PT91925B - Processo para a producao de tomateiros cujos orgaos masculinos sao esterilizados - Google Patents
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-
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Description
DescriçSo
Antecedentes da invençSo
A presente invençSo refere-se à produçSo de tomateiros cujos órgSos masculinos sSo esterilizados. No presente contexto considera-se urna planta de órgSos masculinos esterilizados se nSo produzir pólen ou pelo menos pólen germinavel e for desse modo virtualmente incapaz de auto-fecundação» mas pode ser uma planta-rriSe feminina num cruzamento com uma planta de órgSos masculinos ferteis.
Os tomateiros de polinização aberta que sSo vulgarmente cultivados foram ultrapassados por diversas
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BAD ORIGINAL variedades de tomates híbridos F^ em alguns aspectos como o rendimento, uniformidade ou produção de frutos e a produtividade líquida. Mas por que o tomate é uma produção em cultura, a polinização e eastração manual laboriosa foram antigamente pre-requisitos ao aproveitamento da vitalidade do híbrido na produção comercial de frutos híbridos.
Uma alternativa à manipulação da planta-mãe feminina, impedindo deste modo a autopolinização, é a utilização de mutantes de órgãos masculinos esterilizados ou outros mutantes esterilizados como plantas-mãe femininas. Conhecem-se 55 genes que afectam a esterilidade (esterilidade masculina genética ou g-mst) no tomate Lycopersicon esculentum Miller e tem-se utilizado as linhas de tomate g-mst numa basè limitada para a produção comercial de sementes e frutos híbridos em Israel, na Bulgária, em França e nos Estados Unidos.
Entretanto, dificuldades encontradas na produção de uma população de c ampo composta primeiramente de plantas-mãe de sementes g-mst (grupos homogéneos) restardaram a utilização mais ampla da esterilidade masculina genética na bibridização do tomate. Além disso, a intragressâo de determinantes g-mst (ms) num contexto desejado vincula geralmente vários gerações de cruzamento e selecção antes de se obter plantas de órgãos masculinos esterilizados que são por outro lado idênticas às da variedade desejada. Por estas razões, a produção de sementes* tomade F^ tem sido até agora de trabalho intensivo, de um consumir de tempo e de custos de produção elevados.
Uma outra alternativa, pelo menos em teoria, seria o aproveitamento da esterilidade masculina genético-citoplásmica no contexto da produção de tomate híbrido. Em termos gerais, os genes ms nucleares são insensíveis ao citoplasma, enquanto que a acção de determinantes nucleares (genes fr) que afectam a fertilidade mas2
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culina é sensível ao citoplasma. Assim, os genes fr actuam apenas num certo tipo de citoplasma (o citoplasma S), que contém genes c específicos, a fim de produzir uma esterilidade genetico-citoplásmica masculina (gc-mst).
De acordo com o pedido de patente japonesa ns 63-500001, por exemplo, as características dos órgãos masculinos esterilizados podem ser transferidos para uma variedade protectora de cenoura (Daucus carota) por combinação do núcleo de uma variedade protectora com um citoplasma enucleado de uma variedade de cenoura gc-mst. Nem esta estratégia nem nenhuma outra baseada na esterilidade masculina genético-cito plásmica é praticável no tomate, contudo, devido a não se ter encontrado nenhum citoplasma utilizado no L. esculentum.
Resumo da invenção
É assim objecto da presente invenção proporcionar um método para produzir tomateiros de órgãos masculinos esterilizados que seja prático de realizar a n ível comercial e que possa ser efectuado de modo eficaz num único passo, i.e, dentro de um espaço de tempo relativamente curto sem cruzamento ou cruzamentos anteriores.
É também objecto da presente invenção proporcionar meios para realizar a produção à escala comercial de semente ou fruto de tomate híbrido sem recurso a técn cas dispendiosas e de intenso trabalho até agora disponíveis.
Na realização destes objectos, proporcfonou-se, de acordo com um aepecto da presente invenção, um método para a produção de tomateiros de órgãos masculinps esterilizados constituído pelos seguintes passos
A) fusão de protoplastos de tomate que contém elementos cicoplásmicos inactivados com protoplastos de
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Snlanum que contém elementos nucleares inactivados, para obter uma pluralidade de produtos de fusão; e (B) Regeneração de pelo menos um produto de fusão da referida pluralidade num tomateiro completo, de órgão masculinos esterilizados.
De acordo com um outro aspecto da presente invenção, proporciona-se um tomateiro de órgãos masculinos esterilizados que é o produto do método acima descrito. Também se proporciona um grupo homogéneo de tomatei ros de órgãos masculinos esterilizados que era anteriormente inacessível na prática.
A partir da descrição pormenorizada que se segue tornar-se-á evidentes outros objectivos, características e vantagens da presente invenção. Deve, no entanto, entender-se que a descrição pormenorizada e os exemplos específicos, embora indicando realizações preferidas da presente invenção, são dadas apenas como meio de ilustração, visto que várias alterações e modificações no espírito e âmbito da presente invenção se tornarão evidentes para os peritos na técnica a partir desta descrição detalhada.
Descrição pormenorizada das Formas de Realização preferidas
Concluiu-sa que uma incompatibilidade entre os genes nucleares e os genes citoplásmicos pode ser utilizada com vantagem num método para proporcionar e produzir tomateiros de órgãos mascúlinosesterilizados, em que o método envolve a introdução de citoplasma estranho mas não genes nucleares estranhos, nas células de uma variedade cultivada de tomate desejada. Em particular, os protoplastos de uma variedade cultivada de tomate cujos órgãos masculinos estão para ser esterilizados, de acordo com a presente invenção, são tratados com um inibidor citoplas4
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mico, a fim de inactivar desse modo os factores citoplásmicos, e são então fundidos com fotoplastos, obtidos a partir de uma planta de uma espécie Sobanum , em que os genes nucleares foram inactivados. Evita-se deste modo a esterilidade total, tal como foi descrita a partir de híbridos somáticos regenerados a partir de heterocariões produzidos via fusão de protoplastos de tomate e de batata não-tratados (Solanum tuberosum), ver Melchers et al., Carlsberq Res. Conrnon. 43í203-18 (1978); shepard et al., Science 219:683-89 (1983), enquanto se alcança uma forma de esteriiilidade parei, desejável (esterilidade dos órgãos masculinos).
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Esta distinção entre as duas origens dos protoplastos utilizados na presente invenção é bem aceite taxononjicamente. C0nforme anteriormente referido o tomate comercial pertence a uma espécie, da família Solanaceae, que é muito frequentemente referido como Lycopersicon esculentum Miller, embora tenham surgido nomes alternativos (Lycopersicon lycopersicum e Solanum lycopersicul L., por exemplo ). A família Solaceae é principalmente dividida em duas sub-famílias, a Solanoideas e a Cestroideae, a primeira das quais se encontra ainda subdividida em tribos, A Lycopersicon pertence à maior destas, a tribo Solaneae, que também inclui o género Solanum.
Os membros da família Solanaceae partilham uma estrutura floral geral, caracterizada por pétalas que estão ftindidas juntamente, pelo menos na base, e pelos filamentos dos estames que estão fundidos às pétalas de modo que os estames parecem surgir da corola. Os dois géneros, Lycopenslcon e Solanum são tradicionalmente separados na base da morfologia de antera única normalmente encontrada na espécie Lycopersicon, que inclui o tomate comercial. A for de Lycopersicon possui normalmente cinco anteras (algumas variedades das espécies de cultura L. esculentum possuem seis), e os estames estão unidos juntamente para formar um cone de antera em forma de frasco que é caracterís- 5 BAD ORIGINAL I
tica do género. O gargalo do cone é formado pela extremidade estéril alongada de cada antena, e é esta característica que tem sido largamente utilizada para distinguir o Lycopersicon do Solanum . Também associado a esta característica está o aspecto invulgar de antena deiscente encontrado nas espécies Lycopersicon em que as anteras pendem lateralmente em con traste com as anteras deiscentes terminais encontradas na Solanum.
A distância bio-sistemática entre as espécies L. esculentum e Solanum empregues como fontes de protoplasto, de acordo com a presente invenção, não é decisiva; isto é a esterilidade dos órgãos masculinos desejada pode ser alcançada, com razoável reproducibilidade, enquanto os protoplastos de tomate de citoplasma inactivado são fundidos com protoplastos de nucleares inactivados derivados de uma planta Solanum. As fontes preferidas de protoplastos utilizados na presente inveação são as batateiras (S. tuberosum) e plantas de uma espécie Solanum que é considerada análoga da batata) devido a possuir um pedúnculo ou tubérculo subterrâneo (Rizoma de armazenamento) com intermódulos encurtados. De acordo com este critério muitas espécies Solanum, tais como S_. berthaultiHawkes, S. chacoense, S_j_ tarijense Hawkes, S. kurtzianum, S_. demissum Lindl. e S. poliadenium Greenm., qualificam-se como análogo da batata.
Exemplar da série Solanum análogo da batata é a espécie tetreplóide S. acaule cresce como um invólucro a baixas temperaturas, alonga-se a temperaturas entre 20° e 3O°C, e possui frutos que são redondos e de cor verde.
As espécies podem propagar-se a partir de tubérculos e, a este respeito, assemeibam-se a S. Tuberosum. As pétalas de S. acaule são brancas ou púrpura e as suas flores, embora muito maiores, tem uma morfologia que se assemelha à da batata. A marcante resistência à congelação da S. acaule indentifica a espécie como uma atrativa fonte potencial de resistência ao frio no programa de produção de tomate. Veja6
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J
-se Melchres, Topatoes and Pomatoes, ._Somatic Hybrids Between Tomatoes and Potatoes, in TISSUE CULTURE AND RES 499,505 (Akademiai kiado, Budapest 1984). A Splanum acaule é auto-fertilizável mas não se cruza sexualmente com tomate, um facto que tornou impossível até alora a produção de híbridos de S. acaule / L, esculentum.
A solanum acaule Hawkes é oriunda das altitudes mais elevadas dos Andes onde as plantas desta espécie são facilmente obtidas. Além disso, a S. acaule é cultivada há muitos anos no Max-Pianek Institut fur Zuechtusgsforschung (Cologne) FGR) e, mais recentemente no Max-Pianck Institut fur Biologie (Tuebingen, FGR), Material para propagação destas espécies está disponível nestas duas fontes (P.O.Bo?c5969, 1OO LIMA, Peru), uma instituição pública e um centro internacional de pesquisa de batata.
Os protoplastos para utilização na presente invenção podem ser produzidos por técnicas enzimáticas convencionais. Existem inúmeras enzimas disponíveis comercialmente, tais como a Celulase Onozuka R-10 e a pectinase Macerosyme R-10, ambas produtos da Yakult
Honsha Co. (Tokyo) que são apropriadas para utilização neste contexto.
Conforme descrito, por exemplo, por Eriksson, Protoplast Isolation and Culture in PLANT PROTOPLASTS 1-20 (CRC Press 1983) (aqui “Eriksson), cujo conteúdo é aqui incluído por referência, o isolamento enzimático de protoplastos pode ser realizado de dois modos diferentes :
o método em dois passos (ou método sequencial) e o método de passo único. No método de dois passos, o tecido é primeiro tratado com uma macerozima ou pectinase que separa as células por degradação da lamela média. As células libertas são então tratadas coro celulose, que liberta os protoplastos.
Sm geral, as células são expostas a diferentes enzimas por
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períodos mais curtos do que os utilizados no método de passo único. No método de passo único o tecido é sujeito a uma mistura de enzimas, incluindo a macerozima e a celulose. Este método resulta geralmente em rendimentos mais elevados a partir de tecidos da folha, visto que as duas células do mesófilo (estacada ou esponjosa) libertam protoplástos, e é também de trabalho menos intensivo.
Vqsto que os protoplástos são de carga negativa e não se fundirão de modo expontâneo a frequências utilizáveis, a fusão dos protoplástos tem de ser induzida. Realizações preferidas a este respeito vinculam a utilização de um agente de fusão químico tais como cálcio elevado e pH elevado, veja-se Keller and Melchers,
Z. NAturforscb. 28c: 737-41 (1973), e polietileno glicol (PEG), que é vulgarmente utilizado, como uma redução de PEG 1540, 4000 ou 6000. Também se podem utilizar métodos eléctrioos para induzir a fusão de protoplástos, por exemplo, por meio da técnica de vibração do campo eléctrico descrita por Vienken et al., Physiol. Piant. 53:64 (1981).
A fusão das células entre protoplástos de Solanum e tomate pode, assim, ser efectuada de modo convencional. A partir das calosidades desenvolvidas a partir dos produtos de fusão resultantes, podem regenerar-se plantas completas de acordo com a metodologia disponível conforme descrito, por exemplo, por Shahin, Theor. Appl. Genet. 69:235-40 (1985) (aqui o artigo de Shahin), Melchers and Labib, Mplec. Gen. Genet. 135:277-94 (1974), e Kao et al., Pi anta 120:215-27 (1974), cujos respectivos conteúdos estão aqui incluídos por referência. Em geral, cerca de 20% a 30% das calosidades obtidas deste modo são regeneráveis em plantas. As calosidades a partir das quais se podem regenerar tomateiros de órgãos masculinos estereis na presente invenção são obtidos a uma frequência, tipicamente na variação entre 10 e 1O~ , que é facilmente fornecida com as técnicas de selecção / regeneração da
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calosidade disponíveis.
De acordo com a presente invenção, tratam-se os protoplastos de tomate de modo a inactivar o material genético contido no citoplasma. De preferência, isto é realizado por exposição dos protoplastos de tomate a um composto (aqui inactivador citoplásmico) como o ácido iodo-acético ou Rhodamine 6-G, que bloqueia a replicação, ou rompe o DNA da nitocôndria. Um inactivador citoplásmico preferido neste contexto é o iodo-acetato ou um dos seus derivados, tal como iodo-acetamida. A inactivação citoplásmica pode ser realizada, de acordo com a presente invenção, por suspensão temporária, de protoplastos de tomate numa solução aquosa contendo uma quantidade do inactivador citoplásmico que tenha sido determinado empiricamente como sendo eficaz no rompimento do material genético citoplásmico.
Assim, a concentração específica do inactivador citoplásmico que é muito favorável pode ser facilmente determinada em relação, por exemplo, à condição fisiológica e de grupo da origem a partir da qual são obtidos os protoplastos de tomate. Para es protoplastos de tomate utilizados nos exemplos a seguir, as concentrações apropriadas do inactivador citoplásmico seleccionado (iodo-acetamida) localizavam-se na variação entre 5 e 30 mM.
Os protoplastos de Solanum a ser fundidos com os protoplastos de tomate, de acordo oom a presente invenção, devem ser tratados para que a transmissão dos genes nucleares para os produtos de fusão seja impedida.
Esta inactivação nuclear é, de preferência, realizada por irradiação da planta dadora (antes do isolamento de protoplastos) ou dos próprios protoplastos,
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ORIQlNAk J após isolamento, com uma dose apropriada de raios x ou Tal como com o inactivador citoplásmico, a dosagem de radiação mais favorável para uma dada situação pode ser determinada por experimentação de rotina. Para a S. acaule concluiu-se ser apropriada uma dose de raios-x ou na variação de 10 a 200 krad.
Na presente invenção, os protoplastos de tomate de citoplasma inactivado e os protoplastos de Solanum que contém um complemento nuclear-genético inactiva do são submetidos a fusão de células a fim de dar origem a uma cooperação modificada entre o núcleo e o citoplasma, sem produção de e feitos mutagénicos significantemente adversos nos genes nucheares dos tomateiros, produzindo deste modo tornateiros de órgãos masculinos esterilizados.
As anteras e o pólen dos tomateiros de órgãos masculinos estéreis da presente invenção diferem tipicamente na morfologia da planta original (mãe) masculina fértil do seguinte modo:
A) A planta de órgãos masculinos esterilizados pode ter antenas normais, contendo grãos de pólen todos coloridos com aceto carmina (uma indicação de viabilidade) mas não germinam.
3) A planta de órgãos masculinos esterilizados possuem antenas normais mas muitos dos seus grãos de pólen são diminuídos e não germinam.
C) A planta de órgãos masculinos esterilizados pode ter antenas diminuidas e não ter pólen.
D) A planta de órgãos masculinos esterilizados pode ter antenas normais mas ou (i) significantemente poucos dos 100% dos seus grãos de pólen se colaram de acetocarmina ou (ii) alguns dos seus grãos de pólen germinam quando colocados num meio artificial
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de germinação de pólen.
As plantas do tipo (D) são fontes potenciais de um genotipo (B-linha) conservador apropriado para utilizar na sustenção de uma linha de tomate idêntica mas de órgãos masculinos esterilizados produzida de acordo com a presente invenção. De qualquer modo, tais plantas são facilmente diferenciadas desde o tipo (A), tipo (B) e tipo (D), com base nos critérios de aparência e coloração de pólen anteriormente discutida.
Excepto no que se refere às antenas e ao pólen, não se detectam facilmente diferenças morfológicas entre os tipos acima referidos de plantas de órgãos masculinos esterilizados da presente invenção e as plantas-mâe. As plantas regeneradas a partir de produtos de fusão, de acordo com a presente invenção, diferem assim das plantas-mãe férteis em que a pólen do primeiro não germina nas estirpes dcs tomateiros férteis sob condições normais de cultura de tomate.
A presente invenção é ainda descrita por referência aos exemplos ilustrativos que se seguem.
Os exemplos mostram como se obtem novas variedades de tomate híbrido, conforme anteriormente descrito, utilizando plantas que representam cinco variedades de tomate, respectivamente, e um exemplo de espécie Solanum.
Exemplo 1
Seleccionou-sa a variedade de tomate congénita Sekai-ichi por conversão à esterilização dos órgãos masculinos. De acordo com a ENCYCLOPEDIA OF HDRTICULTURE, Vol. 6 (Seibundo Shinkosha), 1970, o Prof. Taniguchi do Tokyo Higher Agricultural College caracterizou a Sekai-ichi em 1933 como uma selecção da variedade Ponderosa ou um hábrido obtido por meio de um cruzamento
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envolvendo a variedade Beefheart. A Sekai-ichi cresce vigorosa e abundantemente, e é uma planta de crescimento médio ou lento. Cresce bem em locais onde a Ponderosa também cresce bem mas é colhida ligeiramente mais cedo. O fruto da Sekai-ichi é coçde-rosa, achatado, e maior do que a média, com topos pontudos, cavidades profundas e fimbrias que se prolongam para trás,
As sementes de tomate da Sekai-ichi foram germinadas assepticamente e os cotilédones dissecados das mudas e colocados numa versão modificada da redução de enzimas TSE-2 descrita por Shahin, CELL CULTURE AND S0I4ATIC CELL GENETICS OF PLANTS, Vol. 1, pag. 375 (Vasil ed. Academic Press, 1984) para obter protoplastos. Modificou-se a composição da solução de enzimas de modo a conter 2% de celulose Onozuka R-10 e O, 2% Macerozyme R-10.
Isolaram-se os protoplastos assim produzidos e suspenderam-se numa solução contendo 10 mM de iodo-acetamida, e levaram-se então a descansar a 4°C durante 15 minutos para inactivar os factores citoplásmicos dos protoplastos.
Separadamente, propagaram-se assepticamen te, por corte, plantas Solanum acaule. Dissecaram-se as folhas e irradiaram-se com raios-x e - para inactivar os seus genes nucleares. Subsequentemente, trataram-se as folhas com a solução de enzimas TSE-2 modificada anteriormente descrita, produzindo assim protoplastos.
Misturaram-se juntamente números iguais de protoplastos de tomate tratados com iodo-acetamida e protoplastos de S. acaule irradiados e submeteram-se a fusão das células de acordo com o método de Kao et al,. Planta 120: 215-27 (1974). Modificaram-se as soluções para tratamento da fusão como a seguir se indica:
- 12 &AD ORIGINAL
Adicionaram-se cinco gotas da solução de suspensão de protoplastos, por meio da pipeta de Pasteur, a um prato Petri de plástico; doze minutos mais tarde, adicionaram-se de igual modo doze gotas de solução de PEG / 25 % (p/p) de polietileno glicol 1540, 10,5 mM de CaCl^ e 0,7 mM de KH2PO^_7 e levou-se a solução a descansar durante vinte minutos.
Adicionaram-se então vinte gotas de uma solução de elevado pH/elevado Ca constituida por 50,0 mM de solução tampão glicina-NaOH (pH 10,5), 50,0 mM de CaCl2 e 0, 2M de manitol, conforme descrito em Keller e Melchers, Z. NRturforsch 28: 737-41 (1973); vinte minutos depois, adicionaram-se mais vinte gotas da mesma solução de elevado pH/elevado Ca após um volume de líquido comparável ter sido primeiro retirado da solução de suspensão. Retirou-se então um volume aproximadamente de vinte gotas e adicionou-se de lavagem contendo 0,75 mM CaCl2 e 0,4 M de manitol. Quinze minutos mais tarde, após se ter retirado um volume de vinte gotas da solução de suspensão, adicionaram-se vinte gotas da solução de lavagem. Depois retirou-se a solução de lavagem, adicionaram-se vinte gotas da solução TM2 descrita por Shahin. Theor. Appl. Genet 69:235-40 (1985) (aqui “o artigo de Shahin) e, quinze minutos depois, substituiu-se a solução de suspensão pelo mesmo volume do meio TM2.
Realizou-se a cultura e a regeneração dos produtos de fusão dos protoplastos de acordo com o método descrito no artigo de Shahin. Mais especificamente, duas semanas após a fusão, transferiram-se as mini-calosidades obtidas do meio líquido para um meio sólido para uma cultura de seis dias a 24°C, sob desasseis horas de luz (500 lux). As calosidades que cresceram transferiram-se para um meio de regeneração, descrito no artigo de Shahin, para uma cultura de dois meses a 24°C sob desasseis horas de luz (4500-5000 lux) . Transplantaram-se os rebentos que- geBAD ORIGINAL I
TM-5 (veja-se ο artigo de Sbahin) para uma cultura de dois meses. Enraizaram-se os rebentos e propagaram-se assepticamente por corte.
Cerca de quatro meses após a fusão transferiram-se para o solo de uma estufa para plantas.
Duas plantas regeneradas a partir da calosidade (calosidade A) obtida por meio da fusão de protoplastos de tomate tratados com iodo-acetamida e protoplastos de S. acaule irradiados com raios - γ' (100 krad), possuíam vinte e quatro cromossomas; As características destas plantas incluindo características das pétalas das antenas, não diferem das da Sekai-ichi mãe. Além disso, o pólen destas plantas, tal como o pólen da Sekai-ichi, colora-se quase 100% com acetocarmina.
No entanto o pólen destas plantas não germina num meio de germinação de pólen artificial descrito por Brewbaker and Kwack, Am,er. J. Botany 50: 859-65 (1963). Istr estava em surpreendente contraste com o pólen da Sekai-ichi, 80% do qual germinou neste meio. As duas plantas regeneradas fracassaram na produção de quaisquer sementes por auto-polinização e formaram sementes apenas quando foram polinizadas com pólen de variedades de tomate comuns e Sobanum pennellii, respectivamente. Quando polinizadas com pólen de Sekai-ichi, obtiveram-se cerca de 190 sementes por fruto (média de sete frutos).
Quando as sementes híbridas obtidas por polinização com pólen de Sekai-ichi foram semeadas, as plantas resultantes não diferiam das Sekai-ichi nas características morfológicas ou em crescimento. As plantas regeneradas de modo semelhante de uma outra calosidade (calosidade B) que havia sido obtida do mesmo modo da calosidade A, excepto por se terem usado raios-x em vez de raios - Ύ, também possuiam vinte e quatro cromossomas. Entre 7% e 44%
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do pólen destas plantas coloriu-ce com acetocarmina; o resto dos grãos de pólen eram diminuídos. 0 pólen colorido não germinou no meio artificial de germinação de pólen anteriormente referido.
Não se obtiveram sementes a partir das plantas da calosidade-E sob auto-polinização, mas obtiveram-se sementes a partir de todas as plantas quando foram polinizadas com outras variedades de tomate férteis, com o Sekai-ichi.
Exemplo 2
Seguiram-se os processos do Exemplo 1, excepto por se utilizar cada uma das variedades de tomate Red Cherry, VF-3 6, “Delicious e Kuribara como fonte
O de protoplastos e folhas de S. acaule irradiadas com raios- ya 100 krad.
Ag caracteristicas salientes de cada uma das variedades atrás referidas resumem-se a seguir:
(1) Red cherry - Esta é uma variedade de tomate vermelho-cereja, e utilizou-se como um tomate vermelho-cereja tipo nesta experiência. As caracteristicas do Red cherry são idênticas às do tomate amarelo-cereja, excepto na cor do fruto. O Red cherry é conhecido desde há muito tempo e foi cultivado na Europa durante muitos anos. Embora popular, de início, na jardinagem caseira, as plantas Red cherry tem sido recentemente utilizadas de modo extensivo para a produção de tomates vermelho-cereja no Japão. A sua maturidade é intermédia entre as variedades de maturidade precoce e maturidade tardia. As plantas desta variedade crescem alto, largas e direitas. Os pedúnculos e folhas são verde médio e crescem densamente. Os frutos crescem em cachos de
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a 9, e cada fruto é pequeno, redondo e vermelho, com diâmetros de cerca de 28 mm e pesos de cerca de 9 gramas. 0 fruto divide-se em duas câmaras, contendo cada câmara polpa e pequenas sementes. 0 gosto do fruto do Red cherry é suave.
(2) VF-36 - uma espécie desenvolvida na Universidade da Califórnia era 1959 a partir de um cruzamento de VC255 com VR11, a VF-36 amadurece cedo e é resistente ao murchar da Fusarium e Verticillium. A VF-36 possui padrão de crescimento determinado (autoelevação) com frutos que são grandes e pontudos de forma e pessam entre 160 e 200 gramas.
(3) D licious - Esta variedade é também conhecida há
O muito tempo e existem muitas famílias. Amadurece cedo e é apropriada para cultura rápida. Delicious adapta-se a qualquer género de solo bem drenado,
É resistente à superfertilização. Os frutos são graades, redondos e vermelhos, e tem uma forma muito agradável. Visto que o período de colheita é muito curto, é pouco razoável esperar que as colheitas sejam grandes.
(4) Kurihara - uma linha de uma espécie de longa duração, Kurihara possui trepadeiras vigorosas, cresce grande e desenvolve grandes folhas. É apropriada para cultivo tardio e campo aberto, e por isso adapta-se bem a cultivo em estufa no Outuno. é apropriado quer para tomate em fatias quer para uma grande variedade de aplicações. É uma planta de elevado rendimento que possui frutos de tamanho grande a médio. 0 fruto é alto arredondado mas, quando não se adiciona fertilizante suficiente, tende a tornar-se angular. Pode resistir a uma grande quantidade de fefctilizante, mas podem esperar-se regularmente grandes colheitas com apenas uma pequena
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quantidade de fertilizante. Devido à sua pele macia o fruto de Kurihara não se adapta bem ao transporte. O núcleo é pequeno. A pele muito fina e a polpa macia d.o fruto da Kurihara significam que o fruto racha quando amadurece demais. Assim, é importante ter cuidado com a regulação do tempo das colheitas.
Os rebentos enraiados obtidos a partir destas variedades foram testados pela capacidade de germinação do pólen conforme representado no Quadro 1. De acordo com o critério de germinação do pólen anteriormente referido, todas as plantas testadas eram de órgãos masculinos esterilizados, com a excepçâo de duas plantas, RC. A-a e VF B-a (veja-sé o Quadro 1).
Uma das plantas obtidas a partir de Red cherry (RC B-b no Quadro 1) não seria diferente da Red cherry em termos de morfologia da flor. Além disso, o pólen da planta de órgãos masculinos esterilizados coloriu-se com acetocarmina do mesmo modo como o pólen da Red cherry-mãe. Mas o pólen da RC B-b, a não ser o pólen da Red Cherry, não germinou em meio artificial de germinação de pólen. Além disso, não foram obtidas sementes a partir da planta de RC B-b após a auto-polinização. A planta dá frutos de cerca de 24 mm de diâmetro (média de 9 frutos) e obtiveram-se cerca de 82 sementes por fruto sob poiinização com pólen de Red cherry (média de 4 frutos)
Quadro 1. Resultados da coloração com acetocarmina e germinação de pólen em meio artificial âe germinação de pólen.
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As designações alfabéticas em maiusculas referem-se a calosidades diferentes das várias variedades.
As designações em minúsculas referem-se a diferentes plantas derivadas a partir de várias calosidades
Obtiveram-se também plantas de órgSos masculinos esterilizados quando, em vez de S. acaule,se utilizou S. tuberosum como fonte de protoplastos Solarum, de acordocom a presente invençSo.
A presente invençSo torna possível a conversão eficaz de qualquer variedade de tomate à esterilidade masculina num curto período de tempo, sem produzir quaisquer efeitos adversos, nSo-desejados, nas plantas resul tantes. A presente invenção proporciona os meios para produzir um grupo homogéneo de tomateiros de órgãos masculinos esterilizados, que é de grande utilidade na obtenção de híbridos de tomate de base comercial. Além disso, os tomateiros de órgSos masculinos esterilizados produzidos pelo método da presente invençSo possuem uma capacidade produtora de sementes que é praticamente igual à das plantas-mSe θ. especiaimente, são capazes de produzir sementes sem quais quer alterações nas características da planta como resultado da polinização com o pólen do tomateiro utilizado para fusão. Assim, um tomateiro de órgãos masculinos esterilizados da presente invenção é bastante diferente das plantas de órgãos masculinos esterilizados produzidos até agora utilizando métodos convencionais e, ainda, representa uma significação contribuição para a produção de sementes e fruto de tomate F1·
Claims (1)
- REI VINDICAÇÕES i * _ .1Processo para a produção de tomateiros cujos órgãos masculinos são esterilizados, caracterizado pora) se fundir protoplastos de tomate os quais contém material genético citoplásmico inactivado com protoplastos Solanum que contém material genético nuclear inactivo, para se obter uma diversidade de produtos de fusão.B) se regenerar pelo menos um produto de fusão dos obtidos em A) dentro de um tomateiro completo cujos órgãos masculinos são esterilizados.- 25 Processo de acordo com a reivindicação1, caracterizado por, antes do passo A), se tratar os protoplastos de tomateiro com iodoacetato du um seu derivado para produzir os referidos protoplastos de tomate que contém elementos cicoplásmicos inactivados.- 3fl Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por, antes do passo A), se produzir os referidos protoplastos Solanum que contém elementos nucleares inactivados, por se irradiar ou uma planta Solanum ou protoplastos Solanum com uma dose de esterilização de radiação de raios γ ou raios X.EAD ORIGINAL- 20 43Prccesso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por os referidos protoplastos Solanum que contém elementos nucleares inactivados são protoplastos de uma batateira ou de uma planta da espécie Solanum semelhantes à batateira.- 5a Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por os referidos protoplastos serem protoplastos S. acaule.- 5e Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por os referidos protoplastos serem protoplastos S. acaule.
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