PT696456E - Combinacao de substancias induzidas por necrose com, substancias que sao activadas por necrose para a terapia selectiva de tumores e de doencas inflamatorias - Google Patents

Description

L-Cj DESCRIÇÃO "COMBINAÇÃO DE SUBSTÂNCIAS INDUZIDAS POR NECROSE COM SUBSTÂNCIAS QUE SÃO ACTIVADAS POR NECROSES PARA A TERAPIA SELECTIVA DE TUMORES E DE DOENÇAS INFLAMATÓRIAS" A invenção refere-se a uma combinação de substâncias (componente I) induzidas por necrose em tumores ou em tecidos inflamados, isto é endotélios proliferantes, com outras substâncias não tóxicas ("pró-drogas", componente II) . Os enzimas libertados pelos processos necróticos cindem então a "pró-droga" não tóxica na "droga" tóxica o que leva a uma morte massiva das células tumorais ou ao retrocesso da inflamação.

Para o tratamento de tumores sólidos avançados (metastatizados) existe hoje em dia à disposição apenas a quimioterapia. Esta forma de terapia tem nomeadamente um efeito anti-tumoral objectivável numa série de tumores sólidos, contudo, na maior partes dos casos, com graves efeitos secundários para o paciente. Desta situação insatisfatória resulta a necessidade urgente de desenvolver formas de terapia melhores e com menos efeitos secundários.

Nos últimos anos fizeram-se várias tentativas para, com base em mecanismos de reconhecimento imunológico específicos, introduzir na clínica novas e eficientes terapias. Trata-se neste caso principalmente de esquemas terapêuticos, nos quais por meio de anticorpos que são selectivos para as estruturas superficiais dos tumores, se transportam para o tecido tumoral princípios tóxicos. Nestes ensaios clínicos verificou-se que 1 macromoléculas, como por exemplo anticorpos monoclonais ou as respectivas variantes recombinantes, se ligam in vivo de modo muito selectivo às células tumorais, mas apenas numa extensão muito pequena, na maior parte dos casos não suficiente para a terapia. Estas descobertas cientificas levaram ao desenvolvimento dos chamados conceitos em vários passos, segundo os quais se acoplava um enzima a um anticorpo monoclonal selectivo para o tumor (conjugado anticorpo-enzima) que é capaz de, após uma respectiva fase de pré-localização no tumor (Io passo), cindir uma pró-droga de baixo peso molecular não tóxica injectada posteriormente (2° passo) numa droga tóxica selectiva para o tumor. Em ensaios pré-clinicos este conceito de duas fases leva a concentrações de droga no tumor mais elevadas do que na quimioterapia convencional, o que está relacionado com uma melhor eficácia no modelo xenográfico do tumor humano no ratinho pelado (Senter, P.D. et al., Bioconj. Chem. 4: 3-9, 1993) . Para além da imunogenidade esperada dos conjugados de anticorpo-enzima utilizados (anticorpo de ratinho ligado com xenogénicos, normalmente enzimas bacterianos), há que referir os seus problemas de penetração nos tumores sólidos, bem como a sua restrição a determinados tipos de tumores, em consequência da presença do antigene associado ao tumor reconhecido. Daqui resulta a necessidade de desenvolver vários conjugados de anticorpo-enzima com especificidades diferentes, para poder tratar pelo menos os tumores mais frequentes (carcinomas do tracto gastrointestinal, dos pulmões, da mama, do ovário, da próstata).

Em seguida, propõe-se então uma composição farmacêutica que, surpreendentemente não apresenta os problemas acima mencionados de imunogenidade, heterogeneidade e falta de penetração nos tumores, mas que possui as vantagens do conceito das duas fases, a melhor concentração de droga no tumor e, em consequência disso, possibilitam uma terapia de aplicação universal para tumores sólidos com poucos efeitos secundários. A composição farmacêutica é constituída por dois componentes, um componente que induz necroses selectivamente em tumores ou que é toxicamente selectivo para o endotélio proliferante (endotélio do tumor ou endotélio em processos inflamatórios) e um componente pró-droga não tóxico que através dos enzimas libertados durante os processos necróticos é transformado numa droga tóxica. 0 primeiro componente indutor de necrose pode ser um inibidor do metabolismo do tumor ou do endotélio ou uma substância especifica do endotélio do tumor. A substância específica do endotélio do tumor ou o primeiro componente indutor de necrose aplica-se por via parenteral, de preferência por via intravenosa. Liga-se, no caso do componente específico para o endotélio do tumor, selectivamente a um epítopo, que se exprime preferencialmente no endotélio proliferante dos vasos sanguíneos, sem ter que penetrar no interstício do tumor. .....>» ο ΐ r»f 1 ΐ ίτηΛΐΛ ,—<τη >"s λ w ^ λ Vk-ií·· xiiLCJ-naj-χώαναϋ aw uuiapuucuuc A±a.o 7\ y^A < mdoteliais proliferantes ou por activação de mecanismos efectores do hospedeiro citotóxicos por não internalização, o endotélio proliferante é inibido no seu crescimento ou totalmente destruído. Daqui resulta uma subnutrição de numerosas células tumorais que leva à inibição do crescimento e à morte de determinadas áreas tumorais. Podem também conseguir-se efeitos comparáveis por injecção i.v. de substâncias inibidoras do metabolismo do tumor ou do metabolismo do endotélio. Na necrose assim resultante libertam-se enzimas intracelulares, de preferência glicosidases lisosomais, que transformam depois o segundo componente, injectado de preferência por via i.v., a pró-droga não tóxica, na droga tóxica. As altas concentrações de droga assim produzidas no tumor levam então a uma morte massiva

ν 1 . f I—i \ das células do tumor, o extraordinário efeito antitumoral desta nova terapia de dois componentes, ou ao retrocesso da inflamação.

Como primeiro componente do novo sistema de dois componentes podem empregar-se várias substâncias, a seguir descritas mais detalhadamente:

Os anticorpos monoclonais descritos em a) são preferencialmente específicos para um antlgene endotellal dependente da proliferação, como por exemplo o receptor VEGF (Terman et al., 1991, Oncogene 6, 1677-1683; Ullrich e Schlesinger, 1990, Cell 61, 203-212; Millauer et al., 1993, Cell 72, 835-846; Millauer et al., 1994, Nature 367 (6463) 576-579; Kaipinen et al., 1993, J. Exp. Med 178 (6), 2077-2088; Plate et al., 1993, Câncer Res. 53, 5822-5827), os antigenes de endotélio descritos por Clarke e West (Electrophoresis, 12 (7-8), 500-508, 1991), o antigene específico de endotélio de tumor de 30,5 kDa descrito Hagemeier et al. (Int. J. Câncer 38 (4) 481-488, 1986) antigene mediado por apoptose que ocorre em células endoteliais proliferantes, como por exemplo o receptor de vitronectina (integrina ανβ3) (Brooks et al., Science, 246, 569-71, 1994;

Brooks et al., Cell 79, 1157-64, 1994), o complexo VEGF/receptor de VEGF (VEGF/FLK1, VEGF/KDR) (Abraham et al., US 52 19739;

Abraham et al., WO 91 02058A; Millauer et al., Cell 72, 835-846, 1993; Terman et al., Oncogene 6, 1677-1683, 1991; Terman et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 187, 1579-1586, 1992), o domínio f ibronectina-CH2 (Carnemolla et al., J. Cell Biol. 108, 1139- 1148, 1989; Castellani et al., Int. J. Câncer, 59, 612-618, 1994), a endoglina (Fernandez-Ruiz et al., Cytogenet. Cell

Genet. 64, 204-207, 1993; Gougos et al-, J. Biol. Chem. 265, 8361-8364, 1990), a endosialina (Garcia-Chesa e Rettich, USP 5 4 342 757) , o antigene definido como Mak na WO 94/10331, que ocorre em endotélios proliferantes, o antigene de sialoglicoproteína EAM-1 (EPA 0583 799A), a proteina FLK-2 (WO 94/01576), o antigene CMP-170 (EPA 0 585 963 Al), o antigene E9 (Wang et al., Int. J. Câncer 54, 363-370, 1993; Wang et al., J. Immunol. Methods 171, 55-64, 1994), o novo antigene de activaçâo de células endoteliais dermais de 180 kDa (Westphal et al., J. Invest. Dermatol. 100, 27-34, 1993), a proteina FLt (Shibuya et al., Oncogene 5, 519-524, 1990; DeVries et al., Science 255, 989-991, 1992), o receptor β de PDGF (Plate et al., Laboratory Investigation, 67, 529-534, 1992), o complexo de PDGF/receptor β de PDGF, o complexo de PDEGF/receptor de PDEGF (Ishikawa et al., Nature 338, 557-562, 1989), o antigene indutivel HT7 especifico do endotélio cerebral (neurotelina, basignina; gp 42, OX 47) (Seulberger et al., Annals of the New York Academy of Sciences, 633, 611-614, 1991; Seulberger et al., Neuroscience Letter 140, 93-97, 1992) . Para além dos MAk acima definidos podem também utilizar-se os Mak mencionados por Burrows e Torpe (Pharmac. Ther. 64, 155-174, 1994) . Todos os MAk mencionados em a) podem também utilizar-se para a preparação de proteínas de fusão em ligação com factores pró-coaguladores (Denekamp, Câncer Topics 6, 6-8, 1986) ou citoquinas ou quimioquinas (Mulligan, Science 260, 926-932, 1993). Em ligação com DNA-vector, que codifica para proteínas pró-inflamatórias, imunorreguladoras ou inibidoras da proliferação, podem utilizar-se principalmente os MAk descritos em a), que procedem à internalização, para "Targeting" e para a modificação do endotélio proliferante (Nabel et al., Science 249, 1285-1288, 1990). Em princípio, uma internalização, quando não é ela própria mediada pelo antigene reconhecido, pode ser provocada pela administração de um segundo anticorpo com especificidade contra o primeiro. Em vez dos MAk clássicos, obtidos a partir de hibridomas, podem utilizar-se Γ obviamente também anticorpos obtidos de bancos de genes não humanos ou humanos através de "display libraries" (Lille et al., Biotech Adv. 12, 539-555, 1994), bem como os respectivos derivados como por exemplo "Single Chain Fragment Variable Region" (scFvs), "Domain Antibodies" (dAbs), péptidos que se ligam a antigenes ou miméticos peptidicos com as especificidades acima referidas. Péptidos que se ligam a antigenes são em especial os péptidos cíclicos referidos por Brooks et al. (ver 3 loc cit) , que desencadeiam apoptose através da ligação ao receptor da vitronectina.

Os imunoconjugados descritos em b) preparam-se ligando os anticorpos específicos definidos em a) ou suas variantes com toxinas de origem xenógena (ricina A, toxina A de difteria, Pseudomonas exotoxina A; Burrows e Thorpe, PNAS 90, 8996-9000, 1993) ou de origem humana (angiogenina, RNAses; Rybak et al., PNAS 89, 3165-3169, 1992). Além disso, pode também efectuar-se uma ligação com compostos sintéticos ou naturais tóxicos, como por exemplo alquilantes, antimetabolitos, antraciclinas, vincaalcalóides, taxol, chalichimicina, etc., bem como com radioisótopos, de preferência a- ou β-emissores em forma complexada (por exemplo Y-90 DOTA: ácido 2-(p-nitrobenzil)-1,4,7,10-tetracíclododecano-N,Ν' , Ν'' , N''', N' ' ' '-tetraacético; Moi et al., J. Am. Chem. Society, 110, 6266 (1988)).

As toxinas ligantes descritas em c) tratam-se de ligandos naturais ou sintéticos, que se ligam aos receptores ou antigenes definidos em a) por meio de MAk, de preferência de variantes do "Vascular Endothelial Growth Factor" (VEGF) (Shweiki et al., 1993, J. Clin. Invest. 91, 2235-2243), ligados com as toxinas descritas em b) e substâncias tóxicas, bem como com antagonistas ou agonistas de VEGF. 6

No caso das substâncias inibidoras das células tumorais ou do metabolismo das células do endotélio (d) podem utilizar-se por exemplo ácido 5, 6-dimetil-xantenona-acético ou ácido flavono-acético (Zwi et al., Pathology 26, 161-169, 1994), zilascorb (ácido 5,6-0-benzilideno-d-L-ascórbico; Petterson et al., Brit. J. Câncer 67, 650-656, 1993) ou AGM 1470 (Antoine et al., Câncer Res. 54, 2073-2076, 1994). Outros exemplos de substâncias inibidoras do metabolismo das células tumorais são imunoconjugados ou proteínas de fusão, sendo estas construções selectivas para um antigene internalizável associado ao tumor, ligadas com um componente tóxico, de preferência um enzima inibidor do metabolismo, por exemplo Pseudomonas endotoxina (Brinkmann et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 88, 8616-8620, 1991), um composto sintético tóxico como ciclofosfamida ou um composto natural tóxico, por exemplo daunomicina. A injecção dos respectivos primeiros componentes descritos em a)-d) a um paciente provoca assim uma necrose selectiva dos tecidos, quer através da lesão directa dos tecidos do tumor (d) ou indirectamente por influenciação do endotélio proliferante (a, b, c) .

Para a análise completa do estado da técnica devem considerar-se as publicações resumidas na parte que se segue.

De acordo com a EP 0 540 859 transformam-se pró-drogas do tipo da antraciclina, por meio de complexos de anticorpo-enzima específicos do tumor, em compostos citotóxicos activos. Na WO 92/17151 reivindica-se um método para administrar substâncias farmacologicamente activas de forma paraceleular através de tecido epotelial de mamíferos. Para tal diminui-se a resistência das "tight junctions" por meio de substâncias escolhidas, que interactuam com o factor de necrose do tumor em camadas de Γ células epiteliais que exprimem o factor de necrose do tumor. Este efeito utiliza-se então para reter substâncias farmacologicamente activas pela camada epitelial. Na patente US 5 098 702 reivindica-se uma mistura de TNF e IL-2 em quantidades sinergisticas eficazes para o tratamento do cancro em mamíferos. No Chemical Abstracts, Vol. 119, N° 9, de 8 Nov. 1993, Meltron et al. referem que o TNF aumenta a incorporação de conjugado de anticorpo-carboxipeptidase G2 simultaneamente administrados em tumores. Os mesmos autores (Meltron et al.) publicam os mesmos resultados no Eur. J. Câncer, Part A, Vol. 29A, N° 8, 1993, pags. 1177-1183. Na EP 0 595 133 A descrevem-se pró-drogas com espaçadores glicosilo, bem como a respectiva preparação e utilização.

Ao mesmo tempo que e/ou após a ocorrência da necrose injectam-se pró-drogas como segundo componente, que são decompostas por enzimas libertados durante a necrose das células do tumor, por exemplo as pró-drogas descritas na EP-A 0 511 917 Al ou na EP-A 0 595 133, de preferência a pró-droga descrita por Bosslet et al. (Câncer Res. 54, 2151-2159, 1994), na Fig. 3, N-(4-β- glucoronil-3-nitrobenziloxicarbonil)-doxorrubicina (referida como "pró-droga" nos exemplos).

Em seguida descrevem-se exemplos experimentais em animais, que comprovam a superior eficácia farmacológica da nova terapia de dois componentes. Estes modelos animais constituem uma elevada predictividade para a situação clínica.

Exemplo 1: 0 modelo do ratinho idealizado por Burrows e Thorpe (Proc. Natl. Acad. Sei., USA, 90, 8996-9000, 1993) utilizou-se para comprovar 8 p-' ^ \] a extraordinária eficácia farmacodinâmica de uma imunotoxina anti-endotélio de tumor (Io componente) juntamente com a pró-droga (F 826) como 2o componente. 0 modelo do ratinho construiu-se do seguinte modo:

Uma mistura de l,4xl07 células C1300 de neuroblastoma de ratinho e 6x10® células Muy (linha de neuroblastoma de ratinho transfectada com γ-interferão de ratinho) injectou-se por via subcutânea no flanco direito de ratinhos Balb/c nu/nu. Catorze dias mais tarde, quando os tumores tinham atingido um diâmetro de 0,8-1,2 cm, distribuiram-se aleatoriamente os animais em quatro grupos de 6 animais cada. Os animais receberam ao 15° dia a imunotoxina e aos dias 17, 20 e 23 a pró-droga injectada por via i.v. A imunotoxina de endotélio de tumor injectada é constituída por um anticorpo monoclonal (MAk M 5/114), que é específico para moléculas de haplótipo d da classe II MHC de ratinho, ligado com a cadeia de ricina-A desglicosilada. As células endoteliais normais de ratinhos Balb/c nu/nu não exprimem moléculas da classe II MHC. O γ-interferão libertado localmente in vivo pelas células tumorais C1300 Muy conduz, por outro lado, no tumor a uma activação das células endoteliais que aí se encontram, ligada a uma clara expressão das moléculas da classe II MHC. Deste modo, produz-se um antigene quase específico do endotélio do tumor (exceptuando as células B de ratinho, macrofagos e algumas células epiteliais que exprimem construtivamente antigenes da classe II MHC). A injecção da imunotoxina leva consequentemente a uma ligação preferencial às células do endotélio do tumor, seguida da destruição do endotélio após internalização do conjugado. A necrose resultante da destruição 9 Γ do endotélio do tumor conduz a uma libertação intracelular de enzimas, principalmente de γ-glucoronidase, que vão activar em seguida a pró-droga administrada ao tumor.

Para confirmar esta hipótese, trataram-se os animais da experiência, repartidos em quatro grupos, como descrito na Tabela 1.

Tabela 1

Esquema de tratamento Grupo Imunotoxina Pró-droga μg/ratinho μg/ratinho 1 4 4 2 4 0 3 0 4 4 0 0

Determinou-se o crescimento do tumor medindo dois diâmetros perpendiculares sobrepostos do tumor por meio de uma craveira em cada dia da experiência. 0 volume do tumor calculou-se por meio da fórmula V = ^ ab2, em que a é o diâmetro maior e b o mais pequeno.

Os tumores do grupo experimental 4 apresentaram um crescimento progressivo. Através do tratamento triplo com pró-droga (grupo 3) ou com imunotoxina (grupo 2) obtiveram-se fortes efeitos inibidores do crescimento do tumor. Em todos os animais do grupo 1 se conseguiu uma terapia de regressão completa. Esta experiência confirma a superior eficácia da nova terapia de dois componentes com imunotoxina e pró-droga. Em lugar da imunotoxina aqui apresentada com especificidade para antigenes HLA de 10 t Γ" \1 ratinho (Burrows e Thorpe, PNAS 90, 8996-9000, 1993) podem empregar-se em pacientes os componentes descritos em a), b) e c) .

Exemplo 2:

Em duas outras experiências independentes comprovou-se a superioridade farmacodinâmica da nova terapia de dois componentes. Transplantaram-se grupos experimentais de 6 ratinhos pelados cada com o carcinoma de cólon LoVo ou com o carcinoma de mama Mx-1. Após os tumores terem atingido um diâmetro de = 5 mm aplicou-se ao dia 1-7 Zilascorb (Pettersen et al., 1993, Brit. J. Câncer, 67, 650-656; Borretzen et al., USP 4874 780, 1989) e aos dias 8, 11 e 14 a pró-droga F 826, por via i. v. O esquema de tratamento encontra-se detalhadamente descrito na Tabela 2.

Tabela 2

Esquema de tratamento MX-1 Zilascorb Pró-droga μg/ratinho pg/ratinho Grupo 1 0,4 4 2 0,4 0 3 0 4 4 0 0 LoVo Grupo 1 0, 8 4 2 0,8 0 3 0 4 4 0 0 11 r

Determinou-se o crescimento do tumor como descrito no exemplo 1 e seguiu-se durante 30 dias após a terapia. Verificaram-se os seguintes efeitos terapêuticos do tumor:

Os grupos experimentais 4, que foram tratados com soro fisiológico, apresentaram durante o período de tempo de tratamento de 38 dias um crescimento progressivo. Quando atingiram um diâmetro de tumor > 20 mm mataram-se os animais por razões éticas. Nos grupos experimentais 2 e 3 verificou-se uma inibição significativa do crescimento do tumor. Em mais do que 50% dos animais dos grupos de tratamento 1 obtiveram-se regressões dos tumores.

Estas observações mostram que a nova terapia de dois componentes com Zilascorb e pró-droga F 826, em comparação com a monoterapia com um dos componentes, tem uma eficácia superior na terapia dos tumores. Em outros modelos pré-clínicos in vivo, em que se trataram carcinomas humanos do pulmão, da mama, da próstata, do pâncreas e do estômago, puderam observar-se efeitos comparáveis aos verificados nos casos dos tumores MX-1 e LoVo. Utilizando ácido flavono-acético ou ácido 5,6-dimetil-xantenona-acético como primeiro componente obtiveram-se resultados comparáveis aos obtidos com Zilascorb. Estas experiências pré-clínicas in vivo com elevada predictividade para a situação clínica mostram que a nova terapia de dois componentes, com substâncias inibidoras das células tumorais ou do metabolismo das células do endotélio combinadas com pró-droga, se pode aplicar numa larga gama de tumores humanos de variadas origens. Em pacientes humanos, de modo análogo às experiências com animais, injectaram-se os reagentes descritos em d) como Io componente, seguido por F 826 como 2° componente. 12

1 I

Exemplo 3:

Numa outra experiência independente comprovou-se a superioridade farmacodinâmica da nova terapia de dois componentes. Transplantaram-se grupos experimentais de 6 animais cada com o carcinoma de cólon LoVo. Após os tumores Lerem aLinyido um diâmetro de » 5 mm, aplicou-se ao dia 1 a construção ScFv PE40 (Brinkmann, Proc. Natl. Acad. Sei., USA, 88, 8616-8620, 1991) em intervalos de 12 horas, num total de 4 vezes, por via i.v. A pró-droga aplicou-se aos dias 3, 6 e 9 por via i.v. O esquema de tratamento apresenta-se na Tabela 3.

Tabela 3

Esquema de tratamento ScFv PE40 Pró-droga μg/ratinho gg/ratinho Grupo 1 5 4 2 5 0 3 0 4 4 0 0

Obteve-se o seguinte resultado experimental: Em comparação com o grupo de controle 4 verificou-se no grupo de pró-droga 3 uma regressão parcial do tumor, no caso do grupo 2, de ScFv PE40, apenas uma diminuição da velocidade de crescimento do tumor. No grupo 1, da terapia de combinação, 4 dos 6 animais apresentaram uma regressão completa e 2 uma regressão parcial.

Esta experiência confirma a eficácia superior da terapia de dois componentes no caso de uma imunotoxina, dirigida contra um antigene associado ao tumor (TAA), em ligação com uma pró-droga. 13

Para a aplicação em pacientes esta experiência significa que a terapia de dois componentes com as substâncias descritas em d), ligadas à pró-droga F 826, deve apresentar uma eficácia superior na terapia de tumores.

Em resumo, há que referir que a terapia de combinação com os primeiros componentes descritos em a), b) , c) e d) e o segundo componente (pró-droga) tem um efeito terapêutico superior em comparação com a monoterapia com os componentes I ou II.

Lisboa, 26 de Abril de 2001

O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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Claims (7)

1 . i—.

REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica, contendo um ou mais ingredientes activos como componente I, que provoca necroses em tumores e em doenças inflamatórias, e contendo uma ou mais pró-drogas que são cindidas por enzimas libertados durante a necrose das células do tumor ou em doenças inflamatórias, libertação essa provocada pela necrose, como componente II, na forma de preparado de combinação para aplicação simultânea, separada ou regulada no tempo na terapia citostática ou imunorreguladora, abrangendo a aplicação simultânea também misturas dos componentes I e II.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o componente I conter pelo menos um dos compostos a) a d) abaixo descritos. a) Anticorpos monoclonais (Mak), selectivos para endotélio proliferante ou respectivas variantes humanizadas com parte Fc activante de complementos e/ou a "Antiboby-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity" mediada por ADCC, bem como variantes não citoliticas ou fragmentos; b) Imunoconjugados de substâncias como as descritas em a) , ligadas a toxinas ou produtos químicos citotóxicos; c) Toxinas ligantes específicas para endotélios proliferantes, constituídas por um ligando receptor ligado a toxinas ou produtos químicos tóxicos; d) Substâncias inibidoras de células tumorais ou do metabolismo do endotélio, que perturbam localmente pelo menos partes de populações de células tumorais. 1 I

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o componente I conter pelo menos um anticorpo monoclonal ou um ligando receptor, que seja selectivo para endotélio proliferante, de preferência especifico para o complexo VEGF/receptor de VEGF.

Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o componente I conter pelo menos um anticorpo monoclonal ou ligandos ou antagonistas contra um antigene mediador da apoptose que ocorre em células endoteliais proliferantes, de preferência a integrina ανβ3·

5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o componente I conter pelo menos um imunoconjugado citotóxico.

6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o componente I conter pelo menos uma toxina ligante.

Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por conter uma substância inibidora de células tumorais ou do metabolismos das células endoteliais.

8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por como componente II se utilizar a pró-droga N-(4-p-glucoronil-3-nitrobenziloxicarbonil)-doxorrubicina. 2

9. Utilização de um ou mais ingredientes activos que provocam necroses em tumores e em doenças inflamatórias (componente I) com um ou mais ingredientes activos que são activados pela necrose produzida (componente II), para a preparação de um medicamento para o combate a tumores ou a doenças inflamatórias.

Lisboa, 26 de Abril de 2001 o agente oficial da propriedade industrial

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