgânica foi lavada com água, salmoura, seca (Na„BO„) e o solvente removido de modo -a obter-se uma goma <0,35 g>» A cromatografia sobre gel de sílica com solvente acetato de etilo-hexano <3sl) originou Θ a J. 1Θ g do produto do Exemplo sob a. forma de uma espuma esbranquiçada C higroscópica) % IV;; 2950, 285$* 176®, 1580 cm % Espectro de Massa (1C) 5 (MH1 ) 262? (M+NH4+), 279,

Corno descrito no Exemplo de Referência 64, os compostos dos Exemplos de Referência li, 21 e 27 podem ser feitos reagir com 2-trimetilsililtiazole de modo a obterem-se os seguintes Compostos de Referências U~ i- U" (· Fsn i 1 metox i > car bon 113-L-fen i 1 a 1 an i 1 -L-2- í 2~met i 1 propox i ) -g 1 ic i 1 3 - (S) -2-am in ο-4-me t i 1 - < R) -1 - < 2-1 ia zo 1 i 1 > pen tan -· 1 -o 1 N-CN~CFen i1metoxi)carbon i13-L-fen i1a1an i1-L-2-í1-me t i1etox i)g1i-cil3~<S>"2-amino-4-metil~<R}-l~(2-tiazQlil)pantan-l-ol N-CN-í Fen i1me tox i)carbon i13-L-fen i1a1an i1-L-2—(I-feni1me tox i > g1i-cil—2-amino-4—metil-(R)—1—<2—tiazolil)pentan—1—ol=

Os exemplos que se seguem ilustram a preparação de compostos do nosso invento»

£*êSiEÍ2JL N-tN-CDietoKifosf inil )--L-feniIaianii-L-—leucil 3-<S)-2-aaiinQ-4-metil-(R)--l" -(2-1ia zo1íI)pentan-1-o1 A uma soiuç-lo de 46 mg de N—<L-feniIalanil~L-leu-cil )-~(S)“"2-"amino-4~metil--(R)-l-(2~tiazoIiI )pentan-l-ol em um ml de diclarometano sob árgon foram adicionados 12 mg de trietil--amina seca e 2Θ mg de fosfocloridato de dietilo iclorofosfato de distila)η A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas s em seguida diluída com 1Θ ml de acetato de etilo» A mistura foi lavada com 2 ml de ácido clorídrico 1N3 2 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio e 2 ml de solução saturada de cloreto de sódio» A camada orgânica foi seca e o solvente removido sob vácuo de modo a obter—se um sói ido5 o qual foi lavada com heleno» 0 produto foi obtido sob a forma de um sólido branco5 Cal^ ~43° (c = @?328? metanol)»

Exemplo 2

Nr.C&blDifenoxifosfinil) --L--fsnilalanil--:L::· -1suei 13-C S)-2-aminp-4-meti1-í R)-1--(2-tiazolil)pentan-l—ol A uma solução de 69 mg de N-CL-fenilalanil—L-lsucil)— -•(S)---2-amino“-4“mstil“(R)“l-(2-tiazolil )pentan-l-ol em 2 ml tíe dicloroiBstano sob árgon foram adicionados 18 mg de trietilamina seca e 45 mg de fosfocloridato de dietilo (clorofosfato de dietilo),, A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2

dias (formou-se uns precipitado branco)» A mistura foi filtrada e o sólido lavado com água e metanol» 0 sólido foi seco sob vácuo da modo a obterem-se 9Θ mg da produto sob a forma da um sólido branco» -26° Ce = θ»49, tíimetilsulfoxidc) „

Exemplo 5 N-CM—C Misto x i 3 í f snoxi 3 f osf in i 1 3 -L-f en i 1 a l an i 1 -L·--leucil3-(5)-2-amino-4-mgtil-<R)-l--(2-tiasolil) p-antan-l-ol A uma solução de 92 mg de N-CL-fenilalanil-Lç-lsucil )~ “CS)-2~amino-4~matil-(R}-Í~C2~tia£olii) pentan-l-ol em 2 ml de dχε:1 arometano foram adicionados 45 mg de ácido fosforoclorídrico» éster metil-fsniiico» A mistura foi agitada sob árgon à temperatura ambiente durante 27 horas» A mistura foi diluída com i® ml de acetato de stilo e lavada com ácido clorídrico ÍN (2x3 ml), bicarbonato de sódio saturado Í3 ml) s seco» A solução foi filtrada através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado e a almofada foi lavada com acetato de etilo C2x2 ml>» 0 filtrado foi concentrado sob vácuo de modo a obterem-se ©i 1 g de sólido brancos [g)r^u -4®°±2 íc = ®=622» metanol)»

Exemplo 4 N-.L.N- (Dibutoxifosfinil) -L-f en i 1 a 1 an i, 1 -L-rlguciy ,-<,S2:--2-ami,no-4-meti 1 ziBlzlz. -(2-tiacoliI)pentan-l-ol A uma soluçSo de 4& mg de f^-CL-fenilalanil-L-leucil)--CS)-2~amino~4-metil-CRí-l-C2-tiasDlil)pentan-í-ol em um ml de diclorosnetana sob árgon foram adicionados 12 mg de trietilamina secs & 6 1 :.· 11 mmo 1 e Qtcf fosfocloridato de difouti agitada â temper B Έ \Λ Γ* a ambiente durant e 24 ho diluída com 1Θ ml de acetato de etilo» ώ (íílSUJ. p O Ç CÍ ("* ΐΞ· ™|-~y i de ácido clorídrico 1N? bica «nxsíura tdi iistura Toi lavada com iar”oonaiio 00 bdgiq saturado e cloreto de sódio saturado» A cansada orpinica foi sscs , α solvente removido sob vácuo e o resíduo triturado com hsKsno5 de modo a obter—se o produto sob a forma de um sói ides branco»

Eiíempli N- C N— (D is t a h i f os f i n i 1 > -L- f en i 1 a 1 an i 1 --1..---

Leucil 3-\κ>·

Mnxna-o—cxc io-nes: ΓΚ.ί-Ί' • (2-tiazoliI)propan—1—o1 (S) —v—.3^2. no—3—cic1 til)sililo KiDpropan g de trietila A uma solução de @5òl g de N—<L—feniiaianil—L—leucil>— :iclo—hexil — íR)— 1 —(2—tiazolil>—1—C í t—butil) ídirns-· :5 Hm l_s cr tÍíll-3. c* x ííiu ϊ âUtí do f i 1tro foi Ia- Q de X av3,y ΕΠ» for 5 ml de diclcrometano foram adicionados amina e €>,, i 1 q de fosfocloridato de distilo» Esta mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 28 horas e ens seguida diluída com 3€> rnl de acetato de etilo» A mistura foi lavada com duas porções de 6 ml de ácido clorídrico 0,5N;i duas porçSesde 1© ml de carbonato de potássio a 1®% e seca» A solução foi filtrada através de uma almofada fina de silicato de magnésio io fon acetato de etilo» 0 iquiDo ae iavsqsm roram combinados e concentrados xn vácuo, originanao %j54 g de um sólido espumosos Ε«]_Λ“ em um ?Til de luoreto cie A uma porção de Θ?3 g do sólido tetra—hidrof urano foram adicionados €? = 4 tetra· -n—bu ti 1 anté nio 1M» Esta solu çlo foi sq i tada d? urante L* horas e em segui da dil ulda com ϊ© ml de so 1 uç -Mg ϊ Hítí "...3 '«m bicará banato de SÓdla a 10% .-¾. 28 m i de acetato ds BtllDs A C ΒΐΐϊΒ'ΒΒ orgSn ics. *foi.

separada3 lavada com 5 ml ds cada um de ácido clorídrico €h,5 Ws solução saturada de bicarbonato de sódio e solução saturada de cloreto de sódios seca e filtrada atrvés de uma almofada fina de silicato ds magnésio hidratado» A almofada foi lavada com acetato de etilo e o filtrado e liquido de lavagens combinados foram concentrados in vácuo» originando um sólido» Este sólido foi triturado com hexanoP originando 0=26 g do composto desejado sob o a _ a forma de um séí.ido brancop Lai^ ~5tí‘-‘±4 (c = metanol)»

Exemplo è . CE Hetoxi 3 Ef eni Imetoxilf osf ínil J-L—fenllaianil-L—. -leucil 3-<S)-2~areino~5--^cicIo-·heκil-(R)-i~ -{2~tia2olil )propan-l-ol A uma solução de ©P12 g de N—(L—fenilalanil—L—leucil >~ “<S)-2-amino-3-ciclo-hexil-(R)-l-(2-tiazolil>-l~L Ct-butil)Cdime- ti1> si1iloxí Jpropano em 2 ml de diclorometano foram adicionadas SS mg ds ácido fosfcroclorídrico^ éster metil“fsnilmetilíco? s 32 mg de 2', 6-dimstrL Ipiridina» Esta solução foi agitada sob ârgon durante 2 horas e adicionaram-se ®?22 g ds ácido fosforoclorídri-co, éster metil-fenilmetílico» Após agitação durante 2 horas a mistura foi processada como descrito no Exemplo 5» originando ©316 g de um sólido espumoso branco» 0 procedimento anteriormente referido foi repetido utilizando ©524 g de N-ÍL—fenilalanil-L-leucil )-<S)-2-amino-3-·· -ciclo-hexil —(R> — 1 — (2—tiazolil> — I — rCt—butil)(dimetil/sililoxi3 — propsnoj ©51 g de trietilamina e €>,22 q ds ácido fosforoclorídri-coj éster meti1-fenilmetilico» originando ©527 g de um sólido espumoso branco» 142 -

Os dois sólidos anteriores foram combinados e cromata-grafados sobre gel de sílica com acetato de etiloshsxano originando €b, 18 g N-Ci^-CRí-CniaiDxijCfenilmetoxijfosfinilj-L-íe-nilalanil-L-leucil 3—<3>~2~amina-3-cicIa-ttexil~íR}“l~<2~tiazQlil )--Í---L í t-butil) (tíiíRetil )sililoxi3propano e ®?18 g N-EN-CSí-Cmeta--· wi 3 ifení ImetoKi jf osfinil 3 “L-f eniialanil-t^leueil 3-<8>--2-amino-3~ -ciclo— hexil~<R>—l-<2-tiazolil > —1—C í t-butil) (diíoetil )sililoxi3~ propanoj sob a forma de sólidos espumosos brancos„

Cada um dos diastereómeros anteriormente referidos foi tratado separadamente mas de maneira id?nticas como se segues Uma porção de 80 mg foi dissolvida em @,5 ml de tetra-hidrofurano, a solução arrefecida até ®°C5 e adicionaram-se ô„2 ml de fluoreto de tetra-n-butilamónio In em tetra-hidrofurano^ Após agitação durante 1,5 horas cada misturai, fo processada como descrito no Exemplo 5, originando 5® mg de M-CN~CR>~Eínetaxi iCfenilmetoxil-fosf inil 3—L-fenilalanil-L-leucil 3- CS>~2—amind-3-cic 1 o- hex 11 - (R)--l~(2“tiazolil)propan-l-ol sob a forma de um sólido branco; -45°±2 (c = ®s48? metanol); e 50 mg de M-lN-<8)-Cmetoxij~ Cfsnilmstoxi j fosf inil 3-L-f eni lalani 1-L-leuci 1 3-<B>-2“-amino~-3-ci-clo-hexil-(R)-l~(2-tiazQlil)propan-l-ol sob a forma da um sólida V ^ branco; Eα 3 ' -5® °±2 (c = ®, 253, metano 1) a

Exemplo 7 fc0^i.Hidm,xiJlfmQKi 3 fosf in i 13 -L-f en i 1 a 1 an i 1 ~t.~ -leucij1-Íg> ~2-am i nq-3-c i c1o-hexi1-(R>-í--„<2-ti azo li 1.) propan -1 -o 1

Como descrito relativamente ao Exemplo 6;, uma mistura de ®,31 q de N~CL-fsni1alani1-L-leuci1)-(S)-2-amino-3-cic1o-he-xil-ÍR>—1—Í2—tiazolil )-1-11 ít—butil > íriimetil)si 1 ϊ 1 oxi3propano em 2 ml de dicioromeiana e 61 mg de trietilamina foram feiyos reagir com ©ç1Ξ g de ácido fosforocloridrico, éster metil-fenílico, originando ôs41 g de N-CM-í Craeioxil t f enoxí J f osf inil 3-L—f sni laia··· ni 1 -L-1 euci 1 j-<S)-2~amino-3-eiclo~hexil--<R)-í-"(2-tiazolil)propan--l~ol sob a forma de um sólido branco espumoso § ls --4©°±2 (c = β?429ρ metanol)=

Uma porção de Θ531 g do sólido anterior foi dissolvida em €>55 ml de tetra-hidrofurano e foram adicionados ®542 ml de uma solução 1M de fluoreto de tetra-n-butilamónio em tetra-hidrofu- rano. A mistura foi agitada durante fe horas e síb seguida diluída com 2Θ ml de acetato de etilo e 5 ml de bicarbonato de sódio a !©%„ A camada orgânica foi lavada com 5 ml de cada um de ácido clorídrico bicarbonato de sódio saturado e cloreto de sódio saturado, A camada orgânica foi seca e o solvente removido in vácuo0 resíduo foi agitado com 1Θ ml de éter dietílico seco durante 0?5 horas e em seguida filtrado,, originando θ322 g ds do —- produto desejado sob -a fornia de um sólido brancop [«3niu -óó°±i íc = 13 i 59,, metanol ) =

LKempJ f eni imetoxi .3 f osf inil 3 -L-f eni lal.ani 1-L-. -leucil3--(S>-2-amino-4-Hietil-CR)-l-zl Zziimi liaen tan-i -o j

Uma porção de ©;,81 g de CS>-2-terc-buto;··;icarboni 1 amino--4-met.il-íR3S)“l--í2-tienil)pentan-l-ol (Exemplo de Referência 55) foi dissolvida sm 5 ml de diclorometano e adicionaram—se 2,1 m.l de ácido trifluoroacético. Esta mistura foi diluída durante 3 horas e em seguida vetida dentro de 15 ml de hidróxido de sódio 2N arrefecido com gelo,, com agitação = A mistura foi diluída com 25 ml de diclorometano» a camada orgânica foi separada e a camada 144

aquosa extraída com 2Θ ml ds diclaromebano» A camada orgânica s o extracto foram combinados, lavados solução saturada de cloreto de sódio» sscos s o solvente removida in. vácuo, originando 1 ,®6 g ds um sóldo branco» Uma porção de 0,23 g deste sólido foi dissolvida em 5 ml de etanol e adicionaram-se 5 ml de hidróxido ds sódio 1N„ Esta solução foi submetida a refluxo durante 16 horas e em seguida concentrada in. vácuo» Q resíduo foi extraída cara duas porções de 1® ml de diclorometano» Os extractos foram combinados, secos s α solvente removido in. vaçua5 originando 0,2® g de (B)-2-smino-4-metil~í R>-i-(2-txenil)pentan—l-ol sob a forma de um sólido branco»

Uma porção de ®?i g do sólido anterior foi acoplada com M-(terc-butoxicarbonil)-L-fenilalanil-L-leucina como descrito no Exemplo 43,, originando Θ,31 g de sólido» Este sólido foi dissolvido em 2 ml de metanol e adicionou-se 1,@ ml de hidróxido de sódio IN. Após agitação durante uma hora, a mistura foi diluída com 2 ml deágua e o metanol foi removido in vácuo» A suspensão aquosa foi extrída com acetato de etilo» 0 extracto foi lavado com solução saturada ds cloreto de sódio, seco s filtrado através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado» A almofada foi lavada com acetato de etilo e α filtrado e o liquido de lavagem foram combinados» 0 solvente foi removido e o resíduo triturado com hexano, originando ®527 g de N—CM-(terç-butoxicar-bon i 1) -L-fen i 1 a 1 an i 1 -L-1 euc i 13 - í S) -2-amino-4-met i i -- C R) - í - (2-1 i e-nilJpsnfcan-l—ol sob a forma da um sólido branco»

Este sólido foi agitado num mistura de 2 ml de dícloro-metano e um ml de ácido trifluoroacético durante 3 horas» A mistura foi diluida com 1Θ ml de diclorometa.no» lavada com carbonato de sódio iN? seca e α solvente removido in. vácuo. G resíduo foi feito reagir com ácido fosforoclorídico. éster 145

metil-fenilmetílico, como descrito no fc.xemplo 63 originando o produto desejado sob a forma, de um sólido branco espumoso»

Exemplo 9 NHIN^iCPjLetOKif psf inijL^ -L-1 euc i 1 3 - (S) -2-amin,o-4-me t i 1 -(R)-i-—(2—tiasolil)pentan—l-ol □ N~CN-< tsrc-butoxicarboni 1)~L~pro 1 i 1 -1.-fenilalanil-L-~ 1 euci 1 3 - < S) -2—aminD~4-meti 1 - (R) -1 — C 2-tiazo 111) pen tan-1 -o 1 (Exemplo de Referencia 48) foi desbloqueado com ácido trifluoro-acéticosdiclorometano Clsi) è temperatura ambiente s a mistura foi concentrada in vácuo» 0 resíduo foi feito reagir com fosfa-rocloridato os distilo sm diclorometano» na presença de trietil-amena coíbo descrito no Exemplo 1, de modo a obter—se o composto desejado sob a forma de um sólido»

EssaBla-là N™ í N- (D1. f en ο x i f osf i η A1) -L- f en A 1 a I anil -L-2- (2-metilpro-poxi)glicil3-(lR,2S)-2-amino-5-ciclO"hexil-=lzJ..2=tia2Plil.) oropan-1 - o 1 0 N-C (fenilmetoxilcarbonil )-L-fenilalanil-L-2-(2-nietil--· propoxi)ylicilj~(1R?2S>—2—amino-3-ciclo—hexi1—1-(2—tiasoii1)pro-pan—l-ol foi desbloqueado com brometo de hidrogénio anidra em ácida acético glacial à temperatura ambiente e a mistura foi concentrada in vácuo, 0 resíduo foi feito reagir com fosforoclo™ rxdato de difenilo em diclorometanas na presença de trietilamina como descrito no Exemplo 2S de modo a obter—se o composto desejado sob a forma de um sólido»

Exemplo 11 ζί^ΐΐΕΠΜΜΜύά~Ιζ1^£Ϊ12— -CS)-2-amΙηο-4-wS ti1-<R)-l-(1-metil-iH--1s2g4-triasol-5-il)oen tan-1—q1 0 N-CN-C terc-butoxicarboní1)-L“fsnilalaniI“L-leucil3-(g)-2~amino-4-meti 1— í í-meti 1-IH-i ?2s4-triaso 1---5-11) pentan- -í-ol foi desbloqueado com brometo de hidrogénio anidro à temperatura ambiente s a mistura foi concentrada in vácuo, 0 resíduo foi feito reagir com fosforocloridato de distila em diclorame-ts.no, à temperatura ambiente3 na presença de trietilamina como descrito no Exemplo í, de modo a obter-se o composto desejado sob a forma de um sólido,.

feiisiQÊliLiS N-r N~(D1e to x i fosf i n i1>-L-fenilalanil-L-2-(2-metil- prQpoxi?qIicil3-(S)-2-aiBÍno-4~fíjgtil-CR)-l~( í~ -metil-ÍH-1 «2,4-triazpl-5--il )pentan-l-ol 0 N-CN-Cbenziloxicarbonil)-L-fenilaianil-L~2-<Ξ-meti1-propoxi)glicil3-íB)-2”amino~4-mstil™CE)~l-Ci-meti1-ÍH-ls2s4-tri-azol-5-il>pentan-i-ol foi desbloqueado por agitação com paládio sobre carbono em etanol sob uma atmosfera de hidrogénio, A mistura foi filtrada sob azoto para remover o catalisador s α filtrado concentrado in yscuo» D resíduo foi feito reagir com fosforoc laridato de distilo síti diclorofnetano5 à temperatura ambiente, na presença de trietilamina como descrito no Exemplo 1, de modo a obter-se o campasto desejada sob a forma de um sólido.

fcxemplo lá N~EN~(Pigtpxifosfinil)~L-fgnilalaniI~L~2-<2~$gtil- prgpQK j) g liei 1, l-JSl-2Tafa.ingr^.ímiL·^ >- íz. -<2-tiazolil ),prppan~l~ol 0 N- l N- í bsn si 1 o>; icarbon 11) -L-f sn i 1 a 1 an. i 1 -L-2- C 2~ms ti 3. ~ proppx i ) g 1 ic i 1 ϊ ~ < S)—2--amino-3-f en i 1 - C R) ~ 1 ~ (2-1ia2o 1 i 1) prppan-1 ~ρ 1 (Exemplo de Referência 63) foi desbloqueada par agitação em etanol sob uena atmosfera de hidrogénio com paládio sobre carbono. Esta mistura fai filtrada sob azoto e o filtrada concentrada In vácuo. 0 resíduo foi feito reagir com fosforocloridato de dietilo em cicloromstano3 na presença de trietilamina como descrito no Exemplo I, originando o composto desejado sob a forma de um séI ido.

Exjtfflpjp......1,1 i- N~ vQ ie tox i f os f in i 1) —t-~fen i I a I an i 1 —L-2-- (c ic 1 o- ~Mniloxi Lg..l..ic.i.ll~ÍS.)-2-amino;"4-metil-(R)-1 --(2-tiazolil)pentan~l~ol □ N--“LN~Cbenciloxicarbonil /-L~fenilalanil-L-2-(ciclo-h®" i 1 ο x i ) glicil j~ (S) -2—am in o—4 -me t i I - < R) — 1 - í 2-1 i a za 1 i 1) pen t an—1 —o 1 (Exemplo de Referencia 65) foi desbloqueado por agitação em etanol sob uma atmosfera de hidrogénio com paládio sobre carbono,. Esta mistura foi filtrada sob azoto e o filtrado concentrado in vácuo. 0 resíduo foi feito reagir com fosforocloridato de dietilo em d ic lorometa.no 5 na presença de trieti lamina como descrito no Exemplo 15 originando o composto desejado sob a forma de um sólido. TV - <v bxemplo lia N-CN.r ΐ Dif enpx ifosf i^li.-L^50Ílgl.aml-Lr2-Íl-m^l-:. -etDKi)q1ic i13-< S) —2,—a.mino—4~me t ij,( Rjjrl ~ -12-tiazol ilj^en tan- l^Sl 0 W-CH~ (b en 2 i 1 ck icarbon i 1) -L-fen i X a 1 an 11 --1..-2- < 1 --meti X --· stoxi )glicil 3-<S)-2—amino~4-metil-(R>-l-<2-tia2olil )psntan-l-ol (Exemplo de Referência 66) foi desbloqueado por agitação com paládio sobre carbono em etanol sob uma atmosfera de hidrogénio» Esta mistura foi filtrada sob asoto e o filtrado concentrado in vácuo. O resíduo foi feito reagir com fosforocloridato de dite— nila em diclorometanoy na presença de trietilamina como descrito no Exemplo 15. originando o composto desejado sob a forma de um sò lides» ixgJBBlB-íâ N-CN—(Bietoxifosfinil)-L—fenilalani1—L-metio-Dll.J-lS) -2-aming-4rffiet.il - (R ) -1 -—(2~tiazolil)pentan-l-ol ft uma suspensão de ®s317 g de N-EM- (terc-fautoxicarbo-ni 1) -L-feni 1 alani 1 -L-metioni 1 J - (S) -2-amino-4-meti 1 — (R )-1-- (2-tia— zolil)pentan-l-ol (Exemplo de Referência 7Θ) numa mistura de 3 ml de diclorometano e 3 ml de ácido trifluoroacético» foram adicionados 3 ml de tetra-hibrofurano seco» Esta mistura foi agitada durante uma horas em seguida concentrada in vacuo até se obter um óleo» Este óleo foi triturado com 3 ml de hidróxido de sódio 1MS originando €b, 15 g de sólido» o qual foi recolhido e lavado com com água» 0 sólido foi dissolvido em 2 ml de tetra-hidrofurano e adicionaram-se 34 mg fosforocloridato de distilo e @95 ml de trietilamina» A mistura foi agitada durante 2 horas» em seguida o

ΙΗ-Ύ salvente foi removida in vácuo originando uma goma, Esta goma foi 2 ml de aueta Lo de e L z 1 u e lavada com ácido ci ii r i. c o ato de s òà ίο 1 í‘4 a camada o rQdfílCd 7 Ο X SECâ TOX bSt:a. removido tD f X Q i Π and o &, 14 g de uma goma. Esta. q orna ía sobre placas gel de siixca de camada es d i5501 V1 d3. sTí 2 2M b bicarbonat t"Ui. gU* ..... i àLuUo com acetato de eti.Iosete.noi (19s!) como so 1 venter. originando 4 O ífjQ do produco Q85S j âOO n

Análise L-a.lcuIa.de. s Cs ol?V§ H? ό?Βρ N5 Io54p P5 4^ò Encontradas C5 52,2§ H5 ό5ό| N5 9s3p P, 4,5 =

Exemplo M-CM-C ΐθ-metoxi-1 π o 2~dioxafosforin-2-i1) -ρ-óxido3-L-“lí sni lalani 1— L—leuci 13 — {S)—S—amino~5*-ciclo-hsxil — -(R)-l-(2-tiasolil)propan-l-ol 1 eu.- A uma suspensão de q d e N— < L—fen i 1 β. 1 an i 1 · cil) - CS) —2-e.mino-3-cic lo-hexi 1- íR)-Í-C2-tiazolil )-l —l < t-butil )·-CdimstilísililoxiJoropano em 2 ml de diclorometano foram adicionados 4Θ mg da triatilamina seguido por 56 mg de 2—clora-5-me- tOKÍ-1,3,2- ~d x o >í a f os f o i riiiuna, 2-ókíuíj. hsta fflistuí ra foi aoitada durante 15 horas* OH) seguida diluída COiTi 15 ml de acetato de .d a., A goma residual foi inando IA i w V J i ·· g de um sóixdo ilvido 0il> U.fB ml de tetra- te w L_- e ao ic xonaram—se ;ÍO 1M em te tra-hidrofura- horas OQ e em seguxda. a t o de SÓd ÍO a 10% e 10 ml .c^iBcSCl-rã. tui^Q-Síl XC-a foi, "~-S O aΓ* a Q S ;zr J.âVSU-5 U-Oíll etilo e lavada com 5 ml de ácido clorítiico 1N = 2x0 ml de carbonato de sódio a 10% e 5 ml de solução saturada de cloreto de sódio, A csísaoa organxca foi. seca e eva.p? lavada com hexano a seca in vácuoar espumoso branco, Este sólido foi dii riGji Ιΐΐ'Ξ- ιϊ* X rg ir. Lí Γ S fui tf.y I lSO-3 CíQ Y~ <zk\ ? tír: diluída com 5 ml de solução de bicar! ,-4.- 5 ιτιΐ de ácido clorídrico ®,5N, 5 m 1 de solução saturada de bicarbonato de sódio, 5 ml solução saturada de cloreto de sódio e seca» 0 solvente foi removido tn vácuo e o resíduo triturado cosi éier-hexanos originando 0,16 q do composto desejado sob a forma de um sólido branco? -46°±í (c = Θ,/ítí, metanol)»

Os compostos dos Exemplos de Referencia 35, 37, 45, 4ó, 40, 57, 58 e 59 podem ser desbloqueados como descrito no Exemplo de Referência 49 e feitos reagir com fosforocloridrato de dietilo como descrito no Exemplo 1, de modo a obterem-se os seguintes compostos £ N-lW- (Distoxifosfinil >-L-f eni lai anil-t-leucil j-CS)-2-ãiBÍno-3-fe-n i 1 -- < S > -1 í 2 -1 i a 2 ο I i 1) propan - X -o 1 ί4~Ε{4-\0ΪΒΐοχίίθΒίinil >-L-fenilalanil-L-leucil 3—{S}-2-aminQ—3—fe-n i 1 — í R) — 1 - {2-11 a ε o 1 i 1) propan -1 -o 1 N—ΓΝ—(Dietoxifosf inil )-L-fsnilalanil~Lp-hÍ5tidilj-(S)-2-aniinD-4“ -me t i 1 — (S) -1 - (2 -1 i a 2 o 1 i 1) pen t an - í —o 1

N-EN-(Dietoxifosfinil>-L-fenilalanil-L-histidil3-(8)-2-amino~3--c i c1o~hex iI-(R)—1-< 2—ti aso1i1>propan-1—οI M-EN-(Dietoxifosfini1J-L-prolil-L-fenilalanil—L-Ieuci13-(5)-2-“âmino-4-meti1 — CR> —1 — <2-tiaso1i1)propan-1~o1

Li“ Γ ijl— (D i e t o x i f os f i n i 1 > -L- f en i 1 a I an i 1 -L— 1 euc i 1 3 - C S > -2—am i n ο-4-sne-til-CR,S)-1-í 2-fu ran i1)pen tan~1-o1 fv--LÍM~CDietnKÍf osf inil >-L-f enilalanil-L-leucil j-5-t CS)-2-amino~ - (R, S) —1 —hidroxi—4—meti 1 pen ti 1 3 —2—t.iaf enocarboxamida Ν™LΝ-(Dietoxi fosf iniI) -L—f eni 1 ai aniI-L-leuci 1 j — (b) -2-amino~4~me~ t i 1 - (R , B) -1 - C 2-t í en iI> pen tan-i-o1

ÍxêíSEÍoJLS H-IH- (DietPKifpsf i.o.i.1 )-L-feniialanil-L-l.guc -2-amino~5-c ic 1 o-hsx i l-(R)~l-< 2-f urani 1) ,prop,an-l-ol, A„ (S)-Ci—(Ciclo—hesilmetil>-2—<2-furani1>—2-OKoetiIJcarbamato ds 1 , l~dimetiletilo

Uma solução de 1,57 g ds N-metil—N-N^-i-butoxicarbo™ nilj-L-ciclo-hexilalaninamida em 15 ml de tstra-hidrofurano seco foi arrefecida até -78 °C sob árgon. à solução foram adicionados, gota a gota» 5,9 mi de bi.itii secundário-1 itio (®,85rf em hsxano)» A mistura viscosa foi agitada a -78*0 durante í,5 horas e em seguida aquecida até ®°C e agitada durante 5 minutos» (BoIuçSo A)

Uma solução de ©,73 ml ds furano em 5 ml de tetra-hidrofurano seco foi arrefecida até ®°C e adicionaram-se 3,8 ml de n-buti 1-1 itio (2,35f1 sm hexsno) „ A suspensão amarela foi agitada a 8°C durante 1«7 horas s, em seguida» deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante 15 minutos» íSolução amarela B> A solução amarela B foi adicionada à solução A e a mistura agitada a €?C*C durante 175 horas» A mistura foi temperada com 5 ml de cloreto de amónio saturado aquoso s o solvente tetra—hidrofurano removido sob vácuo» 0 resíduo foi diluído com 5© ml de acetato de etilo 2® ml de ácido clorídrico IN» A fase orgânica foi separada e lavada sucessivamente com 2© ml de ácido clorídrico IN» 2® ml ds água, 2© ml ds bicarbonato de sódio saturado, 2© ml de salmoura s seca sobre sulfato ds sódio» 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a oterem-se l,ó3 g de uma

goma castanho-clara. Esta goma foi dissolvida em éter-hexano C1 !,·5) e a solução foi filtrada através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado» A -almofada foi lavada com étsr-—heK-ano Íis5> e o filtrado concentrado» 0 resíduo foi triturado com hsxano de modo a obterem—se í,23 g de cristais- amarelo-claros s Cajp”” +41°±i (c = 1,14, metanol)» B(S) -2~ C M—terc-ButoMicarboni 1) amino-3-cic lo-hexi 1 -{R,8>-1~ -\2-furani1)propan-i-o1

Uma solução de ©,16 g de CSí-Cl-íciclo-hexilmetil>~2~ -í2-furani 1)~2~oxoet,í 1 Icarbamato tíe 1,1-tíimetiletilo de 2 ml de tetra-hidrofurano e 0,2 ml de metanol foi arrefecida até ©°C sob árgon 3 adicionaram—se 23 mg boro-hidreto de sódio» A solução foi agitada a ©°C durante uma hora e temperada com 2 ml de cloreto de amónio aquoso saturado» 0 solvente orgânico foi removido sob vácuo s o resíduo diluído com com 5 ml de cloreto de amónio aquosa saturado» 0 solvente orgânico foi removido s-ob vácuo e o resíduodiluído com 5 ml de água e extraído com 1Θ ml de acetato de etilo» A camada orgânica foi separada, lavada sucessivamente com 5 ml de ácido clorídrico ô,5N, 5 ml ds bicarbonato tíe sódio saturado, 5 ml de salmoura e seco sobre sulfato de sódio» 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a obterem—se ©„ 19 g de um só1 ido gomoso» 0,, (48-trans) -4— i Cic lo-hexi Imeti 1 > -3- (2-f urani 1 > -2—oxasol idona A uma solução de © ,23 g ds íS)-2-(N-terç—butoxicarbo™ nil >amino-3-ciclQ-hexil-(RfS)~l~(2-fu.ranil>propan—l-ol em 3 ml de diclorometano foram adicionados ©,©6 ml de ácido trifluoraacé-tico» A solução foi agitada durante 23 horas á temperatura ambiente, lavada com hidróxido de sódio IN, seca sobre sul farto de sódio e q solvente removido de modo a obterem—ss θ?17 g de sólido,. D. (S) -2-Am i ne—3—c ic Io-hex i1 — (SR > — 1 — < 2- f ursn i 1) propan-1 -o 1

Uma -amostra de ®, 15 g de (45-t.rans) -4- (c ic I o-hex i 1 nte-til ) -5-(2~furanil )™2"-oKa2oIídona foi dissolvida numa mistura de 3 ml de stanol e 3 ml de hidróxido de sódio IN» A solução foi submetida a refluxo durante durante 17 horas, diluída com 3 ml de água e concentrada sob vácuo para remover o stanol= 0 resíduo aquoso foi extraído com duas porções de 5 ml de diclorometano e os extractos secos sobre sulfato de sódio» 0 solvente foi removido de modo a obterem—se 0,15 g de sólido, o qual foi lavado com hexano de modo a obterem-se ®, 13 g de sólido brancon ls - í ®°±2 ic ~ 0,507, metanol)» E. ·, Uma mistura de 0,12 g de diclorofosfato de fenilo e 0,12 g de inidasole em 2,5 ml de diclorometano foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora s em seguida arrefecida até 15°C sob ãrgon» Foi adicionada H~ \ terc—bu tox icar bon i 1 ? -L—f en i 1 a 1 an i 1 --L~ -leucina (0,21 q) em porções e a mistura foi agitada durante uma hora» â mistura anterior foram adicionados 8® mg de ÍS)-2-amino---3“Ciclo-hsxiliiistil-<R)-i“(2-furanil ipropan-l-ol em ô,5 ml ds diclorometano» A mistura foi agitada a -15°C durante 23 horas, e diluída com 15 ml de acetato de etilo e 10 ml de ácido clorídrico 0,5N. A cainda orgânica foi separada e lavada sucessivamente com 5 rnl de ácido clorídrico 0,5N, 5 ml de hidróxido de sódio IN, 5 ml de salmoura s seco sobre sulfato de sódio» 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a obterem—se ®,24 g de sólido» Este. sólido foi dissolvido em 2 ml de metanol e um ml de hidróxido de sódio IN e a mistura foi agitada durante uma hora» A mistura foi diluída cora 4 ral de água e concentrada de modo a remover o metanol» 0 resíduo foi extraído com 1® ml de acetato de etilo e o t.racto seca sabre sulfata de sódio. 0 extracto fai filtrada através de uma almofada fina de silicato de magnésio de silicato de magnésio hidratado e a almofada lavada com acetato de etiio» 0 filtrado foi concentrado sob vácuo de modo a obterem—se 0,16 g de sólido5 originando a lavagem do sólido com hexano 0,15 g do produto da Exempla sob a forma de um sólido brancos ~31°±2 í c - & , 58me tan o 1) =

Como descrito no Exemplo de Referência 48, o composto anterior ests dicloromstano é tratado com ácido trifluoroacético da modo a obter-se N- < L-f en i l a 1 sn i 1 -L-1 euc i 1) - < S) -2-ami no-3~c ic 1 o-hex i 1 me-til-(R)—í—í2~furanil)propan—1—ol sob a forma de um sólido. Este sólido (Θ;, 1® g) em diclorometano foi feito reagir com fosforo™ cloridato de dietilo como descrito relativamente ao Exempla 1 de modo a obter-se um sólido branco. i>ísamla_ii

M-lH-ÇDietoxifosfinil)-L-f enil ai ani 1-1.--1 eucil 3-(S)--2—am i n o—4—me t i 1 — < R > — 1—(2-itn ida so 1 i 1 ? psn tan-1 ~o I

Uma solução de 18,4 g de 1-CC2-C trimetilsilil )etoxi3cne— tili-lH-imidazols em 8® ml de tetra-hidrofurano sob árgon foi -arrefecida, -até -78°C e à solução foram adicionados 37,2 ml de n-butil-litio em hexano (2,511). Após agitação a -78°C durante 1,5 horas, o banho de arrefecimento foi removido durante 5 minutos, e a mistura temperada com 3® ml de solução saturada de cloreto de -amónio. 0 tetra-hidrofurano foi removido sob vácuo e o resíduo aquoso diluído com 30 ml de água e em seguida extraído com 3®® ml de acetato de etiio. A camada orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio saturado (50 ml), solução saturada de cloreto de sódio a seca CNa?S04>. 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a obterem—se 29,0 g de um óleo âmbar„ A cromatografia sobre gel de sílica com acetato de etilo—bexano (2s3) originou 8,2 g cie sólido. Este sólido foi cromatografado sobre gel de sílica com acetato de etilo -hexano (352) coroo eluente de modo a obterem-se 4,1.4 g de <S>~2—< t—butoKicarbonil )affiino-4-snetii —íR>-l“<2-CW—C2— -(trimetilsilil)etoKijrostil3iffiida*olil>psntan-Í-Ql sob a forma de

*7· A um sólido branco5 ->-8°±2 íc = Θ,083r, metanol). A Θ521 g do composto anterior em um ml de diclorometano foram adicionados ôs39 rol de ácido trifluoroacético e a solução foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente sob árqon = A mistura foi diluída coro 1Θ rol de diclororoetano e vertida dentro de hidróKido de sódio IN arrefecido com gelo. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com diclorometano. A camada orgânica e os extractos foram combinadoss secos ÍNa„S0^> e o solvente removido de modo a obterem-se Θ, 15 g de (S)-2~amino~ “4--metil-\R>-l-(2--£N-L2-( trimetilsilil )etoxi3metil limidasolil pentan-í-ol sob a forma ds um sólido branco.

Uma mistura de ô?'í3 g de diclorofosfato de fenilo e ©?2© g de imidazole em 4 ml de diclorometano foi agitada durante õ,5 horas e em seguida arrefecida até -15*0, A esta mistura foram adicionados Θ?23 g de W-t-butoxicarbonil-L-fsnilalanil-L-leucina em ô;,5 ml de diclororoetano e a mistura fcsi agitada a ~Í5°0 durante 1,5 horas. A esta mistura foram adicionados €>,15 q kB ) —2—arom 0—4—meti 1 — i R) — 1 — (2—LjM—12— í t rime ti I si 1 i 1) etoxi 3 me ti 1 jim~ idasolil)pentan-l-ol em €>s5 ml de diclororoetano. A mistura foi aqxtaoa a — í5'-'C durante 18 horas s à temperatura ambiente durante 3 horas. A mxstura fox diluída com 3& rol ds acetato de etilo, lavada com égua,, bicarbonato ds de potássio a solução saturada ds cloreto de sódio e seca CNs^SO^), 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a obterem-se €>.,24 g de w-CN-Ct-huto- xicarboníl)-L-fenilalanil-L“leucil3-(8>-2-aminp-4-ffietil~iR)-i-(2-

-lM-C2-< trimetilsilil líostoxilmatil 3imidacolil) pentan-í-ol sota a forma de um sólido branco» 0 composto anterior foi dissolvido em um ml ds tstra---hidrofursno» A esta solução foram adicionados um ml de fluoreto ds tetra~n~butilamónio em tetra-hidrofurano (1?©M)S θ,2 ml de trietilamina e «?2 ml de água» A mistura foi submetida a refluxo durante 24 horas» Foi adicionado um m1 suplementar de fluoreto da tetra-rv-butilamónio em tetra-hidrofurano Í1M) e a mistura foi submetida a refluxo durante 24 horas» Após a adição de um ml da água, o tetra-hidrofurano foi removido sob vácuo e o resíduo aquoso extraído com acetato ds stíla» 0 sxtracta foi lavado com água e solução saturada de cloreto de sódio, seco CMa^SO*) e o solvente removido» 0 resíduo í€>,169 g) foi cromatografado sobre 15 g de gel de sílica com acetato de etilo como elusnts ds modo a obterem-se ó€> mg de N--EN-<t“bufcGxicarbonil>—L—fenilalanil~L—leu-~ cil j"~(S)-2”afliino-4-metil~(R)“l-<2—imidazolil)pentan-l-ol sob a forma de um sólido branco» D composto -anterior em diclorosnetano e ácido trifluoro— acético foi agitado durante 2® horas à temperatura ambiente e processado como descrito relativamente ao Exemplo de Referencia 49 de modo a obter-se N-(L~f en i1a1ani1~L-1suci13-(S)-2-amino-4-—metal—CR)—1—i2—imidasoli1ípentan—1—ol sob a forma de um sólido branco» Do mesmo modo que relativamente ao Exemplo í, o composto anterior foi tratado com fosforocloridato de dietilo de modo a obc-Bf se o produto do Exemplo sob a forma de um sólido branco» N-CM-tDi-isopropilPxifQsfinAl /-L-f enilalanil-L·-· —leuci1j~(S)—2—aminp"4—meti1-(R)—1— -<2-imida?QlAI)pgntan-i-ol

Uma amostra de Θ,ί© q de W—CM"(t~butco;icarfaonil)—L--fa·--nilalanil-L-leucil 3-<S>-2“-amino-4-meti 1-(R> —l — <2-CN-E2~( trimstil-sililíetoxiImetillimldazolil>pentan-l-ol em um mi de dicioroíne-tano e 0518 ml de ácido trifluoroacético foi agitada durante 2Θ horas a processada do mesma modo que relativamente ao Exemplo de Referfncia 49 de modo a obterem-se 55 mg de N-CN-íL-fenilalanil” —L—Ieuc i1) — < S)-2—amino—4—mefcil — <E)-l-í2— L N—L 2— < trime ti1s i1i1)eto~ Kilmetiljimidasolil)pentan-i-ol sob a forma de um sólido branco. 0 composto anterior foi feito reagir com fosforoclori-dato de di-isopropilo como descrito re1ativamente ao Exemplo í, de modo a obter-se N—CN-Cdi-isQgropiloxifpsfinil)—L-fenilalanii--L~leucil-íS)-2-amino—4-meti1-CR} —Ϊ-C 2-CN-C2-C trimetilsi1i1)eto— xilmetil3imidasolil)pentan-1—ol sob a forma de um sólido branco. 0 composto anterior <5® mg) foi dissolvido em um ml de tetra-hidrofurano e adicionaram—se um ml de fluoreto de tetra—n--butilamónio em tetra-hidroíurano (1S0M)5 o?2 ml de trietilamina s a52 ml de água. A mistura foi submetida a refluxo durante 24 horas e o solvente foi removido sob vácuo. 0 resíduo em água foi extraído com acetato de atilo,, α extracto lavado com água, solução saturada de cloreto de sódio e seco. 0 solvente foi removido sob vácuo ε α resídua cramatografado sobre gel de sílica de modo a obter-s-e o produto do Exemplo sob a forma de um sólido branco.

EkSBSÍ2_21 N- í N- ΐ p i e to κ i f os f i π 11) -L- f en AI a ian i 2 -L-1 euci-lJ-rlS)--2~aminq~4~meti1~(R)-Í~í2~qirldinil)pentan-l-ol ft ,· *· S) —2—terc—BuIok ioarbon i 1 amino—4-meti 1 — < R 5 5) -1 — í 2—pí ri tí i— nil)penisn-1-αΙ A 2—bromopiridina <3·, ió gs 26 mm) em 26 ml de tetra— hi— drofurano a -78°C e sob árgon? taram adicionadas, leniamente,, ί 1;;2 ml (26 mm) da n—fautil-lítio 2M asa tetra—hidrofurano, A soíuçSo foi agitada durante 5 minutos, em seguida foram adicionados 25í g Cí® mm) d® N-tere~butoKicarboniI~i.-Ieucinal em 16 ml de tetra-hidrofurano» A mistura foi agitada durante 35 ffiinuioe5 em seguida temperada cosi 16 ml de soIuçSo saturada de sulfato de sódio„ aquecida até à temperatura ambiente e vertida dentro de 56 ml de água, A mistura foi extraída com acetato de etilo, A camada orgânica amarelo pálida foi seca \sulfato de sódio) e evaporada sob pressão reduzida, O produto foi cromatografado sabre sílica com acetato de etilo a 36% em hexano, seguido por acetato de etilo a 56% em HeKano ds modo a obterem-se 6,626 g de óleo amarelo? Ca —21°±3 Cc ~ ®5329? diclorometano) (mistura de diastereémeros)» B, í S > ”2- terç-ButoJí icarboni lamino-4-meti 1- í R) -1 - C 2-piridini 1 > — pentan-l-ol 5 O-acetato,, e (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-···#--cnetil- CS)-1-C2-piridinil)pentan-i—ol 5 0—acetato 0 (S>-2™terç.-butoMicarbonilamino-4-metil-ΐR,S)-1-i2-p.i-ridimi )pentan— i— ol (4SÍ2 g) sm 5 ml de anidrido acético e 15 ml de cloreto de metileno foi agitado à temperatura ambiente durante 22 horas„ 0 anidrido acético em excesso foi removido sob presslo reduzida, 0 resíduo foi dissolvido em cloreto de metileno e

lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado» A camada de cloreto de metileno foi seca sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob vácuo» Q resíduo foi cromatografado sobre gel de sílica de malha 2&&—4ΦΦ com acetato de etilo a 3®% em hexano de modo a obterem-se is55 g de (5)-2-terc-butoxicarbonilamino-4-me-til-(S)-l-(2-piridinil)pentan-l-ol5 O-acetato» sob a forma de cristais,, p„f» 03—85°C; [a]^ -62°±1 tc = 1»®15 diclorometano}g e i „55 g de (S)— 2~terc-butoxicarbonii5iiiino-4"metil-(R)-i-(2-pi-ridinil)psntan-l-ol? 0-acetato,, sob a forma de um óleo âmbar, [ o: ] +3 °± 1 <c := i , Θ66 , metanol). C. (S)--2-amino-4-metil-(S)-Í-(2-piridinil)pentan-i-ol , di-hi-draclorstoj e í3}-2-amino-4--ínetil~íR>-Í--<2~piridinil) psnt-an-i-ol, di-hidrocloreto. 0 (S)-2“terç-butoxicarbonilamino-4-mstil-<S)-l”C2“pi-ridinil)pentan-l-ol? O-acetato, 1,35 g> foi dissolvido numa mistura de 3 ml de etanol e -3 ml de hidróxido de sódio SN e a misture, foi agitada á temperatura, ambiente durante 2 horas» A mistura foi extraída com diclarometana, o extracto seco e o solvente removido de modo a. obterem—se 1, 17 g de sólido» A este sólido em 2Φ ml de diclorometano foram adicionados 5 ml de diclorometano saturado saturado com ácido clorídrico anidro» 0 solvente foi removido e o sólido dissolvido em etanol» A diluição com éter e arrefecimento originaram Θ,36 g de cristais, p.f. 211-213°C <di-hidrocloreto)» 0 <S)-2-terc-butοxicarboni1amino-4-meti1-<R)-1—C 2-pir i-dinil)pentan-1-αΧ , O-acetato, 3,32 g) foi dissolvido nu.ma mistura de 3 ml de etanol e B ml de hidróxido de sódio 5N» A mistura foi agitada a i€*°C. durante 2 horas s extraída com diclorometano» 0 extracto foi seco sobre sulfato de sódio e o solvente removido, sob vácuo» de modo a obterem-se 2,ó9 g de um óleo» Ao óleo foram adicionados 15 ml ácido clorídrico 2N em acetato ds etilo.-, Após agitação á temperatura ambiente de um dia para o outro, o solvente foi removido sob vácuo ds modo a obtsrsm-ss 2,4 g ds -amino-4—metil-(R>-l-<2-piridinil) pentan-i-ol , di-hidrocloreto, p.fn Í52~Í54°C» N-CN-(terc-butoxicarboni1 )-L-feniialanil-L“leucil J~CB>~2~ -amino-4-metil-<S)~i-<2~piridinil)pentan-l-ol, e terc- ••butoxic:arbonil )-L-fsni lalanii-L-leucil 3—íS>—2-amino-4—me— t i 1 - < R) -1 - < 2~ ρ i r i d i η ΐ 1 > pen t an -1 -o 1 = A uma solução contendo 0,769 g de N-terc-butoxicarbo-nil-L-fenilalanil-L-leucina em 1Θ ml de tetra—hidrofurano a -10°C sob árgon foram adicionados Θ,66Θ ml (6 mm) de N-metilmorfolina. Apés uns poucos minutos foram adicionados cloroformsto de isobu-tilo (0,268 ml) e 0,542 g de (S)-2-amino-4-met i1-< R >-1-(2-pi r i-dinil)pentan-l-ol, di-hidrodoreta= A mistura foi agitada a -ΙΘ^Ο durante 1,5 horas, em seguida à temperatura ambiente durante 5 horas. Qs sais foram filtrados s o filtrada evaporado sob pressão reduzida» 0 resíduo foi cromstoqrafado sobre sílica de malha 2ΘΘ-4Θ0 com acetato de etilo-hexano 5Θ/5Θ de modo a obterem-se ®»36®bg de cristais brancos-i p.f» Í54-15é*Cs Ca3^~° -13°±í (c ~ 0,63®, metanol), diastersómero <2S,IR>»

De uma maneira semelhante a N—terc-butoxicarbonil—L— -fenilalaníl-L-Ieucina foi acoplada ao <S)-2-amino-4-metil-~(S)~l-í2-piridinilJpentan—1—ol, di-hidrocloreto, de modo a obter—se W-C N—C terc—butoxicarboni1)—L—feni1a1an i1-L—1euci13 — (S)-"2“amino~4-metil~(S)~l-(2-piridinil)pentan-l-ol, sob a forma de cristais, p.f„ 14Í-142*C§ -42°±2 (c = 0,4®1, metanol)» uma

Como descrito an ter iormen te relativamente ao Exemplo de Refsrfncia 49, uma amostra de ®,2Θ g do composto N— l W— (tsrc-buto>; icarbon i 1) ~L~f sn. i I a I an i I -L~ 1 euc i 1 3 - í S) -2-amina-4--metil-(R)“i-í2-piridinil)pentarv-i-ol em diclorometano foi tratada com ácido trif lucroacético de modo a obter—se N-LL-— fsni i s1an i X-L-1euc i 2 3 — í S > —Ξ—ami no—4—met il-ÍR) — 1 — C2—piridinil) — pentan-l-ol sob a forma de um sólido» Sem purificação este sólido foi feito reagir com fosforocloridato como descrito relativamente ao Exemplo í de modo a obter-se o produto do Exemplo sob a forma de um sólido branco» EKsmglo_22 N-CM.-< D í e tox i fosf in i 1) -L-f en i la 1 anil·-L-leuç 11 Í.S|-2- r atnin ο-5-c i c 1 Qrhex i 1 - ΐ R) -1 - .< 2ri?..i rJ^.nU)..m^5anzÍCLOl A uma solução de 3,16 g de 2--broraopiridina sm 2Θ ml de tstra-hidrofurano seco arrefecido a -7S°C5 sob àrgon, foram adicionados 11,6 mi de n~butil~litio em tstra-hidrofurano* Após 5 minutos, foi adicionado N—metoxi-N-metil-M^-terc-butoxicarbonil-~L—ciclo-heKil—alaninamida (3,14 g) em 2Θ ml de tstra-hidrofurano sob condições sxtremamente secas» A solução esc.ur-3i foi agitada a -73 *C durante uma hora» A mistura foi temperada com solução aquosa saturada de sulfato de sódio (26 ml), aquecida até à temperatura ambiente e vertida dentro de 5Θ ml de água» A mistura foi extraída com acetato de eiiio e a camada orgânica de acetato de etilo foi seca s o solvente removido sob vácuo» 0 resíduo foi cromatografado sobre uma coluna de gel de sílica com acetato de etilo-hexano como C1si> como solvente de modo a obterem-se 2,@ϊ g de (tí> — C1 — (ciclo—hexiliTietil) -2—oxo—2- (2—piridini 1)etiI Ϊcarbamato •"5 L· de i 5 i-dimetiletilo sob a forma de um éleop ΐα]^5- -K55°±i (c = 0,812* metanol)»

Uma solução de 1*35 g do composto anterior em 3® ml de tetra-hidrofurano» sob ârgon, foi arrefecida até -78 °C e foram adicionados 7,5 ml de tri-sec-buti1-boro-hidreto de litio em

tetra-hidrofurano durante ίί.θΗ). A mistura foi agitada a -7S°C

durante 5 horas e durante 12 horas á temperatura ambiente. A solução arrefecida <banho de gelo) foi temperada com água <8 ml 5 e adicionou-se5 gota. a geia. lentamente. peróxido de hidrogénio. A mistura foi extraída com acetato de atilo. seca sobra sulfata de sódio e o solvente removido sob vácuo. 0 resíduo foi cromato— grafado sobre uma coluna de gel de sílica com acetato de etilo- -hsxano <2s3> de modo a obterem-se ©.27 g de· (S)-2~ierc-butoKi- carbonilamina-3-ciclo--hexil-(8)~l-<2-piridiní 1)propan-1—ol sob a 26 forma de um sólido brancos la3^ +4°±l tc - metanol),, e ®?25 g de (4S~trans)-4-(cicIo~hexilmstil )-5-(2-piridinil )-5-oxa- 26 ioiidinona sob a forma de um óleo transparente? Lal„ ~4©’··!±ί íc = 1.16=, metanol). A uma amostra de 3.2 g do óleo anterior foi dissolvida em -&Φ ml de etanol e 6Θ ml de hidróxido de sódio 1N-. ft mistura foi submetida, a refluxo durante 17 horas5 diluida com 60 ml de água e concentrada de modo a remover o etanol. A mistura foi extraída com diclorometano (3 x 8® ml) e o extracto seco sobre sulfato de sódio. 0 solvente foi removido de modo a obterem-se 2.54 g de <S)-2-amino-3~ciclo-hexil-\R)-l-í2-piridinil )·-propan-l-ol sob a forma de cristais. p.f. 53-5é°C. 0 N~ terc-bu tox icarbon i 1 -L-f sn i. 1 a 1 an i 1 -L-1 euc i na (0?769 g) em 16 ml de tetra-hidrofurano seco foi arrefecido até ~10°C sob árqon a adicionaram-se Θ.66Θ ml de N-metilmorfolina. Após agitação durante 2 minutos. foram adicionaos 0.26S ml cloroformato de isobutilo, seguido por Θ.534 g de <S)-amino—3-"-ciclo-hexii~<R}~í —(2-piridinil )propan—1—ol. A mistura foi agitada a ~I0°C durante uma hora e em seguida à temperatura ambiente durante 5 horas. 0 sólido foi separado por filtração s o filtrado evaporado sob vácuo. 0 resíduo foi cromatografado sobra gel de sílca com acetato de etilo-hexano Cisl) de modo a eluir o produto. As fracçSes que continham o produto foram em seguida concentradas de modo a obterem—se 0,41 g do composto

Ν-ίN-terc-buί οκ icarhaniI~L~feni1a1an i1-L-1euc i13 - iS)-arn i no-ó-ci-cId—heKii-íR>-i—í2—piridini1>propan-i-ol sob a forma de cristais» p.f- Í40"Í42oCs Ea3 26 -2&*±1 ic = 150ο5 metanol).

Coma descrito rslativamsnts ao Exemplo do Referencia 49 5 uma amostra de Θ?2Θ g do composto anterior en? diclorometano fai tratada com ácido trifluoroacético de modo a obter-se N-CL— -fsnilalanil-L-leucil 3-ÍS}-as?5ino-3-ciclo“-heKil-(R)-Í-(2~piri-dinil)propan-I-ol sob a forma de um sólido* Este sólido foi feito reagir com fosíorocloridato de dietilo como descrito relativamen- _ - Se te ao txemplo i de modo a obtef—se um sólido oranços loJ_ ' ~4ò°±l ic ~ 1?€5? metanol)» EKefliPlD...2ó

NrCJjrIDietgxif psf ini 1 j-L-feni lalani 1-L-leuci 13-( S) -2- -aminorSrcic 1o-hexi 1 - <5)-1--(2-piridini 1) propan-l-ol A uma sedução de is93 g de <S)-2-terc-butoMic5rboniX-amina-3™ciclo“he;íil-(S)-l-C2-piridinil )propan-l-ol em i& ml de acetato de etilo foram adicionados 25 ml de ácido clorídrico anidro 2M em acetato de etilo» A mistura foi agitada durante 45 minutos5 diluída com hsKa.no α o sólido foi separado por filtração» 0 sólido foi lavado com hsKano de modo a obterem-se 1»Θ4 q de < S> —2—amino—3—cic1o—hexi1-< S)-1-C2~piridini1)prepan-1—ol, hidrocloretOj sob a forma de cristais»

A uma solução de ©?37B g de N-terc—butoxicarbonil-L--íenilalanil-LT-Ieucina em í© ml de tetra-hidrofurano seco a ~1®°C sob árgon foram adicionados ®?33© ml de N-metx Imortal iria * à solução foram adicionados ©^134 ml de cloroformato de isobutilo5 seguido por ©?37 g de (S)-2~amino“3-ciclo-heKil-CS)~l-(2-piridi-nil) propan-l-ol» hidroc loreto* A mistura foi agitada a --1Θ°C durante 2 horasos sólidos separados por fi 1 tração e a filtrado evaporado sob vácuo» 0 resíduo foi cromatografado sobre gel de sílca com acetato de etilo-hexano C1 s í) de modo a obterem-se €>, 122 g de N-CH-t-butoKi-· carbon i1-L-feni1a1ani1-L-1euci13-<3>-amino-S-cic1o-hexil-CRí-l-~<2~piridinil )propan-l-ol sob a forma de um óleos --·43°±:1 (c = 1.5 i© 1.3 metanol)»

Como descrito relativamente ao Exemplo de Referencia 49== uma amostra de Θ,ίβ g do composto anterior em dicloromefcano foi tratada com ácido trifluoroacético de modo a obter—se M—lL— -fenilalanil-L-leucil ]-<S)-afflino-3-ciclo-hexil-í S) - l--(2~piri-din.il) prop-an-l-o 1 sob a forma de um sólido» Este sólido foi feito reagir com fosforocloridato de dietilo como descrito relativamente ao Exemplo 1 de modo a obter-se um sólido branco» êólsilIBlg......24 N-CN-(DietoKÍfosfínii/-L-fenilalanil-L-histidilj-lSj-gr -amino—3-ciclo-hexi1-C R)-1-í 2~tiazoli1)propan-i-ol A uma mistura de @==59 g de N^-t-butoxicarbonil-L-his-tidina sm ó ml de diclorometa.no foram adicionados Θ32 ml de trietilamina e 1,02 g de hexafluorofosfato de bencotriazal-í-—iloxitrisCdimetilamino)fosfónio» Após agitação durante um minuto5 foram adicionados ô»53 g de (S)-2-aroino-3-ciclQ~hexil--— (R)-l-(2-tiazol il) propan-í—ol == A mistura foi agitada tis um dia para o outro e o solvente removido» G resíduo foi dissolvida em 2« ml de acetato de etilo e lavado sucessivamente com 5 ml de água., bicarbonato de sódio saturado solução saturada de cloreto de sódio» fí camada orgânica foi seca <riqSO^) e passada através de uma almofada curta de silicato ds magnésio hidratado» A almofada foi lavada com acetato de etilo s o filtrado concentrado sob

vácua de modo a obterem-se 1., í g ds sólida- 0 sólida fai dissolvido em diclorometano e filtrsdo através de terra de diatomáceas-0 filtrada foi concentrado sob vácuo da modo a obterem—ss Θ,98 g de N-EN-t-butoxicarhonil-L-fenilslanil-L-histidil3-<S)-2-amino-3--ciclo-hexiI~(R>-i-C2-tiãzoIiI)propan~l-ol sob a forma de um sólido (vidro). Este vidro em um ml de acetato de etilo foi tratada fai tratada com 1® ml de ácida clorídrica anidra 2N em acetato de etilo e a mistura agitada durante 2 horas- A mistura fai diluída com i® ml ds hexano, arrefecida s filtrada de moda & obterem—se cristais- Os cristais foram dissolvidos em 3 ml de água e adicionaram-se ®s4 ml da hidróxido de amónio I5N- A mistura foi extraída com diclorocnetano e em seguida com acetato de etilo- Os extractos combinados foram secos CMgSO^) e o solvente removido de modo a obterem-se g de j^tL-histidiIj-CS)- amino—3—ciclo— hexil— íR>~Í~(2-iiazolil )propan—1— ol sob a forma, de uma goma.

Uma mistura de 3-3® g de L-fsnilalsnina, 1® ml de irietilamina, ó ml ds água e 4 ml de etanol foi arrefecida até ®°C sob àrgon- à mistura agitada foi adicionada, gota a gota, uma mistura de 2-76 g ds fosfito de dietilo em 8 ml ds tetracloreto de carbono- A mistura foi agitada ds um dia para o outro Cló horas) e acidificadacom ácido clorídrico 3N até pH 2- A mistura foi extraída tr'§'s vezes com 4® ml de acetato de etilo, o extracto seco CrlgSO -) e o solvente removido sob vácuo de modo a obterem—se 5,4 g de N-ídietoxifosfinil J-Lç-fenilalanina, sob a forma de um ó1so vi scoso- A uma amostra (1 mmol) do composto anterior em dicloro-meiano (5 ml) a -í®°0 fai adicionada triatilamina (2,5 ml), seguida pela sdiçSo, gota a gota, ds uma solução ds N,N~diciclo--hexiIcarbodi-imida (um mmol) s M-hidroxi-succinimida (í mmol) em 5 ml de diclarametano- A esta mistura foi adicionada 1 mmol de N-CL-histidil3-<S>-amino-S-cicIa-hexil-íR>-í-í2-tiasolii)propan—

1 —o 1 em um ml de diclorometano» A. mistura foi agitada a. 2@°C durante 5 horas, filtrada a o filtrada fai lavado com água. bicarbonato de sódio saturado, água e seca.» 0 solvente foi

?A removido de modo a obter—se um sólido Brancos taJr< ' ~2òw±i (c = 1,@, clorofórmio)»

Exemplo 2a N~tN~(Di---isopropiIoxifosf inil)-L-fsnilalanil-L-leucilJ--CS)-2-amino-5-cic1o-hexil-(R)-1-< 2--piridini 1 )propan-l-C!Í A uma solução de €5,324 g de N^-t-butoxicarbonil-L-leu-cina em 6 ml de tetra-hidrofurano arrefecida até -150CS foram adicionados @,429 ml de N-metilroorfoiina» Após um minuto foram adicionados @,174 ml de cloroformato de isobutilo, seguido pela adiçãc? @,399 g de <S)-2~amino--3--ciclo~hexil-CR)-l~-C2~piridinil )-- propan-l-ol, hidrocloreto» A mistura foi agitada a — 15°C durante uma hora e á temperatura ambiente durante 2 horas» Os sólidos foram separados por filtração e o filtrado evaporado sob vácuo» O óleo residual foi cromatografado sobre gel de silca com acetato de stilo-hexano C2i3) de modo a obterem-se @,25 g de N-EW-tsn::--hutox icarboni 1 -L-leuci 1J-C3 > -a.mino-3-cic 1 o-hex.il - C E) -1 ~ í 2-pi-ri-dinil)propan-l-ol sob a forma de cristaisj p«f„ 52-54°Ck líí]^ -51°±3 íc = @,3óí, metanol)»

Como descrito relativamsnte ao Exemplo de Eefsr§ncia 49, o composto anterior em diclorometano foi tratada com ácido trifluoroacético de modo a obter-se ^ELç-leucilj-CS^-amino-S-ci-cio—hexil~CS)-1-C2-piridinil)propan-l-ol sob a forma de um sólido» Este composto foi feito reagir com N—Cdi-isopropoxifos-f inil )-L-feniIalanina, activado com f osf oroc Ia ri d-a to de feniio como descrita relativamente ao Exemplo li© de modo a obter-se um sèlido branco»

Exemplo :eò M-r.M-(DistoKifosfinil)-L-feniIaianil-L-histidil]-{S)-2-· ~afninQ-4~metil-<R)~-l~<2~tiacoIll )pgntan-l-ol

A uma suspensão de 2,4 g de j^-t-butoxicarbonil-L-his-tidina em 24 ml de diclorometano foram adicionados ír,3 ml de tristilamina, seguido pela adição de 4»2 g de hexafluorofosfato de benEatriacol-i-iloKitrisídimetilamino)fosfónio <BQP). A mistura foi agitada, sob árgon, durante 2 minutos e adicionaram-—se 1,73 g de CS)-2-aminQ-4-metil-(R)-l—(2-tiazolil)pentan-l-ol= A mistura foi agitada durante 4 dias e o solvente removido» 0 resíduo foi dissolvido em 2Θ al de acetato de stilo e a solução lavada com ΙΘ ml de água, trf's porções de i® ml bicarbonato de sódio IH, 5 ml de ácido cítrica 2iM e 2Θ ml de bicarbonato de •sódio 1M„ A camada orgânica -foi seca <MgSOfl> e passada através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado (almofada lavada com acetato de etilo)* 0 filtrado foi concentrado sob vácuo de modo a obterem-se 2,7 g de N-CN-t-butoiíicarbonil-L-his-t id i 13 - C S)-2~am inG-4-me ti1-< E >-1-< 2~ tiâ£o1i1>pen tan-1-o1 sob a forma de uma espuma-.. Este espuma (2,7 g> foi dissolvida em 5 ml de acetato de etilo e à solução foram adicionados 3ô ml da ácida clorídrico anidro 2IM em acetato de etilo e a mistura agitada durante 2 horas» A mistura foi diluída com lô ml de banano» A mistura foi -agitada durante 2 horas (separaram—se cristais) e adiconaram—se 33 ml de haxano» A mistura foi de modo a obterem—se 4,55 g ds N-CN~?_-“histidil3-{S)-2-amino-4-metil-íR)-í-(2-tia20~ 111>penfcan-i-oi, di-hidroclorsto sob a forma de cristais higros-cópicos. Os cristais foram dissolvidos em 9 ml de água e adicionaram-se 3 ml ds hidróxido de amónio concentrado» A mistura foi extraída com acetato de etila, os extractos secos (rlgSO*) e o solvente removida safa vácuo de modo a obterem-se 1,23 g de N-CL-histidil 3-<S)-afflino“4~{netil“(R)-Í—<2-tia2oIil) psntan-i-ol sob a forma de uma espuma»

Uma -amostra de 3,®i g de N—CdietoKifosfinil}—L—fenil— alanina (ver Exemplo 24 para a preparação) em 5 ml foi adicionada lentamente com agitação a uma mistura preparada de 3,4# q de imidasole, 2,2 g de diclrofosfato de fenilo em 25 ml de dicloro-metano (arrefecido num banho de gelo)» A mistura foi agitada a durante 1 hora e em seguida foram adicionados 1® mmole da M-<L-histidil)-íS)-2-amino-4~metil-(R)-1-(2-tiasol il >pentan-l—ol. A mistura foi agitada a o°C durante 5 horas s â temperatura ambiente durante uma hora» A mistura foi diluída com diclorome-tano s lavada com água., bicarbonato de sódio 1M, água solução saturada de cloreto de sódio» A camada orgânica foi seca e o solvente removida de modo a obter-se um sólido»

Exemplo 27 fcCN~.<.Pietoxifosfin i 1 ? -L-f eni lalanl 1 -L-leuc il 3 — -(S)—2—amino—3-ci clo—hex i1-(R)-1-(2-—imidasolil)propan-l-ol

Uma solução (arrefecida até -78°C) de 17, S2 g de l-CC2-<trimetilsilil)etoxiImetil3-lH-imidazole em 9® ml de tetra—hidrofurano seco sob árgon foi adicionada, lentamante, a 36 ml de n-butil-litio em tetra-hidrofurano (2,5 molar)» Após a adiçSo ficar completa a mistura foi agitada a —78°C durante uma hora íSoluclo A)= ml de A uma solçSo agitada de 18,84 de -t-butoxicarbonil-L-ciclo-hexilalaninamida em

tefcra-hidrofurana seco arrefecido até -78°C sob árgon foram adicionados 67 ml de butil secundário-Iítio em hsxano <θ,85 molar)» Após a adição, a mistura foi agitada durante 1,5 horas a -78°C (Solução BK

Através da utilização da técnica da agulha de dupla exrfcreraidade, a solução A foi adicionada à solução 8 com agitação a -78*8. A mistura foi agitada a ~78°C durante uma hora e deixada aquecer até ®°C s mantida (banho ds gelo) a 0°O durante uma hora» A mistura foi temperada com 15© ml de solução saturada de cloreto ds amónio s o solvente tetra-hidrofurana removido sob pressão reduzida. H camada aquosa residual foi extraída duas vezes com 15© ml de acetato ds atilo» Os extractos combinados foram lavados com cloreto de sódio saturado e secos (Na^BO„). 0 solvente foi removido sob vácuo de modo a obterem—se 35,© g ds óleo cor de laranja escuro» Este óleo <35 g) foi crosatografada sobre uma coluna de gel de sílica com acetato de etilo—hexano <lsí@) de modo a obterem-se 17,82 g de <3)-C 1-Cciclo-haxilreetil)~-2~oxo~2~ -- C2-E'N“-t2-< trimetilsi 1 i 1 )etoxi 3 me ti 1 limidazol i 1 )eti 1 Dcarbamato de 15í-dimetiletilo sob a forma ds um óleo viscoso amarelo. A uma solução de 9,©2 g do composto anterior em 8© ml de tetra-nidrofurano seco arrefecida até -78°C, foram adicionados, gota a gota, 4© ml de tri-sec-butilboro-hidreto de potássio tstra-hidrofurano Após a adição, a mistura foi agitada a -7B°C durante 2 horas e foram adicionados ΒΘ ml de solução saturada de cloreto de amónio» A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e o tetra-nidrofurano foi removido sob vácuo» 0 resíduo aquoso foi diluído com 2© ml da água a extraído com 20© ml de acetato de etilo» 0 extracto foi lavado duas vezes com 8Θ ml ds solução saturada de cloreto ds amónio, 8Θ ml de solução saturada de carbonato de amónio e 8© ml de solução de cloreto da sódio» -A camada orgânica, foi seca <Na.-=SO<.> s o

solvente removido de modo a obterem—se 15,2 g de uma. goma espessa» Esta goma numa mistura, de 1©© ml de acetato de etilo s 8© ml de água, foi arrefecida num banho de gelo e foram adicionados» lentamente, 2© ml de peróxido de hidrogénio a 3©%» Esta mistura foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora, arrefecida num banho de gelo s em seguida adicionou-se» lentamente.» em pequenas porções» sulfito de sódio sólido Í45 g>» A camada C3rglnica foi separada e a camada aquosa extraída com 1©© ml de acetato de etilo» A camada orgânica s o exfcracto combinados foram secos vPJa^SO,,) e o solvente removido de modo a obter-se um sólido amarelo claro Cl©5© g>» Este sólido foi cromatografado sobre gel de sílca com acetato de etilo-hexano Í2s3> de modo a obterem—se 4,5 g de (8)-2-terç"butoxicarbonilamino-3-ciclo-haxil-CR)-l-C2- --CH-E2-<trimetilsililletoxiImetillimidacolil)propan-l-ol sob a ”’ó _ forma de um sòixdo brancop íαϊn ^·9°±ί «c = l?©-54» metanol)» 0 composto anterior em diclorometano foi tratadocom ácido trifluoroacético como descrito relativamente ao Exemplo de Referência 49 de modo a obter-se (S)-2-smino-4-ciclo-haxil-(R)~ -i-·(2-CW-E2—(trimetilsilillatoxilmetiljirnidacolil)propan-l-ol sob a forma de um sólido; -8°±1 Cc = 1,©5, metanol)» A uma solução de 3,4® g de imidazole em 25 ml de diclorometano sob árgon foi adicionada, isntsffisnts, uma solução de 2?20 d de dic1orofosfato de fenilo em 5 ml de diclorometano· A suspensão foi agitada durante ©»5 horas e em seguida arrefecida num bainho de gelo até ©°C = à mistura foi adicionada uma solução de 3,01 g de N-Criietoxifosf in.il )-L-fenilalanina em 5 ml de diclorometano» A misturai foi agitada, a ©°C durante uma hora e adicionaram—se 1,82 g de hidrocloreto do éster metílico de L-leucina em pequenas porções» A mistura foi agitada a ®°C durante 5 horas e k·. temperatura ambiente durante uma hora» A mistura foi diluída com diclorometano e lavada com 3© ml de ácido

clorídrico ©,5N, A cantada aquosa foi sktraída cofit 2© ml de diclorometano e a camada orgânica e o extracto foram combinados. Os exiractos combinados foram lavados com 20 ml de ácido clorídrico 0j5M? com 10 ml de água* 20 ml de bicarbonato de sódio saturado e secos, 0 solvente foi removida sob vácua de modo a obterem-se 3*5 g de uma goma. Esta goma foi crosnatografada sobre gel de sílica com acetato de etilo-he-Kano ílsl) como elciente de modo a obterem-se 2»11 g de éster metílico de N—lN— (dietoxifos— f inil >-L~fenilalanil 3-L-lsucinas p=f» 92-94*0? Ca3n"”5"í -27°±i (c = 1 ,Θ35,, metanol). â solução de 1,71 g de éster metílico de jSj—EN— <dietoxi-fosfinil }---L“fenlIa!anil3-L-lsucina ent 8 ml de metanol arrefecido^ foram adicionados sob árgon 4S8 ml de hidróxido de sódio IN» A mistura foi agitada sob àrgon a ©*0 durante 22 horas» 0 metanol foi removido sob vácuo e o resíduo aquoso acidificado com ácido clorídrico ÍN até pH 1 com agitaçlo em ó© ml de acetato de etilo» A camada de acetato de etilo foi separada,* lavada com 2© ml de salmoura e seca sobre sulfato de sódio, 0 solvente foi removido e o sólido lavado com hexano de modo a obterem—se 1966 g de Nç-EM— -(dietoxifosfinil)-L-fenilalanill-L-lsucinag sob a forma de um sólido branco; ~21°±í (c = i9íii,, metanol).

Uma amostra deste sólido (1 mmol) foi activada com d iclorofosfato de fsnilo e imidacole em diclorometano como dscrito anteriormente e á mistura foi adicionado iS)~2-amino-3--ciclo-hexiI-(R)-í~C2-ÍN-(2~< trimetilsilil Jetoxi>metil) lirnidaso-1i1)propan-1-o1, A mistura foi agitada de um dia para o outro s o solvente removida sob vácuo» Aa resíduo foi adicionada áqua. e acetato de etilo» A camada orgânica foi separada5 lavada com água, ácido clorídrico IN, bicarbonato de sódio 1M? solução saturada de cloreto ds sódio e seca» 0 solvente foi removido sob vácuo e ao resíduo foram adicionados tetra-hldrofurano, fluoreto

de istra-n-butilamània em tetra-hidrofurano (i3®n)9 água a trieiilamina» A mistura foi uhmetida a refluxo durante 24 horas5 o solvente removido s α resíduo em água extraído com acetato de atiles, 0 sKtracto foi lavado com àgu.-a e cloreto de sódio saturado, seca e a solvente removido de modo a obter-se o produto sob a forma de um sólido^ Eal-/""-' ~2b°±1. (c = 15#, metanol)» faxemplo 28 N-[N-(DietQKifosfinii)--L-fenilaianiI-t~leu.cilj~ -(S>-2-amino-3-ciclp-hexil-(R)-l-(2- ~tiayolJJ.J^roo-an-l-ol, A ®s65 g de diclorofosfato de fenilo em i ml de dicla- rometano sob árgon foram adicionados 1?Θ2 g de imidazole em 12 ml de diclaroíBatano» A mistura foi agitada à temperatura ambienta durante Θ = 5 horas e em seguida arrefecida atè "i5°C» A esta mistura agitada foram adicionados ls24 g de N— Cl^-Cdistoxifosfi~ nil >“L-fenilalanil3--L-leueins e a mistura foi agitada a -15C'C durante uma hora» A esta mistura foram adicionados ©s7i g de (S)-2~amino—3-ciclo—hexil—(R>—l-(2~tiazolil)-l-C C(t—butil)Cdimst-i 1)si 1 i 13oxi]propana em 2 ml de dicloromstano s a mistura foi agitada a — 15°C durante 29 horas-» Foi adicionada água C1Θ ml)e o diclororastanc foi removido sob vácua» Aa resídua aquosa foram adicionados 3Θ ml de acetato de etilo» A casada orgânica foi separada a lavada com í€s ml da ácido clorídrico IN» 2# ml de ácido clorídrico N, 5 ml de salmoura, duas porçSes de 1Θ ml de hidróxido de sódio IN e 5 ml de salmoura» A camada orgSnica foi seca sobre sulfato de sódio e passada através de uma almofada fina da silicato de magnésio hidratado» A almofadafoi lavada com acetato de etilo e o filtrado concentrado sob vácuo de modo a obterem-se 15o3 g de W™LN~(dietoxifosfinil)-L-fenilalanil]~L~leu·-eil-(S)-2-amino—3—ciclo—hexil-(R)-l-í2—tiasoiãl > —i-E E < t~buti 1 > — ídimetil)sililJoxilpropano sob a forma de um sólido espumoso5 V L· II α 1 ^5-5 -4Θ°±1 íc = 1 =,067, metanol). h uma amostra íí?4® g) do composto -anterior em 5 ml de tetra—hidrofurano arrefecido s 0°C foram adicionados 2»t ml de fluoreta de tetra-η—butilamónio em tetra-hidrofursno (1ΘΗ) . A mistura, foi agitada, à temperatura ambiente durante 2 heras e diluída com com 5 ml de bicarbonato de sódio saturado. D tetra-hidrofurano foi removido sob vácuo e o resíduo foi partilhado entre 4Θ ml de acetato de etilo e í@hml de água. A camada orgânica foi separada, lavada com 10 ml de ácido clorídrico Θ55Ν. ίθ ml de bicarbonato de sódio saturado, i& ml de salmoura, seca sobre sulfato de sódio e filtrada. 0 filtrado foi passada através ds uma almofada fina de silicato da magnésio hidratado e a almofada foi lavada com acetato de etilo» 0 filtrado foi concentrado sob vácuo de modo a obterem-se 1,Í7 g de produto sob a forma de um sólido brancos p.f» 164--Í65°C ξ !'aj~ -5@°±i (c - Ι,Θ, metanol).

Como descrito rslativamen te ao Exemplo 28, foram preparados os Exemplos seguintes 29-33»

Exemols 29 ͱctN" < P ie to xifos f in i 1) -L-feni 1 a 1 an i 1 -L-1 suc i 13 - llSlc^r^íyiig:::3-cic.lp-he.xil-(R)-l~<5-metoKi- çaj^gnilr2rtiazolil)prQgan-l-ol A N-C(dietoxitosfinil)-L~fenilalanil-L-leucina (0,12 g) foi feita reagir com íSl-S-amino-S-ciclo-hexil-íRj-i-ÍS-sietaxi-carbonil— 2— tiazoli 1) — i — E E ít—butil) ídimetil )s-ilil 3oxi Jpropano (0==082 g) de modo a obterem-se Θ,ΐό g de W-E ídietoxifosf inil )--L”f sn i1a1an i1-L-1euci1-< 8)—2-ami no—3-ci c1o—hex i1-í R) — 1-ío-me to— x i c a rboni1—2—tia 2o1ΐ1)-l-Eíit-buii1)ídimetil)silil3oxijpropano “ó4°±l íc *7* f ίθ,ΐό g}j ίαΐ^"1· ~·ό4°±1 íc = 0.788, metanol)» h reacçao rfí - 174 -

composto anterior Í0?ii g) com tluoreto de te tra-n-bu til amónio em tstra-hidrofurano < 13€ílv1 > originou g do produto do Exemplo

'7-* A sob a forma de um pó branços ία3η*"’~' -92°±i Cc = 0 = metanol)»

Exemplo......5¾ N-CN-<Digtoxifosfinill-L-fenilalanil—L-leucil3— ~(S)~2-amino-"5~c:icIa-hexll~CR)~Í~í 5-acef il--2-furanil)propan-í-ol A ti~i \distDMifosfinil >-L-feniIaIanil-L-leucina Í0g14 g) foi feita reagir com <S}~2~amino-3~ciclo~heHÍI~<R}-Í-<5---acati!--2—furanilípropan—i—ol (®3©6Θ g> de modo a obterem-se g do produto da Exempla sob a forma de um sólido brancoϋ -i-3‘::±í íc - Θ?ό89θ? metanol)»

Exemplo 31 N-tM-CPietgxifosfinil)-L-fenilalanil-L-leucil3-~<S)-2-amino-3-ciclo-heKÍl-(R)—1— -(2-furanil)propan-l-ol A Μ— Γ. (d i e tο κ i f os f i η í 1> —L—f en i 1 a 1 an i 1 —L— 1 sue i n a C & 3 62 g) foi feita reagir com {S>~2~âmino~3-ciclo-hexiI-<R)-l-<2~fura~ nil)propan-l-ol (Θ,,@22 g) de modo a obterem—se ®=6Θ g do produto do Exemplo sob a forma de um sólido branco§ CsJ~34*±1 Cc = 1?©5S metanol)» EKgjimlo „32 M-iM-(DietOKifosfinlI )-L-fenilalanilrL-l,eu^i!>: - < S) —2—amino—5—c ic 1 c?-he;;i 1 - (R) -1 — < 1 H~

-pirazol-5-il)propan-l-oI A N-C (dietoKifosf irsii>~L~fenilalaniI-L-leucina (0=,19 g) foi feita reagir com <S}~2~âffiinD~3~cIclQ-hexIl~(R>"-í~\IH-pira--zol-3-il) —1—C L (1l-dimetilstil >dimetilsilil loxi Jpropano <Θ? 1Θ g ) de modo a obter—se N-ECdietoKifosfinill-L-fenilalanil-L-Ieucil— — ÍS>-2-ajnino—3—ciclo-hexil —ÍR>—i —í 1H—pirazol— 3-il >—1—CE ( 1 s l-dime-tiletil )dimetilsilil joKijpropano (0,= 12 g) sob a forma de um sólido brancos ~32°±2 (c = 0,.54/,= clorofórmio) « Q composto anterior (8® mg) em ®55 ml de tstra-hídro-furano foi feito reagir com ©,6& ml de fluoreto de tetra—n—fou— tilamónio em C1 ?em tetra-hidrofurano) durante 6 horas de modo a obterem-se 55 mg do produto do Exemplo sob a forma de um sólido branco § C a i -33°± 1 (c ” €3,417 =, me tarso 1) iHiiiBPlO 33 jjjrl N- < P i b^n silo y, ifosfinil.) -L-fenila lars i 1 -L-1 sue i 1 3 -niSj^2-am inoz3rçiglPrí?e.K i I - (R > -1 -Z-L2.-itJ.azQ 1 i 1) propan-1-ol A N- L C d i ben z i 1 ο κ i f os f i n i1> —L—fen iIa1 an i 1 —L— 1 euc í n a <®524 g) foi feita reagir com <S>-2-afiiino-3-ciclo-hexil-(R)-l“(2--iiazolil >~i~CE (jn-butil >< (dinsstll }silil3oí<i Jpropano (®511 g) de modo a obterem-se ®?28 g de N-C(dibsnziioxifQsfinil)-L-fenilala” nil-L~leucil-(B>-2™amino-3-ciclO“hexil“<R)-i-(2-tiazolil) — 1 — C £ C t— -butil) (dimetil )silil 3omí jproparso sob a forma de um sólida brancos Eal.^^ -31*±i <c - 0=,797, metanol) „

0 composto anterior (©=,21 g) em um ml de tetra-hidra-furano e 0P60 ml de fluorelo de tetra-n-butilamónio em tetra--hidrofurano (Ι,ΘΜ) à temperatura ambiente durante 1 hora originou ©..IS g do produto do Exemplo sob a forma de um sólido brancos [s3n2è -38°±1 íc = 0,608, metanol)=

Exemplo 34 Ν-.ΪΜ- (Dietoxi f osf ini lI.-L-f eni la 1 anil -L~leucil .3---- (5) -2-aminp-5-ci,ç 1 o-heni 1 - ΐ R) - í - <2~ t iazp 1 e-5--ácido carboxllico)propan-i-ol 0 14-í i dietoxif osf inil }”j^feniIaIanil~L-leuciI3-\8>-2-- -•amino~3-cic lo-hsxi 1- CR) ~í~ í 5-matoxicarboni I-2-tiazoIi1)propan----l-ol (4© mg) em um ml de metanol e um ml de hidróxido de sódio ÍM foi agitado á temperatura ambiente durante 2 horas s concentrado sob vácuo* 0 rssiduo aquoso foi acidificado com ácido clorídrico IN e a. suspensão extraída com 1© ml de acetato de atilo» 0 extracto foi lavado com salmoura,, seco e evaporado de modo a. obterem-se 39 mg do produto sob a forma de um sólidos tal^* -89°±2 (c = 0,485;, metanol). jjjgSLBlB-35 jX?~ iw- < D is to x i f os f in 11) -L-f sn i 1 a 1 an 1 i -L- h istidil3-•"(S)-2-amino-5-cic lo-hexi ~<2-oiridinil )_propan-l-ol

Uma solução de N~Cdietoxifosfinil l-L-fsnilalanina (©,62 g) em um ml da diclorometano foi adicionada a uma mistura arrefecida (©°C) de @s43 g de clorofosfato de díetilo e © == è8 g de iiTiidazole sffi & ml de diclorometano e a mistura foi. agitada duranta 45 minutos a ®°C = à solução foram adicionados ©,3© g de Λ N~{L--hÍ3tidil >“ÍS)“2-aminD-3-cicIo-hsKÍl-<R)-l-(2---piridiniI) prop-an-i-ol em 2 ml de diclorometano e a mistura foi agitada a ®°C durante 23 horas» â mistura foram adicionadas 1# ml de hidróxido de sódio IN s o diclorometano foi removido sob vácuo» A camada aquosa foi decantada do precipitado gomoso s a goma foi enxaguada duas vsíss porçoes de 1® ml de água» A goma foi dissolvida em 6 ml de metanol s adicionaram-se 3 ml de hidróxido de sódio UM. Após agitação durante @,5 horas, foram adicionados 3 ml de água e o metanol foi removido sob vácuo. A camada aquosa foi decantada do sólido precipitado e o sólido dissolvido em 25 ml de acetato de etilo» Esta solução foi lavada com 5 ml de hidróxido de sódio iíM, 1® ml de salmoura;, seca ϊ!Μβ„30Λ > e o solvente removido de modo a obterem-se @,44 g de sólido» A trituração com éter originou @,42 q de sólido branco, o qual foi cromatografatío sobre gel de silica com diclDromstano-metanol-hitíróxido de amónio íi@s1s@»5> coajo eluenis de modo a obterem-se @»4® g de sólido branco^ -12°±1 (c = Θ,νΐ®, metanol)»

Exemplo 5è N" lN-C Dietox i f gsfini I IrLr f an ija 1 an.il^L-his t id .11. j-, - (B) -2-amino—3-c iclp-hexilriRI-l·-=^.2-ifflidazol í 1) propan-l-ol

Como descrito no Exemplo 34, a N-Cdietoxifosíinil>-L--•fenilalanina (@»3@ g) foi acoplada com N~(L-histidil)-{S>~2~ami-no™3-ciclo™Jriexi 1 -(E) — 1 — (2-LN-<2-1rimetilsiliDetoxi >meti 1 3imida-zolii)propan-l~ol <@»18 g> de modo a obterem—ss @,13 g de um sólido após processamento do mesmo modo que relativamente ao Exemplo 34= Este sólido foi dissolvido era hexametilfosfaramida (2 ml) e adicionaram—se ®,@7 ml de etlienodiaraina e @s85 ml de uma solução de fluoreto de tetra-n—butilamónio em teira-hidrafu-rano (i,@n)» A mistura foi agitada á. temperatura ambiente durante

255 dias s concentrada» Esta solução foi adicionada a uma solução agitada de bicarbonato de sódio saturado (20 ml)« A suspensão foi filtrada e o sólido lavado com duas porções de 2 ml de água seca ao ar» A trituração com éter bietílIco-acetato fls atilo (2sl> originou 6O mg de produto sob a forma de um sólido branco5 talrf* ~i7°±2 (c * ©5495., metanol)»

Enemplo 37 M—CN-(Dietgxifosf iniU-L-3—(1 * -naf til)alaiil.-L--1 euc j 1 3 - (s) ,-2-ami ηο-3-c iclo-heKÍI-(R)"-í-r,<2ziy£iQiIl.PEaeiir:ízai

Uma solução de Θ325 g de L-3-Íinaftil)alanína em 5 ml ds metanol foi saturada com gas cloreto ds hidrogénio anidra a ®°C e em seguida agitada de- um dia para o outro» O solvente foi removido sob vácuo e adicionou-se metanol e removeu-se várias vezes» 0 resíduo em éter dietilico foi arrefecido e o precipitado separado por filtração de modo a obterem-se ©»26® g de hidrocio- reto do L-3-C1'-naftil)alanato de meti lo sob a forma de um sólido *·*?£. branco^ -*-29°±Í (c = lf©36s metanol)» A uma pasta fluida do composto anterior (1,,27 g> em 55 ml de diclarometano sob árgon foram adicionados í546 ml de trietilamina e ©?763 g de cloreto de dietilfosforilo» A mistura foi agitada à temperatura, ambiente de um dia para o outra e em seguida lavada com solução de bicarbonato de sódio a 1@% e salmoura» Q solvente foi removido,, o resíduo dissolvido em acetato de etilo—diclarometano Cisi) e a solução filtrada através de uma almofada fina de silicato ds magnésio hidratado» A almofada foi lavada com acetato de etilo—diclorometano íisi) e o

filtrado concentrado de modo a obterem-se 1,76 g ds cristais» A recristalização a partir ds éter .di-isopropilico originou 1?62 g

de W-ídisfcoxifosfinil}-L-.5~C1'-~nsítillalanato de meti lo sob a V i._ forma de cristais brancos| p,f» íi©-llZ°Cp taUj/"'"' ~23’:!±í íc ·- 1,Θ933 metanol).

Ao composto anterior (Θ,,35θ g) em 15 ml de metanol foram adicionados 2,,88 ml de hidróxido de sódio 1M e a mistura foi agitada durante 2,5 horas à temperatura ambiente. Foi adicionado ácido (HC1 3M) até a mistura ficar acidica e removeu-se o solvente, 0 resíduo foi extraído com diclorometano, os extractos secos íiiqSO,) e o solvente removido de modo a obter—se N-(dietil — fosfinil)-L-3-(1'-naftillalanina, Q composto anterior (resíduo) foi dissolvido em 12 ml de diclorometano sob árgon e adicionaram-se 96?9 mg de trietil-amina e ©?424 g de hexafluorofosfato de bensotriazol-l-i1trisCdi-mstilancino)fosfónio <BOP>, Após um minutos foram adicionados 0,,293 g ds N-\L-ieuci 1)-{S>-2~amino~-3~ciclo~hexi 1-CR)-l-<2-fura-nil)propan-l-ol e a mistura foi agitada à temperatura ambiente ds um dia para o outro, 0 solvente foi removido e o resíduo em acetato de etilo foi lavado com ácido cítrico 2Μ? bicarbonato de sódio a Í0%5 água s seco, 0 solvente foi removido de modo a obterem-se Q?hQ g de um sólido castanho—amarelado ítanino). Este sólido foi dissolvido em acetato de etilo e filtrado através de uma almofada de qel de sílica, A almofada foi lavada com acetato de etilo e o filtrado evaporado de modo a obterem-se θ947 g de cristais: -46*±1 (c =- 1,,1-54,, metanol) § Espectro de Massa (8AR)s Calculs 692s3441^ Encontrados 692s342S,

Seguindo o procedimento antariorísente referido podem ser preparados os compostos seguintes, M-lN-CDietoxifosfinil>~L—3—(i'-naftillalanil—L—leucil3-(S)-2~ami-n o-3—ci c1o—hex i1-{R 5 — 1 — í5—acet i1—2—furan i1>propan—1~o1

N-CN-íDisto»ifosfinil>-L~3-<1'-naffcil}alanil-L-leucil3-<S)-2-ami-no“-3--cicIo“heKÍI-(R)-!-(5-etDKÍcsrfaoniI-2-furanil) propan-i-ol N-CN-< DistoKifasf inil)—L—3-< 11 — naf til)alanil—L—leuci 1 3-<S)-2-smi~ no-3-c i c1o-hs κ iI~< R)™ i-(5~ c Iord-2-furanil)pro pan-1-o1 N-CN~<DistoMÍfasfinil>-L-3-<i‘-naftilíalanil—L-leucil3-<S)-2-ami~ no-3—cic1o—hs κ i1-í R) — 1-(2-furani1)propan—1~pl

Exemplo.58

NrINzi,Dielo,r4fpgf.in,il>zk"ll~ietPixi,feoili) -1. suc i 11 - (S) -2-araino-~5--c icl o--hsx i 1 - (R) -1 - -(2-furan i1)propan-1-o1 A uma pasta fluida agitada de Θ = 83 g do hidrocloreto do éster metílieo de L---(4-metoKifenil )alanina em 4Θ ml de diclorome-tano sab érgon foram adicionados 1?Θ9 ml de tretilamina e ©5572 ml de cloreto de dietil-fosforilo» A mistura foi agitada de um dia para o outro e em seguida foi lavada cora solução de bicarbonato de sódio a i'3% e salmoura. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo» 0 resíduo era acetato de etilo-diclorams™ tsn.a (Isi) foi filtrado através de uma almofada fina de silicato de magnésio hidratado s a almofada foi lavada cora acetato de stilo-dicloFometano íisi) e o filtrado concentrado até a secura ds modo a obter—se um óleo que cristalizou» Qs cristais foram recristalisados a partir de éter di-isopropílico de modo a obterem-se Θ»932 g ds N-ídietaxifasfinil>-L—<4—metoKifenilJala-nato de metilo sob a forma de cristais brancos? p»f= 5B55“ó0s5QC? IIα 1 -i}°± 1 kc — 0S947? metanol)»

Ao composta anterior 179 g) em 1Θ ml de metanol forara adicionados i»3© ml de hidróxido de sódio 1M e a soluçSa

foi agitada durante 1,5 horas, Foi adicionada uma quantidade suplementar de o,52 ml de hidróxido de sódio 1M e depois- de 5 minutos, foi adicionada ácida clarídrica 3N até a mistura ficar acidica e removeu-se o solvente, O residuo foi extraído com diclorometano» Os extractos foram secos CMqSChj) e o solvente removido de modo a obter-se N-ídietilfosfinil)-L“<4-metoxifenil)-alanina sob s forma de uma goma,

Esta goma, sob árgon, foi dissolvida em 6 ml de diclo-rometano e adicionaram-se 52,3 mg de trietilamina e β,229 g de hexafluorofosfato de benzotriasol-l-11trisCdiraetilamino)fosfánio ÍBOP) . Após- agitaçSo durante um minuto, foram adicionados ¢5-,145 g de M-CL-leucil>“<S}~2-afiiino-3~cícIa-hexíl~(R>-l-<2-furanil)pro- pan-l-ol e a mistura foi agitada de um dia para o outro, 0 solvente foi removido e o resíduo, dissolvido em acetato ds etilo» foi lavado com água, A camada orgânica foi seca (HqSO,) e o solvente removida, 0 resíduo foi cromatagrafado sobre gel ds sílica com solvente acetato ds etilo-diclorometano C1 η 1} até acetato de etilo íeiuiçSo gradiente) como sluente. As fracções contendo o produto foram combinadas e o solvente removido de modo

—. 7 A a obterem—ss ®,1/® q de uma espuma brancas Ca 3.^'“'" -3®°±1 Cc = 1,00, metanol). usquindo o procedimento anteriormente referido podem ser preparados os compostos seguintes, N-Llv-CDietoxifosf ini 1 }~L-(4-metoxifenil >alanil-L-leucil3-(8)-2-—-siii in o-3—c ic 1 o— he x i 1 < R) -1 - < 5- b romo-2-f u ran i 1) pro pan -1 -o 1 N— C N—(Dietoxifosfinil>-L-C 4-metoKi feniI)alanil-L~leucil3-(8)-2-—am ino—3—cic1o—hex il-(R)-í-{5~aceti1—2~furani1> propan-i—ol

N~ CM- < Die toK i f osf in i 13 -L- (4-íee t.Q>; i f en i 1) al sn i 1 -L-1 eu c 113--(3) -2---af?sinD"-3“Ciclo-heKÍl-<R)”Í~í5-clDro-2“furanil) propan-~ 1 --o 1 N“lN~CDIetoxi fosf in113—L-(4-malo>;i fsn i1)aIan i1-L—1suc113-(3)~2~ ·· arn i n ο—3—c i c 1 o- he x i 1 — C R > - i - C 5-1 r i f 1 uo roac e t i 1 — 2- f u rsn 113 propan— -l-ol |4“S:N™CDistpKifosf inll >-L-í 4-fnetoxifeni 13alanil-L-leucíl3-ÍS)-2--aíiílnG-3”CÍclQ-heMil~íR3“l-(5-isaprQpQMicarbonil-2-furanil)pra-parr-l-ol Ν" í |Μ“ < Di sIdm i f osf i ni 1) -L- < 4-me t i f επ 11) a 1 sn i 1 -L-1 euc i 1 3 - (S) -2--amino“3"Ciclo-bexil-íR)-l-<5~furan-2-carboKamida)=

Claims (2)

1. ReivinoicsçSss iâ* - HrDC53SD para a preparacSo ds um composto da R, 0 R. 0 R. OH I II I II II Ri-NH-CH-C-N-CH-C-N-CH-ÇH-À I · I · ao que F:.. é (CH,)m V '\ O P — fenilmetil -o-( p-V_' alquil 0 0 2 i Si Lalquil s í fenil-0>^P-s Lalqaii (C1 -C? )jialqail CC.,-0^)· oo o « H I! 0 3?-';; (fsnilmstíl“0)2P-5 Ealquil (C, -CA S-ul l f snil-03P-, Efenil- 0 0 *< „J iaiqail (C1 -CA) 0 jp- 3 r fsnil CCH„)n 31 fenil-03P-, alqai 1 (C., -

   ίΩ4 Q 0 Π1 p-w «β Γ q <fenil-0)-P~s í 3-L-pra1x1o, K-L-tioproli “U, > 3 C f εη i1me t x1-Q 3 P lo5 K-L~ssrilu 5 *hz. ia t x onilo f H—L—a1 an i 1 o 5 H-L-feni1a 1 an i 1 ο ι R-L-(B~benz i1)c istsini lo, R-L—hi stidilo ou R—q1 icilo, SiTc qi ue Π έ um numero xntei ro ds 1 a 4 Ί m é uns núiser o intsi u ·*η - λ § u uS ^ tl 4 e H j4í seleccionado a partir de um dor grupos definid Ο ν’ p-5, 3. K Λ ! ? I £“t f enl Imsti lo» —CH^Í2—tienil), —uh _ (ò --· i n d o 111) ;i 4~mstaxibenzi Iq ou sí. ~CH.~(-naf til | R-, é hidrogénio ou meti! o § R* é 4~í imidazolil )Ci-uX-5 a 1 q u. i 1 q CC -C0) = J. SJ - X ~âlquiiíC„ -C) • í CH.-. 1 -fsJH “5 y f sni1meti1o q e i c1o—he x i1me t i1a, - X“Cic1o—hs x i1 - < CH.-i) _ - X~alquil(Ci as porções das —X—CH.-X-H.-Jml a3.qui 1(0.;--C—> 3 ^ (onde X é —G fórmulass rc- h.rnr ruarogen:

   H ou TitastÍliJS K alquilo (C mi i 1 o,, L QUX 1 \ C -j “ϋ-ç-) OU cii.lo-hssxxImsLi 1 o5 —íUH.-, X -CH

   onde R-? á hidrogénio, alquileiU, -C^ )5 Brs Ci s t ou COR^, onde Rr é Hs CF^p NH^p OH5 -O-alquii(C,~C4>s ~NH~alquil iC., -C4) , alqui- Io(C.= -C, > , CH.-.OH, -NCalquilíC.-C^) 3„ ou x a · ^ " i o z:

   -NHCH e em que os asteriscos representam átomos de carbono assimétricas 9 caracterizado por compreender a activaçlo de um composto da fórmula.

   R -NH-CH-C-N-CH-C-OH ♦ i ♦ *3 com um reagente ds acoplamento peptidico de NsM'--di-ciclo—hesil-carbodi-imida,: NSN'-dl-ciclo-hexilcarbodi-imida roais hidraxi-suc-cinimida, N3N'—di—ciclo—hexilcarbodi-imida rasis 1—hidroxi—benza— triazolp dietil—fosfato de l--benzatriazalilas i—cloro-NsN-2~tri-· meti1-i-propen—i—amina5 dífeni1—fosfori1-azida5 fosforocloridato da dietilOj fosforocloridatas de dx-alquilo inferioríC., ~~CR) 3 fosforaelaridato ds difsnilo- hexafluorofosfato de fenil-fosfaro-dicloridato—benzotriasol—i-iloKitris(dimetilamino)fosfónio5 cloreto N»N' -bi3L2“Oxo-d-oxazGlidxniljfGsforodiamidicOj cloreto ds difsnilfosfinilOj cianeto de de dietoxifosforilos W5W—carbo— nildx-i®idazQla3 ou cloroforroato de isobutilo mais

   N~meiiífflGrfoIina5 iodsto de S-claro-i-mstilpiridiniop da modo a obter-se um intermediário da fórmula

   R .-NH-CH-C-N-CH-C-X 1 * I (em que X é uma porção activadoraíg a reacçao do intermsdiârio a - 1©°C até 25°C em tetra-hidrofurano5 dicKsno, dicloromeiano ou acatato da atilo com um composto da Í-amino-~2~-hidroxi ds fórmula rc or r5-nh-ch-ch-a • · sm que Y é hidrogénio ou um grupo bloqueador removível de trine-tílsililoj t-butildimatilsililos fcetra~hidropiranila? acsiilo;; ou benzoilo es quando Y for um grupo de protecção* a remoção do grupo protsctor de hidroxilo* 2a* - Processo de acordo com a Reivindicação 1? carsc-tarizado por se preparar um composto sm que os amino-ácidos têm a configuração natural L= 3ã* - Processo de acordo com a Reivindicação 1 s carac-tsrizatío por se preparar um composto sm que a unidade C-fcermina3. é da fórmula IBS R T nh-ch-ch-a t I I I OH 0 n fejíii que K., é C.3.iiju 11 i C·"!_·,. (teπ i l—O)P η Ce.lqu.il CL., L, 1 3— 1 1 Q Z. αί. * I D a a ju Γ. a laui 1C L. -C, ) -0 3 E f e- i & C a 1 a u i 1C C-C .. ) -O 3,, C f en i 1 ma t i 1 ~U 5 ,-,r-· ' I o nil-Ojp-; R._, é íeni Imetilo,. C3-xnrJDl.il )0Ho ? C2-t.ien.il 5CH.-j du CH_-naft.il 5 R_ é hidrDqénios R„ é alquiloCC,-C_>
2. ,, 2 ' O “ ’ ·'+ 1 o

   -CHj

   & M & *

   I Η Ί \' Ν

   R.., é coma prevismente definidos e RQ é NH?5 0!-L -O-alquil (Ci -“0Λ)5 “NH-alquil(C?-C^)5 alquilo inferior(C1-C^)g e em que os asteriscos representam átomos de carbono assimétricos» 4ã. — Processes de acordo com a Reivindicação 3, carac-terizado por se preparar o composto l;|-CÍ!-CdietGxifo3finil}”L~-fe···-nilalanil-L-histidii 3-<S>-2-amino—3-ciclo—hexil-CRí-i-íP-imidaso-lil )propan-i-ol= 5s-= - Processo de acordo com a Reivindicação 3, carac-tsricado por se preparar o composta N-CN-< d i e to κ i f os f i n i 1) —L~ f e -ηϊΐ3ΐβηϊ1·“ίν-1οοοί13·"ί5)~2-βίΒίηο~3~οϊο1ο—hexil”(R)”i“(2“tiazolil > — prapan-i-ol= èl„ - Processo de acordo com a Reivindicação 3* carac— terizado por se preparar o composto N-EN-<dietoxifosfinil)-L-fe--nilalanil-L-histidil J-CS>~2-sffiino~3~ciclo“heKÍl~íRí~Í~-<2-iienil > — propan-j.~ol„ 7:5-u - Processo de acordo com a Reivindicação 35 carac— terizado por se preparar o composto N-CN-Cdietoxifosf inil )-L-fe·-· n i 13.1 an i 1—L—hist id ϊ 1 3— (S) — 2-ami no—3—c i c 1 o— he κ i 1 — (R) — i — < 2- f u r a— nil)propan-í-ol„ 19® 8â= - Pracssso de acarda com a Reivindicação 3, carac-ierisado por se preparar o composto Μ-ΓΝ-CdietoKÍfosfinil)~L—fe~ nilalanil-L-histidil 3-<S)-2-amina-3-c iclo-hsKÍl-<R> ~l~<2-iisca--1i1)propan—1—ol* 91= - Processo os acordo com a Reivindicação 3= carac-terizado por se preparar o composto N-lN-CdietoKifosfinil)-“L-“3--(1'-naftil)alanil~L”hi5tidiIj~(S)“2“aminO“3-ciclD™heMil-tR}-· -1--( 2---lmidasolil) propan-1—ol = Lisboa= l2 de Dezembro de 1989

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