PT2699227T - Complexo de extratos vegetais para proteção da pele - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "COMPLEXO DE EXTRATOS VEGETAIS PARA PROTEÇÃO DA PELE" A presente invenção refere-se a uma nova composição cosmética e/ou dermatológica útil para a proteção da pele, e mais particularmente a uma composição à base de extratos de borragem, de pétalas de papoila e de maracujazeiro destinada a tratar e/ou a prevenir os sinais do envelhecimento cutâneo. A pele é um verdadeiro órgão que compreende uma pluralidade de camadas integradas, que vão desde a camada superficial, a epiderme, até às camadas mais profundas, a derme e a hipoderme, e cada uma dessas camadas tem propriedades especificas que permitem ao conjunto reagir e adaptar-se às condições do seu ambiente. A epiderme é composta principalmente por queratinócitos (90% das células epidérmicas) que sintetizam queratina, melanócitos (2-3% das células epidérmicas) responsáveis pela pigmentação da pele e células de Langerhans que desempenham um papel imunológico. A epiderme, cuja espessura varia de acordo com as diferentes partes do corpo, constitui a camada externa da pele e, portanto, desempenha um papel fundamental na garantia da proteção e manutenção de uma boa troficidade. É por isso que muitas composições foram desenvolvidas para protegê-la e melhorar as suas funções, em particular para aumentar sua elasticidade e firmeza. A derme é a camada mais espessa, rica em nervos, vasos sanguíneos e glândulas sudoríparas, e consiste principalmente em colagénio, elastina e proteoglicanos. Estes três tipos de moléculas são sintetizados por fibroblastos dérmicos. As fibras de colagénio, que representam 70% do peso seco da derme, asseguram a resistência mecânica e a textura da pele, a elastina é responsável pela elasticidade, e os proteoglicanos desempenham um papel importante de estrutura e hidratação da pele. Outras células, como os macrófagos e leucócitos, estão também presentes na camada da derme. A hipoderme é a camada mais profunda da pele, contém os adipócitos que produzem os lipidos para que o tecido subcutâneo fabrique uma camada gorda de proteção dos músculos, dos ossos e dos órgãos internos contra choques. O envelhecimento da pele pode ser intrínseco ou extrínseco, ou seja, causado pelo ambiente, incluindo agressões climatéricas, o que pode contribuir nomeadamente para acelerar a degradação do colagénio da derme e, em particular, a exposição à luz solar, variações de temperatura e radicais livres. Os primeiros sinais de envelhecimento da pele, tais como rugas e rídulas, são geralmente causados pelo stresse e por mudanças biológicas e fisiológicas, aceleradas pelo ambiente externo ou por estilos de vida. O aparecimento de marcas pigmentares, a diminuição da espessura da pele e a sua flacidez são também alterações observadas durante o envelhecimento. Ao nível da pele, o envelhecimento provoca, em particular, uma diminuição da síntese de proteínas (colagénio, elastina), uma diminuição da síntese de proteoglicanos, e uma elevação das metaloproteinases do tipo MMP3. A capacidade da pele para substituir o colagénio danificado diminui não só com o tempo, mas também com fatores ambientais e com o estado de stresse, e espaços e irregularidades aparecem progressivamente na rede de colagénio. 0 envelhecimento da pele é muitas vezes acompanhado de sensação de peso, de pressão durante o sono e também de contrações dos músculos faciais, que determinam as rugas de expressão, especialmente ao redor dos olhos e da boca, ou a modificação do microrrelevo epidérmico, especialmente devido ao stresse.

Foi proposta a utilização de composições cosméticas contendo substâncias de ação exfoliante tais como os alfa-hidroxiácidos, por exemplo o ácido láctico e o ácido glicólico para facilitar a remoção das células mortas e estimular a formação de colagénio e elastina. Também são conhecidas composições à base de ácido retinoico ou retinol que podem atuar contra os sinais de envelhecimento cutâneo tais como a secura, a perda de elasticidade da pele e a formação de rugas.

Foi também proposto a incorporação de substâncias de origem vegetal em composições destinadas ao tratamento de sintomas de envelhecimento da pele. Assim, a patente FR-A-2.761.607 descreve uma composição compreendendo um derivado de silanol metilado e um derivado de uma proteína vegetal hidrolisada, com a adição, conforme o caso, de um derivado de vitamina C. A patente FR-A-2.783.169 descreve o uso de penta-péptidos do tipo Lys-Thr-Thr-Lys-Ser em composições tópicas para promover a síntese de colagénio e de glicosaminoglicanos, e portanto a regeneração cutânea. Um exemplo de um pentapéptido comercialmente disponível é o Matrixyl®. O pedido WO 2004062637 descreve uma composição cosmética e/ou dermatológica à base de inibidores de metaloproteinases da matriz, em particular extrato de Siegesbeckia, e lipopéptidos que permitem o tratamento e a prevenção de sinais de envelhecimento cutâneo, tais como o aparecimento de rugas e a perda de elasticidade da pele. Uma composição baseada em extrato de sementes de mimosa, que pode atuar contra o aparecimento de rugas e a perda de elasticidade da pele, é descrita no pedido WO 2007144518. O maracujazeiro, da família das passifloraceae, é uma planta medicinal perene usada em infusões pelo seu efeito calmante e sedativo. Compreende várias centenas de espécies, algumas das quais, tais como Passiflora edulis e Pass!flora ligularis, são conhecidas por dar frutos comestíveis (maracujá e granadilha). A patente EP 1.541.037 descreve composições para administração por via oral, contendo um extrato de maracujazeiro e ácidos gordos que podem ser utilizados como aditivos alimentares. O pedido de patente EP 1.537.789 descreve uma composição com atividade anti-inflamatória para aplicação tópica ou para administração por via oral contendo um carotenoide, tocoferol, um extrato de maracujazeiro e um extrato de mirtilo; tais composições são apresentadas como eficazes para combater os efeitos adversos causados por uma exposição excessiva à radiação solar. Composições cosméticas destinadas a combater o envelhecimento da pele e contendo óleos ricos em ácidos gordos essenciais e um extrato de maracujazeiro, são descritas na patente EP 1.002.524. O pedido de patente US 2007/134189 descreve composições antirrugas baseadas em extratos de maracujazeiro, de menta, de papoila e de mirto. O pedido de patente JP 2002-332224 descreve uma composição cosmética para combater o envelhecimento cutâneo, contendo um extrato de maracujazeiro como composto para remoção de iões superóxido e um aditivo escolhido entre agentes hidratantes, antioxidantes, ativadores celulares, agentes branqueadores e filtros solares.

Extratos de borragem (Anchusa officinalis) foram propostos em composições alimentares, em associação com outros extratos vegetais tais como Magnolia officinalis, Nelumbo nucifera e Origanum vulgare, para inibir a formação de mercaptanos por ação de bactérias, tal como indicado na patente JP 2005-162697. Estudos demonstraram que extratos de raizes de Anchusa strigosa podem ter um efeito protetor de úlcera induzida por etanol no rato (AM Disi et ai., J. Ethnopharmacol. 1998, pág. 189-98) . A utilização de extratos de borragem como um agente hidratante ou amaciador em composições cosméticas foi já proposto, em particular no pedido de patente US 2006/018867. A associação de maracujazeiro e borragem foi descrita no pedido WO 2009147345, bem como a sua utilização no combate contra contrações musculares, em particular contrações faciais e rugas de expressão. A papoila (Papaver rhoeas) contém roeadina, alcaloide da série das tetra-hidrobenzazepinas, que é considerada ter propriedades neurolépticas. Esta planta foi descrita como podendo ser utilizada em casos de eretismo cardíaco do adulto, como calmante para adultos e crianças, e também para o tratamento sintomático da tosse.

As composições compreendendo extratos de papoila (Papaver rhoeas) em associação com extratos de lótus azuis (Nymphaea caerulea), exibindo efeitos de inibição de contrações musculares faciais, são descritas na patente FR 2.871.382. Estes extratos são obtidos a partir de sementes de plantas. Uma composição farmacêutica administrável por via oral à base de extratos de pétalas de papoila foi proposta na patente GB 171920 para o tratamento da tuberculose. O pedido WO 2009101301 descreve a utilização de pétalas de papoila (Papaver rhoeas) para a preparação de composições tópicas promovendo a nutrição de células dérmicas e epidérmicas. Um estudo fármaco-toxicológico em ratinhos mostrou que extratos de pétalas de papoila podem ter um efeito sedativo em doses significativas (R. Soulimari et ai., "Medicinal and Aromatic Plants Abstracts", vol. 23 n° 5, out. 2001) .

No entanto, embora tenham sido propostas muitas composições cosméticas e dermatológicas, há ainda necessidade de novas composições tópicas alternativas para proteger a pele e combater os sinais de envelhecimento cutâneo e, mais particularmente, composições tópicas à base de extratos vegetais apropriados de plantas conhecidas pelas suas propriedades favoráveis a uma tal atividade.

Os estudos realizados pelo requerente demonstraram que a associação de plantas constituídas pela borragem, pela papoila e pelo maracujazeiro proporciona efeitos inesperados úteis para a proteção da pele e para a prevenção e o tratamento de sinais de envelhecimento cutâneo. A presente invenção tem, portanto, por objeto uma nova composição cosmética e/ou dermatológica para aplicação tópica à base de extratos de plantas e mais particularmente â base de extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e maracujazeiro, em associação.

As composições da invenção são composições tópicas que compreendem uma quantidade eficaz de extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e de maracujazeiro, em associação, para assegurar uma boa proteção da pele.

Tais composições apresentam excelentes propriedades utilizáveis em cosmética e em dermatologia para o cuidado da pele, mais particularmente para proteger a pele de agressões ambientais e para prevenir e/ou tratar os sinais de envelhecimento cutâneo. A invenção tem também por objetivo uma composição farmacêutica baseada em extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e de maracujazeiro, em associação, proporcionando efeitos sobre a proteção e regeneração do ADN mitocondrial, para utilização na prevenção e/ou no tratamento de sinais de envelhecimento cutâneo.

As composições de acordo com a presente invenção distinguem-se porque compreendem uma associação de extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e maracujazeiro numa quantidade eficaz para proporcionar um efeito sobre a proteção e regeneração do ADN mitocondrial, permitindo a prevenção e/ou o tratamento de sinais de envelhecimento cutâneo, além de transportadores e excipientes aceitáveis em dermatologia e em cosmetologia.

Assim, os estudos realizados pelo requerente demonstraram inesperadamente que a associação de extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e maracujazeiro apresentem um efeito verificado em queratinócitos humanos em cultura, resultando num efeito protetor e reparador do ADN mitocondrial que é claramente superior ao de cada um dos seus componentes. É interessante notar que a associação de maracujazeiro e borragem descrita no pedido WO 2009147345 acima, tem essencialmente efeitos contra as contrações musculares, em particular as contrações faciais e as rugas de expressão, enquanto que as propriedades da associação de acordo com a presente invenção tornam possível a sua utilização de modo mais geral para a prevenção e/ou o tratamento de sinais de envelhecimento cutâneo.

Além disso, nas doses utilizadas, os testes realizados demonstraram que os extratos utilizados na presente invenção não apresentam qualquer citotoxicidade. 0 extrato de papoila utilizado na invenção é um extrato de pétalas de papoila, de preferência um extrato obtido a partir de mucilagem, que evita os pigmentos e os opioides. Deve-se notar que as propriedades de extratos de sementes de papoila (Papaver rhoeas) diferem substancialmente das das pétalas, e mais particularmente das da mucilagem. Sabe-se que as sementes contêm principalmente proteínas e roeadina, enquanto que as pétalas e, em particular a mucilagem, contêm polissacáridos.

De acordo com um método preferido, as pétalas são extraídas com água a um pH ácido (4,6-6,6), sendo a extração seguida de descoloração. 0 extrato aquoso assim obtido pode ser conservado na presença de um conservante autorizado para produtos biológicos, tal como benzoato de sódio e sorbato de potássio. 0 extrato de mucilagem de pétalas de papoila está presente na forma de um líquido caracterizado por: - matéria seca: 0,5 a 2% - densidade: 00,980 a 1,020 - índice de refração (a 22 °C): 01,320 a 1,350 - teor em oses neutras: 015 a 45% (média de 40%) - pH (unidade direta): de 04,6 a 6,6 (média 5).

Os materiais secos podem representar de 0,5 à 2% tal como indicado acima, mas mais frequentemente 1,5 a 2%. O teor em oses neutras é expresso em relação à matéria seca. O extrato de pétalas de papoila utilizado na presente invenção e descrito acima pode ser concentrado e liofilizado, se necessário.

No que se refere à borragem e ao maracujazeiro, utiliza-se de preferência as partes aéreas, em particular os topos floridos, compreendendo as flores e folhas jovens da parte apical, de preferência outras partes das plantas.

Os extratos de borragem e de maracujazeiro são preparados a partir de plantas secas, o extrato representando aproximadamente 5% do peso total da planta. Por exemplo, podem preparar-se extratos hidro-alcoólicos, por exemplo extratos hidroglicólicos ou hidroetanólicos ou extratos hidroglicerinados tal como indicado abaixo. Após secagem e pulverização das plantas, a extração é de preferência realizada por percolação à razão de 100 g de planta para 500 g de água. O bolo é expresso e os licores são reunidos e completados até 500 g através da adição de glicerina biológica. O extrato de maracujazeiro utilizado na invenção tem as seguintes características. Neste exemplo, o extrato utilizado é um extrato hidroglicerinado obtido a partir da espécie Passiflora incarnata.

Pass!flora incarnata (extrato seco) (partes aéreas floridas) 0,5%: - Água: 049,75% - Glicerina: 049,75% - Densidade a 22 °C (1,050 - 1,150): 01,117 - índice de refração a 22 °C (1,380 - 1,420): 01,400 - pH (4,9-6,9) : 05,89

As características do extrato de borragem utilizadas na invenção estão indicadas abaixo. A espécie de borragem utilizada neste exemplo é Anchusa arvensis.

Anchusa arvensis (extrato seco) (topos floridos) 1,0%: - Água: 049,5% - Glicerina: 049,5% - Densidade a 22 °C (1,050-1,150): 01,122 - índice de refração a 22 °C (1,380-1,420): 01,401 - pH (de 6,0 a 8,0): 07,0

Os extratos hidroglicerinados utilizados na invenção apresentam a vantagem de poderem ser conservados durante um período prolongado em condições normais de temperatura e humidade sem a necessidade de adicionar um conservante. No entanto, é possível diminuir a quantidade de glicerina e adicionar um conservante usual. Assim, pode ser utilizado um extrato contendo 20 ou 30% de glicerina com um conservante apropriado, tal como benzoato de sódio ou sorbato de potássio. De acordo com uma variante da invenção, é possível preparar um extrato hidro-alcoólico (por exemplo com butilenoglicol ou propilenoglicol) completado com um conservante usual. Tal extrato tem a vantagem de permitir uma concentração um pouco mais elevada de princípio ativo.

Entre as diversas espécies do género do maracujazeiro utilizáveis na invenção, pode-se citar em particular Pass!flora incarnata, Passiflora acuminata, Pass!flora alata, Pass!flora antioquensis, Pass!flora antiquiensis, Pass!flora aurantia, Pass!flora baraquiniana, Pass!flora biflora, Pass!flora caerulea, Pass!flora capsularis, Pass!flora coccinea, Pass!flora cumbalensis, Pass!flora dlctamo, Pass!flora edulis, Pass!flora glandulosa, Pass!flora hastata, Pass!flora hircina, Pass!flora laurifolia, Pass!flora ligularis, Pass!flora mexicana, Pass!flora mixta, Pass!flora mollissima, Pass!flora morifolia, Pass!flora multi flora, Pass!flora nitida, Pass!flora ornithoura, Pass!flora quadrangularis, Pass!flora saponaria, Pass!flora suberosa, Pass!flora sulcata, Pass!flora tenuiloba, Pass!flora tinifolia, Pass!flora vitifolia, Pass!flora foetida, Pass!flora nigelliflora, Pass!flora obscura, Pass!flora gossypifolia, Passiflora grand!flora, Passiflora hastada, Passiflora hibisciflora, Passiflora hirsina, Passiflora hirsuta, Passiflora hispida. De acordo com a invenção é utilizado de preferência um extrato da espécie Passiflora incarnata.

As espécies do género da borragem utilizadas nas composições da invenção podem ser escolhidas de entre Anchusa arvensis, Anchusa azurea, Anchusa barrelieri, Anchusa crispa, Anchusa gmelini, Anchusa italica, Anchusa lutea, Anchusa officinalis, Anchusa ovata, Anchusa paniculata, Anchusa sempervirens, Anchusa stricosa, Anchusa sylvestris, Anchusa tinctoria, Anchusa undulata/hybrida. De acordo com a invenção, utiliza-se de preferência um extrato da espécie Anchusa arvensis ou sylvestris. A espécie de papoila utilizada de preferência na invenção é Papaver rhoeas, mas é possível utilizar extratos de pétalas, e opcionalmente de mucilagem, de outras espécies tais como, por exemplo, Papaver somniferum var. Nigrum (papoila papoila), Papaver alpinum, Papaver argemone, Papaver collinum, Papaver dubium, Papaver hybridum, Papaver lamottei, Papaver modestum, Papaver pallidum, Papaver pinnatifidum, Papaver uniflorum.

Os testes de avaliação do efeito sobre o ADN mitocondrial foram realizados em queratinócitos humanos em cultura, utilizando amostras de cada um dos componentes isoladamente e da sua associação.

Os resultados dos testes in vitro detalhados abaixo demonstraram o efeito protetor e regenerador do ADN mitocondrial sem efeitos secundários nocivos, e em particular: - a ausência de danos no ADN mitocondrial induzida pela associação da invenção nas doses testadas; uma redução significativa nas lesões provocadas pela exposição de queratinócitos a raios ultravioletas utilizando a associação da invenção antes da exposição, demonstrando o efeito protetor; uma redução significativa nas lesões provocadas pela exposição de queratinócitos a raios ultravioletas utilizando a associação da invenção após exposição, demonstrando o efeito regenerador; - a ausência de citotoxicidade da associação de extratos da na invenção.

Assim, os resultados dos ensaios realizados mostram que a composição da invenção não só proporciona um efeito protetor e um efeito reparador do ADN mitocondrial de células expostas aos raios ultravioletas, como também que estes efeitos são superiores aos dos componentes utilizados isoladamente nas mesmas condições, ou seja, a composição da invenção proporciona um efeito sinérgico inesperado.

Sabe-se que sob a ação de agressões f isico-quimicas ou fisico-patológicas, as células humanas tentam proteger-se através da ativação da transcrição de genes codificando para as suas proteínas vitais, mas estas agressões podem, no entanto, reduzir a capacidade de modular a transcrição, o que pode privar as células de atividades vitais tais como funções mitocondriais e conduzir à morte celular por apoptose. A exposição aos raios UV, particularmente UVB, pode produzir tais efeitos nefastos. Assim, a exposição a doses elevadas de UV pode causar paralisia mitocondrial e o aparecimento de sinais precoces de apoptose. Os ensaios de exposição de queratinócitos, isto é as principais células da pele humana, são por isso particularmente significativos para a capacidade da composição da invenção para proteger e reparar o ADN mitocondrial.

Os resultados são explicados nos exemplos abaixo. A mitocôndria é um organelo presente no interior da célula eucariota que desempenha um papel fisiológico primordial na síntese de proteínas, e assim a manter a estrutura da pele. Ela é responsável pelas etapas finais do ciclo respiratório para produzir a energia diretamente utilizável pela célula (ATP) e gerar a assimilação de lípidos e proteínas fornecidas pela nutrição. As mitocôndrias permitem também a síntese de colagénio, ácido hialurónico, ceramidas, e protegem contra a oxidação. Manter a mitocôndria em bom estado de funcionamento é essencial para a conservação das qualidades da pele.

Como resultado, o efeito protetor do ADN mitocondrial tem consequências diretas sobre a síntese de colagénio e elastina, a síntese de GAG (glicosaminoglicanos) e proteoglicanos, a atividade antirradicais, a assimilação de hidratos de carbono e, mais geralmente, a limitação da formação de rugas, a firmeza da pele e a conservação do brilho da pele. A composição de acordo com a invenção pode compreender, por exemplo, entre 0,2 e 2% em peso de extrato de borragem, entre 0,5 e 5% em peso de extrato de pétalas de papoila, e entre 0,5 e 6% em peso de extrato de maracujazeiro, em relação ao peso total da composição. A escolha da concentração de cada um dos componentes na composição pode ser feita de acordo com o uso pretendido. Para um tratamento prolongado, utiliza-se de preferência doses mais baixas, na forma de leite ou creme doseado com aproximadamente 2 a 8% (total de três componentes), enquanto que um tratamento pontual pode necessitar de doses mais elevadas, por exemplo um gel ou um soro entre 8 e 15%.

Assim, estas composições tópicas podem ser utilizadas vantajosamente em dermatologia e em cosmética para o tratamento ou a prevenção de sinais de envelhecimento cutâneo.

As composições de acordo com a invenção podem conter outros extratos de borragem, pétalas de papoila, e maracujazeiro, ativos secundários reforçando ou completando vantajosamente a sua atividade, e compatíveis, isto é, não suscetíveis de reagir uns com os outros ou de mascarar ou limitar os seus respetivos efeitos.

Mais particularmente, os ativos secundários podem ser selecionados a partir de um agente anti-envelhecimento complementar, ou a partir de polifenóis de cacau, um extrato de sementes de mimosa e um extrato de sementes de calêndula atuando favoravelmente sobre a estimulação de colagénio recém-formado, ou ainda um agente reestruturante tal como Centella asiatica, que tem um efeito reafirmante e estimulante da microcirculação cutânea. 0 agente anti-envelhecimento complementar pode ser por exemplo um lipido tal como geranil-geranil-propanol (Juvinyl®) que reduz a formação de peróxidos intracelulares e retarda assim o envelhecimento celular. A associação de extratos de pétalas de papoila, de borragem e de maracujazeiro de acordo com a presente invenção, complementada se necessário por substâncias de atividade complementar, tal como indicado acima, utilizada em condições normais de utilização no tratamento de sinais de envelhecimento cutâneo, por um período de 30 a 90 dias consecutivos, apresentou excelente tolerância cutânea.

Os extratos de pétalas de papoila, de borragem e de maracujazeiro da invenção são mais particularmente destinados a composições para administração por via tópica externa, isto é, uma administração para uma ação localizada direta, não sistémica, sem passagem pelo sistema sanguíneo, ao contrário de uma administração oral.

As composições de acordo com a presente invenção podem ser apresentadas nas formas galénicas classicamente utilizadas para aplicação tópica nesta indicação, isto é, sob a forma de gel, emulsão (especialmente creme ou leite), máscara, pomada, loção, solução concentrada, nanocápsulas ou lipossomas, contendo excipientes e transportadores comuns compatíveis e farmaceuticamente aceitáveis. Elas são utilizadas de preferência na forma de cremes, soros, loção ou gel.

Estas formas de administração tópica são preparadas através de técnicas usuais, e por exemplo, no caso de um creme, através de dispersão de uma fase gorda numa fase aquosa para obter uma emulsão de óleo em água, ou por outro lado, para preparar uma emulsão de água em óleo. No caso de cremes, pode-se utilizar emulsões de estrutura lamelar obtidas com lecitinas hidrogenadas ou ésteres de açucares contendo poucos produtos etoxilados ou não contendo nenhum.

No caso de nanocápsulas e lipossomas, pode ser vantajoso utilizar extratos aquosos, de preferência extratos hidroglicólicos.

De acordo com uma forma de realização da invenção, os extratos de borragem, pétalas de papoila e de maracujazeiro podem ser vantajosamente utilizados na forma encapsulada em lipossomas. De acordo com uma técnica conhecida para o fabrico de composições cosméticas, os lipossomas consistem em pequenas esferas ocas, de diâmetro geralmente inferior a 500 nm, a parede é formada por uma camada dupla de lípidos tais como glicolípidos ou fosfolípidos, isto é, de natureza próxima da membrana celular, facilitando a penetração na pele. Podem ser obtidos, por exemplo, através de tratamento de ultrassons de uma mistura de um soluto aquoso e lípidos. Os lípidos (fosfolípidos ou glicolípidos) reorganizam-se numa configuração onde a energia do todo é mínima, portanto, termodinamicamente a mais estável. Os lipossomas são usados na indústria cosmética para distribuir compostos ao interior das células quando a vesícula se funde com a membrana plasmática.

As composições tópicas de acordo com a invenção podem compreender excipientes apropriados para uma administração tópica externa, em particular excipientes aceitáveis no plano dermatológico e cosmético. Estes excipientes apropriados para a formulação são bem conhecidos dos peritos na especialidade e compreendem, em particular, agentes de penetração tais como etoxidiglicol, fitantriol, octildodecanol e escina; espessantes tais como gomas naturais e polímeros sintéticos; emolientes e agentes tensioativos tais como octanoato de cetearilo, miristato de isopropilo, isononanoato de cetearilo, dimeticona, ciclometicona, 3-diisoestearato de poliglicerilo, poli-isobuteno hidrogenado, álcool cetílico, palmitato cetílico, fosfato cetílico; emulsionantes tais como derivados de poliglicerol; conservantes tais como fenoxietanol, para-hidroxibenzoato de metilo (metilparabeno) , para-hidroxibenzoato de etilo (etilparabeno) e Phenonip® associado com fenoxietanol e para-hidroxibenzoatos; corantes; perfumes; etc.

Como outros ingredientes utilizáveis nas composições da invenção, pode-se citar os agentes hidratantes tais com propilenoglicol, glicerina, butilenoglicol, sal sódico do ácido pirrolidonacarboxílico (PCA sódico), e associações de derivados glicosídicos com efeito hidratante e reestruturante tais como o produto Aquaxyl® (xilitil-glicósido e anidroxilitol e xilitol), e também vitaminas antioxidantes tais como a vitamina E, por exemplo acetato de tocoferol ou tocotrienol, a vitamina C, polifenóis naturais.

Podem também ser adicionados à composição glicidos principalmente selecionados a partir de glicose, glicogénio e trealose, ou ainda um palmitoil-pentapéptido-3, tal como Matrixyl® ou derivados tais como palmitoil-GHK (possuindo a cadeia Glicil-Histidil-Lisina) e palmitoil-GQPR (Glicil-Glutamil-Prolil-Arginina) ou palmitoil-VGVAPG (Valil-Glicil-Valil-Alanil-Prolil-Glicina) associado com uma ceramida-2, bem como de uma maneira geral qualquer associação com uma ceramida.

Pode adicionar-se igualmente à composição agentes de proteção contra os raios ultravioletas, e por exemplo, filtros solares UV-A e UV-B hidrófilos ou lipófilos, ou pigmentos formando um ecrã anti-ultravioleta.

Os filtros solares podem ser selecionados por exemplo a partir de benzofenona ou um derivado de benzofenona, tal como 2-hidroxi-4-metoxibenzofenona (Eusolex® 4360), ou um éster do ácido cinâmico e mais particularmente metoxicinamato de octilo (Eusolex® 2292), metoxicinamato de 2-etil-hexilo (Parsol MCX®) , ou ainda um ciano-β,β-difenilacrilato tal como octocrileno (Eusolex® OCR), cânfora 4-metilbenzilideno (Eusolex 6300®) , e derivados de dibenzoilmetano tais como 4-isopropil-dibenzoilmetano (Eusolex 8020), t-butil-metoxidibenzoilmetano (Parsol 1789®), e 4-metoxi-dibenzoilmetano. Os pigmentos podem ser escolhidos, por exemplo, a partir de dióxido de titânio, óxido de zinco, óxido de zircónio ou ainda óxido de alumínio.

Os exemplos seguintes ilustram a invenção em mais detalhe, sem limitar o seu âmbito. Em todos os exemplos de composições que se seguem, as partes são em peso a menos que especificado em contrário.

Exemplo 1

De acordo com as técnicas clássicas, prepara-se um soro anti-envelhecimento com a seguinte composição. Água desmineralizada qsp 100,00

Diacetato de glutamato tetrassódico 0,07

Butilenoglicol vegetal 5,00

Goma de xantano 0,05

Hidroxietilcelulose 0,30

Lecitina hidrogenada 1,00

Bentonite 1,00

Triglicéridos caprilicos/cápricos 3,00

Estearoil-lactilato de sódio 0,20

Geranilgeranil-propanol 2,00

Undecilenato de glicerilo 0,50

Tetra-isopalmitato de ascorbilo 0,20 Ácido desidroacético, sal de sódio 0,10

Hialuronato de sódio 0,15

Trealose 1,00

Complexo de acordo com a invenção 10,00

Xilitil-glucósido e xilitol anidro e Aqua e xilitol (Aquaxyl®) 1,00

Amido de milho 0,50

Este soro é preparado de acordo com as técnicas habituais. O complexo de acordo com a invenção combina extratos de borragem, de papoila (pétalas) e de maracujazeiro com os teores respetivos de 2,00%, 3,75% e 4,25%. O soro possuindo a composição indicada acima pode ser usado em aplicação local no rosto, uma a duas vezes por dia durante 6 a 12 semanas, podendo esse tratamento ser repetido várias vezes por ano. Os primeiros efeitos da diminuição das rugas são observados logo na 4a semana.

Exemplo 2

De acordo com uma técnica convencional, prepara-se um creme regenerador nutritivo com a seguinte composição em peso. Água desmineralizada qsp 100,00

Diacetato de glutamato tetrassódico 0,07

Butilenoglicol vegetal 5,00

Glicerina biológica 8,00

Betaina 2,00

Hidroxietilcelulose 0,50

Desidroacetato de sódio 0,15 Álcoois C12-C16, ácido palmitico, lecitina hidrogenada (Biophilic H®) 4,00

Citrato de estearato de glicerilo 0,80

Esqualeno vegetal 5,00

Triglicéridos caprilicos/cápricos 7,00 Álcool benzilico 1,00 Óleo de Macadâmia 2,00 Óleo de Jojoba 0,50

Manteiga de Karité 4,00

Silicato de magnésio 1,00

Undecilenato de glicerilo 0,50

Tetraisopalmitato de ascorbilo 0,30

Complexo de acordo com a invenção 8,00

Trealose 1,00

Hialuronato de sódio 0,20

Matrixyl 3000 3,00

Perfumes 0,50 O complexo de acordo com a invenção combina os extratos de borragem, de papoila (pétalas) e de maracujazeiro nos respetivos teores de 1,6%, 3,0% e 3,4%. O creme regenerador e nutritivo possuindo a composição indicada acima pode ser utilizado em aplicação nas áreas a tratar, uma vez por dia durante um período de 1 a 3 meses.

Exemplo 3

De acordo com as técnicas clássicas, prepara-se uma loção refrescante possuindo a seguinte composição em peso. Água desmineralizada qsp 100,00

Butilenoglicol vegetal 5,00 Ácido galactárico 0,10 Ácido anísico 0,10 Ácido levulínico/levulinato de sódio 0,30 Água de hortelã em pó 10,00 Água de Melissa 10,00 Água de tília 10,00 Água de Hamamelis 25,00

Extrato glicólico de Centella asiatica 5,00 Água de Alecrim 3,00

Complexo de acordo com a invenção 2,00 O complexo de acordo com a invenção combina os extratos de borragem, de papoila (pétalas) e de maracujazeiro nos respetivos teores de 0,40%, 0,75% e 0,85%.

Esta loção possuindo a composição indicada acima, e preparada de acordo com as técnicas usuais é usada em aplicação local no rosto, uma ou duas vezes por dia durante 6 a 10 semanas.

Exemple 4 O estudo in vitro do efeito da associação utilizada na presente invenção sobre a proteção e reparação do ADN mitocondrial foi realizado em queratinócitos humanos em cultura.

Queratinócitos humanos em cultura:

Os queratinócitos foram isolados a partir de amostras colhidas durante operações cirúrgicas da maneira usual e foram cultivados até à obtenção do número de células necessárias para o estudo. O estudo foi realizado em células cultivadas em placas de 6 poços a uma taxa de 2χ106 células por poço num meio de cultura suplementado com glândulas pituitárias bovinas, EGF recombinante humano, insulina, hidrocortisona, transferrina humana, epinefrina e cloreto de cálcio. O ensaio de citotoxicidade foi realizado em triplicado após 24 horas de contato com os produtos testados.

Os seguintes lotes foram formados.

Lote n° 1: controlo não recebendo qualquer produto.

Lote n° 2: tratado com o Complexo 1.

Lote n° 3: tratado com o Complexo 2.

Lote n° 4: tratado com o Complexo 3.

Lote n° 5: tratado com extrato de borragem a 0,4%.

Lote n° 6: tratado com extrato de borragem a 0,8%.

Lote n° 7: tratado com extrato de borragem a 1,6%.

Lote n° 8: tratado com extrato de papoila a 0,75%.

Lote n° 9: tratado com extrato de papoila a 1,5%.

Lote n° 10: tratado com extrato de papoila a 3,0%.

Lote n° 11: tratado com extrato de maracujazeiro a 0,85%.

Lote n° 12: tratado com extrato de maracujazeiro a 1,7%.

Lote n° 13: tratado com extrato de maracujazeiro a 3,4%.

Complexo n° 1: extrato de borragem a 0,4% + extrato de pétalas de papoila a 0,75% + extrato de maracujazeiro a 0,85%.

Complexo n° 2: extrato de borragem a 0,8% + extrato de pétalas de papoila a 1,5% + extrato de maracujazeiro a 1,7%. Complexo n° 3: extrato de borragem a 1,6% + extrato de pétalas de papoila a 3,0% + extrato de maracujazeiro a 3,4%. A viabilidade celular foi determinada pelo teste de redução de Azul de Formazan (teste MTT) .

Após 24 horas de incubação de células queratinócitos de cada lote onde os produtos a testar foram aplicados a diferentes concentrações em comparação com o controlo tal como indicado acima, os poços contendo as células são esvaziados por inclinação suave e o tapete celular é lavado com o meio de cultura. São distribuídos por todos os poços 200 μΐ de uma solução diluída de MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio), e depois as placas são incubadas a 37 °C durante 3 horas. A formação de cristais azuis de Formazan é então observada numa quantidade inversamente proporcional à obtenção das succinato- desidrogenases.

Os poços são novamente esvaziados por inclinação, as células são então lisadas e os cristais de azul de Formazan são dissolvidos por 200 μΐ de dimetilsulfóxido. Após homogeneização da coloração por agitação, a densidade ótica (DO) das placas é lida, por meio de um espectrofotómetro a 570 nm, o que permite conhecer a quantidade relativa de células vivas e metabolicamente ativas.

Os valores da densidade ótica (DO) após 24 horas de contato são resumidos na tabela abaixo.

Estes resultados mostram que os extratos utilizados na invenção, bem como a sua associação, não apresentam citotoxicidade em relação aos queratinócitos humanos em cultura nas concentrações estudadas.

Exemplo 5 0 estudo do efeito dos extratos utilizados na invenção e da sua associação no ADN mitocondrial foi realizado tal como indicado abaixo.

Os mesmos queratinócitos são utilizados em cultura tal como no Exemplo 4. Os ensaios são realizados sob condições fisiológicas e, em seguida, sob condições de indução de degradações por irradiação com raios UVB, quer após a aplicação dos produtos para avaliar o seu efeito protetor, quer antes da aplicação dos produtos para avaliar o seu efeito reparador. Cada um desses três ensaios foi realizado em triplicado durante 24 horas.

Para estudar o efeito dos produtos no ADN mitocondrial, após 24 horas de contato com os produtos, as células são recuperadas após 24 horas de incubação antes da extração do ADN. 0 ADN total foi extraído utilizando um Invisorb® Spin DNA Extraction Kit (Eurobio, França).

As células são lisadas utilizando um tampão de lise e os ácidos nucleicos são precipitados na presença de etanol a 70%. O ADN total é então fixado diretamente na membrana de uma coluna dedicada à extração de ADN. Após lavagem da membrana, o ADN é eluído com um tampão de baixo teor de sal. O ADN mitocondrial representa apenas cerca de 0,1% do ADN total. É, portanto, amplificado por meio de um estojo REPLI-g Mitochondrial DNA (Qiagen, França) contendo a ADN-polimerase, tampões e reagentes necessários para a amplificação do genoma mitocondrial humano a partir de todo o genoma com um rendimento aproximado de 3 a 5 pg de ADN mitocondrial amplificado por reação. 0 ADN total é desnaturado a 75 °C durante 5 minutos com um tampão especifico. Depois de parar a desnaturação por arrefecimento da solução até à temperatura ambiente, adiciona-se a ADN-polimerase. A amplificação isotérmica ocorre durante 8 horas a 33 °C, em seguida o ADN mitocondrial é congelado a -20 °C. A quantificação dos danos causados no ADN mitocondrial é realizada da seguinte forma, utilizando um DNA Damage Quantification Kit (Biovision, EUA) usando reagentes ARP (Aldehyde Reactive Probe). 0 ADN mitocondrial (0,5 pg) é incubado com os reagentes ARP durante 1 hora a 37 °C para marcar os locais AP (apurinicos/apirimidinicos), que são uma das principais lesões do ADN e constituem um bom indicador de danos no ADN e da taxa de reparação. O ADN é então precipitado com etanol puro e depois centrifugado e lavado 3 vezes com etanol a 70%. O sedimento de ADN é seco ao ar livre e depois retomado em 1 ml de tampão TE. O ADN marcado foi aplicado a uma placa de 96 poços durante a noite e após 5 lavagens foi adicionada uma solução de HRP-estreptavidina aos poços durante 1 hora à temperatura ambiente. Após 5 lavagens, a revelação da cor é feita por um tampão especifico durante 1 hora a 37 °C e depois parada com ácido sulfúrico 2 N. A densidade ótica é lida num espectrof otómetro a 450 nm para quantificar os locais AP marcados.

Os resultados estão resumidos na tabela abaixo.

Estes resultados mostram que os extratos estudados, bem como a associação da invenção, nas concentrações testadas, não induziram lesão do ADN mitocondrial em condições fisiológicas.

Tal como indicado mais acima, o efeito protetor dos produtos foi avaliado em relação aos danos causados ao ADN mitocondrial pelos UVB ao nível de queratinócitos humanos em cultura.

Para este fim, as células são tratadas com os produtos a testar a diferentes concentrações durante 2,5 horas e depois irradiadas com raios UVB (100 mJ/cm2) . Elas são recuperadas após 24 horas de incubação.

Os resultados estão resumidos na tabela abaixo.

Estes resultados mostram que o número de locais AP é estimulado em reação aos raios UVB (+159%) em comparação com o controlo neqativo. O tratamento de células queratinócitos com os produtos testados antes da exposição aos UVB reduz significativamente as lesões do ADN mitocondrial no caso do tratamento com a associação da invenção enquanto que o efeito protetor é sensivelmente menos importante com cada um dos componentes separadamente. 0 efeito reparador dos produtos foi avaliado em relação aos danos causados ao ADN mitocondrial pelos UVB ao nivel de queratinócitos humanos em cultura.

Para este fim, as células são irradiadas com raios UVB (100 mJ/cm2) e depois incubadas durante 3 horas. Os produtos a testar são então adicionados às culturas de células irradiadas a diferentes concentrações. As culturas são recuperadas após 24 horas de incubação.

Os resultados estão resumidos na tabela abaixo.

Estes resultados mostram que o número de locais AP é estimulado em reação aos raios UVB (+167%) em comparação com o controlo negativo. 0 tratamento das células queratinócitos com os produtos testados após exposição a UVB reduz significativamente as lesões do ADN mitocondrial no caso do tratamento com a associação da invenção enquanto que o efeito reparador é substancialmente menos importante com cada um dos componentes separadamente.

Este efeito protetor e reparador em relação aos UVB e o efeito sinérgico da associação dos três componentes da composição da invenção (extratos dos topos floridos da borragem, dos topos floridos do maracujazeiro, e das pétalas de papoila), foram confirmados por análise da transcrição de uma bateria de 84 genes (genes que codificam para a sobrevivência ou apoptose de células humanas). Para esta análise, as células são irradiadas antes da adição dos vários extratos (efeito reparador) ou após (efeito protetor) e, após a irradiação, os ARNm celulares são purificados, retrotranscritos em ADNc e amplificados por PCR quantitativa e os resultados são comparados para avaliar o efeito dos extratos.

Os extratos utilizados são originários de Passiflora incarnata (PI), Papaver rhoeas (PR) e Anchusa arvensis (AA) isoladamente, ou em mistura (MIX) de acordo com a invenção. Os resultados são mostrados na Fig. 1 que demonstra o efeito sinérgico observado com a mistura (MIX). A melhor proteção contra UVB é obtida com taxas de diluição de 0,8% para AA, 3% para PR e 1,7% para PI antes da irradiação.

Surpreendentemente, quando os três extratos são misturados (MIX), antes da adição a queratinócitos irradiados, é atingido um patamar com concentrações significativamente menores desses extratos. A melhor proteção é obtida com células tratadas com uma mistura de 0,016% de AA, 0,034% de PI e 0,03% de PR. Além disso, a mistura proporciona uma melhor inibição dos danos induzidos por UVB em comparação com os valores ótimos de cada extrato isoladamente, demonstrando um efeito sinérgico na mistura.

No teste dos efeitos reparadores (2a parte da Figura 1), a reversão ótima dos danos induzidos pelos UVB é observada a taxas de diluição de 1,6% para AA, 3% para PR e 3,4% para PI, proporcionando taxas de redução de lesões de ADNcmt de 36%, 39% e 35%, respetivamente. Surpreendentemente, a taxa de redução é de 68% com a mistura (MIX). A associação de borragem, pétalas de papoila e maracujazeiro de acordo com a invenção desempenha assim um papel protetor e reparador do ADN mitocondrial, o que permite produzir uma composição eficaz para a proteção da pele.

Claims (10)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composição cosmética e/ou dermatológica para aplicação tópica, destinada à proteção da pele, caracterizada por compreender uma quantidade eficaz de extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e de maracujazeiro, em associação.
2. 2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender uma associação de extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e de maracujazeiro numa quantidade eficaz para a prevenção e/ou o tratamento de sinais de envelhecimento cutâneo, bem como transportadores e excipientes aceitáveis em dermatologia e em cosmética.
3. 3. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizada por o extrato de borragem ser um extrato de Anchusa arvensis ou Anchusa sylvestris.
4. 4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizada por o extrato de papoila ser um extrato de Papaver rhoeas.
5. 5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, caracterizada por o extrato de maracujazeiro ser um extrato de Passiflora incarnata.
6. 6. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender um extrato hidroglicerinado de borragem possuindo as seguintes características: - Água: 049,5% - Glicerina: 049,5% - Densidade a 22°C: 01,050-1,150 - índice de refração a 22 °C: 01,380-1,420 - pH: de 06,0 a 8,0
7. 7. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender um extrato de pétalas de papoila possuindo as seguintes características: - matéria seca de 00,5 a 2% - densidade de 00,980 a 1,020 - índice de refração (a 22 °C) de 01,320 a 1,350 - teor de oses neutras de 015 a 45% (média de 40%) - pH (em contato direto): de 04,6 a 6,6 (média de 5).
8. 8. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender um extrato hidroglicerinado de maracujazeiro possuindo as seguintes características: - Água: 049,75% - Glicerina: 049,75% - Densidade a 22 °C: 01,050-1,150 - índice de refração a 22 °C: 01,380-1,420 - pH: de 04,9 a 6,9
9. 9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada por compreender entre 0,2 e 2% em peso de extrato de borragem, entre 0,5 e 5% em peso de extrato de pétalas de papoila, e entre 0,5 e 6% em peso de extrato de maracujazeiro, em relação ao peso total da composição.
10. 10. Composição compreendendo extratos de borragem, de pétalas ou de mucilagem de pétalas de papoila e de maracujazeiro, em associação, para utilização na prevenção e/ou no tratamento de sinais de envelhecimento cutâneo.