PT85405B

PT85405B - Processo para a preparacao de compostos derivados da eritromicina usados na prevencao e tratamento de doencas causadas por viroses

Info

Publication number: PT85405B
Application number: PT85405A
Authority: PT
Original assignee: Robinson William S
Priority date: 1986-07-24
Filing date: 1987-07-24
Publication date: 1990-04-30
Also published as: EP0254534A3; DK384387D0; EP0254534A2; PT85405A; DK384387A; KR880001690A; HUT44439A

Description

EPÍGRAFE: PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS DERIVADOS DA ERITROMICINA USADOS NA PREVENÇÃO E

TRATAMENTO DE DOENÇAS.CAUSADAS POR VIROSES

MEMÓRIA DESCRITIVA

Este pedido é uma continuação em parte do Ped_i_ do em série dos Estados Unidos N⁹. 003.080, depositado em 14 de Janeiro de 1987, que é uma continuação em parte do Pedido em série dos Estados Unidos N^s. 948.232, depo sitado em 31 de Dezembro de 1986, que é uma continuação em parte do Pedido em série dos Estados Unidos N⁹.889.791 , depositado em 24 de Julho de 1986.

A invenção apresentada refere-se a um método para a inibição da rtplicação de viroses em mamíferos, especialmente ret^oviroses e viroses hepáticas humanas, para melhoramento das doenças relacionadas com estas.

Tem sido feito um progresso significativo no que respeita à prevenção e cura de doenças bacteriais, através do mundo. Por outro lado_; o progresso contra os vectores d^ doenças virais tem siao significativamente menos evidente. Nos países subdesenvolvidos, as doenças virais tal como a febre amarela e a encefalite japonesa estão grandemente espalhadas. Mesmo nos países desenvoj. vidos existe um número de doenças virais para as quais não existe um tratamento eficaz, uma vez que surja a infecção. Nos Estados Unidos, as doenças virais deste tipo mais predominantes são causadas pelo vírus do herpes simples tipo 1 e 2, pele vírus da Varicela-Zoster, pelo citomegaiovírus, pelo víru· Ge Epstein-Barr, pelo vírus da Influenza tipo A B, pelo vírus respiratório sincjciai, pelas viroses 1? parainfluenza, pelas r^;noviroses, pelas coronaviroses, pelo adenovírus. pelo ro avírus, pe do Norwalk vírus, pelo vírus B da hepatite, pelo vírus A da hepatite, pelas v.roses hepáticas Não-A e Não-B, pelas papovaviroses (vírus JC, vírus BK e Papilomavírus),e pelas retroviroses tal como a HTLV III.

Sabe-se que as várias retroviroses humanas estão relacionadas com doenças umanas. 0 vírus T-linfotró (HTLV) I e II humano está associado às leucemias das célju las T humanas, e o HTLV III (também conhecido como vírus associado à 1infadenopatia, ou LAV-1, e vírus da imunode; ficiência humana ou HIV) e LAV-2 estão associados ao si_n droma de imunodeficiência adiquirida. Estas retroviroses têm um mecanismo comum de replicação e propriedades bióló^ gicas semelhantes. Presentemente não existe um tratameji to satisfatório para as doenças associadas a essas infec ções virais, e as doenças causam uma séria morbidade e uma alta mortalidade.

Adicionalmente existe um grupo de viroses DNA conhecidas pela família de vírus hepáticos, caracterizados pelo facto de causarem, no seu hospedeiro, infecções e doenças no fígado. Como membros conhecidos desta fam_í lia encontram-se o vírus B da hepatite (HBV), que infecta o homem, o vírus da hepatite das marmotas (WHB), o vírus da hepatite do esquilo terrestre (GSHV), e o vírus B da hepatite dos patos (DHBV). Os membros da família dos v_í_ rus hepáticos estão estritamente relacionados uns com os outros, e possuem as mesmas características referentes à ultraestrutura, à estrutura antigénica, à estrutura mole cular, ao mecanismo de replicação, ao tropismo no fígado, à tendência para causar infecção crónica, e às altas co_n cent.rações de vírus e de partículas antigénicas virais, no sangue, durante infecções agudas e crónicas, vias se2

melhantes o tre s issáo e semelnante comportamento epi-, demiológico, e um espectro semelhante de doenças associa^ das.

Os indivíduos infectados pelo HBV, com vírus no seu sangue, são contagiosos, e as vias comuns de tran_s missão aos outros são pelo sangue, por soro, e possivelmente por outros fluidos corporais, através das vias p_a rentéricas, por contactos sexuais, e através de mães i_n fectadas para os seus recém-nascidos ou crianças pequenas. As infecções por HBV, agudas e crónicas, podem e_s tar associadas a hepatites agudas e crónicas, a doenças intermediárias pelo complexo antigénio-anticorpo (imune) virai, tais como a glomerulonefrite e a poliarterite, e o carcinoma hepatocelular (HCC). Em áreas geográficas do mundo altamente endémicas, o vírus B da hepatite infecta normalmente os recém-nascidos ou as crianças peque nas, pelo que a infecção crónica é estabilizada e perma nece por muitos anos. Mortes jovens acontecem a indiv_í duos com infecção crónica pelo HBV, que desenvolve sérias hepatites, cirroses, HCC ou poliarterites.

Por isso existe uma necessidade importante de encontrar métodos para inibir ou suprimir a replicação virai, ou para destruir ou acabar com a infecção, a fim de eliminar a possibilidade de contágio; impedir ou adiar o desenvolvimento da doença; e melhorar , e atrasar a progressão, ou curar a doença resultante da infecção vi Γ3 1 .

A eritromicina é um antibiótico muito conhec_i_ do, oralmente eficaz, descoberto em 1952, e é objecto de muitas publicações. É apresentada uma discussão sobre a eritromicina e sobre as suas propriedades, bem conhecj_ das, em Pharmacological Basis of Therapeutics, 5^a Edição , de Goodman e Gillman, Eds., MacMillan Publishing Çompany, Nova Iorque, 1975, pags 122--1227. A Patente

Americana N^!;s 3.^{tí1.í25 e 3.979.51:, descreve ós derivados oximinoê. ^jr cas eritromicinas, que sao conhecidos por serem inibidores da transcriptase inversa, do sarcoma Rous, nas galinhas.

Os derivados da eritromicina 7 e/ou B são usados para fins profilácticos ou terapêuticos, na prevenção ou no tratamento de infecções virais, em células de ou provenientes de hospedeiros sensíveis, especialmente na prevenção e no tratamento de doenças associadas a infecções hepáticas e retroviroses, e na redução ou eliminação da possibilidade de contágio. 0(s) composto(s) é, particu larmente, administrado nas células, tipicamente num hospe deiro, numa quantidade inibidora da replicação de vírus, antes ou durante a infecção virai, ou antes ou durante a ocorrência de doença associada com a infecção virai.

São c-idas aos doentes sensíveis à infecção virai, especialmente à infecção ao retrovírus ou à ínfeccão ao vírus hepático, doses profiláticas ou terapêuticas de, pelo menos, um derivado da eritromicina A ou B, como estão abaixo identificados, sózmho ou em combinação com outros medicamentos, para evitar a infecção virai, ou p_a ra suprimir ou destruir infecções virais em desenvolvimer to.

Os compostos utilizados são derivados da eritrjD micina A ou B e estão relacionados com antibióticos macro líticos. A própria erit 'omicina tem a estrutura de anel macrolítico, demonstrada como o comoosto I(a) e I(b), como se segue (folha seguinte).

I(a) R¹- OH; Eritromicina A (b) R'= H; Eritromicina B

Muitos compostos da invenção são quer eritromj.

cina 9-oximinoéteres, ou 6,9-hemicetal-8,9-dehidroeritro

O micinas (também conhecidas por Δ -9-desoxo-6,9-oxieritro micinas), utilizando o sistema de numeração apresentado acima, na est utura de anel macrolítico. Os sistemas pre feridcs deste aspecto da invençã:· têm a fórmula geral que se segue:

Em que:

Me é metil

Et é etil

T é OH ou um substituinte orgânico farmacêuticamente ace_i távei, ligc.o a Cò, através dum · ngénio (especialmente um resíduo de açúcar);

V é OH ou um substituinte orgânico farmacêuticamente aceitável, ligac-o a C3, através dum oxigénio (e_s pecialmente um resíduo ue açúcar);

A é hidrogénio ou acil (preferivelmente alcanol ou outros derivados do ácido carboxílico de 1 a 20 átomos de carbono que podem ser substituídos, incluindo derivados do ácido carboxílico, possuindo metades orgânicas al_i fáticas, alicíclicas ou aromáticas (incluindo heteroaromá ticas), ligadas a -C0-, ou a uma combinação das mesmas), ou OA em C6, e um H em C7 são removidos para formar uma ligação dupla entre C6 e C7, ou A é tirado ao mesmo tempo 'om G para definir uma ligação, formando a ligação uma ponte de éter vinílico entre C6 e C9;

_________B, é hidrogénio, acil jpreferivelmente alcanol, como definido para A )|, um sulfato ou grupo sulfonato (i_n eluindo um sulfato ou sulfonato de alquilo contendo de 1 a 6 átomos de carbono), CHgSC^CHp ou CHgSOCHg; ou 0B e um H em CIO são removidos para formar uma ligação dupla entre CIO e C11;

D é hidrogénio, ou é tirado ao mesmo tempo com E para definir uma ligação dupla;

E é tiraa; ao mesmo tempo com D para formar uma ligação dupla, E é tirado com G para definir um oximinoéter, no qual o oxigén o é substituído por R, ou E e G são tira dos ao mesmo tempo para representar um 'grupo.diazo, ou um grupo diazo substituído por um substituinte orgânico farmaceuticamente aceitável;

R é um substituinte orgânico f armaceuticarnente aceitável; e

R é hidrogé. io, hidroxilo, ou hidroxilo substi tuído por um substituinte orgânico farmaceuticamente ace_i tável.

Quando T e V representam resíduos de açúcar, estes resultam, preferivelmente, duma formação dum acetal, entre uma aldose e um grupo hidroxilo no anel macrolítico, em posições dos substituintes V e T (respectivamente C3 e C5). 0 açúcar encontra-se preferivelmente presente na forma piranósica (anel de n membros). Quando T reprrseji ta um açúcar, o açúcar ã, oreferivelmente, um açúcar arni. nado, especialmente um açúcar aminado com o grupo amino, ou com o grupo amino substituído, presente na posição 3'. Os açucares preferidos (para ambas as posições) também contêm menos que um grupo hidroxilo por cada carbono não pertencente a un grupo carbonilo (por exemplo: pouco menos que cinco grupos hidroxilo numa aldose com 6 átomos de carbono). E especialmente preferida desosamina para T, e para V, cladinose. Num resíduo ou resíduos de açúcar podem estar presentes substituintes.

A frase substituinte orgânico f armacêuticameji te aceitável, como é usado nesta Memória Descritiva (tan to para esta como para fórmulas gerais posteriores), pre tende incluir substituintes orgânicos estáveis que não evitam que o composto referido iniba a replicação virai. No entanto, deve-se reconhecer que a inibição virai não necessita de ser completa. 0 melhoramento das doenças virais ocorrem em muitas doenças em que a taxa da replica^ ção virai é meramente reduzida. -Reduzindo a mesma, permite-se que o sistema imunitário natural funcione mais efj. cazmente.

Os substituintes irgânicos farmaceuticamente aceitáveis (excepto os açucares) não tê^ . ore^H velmente, um volume maior aue um substitu¹nro j_e ρ idílico ou benzóico, que é. ele Dr-c^y'i:. -Jv¹ ituíd., --r s.. p$t i tu i n7 tes alquilos C1-C4- Os substituintes preferidos em grupos aromáticos incluem halogenados, alquilo ou alcanol C1-C4, alcoxi ou alcanoiloxi C1-C4 , hidroxi, carboxi (e alquiloéteres), amino, amino alquilo ou amino dialqui_ lo, e grupos nitro. Os substituintes preferidos dos car bonos não-aromáticos incluem todos os que são preferidos para os substituintes aromáticos, excepto o nitro. Os substituintes preferidos num heteroátomo (por exemplo: oxigénio ou azoto) incluem substituintes cuja ligação é feita por um carbono orgânico. Quando estão presentes num substituinte principal, especificamente designado, substituintes indefinidos (por exemplo: quando R é um grupo benzilo substituído), eles estão preferivelmente limitados a um ou a dois (por exemplo: 2,4-diclorobenzi1). Os anéis heterocíclicos preferidos, tanto os aromáticos como os não-aromáticos, incluem furano, tiofeno, pirrol, pirazol, imidazol, triazol, oxazol, tiazol, isotiazol, pirano, pirone, dioxina, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, oxazina e morfolina. Os substituintes orgânicos farmaceuticamente aceitáveis pre feridos não contêm mais que um anel orgânico, não mais que um grupo substituinte ou um grupo funcional por átomo de carbono (excepto para os hidrocarbonetos halogena. dos), e, mais preferivelmente, não mais que um grupo sub_s tituinte ou grupo funcional por dois átomos de carbono, e 15 ou menos, mais preferivelmente 10 ou menos átomos, excepto de hidrogénio.

Um número de compostos preferidos da invenção têm a fórmula geral acima apresentada, na qual as diferentes partes da fórmula tem os seguintes significados: Me é meti 1;

Et é eti1;

T é OH, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, a~ilcxi de um a 22 átomos de carbono (especialmente 1 a 3 átomos de carbono e ocorrendo grupo de ácidos gorios acílicos ^10^_í22^’ -4^-1 ;-5-R '-oranol - 6-ox í, 2-metil3

-3,4-epoxi-5-R -piranol-6-oxi, ou 2-metil-3,4-dehidro-5-.

1

-R - piranol-6-oxi, em que R representa hidrogénio ou metil, R representa hidrogénio, metil, benzil, ou benzil substituído por um substituinte orgânico farm ceuticamen te aceitável, e .pecialmente um halogenado, alquilo ou aj_ canol C1-C4, hidroxi, sarboxi, amino, amino alquilo ou amino dialquilo, ou um grupo nitro, e R~ é um hidroxi ou um alquilo, alcoxi ou aciloxi farmacológicamente aceita vel, de 1 a|10, preferivelmente de 1 a 6|átomos de carbc) no, por exemplo: formaloxi, acetoxi, propinoxi, ou etil

succinoxi;

3 grupos aciloxi para R incluem grupos em que

a metade acílica se encontra dentro da definição de A, acima descrita, e inclui, especialmente, nicotinil ;

V é 2,4-dimeti1-3-R -4-metoxipiranol-6-oxi, hidroxi, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, aciloxi de 1 a 22 átomos de carbono (especialmente 1 a 3 átomos de carbono, e ocorrendo grupos de ácidos gordos acílicos Clo^-^22’ ^2υ^^οηάΐο’ ^{ou um} sulfonato alquilo substituído;

B é hidrogénio, aciloxi, C^SC^CH^, ou CH₂SOCH

3,

D é hidrogénio ou é tirado ao mesmo tempo com

E para definir uma ligação dupla;

E é tirado ao mesmo tempo som D para formar uma ligação dupla, ou é tirado ao mesmo tempo com G para definir um oximinoéter em que o oxigénio é substituído por R; o E e o G, tirados ao mesmo tempo, podem também representar .m substituinte diazo que pode ser substitu_í dc por um substituinte orgânico farmaceuticamente aceita vei, especialmente R;

A é hi ,rogénio ou acil, de 1 a 3 átomos de cajr bono, ou OA em C6 e C7 sao removidos par formar uma lj_ gação dupla entre C6 e um, H em C7. a A e rac· ao me_s mo tempo com ó para uma ligação, ' -inindo, assim.

uma ponte de éter vinílico;

é hidrogénio ou hidroxilo; e

R é um substituinte orgânico de 1 a 20 átomos de carbono, particularmente um hidrocarbil ou grupos hidrocarbil substituídos que podem ser alifáticos, a 1 icícl_i cos, aromáticos (incluindo os heteroaromáticos), ou uma combinação dos mesmos, e· podem, além disso, ser alifati-r camente saturados ou insaturados, particularmente satura dos. R é, mais particularmente, um alquilo de 1 a 3 átjo mos de carbono, preferivelmente de 1 a 2 átomos de carbo no (facultativamente é substituído por um ou mais grupos alcoxi, por exemplo: metoxietoximeti 1); cicloalquilo com um anel de 5 a 6 átomos de carbono; fenil; benzil; beja zoil; ou derivados substituídos dos mesmos, particularmente benzil substituído em que os substituintes são halo genados (particularmente cloro, mais particularmente mono ou dicloro ligados a um átomo de carbono de arílo), Os grupos ilustrativos R incluem metil, etil, propil, ciclohexil, fenil, benzil, 2,4-diclorobenzi 1, metoximeti 1, be_n zoil, e benzoil alquilo substituído ou benzoil halogenado substituído. 0 hidrocarbil refere-se a um grupo orgânico composto unicamente de hidrogénio e : carbono, e pode ser alj fático, aromático, alicíclico ou combinações dos mesmos, e pode ser saturado ou insaturado; o hidrocarbil substj_ tuído exige a presença de heteroátomos (especialmente 0,

N, S, P, e halogénios, assim como sais de metais, espec_i almente sais de metais alcalinos, de ácidos), e inclui grupos heterocíclicos.

Outros grupos convenientes , representados por

E · G, tirados ao mesmo tempo, incluem o seguinte (folha seguinte) :

X = alquilo ou dialquilo

Os compostos particularmente preferidos são os em que todos os substituintes, na fórmula geral acima apre^ sentada, são idênticos aos existentes nas eritromicinas na 4 turais, sob a condição de que R possa representar tanto hidroxi como hidrogénio (definindo, por isso, os derivados da eritromicina A e B, respectivamente), e também sob a condição de que R possa representar qualquer dos substituintes apresentados nos dois parágrafos imediatamente precedentes. E, pelo menos, requerida uma diferença entre a eritromicina A e a B.

Os exemplos de compostos específicos da invenção

incluem 9-0-metiloximini1 eritromicina A	((incluindo os isó
meros isolados 9(Z) e 9 ( E ));	9-0-(2,4-diclorobenzil)oximinil

eritromicina A; 9-0-isopropiloximini 1 eritromicina B; 9-0-feni1oxi oini1 eritromicina B; 9-0-ciclohexiloximini1 eri tronolide A; 9-0-(2-metoxietoxi)metiloximini1 eritromicina A; 9-Ò-hexadeciloximini1 er tromicina A; des-dimetiiamino-9-0-metiloximini1 eritromicina A; 9-0-metiloximini1 eritrcno1 ide A; 9-0-metiloximini1 eritronolide A 2',4dinicotinado; 3¹-de(dimeti1amino)-3¹,4¹-dicehidro-9-0-me ti loximini1 eritronolide A 2'4-dinicotinaGo; 9-0-benzilo ximinil eritronolide A N-óxico, 9-0-isopenti 1 ^ximini 1 er_i_ tronoiine A: e 9-0-meti loximini 1 er i trone, i i ae A a ^:-monoace .tato.

Um segundo grupo de compostos preferidos da in venção têm a segunda fórmula geral seguinte:

em que:

T é OH ou um substituinte orgânico farmaceuticameni te aceitável, ligado a C5 através dum oxigénio (especialmente um resíduo de açúcar);

V é OH ou um substituinte orgânico farmacêutica mente aceitável, ligado a C3 através dum oxigénio (especialmente um resíduo de açúcar);

U é hidrogénio, hidroxi ou alcoxi' ou aciloxi (pre perivelmente alcanol) de 1 a |io| átomos de carbono, ou U em C6, e um H em C7 são removidos para formar uma ligja ção dupla entre C6 e C7, ou U é tirado ao mesmo tempo com X para definir uma ponte de éter, entre C6 e C9;

Y é hidrogénio, hidroxi, alcoxi ou aciloxi (pre ferivelmente alcanol), de 1 a |10|átomos de carbono, um sulfato ou um grupo sulfonato (incluindo um sulfato ou um sulfonato de alquilo, contendo de 1 a 6 átomos de car no), ligado a C’1 através dum átomo de oxigénio,-OCHgSO^CHg, ou -OC^SOCH.,; Y e ur^r H em C10 são removidos para formar uma ligação dupla ntrp C10 e 7/1. ou ^v e ri, quando tirado ao me r.o tempo que C9. Cif» ^j C¹¹, -^o macro lítico, representam um anel heterocíciico de 5 a 7 membros, especialmente um anel de 6 membros 1,3-dioxa, contendo facultativamente boro na posição 2; e

Z, X e W representam, independentemente, hidro génio, hidroxi, aciloxi (preferivelmente alcanol), de a 10 átomos de carbono, ou alcoxi (preferivelmente de 1 a 6 átomos de carbono); sob a condição de que X e W tira dos ao mesmo tempo possam representar =0 ou =S; X pode ser tirado ao mesmo tempo com U, conforme está acima def£ nido; W pode ser tirado ao mesmo tempo com Y, conforme está acima definido; ou Z pode ser tirado ao mesmo tempo que um hidrogénio em C13 para representar uma ligação dupla.

Quando T e V representam resíduos de açúcar, os resíduos de açúcar resultam, preferivelmente, duma forma ção de acetal entre uma aldose e um grupo hidroxilo, no anel macrolítico, nas posições dos substituintes do V e do T (C3 e C5, respectivamente). 0 açúcar está, preferi, velmente, presente numa forma piranósica (anel de 6 membros). Quando T representa um açúcar, o açúcar é, prefe rivelmente um açúcar aminado, especialmente um açúcar ✓ aminado com o grupo amino, ou com grupo amino substituj. do presente na posição 3'. Os açúcares preferidos (para ambas as posições) também-contêm menos do que um grupo hidroxilo por carbono não pertencente a um grupo carbonilo (por exemplo: menos que cinco grupos hidroxilo numa aldose com 6 átomos de carbono). É especialmer te preferida desosam_i na para T, e para V cladinose. No resíduo ou nos resíduos de açúcar podem estar presentes substituintes, conforme descrito para a primeira fórmula geral.

Um número de compostos preferidos da invenção têm a segunaa fórmula geral acima apresentada, na qual as diferentes partes da fórmula têm os seguintes significados:

T é QH, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, acilo exemplo: formaloxi, acetoxi, propino3,4-dicloro-benzi1-oxi, ou nicotiloxi.

xi de 1 a 22 átomos de carbono (especialmente 1 a 3 átomos de carbono, e ocorrendo grupos de ácidos gordos acílicos 2-metil-4-(R^R^N)-5-R³-piranol-6-oxi, 2-metil-3,4-epoxi-5-R³-piranol-6-oxi, ou 2-metil3 1

-3,4-dehidro-5-R -piranol-6-oxi, em que R representa hj.

drogénio ou metil, R representa hidrogénio, metil, benzil, ou benzil substituído por um substituinte orgânico farmactuticamente aceitável, especialmente um halogenado, um alquilo ou alcanol C^-C^, hidroxi, carboxi, amino, amj_ no alquilo ou amino dialquilo, ou um grupo nitro, e R³ é hidroxi, ou um alquilo, alcoxi ou aciloxi farmacologicamente aceitáveis, de 1 a [70} preferivelmente de 1 a [6~]áto mos de carbono, por xi, eti1 succinoxi,

V é 2,4-dimetil-3-R -4-metoxipiranol-6-oxi, hidroxi xi, alcoxi, de 1 a 6 átomos de carbono, aciloxi de 1 a 22 átomos de carbono (especialmente 1 a 3 átomos de carbono, e ocorrendo grupos de ácidos gordos acílicos C^Q-Cgg), sulfonato, ou sulfonato de alquilo substituído;

Y é hidrogénio, hidroxi, ou aciloxi, ou Y e W são tirados ao mesmo tempo que C9, C10 e C11 para representarem um anel 1,3-dioxa de 6 membros, ou um anel 1,3-dioxa-2-boro de 6 membros, substituído por um grupo fenil, no átomo de boro; e

Z, X e W têm os significados acima definidos.

Os compostos deste segundo aspecto da invenção diferem da eritromicina A ou B (consoante com o qual este jam mais intimamente ligados), em, pelo menos, um substituinte representado por T, U, V, W, X. , Z, ou uma comb_i nação do mesmo. Os compostos preferi os diferem em não mais que quatro, mais preferivelmente não mais que três, e mais preferivelmente não mais que dua¹·’ dessas pos iões. Quando T ου V representam açuca diferente da desosa mina ou da cladin.ose, respectivamente quatro ou menos, mais preferível mente três ou menos, e mais preferivelmente dois ou menos grupos funcionais, são diferentes em qualquer outro açúcar.

Os exemplos seguintes referem-se a compostos e_s pecíficos, nos quais os grupos funcionais indicados são diferentes da eritromicina A ou B naturais: eritromicina

A N-óxido (diferindo no grupo amino no açúcar desosamina); r λ n

Δ. ’ -6,11-dideoxieritronolide diacetado; eritromicina B

11-metiltiomenti1 éter 2'-acetado (com um éster acetado formado no grupo hidroxi do resíduo de açúcar da desosand na);Δ -6-deoxi-11-0-aceti1 eritromicina B 2'-acetado; eritromicina B com um substituinte 2-meti1-3,4-epoxi-5-acetoxi-6-piranol-oxi, em vez do resíduo de açúcar da de; sosamina; eritromicina B com um substituinte 2-meti1-3,4

-dehidro-5-acetoxi-piranol-6-oxi, em vez do resíduo de açúcar da desosamina; eritromicina B com- um substituinte 2-meti1-3,4-dehidro-5-acetoxi-piranol-5-oxi, em vez do re síduo de açúcar da desosamina, e um substituinte 2,4-dime til-3-acetoxi-4-metoxipiranol-6-oxi, em vez do resíduo de açúcar da cladinose; e eritromicina B na qual a posição correspondente a X, da segunda fórmula geral, é um hidr£ génio, e Y e W representam -O-CHg-O-.

Deve-se ter em con ta que os resíduos de açúcar, quando numerados como os p_i ranos, com o oxigénio do anel na posição 1, têm diferentes valores numéricos para indicar as posições dos substituijn tes, comparando com o sistema da eritromicina que utiliza números primos e números primos duplos.

Estes compostos são todos eritromicinas tendo, pelo menos, um substituinte orgânico farmaceuticamente aceitável, que é seleccionado a partir do açúcar macrol_í tico e de açucares aminados, de ligações duplas e de epó xidos; os anéis heterocícl! os, ligados ao anel macrolítj. co pelas posições 09 e 011 i nc 1 u i ge^almente os oxigé nios dos dois grupos hidro*;lo ou oxc. D^sentes nestas

.posições); e derivados alquilos , acilos, tioalquilos, .

sulfatos e sulfonatos de grupos hidroxi, presentes nas eritromictnas e nos eritronolides naturais.

Quando T e V são ambos grupos hidroxilo, o com posto resultante é usualmente chamado eritronolide, em vez de erítromicina. No entanto, este composto e compos. tos macrolíticos semelhantes em que os substituintes têm o- significado acima apresentado, são considerados dentro do alcance da presente invenção, e são incluídos pelas frases derivado da eritromicina, eritromicinas, ou composto, e por frases semelhantes como as aqui usadas para referir compostos da invenção.

Pretende-se que os sais farmaceuticamente acej. táveis sejam identificados e incluídos pela referência a composcos não sob as formas de sal. Vários sais dos com postos podem ser feitos incluindo estearatos,. ou outros ácidos gordos Cg-Cgg, doedecil, e outros sulfatos gordos, fosfato, hidrocloreto, lactobionato ou gluconato. Sais de aminas quaternárias, incluindo os formados por subst/ tuintes do amino, fazendo parte dos compostos da invenção, estão também incluídos (especialmente os açúcares trimeti laminados).

Os derivados oximinil das eritromicinas podem ser preparados pelo processo descrito na Patente Americana N⁹. 3.681.326, publicada em 1 de Agosto de 1972. 0 éter vinílico pode ser obtido pelo aquecimento do oximinoéter num solvente orgânico, sob condições levemente acídicas. Todos os compostos podem ser produzir )s semi-sintéticameri te, a partir de eritromicinas naturais, eias modificações de grupos funcionais orgânicos, tais com·: hidroxi, acetal e carbonilo, usando técnicas padrão de química orgânica.

Os medicamentos expostos ?ode-i ser -'o^mulacos de formas convencionais. uxilizandc· in cra^spor-ador fi- lí ~ sio 1 ógicamente ou farmacologicamente aceitável. Tais transportadores incluem a água esterilizada, na qual o me dicamento pode estar suspenso (utilizando, facultativameri te, um detergente ou um emulsionante), ou pode ser disso_l viao num tampão fosfato, dimetil sulfóxido (DMSO), etile no-glicol, álcool, etc. 0 medicamento pode ter forma djj ma duma pastilha, de cápsula, ou algo semelhante, sendo encapsulado de acordo com os meios convencionais.

Os compostos da presente invenção podem ser for mulados e utilizados da mesma forma que outros derivados da eritromicina. As formulações, as dosagens e as técnicas utilizáveis na administração oral, e em algo semelhaji te, para a eritromicina e para os compostos relacionados com esta podem ser encontrados na Pharmacological Basis of Therapeutics (acima citada), pags 1224-1227. A forrnu lação e a administração está, por isso, dentro das capaci dades dos peritos neste campo, aos quais^- esta invenção diz respeito. No entanto, os comentários que se seguem são fornecidos para uma orientação inicial.

A concentração do medicamento, numa formulação particular, irá variar consoante a formulação, a presença ou ausência de outros medicamentos, a forma de administra, ção, o transportador, e algo semelhante. As unidades de dosagens típicas encontram-se entre os 10 e 500mg de ingrediente activo. São adequadas as pastilhas oralmente administráveis, e as cápsulas que contêm de 5% a 95% do ingrediente activo. As composições parentéricas que cori têm de 10 a 100mg/ml podem ser rapidamente preparadas. São igualmente adequados os pós secos esteri1izados, para uso em soluções de injecção in .ravenosa, após a mistura com soro fisiológico.

Geralmente, a dosagem dos compostos expostos se rá de, pelo menos, cerca de .,0 , e não mais do que cerca de 200mg diárias oor cada Kg do peso corocal, em doses

- 7 δ ί

t ι

•únicas ou múltiplas, usualmente de cerca de 10 a 100mg por cada Kg do peso corporal. Gs métodos de tratamento podem ser utilizados duran :e um dia, alguns dias, durante semanas, meses ou anos, o que depende da eficácia do método de tratamento, ou da natureza refractária da doeri ça.

Sabe-se que as eritromicinas se concentram no fígado do hospedeiro, no qual elas são administradas. Adequadamente, supõe-se que os compostos da invenção são particularmente úteis no tratamento de doenças virais do fígado, tal como a hepatite.

Embora os compostos da invenção possam ser uti lizados no tratamento de animais, particularmente de mamíferos, eles são preferidos no tratamento de pessoas. Os medicamentos são utilizados no tratamento de doenças e de tipos de viroses discutidas na secção anterior desta Memória Descritiva. Os oximinoéteres e os hemicetais e cetais relacionados com estes, são articularmente prefe ridos para as retroviroses e viroses hepáticas, embora os compostos da segunda fórmula geral possam ser ta; oém usados para este fim.

Os medicamentos, quer seja sózinhos quer seja em combinação, podem ser administrados por via subcutânea, intradérmica, oral, parentérica, intra-peritonial, intra-vascular, etc. 0 modo particular de administração será seleccionado a fim de assegurar que o(s) medicamento(s) estão aptos a ser dirigidos ao local da invasão virai, nui ma dosagem eficaz (por exemplo: dirigidos às células se_n sí vei s ).

As composições expostas ρ dem ser administradas, quer seja numa mesma ^ormulação quer seja numa formulação separada, em conjunto com outros medicamentos que actuam em cooperação com os medicamentos da i.nver;ão exposta, ou podem ser utilizadas para fornecer várias profilaxias de apoio, ou capacidades terapêuticas, tais como a prevenção, melhoramento ou a terapia das doenças, Dara as quais um retrovírus é, totalmente ou em parte, o agente etiológico. Estes agentes podem incluir os tais medicamentos não -proteicos, como a adenina arabinose (araA), rifamicina e derivados destas, ribavirina, aciclovir, e compostos relacionados com estes, e medicamentos azidotimidina ou medicamentos peptídicos, tal como o interferon (<x,p, ouY), as interleucinas, por exemplo: IL-2, o factor necrose tumoral, etc.

Para medicamentos associados, a dosagem irá variar com o uso que deles se pretenda fazer; para araA a dosji em serã de cerca de 5 a 15mg/Kg por dia, para as proteínas

7 (biológicas), será de cerca de 10 -10 unidades por dia, ou o equivalente.

Os exemplos que se seguem são oferecidos para i 1 u_s tração e não como limite.

EXEMPLO 1

Uma amostra de 9-0-metiloximini1 eritromicina A (EMO), foi testada para verificar a capacidade de inibição do crescimento do HTLV III, numa cultura de tecidos. Uma linha de células T (V3) foi infectada com HTLV III, e as células infectadas foram incubadas com 0, 1, 5, 10 e 20pgm EMO, por ml do meio de cultura de tecidos. 0 meio de cultura foi re cuperado após 0, 1, 2, 3 e 4 dias de incubação, e analisado' para a produção de HTLV III, pela transcriptase e antigénio virai (P-24), testado pelo método ELISA. A tabela 1 demonstra que a produção de antigénio virai, e que a actividade da ⁺ 'anscriptase inversa associada à partícula virai, são signj_ f cativamente reduzidas.

Tabela 1

Concentração EMO (pg/mi)	Percentagem de redução
transcriptase invensa	P-24
0	0	0
1	10%	8%
5	50%	45%
10	73%	69%
20	82%	36%

E evidente, pelos resultados acima apresentados, que os derivados da eritromicina expostos-são efica es na inibição da replicação do retrovírus humano, nas células em cultura. Isto indica que os compostos da invenção po dem ser usados para evitar ou inibir as infecções in vivo, por retrovírus humano. Podem ser utilizadas baixas dosagens com compostos que provaram ser administrados aos se res'humanos, duma forma segura. Os compostos podem ser administrados de várias formas, tal como oralmente, ae fojr ma conveniente, e assegurando um alto grau de protec:ão, tanto durante a administração do medicamento, como a seguir a esta.

Como é evidente pelos resultados acima apre sentados, a terapia exposta pode ser utilizada no tratamento de infecções, agudas e crónicas, pelo retrovírus, para inibir ou suprimir a replicação virai, ou para destruir ou acabar com a infecção, a fim de (1) reduzir ou eliminar a possibilidade de contágio, (2) evitar ou adiar o desenvolvimento da doença, quando é usado um tratamento em indivíduos infectados, antes que a doença se desenvolva, e (3) melhorar, atrasar a progressão da doença, ou curar a doença resultante da infecção.

EXEMPLO 2

Uma amostra de 9-0-meti.i aximini 1 eritromicina A (EMO), em soiucão, numa concentraçã de i00mq/ml em dime

- TO .til sulfóxido (DMSO), foi subcutâneamente administrado, numa dose de 15mg/Kg/dia, durante 14 dias, a um grupo de marrecos de pequim com 10 semanas de vida, infectados cronicamente por DHBV (experimentalmente infectados como é descrito por Marion et al. , Liver Disease Associated with Duck Hepatitis B Virus Infection of Domestic Ducks (Doença de F/ gado Associada com a Infecção pelo vírus B da Hepatite dos Patos Domésticos), Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1984) 8/.:898). Outro grupo de marrecos de pequim com 10 semanas de vida, foram usados como controle, e tratados com *

a mesma dose de apenas DMSO. A replicação virai in vivo foi avaliada por medição dos níveis de vírus DHBV, no sjo ro de animais infectados antes, durante e depois do tratamento. Os níveis de vírus no soro foram determinados pela quantificação do DNA do vírus, pela hibridação slot blot. A dez μΐ de cada soro foi acrescentado NaOH 0,1 M, para destruir o vírus e desnaturar o DNA virai. As amostras foram espalhadas numa membrana de nylon, à qual estão ligadas cadeias simples de DNA. 0 DNA virai ligado ao filtro foi detectado pela hibridação com DHBV C²pj- DNA sonda, seguida de autoradiografia. A quantida^ de de DNA virai existente em cada amostra de saro, expres. sa em picogramas de DNA viral/ml de soro, foi determinada pela comparação dos traçados densiométricos da âroa expôs, ta da película, sobre cada local onde há soro, sobre a membrana de nylon com uma curva padrão originada pelos traçados densiométricos, para quantidades conhecidas de DHBV DNA, espalhadas do mesmo modo, na mesma membrana de nylon.

Os resultados obtidos mostram que ao 0 dia os picogramas de DHPV DNA/ml de soro era de 900, atingirdo um máximo de 1 500 ) 8⁸ dia, e baixando para menos d n_í vel de detecção ao 12⁹ dia. Foi administrada EMO, a come çar no dia 8 e durante 14 dias, numa taxa de 15mq/Kg/dia. 0 nível baixo marteve-se até ao 22⁹ dia .quando o tratamento por EMO ^foi interrompido)..

tendo jo, a partir .daí, o nível virai i subir, continuando até ao 32^s dia, . altura em que o nível atingiu cerca de 650 picogramas de DHPV DNA/ml de soro.

A tabela 2 resume os resultados do tratamento de quatro animais com eritromicina A 9-0-metiloxima (EMO) em DMSO, e de quatro animais com apenas DMSO, como determina do no 22⁹ dia após a paragem da administração do medicamento, 14 dias depois. Descobriu-se que o vírus foi da mesma forma eliminado pelo tratamento por EMO, em cada animal, e não por DMSO.

Tabela 2

Percentagem de Redução em DHBV DNA, em soro

Animal N^g. Tratamento__Após 14 dias de tratamento

1	EMO (em DMSO) 15mg/Kgm/dia	100
2	EMO (em DMSO) 15mg/Kgm/dia	100
3	EMO (em DMSO) 15mg/Kgm/dia	96
4	EMO (em DMSO) 15mg/Kgm/dia	94
5	DMSO- 0,5 ml por dia	0
6	DMSO- 0,5 ml por dia	0
7	DMSO- 0,5 ml por dia	0
8	DMSO- 0,5 ml por dia	0

EXEMPLO 3

São apresentados vários exemplos de técnicas sintéticas para mostrar a síntese de /ários compostos da invenção.

Preparação da eritromicina A 9-0-metiloxima e separação dos isómeros 9(Z)- e 9(E)

Foi acrescentada eritromicina A (86,84 gr) a um frasco de 3 litros de fundo redondo com trê'; gargalos, se guida de 600ml de metanol. Foram acrescentados a esta so lução límpida, à temperatura ambiene/, ?9,2 gr de

- '·' c CH^ONH^ HC1. Depois de agitados durante 10 minutos, foram acrescentados à solução límpida, à temperatura ambie_n te/Ngj 32,86ml de EtgN. Após a agitação durante 20 horas, à temperatura ambiente/^, a reacção terminou. A mistura foi arrefecida com um banho de gelo, e foi lentamente acrescentado 1 litro de 10% da solução aquosa de NH^OH. 0 precipitado branco foi recolhido por filtração, lavado com água (3x100ml), e secou ao ar, de um dia para o outro. 0 material sólido foi dissolvido em 1,6 litros de CH₂CL_2#e um vestígio da quantidade de material insolúvel foi re movido por filtração. A solução de CH₂C1₂ foi lavada com água (4x350ml), e foi seca com 45gr de grânulos de Na₂S0^ anidro. Após a filtração, a concentração da solução 1ím pida, até um volume de 200ml, originou uma grande quantj_ dade de material cristalino branco. Foram acrescentados à suspensão branca 200ml de éter absoluto, e a suspensão resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 5 minutos. Os cristais dispersos e finos foram recolhidos, lavados com vestígios de éter, e secos ao ar, de um dia para o outro, para produzir 34,7gr do produto desej_a do.

Uma vez que a sua HPLC demonstrou algumas impu. rezas, foi requerida mais uma recristalização. 0 produto impuro (34gr) foi dissolvido em 340ml de CH₂C1_2S e d_i_ luido numa igual quantidade de éter absoluto (340ml). A concentração da solução límpida, até um volume de 300ml, origino.! uma grande quantidade de cristais brancos que fo ram recolhidos e secos à temperatura ambiente em 0,1mm de Mercúrio, de um dia para o outro, possibilitando a prod_u ção de 19,0gr do produto principal, cujo ponto de fusão varia entre os 127-131°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS, e pela análise elementar estão de acordo com a estrutura do produto principal.

A separação dos dois isómeros 9-metiloxima pode ser conseguida por uma HPLC inicial, numa cciuna de 18

X .pratos, com o sistema solvente de CHgOH/O,! M pH 7,0, numa razão de 85/15. Começando com 210mg da mi_s tura, a separação por HPLC fornece, inicialmente, 11mg de 9(Z)wmetiloxima, de ponto de fusão entre os 120-122°C, IR (KBr): 3450, 1735, 1460, 1380, 1167, 1050 e 1010 cm“¹,

NMR (CDClo): 0,84 (t, 3H, CH, ou grupo etilo),2,32 (s, 6H CH 0CH ^J

-N·^ ³ ), 3,32 (s, 3H,V ³ ), 3,82 (s, 3H, =N-0CH,)ppm.

^XCH₃ Ametil ⁰

Espectro de massa: MH⁺ em m/e 763 (teoria 763 ). Numa ojj tra mistura obtem-se 140mg de 9(E)-metiloxima, de ponto de fusão entre os 127-130°C, IR (KBr): 3450, 1737, 1460, 1380, 1 170, 1050 e 1010 cm¹. NMR (CDC1₃):S 0,84 (t, 3H,

CH₃, de grupo etilo),

XOCH, ^J ), 3,85 (s, 3H, meti 1 /CH

2,32 (s, 6H,-N. ^á), 3,32 (s, \CH₃

=NOCH₃)ppm. Espectro de massa:

MH⁺ em m/e, a 763 (teoria 763).

Preparação da eritromicina A 9-[θ-Ç(3,4-diclorof eni 1 )meti 1] oximal.

A eritromicina A (58,64gr) foi acrescentada, num frasco de 3 litros, de fundo redondo, de três gargalos, se guida de 800ml de metanol. Foram acrescentados, a esta so lução límpida, à temperatura ambiente/Ng, 55gm de (3,4-diclorofenil)metoxiamino hidrocloreto (Ref.:Bul1. Acad. Pai. Sei., Ser. Sei. Chem. ( 1974) 22(3): 195-199) e 12,65gr de EtgN. A agitação durante 48 horas completou a reacção. A mistura foi arrefecida com um banho de gelo, após o que foi acrescentado 1 litro da solução aquosa de NH^OH, a 10%. A colecta do precipitado branco, pela filtração, foi seguida da lavagem com ájua (3x100ml), e da secagem ao ar, de um dia para o outro. 0 material sólido foi dissolvido em 1,5 litros de CHgClg> 1avado com água (4x300ml), e seco sobre MgSO^ anidro. Depois da tração, a concentração do filtrado, até cerca de 80ml originou uma grande quantidade de material cristalino brar^o. ^oram acrescentados, a esta .suspensão branca, 200ml de éter absoluto, e foram agita1 dos, à temperatura ambiente, durante - hora. Os cristais foram recolhidos e recristalizados com C-^Clg/éter = 1:1, para possibilitar a formação de 23,7gr do produto prir:cj_ pal, de dos por □roduto ponto de fusão entre os 107-109°C. Os dados obti

IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do _krincipa1.

Preparação da Roxitromicina (eritromicina A 9- [O- [(2-metoxietoxi )meti 1] oximal) composto principal pede ser preparado segundo o processo publicado na Patente Americana N⁵. 4.349.545 (de 14 de Setembro de 1882), de ponto de fusão entre os 110-119°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do produto principal.

Preparação da eritromicina 9 (O-hexadeciloxima;

A eritromicina 9-oxima (39,3gr) foi dissolvida · em 240ml de dimetil formamide. A esta solução foram acres, centados 36,6gr de brometo de hexadecil, e 13,8gr de l^COg, Depois de agitada a mistura durante 4 dias, a mesma foi filtrada e o filtrado evaporou-se. 0 resíduo foi disso/ vido em 100ml de metanol, e diluído em 1,3 litros da solji ção de NH₄0H a 10%. 0 precipitado branco foi recolhido, dissolvido em 1,25 litros de cloreto de metileno e lavado com água. A evaporação do solvente e a purificação HPLC, do produto bruto (coluna de 18 pratos, sistema solvente: acetonitrilo/O,01 M NH^HPO^, de igualador para 3,5 ph=80/20)_:forneceu 41,5gr do produto principal como sendo um sólido, de ponto de fusão entre os 86-94^JC. Os dados obtidos po ' IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do produto principal.

Preparação da des-dimetilamíno-eritromicína A 9-0-metiloxima

A eritromicina A 9-metiloxima N-óxido (2,0gr;

--^- preparado da eritromicina A 9-metiloxima, de ecc do com a técnica de conversão descrita em J. Am. Chem. Soc. ( 1954) 7_6:3121), sofreu pirólise a 145-155°C, sob uma pressão reduzida (0,1mm de mercúrio), durante 3 horas. A cromatografia do produto resultante da pirólise, sobre sílica gel, com 1% de metanol em cloreto de metileno, for neceu 0,28gr do produto principal, como sendo um sólido, de ponto de fusão entre os 127-129°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do produto principal.

Preparação de eritronolide A 9-(0-metiloxima) A des-dimeti1amino-eritromicina A 9-metiloxima (0,9gr) foi disssolvida em 70ml de 3% de HC1 em metanol. Depois de ter sido agitada a solução, durante 20 horas, à temperatura ambiente, o solvente evaporou-se, e o resí. duo foi dissolvido em 200ml de acetato de etilo. A solu ção de acetato de etilo foi lavada com uma solução de b_i carbonato de sódio saturada, e com água salgada, e a fase orgânica resultante foi seca. 0 solvente foi evaporado e o produto bruto foi cromatografauo sobre sílica gel. A diluição com 2% de metanol em cloreto de metileno, permj_ tiu a formação do produto principal como sendo um sólido, de ponto de fusão entre os 98-101°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do prodjj to principal.

Preparação da eritromicina A 9-0-metiloxima diri i cot i nado

A eritromicina A 9-(0-meti loxima.) (1,0gr) foi dissolvida em 10ml de piridina. A esta solução límpida foram acrescentados 1,0gr de cloreto nicotinilo HC1. Agj. tando-se a piridina, durante 20 horas, a uma temperatura ambiente, e havendo a sua evaporação, sob uma pressão re duzida, surgiu uma espuma amarela, a qual foi dissolvida em 200ml de cloreto de metileno, lavada vn áaua e seca. I f

I solvente evaporou-se e o resíduo a -^atografado j ___________:______i sobre sílica gel. A diluição com 5% de metanol em clore to de metileno, possibilitou a formação de 0,15gr do pro duto principal como sendo espuma, de ponto de fusão entre os 148-152°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do produto principal.

Preparação da 3¹-de(dimeti1amino)-3 ¹ ,4¹-didehidroeritromicina 9-(0-metiloxima·) 2 ¹ ,4-dinicotinado

A des-dimetilamino-eritromicina A 9-metiloxima (718mg) foi dissolvida em 4ml de piridina. A solução fo ram acrescentados 1,0gr de cloreto nicotirii lo· HC1. Agitando-se durante 2 dias, à temperatura ambiente, e evapo rando-se o solvente, sob uma pressão reduzida, originou um resíduo que foi purificado pela cromatografia de sílj. ca gel. A diluição com 2% de metan-I em cloreto de meti, leno, permitiu a formação de 350mg do produto principal, como sendo um sólido, de ponto de fusão entre os 120--130°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS estão-de acordo com a estrutura do produto principal.

Eritromicina 9-(0-benziloxima) N-óxido

A eritromicina 9-(0-benziloxima) (2,0gr) foi dissolvida em 70ml de metanol, e 30ml de água. Foi acres, centada a esta solução, uma solução de 12ml de peróxido de hidrogénio aquosa a 30%. A mistura foi agitada, â têm peratura ambiente em azoto, durante 24 horas, todo o meta, nol se evaporou, e o resíduo aquoso foi extraído com CHgClg0 extracto de CH^Cl^ foi lavado com água (2x100ml), e secou sobre MgSO^. 0 solvente evaporou-se e o resídua cris. talizou com uma mistura de CH OH e éter , para permitir

O a formação de 1,26gr do produto principal; como sendo um sólido branco, de ponto de ^usão entre os 175-177°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do produto principal .

^Preparação da eritromicina A 9-0-isopentiloxima

A temperatura ambiente em azoto. 90,0gr de eri tromicina e 56,ugr de j_-C₅H₁₁ONH₂-HC1, foram dissolvidos em 650ml de CH^OH. A solução foram acrescentados 24,7gr de trietilamina, e foram agitados durante 24 horas. A mistura foi tratada com um litro da solução aquosa de

NH^OH a 10%, à temperatura de 0°C. 0 precipitado branco foi recolhido, enxaguado com água (6x200ml), e seco ao ar, de um dia para 0 outro. 0 sólido foi dissolvido em 2,5 H tros de CH^Cl-,, lavado com água (3x1 litro), e seco com grãos de Na₂S0₄. A evaporação da solução de CH₂C1₂ origj^ nou um sólido branco, que foi inicialmente recrista.1 izado com uma mistura de CH₂Cl₂/éter/pentano (3:13:15). Outra recristalização do material sólido, com uma mistura de éter/CH₂Cl₂/pentano (10:3:15), possibilitou a formação de 25,6gm do produto principal (Wy-49,112), de ponto de fusão entre os 122-125°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS, e pela análise elementar, estão de acordo com a estru tura do produto principal.

Preparação da eritromicina A 9-metiloxima 4¹-monoacetato

A eritromicina A 9-metiloxima (1,0gr) foi dissoj^ vida em 10ml de piridina. Foram acrescentados, a esta sõ lução límpida, 2ml de anidrido acético. Depois de se ag_i_ tarem, à temperatura ambiente/N₂, durante 28 horas, foram acrescentados 25ml de água, e a mistura resultante foi ex traída com CHCl^ (4x35ml). 0 extracto de CHCl^ foi lavado com NaHCOg (3x15ml), depois com água (3x15ml), e seco com MgSO^. A eva poração do solvente e a cristalização da mistura do resíduo com éter/ /pentano (1/5), originou 750mg do sólido impuro.

sólido (210mg) foi dissolvido em 10ml de meta nol aquoso (H^CHgOH = 1:4), e agitado à temperatura ambiente/N₂, durante 24 horas. A mistura foi diluida em 25ml de água, extraída com CHClg (3x35ml), e 0 extracto foi seco com MgSO^. A evaporação da solução de CHCl^ per mitiu a formação de 130mg do produto principal (Wy-48,138) de ponto de fusão entre os 125-130°C. Os dados obtidos por IR, NMR e MS estão de acordo com a estrutura do produto principal.

Todas as publicações mencionadas nesta Memória Descritiva indicam o nível de aptidão dos peritos neste ramo, ao qual esta invenção diz respeito. Todas as pubH cações e todos os pedidos de patente citados, estã.0 aqui incluídos pela referência ao mesmo nível, como se cada publicação individual ou pedido de patente fosse, especí fica e individualmente indicado, para ser incluído por referência.

Tendo sido a invenção agora descrita, por completo, tornar-se-á evidente, para alguém com conhecimento vulgar neste ramo, que muitas mudanças e modificações p£ dem ser feitas na mesma, sem nos afastarmos do espírito ou do âmbito das reivindicações anexas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1- Processo para a preparação de compostos derivados da eritromicina, caracterizado pelo facto de Eritromicina 9-oxima (39,3 gr) ser dissolvida em 240 ml de formamida dimetílica, sendo acrescentada a esta solução 36,6 gr de brometo hexadecil e 13,8 gr de K2CO3; depois de agitada a mistura durante quatro dias, a mesma é filtrada e 0 filtrado evapora-se, sendo 0 resíduo dissolvido em 100 ml de meta nol e diluido em 1,3 litros de 10% da solução de NH^OH. 0 precipitado branco é recolhido, é dissolvido em 1,25 litros de cloreto de metileno e é lavado com água. A evaporação do solvente e a purj/ iça ção F°LC do produto bruto (coluna ae 18 pratos, sistema solvente: acetonitrilo/O,01 M NH^HPO^ de igualador para 3,5 pH = 80/20)fornece 41,5 gr do produto principal, como sendo um sólido, tendo um pon to de fusão entre os 86-94°C.

2- Processo para a preparação de compostos derivados da eritromicina, caracte- 30 rizado pelo facto de eritromicina A 9-metiloxima óxido de azoto (2,0 gr ; Dreparado da eritromicina A -9-metiloxima) sofrer pirólise a 145-155°C, sob uma pressão reduzida (de 0,1mm de mercúrio), duran te 3 horas. A cromatografia do produto resultante da pirólise, sobre sílica gel com 1% de metanol em cloreto de metileno, fornece 0,28 gr do produto principal, como sendo um sólido, tendo um ponto de fusão entre os 127-129°C.

3- Processo para a, preoaração de compostos derivados da eritromicina caracterizado pelo facto de des-dimetilamino-eritromicina A 9-metiloxima (0.9gr)ser dissolvida em 70ml de 3% de HC1 em metanol. Depois de se agitar a solução, durante 20 horas, à temperatura ambiente, o so/ vente evapora-se e dissolve-se o resíduo em 200 ml de acetato de et/ lo. A solução de acetato de etilo é lavada com uma solução de bicar bonato de sódio saturada e com água salgada, e a fase orgânica resultante é seca. 0 solvente evapora-se e o produto bruto é cromato grafado sobre sílica gel. A diluição com 2% de metanol em cloreto de metileno permite a formação do produto principal referido, como sendo um sólido, tendo um ponto de fusão entre os 98-101^GC.

4- Processo para a preparação de compostos derivados da eritromicina caracterizado pelo facto de eritromicina A 9-(0-metiloxima) (1,0 gr) ser dissolvida em 10 ml de piridina, sendo acrescentada a esta solução nítida 1,0 gr de cloreto de nicotina HC1. Agitando-se.durante 20 horas, a uma temperatura ambiente, e havendo a evaporação da pirid/' na, sob uma pressão reduzida, surje uma espuma amarela que é disso/ vida em 200 ml de cloreto de metileno, sendo lavada com água e se31 ca. 0 solvente evapora-se e o resíduo é cromatografado sobre síH ca gel. A diluição com 5% de metanol em cloreto de metileno perm_i_ te a formação de 0,15 gr do produto principal, como sendo espuma, tendo um ponto de fusão entre os 148-152°C.

5- Processo para a preparação de compostos derivados da eritrom2 ci_ na, caracterizado pelo facto de des-dimetiiamino-eritromicina A 9-metiloxima (718 mg) ser dissolvida em 4 ml de piridina, sendo acrescentado à solução 1,0 gr de cloreto de nicotina HC1. Agitando -se curante dois dias, à temperatura ambiente, e evaporando-se o solvente sob uma pressão reduzida, é fornecido um resíduo que é pu rificado pela cromatografia de sílica gel. A diluição com 2% de metanol em cloreto de metileno permite a formação de 350 mg do pro duto principal, como sendo um sólido tendo um ponto de fusão entre os 120- 130°C.

6- Processo para a preparação de compostos derivados da eritromic_i_ na, caracterizado pelo facto de eritromicina 9-(0-benziloxima) (2,0 gr) ser dissolvida em 70ml de metanol e 30 ml de água, acrescentando-se a esta solução uma solução de 12 ml de 30% de peróxido de hidrogénio aquosa. A mistura é agitada durante 24 horas, à tem peratura ambiente em azoto, evaporando-se todo o metanol e sendo o resíduo aquoso extraído com cujo extracto é lavado com água (2x100 ml), e seco sobre MgS0₄, evaporando-se o solvente e cristalizando o resíduo com uma mistura de CHgOH e éter, permitindo a for mação de 1,26 gr do produto principal, como sendo um sólido branco tendo um ponto de fusão entre os 175-177°.

7- Processo para a preparação de compostos derivados da eritromici. na, caracterizado pelo facto de, à temperatura ambiente em azoto, 90,0 gr de eritromicina e 56,0 gr de ^-ΟςΗ-]-jON^-HCl serem dissolvj. dos em 650 ml de CH3OH, sendo acrescentada à solução 24,7 gr de tri. etilamina, e sendo agitada durante 24 horas. A mistura é tratada com um litro de 10% da solução aquosa de NH^OH, à temperatura de 0°C. 0 precipitado branco é recolhido, enxaguado com água (6x200ml), e seca ao ar, de um dia para 0 outro. 0 sólido é dissolvido em 2,5 litros de CH₂C1₂> é lavado com água (3x1 litro), e seco com grãos ie Na₂S04A evaporação da solução de CH₂C1₂ fornece um sólido branco, que é inicialmente recristalizado com uma mistura de CHgC^/éter/pentano (3/13/15). Há uma outra recristalização do material sólido que é feita com uma mistura de éter/CH₂C1₂/pentano (10/3/15), possibilita da por 25,6 gr do produto principal (Wy-49,112), tendo um ponto de fusão entre 122-125°C.

8- Processo para a preparação de compostos derivados da eritromicina, caracterizado pelo facto de eritromicina A 9-metiloxima (1,0 gr) ser dissolvida em 10 ml de piridina, sendo acrescentado a esta soljj ção nítida, 2 ml de anidrido acético. Depois de se agitarem, à tem peratura ambiente em azoto, durante 28 horas, são acrescentados 25 ml de água, e a mistura resultante é extraída com CHCI3 (4χ 35 ml). 0 extracto de CHCI3 é lavado com NaHCOj saturado (3χ 15 ml), depois com água (3χ 15 ml), e é seca com MaSO^. A evaporação do solvente e a cri stal ização da mist·.. a ^esidual corr- éter/pen^ano (1/5), forne ca 750 mg do só id''·

0 sólido (210 mg) é dissolvido em 10 ml de metanol aquoso (H2O: .CH^OH = 1:4), e agitado durante 24 horas a uma temperatura ambien te em azoto, sendo a mistura diluida em 25 ml de água, e extraída com CHCl^ (3χ 35 ml), e sendo 0 extracto seco com MgSO^. A evaDOração da solução de CHCl^ permite a formação de 130 mg do produto principal (Wy-48,138), tendo um ponto de fusão entre os 125-130°C.