PT89120B

PT89120B - Processo para a preparacao de novos derivados flavonoides 2-piperazinil-2-oxo-etileno substituidos

Info

Publication number: PT89120B
Application number: PT89120A
Authority: PT
Inventors: Jacques Duhault; Yves Rolland
Original assignee: Adir
Priority date: 1987-12-01
Filing date: 1988-11-30
Publication date: 1993-04-30
Also published as: EP0319412A1; PT89120A; AU610665B2; DK671688A; ATE73449T1; AU2636988A; JPH01294670A; GR3004855T3; EP0319412B1; IE883573L; ZA889023B; DK671688D0; DE3869075D1; FR2623808A1; OA09022A; JPH064616B2; ES2032335T3; FR2623808B1; NZ227149A; IE61455B1

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS FLAVONOIDES 2-PIPERAZINIL-2-0X0-ETIDEN0 SUBSTITUÍDOS.

A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de novos derivados flavonoides 2-piperazinil-2-oxo-etileno substituídos e de composições farmacêuticas que os contêm. '

Oonhece-se já que os flavonoides e alguns dos seus derivados produtos de semi-síntese possuem importantes activi dades fisiológicas e terapêuticas: em particular, reduzem a fragilidade e/ou a permeabilidade capilar e têm uma acção anti-inflamatória. (Burger’s Medicinal Ohemistry, 4 th Ed. Part. III, p.1258-1259 Manfred Volff edt., J. Wiley, N.Y.) (pedidos de patente de invenção francesa N2 7.329.235 e NS. 2.183.612; patente de invenção norte-americana N2 3.810.896).

Outros derivados dotados de propriedades coronaro-í -dilatadoras são igualmente descritos (patente de invenção norte-americana N2 3.002.979). Finalmente, alguns compostos de semi-síntese da hesperetina são conhecidos e encontram apli cação em bromatologia (patente de invenção norte-americana N2 3.976.790).

A requerente descobriu agora que alguns derivados flavonoides 2-piperazinil-2-oxo-etileno substituídos, de estru tura original, são dotados de propriedades farmacológicas muito interessantes. Oom efeito, os compostos preparados pelo pro cesso de acordo com a presente invenção actuam sobre os mediadores bioquímicos implicados nas perturbações devidas à insu-2?

ficiência venosa. Além disso, quando dos ensaios in vivo, os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção demonstraram um efeito inibidór muito importante em relação à constituição do edema.

A presente invenção diz mais particularmente respei to a um processo para a preparação de derivados flavonoides 2-piperazinil-2-oxo-etileno substituídos de formula geral

na qual:

- A representa uma ligação simules ou dupla,

- R^ e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um radical aleoxi-carbonil-metileno de fórmula geral -OH^COpR^. (na qual R4 representa um radical alquilo com 1 a 5 átomos de carbono) ou um radical de formula geral V:

/~~\

W = — h „0-0—R N (CH_O) ² 11 \ / ² ^x'

(na qual n representa um numero igual a 0 ou 1 e Rg, Rg e Ry, iguais ou diferentes, representam, oada um, um átomo de hidrogénio ou de halogéneo ou um radical hidroxilo, trifluorometilo, alquilo

inferior comportando 1 a 5 átomos de carbono ou. um radical alcoxi comportando 1 a 5 átomos de car bono),

- R₂ representa um átomo de hidrogénio, um radioal alcoxi-carbonil-metileno de fórmula geral -CE^OC^R^, um radical de fórmula geral V, ou uma molécula de

-glucose ou rutinose ligada ao átomo de oxigénio ao qual está ligada com uma ligação osídica, com a condição, contudo, de pelo menos ou o símbolo R^ ou o símbolo R₂ ou o símbolo R^ representar sempre um radical de formula geral V, assim como dos seus sais de adição com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

quer de se fazer reagir a diosmina, composto de fórmula

com um cloreto de alquilo de formula geral III compostos de fórmulas gerais Illa e Illbis:

comportando os

010H₂00₂R₄

Illa

0IV (III)

Illb

em que R^ e V/ têm os significados definidos antes, no seio de um dissolvente orgânico azotado polar, na presença de um sal inorgânico ácido de metal alcalino a uma tèmperatura compreendida entre 80° e 120°C, para se obter

- ou com os compostos de fórmula geral Illa, os compostos de fórmula geral

na qual R^ tem o significado definido antes? que se submetem a uma hidrólise ácida ha presença de um ácido inorgânico.concentrado e a uma temperatura compreendida entre 35° e 55°C para se obter o composto de· fórmula

OH

0CH₂00₂H (V) o qual em seguida:

- quer :

se submete a uma acetilação com anidrido acético no seio de um dissolvente orgânico azotado básico e à temperatura ambiente para se obter o composto de formula

que se faz reagir com um derivado da piperazina de fórmula geral

HN

na qual n, R^, Rg e Ry têm os significados definidos antes, na presença de uma amina terciária de pequeno peso molecular e de cloroformato de etilo, a uma temperatura compreendida entre 0° e 20°C para se obter os compostos de fórmula geral

(VIII) na qual' n, R^sRg θ Ry tem os significados definidos antes, que se submetem, em seguida, a uma desacetilação em solução em dimetilformamida na presença de um sal inorgânico ácido de um metal alcalino a uma temperatura compreendida entre 80° e 120°C, para se obter os compostos de fórmula geral

(q) na qual n, R^, Rg ei-, antes, que se condensam com um composto obter compostos de fórmula geral têm os significados definidos de fórmula geral III para se

na qual n, R^, Rg e Ry têm os significados definidos antes e R₂ representa um radical alcoxi-carbonil-metileno de fórmula geral -OHgCOgR^ ou um radical,de fórmula geral V,

quer :

se esterifica eom um álcool primário ou secundário comportando 1 a 5 átomos de carbono, em meio anidro a uma tem peratura compreendida entre 80° e 110°C e na presença de ácido tosílico para se obter os compostos de formula geral

na qual R^ tem o significado definido antes, que se fazem reagir ou oom um cloreto de alquilo de formula geral III^ para se obter os compostos de fórmula geral

na qual R^ representa um radical de formula geral V, *

• ou com um cloreto de alquilo de fórmula geral III^ para se obter os compostos de fórmula geral

X ^Κ4°2^σ—^Η2°·

(X) na qual R^ tem o significado definido antes, que se condensam com um composto de fórmula geral III^ para se obter os compostos de fórmula geral

na qual n, R^, Rg, Rg e Ry têm os significados definidos antes, ou com os compostos de formula geral os compostos de formula geral rutinose*—.

OH

(I_E)

na qual n, R^,rRg e Β,γ têm os significados definidos antes, que se submetem, em seguida, a uma hidrólise enzimática com naringinase para se obter os compostos de fórmula geral

na qual n, R^, Rg e E? têm os significados definidos antes, os quais em seguida, se submetem a uma hidrólise enzimática comJ3-glucosidase para se obter os compostos de fórmula geral 1^, que se condensam, em seguida, com um composto de fórmula geral III para se obter os compostos de fórmula geral I_B,

Quer :

de se fazer reagir um composto de fórmula geral

na qual A tem o significado definido antes, com uma quantidade adequada de compostos de fórmula geral ΙΙΙθ, para se obter os compostos de fórmula geral

na qual A, n, R^, Rg e Ry têm os significados definidos antes e R^ representa um átomo de hidrogénio quando a quantidade dos compostos de formula geral ΙΙΙ-θ utilizada for aproximadamente equimolar, ou um radical de fórmula geral V quando a alquilação se efectuar com uma quantidade de cloreto de alquilo de fórmula geral ΙΙΣθ pelo menos dupla, e de se salificar eventualmente, em seguida, os compostos de fórmulas gerais a Iq, que formam conjuntamente compostos de fórmula geral I, com um ácido orgânico ou inorgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

processo para a preparação dos compostos de fórmulas gerais 1^ a 1^ está ilustrado nos quadros das fórmulas N^l a N° 3.

Entre os ácidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico para a preparação dos sais de adição dos compostos de fórmula geral I, pode-se citar os ácidos clorídrico, fosfórico, fumárico, cítrico, oxálico, sulfúrico, ascórbico, tartárico, maleico, mandólico, metano-sulfónico, etc.»

Zll-

Os conmostos de fórmula geral podem preparar-se mediante amidificação de derivados da piperazina de fórmu la geral VII eom cloreto de cloroacetilo. Esta reaoção realiza-se no seio de um dissolvente orgânico clorado tal como o diclorometano a uma temperatura compreendida entre 0° e 20°C.

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção possuem propriedades farmacológicas e bio lógicas de grande interesse. Além disso, os seus sais de adição são muito solúveis em água. Podem portanto ser utilizados, com vantagem, para a preparação de injectáveis.

Os diferentes ensaios efectuados in vivo demonstra ram que os compostos preparados pelo processo de acordo oom a presente invenção possuem uma actividade antiedematosa muito potente. Ensaios in vitro demonstraram igualmente que estes compostos apresentam efeitos protectores, muito interessantes, face à reacção inflamatória.

Sabe-se que os metabolitos do oxigénio estão implicados nas reacçôes de inflamação tecidular tanto ao nível da reacção vascular como dos ataques tecidulares e celulares.

/* Bruce e Colab. , Lab. Invest., 1982,. 47, (5). p.412-426 J. Ensaios farmacológicos realizados com os compostos preparados pelo processo de. acordo com a presente invenção provaram que estes últimos inibem a formação de radicais livres oxigenados no meio extracelular. Os resultados dos estudos farmacológicos demonstraram igualmente que os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção possuem uma actividade inibidora sobre a degradação do AMP cíclico e tal como outros inibidores da fosfodiesterase /lehmeyer J.E. Jonhston, R.B. Clin. Immunol. Immunopathol., 9, p.482-490 (1978) J7 induzem

uma diminuição da libertação de mediadores da reacção inflamatória pelos polimorfonucleares.

edema e a inflamação tecidular são manifestações de insuficiência venosa. X Arch. Int. Pharmacodyn. Ther.”,

254, p. 168, (1981); e Phlebology 85, Nergus D. e Jantet G. , Ed. 1981, Eibbey J., Eon. Par.

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção encontram aplicação no tratamento de diferentes afecções vasculares e, em particular, no tratamento da insuficiência venosa crónica dos membros inferiores, funcional e orgânica, do edema dos membros inferiores, da doença hemorroidária, etc..

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção são substâncias muito pouco tóxicas. Gom efeito, a EE^q observada no rato e no murganho após administra ção por via oral é superior a 1600 mg. kg~\

A -presente invenção diz igualmente respeito às composições farmacêuticas comportando como ingrediente activo p_e lo menos um composto de fórmula geral I, ou um dos seus sais de adição com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob 0 ponto de vista farmacêutico, em associação com um ou vários excipientes inertes e apropriados.

As composições farmacêuticas assim obtidas apresentarn-se, com vantagem, sob diversas formas tais como por exemplo comprimidos, drageias, gólulas, pomadas ou outras preparações galênicas apropriadas para uma administração local, supositórios, soluções injectáveis ou bebíveis.

A posologia pode variar largamente em função da idade, do peso do paoiente, da natureza e da gravidade da afecção, assim oomo da via de administração. De uma maneira geral, a posologia unitária está compreendida entre 50 e 500 mg e a po sologia diária, utilizável em terapêutica humana, está compre endida entre 50 mg e 1 g.

A via de administração preferida é a via oral ou pa renteral.

Os exemplos seguintes, dados a título não limitativo, ilustram a presente invenção.

Os pontos de fusão são medidos de acordo com a técnica de Micro-Kò'fler.

EXEMPLO 1

7-/~ 2- -4-/~ (2,3> 4-Trimetoxi-fenil)-metil J -1-piperazinilj -2-oxo-etoxi_/-5--hidroxi-4-'-metoxi-3’-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-flavona

ESTÁDIO A

3Í20-(2-etoxi-2-oxo-etil)-diosmina

A 50 mmoles de diosmina e 52,5 mmoles de carbonato ácido de potássio, adiciona-se 250 ml de dimetilformamida anidra, depois 215 mmoles de cloroacetato de etilo, sob atmosfera de azoto e agitação em banho de óleo a 110°0. A mistura reaccio

nal fortemente heterogénea torna-se mais límpida com o tempo; continua-se a reacção durante 3 horas e meia à temperatura de 110°0. Apos arrefecimento, filtra-se o meio reaccional sohre vidro calcinado e evapora-se até à secura no rotavanor e com a bomba de palhetas, para se obter um resíduo de aspecto geli ficado.

Rendimento: 100%

ESTÁDIO B

Goloca-se o resíduo da etapa anterior em solução em 300 ml de ácido clorídrico concentrado (llN) e agita-se em ba nho de oleo à temperatura de 50°0.

meio reaccional muito escuro começa a precipitar. Oontinua-se a cristalização à temperatura ambiente e filtra-se depois a mistura sobre vidro calcinado.

lava-se o precipitado várias vezes com água até à neutralidade das águas de lavagem, seca-se sob vazio, tritura -se no almofariz e seca-se depois a 50°0 com a bomba de palhe tas.

Rendimentos 78%

ESTÁDIO C

O^efoxicarbonil^^^metil-diosmetina.

Mistura-se o ácido obtido no estádio anterior (l4,lg) e 0,7 g de ácido tosílico com 200 ml de etanol absoluto? Isva-se o meio reaccional a refluxo sob atmosfera de azoto e com agitação durante 5 horas a 100°C. Adiciona-se, em seguida, 1

100 ml de etanol e deixa-se em repouso durante uma noite à temperatura ambiente.

Rendimento: 89% l-(l-cloro-aoetil)-4-/”(2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil £

-piperazina.

A uma solução de 115 mmoles de 4-/ (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil ./-piperazina em 200 ml de diclorometano, arrefecida em banho de gelo, adiciona-se, gota a gota, no decurso de 15 minutos, uma solução de cloreto de cloroacetilo (no total 115 mmoles) em diclorometano. Mantém-se a agitação ainda duran te 15 minutos, depois mergulha-se o meio reaccional em água ge lada, alcaliniza-se até pH8 com carbonato ácido de sódio e extrai-se eom diclorometano. lava-se a fase orgânica com água, seca-se sobre sulfato de sódio anidro e evapora-se ató à secura no rotavapor e depois com uma bomba de palhetas.

Rendimento: 100%

ESTÁDIO 1

A 20 mmoles de 0-etoxicarbonil-3'-metil-diosmetina e 30 mmoles de carbonato ácido de potássio, adiciona-se¹50 ml de’ dimetilformamida anidra sob atmosfera de azoto e agitação a 110°0. Após dissolução do composto orgânico, adiciona-se 24 mmoles de l-(l-cloro-acetil)-4-/ (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metilJ-piperazina. Continua-se a reacção durante 2 horas.

Após evaporação do dissolvente reaccional sob pressão reduzida, solubiliza-se o resíduo obtido em cerca de 75 ml de acetona e deixa-se cristalizar. Isola-se os cristais formados mediante filtração e purificam-se em seguida em coluna de sílica (Merck 9385 ^) utilizando como dissolvente de eluição uma mistura de diclorometano e acetona (4:1 V/V) para se obter a 7- /•2-{4-r( 2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil ./-1-piperazinil^-2-oxo-etoxi _/-5-hidroxi-4’-metoxi-3’-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-flavona pura.

Rendimento: 59%

Ponto de fusão: 103-104°0

Análise elementar:

% encontrada % calculada

Espectro de massa:

0	H	N
62,02	5,88	4,24
62,42	5,82	4,04

espectro de massa foi realizado mediante dessorção e ionização química (NH^); Temperatura da fonte 175°C; Aquecimento do filamento 50 a 650 mA a 7xmA/s.

693 m/z /M/⁺ (100%); 607 m/z;

525 m/z; 5ll m/z; 387 m/'z; 309 m/z;

267 m/z; 181 m/z.

Para preparar o monofosfato de 2-j 4-/~(2,3,4-trimetoxi-fenil)-metilJ7_i_piperazinilj -2-oxo-etoxâ^-5-hidroxi-4'-metoxi-3'-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-flavona, salifica-se 1 mmole da base, em solução em uma mistura de tetrahidrofurano e de diclorometano, com uma quantidade equimolar de ácido fosfórico IN.

Solubilidade em água: 158 g/litro.

EXEMPLO 2

5-/2-|4-/~ (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil J-1 -piperazinilj -2-oxo-etoxi_/-7,3'-bis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4’-metoxi-flavona.

ESTÁDIO A

5-hidroxi-7,3 *-bis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4-metoxi-flavona.

A 100 mmoles de O-etoxicarbonil-3'-metil-diosmetina e 120 mmoles de carbonato ácido de potássio, adiciona-se 350 ml de dimetilformamida anidra sob atmosfera de azoto e agitação a 110°C. Após dissolução do comnosto orgânico, adiciona-se 400 mmoles de cloroacetato de etilo. Oontinua-se a reacção durante 3 boras. Em seguida, arrefece-se o meio reaccional e observa-se a formação de cristais. Após 24 boras à temperatura ambiente, dilui-se o meio reaccional com água e filtra-se sobre vidro calcinado. Lava-se os cristais com etanol e seca-se com a bomba de palbetas.

Rendimento: 90$

ESTÁDIO E

A 96 mmoles do resíduo seco obtido antes e 480 mmoles de carbonato de potássio, adioiona-se 350 ml de dimetilformamida anidra sob atmosfera de azoto e com agitação a U0°0. Após dissolução do composto orgânico, adicinna-se 105 mmoles de l-(l-cloro-acetil)-4-/*(2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil J -pinerazina e continua-se a agitação durante cerca de 2 horas e meia. Após arrefecimento, filtra-se o meio reaccional sobre vidro calcinado e evapora-se até à secura. Purifica-se o resíduo sucessivamenente mediante recristalização em etanol, sobre coluna de sílica (Merck 9385 ®) utilizando uma mistura de diclorometano e metanol (96:4, V/V) como dissolvente de eluição e em seguida mediante recristalização em metanol*

Rendimento global em relação à diosmina: 42$

Ponto de fusão: 86-88°O.

Analise elementar $ encontrada $ calculada

c	H	N
61,24	6,05	3,82
61,69	5,95	3,60

Espectro de massa:

espectro de massa realizou-se mediante dessorção e ionização química (NH^);

Temperatura da fonte 175°O; Aquecimento do filamento 50 a 650 mA a 7 mA/s.

779 m/z /~M+HJ ⁺ (100$); 693 m/z; 613 m/z; 473 m/z; 309 m/z; 267 m/z; 181 m/z.

Preparou-se o cloridrato de 5-/~2-^ 4-Z (2,3»4-trimetoxi-fenil)-metil_/-l-piperazinil^ 2-oxo-etoxi„7-7,3’-bis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4*-metoxi-flavona mediante salificação

da base correspondente em solução em diclorometano com uma quantidade adequada de etanol clorídrico IR.

Solubilidade em água: I63 g/litro.

EXEMPLO 3

7-Ramnoglucosido da 3'-/* 2- ·[ 4-/~(2_s3_?4-trimetoxifenil)-metil J^-l-piperazinilJ -2-oxo-etoxi 7-4’-metoxi-5-hidroxi-flavona

Suspende-se 195 mmoles de diosmina e 253,5 mmoles de carbonato ácido de potássio em 800 ml de dimetilformamida anidra sob atmosfera de azoto, com agitação e a 100°C. Adiciona-se, em seguida, 253.?5 mmoles.de l-(l-cloro-acetil)-4-/’ (2,3»

4-trimetoxi-fenil)-metil_7-piperazina em solução em 175 ml de dimetilformamida e continua-se a reacção a esta temperatura durante 3 horas. Após arrefecimento, filtra-se 0 meio reaccional sobre vidro calcinado. Dilui-se 0 filtrado com água e extrai-se quatro vezes com acetato de etilo. Elimina-se 0 acetato de etilo após decantação e, ,em seguida, extrai-se 0 filtrado 5 vezes com n-butanol saturado com água. Evapora-se as fases butanólicas, bem decantadas, ate à secura no rotavapor. Retoma-se 0 resíduo com uma mistura de n-butanol/água (5:1 V/V). Ooncentra-se em seguida a solução hidroalcóolica assim formada e deixa-se durante uma noite à temperatura ambiente. Recristaliza-se os cristais formados em uma mistura de n-butanol e de água de acordo com as condiçbes descritas antes e lavam-se, em seguida, com n-butanol puro e depois oom ciclohexano.

	Rendimento: 65% em relação à Ponto de fusão: l84-l86°C.	diosmina	inicial.
Análise elementar:	0	H	N
%	encontrada	57,71	5,96	2,83
%	calculada	57,76	5,95	3,06

Espectro de massa:

espectro de massa realizou-se mediante dessorção e ionização química (NH^); Temperatura da fonte 175°0; Aquecimento do filamento 50 a 650 mA a 7 mA/s.

915 m/z z/M+H_7 *; 733 m/z; 607 m/z (100%); 326 m/z; 308 m/z; 267 m/z; 181 m/z; 164 m/z; 146 m/z; 129 m/z.

Preparou-se o semitartarato do 7-ramnoglucosido da 3’-/“ 2 ^4-/ (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metiiy-l-piperazinil^-2-oxo-etoxi^-4'-metoxi-5-hidroxi-flavona mediante salificação da base correspondente em solução em uma mistura de metanol e de acetato de etilo com uma quantidade adequada de ácido 1-tar tárico.

Solubilidade em água: 200 g/litro.

EXEMPLO 4

7-ft-glucosido da 3'-/~2-^4- / (2,3?4— trimetoxi-fehil)-metil JZ-l-piperazinilJ -2-oxo-etoxi J-4'-metoxi-5-hidroxi-flavona.

Dissolve-se 39 mmoles de tartarato do 7-ramnoglucosido da 3’- c 2- {4-r (2,3}4-'fcLimetoxi-fenil)-metil_/-l-pipera zinilJ-2-oxo-etoxi _/-4'-metoxi-5-hidroxi-flavona, composto do exemplo 3» em um litro de água destilada. Ajusta-se o pH da solução a 4 oom ácido clorídrico O,5N₅ aquece-se ate 40°0, adi ciona-se depois l,2g de naringinase (Sigma1385).. Apos duas horas de agitação a esta temperatura interrompe-se a reacção.

Transfere-se o meio reaccional, a que se adicionou 200 ml de dimetilformamida, para uma'ampola de decantação e al caliniza-se o meio com água hicarBonata atá precipitação nítida. Extrai-se com três vezes 600 ml e depois duas vezes com 400 ml de n-hutanol saturado com água. Após decantação, reúne-se as fases hutanálicas e evapora-se ate à secura. Retoma-se o resíduo com metanol e aquece-se a refluxo até à dissolução. Deixa-se a solução assim formada durante 24 horas à temperatura ambiente. Separa-se os cristais formados mediante filtração e seca-se em seguida a 45°G sob vazio.

Rendimento: 79%

Pondo de fusão : 132-134°C.

Análise elementar:	0	H	E
% encontrada	56,64	5,89	3,33
% calculada	56,54	6,03	3,47
Espectro de massa:
0 espectro foi realizado com fonte PAB	modo positi-
vo; G-ás incidente	Crípton; Energia 7	Eev; Matriz	glicerol.
769 m/z /“M+Hj^{7 +} ;	767 m/z; 737 m/z;	607 m/z; 589	¹ m/z; 427 m/z;

301 m/z.

Prepara-se o monofosfato do 7-J&-glucosido da 3’/~2(2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil_/-l-piperazinil^-2-oxo-eto xiJ^-4’-metoxi-5-hidroxi-flavona após adição de uma quantidade adequada de ácido fosfórico em uma solução de acetona contendo o 7-3~glucosido da 3' -/”2-^4-/” (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil J-l-piperazinil^-2-oxo-etoxi _/-4'-metoxi-5-hidrOxi-flavona. Solubilidade em água: 43g/litro.

>

EXEMPLO 5 (2,3? 4-trimetoxi-fenil)-metil 1-piperazinil j-2-oxo-etoxi /7-4¹-metoxi-5,7-dihidroxi-flavona.

Processo A

Agita-se 20 mmoles do composto do exemplo 4 em 300 ml de uma mistura de acetona e água (V/V) à temperatura ambiente. Adiciona-se então 20 ml de uma solução aquosa normal de ácido fosfórico e 200 ml de água. Agita-se a mistura reaccional em banho-maria até à dissolução total e concentra-se depois no rotavapor ate à destilação total da acetona. Dilui-se a solução aquosa residual de pH 3,5 com água para se obter um volume final de 1 litro e um pH de 3,95 e aquece-se depois a 37°0. Adiciona-se então 550 mg de jâ-glucosidase (Sigma® ti po II G 8625 a 7,1/i/mg) e deixa-se a reacção a esta temperatu ra sob agitação durante 48 horas.

Leva-se 0 meio reaccional a pH 7 mediante adição de água bicarbonatada e extrai-se depois com n-butanol aquoso (ÔOOml, 400 ml, 300 ml).

Clarifica-se as fases butanólicas reunidas mediante passagem sobre celite e após uma nova decantação, evapora-se ate à secura.

Purifica-se 0 resíduo sobre uma coluna de sílica (Merck® 9385) utilizando como dissolvente de eluição uma mistura de diclorometano e acetona (V/V).

Rendimento: 770.

Processo B

ESTÁDIO A

Solubiliza-se mediante aquecimento, 7,5 mmoles do áci do obtido no estádio B do exampló 1 em 20 ml de uma mistura de piridina e anidrido acético (V/V). Deixa-se a mistura reaccional durante 48 horas à temperatura ambiente, adiciona-se depois água e extrai-se com diclorometano. Após lavagem com água, secagem sobre sulfato de sodio anidro e filtração, recupera-se, após evaporação, um resíduo, que mediante cristalização em metanol fornece o composto pretendido puro.

Rendimento: 60%.

ESTÁDIO B a-Aaía£Aaaa zÍfÍ3ÊÍ25ÍzÊfHÍi2z3ÊÍii/zlzRÍEÊ^_razinÍl£~2-oxo-etoxi_7-4’-metoxi-bis-5,7-acetoxi-flavona.

Suspende-se 2 mmoles do composto obtido no estádio anterior em 60 ml de diclorometano em banho de gelo. Adiciona-se, em seguida, 2 mmoles de trietilamina e 2 mmoles de cloroformato de etilo. Após 40 minutos a 0°G, adiciona-se 2 mmoles de 4- /“(2,3,4 -trimetoxi-fenil)-metil_/-piperazina. Agita-se o meio reaccional durante 45 minutos à temperatura ambiente, lava-se, em seguida, com água e evapora-se ató à secura para se obter o composto pretendido.

ESTÁDIO 0

Solubiliza-se, o composto obtido no estádio anterior, em 40 ml de dimetilformamida e agita-se à temperatura de 100°G sob atmosfera de azoto na presença de 6 mmoles de carbonato áci do de potássio durante 4 horas. Após arrefecimento, filtra-se o meio reaccional e evapora-se até à secura para se obter o composto pretendido.

Rendimento global: 40%

Ponto de fusão: 200-202°0.

Analise elementar:

$ encontrada $ calculada

Espectro de massa:

0	H	N
63,41	5,63	4,59
63,36	5,65	4,62

espectro de massa realizou-se em dessorção e ioni zação química Temperatura da fonte l60°C; Intensidade do filamento 250 jjA.

607 m/z /M+í-iy ⁺'; 441 m/z; 427 m/z; 425 m/z; 309 m/z; 307' m/z; 301 m/z; 267 m/z; l8l m/z.

Preparou-se o metano-sulfonato correspondente median te salificação da3*-2-^/p-/ (2,3,4-trimetoxi-f enil)-metil J7_q_pj_ perazinil^-2-oxo-etoxi J⁷-4'-metoxi-5,7-dihidroxi-flavona em so lução em uma mistura de tetrahidrofurano e água com ácido meta no-sulfánico*

Solubilidade em água: 35g/l.

EXEMPLO 6

3*-Ζ~ (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metilJ/-l-pinerazinil^-2~

-oxo-etoxi ^7-4’-metoxi-5-hidroxi-7-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-flavona.

A 5 mmoles do composto do exemplo 5 e 5,25 mmoles de carbonato ácido de potássio, adiciona-se 15 ml de dimetilforma *a mida anidra sob atmosfera de azoto e aquece-se a mistura reaccional sob agitação a 110°0. Após dissolução do composto do exemplo 5» adiciona-se 20 mmoles de cloroacetato de etilo e prossegue-se a reacção durante 2 horas. Após arrefecimento, filtra-se o meio reaccional e evapora-se ate à secura. Recristaliza-se o resíduo, em seguida, em etanol para se obter o com posto pretendido.

Rendimento: 60%

Ponto de fusão: 1O5-1O6°C

Análise elementar:

% encontrada;

% calculada: Espectro de massa:

Η N

62,03 5,90 . 3,96

62,42 5,82 4,04 espectro de massa foi realizado em dessorção e ionização química Temperatura da fonte 175°C; Aquecimento do filamento 50 a 650 mA a 7 mA/s.

693 m/z /M+H J ⁺ ; 511 m/z; 267 m/z; 181 m/zPreparou-se o fosfato da 3’-/ 2—^4-/7(2,3,4-trimetoxi-fenil)-metilj^-i-piperazinill -2-oxo-etoxi J⁷-4'-metoxi-5-hidroxi-7-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-flavona mediante adição a uma so. lução hidroacetónica da base correspondente de uma quantidade adequada de ácido fosfórico.

Solubilidade em água: 39,5g/litro.

EXEMPLO 7

Bis 7,3^ι^/~(2,3,4-trimetoxi-f enil)-metil J⁷-1-piperazinil J-2-oxo-etoxi _/-5-hidroxi-4'-metoxi-flavona.

^0CH3 och₃

A 5 mmoles do composto do exemplo 5 e 6 mmoles de carbonato ácido de potássio, adiciona-se 15 ml de dimetilfõrmamida anidra sob atmosfera de azoto e com agitação a 110°C. Em seguida, adiciona-se 6 mmoles de 1-(l-cloro-acetil)-4~Z (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil./-piperazina em solução em dimetilformamida e prossegue-se a reacção durante 3 horas. Após arrefecimento₅ filtra-se o meio reaccional, evapora-se ate à secura e purifica-se mediante cromatografia sobre coluna de sílica (Merck® 9385) mediante utilização de um dissolvente de eluição constituído por uma mistura de acetona e diclorometano (2:1 V/V).

Rendimento: 60%

Análise elementar:

	0	H	N .
% encontrada:	61,25	6,,05	5,84
% calculada ^s:	61,30	6,33	5,96
χ corrigida 3% ΕΕ,Ο
Espectro de massa:
0 espectro	de massa foi	obtido com	uma fonte

sitivo; Gas incidente Crípton; Energia 7 ev. Matriz Glicerol.

913 m/z /“M+Hj ⁺; 733 m/z; 607 m/z

Preparou-se o bifosfato da 7,3'-bis- /*2-/4-/^-(2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil J7-l-piperazinil J'-2-oxo-etoxi_/-5-hidroxi-4’-metoxi-flavona mediante salificação da base correspon dente em solução em uma mistura de acetona e água com ácido fosfórico.

Solubilidade em água: 221g/litro.

EXEMPLO 8

7-/-2-/4-/- (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil/-l-piperazinilJ-2-oxo-etoxi J-5,3’-dihidroxi-4’-metoxi-flavanona.

Agita-se 120 mmoles de hesperetina na presença de 132 mmoles- de carbonato ácido de potássio em 500 ml de dimetilformamida anidra a 110°0 sob atmosfera de azoto. Apos dissolução da hesperetina, adiciona-se 126 mmoles de l-(l-cloro-acetil)-4-/”(2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil_/-piperazina em so lução em 100 ml de dimetilformamida e continua-se a agitação a 110°C durante 2.horas.

Apás arrefecimento, filtra-se 0 meio reaccional sobre vidro calcinado e evapora-se ate à secura.

Dissolve-se o resíduo seco em 600 ml de diclorometa no e, apos uma hora de repouso à temperatura ambiente, filtra

-se sobre celite. Purifica-se em seguida o filtrado sobre uma coluna de sílica (Amicon® 84068), utilizando como eluente uma mistura de diclorometano e metanol (97,5:2,5 V/V).

Rendimento: 49%

Análise elementar:

% encontrada % calculada

c	H	H
62,78	6,07	4,54
63,15	5,96	4,60

Espectro de massa:

espectro de massa foi obtido por dessorção e ioni zação química (NHg); Temperatura da fonte 175°0; Aquecimento do filamento 50 a 60 mA a 7 mA/s.

609 m/z; /M+HJ ⁺ ; 325 m/z; 309 m/z; 303 m/z; 267 m/z; l8l m/z.

Preparou-se o metano-sulfonato da 7- £2-(-4-/^- (2,3,4-trimetoxi-fenil)-metil J^-i-piperazinil^-S-oxo-etoxi ,3'-di

hidroxi-4*-metoxi-flavanona mediante adição de uma quantidade adequada do ácido metano-sulfónico a uma solução hidroacetónica da base indicada antes.

Solubilidade em água: l,4g/litro.

EXEMPLO 9

7,3'-bis-/^-2-(4-benzil-l-piperazinil)-2-oxo-etoxi J-5-hidroxi-4¹-metoxi-flavona.

OH

Este composto foi preparado de acordo com o processo descrito no exemplo 7 mas utilizando a 4-(l-cloro-acetil)-4-benzil-piperazina em vez da 1-(l-cloro-acetil)-4-2”(2,3,4,-30-

-trimetoxi-fenil)-metil J7-piperazina.
Rendimento: 25% (em relação à diosmina).
Análise elementar:	0 H	R
% encontrada	68,65 5,95	7,20
% calculada	68,84 6,05	7,65
Espectro	de ressonância magnética	do protão (400

MHz - dissolvente GDOl^): 2,5 ppm, m, 8H; 3,58 ppm, s, 2H;

3,6 ppm, s, 2H; 3,7 ppm, m, 8H; 4,0 ppm, s, 3H; 4,8 ppm, s, 2H; 4,87 ppm, s, 2H; 6,4 ppm, d, 1H; 6,6 ppm, t, 2H; 7,0 ppm, d, 1H; 7,32 ppm, m, 10H; 7,45 ppm, d, 1H; 7,6 ppm, d, 1H;

12,8 ppm, 1H permutável.

EXEMPLO 10

3’-£ 2-£-4-/“(2-cloro-fenil)-metilJZ-l-piperazinil^-

“2-oxo-etoxi J-\'-metoxi-5-hidroxi-7-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-flavona.

Este composto foi sintetizado a partir da 3'-/2-^4(2-çloro-fenil)-metil_7-l-piperazinilJ-2-oxo-etoxi_7-4’-metoxi-5,7-dihidroxi-flavona de acordo com o processo descrito no exemplo 6. Este último composto foi obtido mediante alquilação da diosmetina coma l-(l-cloro-acetil)-4-/^_(2-cloro-fenil)-metil_7-piperazina.

Rendimentos 27% (em relação à diosmina).

Espectro de ressonância magnética nuclear do protão (400 MHz - dissolvente CDCl^):

1,2 ppm, t, 3H; 2,5 a 3,58 ppm, m, 8H; 3»5δ ppm, s, 2H; 3?85 pum, s, 3H; 4,2 ppm, q, 2H; 4,62 ppm, _s, 2H; 4,76 ppm, s, 2H; 6,28 ppm, d,, 1H; 6,43 ppm, 1H; 6,45 ppm, _s, 1H; 6,9 ppm, d,

1H; 7,15 a 7,3 ppm, m, 4H; 7,38 ppm, d, 1H; 7,45 ppm, d, 1H; 12,7 ppm, 1H permutável.

EXEMPLO 11

5-/” 2-(4-benzil-l-piperazinil)-2-oxo-etoxi^/-7,3’-bis- (2-etoxi-2-oxo-etoxi )-4’-metoxi-flavona.

Este composto foi preparado de acordo oom 0 processo descrito no exemplo 2 mediante condensação da 5-hidroxi-753’-bis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4'-metoxi-flavona e da l-(l-oloro-acetil)-4-benzil-piperazina.

Rendimento: 37$_t

Análise elementar:

$ encontrada $ calculada

c	H	N
64,68	5,62	3,85
64,53	5,85	4,07

Espectro de ressonância magnética do protão (400 MHz - dissolvente CTDClg):

1,23 ppm» t, 6H; 2,35 ppm, m, 4H; 3,55 a 3,70 ppm, m, 4Ξ; 3,42 ppm, s, 2H; 3,9 ppm, s, 3Hj 4,22 ppm, q, 4H; 4,62 ppm, s, 2H; 4,70 ppm, s, 2H; 4,80 ppm, s, 2H; 6,43 ppm, s, 1H; 6,5 ppm, d, 2H; 6,92 ppm, d, 1H; 7,2 ppm, m, 5H; 7,25 ppm, d, 1H; 7,48 ppm, d, 1H.

EXEMPLO 12

5-/~2-(-4-/- (4-cloro-fenil)-metil_/-1-piperazinil) -2-oxo-etoxi /-7,3’-bis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4'-metoxi-flavona.

h₅c₂ooc-oh₂-o

Este comnosto foi preparado de acordo com 0 processo descrito no exemplo 2 mediante condensação da 5-bidroxi-7,3' -his-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4’-metoxi-flavona e da l-(l-cloro-acetil)-4-/*(4-cloro-fenil)-metil_/-piperazina₀

Rendimento: 33%

Análise elementar:

% encontrada % calculada

c	H	R	Cl
61,19	5,20	3,65	5,23
61,45	5,44	3,87	4,90

Espectro de massa:

espectro de massa foi obtido por dessorção ionização química (RH·}); Temperatura da fonte 150°C, Energia 70 eV. 723 m/z /*M+HJ ⁺ ; 637 m/z; 597 m/z; 513 m/z; 485 m/z; 473 m/z; 269 m/z; 253 m/z; 239 m/z; 211 m/z; 142 m/z; 125 m/z.

1,25 ppm, t, 6H; 2,35 a 3,55 ppm, m, 4H; 2,30 a 3,70 ppm, m,

4H; 3j45 ppm, s, 2H; 3,5 ppm, s, 3H; 4,22 ppm, q, 4H; 4,60 ppm, s, 2H; 4,70 ppm, _s, 2H; 4,80 ppm, _s, 2H; 6,45 ppm, s, 1H;

6,5 ppm, d., 2H; 6,92 ppm, d, 1H; 7,3 ppm, d, 1H; 7,3 ppm, m,

4H; 7,48 ppm, d, 1H.

EXEMPLO 13 >

5-/2-{4-/ (4-metil-fenil)-metil/-l-piperazinil}-2-oxo-etoxi ^7-7,3’-bis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4-metoxi-flavona tí^OOG - gh₂

34Este composto foi preparado de acordo com o proces· so descrito no exemplo 2 mediante condensação da 5-hidroxi-7,3^,-bis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4'-metoxi-flavona e da l-(l-cloro-acetil)-4-/^,” (4-metil-fenil)-metil /-piperazina.

Rendimento: 250.
Análise elementar:
		0	H	N
0 encontrada		64,18	5,67	3,66
0 calculada		64,95	6,02	3,99
Espectro	de	ressonância	magnética	nuclear	do protão
(400 MHz - dissolvi	ente	ι CLC1₃):
1,30 ppm, t, 6H; 2	,30	ppm, s, 3H;	2,40 a 3,	60 ppm, .	m, 4H; 2,40

a 3,75 ppm, m, 4H; 3,45 ppm, s, 2H; 3,95 ppm, s, 3H; 4,30 ppm, q, 4H; 4,70 ppm, _s, 2H; 4,75 ppm, _s, 2H; 4,85 ppm, s, 2H; 6,50 ppm, _s, IHj 6,60 ppm, d, 2H*, 7,00 ppm, d, IH; 7,1 ppm, m, 4H; 7,30 ppm, d, IH; 7,55 ppm, d, IH.

EXEMPLO 14

5-{ 2-(4-fenil-l-piperazinil)-2-oxo-etoxi}-7,3’-bis (2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4’-metoxi-flavona h₅o₂ooc-ch₂-o

Este composto foi preparado de acordo com o processo

descrito no exemplo 2 mediante condensação da 5-hidroxi-7,3’-

-Pis-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-4’-metoxi-flavona e da l-(l-cloro-
-acetil)-4-fenil-piperazina. Rendimento: 30$
Análise elementar:
0	H	N
$ encontrada 63,79	5,37	4,09
$ calculada 64,09	5,68	4,15
Espectro de ressonância	magnética	nuclear do protão
(400 MHz - dissolvente ODCl^): 1,3 pp, t, 6H; 3,15 a 3,75 ppm, m.	, 4H; 3,15	a 3,95 ppm, m, 4H;

3,95 ppm, s, 3H; 4,3 ppm, q, 4H; 4,6 ppm, s, 2H; 4,65 ppm, s, 2H; 4,90 ppm, _s, 2H; 6,50 ppm, d, 1H; 6,55 ppm, d, 1H; 6,65 ppm, d, 1H; 6,85 a 7,20 ppm, m, 5H; 7,0 ppm, d, 1H; 7,3 ppm,d, 1H; 7,55 ppm, d, 1H.

EXEMPLO 15

7-4 H 4-/ ('4-cloro-fenil)-metil^/-l-piperazinil}· -2-oxo-etoxi /-5-hidroxi-4’-metoxi-3’-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)·

-flavona

Este composto foi preparado mediante condensação da

0-etoxicarbonil-3’-metil-diosmetina e da 1-(l-cloro-acetil)-4-£ (4-cloro-fenil)-metil__/~piperazina de acordo com o processo descrito no exemplo 1.

Rendimento: 84%.

Análise elementar:

	C	H	N	01
% encontrada	62,02	5,16	4,38	5,62
% calculada	62 »22	5,22	4,40	5,56

Espectro de ressonância magnética do protão (400 MHz - dissolvente CECl^):

1,23 ppm, t, 3H; 2,45 a 3,60 ppm, m,4H; 2,45 a 3,65 ppm, m,4H; 3,50 ppm, s, 2H; 3,85 ppm, s, 3H; 4,22 ppm, q,2H; 4,8 ppm, s, 4H; 6,35 ppm, d, 1H; 6,55 ppm, .s, 1H; 6,55 ppm, d, 1H; 7,30 ppm, m, 4H; 7,35 ppm, d, 1H; 7,60 ppm, d,lH; 12,8 ppm,lH permutável.

EXEMPLO 16 l-[ 2-(4-’benzil-l-piperazinil)-2-oxo-etoxi/-5-hidroxi-4'-metoxi-3'-(2-etoxi-2-oxo-etoxi)-flavona.

Este composto foi preparado mediante condensação da O-etoxicarbonil-3'-metil-diosmetina e da 1-(l-cloro-acetil)^-benzil-piperazina de acordo com o processo descrito no exem pio 1.

37—

Rendimento: 86$

Análise elementar;	0	H	N
$ encontrada	65,44	5,52	4,91
$ calculada	65,77	5,69	4,65

Espectro de ressonância magnética do protão (400 MHz dissolvente ODCl^):

1,30 ppm, t, 3H; 2,5 a 3,55 ppm, m, 4H; 2,5 a 3,65 ppm, m, 4Hj 3,55 ppm, s, 2H; 4,0 ppm, s, 3H; 4,3 ppm, £, 2H; 4,8 ppm, s,

4H; 6,35 ppm, d, 1H$ 6,55 ppm, d 1H$ 6,55 ppm, s, lHj 7,0 ppm, d, 1H; 7,3 ppm, m, 5Hj 7,35 ppm, d, 1H$ 7,6 ppm, d, lHj 12,8 ppm, 1H permutável.

EXEMPLO 17

7-Bamnoglucosido da 3^,-Z'2-(4-benzil-l«-piperazinil)-

Este composto foi preparado a partir de diosmina e da 1-(l-cloro-acetil)-4-benzil-piperazina de acordo com o pro cesso descrito no exemplo 3.

Rendimento: 70$

Ponto de fusão: 214-217°C.

Análise elementar: , ,,

C Η N

$ encontrada	59,63	5,98	3,38
$ calculada	59,70	5,87	3,40

Espectro de massas

Os espectros foram realizados com a fonte EAB modo positivo e negativo; Gás incidente Orípton; Energia 8 Kev, Matriz Glicerol - Tioglicerol (l/l)

FAB⁺ : 825 m/z /M+H_/*$ 823 m/z; 733 m/z; 679 m/z; 661 m/z; 517 m/z; 91 m/z.

EAB~: 824 m/z [ MJ; 823 m/z; 809 m/z; 663 m/z; 621 m/z; 607 m/z; 515 m/z; 299 m/z.

EXEMPLO 18

7-Ramnoglucosido da 3 *-/* 2-{4-/~ (2-cloro-fenil)-met il ^-l-piperazin.íll-2-oxo-etoxi V-4' -metoxí-5-hidroxi-flavona

Este composto foi preparado a partir da diosmina e dá l-(l-cloro-acet il)-4-/~ (2-cloro-fenil)-metil_/-piperazina de acordo com 0 processo descrito no exemplo 3.

Rendimento: 64$

Ponto de fusão: 200-222°0

Análise elementar:

		0	H	R	01
$ encontrada:		57,42	5,42	3,14	4,29
$ calculada:		57,31	5,51	3,26	4,13
Espectro	de massa:
Os espectros	foram realizados com fonte	EAB modo po-
s it ivo e ne gat ivo ;	Gás	Incidente	Orípton;	Energia	8 Kev; Matriz

Glicerol/Tioglicerol (l/l) EAB⁺í 859 m/z /~M+H/t; 713 m/z;

551 m/z; 147 m/z; 125 m/z;

PAB~: 858 m/z /MJ; 857 m/z; 607 m/z; 549 m/z; 299 m/z;

163 m/z;

EXEMPLO 19

7~Ramnoglucosido da 3*-/~2-{4-/~ (4-cloro-fenil)-meíi.1,^-1- piperazinií)-2-oxo-etoxi ,/^>-4^,-:metoxí-5-“h-idpoxi-flavona

Este compcetofoi preparado de acordo com 0 processo des crito no exemplo 3 a partir da diosmina e da l-(l-cloro-acetil)· “4-/”(4-clorofenil)-metil_/-piperazina.

Rendimento: 30%

Espectro de massai

Os espectros foram realizados com a fonte EAB modo positivo e negativo; Gás Incidente Crípton; Energia 8 KeV; Matriz Glicerol/Tioglieerol (l/l).

EAB⁺ ! 859 m/z /M+M_/⁺ ; 857 m/z; 551 m/zj

EAB“: 858 m/z /“ M; 549 m/z

EXEMPLO 20

7-Ramn.oglucosido da 3 *-·/ 2-{ 4-2 (4-metil-fenil)-metilV-l-piperazinil} -2-oxo-etoxi 7~4^l-metoxi~5hidroxi~flavorLa

Este composto foi preparado de acordo com o processo descrito no exemplo 3 a partir da diosmina e da l-(l-cloro-acetil )-4-/ (4-met il-f enil )-metil ^/-piperazina.

Rendimento: 56%.

Espectro de massa:

Os espectros foram realizados com a fonte EAB modo po_ sitivo e negativo; Gás Incidente Crípton; Energia 8 KeV; Matriz dietanolamina.

EAB⁺: 838 m/z /“ M+HJ* ; 821 m/z; 421 m/z; 316 m/z; 211 m/z;

105 m/z;

FAB: 838 m/z fV·^- ’ ”^{/z! 2}°⁹

7-RamnogluoosicLo da 3^,-/~2-(4-fenil-l-piperazinil)-2-oxo-etoxi ^/-4*-metoxi-5-hidroxl-flavona

Este composto foi preparado mediante condensação da diosmina com a l-(l-cloro-acetil)-4-fenil-piperizina. Rendimento : 59%

Ponto de fusão: 2l8-221°0.

Análise elementar:

	C	H	N
% entontrada	58,69	5,33	3,46
% calculada	59,25	5,75	3,45

-41“

Espectrometria de massa:

Os espectros foram realizados com a fonte FAB modo positivo e negativo; Gás Incidente Crípton;

Energia 8 EeV; Matriz Glicerol/Tioglicerol (1/1)

FAB⁺; 811 m/z £M+H_/⁺;

FAB“: 809 m/z; 795 m/z.

ESTUDO FARMACOLÓGICO

EXEMPLO 22

Edema provocado pelo cróton na orelha de murganho

Este ensaio consiste em inflamar as orelhas de murganhos eom uma solução irritante à base de óleo de cróton e em ensaiar o efeito preventivo dos compostos a examinar administrados per os.

Os ensaios foram realizados sobre lotes de pelo menos 8 murganhos machos 0D^ (Charles River) de peso médio 18-20g. Os compostos de acordo com a presente invenção foram administrados mediante entubação com uma sonda, em uma única toma, à razão de 0,1 ml de líquido por 10 g de murganho. 0 murganho foi privado de alimentação mas não de bebida, 2 horas antes da entubação e até depois da irritação.

Trinta minutos depois da entubação cada murganho foi anestesiado ligeíramente com éter. Em seguida depositou-se 10 da solução irritante com a ajuda de uma pipeta de Eppendorf sobre a superfície cutânea do pavilhão da orelha direita; a orelha esquerda não recebe qualquer tratamento, servindo como testemunha, Em seguida, coloca-se o animal na gaiola e sacrifica-se seis horas mais tarde. As orelhas foram seccionadas seguin do a paragem cartilaginosa e pesadas imediatamente.

Para preparar a actividade dos compostos de acordo com a presente invenção, comparou-se o aumento médio de peso das orelhas dos lotes tratados (m) pelo ensaio t de Student com o do lote testemunha (mt) não tratado. 0 índice da actividade curativa é avaliado pelo cálculo da percentagem de ini bição (I) de acordo com a fórmula:

mt

Os compostos de acordo com a presente invenção demonstraram um efeito inibidor significativo em relação â cons tituição do edema. Os resultados do ensaio estão indicados no Quadro I.

QUADRO I

COMPOSTO	DOSE mg.Kg^-1	I
Exemplo 2 (cloridrato)	166	- -34$ (p < 0,05)
Exemplo 3 (semitartarato)	200	- 26$ (p < 0,01)
Exemplo 4 (monofosfato)	173	- 28$ (p < 0,05)
Exemplo 6 (monofosfato )	160	- 35% (p < 0,01)

EXEMPLO 23

Inibição da reacção de degradação do AMP cíclico pela fosfodiesterase extracto enzimático necessário para este estudo foi preparado a partir do cérebro de rato.

Apés decapitação, colhè-se o cérebro, pesa-se e congela-se durante meia hora a —70θ0. Em seguida mantem-se a preparação em gelo, dilui-se e homogeneiza-se em glicerol a 50% contendo 50 mmoles de tris-(hidroximetil)-aminometano e 50 mmoles de sulfato de magnésio, à razão de 5 ml por grama de c£ rebro. Em seguida centrifuga-se a preparação. Reparte-se o sobrenadante em aliquotas e conserva-se a 4°C.

Quando do ensaio, incuba-se o extracto enzimático na presença de AMP cíclico (Boehringer® Ref. 1G2300), de fosfatase alcalina (Boehringer® Ref. 108183), de adenosina desaminase (Boehringer^ Ref, 102091) e de quantidades crescentes dos compostos de acordo com a presente invenção. Segue-se a cinética da degradação do AMP cíclico mediante espectrofotometria a 25°0. Gomo branco utiliza-se uma mistura sem fosfatase alcalina e sem adenosina desaminase. A medida da densidade óptica faz-se a 265 hm. Oalcula-se a concentração dos compostos de acor do com a presente invenção que conduz a uma inibição de 50% da reacção enzimática (IC^q). Duas sdhstânoias de referênoiaíjayfioqinina e a teofilina, são estudadas de acordo com a mesma metodologia.

Os resultados deste ensaio indicados no Quadro II demonstraram que os compostos de acordo com a presente invenção são inibidores muito potentes da reacção de degradação do AMP cíclico pela fosfodiesterase e confirmam o interesse da sua utilização em terapêutica. Oom efeito, sabe-se que a libertação

dos medidores bioquímicos da inflamação tais esmo jahi st amina, leucotrienos, enzimas lisossomiais e radicais livres é inibida pelo aumento da concentração intracelular de AM? cíelieo /Kaliner M,' Austen K.P. Bioch. Hiarmacol, 23, p. 763-771, (1974) e Lehmeyer <T. Ξ. Johnston R.B. Jr, Clin. Inmunol Immunopathol, 9. , p· 482-490 (1978 $ Os compostos dé acorde cofirá.pre sente invenção -ihihém..a.reácção'dãdegraâação'do.'AMI^>cíclico aumentando' a sua concentração intracelulare contribuem para a diminuição da libertação dos mediadores bioquímicos da inflamação. De salientar que os compostos de acordo com a presente invenção possuem uma acti vidade inibidora muito mais importante em relação aos compostos utilizados habitualmente como ref erência.· teofilina e diosmina.

QUADRO II

COMPOSTO	I0₅₀ (M)
Exemplo 2	2,0 x 10-5
Exemplo 3	2,5 x 10“⁵
Exemplo 7	1,0 x 10“⁵
Exemplo 8	5,7 x 10“⁵
DIOSKINA	10,0 x 10“⁵
TEOFILINA	100,0 x 10“⁵

(EXEMPLO 24

Determinação da actividade farmacodinâmica em relação aos radicais livres oxigenados produzidos pelos polimo rfonucleares

A eventual actividade farmacodinâmica dos compostos de acordo com a presente invenção em relação à produção de radicais livres pelos polimorfonucleares foi pesquisada in v’itro. 0 modelo celular utilizado foi leucócitos polimorfonucleares de rato. Este modelo é capaz de produzir radicais livres de modo controlável. A produção de radicais livres foi quantificada mediante medida da quimioluminescência que é proporcional à sua quantidade.

Quantidades de 2x10° células de leucócitos polimorfonucleares isolados do sangue de rato heparinado são misturados com soluções de concentrações crescentes dos compostos de

«.Λ —fi acordo com a presente invenção (2xl0~^ M a 2xL0“ M).

Em seguida, adiciona-se sucessivamente quantidades adequadas de uma solução de Hanks, de zymosan® (Sigma 24250) e de luminoP⁷ (Merck 82007). As soluções guardam-se ao abrigo da luz e transferem-se rapidamente para um contador de cintilação líquida. No ensaio branco os polimorfonucleares são substituídos por um volume equivalente de solução de Hanks e no ensaio testemunha, a solução doscompostos a ensaiar ê substituída por uma solução de Hanks. 0 mesmo ensaio foi realizado com um composto de referência: a diosmina,

A percentagem de inibição da- produção de radicais livres foi calculada pela seguinte fórmula :

% de inibição = 100% testemunha - 01 compostos testemunha - Cl branco ensaiar testemunha: quimioluminiscêneia máxima do ensaio testemunha

Cl compostos: quimioluminescência máxima do ensaio composto a

branco: quimioluminescência máxima do ensaio branco

As concentrações dos compostos de acordo com a presente invenção e da diosmina, que determinam uma inibição de 50$ (ΐΟ^θ) da reacção de quimioluminescência, estão reunidas no quadro III.

Sabe-se que a acumulação de radicais livres oxigenados no meio extracelular constitui uma ameaça à integridade celular e tecidular £Bruce A e Colab. Lab. Invest., 47 (5), p. 412 - 426, (1982)Gom efeito, os metabolitos do oxigénio estão implicados nas reacções de inflamação tecidular tanto ao nivel da reacção vascular como dos acidentes tecidulares e celulares.

Os compostos de acordo com a'presente invenção, ao inibirem a formação dos radicais livres oxigenados, previnem a constituição e a manutenção do edema que é uma manifestação da insuficiência venosa (Hilebology 89, Eds. D. Negus e G. Jantet, 1986, John Libley Lon. Bar.).

QUADRO III

COMPOSTO	^IG50
DIOSMINA	40,10~^β M
EXEMPLO 2	4.10”⁶ M
EXEMPLO 6	10.10“^δ M
EXEMPLO 8	15.1O-⁶ M

EXEMPLO 25

Comprimidos revestidos doseados com 400 mg de 7-ramnoglucosido da 3*-/2-{4-2 (2,3,4-trimetoxi-fenil)~metil_7-1-piperazinil} ^-.2 -r-QXQ .-τ* stoxlA^metoxi-S-hidroxi-flavoha (R,T,M.P.M.P.E, )

R.T.M.P.M.P.F.	400,000 mg
Oarboximetilamido sódico	27,000 mg
Celulose microcristalina	62,000 mg
Cera de abelha branca	q.b.p. encerar
Gelatina	31,000 mg
Glicerol	0,426 mg
Hidroxipropilmetilcelulose	7,078 mg
laurilsulfato de sódio	0,034 mg
óxido de ferro amarelo	0,166 mg
óxido de ferro vermelho	0,055 mg
óxido de titânio	1,362 mg
Polioxietilenoglicol 6000	0,453 mg
Estearato de magnésio	4,426 mg
Talco	6,000 mg

para um comprimido revestido

Claims

Processo para a preparação de compostos de fórmula geral t> 5'

OR, na qual

- A representa uma ligação simples ou dupla,

- R^ e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um radical alcoxi-carbonil-metileno de fórmula geral -d^CC^R^ (na qual R^ representa um radical alquilo com 1 a 5 átomos de carbono) ou um radical de fórmula geral W.

(na qual n representa um número igual a 0 ou 1 e Rg, Rg e Ry, iguais ou diferentes, representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio ou de haiogêneo ou um radical hidroxilo, trifluorometilo, alquilo inferior comportando 1 a 5 ãtomos de carbono ou um radical alcoxi comportando 1 a 5 ãtomos de carbono),

- R2 representa um ãtomo de hidrogénio, um radical alcoxi-carbonil-metileno de fórmula geral -Cí^CC^R^, um radical de fórmula geral W ou uma molécula de -glucose ou rutinose ligada ao ãtomo de oxigénio ao qual ela estã ligada com uma ligação osídica, com a condição, contudo, de pelo menos ou o símbolo R^, ou o símbolo ^{ou 0} símbolo Rg representar sempre um radical de fórmula geral W, e dos seus sais de adição com um ãcido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

quer:

de se fazer reagir diosmina, composto de fórmula com um cloreto de alquilo de fórmula geral III comportando os compostos de fórmulas gerais

III

C1CH₂CO₂R₄

Illa

Cl w

Illb em que R^ e W têm os significados definidos antes, no seio de um dissolvente orgânico azotado polar, na presença de um sal inorgânico ãcido de metal alcalino a uma temperatura compreendida entre 80° e 120°C, para se obter

- ou com os compostos de fórmula geral Illa, compostos de fórmula gera.i (IV) na qual R^ tem o significado definido antes, que se submete a uma hidrólise ácida na presença de um ãcido inor gânico concentrado e a uma temperatura compreendida entre 35° e 55°C para se obter o composto de fórmula o qual em seguida:

ou:

se submete a uma acetilação com anidrido acético no seio de um dissolvente orgânico alcalino ã temperatura ambiente para se obter o composto de fórmula (VI) que se faz reagir com um derivado da piperazina de fórmula geral ^_< (VII) na qual n, R^, R^ e R-? têm os significados definidos antes, na presença de uma amina terciária de baixo peso molecular e de cloroformato de etilo, a uma temperatura compreendida entre 0° e 20°C, para se obter compostos de fórmula geral na qual n antes, ^R5' ^R6 ^{e R}7 ^os significados definidos que se submetem, em seguida, a· uma desacetilação em solução no seio

-52de dimetilformamida na presença de um sal inorgânico ãcido de um metal alcalino a uma temperatura compreendida entre 80° e 120°C, para se obter compostos de fórmula geral na qual n, Rg, R_g e Ry têm os significados definidos antes,

I . · que se condensam com um composto de fórmula geral III para se obter compostos de fórmula geral (IB) na qual n, Rg, Rg e Ry têm os significados definidos antes e R₂ representa um radical alcoxi-carbonil-metileno de fórmula geral -CH₂CO₂R₄ ou um radical de fórmula geral W,

- quer:

se esterificam com um álcool primário ou secundário comportando 1 a 5 ãtomos de carbono, em meio anidro a uma temperatura compreendida entre 80° e 110°C e na presença de ácido tosílico

V para se obter compostos de formula geral

IX) . na qual R^ tem o significado definido antes, que se fazem reagir.

κ ou com um cloreto de alquilo de fórmula geral ΙΙΙ_β para se obter compostos dé fórmula geral dc) na qual R₂ representa um radical de fórmula geral W, » ou com um cloreto de alquilo de fórmula geral III^ para se obter compostos de fórmula geral (X) na qual R^ tem o significado definido antes, mdensam com um composto obter compostos de fórmula geral que se condensam com um composto de fórmula geral III para se

-54^η5, '

R_£ (ID) na qual n, R^/ Rg, Rg θ R? têm os significados definidos antes,

- ou com compostos de fórmula geral IHg/ para se obter compostos de fórmula geral na qual' n, R^., R^ e têm os significados definidos antes, que se submetem, em seguida, a uma hidrólise enzimãtica com narin· ginase para se obter compostos de fórmula geral na qual n, R^, Rg e têm os significados definidos antes, os quais em seguida, se submetem a uma hidrólise enzimática com p-glucosidase para se obter compostos de fórmula geral 1^, que se condensam, em seguida, com um composto de fórmula geral III para se obter compostos de fórmula geral I , quer:

de se fazer reagir um composto de fórmula geral na qual A tem o significado definido antes, com uma quantidade adequada dos compostos de fórmula geral III_, B para se obter compostos de fórmula geral

Og) na qual η, A, R^, Rg e R^ têm os significados definidos antes e R^ representa um átomo de hidrogénio quando a quantidade dos compostos de fórmula geral III_D utilizada for aproximadamente equimolar, ou um radical de fórmula geral W quando a alquilação se efectuar com uma quantidade de cloreto de alquilo de fórmula geral III_ pelo

O menos dupla, e, eventualmente, de se salificar em seguida os compostos de fórmulas gerais 1^ a Iç, que formam o conjunto dos compostos de fór mula geral I, com um ãcido orgânico ou inorgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico,

Lisboa, 30 de Novembro de 1988 '0' Agente Oficial Ha ProprieHaHe íncíusfrraf

RESUMO·

Processo para a preparaçao de novos derivados flavonoides 2-piperazinil-2-oxo-etileno substituídos

Descreve-se um processo para a preparação de compostos de fórmula geral e dos seus sais de adição com um ãcido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

quer:

de se fazer reagir diosmina, compostos de fórmula cich₂co₂r₄ com um cloreto de alquilo de fõrmula geral III comportando os compostos de fórmulas gerais Illa e Illb:

III

III

Cl w

III, no seio de um dissolvente orgânico azotado polar, na presença de um sal inorgânico de metal alcalino a uma temperatura compreendida entre 80° e 120°C, para se obter

- ou —58 com os compostos de fórmula geral Illa, compostos de fórmula geral (IV) que se submetem a uma hidrólise ácida na presença de um ãcido inorgânico concentrado e a uma temperatura compreendida entre 35° e 55°C para se obter o composto de fórmula (V) o qual em seguida:

- ou:

se submete a uma acetilação com anidrido acético no seio de um dissolvente orgânico alcalino ã temperatura ambiente para se obter o composto de fórmula (VI) que se faz reagir com um derivado da piperazina de formula geral *5 /c

M R.

HN . N-ÍCHj),.

(VII) na presença de uma amina terciária de baixo peso molecular e de cloroformato de etilo, a uma temperatura compreendida entre 0° e 20°C para se obter compostos de fórmula geral que se submetem, em seguida, a uma desacetilação em solução no seio da dimetilformamida na presença de um sal inorgânico ácido de um metal alcalino a uma temperatura compreendida entre 80°C e 120°C, para se obter compostos de fórmula .geral

OH que se condensam com um composto de fórmula geral III para se obter compostos de fórmula geral (IB)

- ou:

se esterificam com um álcool primário ou secundário comportando 1 a 5 átomos de carbono, em meio anidro a uma temperatura compreendida entre 80° e 11O°C e na presença de ãcido tosílico para se obter compostos de fórmula geral (IX) que se fazem reagir = ou com um cloreto de alquilo de fórmula geral ΙΙΙ_β para se obter compostos de fórmula geral

OCH:

OCH₂CC₂R₄ dc) = ou com um cloreto de alquilo de fórmula geral III_a para se obter compostos de fórmula geral (X) que se condensam com um composto da fórmula geral III^ para se obter compostos de fórmula geral (Id)

- ou com compostos de fórmula geral III„, para se obter com15 postos de fórmula geral rutinose ~ θ

OH \ —: 'V och₃ O-CHj-C -N II \ 0

Λ \ (IE) que se submetem, em seguida, a uma hidrólise enz.imãtica com narin ginase para se obter compostos de fórmula geral β-glucose — Ο

OH

OCH₃Ο -CH,-C os cuais em seguida se submetem a uma hidrólise enzimática com -glucosidase para se obter compostos de fórmula geral I_A, que se condensam, em seguida, com um composto de fórmula geral III para se obter compostos de fórmula geral I ,

B

I quer:

de se fazer reagir um composto de fórmula geral com uma quantidade adequada dos compostos de para se obter compostos de fórmula geral fórmula geral ΠΙ_β, dc) e, eventualmente, de se salificar em seguida os compostos de fórmulas gerais I_A a Iç, que formam o conjunto dos compostos de fórmula geral I, com um ácido orgânico ou inorgânico aceitável sob o ponto 'Τ' de vista farmacêutico.

Os compostos assim obtidos são utilizáveis como medicamentos.