PT2773335T - Amidas de ácido oxálico como inibidores de neprilisina, sua composição farmacêutica e sua preparação - Google Patents

Amidas de ácido oxálico como inibidores de neprilisina, sua composição farmacêutica e sua preparação Download PDF

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PT2773335T
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Fenster Erik
Fleury Melissa
Gendron Roland
J Moran Edmund
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Theravance Biopharma R&D Ip Llc
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Description

DESCRIÇÃO "AMIDAS DE ÁCIDO OXÁLICO COMO INIBIDORES DE NEPRILISINA, SUA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E SUA PREPARAÇÃO"
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a novos compostos possuindo atividade de inibição de neprilisina. A invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, processos para preparar tais compostos e encontra utilidade em métodos de utilização de tais compostos para tratar doenças, tais como hipertensão, insuficiência cardíaca, hipertensão pulmonar e doença renal.
ESTADO DA TÉCNICA A neprilisina (endopeptidase neutra, EC 3.4.24.11) (NEP), é uma metalopeptidase de Zn2+ ligada à membrana endotelial, encontrada em muitos órgãos e tecidos, incluindo o cérebro, rins, pulmões, trato gastrointestinal, coração e a vasculatura periférica. A NEP degrada e inativa vários péptidos endógenos, tais como encefalinas, bradicinina em circulação, péptidos de angiotensina e péptidos natriuréticos, o último dos quais possui diversos efeitos, incluindo, por exemplo, vasodilatação e natriurese/diurese, bem como inibição de hipertrofia cardíaca e fibrose ventricular. Assim, a NEP desempenha um papel importante na homeostase da pressão sanguínea e saúde cardiovascular.
Os inibidores da NEP, tais como tiorfano, candoxatril e candoxatrilato, foram estudados como potenciais terapêuticos. 0 documento 2010/305145 divulga compostos que são inibidores da NEP. São também conhecidos compostos que inibem a NEP e enzima conversora da angiotensina-I (ACE) e incluem omapatrilato, gempatrilato e sampatrilato. Referidos como inibidores da vasopeptidase, esta última classe de compostos está descrita em Robl et al., (1999) Exp. Opin. Ther. Patents 9(12): 1665-1677.
Ksander et al., (1995) J. Med. Chem. 38:1689-1700 descreve inibidores da NEP dipeptídicos do ácido dicarboxílico da fórmula:
0 composto 21a, o qual possui um substituinte de ácido succinico, é o composto mais ativo, com um IC50 de 5 nM. Os autores observaram que "o ácido succinico no sitio P2 ' parece ser ótimo, uma vez que a extensão da cadeia de ácido carboxílico em uma (21e) e duas (21f) unidades de metileno diminuiu a atividade 18 e 65 vezes". Os autores verificaram ainda que "a diminuição do comprimento da cadeia em um metileno (21g) também mostrou uma diminuição de 18 na atividade". (página 1692, 2a coluna).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona novos compostos que se verificou possuírem atividade de inibição da enzima neprilisina (NEP) . Por conseguinte, espera-se que os compostos da invenção sejam úteis e vantajosos como agentes terapêuticos para tratar estados, tais como hipertensão e insuficiência cardíaca.
Um aspeto da invenção refere-se a um composto de fórmula I:
(I) onde: R1 é selecionado de H, -alquilo Ci-s, -alquileno Ci-3-arilo Ce-10, -alquileno Ci-3-heteroarilo C1-9, -cicloalquilo C3-7, — [ (CH2) 2O] i_3CH3, -alquileno Ci_6-OC (0) R10, -alquileno Ci_6-NR11R12, -alquileno Ci-6-C (0) R13, -alquilenomorfolinilo C0-6, -alquileno Ci-6-S02-alquilo Ci_6,
R10 é selecionado de -alquilo C1-6, -0-alquilo C1-6»· -cicloalquilo C3-7, -O-cicloalquilo C3-7, fenilo, -0-fenilo, -NRnR12, -CH (R15)-NH2, -CH (R15)-NHC (0) 0-alquilo Ci-6 e —CH (NH2) CH2C00CH3; e R11 e R12 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci_6 e benzilo; ou R11 e R12 são considerados em conjunto como -(CH2)3-6-, -C (0) - (CH2) 3-, ou - (CH2) 20 (CH2) 2-; R13 é selecionado de -0-alquilo Ci_6, -0-benzilo, e -NRnR12; e R14 é -alquilo C1-6 ou -alquileno Ci_6-arilo C6-io; R15 é H, -CH3, -CH (CH3) 2, fenilo ou benzilo; R2 é -OR21 ou -CH2OR21; e R3 é H ou -CH3; onde R21 é H, -c (0)-alquilo Ci-6, -c (0)-CH (R22)-NH2, -C (0) -CH (R22) -NHC (0) 0-alquilo C1-6, ou -P (0) (OR23) 2; R22 é H, -CH3, -CH(CH3)2, fenilo, ou benzilo; R23 é H, -alquilo Ci_6 ou fenilo; ou R2 é considerado em conjunto com R1 para formar -OCR15r16- ou -CH20-CR15r15-, e R3 é selecionado de H e -CH3, onde R15 e R16 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci-6, e -O-cicloalquilo C3-7, ou R15 e R16 são considerados em conjunto para formar =0; ou R2 é considerado em conjunto com R3 para formar -CH2-0-CH2- ou -CH2-CH2-; ou R2 e R3 são ambos -CH3; Z é selecionado de -CH- e -N-; R4 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-0-alquilo Ci-8, -alquileno Ci-3-arilo C6-io/· -alquileno Ci-3-0- arilo C6_io, -alquileno Ci^3-heteroarilo Ci_9, -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 2O] i_3CH3, -alquileno Ci_6-OC (O) R40, -alquileno Ci_6-NR41R42, -alquileno C1-6-C (O) R43, -alquilenomorfolinilo Co-6/ -alquileno Ci_ 6-S02-alquilo C1-6,
R40 é selecionado de -alquilo Ci-6, -O-alquilo Ci_6, -cicloalquilo C3_7, -O-cicloalquilo C3_7, fenilo, -O-fenilo, -NR41R42, -CH (R45)-NH2, -CH (R45)-NHC (0) O-alquilo Ci_6, e -CH (NH2) CH2COOCH3; e R41 e R42 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci_6, e benzilo; ou R41 e R42 são considerados em conjunto como -(CH2)3-6-, -C (0) - (CH2) 3-, ou - (CH2) 20 (CH2) 2-; R43 é selecionado de -O-alquilo ^_6, -0-benzilo, e -NR41R42; e R44 é -alquilo C1-6 ou -alquileno C0-6_arilo C6_i0; R45 é H, -CH3, -CH (CH3) 2, fenilo ou benzilo; a é 0 ou 1; R5 é selecionado de halo, -CH3, -CF3 e -CN; b é 0 ou um número inteiro de 1 a 3; cada R6 é independentemente selecionado de halo, -OH, -CH3, -0CH3, -CN e -CF3; onde cada grupo alquilo em R1 e R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com um ou dois grupos -alquilo Ci-6 ou ciclopropilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Outro aspeto da invenção refere-se a composições farmacêuticas compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto da invenção. Tais composições podem opcionalmente conter outros agentes terapêuticos. Por conseguinte, ainda noutro aspeto da invenção, uma composição farmacêutica compreende um composto da invenção como o primeiro agente terapêutico, um ou mais agentes terapêuticos secundários e um veículo farmaceuticamente aceitável. Outro aspeto da invenção refere-se a uma combinação de agentes ativos, compreendendo um composto da invenção e um segundo agente terapêutico. 0 composto da invenção pode ser formulado em conjunto ou separadamente do ou dos agentes adicionais. Quando formulado separadamente, um veículo farmaceuticamente aceitável pode ser incluído com o ou os agentes adicionais. Assim, ainda outro aspeto da invenção, refere-se a uma combinação de composições farmacêuticas, a combinação compreendendo: uma primeira composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção e um primeiro veículo farmaceuticamente aceitável; e uma segunda composição farmacêutica compreendendo um segundo agente terapêutico e um segundo veículo farmaceuticamente aceitável. Noutro aspeto, a invenção refere-se a um kit contendo tais composições farmacêuticas, por exemplo, onde a primeira e segunda composições farmacêuticas são composições farmacêuticas separadas.
Os compostos da invenção possuem atividade de inibição da enzima NEP e, assim, espera-se que sejam úteis como agentes terapêuticos para tratar doentes que sofrem de uma doença ou distúrbio que é tratado por inibição da enzima NEP ou por aumento dos níveis dos seus substratos peptídicos. Assim, um aspeto da invenção encontra utilidade num método de tratamento de doentes que sofrem de uma doença ou distúrbio que é tratado por inibição da enzima NEP, compreendendo a administração a um doente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Outro aspeto da invenção encontra utilidade num método de tratamento de hipertensão, insuficiência cardíaca ou doença renal, compreendendo a administração a um doente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Ainda outro aspeto da invenção encontra utilidade num método para inibir uma enzima NEP num mamífero compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade inibidora da enzima NEP de um composto da invenção.
Uma vez que os compostos da invenção possuem atividade de inibição de NEP, estes são também úteis como ferramentas de pesquisa. Por conseguinte, um aspeto da invenção encontra utilidade num método de utilização de um composto da invenção como uma ferramenta de pesquisa, o método compreendendo a condução de um ensaio biológico utilizando um composto da invenção. Os compostos da invenção também podem ser utilizados para avaliar novos compostos químicos. Assim, outro aspeto da invenção encontra utilidade num método de avaliação de um composto de teste num ensaio biológico, compreendendo: (a) conduzir um ensaio biológico com um composto de teste para proporcionar um primeiro valor de ensaio; (b) conduzir o ensaio biológico com um composto da invenção para proporcionar um segundo valor de ensaio; em que o passo (a) é conduzido antes, depois ou concorrentemente com o passo (b) ; e (c) comparar o primeiro valor de ensaio do passo (a) com o segundo valor de ensaio do passo (b). Os ensaios biológicos exemplificativos incluem um ensaio de inibição da enzima NEP. Ainda outro aspeto da invenção encontra utilidade num método de estudo de um sistema biológico ou amostra compreendendo uma enzima NEP, o método compreendendo: (a) colocar o sistema biológico ou amostra em contacto com um composto da invenção; e (b) determinar os efeitos provocados pelo composto no sistema biológico ou amostra.
Ainda outro aspeto da invenção refere-se a processos úteis para preparar compostos da invenção; são também divulgados intermediários úteis para preparar os compostos da presente invenção. Por conseguinte, outro aspeto da invenção refere-se a um processo de preparação de compostos de fórmula I, compreendendo o passo de acoplar um composto de fórmula 1 com um composto de fórmula 2:
para produzir um composto de fórmula I; onde P é H ou grupo protetor de amino selecionado de t-butoxicarbonilo, tritilo, benziloxicarbonilo, 9-fluoronilmetoxicarbonilo, formilo, trimetilsililo e t-butildimetilsililo; e onde o processo compreende ainda desproteger o composto de fórmula 1 quando P é um grupo protetor de amino; e onde R1-R6, a, b e Z são como definidos para a fórmula I. Outro aspeto da invenção refere-se a um processo de preparação de um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de fórmula I, compreendendo colocar um composto de fórmula I na forma de ácido ou base livre em contacto com uma base ou ácido farmaceuticamente aceitável. Os intermediários podem ser de fórmula 1 ou um seu sal, como aqui definido. A invenção encontra utilidade na utilização de um composto de fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento, especialmente para o fabrico de um medicamento útil para tratar hipertensão, insuficiência cardíaca ou doença renal. A invenção também encontra utilidade na utilização de um composto da invenção para inibir uma enzima NEP num mamífero; e na utilização de um composto da invenção como uma ferramenta de investigação.
Um grupo particular de compostos de fórmula I são aqueles divulgados no Pedido Provisório U.S. N2 61/554625, apresentado em 2 de novembro de 2011. Este grupo inclui compostos de fórmula I'; em que:
(Γ) onde: R1 é selecionado de H, -alquilo Ci-8, -alquileno Ci_3- arilo Cõ-io, -alquileno Ci-3-heteroarilo C1-9, -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 2O] i~3CH3, -alquileno Ci-6-OC (O) R10, -alquileno Ci-6-NR1:lR12, -alquileno C1-6-C (O) R13, -alquilenomorfolinilo C0-6, -alquileno Ci-6-S02-alquilo C1-6,
R10 é selecionado de -alquilo Ci-6, -O-alquilo Ci-6, -cicloalquilo C3-7, -O-cicloalquilo C3-7, fenilo, -O-fenilo, -NRnR12, -CH [CH (CH3) 2]-NH2, -CH [CH (CH3) 2] -NHC (O) O-alquilo Ci-6, e —CH (NH2) CH2COOCH3; e R11 e R12 sao independentemente selecionados de H, -alquilo Ci_6, e benzilo; ou R11 e R12 são considerados em conjunto como -(CH2)3-6-, -C (0) - (CH2) 3-, ou - (CH2) 20 (CH2) 2-; R13 é selecionado de -O-alquilo Ci-6, -0-benzilo, e -NRnR12; e R14 é -alquilo Ci-6 ou -alquileno C0-6_arilo C6-io; R2 é selecionado de -OH, —CH20H, -0P (0) (OH) 2, e -CH20P (0) OH, e R3 é selecionado de H e -CH3; ou R2 é considerado em conjunto com R1 para formar -OCR15i?16-ou -CH20-CR15fil6- e R3 é selecionado de H e -CH3, onde R15 e R16 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci_6, e -O-cicloalquilo C3-7, ou R15 e R15 são considerados em conjunto para formar =0; ou R2 é considerado em conjunto com R3 para formar -CH2-0-CH2- ou -CH2-CH2-; ou R2 e R3 são ambos -CH3; Z é selecionado de -CH- e -N-; R4 é selecionado de H, -alquilo Ci-8, -alquileno Ci-3-arilo C5_i0, -alquileno Ci-3-heteroarilo C1-9, -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 20] 1-3CH3, -alquileno Ci_6-0C (0) R40, -alquileno Ci-6-NR41R42, -alquileno Ci_6-C (0) R43, -alquilenomorfolinilo C0-5, -alquileno Ci-6-S02-alquilo Ci_6,
R40 é selecionado de -alquilo Ci-6, -O-alquilo Ci_6, -cicloalquilo C3-7, -O-cicloalquilo C3-7, fenilo, -O-fenilo, -NR41R42, -CH[CH (CH3) 2]-NH2, -CH [CH (CH3) 2]-NHC (0) O-alquilo Ci-e, e -CH (NH2) CH2COOCH3; e R41 e R42 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci_6, e benzilo; ou R41 e R42 são considerados em conjunto como -(CH2)3_6-, -C (0) - (CH2) 3-, ou - (CH2) 20 (CH2) 2-; R43 é selecionado de -O-alquilo Ci-6, -0-benzyl, e -NR41R42; e R44 é -alquilo Ci—6 ou -alquileno Ci-6-arilo C6_10; a é 0 ou 1; R5 é selecionado de halo, -CH3, -CF3, e -CN; b é 0 ou um número inteiro de 1 a 3; cada R6 é independentemente selecionado de halo, -OH, —CH3, —0CH3, e -CF3; e onde cada grupo alquilo em R1 e R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com um ou dois grupos -alquilo C1-6 ou ciclopropilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
DEFINIÇÕES
Quando se descrevem os compostos, composições, métodos e processos da invenção, os seguintes termos possuem os seguintes significados, a menos que indicado de outro modo. Além disso, como aqui utilizado, as formas singulares "um", "uma" e "o/a" incluem as formas plurais correspondentes, a menos que o contexto de utilização dite claramente de outro modo. Pretende-se que os termos "compreendendo", "incluindo" e "possuindo" sejam inclusivos e signifiquem que possam existir elementos adicionais que não os elementos listados. Todos os números que expressam quantidades de ingredientes, propriedades, tais como peso molecular, condições de reação e semelhantes aqui utilizados são para ser entendido como sendo modificados em todos os casos pela expressão "cerca de", a menos que indicado de outro modo. Por conseguinte, os números aqui estabelecidos são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas que se procurou serem obtidas pela presente invenção. Pelo menos, e não como uma tentativa de limitar o pedido à doutrina de equivalentes para o âmbito das reivindicações, cada número deve, pelo menos, ser entendido à luz dos algarismos significativos referidos e por aplicação de técnicas de arredondamento convencionais. 0 termo "alquilo" significa um grupo hidrocarboneto saturado monovalente, o qual pode ser linear ou ramificado. A menos que definido de outro modo, esses grupos alquilo contêm tipicamente desde 1 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -alquilo Ci_4, -alquilo Ci_5, -alquilo C2-s, -alquilo Ci-6, -alquilo Ci_8 e -alquilo Ci_i0. Os grupos alquilo representativos incluem, a titulo exemplificativo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, s-butilo, isobutilo, t-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo e n-decilo.
Quando um número especifico de átomos de carbono se destina a um termo particular aqui utilizado, o número de átomos de carbono é mostrado sucedendo o termo como subscrito. Por exemplo, o termo "-alquilo Ci-6" significa um grupo alquilo possuindo desde 1 a 6 átomos de carbono e o termo "-cicloalquilo C3-7" significa um grupo cicloalquilo possuindo desde 3 a 7 átomos de carbono, respetivamente, onde os átomos de carbono estão em qualquer configuração aceitável. 0 termo "alquileno" significa um grupo hidrocarboneto saturado divalente que pode ser linear ou ramificado. A menos que definido de outro modo, esses grupos alquileno tipicamente contêm desde 0 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -alquileno C0-i-, -alquileno C0-6-, -alquileno Ci_3- e -alquileno C1-6-. Os grupos alquileno representativos incluem, a título exemplificativo, metileno, etano-1,2-diilo ("etileno"), propani-1,2-diilo, propano-1,3-diilo, butano-1,4-diilo, pentano-1,5-diilo e semelhantes. É entendido que quando o termo alquileno inclui zero carbonos, tal como -alquileno Co-i~, esses termos pretendem incluir a ausência de átomos de carbono, ou seja, o grupo alquileno não está presente, exceto para uma ligação covalente ligando os grupos separados pelo termo alquileno. O termo "arilo" significa um hidrocarboneto aromático monovalente possuindo um único anel (i. e., fenilo) ou um ou mais anéis fundidos. Os sistemas de anel fundido incluem aqueles que são completamente insaturados (e. g., naftaleno) bem como aqueles que são parcialmente insaturados (e. g., 1,2,3,4-tetra- hidronaftaleno). A menos que definido de outro modo, tais grupos arilo contêm, tipicamente, desde 6 a 10 átomos de anel de carbono e incluem, por exemplo, -arilo C6-io· Os grupos arilo representativos incluem, a título exemplificativo, fenilo, naftalen-l-ilo e naftalen-2-ilo. O termo "cicloalquilo" significa um grupo hidrocarboneto carbocíclico saturado monovalente. A menos que definido de outro modo, tais grupos cicloalquilo contêm, tipicamente, desde 3 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, -cicloalquilo C3_5, -cicloalquilo C3-6 e -cicloalquilo C3-7 · Os grupos cicloalquilo representativos incluem, a titulo exemplificativo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo. 0 termo "halo" significa fluoro, cloro, bromo e iodo. 0 termo "heteroarilo" pretende significar um heterociclo insaturado (aromático) monovalente possuindo um anel único ou dois anéis fundidos. Os heterociclos insaturados monovalentes são também geralmente referidos como grupos "heteroarilo". A menos que definido de outro modo, os grupos heteroarilo contêm tipicamente desde 5 a 10 átomos de anel totais, dos quais 1 a 9 são átomos de carbono do anel e 1 a 4 são heteroátomos do anel e incluem, por exemplo, -heteroarilo Ci-9 e -heteroarilo C5-9. Os grupos heteroarilo representativos incluem, a titulo exemplificativo, pirrole (e. g., 3-pirrolilo e 2H-pirrol-3-ilo), imidazole (e. g., 2-imidazolilo), furano (e. g., 2-furilo e 3- furilo), tiofeno (e. g., 2-tienilo), triazole (e. g., 1,2,3-triazolilo e 1,2,4-triazolilo), pirazole (e. g., lH-pirazol-3-ilo), oxazole (e. g., 2-oxazolilo), isoxazole (e. g., 3-isoxazolilo), tiazole (e. g., 2-tiazolilo e 4- tiazolilo) e isotiazole (e. g., 3-isotiazolilo), piridina (e. g., 2-piridilo, 3-piridilo e 4-piridilo), piridilimidazole, piridiltriazole, pirazina, piridazina (e. g., 3-piridazinilo), pirimidina (e. g., 2-pirimidinilo), tetrazole, triazina (e. g., 1,3,5-triazinilo), indolilo (e. g. , lH-indol-2-ilo, lH-indol-4-ilo e lH-indol-5-ilo), benzofurano (e. g., benzofuran-5-ilo), benzotiofeno (e. g., benzo[b]tien-2-ilo e benzo[b]tien-5-ilo), benzimidazole, benzoxazole, benzotiazole, benzotriazole, quinolina (e. g., 2-quinolilo), isoquinolina, quinazolina e quinoxalina. A expressão "opcionalmente substituído" significa que o grupo em questão pode ser não substituído ou este pode ser substituído uma ou diversas vezes, tais como 1 a 3 vezes ou 1 a 5 vezes ou 1 a 8 vezes. Por exemplo, um grupo alquilo que é "opcionalmente substituído" com átomos de flúor pode ser não substituído ou este pode conter 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 átomos de fluoro. De um modo semelhante, um grupo que é "opcionalmente substituído" com um ou dois grupos -alquilo Ci-6, pode ser não substituído ou este pode conter um ou dois grupos -alquilo Ci-6·
Como aqui utilizada, a frase "possuindo a fórmula" ou "possuindo a estrutura" não pretende ser limitativa e é utilizada do mesmo modo que o termo "compreendendo" é geralmente utilizado. Por exemplo, se é representada uma estrutura, é entendido que estão abrangidas todas as formas estereoisoméricas e tautoméricas, a menos que referido de outro modo. A expressão "farmaceuticamente aceitável" refere-se a um material que não é biologicamente ou de outro modo inaceitável quando utilizado na invenção. Por exemplo, a expressão "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um material que pode ser incorporado numa composição e administrado a um doente sem provocar efeitos biológicos inaceitáveis ou interagindo de um modo inaceitável com outros componentes da composição. Esses materiais farmaceuticamente aceitáveis cumpriram tipicamente os padrões requeridos de testes toxicológicos e fabrico e incluem aqueles materiais identificados como ingredientes inativos adequados pela U.S Food and Drug administration. A expressão "sal farmaceuticamente aceitável" significa um sal preparado a partir de uma base ou um ácido, os quais são aceitáveis para administração a um doente, tal como um mamífero (por exemplo, sais possuindo segurança para mamíferos aceitável para um dado regime de dosagem). Contudo, é entendido que não é necessário que os sais abrangidos pela invenção sejam sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como sais de compostos intermediários que não são pretendidos para administração a um doente. Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser derivados de bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis e de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Além disso, quando um composto de fórmula I contém uma unidade básica, tal como um amina, piridina ou imidazole e uma unidade acídica, tal como um ácido carboxílico ou tetrazole, podem ser formados zwiteriões e estão incluídos dentro do termo "sal" como aqui utilizado. Os sais derivados de bases inorgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de amónio, cálcio, cobre, férricos, ferrosos, lítio, magnésio, manganês, manganoso, potássio, sódio e zinco. Os sais derivados de bases farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, incluindo aminas substituídas, aminas cíclicas, aminas de ocorrência natural e semelhantes, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'~dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, W-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina e trometamina. Os sais derivados de ácidos inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de ácidos bórico, carbónico, hidro-hálico (bromídrico, clorídrico, flourídrico ou hidroiódico), nítrico, fosfórico, sulfâmico e sulfúrico. Os sais derivados de ácidos orgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de ácidos hidroxilo alifáticos (por exemplo, ácidos cítrico, glucónico, glicólico, láctico, lactobiónico, málico e tartárico), ácidos monocarboxilicos alifáticos (por exemplo, ácidos acético, butirico, fórmico, propiónico e trifluoroacético), aminoácidos (por exemplo, ácidos aspártico e glutâmico), ácidos carboxilicos aromáticos (por exemplo, ácidos benzóico, p-clorobenzóico, difenilacético, gentisico, hipúrico e trifenilacético), ácidos hidroxilo aromáticos (por exemplo, ácidos o-hidroxibenzóico, p-hidroxibenzóico, l-hidroxinaftaleno-2-carboxílico e 3-hidroxinaftalen-2-carboxílico), ascórbico, ácidos dicarboxílicos (por exemplo, ácidos fumárico, maleico, oxálico e succínico), glucurónico, mandélico, múcico, nicotínico, orótico, pamóico, pantoténico, ácidos sulfónicos (por exemplo, ácidos benzenossulfónico, canforsulfónico, edisílico, etanossulfónico, isetiónico, metanossulfónico, naftalenossulfónico, naftaleno-1,5-dissulfónico, naftaleno-2,6-dissulfónico e p-toluenossulfónico) e ácido xinafóico.
Como aqui utilizado, o termo "profármaco" pretende geralmente significar um precursor inativo de um fármaco que é convertido na sua forma ativa no corpo sob estados fisiológicos, por exemplo, por processos metabólicos normais. Tais compostos podem não possuir atividade farmacológica na NEP, mas podem ser administrados oral ou parentericamente e, depois, metabolizados no corpo para formar compostos que são farmacologicamente ativos na NEP. Quando administrados oralmente, tais compostos também podem proporcionar uma melhor fração absorvida (i. e., melhores propriedades pK) para distribuição renal, em comparação com a administração oral da forma ativa. Os profármacos exemplificativos incluem ésteres, tais como ésteres de alquilo Ci_6 e ésteres de arilalquilo Ci_6. Numa forma de realização, o composto ativo possui um carboxilo livre e o profármaco é um seu derivado de éster, i. e., o profármaco é um éster, tal como -C (0) OCH2CH3. Tais profármacos de éster são depois convertidos por solvólise ou sob estados fisiológicos para ser o composto carboxilo livre. 0 termo "profármaco" também pretende incluir um precursor menos ativo de um fármaco que é convertido numa forma mais ativa no corpo. Por exemplo, determinados profármacos podem possuir atividade farmacológica em NEP, mas não necessariamente no mesmo nivel desejado; tais compostos são convertidos no corpo para uma forma possuindo o nivel desejado de atividade. 0 termo também pretende incluir determinados derivados protegidos de compostos de fórmula I os quais podem ser preparados antes de um passo de desproteção final. A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade suficiente para efetuar o tratamento, quando administrada a um doente com sua necessidade, ou seja, a quantidade de fármaco necessário para obter o efeito terapêutico desejado. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz para tratar hipertensão é uma quantidade de composto necessária para, por exemplo, reduzir, suprimir, eliminar ou prevenir os sintomas de hipertensão ou para tratar a causa subjacente de hipertensão. Numa forma de realização, uma quantidade terapeuticamente eficaz é aquela quantidade de fármaco necessária para reduzir a pressão sanguínea ou a quantidade de fármaco necessária para manter a pressão sanguínea normal. Por outro lado, a expressão "quantidade eficaz" significa uma quantidade suficiente para obter um resultado desejado, o qual pode não ser necessariamente um resultado terapêutico. Por exemplo, quando se estuda um sistema compreendendo uma enzima NEP, uma "quantidade eficaz" pode ser a quantidade necessária para inibir a enzima.
Os termos "tratar" ou "tratamento", como aqui utilizados, significam tratar ou o tratamento de uma doença ou estado clínico (tal como hipertensão) num doente, tal como um mamífero, (particularmente um humano) que inclui um ou mais dos seguintes: (a) impedir a ocorrência da doença ou estado clínico, i. e., impedir a recorrência da doença ou estado clínico ou tratamento profilático de um doente que está predisposto à doença ou estado clínico; (b) melhorar da doença ou estado clínico, i. e., eliminar ou provocar a regressão da doença ou estado clínico num doente; (c) suprimir a doença ou estado clínico, i. e., abrandar ou deter o desenvolvimento da doença ou estado clínico num doente; ou (d) aliviar os sintomas da doença ou estado clínico num doente. Por exemplo, a expressão "tratar a hipertensão" iria incluir a prevenção da ocorrência de hipertensão, melhoria da hipertensão, supressão da hipertensão e alívio dos sintomas de hipertensão (por exemplo, diminuição da pressão sanguínea). 0 termo "doente" destina-se a incluir aqueles mamíferos, tal como humanos, os quais estão em necessidade de tratamento ou prevenção da doença ou que estão atualmente a ser tratados para a prevenção da doença ou tratamento de uma doença ou estado clínico específico, bem como indivíduos de teste, nos quais os compostos da invenção estão a ser avaliados ou a ser utilizados num ensaio, por exemplo, um modelo animal.
Todos os outros termos e expressões aqui utilizados pretendem ter o seu significado convencional como entendido pelos especialistas na técnica ao qual estes pertencem.
Num aspeto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I:
ω ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Como aqui utilizado, a expressão "composto da invenção" inclui todos os compostos abrangidos pela fórmula I, tal como as espécies realizadas nas fórmulas Ia e Ib, bem como os compostos abrangidos pelas fórmulas Ila-IIk, IlIa-IIIb e IVa-IVd. Além disso, os compostos da invenção também podem conter diversos grupos básicos ou acidicos (por exemplo, grupos amino ou carboxilo) e, assim, esses compostos podem existir como uma base livre, ácido livre ou em várias formas de sal. Todas essas formas de sal farmaceuticamente aceitáveis estão incluídas dentro do âmbito da invenção. Além disso, os compostos aqui divulgados também pode existir como profármacos. Por conseguinte, os especialistas na técnica irão reconhecer que aqui a referência a um composto, por exemplo, referência a um "composto da invenção" ou um "composto de fórmula I", inclui um composto de fórmula I bem como sais farmaceuticamente aceitáveis desse composto, a menos que indicado de outro modo. Além disso, a expressão "ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e/ou profármaco" pretende incluir todas as permutações de sais farmaceuticamente aceitáveis e profármacos, tal como um sal farmaceuticamente aceitável de um profármaco. Além disso, os solvatos de compostos de fórmula I estão incluídos dentro do âmbito desta invenção.
Os compostos de fórmula I podem conter um ou mais centros quirais e, assim, estes compostos podem ser preparados e utilizados em várias formas estereoisoméricas. Por conseguinte, a invenção também se refere a misturas racémicas, estereoisómeros puros (e. g., enantiómeros e diastereoisómeros), misturas enriquecidas com estereoisómeros e semelhantes, a menos que indicado de outro modo. Quando uma estrutura química é aqui representada sem qualquer estereoquímica, é entendido que todos os possíveis estereoisómeros estão abrangidos por tal estrutura. Assim, por exemplo, as expressões "composto de fórmula I", "compostos de fórmula II" e semelhantes, pretendem incluir todos os possíveis estereoisómeros do composto. De um modo semelhante, quando é aqui mostrado ou denominado um estereoisómero particular, será entendido pelos especialistas na técnica que podem estar presentes quantidades mais pequenas de outros estereoisómeros nas composições da invenção, a menos que indicado de outro modo, desde que a utilidade da composição como um todo não seja eliminada pela presença desses outros isómeros. Os estereoisómeros individuais podem ser obtidos por numerosos métodos que são bem conhecidos na técnica, incluindo cromatografia quiral utilizando uma fase estacionária quiral ou suporte adequado ou por conversão química destes em diastereoisómeros, separando os diastereoisómeros através de meios convencionais, tais como cromatografia ou recristalização, regenerando depois o estereoisómero original.
Além disso, onde aplicável, todos os isómeros cis-trans ou E/Z (isómeros geométricos), formas tautoméricas e formas topoisoméricas dos compostos da invenção, estão incluídos dentro do âmbito da invenção, a menos que indicado de outro modo.
Mais especificamente, os compostos de fórmula I podem conter, pelo menos, dois centros quirais quando a unidade "Z" é -CH-, e podem conter, pelo menos, um centro quiral quando a unidade "Z" é -N-. Estes centros quirais são indicados pelos símbolos * e ** nas fórmulas Ia e Ib seguintes:
(Ib).
Note-se, contudo, que não existe centro quiral * quando R2 é considerado em conjunto com R3 para formar -CH2-0-CH2- ou -CH2-CH2-, ou R2 e R3 são ambos -CH3.
Num estereoisómero do composto de fórmula Ia, ambos os átomos de carbono identificados pelos símbolos * e ** possuem a configuração (R) . Nesta forma de realização, os compostos possuem a configuração (R, R) nos átomos de carbono * e ** ou são enriquecidos numa forma estereoisomérica possuindo a configuração {R, R) nestes átomos de carbono. Noutro estereoisómero do composto de fórmula Ia, ambos os átomos de carbono identificados pelos símbolos * e ** possuem a configuração (S). Nesta forma de realização, os compostos possuem a configuração (S,S) nos átomos de carbono * e ** são enriquecidos numa forma estereoisomérica possuindo a configuração (S,S) nestes átomos de carbono. Ainda noutro estereoisómero do composto de fórmula Ia, o átomo de carbono identificado pelo símbolo * possui a configuração (S) e o átomo de carbono identificado pelo símbolo ** possui a configuração (R). Nesta forma de realização, os compostos possuem a configuração (S,R) nos átomos de carbono * e ** ou são enriquecidos numa forma estereoisomérica possuindo a configuração (S,R) nestes átomos de carbono. Ainda noutro estereoisómero do composto de fórmula Ia o átomo de carbono identificado pelo símbolo * possui a configuração (R) e o átomo de carbono identificado pelo símbolo ** possui a configuração (S) . Nesta forma de realização, os compostos possuem a configuração (R,S) nos átomos de carbono * e ** ou são enriquecidos numa forma estereoisomérica possuindo a configuração (R,S) nestes átomos de carbono.
Num estereoisómero do composto de fórmula Ib, o átomo de carbono identificado pelo símbolo * possui a configuração (R) . Nesta forma de realização, os compostos possuem a configuração (R) no átomo de carbono * ou são enriquecidos numa forma estereoisomérica possuindo a configuração (R) neste átomo de carbono. Noutro estereoisómero do composto de fórmula Ib, o átomo de carbono identificado pelo símbolo * possui a configuração (S) . Nesta forma de realização, os compostos possuem a configuração (S) configuração no átomo de carbono * ou são enriquecidos numa forma estereoisomérica possuindo a configuração (S) neste átomo de carbono.
Estas várias formas de realização podem ser mostradas como a fórmula Ia-1:
la-l), fórmula la-2: fórmula Ia-3: fórmula Ia-4:
fórmula Ib-1: e fórmula Ib-2:
(Continuação)
(Continuação)
Em algumas formas de realização, de modo a otimizar a atividade terapêutica dos compostos da invenção, e. g., para tratar a hipertensão, pode ser desejado que os átomos de carbono identificados pelos símbolos * e ** possuam uma configuração particular ou sejam enriquecidos numa forma estereoisomérica possuindo tal configuração. Assim, em determinados aspetos, esta invenção refere-se a cada enantiómero individual ou a uma mistura enriquecida com enantiómeros de enantiómeros compreendendo predominantemente um enantiómero ou o outro enantiómero. Noutras formas de realização, os compostos da invenção estão presentes como misturas racémicas de enantiómeros.
Os compostos da invenção, bem como aqueles compostos utilizados na sua síntese, também podem incluir compostos marcados isotopicamente, ou seja, onde um ou mais átomos foram enriquecidos com átomos possuindo uma massa atómica diferente da massa atómica predominantemente verificada na natureza. Os exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos de fórmula I, por exemplo, incluem, mas não estão limitados a 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 180, 170, 35S, 36C1 e 18F. De particular interesse são os compostos de fórmula I enriquecidos em trítio ou carbono-14, os quais podem ser utilizados, por exemplo, em estudos de distribuição de tecido; compostos de fórmula I enriquecidos em deutério especialmente num local de metabolismo resultando, por exemplo, em compostos possuindo uma maior estabilidade metabólica; e compostos de fórmula I enriquecidos num isótopo emissor de positrão, tais como nC, 18F, 150 e 13N, os quais podem ser utilizados, por exemplo, em estudos de Topografia por Emissão de Positrão (PET). A nomenclatura aqui utilizada para nomear os compostos da invenção é ilustrada nos Exemplos aqui. Esta nomenclatura foi derivada utilizando o software AutoNom disponível comercialmente (MDL, San Leandro, Califórnia).
FORMAS DE REALIZAÇÃO REPRESENTATIVAS
Os substituintes e valores seguintes são pretendidos para proporcionar exemplos representativos de vários aspetos e formas de realização da invenção. Estes valores representativos são pretendidos para definir e ilustrar adicionalmente tais aspetos e formas de realização e não pretendem excluir outras formas de realização ou limitar o âmbito da invenção. A este respeito, a representação de que um valor ou substituinte particular é preferido, não pretende, de qualquer modo, excluir da invenção outros valores ou substituintes da invenção, a qual é definida apenas pelas reivindicações anexas.
Num aspeto, esta invenção refere-se a compostos de fórmula I:
l·
O A unidade R1 é selecionada de: H; -alquilo Ci-s, e. g. , -CH3, -CH2CH3, -(CH2)2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH3, —C (CH3) 3, -(CH2)3CH3, -(CH2)4CH3, - (CH2) 2CH (CH3) 2, — (CH2) 5CH3 e -(CH2)6CH3; -alquileno Ci-3-arilo Cõ-io, e. g., benzilo; alquileno Ci_3-heteroarilo C1-9, e. g., -CH2-piridinilo e - (CH2) 2-piridinilo; -cicloalquilo C3-7, e. g., ciclopentilo; - [ (CH2) 20] 1-3CH3, e. g., - (CH2) 2OCH3 e - [ (CH2) 20] 2CH3; -alquileno C^-OC (0) R10, e. g., -CH20C (0) CH3, -CH20C (0) CH2CH3, -CH20C(0) (CH2)2CH3, -CH2CH(CH3)0C(0)CH2CH3, -CH20C(0)0CH3, -CH2OC (0) OCH2CH3, -CH (CH3) OC (0) OCH2CH3, -CH (CH3) OC (0) O-CH (CH3) 2, -CH2CH (CH3) OC (0) -ciclopentilo, -CH2OC (0) O-ciclopropilo, -CH (CH3) -OC (0)-O-ciclo-hexilo, -CH2OC (0)O-ciclopentilo, -CH2CH (CH3)OC (0)-fenilo, -CH2OC (0) O-fenilo, -CH2OC (0)-CH [CH (CH3) 2]-NH2, -CH2OC(0)-CH [CH (CH3) 2]-NHC (0) OCH3 e -CH (CH3) OC (0)-CH (NH2) CH2COOCH3; -alquileno C1-6-NR11R12, e. g. , - (CH2) 2-N (CH3) 2,
-alquileno Ci-6-C (0) R13, e. g. , -CH2C (0) OCH3, -CH2C (0) O-benzilo, -CH2C (0) -N (CH3) 2 e
-alquilenomorfolinilo Co-6/· e. g. , - (CH2) 2-morfolinilo e -(CH2)3- morfolinilo:
-alquileno Ci-6-S02-alquilo Ci-6, e. g. , - (CH2) 2s02CH3;
A unidade R10 é selecionada de: -alquilo Ci-6, e. g. , -CH3 e -CH2CH3; -O-alquilo C^g, e. g., -OCH3, -0-CH2CH3 e -0-CH(CH3)2; -cicloalquilo C3_7, e. g. , ciclopentilo) ; -O-cicloalquilo C3-7, e. g.r -O-ciclopropilo, -O-ciclo-hexilo e - O-ciclopentilo; fenilo; -O-fenilo; -NR11R12; -CH (R15)-NH2, e. g.f -CH[CH(CH3)2]-NH2; -CH (R15)-NHC (0) ο-alquilo 02-6, e. g., -CH [CH (CH3) 2]-NHC (0) OCH3; e -CH (NH2) CH2COOCH3 .
As unidades R11 e R12 são selecionadas independentemente de H, -alquilo Ci-6 (e. g. , CH3) e benzilo. Alternativamente, as unidades R12 e R13 podem ser consideradas em conjunto como — (CH2) 3-6—, —C (0) — (CH2) 3— ou - (CH2) 20 (CH2) 2-, por exemplo, para formar um grupo, tal como:
A unidade R13 é selecionada de -O-alquilo Ci-6, e. g. , -OCH3, -O-benzilo e -NR41R12, e. g., -N(CH3)2, e
A unidade R14 é -alquilo Ci_6 (e. g. , -CH3 e -C(CH3)3) ou -alquileno C0-6-arilo C6-io· A unidade R15 é H, -CH3, -CH(CH3)2, fenilo ou benzilo.
Além disso, cada grupo alquilo em R1 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro. Por exemplo, quando R1 é -alquilo Ci-8, R1 pode também ser um grupo, tais como -CH2CF3, -CH(CH3)CF3, -(CH2)2CF3, -ch2cf2ch3, -ch2cf2cf3, -CH(CF3)2, -CH(CH2F)2, -C(CF3)2CH3 e -CH (CH3) cf2cf3.
Numa forma de realização, R1 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci-6-OC (0) R10 e
onde R10 é -alquilo Ci-6, -O-alquilo Ci-6, ou -CH [R15] -NHC (0) 0-alquilo Ci_6; R14 é -alquilo Ci_6; R15 é -CH(CH3)2; e cada grupo alquilo em R1 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro. Numa forma de realização específica, R1 é selecionado de H, -CH2CH3, -CH (CH3) 2r -ch2ch (CH3) 2r - (CH2) 3ch3, - (CH2) 6ch3,-ch2cf3, -(CH2)2CF3, -CH2CF2CH3, -CH2CF2CF3, -CH2OC (0) CH3, -CH20C (0) ch2ch3, -CH20C(0) (CH2)2CH3, -CH20C(0)0CH2CH3, -CH20C (0) -CH [CH (CH3) 2] - NHC(0)0-CH3, e
onde R14 é -CH3. Noutras formas de realização, estes compostos possuem as formulas ila-IId, Ili-IIk, Illa-Illb e IVa-IVd.
Numa forma de realização, R1 é H. Noutras formas de realização, estes compostos possuem as formulas Ila-IId,
Ili-IIk, Illa-Illb e IVa-IVd.
Noutra forma de realização, R1 é selecionado de -alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-arilo C6-i0f -alquileno Ci_3-heteroarilo C1-9, -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 20] 1-3CH3, -alquileno C1-6-OC (0) R10, -alquileno Ci-6_NR11R12, -alquileno Ci^6~C (0) R13, -alquilenomorfolinilo Co-6, -alquileno Ci-6-S02-alquilo C1-6,
Noutras formas de realização, estes compostos possuem as fórmulas Ila-IId, Ili-IIk, Illa-Illb, e IVa-IVd. Estes compostos podem encontrar particular utilidade como profármacos ou como intermediários nos procedimentos sintéticos aqui descritos. Os exemplos específicos de tais unidades de profármaco incluem onde R1 é -alquileno C1_6-OC (0) R10, tal como -CH (CH3) OC (0) -0-ciclo-hexilo:
tornando o composto um éster de cilexetilo; ou R1 é -alquilenomorf olinila C0-6r tal como - (CH2) 2-morf olina :
tornando o composto um éster de 2-morfolinoetilo ou mofetilo; ou
tal como -0-CH2-5-metil-[1,3]dioxol-2-ona:
tornando o composto um éster de medoxomilo.
Numa forma de realização, R2 é -OR21 ou -CH2OR21, e R3 é H ou -CH3. Estas formas de realização podem ser representadas como fórmulas Ila-IId:
A unidade R21 é H, -C (0)-alquilo Ci_6, -C (0) -CH (R22) -NH2, -C (0)-CH (R22)-NHC (0) 0-alquilo Ci_6, ou -P (0) (OR23)2; e numa forma de realização particular, a unidade R21 é Η. A unidade R22 é H, -CH3, -CH (CH3) 2, fenilo ou benzilo. A unidade R23 é H, -alquilo C1-6 ou fenilo.
Numa forma de realização, os compostos da invenção possuem a fórmula lia e, numa forma de realização exemplificativa, R1 é selecionado de H, -alquilo Ci-s, -alquileno C1-6-OC (0) R10, e
5 onde R10 é -alquilo Ci-6, -O-alquilo Ci_6, ou -CH [R15] -NHC (0) 0-alquilo Ci-6; R14 é -alquilo Ci-6; R15 é -CH(CH3)2; e cada grupo alquilo em R1 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; Z é selecionado de -CH- e -N-; R4 é selecionado de H, -alquilo Ci-8, -alquileno Ci-3-0-alquilo Ci_8, -alquileno C1-3-O-arilo C6-10, - [ (CH2) 20] i-3CH3, e
onde R44 é -alquilo Ci-6; e cada grupo alquilo em R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; a é 0 e b é 0; ou a é 0, b é 1, e R6 é halo; ou a é 0, b é 2, e um R6 é halo e o outro R6 é halo ou -CH3; ou a é 1, R5 é halo, e b é 0; ou a é 1, R5 é halo, b é 1, e R6 é halo; ou a é 1, R5 é halo, b é 2, e cada R6 é halo; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com dois grupos -CH3; e noutra forma de realização exemplif icat iva, R1 é selecionado de H, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -ch2ch (CH3) 2, - (CH2) 3ch3, - (CH2) 6ch3,-ch2cf3, -(CH2)2CF3, -ch2cf2ch3, -ch2cf2cf3, -CH2OC (O) ch3, -CH2OC (O) ch2ch3, -CH20C(0) (CH2)2CH3, -ch2oc (O) och2ch3, -CH2OC (O)-CH [CH (CH3) 2]-NHC(0)0-CH3, e
onde R14 é -CH3; R4 é selecionado de H, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH (CH3) 2, -(CH2)3CH3, -C (CH3) 3, - (CH2) 2cf3, -ch2cf2ch3, - (CH2) 3-0-CH2CH3, - (CH2) 2-0-fenilo, -(CH2)2OCH3, e
onde R44 é -CH3; eaéOebéO; ou a é 0, b é 1, eR6é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro; ou a é 0, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro ou 2'-metilo, 5'-cloro ou 2',5'-dicloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, e b é 0; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 1, e R6 é 3'-cloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro.
Numa forma de realização, os compostos da invenção possuem a fórmula Ilb e, numa forma de realização exemplificativa, H ou -alquilo Ci_8; Z é -N-; R4 é H ou -alquilo Ci_8; e a e b são 0; e, noutra forma de realização exemplificativa, R1 e R4 são H.
Numa forma de realização, os compostos da invenção possuem a fórmula IIc e, numa forma de realização exemplificativa, R1 é H ou -alquilo Ci_8; Z é -CH-; R4 é H ou -alquilo Ci-8; a é 0 ou a é 1 e R5 é halo; bé0oubélou2eR5é halo; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com dois grupos -CH3; e, noutra forma de realização exemplificativa, R1 é H, -CH2CH3, ou -(CH2)3CH3; R4 é H; a é 0 ou a é 1 e R5 é 3-cloro; b é 0 ou b é 1 e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro.
Numa forma de realização, os compostos da invenção possuem a fórmula Ild e, numa forma de realização exemplificativa, R1 é H ou -alquilo Ci_8; Z é -CH-; R4 é H ou -alquilo Ci_8; a é 0; e b é 0, ou b é 1 e R5 é halo; e, noutra forma de realização exemplificativa, R1 é H ou -CH2CH3; R4 é H ou -CH2CH (CH3) 2; e b é 0, ou b é 1 e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro.
Noutra forma de realização, R2 é considerado em conjunto com R1 para formar -OCR15r16- ou -CH20-CR15r16-, e R3 é selecionado de H e -CH3. As unidades R15 e R16 são independentemente selecionadas de H, -alquilo Ci_6, e -O-cicloalquilo C3_7, ou R15 e R16 são considerados em conjunto para formar =0. Estes podem ser representados como as fórmulas Ile-IIh:
Estes compostos podem encontrar particular utilidade como profármacos ou como intermediários nos procedimentos sintéticos aqui descritos. Os compostos onde R2 é -CH2OP (O) (OH)2 também podem encontrar utilidade como profármacos. Numa forma de realizaçao dos compostos das fórmulas lie, Ilf, Ilg, e Ilh, Z é -CH-, R4 é H, a é 0, b é 1, R6 é 3'C1, e R15 e R16 são H.
Noutra forma de realização, R2 é considerado em conjunto com R3 para formar -CH2-0-CH2- ou -CH2-CH2-, os quais podem ser representados como as fórmulas Ili e Ilj, respetivamente:
Noutra forma de realização, R2 e R3 são ambos -CH3, o qual pode ser representado como a fórmula Ilk:
Numa forma de realização dos compostos das fórmulas Ili, Ilj e Ilk, R1 é H, Zé -CH-, R4 é -alquilo Ci-8 (e. g. , -CH2CH (CH3) 2) , aéO, bél, e R6 é 3'C1. O grupo Z é selecionado de -CH- e -N-. Estas formas de realização podem ser representadas como as fórmulas Ilia e Illb:
A unidade R4 é selecionada de: H; -alquilo Ci-s, e. g., -CH3, -CH2CH3, -(CH2)2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, CH2CH(CH3)2, -(CH2)3CH3, -(CH2)4CH3, - (CH2) 2CH (CH3) 2, - (CH2) 5CH3 e - (CH2) 6CH3; -alquileno Ci-3-0-alquilo Ci-8, e. g. , - (CH2) 3-0-CH2CH3; -alquileno Ci_3-arilo C5_i0, e. g., benzilo; -alquileno Ci-3-0-arilo C5-i0, e. g.r - (CH2) 2-0-fenilo; -alquileno Ci-3-heteroarilo C1-9, e. g., -CH2-piridinilo e - (CH2) 2-piridinilo; -cicloalquilo C3-7, e. g., ciclopentilo; - [ (CH2) 20] i-3CH3, e. g.f -(CH2)2OCH3 e - [ (CH2) 20] 2CH3; -alquileno Ci-6-OC (0) R40, e. g., -CH20C (0) CH3, -CH20C (0) CH2CH3, -CH20C(0) (CH2)2CH3, -ch2ch (CH3) OC (0) ch2ch3, -CH20C (0) 0CH3, -CH20C (0) 0CH2CH3, -CH (CH3) OC (0) 0CH2CH3, -CH (CH3) OC (0) O-CH (CH3) 2, -CH2CH (CH3) OC (0) -ciclopentilo, -CH2OC (0) O-ciclopropilo, -CH (CH3) -OC(0) -O-ciclo-hexilo, -CH2OC(0)O-ciclopentilo, -CH2CH (CH3) OC(0)-fenilo, -CH2OC (0) O-fenilo, -CH2OC (0)-CH [CH (CH3) 2]-NH2, -CH20C(0)- CH [CH (CH3) 2]-NHC (0) OCH3, e -CH (CH3) OC (0) -CH (NH2) CH2COOCH3; -alquileno Ci-6-NR41R42, e. g., - (CH2) 2-N (CH3) 2,
-alquileno Ci-6-C (0) R43, e. g. , -CH2C (0) 0CH3, -CH2C (0) 0-benzilo, -CH2C (0)-N (CH3)2, e
-alquilenomorfolina Co-6/· e. g., - (CH2) 2-morfolina e —CH2) 3-morf olina :
-alquileno Ci-6-S02-alquilo Ci-6, e. g. , - (CH2) 2s02CH3;
A unidade R40 é selecionada de: -alquilo Ci-6, e. g. , -CH3 e -CH2CH3; -O-alquilo Ci-6, e. g. , -OCH3, -0-CH2CH3 e -0-CH(CH3)2; -cicloalquilo C3_7, e. g. , ciclopentilo; -O-cicloalquilo C3_7, e. g.r -O-ciclopropilo, -O-ciclo-hexilo e -0-ciclopentilo; fenilo; -0-fenilo; -NR41R42; -CH (R45)-NH2, e. g., -CH [CH (CH3) 2] -NH2; -CH (R45)-NHC (0) ο-alquilo Ci_5, e. g., -CH [CH (CH3) 2]-NHC (0) OCH3; e -CH (NH2) CH2COOCH3 .
As unidades R41 e R42 são selecionadas independentemente de H, -alquilo C2-6 (e. g. , CH3) e benzilo. Alternativamente, as unidades R41 e R42 podem ser consideradas em conjunto como - (CH2) 3-6-, —C (0) — (CH2) 3— ou - (CH2) 20 (CH2) 2-, por exemplo, para formar um grupo, tal como:
A unidade R43 é selecionada de -O-alquilo Ci-6, e. g. , -0CH3, -0-benzilo e -NR41R42, e. g. , -N(CH3)2, e
A unidade R44 é -alquilo Ci_6 (e. g., -CH3 e -C(CH3)3) ou -alquileno C0-6~arilo C6-io· A unidade R45 é H, -CH3, -CH(CH3)2, fenilo, ou benzilo.
Além disso, cada grupo alquilo em R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro. Por exemplo, quando R4 é -alquilo Ci-s, R4 também pode ser um grupo, tais como -CH2CF3, -CH(CH3)CF3, - (CH2) 2cf3, -ch2cf2ch3, -CH2CF2CF3, -CH(CF3)2, -CH(CH2F)2, -c (CF3) 2CH3, e -CH (CH3) cf2cf3.
Numa forma de realização, R4 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-0-alquilo Ci_8/· -alquileno Ci_3-0-arilo C6-10r - [ (CH2) 20] i_3CH3, e
onde R44 é -alquilo Ci_6; e cada grupo alquilo em R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro. Numa forma de realização específica, R4 é selecionado de H, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH (CH3) 2, -(CH2)3CH3, -C(CH3)3, - (CH2) 2cf3, -ch2cf2ch3, - (CH2) 3-0-CH2CH3, - (CH2) 2-0-fenilo, -(CH2)2OCH3, e
onde R44 é -CH3. Noutras formas de realização, estes compostos possuem as fórmulas Ila-IIk, IlIa-IIIb, e IVa-IVd.
Numa forma de realização, R1 é H. Noutras formas de realização estes compostos possuem as fórmulas Ila-IIk, Illa-Illb, e IVa-IVd. Ainda noutra forma de realização, ambos os R1 e R4 são H. Noutras formas de realização, estes compostos possuem as fórmulas Ila-IIh, Ilm-IIo, IlIa-IIIb e IVa-IVd.
Noutra forma de realização, R4 é selecionado de -alquilo Ci-s, -alquileno Ci_3-0-alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-arilo C6-ior -alquileno Ci-3-0-arilo Cõ-ior -alquileno Ci-3-heteroariloCi-9f -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 2O] i-3CH3, -alquileno C1-6-OC (0) R40, -alquileno Ci_6-NR41R42, -alquileno Ci-6_C (0) R43, -alquilenomorfolinilo C0-6, -alquileno Ci-6-S02-alquilo C3-6,
Noutras formas de realização, estes compostos possuem as fórmulas Ila-IIk, IlIa-IIIb, e IVa-IVd. Estes compostos podem encontrar particular utilidade como profármacos ou como intermediários nos procedimentos sintéticos aqui descritos. Numa forma de realização, ambos os R1 e R4 são tais unidades de profármaco. Noutra forma de realização, um de R1 e R4 é uma unidade de profármaco e o outro é H. Os exemplos específicos de tais unidades de profármaco incluem onde R4 é -alquileno Ci-6-0C(0)R10, tal como -CH (CH3) OC (0)-O-ciclo-hexilo :
tornando o composto um éster de cilexetilo; ou R4 é -alquilenomorf olina C0-6, tal como - (CH2) 2_morf olina :
tornando o composto um éster de 2-morfolinoetilo ou mofetilo; ou
tal como -CH2-5-metil-[1,3]dioxol-2-ona:
tornando o composto um éster de medoxomilo. A numeração para os grupos R5 e R6 é como se segue:
0 número inteiro "a" é 0 ou 1. A unidade R5, quando presente, é selecionada de halo, -CH3, -CF3, e -CN. Numa forma de realização, a é 0. Noutra forma de realização, a é 1 e R5 é halo, tais como 3-cloro ou 3-fluoro. Ainda noutra forma de realização a é 0, ou a é 1 e R5 é halo. Noutras formas de realização estes compostos possuem as fórmulas Ila-IIk, IlIa-IIIb, e IVa-IVd. O número inteiro "b" é 0 ou um número inteiro desde 1 a 3. A unidade R6, quando presente, é independentemente selecionada de halo, -OH, -CH3, -OCH3 e -CF3. Numa forma de realização, b é 0. Noutra forma de realização, b é 1 e R6 é selecionado de Cl, F, -OH, —CH3, —OCH3, e -CF 3, tais como 2'-cloro, 3'-cloro, 2' fluoro, 3'-fluoro, 2'-hidroxilo, 3'-hidroxilo, 3'-metilo, 2'-metoxilo, 3'-ciano ou 3'-trifluorometilo. Noutra forma de realização, b é 1 e R6 é halo, -CH3 ou -OCH3, tais como 3'-cloro, 3'-metilo ou 2'-metoxilo. Noutra forma de realização, b é 2 e R6 é 2'-fluoro-5'-cloro, 2',5'-dicloro, 2',5'-difluoro, 2'-metil-5'-cloro, 3'-fluoro-5'-cloro, 3 ' -hidroxi-5'-cloro, 3',5'-dicloro, 3',5'-diflúor, 2 ' -metoxi-5'-cloro, 2'-metoxi-5'-fluoro, 2'-hidroxi-5'-fluoro, 2'-fluoro-3'-cloro, 2'-hidroxi-5'-cloro ou 2'-hidroxi-3'-cloro. Noutra forma de realização, b é 3 e cada R6 é independentemente halo ou -CH3, tais como 2'-metilo-3', 5'-dicloro ou 2'-fluoro-3'-metil-5'-cloro. Numa forma de realização particular, b é 0, ou b é 1 e R6 é halo, ou b é 2 e cada R6 é independentemente selecionado de halo e -CH3. Noutras formas de realização estes compostos possuem as fórmulas Ila-IIk, iiia-nib e IVa-IVd.
Noutras formas de realização exemplificativas, a é 0 e b é 0; ou a é 0, b é 1, e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro; ou a é 0, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro ou 2'-metilo, 5'-cloro ou 2',5'-dicloro; a é 1, R5 é 3-cloro, e b é 0; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 1, e R6 é 3'-cloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro. Noutras formas de realização estes compostos possuem as fórmulas Ila-IIk, IlIa-IIIb e IVa-IVd. De particular interesse são os compostos das fórmulas:
0 ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com um ou dois grupos -alquilo Ci-6 ou ciclopropilo. Por exemplo, numa forma de realização, o ligante metileno no bifenilo é não substituído; noutra forma de realização, o ligante metileno no bifenilo é substituído com um grupo -alquilo Ci-6 (e. g., -CH3) ; e ainda noutra forma de realização, o ligante metileno no bifenilo é substituído com dois grupos -alquilo Ci_6 (e. g., dois grupos -CH3) ; noutra forma de realização, o ligante metileno no bifenilo é substituído com um grupo ciclopropilo. Estas formas de realização são representadas, respetivamente, como as fórmulas IVa-IVd:
Numa forma de realização dos compostos das fórmulas IVa, IVb, IVc, e IVd, R1 é H, R2 é -OR21 e R21 é H, R3 é Η, Z é -CH-, R4 é -alquilo Ci_8 (e. g. , -CH2CH (CH3) 2) , a é 0, b é 1, e R6 é 3'C1.
Noutra forma de realização, R1 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci-6-OC (O) R10, e
onde R10 é -alquilo Ci_6, -O-alquilo Ci_6, ou -CH [R15] -NHC (O) 0-alquilo Ci_6; R14 é -alquilo Ci_6; R15 é -CH(CH3)2; e cada grupo alquilo em R1 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; R4 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-0-alquilo C2-s, -alquileno Ci-3-0-arilo C6-io, - [ (CH2) 20] i-3CH3, e
onde R44 é -alquilo Ci_6; e cada grupo alquilo em R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; a é 0 e b é 0; ou a é 0, b é 1, e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro; ou a é 0, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro ou 2'-metilo, 5'-cloro ou 2',5'-dicloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, e b é 0; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 1, e R6 é 3'-cloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com dois grupos -CH3. Numa forma de realização particular destes compostos, R2 é -OR21 ou -CH2OR21; e R3 é H ou -CH3; onde R21 é H.
Além disso, os compostos de fórmula I particulares que são de interesse incluem aqueles apresentados nos Exemplos abaixo, bem como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
PROCEDIMENTOS SINTÉTICOS GERAIS
Os compostos da invenção podem ser preparados a partir de materiais de partida facilmente disponíveis, utilizando os métodos gerais seguintes, os procedimentos apresentados nos Exemplos ou utilizando outros métodos, reagentes e materiais de partida que são conhecidos pelos especialistas na técnica. Embora os seguintes procedimentos possam ilustrar uma forma de realização particular da invenção, é entendido que outras formas de realização da invenção podem ser preparadas, de um modo semelhante, utilizando os mesmos métodos ou semelhantes ou utilizando outros métodos, reagentes e materiais de partida conhecidos pelos especialistas na técnica. Será também entendido que onde sejam dadas condições de processo típicas ou preferidas (por exemplo, temperaturas de reação, tempos, razões molares de reagentes, solventes, pressões, etc.), também podem ser utilizadas outras condições de processo, a menos que indicado de outro modo. Em alguns casos, as reações foram conduzidas à temperatura ambiente e não foi medida a temperatura real. É entendido que a temperatura ambiente pode ser considerada como significando uma temperatura dentro da gama associada geralmente à temperatura ambiente num ambiente laboratorial e será, tipicamente, na gama de cerca de 18 2C a cerca de 30 2C. Noutros casos, as reações foram conduzidas à temperatura ambiente e a temperatura foi de facto medida e registada. Enquanto as condições de reação ótimas irão, tipicamente, variar dependendo dos vários parâmetros de reação, tais como reagentes, solventes e quantidades particulares utilizados, os especialistas na técnica podem facilmente determinar as condições de reação adequadas utilizando procedimentos de otimização convencionais.
Além disso, como será evidente para os especialistas na técnica, podem ser necessários ou desejados grupos protetores convencionais para impedir determinados grupos funcionais de sofrerem reações indesejadas. A escolha de um grupo protetor adequado para um grupo funcional particular, bem como condições e reagentes adequados para a proteção e desproteção desses grupos funcionais são bem conhecidos na técnica. Podem ser utilizados, se desejado, grupos protetores que não os ilustrados nos procedimentos aqui descritos. Por exemplo, são descritos numerosos grupos protetores e a sua introdução e remoção, em T. W. Greene e G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Quarta Edição, Wiley, Nova Iorque, 2006 e referências ai citadas .
Os grupos protetores de carboxilo são adequados para impedir reações indesejadas num grupo carboxilo e os exemplos ncluem, mas não estão limitados a metilo, etilo, t-butilo, benzilo (Bn), p-metoxibenzilo (PMB), 9-fluorenilmetilo (Fm) , trimetilsililo (TMS), t-butildimetilsililo (TBDMS) e difenilmetilo (benzidrilo, DPM) . Os grupos protetores de amino são adequados para impedir reações indesejadas num grupo amino e os exemplos incluem, mas não estão limitados a t-butoxicarbonilo (BOC), tritilo (Tr) , benziloxicarbonilo (Cbz), 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), formilo, trimetilsililo (TMS) e t-butildimetilsililo (TBDMS). Os grupos protetores de hidroxilo são adequados para impedir reações indesejadas num grupo hidroxilo e os exemplos incluem, mas não estão limitados a alquilo Ci_5, grupos sililo incluindo grupos trialquilsililo Ci-6, tais como trimetilsililo (TMS), trietilsililo (TES) e terc-butildimetilsililo (TBDMS); ésteres (grupos acilo) incluindo grupos alcanoilo Ci-6, tais como formilo, acetilo e pivaloilo e grupos acilo aromáticos, tais como benzoilo; grupos arilmetilo, tais como benzilo (Bn), p-metoxibenzilo (PMB), 9-fluorenilmetilo (Fm) e difenilmetilo (benzidrilo, DPM).
As técnicas de desproteção padrão e os reagentes são utilizados para remover os grupos protetores e podem variar dependendo de qual o grupo que é utilizado. Por exemplo, é geralmente utilizado hidróxido de sódio ou litio quando o grupo protetor de carboxilo é metilo, um ácido, tais como TFA ou HC1 é geralmente utilizado quando o grupo protetor de carboxilo é etilo ou t-butilo e H2/Pd/C pode ser utilizado quando o grupo protetor de carboxilo é benzilo. Um grupo protetor de amino BOC pode ser removido utilizando um reagente acidico, tal como TFA, em DCM ou HC1 em 1,4-dioxano, enquanto um grupo protetor de amino Cbz pode ser removido ao empregar-se condições de hidrogenação catalíticas, tais como H2 (1 atm) e 10% de Pd/C num solvente alcoólico ("H2/Pd/C"). H2/Pd/C é geralmente utilizado quando o grupo protetor de hidroxilo é benzilo, enquanto NaOH é geralmente utilizado quando o grupo protetor de hidroxilo é um grupo acilo.
As bases adequadas para utilização nestes esquemas incluem, a titulo de ilustração e não como limitação, carbonato de potássio, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, trietilamina, piridina, 1,8-diazabiciclo-[5.4.0]undec-7-eno (DBU), N,W-diisopropiletilamina (DIPEA), 4-metilmorfolina, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, t-butóxido de potássio e hidretos metálicos.
Os diluentes ou solventes adequados inertes para utilização nestes esquemas incluem, a titulo de ilustração e não como limitação, tetra-hidrofurano (THF), acetonitrilo (MeCN), N, iV-dimet ilf ormamida (DMF) , N, N-dimetilacetamida (DMA), dimetilsulfóxido (DMSO), tolueno, diclorometano (DCM), clorofórmio (CHC13) , tetracloreto de carbono (CC14), 1,4-dioxano, metanol, etanol e água. 0 reagentes de acoplamento de ácido carboxilico/amina adequados incluem hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfónio (BOP), hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitripirrolidinofosfónio (PyBOP) , hexafluorofosfato de N, N, Ν', Ν' -tetrametil-O-(7-azabenzotriazol- l-il)urónio (HATU), 1,3-diciclo-hexilcarbodiimide (DCC), N- (3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (EDCI), carbonildiimidazole (CDI) e 1-hidroxibenzotriazole (HOBt). As reações de acoplamento são conduzidas num diluente inerte na presença de uma base, tal como DIPEA e são realizadas sob condições de formação de ligação amida convencionais.
Todas as reações são, tipicamente, conduzidas a uma temperatura dentro da gama de cerca de -78 2C a 100 2C, por exemplo, à temperatura ambiente. As reações podem ser monitorizadas através da utilização de cromatografia de camada fina (TLC), cromatografia liquida de elevado desempenho (HPLC) e/ou LCMS até à conclusão. As reações podem estar completas em minutos ou pode demorar horas, tipicamente, desde 1-2 horas e até 48 horas. Após a conclusão, a mistura ou produto de reação resultante pode ainda ser tratado de modo a obter o produto desejado. Por exemplo, a mistura resultante ou produto de reação resultante pode ser submetida a um ou mais dos seguintes procedimentos: concentração ou partição (por exemplo, entre
EtOAc e água ou entre 5% de THF em EtOAc e ácido fosfórico 1 M); extração (por exemplo, com EtOAc, CHC13, DCM, clorofórmio) ; lavagem (por exemplo, com NaCl aquoso saturado, NaHC03 aquoso saturado, Na2C03 (5%), CHC13 ou 1 M NaOH); secagem (por exemplo, sobre MgS04, sobre Na2S04 ou in vacuo); filtração; cristalização (por exemplo, a partir de EtOAc e hexanos); sendo concentrada (por exemplo, in vacuo); e/ou purificação (e. g., cromatografia em silica gel, cromatografia flash, HPLC preparativa, HPLC de fase inversa ou cristalização).
Os compostos de fórmula I, bem como os seus sais, podem ser preparados como mostrado no Esquema I:
0 processo compreende o passo de acoplamento do composto 1 com o composto 2, onde R1-R6, Z, a, e b são como definidos para a fórmula I e P é selecionado de H e um grupo protetor de amino adequado, cujos exemplos incluem, t-butoxicarbonilo, tritilo, benziloxicarbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, formilo, trimetilsililo e t-butildimetilsililo. Quando P é um grupo protetor de amino, o processo compreende ainda a desproteção do composto de fórmula 1, antes ou in situ com o passo de acoplamento.
Em casos onde R1 é um grupo, tais como -OCH3 ou -OCH2CH3, o passo de acoplamento pode ser seguido por um passo de desproteção, para proporcionar um composto de fórmula I, onde R1 é um grupo, tal como -OH. Assim, um método de preparação de compostos da invenção envolve o acoplamento dos compostos 1 e 2, com um passo de desproteção opcional para formar um composto de fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Os métodos de preparação do composto 1 estão descritos nos Exemplos. 0 composto 2 está geralmente disponível comercialmente ou pode ser preparado através da utilização de procedimentos que são conhecidos na técnica.
Os intermediários aqui descritos incluem, por exemplo, os compostos de fórmula 1 ou um seu sal:
onde P é H ou um grupo protetor de amino adequado, cujos exemplos incluem, t-butoxicarbonilo, tritilo, benziloxicarbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, formilo, trimetilsililo, e t-butildimetilsililo; e R1, R2, R3, R5, R6, Z, a e b são como definidos para a fórmula I.
Os detalhes adicionais relativos a condições de reação especificas e outros procedimentos para preparar compostos representativos da invenção ou os seus intermediários estão descritos nos Exemplos apresentados abaixo.
UTILIDADE
Os compostos da invenção possuem atividade de inibição da neprilisina (NEP), ou seja, os compostos são capazes de inibir a atividade catalítica da enzima. Noutra forma de realização, os compostos não apresentam atividade inibitória significativa da enzima conversora da angiotensina. Uma medida da capacidade de um composto inibir a atividade de NEP é a constante de inibição (pKi) . 0 valor de pKx é o logaritmo negativo para a base 10 da constante de dissociação (K±) , o qual é tipicamente referido em unidades molares. Os compostos da invenção de interesse particular são aqueles que possuem uma pKi em NEP maior do que ou igual a 6,0, particularmente aqueles que possuem uma pKi maior do que ou igual a 7,0 e, de um modo mais particular, aqueles possuindo uma pKx maior do que ou igual a 8,0. Numa forma de realização, os compostos de interesse possuem uma pKi na gama de 6,0-6,9; noutra forma de realização, os compostos de interesse possuem uma pKx na gama de 7,0-7,9; ainda noutra forma de realização, os compostos de interesse possuem uma pKi na gama de 8,0-8,9; e, ainda noutra forma de realização, os compostos de interesse possuem uma pKi na gama de maior do que ou igual a 9,0. Esses valores podem ser determinados por técnicas que são bem conhecidas na técnica, bem como nos ensaios aqui descritos.
Outra medida da capacidade de um composto para inibir a atividade da NEP é a constante de inibição aparente (IC50), a qual é a concentração molar do composto que resulta em metade da inibição máxima da conversão do substrato pela enzima NEP. O valor de pIC50 é o logaritmo negativo para a base 10 da IC50. Os compostos da invenção que são de particular interesse, incluem aqueles que apresentam uma pICso para NEP maior do que ou igual a cerca de 5,0. Os compostos de interesse também incluem aqueles que possuem uma pICso para NEP á de cerca de 6, 0 ou uma pIC50 para NEP > de cerca de 7,0. Noutra forma de realização, os compostos de interessem possuem uma pICso para NEP dentro da gama de cerca de 7,0-11,0; e noutra forma de realização, dentro da gama de cerca de 8,0-11,0, tal como dentro da gama de cerca de 8,0-10,0.
Nota-se que em alguns casos, os compostos da invenção podem possuir fraca atividade de inibição da NEP. Nesses casos, os especialistas na técnica irão reconhecer que esses compostos ainda possuem utilidade como ferramentas de pesquisa.
Os ensaios exemplificativos para determinar as propriedades dos compostos da invenção, tal como a atividade de inibição da NEP, estão descritos nos Exemplos e incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, ensaios que medem a inibição da NEP (descrita no Ensaio 1) . Os ensaios secundários úteis incluem ensaios para medir a inibição de ACE (também descrita no Ensaio 1) e inibição da aminopeptidase P (APP) (descrita em Sulpizio et al. (2005) JPET 315:1306-1313). Um ensaio farmacodinâmico para avaliar as potências inibidoras in vivo para ACE e NEP em ratos anestesiados está descrito no Ensaio 2 (ver também Seymour et al. (1985) Hipertension 7(Supl. 1):1-35-1-42 e Wigle et al. (1992) Can. J. Physiol. Pharmacol. 70:1525-1528), onde a inibição da ACE é medida como a percentagem de inibição da resposta pressora da angiotensina I e a inibição da NEP é medida como a produção de guanosina 3',5'-monofosfato ciclica urinária (cGMP).
Existem muitos ensaios in vivo que podem ser utilizados para determinar utilidades adicionais dos compostos da invenção. O modelo de rato consciente espontaneamente hipertensivo (SHR) é um modelo de hipertensão dependente de renina e está descrito no Ensaio 3. Ver também Intengan et al. (1999) Circulation 100(22): 2267-2275 e Badyal et al. (2003) Indian Journal of Pharmacology 35:349-362. 0 modelo de rato consciente de sal de acetato de desoxicorticosterona (DOCA-sal) é um modelo de hipertensão dependente de volume que é útil para a medição da atividade da NEP e está descrito no Ensaio 4. Ver também Trapani et ai. (1989) J. Cardiovasc. Pharmacol. 14:419-424, Intengan et al. (1999) Hipertension 34(4):907-913 e Badyal et al. (2003) supra). O modelo de DOCA-sal é particularmente útil para avaliação da capacidade de um composto de teste para reduzir a pressão sanguínea, bem como para medir a capacidade do composto de teste para impedir ou retardar um aumento na pressão sanguínea. O modelo de rato Dahl hipertensivo sensível a sal de (DSS) é um modelo de hipertensão que é sensível a sal alimentar (NaCl) e está descrito no Ensaio 5. Ver também Rapp (1982) Hipertension 4:753-763. O modelo de hipertensão arterial pulmonar induzida por monocrotalina em rato descrito, por exemplo, em Kato et al. (2008) J. Cardiovasc. Pharmacol. 51(1):18-23, é um fiável indicador da eficácia clínica para o tratamento de hipertensão arterial pulmonar. Os modelos animais de insuficiência cardíaca incluem o modelo de rato DSS para a insuficiência cardíaca e o modelo de fistula aorto-cava (canal que desvia a circulação AV) , o último dos quais é descrito, por exemplo, em Norling et al. (1996) J. Amer. Soc. Nephrol. 7:1038-1044. Outros modelos animais, tais como os testes da placa quente, movimento da cauda e de formalina, podem ser utilizados para medir as propriedades analgésicas dos compostos da invenção, bem como o modelo de ligação do nervo espinal (SNL) da dor neuropática. Ver, por exemplo, Malmberg et al. (1999) Current Protocols in Neuroscience 8.9.1-8.9.15.
Espera-se que os compostos da invenção inibam a enzima NEP em qualquer dos ensaios listados acima ou ensaios de uma natureza semelhante. Assim, os ensaios mencionados acima são úteis na determinação da utilidade terapêutica de compostos da invenção, por exemplo, a sua utilidade como agentes anti-hipertensores ou agentes antidiarreicos. Outras propriedades e utilidades dos compostos da invenção podem ser demonstradas utilizando outros ensaios in vitro e in vivo bem conhecidos pelos especialistas na técnica. Os compostos de fórmula I podem ser fármacos ativos, bem como profármacos. Assim, quando se discute a atividade dos compostos da divulgação, é entendido que qualquer desses profármacos pode não apresentar a atividade esperada num ensaio, mas espera-se que apresente a atividade desejada quanto metabolizado.
Espera-se que os compostos da invenção sejam úteis para o tratamento e/ou prevenção de estados clínicos responsivos para a inibição da NEP. Assim, espera-se que os doentes que sofrem de uma doença ou distúrbio que é tratado através da inibição da enzima NEP ou por aumento dos níveis dos seus substratos peptídicos possam ser tratados por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Por exemplo, através da inibição da NEP, espera-se que os compostos potenciem os efeitos biológicos de péptidos endógenos que são metabolizados pela NEP, tais como os péptidos natriuréticos, bombesina, bradicininas, calcitonina, endotelinas, encefalinas, neurotensina, substância P e péptido intestinal vasoativo. Assim, espera-se que estes compostos possuam outras ações fisiológicas, por exemplo, sobre os sistemas renal, central nervoso, reprodutor e gastrointestinal.
Numa forma de realização da invenção, os doentes que sofrem de uma doença ou distúrbio que é tratado por inibição da enzima NEP, são tratados por administração de um composto da invenção que está na forma ativa, i. e., um composto de fórmula I onde R1 e R4 são H, e R2, R3, R5, R6, a, b, e Z são como definidos para a fórmula I.
Noutra forma de realização, os doentes são tratados por administração de um composto que é metabolizado in vitro para formar um composto de fórmula I, onde R1 e R4 são H, e R2, R3, R5, R6, a, b, e Z são como definidos para a fórmula I.
Noutra forma de realização, os doentes são tratados por administração de um composto da invenção que está na sua forma de profármaco no grupo R1, i. e., um composto de fórmula I onde R1 é selecionado de -alquilo Ci-s, -alquileno Ci-3-arilo Ca-io, -alquileno Ci^-heteroarilo C1-9, -cicloalquilo C3-7,· - [ (CH2) 20] 1-3CH3, -alquileno Ci-6-OC (0) R10, -alquileno Ci-e-NR1^12, -alquileno Ci_6-C (0) R13, -alquilenomorfolinilo C0-6, -alquileno Ci_6-S02-alquilo Ci_6,
Ainda noutra forma de realização, os doentes são tratados por administração de um composto da invenção que está na sua forma de profármaco no grupo R4, i. e., um composto de fórmula I onde R4 é selecionado de -alquilo Ci-8, -alquileno Ci-3-arilo C6-10, -alquileno Ci-3-heteroarilo C1-9, -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 20] 1-3CH3, -alquileno Cd-g-OC (0) R40, -alquileno Ci-6-NR41R42, -alquileno Ci-6-C (0) R43, -alquilonemorfolinilo C0-g, -alquileno Ci-g-S02-alquilo Ci-g,
Ainda noutra forma de realização, os doentes são tratados por administração de um composto da invenção que está na sua forma de profármaco no grupo R1 e no grupo R4.
Doenças Cardiovasculares
Ao potenciar os efeitos de péptidos vasoativos, como os péptidos natriuréticos e bradicinina, espera-se que os compostos da invenção encontrem utilidade no tratamento e/ou prevenção de estados clínicos, tal como doenças cardiovasculares. Ver por exemplo, Roques et al. (1993) Pharmacol. Rev. 45:87-146 e Dempsey et al. (2009) Amer. J. of Pathology 174(3):782-796. As doenças cardiovasculares de interesse particular incluem hipertensão e insuficiência cardíaca. A hipertensão inclui, a título de ilustração e não de limitação: hipertensão primária, a qual também é referida como hipertensão essencial ou hipertensão idiopática; hipertensão secundária; hipertensão acompanhada de doença renal; hipertensão grave acompanhada ou não de doença renal; hipertensão pulmonar, incluindo hipertensão arterial pulmonar; e hipertensão resistente. A insuficiência cardíaca inclui, a título de ilustração e não de limitação: insuficiência cardíaca congestiva; insuficiência cardíaca aguda; insuficiência cardíaca crónica, por exemplo, com fração de ejeção do ventrículo esquerdo reduzida (também referida como insuficiência cardíaca sistólica) ou com fração de ejeção do ventrículo esquerdo preservada (também referida como insuficiência cardíaca diastólica); e insuficiência cardíaca descompensada aguda e crónica, acompanhada ou não de doença renal. Assim, uma forma de realização da invenção encontra utilidade num método para tratar hipertensão, particularmente hipertensão primária ou hipertensão arterial pulmonar, compreendendo a administração, a um doente, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção.
Para o tratamento de hipertensão primária, a quantidade terapeuticamente eficaz é, tipicamente, a quantidade que é suficiente para reduzir a pressão sanguínea do doente. Isto iria incluir a hipertensão leve a moderada e hipertensão grave. Quando utilizado para tratar a hipertensão, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como antagonistas de aldosterona, inibidores de aldosterona sintase, inibidores da enzima conversora da angiotensina e inibidores da enzima conversora da angiotensina de dupla ação/neprilisina, ativadores da enzima 2 conversora da angiotensina (ACE2) e estimuladores, vacinas da angiotensina II, agentes antidiabéticos, agentes antilipídicos, agentes antitrombóticos, antagonistas do recetor ATI e inibidores do antagonista do recetor ATI de dupla ação/neprilisina, antagonistas do recetor βΐ-adrenérgico, antagonista do recetor βΐ-adrenérgico/antagonistas do recetor-αΐ de dupla ação, bloqueadores do canal de cálcio, diuréticos, antagonistas do recetor de endotelina, inibidores da enzima conversora da endotelina, inibidores da neprilisina, péptidos natriuréticos e os seus análogos, antagonistas do recetor de eliminação de péptido natriurético, dadores de óxido nítrico, agentes anti-inflamatórios não esteróides, inibidores da fosfodiesterase (especificamente inibidores da PDE-V), agonistas do recetor de prostaglandina, inibidores de renina, estimuladores e ativadores da guanilato ciclase solúvel e as suas combinações. Numa forma de realização particular da invenção, um composto da invenção é combinado com um antagonista do recetor ATI, um bloqueador de canal de cálcio, um diurético ou uma sua combinação, e utilizado para tratar hipertensão primária. Noutra forma de realização particular da invenção, um composto da invenção é combinado com antagonista do recetor ATI e utilizado para tratar hipertensão com doença renal acompanhada. Quando utilizado para tratar hipertensão resistente, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tal como inibidores da aldosterona sintase.
Para o tratamento de hipertensão arterial pulmonar, a quantidade terapeuticamente eficaz é, tipicamente, a quantidade que é suficiente para reduzir a resistência vascular pulmonar. Outros objetivos da terapia são melhorar a capacidade de exercício de um doente. Por exemplo, num cenário clínico, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser a quantidade que aumenta a capacidade de um doente de andar confortavelmente durante um período de 6 minutos (abrangendo uma distância de, aproximadamente, 20-40 metros). Quando utilizado para tratar a hipertensão arterial pulmonar, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como antagonistas do recetor α-adrenérgico, agonistas do recetor βι-adrenérgico, agonistas do recetor p2-adrenérgico, inibidores da enzima conversora da angiotensina, anticoagulantes, bloqueadores do canal de cálcio, diuréticos, antagonistas do recetor de endotelina, inibidores da PDE-V, análogos de prostaglandina, inibidores da reabsorção de serotonina seletivos e as suas combinações. Numa forma de realização particular da invenção, um composto da invenção é combinado com um inibidor da PDE-V ou um inibidor da reabsorção de serotonina seletivo e utilizado para tratar a hipertensão arterial pulmonar. A invenção também encontra utilidade num método para tratar insuficiência cardíaca, em particular, insuficiência cardíaca congestiva (incluindo insuficiência cardíaca congestiva sistólica e diastólica) , compreendendo a administração a um doente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Tipicamente, a quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade que é suficiente para reduzir a pressão sanguínea e/ou melhorar as funções renais. Num cenário clínico, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser a quantidade que é suficiente para melhorar as hemodinâmicas cardíacas, como, por exemplo, redução na pressão de oclusão, pressão atrial direita, pressão de enchimento e resistência vascular. 0 composto pode ser administrado como uma forma de dosagem intravenosa. Quando utilizado para tratar a insuficiência cardíaca, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como antagonistas do recetor de adenosina, agentes de rutura de produto final de glicação avançada, antagonistas de aldosterona, antagonistas do recetor ATlf antagonistas do recetor βι-adrenérgico, antagonista do recetor β-adrenérgico/antagonistas do recetor oq de dupla ação, inibidores de quimase, digoxina, diuréticos, inibidores da enzima conversora da endotelina (ECE), antagonistas do recetor de endotelina, péptidos natriuréticos e os seus análogos, antagonistas do recetor de eliminação de péptido natriurético, dadores de óxido nítrico, análogos de prostaglandina, inibidores de PDE-V, ativadores e estimuladores da guanilato ciclase solúvel e antagonistas do recetor de vasopressina. Numa forma de realização particular da invenção, um composto da invenção é combinado com um antagonista de aldosterona, um antagonista do recetor βι-adrenérgico, um antagonista do recetor Ali ou um diurético e utilizado para tratar insuficiência cardíaca congestiva.
Diarreia
Como inibidores da NEP, espera-se que os compostos da invenção inibam a degradação de encefalinas endógenas e, assim, esses compostos também podem ser úteis para o tratamento de diarreia, incluindo diarreia infecciosa e secretora/aguada. Ver, por exemplo, Baumer et al. (1992) Gut 33:753-758; Farthing (2006) Digestive Diseases 24:47-58; e Marçais-Collado (1987) Eur. J. Pharmacol. 144(2): 125-132. Quando utilizados para tratar diarreia, os compostos da invenção podem ser combinados com um ou mais agentes antidiarreicos adicionais.
Doenças Renais
Ao potenciar os efeitos de péptidos vasoativos, como os péptidos natriuréticos e bradicinina, espera-se que os compostos da invenção melhorem a função renal (ver Chen et al. (1999) Circulation 100:2443-2448; Lipkin et al. (1997) Kidney Int. 52:792-801; e Dussaule et al. (1993) Clin. Sci. 84:31-39) e possuam utilidade no tratamento e/ou prevenção de doenças renais. As doenças renais de particular interesse incluem nefropatia diabética, doença renal crónica, proteinúria e, particularmente, lesão renal aguda ou insuficiência renal aguda (ver Sharkovska et al. (2011) Clin. Lab. 57:507-515 e Newaz et al. (2010) Renal Failure 32:384-390). Quando utilizado para tratar doença renal, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como inibidores da enzima conversora da angiotensina, antagonistas do recetor ATi e diuréticos.
Terapia Preventiva
Ao potenciar os efeitos dos péptidos natriuréticos, espera-se que os compostos da invenção também sejam úteis em terapia preventiva, devido aos efeitos anti-hipertróficos e antifibróticos dos péptidos natriuréticos (ver Potter et al. (2009) Handbook of Experimental Pharmacology 191:341-366), por exemplo, na prevenção da progressão de insuficiência cardíaca após enfarte do miocárdio, prevenção de restenose arterial após angioplastia, prevenção do espessamento das paredes dos vasos após operações vasculares, prevenção de aterosclerose e prevenção de angiopatia diabética.
Glaucoma
Ao potenciar os efeitos dos péptidos natriuréticos, espera-se que os compostos da invenção sejam úteis para tratar glaucoma. Ver, por exemplo, Diestelhorst et al. (1989)
International Ophthalmology 12:99-101. Quando utilizados para tratar glaucoma, os compostos da invenção podem ser combinados com um ou mais agentes antiglaucoma adicionais.
Alivio da Dor
Como inibidores da NEP, espera-se que os compostos da invenção inibam a degradação de encefalinas endógenas e, assim, esses compostos também possam ser úteis como analgésicos. Ver, por exemplo, Roques et al. (1980) Nature 288 :286-288 e Thanawala et al. (2008) Current Drug Targets 9:887-894. Quando utilizados para tratar a dor, os compostos da invenção podem ser combinados com um ou mais fármacos antinociceptivos adicionais, tais como inibidores da aminopeptidase N ou dipeptidil peptidase III, agentes anti-inflamatórios não esteróides, inibidores da reabsorção da monoamina, relaxantes musculares, antagonistas do recetor de NMDA, agonistas do recetor opioide, agonistas do recetor de serotonina 5-HTiD e antidepressivos triciclicos.
Outras Utilidades
Devido às suas propriedades de inibição de NEP, espera-se também que os compostos da invenção sejam úteis como agentes antitussicos, bem como sejam úteis no tratamento de hipertensão portal associada com cirrose hepática (ver Sansoe et al. (2005) J. Hepatol. 43:791-798), cancro (ver Vesely (2005) J.
Investigative Med. 53:360-365), depressão (ver Noble et al. (2007) Exp. Opin. Ther. Targets 11:145-159), distúrbios menstruais, parto prematuro, pré-eclampsia, endometriose, distúrbios reprodutores (por exemplo, infertilidade masculina e feminina, síndrome de ovários policisticos, falha de implantação) e disfunção sexual masculina e feminina, incluindo disfunção erétil masculina e distúrbio da excitação sexual feminina. Mais especificamente, espera-se que os compostos da invenção sejam úteis no tratamento de disfunção sexual feminina (ver Pryde et ai. (2006) J. Med. Chem. 49:4409-4424), a qual é muitas vezes definida como uma dificuldade ou incapacidade do doente do sexo feminino de encontrar satisfação na expressão sexual. Isto abrange vários diversos distúrbios sexuais femininos incluindo, a titulo de ilustração e não de limitação, distúrbio do desejo sexual hipoativo, distúrbio da excitação sexual, distúrbio orgásmico e distúrbio da dor sexual. Quando utilizados para tratar esses distúrbios, especialmente disfunção sexual feminina, os compostos da invenção podem ser combinados com um ou mais dos seguintes agente secundários: inibidores de PDE-V, agonistas de dopamina, agonistas e/ou antagonistas do recetor de estrogénio, androgénios e estrogénios. Devido às suas propriedades de inibição de NEP, espera-se que os compostos da invenção também possuam propriedades anti-inflamatórias e espera-se que sejam úteis como tal, particularmente quando utilizados em combinação com estatinas.
Estudos recentes sugerem que a NEP desempenha um papel na regulação da função nervosa em diabetes devido a deficiência em insulina e obesidade induzida por dieta. Coppey et al. (2011) Neuropharmacology 60:259-266. Assim, devido às suas propriedades de inibição da NEP, espera-se também que os compostos da invenção sejam úteis na provisão de proteção da disfunção nervosa provocada por diabetes ou obesidade induzida por dieta. A quantidade do composto da invenção administrada por dose ou a quantidade total administrada por dia pode ser predeterminada ou pode ser determinada numa base de doente individual doente tendo em consideração numerosos fatores, incluindo a natureza e gravidade do estado do doente, o estado a ser tratado, a idade, peso e saúde geral do doente, a tolerância do doente ao agente ativo, a via de administração, considerações farmacológicas, tais como a atividade, eficácia, farmacocinética e perfis toxicológicos do composto e quaisquer agentes secundários a serem administrados e semelhantes. 0 tratamento de um doente que sofre de uma doença ou estado clinico (tal como hipertensão) pode começar com uma dosagem predeterminada ou uma dosagem determinada pelo médico assistente e irá continuar durante um período de tempo necessário para impedir, melhorar, suprimir ou aliviar os sintomas da doença ou estado clínico. Os doentes que passam por esse tratamento irão, tipicamente, ser monitorizados de modo rotineiro para determinar a eficácia da terapia. Por exemplo, no tratamento de hipertensão, as medições de pressão sanguínea podem ser utilizadas para determinar a eficácia do tratamento. São bem conhecidos e, estão facilmente disponíveis para médico assistente, semelhantes indicadores, para outras doenças e estados aqui descritos. A monitorização contínua pelo médico irá segurar que a quantidade ótima do composto da invenção será administrada em qualquer dado momento, bem como facilitar a determinação da duração do tratamento. Isto é de particular valor quando os agentes secundários estão também a ser administrados, uma vez que a sua seleção, dosagem e duração da terapia também pode necessitar de ajuste. Deste modo, o regímen de tratamento e esquema de dosagem podem ser ajustados ao longo do decurso da terapia, de modo que a quantidade mais baixa de agente ativo que apresenta a eficácia desejada seja administrada e, ainda, que a administração seja continuada apenas quanto o necessário para tratar com sucesso a doença ou estado clínico.
Ferramentas de Pesquisa
Uma vez que os compostos da invenção possuem atividade de inibição da enzima NEP, tais compostos são também úteis como ferramentas de pesquisa para investigar ou estudar sistemas ou amostras biológicas possuindo uma enzima NEP, por exemplo, para estudar doenças onde a enzima NEP ou os seus substratos péptidos desempenham um papel. Qualquer sistema ou amostra biológica adequada possuindo uma enzima NEP pode ser empregue nesses estudos, os quais podem ser conduzidos in vitro ou in vivo. Os sistemas ou amostras biológicas representativos adequados para tais estudos incluem, mas não estão limitadas a células, extratos celulares, membranas plasmáticas, amostras de tecido, órgãos isolados, mamíferos (tais como murganhos, ratos, cobaios, coelhos, cães, porcos, humanos e semelhantes) e semelhantes, com os mamíferos a serem de particular interesse. Numa forma de realização particular da invenção, a atividade de enzima NEP num mamífero é inibida, através da administração de uma quantidade inibidora de NEP de um composto da invenção. Os compostos da invenção também podem ser utilizados como ferramentas de pesquisa através da condução de ensaios biológicos utilizando tais compostos.
Quando utilizado como uma ferramenta de pesquisa, um sistema ou amostra biológica compreendendo uma enzima NEP é, tipicamente, colocada em contacto com uma quantidade inibidora da enzima NEP de um composto da invenção. Após o sistema ou amostra biológica ser exposta ao composto, os efeitos da inibição da enzima NEP são determinados utilizando procedimentos e equipamento convencional, tais como através da medição da ligação ao recetor num ensaio de ligação ou medição das alterações mediadas por ligando num ensaio funcional. A exposição abrange colocar células ou tecido em contacto com o composto, administrar o composto a um mamífero, por exemplo, por administração i.p., p.o, i.v., s.c. ou inalada, etc. Este passo de determinação pode envolver a medição de uma resposta (uma análise quantitativa) ou pode envolver fazer uma observação (uma análise qualitativa). A medição de uma resposta envolve, por exemplo, determinar os efeitos do composto sobre o sistema ou amostra biológica utilizando procedimentos e equipamento convencional, tais como ensaios de atividade enzimática e medição de substrato enzimático ou alterações mediadas por produto em ensaios funcionais. Os resultados do ensaio podem ser utilizados para determinar o nível de atividade, bem como a quantidade de composto necessário para obter o resultado desejado, ou seja, uma quantidade inibidora da enzima NEP. Tipicamente, o passo de determinação irá envolver a determinação dos efeitos de inibição da enzima NEP.
Além disso, os compostos da invenção podem ser utilizados como ferramentas de pesquisa para avaliar outros compostos químicos e, assim, são também úteis em ensaios de rastreio para identificar, por exemplo, novos compostos possuindo atividade de inibição de NEP. Deste modo, é utilizado um composto da invenção como um padrão num ensaio para permitir a comparação dos resultados obtidos com um composto de teste e com compostos da invenção para identificar esses compostos de teste que possuem atividade, se alguma, aproximadamente igual ou superior. Por exemplo, os dados de pKi para um composto de teste ou um grupo de compostos de teste são comparados aos dados de pKi para um composto da invenção para identificar aqueles compostos de teste que possuem as propriedades desejadas, por exemplo, os compostos de teste possuindo um valor de pKi, se algum, aproximadamente igual ou superior a um composto da invenção. Este aspeto da invenção inclui, como formas de realização separadas, a produção de dados de comparação (utilizando os ensaios apropriados) e a análise de dados de teste para identificar os compostos de teste de interesse. Assim, um composto de teste num ensaio biológico pode ser avaliado através de um método compreendendo os passos de: (a) conduzir um ensaio biológico com um composto de teste para proporcionar um primeiro valor de ensaio; (b) conduzir o ensaio biológico com um composto da invenção para proporcionar um segundo valor de ensaio; em que o passo (a) é conduzido antes, após ou concorrentemente com o passo (b) ; e (c) comparar o primeiro valor de ensaio do passo (a) com o segundo valor de ensaio do passo (b). Os ensaios biológicos exemplificativos incluem um ensaio de inibição da enzima NEP.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E FORMULAÇÕES
Os compostos da invenção são, tipicamente, administrados a um doente na forma de uma composição farmacêutica ou formulação. Tais composições farmacêuticas podem ser administradas ao doente através de qualquer via de administração aceitável, incluindo, mas não limitada a modos de administração oral, retal, vaginal, nasal, inalada, tópica (incluindo transdérmica), ocular e parentérica. Além disso, os compostos da invenção podem ser administrados, por exemplo, oralmente, em múltiplas doses por dia (por exemplo, dois, três ou quatro vezes por dia), numa única dose diária ou uma única dose semanal. Será entendido que qualquer forma dos compostos da invenção (ou seja, base livre, ácido livre, sal farmaceuticamente aceitável, solvato, etc.) que é adequada para o modo de administração particular pode ser utilizada nas composições farmacêuticas aqui discutidas.
Por conseguinte, numa forma de realização, a invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo um veiculo farmaceuticamente aceitável e um composto da invenção. As composições podem conter outros agentes terapêuticos e/ou de formulação adequados. Quando se discutem as composições, o "composto da invenção" também pode ser aqui referido como o "agente ativo" para distingui-lo de outros componentes da formulação, tal como o veiculo. Assim, é entendido que a expressão "agente ativo" inclui compostos de fórmula I, bem como os sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis, desse composto.
As composições farmacêuticas da invenção, tipicamente, contêm uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Os especialistas na técnica irão reconhecer, contudo, que uma composição farmacêutica pode conter mais do que uma quantidade terapeuticamente eficaz, tal como em composições agregadas ou menos do que uma quantidade terapeuticamente eficaz, ou seja, doses unitárias individuais concebidas para administração múltipla para obter uma quantidade terapeuticamente eficaz. Tipicamente, a composição irá conter desde cerca de 0,01-95% em peso de agente ativo, incluindo, desde cerca de 0,01-30% em peso, tal como desde cerca de 0,01-10% em peso, com a quantidade real dependendo da própria formulação, da via de administração, da frequência de dosagem e semelhantes. Numa forma de realização, uma composição adequada para uma forma de dosagem oral, por exemplo, pode conter cerca de 5-70% em peso ou desde cerca de 10-60% em peso de agente ativo.
Qualquer veículo ou excipiente convencional pode ser utilizado nas composições farmacêuticas da invenção. A escolha de um veículo ou excipiente particular ou combinações de veículos ou excipientes irá depender do modo de administração a ser utilizado para tratar um doente particular ou tipo de estado clínico ou estado de doença. A este respeito, a preparação de uma composição adequada para um modo de administração particular está bem dentro do âmbito do conhecimento dos especialistas nas técnicas farmacêuticas. Além disso, os veículos ou excipientes utilizados nessas composições estão disponíveis comercialmente. A título de ilustração adicional, as técnicas de formulação convencionais estão descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a Edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); e H. C. Ansel et al., Pharmaceutical Forma de dosagems and Drug Delivery Systems, 1- Edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
Os exemplos representativos de materiais que podem ser utilizados como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados aos seguintes: açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; amido, tais como amido de milho e amido de batata; celulose, tais como celulose microcristalina e os seus derivados, tais como carboximetilcelulose sódica, etilcelulose e acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras de supositório; óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, tal como propilenoglicol; polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; ésteres, tais como oleato de etilo e laurato de etilo; agár; agentes tampão, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água isenta de pirogénios; solução salina isotónica; solução de Ringer; álcool etílico; soluções de tampão fosfato; gases propulsores comprimidos, tais como clorofluorocarbonetos e hidrofluorocarbonetos; e outras substâncias compatíveis não tóxicas empregues em composições farmacêuticas.
As composições farmacêuticas são, tipicamente, preparadas por mistura ou combinação completa e íntima do agente ativo com um veículo farmaceuticamente aceitável e um ou mais ingredientes opcionais. A mistura uniformemente combinada resultante pode ser, depois, moldada ou carregada em comprimidos, cápsulas, pílulas, pequenas caixas de metal, cartuchos, dispensadores e semelhantes, utilizando procedimentos e equipamento convencionais.
Numa forma de realização, as composições farmacêuticas são adequadas para administração oral. As composições adequadas para administração oral podem ser na forma de cápsulas, comprimidos, pílulas, pastilhas, hóstias, drageias, pós, grânulos; soluções ou suspensões num líquido aquoso ou não aquoso; emulsões óleo-em-água ou água-em-óleo líquidas; elixires ou xaropes; e semelhantes; cada contendo uma quantidade predeterminada do agente ativo.
Quando pretendida para administração oral numa forma de dosagem sólida (cápsulas, comprimidos, pílulas e semelhantes), a composição irá, tipicamente, compreender o agente ativo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou fosfato dicálcico. As formas de dosagem sólidas também podem compreender: agentes de enchimento ou extensores, tais como amidos, celulose microcristalina, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido silícico; aglutinantes, tais como carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e/ou acácia; humectantes, tal como glicerol; agentes de desintegração, tais como agár-agár, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido alginico, determinados silicatos, e/ou carbonato de sódio; agentes de retardamento de solução, tal como parafina; aceleradores de absorção, tal como compostos de amónio guaternários; agentes molhantes, tais como álcool cetilico e/ou monoestearato de glicerol; absorventes, tais como caulino e/ou argila bentonita; lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulfato de sódio e/ou as suas misturas; agentes de coloração; e agentes tampão.
Também podem estar presentes nas composições farmacêuticas, agentes de libertação, agentes molhantes, agentes de revestimento, agentes edulcorantes, aromatizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes. Os agentes de revestimento exemplificativos para comprimidos, cápsulas, pílulas e semelhantes, incluem aqueles utilizados para revestimentos entéricos, tais como ftalato de acetato de celulose, ftalato de acetato de polivinilo, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, copolímeros de éster de ácido metacrílico - ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulose, carboximetiletilcelulose, succinato de acetato de hidroxipropilmetilcelulose e semelhantes. Os exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e semelhantes; antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbilo, hidroxianisole butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, propilgalato, alfa-tocoferol e semelhantes; e agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiaminotetracético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e semelhantes.
As composições também podem ser formuladas para proporcionar libertação lenta ou controlada do agente ativo utilizando, a titulo exemplificativo, hidroxipropilmetilcelulose em proporções variadas ou outras matrizes poliméricas, lipossomas e/ou microsferas. Além disso, as composições farmacêuticas da invenção podem conter agentes opacificantes e podem ser formuladas de modo que estas libertem apenas o agente ativo ou, de um modo preferido, numa determinada parte do trato gastrointestinal, opcionalmente, de um modo retardado. Exemplos de composições de incorporação que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras. 0 agente ativo também pode estar numa forma microencapsulada, opcionalmente com um ou mais dos excipientes descritos acima.
As formas de dosagem liquidas, adequadas para administração oral incluem, a título de ilustração, emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. As formas de dosagem líquidas compreendem tipicamente o agente ativo e um diluente inerte, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubilização e emulsionantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonate de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, óleos (por exemplo, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, gérmen, azeite, ricínio e sésamo), glicerol, álcool tetra-hidrofurílico, polietilenoglicóis e ésteres de ácido gordo de sorbitano e as suas misturas. As suspensões podem conter agentes de suspensão, tais como, por exemplo, álcoois de isostearilo etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, agár-agár e tragacanto e as suas misturas.
Quando pretendidas para administração oral, as composições farmacêuticas da invenção podem ser embaladas numa forma de dosagem unitária. A expressão "forma de dosagem unitária" refere-se a uma unidade fisicamente discreta adequada para dosagem a um doente, ou seja, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada do agente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado por si só ou em combinação com uma ou mais unidades adicionais. Por exemplo, essas formas de dosagem unitárias podem ser cápsulas, comprimidos, pilulas e semelhantes.
Noutra forma de realização, as composições da invenção são adequadas para administração inalada e irão, tipicamente, estar na forma de um aerossol ou um pó. Tais composições são geralmente administradas utilizando dispositivos de distribuição bem conhecidos, tais como um nebulizador, pó seco ou inalador doseado. Os dispositivos nebulizadores produzem uma corrente de ar a elevada velocidade que faz com que a composição vaporize como uma névoa que é conduzida para o trato respiratório do doente. Uma formulação nebulizadora exemplificativa compreende o agente ativo dissolvido num veiculo para formar uma solução ou micronizado e combinado com um veiculo para formar uma suspensão de partículas micronizadas de tamanho respirável. Os inaladores de pó seco administram o agente ativo como um pó de fluxo livre que está disperso numa corrente de ar do doente durante a inspiração. Uma formulação em pó seco exemplificativa compreende o agente ativo misturado em seco com um excipiente, tais como lactose, amido, manitol, dextrose, ácido poliláctico, polilactida-co-glicolida e as suas combinações. Os inaladores doseados descarregam uma quantidade medida do agente ativo agente ativo utilizando gás propulsor comprimido. Uma formulação doseada exemplificativa compreende uma solução ou suspensão do agente ativo num propulsor liquefeito, tais como um clorofluorocarboneto ou hidrofluoroalcano. Os componentes opcionais de formulações incluem co-solventes, tais como etanol ou pentano e tensioativos, tais como tri-oleato de sorbitano, ácido oleico, lecitina, glicerina e laurilsulfato de sódio. Tais composições são, tipicamente, preparadas pela adição de hidrofluoroalcano arrefecido ou pressurizado a um recipiente adequado contendo o agente ativo, etanol (se presente) e o tensioativo (se presente). Para preparar uma suspensão, o agente ativo é micronizado e, depois, combinado com o propulsor. Em alternativa, pode ser preparada uma formulação de suspensão por secagem por aspersão de um revestimento de tensioativo sobre partículas micronizadas do agente ativo. A formulação é depois carregada numa lata pequena metálica de aerossol, a qual forma uma parte do inalador.
Os compostos da invenção também podem ser administrados parentericamente (por exemplo, por injeção subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intraperitoneal). Para tal administração, o agente ativo é proporcionado numa solução estéril, suspensão ou emulsão. Os solventes exemplificativos para preparar essas formulações incluem água, solução salina, álcoois de baixo peso molecular, tais como propilenoglicol, polietilenoglicol, óleos, gelatina, ésteres de ácido gordo, tais como oleato de etilo e semelhantes. As formulações parentéricas também podem conter um ou mais antioxidantes, solubilizadores, estabilizadores, conservantes, agentes molhantes, emulsionantes e agentes de dispersão. Tensioativos, agentes de estabilização adicionais ou agentes de ajuste de pH (ácidos, bases ou tampões) e antioxidantes são particularmente úteis para proporcionar a estabilidade da formulação, por exemplo, para minimizar ou evitar a hidrólise das ligações éster e amida que possam estar presentes no composto. Estas formulações podem ser tornadas estéreis por utilização de um meio injetável estéril, um agente de esterilização, filtração, irradiação ou aquecimento. Numa forma de realização particular, a formulação parentérica compreende uma solução aquosa de ciclodextrina como o veiculo farmaceuticamente aceitável. As ciclodextrinas adequadas incluem moléculas cíclicas contendo seis ou mais unidades de oí-D-glicopiranose ligadas nas posições 1,4 por uma ligação como na amilase, β-ciclodextrina ou ciclo-heptamilose. As ciclodextrinas exemplificativas incluem derivados de ciclodextrina, tais como ciclodextrinas de éter hidroxipropilíco e sulfobutilíco, tais como hidroxipropil-p-ciclodextrina e β-ciclodextrina de éter sulfobutilíco. Os tampões exemplificativos para tais formulações incluem tampões à base de ácido carboxílico, tais como soluções tampão de citrato, lactato e maleato.
Os compostos da invenção também podem ser administrados transdermicamente utilizando conhecidos sistemas de distribuição transdérmicos e excipientes. Por exemplo, o composto pode ser misturado com melhoradores de permeação, tais como propilenoglicol, monolaurato de polietilenoglicol, azacicloalcan-2-onas e, semelhantes, e incorporados num penso ou sistema de distribuição semelhante. Podem ser utilizados nessas composições transdérmicas, se desejado, excipientes adicionais, incluindo agentes de gelificação, emulsionantes e tampões.
Agentes Secundários
Os compostos da invenção podem ser úteis como o único tratamento de uma doença ou podem ser combinados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais, de modo a obter o efeito terapêutico desejado. Assim, numa forma de realização, as composições farmacêuticas da invenção contêm outros fármacos que são coadministrados com um composto da invenção. Por exemplo, a composição pode compreender ainda um ou mais fármacos (também referidos como "agente (s) secundário (s)") . Tais agentes terapêuticos são bem conhecidos na técnica e incluem antagonistas do recetor de adenosina, antagonistas do recetor a-adrenérgico, antagonistas do recetor βι-adrenérgico, agonistas do recetor β2-οάΓβηέ^ίοο, antagonistas do antagonista do recetor β-adrenérgico/receptor al de dupla ação, agentes de rutura de produtos finais de glicação avançada, antagonistas de aldosterona, inibidores da aldosterona sintase, inibidores de aminopeptidase N, androgénios, inibidores da enzima conversora da angiotensina e inibidores da enzima conversora da angiotensina/neprilisina de dupla ação, activadores e estimuladores da enzima 2 conversora da angiotensina, vacinas da angiotensina II, anticoagulantes, agentes antidiabéticos, agentes antidiarreicos, agentes antiglaucoma, agentes antilipídicos, agentes anti-nociceptivos, agentes antitrombóticos, antagonistas do recetor ATi e inibidores de antagonista do recetor ATi/neprilisina de dupla ação e bloqueadores do recetor de angiotensina multifuncionais, antagonistas do recetor de bradicinina, bloqueadores do canal de cálcio, inibidores de quimase, digoxina, diuréticos, agonistas de dopamina, inibidores da enzima conversora da endotelina, antagonistas do recetor de endotelina, inibidores da HMG-CoA redutase, estrogénios, agonistas e/ou antagonistas do recetor de estrogénio, inibidores da reabsorção de monoamina, relaxantes musculares, péptidos natriuréticos e os seus análogos, antagonistas do recetor de eliminação de péptido natriurético, inibidores da neprilisina, dadores de óxido nítrico, agentes anti-inflamatórios não esteróides, antagonistas do recetor de N-metil-d-aspartato, agonistas do recetor opióide, inibidores da fosfodiesterase, análogos de prostaglandina, agonistas do recetor de prostaglandina, inibidores de renina, inibidores da reabsorção de serotonina seletivos, bloqueador de canal de sódio, estimuladores e ativadores da guanilato ciclase solúvel, antidepressivos tricíclicos, antagonistas do recetor de vasopressina e as suas combinações. Os exemplos específicos destes agentes são aqui detalhados.
Por conseguinte, ainda noutro aspeto da invenção, uma composição farmacêutica compreende um composto da invenção, um segundo agente ativo e um veículo farmaceuticamente aceitável. Também podem estar incluídos na composição terceiros, quartos etc., agentes ativos. Em terapia de combinação, a quantidade de composto da invenção que é administrada, bem como a quantidade de agentes secundários, pode ser menor do que a quantidade administrada, tipicamente, em monoterapia.
Os compostos da invenção podem ser fisicamente misturados com o segundo agente ativo para formar uma composição contendo ambos os agentes; ou cada agente pode estar presente em composições separadas e distintas, as quais são administradas ao doente simultaneamente ou em momentos separados. Por exemplo, um composto da invenção pode ser combinado com um segundo agente ativo utilizando procedimentos e equipamento convencionais para formar uma combinação de agentes ativos, compreendendo um composto da invenção e um segunda agente ativo. Além disso, os agentes ativos podem ser combinados com um veículo farmaceuticamente aceitável para formar uma composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção, um segundo agente ativo e um veículo farmaceuticamente aceitável. Nesta forma de realização, os componentes da composição são tipicamente misturados ou combinados para produzir uma mistura física. A mistura física é depois administrada numa quantidade terapeuticamente eficaz utilizando qualquer das vias aqui descritas.
Em alternativa, os agentes ativos podem permanecer separados e distintos antes da administração ao doente. Nesta forma de realização, os agentes não são misturados fisicamente em conjunto antes da administração, mas são administrados simultaneamente ou em momentos separados como composições separadas. Tais composições podem ser embaladas separadamente ou podem ser embaladas em conjunto num kit. Quando administrado em momentos separados, o agente secundário irá tipicamente ser administrado menos do que 24 horas após a administração do composto da invenção, variando de qualquer modo desde concorrente com administração do composto da invenção a cerca de 24 horas após a dose. Esta também é referida como administração sequencial. Assim, um composto da invenção pode ser administrado oralmente simultânea ou sequencialmente com outro agente ativo utilizando dois comprimidos, com um comprimido para cada agente ativo, onde sequencial pode significar ser administrado imediatamente após a administração do composto da invenção ou em algum momento posterior predeterminado (por exemplo, uma hora depois ou três horas depois). Está também contemplado que o agente secundário pode ser administrado mais do que 24 horas após a administração do composto da invenção. Em alternativa, a combinação pode ser administrada por diferentes vias de administração, ou seja, uma oralmente e a outra por inalação.
Numa forma de realização, o kit compreende uma primeira forma de dosagem compreendendo um composto da invenção e, pelo menos, uma forma de dosagem adicional compreendendo um ou mais dos agentes secundários aqui apresentados, em quantidades suficientes para realizar os métodos da invenção. A primeira forma de dosagem e a segunda (ou terceira, etc.) forma de dosagem em conjunto compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de agentes ativos para o tratamento ou prevenção de uma doença ou estado clínico num doente. 0 ou os agentes secundários, quando incluídos, estão presentes numa quantidade terapeuticamente eficaz de tal modo que estes são tipicamente administrados numa quantidade que produz um efeito terapeuticamente benéfico quando coadministrado com um composto da invenção. 0 agente secundário pode estar na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisómero oticamente puro e semelhantes. 0 agente secundário também pode estar na forma de um profármaco, por exemplo, um composto possuindo um grupo de ácido carboxílico que foi esterifiçado. Assim, pretende-se que os agentes secundários aqui listados incluam todas essas formas e estejam disponíveis comercialmente ou possam ser preparados utilizando procedimentos e reagentes convencionais.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor de adenosina, os exemplos representativos dos quais incluem, mas não estão limitados a naxifilina, rolofilina, SLV-320, teofilina e tonapofilina.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor α-adrenérgico, os exemplos representativos dos quais incluem, mas não estão limitados a doxazosina, prazosina, tamsulosina e terazosina.
Os compostos da invenção também podem ser administrados em combinação com um antagonista do recetor βι-adrenérgico ("βι-bloqueadores") . Os βι-bloqueadores representativos incluem, mas não estão limitados a acebutolol, alprenolol, amosulalol, arotinolol, atenolol, befunolol, betaxolol, bevantolol, bisoprolol, bopindolol, bucindolol, bucumolol, bufetolol, bufuralol, bunitrolol, bupranolol, bubridina, butofilolol, carazolol, carteolol, carvedilol, celiprolol, cetamolol, cloranolol, dilevalol, epanolol, esmolol, indenolol, labetolol, levobunolol, mepindolol, metipranolol, metoprolol, tais como succinato de metoprolol e tartarato de metoprolol, moprolol, nadolol, nadoxolol, nebivalol, nipradilol, oxprenolol, penbutolol, perbutolol, pindolol, practolol, pronethalol, propranolol, sotalol, sufinalol, talindol, tertatolol, tilisolol, timolol, toliprolol, xibenolol e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o βι-antagonista é selecionado de atenolol, bisoprolol, metoprolol, propranolol, sotalol e as suas combinações. Tipicamente, o βι-bloqueador irá ser administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 2-900 mg por dose.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agonista do recetor β2-3ά^ηέ^ίοο, os exemplos representativos dos quais incluem, mas não estão limitados a albuterol, bitolterol, fenoterol, formoterol, indacaterol, isoetarina, levalbuterol, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, salmefamol, salmeterol, terbutalina vilanterol, e semelhantes. Tipicamente, o agonista do recetor β2-3άΓβηό^ίοο será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 0,05-500 yg por dose.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agente de quebra de produto final de glicação avançada (AGE), exemplos dos quais incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, alagebrio (ou ALT-711) e TRC4149.
Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista de aldosterona, os exemplos representativos dos quais incluem, mas não estão limitados a eplerenona, espironolactona e as suas combinações. Tipicamente, o antagonista de aldosterona será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 5-300 mg por dia.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um inibidor da aminopeptidase N ou dipeptidil peptidase III, cujos exemplos incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, bestatina e PC18 (2-amino-4-metilsulfonil butano tiol, metionina tiol).
Os compostos da invenção também podem ser administrados em combinação com um inibidor da enzima conversora da angiotensina (ACE) . Os inibidores representativos da ACE incluem, mas não estão limitados a acupril, alacepril, benazepril, benazeprilato, captopril, ceranapril, cilazapril, delapril, enalapril, enalaprilato, fosinopril, fosinoprilato, imidapril, lisinopril, moexipril, monopril, moveltipril, pentopril, perindopril, quinapril, quinaprilato, ramipril, ramiprilato, acetato de saralasina, rspirapril, temocapril, trandolapril, zofenopril e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o inibidor da ACE é selecionado de: benazepril, captopril, enalapril, lisinopril, ramipril e as suas combinações.
Tipicamente, o inibidor da ACE será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 1-150 mg por dia.
Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um inibidor da enzima conversora da angiotensina/neprilisina (ACE/NEP) de dupla ação, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a: AVE-0848 (ácido (4S, 75,12bR)-7-[3-metil-2(5)-sulfanil-butiramido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octa-hidropirido[2,1-a][2]-benzazepina-4-carboxilico); AVE-7688 (ilepatril) e o seu composto parental; BMS-182657 (ácido 2-[2-oxo-3(5)-[3-fenil-2(5) - sulfanilpropionamido]-2,3,4,5-tetra-hidro-lH-l-benzazepin-l-il]acético); CGS-26303 (ácido [N-[2-(bifenil-4-il)-1(5)-(1H-tetrazol-5-il)etil]amino]metilfosfónico); CGS-35601 (N—[1—[4 — metil-2(5)-sulfanilpentanamido]ciclopentilcarbonil]-L-triptofano); fasidotril; fasidotrilato; enalaprilato; ER-32935 (ácido (3R,6S,9aR)-6-[3(5)-metil-2(5)-sulfanilpentanamido]-5- oxoper-hidrotiazolo[3,2-a]azepina-3-carboxilico); gempatrilato; MDL-101264 (ácido (4S, 7S, 12bR)-7-[2(5)-(2-morfolinoacetiltio)- 3-fenilpropionamido]-6-oxo-l,2,3,4,6,7,8,12b-octa-hodroporido[2,1-a][2]benzazepina-4-carboxilico); MDL-101287 (ácido [45-[4a,7a(R*),120β]]-7-[2-(carboximetil)-3- fenilpropionamido]-6-oxo-l,2,3,4,6,7,8,12b-octa-hidropirido[2,1-a][2]benzazepina-4-carboxilico); omapatrilato; RB-105 (N-[2(S)- (mercaptometil)-3(R)-fenilbutil]-L-alanina); sampatrilato; SA-898 ((2R, 4R)-N-[2-(2-hidroxifenil)-3-(3- mercaptopropionil)tiazolidin-4-ilcarbonil]-L-fenilalanina) ; Sch-50690 (N-[1(5)-carboxi-2-[N2-(metanossulfonil)-L- lisilamino]etil]-L-valil-L-tirosina); e as suas combinações, também podem estar incluídas. Numa forma de realização particular, o inibidor de ACE/NEP é selecionado de: AVE-7688, enalaprilato, fasidotril, fasidotrilato, omapatrilato, sampatrilato e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um ativador ou estimulador da enzima 2 conversora da angiotensina (ACE2).
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com uma vacina da angiotensina II, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a ATR12181 e CYTOO 6-AngQb.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um anticoagulante, os exemplos representativos do qual incluem, mas não estão limitados a: coumarinas, tal como varfarina; heparina; e inibidores diretos da trombina, tais como argatrobana, bivalirudina, dabigatrana e lepirudina.
Ainda noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agente antidiabético. Os agentes antidiabéticos representativos incluem fármacos injetáveis, bem como fármacos oralmente eficazes e as suas combinações. Os exemplos de fármacos injetáveis incluem, mas não estão limitados a insulina e derivados de insulina. Os exemplos de fármacos oralmente eficazes incluem, mas não estão limitados a: biguanidas, tal como metformina; antagonistas de glucagon; inibidores de α-glucosidase, tais como acarbose e miglitol; inibidores da dipeptidil peptidase IV (inibidores da DPP-IV), tais como alogliptina, denagliptina, linagliptina, saxagliptina, sitagliptina e vildagliptina; meglitinidas, tal como repaglinida; oxadiazolidinedionas; sulfonilureias, tais como clorpropamida, glimepirida, glipizida, gliburida e tolazamida; tiazolidinedionas, tais como pioglitazona e rosiglitazona; e as suas combinações.
Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com tratamentos antidiarreicos. As opções de tratamento representativas incluem, mas não estão limitadas a soluções de reidratação oral (ORS), loperamida, difenoxilato e subsalicilato de bismuto.
Ainda noutra forma de realização, um composto da invenção é administrado em combinação com um agente antiglaucoma. Os agentes antiglaucoma representativos incluem, mas não estão limitados a: agonistas de α-adrenérgico, tal como brimonidina; antagonistas do recetor βχ-adrenérgico; βι-bloqueadores tópicos, tais como betaxolol, levobunolol e timolol; inibidores da anidrase carbónica, tais como acetazolamida, brinzolamida ou dorzolamida; agonistas colinérgicos, tais como cevimelina e DMXB-anabaseina; compostos de epinefrina; mióticos, tal como pilocarpina; e análogos de prostaglandina.
Ainda noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agente antilipídico. Os agentes antilipídicos representativos incluem, mas não estão limitados a: inibidores da proteína de transferência do éster de colesteril (CETP), tais como anacetrapib, dalcetrapib e torcetrapib; estatinas, tal como atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, rosuvastatina e sinvastatina; e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agente antitrombótico. Os agentes antitrombóticos representativos incluem, mas não estão limitados a: aspirina; agentes antiplaquetários, tais como clopidogrel, prasugrel e ticlopidina; heparina e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor ATi, também conhecidos como bloqueadores do recetor tipo 1 da angiotensina II (ARB). Os ARB representativos incluem, mas não estão limitados a abitesartan, azilsartan (e. g., azilsartan medoxomil), benzilosartan, candesartan, candesartan cilexetil, elisartan, embusartan, enoltasosartan, eprosartan, EXP3174, fonsartan, forasartan, glicilosartan, irbesartan, isoteolina, losartan, medoximil, milfasartan, olmesartan (e. g., olmesartan medoxomil), opomisartan, pratosartan, ripisartan, saprisartan, saralasin, sarmesin, TAK-591, tasosartan, telmisartan, valsartan, zolasartan e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o ARB é selecionado de azilsartan medoxomil, candesartan cilexetil, eprosartan, irbesartan, losartan, olmesartan medoxomil, saprisartan, tasosartan, telmisartan, valsartan e as suas combinações. Os sais e/ou profármacos exemplificativos incluem candesartan cilexetil, mesilato de eprosartan, sal losartan potássico e olmesartan medoxomil. Tipicamente, o ARB será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 4-600 mg por dose, comas doses diárias exemplificativas variando desde 20-320 mg por dia.
Os compostos da invenção também podem ser administrados em combinação com um agente de dupla ação, tal como um inibidor do antagonista do recetor ATi/inibidor de neprilisina (ARB/NEP), cujos exemplos incluem, mas não estão limitados aos compostos descritos nas Publicações U.S. N2 2008/0269305 e 2009/0023228, ambas de Allegretti et al., apresentados em 23 de abril de 2008, tal como o composto ácido 4'-{2-etoxi-4-etil-5-[((S)-2-mercapto-4-metilpentanoilamino)-metil]imidazol-l-ilmetil}— 3 * — fluorobifenil-2-carboxílico.
Os compostos da invenção também podem ser administrados em combinação com blogueadores multifuncionais do recetor de angiotensina como descrito em Kurtz & Klein (2009) Hipertension Research 32:826-834.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor de bradicinina, por exemplo, icatibant (HOE-140) . Espera-se que esta terapia de combinação possa apresentar a vantagem de prevenir angioedema ou outras consequências indesejadas de níveis de bradicinina elevados.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um bloqueador de canal de cálcio. Os bloqueadores do canal de cálcio representativos incluem, mas não estão limitados a amlodipina, anipamil, aranipina, barnidipina, benciclano, benidipina, bepridil, clentiazem, cilnidipina, cinnarizina, diltiazem, efonidipina, elgodipina, etafenona, felodipina, fendilina, flunarizina, gallopamil, isradipina, lacidipina, lercanidipina, lidoflazina, lomerizina, manidipina, mibefradil, nicardipina, nifedipina, niguldipina, niludipina, nilvadipina, nimodipina, nisoldipina, nitrendipina, nivaldipina, perhexilina, prenilamina, riosidina, semotiadil, terodilina, tiapamil, verapamil e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o bloqueador de canal de cálcio é selecionado de amlodipina, bepridil, diltiazem, felodipina, isradipina, lacidipina, nicardipina, nifedipina, niguldipina, niludipina, nimodipina, nisoldipina, riosidina, verapamil e as suas combinações. Tipicamente, o bloqueador de canal de cálcio será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 2-500 mg por dose.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um inibidor de quimase, tais como TPC-806 e 2-(5-formilamino-6-oxo-2-fenil-l,6-di-hidropirimidina-l-il)-N-[{3,4-dioxo-l-fenil-7-(2-piridiloxi)}-2-heptil]acetamida (NK3201).
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um diurético. Os diuréticos representativos incluem, mas não estão limitados a: inibidores da anidrase carbónica, tais como acetazolamida e diclorfenamida; diuréticos da ansa, os quais incluem derivados de sulfonamida, tais como acetazolamida, ambusida, azosemida, bumetanida, butazolamida, cloraminofenamida, clofenamida, clopamida, clorexolona, dissulfamida, etoxzolamida, furosemida, mefrusida, metazolamida, piretanida, torsemida, tripamida e xipamida, bem como diuréticos não sulfonamida, tal como ácido etacrínico e outros compostos de ácido fenoxiacético, tais como ácido tienilico, indacrinona e quincarbato; diuréticos osmóticos, tal como manitol; diuréticos poupadores de potássio, os quais incluem antagonistas de aldosterona, tais como espironolactona e inibidores do canal de Na+, tais como amilorida e triamtereno; tiazida e diuréticos tipo tiazida, tais como altiazida, bendroflumetiazida, benzil-hidroclorotiazida, benztiazida, butiazida, clortalidona, clorotiazida, ciclopentiazida, ciclotiazida, epitiazida, etiazida, fenquizona, flumetiazida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamide, metilclotiazida, meticrane, metolazona, paraflutizida, politiazida, quinetazona, teclotiazida e triclorometiazida; e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o diurético é selecionado de amilorida, bumetanida, clorotiazida, clortalidona, diclorfenamida, ácido etacrinico, furosemida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamida, metilclotiazida, metolazona, torsemida, triamtereno e as suas combinações. 0 diurético será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 5-50 mg por dia, mais tipicamente, 6-25 mg por dia, com as dosagens comuns sendo 6,25 mg, 12,5 mg ou 25 mg por dia.
Os compostos da invenção também podem ser administrados em combinação com um inibidor da enzima conversora da endotelina (ECE), cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a fosforamidon, CGS 26303 e as suas combinações.
Numa forma de realização particular, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor de endotelina. Os antagonistas do recetor de endotelina representativos incluem, mas não estão limitados a: antagonistas do recetor de endotelina seletivos que afetam os recetores de endotelina A, tais como avosentan, ambrisentan, atrasentan, BQ-123, clazosentan, darusentan, sitaxentano e zibotentan; e antagonistas do recetor de endotelina duplos que afetam os recetores de endotelina A e B, tais como bosentano, macitentano, tezosentano).
Ainda noutra forma de realização, um composto da invenção é administrado em combinação com um ou mais inibidores da HMG-CoA redutase, os quais são também conhecidos como estatinas. As estatinas representativas incluem, mas não estão limitadas a atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina e sinvastatina.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um inibidor da recaptação de monoamina, cujos exemplos incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, inibidores da recaptação de norepinefrina, tais como atomoxetina, buproprion e o metabolito de bupropriona hidroxibupropriona, maprotilina, reboxetina e viloxazina; inibidores da recaptação de serotonina seletivos (SSRI), tais como citalopram e o metabolito de citalopram desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (e. g., oxalato de escitalopram), fluoxetina e o metabolito de desmetil fluoxetina norfluoxetina, fluvoxamina (e. g., maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina e o metabolito de sertralina demetilsertralina; inibidores da recaptação de serotonina-norepinefrina duplos (SNRI), tais como bicifadina, duloxetina, milnacipran, nefazodona e venlafaxina; e as suas combinações.
Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um relaxante muscular, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a: carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, diflunisal, metaxalona, metocarbamol e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um péptido natriurético ou análogo, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a: carperitida, CD-NP (Nile Therapeutics), CU-NP, nesiritida, PL-3994 (Palatin Technologies, Inc.), ularitida, cenderitida e os compostos descritos em Ogawa et al. (2004) J. Biol. Chem. 279:28625-31. Estes compostos também são referidos como agonistas do recetor-A do péptido natriurético (NPR-A). Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor de eliminação do péptido natriurético (NPR-C), tais como SC-46542, cANF (4-23) e AP-811 (Veale (2000) Bioorg Med Chem Lett 10:1949-52). Por exemplo, AP-811 mostrou sinergia quando combinado com o inibidor de NEP, tiorfano (Wegner (1995) Clin. Exper. Hypert. 17:861-876).
Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um inibidor da neprilisina (NEP) . Os inibidores da NEP representativos incluem, mas não estão limitados a: AHU-377; candoxatril; candoxatrilato; dexecadotril (éster benzilico de ( + ) -N-[2(R)-(acetiltiometil)-3-fenilpropionil]glicina); CGS-24128 (ácido 3-[3-(bifenil-4-il)-2- (fosfonometilamino)propionamido]propiónico); CGS-24592 (ácido (S)-3-[3-(bifenil-4-il)-2-(fosfonometilamino)propionamido] propiónico); CGS-25155 (éster benzilico de N-[9(R)-(acetiltiometil)-10-oxo-l-azaciclodecan-2(S)-ilcarbonil]-4(R)-hidroxi-L-prolina); derivados do ácido 3-(1-carbamoilciclo-hexil)propiónico descrito no documento WO 2006/027680 de Hepworth et al. (Pfizer Inc.); JMV-390-1 (2(R)-benzil-3-(N- hidroxicarbamoil)propionil-L-isoleucil-L-leucina); ecadotril; fosforamidon; retrotiorfan; RU-42827 (2-(mercaptometil)-N-(4- piridinil)benzenopropionamida); RU-44004 (N-(4-morfolinil)-3- fenil-2-(sulfanilmetil)propionamida); SCH-32615 ((S)-N-[N-(1- carboxi-2-feniletil)-L-fenilalanil]-β-alanina) e o seu profármaco SCH-34826 ((S)-N-[N-[1-[[(2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4- il)metoxi]carbonil]-2-feniletil]-L-fenilalanil]-β-alanina); sialorfina; SCH-42495 (éster etílico de N-[2(S)- (acetilsulfanilmetil)-3-(2-metilfenil)propionil]-L-metionina); espinorfina; SQ-28132 (N-[2-(mercaptometil)-l-oxo-3- fenilpropil]leucina); SQ-28603 (N-[2-(mercaptometil)-l-oxo-3- fenilpropil]-β-alanina); SQ-29072 (ácido 7-[[2-(mercaptometil)- l-oxo-3-fenilpropil]amino]heptanóico); tiorfan e o seu profármaco racecadotril; UK-69578 (ácido cis-4-[[[1-[2-carboxi-3-(2-metoxietoxi)propil]ciclopentil]carbonil]amino] ciclo- hexanocarboxilico); UK-447841 (ácido 2—{1— [3— (4 — clorofenil)propilcarbamoil]-ciclopentilmetil}-4-metoxibutirico); UK-505749 (ácido (P)-2-metil-3-{1-[3-(2-metilbenzotiazol-6-il)propilcarbamoil]ciclopentil}propiónico); ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanóico e éster etilico do ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanóico (documento WO 2007/056546); daglutril [ácido (3S,2'R)-3-11-[2'-(etoxicarbonil)-4'-fenilbutil]-ciclopentan-1-carbonilamino}-2,3,4,5-tetra-hidro-2-oxo-lH-l-benzazepina-l-acético] descrito no documento WO 2007/106708 de Khder et al. (Novartis AG); e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o inibidor da NEP é selecionado de AHU-377, candoxatril, candoxatrilato, CGS-24128, fosforamidon, SCH-32615, SCH-34826, SQ-28603, tiorfan e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o inibidor da NEP é um composto, tal como daglutril, o qual também possui atividade como um inibidor da enzima conversora da endotelina (ECE) e da NEP. Também podem ser utilizados outros compostos de ECE/NEP de dupla ação. O inibidor da NEP será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar desde cerca de 20-800 mg por dia, com dosagens diárias típicas variando desde típico 50-700 mg por dia, mais geralmente, 100-600 ou 100-300 mg por dia.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um dador de óxido nítrico, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a nicorandil; nitratos orgânicos, tal como tetranitrato de pentaeritritol; e sidnoniminas, tais como linsidomina e molsidomina.
Ainda noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agente anti-inflamatório não esteroide (NSAID). Os NSAID representativos incluem, mas não estão limitados a: acemetacina, ácido acetilsalicilico, alclofenac, alminoprofeno, amfenac, amiprilose, aloxiprina, anirolac, apazona, azapropazona, benorilato, benoxaprofeno, bezpiperilon, broperamole, ácido buclóxico, carprofeno, clidanac, diclofenac, diflunisal, diftalona, enolicam, etodolac, etoricoxib, fenbufeno, fenclofenac, ácido fenclózico, fenoprofeno, fentiazac, feprazona, ácido flufenâmico, flufenisal, fluprofeno, flurbiprofeno, furofenac, ibufenac, ibuprofeno, indometacina, indoprofeno, isoxepac, isoxicam, cetoprofeno, cetorolac, lofemizole, lornoxicam, meclofenamato, ácido meclofenâmico, ácido mefenâmico, meloxicam, mesalamina, miroprofeno, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácido niflúmico, oxaprozina, oxpinac, oxifenbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, pranoprofeno, salsalato, sudoxicam, sulfasalazina, sulindac, suprofeno, tenoxicam, tiopinac, ácido tiaprofénico, tioxaprofeno, ácido tolfenâmico, tolmetina, triflumidato, zidometacina, zomepirac e as suas combinações. Numa forma de realização particular, o NSAID é selecionado de etodolac, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, cetoprofeno, cetorolac, meloxicam, naproxeno, oxaprozina, piroxicam e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor do N-metil-d-aspartato (NMDA), cujos exemplos incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, incluindo amantadina, dextrometorfano, dextropropoxifeno, cetamina, cetobemidona, memantina, metadona e semelhantes.
Ainda noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agonista do recetor opioide (também referidos como analgésicos opioides). Os agonistas do recetor opioide representativos incluem, mas não estão limitados a: buprenorfina, butorfanol, codeína, di-hidrocodeína, fentanil, hidrocodona, hidromorfona, levalorfano, levorfanol, meperidina, metadona, morfina, nalbufina, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, nalorfina, oxicodona, oximorfona, pentazocina, propoxifeno, tramadol e as suas combinações. Em determinadas formas de realização, o agonista do recetor opioide é selecionado de codeína, di-hidrocodeína, hidrocodona, hidromorfona, morfina, oxicodona, oximorfona, tramadol e as suas combinações.
Numa forma de realização particular, os compostos da invenção são administrados em combinação com um inibidor da fosfodiesterase (PDE), particularmente um inibidor da PDE-V. Os inibidores da PDE-V representativos incluem, mas não estão limitados a avanafil, lodenafil, mirodenafil, sildenafil (Revatio®) , tadalafil (Adcirca®) , vardenafil (Levitra®) e udenafil.
Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um análogo de prostaglandina (também referidos como prostanoides ou análogos de prostaciclina). Os análogos de prostaglandina representativos incluem, mas não estão limitados a beraprost sódico, bimatoprost, epoprostenol, iloprost, latanoprost, tafluprost, travoprost e treprostinil, com bimatoprost, latanoprost e tafluprost sendo de particular interesse.
Ainda noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agonista do recetor de prostaglandina, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a bimatoprost, latanoprost, travoprost e semelhantes.
Os compostos da invenção também podem ser administrados em combinação com um inibidor de renina, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a alisquireno, enalquireno, remiquireno e as suas combinações.
Noutra forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um inibidor de reabsorção de serotonina seletivo (SSRI). Os SSRI representativos incluem, mas não estão limitados a: citalopram e o metabolito de citalopram desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (e. g., oxalato de escitalopram), fluoxetina e o metabolito de fluoxetina desmetil norfluoxetina, fluvoxamina (e. g., maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina e o metabolito de sertralina demetilsertralina e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um agonista do recetor de serotonina 5-HTiD, cujos exemplos incluem, a titulo de ilustração e não de limitação, triptanos, tais como almotriptano, avitriptano, eletriptano, frovatriptano, naratriptano, rizatriptano, sumatriptano e zolmitriptano.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um bloqueador de canal de sódio, exemplos dos quais incluem, a título de ilustração e não de limitação, carbamazepina, fosfenitoína, lamotrigina, lidocaine, mexiletina, oxcarbazepina, fenitoína, e suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um estimulador ou ativador de guanilato ciclase solúvel, cujos exemplos incluem, mas não estão limitados a ataciguat, riociguat e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antidepressivo tricíclico (TCA), cujos exemplos incluem, a título de ilustração e não de limitação, amitriptilina, amitriptilinoxida, butriptilina, clomipramina, demexiptilina, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, dosulepina, doxepina, imipramina, imipraminoxida, lofepramina, melitraceno, metapramina, nitroxazepina, nortriptilina, noxiptilina, pipofezina, propizepina, protriptilina, quinupramina e as suas combinações.
Numa forma de realização, os compostos da invenção são administrados em combinação com um antagonista do recetor de vasopressina, cujos exemplos incluem, a título de ilustração e não de limitação, conivaptan e tolvaptan.
Os agentes secundários terapêuticos combinados também podem ser úteis na terapia de combinação adicional com os compostos da invenção. Por exemplo, os compostos da invenção podem ser combinados com um diurético e um ARB ou um bloqueador de canal de cálcio e um ARB ou um diurético e um inibidor de ACE ou um bloqueador de canal de cálcio e uma estatina. Os exemplos específicos incluem, uma combinação do inibidor de ACE enalapril (na forma de sal maleato) e o diurético hidroclorotiazida, a qual é vendida sob a marca Vaseretic® ou uma combinação do bloqueador de canal de cálcio amlodipina (na forma de sal besilato) e o ARB olmesartan (na forma de profármaco medoxomil) ou uma combinação de um bloqueador de canal de cálcio e uma estatina, todos podem também ser utilizados com os compostos da invenção. Outros agentes terapêuticos, tais como os agonistas do recetor a2-adrenérgico e antagonistas do recetor de vasopressina também podem ser úteis em terapia de combinação. Os agonistas do recetor oç-adrenérgico exemplificativos incluem clonidina, dexmedetomidina e guanfacina.
As seguintes formulações ilustram composições farmacêuticas representativas da invenção. Cápsulas de Gelatina Dura Exemplificativas Para Administração Oral
Um composto da invenção (50 g) , 440 g de lactose seca por aspersão e 10 g de estearato de magnésio são completamente misturados. A composição resultante é depois carregada em cápsulas de gelatina dura (500 mg de composição por cápsula). Em alternativa, um composto da invenção (20 mg) é completamente misturado com amido (89 mg), celulose microcristalina (89 mg) e estearato de magnésio (2 mg) . A mistura é, depois, passada através de um crivo U.S. de malha N2 45 e carregada numa cápsula de gelatina dura (200 mg de composição por cápsula).
Em alternativa, um composto da invenção (30 g), um agente secundário (20 g) , 440 g de lactose seca por aspersão e 10 g de estearato de magnésio são completamente misturados e processados como descrito acima.
Formulação de Cápsula de Gelatina Exemplificativa para Administração Oral
Um composto da invenção (100 mg) é completamente misturado com monooleato de polioxietileno sorbitano (50 mg) e pó de amido (250 mg) . A mistura é depois carregada numa cápsula de gelatina (400 mg de composição por cápsula) . Em alternativa, um composto da invenção (70 mg) e um agente secundário (30 mg) são completamente misturados com monooleato de polioxietileno sorbitano (50 mg) e pó de amido (250 mg) e a mistura resultante é carregada numa cápsula de gelatina (400 mg de composição por cápsula).
Em alternativa, um composto da invenção (40 mg) é completamente misturado com celulose microcristalina (Avicel PH 103; 259,2 mg) e estearato de magnésio (0,8 mg) . A mistura é depois carregada numa gelatina cápsula (Tamanho N2 1, Branca, Opaca) (300 mg de composição por cápsula).
Formulação de Comprimido Exemplificativa Para Administração
Oral
Um composto da invenção (10 mg) , amido (45 mg) e celulose microcristalina (35 mg) são passados através de um crivo U.S. de malha N2 20 e completamente misturados. Os grânulos produzidos deste modo são secos a 50-60 2C e passados através de um crivo U.S. de malha N2 16. Uma solução de polivinilpirrolidona (4 mg como uma solução a 10% em água estéril) é misturada com carboximetilamido sódico (4,5 mg), estearato de magnésio (0,5 mg) e talco (1 mg) e esta mistura é, depois, passada através de um crivo U.S. de malha N2 16. O carboximetilamido sódico, estearato de magnésio e talco são depois adicionados aos grânulos. Após a mistura, a mistura é prensada numa máquina de comprimidos para dar um comprimido com o peso de 100 mg.
Em alternativa, um composto da invenção (250 mg) é completamente misturado com celulose microcristalina (400 mg) , dióxido de silício fumado (10 mg) e ácido esteárico (5 mg) . A mistura é, depois, prensada para formar comprimidos (665 mg de composição por comprimido).
Em alternativa, um composto da invenção (400 mg) é completamente misturado com amido de milho (50 mg), croscarmelose sódica (25 mg), lactose (120 mg) e estearato de magnésio (5 mg). A mistura é, depois, prensada para formar um comprimido de marca única (600 mg de composição por comprimido).
Em alternativa, um composto da invenção (100 mg) é completamente misturado com amido de milho (100 mg) com uma solução aquosa de gelatina (20 mg). A mistura é seca e triturada para um pó fino. A celulose microcristalina (50 mg) e estearato de magnésio (5 mg) são depois misturados com a formulação de gelatina, granulados e a mistura resultante prensada para formar comprimidos (100 mg do composto da invenção por comprimido).
Formulação de Suspensão Exemplificativa para Administração
Oral
Os seguintes ingredientes são misturados para formar uma suspensão contendo 100 mg do composto da invenção por 10 mL de suspensão:
Ingredientes Quantidade
Composto da invenção 1,0 g Ácido fumárico 0,5 g
Cloreto de sódio 2,0 g
Metilparabeno 0,15 g
Propilparabeno 0,05 g Açúcar granulado 25,5 g
Sorbitol (solução a 70%) 12,85 g
Veegum® K (silicato de alumínio e magnésio) 1,0 g Aromatizante 0,035 mL
Corantes 0,5 mg
Água destilada q.s. para 100 mL
Formulação Líquida Exemplificativa para Administração Oral
Uma formulação líquida adequada é uma com um tampão à base de ácido carboxílico, tais como soluções tampão de citrato, lactato e maleato. Por exemplo, um composto da invenção (o qual pode ser pré-misturado com DMSO) é misturado com um tampão de citrato de amónio 100 mM e o pH ajustado para pH 5 ou é misturado com uma solução de ácido cítrico 100 mM e o pH ajustado para pH 2. Essas soluções também podem incluir um excipiente solubilizante, tal como uma ciclodextrina, por exemplo, a solução pode incluir 10% em peso de hidroxipropil-β-ciclodextrina.
Outras formulações adequadas incluem uma solução de NaHC03 a 5%, com ou sem ciclodextrina.
Formulação Injetável Exemplificativa Para Administração Por Injeção
Um composto da invenção (0,2 g) é misturado com solução de tampão de acetato de sódio 0,4 M (2,0 mL) . O pH da solução resultante é ajustado para pH 4, utilizando ácido clorídrico aquoso 0,5 N ou hidróxido de sódio aquoso 0,5 N, como necessário e, depois, é adicionada água suficiente para injeção, para se proporcionar um volume total de 20 mL. A mistura é depois filtrada através de um filtro estéril (0,22 mícrones) para proporcionar uma solução estéril adequada para administração por injeção.
Composições Exemplificativas Para Administração Por Inalação
Um composto da invenção (0,2 mg) é micronizado e, depois, misturado com lactose (25 mg) . Esta mistura combinada é, depois, carregada num cartucho de inalação de gelatina. Os conteúdos do cartucho são administrados, por exemplo, utilizando um inalador de pó seco.
Em alternativa, um composto da invenção micronizado (10 g) é disperso numa solução preparada por dissolução de lecitina (0,2 g) em água desmineralizada (200 mL). A suspensão resultante é seca por aspersão e, depois, micronizada, para formar uma composição micronizada compreendendo partículas, possuindo um diâmetro médio inferior a cerca de 1,5 pm. A composição micronizada é, depois, carregada em cartuchos doseados de inalador contendo 1,1, 1,2-tetrafluoroetano pressurizado numa quantidade suficiente para proporcionar cerca de 10 pg a cerca de 50 0 yg do composto da invenção por dose quando administrado pelo inalador.
Em alternativa, um composto da invenção (25 mg) é dissolvido em solução salina isotónica (125 mL) tamponada com citrato (pH 5) . A mistura é agitada e sonicada até o composto ser dissolvido. O pH da solução é verificado e ajustado, se necessário, para pH 5, através da adição lentar de NaOH 1 N aquoso. A solução é administrada utilizando um dispositivo nebulizador que proporciona cerca de 10 yg a cerca de 500 yg do composto da invenção por dose.
EXEMPLOS
Os seguintes Preparações e Exemplos são proporcionados para ilustrar formas de realização específicas da invenção. Estas formas de realização específicas, contudo, não pretendem limitar de qualquer modo o âmbito da invenção, o qual é definido apenas pelas reivindicações anexas.
As seguintes abreviaturas possuem os seguintes significados, a menos que indicado de outro modo e quaisquer outras abreviaturas aqui utilizadas e não definidas possuem o seu significado padrão, geralmente aceite:
AcOH ácido acético BOC t-butoxicarbonilo (-C (O) OC (CH3) 3) (Boc)20 dicarbonato de di-t-butilo
Bn benzilo DCC diciclo-hexilcarbodiimida DCM diclorometano ou cloreto de metileno DIBAL hidreto de diisobutilaluminio DIPEA N, N-diisopropiletilamina DMAP 4-dimetilaminopiridina DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido
Dnp 2,4-dinitrofenilo EDC 1-(3-dimetilaminopropil)-3- etilcarbodiimida Et 3N trietilamina
Et20 éter dietilico
EtOAc acetato de etilo
EtOH etanol HEPES ácido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinaetanossulfónico HOBt 1-hidroxibenzotriazole
LiHMDS hexametildisilazida de litio
Mca (7-metoxicoumarin-4-il)acil
MeCN acetonitrilo
MeOH metanol MTBE Éter metil-t-butilico
NaHMDS hexametildisilazida de sódio
Pd(dppf)2Cl2 cloreto de 1,1- bis(difenilfosfino)ferroceno-paládio Pd(PPh3) 4 tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) PE éter de petróleo
SilicaCat®DPP-Pd catalisador de difenilfosfina paládio (II) à base de silica
SilicaCat®Pd(0) catalisador de paládio(0) à base de silica TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano A menos que indicado de outro modo, todos os materiais, tais como reagentes, materiais de partida e solventes, foram adquiridos de fornecedores comerciais (tais como Sigma-Aldrich, Fluka Riedel-de Haên e semelhantes) e foram utilizados sem purificação adicional.
As reações foram corridas sob atmosfera de azoto, a menos que notado de outro modo. 0 progresso das reações foi monitorizado por cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia liquida de elevado desempenho analítica (HPLC anal.) e espetrometria de massa, cujos detalhes estão em exemplos específicos. Os solventes utilizados em HPLC analítica foram como se segue: o solvente A foi 98% de H20/2% de MeCN/1,0 mL/L de TFA; o solvente B foi 90% de MeCN/10% de H20/1,0 mL/L de TFA.
As reações foram processadas como descrito especificamente em cada preparação por exemplo; geralmente as misturas de reação foram purificadas por extração e outros métodos de purificação, tais como temperatura e cristalização dependente de solvente e precipitação. Além disso as misturas de reação foram purificadas de modo rotineiro por HPLC preparativa, utilizando, tipicamente, enchimentos de coluna Microsorb C18 e Microsorb BDS e eluentes convencionais. O progresso das reações foi, tipicamente, medido por cromatografia líquida acoplada a espetrometria de massa (LCMS). A caracterização de isómeros foi realizada por espetroscopia de efeito Nuclear de Overhauser (NOE). A caracterização dos produtos de reação foi realizada de modo rotineiro por espetrometria de RMN de ΤΗ e de massa. Para a medição do RMN, as amostras foram dissolvidas em solvente deuterado (CD3OD, CDC13 ou DMSO-d6) e o espetro de RMN de ΤΗ foi medido com um instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) sob condições de observação padrão. A identificação dos compostos por espetrometria de massa foi, tipicamente, conduzida utilizando um método de ionização por eletrospray (ESMS) com um instrumento Applied Biosystems (Foster City, CA) modelo API 150 EX ou um instrumento Agilent (Paio Alto, CA) modelo 1200 LC/MSD.
Preparação 1 Éster Etílico do Ácido Acetoxi(dietoxifosforil)acético
Foi adicionado, gota a gota, 2-oxoacetato de etilo (50%) (74 g, 724,8 mmol), enguanto se agitava a 0 2C, a uma solução de hidrogenofosfito de dietilo (50 g, 362,1 mmol) em tolueno (100 mL) , sob azoto. Foi adicionado, gota a gota, Et3N (110 g, 1,1 mol), enquanto se agitava a 0 2C. A solução resultante foi agitada durante 1 hora, à temperatura ambiente. À mistura foi adicionado, gota a gota, anidrido acético (37 g, 362,4 mmol), enquanto se agitava, a 0 2C. A solução resultante foi agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. 0 valor de pH da solução foi ajustado para 6 com HC1 2 N. A solução resultante foi extraída com DCM (3 x 150 mL) e as camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2S04 e concentradas sob vácuo. 0 resíduo foi carregado numa coluna de sílica gel com EtOAc:hexanos (1:2-1:5), para dar o composto em epígrafe (52 g) como um líquido amarelo-claro.
Preparação 2 Éster Etílico do Ácido (R)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroxipentanóico
Uma solução de éster etílico do ácido acetoxi(dietoxifosforil)acético (15,6 g, 55,3 mmol, 1,2 equiv) em THF (seco) (150 mL) , sob azoto, foi arrefecida para -78 2C. Foi adicionado, gota a gota, Li HMDS (1 M em THF) (55,3 mL) , enquanto se agitava, a -78 2C. Após agitação durante 30 minutos a essa temperatura, uma solução de éster t-butílico do ácido ( (R) -2-bifenil-4-il-l-formiletil)carbâmico (15,0 g, 1,0 eq.) em THF (seco) (30 mL) foi adicionada, gota a gota, durante 15 minutos. A agitação foi continuada durante 1,5 horas, a -78 2C antes de a mistura ser vertida numa solução fria com água (200 mL) e EtOAc (200 mL) . A camada orgânica foi repetidamente separada e a camada aquosa foi extraída novamente com EtOAc (2x100 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (EtOAc/hexanos=0~l:10) , para dar o Composto 1 (10,5 g) como um sólido branco.
Uma solução agitada de composto 1 (10,5 g, 23,2 mmol) em EtOH (anidro) (100 mL) foi combinada com carbono-paládio (1,0 g), sob azoto. A mistura foi purgada quatro vezes com hidrogénio e, depois, o hidrogénio foi borbulhado durante 2 horas, à temperatura ambiente. O carbono-paládio foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo, para dar o Composto 2 em bruto (10,0 g) como um óleo amarelo pálido, o qual foi utilizado sem purificação adicional. 0 Composto 2 (10,0 g, 22,0 mmol) em EtOH (anidro) (100 mL) foi combinado com carbonato de potássio (6,1 g, 44,1 mmol) e a solução resultante foi agitada, durante 2 horas, à temperatura ambiente. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi carregado numa coluna de sílica gel (EtOAc/hexanos = 0~l: 5) , para dar o Composto 3 (6,0 g) como um sólido branco.
0 Composto 3 (6,0 g, 14,5 mmol) foi dissolvido em DCM (seco) (120 mL) e o HC1 foi borbulhado na mistura durante 5~6 horas, à temperatura ambiente. Foi observado precipitado sólido. A mistura foi concentrada para metade do volume, depois, filtrada. Os sólidos foram recolhidos e lavados com EtOAc frio e secos sobre pressão reduzida, para dar o composto em epígrafe (4,2 g) como um sal de HC1 sólido esbranquiçado. LC-MS (ES, m/z) : 314 [M-HC1+H]+. RMN de ΤΗ (300 MHz, DMSO) : δ (ppm) = 8,07 (s, 1, 9H) , 7,96 (s, 1,2H), 7,65-7,69 (m, 4,0H), 7,45-7,5 0 (m, 2,0H), 7,33-7,39 (m, 3,0H), 6, 05-6, 07 (m, 0,63H), 5, 88-5, 90 (m, 0,88H), 4,32-4,38 (m, 0,8 0H), 4,18-4,31 (m, 0,51H), 4,05-4,11 (m, 2H) , 3,50 (s, 1H) , 2,75-3, 05 (m, 2,8H), 1,83-1, 94 (m, 1H) , 1,71-1,82 (m, 1H) , 1,10-1,20 (m, 3,3H) .
Preparação 3 Éster t-Butílico do Ácido (S)-2-(4-bromobenzil)-5-oxopirrolidina-l-carboxílico
A uma solução de ácido (R)-2-amino-3-(4-bromo-fenil)propiónico (50 g, 0,2 mol) em MeCN (700 mL) foi adicionada uma solução de NaOH (16,4 g, 0,4 mol) em água (700 mL), a -5 2C. Após agitação durante 10 minutos, foi adicionada uma solução de (Boc)20 (44,7 g, 0,2 mol) em MeCN (100 mL) . A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada, de um dia para o
outro. Após a evaporação do MeCN, o resíduo foi diluído com DCM (800 mL) e acidificado com HC1 1 M para pH = 2, a -5 2C. A aquosa foi extraída com DCM (3x200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (500 mL) , secas sobre Na2S04 e concentradas para dar o Composto 1 (66,5 g) como um sólido branco. LC-MS: 366 (M+Na), 709 (2M+Na). A uma solução do Composto 1 (66,5 g, 193 pmol), ácido de
Meldrum (33,4 g, 232 mmol) e DMAP (37,7 g, 309 mmol) em DCM anidro (600 mL) , foi adicionada, gota a gota, uma solução de DCC (47,9 g, 232 mmol) em DCM anidro (200 mL) durante 1 hora, a -5 2C, sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 8 horas, depois refrigerada, de um dia para o outro. Foram observados cristais de diciclo-hexilureia. A mistura foi filtrada, lavada com 5% de KHS04 (5x200 mL), NaCl aquoso saturado (200 mL) e seca sobre MgS04 anidro sob refrigeração, de um dia para o outro. A solução foi, depois, evaporada para dar o Composto 2 em bruto (91 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 492(M+Na), 961 (2M+Na).
A uma solução de Composto 2 em bruto (91 g, 193 mmol) em DCM anidro (1 L) foi adicionado AcOH (127,5 g, 2,1 mol) a -5 2C, sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 30 minutos, depois foi adicionado NaBH4 (18,3 g, 483 mmol) em pequenas partes durante 1 hora. Após agitação durante mais 1 hora, a -5 eC, foi adicionado NaCl aquoso saturado (500 mL) . A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x300 mL) e água (2x300 mL) , seca sobre MgS04, filtrada e concentrada, para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por lavagem com Et20, para dar o Composto 3 (68 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 478 (M+Na) , 933 (2M+Na) .
Uma solução de Composto 3 (68 g, 149 mmol) em tolueno anidro (500 mL) foi submetida a refluxo sob azoto durante 3 horas. Após evaporação do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia (hexanos:EtOAc=10:1), para dar o composto em epígrafe (38 g) como um óleo amarelo-claro. LC-MS: 376 (M+Na), 729 (2M+Na).
Preparação 4 Éster Etílico do Ácido (2.R, 4.R)-4-amino-5-(4-bromofenil)-2-hidroxipentanóico
A uma solução de éster t-butílico do ácido (S)-2-(4-bromobenzil)-5-oxopirrolidina-l-carboxílico (38 g, 107 mmol) em DCM anidro (250 mL) foi adicionado TFA (20 mL, 0,27 mol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, o resíduo foi diluído com EtOAc (300 mL) e lavado com NaHC03 aquoso saturado (3x200 mL) , água (200 mL) , NaCl aquoso saturado (250 mL) , seco sobre Na2S04 e concentrado para dar o Composto 1 em bruto (24 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 254 (M+H). A uma solução de NaH (8,6 g, 250 mmol) em THF anidro (200 mL) foi adicionada, gota a gota, uma solução do Composto 1 (24 g, 94 mmol) em THF anidro (200 mL) durante 30 minutos, a 0 2C, sob azoto. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Após arrefecimento para os 0 2C, foi adicionado, gota a gota, durante 30 minutos, cloreto de pivaloilo (18 g, 150 mmol) . A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. A reação foi mitigada com NH4C1 aquoso saturado (300 mL) e extraída com EtOAc (3x200 mL) . As camada orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL), secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=25:1) para dar o Composto 2 (18 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 360(M+Na).
A uma solução de Composto 2 (18 g, 53 mmol) em THF anidro (250 mL) foi adicionado, gota a gota, HMDSNa (47,7 mL, 96 mmol) durante 30 minutos, a -78 2C, sob azoto. Após agitação, a -78 2C, durante 90 minutos, foi adicionada, gota a gota uma solução de (+)-(8,8-diclorocamforilsulfonil)oxaziridina, durante 30 minutos, (31,6 g, 106 mmol). Após agitação, a -78 2C, durante 2 horas, a reação foi mitigada com NH4C1 aquoso saturado (400 mL) e extraída com EtOAc (3x300 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL) , secas sobre MgS04, filtradas e concentradas, para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=15:1) para dar o Composto 3 (8,9 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 376(M+Na).
Uma solução de Composto 3 (8,9 g, 25 mmol) em HC1 concentrado (81 mL, 81 mmol) foi aquecida para 100 2C, durante 16 horas. A mistura foi, depois, foi concentrada para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por lavagem com Et20, para dar o Composto 4 (7 g) como um sal de HC1 sólido amarelo-claro. LC-MS: 323 (M+H).
Uma solução de Composto 4 (7 g, 22 mmol) em EtOH (10 mL) foi combinada com HC1 8 M em EtOH (120 mL, 960 mmol), à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 50 2C, durante 16 horas, depois foi concentrada. O produto em bruto foi purificado adicionalmente por lavagem com Et20, para dar o composto em epígrafe (6 g) como um sal de HC1 sólido amarelo-claro. LC-MS: 352 (M+H).
Preparaçao 5 (3R,5R)-5-(3'-Clorobifenil-4-ilmetil)-1-(2,2-dimetilpropionil)-3-hidroxipirrolidin-2-ona
A uma solução de éster t-butilico do ácido (S-2-4-bromobenzil)-5-oxopirrolidina-l-carboxilico (15 g, 43 mmol) em 1,4-dioxano (600 mL) foi adicionado ácido 3-clorofenilborónico (8 g, 51 mmol) e Pd(dppf)2Cl2 (3,1 g, 4,2 mmol) à temperatura ambiente sob azoto. Após agitação, durante 10 minutos, foi adicionada uma solução de K2C03 (11,7 g, 85 mmol) em água (60 mL) . A mistura foi aquecida para 60 2C e agitada, de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, foi adicionada água (200 mL) e extraído com EtOAc (3x200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (400 mL) , secas sobre Na2S04, e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia em coluna (hexanos:EtOAc=6:1) para dar o Composto 1 (15 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 408 (M+Na). A uma solução de Composto 1 (15 g, 0,039 mol) em DCM anidro (250 mL) foi adicionado TFA (20 mL, 270 mmol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, o resíduo foi diluído com EtOAc (300 mL) , depois lavado com NaHC03 aquoso saturado (3x200 mL) , água (200 mL) , e NaCl aquoso saturado (250 mL) , depois seco sobre Na2S04 e concentrado para dar o Composto 2 em bruto (11 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 286 [M+H].
A uma solução de NaH (2,3 g, 98 mmol) em THF anidro (200 mL) foi adicionada, gota a gota, uma solução de Composto 2 (11 g, 39 mmol) em THF anidro (100 mL) durante 30 minutos, a 0 2C, sob azoto. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Após arrefecimento para 0 2C, foi adicionado, gota a gota, cloreto de pivaloílo (6 g, 51 mmol) durante 30 minutos. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A reação foi mitigada com NH4C1 aquoso saturado (200 mL) e extraída com EtOAc (3x200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL), secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=25:1) para dar o Composto 3 (10,5 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 391 (M+Na). A uma solução de Composto 3 (10,5 g, 29 mmol) em THF anidro (120 mL) foi adicionada, gota a gota, NaHMDS (29 mL, 58 mmol) durante 30 minutos a -78 2C sob azoto. Após agitação a -78 2C, durante 90 minutos, foi adicionada, gota a gota, uma solução de (+)-(8,8-diclorocanforilsulfonil)-oxaziridina (15,6 g, 52 mmol) durante 30 minutos. Após agitação a -78 2C durante 2 horas, a reação foi mitigada com NH4C1 saturado (400 mL) e extraída com EtOAc (3x300 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL) , secas sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=15:1) para dar o composto em epígrafe (9,6 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 408 (M+Na).
Preparação 6 Éster Etílico do Ácido {2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico
Uma solução de (3R,5R)-5-(3'-clorobifenil-4-ilmetil)-1-(2,2-dimetilpropionil)-3-hidroxipirrolidin-2-ona (9,6 g, 25 mmol) em HC1 concentrado (81 mL, 81 mmol) foi aquecida a 100 2C, durante 16 horas. A mistura foi, depois, concentrada para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por lavagem com Et20 para dar o Composto 1 (5,7 g) como um sal de HC1 sólido amarelo-claro. LC-MS: 320 (M+ H). A uma solução de Composto 1 (5,7 g, 18 mmol) em EtOH (10 mL) foi adicionado HC1 8 M em EtOH (120 mL, 960 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 50 eC durante 16 horas. Após concentração, o produto em bruto foi purificado adicionalmente por lavagem com Et20 para dar o composto em epígrafe (2,1 g) como um sal de HC1 sólido amarelo-claro. LC-MS: 348 (M+ H).
Preparação 7 Ácido (2Rf 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il) -2-hidroxipentanóico
HC1 aquoso 1 M (2,0 mmol) foi adicionado a éster etílico do ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2- hidroxipentanóico (150,0 mg, 431 pmol) e a mistura foi agitada, a 100 2C, durante 2 horas. A mistura foi concentrada sob vácuo durante 3 horas e o resíduo foi purificado por fase inversa para dar o composto em epígrafe (117 mg) como um sólido branco.
Preparação 8 Éster Isopropílico do Ácido cloro-oxo-acático
Isopropanol (158 pL, 2,1 mmol, 1,0 eq.) foi adicionado, gota a gota, durante 5 minutos, a cloreto de oxalilo (350 pL, 4.14 mmol, 2,0 eq.) a 0 2C, e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas. O cloreto de oxalilo em excesso foi removido por evaporação rotativa (40 2C, 50 mmHg) e utilizado sem purificação adicional.
Preparação 9 Éster Isobutílico do Ácido cloro-oxo-acético
Isobutanol (191 pL, 2,1 mmol, 1,0 eq.) foi adicionado, gota a gota, durante 5 minutos, a cloreto de oxalilo (350 pL, 4.14 mmol, 2,0 eq.) a 0 2C, e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas. O cloreto de oxalilo em excesso foi removido por evaporação rotativa (40 2C, 50 mmHg) e utilizado sem purificação adicional.
Preparaçao 10
Cloreto de t-butil-oxalilo
Cloreto de oxalilo (274 pL, 3,2 mmol) foi adicionado a uma solução de álcool t-butílico (289 pL, 3,0 mmol) em éter (2,0 mL, 19,0 mmol) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora e, depois, concentrada in vacuo para dar um liquido incolor límpido. Uma solução de aproximadamente 1 M de cloreto de t-butil-oxalilo foi preparada por dissolução do líquido incolor límpido resultante em DCM ( — 3,0 mL) .
Preparação 11 Éster 2-Metoxietílico do Ácido Cloro-oxo-acético
Uma solução de 2-metoxietanol (295 mg, 3, 9 mmol) em DCM (volume total: 0,5 mL) foi adicionada a uma solução de cloreto de oxalilo (0,5 mL, 5,8 mmol) em DCM (volume total 1,0 mL) a 0 2C e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente durante, 30 minutos. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo resultante foi dissolvido em DCM (3, 9 mL) para dar uma solução 1,0 M em DCM.
Preparação 12 Éster 3-Etoxipropílico do Ácido Cloro-oxo-acético
Uma solução de 3-etoxipropan-l-ol (404 mg, 3,9 mmol) em DCM (volume total: 0,5 mL) foi adicionada a uma solução de cloreto de oxalilo (0,5 mL, 5,8 mmol) em DCM (volume total 1,0 mL) a 0 2C e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo resultante foi dissolvido em DCM (3, 9 mL) para dar uma solução 1,0 M em DCM.
Preparação 13 Éster 2-Fenoxietílico do Ácido Cloro-oxo-acético
Uma solução de 2-fenoxietanol (536 mg, 3,9 mmol) em DCM (volume total: 0,5 mL) foi adicionada a uma solução de cloreto de oxalilo (0,5 mL, 5,8 mmol) em DCM (volume total 1,0 mL) a 0 2C e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo resultando foi dissolvido em DCM (3, 9 mL) para dar uma solução 1,0 M em DCM.
Preparação 14 Ácido (2R,4R)-4-t-Butoxicarbonilamino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico
Uma solução de (3R,5R)-5-(3'-clorobifenil-4-ilmetil)-1-(2,2-dimetilpropionil)-3-hidroxipirrolidin-2-ona (4,5 g, 11,7 mmol) em HC1 concentrado (30 mL) foi agitada, a 100 2C, durante 16 horas. A mistura foi concentrada in vacuo para dar o Composto 1 (4 g) como um sal de HC1 sólido branco. LC-MS: 321 [M+H]+. A uma solução de NaOH (1,8 g, 45,2 mmol) em água (100 mL), foi adicionado, gota a gota, Composto 1 (4 g, 11,3 mmol) em MeCN (100 mL). A mistura foi agitada, durante 10 minutos, a 0 2C. Foi adicionado di-t-butildicarbonato (7,17 g, 33,8 mmol) e a mistura foi agitada durante 15 horas, à temperatura ambiente. A mistura resultando foi concentrada in vacuo para remover MeCN, depois diluída com DCM (300 mL) e o pH ajustado para pH=5-6 com HC1 aquoso 1 N. Depois a camada orgânica foi recolhida e o resíduo foi extraído com DCM (3x300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas e lavadas com hexanos (150 mL) para dar o composto em epígrafe (4 g) como um sólido branco. LC-MS: 442 [M+Na]+.
Preparação 15 Éster 2,2,3,3,3-Pentafluoropropílico do Ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico
A uma solução de ácido (2R, 4R)-4-t-butoxicarbonilamino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (0,9 g, 6 mmol) e 2,2,3,3,3-pentafluoropropan-l-ol (450 mg, 3 mmol) em DCM (30 mL) foi adicionado DCC (880 mg, 4,3 mmol) e DMAP (260 mg, 2,1 mmol). A mistura resultante foi agitada, durante 15 horas, à temperatura ambiente, depois, concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com água (30 mL) e NaCl aquoso saturado (30 mL) . A camada orgânica foi recolhida e concentrada e purificada por cromatografia em coluna (hexanos/EtOAc=5:1) para dar o Composto 3 (0,4 g) como um sólido branco. LC-MS: 574 [M+Na]+.
Uma solução de Composto 3 (0,4 g, 690 pmol) em HC1 1,4 M numa solução de 1,4-dixoano (15 mL) foi agitada, de um dia para o outro e, depois, concentrada in vacuo. O resíduo foi disperso em EtOAc (10 mL) e o precipitado foi recolhido por filtração para dar o composto em epígrafe como um sal de HC1 sólido esbranquiçado (165 mg) . LC-MS: 452 [M+H] + . RMN de ΧΗ: (DMSO-dô) 1, 95-1,82 (m, 2H) , 2, 99-2, 98 (m, 2H) , 3,56 (br, 1H) , 4,41-4,38 (m, 1H) , 4, 92-4,82 (m, 2H) , 6,35 (s, 1H) , 7,71-7,38 (m, 8H) , 8,09 (s, 3H) .
Preparação 16 Éster 5-Metil-2-oxo[1,3]dioxol-4-ilmetílico do Ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico
Uma suspensão de ácido (2R, 4R)-4-t-butoxicarbonilamino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (740 mg, 1,8 mmol), 4-(bromometil)-5-metil-l,3-dioxol-2-ona (340 mg, 1,8 mmol), iodeto de potássio (58 mg, 350 ymol) e k2co3 (486 mg, 3,5 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada, durante 4 horas, à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com EtOAc (150 mL) e lavada com água (30 mL). A camada orgânica foi recolhida e concentrada e purificada por cromatografia em coluna (hexanos/EtOAc=l:1) para dar um sólido branco (490 mg) . LC-MS: 554 [M+23] + . Uma solução deste sólido (476 mg, 890 pmol) em HC1 3 N em 1,4-dioxano (20 mL) foi agitada, de um dia para o outro e, depois, concentrada in vacuo. O resíduo foi disperso em EtOAc (10 mL) , e o precipitado foi recolhido por filtração para dar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (290 mg). LC-MS: 432 [M+H]+. RMN de ΧΗ: (DMSO-d6) 1, 92-1,82 (m, 2H) , 2,16 (s, 3H) , 2,99 (br, 2H) , 3,56 (br, 1H) , 4,35-4,32 (m, 1H) , 5,017 (s, 2H) , 6,17 (s, 1H) , 7, 39-7,36 (m, 4H) , 7,71-7,68 (m, 4H) , 8,05 (s, 3H) .
Preparação 17 Éster Butiriloximetílico do Ácido (2.R, 4.R)-4-amino-5-(3 ' -clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico
Uma solução de ácido (2R, 4R)-4-t-butoxicarbonilamino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (900 mg, 2,1 mmol), butirato de clorometilo (350 mg, 2,6 mmol), iodeto de sódio (481 mg, 3,21 mmol) e DIPEA (828 mg, 6,42 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada durante 16 horas a 30 2C. A mistura foi diluída com
EtOAc (150 mL) e lavada com água (50 mL) e NaCl aguoso saturado (50 mL). A camada orgânica foi recolhida e concentrada e purificada por cromatografia em coluna (hexanos/EtOAc=5:1) para dar um sólido branco (240 mg) . LC-MS: 542 [M+Na] + . Uma solução deste sólido (240 mg, 460 pmol) em HC1 1,4 M em 1,4-dixoano (15 mL) foi agitada, de um dia para o outro e, depois, concentrada in vacuo. 0 resíduo foi disperso em EtOAc (10 mL), e o precipitado foi recolhido por filtração para dar o composto em epígrafe como um sal de HC1 sólido esbranquiçado (140 mg). LC-MS: 420 [M+H]+. RMN de ΧΗ: (DMSO) 0,85 (t, J= 7,5 Hz, 3H) , 1,61-1,52 (m, 2H) , 1, 89-1, 86 (m, 2H) , 2,30 (t, J=7,5 Hz, 2H) , 2,98 (br, 2H) , 3,56 (br, 1H) , 4,33-4,30 (m, 1H) , 5,74-5, 68 (m, 2H) , 6,21 (s, 1H) , 7,37-7,35 (m, 4H) , 7,70-7,767 (m, 4H), 8,01 (brs, 3H) .
Preparação 18 Éster Etílico do Ácido (2R,4R)-4-amino-5-(2',5'-diclorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico
A uma solução de éster t-butílico do ácido (S-2-4-bromobenzil)-5-oxopirrolidina-l-carboxílico (33,5 g, 95 mmol) em 1,4-dioxano (1,2 L) foi adicionado ácido 2,5-diclorofenilborónico (21,7 g, 114 mmol) e Pd(dppf)2Cl2 (3,5 g, 4,7 mmol) à temperatura ambiente sob azoto. Após agitação, durante 10 minutos, foi adicionada uma solução de K2CO3 (26,1 g, 189 mmol) em água (120 mL). A mistura foi aquecida para 60 2C e, agitada de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, foi adicionada água (400 mL) e extraído com EtOAc (3x400 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (500 mL) , secas sobre Na2SC>4 anidro e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia em coluna (hexanos:EtOAc=6:1) para dar o Composto 1 (35,8 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 442 [M+Na]. A uma solução de Composto 1 (35,8 g, 85 mmol) em DCM anidro (300 mL) foi adicionado TFA (30 mL, 405 mmol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, o resíduo foi diluído com EtOAc (500 mL) , depois lavado com NaHC03 aquoso saturado (3x300 mL), água (200 mL) e NaCl aquoso saturado (250 mL) , depois, seco sobre Na2S04 e concentrado para dar o Composto 2 em bruto (26 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 320 [M+H].
A uma solução de Composto 2 (26 g, 81 mmol) em THF anidro (500 mL) foi adicionado, gota a gota, n-BuLi em hexano (39 mL, 97 mmol) durante 1 hora a -78 2C sob azoto. Após agitação, a -78 2C, durante 2 horas, a reação foi mitigada por adição, gota a gota, de cloreto de pivaloílo (12,7 g, 105 mmol) durante 30 minutos. Após agitação, a -78 2C, durante 2 horas, a reação foi mitigada com NH4C1 aquoso saturado (200 mL) e extraída com EtOAc (3x200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL) , secas sobre MgS04 anidro, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=25 :1) para dar o Composto 3 (33 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 426 [M+Na]. A uma solução de Composto 3 (10 g, 0,025 mol) em THF anidro (120 mL) foi adicionada, gota a gota, NaHMDS (18,6 mL, 37 mmol) durante 30 minutos a -78 2C sob azoto. Após agitação, a -78 2C, durante 2 horas, foi adicionada, gota a gota, uma solução de ( + )-(8, 8-diclorocanforilsulfonil)-oxaziridina (11,1 g, 37 mmol) em THF (80 mL) durante 30 minutos. Após agitação, a -78 2C, durante 2 horas, a reação foi mitigada com NH4C1 aquoso saturado (500 mL) e extraída com EtOAc (3x300 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL) , secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=15:1) para dar o Composto 4 (4,2 g) como um óleo amarelo-claro. LC-MS: 442 [M+Na].
Uma solução de Composto 4 (4,2 g, 10 mmol) em HC1 concentrado (80 mL, 0, 96 mol) foi aquecida, a 100 2C, durante 16 horas. A mistura foi depois concentrada para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por lavagem com Et20 para dar o Composto 5 (3,8 g) como um sólido branco. LC-MS: 354 [M+ H]. A uma solução de Composto 5 (3,8 g, 10 mmol) em EtOH (5 mL) foi adicionado HC1 4 M em EtOH (100 mL, 0,4 mol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 50 2C, durante 16 horas. Após concentração, o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por lavagem com Et20 para dar o composto em epígrafe (3,3 g) como um sólido branco. LC-MS: 382 [M+ H].
Preparação 19 (3-R, 5R) -5-Amino-6- (4-bromo-2-clorofenil) -2-etoxi-hex-l-en- 3-ol
A uma suspensão de 4-bromo-2-clorobenzaldeído (50 g, 22,8 mmol) em MeOH (500 mL) foi adicionado NaBH4 (17,3 g, 45,6 mmol) em partes a 0 2C. A mistura foi agitada durante 30 minutos e, depois, foi adicionado NH4C1 aquoso para mitigar a reação. A mistura foi concentrada in vacuo. O resíduo foi extraído com EtOAc (2x200 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro, e concentradas sob vácuo para dar o Composto 1 (48g) como um sólido branco. A uma solução de Composto 1 (46,8 g, 21,1 mmol) em DCM seco (500 mL) foi adicionado, gota a gota, tribrometo de fósforo (68,6 g, 25,3 mmol) a 0 2C sob azoto. A mistura foi agitada durante 2 horas e, depois lavada com NaHC03 aquoso saturado (2x200 mL) e NaCl aquoso saturado (200 mL) , seca sobre Na2S04 anidro, concentrada sob vácuo para dar o Composto 2 (36 g) como um óleo incolor.
A uma solução agitada de ácido (R)-pirrolidina-2-carboxílico (57,7 g, 0,5 mol) e KOH (84 g, 1,5 mol) em álcool isopropilico (330 mL) foi adicionado, gota a gota, cloreto de benzilo (70 mL, 0,6 mol) a 0 2C, durante 3 horas. A mistura foi depois agitada, de um dia para o outro, à mesma temperatura. A mistura resultante foi neutralizada com HC1 concentrado para pH=6, seguido por adição de clorofórmio (200 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos, depois filtrada, e o precipitado foi lavado com clorofórmio (3x100 mL) . As soluções de clorofórmio combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro, e concentradas sob vácuo para dar o Composto 3 (52 g) como um sólido branco. LC-MS: 206 [M+H]+. A uma solução de Composto 3 (10 g, 48,8 mmol) em DCM seco (50 mL) foi adicionado S02C12 (7,3 g, 61 mmol) a -20 2C, sob azoto. A mistura foi agitada, a -20 2C, durante 3 horas, seguido pela adição de uma solução de (2-aminofenil)(fenil)metanona (6 g, 30,5 mmol) em DCM seco (25 mL) e a mistura foi agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. Foi adicionada uma solução de Na2C03 (10,3 g) em água (40 mL) a 0 2C. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com DCM (50 mLx3) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro e concentradas sob vácuo. O resíduo foi lavado com MTBE (2x50 mL) para dar o Composto 4 (8,5 g) como um sólido amarelo. LC-MS: 385 [M+H]+.
A uma solução de Composto 4 (29,4 g, 76,5 mmol), glicina (28,7 g, 382,4 mmol) e Ni (N03) 2 · 6H20 (44,5 g, 152,9 mmol) em MeOH (280 mL) foi adicionada uma solução de KOH (30 g, 535,3 mmol) em MeOH (100 mL) a 45 2C sob azoto. A mistura foi agitada a 60 2C durante uma hora. A solução resultante foi neutralizada com AcOH (31 mL) e vertida em água gelada (380 mL) . O sólido resultante foi filtrado e dissolvido em DCM (450 mL), o qual foi lavado com NaCl aquoso saturado (150 mL), seco sobre Na2S04 anidro e concentrado. O resíduo foi lavado com EtOAc (2x50 mL) para dar o Composto 5 (38 g) como um sólido vermelho. LC-MS: 498 [M+H]+.
Composto 5 (14,3 g, 28,7 mmol) e NaOH (3,4 g, 81,6 mmol) foram adicionados a um balão, o qual foi purgado duas vezes com azoto. Foi adicionado DMF anidro (100 mL) e a mistura foi
agitada, durante 5 minutos, a 0 2C, antes de ser adicionada uma solução de Composto 2 (8,6 g, 30,1 mmol) em DMF (20 mL) . A mistura de reação foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos até ao consumo completo do Composto 4 (verificado por TLC) . A mistura resultante foi vertida numa solução aquosa de AcOH a 5% (120 mL), a qual foi depois extraída com DCM (3x150 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (150 mL) , secas sobre Na2S04 anidro e concentradas sob vácuo. O resíduo foi recristalizado com DCM/Et20 (1:1) para dar o Composto 6 (15,5 g) como um sólido vermelho. LC-MS: 702 [M+H]+.
A uma solução de Composto 6 (46 g, 65,6 mmol) em MeOH (300 mL) foi adicionado HC1 3 N (200 mL). A mistura foi submetida a refluxo até a cor vermelha se ter tornado verde. A solução resultante foi concentrada sob vácuo e foi adicionado NH3-H20 concentrada (100 mL), e seguido por extração com DCM (2x200 mL). A fase aquosa foi concentrada sob vácuo e submetida à resina de permuta catiónica (aluída com NH3 · H20/Et0H, 1:1) para dar o
Composto 7 (15 g) como um sólido branco. LC-MS: 280 [M+H]+.
A uma suspensão de Composto 7 (15 g, 53,9 mmol) em MeCN (150 mL) foi adicionada uma solução de NaOH (4,3 g, 107,7 mmol) em água (150 mL) a 0 2C e seguido pela adição de (BOC)20 (17,6 g, 80,8 mmol) . A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A solução resultante foi concentrada sob vácuo, seguido por extração com DCM (2x150 mL) . A fase aquosa foi acidificada com HC1 1 N para pH=3 e extraída com EtOAc (3x150 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (150 mL) , secas sobre Na2SC>4 anidro e concentradas sob vácuo para dar o Composto 8 (12,3 g, 60%) como um sólido branco. LC-MS: 402 [M+Na]+. A uma suspensão de Composto 8 (18,4 g, 48,5 mmol) e ácido de Meldrum (8,4 g, 58,2 mmol) em DCM (400 mL) foi adicionado DMAP (9,5 g, 77,6 mmol) a -5 2C. Após agitação durante 10 minutos, foi adicionada, gota a gota, uma solução de DCC (12 g, 58,2 mmol) em DCM (100 mL) a -5 2C. A mistura foi agitada, de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A solução resultante foi arrefecida para 0 2C e filtrada. O filtrado foi lavado com ácido cítrico aquoso (3x200 mL) e NaCl aquoso saturado (200 mL), seco sobre Na2S04 anidro e concentrado sob vácuo. O resíduo foi lavado com Et20 (2x50 mL) para dar o Composto 9 (22 g) como um sólido amarelo-claro.
A uma solução de Composto 9 (22 g, 43, 6 mmol) em DCM (400 mL) foi adicionado AcOH (28,8 g, 479,4 mmol) a 0 2C. Após agitação durante 10 minutos, NaBH4 (4,1 g, 109 mmol) foi adicionado em partes. A mistura foi agitada durante uma hora a 0 2C. A solução resultante foi lavada com NaHCCA aquoso saturado (2x200 mL) e NaCl aquoso saturado (200 mL) , seca sobre Na2SC>4 anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi lavado com éter (2x100 mL) para dar o Composto 10 (18,6 g) como um sólido esbranquiçado. LC-MS: 514 [M+Na]+.
Uma solução de Composto 10 (18,6 g, 37,9 mmol) em tolueno (350 mL) foi aquecida sob refluxo durante 2 horas. Após arrefecimento, a mistura foi evaporada até à secura para dar o Composto 11 (14 g) como um xarope amarelo. LC-MS: 334 [M-tBu+H]+. A uma solução de Composto 11 (14 g, 36,0 mmol) em DCM (250 mL) foi adicionado TFA (20 mL) . A mistura foi agitada, durante 4 horas, a 0 2C. A solução resultante foi concentrada sob vácuo para remover o TFA. O resíduo foi dissolvido em DCM (400 mL) e lavado com NaHC03 aquoso saturado (2x200 mL) , seco sobre Na2S04 anidro e concentrado para dar o Composto 12 (10 g) como um sólido amarelo. LC-MS: 290 [M+H]+.
A uma solução de Composto 12 (10 g, 34,7 mmol) em THF seco (250 mL) foi adicionado NaH (2,4 g, 69,3 mmol, 70%) a 0 2C. A mistura foi agitada, durante uma hora, a 0 2C, sob azoto.
Depois, foi adicionado cloreto de pivaloílo (5 g, 41,6 mmol).
Após agitação durante mais 2 horas, foi adicionado NaHC03 aquoso saturado (100 mL) para mitigar a reação. A mistura resultante foi concentrada e extraída com EtOAc (3x100 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (100 mL) , secas sobre Na2S04 anidro e concentradas sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel (hexanos/EtOAc, 5:1) para dar o Composto 13 (11,8 g) como um sólido branco. LC-MS: 374[M+H]+. A uma solução de Composto 13 (11,8 g, 31,8 mmol) em THF seco (70 mL) foi adicionada, gota a gota, NaHMDS (24 mL, 47,7 mmol, 2,0 M em THF), a -78 2C, sob azoto. Após agitação durante 30 minutos, foi adicionada, gota a gota, uma solução de ( + )-(8, 8-diclorocanforilsulfonil)oxaziridina (15,2 g, 50,8 mmol) em THF (70 mL) a -78 2C. A mistura foi agitada durante mais uma hora à mesma temperatura antes de ser adicionado NH4C1 aquoso (70 mL) para mitigar a reação. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3x150 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (150 mL) , secas sobre Na2S04 anidro, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia de sílica gel (hexanos/EtOAc, 20:1-5:1) para dar o produto em bruto (5 g) , o qual foi purificado adicionalmente por HPLC preparativa para dar o Composto 14 (4 g) como um sólido amarelo. LC-MS: 390 [M+H]+.
Uma solução de Composto 14 (4 g, 10,3 mmol) em HC1 concentrado (50 mL) foi aquecida sob refluxo, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada sob vácuo e o sólido resultante foi lavado com Et20 (2x50 mL) para dar o Composto 15 (3,1 g) como um sal de HC1 sólido branco. LC-MS: 324 [M+H]+.
Uma solução de Composto 15 (3,1 g, 8,6 mmol) em HCl/EtOH
(6,7 M, 40 mL) foi agitada, de um dia para o outro, a 50 2C. A mistura resultante foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi lavado com éter (2x50 mL) para dar o composto em epígrafe (2,9 g) como um sal de HC1 sólido esbranquiçado. LC-MS: 352 [M+H]+. RMN de 1H: (CD3OD) 1, 268 (t, J=6, 9 Hz, 3H) , 1, 862-1, 946 (m, 1H) , 2,068-2,143 (m, 1H), 3,104-3,199 (m, 2H), 3,769-3,809 (m, 1H), 4, 162-4,209 (m, 2H) , 4,274-4,881 (m, 1H) , 7,325 (dd, J=8,l, 2.1 Hz, 1H) , 7,522 (dd, J= 8,3, 3,0 Hz, 1H) , 7, 696 (d, J=l,8 Hz, 1H) .
Preparação 20 Éster t-Butílico do Ácido [(R)-l-bifenil-4-ilmetil-2-(2,2-dimetil-4, 6-dioxo-[l,3]dioxan-5-il)-2-oxoetil]carbâmico
A uma solução de ácido (R)-3-bifenil-4-il-2-t-butoxicarbonilamino-propiónico (50 g, 146,5 mmol), ácido de Meldrum (23,3 g, 161,1 mmol) e D MAP (27,8 g, 227 mmol) em DCM anidro (500 mL) foi adicionada uma solução de DCC (33,3 g, 161.1 mmol) em DCM anidro (200 mL) durante 1 hora, a -5 2C, sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 8 horas, depois refrigerada, de um dia para o outro, durante o qual precipitaram pequenos cristais de diciclo-hexilureia. Após filtração, a mistura foi lavada com KHS04 a 5% (4 x 200 mL) , NaCl saturado aquoso (1 x 200 mL) e seca sobre MgS04, de um dia para o outro. A solução resultante foi evaporada para dar o composto em epígrafe (68 g, como um sólido amarelo-claro), o qual foi utilizado sem purificação adicional. LC-MS: 490 [M+Na], 957 [2M+Na].
Preparação 21 Éster Etílico do Ácido (2R, 4S)-5-Bifenil-4-il-4-t-butoxicarbonilamino-2-hidroximetilpentanóico (composto 6) e Éster Etílico do Ácido (2S, 4S)-5-Bifenil-4-t-butoxicarbonilamino-2-hidroximetilpentanóico (composto 7)
A uma solução de éster t-butílico do ácido [(R)-1-bifenil- 4-ilmetil-2-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-il) -2-oxoetil] carbâmico em bruto (68 g, 147 mmol) em DCM anidro (1 L) foi adicionado AcOH (96,7 g, 1,6 mol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 0,5 horas, depois NaBH4 (13,9 g, 366 mmol) foi adicionado em pequenas partes durante 1 hora. Após agitação, durante mais 1 hora, a -5 2C, foi adicionado NaCl aquoso saturado (300 mL) . A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x300 mL) e água (2x300 mL) , seca sobre MgS04, filtrada e evaporada para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=5:1) para dar o Composto 1 (46 g, sólido amarelo-claro). LC-MS: 476 [M+Na], 929 [2M+Na].
Uma solução de Composto 1 (46 g, 101 mmol) em tolueno anidro (300 mL) foi submetida a refluxo sob azoto durante 3 horas. Após evaporação do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia (hexanos:EtOAc=l0:1) para dar o Composto 2 (27 g,
sólido amarelo-claro). LC-MS: 374 [M+Na], 725 [2M+Na]. RMN de XH (300 MHz, CDC13) : 57, 64-7, 62 (m, 4H) , 7,51-7,46 (m, 2H) , 7,42-7,39 (m, 1H) , 7,39-7,30 (m, 2H) , 4,50-4, 43 (m, 1H) , 3, 27-3, 89 (m, 1H) , 2,88-2,80 (m, 1H) , 2,48-2,42 (m, 2H) , 2, 09-1,88 (m, 2H) , 1, 66 (s, 9H) .
Uma mistura de Composto 2 (27 g, 77 mmol) e t-butoxi-N,N,N',N'-tetrametilmetanodiamina (40,3 g, 231 mmol) foi aquecida para 80 2C sob azoto. Após agitação durante 3 horas a 80 2C, a mistura foi diluída com EtOAc (300 mL) , lavada com água (2x150 mL) e NaCl aquoso saturado (2x150 mL) , seca sobre MgS04, filtrada e evaporada para dar o Composto 3 em bruto (29,7 g, óleo amarelo-claro). LC-MS: 425 [M+H], 835 [2M+H].
A uma solução de Composto 3 em bruto (29,7 g, 73 mmol) em THF (200 mL) foi adicionado HC1 1 M (81 mL) a 0 2C sob azoto. Após agitação, durante 1 hora, à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com EtOAc (100 mL) e ajustada com NaHC03 aquoso saturado para pH 7. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x150 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2x150 mL) e NaCl aquoso saturado (1x150 mL) , secas sobre MgS04, filtradas e evaporadas para dar o Composto 4 em bruto (29,4 g, óleo amarelo). LC-MS: 402 [M+Na], 781 [2M+Na]. A uma solução de Composto 4 (29,4 g, 77 mmol) em THF anidro (300 mL) foi adicionado EtOH anidro (30 mL) e AcOH (92,5 g, 1,5 mol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 0,5 horas, depois NaBH3CN (19,4 g, 308 mmol) foi adicionado em pequenas partes durante 1 hora. Após agitação durante mais uma hora a -52 C, a mistura foi ajustada com NaHC03 aquoso saturado para pH 7. As camadas aquosas foram extraídas com EtOAc (2x200 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2x150 mL) e NaCl aquoso saturado (1x150 mL) , secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=5:1) para dar o Composto 5 (11,2 g, sólido amarelo-claro). LC-MS: 404 [M+Na], 785 [2M+Na].
A uma solução de Composto 5 (11,2 g, 29 mmol) em EtOH anidro (500 mL) foi adicionado K2C03 anidro (8,0 g, 58 mmol) a 0 2C sob azoto. Após agitação durante 1 hora, a 0 2C, a mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 16 horas. Após filtração, o filtrado foi concentrado e o residual foi diluído com água (150 mL) , DCM (200 mL) e NaCl aquoso saturado (50 mL) . Após separação, a camada aquosa foi extraída com DCM (2x150 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (2x200 mL), secas sobre MgSCU e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia em coluna (hexanos:EtOAc=5:1) para dar os
Compostos 6 e 7 (8,3 g, sólido amarelo-claro).
Composto 6: LC-MS: 450 [M+Na], 877 [2M+Na]. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) : 57,58-7,23 (m, 9H), 4,46-4,43 (d, 1H) , 4,20-4,13 (m, 2H) , 3,94 (s, 1H) , 3, 82-3,70 (m, 2H) , 2,85-2,70 (m, 3H) , 2,25-2,22 (d, 1H) , 2,01-1,92 (m, 1H) , 1,47 (s, 9H) , 1,26-1,24 (m, 3H).
Composto 7: LC-MS: 450 [M+Na], 877 [2M+Na]. RMN de 2Η (300 MHz, CDCI3) : 57,58-7, 55 (m, 4H) , 7,50-7,43 (m, 2H) , 7,40-7,30 (m, 1H) , 7,26-7,23 (m, 1H) , 4,46 (m, 1H) , 4,21-4,13 (m, 2H) , 3,94 (m, 1H) , 3, 82-3, 77 (m, 2H) , 2,83-2,81 (d, 2H) , 2,66-2,63 (m, 1H), 2,24 (m, 1H), 1,83-1,81 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,30-1,25 (m, 3H).
Preparação 22 Ácido (2S,4S)-5-Bifenil-4-il-4-t-butoxicarbonilamino-2-hidroximetilpentanóico (R7=H; P2=BOC) e Éster Etílico do Ácido (2Sr 4S')-4-Amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetilpentanóico (R7=-CH2CH3; P2 removido)
Éster etílico do ácido (2S, 4S)-5-bifenil-4-il-4-t- butoxicarbonilamino-2-hidroximetil-pentanóico (210 mg) foi saponificado com LiOH para dar o ácido protegido com BOC (R =H; P2=BOC) (120 mg). Éster etílico do ácido {2S,4S)-5-bifenil-4-il-4-t-butoxicarbonilamino-2-hidroximetil-pentanóico (-180 mg) foi submetido a desproteção com HC1 para dar o éster de amina (R7=-CH2CH3; P2 removido) como um sal de HC1 (120 mg).
Preparação 23 Éster Etílico do Ácido (2S, 4S)-4-Amino-5-(2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetilpentanóico
A uma solução de éster t-butílico do ácido (S)-2-(4-bromobenzil)-5-oxopirrolidina-l-carboxilico (18,4 g, 52 mmol) em 1,4-dioxano (500 mL) foi adicionado ácido 2-fluorofenilborónico (8,7 g, 63 mmol) e Pd(dppf)2Cl2 (3,8 g, 5,2 mmol) à temperatura ambiente sob azoto. Após agitação durante 10 minutos, foi adicionada uma solução de K2C03 (14,4 g, 104 mmol) em água (50 mL) . A mistura foi aquecida para 80 2C e agitada a esta temperatura durante 5 horas. Após evaporação do solvente, foi adicionada água (300 mL) e a mistura foi extraída com EtOAc (3x200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (400 mL) , secas sobre Na2SC>4 e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia em coluna (hexanos:EtOAc=8:1) para dar o Composto 1 (17,3 g) como um óleo vermelho. LC-MS: 392 [M+Na].
Uma mistura de Composto 1 (17,3 g, 46,7 mmol) e t-butoxi- N,N,N',N'-tetrametilmetanodiamina (24,4 g, 140 mmol) foi aquecida para 80 2C, sob azoto. Após agitação, durante 3 horas, a 80 2C, a mistura foi diluída com EtOAc (300 mL) e lavada com água (2x150 mL) , NaCl aquoso saturado (150 mL) , seca sobre MgS04, filtrada e evaporada para dar o Composto 2 em bruto (20,6 g) como um óleo vermelho. LC-MS: 425 [M+H], 849 (2M+H).
A uma solução de Composto 2 em bruto (20,6 g, 48,6 mmol) em THF (300 mL) , foi adicionado HC1 1 M (58 mL, 58 mmol) a 0 2C sob azoto. Após agitação, durante 1 hora, à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com EtOAc (100 mL) e ajustada com NaHC03 aquoso saturado para um pH de 7. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x150 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2x150 mL) e NaCl aquoso saturado (150 mL), secas sobre MgS04, filtradas e evaporadas para dar o Composto 3 em bruto (18,9 g) como um óleo vermelho. LC-MS: 420 (M+Na), 817 (2M+Na). A uma solução de Composto 3 em bruto (18,9 g, 47,6 mmol) em THF anidro (400 mL) foi adicionado EtOH anidro (50 mL) e AcOH (57,2 g, 952 mmol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 30 minutos, depois NaBH3CN (15 g, 238 mmol) foi adicionado em pequenas partes durante 1 hora. Após agitação durante mais 1 hora, a -5 2C, a mistura foi ajustada com NaHC03 aquoso saturado para um pH de 7. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x200 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2x150 mL) e NaCl aquoso saturado (150 mL) , secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=6:1) para dar o Composto 4 (7,1 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 422 (M+Na), 821 (2M+Na).
A uma solução de Composto 4 (7,1 g, 17,7 mmol) em EtOH anidro (500 mL) foi adicionado K2C03 anidro (9,8 g, 70,8 mmol), a 0 2C, sob azoto. Após agitação durante 1 hora a 0 2C, a mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 16 horas. Após filtração, o filtrado foi concentrado e o residual foi diluído com água (150 mL) , DCM (200 mL) e NaCl aquoso saturado (50 mL). Após separação, a camada aquosa foi extraída com DCM (2x150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (2x200 mL), secas sobre MgS04, e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia em coluna (hexanos:EtOAc=5:1) para dar o Composto 5 (2 g) como um sólido amarelo-claro. Foram também obtidos 2,1 g dos isómeros (R,S) como um sólido amarelo-claro.
O Composto 5 (400 mg, 0,9 mmol) foi dissolvido em MeCN (3 mL) e HC1 4 M em dioxano (0,5 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente, durante 1 hora, depois concentrada para dar o composto em epígrafe como um sal de HC1 (340 mg) , o qual foi formado como um óleo e solidificado de um dia para o outro.
Preparação 24 Éster t-Butílico do Ácido [ (R) -2-Bifenil-4-il-l-(2,2,5-trimetil-4,6-dioxo-l,3-dioxinan-5-ilmetil)etil]carbâmico
AcOH (8,6 mL) foi adicionado a uma solução de éster t-butilico do ácido [(R)-l-bifenil-4-ilmetil-2-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-il)-2-oxo-etil]-carbâmico em bruto (6,4 g, 14 mmol) em MeCN anidro (90 mL) foi adicionado AcOH (8,6 mL), a -5 2C, sob azoto. A mistura foi agitada a -5 2C durante 30 minutos, depois boro-hidreto de sódio (1,3 g, 34,5 mmol) foi adicionado em pequenas partes durante 2 horas. Após agitação durante mais 1 hora, a -5 2C, foi adicionado NaCl aquoso saturado e NaCl 1,7 M em água (30 mL). As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x30 mL) e água (2x30 mL) , seca sob MgSCg, filtrada e evaporada. O produto em bruto resultante foi purificado adicionalmente por cromatografia (5:1 heptano:EtOAc) para dar éster t-butilico do ácido [(S)-2-bifenil-4-il-l-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-ilmetil)etil]carbâmico (1,1 g, pureza 98,4%) como um sólido amarelo-claro.
Éster t-butilico do ácido [(S)-2-bifenil-4-il-l-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-ilmetil)-etil]carbâmico (5,0 g, 11 mmol) e K2C03 (1,8 g, 13,2 mmol) foram dissolvidos em DMF (33,9 mL) e arrefecidos para 0 2C com agitação sob azoto. Foi adicionado iodeto de metilo (892 pL) e a mistura resultante foi agitada, a 0 2C, durante 1 hora. A mistura foi deixada a aquecer para a temperatura ambiente. Foram adicionados NaCl aquoso saturado (35 mL) e EtOAc (35 mL) , e a mistura resultante foi agitada durante 2 minutos. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi evaporada. 0 residuo foi triturado com EtOAc (20 mL). O sólido foi removido por filtração e seco sob vácuo. O filtrado foi concentrado e triturado com EtOAc para dar o composto em epígrafe (3, 9 g) .
Preparação 25 Ácido (2S, 4R)-5-Bifenil-4-il-4-t-butoxicarbonilamino-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (P2=BOC) e Ácido {2S,4R)~4-Amino- 5-bifenil-4-il-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (P2 removido)
Água Destilada (140 mL) foi purgada 30 minutos sob azoto, depois canulada para um recipiente contendo 0,1 M de diiodeto de samário em THF (800 mL) , tendo o cuidado para não permitir que qualquer ar entre em contacto com a solução. Enquanto mantendo uma atmosfera de azoto, foi adicionada uma solução desgaseifiçada de éster t-butílico do ácido [(R)-2-bifenil-4-il-l-(2,2,5- trimetil-4,6-dioxo-l,3-dioxinan-5-ilmetil)etil]carbâmico (3,7 g, 8,0 mmol) e THF (100 mL) por meio de cânula. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos, depois exposta ao ar. Foram adicionados NaCl aquoso saturado (12 mL), ácido cítrico a 10% (6 mL) e EtOAc (30 mL). A mistura foi agitada, durante 5 minutos, depois, foram extraídas ambas as camadas. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada sob vácuo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (coluna de outro de 330 g, EtOAc a 50% com gradiente AcOH a 0,5%/éter) para dar o ácido protegido com BOC. (P2=BOC) (1,4 g) . O ácido protegido com BOC foi dissolvido em MeCN (10 mL), seguido pela adição de HC1 4 N em dioxano (10 mL) . O solvente foi evaporado e o produto azeotropado com tolueno (2x) para dar o ácido. (P2 removido) (1,0 g) .
Preparação 26 Éster Etílico do Ácido (2S, 4R)-4-Amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximeti1-2-metilpentanóico
Ácido (2S,4R)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil-2- metilpentanóico (0,3 g, 957 pmol) foi combinado com EtOH (6 mL) e 4 M de HC1 em 1,4-dioxano (718 pL) e agitado, de um dia para o outro. Os solventes foram evaporados e o produto foi azeotropado com tolueno (2x) para dar o composto em epígrafe (295 mg), o qual foi utilizado sem purificação adicional.
Preparação 27 Éster t-Butílico do Ácido [(R)-1-(3'-Fluorobifenil-4-ilmetil)-2-(2,2,5-trimetil-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-il)-etil]carbâmico
A uma solução de ácido (R)-2-amino-3-(4-bromo-fenil)propiónico (50 g, 0,2 mol) em MeCN (700 mL) foi adicionada uma solução de NaOH (16,4 g, 0,4 mol) em água (700 mL), a -5 2C. Após agitação, durante 10 minutos, foi adicionada uma solução de (Boc) 20 (44,7 g, 0,2 mol) em MeCN (100 mL) . A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. Após a evaporação do MeCN, o resíduo foi diluído com DCM (800 mL) e acidificado com HC1 1 M para pH 2, a -5 2C. A camada aquosa foi extraída com DCM (3x200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (500 mL) , secas sobre Na2S04 e concentradas para dar o Composto 1 (66,5 g, sólido branco. LC-MS: 366 (M+Na), 709 (2M+Na). A uma solução de Composto 1 (64,2 g, 187 mmol) em 1,4-dioxano (500 mL) foi adicionado ácido 3-fluorofenilborónico (31,3 g, 224 mmol) e Pd(dppf)2Cl2 (13,7 g, 19 mmol), à temperatura ambiente, sob azoto. Após agitação, durante 10 min, foi adicionada uma solução de K2CO3 (51,7 g, 374 mmol) em água (250 mL). A mistura foi aquecida para 100 2C e agitada de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, foi adicionada água (200 mL). A camada aquosa foi acidificada com HC1 1 M para pH 2 e extraída com EtOAc (3x200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (400 mL) , secas sobre Na2S04 anidro, e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia em coluna (hexanos:EtOAc=4:1) para dar o Composto 2 (45 g, óleo amarelo-claro). LC-MS: 382 [M+Na], 741 [2M+Na].
A uma solução de Composto 2 (45 g, 125 mmol) , ácido de Meldrum (23,5 g, 163 mmol), e DMAP (26,0 g, 213 mmol) em DCM anidro (500 mL) foi adicionado a solução de DCC (33,3 g, 163 mmol) em DCM anidro (200 mL) durante 1 hora, a -5 2C, sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 8 horas, depois refrigerada de um dia para o outro, durante o qual pequenos cristais de diciclo-hexilureia precipitaram. Após filtração, a mistura foi lavada com KHSO4 a 5% (4x200 mL) e NaCl aquoso saturado (1x200 mL), depois seca sob refrigeração com MgS04 anidro de um dia para o outro. A solução foi evaporada para dar o Composto 3 em bruto (57,7 g, óleo amarelo-claro) . LC-MS: 508 [M+Na], 993 [2M+Na].
A uma solução do Composto 3 em bruto (57,7 g, 119 mmol) em DCM anidro (1 L) foi adicionado AcOH (78,4 g, 1,3 mol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 0,5 horas, depois NaBH4 (11,3 g, 0,3 mol) foi adicionado em pquenas partes durante 1 hora. Após agitação durante mais 1 hora a -5 2C, foi adicionado NaCl aquoso saturado (300 mL) . A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x300 mL) e água (2x300 mL) , seca sobre MgS04 anidro, filtrada e concentrada para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=6:1) para dar o Composto 4 (28 g, óleo amarelo-claro). LC-MS: 494 [M+Na], 965 [2M+Na]. A uma solução de Composto 4 (28 g, 60 mmol) em DMF anidro (250 mL) foi adicionado K2C03 (9,9 g, 72 mmol) e CH3I (25,6 g, 180 mmol) a 0 2C sob azoto. Após agitação durante 1 hora a 0 2C, a mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A mistura foi diluída com água (3 L) e extraída com EtOAc (3x300 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (500 mL) , secas sobre
Na2S04 anidro e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=5:1) para dar o composto em epígrafe (11,7 g, sólido amarelo-claro) . LC-MS: 508 [M+Na], 993 [2M+Na] . RMN de ΤΗ (300 MHz, CD3OD) : 57,52-7,49 (m, 2H), 7,41-7,39 (m, 2H) , 7,32-7,27 (m, 3H) , 7,07-7,01 (m, 1H) , 6,21-6,18 (d, 1H) , 3,79 (m, 1H) , 2,78-2,61 (m, 2H) , 2,35-2,20 (m, 2H) , 1,76 (s, 6H) , 1,59 (s, 3H), 2,21 (s, 1H), 1,28 (s, 9H).
Preparação 28 Ácido (2S,4R)-4-t-butoxicarbonilamino-5-(3'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (P2=BOC) e Ácido (2S,4R)~4-amino-5-(3'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (P2 removido)
Água Destilada (181 mL) foi purgada 1 hora sob azoto, depois canulada para um recipiente contendo 0,1 M de diiodeto de samário em THF (800 mL) . Enquanto se mantém uma atmosfera de azoto, foi adicionada uma solução similarmente desgaseifiçada de éster t-butilico do ácido [ (R)-1-(3'-fluorobifenil-4-ilmetil)-2-(2,2,5-trimetil-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-il)-etil]-carbâmico (4,9 g, 10,0 mmol) e THF (20 mL) por meio de cânula. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos, depois, exposta ao ar. O solvente foi evaporado, e foram adicionados EtOAc (200 mL), NaCl aquoso saturado (50 mL) e ácido cítrico a 10% (20 mL). A mistura foi agitada, durante 5 minutos, depois, ambas as camadas foram extraídas. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada sob vácuo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (coluna de outro 330 g, 1:1 éter:EtOAc com AcOH a 0,5%) para dar o ácido protegido com BOC. (P2=BOC) (1,5 g) . Uma parte do ácido protegido com BOC foi dissolvida em HC1 4 M em dioxano (6 mL) e MeCN (10 mL). O solvente foi evaporado sob vácuo para dar o ácido (P2 removido).
Preparação 29 Éster Metílico do Ácido 3-(N-Bifenil-4-ilmetil-N'-t-butoxicarbonil-hidrazino)-2-hidroxi-2-metilpropiónico
4-(Bromometil)bifenilo (2,00 g, 8,09 mmol) e DIPEA (1,4 mL, 8,1 mmol) foram dissolvidos em DMF (40,0 mL), depois, foi adicionado carbazato de t-butilo (2,1 g, 16,2 mmol) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi parcialmente concentrada, e o resíduo foi particionado entre EtOAc e NaHCCh aquoso saturado. A camada de EtOAc foi seca sobre Na2S04 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (0-60% de EtOAc/hexanos com DIPEA a 0,5%) para dar o Composto 1 (1,3 g.)
0 Composto 1 (460 mg, 1,5 mmol) foi dissolvido em álcool isopropilico (10,0 mL) , depois foi adicionado 2-metilglicidato de metilo (180 pL, 1,7 mmol) e a mistura foi aquecida para 85 2C, de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi particionada entre EtOAc e NaHC03 aquoso saturado. A camada de EtOAc foi depois seca sobre Na2S04 e concentrada para dar o composto em epígrafe (0,5 g) , o qual foi utilizado sem purificação adicional.
Preparação 30 Éster Metílico do Ácido (R)-3-[N-(4-Bromobenzil)-N'-t-butoxicarbonil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Brometo de 4-bromobenzilo (5,0 g, 20 mmol) e DIPEA (3,48 mL, 20,0 mmol) foram dissolvidos em DMF (20 mL) . Foi adicionado carbazato de t-butilo (7,9 g, 60,0 mmol) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar complete. A mistura foi parcialmente concentrada, depois, o resíduo foi particionado entre EtOAc e NaHCCt aquoso saturado. A camada de EtOAc foi depois seca sobre Na2SC>4 e concentrada. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash para dar o Composto 1 (3,8 g).
0 Composto 1 (1,9 g, 6,3 mmol) foi dissolvido em álcool isopropílico (26,4 mL) . Foi adicionado (2R)-glicidato de metilo (1,1 mL, 12,6 mmol) e a mistura foi aquecida a 90 2C até a reação estar completa (~4 dias). A mistura foi arrefecida para a temperatura ambiente e concentrada para dar o composto em epígrafe (2,5 g) como um sólido branco.
Preparação 31 Éster Etílico do Ácido {R)-3-[N-(3'-clorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Éster metílico do ácido (R)-3-[N-(4-bromobenzil)-N'-t- butoxicarbonil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico (600 mg, 1 mmol), ácido 3-clorofenilborónico (419 mg, 2,7 mmol), e K2C03 (617 mg, 4,5 mmol) foram combinados em EtOH (5 mL) e água (1 mL), seguido pela adição de SilicaCat®Pd(0) (0,09 mmol/g de carga, 1160 mg, 104 pmol). A mistura foi aquecida num reator de micro-ondas a 120 2C até a reação estar completa ( — 30 minutos) . A mistura foi filtrada e concentrada. O resíduo foi dissolvido em MeCN/AcOH e purificado por cromatografia de fase inversa (coluna 55 g; gradiente MeCN a 30-95% em água com TFA a 0,1%) . As frações límpidas foram recolhidas, concentradas e, depois, dissolvidas em HC1 4 M em dioxano (6 mL) e EtOH (6 mL) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro, depois concentradas para dar o composto em epígrafe (250 mg) , o qual foi utilizado sem purificação adicional.
Preparação 32 Éster t-Butílico do Ácido (S)-2-(1-Bifenil-4-il-l-metiletil)-5-oxo-pirrolidina-l-carboxílico
A uma solução de 2-(4-bromofenil)acetonitrilo (130,0 g, 0,7 mol) e iodometano (103,9 mL, 1,7 mol) em THF (1,0 L) foi adicionado NaH (dispersão a 60% em óleo mineral, 66,7 g, 1,7 mol) em pequenas partes, a 10 2C. Após conclusão da adição, a mistura foi agitada, a 10 2C, durante mais 2 horas. A mistura foi
vertida em água gelada (2,0 L) e extraída com EtOAc (1,5 L). A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado, seca sobre MgS04 anidro e concentrada, para dar o composto 1 (175 g, contendo óleo mineral) como um óleo amarelo, o qual foi utilizado diretamente sem purificação adicional. RMN de ΧΗ (CDC13, 300 MHz) δ 7,52 (d, J=9,0 Hz, 2H) , 7,38 (d, J=9,0 Hz, 2H), 1,72 (s, 6H). A uma solução de Composto 1 (175 g, contendo óleo mineral) em DCM (1,0 L) foi adicionado, gota a gota, DIBAL (solução 1,0 M em DCM, 700 mL, 0,70 mol), a -78 2C. A mistura de reação foi agitada, a -78 2C, durante 1,5 horas e, depois, cuidadosamente mitigada com HC1 3,0 N (1,0 L). A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro, e a camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado, seca sobre Na2S04 anidro e concentrada, para dar o Composto 2 (180 g) como um óleo amarelo, o qual foi utilizado diretamente sem purificação adicional. RMN de ΧΗ (CDCI3, 300 MHz) δ 9,48 (s, 1H), 7,53 (d, J=11, 0 Hz, 2H), 7,17 (d, J=11,0 Hz, 2H), 1,46 (s, 6H) .
A uma solução aquosa de NaCN (32,7 g em 1,0 L de H20, 0,7 mol) foram adicionados (NH4)2C03 (380 g, 4,0 mol) e Composto 2 (180 g) . A mistura de reação foi submetida a refluxo, de um dia para o outro e, depois, concentrada sob pressão reduzida, a 75 2C. Foi adicionada água (350 mL) ao resíduo e a mistura foi novamente concentrada. O resíduo foi suspenso em éter de petróleo (700 mL) e água (250 mL) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 15 minutos. O precipitado foi recolhido por filtração e seco, para dar o Composto 3 (150 g) como um sólido branco. RMN de ΤΗ (DMSO-d6, 300 MHz) δ 10,39 (s, 1H) , 8,05 (s, 1H) , 7,48 (d, J=9,0 Hz, 2H) , 7,28 (d, J=9, 0 Hz, 2H) , 4,17 (s, 1H), 1,42 (s, 3H) , 1,34 (s, 3H) .
Um suspensão de Composto 3 (150 g, 0,51 mol) em NaOH 6,0 N (400 mL) e etano-1,2-diol (300 mL) foram agitados a 120 2C, durante 38 horas. A mistura foi arrefecida para a temperatura ambiente e neutralizada com uma solução de HC1. O precipitado foi recolhido por filtração e seco, para dar o Composto 4 (250 g, contendo sal de NaCl) como um sólido branco. RMN de 1H (DMSO-d6, 300 MHz) δ 7,35 (d, J=9,0 Hz, 2H) , 7,17 (d, J=9,0 Hz, 2H), 3,22 (s, 1H), 1,16 (s, 3H), 1,15 (s, 3H). A uma suspensão de Composto 4 (250 g, contendo sal de NaCl) em MeOH (1,0 L) foi adicionado, gota a gota, cloreto de tionilo (72,0 mL, 1,0 mol) a 5 2C. A mistura foi submetida a refluxo, de um dia para o outro, e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O residuo foi particionado entre DCM (1,0 L) e NaHC03 aguoso saturado (1,5 L) . A camada orgânica foi lavada com NaCl aguoso saturado, seca sobre Na2S04 anidro e concentrada, para dar o éster metilico correspondente (90,0 g). Foi adicionado, gota a gota, cloreto de 2-fenilacetilo (48,6 g, 0,32 mol) a uma solução do éster (90,0 g) e Et3N (56,5 mL, 0,41 mol) em DCM (1,0 L) a 0 2C e a mistura foi agitada a, 0 2C, durante 30 minutos. A mistura foi lavada com HC1 1,0 N (500 mL) e NaCl aquoso saturado, respetivamente. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 anidro e concentrada para dar o Composto 5 (12 0 g) . RMN de ΤΗ (CDC13, 300 MHz) δ 7,32 (m, 5H) , 7,18 (m, 2H) , 6,95 (m, 2H) , 5,68 (br s, 1H) , 4,76 (d, J=9,0 Hz, 1H) , 3,57 (s, 3H) , 3,53 (d, J=5,0 Hz, 2H), 1,30 (s, 3H), 1,25 (s, 3H).
A uma solução de Composto 5 (120 g, 0,30 mol) em MeOH (500 mL) foi adicionado NaOH 4,0 N (200 mL) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 4 horas e, depois, o pH foi ajustado para pH=l com HC1 3,0 N. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2x300mL). Os extratos combinados foram lavados com NaCl aquoso saturado, secos sobre Na2S04 anidro e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi recristalizado a partir de EtOAc/hexanos, para dar o Composto 6 (82,0 g). RMN de ΧΗ (DMSO-d6, 300 MHz) δ 7,41 (d, J=6, 0 Hz, 2H) , 7,22 (m, 5H) , 6,99 (d, J=6, 0 Hz, 2H) , 4,65 (d, J=9, 0 Hz, 1H) , 3,52 (d, J=14, 0 Hz, 1H) , 3,36 (d, J=14,0 Hz, 1H) , 1,34 (s, 3H) , 1,30 (s, 3H) .
Uma suspensão de Composto 6 (82,0 g, 0,21 mol) em água destilada (3,0 L) foi ajustada para pH=8,5 com LiOH 3,0 N e foi formada uma solução límpida. Foi adicionada Penicilinase imobilizada (20,0 g) e a mistura resultante foi agitada a 37 2C, durante 60 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi ajustado para pH=l com HC1 3,0 N e extraída com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com NaCl aquoso saturado, secos sobre Na2S04 anidro e concentrados, para dar o Composto 7 (59,0 g, 80% ee, contendo ácido 2-fenilacético).
Uma suspensão do Composto 7 (59,0 g, contendo ácido 2-fenilacético) em HC1 6,0 N (500 mL) foi submetida a refluxo, de um dia para o outro. A mistura foi lavada com EtOAc (300 mL) e a fase aquosa foi concentrada sob pressão reduzida para dar o aminoácido correspondente como o seu sal cloridrato. 0 sal foi dissolvido em água (300 mL) e a solução foi ajustada para pH=ll. Foi adicionada uma solução de (BOO2O (33,0 g, 0,2 mol) em acetona (200 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas. A mistura foi lavada com hexanos (200 mL) e a fase aquosa foi ajustada para pH=2. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2x300 mL) . Os extratos combinados foram lavados com NaCl aquoso saturado, secos sobre Na2S04 anidro e concentrados, para dar o Composto 8 (37,0 g) como um sólido branco. RMN de 1R (CDC13, 300 MHz) δ 9,48 (br s, 1H) , 7,46 (d, J=7,0 Hz, 2H) , 7,26 (d, J=7,0 Hz, 2H) , 5,02 (br s, 1H) , 4,56 (d, J=9,0 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H).
Uma mistura de Composto 8 (37,0 g, 0,1 mol) em dioxano (200 mL) e K2C03 1,0 N (200 mL) foi desgaseifiçada durante 30 minutos com azoto, seguido pela adição de ácido fenilborónico (13,4 g, 0,1 mol) e Pd(PPh3)4 (1,6 g, 1,4 mmol) . A mistura foi aquecida a 75 2C, durante 8 horas e, depois, arrefecida para a temperatura ambiente. A mistura foi lavada com EtOAc/hexanos (150 mL, 1:1) e a fase aquosa foi ajustada para pH=2 e extraída com EtOAc (2x300 mL) . Os extratos combinados foram lavados com NaCl aquoso saturado, secos sobre Na2S04 anidro e concentrados, para dar o Composto 9 (31,0 g, rendimento 84%) como um sólido branco.
Uma solução de Composto 9 (31,0 g, 84 mmol), ácido de
Meldrum (13,3 g, 92 mmol) e DMAP (15,4 g, 0,13 mol) em DCM (400 mL) foram arrefecidos para -5 2C e foi adicionada uma solução de DCC (19,0 g, 92 mmol) em DCM (200 mL) , durante 1 hora. A mistura foi agitada, a -5 2C, de um dia para o outro. O precipitado foi removido por filtração e o filtrado foi lavado com HC1 1,0 N (2x700 mL) e NaCl aquoso saturado, respetivamente. Após a camada orgânica contendo o Composto 10 ter sido seca sobre MgS04 anidro, foi utilizada diretamente para o passo seguinte sem concentração.
Uma solução de Composto 10 em DCM (600 mL) foi arrefecia para -5 2C e foi adicionado AcOH (45,0 mL) . Depois, NaBH4 foi adicionado, em pequenas partes (7,0 g, 0,2 mol), durante 30 minutos e a mistura foi agitada, a -5 2C, durante 3 horas. Foi adicionada, gota a gota, água (50,0 mL), seguido por adição de NaCl aquoso saturado (450 mL) . A camada orgânica foi lavada com água (2x300 mL) e NaHC03 aquoso saturado (2x300 mL) , seca sobre MgS04 anidro e concentrada, para dar o composto 11 (32,0 g, 75% ee) como um sólido esbranquiçado. Após recristalização a partir de EtOH, foi obtido o Composto 11 quiralmente puro (13,0 g) . RMN de ^ (CDC13, 300 MHz) δ 7,61 (m, 10H) , 4,46 (br s, 1H) , 4,26 (m, 1H) , 3,72 (br s, 1H) , 2,23 (m, 1H) , 1,79 (s, 3H) , 1,76 (s, 3H), 1,48 (s, 6H), 1,39 (s, 9H).
Uma solução de composto 11 (13,0 g, 27,0 mmol) em tolueno (100,0 mL) foi submetida a refluxo durante 3 horas. Após evaporação do solvente, o residuo foi recristalizado a partir de hexanos/EtOAc (3:1), para dar o composto em epígrafe (8,0 g) como um sólido branco.
Preparação 33 Éster Etílico do Ácido (2.R, 4S)-4-Amino-5-bifenil-4-il-2-hidroxi-5-metil-hexanóico
Uma mistura de éster t-butílico do ácido (S)-2-(l-bifenil-4-il-l-metiletil)-5-oxo-pirrolidina-l-carboxílico (14,0 g, 36,9 mmol, racémica) numa solução HCl-EtOAc 3,0 N (150 mL) foi agitada, à temperatura ambiente, durante 3 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida, para dar o Composto 1 (10,0 g) como um sólido branco.
A uma solução de Composto 1 (10,0 g, 35,8 mmol) em THF (80,0 mL) foi adicionado, gota a gota, BuLi (2,5 M em hexanos, 15,0 mL) , a -78 2C. Após a mistura ser agitada durante 30 minutos foi adicionado, gota a gota, cloreto de pivaloílo (4,8 mL, 39,4 mmol) . A mistura foi agitada, a -78 2C, durante 1 hora e, depois, mitigada com NH4C1 aquoso saturado. A mistura resultante foi extraída com EtOAc e os extratos combinados foram lavados com NaCl aquoso saturado, secos sobre MgS04 anidro e concentrados. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash sobre sílica gel, para dar o Composto 2 (9,0 g) como um sólido branco.
A uma solução de Composto 2 (9,0 g, 24,7 mmol) em THF (50,0 mL) foi adicionado bis (trimetilsilil)amida sódica (2,0 M em THF, 18,5 mL, 37,0 mmol), gota a gota, a -78 2C. A mistura foi agitada durante 20 minutos e foi adicionada, gota a gota, uma solução de derivado de oxaziridina (10,8 g, 37,0 mmol) em THF (30,0 mL) . A mistura foi agitada, a -78 2C, durante 30 minutos e, depois, mitigada com NH4C1 aquoso saturado. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (1,0 L) e o extrato foi lavado com HC1 1,0 N e NaCl aquoso saturado, seco sobre MgS04 anidro e evaporado para remover a maior parte do solvente. O precipitado foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash sobre silica gel (DCM:hexanos=l:1 para DCM), para dar o composto 3 (4,3 g, racémico). Este racemato foi submetido a cromatografia em coluna AD quiral para dar o composto 3 quiralmente puro (1,4 g) . RMN de XH (DMSO-d6, 300 MHz) δ 7,63 (m, 4H) , 7,49 (m, 4H) , 4,83 (d, 1H) , 3,29 (m, 1H) , 2,31 (m, 2H) , 1,40 (s, 3H) , 1,36 (s, 3H), 1,28 (s, 9H). LC-MS (ESI): m/z 380,1 [M+H]+.
Uma solução de Composto 3 (1,7 g, 160 mmol) e EtOH (15,0 mL) e HC1 12,0 N (15,0 mL) foi aquecida para 90-95 2C, durante 20 horas. O solvente foi removido e o resíduo foi tratado com uma solução de HCl-EtOH 3,0 N (25,0 mL) sob refluxo, durante mais 3 horas. Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado por HPLC preparativa, para dar o composto em epígrafe (0,6 g) como um sal de HC1 sólido espumoso. RMN de ΤΗ (DMSO-d6, 300 MHz) δ 7,88 (br s, 3H) , 7,68 (m, 4H) , 7,49 (m, 4H) , 7,35 (m, 1H) , 6,11 (br s, 1H) , 4,11 (br s, 1H) , 4,05 (q, 2H) , 3,61 (br s, 1H) , 1,67 (m, 2H) , 1,40 (s, 3H) , 1,36 (s, 3H) , 1,09 (t, 3H) , LC-MS (ESI): m/z 342,1 [M+H] +.
Preparação 34 Éster Etílico do Ácido (2S,4S)-4-Amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil-5-metil-hexanóico
Uma mistura de éster t-butílico do ácido (S)-2-(l-bifenil-4-il-l-metiletil)-5-oxo-pirrolidina-l-carboxílico (8,0 g, 21,2 mmol) e t-butoxi-N,N,N',N'-tetrametilmetanodiamina (10,0 g, 63,6 mmol) foi aquecida, a 80 2C, durante 3 horas. A mistura foi arrefecida para a temperatura ambiente e diluída com EtOAc (200 mL). A solução resultante foi lavada com água (2x100 mL) e NaCl aquoso saturado, seca sobre MgSCq anidro e concentrado para dar o Composto 1 (9,2 g, quantitativo) como um óleo. RMN de (CDC13, 300 MHz) δ 7,53 (m, 9H) , 6,95 (s, 1H) , 4,60 (br s, 1H) , 2,90 (s, 1H) , 2,62 (m, 2H) , 1,61 (s, 9H) , 1,39 (s, 3H) , 1,34 (s, 3H) .
A uma solução de Composto 1 (9,2 g, 21,2 mmol) em THF (80,0 mL) foi adicionado HC1 1,0 N (25,0 mL) a 0 2C. A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas e, depois, diluída com EtOAc (100 mL). A mistura resultante foi neutralizada com NaHC03 aquoso saturado e extraída com EtOAc (2x100 mL) . Os extratos combinados foram lavados com água (2x100 mL) e NaCl aquoso saturado, secos sobre MgS04 anidro e concentrados para dar 0 Composto 2 (8,6 g, quantitativo) como um óleo. LC-MS (ESI) : m/z 430,1 [M+Na]+.
A uma solução de Composto 2 (8,6 g, 21,2 mmol) em THF (150 mL) e EtOH (15,0 mL) foi adicionado AcOH (24,3 mL, 0,4 mol) a -5 2C. Após a mistura ser agitada, a -5 2C, durante 30 minutos, NaBH3CN (5,3 g, 84,8 mmol) foi adicionado em pequenas partes durante 1 hora. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 1 hora e neutralizada com NaHC03 aquoso saturado. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (2x100 mL) . Os extratos combinados foram lavados com água (2x100 mL) e NaCl aquoso saturado, secos sobre MgS04 anidro e concentrados para dar o Composto 3 (8,67 g, quantitativo) como um sólido espumoso.
A uma solução de Composto 3 (3,5 g, 8,6 mmol) em EtOH
(30,0 mL) foi adicionado K2C03 (2,4 g, 17,1 mmol) a 0 2C. A mistura foi agitada a 0 2C durante 1 hora e depois deixada para aquecer à temperatura ambiente e agitada, de um dia para o outro. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado. 0 resíduo foi tratado com água (20 mL) e a mistura resultante foi extraída com DCM (3x25 mL). Os extratos combinados foram lavados com NaCl aquoso saturado, secos sobre MgS04 anidro e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna sobre sílica gel (hexanos:EtOAc=6:1) para dar o
Composto 4 (2,2 g) como um sólido espumoso. RMN de ΤΗ (CDCI3, 300 MHz) δ 7,53 (m, 9H) , 4,35 (br s, 1H) , 4,15 (m, 2H) , 3,95 (br s, 1H) , 3,65 (m, 2H) , 2,61 (br s, 1H) , 1,79 (m, 1H) , 1,45 (s, 9H) , 1,35 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,25 (t, 3H), LC-MS (ESI): m/z 478,2 [M+Na]+.
Uma mistura de Composto 4 (2,2 g, 4,8 mmol) numa solução HCl-EtOH 2,0 N (30,0 mL) foi agitada, à temperatura ambiente, durante 3 horas. A remoção do solvente sob pressão reduzida deu o composto em epígrafe (1,6 g) como um sal de HC1 sólido espumoso. RMN de ΧΗ (DMSO-d6, 300 MHz) δ 8,08 (br s, 3H), 7,55 (m, 9H), 4,95 (br s, 1H) , 3,95 (m, 2H) , 3,48 (m, 2H) , 2,75 (br s, 1H) , 1,79 (m, 2H) , 1,47 (s, 3H) , 1,40 (s, 3H) , 1,09 (t, 3H) . LC-MS (ESI): m/z 356,1 [M+H]+.
Preparaçao 35 Éster Etílico do Ácido 3-[N-(4-Bromobenzil)hidrazinol-2-hidroxipropiónico
Uma solução de éster metílico do ácido (í?)-3-[N-(4-bromobenzil)-Ν'-t-butoxicarbonil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico (25 g, 62 mmol) em EtOH/HCl (310 mL, 1,0 M, 0,3 mol) foi agitada, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada e o resíduo foi lavado com EtOAc (120 mL) e filtrada para dar o composto em epígrafe como um sal de HC1 sólido branco (15 g).
Preparação 36 Éster Etílico do Éster (R)-2-[N-(4-bromobenzil)-N'-etoxioxalil-hidrazino]-1-etoxicarboniletílico do ácido oxálico
Cloreto de etil-oxalilo (70 pL, 630 pmol) foi adicionado, gota a gota, a uma solução de éster etílico do ácido 3-[N-(4-bromobenzIl)hldrazino]-2-hidroxipropiónico (200 mg, 630 pmol) e Et3N (220 pL, 1,6 mmol) em DCM (4,0 mL, 62,2 mmol) a 0 2C. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos, a 0 2C, e durante 15 minutos, à temperatura ambiente. Foi adicionada água (3 mL) , as camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM (2x2 mL) . As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre MgSOí, e concentradas para dar o composto em epígrafe (275 mg).
Preparação 37 Éster t-Butílico do Ácido N'-(4-Bromobenzil)hidrazina-carboxílico
A uma solução agitada de carbazato de t-butilo (50 g, 0,4 mol) em THF seco (400 mL) foi adicionada, gota a gota, uma solução de 4-bromobenzaldeído (70 g, 0,4 mol) em THF seco (200 mL) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas e, depois, concentrada in vacuo para dar o Composto 1 como um sólido amarelo (113,8 g). LC-MS: 243 [M-tBu+H]+. A uma solução de Composto 1 (113,8 g, 0,4 mol) em THF seco (1 L) foi adicionado NaCNBH3 (36 g, 0,6 mol) em partes, a 0 2C. Foi adicionado, gota a gota, AcOH (180 mL) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro.
Foram adicionados água (2 L) e EtOAc (1,5 L) e a fase aquosa foi ajustada para pH=7 com uma solução aquosa saturada de Na2C03. A camada orgânica foi separada, lavada com NaCl aquoso saturado e água (200 mL), seca sobre Na2S04 anidro, e concentrada in vacuo. Ο resíduo foi tratado com MeOH (2 L) e NaOH 1 N (1,5 L) e, depois, agitado, à temperatura ambiente, durante 2 horas. Após a remoção do solvente de MeOH, o precipitado foi recolhido por filtração para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (112 g) . LC-MS: 245 [M-tBu+H]+.
Preparação 38 Éster Metílico do Ácido (-R)-3-[Ν'-t-Butoxicarbonil-N-(5 '-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico
A uma solução de éster t-butílico do ácido N'-(4-bromobenzil)hidrazinacarboxílico (60 g, 0,2 mol) em 1,4-dioxano (1,5 mL) foi adicionado ácido 5-cloro-2-fluorofenilborónico (38 g, 0,2 mol) e Pd(dppf)Cl2 (7,3 g) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, sob azoto, durante 10 minutos e, depois, foi adicionado K2C03 (55,2 g, 0,4 mol) em água (240 mL). A mistura resultante foi agitada, a 60 2C, durante 3 horas e, depois, arrefecida para a temperatura ambiente e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi extraído com EtOAc (3x300 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro e concentradas in vacuo. 0 produto foi purificado por cromatografia em coluna (PE:EtOAc=10:1~5:1) para dar o Composto 1 como um sólido cor-de-rosa (56 g) . LC-MS: 701 [2M+H] +.
A uma solução de Composto 1 (20 g, 57 mmol) em álcool isopropilico (250 mL) foi adicionado (2R)-glicidato de metilo (8,7 g, 86 mmol) sob azoto. A mistura foi agitada, a 85 aC, durante 3 dias, depois arrefecida para a temperatura ambiente. O sólido precipitado foi recolhido por filtração para dar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (18,5 g). LC-MS: 397 [M-tBu+H]+.
Preparação 39 Éster Etílico do Ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil- 4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Uma solução de éster metilico do ácido (R)-3-[N'-t- butoxicarbonil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4- ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (20 g, 16 mmol) em HCl/EtOH (1,1 M, 200 mL) foi agitada, de um dia para o outro e, depois concentrada in vacuo. O resíduo foi disperso em EtOAc (2x40 mL) , e o precipitado foi recolhido por filtração para dar o composto em epígrafe como um sal de HC1 sólido esbranquiçado (8,8 g). LC-MS: 367 [M+H]+. RMN de ΧΗ (300 MHz, DMSO-dff) δ 1,05 (t, J=7,2 Hz, 3 H) , 3, 05-3, 03 (q, J=7,2 Hz, 2 H) , 4, 06-3, 95 (m, 4 H) , 4,42 (br, 1 H) , 6,46 (br, 1 H) , 7, 62-7,40 (m, 7 H) , 9,42 (s, 3 H) .
Preparação 40 Éster 2-Oxo-2-feniletílico do ácido (.R)-3-[N-(5 '-cloro-2 '-fluorobifenil-4-ilmetil)hydrazino]-2-hidroxipropiónico
O éster etílico do ácido 3-[N-(4-bromobenzil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (3,1 g, 9,6 mmol) foi combinado com di-t-butildicarbonato (4,2 g, 19,2 mmol) e DCM (92,4 mL, 1,4 mol) . Foi adicionado DIPEA (5,0 mL, 28,8 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 24 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em DCM e purificado por cromatografia flash (EtOAc a 10-95% em hexanos). As frações límpidas foram recolhidas e concentradas para dar o Composto 1 como um pó branco (4,0 g).
0 Composto 1 (3,5 g, 8,4 mmol) foi combinado com ácido 5-cloro-2-fluorofenilborónico (1,8 g, 10,1 mmol) e K2C03 (3,5 g, 25,2 mmol) em EtOH (29,4 mL, 503 mmol) e água (7,6 mL, 419 mmol). A mistura resultante foi colocada sob azoto e foi, depois, adicionado SilicaCat DPP-Pd (0,28 mmol/g de carga; 3,0 g, 839 pmol). A mistura foi submetida a micro-ondas, a 120 2C, durante 15 minutos. A mistura foi depois filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado utilizando cromatografia flash (EtOAc a 10-90% em hexanos) para dar o Composto 2 (2,0 g) .
0 Composto 2 (500 mg, 1 mmol) foi combinado com K2C03 (315 mg, 2,3 mmol) em DMF (5,3 mL, 68,4 mmol) . Foi depois adicionado 2-bromoacetofenona (249 mg, 1,3 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 15 minutos. A mistura foi depois purificada utilizando cromatografia flash (EtOAc a 50-100% em Hexanos). Este material purificado (605 mg) foi depois dissolvido em MeCN (3,6 mL, 68,4 mmol) . Foi depois adicionada uma solução de HC1 4 M em 1,4-dioxano (1,4 mL, 5,7 mmol), e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora para dar o composto em epígrafe (245 mg).
Preparação 41 Ácido (R)-3-[Ν' -t-Butoxioxalil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Cloreto de t-butil-oxalilo foi preparado adicionando cloreto de oxalilo (102 pL, 1,2 mmol) a uma solução de álcool t-butílico (35 pL, 361 pmol) em éter (632 pL, 6,0 mmol). A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 15 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um líquido incolor límpido. Éster 2-oxo-2-f enilet í lico do ácido (.R)-3-[N-(5 '-cloro-2 ' -fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (55,0 mg, 120 pmol) foi dissolvido em D CM (463 pL, 7,2 mmol) . Foi adicionado cloreto de t-butil-oxalilo, e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo. 0 resíduo resultando foi dissolvido em AcOH (411 pL, 7,2 mmol) . Foi adicionado zinco (394 mg, 6,0 mmol) à mistura, a qual foi depois agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. A mistura foi filtrada e purificada (coluna de fase inversa Interchim) para dar o composto em epígrafe (25,0 mg) .
Preparação 42 Éster 5-metil-2-oxo-[1,3]dioxol-4-ilmetílico do Ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico
LiOH hidratado (3 g, 73 mmol) em água (60 mL) foi adicionado a éster metílico do ácido (R)-3-[N'-t-butoxicarbonil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (16,5 g, 36,5 mmol) em MeOH (300 mL) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas, e o MeOH foi evaporado in vacuo. A mistura foi ajustada para pH=5 com HC1 aquoso 1 M, e o resíduo foi extraído com EtOAc (2x300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro e concentradas in vácuo para dar o Composto 1 como um sólido branco (18 g) . LC-MS: 383 [M-tBu+H].
A uma solução de Composto 1 (1,5 g, 3,42 mmol), K2C03 (0,95 g, 6,84 mmol) e iodeto de potássio (20 mg) em DMF (40 mL) foi adicionada 4-(bromometil)-5-metil-l,3-dioxol-2-ona (0,8 g, 4,1 mmol) em DMF (15 mL) . A mistura resultante foi agitada, durante 4 horas, à temperatura ambiente. Foi adicionado NaCl aquoso saturado (30 mL) e a mistura foi extraída com EtOAc (2x50 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexanos/EtOAc=l:1) para dar o Composto 2 como um sólido amarelo (930 mg). LC-MS: 495 [M-tBu+H]+.
O Composto 2 (400 mg, 0,73 mmol) foi dissolvido em MeCN (20 mL) , e arrefecido para 0 2C. Foi adicionada, gota a gota, N-trimetilsililimidazole (290 mg, 1,46 mmol) e a mistura resultante foi agitada, durante 2 horas. Foi adicionado MeOH (50 mL) para mitigar a reação. A mistura foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x50 mL) e extraída com DCM (2x80 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro e concentradas in vacuo. 0 produto foi recolhido para dar o composto em epígrafe como um sólido amarelo (200 mg). LC-MS: 451 [M+H]+.
Preparação 43 Ácido (R)-3-[N'-t-Butoxioxalil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
A uma mistura de éster 2-oxo-2-feniletílico do ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (2,0 g, 4,4 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado gota a gota, 2-cloro-2-oxoacetato de t-butilo (1,5 g, 8,8 mmol) a 0 2C sob azoto. Foi depois adicionado, gota a gota, DIPEA (1,15 g, 8,8 mmol), e a mistura resultante foi agitada durante 5 minutos a 0 2C. O solvente foi removido por evaporação e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (PE:EtOAc=2:1) para dar o Composto 1 como um líquido amarelo (2,0 g). LC-MS: 5 85[M+H] +.
Uma mistura de Composto 1 (2,0 g, 3,4 mmol) e Zn (15,5 g, 240 mmol) em AcOH (15 mL) foi agitada, durante 1 hora, à temperatura ambiente, depois, filtrada. Foi adicionada água (30 mL) ao filtrado e a mistura foi extraída com EtOAc (3x40 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (2x50 mL) , secas sobre Na2S04 anidro, e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (DCM/MeOH=10:1) para dar o composto em epígrafe como um líquido amarelo (1,4 g). LC-MS: 467 [M+H]+. EXEMPLO 1 Ácido (R)-5-Bifenil-4-il-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Éster etílico do ácido (R)-4-amino-5-bifenil-4-il-2- hidroxipentanóico (sal de HC1; 47 mg, 0,2 mmol) e cloreto de etil-oxalilo (18,4 pL, 1,1 eq) foram combinados com DIPEA (52,2 pL, 0,3 mmol) em DMF (0,3 mL)/DCM (0,3 mL). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa. O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em EtOH (750 pL) e NaOH aquoso 1 M (750 pL) , e agitado, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (28,2 mg, 100% de pureza). MS m/z [M+H]+ calcd para C49H19NO6, 358,12; encontrado 358,0. EXEMPLO 2 A. Ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Uma solução de cloreto de etil-oxalilo (70,7 pL, 0,6 mmol) em DIPEA (165 pL, 0,9 mmol) foi adicionada a uma solução de éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(4-bromofenil)-2- hidroxipentanóico (100 mg, 0,3 mmol) e DCM (0,7 mL), e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos, seguido por evaporação do solvente sob pressão reduzida. Foram adicionados ácido 3-clorofenilborónico, éster de pinacol (112 mg, 468 pmol), K2C03 (97 mg, 702 pmol), EtOH (2 mL), e água (0,6 mL) , seguido pela adição de SilicaCat®Pd (0) (0,09 mmol/g de carga, 260 mg, 23,4 pmol). A mistura foi aquecida a 120 2C durante 20 minutos. A mistura de reação foi concentrada e foram adicionados 10 M de NaOH aquoso (316 pL) e THF (4,0 mL) com 1 gota de MeOH. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora. O resíduo foi dissolvido em AcOH e purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (9 mg, pureza 95%) . MS m/z [M+H]+ calcd para Ci9Hi8ClN06, 392,08; encontrado 392,4. B. Éster Etílico do Ácido {2R, 4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)- 2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de oxalilo (54,5 pL, 0,6 mmol) foi adicionado a uma solução de álcool t-butílico (56,0 pL) em éter (1,0 mL) e a mistura foi agitada, durante 1 hora, à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada sob vácuo e foi adicionada uma solução de éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (67,9 mg, 0,2 mmol) e DIPEA (102 pL, 0,6 mmol) em DCM (1,0 mL) ao resíduo líquido incolor límpido resultante. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas e concentrada sob vácuo para dar um líquido amarelo límpido. Uma TFA/DCM 1:1 (1,6 mL) foi adicionada ao líquido em bruto e a mistura de reação foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas e concentrada sob vácuo para dar um líquido amarelo límpido. 0 líquido em bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase inversa (40-90% de MeCN/H20) para dar o composto em epígrafe (25, 0 mg, pureza 95%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C21H22CINO6, 420,11; encontrado 420,1. C. Éster Etílico do Ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-4- (etoxioxalilamino)-2-hidroxipentanóico
Uma solução de cloreto de etil-oxalilo (24,6 pL, 0,2 mmol) em DCM (0,4 mL) foi adicionada a uma solução de éster etílico do ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-
hidroxipentanóico (69,6 mg, 0,2 mmol) e Et3N (69,7 pL, 0,5 mmol) em DCM (1,0 mL) a 0 2C durante um período de 10 minutos. A mistura resultante foi agitada, a 0 2C, durante 30 minutos e, depois, durante 15 minutos à temperatura ambiente. Foi adicionada água (2 mL) , as camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM (2x2 mL) . As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre Na2SC>4 e concentradas para dar um líquido amarelo límpido. 0 líquido em bruto foi purificado por cromatografia flash (coluna 4 g, 16 mL/min, utilizando 35% de EtOAc/hexanos (2 min) , 35-50% (1 min) , 50% (4 min) , 50-70% (1 min) e 70% de
EtOAc/hexanos (3 min)) para dar o composto em epígrafe (63,9 mg, pureza 90%) como um líquido incolor límpido, o qual solidificou após repousar para um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C23H26C1N06, 448,14; encontrado 448,2. D. Éster Butílico do Ácido {2R, 4R)-4-(Butoxioxalilamino)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico
Ácido p-toluenossulfónico mono-hidratado (849 pg, 4 pmol) foi adicionado a uma solução de éster etílico do ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroxipentanóico (20,0 mg, 45 pmol) em 1-butanol (0,5 mL) . A mistura de reação foi agitada, a 80 2C, durante 14 horas, a 902C durante 4 horas e, depois, foi deixada a arrefecer para a temperatura ambiente. Foi adicionado NaHC03 aquoso saturado (2 mL) , e a camada aquosa foi extraída com DCM (3x2 mL) . As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre Na2S04, e concentradas sob vácuo para dar um líquido incolor límpido. O líquido em bruto foi purificado por cromatografia flash (coluna 4 g, 40% de EtOAc/hexanos) para dar o composto em epígrafe (18,1 mg, pureza 99%) como um líquido incolor límpido. MS m/z [M+H]+ calcd para C27H34CINO6, 504,21; encontrado 504,2. E. Ester 5-Metil-2-oxo-[1,3]dioxol-4-ilmetilico do Ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(5-metil-2-oxo-[1,3]dioxol-4-ilmetoxioxalil)amino]pentanóico
Cloreto de oxalilo (22,4 pL, 264 μπιοί) foi adicionado a uma solução de 4-hidroximetil-5-metil-[1,3]dioxol-2-ona (29,1 mg, 224 pmol) em éter (1,5 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas. 0 éter foi removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em DMF (1,5 mL) . A solução resultante foi adicionada a uma solução de ácido (2R,4R)~4-amino-5-(3'-cloro-bifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (65,0 mg, 203 pmol) e NaHC03 (51,2 mg) a 0 2C. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 3 horas, depois concentrada sob vácuo. 0 resíduo foi depois purificado por HPLC preparativa de fase inversa (30% — 90% de MeCN/H20) para dar o Composto 1 (19,1 mg) como um sólido branco.
1-Hidroxibenzotriazole (7,7 mg, 56,8 μπιοί) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N '-etilcarbodiimida (10,9 mg, 56,8 μπιοί) foram adicionados a uma solução de Composto 1 (19,1 mg, 37,9 μπιοί) em DCM (1,0 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. Foram adicionados 4-hidroximetil-5-metil-[ 1,3] dioxol-2-ona (14,8 mg, 114 μπιοί) e 4-metilmorfolina (7,7 mg, 75,8 μπιοί) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 6 horas. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com DCM (3x1,5 mL). As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre Na2S04 e concentradas para dar um líquido amarelo. 0 líquido em bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase inversa para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (5,1 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C29H26C1N012, 616,11; encontrado 616,1. F. Ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroxipentanóico
Cloreto de etil-oxalilo (46,1 pL, 0,4 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-cloro-bifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (120 mg, 0,4 mmol) e Et3N (157 pL, 1,1 mmol) em DMF (2,0 mL, 25,8 mmol) a 02C, e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 20 minutos. Foi adicionado mais cloreto de etil-oxalilo (30 pL) e a mistura foi agitada mais 10 minutos. Foi adicionada água (2 mL) e a mistura foi extraída com DCM (3x2 mL) . Os extratos foram combinados, secos sobre Na2S04 e concentrados para dar um líquido amarelo. O líquido em bruto foi purificado por (cromatografia em coluna C-18, 20 g; 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (28,5 mg) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C21H22CINO6, 420,11; encontrado 420,2. G. Ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(isopropoxioxalilamino)pentanóico
Éster isopropílico do ácido cloro-oxo-acático (62,1 mg, 413 pmol; ~53 pL) foi adicionado, gota a gota, a uma solução de ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-cloro-bifenil-4-il)-2-hidroxi- pentanóico (100 mg, 313 pmol) e Et3N (157 pL, 1,1 mmol) em DMF (2,0 mL, 25,8 mmol) a 0 2C, e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. Foi adicionado mais cloreto de etil-oxalilo (50 pL) e a mistura foi agitada mais 10 minutos. Foi adicionado NaHC03 aquoso saturado (5 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora. A mistura foi extraída com DCM (3x3 mL), os extratos foram combinados, secos sobre Na2S04, e concentrados para dar um líquido amarelo. O líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C-18 pré HPLC, coluna pequena, utilizando 40-95% de
MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (53,0 mg) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C22H24CINO6, 434,13; encontrado 434, 1. H. Ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(isobutoxioxalilamino)pentanóico
I, 0 M de HCL aquoso (2,5 mL, 2,5 mmol) foi adicionado a éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5- (3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (100 mg, 287 pmol) e a mistura resultante foi agitada, a 100 2C, durante 1 hora. A mistura foi concentrada para dar ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico. Éster isobutílico do ácido cloro-oxo-acático (99,4 mg, 604 pmol) foi adicionado, gota a gota, a uma solução de ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico e Et3N (160 pL, 1,2 mmol) em DMF (2.0 mL, 25,8 mmol) a 0 2C, e agitado, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. Foi adicionado NaHC03 aquoso saturado (5 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas. A mistura foi extraída com D CM (3x5 mL) , os extratos de DCM foram combinados, lavados com NaCl aquoso saturado, secos sobre Na2S04 e concentrados para dar um resíduo sólido branco. 0 sólido em bruto foi purificado por cromatografia em coluna C18 HPLC preparativa (coluna pequena; 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TF A) para dar o composto em epígrafe (40,0 mg) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C23H26C1N06, 448, 14; encontrado 448, 1. I. Éster Isobutílico do Ácido (2R, 4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (216 pL, 862 pmol) foi adicionado a uma suspensão de éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (75,0 mg, 216 pmol) em álcool isobutílico (0,5 mL, 5,4 mmol), e a mistura resultante foi agitada, a 60 2C, durante 2 horas. A mistura foi, depois, concentrada in vacuo para dar um sólido branco. O sólido branco foi dissolvido em DCM e foi depois adicionado DIPEA (113 pL, 647 pmol) à mistura, seguido por -0,22 mL de uma solução de cloreto de t-butil-oxalilo 1 M em DCM (0,2 mmol), gota a gota. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM (1:1, 1,3 mL, 7,7 mmol) ao líquido amarelo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois,
concentrada in vácuo para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 HPLC à escala preparativa, 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (70,5 mg, pureza 99%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C23H26CINO6, 448, 14; encontrado 448,1. J. Éster Isopropílico do Ácido {2R, 4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (216 pL, 862 pmol) foi adicionado a uma suspensão de éster etílico do ácido (2R,4R)~4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (75,0 mg, 216 pmol) em álcool isopropílico (0,5 mL, 6,5 mmol) e a mistura resultante foi agitada, a 60 2C, de um dia para o outro. A mistura foi depois concentrada in vacuo para dar um sólido branco. O sólido branco foi dissolvido em DCM e foi, depois, adicionado DIPEA (113 pL, 647 pmol) à mistura, seguido por -0,22 mL de uma solução de cloreto de t-butil-oxalilo 1 M em DCM (0,2 mmol) gota a gota. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e depois concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM (1:1, 1,3 mL, 7,7 mmol) ao líquido amarelo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois ,concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. 0 líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 HPLC à escala preparativa, 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (62,8 mg, pureza 98%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C22H24C1N06, 434,13; encontrado 434,1. K. Éster Heptílico do Ácido {2R, 4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (216 pL, 862 pmol) foi adicionado a uma suspensão de éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (75,0 mg, 216 pmol) em 1-heptanol (250 pL, 1,8 mmol) e a mistura resultante foi agitada, a 60 2C, durante 2 horas. A mistura foi depois concentrada in vacuo para dar um sólido branco, o qual foi purificado (coluna de cromatografia de fase inversa Interchim; 30-90% de MeCN em gradiente de água com 0,5% de TFA) . O sólido branco purificado foi dissolvido em DCM e foi, depois, adicionado, gota a gota, DIPEA (113 pL, 647 pmol) à mistura, seguido por -0,22 mL de uma solução de cloreto de t-butilo 1 M em DCM (0,2 mmol). A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e depois concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM (1:1, 1,3 mL, 7,7 mmol) ao líquido amarelo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 HPLC à escala preparativa, 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (43,3 mg, pureza 99%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C26H32CINO6, 490, 19; encontrado 490,2. L. Éster 3,3,3-Trifluoropropílico do Ácido (2R, 4R)-5—(3'— clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (287 pL, 1,2 mmol) foi adicionado a uma suspensão de éster etílico do ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 144 pmol) em 3,3,3-trifluoropropan-l-ol (492 mg, 4,3 mmol) e a mistura resultante foi agitada, a 80 2C, durante 12 horas. A mistura foi depois concentrada in vacuo para dar um sólido branco, o qual foi dissolvido em DCM (1,0 mL) e ~0,2 mL de uma solução de cloreto de t-butilo 1 M em DCM (0,2 mmol). Foi, depois, adicionado, gota a gora, DIPEA (75,1 pL, 431 pmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e depois concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM (1:1, 1,3 mL, 7,7 mmol) ao líquido amarelo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um liquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (cromatoqrafia em coluna C18 HPLC à escala preparativa, 40-90% de MeCN em áqua com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (44,9 mg, pureza 99%) como sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C22H21CIF3NO6, 488, 10; encontrado 488,1. M. Éster 2,2,2-Trifluoroetílico do Ácido (2R,4R)-5 —(3' — Clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (287 pL, 1,2 mmol) foi adicionado a uma suspensão de éster etílico do ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 144 pmol) em 2,2,2-trifluoroetanol (0,5 mL, 6,9 mmol) e a mistura resultante foi agitada, a 110 2C, durante 12 horas. A mistura foi, depois, concentrada in vacuo para dar um sólido branco, o qual foi dissolvido em DCM (1,0 mL) e ~0,2 mL de uma solução de cloreto de t-butilo 1 M em DCM (0,2 mmol). Foi depois adicionado, gota a gota, DIPEA (75,1 pL, 431 pmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM (1:1, 1,3 mL, 7,7 mmol) ao líquido amarelo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e depois concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. 0 líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 HPLC à escala preparativa, 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (22,5 mg, pureza 98%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C2iHi9ClF3N06, 474, 09; encontrado 474,1 . N. Ácido (2R, 4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(3,3,3-trifluoropropoxioxalil)-amino]pentanóico
Álcool benzílico (13,0 mL, 126 mmol) foi adicionado a éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (1,9 g, 5,3 mmol), seguido por HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (5,3 mL, 21,3 mmol), e a mistura foi agitada, a 60 2C, durante 1 hora. A mistura foi purificada (coluna de cromatografia de fase inversa Interchim; 30-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar éster benzílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (2,2 g) como um sólido branco, (evaporado in vacuo com água (4 x 300 mL) para remover o álcool benzílico em excesso).
Cloreto de 3,3,3-trifluoropropil-oxalilo foi preparado por adição de cloreto de oxalilo (51,6 pL, 610 pmol) a uma solução de 3,3,3-trifluoropropan-l-ol (62,6 mg, 549 pmol) em éter (500 pL, 4,8 mmol). A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora e depois concentrada in vacuo dando um liquido incolor límpido. Foi preparada uma solução ~1 M do cloreto de oxalilo por dissolução do líquido resultante em ~ 0,61 mL de DCM.
Uma solução de cloreto de 3,3,3-trifluoropropil-oxalilo (~140pL) foi adicionada a uma solução de éster benzílico do ácido (2R,4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 122 pmol) em DCM (1,0 mL) a 0 2C, e a mistura foi agitada a 02C durante 15 minutos. Foi adicionado NaHC03 aquoso saturado (1 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM (2x2 mL) . As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre Na2SC>4 e concentradas para dar um líquido amarelo límpido. Foi adicionado Pd/C a 10%, 50% húmido (0,45 mmol/g de carga; 13,6 mg, 6,1 pmol) a uma solução do líquido amarelo em DCM e THF (1,0 mL) e a mistura foi agitada sob hidrogénio durante 30 minutos. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado por HPLC preparativa (40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (16,5 mg, pureza 99%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C22H21CIF3NO6, 488,10; encontrado 4880. O. Éster 2,2,3,3,3-Pentafluoropropílico do Ácido {2R, 4R)-5-(3'-Clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Uma solução ~1 M de cloreto de t-butil-oxalilo (—0,2 mL) foi adicionada a uma solução de éster 2,2,3, 3, 3-pentafluoropropilico do ácido {2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2- hidroxipentanóico (50,0 mg, 111 pmol) em DCM (1,0 mL) a 0 2C seguido pela adição, gota a gota, durante 10 minutos, de DIPEA (21,2 pL, 122 pmol) . A mistura foi agitada a 0 2C durante 15 minutos. Foi adicionado NaHC03 aquoso saturado (5 mL) e a mistura foi extraída com DCM (3x5 mL) . Os extratos de DCM foram combinados, secos sobre Na2S04, e concentrados para dar um líquido incolor límpido. O líquido em bruto foi purificado por cromatografia flash (50% de EtOAc/hexanos para dar um líquido incolor límpido. Foi adicionado 1:1 TFA/DCM (1,0 mL) a uma solução do líquido incolor e agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado por HPLC preparativa (40%-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (21, 6 mg, pureza 98%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C22H19CIF5NO6, 524,08; encontrado 524,0. P. Éster 5-Metil-2-oxo-[1,3]dioxol-4-ilmetilico do Ácido {2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Uma solução ~1 M de cloreto de t-butil-oxalilo (160 pL) foi adicionada a uma solução de éster 5-metil-2-oxo[1,3]dioxol-4-ilmetilico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 116 pmol) em DCM (1,00 mL, 15,6 mmol) a 0 2C, seguido pela adição, gota a gota, durante 10 minutos de N,N-diisopropilamina (17,8 μL, 127 pmol) . A mistura resultante foi agitada a 0 2C durante 15 minutos, depois concentrada in vacuo. Foi adicionado 1:1 TFA/DCM (1,0 mL, 6,2 mmol) ao resíduo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 à escala preparativa, coluna pequena, utilizando 30-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (9,6 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C24H22CINO9, 504, 10; encontrado 504,0. Q. Éster Butiriloximetilico do Ácido (2R,4R)~5—(3'— Clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Uma solução ~1 M de cloreto de t-butil-oxalilo (160 pL) foi adicionada a uma solução de éster butiriloximetílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (48,6 mg, 116 pmol) em DCM (1,00 mL, 15,6 mmol) a 0 2C seguido pela adição, gota a gota, durante 10 minutos, de N,N-diisopropilamina (17,8 pL, 127 pmol). A mistura resultante foi agitada, a 0 2C, durante 15 minutos, depois concentrada in vacuo. Foi adicionado 1:1 TFA/DCM (1,0 mL, 6,2 mmol) ao resíduo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 à escala preparativa, coluna pequena, utilizando 30-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (10,2 mg). MS m/z [M+H]+ calcd para C24H26CINO8, 492, 13; encontrado 492,0. R. Éster Acetoximetílico do Ácido (2R, 4R)-5-(3'-cloro-bifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
A uma solução de ácido (2R, 4R)-4-(t-butoxioxalilamino)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (200 mg, 450 pmol) e acetato de bromometilo (97 mg, 0,9 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada 2,6-lutidina (144 mg, 1,3 mmol) e Nal (67 mg, 450 pmol). Após agitação, à temperatura ambiente, durante 24 horas, a mistura foi diluida com água (20 mL) e extraída com EtOAc (2x20 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (2x70 mL) , secas sobre Na2S04 anidro, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por TLC preparativa (PE:EtOAc=2:1) para dar o Composto 1 (100 mg) como um sólido amarelo. LC-MS: 542[M+Na] + . A uma solução de Composto 1 (100 mg, 0,2 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (2 mL) a 0 2C. A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas, o solvente foi removido, e o resíduo foi purificado adicionalmente por TLC preparativa (DCM:MeOH=8:1) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (10 mg). LC-MS: 464[M+H] + . RMN de ΤΗ (400 MHz, MeOD) δ 7,61 (s, 1H) , 7,55 (d, J=8, 0 Hz, 3H) , 7,42 (t, J=7,8 Hz, 1H) , 7,34 (d, J=8, 1 Hz, 3H) , 5,78 (s, 2H) , 4,40 (s, 1H) , 4,31 (t, J=5, 9 Hz, 1H), 2,94 (ddd, J=22,0, 13,8, 7,2 Hz, 2H), 2,09 (m, 5H). S. Éster Etoxicarboniloximetílico do Ácido (2R,4R)-5—(3' — Clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
A uma solução de ácido (2R, 4R)-4-(t-butoxioxalilamino)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (100 mg, 220 pmol) e carbonato de clorometil-etilo (61 mg, 440 pmol) em DMF (3 mL) foi adicionada 2, 6-lutidina (72 mg, 660 pmol) e Nal (33 mg, 220 pmol). Após agitação, à temperatura ambiente, durante 24 horas, a mistura foi diluída com água (20 mL) e extraída com EtOAc (2x20 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (2x70 mL) , secas sobre Na2S04 anidro, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por TLC preparativa (PE:EtOAc=2:1) para dar o Composto 1 (40 mg) como um sólido amarelo. LC-MS: 572[M+Na]+. A uma solução de Composto 1 (40 mg, 70 pmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL) a 0 2C. A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas, o solvente foi removido, e o resíduo foi purificado adicionalmente por TLC preparativa (DCM:MeOH=8:1) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (18 mg). LC-MS: 494[M+H] + . RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 7,55 (m, 4H) , 7,38 (m, 4H) , 5,80 (d, J=18,6 Hz, 2H) , 4,34 (s, 2H) , 4,21 (dd, J=14,3, 7,1 Hz, 2H) , 2,95 (m, 2H) , 2,07 (d, J=28,0 Hz, 2H) , 1,29 (dd, J=12,6, 5,5 Hz, 3H) . MS m/z [M+H]+ calcd para C23H24CINO9, 494, 11; encontrado 494. T. Ácido (2R, 4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(2-metoxietoxioxalil)amino]-pentanóico
DIPEA (64 pL, 366 pmol) foi adicionado a uma solução de éster benzílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 122 pmol) em DCM (3 mL) seguido pela adição, gota a gota, de uma solução de éster 2-metoxietílico do ácido cloro-oxo-acático 1,0 M (22 mg, 134 pmol) em DCM. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos, depois, concentrada para dar um liquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (coluna de cromatografia C18 Interchim, 20 g, 340-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA). THF (3 mL) foi adicionado ao material purificado, seguido pela adição de carbono-paládio (10% peso em carbono, 50 g húmido, 12,9 mg, 12 pmol) e a mistura foi agitada sob hidrogénio durante 30 minutos. A mistura foi filtrada e concentrada in vacuo e o resíduo dissolvido em AcOH (0,5 mL) e purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (9,8 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C22H24CINO7, 450,12; encontrado 450,2. U. Ácido (2R, 4R)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-[(2-fenoxietoxioxalil)amino]-pentanóico
DIPEA (64 pL, 366 pmol) foi adicionado a uma solução de éster benzílico do ácido {2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico ácido (50,0 mg, 122 pmol) em DCM (3 mL) seguido pela adição, gota a gota, de uma solução de éster 2-fenoxietílico do ácido cloro-oxo-acático 1,0 M (31 mg, 134 pmol) em DCM. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos, depois concentrado para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (coluna de cromatografia C18 Interchim, 20 g, 340-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) . THF (3 mL) foi adicionado ao material purificado, seguido pela adição de carbono-paládio (10% em peso em carbono, 50 g húmido, 12,9 mg, 12 pmol) e a mistura foi agitada sob hidrogénio durante 30 minutos. A mistura foi filtrada e concentrada in vacuo e o resíduo dissolvido em AcOH (0,5 mL) e purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (3,5 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C27H26CINO7, 512,14; encontrado 512,2. V. Ácido (2R,4R)-5-(3'-clorobifenil-4-)-4-[(3-etoxipropoxioxalil)amino]-2-hidroxi-pentanóico
DIPEA (64 pL, 366 pmol) foi adicionado a uma solução de éster benzílico do ácido {2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 122 pmol) em DCM (3 mL) seguido pela adição, gota a gota, de uma solução de éster 3-etoxipropílico do ácido cloro-oxo-acático 1,0 M (26 g, 134 pmol) em DCM. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos, depois concentrada para dar um líguido amarelo límpido. O líguido em bruto foi purificado (coluna de cromatografia C18 Interchim, 20 g, 340-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) . THF (3 mL) foi adicionado ao material purificado, seguido pela adição de carbono-paládio (10% em peso em carbono, 50 g húmido, 12, 9 mg, 12 pmol) e a mistura foi agitada sob hidrogénio durante 30 minutos. A mistura foi filtrada e concentrada in vacuo e o resíduo dissolvido em AcOH (0,5 mL) e purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (10,5 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C24H28CINO7, 478,16; encontrado 478,2. W. Éster (S)-2-Metoxicarbonilamino-3-metilbutiriloximetílico do Ácido (2-R, 4R) -5- (3 ' -clorobifenil-4-il) -2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Seguindo os métodos aqui descritos, foi também preparado o composto em epígrafe (12,6 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C27H31CIN2OIO, 579, 17; encontrado 579, 2. EXEMPLO 3 A. Ácido (2-R, 4R) -5- (2 ' , 5 ' -Diclorobifenil-4-il) -2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Uma solução de cloreto de etil-oxalilo (42,4 pL, 0,4 mmol) em DCM (0,4 mL, 6 mmol) foi adicionada a uma solução de éster etílico do ácido {2R, 4R)-4-amino-5-(4-bromofenil)-2- hidroxipentanóico (80 mg, 0,2 mmol) e Et3N (0,1 mL, 0,8 mmol) em DCM (1 mL) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos, depois evaporada sob pressão reduzida. O produto foi, depois, combinado com ácido 2,5-diclorofenilborónico (72,4 mg, 0,4 mmol), K2C03 (104,9 mg, 759 pmol), EtOH (0,9 mL), e água (0,2 mL). A mistura foi colocada sob azoto e foi adicionado SilicaCat®DPP-Pd (0,28 mmol/g de carga, 90,4 mg, 25,3 pmol) . A mistura foi submetida a micro-ondas, a 120 2C, durante 20 minutos, depois filtrada. Foi adicionado LiOH aquoso 1 M (2,5 mL, 2,5 mmol) para dar o composto em epígrafe (11,9 mg, 100% de pureza) . MS m/z [M+H]+ calcd para Ci9Hi7Cl2N06, 426,04; encontrado 426,0. B. Éster Isobutílico do Ácido (2R,4R)-5 —(2' , 5' —
Diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (196 pL, 785 pmol) foi adicionado a uma suspensão de éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(2',5'-diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (75,0 mg, 196 pmol) em álcool isobutílico (0,5 mL, 5,4 mmol), e a mistura resultante foi agitada, a 60 2C, durante 2 horas. A mistura foi depois concentrada in vacuo para dar um sólido branco. O sólido branco foi dissolvido em DCM (1 mL) e DIPEA (102 pL, 588 pmol) foi depois adicionado à mistura, seguido por ~0,2 mL de uma solução 1 M de cloreto de t-butilo em DCM (0,2 mmol) , gota a gota. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um liquido amarelo. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM (1:1, 1,1 mL, 7,0 mmol) ao liquido amarelo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 HPLC à escala preparativa, 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (80 mg, pureza 99%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C23H25CI2NO6, 482, 11; encontrado 482,1. C . Éster Isopropílico do Ácido (2R,4R)-5 —(2' , 5 ' —
Diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Foi adicionado HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (196 pL, 785 pmol) a uma suspensão de éster etílico do ácido (2R,4R)-4-amino-5-(2',5'-diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (75,0 mg, 196 ymol) em álcool isopropílico (0,5 mL, 6,5 mmol), e a mistura resultante foi agitada, a 60 2C, de um dia para o outro. A mistura foi depois concentrada in vacuo para dar um sólido branco. 0 sólido branco foi dissolvido em DCM (1 mL) e DIPEA (102 pL, 588 pmol) foi, depois, adicionado, gota a gota, à mistura, seguido por ~0,2 mL de uma solução de cloreto de t-butilo 1 M em DCM (0,2 mmol). A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois , concentrada in vacuo para dar um liquido amarelo. Foi adicionada uma solução de TFA/DCM (1:1, 1,1 mL, 7,0 mmol) ao líquido amarelo e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e, depois, concentrada in vacuo para dar um líquido amarelo límpido. O líquido em bruto foi purificado (cromatografia em coluna C18 HPLC à escala preparativa, 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (60,6 mg, pureza 98%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C22H23CI2NO6, 468,09; encontrado 468, 1 . D. Ácido (2R,4R)-5~(2',5'-Diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(isobutoxioxalilamino)-pentanóico
Foi adicionado HC1 aquoso 1,0 M (3,5 mL, 3,5 mmol) a éster etílico do ácido {2R, 4R)-4-amino-5-(2',5'-diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (155 mg, 405 pmol) e a mistura foi agitada, a 100 2C, durante 1 hora, depois, concentrada. 0 produto foi combinado com Et3N (226 pL, 1,6 mmol) em DMF (2,5 mL, 32,3 mmol). Foi adicionado, gota a gota, éster isobutilico do ácido cloro-oxo-acático (140 mg, 851 pmol) a 0 2C e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. Foi adicionado NaHC03 aquoso saturado (5 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas. A mistura foi extraída com D CM (3x5 mL) , os extratos foram combinados, lavados com uma solução saturada aquosa de NaCl, secos sobre Na2S04 e concentrados para dar um resíduo sólido branco. O sólido em bruto foi purificado por meio HPLC preparativa (coluna C18; 40-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para dar o composto em epígrafe (98,0 mg, pureza 99%) como um sólido branco. MS m/z [M+H]+ calcd para C23H25CI2NO6, 482,11; encontrado 482,1. EXEMPLO 4 Ácido (2R,4R)-5-(3-clorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico
Uma solução de cloreto de etil-oxalilo (41 pL, 0,4 mmol) em DCM (0,5 mL) foi adicionada a uma solução de (3R, 5R) -5-amino-6-(4-bromo-2-cloro-fenil)-2-etoxi-hex-l-en-3-ol (96 mg, 0,3 mmol) e Et3N (0,1192 mL, 0,8556 mmol) em DCM (1,4 mL), e agitada durante 20 minutos à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada sob pressão reduzida e combinada com ácido fenilborónico (52,2 mg, 0,4 mmol), K2C03 (100 mg, 0,9 mmol), água (0,2 mL), e EtOH (1 mL). A mistura resultante foi colocada sob azoto e foi adicionado SilicaCat®DPP-Pd (0,28 mmol/g de carga; 100 mg, 0,03 mmol) . A mistura foi aquecida a 120 2C durante 20 minutos até a reação estar completa. A mistura foi filtrada e foi adicionada uma solução de LiOH aquoso 1 M (3 mL, 3 mmol) . O produto foi depois purificado (coluna de cromatografia de fase inversa Interchim) para dar o composto em epígrafe (12,6 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para Ci9Hi8C1N06, 392, 08; encontrado 392,2. EXEMPLO 5
Seguindo os procedimentos aqui descritos nos exemplos e substituindo os materiais de partida e reagentes apropriados, foram também preparados os compostos seguintes:
(Continuação)
1. Ácido {2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'-metIlbifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalllamino)-pentanóico 2. Éster propilico do ácido {2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'-metilbifenil- 4-il) -2-hidroxi-4-(oxalilamino)-pentanóico 3. Éster etílico do ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-metilbifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 4. Éster isobutílico do ácido (2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'-metilbifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 5. Ácido {2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 6. Éster etílico do ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 7. Éster isobutílico do ácido (2Rr4R)-5-(5'-cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 8. Éster propílico do ácido (2Rr 4R)-5-(5'-cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 9. Ácido (2R,4R)-5-(3,3'-Diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 10. Ácido (2.R, 4.R)-5-(3,3 '-Diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(isobutoxioxalilamino)-pentanóico 11. Éster isobutílico do ácido (2R, 4R) -5- (3,3'-Diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 12. Éster propílico do ácido (2R, 4R)-5-(3,3'-Diclorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico 13. Ácido (R)-3-[N-(3,5'-Dicloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-Ν' -oxalil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
14. Ácido (2R,4R)~5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroxi-pentanóico 15. Ácido (2R,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(isopropoxioxalil-amino)-pentanóico 16. Ácido (2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4- (isobutoxioxalilamino)-pentanóico 17. Éster etílico do ácido (2R,4R)-5-(3,3'-diclorobifenil-4-il)- 2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico EXEMPLO 6 A. Ácido (2S,4S)-5-Bifenil-4-il-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de etil-oxalilo (27 pL, 0,2 mmol, 1,1 eq) foi adicionado a uma solução de éster etílico do ácido (2S,4S)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil-pentanóico (sal de HC1; 80 mg, 0,22 mmol) em DMF (0,5 mL)/DCM (0,5 mL), e agitado, à temperatura ambiente, durante 20 minutos. O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em LiOH (mono-hidratado; 92,2 mg, 2,2 mmol), água (1,0 mL) e EtOH (2.0 mL), e agitado, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A reação foi mitigada com AcOH e o solvente foi removido. O resíduo foi dissolvido em AcOH/MeCN e purificado por HPLC preparativa. As frações límpidas foram combinadas e liofilizadas para dar o composto em epígrafe (37 mg, pureza 95%) . MS m/z [M+H]+ calcd para Ο20Η2ιΝΟ6, 372,14; encontrado 372.2. B. Éster Etílico do Ácido (2S, 4S)-5-Bifenil-4-il-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de oxalilo (232 pL, 2,8 mmol) e álcool t-butílico (228 pL) foram combinados em éter (6,7 mL) sob azoto a 0 2C. A mistura resultante foi agitada, durante 30 minutos, à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado sob vácuo para formar éster t-butilico do ácido cloro-oxo-acático, o qual foi depois dissolvido em DCM (10 mL) e combinado com éster etílico do ácido (2S, 4S) -4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil- pentanóico (sal de HC1; 667 mg, 1,8 mmol), o qual foi dissolvido em DCM com Et3N (2,6 mL) a 0 2C. A mistura resultante foi agitada, durante 5 minutos, à temperatura ambiente. O produto em bruto foi concentrado, dissolvido em DCM e purificado por cromatografia flash (20-80% de EtOAc/hexanos). O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em DCM (5 mL) e TFA (1 mL) e agitado, durante 1 hora. O produto foi seco sob vácuo e purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (135 mg, pureza 95%). MS m/z [M+H]+ calcd para C22H25NO6, 400,17; encontrado 400,2. EXEMPLO 7 A. Éster Butílico do ácido (2S,4S)-5-(2'-Fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de oxalilo (44,1 pL, 0,5 mmol) e álcool t-butílico (46,5 pL) foram combinados em éter (1 mL) e foram agitados durante 30 minutos à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado sob vácuo para formar éster t-butilico do ácido cloro-oxo-acético, o qual foi depois dissolvido em DCM (2 mL) . Éster etílico do ácido (2S, 4S)-4-amino-5-(2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetilpentanóic (sal de HC1; 120 mg, 0,3 mmol) foi combinado com 1-butanol (3 mL) e 4 M de HC1 em 1,4-dioxano (3 mL) e agitado, a 60 2C, durante 2 horas. O solvente foi evaporado e azeotropado com tolueno (2x) e o produto foi dissolvido em Et3N (155 pL) e DCM, depois combinado com o éster t-butílico do ácido cloro-oxo-acético. A mistura resultante foi agitada durante 20 minutos à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o resíduo foi redissolvido em 1:1 TFA:DCM, e agitado durante 20 minutos a 40 2C. Foi adicionado AcOH e o produto foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (30 mg, pureza 95%) . MS m/z [M+H]+ calcd para C24H28FNO6, 446, 19; encontrado 446,4. B. Ácido (2S, 4S)-5-(2'-Fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de etil-oxalilo (13,8 pL, 0,1 mmol) e DIPEA (39,2 pL, 0,2 mmol) foram combinados com éster etilico do ácido (2S, 4S) -4-amino-5-(2'-fluorobifenil-4-il)-2- hidroximetilpentanóico (sal de HC1; 43 mg, 0,1 mmol) dissolvido em DCM (0,9 mL) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos, depois concentrada sob vácuo. Foi adicionado LiOH aquoso 1 M (0,9 mL) e EtOH (0,9 mL) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora. A mistura de reação foi mitigada com AcOH e o solvente foi evaporado. O resíduo foi dissolvido em AcOH/MeCN e purificado por HPLC preparativa. As frações límpidas foram combinadas e liofilizadas para dar o composto em epígrafe (32,7 mg, pureza 95%). MS m/z [M+H]+ calcd para C2oH2oFN06, 390, 13; encontrado 390,2. EXEMPLO 8
Seguindo os procedimentos aqui descritos nos exemplos e substituindo os materiais de partida e reagentes apropriados, foram também preparados os compostos seguintes:
1. Éster etílico do ácido (2S, 4S)-5-(3'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico 2. Ácido (2S,4S)-5-(3'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico 3. Ácido (2S,4S)-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico
4. Ácido (2Sr4S)-5-(4'-Fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4- (oxalilamino)pentanóico
5. Ácido (2S,4S)-5-(3-clorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico 6. Ácido {2R,4S)-5-(3-clorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(oxalilamino)pentanóico EXEMPLO 9 A. Ácido (2S, 4R)-5-Bifenil-4-il-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de etil-oxalilo (13,1 pL, 0,1 mmol) foi combinado com éster etílico do ácido (2S,4R)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (40 mg, 0,1 mmol) dissolvido em DCM (0,3 mL) e uma pequena quantidade de DMF. A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 20 minutos, depois concentrada sob vácuo. Foi adicionado NaOH aquoso 1 M (117 pL) e THF (1,5 mL) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. O resíduo foi dissolvido em AcOH e purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (8 mg, pureza 95%). MS m/z [M+H]+ calcd para C21H23NO6, 386, 15; encontrado 386,0. B. Éster Etílico do Ácido (25, 4R)-5-Bifenil-4-il-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de oxalilo (12,4 pL. 0,1 mmol) e álcool t-butílico (13,1 pL) foram combinados em éter (0,3 mL) sob azoto a 0 2C. A mistura resultante foi agitada, durante 30 minutos, à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado sob vácuo para formar éster t-butílico do ácido cloro-oxo-acático, o qual foi depois dissolvido em DCM (0,7 mL) e combinado com éster etílico do ácido (2S,4R)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil-2- metilpentanóico (33,4 mg, 98 pmol). Foi adicionado EtsN (43,6 pL,) a 0 2C e a mistura resultante foi agitada, durante 30 minutos, à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em 1:1 TFA:DCM e agitado durante 1 hora. Foi adicionado AcOH e o produto foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (7 mg, pureza 95%). MS m/z [M+H]+ calcd para C23H27NO6, 414,18; encontrado 414,4. EXEMPLO 10 Ácido (2S,4R)-5-(3'-Fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico
Cloreto de etil-oxalilo (9,1 pL, 0,1 mmol) foi combinado com ácido (2Sr 4R) -4-amino-5-(3'-fluorobifenil-4-il)-2- hidroximetil-2-metilpentanóico (27 mg, 0,1 mmol) dissolvido em DCM (0,2 mL) e uma pequena quantidade de DMF. A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 20 minutos. O solvente foi evaporado e foi adicionado NaOH aquoso 10 M (81,5 pL) , e THF (1,0 mL) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. O resíduo foi dissolvido em AcOH e purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (6 mg, pureza 95%) . MS m/z [M+H]+ calcd para C2iH22FN06, 404, 14; encontrado 404,4. EXEMPLO 11
Seguindo os procedimentos aqui descritos nos exemplos e substituindo os materiais de partida e reagentes apropriados, foram também preparados os compostos seguintes:
1. Ácido (2S, 4R)-5-(2'-Fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico 2. Ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico
3. Ácido (2S,4R)-5-(4'-Fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico
4. Ácido (2S, 4.R)-5-(3 '-clorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-4-(isobutoxioxalil-amino)-2-metilpentanóico EXEMPLO 12 Ácido 3- (N-Bifenil-4-ilmetil-N'-oxalil-hidrazino)-2-hidroxi-2-metilpropiónico
Éster metilico do ácido 3-(N-bifenil-4-ilmetil-N'-t-butoxicarbonil-hidrazino)-2-hidroxi-2-metilpropiónico (0,1 g, 241 pmol) foi dissolvido em DCM (1,0 mL) , depois foi adicionado TFA (1,0 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora. A mistura foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em DMF (2,00 mL). Foi adicionado DIPEA (126 pL, 724 pmol), seguido por cloreto de etil-oxalilo (29,6 pL, 265 pmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (~3 horas) . A mistura foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em THF (1,5 mL) , depois foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidratado (101 mg, 2,4 mmol) em água (1,50 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A reação foi mitigada com AcOH e a solução foi concentrada. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (10-70% de MeCN/H20) para dar o composto em epígrafe (10,9 mg, pureza 95%). MS m/z [M+H]+ calcd para C19H20N2O6, 373, 13; encontrado 373, 2. EXEMPLO 13 Ácido (-R) -3- [N- (3 ' -clorobifenil-4-ilmetil) -Ν' -oxalil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Éster etílico do ácido {R)-3-[N-(3'-clorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxi-propiónico (70 mg, 0,2 mmol) foi dissolvido em DCM (1,5 mL) , seguido pela adição de cloreto de etil-oxalilo (24,7 pL, 221 pmol) e DIPEA (69,9 pL, 401 pmol). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (~10 minutos). A mistura foi concentrada sob vácuo. Foi adicionado hidróxido de litio aquoso 1 M (1,6 mL, 1,6 mmol) e Et OH (1,5 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (~2 horas). A reação foi mitigada com AcOH e o solvente foi evaporado. O residuo foi dissolvido em AcOH/MeCN e purificado por HPLC preparativa. As frações límpidas foram combinadas e liofilizadas para dar o composto em epígrafe (8,3 mg, pureza 95%) . MS m/z [M+H]+ calcd para 0ΐ8Ηι701Ν206, 393, 08; encontrado 393,2. EXEMPLO 14 A. Ácido (-R)-3-[N-(5'-cloro-2' -f luorobifenil-4-ilmetil) -Ν' -oxalil-hidrazinol-2-hidroxipropiónico
Éster etílico do éster (R)-2-[N-(4-bromobenzil)-N'- etoxioxalil-hidrazino]-1-etoxicarboniletílico do ácido oxálico (675 mg, 1,3 mmol) foi combinado com ácido 5-cloro-2- fluorofenilborónico (273 mg, 1, 6 mmol) e K2CO3 (541 mg, 3,9 mmol) em EtOH (4,6 mL, 78,3 mmol) e água (1,2 mL, 65,2 mmol). A mistura resultante foi colocada sob atmosfera de azoto e foi, depois, adicionado SilicaCat®DPP-Pd (0,28 mmol/g de carga; 466 mg, 130 pmol) . A mistura foi submetida a micro-ondas, a 120 2C, durante 10 minutos, depois filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (40 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para Ci8H16C1FN206, 411, 07; encontrado 411,0. B. Éster Etílico do Ácido (A)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-N'-oxalil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Uma solução ~1 M de cloreto de t-butil-oxalilo em DCM (136 pL) foi adicionada a uma solução agitada de éster etílico do ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]- 2-hidroxipropiónico (sal de HC1; 55,0 mg, 136 pmol) em DCM (1,3 mL, 20 mmol) a 0 2C. Após agitação, à temperatura ambiente durante 2 horas, foi adicionado, gota a gota, DIPEA (11,9 pL, 68 pmol) numa solução DCM (80 pL). Após um minuto, foi adicionado mais DIPEA (10 pL) em DCM (80 pL) , e a mistura foi agitada à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash (sílica gel 4 g, 0-100% de EtOAc/hexanos). As frações desejadas foram combinadas e concentradas para dar um óleo incolor (60 mg) . Uma parte deste óleo (20 mg) foi tratada com uma mistura 1:1 de DCM:TFA (0,2 mL) à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi concentrada, o resíduo foi dissolvido em 50% de água/AcOH (1,5 mL) , filtrada e purificada por preparativa de fase inversa para dar o composto em epígrafe (10 mg) como um sal de TFA. MS m/z [M+H]+ calcd para C2oH2oC1FN206, 439,10; encontrado 439,4. C. Ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-Ν' -isobutoxioxalil-hidrazinol-2-hidroxipropiónico
Éster isobutílico do ácido cloro-oxo-acético foi preparado por adição de cloreto de oxalilo (21 pL, 252 pmol) a uma solução de isobutanol (21 pL, 226 pmol) em éter (206 pL, 2,0 mmol) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 15 min e depois evaporada. O éster isobutílico do ácido cloro-oxo-acético foi depois adicionado a uma solução de éster 2-oxo-2-feniletílico do ácido (R) -3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (23,0 mg, 50 pmol) em DCM (413 pL, 6,4 mmol) a 0 aC. A mistura resultante foi agitada, a 0 2C, durante 15 minutos. Foi depois adicionado NaHCCp aquoso saturado e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre MgS04 e concentradas para dar um líquido amarelo límpido. Foi adicionado zinco (164 mg, 2,5 mmol) a uma solução deste líquido amarelo em AcOH (172 pL, 3,0 mmol) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. A mistura foi filtrada utilizando AcOH e água, os solventes foram evaporados in vacuo, e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (9,0 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C22H24CIFN2O6, 467, 13; encontrado 467,1 D. Ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-Ν' -(2,2-difluoropropoxioxalil)-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Cloreto de 2,2-difluoropropil-oxalilo foi preparado por adição de cloreto de oxalilo (21 pL, 252 pmol) a uma solução de 2,2-difluoropropanol (21,8 mg, 226 pmol) em éter (206 pL, 2,0 mmol). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 15 minutos e, depois, evaporada. O cloreto de 2,2-difluoropropil-oxalilo foi depois adicionado a uma solução de éster 2-oxo-2-feniletílico do ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (23,0 mg, 50 pmol) em DCM (413 pL, 6,4 mmol) a 0 2C. A mistura resultante foi agitada, a 0 2C, durante 15 minutos. Foi depois adicionado NaHCCp aquoso saturado e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre MgS04 e concentradas para dar um líquido amarelo límpido. Foi adicionado zinco (164 mg, 2,5 mmol) a uma solução deste líquido amarelo em AcOH (172 pL, 3,0 mmol) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. A mistura foi filtrada utilizando AcOH e água, os solventes foram evaporados in vacuo e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (1,1 mg). MS m/z [M+H]+ calcd para C2iH2oClF3N206, 489, 10; encontrado 489,0. E. Éster 5-Metil-2-oxo-[1,3]dioxol-4-ilmetílico do Ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-Ν'-oxalil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
A uma solução de éster 5-metil-2-oxo-[1,3]dioxol-4-ilmetílico do ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (350 mg, 780 pmol) em DCM anidro (15 mL) foi adicionado cloreto de t-butil-oxalilo (193 mg, 1,2 mmol) e DIPEA (302 mg, 2,3 mmol) a 0 2C. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 5 horas. A mistura foi depois lavada com NaCl aquoso saturado (2x30 mL) e extraída com DCM (3x50 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 anidro, e concentradas in vacuo para dar um sólido branco (300 mg). LC-MS: 523 [M-tBu+H]+.
Este sólido (100 mg, 170 pmol) foi dissolvido em TFA (5 mL) e D CM (15 mL) . A mistura resultante foi agitada, de um dia para o outro. A mistura foi evaporada in vacuo e o residuo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (20 mg. LC-MS: 523, 1 [M+H] + . RMN de ΧΗ: (DMSO-dg) : 5 2,14 (s, 3H) , 3,17-3,16 (m, 2 H) , 4,11-4,08 (m, 2 H) , 4,26 (br, 1 H) , 4,98 (br, 2 H) , 5,50 (br, 1 H) , 7,58-7,36 (m, 7 H) , 9,94 (s, 1 H), 13,8 (br, 1 H) . F. Ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-Ν' -etoxioxalil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Cloreto de etil-oxalilo (12,4 pL, 111 pmol) foi adicionado a uma solução de éster 2-oxo-2-feniletílico do ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2- hidroxipropiónico (23,0 mg, 50 pmol) em DCM (413 pL, 6,4 mmol) a 02C e a mistura resultante foi agitada, a 0 2C, durante
15 minutos. Foi depois adicionado NaHC03 aquoso saturado (1 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2x2 mL). As camadas de DCM foram combinadas, secas sobre MgSCp, e concentradas. Foi adicionado zinco (164 mg, 2,5 mmol) a uma solução deste resíduo em AcOH (172 pL, 3,0 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. A mistura foi filtrada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (10 mg). MS m/z [M+H]+ calcd para C20H20CIFN2O6, 439, 10; encontrado 439, 1. G. Éster 2,2-Dif luoropropílico do Ácido (.R)-3-[N-(5 '-cloro-2'-fluoro-ifenil-4-ilmetil)-N'-oxalil-hidrazino]-2- hidroxipropiónico
Ácido (R)-3-[N'-t-Butoxioxalil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]2-hidroxi-propiónico (15,0 mg, 32 pmol) foi combinado com HOBt (26,0 mg, 193 pmol) e EDC (34 pL, 0,2 mmol) em DCM (0,2 mL, 4 mmol). A solução foi agitada durante 10 minutos e foi adicionado 2,2-difluoropropanol (24,7 mg, 257 pmol). A reação foi agitada, à temperatura ambiente, e monitorizada para conclusão. Após 2 horas, a mistura foi concentrada por evaporação rotativa e o solvente foi removido in vacuo. Ο resíduo resultante foi dissolvido em DCM (124 pL, 1,9 mmol). Foi adicionado TFA (124 pL, 1,6 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 2 horas. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (2,2 mg). MS m/z [M+H]+ calcd para C21H20CIF3N2O6, 489,10; encontrado 489,1. H. Éster Isobutílico do Ácido (A)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-N'-oxalil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
A uma mistura de éster etílico do ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (sal de HC1; 500,0 mg, 1,3 mmol) em DCM (6,0 mL, 94 mmol) à temperatura ambiente foi adicionado di-t-butildicarbonato (342 pL, 1,5 mmol) e DIPEA (216 pL, 1,3 mmol). Após agitação, à temperatura ambiente, de um dia para o outro, a mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica gel 12 g, 0-50% de EtOAc/hexanos). As frações desejadas foram combinadas e concentradas para dar um óleo amarelado claro. Este resíduo oleoso foi dissolvido em MeOH (6,0 mL, 150 mmol) e água (1,0 mL, 56 mmol), depois tratado com LiOH mono-hidratado (104 mg, 2,5 mmol) à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi concentrada e o resíduo foi diluído com água (2,0 mL) e EtOAc (10,0 mL) , depois acidificado com HC1 aquoso 1 N até pH~2,0 com agitação vigorosa. A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x2,0 mL) , seca sobre Na2S04, filtrada, e concentrada para dar o Composto 1 como um sólido branco (528,6 mg).
0 Composto 1 (65,0 mg, 148 pmol) foi dissolvido em álcool isobutílico (684 pL, 7,4 mmol). Foi adicionada uma solução de HC1 4,0 M em 1,4-dioxano (1,2 mL, 4,9 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 2 horas, depois a 60 2C durante mais um par de horas, até a reação estar completa. O solvente foi removido in vacuo para dar o Composto 2, o qual utilizado sem purificação adicional.
O cloreto de t-butil-oxalilo foi preparado por adição de cloreto de oxalilo (63 pL, 741 pmol) a uma solução de álcool
t-butílico (43 pL, 444 pmol) em éter (778 pL, 7,4 mmol). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 15 minutos, depois concentrada in vacuo. O Composto 2 (58,5 mg, 148 pmol) foi dissolvido em DCM (570 pL, 8,9 mmol) e foi adicionado cloreto de t-butil-oxalilo. A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e depois concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa solução de DCM:TFA 1:1 e agitado, à temperatura ambiente, durante 1 hora. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto em epígrafe (8,5 mg) . MS m/z [M+H]+ calcd para C22H24CIFN2O6, 467,13; encontrado 467,0. I. Éster Etílico do Ácido (R)-3-[N'-fc-Butoxioxalil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico
A uma solução de éster etílico do ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (200 mg, 0,5 mmol) em DCM (2.0 mL) foi adicionada, gota a gota, uma solução de cloreto de t-butil-oxalilo (165 mg, 1,0 mmol) a 0 2C sob azoto. A mistura resultante foi agitada durante 5 minutos e depois foi adicionado, gota a gota, DIPEA (130 mg, 1,0 mmol). O solvente foi removido por evaporação e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (éter de petróleo/EtOAc=4:1) para dar o composto em epígrafe como um líquido amarelo (144 mg) . LC-MS: 4 95 [M+H] + . RMN de 1H (CDCI3, 400 MHz) : δ 1,30 (t, J=7,l Hz, 3H) , 1,56 (s, 9H) , 3, 37-3, 24 (m, 2H) , 4,27- 4,16 (m, 4H) , 4,38-4,30 (m, 1H) , 7,14-7,09 (m, 1H) , 7,30-7,28 (m, 1H) , 7,48-7,41 (m, 3H) , 7,56-7,50 (m, 2H) , 8,05 (s, 1H). J. Éster Etoxicarboniloximetilico do Ácido (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-Ν'-oxalil-hidrazino]-2-hidroxipropiónico
Uma mistura de ácido (R)-3-[N'-t-butoxioxalil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (270 mg, 580 pmol), carbonato de clorometil-etilo (160 mg, 1,16 mmol) , Nal (174 mg, la2 mmol) e 2, 6-dimetilpiridina (620 mg, 5,8 mmol) in DMF (10 mL) foi agitado, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi vertida em água (30 mL) e a mistura foi depois extraída com EtOAc (3x30 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (2x30 mL) , secas sobre Na2S04 anidro e concentradas in vacuo. O Composto 1 em bruto (300 mg) foi utilizado sem purificação. LC-MS: 569 [M+H]+.
TFA (1,0 mL) foi adicionado, gota a gota, à temperatura ambiente, a uma solução de Composto 1 (300 mg, 530 pmol) em DCM (5 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente, e o solvente foi, depois, removido. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (DCM/MeOH, 10:1) para dar o composto em epígrafe como um líquido amarelo (10 mg). LC-MS: 512,9 [M+H] + . RMN de ΧΗ (400 MHz, MeOD) δ 1,28 (t, J=7,3 Hz, 3H) , 3,24-3,28 (m, 2H) , 4,18-4,20 (m, 4H) , 4,41 (br, 1H) , 5,80 (dd, J=ll,6, 5,8 Hz, 2H) , 7,22 (d, J=10,l Hz, 1H) , 7,34-7,40 (m, 1H) , 7,48-7,51 (m, 5H) . K. Éster (R)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-Ν' -oxalil-hidrazino]-2-hidroxipropioniloximetílico do Ácido Butírico
Uma mistura de ácido (R)-3-[N'-t-butoxioxalil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (300 mg, 430 ymol), butirato de clorometilo (175 mg, 1,3 mmol), Nal (192 mg, 1,3 mmol) e 2,6-dimetilpiridina (680 mg, 6,4 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi vertida em água (30 mL) e a mistura foi depois extraída com EtOAc (3x20 mL) . A camada orgânica foi separada, lavada com NaCl aquoso saturado (30 mL) , seca sobre Na2S04 anidro e concentrada in vacuo. O Composto 1 em bruto (300 mg) foi utilizado sem purificação. LC-MS: 567[M+H]+.
TFA (1,0 mL) foi adicionado, gota a gota, à temperatura ambiente, a uma solução de Composto 1 (300 mg, 464 pmol) em DCM (5 mL) . A mistura resultante foi agitada, durante 2 horas, à temperatura ambiente, e o solvente foi depois removido. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (DCM/MeOH, 10:1) para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo (21 mg) . LC-MS: 511,1 [M+H]+. RMN de ΧΗ (400 MHz, MeOD) δ 0,94 (t, J=7,4 Hz, 3H) , 1,62 (dd, J= 14, 8, 7,4 Hz, 2H) , 2,33 (t, J=7,3 Hz, 2H) , 3,28 (d, J=6,l Hz, 2H) , 4,14 (q, J=13,2 Hz, 2H) , 4,38 (dd, J=6,0, 4,2 Hz, 1H) , 5,80 (br, 2H), 7,16-7,26 (m, 1H), 7,33-7,40 (m, 1H), 7,47-7,52 (m, 5H). L. Éster Acetoximetilico do Ácido (A)-3-[N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-N'-oxalil-hidrazino] -2-hidroxipropiónico
Uma mistura de ácido (R)-3-[N'-t-butoxioxalil-N-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)hidrazino]-2-hidroxipropiónico (300 mg, 640 pmol) , acetato de bromometilo (196 mg, 1,3 mmol) , Nal (192 mg, 1,3 mmol) e 2,6-dimetilpiridina (680 mg, 6,4 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi vertida em água (30 mL) e a mistura foi depois extraída com EtOAc (3x20 mL) . A camada orgânica foi separada, lavada com NaCl aquoso saturado (30 mL) , seca sobre Na2S04 anidro e concentrada in vacuo. O Composto 1 em bruto (300 mg) foi utilizado sem purificação. LC-MS: 539 [M+H]+.
TFA (1,0 mL) foi adicionado, gota a gota, à temperatura ambiente a uma solução de Composto 1 (300 mg, 550 pmol) em DCM (5 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 2 horas, à temperatura ambiente, e o solvente foi, depois, removido. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (DCM/MeOH, 10:1) para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo (15 mg). LC-MS: 482, 9 [M+H] + . RMN de ΧΗ (400 MHz, MeOD) δ 2,07 (s, 3H) , 3,25-3,28 (m, 2H) , 4,14 (q, J=13,2 Hz, 2H) , 4,38 (t, J=5,9Hz, 1H) , 5,88-5,71 (m, 2H) , 7,25-7,17 (m, 1H) , 7,41-7,31 (m, 1H), 7,70-7,46 (m, 5H). EXEMPLO 15 Ácido (2R,4S)-5-Bifenil-4-il-2-hidroxi-5-metil-4-(oxalilamino)hexanóico
Éster etílico do ácido (2R, 4S)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroxi-5-metil-hexanóico (70 mg, 0,2 mmol) foi dissolvido em DCM (5 mL) e agitado durante 2 minutos, seguido pela adição de cloreto de etil-oxalilo (23 pL, 0,2 mmol) e DIPEA (79 mg, 0,6 mmol). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, durante 1 hora, depois evaporada sob pressão reduzida. A mistura foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOH, e foram adicionados equivalentes suficientes de NaOH 10 N para tornar a solução básica. A reação foi monitorizada durante 1 hora até a desproteção final estar completa. A solução foi acidificada com um volume igual de AcOH e evaporada sob pressão reduzida. 0 produto foi depois purificado utilizando cromatografia de fase inversa (gradiente de 10-70% de MeCN para dar o composto em epígrafe (37 mg, pureza 95%) . MS m/z [M+H] + calcd para C2iH23N06, 386, 15; encontrado 386, 4. EXEMPLO 16 Ácido (2S,4S)-5-Bifenil-4-il-2-hidroximetil-5-metil-4-(oxalilamino)hexanóico
Éster etílico do ácido (2S,4S)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil-5-metil-hexanóico (sal de HC1; 40 mg, 0,1 mmol) foi dissolvido em DCM e DMF (1 mL) , seguido pela adição de cloreto de etil-oxalilo (17 pL, 0,2 mmol) e DIPEA (53,3 μL, 0,3 mmol). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (~5 minutos). A reação foi mitigada com água. O produto extraído com EtOAc e a camada orgânica resultante foi concentrada. Foi adicionado hidróxido de lítio aquoso 1 M (1,0 mL, 1,0 mmol) e EtOH (2,0 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (~2 horas). A reação foi mitigada com AcOH e o produto foi purificado por HPLC preparativa. As frações límpidas foram combinadas e liofilizadas para dar o composto em epígrafe (19 mg, pureza 95%) . MS m/z [M+H]+ calcd para C22H25NO6, 400,17; encontrado 400,2.
Podem ser preparados compostos adicionais da invenção utilizando os materiais de partida seguintes: Éster Etílico do Ácido (R)-4-Amino-5-bifenil-4-il-2-hidroxi-2-metil-pentanóico
A uma solução de ácido (R)-3-bifenil-4-il-2-t-butoxicarbonilamino-propiónico (50 g, 0,1 mmol), ácido de Meldrum (23,3 g, 0,2 mmol) e DMAP (27,8 g, 0,2 mmol) em DCM anidro (500 mL) foi adicionada uma solução de DCC (33,3 g, 0,2 mmol) em DCM anidro (200 mL) durante 1 hora, a -5 2C, sob azoto. A mistura foi agitada, a -5 2C, durante 8 horas, depois refrigerada, de um dia para o outro, durante o qual precipitaram pequenos cristais de diciclo-hexilureia. Após filtração, a mistura foi lavada com KHSO4 a 5% (4x200 mL), NaCl saturado aquoso (1 x 200 mL) e seca sobre MgS04, de um dia para o outro. A solução resultante foi evaporada para dar o Composto 1 em bruto (68 g). LC-MS: 490 [M+Na], 957 [2M+Na]. A uma solução de Composto 1 em bruto (68 g, 0,1 mmol) em DCM anidro (1 L) foi adicionado AcOH (96,8 g, 1,6 mol), a -5 2C, sob azoto. A mistura resultante foi agitada, a -5 2C, durante 0,5 horas, depois, NaBH4 (13,9 g, 0,4 mmol), foi adicionado, em pequenas partes, durante 1 hora. Após agitação durante mais uma hora, a -5 2C, foi adicionada solução aquosa saturada de NaCl (300 mL) . A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x300 mL) e água (2x300 mL) , seca sobre MgS04, filtrada e concentrada, para dar o composto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=5:1) , para dar o Composto 2 (46 g) como um sólido amarelo-claro. LC-MS: 476 [M+Na], 929 [2M+Na].
A uma solução de Composto 2 (46 g, 0,1 mol) em álcool butilico terciário (100 mL) foi adicionado iodeto de dimetilmetilenoimónio (46,3 g, 0,3 mol) à temperatura ambiente sob azoto. A mistura foi aquecida para 65 2C e agitada a esta temperatura durante 16 horas. Após filtração, o filtrado foi concentrado para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=20:1~10:1) para dar o Composto 3 como um sólido amarelo-claro) (18 g) . LC-MS: 460 [M+Na], 897 [2M+Na]. A uma solução de Composto 3 (18 g, 44 mmol) em acetona (430 mL) e água (22 mL) foi adicionado Vermelho de Sudão como
indicador. Foi introduzida atmosfera de ozono na mistura, a 0 2C, até a cor vermelha do Vermelho de Sudão ter desaparecido. Foi adicionado sulfureto de dimetilo (45 mL) e a mistura foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura foi depois concentrada e o residual foi purificado por cromatografia (hexanos:EtOAc=15:1~7:1) para dar o Composto 4 como um sólido amarelo-claro (9,5 g) . LC-MS: 434 [M+H] , 845 [2M+H].
A uma solução de Composto 4 (9,5 g, 23 mmol) em THF anidro (120 mL) foi adicionada uma solução de brometo de metilmagnésio em THF (9,2 mL, 28 mmol) a -70 2C sob azoto. A mistura foi agitada, a -60 2C, durante 3 horas e a reação foi, depois, mitigada com NH4C1 aquoso saturado (50 mL). A camada orgânica foi separada e seca sobre MgS04. A mistura foi, depois, concentrada e o residual foi purificado por cromatografia (hexanos:EtOAc=10:1~5:1) para dar o Composto 5 como um óleo (7,9 g). LC-MS: 450 [M+H], 877 [2M+H]. A uma solução de Composto 5 (7,9 g, 18,4 mmol) em DCM anidro (300 mL) foi bombeada atmosfera de HC1, a 0 2C, durante 6 horas. A mistura foi, depois, concentrada e o resíduo foi lavado com Et20 anidro para dar o composto em epígrafe como um sal de HC1 sólido branco (5,8 g) . LC-MS: 364 [M+H] , 727 [2M+H] . RMN de XH (300 MHz, DMSO) : δ 8,00-7, 97 (d, 4H) , 7, 67-7, 62 (m, 6H) , 7,47-7,28 (m, 8H) , 6,32 (s, 1H) , 6,09 (s, 1H) , 4,13-4,06 (m, 2H) , 3, 95-3, 78 (m, 2H) , 3,60 (s, 1H) , 3,22-3, 08 (m, 3H) , 2, 95-2, 65 (m, 2H) , 1, 99-1,79 (m, 4H) , 1,30-0,87 (m, 9H) . Éster Etílico do Ácido (R)-4-Amino-5-bifenil-4-il-2,2-dimetil-pentanóico
Uma solução de éster t-butílico do ácido [(S)-l-bifenil-4-ilmetil-2-(2,2-dimetil-4,6-dioxo-[1,3]dioxan-5-il)-etil]-carbâmico (46 g, 0,1 mol) em tolueno anidro (300 mL) foi submetida a refluxo durante 3 horas, sob azoto. Após evaporação do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia (hexanos:EtOAc=l0:1) para dar o Composto 1 como um sólido amarelo-claro (27 g). LC-MS: 374 [M+Na], 725 [2M+Na]. A uma solução de Composto 1 (6,2 g, 17,6 mmol) em THF anidro (100 mL) foi adicionada uma solução de LiHMDS em THF (39 mL, 39 mmol) a -78 2C sob azoto. A mistura foi agitada, a -78 2C, durante 2 horas e, depois, foi adicionado iodeto de metilo (7,5 g, 53 mmol). Após agitação, durante 0,5 horas, a -78 2C, a mistura foi aguecida para a temperatura ambiente e agitada, à temperatura ambiente, durante 3 horas. Após a mistura ser arrefecida para -10 2C, a reação foi mitigada com NH4C1 aquoso saturado (100 mL) e extraia com EtOAc (100 mLx4) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL) , secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para dar o produto em bruto, o qual foi purificado adicionalmente por cromatografia (hexanos:EtOAc=10:1) para dar o Composto 2 como um sólido amarelo-claro (5,7 g). LC-MS: 402 [M+Na], 781 [2M+Na].
A uma solução de Composto 2 (5,7 g, 15 mmol) em acetona (120 mL) foi adicionado NaOH 1 M (60 mL, 60 mmol) a -5 2C sob azoto. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada, à temperatura ambiente, durante 20 horas. A mistura foi concentrada e o residual foi diluído com água (250 mL) e lavado com EtOAc (150 mL). O pH da camada aquosa foi ajustado para 2 com HC1 6 M, a 0 2C, e o sólido foi filtrado e seco in vacuo para dar o Composto 3 em bruto como um sólido branco (5 g). LC-MS: 420 [M+Na], 817 [2M+Na]. A uma solução de Composto 3 em bruto (5 g, 12,7 mmol) em EtOH anidro (300 mL) foi adicionado S0C12 (13,4 mL, 190 mmol) a -30 2C sob azoto. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 20 horas à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada e o residual foi lavado com Et20 anidro para dar o composto em epígrafe como um sal de HC1 sólido branco (3,7 g). LC-MS: 326 [M+H], 651 [2M+H]. RMN de ΤΗ (300 MHz, DMSO): δ 7,86 (s, 3H), 7,67-7,64 (m, 4H), 7,49-7,33 (m, 5H), 4,09-3,97 (m, 2H) , 3,42 (m, 1H) , 2, 90-2,80 (m, 2H) , 1, 88-1, 84 (m, 2H) , 1,17-1,12 (m, 9H). Ácido 1-((R)-2-Amino-3-bifenil-4-il-propil) -ciclopropanocarboxilico
Num balão contendo BOC-D-4,4'-bifenilalanina (11,3 g, 33.1 mmol, 1,0 eq.), 4-dimetilaminopiridina (6,5 g, 53,0 mmol, 1,6 eq.), 2,2-dimetil-l,3-dioxano-4,6-diona (5,3 g, 36,4 mmol, 1.1 eq.) em DCM (100 mL) foi adicionado 1 M de DCC em DCM (38,1 mL) a 0 2C durante 30 minutos. A mistura foi mantida a 0 2C durante 6 horas e o precipitado resultante foi removido por filtração. O filtrado foi lavado com KHS04 a 10% aquoso (2x50 mL), depois seco. A solução foi acidificada com AcOH (20 mL) a 0 2C e foi adicionado boro-hidreto de sódio (3,1 g, 82,7 mmol, 2,5 eq.) durante 30 minutos em 3 partes. A mistura foi mantida a 0 2C, durante 3 horas, lavada com água e seca, depois concentrada sob vácuo. O material em bruto foi purificado por cromatografia (gradiente 0-40% de EtOAc/hexanos). Foi adicionado sal de Eschenmoser (15,9 g, 86,0 mmol) em álcool t-butilico (70 mL) e a mistura resultante foi agitada, a 65 2C, de um dia para o outro. A mistura foi concentrada e foi
adicionado Et20 (10 mL) . A solução orgânica foi, depois, lavada com NaHCCp aquoso saturado (10 mL) e KHSCq a 10% (10 mL) . A solução orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (gradiente 0-40% de EtOAc/hexanos) para dar o Composto 1 (3,3 g).
Iodeto de trimetilsufoxónio (2,0 g, 9,2 mmol, 1,0 eq.) em dimetilsulfóxido (50 mL) foi combinado com NaH (366 mg, 9,2 mmol, 1,1 eq.) e agitado durante 15 minutos à temperatura ambiente. A este, foi adicionado o Composto 1 (3,6 g, 8,3 mmol, 1,0 eq) dissolvido em dimetilsulfóxido (50 mL). A mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A solução foi misturada com NaCl aquoso saturado (50 mL) e extraída com EtOAc (3x10 mL), e a camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2x50 mL) e seca sobre Na2S04 anidro. Após evaporação do solvente, a reação em bruto foi purificada por cromatografia (gradiente 0-40% de EtOAc/hexanos) para dar o Composto 2, éster t-butílico do ácido 1-((R)-3-bifenil-4-il-2-t-butoxicarbonylaminopropil)-ciclopropanocarboxílico. TFA (200 pL) e DCM (500 pL) foram adicionados e a mistura resultante foi agitada durante 30 minutos. O solvente foi evaporado sob vácuo e azeotropado com tolueno (2x) para obter o composto em epígrafe. ENSAIO 1
Ensaios In vitro para a Quantificação de Potências
Inibidoras em NEP Humana e de Rato e ACE Humana
As atividades inibidoras de compostos na neprilisina humana e de rato (EC 3.4.24.11; NEP) e enzima conversora de angiotensina (ACE) humana foram determinadas utilizando ensaios in vitro como descritos abaixo.
Extração de Atividade de NEP de Rins de Rato A NEP de rato foi preparada a partir dos rins de ratos Sprague Dawley adultos. Os rins inteiros foram lavados em tampão fosfato salino (PBS) frio e recuperados em tampão de lise gelado (1% de Triton X-114, 150 mM de NaCl, 50 mM de tris(hidroximetil) aminometano (Tris) pH 7,5; Bordier (1981) J. Biol. Chem. 256: 1604-1607) numa razão de 5 mL de tampão para cada grama de rim. As amostras foram homogeneizadas em gelo utilizando uma trituradora de tecidos manual polytron. Os homogenatos foram centrifugados a 1000 x g num rotor basculante durante 5 minutos, a 3 2C. O sedimento foi ressuspenso em 20 mL de tampão de lise gelado e incubado em gelo durante 30 minutos. As amostras (15-20 mL) foram depois dispostas em camadas sobre 25 mL de tampão amortecedor gelado (6% p/v de sacarose, 50 mM, pH 7,5 Tris, 150 mM de NaCl, 0,06%, Triton X-114), aquecidas para 37 2C durante 3-5 minutos e centrifugadas a 1000 x g num rotor basculante à temperatura ambiente, durante 3 minutos. As duas camadas superiores foram removidas por aspiração, deixando um precipitado oleoso viscoso contendo a fração da membrana enriquecida. Foi adicionado glicerol a uma concentração de 50% e as amostras fora armazenadas a -20 2C. As concentrações proteicas foram quantificadas utilizando um sistema de deteção BCA com albumina sérica bovina (BSA) como um padrão.
Ensaios de Inibição Enzimática A NEP humana recombinante e ACE humana recombinante foram obtidas comercialmente (R&D Systems, Minneapolis, MN, números de catálogo 1182-ZN e 929-ZN, respetivamente). Foram utilizados nos ensaios de NEP e ACE, respetivamente, substrato peptidico fluorogénico Mca-D-Arg-Arg-Leu-Dap-(Dnp)-OH (Medeiros et ai. (1997) Braz. J. Med. Biol. Res. 30:1157-62; Anaspec, San Jose, CA) e Abz-Phe-Arg-Lys(Dnp)-Pro-OH (Araujo et al. (2000) Biochemistry 39:8519-8525; Bachem, Torrance, CA).
Os ensaios foram realizados em placas opacas brancas de 384 poços, a 37 2C, utilizando os substratos peptidicos fluorogénicos, a uma concentração de 10 μΜ em Tampão de Ensaio (NEP: HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, 0,01% de monolaurato de polietilenoglicol sorbitano (Tween-20), ZnS04 10 μΜ; ACE: HEPES 50 mM, pH 7,5, 100 mM NaCl, 0,01% de Tween-20, de 1 μΜ ZnS04) .
As respetivas enzimas foram utilizadas a concentrações que resultaram em proteólise quantitativa de 1 μΜ de substrato após 20 minutos, a 37 2C.
Os compostos de teste foram ensaiados ao longo da gama de concentrações desde 10 μΜ a 20 pM. Os compostos de teste foram adicionados às enzimas e incubados durante 30 minutos, a 37 2C, antes do inicio da reação pela adição de substrato. As reações foram terminadas após 20 minutos de incubação, a 37 2C, pela adição de ácido acético glacial a uma concentração final de 3,6% (v/v).
As placas foram lidas sobre um fluorómetro com comprimentos de onda de excitação e emissão definidos para 320 nm e 405 nm, respetivamente. As constantes de inibição foram obtidas por regressão não linear dos dados utilizando a equação (Software GraphPad, Inc., San Diego, CA):
onde v é a velocidade da reação, v0 é a velocidade da reação não inibida, I é a concentração do inibidor e K' é a constante de inibição aparente.
Os compostos da invenção foram testados nestes ensaios e verificou-se que tinham valores de pKi na NEP humana como se segue. Em geral, os compostos de profármaco não inibiram a enzima neste ensaio in vitro ou os profármacos não foram testados (n.d.), uma vez que não seria esperada atividade.
n.d = não determinado ENSAIO 2
Ensaio farmacodinâmico (PD) para atividade de ACE e NEP em Ratos Anestesiados
Ratos Sprague Dawley, machos, normotensos, são anestesiados com 120 mg/kg (i.p.) de inactina. Quando anestesiados, os cateteres da veia jugular, artéria carótida (tubagem PE 50) e bexiga (tubagem PE 50 alargada) são canulados e é realizada uma traqueotomia (Agulha de Teflon, tamanho calibre 14) , para facilitar a respiração espontânea. Deixam-se os animais durante um período de estabilização de 60 minutos a infusão manpossuem-se continuamente com 5 mL/kg/h de solução salina (0,9%) ao longo desta, para mantê-los hidratados e assegurar a produção de urina. A temperatura corporal é mantida ao longo da experiência utilizando uma almofada de aquecimento. No final do período de estabilização de 60 minutos, os animais são doseados intravenosamente (i.v.) com duas doses de AngI (1,0 pg/kg, para a atividade inibidora de ACE) com 15 minutos de intervalo. Aos 15 minutos após a segunda dose de AngI, os animais são tratados com veículo ou composto de teste. Cinco minutos mais tarde, os animais são adicionalmente tratados com uma injeção i.v. de bólus de péptido natriurético atrial (ANP; 30 pg/kg). A recolha da urina (em tubos eppendorf pré-pesados) é iniciada imediatamente após o tratamento de ANP e continuada durante 60 minutos. Aos 30 e 60 minutos da recolha de urina, os animais são desafiados novamente com AngI. As medições da pressão sanguínea são realizadas utilizando o sistema Notocord (Kalamazoo, MI) . As amostras de urina são congeladas a -20 2C, até serem utilizadas para o ensaio cGMP. As concentrações de cGMP na urina são determinadas por Ensaio Imunoenzimático, utilizando um kit comercial (Assay Designs, Ann Arbor, Michigan, Cat. N2 901-013). 0 volume de urina é determinado gravimetricamente. A eliminação de cGMP urinária é calculada como o produto de eliminação de urina e concentração de cGMP na urina. A inibição de ACE é avaliada pela quantificação da % de inibição da resposta pressora a AngI. A inibição de NEP é avaliada por quantificação da potenciação de aumento induzido por ANP na eliminação de cGMP urinária. ENSAIO 3
Avaliação In Vivo de Efeitos Anti-hipertensores no Modelo de Hipertensão de SHR Consciente
Ratos espontaneamente hipertensores (SHR, 14-20 semanas de idade) foram deixados um mínimo de 48 horas em aclimatação após a chegada ao local de teste, com livre acesso a ração e água. Para o registo da pressão sanguínea, estes animais são implantados cirurgicamente com pequenos radiotransmissores de roedores (unidade de telemetria; Modelos DSI TA11PA-C40 ou C50-PXT, Data Science Inc., EUA) . A ponta do cateter ligado ao transmissor é inserida na aorta descendente acima da bifurcação ilíaca e fixa no seu lugar com adesivo para tecido. O transmissor é mantido intraperitonealmente e fixo à parede abdominal enquanto se fecha a incisão abdominal com uma sutura não absorvível. A pele exterior é fechada com sutura e agrafos. Os animais são deixados e recuperar com cuidados pós-operativos apropriados. No dia da experiência, os animais nas suas gaiolas são colocados no topo das unidades recetores de telemetria para aclimatar ao ambiente de teste e registo dos valores de base. Depois de serem registadas, pelo menos, 2 horas de medição dos valores de base, os animais foram então doseados com veículo ou composto de teste e dirigidos para medição de pressão sanguínea 24 horas após a dose. Os dados são registados continuamente durante todo o estudo utilizando o software Notocord (Kalamazoo, MI) e armazenados como sinais digitais eletrónicos. Os parâmetros medidos são pressão sanguínea (pressão arterial sistólica, diastólica e média) e frequência cardíaca. ENSAIO 4
Avaliação In Vivo de Efeitos Anti-hipertensores no Modelo de Hipertensão de Rato Consciente de Sal de DOCA
Ratos CD (machos, adultos, com 200-300 gramas, Charles River Laboratory, EUA) são deixados um mínimo de 48 horas em aclimatação após a chegada ao local de teste antes de serem colocados numa dieta rica em sal. Uma semana após o início da dieta rica em sal (8% em ração ou NaCl 1% em água para beber), um pélete de acetato de desoxicorticosterona (DOCA) (100 mg, tempo de libertação 90 dias, Innovative Research of America, Sarasota, FL) é implantado subcutaneamente e é realizada nefrectomia unilateral. Neste momento, os animais são também implantados cirurgicamente com pequenos radiotransmissores para roedores para a medição da pressão sanguínea (ver Ensaio 3 para detalhes). Os animais são deixados a recuperar com cuidados pós-operativos apropriados. A conceção do estudo, registo de dados e parâmetros medidos são semelhantes aos descritos para o Ensaio 3. ENSAIO 5
Avaliação In Vivo de Efeitos Anti-hipertensores no Modelo de Hipertensão de Rato Dahl/SS Consciente
Ratos Dahl sensíveis a sal, machos, (Dahl/SS, 6-7 semanas de idade de Charles River Laboratory, EUA) são deixados, pelo menos, em 48 horas de aclimatação após a chegada ao local de teste antes destes serem colocados numa dieta rica em sal NaCl 8% (TD.92012, Harlan, EUA), depois, cirurgicamente implantados com peguenos radiotransmissores para roedores para a medição da pressão sanguínea (ver Ensaio 3 para detalhes). Os animais são deixados a recuperar com cuidados pós-operativos apropriados. A, aproximadamente, 4 a 5 semanas desde o início da dieta rica em sal, espera-se gue estes animais se tornem hipertensores. Quando o nível de hipertensão é confirmado, estes animais são utilizados para o estudo, enquanto se continua com a dieta rica em sal para manter o seu nível de hipertensão. A conceção do estudo, registo de dados e parâmetros medidos são semelhantes aos descritos para o Ensaio 3. EXEMPLO COMPARATIVO 1
Ácido (2R, 4S)-5-Bifenil-4-il-2-metil-4-(oxalil-amino)-pentanóico (Composto Comparativo A; R=-C (0)-C00H) Éster etílico do ácido (2R, 4S)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-metil-pentanóico (sal de HC1; 527 mg, 0,2 mmol) e cloreto de etil-oxalilo (18,4 pL, 1,1 eq) foram combinados com DIPEA (52,2 pL, 0,3 mmol) em DMF (0,3 mL)/DCM (0,3 mL). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa. O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em EtOH (750 pL) e NaOH aquoso 1 M (750 pL) e agitado, à temperatura ambiente, de um dia para o outro. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo A (11,2 mg, 100% de pureza) . MS m/z [M+H]+ calcd para C20H21NO5, 356,14; encontrado 356,2. Ácido (2R,4S)-5-Bifenil-4-il-4-(3-carboxi-propionilamino)-2-metil-pentanóico (Composto Comparativo B; R=-C(O)-(CH2) 2-COOH) Éster etílico do ácido (2R, 4S)-5-bifenil-4-il-4-(3-carboxi-propionilamino)-2-metil-pentanóico (sal de Na; 400 mg, 923 pmol) foi misturado com EtOH (7 mL, 0,1 mol) depois THF (6 mL, 0,1 mol). Foi depois adicionado NaOH 1 M aquoso (2,8 mL, 2,8 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 4 horas e foi depois concentrada. 0 produto foi purificado por HPLC preparativa (10-60% de MeCN:água com 0,5% de TFA) para dar o Composto Comparativo B (150 mg, 97% de pureza). MS m/z [M+H]+ calcd para C22H25NO5, 384,17; encontrado 384, 6.
Os Compostos Comparativos A e B foram testados como descrito no Ensaio 1 e verificou-se que possuíam valores de pK± na NEP humana como se seguem:
Os dados mostram que os Compostos Comparativos A e B possuem os mesmos valores de pKi para a inibição de NEP. EXEMPLO COMPARATIVO 2
Ácido (R)-5-Bifenil-4-il-4-(2-carboxiacetilamino)-2-hidroxipentanóico (Composto Comparativo C; R=-C(O)-CH2-COOH) Éster etílico do ácido (R)-4-amino-5-bifenil-4-il-2- hidroxipentanóico (sal de HC1; 60,3 mg, 0,2 mmol) e cloreto de metil-malonilo (21 pL, 0,2 mmol) foram combinados com DIPEA (84 pL, 0,5 mmol) rm DMF (5 mL) . A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (1 hora). O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em MeOH (3 mL) e NaOH 10 N (250 pL) e agitado, a 60 2C, até a reação estar completa (1 hora). Foi adicionado ácido acético glacial (250 pL) e o produto foi evaporado sob pressão reduzida e purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo C (6,3 mg, 98% de pureza). MS m/z [M+H]+ calcd para C2oH2iN06, 372,14; encontrado 372,2. Ácido (R)-5-Bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionylamino)-2-hidroxipentanóico (Composto Comparativo D;R =-C(0)- (CH2) 2~C00H) Éster etílico do ácido (.R) -4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroxipentanóico (sal de HC1; 60,3 mg, 0,2 mmol) e cloreto de 3-(carbometoxi)propionilo (24 pL, 0,2 mmol) foram combinados com DIPEA (84 pL, 0,5 mmol) em DMF (5 mL). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (1 hora). O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em MeOH (3 mL) e NaOH 10 N (250 pL) e agitado, a 60 2C, até a reação estar completa (1 hora). Foi adicionado ácido acético glacial (250 pL) e o produto foi evaporado sob pressão reduzida e purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo D (8,0 mg, 100% de pureza) . MS m/z [M+H]+ calcd para C21H23NO6, 386,15; encontrado 386.2. Ácido (-R) -5-Bifenil-4-il-4- (4-carboxibutirilamino) -2-hidroxipentanóico (Composto Comparativo E; R=-C(OHCH2) 3-COOH) Éster etílico do ácido (.R) -4-amino-5-bifenil-4-il-2- hidroxipentanóico (sal de HC1; 60,3 mg, 0,2 mmol) e 5-cloro-5-oxovalerato de metilo (31,7 mg, 0,2 mmol) foram combinados com DIPEA (84 pL, 0,5 mmol) em DMF (5 mL). A mistura foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (1 hora). O solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em MeOH (3 mL) e NaOH 10 N (250 pL) e agitado, a 60 2C, até a reação estar completa (1 hora). Foi adicionado ácido acético glacial (250 pL) e o produto foi evaporado sob pressão reduzida e purificado por HPLC preparativa para dar o Composto E Comparativo (8,7 mg, 100% de pureza). MS m/z [M+H]+ calcd para C22H25NO6, 400,17; encontrado 400.2. 0 composto do Exemplo 1 e Compostos Comparativos C, D, e E foram testados como descrito no Ensaio 1 e verificou-se que possuíam valores de pK± na NEP humana como se seguem:
Os dados mostram que o composto do Exemplo 1 teve maior potência na NEP do que os Compostos Comparativos C, D, e E. EXEMPLO COMPARATIVO 3
Ácido (2S,4S)-5-Bifenil-4-il-4-(2-carboxi-acetilamino)-2-hidroximetilpentanóico (Composto Comparativo F; R=-C(0)-CH2-COOH) Ácido (2S, 4S)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil- pentanóico (sal de HC1; (5 mg, 10 pmol) foi dissolvido em NaOH aquoso 1 M (119 pL, 119 pmol) e adicionado lentamente a uma solução de cloreto de metil-malonilo (1,9 pL, 18 pmol) e MeCN (0,5 mL, 10 mmol). A solução resultante foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (de um dia para o outro) e o produto foi purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo F (1,0 mg, 95% de pureza) . MS m/z [M+H]+ calcd para C2iH23N06, 386, 15; encontrado 386, 1. Ácido (2S,4S)-5-Bifenil-4-il-4-(3-carboxi-propionilamino)-2-hidroximetilpentanóico (Composto Comparativo G; R=-C(0HCH2) 2-C00H) Ácido (2S,4S)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil- pentanóico (sal de HC1; (5 mg, 10 pmol) foi dissolvido em NaOH aquoso 1 M (119 pL, 119 pmol) e adicionado lentamente a uma solução de cloreto de 3-(carbometoxi)propionilo (2.2 pL, 18 pmol) e MeCN (0,5 mL, 10 mmol) . A solução resultante foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (de um dia para o outro) e o produto foi purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo G (3,4 mg, 95% de pureza). MS m/z [M+H]+ calcd para C22H25N06, 400, 17; encontrado 400,3. Ácido (2S,4S)-5-Bifenil-4-il-4-(4-carboxi-bytirilamino)-2-hidroximetilpentanóico (Composto Comparativo H; R=-C(O)-(CH2) 3-COOH) Ácido (2S,4S)-4-amino-5-bifenil-4-il-2-hidroximetil- pentanóico (sal de HC1; (5 mg, 10 pmol) foi dissolvido em NaOH aquoso 1 M (119 pL, 119 pmol) e adicionado lentamente a uma solução de 5-cloro-5-oxovalerato de metilo (2,5 pL, 18 pmol) e MeCN (0,5 mL, 10 mmol). A solução resultante foi agitada, à temperatura ambiente, até a reação estar completa (de um dia para o outro) e o produto foi purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo Η (3,0 mg, 95% de pureza). MS m/z [M+H]+ calcd para C2,H27N06, 414,18; encontrado 414,7. O composto do Exemplo 5A e Compostos Comparativos F, G, e H foram testados como descrito no Ensaio 1 e verificou-se que possuíam valores de pKx na NEP humana como se seguem:
Os dados mostram que o composto do Exemplo 5A teve maior potência na NEP do que os Compostos Comparativos F, G, e H. EXEMPLO COMPARATIVO 4
Ácido (2R, 4R)-4-(2-Carboxi-acetilamino)-5-(3'-cloro-bifenil- 4-il)-2-hidroxi-pentanóico (Composto Comparativo I; R=-C(O)-CH2-COOH)
Cloreto de metil-malonilo (18,5 pL, 172 pmol) foi adicionado a uma solução de éster etílico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 144 pmol) e DIPEA (75,1 pL, 431 pmol) em DCM (1,5 mL, 23,4 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi depois concentrada para dar um líquido amarelo. Foi adicionado, gota a gota, LiOH aquoso 1 M (719 pL, 719 pmol) ao óleo, e a mistura foi agitada, a 60 2C, durante 1 hora. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo resultante foi dissolvido em AcOH (1,0 mL) purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo I (2,0 mg, 100% de pureza). MS m/z [M+H]+ calcd para C2oH2oC1N06, 406, 10; encontrado 406,1. Ácido (2R, 4R)-4-(3-Carboxi-propionilamino)-5-(3'-cloro-bifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (Composto Comparativo J; R=-C (0) - (CH2) 2-COOH)
Cloreto de 3-(carbometoxi)propionilo (21,2 pL, 172 pmol) foi adicionado a uma solução de éster etilico do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg, 144 pmol) e DIPEA (75,1 pL, 431 pmol) em DCM (1,5 mL, 23,4 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi depois concentrada para dar um líquido amarelo. Foi adicionado, gota a gota, LiOH aquoso 1 M (719 pL, 719 pmol) ao óleo, e a mistura foi agitada, a 60 2C, durante 1 hora. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo resultante foi dissolvido em AcOH (1,0 mL) purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo J (31,1 mg, 100% de pureza) . MS m/z [M+H]+ calcd para C2iH22C1N06, 420, 11; encontrado 420,2. Ácido (2R,4R)-4-(4-Carboxi-butirilamino)-5-(3'-cloro-bifenil-4-il)-2-hidroxi-pentanóico (Composto Comparativo K; R=-C (O) - (CH2) 3-COOH) 5-Cloro-5-oxovalerato de metilo (23,8 pL, 172 pmol) foi adicionado a uma solução de éster etílico do ácido (2R, 4R)-4- amino-5-(3'-clorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (50,0 mg,
144 pmol) e DIPEA (75,1 pL, 431 pmol) em DCM (1,5 mL, 23,4 mmol) e a mistura resultante foi agitada, à temperatura ambiente, durante 30 minutos. A mistura foi, depois, concentrada para dar um líquido amarelo. Foi adicionado, gota a gota, LiOH aquoso 1 M ao óleo, e a mistura foi agitada, a 60 2C, durante 1 hora. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo resultante foi dissolvido em AcOH (1,0 mL) purificado por HPLC preparativa para dar o Composto Comparativo K (29,2 mg, 100% de pureza) . MS m/z [M+H]+ calcd para C22H24CINO6, 434,13; encontrado 434,2. O composto do Exemplo 2A e Compostos Comparativos I, J, e K foram testados como descrito no Ensaio 1 e verificou-se que possuíam valores de pKi na NEP humana como se seguem:
Os dados mostram que o composto do Exemplo 2A teve maior potência na NEP do que os Compostos Comparativos I, J, e K.

Claims (35)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto de fórmula I:
    (I) onde: R1 é selecionado de H, -alquilo Ci-8, -alquileno Ci_3-arilo C6-io/ -alquileno Ci-3-heteroarilo Ci_9, -cicloalquilo C3_7, - [ (CH2) 2O] 1-3CH3, -alquileno Ci_6-OC (0) R10, -alquileno Ci-6-NR1:1R12, -alquileno Ci_6-C (0) R13, -alquilenomorfolinilo C0-6r -alquileno Ci-6-S02-alquilo C1-6,
    R10 é selecionado de -alquilo Ci-6, -0-alquilo Ci-6, -cicloalquilo C3-7, -O-cicloalquilo C3-7, fenilo, -0-fenilo, -NR11R12, -CH (R15) -NH2, -CH (R15)-NHC (0) 0-alquilo Cí-6 e -CH (NH2) CH2COOCH3; e R11 e R12 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci-6 e benzilo; ou R11 e R12 são considerados em conjunto como -(CH2)3_6-, -C (0) - (CH2) 3- ou - (CH2) 2O (CH2) 2~'r R13 é selecionado de -O-alquilo Ci_6, -O-benzilo, e -NR11R12; e R14 é -alquilo Ci-6 ou — alquileno C1-6—arilo C6-10; R45 é H, —CH3, — CH(CH3)2, fenilo ou benzilo; R2 é -OR21 ou -CH2OR21; e R3 é H ou -CH3; onde R21 é H, -C (0)-alquilo C1-6, -C (0) -CH (R22) -NH2, -C (0) -CH (R22) -NHC (0) 0-alquilo C1-6, ou -P (0) (OR23) 2; R22 é H, -CH3, -CH(CH3)2, fenilo, ou benzilo; R23 é H, -alquilo Ci_6 ou fenilo; ou R2 é considerado em conjunto com R1 para formar -OCR15R15- ou -CH20-CR15R16-, e R3 é selecionado de H e -CH3, onde R15 e R16 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci_6 e -O-cicloalquilo C3-7 ou R15 e R16 são considerados em conjunto para formar =0; ou R2 é considerado em conjunto com R3 para formar -CH2-0-CH2-ou -CH2-CH2-; ou R2 e R3 são ambos -CH3; Z é selecionado de -CH- e -N-; R4 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno C1-3-O-alquilo C1-8, -alquileno Ci_3-arilo C6-ior -alquileno Ci_3-0-arilo Ce-w, -alquileno Ci-3-heteroarilo C1-9, -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 20] 1-3CH3, -alquileno Ci-5-0C (0) R40, -alquileno Ci-6_NR41R42, -alquileno Ci-6~C (0) R43, -alquilenomorfolinilo C0-6, -alquileno Ci_6-S02-alquilo Ci_6,
    R40 é selecionado de -alquilo Ci-6, -O-alquilo Ci-6, -cicloalquilo C3-7, -O-cicloalquilo C3-7, fenilo, -O-fenilo, -NR41R42, -CH (R45)-NH2, -CH (R45)-NHC (0) O-alquilo C^e, e -CH (NH2) CH2COOCH3; e R41 e R42 são independentemente selecionados de H, -alquilo Ci~6 e benzilo; ou R41 e R42 são considerados em conjunto como - (CH2) 3_6-, -C (0) - (CH2) 3- ou - (CH2) 2O (CH2) 2-; R43 é selecionado de -O-alquilo Ci_6, -0-benzilo e -NR41R42; e R44 é -alquilo Ci-6 ou — alquileno Co-6—arilo Ce—10} R o H, —CH3, — ΟΗ(ΟΗ3)2, fenilo, ou benzilo; a é 0 ou 1; R5 é selecionado de halo, -CH3, -CF3 e -CN; b é 0 ou um número inteiro de 1 a 3; cada R6 é independentemente selecionado de halo, -OH, -CH3, -0CH3, -CN, e -CF3; onde cada qrupo alquilo em R1 e R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com um ou dois grupos -alquilo Ci_6 ou ciclopropilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. Composto da Reivindicação 1, onde R1 é H.
  3. 3. Composto da Reivindicação 1, onde R1 é selecionado de -alquilo Ci-s, -alquileno Ci-3-arilo Ce-10, -alquileno C1-3-heteroarilo Ci_9, -cicloalquilo C3-7, - [ (CH2) 20] i-3CH3, -alquileno Ci-6-OC (0) R10, -alquileno Ci-6_NR11R12, -alquileno Ci-6-C (0) R13, -alquilenomorfolinilo C0-6, -alquileno Ci-6-S02-alquilo Ci_6,
    ou R1 é considerado em conjunto com R2 para formar -OCR15R16-ou -CH20-CR15R16-.
  4. 4. Composto da Reivindicação 1, onde R1 é selecionado de H, -alquilo Ci-8, -alquileno Ci-6-0C (0) R10 e
    onde R10 é -alquilo Ci-6, -0-alquilo C1-6, ou -CH [R15] -NHC (0) 0-alquilo Ci-6; R14 é -alquilo Ci-6; R15 é -CH(CH3)2; e cada grupo alquilo em R1 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro.
  5. 5. Composto da Reivindicação 4, onde R1 é selecionado de H, -ch2ch3, -ch(ch3)2, -ch2ch (CH3) 2, -(CH2)3CH3, -(CH2)6CH3, -ch2cf3, -(CH2)2CF3, -ch2cf2ch3, -ch2cf2cf3, -ch2oc (0) ch3, -ch2oc (0) ch2ch3, -CH20C(0) (CH2)2CH3, -CH20C(0)0CH2CH3, -CH20C (0) -CH [CH (CH3) 2] -NHC (0) 0-CH3, e
    onde R14 é -CH3.
  6. 6. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 5, onde R2 é -OR21, R3 é H e R21 é H; ou R2 é -OR21, R3 é -CH3 e R21 é H; ou R2 é -CH20R21, R3 é H e R21 é H; ou R2 é -CH20R21, R3 é -CH3 e R21 é H.
  7. 7. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 6, onde R14 é H.
  8. 8. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 6, onde R4 é selecionado de -alquilo Ci-8, -alquileno Ci_3-0-alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-arilo C6-ior -alquileno Ci_3-0-arilo C6-io, -alquileno Ci-3-heteroarilo C2-9, -cicloalquilo C3_7, - [ (CH2) 20] i_3CH3, -alquileno Ci-6_0C (0) R40, -alquileno Ci-6_NR41R42, -alquileno Ci-6_C (0) R43, -alquilenomorfolinilo Co-β, -alquileno Ci-6_S02-alquilo Ci-6,
  9. 9. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 6, onde R4 é selecionado de H, -alquilo Ci-8, -alquileno Ci-3-0-alquilo Ci-8, -alquileno Ci-3-O-arilo C g-ι o r ~ [ (CH2) 2O] 1-3CH3 e
    onde R44 é -alquilo Ci-6; e cada grupo alquilo em R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro.
  10. 10. Composto da Reivindicação 9, onde R4 é selecionado de H, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH (CH3) 2, -(CH2)3CH3, -C(CH3)3, -(CH2)2CF3, -CH2CF2CH3, - (CH2) 3-0-CH2CH3, - (CH2) 2-O-fenilo, - (CH2) 2OCH3 e
    onde R44 é -CH3.
  11. 11. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10, onde a é 0, ou a é 1 e R5 é halo.
  12. 12. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 11, onde b é 0, ou b é 1 e R6 é halo, ou b é 2 e cada R6 é independentemente selecionado de halo e -CH3.
  13. 13. Composto da Reivindicação 1, onde: aéOebéO; ou a é 0, b é 1, e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4 ' -fluoro; ou a é 0, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro ou 2'-metilo, 5'-cloro ou 2',5'-dicloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, e b é 0; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 1, e R6 é 3'-cloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro.
  14. 14. Composto da Reivindicação 6, onde R2 é -OR21, R3 é H, e R21 é H; R1 é selecionado de H, -alquilo Ci-8, -alquileno Ci-6-OC (O) R10, e
    onde R10 é -alquilo Ci-6, -O-alquilo Ci_6, ou -CH [R15] -NHC (O) 0-alquilo Ci_6; R14 é -alquilo Ci-6; R15 é -CH(CH3)2; e cada grupo alquilo em R1 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; Z é selecionado de -CH- e -N-; R4 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-0-alquilo Ci-8, -alquileno Ci^3-0-arilo Ce-w, - [ (CH2) 20] i-3CH3 e
    onde R44 é -alquilo Ci-6; e cada grupo alquilo em R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; a é 0 e b é 0; ou a é 0, b é 1, e R6 é halo; ou a é 0, b é 2, e um R6 é halo e o outro R5 é halo ou -CH3; ou a é 1, R5 é halo, e b é 0; ou a é 1, R5 é halo, b é 1, e R6 é halo; ou a é 1, R5 é halo, b é 2, e cada R6 é halo; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com dois grupos -CH3.
  15. 15. Composto da Reivindicação 14, onde R1 é selecionado de H, -CH2CH3, -CH (CH3) 2, -CH2CH (CH3) 2, - (CH2) 3CH3, -(CH2)6CH3, -ch2cf3, - (CH2) 2cf3, -ch2cf2ch3, -ch2cf2cf3, -CH2OC (0) CH3, -CH2OC (O) ch2ch3, -CH20C (0) (CH2) 2ch3, —CH20C (0) OCH2CH3, -CH20C (0) -CH [CH (CH3) 2] -NHC (0) 0-CH3 e
    onde R14 é -CH3; R4 é selecionado de H, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH (CH3) 2, -(ch2)3ch3, -c (CH3) 3, - (CH2) 2cf3, -ch2cf2ch3, - (ch2) 3-o-ch2ch3, - (CH2) 2-0-phenil, -(CH2)2OCH3 e
    onde R44 é -CH3; e a é 0 e b é 0; ou a é 0, b é 1, e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro; ou a é 0, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro ou 2'-metilo, 5'-cloro ou 2' ,5'-dicloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, e b é 0; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 1, e R6 é 3'-cloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro.
  16. 16. Composto da Reivindicação 6, onde R2 é -OR21, R3 é -CH3, e R21 é H; R1 é H ou -alquilo Ci_8; Z é -N-; R4 é H ou -alquilo Ci^8; e a e b são 0.
  17. 17. Composto da Reivindicação 16, onde R1 e R4 são H.
  18. 18. Composto da Reivindicação 6, onde R2 é -CH20R21, R3 é H, e R21 é H; R1 é H ou -alquilo Ci_8; Z é -CH-; R4 é H ou -alquilo Ci-8; aéOouaéleR5é halo; b é 0 ou b é 1 ou 2 e R6 é halo; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com dois grupos -CH3.
  19. 19. Composto da Reivindicação 18, onde R1 é H, -CH2CH3, ou -(CH2)3CH3; R4 é H; a é 0 ou a é 1 e R5 é 3-cloro; b é 0 ou b é 1 e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro.
  20. 20. Composto da Reivindicação 6, onde R2 é -CH20R21, R3 é -CH3, e R21 é H; R1 é H ou -alquilo Ci_8; Z é -CH-; R4 é H ou -alquilo Ci_8; a é 0; e b é 0, ou b é 1 e R6 é halo.
  21. 21. Composto da Reivindicação 20, onde R1 é H ou -CH2CH3; R4 é H ou -CH2CH (CH3) 2; e b é 0, ou b é 1 e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro ou 4'-fluoro.
  22. 22. Composto da Reivindicação 1, onde R1 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci-6-OC (O) R10 e
    onde R10 é -alquilo Ci_6, -O-alquilo Ci_6, ou -CH [R15] -NHC (O) 0-alquilo Ci_6; R14 é -alquilo Ci_6; R15 é -CH(CH3)2; e cada grupo alquilo em R1 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; R4 é selecionado de H, -alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-0-alquilo Ci_8, -alquileno Ci_3-0-arilo C6_i0, - [ (CH2) 20] i-3CH3, e
    onde R44 é -alquilo Ci-e; e cada grupo alquilo em R4 é opcionalmente substituído com 1 a 8 átomos de fluoro; a é 0 e b é 0; ou a é 0, b é 1, e R6 é 2'-fluoro, 3'-fluoro, 3'-cloro, ou 4'-fluoro; ou a é 0, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro ou 2'-metilo, 5'-cloro ou 2',5'-dicloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, e b é 0; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 1, e R6 é 3'-cloro; ou a é 1, R5 é 3-cloro, b é 2, e R6 é 2'-fluoro, 5'-cloro; e onde o ligante metileno no bifenilo é opcionalmente substituído com dois grupos -CH3.
  23. 23. Composto da Reivindicação 22, onde R2 é -OR21 ou -CH20R21; e R3 é H ou -CH3; cada R21 é H.
  24. 24. Processo para preparar um composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 23, compreendendo o passo de acoplamento de um composto de fórmula 1 com um composto de fórmula 2:
    para produzir um composto de fórmula I; onde Ri-R6, a, e b são como definido na Reivindicação 1, e P é selecionado de H e um grupo protetor de amino selecionado de t-butoxicarbonilo, tritilo, benziloxicarbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, formilo, trimetilsililo e t-butildimetilsililo; e onde o processo compreende ainda a desproteção do composto de fórmula 1 quando P é um grupo protetor de amino.
  25. 25. Composição farmacêutica compreendendo um composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 23 e um veículo farmaceuticamente aceitável; e opcionalmente compreendendo ainda um agente terapêutico selecionado de antagonistas do recetor de adenosina, antagonistas do recetor α-adrenérgico, antagonistas do recetor βι-adrenérgico, agonistas do recetor β2-3άηθηέ^ϊοο, antagonista do recetor β-adrenérgico/antagonistas do recetor oq de dupla ação, agentes de quebra de produto final de glicação avançada, antagonistas de aldosterona, inibidores da aldosterona sintase, inibidores de aminopeptidase N, androgénios, inibidores da enzima conversora da angiotensina e inibidores da enzima conversora da angiotensina/neprilisina de dupla ação, ativadores e estimuladores da enzima conversora de angiotensina 2, vacinas de angiotensina II, anticoagulantes, agentes antidiabéticos, agentes antidiarreicos, agentes antiglaucoma, agentes antilipídicos, agentes antinociceptivos, agentes antitrombóticos, antagonistas do recetor ATi e antagonista do recetor ATi/inibidores da neprilisina de dupla ação e bloqueadores do recetor de angiotensina multifuncionais, antagonistas do recetor de bradicinina, bloqueadores do canal de cálcio, inibidores de quimase, digoxina, diuréticos, agonistas de dopamina, inibidores da enzima conversora da endotelina, antagonistas do recetor de endotelina, inibidores da HMG-CoA redutase, estrogénios, agonistas e/ou antagonistas do recetor de estrogénio, inibidores da reabsorção de monoaminas, relaxantes musculares, péptidos natriuréticos e os seus análogos, antagonistas do recetor de eliminação de péptido natriurético, inibidores da neprilisina, dadores de óxido nítrico, agentes anti-inflamatórios não esteroides, antagonistas do recetor N-metil-d-aspartato, agonistas do recetor opióide, inibidores da fosfodiesterase, análogos de prostaglandina, agonistas do recetor de prostaglandina, inibidores da renina, inibidores da reabsorção de serotonina seletivos, bloqueador de canal de sódio, estimuladores e ativadores da guanilato ciclase solúvel, antidepressivos tricíclicos, antagonistas do recetor de vasopressina e as suas combinações.
  26. 26. Composição farmacêutica da Reivindicação 25, em que o agente terapêutico é um antagonista do recetor de ATi.
  27. 27. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 23, para utilização em terapia.
  28. 28. Composto como reivindicado na Reivindicação 27, para utilização no tratamento de hipertensão, insuficiência cardíaca ou doença renal.
  29. 29. Composto da reivindicação 1, onde o composto possui a fórmula:
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  30. 30. Composto da Reivindicação 29, onde R1 é H.
  31. 31. Composto da Reivindicação 29, onde R4 é -alquilo Ci-s.
  32. 32. Composto da Reivindicação 29, onde R21 é H.
  33. 33. Composto da Reivindicação 29, onde Z é -CH-.
  34. 34. Composto da Reivindicação 29, onde a é 0.
  35. 35. Composto da Reivindicação 1, onde o composto é ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil- 2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
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