PT796104E - Aplicação de moléculas do ácido nucleico em tecido mucoso - Google Patents

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PT796104E
PT796104E PT95943781T PT95943781T PT796104E PT 796104 E PT796104 E PT 796104E PT 95943781 T PT95943781 T PT 95943781T PT 95943781 T PT95943781 T PT 95943781T PT 796104 E PT796104 E PT 796104E
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David B Weiner
Kenneth E Ugen
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Univ Pennsylvania
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Description

Descrição APLICAÇÃO DE MOLÉCULAS DO ÁCIDO NUCLEICO EM TECIDO MUCOSO Campo da Invenção A presente invenção refere-se a composições para introdução de material genético nas células de uma pessoa. As composições da invenção podem ser usadas para aplicar material genético com o código de proteínas alvo para imunização. As composições da presente invenção induzem imunidade mucosa.
Antecedentes da invenção. Já foi estudada a introdução directa de um gene normal e funcional num animal vivo como meio para substituir informação genética defeituosa. Em alguns estudos, o ADN é introduzido directamente nas células de um animal vivo sem se recorrer a uma partícula virai ou outro vector infeccioso. Nabel, E. G., at. al., (1990) Science 249: 1285-1288, apresentam uma expressão de um gene com um sítio específico in vivo de um gene beta-galactosidase que foi transferido directamente para uma parede arterial em ratos. Wolfe, J. A. et al., (1990) Science 247: 1465-1468, apresentam a expressão de vários genes de transmissão que foram transferidos directamente para o músculo de um rato in vivo. Acsadi G., et. al., (1991) Nature 352: 815-818, apresentam a expressão do gene da distrofina humana em ratos após injecção intramuscular de construções de ADN. Wolfe, J. A., et. ai., 1991 Bi o Techniques 11(4) : 474-485, refere condições que afectam a transferência directa do gene para músculo de um roedor in vivo. Felgner, P. L. e G. Rhodes, (1991) Nature 349: 351-152, apresentam a utilização directa de genes 1/103
Vpr é uma proteína 15 kD (96 airdno ácidos) na maioria dos ramos do VIH, embora o quadro de leitura aberto do Vpr seja extensivamente mutilado em muitos ramos virais, é extensivamente aberto na cultura de células. 0 quadro de leitura aberto do Vpr também está presente no VIH-2 e em muitos isolados de VIS. Vpr é a primeira proteína reguladora retroviral que se encontra associada a partículas virais do VIH. A presença no vírus do VIH sugere que pode servir uma função em algum ponto inicial do ciclo de replicação do vírus. 0 Vpr acelera a replicação do VIH, especialmente numa fase inicial da replicação. 0 Vpr aumenta o nível de expressão dos genes repórter ligados ao RTL do VIH em cerca de três dobras. Além disso, Vpr e Tat parecem actuar sinergeticamente no que respeita aos genes ligados ao RTL. 0 Vpr pode ser isolado do soro das pessoas infectadas com o VIH e parece aumentar a capacidade de o vírus infectar novas células. Também já se descobriu que o Vpr inibe as proliferações de células e induz a diferenciação celular. (Levy, D. N. et al., Ce11 (1993) 72: 1-20) , uma descoberta que pode ser significante tendo em conta registos que os monocitos/ macrófagos primários são infectados apenas in vitro enquanto se submete à diferenciação (Schuitemaker, H. et al., (1992), J. Clin. Irivest. 89: 1154-1160. Mesmo as células que não são capazes de apoiar a replicação do VIH podem ser desreguladas pelos efeitos do Vpr. Por exemplo, o Vpr pode ser responsável pelo desgaste muscular frequentemente observado nos pacientes com SIDA. Devido à actívidade potencialmente destruidora do Vpr, a imunização genética deverá ser, de preferência, realizada com uma construção de vpr modificada que irá expressar uma proteína Vpr não funcional.
Nef (também denominada de 3' orf na literatura antiga) é uma proteína 25-27 kD. Já foi sugerido que Nef possa estar envolvido na desregularízação de linfócitos T CD4+. 70/103 r:urí mrào --.- : tc pré núcleo r cu núcleo, rc, ste espolete .ntroduz eme sequência mutaiite DRl para ss: ,,οο: : ο: 1: mom a.e: aoem3 orl. : ·;3 .. ι >: amOlu 0 ιοί κ3 ::α:'::ο::ϊί e οη η3. rai ia ρ oii a de η 1.3 apio VI <3 33ο Puo estratégia alternativa é usada cie medo semelhaste ao descrito ancericournertOf consoado, o eacOleia 3'RCP neste caso, inclui o sinal VBHpoliJã e as sequências que flanqueiam este sinal.
Esta 3? espoleta é usado no caso de as sequências que incluíeis e/cu rodeia."·', o símai dBHpolia sejam Importantes para a expressão, diaa and3id.se mus acionai demonstrou que a função ao 7 6 i 10 u a, cucc! -1:-dV.o ao gem v s giov £ -..-1 J dg Cg ϋ í : CÍ‘ rd .· ii-dc Ó;."[ :d:V:;. pequeno ia nucj. ect ida com c c ódigo rev d a v j. a como única protein a alvo, A sequência de código rev é ciou a da para a col una vetrecral A descri Ca no doempe o 11 de BBG d 5 (RD 5 y enceras Iro;» Minneapc alia, MM; que convém c regiAc do código cie rev do ramo HM3B αο VIH sm pUCIà, Εκemolo 23 s estudos, os ratos foram Lno cuiados i n t ira a g i n a line n t e a construção eCMvji, com o cócigo do gene da β- COSidaS-: SOb o controlo do e s fimuIante CMV. Fc ram introduzidas vinte nicrogramas de oCMVp em 20 μΐ de soluçar PBS na vagina de uma pipeta segura na não. Por várias ores, a seguir à inieulaçáo, os animais foram sacrificados e foi recolhido teci·: uo. A jb"g.;:i 1 ac ci rsiduse foi avaliada por um ensaio de quMi i o 1 u m i n e s c ê n c i a . Gruoos de três ratos foram sacrificados e a aotividade da β-g a1a ctosidase (unicades de luz relativa ou UiB) cor μα de proteína foi quantificada. São mostrados resultados representativos nas Imagens 3A, 3B e 30. A Imagem 3A mostra acci cidade cia β-gaiactosidase em tecidos relacionados ccm mucosa do trato GU (Trompas de Fiai ópio, Ovários, Cerviz, vagina e bexiga). A Imagem 33 mostra aotividade da p-galactoai.áase etc tecidos relacionados com mucosa do trato GI (fígado, estômago, Intestinos, baço e pâncreas). A Imagem 3C mostra aotividade da β-galactosiaase em não mucosa (pulmão, sangue, cimo e Músculo).
Foi detectada aotividade β-galactosidase numa fase inicial de três dias no sangue, fígado, bexiga, cerviz, pulmão e timo. Alguns tecidos corno o fígado e c timo mostraram urna elevação persistente na expressão da β-gniactosiaase. A aotividade da B-galactosidase alcançou níveis máximos no fígado, ovários e ulmo no dia 8. Assim., foi vista expressão da fi-galactosidase no dia 3 em muitos tecidos e persistiu em alguns tecidos no dia 8. Isto índica a capacidade dos genes, inoculados localmente, se disseminarem a outros tecidos e serem expressos em locais distantes. Esta é uma característica importante para as técnicas de terapia de genes usando a invenção. 78/103
Exemplo
Os ratos foram igaalnenrs tramados por inoculação vaginal com um p.Lasmídeo que provou previamente ser capaz de induzir reacções cie anticorpos a seguir à inoculação intramuscular, 0 piasmtcteo pchINIbO teu o código da proteína envelope do V1H soo o controlo do om estimulante CMV. Este plasmídeo induz reacções imunes humorais potentes ou mediadas por células. A adminzstraçac vaginal consistiu em micro pipetas com 20 pq de piasmídec do ALN formulado om IX IBS na vagina de uma pipeta secura na mão no dia 0 e no dia 60. Foram preparadas lavagens vagir, a is através da administração de 200 μΐ de IX PB2 intra-vaginalmente seguido da recolha com uma pipeta de transferência de plástico, Lavagens do soro e vaginais foram recolhidas nos dias 0, 30, 90 e nl80. As reacções dos anticorpos foram determinadas pela ELISA em lavagens vaginais não diluídas ou. soro diluído 1; 100- Os resultados são apresentados nas desenhos 4 A, 4B, 1C s 4D. 0 desenho iA rnostra as reacções IgG contra a proteína de envelope externa (gp 120) do Via. o desenho ih mostra as reacções 'IgA contra a transrn.ern.fcra.n.a da proteína de envelope (gp 41) do VIH-1. 0 desunho 40 rnostra as reacções IgA contra a proteína de envelope externa (gp 120) do VIK. 0 desenho 4D rnostra as reacções IgA contra a transmernbrana da proteína de envelope externa (gp 41) do VIH-1.
Foram avaliados níveis de IgG ou IgA específico através da aplicação de anticorpos secundários anti-IgA específicos ou anticorpos secundários anti-IgG específicos no ELISA. O nível de anti-gp 120 ou anti-gp41 do IgG das lavagens vaginais aumentou gradualmente após a inoculação do ADN e continuou a aumentar após a estimulação secundária ter alcançado um nível de pico no dia 180 contra os gpl20 e gpl4. O nível de soro IgG contra gpl20 e gp41 aumentou signíficativamente cerca do 79/103 dí.. a a 0 a seguir à . ir: oca la çào in ic. lai com ara cut r< 1 aumento re g is1s do a segui. / a esc 1T0.U .1. ação sec u aoa ria Γ i o dí a 3S0. Ob servou~s a qu e o nível do aat i-gpl 20 cu qpii do τ- g.a contra CiV\ iras a a ρ roreinas Ο Ο Ο' Τ IV tt i„ ope oas 1 ivaoera vagi 1 na is aumentoa no dia iO para nineis baixos com ara aumento pernaineíTre regista do mesrn o ao fim de 18C dias; ta 1.0 Vi -L (.../ IgA aumentou ao fim de 30 a: as a voltou a aunei mar O; C ix s a mocujocão seca ndá ri.a . Ao to ao, o nível tíe Ictl no será e aas lavagens vaginal s foram i mu ito ma is altos ao que RO nivei IgA. Este pdt). Oci· 1 r j >'j 1 -—(a r x çao 1 oiciaj. rcgi.stato a o fira de 30 cias seguido por urn aumente : po sterior a seguir à 1. Π.OC Ql aí i ião secundária é
consistente coai o padrão de expressão registado no estudo da p-qa lactcsidase. Po mesmo modo, o predomínio do isótopo IgG lio. reacção, assim co mo o sor·o rn.ai s o i s v a d o em o p a s í çSo à IgG vag íaaí observada, sdo compa tiveis com a exp cessão dis seminada cio gene tal como foi observado para a expressão da p-gai actosí.aaae. Isto indica que os genes acir-m aisarados iocairaanto ficara amplamente aí sacrainados a expressos numa narreoacia ae ceemos «
Quadro 1
Famíl ia plcomavírus Géneros: Rinovírus: (Médico) responsável por 501 dos casos da constipação comum. Eterovírus: (Médico) incluí poliovírus, coxsackievírus, ecovírus, e enterovírus humano tais como o vírus da hepatite A. Aptovírus: (Veterinária) estes são os
vírus de doenças da boca e do pé. Antigénios alvo: VP1, VP2, VP3, VP4, VPG
Família Calcivírus 80/103 Géneros: Grupo Porra) k do virus: V ví rus são agentes causativos tie ga s t r o e n t e r x. t o e p i. ci e cr. c a c
-Θ C i C O } £- S Í1S S i rnpcrtan tes, 1 favi ru s: (Meai cc Veteri ndrio xem.pl os inclo em vrrus ser: i! í í TM ,··ν 1......Ó> .? 1M 1 ir sRÍ ve rp T: S ufalite cuscer u hc τι e st em E auiue
Re o v· í r a a : (Mé d i. c o } vx r u s da R u b é o i
Famí1ia Filar:L
Exemplos incluem (Médico): dengue» febre-amarela, encefalíte Japonesa, encefalite de St, Louiu e uíriís da encefalite tSck òorne.
Virus da hepatite C: (Médico) estes vírus ai.7 ida não estão colocados numa família mas crê-se serem ou togavírus ou flavivirus. Tem maio serneihanc;as com a família Togaví rus.
Família Ccrona vírus (Médico e Ve t e r i n á r i o) V í r u s da bronquite ínfeceiosa(aves domésticas) Vírus da gastroenterite transmissível via suínos (porco) Vírus da encefalomíelite hemaglutinada Suína (porco) Vírus peritonite infeccioso felino (gato) Coronavírus entérico Felino(gato) Coronavírus canino(cão) A causa do coronavírus respiratório humano - 40 causas da constipação
comum. EX. 224E, GC43 Mota-os coronavírus podem causar hepatite não-A,B ou C
Antigénios alvo: 81/103 EI - também chamado do proteica M ou ma a ri z E2 - também chamado de proteica S ou fípike E3 - também chamado HE ou hem.ag.iu t ina-e 11; erose gi i coproteína (não presente em todos os coronavirus} N ...... ntoleocapsideo E. i. ia Rabdovirua
Ge os;
Ve?.; Liovirus
Lissavírus: (Médico e veterinário) ra .1 va
Pt Li génio alvo: proteína G
Proteína N
Família Piov.irid.ae: (Médico) Vírus da febre hemorrágica, tais como o vírus Marburg e o Ébola
Família Paramixovírus:
Paramixovírus: (Médico e Veterinário) Vírus da papeira, vírus da doença de New Castle (patogénio importante nas galinhas) Morbilivírus: (Médico e veterinário) Sarampo, Pneumovírus de distúrbio canino: (Médico e Veterinário) Vírus sincitial respiratório Género:
Família Ortomixovírus (Médico) Vírus da gripe (Influenza)
Família Bungavírus 82/103
Pu/eari rus: {Médico) encefalite da Cai i.forni a, LA Crosse Flebovirus iKédioo; Hantavirus da Febre de Rlft: VaUey: A Furemala é um vírus oa febre hemahagin Naivírus (Ver erinár.í.a) doença ovina «aírobi Também muitos bungavírus r;éo a t. r i.bn1 aos/não determinados ia Arenavlras Famí1ia Reoviru3 Géneros: i Mé dí CC 'i LCM, vírus da febre Lassa
Reevírus: um possível patogér.io nuinanc Rotavírus: gastroenre.ri.ie aguda nas cri.anças Orbivirus: (Médico e Veterinário) Febre d.e Colora do Tick, Lebombo (huma n cs) encefalose equina,, língua a rui
Família Retrovírus Sub-família:
Oncorivirinal:(Veterinário) (Médico) vírus da leucemia felina, HTLVI e HTLV|! Lentivirinal: (Médico e
Veterinário) VIH, vírus da ímunodeficiência felina, infecções equinas, vírus da anemia
Spumavirinal
Família Papovavírus Sub-família: Sub-família:
Poliomavírus: (Médico) virus BKU e
JCU
Papillomavírus: (Médico) muitos tipos virais associados com cancros ou progressão maligna da papílloma 83/103
Ao e η ο ν 1 τ u s (Mé a :i. c o) GA Air/, ai>A ,· ϋ, b, ..... causa doença - alguns adenooíruor tais como 27 5 CciU S aí S C-lu. θίί C €aC .1 L- -Θ Fami] Ao Parvoví ras (VeterIná rio) Parnooíruo fel Ano: provoco enteríoe ... ir: 1 .1.. í ΐ pç FaruLeucopeniavi rus f olíuo Parvovirus su íoo Farniiia Kerpesvíras Sub-famíli a: a 1fane rpes vá r Ί due Géneros: SAnpJ.evvi rus (Médico) VSH ; , VSH 1 1 Gari celoviruo : (Médi co-veterinàro} Pseudo-raiva - zoslrer varicela Sub-família - betaherpesvlrídue Géneros: Citomegalovírus (Médico) HCMV Sub-família Muromega1ovi ru s - Gamaherpesviridue Géneros: Linfocriptovírus (Médico) VBE - (Burkitts linfo) Radinovírus Família Poxvírus Sub-família: Cordopoxviridue (Médico-Veterinário) Géneros: Varíola Vacini (Varíola das vacas) Parapoxvírus (Veterinário) Auipoxvírus (Veterinário) Capripoxvírus Leporipoxvírus 84/103 ub~f arnii. 1 a : E n t emop oxv 3.3:1 cii i e -3 ra .111. a H e p a d n a' .* 1. r i : 3 Vírus cia Hcpa t .11 a 3 em j. assJ. a i.ca.pac V.}. r u s α a H 3; p a t. i l e d eira 310 a e r 1.0 s d a C L Θ -l 3. a Quadro 2 C C 0 c c i g r a rr - p c a í 11 v 0 p a t cr g é a i c 0 inclui: pneumoooca 1; staíiLlooocal; e 3 í: reptococa 1 . 0 Cccoi grarc;~negat i co ρ a 10 g é m c 0 i n c i u I: rae n i. n g 0 c 0 c a 1; e gcnococal, 0 bacilo gra.m~n.egatívo entérico Patogénico inclui: enterobacteriaceae; pseudomonas, acinetobacteria e eiquenela; melioidose; salmonela; chiguelose; hemofila; cancroide; brucelose; tularemia; iersinia (pasteurela); streptobaciio moniliforme e spiriio; monocitogenes listeria; erísipelotrix rusiopatia; difteria; cólera; antrax; donovanose (inguinale granuloma); e bartonelose. As bactérias anaeróbicas patogénicas incluem: tétano; botulismo; outros clostridia; tuberculose; lepra; e outras microbactérias. As doenças spirochetal patogénicas incluem: sífilis; ptreponematose: yaws, pinta e sífilis endémica; e ieptospirose. Outras infecções causadas por causadas por 85/103 bactérias patogénícas de valor ruais elevado e fungos patcgén.i cos incluem: actin omícose; noca rriícne; cu iptococose, blastomíocse, r ist: oplasmose e cccidioidomicese; csndidiace., aspergilose, e nvncorrrtieose; sporc-r; riccae; ρ a r a α o c i d í od ouvi. c o s e, p e t r i e 1d i o s e f toruiopsose, nicetoma e cromem 1. cose; e dermatof:tose. As intenções r i c k e 11 s i a 1 i n c uera r i c ket s i a 1 o rickectsioaes. hxe ímpios xx m.l: croplasina e i nfecções X .1 rXo Xíj. J.-ci ncluem: pneumonia Xu.--.X ; ρX ti X:UX / Yen e re um 1 i n f og r 3 n u I orna; p3itacose; e infecções c.i amidiai perinatai.
Eucariotes patogénico
Protozoans patogénicos e helmintos e infecções nele incluídas: amebíase; malária;leishmaniase;tripanosomiase; toxoplasmose; carinii pneumociste; babesíose; giardíase; triquinose; filariase; chistosomiase; nematode; trematode ou flukes; e cesto de (ténia).
LISTAGEM DAS SEQUÊNCIAS (1) INFORMAÇÃO GERAL: (i) CANDIDATO: Weiner, David B.
Wang, Bin Ugen, Kenneth E. 86/103 (
ii) TÍTULO DA INVENÇ a. c :i d o r u c j. e i c o a o i iI}NÚMERO DE SEQUÊNC iv) MORADA ; Aplicação Tecido Mucoso IAS: 10 3P0NDEDICIA.:
--1.0 í r 11 x a S G D
Ay PAÍS: EDA (F) SIP {CÓDIGO POSTAL): 19103 (V) A) DESTINAI ASIO: Uoodcock WastDcrn Kíj rt.. z MackieAcz 7 Ncarris E) PUA: Ore r Liberty Fiace, ibtF IAA lr (16° andar) C) CIDADE: Fi ladéi fia. D) ESTADO: Penai 1vânia FORMA LEGÍVEL DO COMPUTADOR: (A) TIPO DE MEIO: floppy disk (B) COMPUTADOR: IBM PC compatível
(C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: WordPerfert 5.0 (vi) DADOS DE APLICAÇÃO ACTUAIS: (A) NÚMERO DE APLICAÇÃO: (B) DATA DE ARQUIVO: (C) CLASSIFICAÇÃO: (vii)DADOS DE APLICAÇÃO ANTERIORES: (A) NÚMERO DE APLICAÇÃO: US 08/357, 398 (B) DATA DE ARQUIVO: 16 Dez 1994 (C) CLASSIFICAÇÃO: (viii) INFORMAÇÃO DO ADVOGADO/AGENTE: 87/103 ÇA) ΝΟΜΈ;: Del. -uca, Mark ÍB; NUMERO DE ; REGISTRO: 33,229 (C ' REFERÊNCI A/NÚMERO DE EXTRACT IFOf EMAÇÀC) de te LECOMUNIOAÇÂO: (A) TELEFONE’: 215-268-3100 (3) HMEfcAÀ: 215-5 c 8 ~ 34 59 !2; INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: I: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 32 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 1 AGGCGTCTCG AGACAGAGGA GAGCAAGAAA TG 32 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 2: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 88/103 (A) COMPRIMENTO: 30 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: TTTCCCTCTA GATAAGCCAT CCAATCACAC 30 ÃO PAI IA ID SEQ NR: "0 * CA PAG TERÍSTICAS D) 1 SEQUÊSC T 7·, , (A/ COMPRIMENTO 0; 2."1 par '03 de 1:3 30 t 5' TIPO; áeiO o nacieíc •O (C) FI I:AMENTO: s1mp1es =' D) TOPOLOGIA: .11 Γι6αΓ •T Ç r;: 0 DE MOLfiCUO A: ADN DEI lcriçAo da se QUÊECIA: ID SEQ NR: ΓΙΑΑΟΤ TTTGATCGAT CCATTCC '/ ’ / (2) INFORMAÇÃO PAPA II) 8EQ NR: 4: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 21 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 4 GATTTGTATC GATGATCTGA C 21 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 5: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 25 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN 89/103 DESCRIÇ :ao da seçrj ÊNCIA: E TAGTAGCA AAMRAAATR ,G TTAAG MC PARA ID SEQ ME: 6: IARA Cl'ER .íSTICAS RA. C; QRRÇT IJÇ GÇ , /.'D. . COMPRIMERT 0: 25 pc (3) TIPO: ácid o nuciel (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear (íí) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 6 AATTCTTAÂC TATTTCTTTT GCTAC 25 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 7: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 40 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 7 ATTTGTCGAC TGGTTTCAGC CTGCCATGGC AGGAAGAAGC 40 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 8: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 29 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco 90/103 \ I LAMENTO: s i rnp 1 e s OPuLOGIA: Iinear . ?G CE ÍIOjCDAJLA. - A ,
ADN
' xi.DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: 1D 3EO AR: ACCACGCGIA TTCITTA.GCT CCTGACTCC 2 9 (2) C AR AC D Ei R í S ϊ I CA S DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 24 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear (i) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 9 GCTGACGGTA GCGGCCGCAC AATT 24 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 10: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 22 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ií) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 10 GTATTAAGCG GCCGCAATTG TT 22 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 11: 91/103 (i) CARACTERíSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 78 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 11 AAAAAGCT TC GCGGATCCGC GTTGCGGCCG CAACCGGTCA CCGGCGACGC GTCGGTCGAC 60 CGGTCATGGC TGGGCCCC (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 12: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 29 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear 78 (íi) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 12 CCCAAGCTTA GACATGATAA GATACATTG (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 13: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 22 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear 29 (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN 92/103 22
(xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 13 CTAGCAGCTG GATCCCAGCT TC (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 14: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 24 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 24 GGATTTCTGG GGATCCAAGC TAGT 24 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 15: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 31 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 15 TATAGGATCC GCGCAATGAA AGACCCCACC T 31 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 16: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 31 pares de base 93/103 (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(íi) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 16 ATATGGATCC GCATGAAAG ACCCCCGCTG A 31 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 17: (í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de base (B) TIFO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 17 TAAAGCGGCC GCTCCTATGG CAGGAAGACG 30 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 18: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 34 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 18 ATTACGCGTC TTATGCTTCT AGCCAGGCAC AATG 34 (2) INFORMAÇÃO PAPA ID SEQU NR: 19: 94/103 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 40 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 19 ATTACGCGTT TATTACAGAA TGGAAAACAG ATGGCAGGTG 4 0 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 20: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 32 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 20 ATTATCGCGTT ATTGCAGAAT TCTTATTATG 32 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 21: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 38 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xí) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA.: ID SEQ NR: 21 95/103 38
GAGGCTTGGA GAGGATTATA GAATACTGC AAGACTG (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 22: (I) CARACTERíSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 39 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 22 GAATCCTCTC CAAGCCTCAG CTACTGCTAT AGCTGTGGC 39 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 23: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 39 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 23 AAAAATAAAG CGGCCGCTCC TATGGCAGGA AGAGAAGCG 39 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 24: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 39 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples 96/103 (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 24: AAAAAATTAC GCGTCTTATG CTTCTAGCCA GGCACAATG 39 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 25: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 31 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 25: CCCAAGCTTG GGAATGCTCT GCCAGTGTTAC 31 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 26: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 36 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 26: GGGGGCCGGA AGGGCACAAT AAAACTGTCT GCTTAC 36 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 27: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 97/103 (Ά) COMPRIMENTO: 33 pares de base (B) TIPO: ácido nucieíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 27: CCTGATTCAG GTGAAAATAT TGTTGATGCG CTG 33 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 28: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 111 pares de base (B) TIPO: ácido nucieíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 28: AACATCAATA CAACCTATTA ATTTCCCCTC GTCAAAAATA AGGTTATCAA GTGAGAAATC 60 ACCATCAGTG ACGACTGAAT CCGGTGAGAA TGGCAAAGT TTATGCATTTC 111 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 29: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 55 pares de base (B) TIPO: ácido nucieíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN 98/103 AAAGTCGACG 55
(xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 29: CTAGCGCGGG GATCCGCGTT GCGGCCGCAA GGCGACGCGT AAAA (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 30: (I) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 55 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear TGCGGCCGCA 55
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 30: GATCTTTTTA CGCGTCGCCC GTCGACTTTT ACGCGGATCC CCGCG (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 31: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 48 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA,: ID SEQ NR: 31: ATGTCGACTG GTTTCAGCCT GCCATGGCAG GAAGAAGC (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 32: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 99/103 (A) COMPRIMENTO: 35 pares de base (B) TIPO:, ácido nucleico (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN íxi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 32: 3.5
CCCCACGACG CGTCTATTCT TTAGCTCCTG ACTCC (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 33: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 35 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xl)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 33: TTTGCGGCCG CGTAAGTGGA GAGAGATGGT GCGAG .35 (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQU NR: 34: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 21 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 34: CTGGTGGGGC TGTTGGCTCT G 2.1 100/103 (A) COMPRIMENTO: 41 pares de base (B-) TIPO: ácido aucieico (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA; linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 37; GGGGTTTTTG GGCATATGTA TGAGGGACAA TTGGAGAAGT G 41 (2) INFORMAÇÃO PARA, ID SEQ NR: 38: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 70 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 38: 60 70
AAGCTTGTGG AATTCTTAAT TTCTCTGTCC GGGGTTTTTG GGCATATGTA TGAGGGACAT TGGAGAAGTG (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 39: (I) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 29 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA; linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi)DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 39: 29 102/103
CAGTATCTGG CATGGGTAC (2) INFORMAÇÃO PARA ID SEQ NR: 40: (i) CARACTERíSTICAS DA, SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 29 pares de base (B) TIPO: ácido nucleíco (C) FILAMENTO: simples (D) TOPOLOGIA: linear
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: ID SEQ NR: 40·: CCATGCCAGA TACTGGTAC 29
Lisboa, 103/103

Claims (10)

  1. Reivindicações 1. Uma composição para um creme, um unguento, uma pomada, um duche., um clister ou um supositório para aplicação através de administração atópica de lavagem em tecido mucoso, consistindo em tecido rectal, vaginal, uretral, sublingual ou bocal, compreendendo a composição bupivacaina e uma molécula de ácido nucleíco que compreende uma sequência nucleótida com o código de uma proteína patogénica ou um peptídeo livre de partículas virais, em que a sequência de ácido nucleíco está ligada a uma sequência reguladora que controla a expressão e em que a molécula do ácido nucleíco induz imunidade mucosa contra o referido patogénio.
  2. 2. Uma composição de acordo com a reivindicação 1 em que a referida molécula de acido nucleíco compreende uma sequência nucleótida com o código de pelo menos um epitopo idêntica a um epitopo de um antigénio contra o qual se deseja uma reacção imune, sendo a referida sequência nucleótida operacionalmente ligada a uma sequência reguladora.
  3. 3. Uma composição de acordo com as reivindicações 1 e 2 em que a referida composição se encontra na forma de creme.
  4. 4. Uma composição de acordo com as reivindicações 1 e 2 em que a referida composição se encontra na forma de unguento.
  5. 5. Uma composição de acordo com as reivindicações 1 e 2 em que a referida composição se encontra na forma, de pomada.
  6. 6. Uma composição de acordo com as reivindicações 1 e 2 em que a referida composição se encontra na forma de duche.
  7. 7. Uma composição de acordo com as reivindicações 1 e 2 em que a referida composição se encontra na forma de clister. 1/2
  8. 8. Uma composição de acordo com as reivindicações 1 e 2 em que a referida composição se encontra na forma de supositório.
  9. 9. Utilização de uma composição de acordo com as reivindicações 1 a 8 na preparação de um medicamento para o tratamento de um patogénío.
  10. 10. Utilização de acordo com a reivindicação 9 em que a molécula do ácido nucleíco compreende uma sequência nucleótida com o código de uma proteína que compreende pelo menos um epítopo Idêntico a um epítopo de um antigénio contra o qual se deseja obter uma reacção imune. Lisboa, 2/2
PT95943781T 1994-12-16 1995-12-15 Aplicação de moléculas do ácido nucleico em tecido mucoso PT796104E (pt)

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