PT2324842E

PT2324842E - Agente de indução de imunidade

Info

Publication number: PT2324842E
Application number: PT98050081T
Authority: PT
Inventors: Fumiyoshi Okano; Takanori Saito; Masaki Shimizu
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2008-08-05
Filing date: 2009-08-05
Publication date: 2015-07-21
Also published as: JP5962739B2; RU2511039C2; CA2732283C; KR20170128637A; AU2015210461B2; ES2539603T3; RU2013156620A; WO2010016525A1; KR20110044854A; EP2837383A1; US8454968B2; HUE031343T2; MX339277B; US20130230488A1; BRPI0912462B1; RU2639518C2; BR122020027042B1; EP2324842A4; JPWO2010016525A1; PL2324842T3

Description

DESCRIÇÃO "AGENTE DE INDUÇÃO DE IMUNIDADE"

Campo da Técnica A presente invenção refere-se a um novo agente de indução de imunidade que é útil como um agente terapêutico e/ou preventivo para o cancro ou semelhante. Técnica Antecedente 0 cancro é a principal causa geral de morte. Atualmente, a forma primária de técnica de tratamento do cancro é o tratamento cirúrgico, que é levado a cabo em combinação com o tratamento de radiação e quimioterapia. Apesar do desenvolvimento de novas técnicas cirúrgicas e a descoberta de novos agentes anticancro dos anos recentes, os resultados do tratamento do cancro ainda permanecem sem melhorias, exceto nos casos de alguns tipos de cancro. Em anos recentes, os antigénios de cancro reconhecidos por células T citotóxicas são reativos para o cancro e genes que codificam antigénios de cancro foram identificados juntamente com o desenvolvimento da biologia molecular e imunologia do cancro, e expetativas para imunoterapia especifica de antigénio aumentaram (Tsuyoshi Akiyoshi, Gan to Kagaku Ryouhou (Cancer and Chemotherapy), 1997, vol. 24, pp. 551-519, Cancer and Chemotherapy Publishers Inc.,

Japão). A imunoterapia requer a presença especifica de célula cancerosa de um péptido, polipéptido, ou proteína que é reconhecida como um antigénio alvo, bem como a ausência substancial dos mesmos em células normais desde o ponto de vista do alívio dos efeitos secundários. Em 1991, Boon et al. (o Ludwig Institute for Cancer Research, Bélgica) isolaram o antigénio de melanoma humano MAGE1 reconhecido pelas células T CD8+ através da clonagem da expressão de ADNc utilizando uma linha celular de cancro autóloga e células T reativas a cancro (Bruggen P. et al., Science, 254: 1643-1647, 1991). Depois disso, o método SEREX (identificações sorológicas de antigénios através de clonagem de expressão recombinante), que identifica o antigénio tumoral reconhecido pelo anticorpo produzido em resposta a cancro autólogo no corpo de um paciente com cancro através de clonagem de expressão génica, foi relatado (Proc. Natl. Acad. Sci. E.U.A., 92: 11810-11813, 1995; e documento de Patente US N.° 5.698.396). Alguns antigénios de cancro foram isolados através de tais técnicas (Int. J. Cancer, 72: 965-971, 1997; Cancer Res., 58: 1034-1041, 1998; Int. J. Cancer, 29: 652-658, 1998; Int. J. Oncol., 14: 703-708, 1999; Cancer Res., 56: 4766-4772, 1996; e Hum. Mol. Genet. 6: 33-39, 1997) . Adicionalmente, a testagem clínica da imunoterapia de cancro direcionada a alguns de tais antigénios foi iniciada.

Tal como no caso dos seres humanos, sabe-se que os cães e gatos sofrem de uma variedade de tumores, tais como cancro da glândula mamária, leucemia, e linfoma, e os tumores estão altamente classificados estatisticamente para doenças caninas e felinas. Contudo, de momento não existem agentes de tratamento, preventivos ou de diagnóstico eficazes para o cancro canino ou felino. A maioria dos proprietários de cães e gatos não reconhece os tumores caninos ou felinos até que estes se tornam avançados e aumentados. Mesmo que os tumores sejam removidos através de operação cirúrgica ou fármacos para uso humano (por exemplo, fármacos anticancerígenos) sejam administrados, os tumores já se encontram normalmente além das possibilidades de cura, e os animais normalmente morrem pouco tempo depois do tratamento. Sob tais circunstâncias, se agentes terapêuticos, preventivos e de diagnóstico para o cancro, que são eficazes para cães e gatos, se tornam disponíveis, a aplicação dos mesmos para o tratamento de cancro canino e felino pode ser esperada. A proteína 1 citoplasmática e associada com a proliferação (CAPRIN-1) é expressa quando células normais dormentes são ativadas ou passam por divisão celular. CAPRIN-1 é uma proteína intracelular que é conhecida por formar grânulos de stress intracelulares com ARN na célula e por estar associada com a regulação do transporte e translação de ARNm. A CAPRIN-1 também é conhecida por vários outros nomes, e exemplos dos mesmos incluem a proteína 1 de membrana ancorada a GPI e a proteína 1 marcadora de superfície componente de membrana (M11S1) . A CAPRIN-1 tem nomes que transmitem a impressão de que tem sido conhecida como uma proteína da membrana celular. Outros nomes tais derivam de um relatório ao facto que a sequência génica de CAPRIN-1 tem uma região de ligação a GPI e que é uma proteína de membrana expressa numa linha celular derivada do intestino grosso (J. Biol. Chem., 270: 20717-20723, 1995). Mais tarde, no entanto, foi descoberto que a sequência génica de CAPRIN-1 neste relatório estava incorreta, e na sequência génica, a deleção de um único nucleótido a partir da sequência génica de CAPRIN-1 atualmente registada no GenBank, ou semelhante, causa um deslocamento do quadro de leitura, levando assim à deleção de 80 aminoácidos do terminal C, e portanto, o artefato resultante (74 aminoácidos) foi a região de ligação a GPI mencionada no relatório supramencionado. Adicionalmente, também se sabia que a sequência génica de CAIPRIN-1 mostrada no relatório também tinha um erro no lado 5' , e que 53 resíduos de aminoácidos tinham sido eliminados do terminal N (J. Immunol., 172: 2389-2400, 2004) . Também foi relatado que a proteína codificada pela sequência génica de CAPRIN-1 atualmente registada no GenBank, ou semelhante, não é uma proteína da membrana celular (J. Immunol., 172: 2389-2400, 2004).

Com base no relatório do J. Biol. Chem., 270: 20717- 20723, 1995, aquela CAPRIN-1 é uma proteína da membrana celular, os documentos US 2008/0075722 e WO 2005/100998 descrevem que a CAPRIN-1 pode ser um alvo da terapêutica contra o cancro como uma proteína da membrana celular sob o nome de M11S1. Contudo, eles não incluem quaisquer descrições específicas nos Exemplos. Conforme relatado no J. Immunol., 172: 2389-2400, 2004, no entanto, foi aceite até agora desde que o documento US 2008/0075722 foi depositado, que a CAPRIN-1 não é expressa numa superfície celular. É aparente que as divulgações dos documentos US 2008/0075722 e WO 2005/100998, baseadas apenas na informação incorreta de que a CAPRIN-1 é uma proteína da membrana celular, não devem ser entendidas como conhecimento técnico geral na técnica. Adicionalmente, Não existe qualquer relatório de que o nível de expressão de CAPRIN-1 seja mais elevado nas células cancerosas, tais como células do cancro da mama, do que em células normais.

Os documentos W02008088583, W02005116051 e W00208307 descrevem péptidos para utilização no tratamento do cancro, incluindo péptidos que têm alguma homologia com a CAPRIN-1. Sumário da Invenção

Problema a ser Resolvido pela Invenção É um objeto da presente invenção descobrir um novo polipéptido útil para um agente terapêutico e/ou preventivo para o cancro e proporcionar a utilização do tal polipéptido como um agente de indução da imunidade.

Meios para Resolução do Problema

Os presentes inventores realizaram estudos concentrados, e depois obtiveram ADNc que codificam proteínas que se ligam a anticorpos no soro obtido a partir de um corpo vivo portador de cancro através do método SEREX utilizando uma biblioteca de ADNc derivada de tecido testicular canino e soro de um cão afetado por cancro da mama, e prepararam um polipéptido CAPRIN-1 canino tendo as sequências de aminoácidos mostradas pelas SEQ ID NOs: 6, 8, 10, 12, e 14 utilizando os tais ADNc. Utilizando o gene homólogo humano do gene obtido, eles também prepararam um polipéptido CAPRIN-1 humano tendo as sequências de aminoácidos mostradas pelas SEQ ID NOs: 2 e 4. Além disso, eles encontraram que os tais polipéptidos CAPRIN-1 eram expressos especificamente num cancro de mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro pulmonar, cancro esofágico e cancro coloretal. Além disso, eles verificaram que a administração dos tais polipéptidos CAPRIN-1 a corpos vivos levaria à indução de imunócitos contra os polipéptidos CAPRIN-1 nos corpos vivos e regressão de tumores em corpos vivos que expressam os genes CAPRIN-1. Adicionalmente, Eles descobriram que os anticorpos contra tais polipéptidos CAPRIN-1 perturbariam as células cancerosas que expressam os genes CAPRIN-1 e induziriam efeitos antitumorais in vivo. Isto levou à conclusão da presente invenção.

Consequentemente, a presente invenção possui as seguintes caracteristicas. (1) Um agente para utilização como um agente de indução de imunidade num método de tratamento médico ou veterinário, o agente compreendendo, como um ingrediente ativo, pelo menos um polipéptido que tem atividade de indução da imunidade e selecionado a partir dos seguintes polipéptidos (a), (b), e (c), ou um vetor recombinante que compreende um polinucleótido que codifica o dito polipéptido e capaz de expressar o dito polipéptido in vivo: (a) um polipéptido tendo a sequência de aminoácidos mostrada por qualquer das SEQ ID NOs: 43 a 7 6 na

Listagem de Sequências; (b) um polipéptido tendo 85% ou mais de identidade de sequência com o polipéptido (a); e (c) um polipéptido de até 12 aminoácidos que compreende o polipéptido (a) como uma sequência parcial do mesmo. (2) 0 agente para utilização de acordo com (1), que compreende, como um ingrediente ativo, um de uma pluralidade dos ditos polipéptidos. (3) 0 agente para utilização de acordo com (2), que é para utilização através do tratamento de uma célula apresentadora de antigénio com o agente in vitro e administração a um paciente da célula apresentadora de antigénio; ou para utilização através do tratamento de uma célula apresentadora de antigénio com o agente in vitro, contacto da célula apresentadora de antigénio com células T in vitro, e admistração de células T isoladas que se ligam seletivamente à célula apresentadora de antigénio. (4) 0 agente para utilização de acordo com (1) ou (2), que é para utilização no tratamento ou prevenção de cancro animal. (5) 0 agente para utilização de acordo com (4), em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro pulmonar, cancro esofágico ou cancro coloretal. (6) 0 agente para utilização de acordo com (4) ou (5), em que o animal é um ser humano, cão, ou gato. (7) 0 agente para utilização de acordo com qualquer um de (1) a (6), que compreende adicionalmente um agente imunopotenciador. (8) 0 agente para utilização de acordo com (7), em que o agente imunopotenciador é pelo menos um adjuvante ou citocina selecionado a partir do grupo que consiste de adjuvante incompleto de Freund, Montanide, poli IC e um derivado do mesmo, oligonucleótido CpG, interleucina 12, interleucina 18, interferão a, interferão β, interferão ω, interferão γ, e ligando Flt3. (9) Utilização de pelo menos um polipéptido tendo atividade indutora da imunidade ou vetor recombinante conforme definido em (1) ou (2) no fabrico de um medicamento para indução da imunidade. (10) Utilização de acordo com (9), em que o medicamento é para utilização conforme definido em qualquer um de (3) a (6). (11) Utilização de acordo com (9) ou (10), em que o medicamento compreende adicionalmente um agente imunopotenciador. (12) Utilização de acordo com (11), em que o agente imunopotenciador é pelo menos um adjuvante ou citocina selecionado a partir do grupo que consiste de adjuvante incompleto de Freund, Montanide, poli IC e um derivado do mesmo, oligonucleótido CpG, interleucina 12, interleucina 18, interferão a, interferão β, interferão ω, interferão γ, e ligando Fit3. (13) Uma célula apresentadora de antigénio isolada que compreende um complexo do polipéptido que tem atividade de indução da imunidade denotado em (1) e uma molécula de HLA. (14) Uma célula T isolada, que se liga seletivamente a um complexo do polipéptido que tem atividade de indução da imunidade denotado em (1) e uma molécula de HLA. (15) A célula apresentadora de antigénio de (13) ou célula T isolada de (14), para utilização na indução de imunidade num método de tratamento médico ou veterinário. (16) A célula apresentadora de antigénio ou célula T isolada para utilização de acordo com (15), que é para utilização conforme definido em qualquer um de (4) a (6) . (17) Utilização da célula apresentadora de antigénio de (13) ou célula T isolada de (14) no fabrico de um medicamento para indução da imunidade. (18) Utilização de acordo com (17), em que o medicamento é para utilização conforme definido em qualquer um de (4) a (6).

Efeitos da Invenção A presente invenção proporciona um novo agente de indução da imunidade útil para o tratamento e/ou prevenção do cancro. Conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, a administração do polipéptido utilizado na presente invenção a um animal portador de cancro permite a indução de um imunócito no corpo do tal animal portador de cancro, que permite adicionalmente a diminuição de tamanho ou regressão do cancro existente.

Breve Descrição dos Desenhos A Fig. 1 mostra o padrão de expressão do gene que codifica o polipéptido CAPRIN-1 no tecido normal e numa linha celular tumoral. 0 Número de referência 1 representa o padrão de expressão do gene que codifica a proteína CAPRIN-1, e o Número de referência 2 representa o padrão de expressão do gene GAPDH.

Na Fig. 2., os Números de referência 3 a 31 no eixo horizontal representam cada a capacidade de células T CD8+ HLA-A0201+ para produzir IFN-y estimulada pelas células T2 pulsadas com os péptidos de SEQ ID NOs: 43 a 71. 0 Número de referência 32 representa os resultados em relação a um péptido de controlo negativo de SEQ ID NO: 77 (um péptido tendo uma sequência fora do âmbito da presente invenção). Na

Fig. 3., os Números de referência 33 a 37 no eixo horizontal representam cada a capacidade de células T CD8+ HLA-A24+ para produzir IFN-y estimulada pelas células JTK-LCL pulsadas com os péptidos de SEQ ID

NOs: 72 a 76. 0 Número de referência 38 representa os resultados em relação a um controlo negativo de SEQ ID NO: 77.

Na Fig. 4., os Números de referência 39 a 67 no eixo horizontal representam cada a atividade citotóxica de células T CD8+ HLA-A0201+ estimuladas com a utilização dos péptidos de SEQ ID NOs: 43 a 71 nas células U-87MG. 0 Número de referência 68 representa a atividade citotóxica das células T CD8+ induzida com a utilização de um péptido de controlo negativo (SEQ ID NO: 77).

Na Fig. 5., os Números de referência 69 a 73 no eixo horizontal representam cada a atividade citotóxica de células T CD8+ HLA-A24+ estimuladas com a utilização dos péptidos de SEQ ID NOs: 72 a 76 nas células JTK-LCL. 0 Número de referência 74 representa a atividade citotóxica das células T CD8+ induzida com a utilização de um péptido de controlo negativo (SEQ ID NO: 77).

Formas de Realização para levar a cabo a Invenção <Polipéptidos>

Os polipéptidos contidos no agente de indução de imunidade da presente invenção como um ingrediente ativo incluem um ou mais de uma pluralidade de polipéptidos selecionados a partir dos seguintes polipéptidos (a), (b), e (c) . (a) um polipéptido tendo a sequência de aminoácidos mostrada por qualquer das SEQ ID NOs: 43 a 7 6 na

Listagem de Sequências; (b) um polipéptido tendo 85% ou mais de identidade de sequência com o polipéptido (a); e (c) um polipéptido de até 12 aminoácidos que compreende o polipéptido (a) como uma sequência parcial do mesmo. 0 termo "polipéptido" utilizado no presente documento refere-se a uma molécula formada através de ligações peptidicas entre uma pluralidade de aminoácidos. 0 termo refere-se não apenas a uma molécula de polipéptido constituída por um grande número de aminoácidos mas também a uma molécula de baixa massa molecular constituída por um pequeno número de aminoácidos (um oligopéptido) e uma proteína de comprimento completo. Na presente divulgação, o termo "polipéptido" também se refere a uma proteína de uma sequência de comprimento completo mostrada por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30.

As sequências de nucleótidos de polinucleótidos que codificam proteínas separadas que consistem nas sequências de aminoácidos conforme mostrado pelos números de SEQ ID pares entre SEQ ID NOs: 2 a 30 (isto é, SEQ ID NOs: 2, 4, 6...28 e 30) são mostradas por números de SEQ ID ímpares entre SEQ ID NOs: 1 a 29 (isto é, SEQ ID NOs:l, 3, 5...27 e 29) . O termo "tendo a sequência de aminoácidos" utilizado no presente documento refere-se a uma sequência composta de resíduos de aminoácidos numa ordem particular. Por exemplo, o termo "um polipéptido tendo a sequência de aminoácidos mostrada pela SEQ ID NO: 2" refere-se a um polipéptido de 709 resíduos de aminoácidos de comprimento que possui a sequência de aminoácidos mostrada pela SEQ ID NO: 2, isto é, Met Pro Ser Ala Thr. . . (recorte) . . .Gin Gin Vai Asn, . O termo "um polipéptido tendo a sequência de aminoácidos mostrada pela SEQ ID NO: 2" pode ser ocasionalmente abreviado como "o polipéptido de SEQ ID NO: 2". O mesmo se aplica à expressão "tendo a sequência de nucleótidos". No contexto de que, o termo "tendo" é intercambiável com a expressão "consistindo em". O termo "atividade de indução de imunidade" utilizado no presente documento refere-se à capacidade de induzir um imunócito que secreta citocina, tal como um interferão ou interleucina, in vivo.

Se um polipéptido tem ou não atividade de indução da imunidade pode ser confirmado através, por exemplo, do conhecido ensaio ELISPOT. Especificamente, células tais como células mononucleares sanguíneas são obtidas a partir de um corpo vivo ao qual foi administrado um polipéptido a ser testado em relação à atividade de indução de imunidade, tais células são co-cultivadas na presença do tal polipéptido, e a quantidade de produção de citocina e/ou quimiocina, tal como IFN-γ ou interleucina (IL), a partir das células é medida com a utilização de um anticorpo específico, conforme descrito nos Exemplos abaixo, por exemplo. Assim, o número de imunócitos entre as células pode ser testado. Isto permite a avaliação da atividade de indução de imunidade.

Alternativamente, um polipéptido recombinante preparado com base numa sequência de aminoácidos mostrada por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 pode ser administrado a um animal portador cancro, de modo que o tumor possa ser regredido através da atividade de indução de imunidade, conforme descrito nos Exemplos abaixo. Assim, a atividade de indução de imunidade pode ser avaliada como a capacidade para suprimir o crescimento de células cancerosas exprimindo um polipéptido mostrado por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 ou a capacidade de diminuir o tamanho ou eliminar o tecido cancerígeno (tumor) (doravante, tal capacidade é referida como "atividade antitumoral"). A atividade antitumoral dos polipéptidos pode ser determidada por, por exemplo, administrando o tal polipéptido a um corpo vivo portador de cancro e examinando se o tumor é ou não diminuído de tamanho, conforme especificamente descrito nos Exemplos abaixo.

Alternativamente, se as células T estimuladas pelo polipéptido (isto é, células T colocadas em contacto com as células apresentadoras de antigénio que apresentam tal polipéptido) exibem atividade citotóxica nas células tumorais in vitro pode ser examinado para avaliar a atividade antitumoral do polipéptido. As células T podem ser colocadas em contacto com células apresentadoras de antigénio através do co-cultivo das mesmas num meio liquido conforme descrito abaixo. A atividade citotóxica pode ser testada através de uma técnica conhecida referida como a técnica do ensaio de libertação de 51Cr descrita em, por exemplo, Int. J. Cancer, 58: p. 317, 1994. Quando os polipéptidos são utilizados para tratamento e/ou prevenção do cancro, é preferível que a atividade de indução de imunidade seja avaliada utilizando a atividade antitumoral como um indicador, embora um método de avaliação não seja particularmente limitado.

As sequências de aminoácidos mostradas por números de SEQ ID pares entre SEQ ID NOs: 2 a 30 listadas na Listagem de Sequências divulgada no presente documento são sequências de aminoácidos dos polipéptidos CAPRIN-1 isolados como os polipéptidos que se ligam aos anticorpos que existem especificamente no soro obtido a partir de homólogos de ser humano, cão, bovino, cavalo, ratinho, e galinha portadores de cancro dos tais polipéptidos através do método SEREX utilizando a biblioteca de ADNc derivada de tecido testicular canino normal e o soro de um cão afetado com cancro da mama (veja-se o Exemplo 1 abaixo). O polipéptido (a) indicado acima é de 9 ou 10 aminoácidos contíguos no polipéptido tendo a sequência de aminoácidos mostrada pela SEQ ID NO: 2 e tem atividade de indução da imunidade.

Tal como conhecido na técnica, um polipéptido de pelo menos 7 resíduos de aminoácidos pode exercer antigenicidade. Consequentemente, um polipéptido de pelo menos sete resíduos de aminoácidos contíguos da sequência de aminoácidos mostrada por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 pode exercer ant igenicidade e imunogenicidade. Isto é, um polipéptido de pelo menos sete resíduos de aminoácidos contíguos da sequência de aminoácidos mostrada por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 pode ter atividade de indução de imunidade, e o tal polipéptido pode ser utilizado para preparar o aqente de indução de imunidade. Com base no facto de que os anticorpos produzidos contra a substância antigénica in vivo são anticorpos policlonais, um polipéptido composto por um grande número de resíduos de aminoácidos pode induzir uma grande variedade de anticorpos que reconhecem vários sítios de substância antigénica, potenciando assim a atividade de indução de imunidade. De modo a potenciar a atividade de indução da imunidade, consequentemente, o número de resíduos de aminoácidos pode ser, preferivelmente, pelo menos 30 ou mais, ou 50 ou mais, mais preferivelmente, pelo menos 100 ou mais, 150 ou mais, e ainda mais preferivelmente, pelo menos 200 ou mais, ou ainda preferivelmente 250 ou mais.

Como o principio da indução de imunidade através da administração de um polipéptido de antigénio de cancro, sabe-se que um polipéptido é incorporado numa célula apresentadora de antigénio, o polipéptido é degradado por uma peptidase na célula num fragmento mais pequeno (doravante pode ser referido como um "epitopo"), tal fragmento é apresentado na superfície celular, células T citotóxicas ou semelhantes reconhecem o tal fragmento e matam seletivamente as células apresentadoras de antigénio. O tamanho de um polipéptido apresentado na superfície da célula apresentadora de antigénio é relativamente pequeno, e é de cerca de 7 a 30 em termos do número de aminoácidos. Desde o ponto de vista da apresentação na célula apresentadora de antigénio, consequentemente, é suficiente que o polipéptido seja de cerca de 7 a 30 e preferivelmente cerca de 8 a 30 ou 9 a 30 aminoácidos contíguos nas sequências de aminoácidos mostradas por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30. Tal polipéptido de um tamanho relativamente pequeno pode ser diretamente apresentado na superfície da célula apresentadora de antigénio sem estar incorporado na célula apresentadora de antigénio. 0 polipéptido incorporado na célula apresentadora de antigénio é clivada em posições aleatórias com uma peptidase presente nas células, uma variedade de fragmentos de polipéptido são gerados, e os tais fragmentos de polipéptido são apresentados na superfície das células apresentadoras de antigénio. Se um polipéptido grande tal como uma sequência de comprimento completo mostrada por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 é administrado, consequentemente, fragmentos de polipéptidos que são eficazes para a indução da imunidade mediada por células apresentadoras de antigénio através da degradação na célula apresentadora de antigénio são naturalmente gerados. Assim, um polipéptido de grande tamanho pode ser preferivelmente utilizado para a indução de imunidade mediada por células apresentadoras de antigénio, e o número de aminoácidos pode ser pelo menos 30, mais preferivelmente pelo menos 100, ainda mais preferivelmente pelo menos 200, e mais preferivelmente ainda pelo menos 500 vezes,

Adicionalmente, o polipéptido pode ser examinado para um péptido ser um possível epítopo com o uso de um meio correspondente que pode procurar um péptido que serve como um possível epítopo tendo um motivo de ligação para cada tipo de HLA, tal como o HLA Peptide Binding Predictions of Bioinformatics & Molecular Analysis Selection (BIMAS) (http ://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/index .html) . Especificamente, um polipéptido de pelo menos sete aminoácidos contíguos na região dos resíduos de aminoácidos (aa) 41 a 400 ou resíduos de aminoácidos (aa) 503 a 564 nas sequências de aminoácidos mostradas por qualquer número de SEQ ID par selecionado de entre SEQ ID NOs: 2 a 30 exceto para a SEQ ID NO: 6 e SEQ ID NO: 18 ou um polipéptido que compreende tal polipéptido como uma sequência parcial do mesmo é preferível. No polipéptido de SEQ ID NO: 2, um polipéptido mostrado por qualquer de SEQ ID NOs: 43 a 76 é mais preferível. 0 polipéptido (b) acima é derivado a partir do polipéptido (a) através de substituição, deleção, adição, e/ou inserção de um pequeno número de (preferivelmente um ou vários) resíduos de aminoácidos, ele tem 85% ou mais, preferivelmente 90% ou mais, mais preferivelmente 95% ou mais, ainda mais preferivelmente 98% ou mais, 99% ou mais, ou 99,5% ou mais de identidade de sequência com a sequência original, e tem atividade de indução de imunidade. Quando um pequeno número de (preferivelmente um ou vários) resíduos de aminoácidos é substituído com, eliminado de, adicionado a, ou inserido na sequência de aminoácidos do antigénio proteico, em geral, é extensivamente conhecido na técnica que a proteína resultante ocasionalmente tem substancialmente a mesma antigenicidade ou imunogenicidade que aquela da proteína original. Assim, o polipéptido (b) acima é capaz de exercer a atividade de indução da imunidade e pode, portanto, ser utilizado para preparar um agente de indução de imunidade da presente invenção. Também é divulgado no presente documento um polipéptido tendo uma sequência de aminoácidos derivada a partir da sequência de aminoácidos mostrada por qualquer número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 através de substituição deleção, adição, e/ou inserção de um ou vários resíduos de aminoácidos. O termo "vários" utilizado no presente documento refere-se a um número inteiro de 2 a 10, preferivelmente um número inteiro de 2 a 6, e ainda mais preferivelmente um número inteiro de 2 a 4. O termo "identidade de sequência" utilizado no presente documento em relação à sequência de aminoácidos ou sequência de nucleótidos representa uma percentagem (%) determinada através do alinhamento de duas sequências de aminoácidos (ou sequências de nucleótidos) para serem comparadas de modo a maximizar o número de correspondências de resíduos de aminoácidos (ou nucleótidos) e dividindo o número de resíduos de aminoácidos correspondidos (ou o número de nucleótidos correspondidos) pelo número total de resíduos de aminoácidos (ou o número total de nucleótidos). Quando se alinham as sequências conforme descrito acima, um intervalo é adequadamente inserido numa ou em ambas as duas sequências a serem comparadas, de acordo com a necessidade. Tal alinhamento de sequências pode ser levado a cabo com a utilização de um programa bem conhecido, por exemplo, programas BLAST, FASTA, ou CLUSTAL W (Karlin e Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. E.U.A., 87: 2264-2268, 1993; Altschul et al. , Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402, 1997) . Quando um intervalo é inserido, o número total de resíduos de aminoácidos (ou o número total de nucleótidos) é o número de resíduos (ou o número de nucleótidos) contados designando um intervalo como um resíduo de aminoácido (ou um nucleótido). Quando o número total de resíduos de aminoácidos (ou o número total de nucleótidos) assim determinado difere entre as duas sequências a serem comparadas, a identidade (%) é determinada através da divisão do número dos resíduos de aminoácidos correspondidos (ou o número de nucleótidos) pelo número total de resíduos de aminoácidos (ou o número total de nucleótidos) de uma sequência mais longa.

Uma substituição de aminoácidos preferível é uma substituição de aminoácidos conservadora. Vinte tipos de aminoácidos constituindo uma proteína de ocorrência natural podem ser classificados em grupos de aminoácidos tendo propriedades semelhantes: ou seja, aminoácidos neutros tendo cadeias laterais de baixa polaridade (Gly, Ile, Vai, Leu, Ala, Met, e Pro); aminoácidos neutros tendo cadeias laterais hidrofílicas (Asn, Gin, Thr, Ser, Tyr, e Cys) ; aminoácidos ácidos (Asp, e Glu); aminoácidos básicos (Arg, Lys, e His); e aminoácidos aromáticos (Phe, Tyr, Trp, e

His) . Sabe-se que a substituição dentro de tais grupos; isto é, substituição conservativa, não alteraria as propriedades dos polipéptidos em muitos casos. Quando os resíduos de aminoácidos no polipéptido (a) da presente invenção são substituídos, consequentemente, a substituição pode ser levada a cabo dentro de tais grupos, de modo que a possibilidade de manter a atividade de indução da imunidade pode ser potenciada. Na presente invenção, no entanto, o polipéptido alterado pode ter substituição não conservativa, desde que o polipéptido resultante tenha atividade de indução da imunidade equivalente ou substancialmente equivalente àquela de um polipéptido inalterado. 0 polipéptido (c) compreende o polipéptido (a) ou (b) como uma sequência parcial do mesmo e tem atividade de indução da imunidade. Especificamente, o polipéptido (c) corresponde ao polipéptido (a) ou (b) aos quais outro(s) aminoácido(s) ou polipéptido(s) é(são) adicionados numa ou ambas as extremidades e tendo atividade de indução da imunidade. Tal polipéptido pode ser utilizado para preparar o agente de indução de imunidade da presente invenção. 0 polipéptido supramencionado pode ser sintetizado quimicamente de acordo com, por exemplo, o método de Fmoc (fluorenilmetiloxicarbonilo) ou o método de tBoc (t-butiloxicarbonilo) (a Japanese Biochemical Society (ed.), Seikagaku Jikken Kouza (o Course for Biochemical Experiment) 1, Tanpakrushitsu no Kagaku (Chemistry of Protein) IV, Kagaku Shushoku to Peptide Gousei (Chemical Modification and Peptide Synthesis), Tokyo Kagaku Dojin, Japão, 1981) . Também, uma variedade de sintetizados de péptidos disponíveis comercialmente podem ser utilizados para sintetizar o polipéptido de acordo com uma técnica convencional. Além disso, técnicas de manipulação genética conhecidas (por exemplo, Sambrook et al. , Molecular Cloning, vol. 2, Current Protocols in Molecular Biology, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press; e Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, vol. 3, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, 1995, John Wiley & Sons) podem ser empregues para preparar um polinucleótido que codifica o polipéptido acima, o polipéptido resultante pode ser incorporado num vetor de expressão e depois introduzido numa célula hospedeira, e o polipéptido pode ser produzido em tal célula hospedeira para obetr o polipéptido alvo.

Um polinucleótido que codifica o polipéptido acima pode ser facilmente preparado através de uma técnica de manipulação genética conhecida ou uma técnica convencional utilizando um sintetizador de ácidos nucleicos comercialmente disponível. Por exemplo, ADN tendo a sequência de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 pode ser preparado através da realização de PCR com a utilização da biblioteca de ADNc ou ADN cromossómico humano como um molde e um par de iniciadores desenhados de forma a amplificar a sequência de nucleótidos mostrada pela SEQ ID NO: 1. De forma semelhante, ADN tendo a sequência de nucleótidos de SEQ ID NO: 5 pode ser preparado com a utilização da biblioteca de ADNc ou ADN cromossómico canino como o molde. As condições de PCR pode ser adequadamente determinadas. Por exemplo, um ciclo de reação de desnaturação a 94 °C durante 30 segundos, hibridização a 55 °C durante 30 segundos a 1 minuto, e extensão a 72 °C durante 2 minutos com a utilização de ADN polimerase termoestável (por exemplo, Taq polimerase) e tampão de PCR contendo Mg2+ é repetida 30 vezes, seguida pela reação a 72 °C durante 7 minutos, embora as condições de reação não estejam limitadas a estas. As técnicas, condições, de PCR e semelhantes são descritas em, por exemplo, Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, vol. 3, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, 1995, John Wiley & Sons (Capítulo 15, em particular). Também, sondas ou iniciadores adequados podem ser preparados com base na informação das sequências de nucleótidos e as sequências de aminoácidos mostradas pelas SEQ ID NOs: 1 a 30 na Listagem de Sequências da presente invenção, e bibliotecas humanas, caninas, bovinas, ou outras bibliotecas de ADNc podem ser rastreadas com a utilização das tais sondas ou iniciadores, de modo que o ADN de interesse possa ser isolado. As bibliotecas de ADNc são preferivelmente preparadas a partir de células, órgãos, ou tecidos onde uma proteína mostrada por um número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 é expressa. Os procedimentos, tais como preparação de sondas ou iniciadores, construção de biblioteca de ADNc, rastreio de biblioteca de ADNc, e clonagem de genes alvo, descritos acima são conhecidos na técnica. Por exemplo, tais procedimentos podem ser realizados de acordo com os métodos descritos em Sambrook et al., Molecular Cloning, vol. 2, Current Protocols in Molecular Biology, 1989), Ausubel et al. (como acima) . O ADN que codifica o polipéptido (a) acima pode ser obtido a partir de ADN assim obtido. Uma vez que um codão que codifica cada aminoácido é conhecido, uma sequência de nucleótidos de um polinucleótido que codifica uma sequência de aminoácidos particular pode ser facilmente identificada. Consequentemente, a sequência de nucleótidos de um polinucleótido que codifica o polipéptido (b) ou (c) pode ser facilmente identificada, e o tal polinucleótido pode também ser facilmente sintetizado com a utilização de um sintetizador de ácidos nucleicos comercialmente disponível de acordo com uma técnica convencional.

As células hospedeiras podem ser quaisquer células, desde que o polipéptido supramencionado possa ser expresso nas mesmas. As células hospedeiras incluem, mas não estão limitadas a, uma célula de E. coli como células procarióticas; e células do rim de macaco (COS 1), células de ovário de hamster chinês (CHO), a linha celular de células embrionárias humanas (HEK293), e a linha celular de pele de ratinho fetal (NIH3T3), células de levedura em germinação, células de levedura em divisão, células de bichos-da-seda, e células de ovos de xenopus como células eucarióticas.

Quando são utilizadas células hospedeiras procarióticas, vetores de expressão tendo, por exemplo, uma origem, um promotor, um sítio de ligação a ribossoma, um sítio de clonagem múltipla, um terminador, um gene tolerante a fármacos, e um gene complementar auxotrófico que pode ser replicado em células procariotas, são utilizados. Exemplos de vetores de expressão de E. coli incluem pUC, pBluescriptII, e o sistema de expressão pET, e o sistema de expressão pGEX. ADN que codifica o polipéptido acima pode ser incorporado em tal vetor de expressão, células hospedeiras procarióticas podem ser transformadas com tal vetor, e o transformante resultante pode ser cultivado. Assim, o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expresso em células hospedeiras procarióticas. Neste caso, tal polipéptido pode ser expresso sob a forma de uma proteína de fusão com outra proteína.

Quando são utilizadas células hospedeiras eucarióticas, vetores de expressão de células eucarióticas tendo, por exemplo, um promotor, uma região de splicing, e um sítio de adição de poli(A) são utilizados. Exemplos de tais vetores de expressão incluem os vetores pKAl, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV, pRS, pcDNA3, e pYES2. Conforme descrito anteriormente, ADN que codifica o polipéptido acima pode ser incorporado em tal vetor de expressão, células hospedeiras eucarióticas podem ser transformadas com tal vetor, e o transformante resultante pode ser então cultivado. Assim, o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expresso em células hospedeiras eucarióticas. Quando pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, pEGFP-Cl, ou outros vetores de expressão são utilizados, o polipéptido pode ser expresso sob a forma de uma proteína de fusão com uma variedade de etiquetas, tal como etiqueta His (por exemplo, (His) 6 a (His)io), etiqueta FLAG, etiqueta myc, etiqueta HA, ou GFP.

Vetores de expressão podem ser introduzidos em células hospedeiras através de técnicas convencionais, tais como eletroporação, o método de fosfato de cálcio, o método de lipossomas, o método de DEAE-dextrano, microinjeção, infeção virica, lipofeção ou ligação com um péptido permeável a células. 0 polipéptido alvo pode ser isolado e purificado a partir de células hospedeiras empregando técnicas de separação conhecidas em combinação. Exemplos das mesmas incluem, mas não estão limitados a, tratamento com a utilização de um agente de desnaturação tal como ureia ou um tensioativo, ultrasonicação, digestão enzimática, salificação ou precipitação fracionária com um solvente, diálise, centrifugação, ultrafiltração, filtração em gel, SDS-PAGE, focagem isoelétrica, cromatografia de permuta iónica, cromatografia hidrofóbica, cromatografia de afinidade e cromatografia de fase reversa.

Alguns polipéptidos obtidos por tais métodos estão sob a forma de proteínas de fusão com quaisquer outras proteínas descritas acima. Exemplos das mesmas incluem proteínas de fusão com glutationa-S-transferase (GST) ou etiqueta His. Tais polipéptidos sob a forma de proteínas de fusão estão dentro do âmbito da presente invenção como polipéptido (c) . Além disso, os polipéptidos expressos em células transformadas são traduzidos, e os polipéptidos traduzidos passam ocasionalmente por vários tipos de modificações nas células. Tais polipéptidos modificados pós-translacionalmente estão também dentro do âmbito da presente invenção, desde que tais polipéptidos tenham atividade de indução da imunidade. Exemplos de tais modificações pós-translacionais incluem eliminação de metionina N-terminal, acetilação N-terminal, adição de cadeia de açúcar, degradação limitada com proteáse intracelular, miristoilação, isoprenilação e fosforilação. <Agente de indução de imunidade>

Conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, a administração do polipéptido supramencionado tendo atividade de indução de imunidade a um corpo vivo portador de cancro permite a regressão de um tumor existente. Assim, o agente de indução de imunidade pode ser utilizado como um agente terapêutico e/ou preventivo para o cancro.

Os termos "tumor" e "cancro" utilizados no presente documento referem-se a neoplasmas malignos, e estes termos são utilizados indistintamente um com o outro.

Neste caso, cancros alvo são aqueles que expressam um gene que codifica um polipéptido que compreende uma sequência de aminoácidos mostrada por qualquer número de SEQ ID par entre as SEQ ID NOs: 2 a 30 ou uma sequência parcial das mesmas que consiste em pelo menos 7 aminoácidos contíguos. Preferivelmente, tais cancros são cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro pulmonar, linfoma, tumor de mastócitos, cancro esofágico e cancro coloretal. Exemplos de tais cancros especificados incluem, mas não estão limitados a, cancro da glândula mamária, cancro da glândula mamária combinado, tumor da glândula mamária misto maligno, adenocarcinoma papilar intraductal, leucemia linfocítica crónica, linfoma gastrointestinal, linfoma digestivo, e linfoma de células pequenas a médias.

Animais alvo são mamíferos, e exemplos dos mesmos incluem animais mamíferos, incluindo primatas, animais de estimação, animais de produção, e animais de competição, com seres humanos, cães, e gatos sendo particularmente preferíveis. O agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção pode ser administrado a um organismo por via oral ou parentérica. A administração parentérica, tal como intramuscular, subcutânea, intravenosa, ou administração intra-arterial, é preferível. Quando tal agente de indução de imunidade é utilizado para o propósito do tratamento do cancro, o agente pode ser administrado ao nódulo linfático regional na proximidade do tumor a ser tratado, de forma a melhorar os efeitos antitumorais conforme descrito nos exemplos abaixo. A dose pode ser qualquer quantidade desde que seja eficaz para a indução de imunidade. Quando o agente é utilizado para tratamento e/ou prevenção de cancro, por exemplo, uma quantidade eficaz para tratamento e/ou prevenção de cancro é suficiente, e tal quantidade pode ser alterada dependendo de, por exemplo, o peso corporal, sexo (isto é, masculino ou feminino), ou sintoma de um animal. A quantidade eficaz para tratamento e/ou prevenção do cancro é adequadamente determinada de acordo com o tamanho do tumor, sintomas, ou outras condições. Em geral, uma quantidade eficaz para um animal alvo por dia é 0, 0001 yg a 1.000 yg, e preferivelmente 0,001 yg a 1.000 yg, e o agente pode ser administrado através de uma dose única ou uma pluralidade de doses. Preferivelmente, o agente é administrado através de várias doses separadas cada vários dias ou meses. Conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, o agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção permite a regressão de um tumor existente. Assim, o agente pode exercer os efeitos antitumorais num pequeno número de células cancerosas em estádio de desenvolvimento precoce. A utilização do mesmo antes do início do cancro ou depois do tratamento leva à prevenção do desenvolvimento ou recorrência de cancro. Especificamente, o agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção é útil para tratamento e prevenção de cancro. O agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção pode consistir num polipéptido, ou pode ser adequadamente misturado com um aditivo que é adequado para uma forma farmacêutica relevante, tal como um portador, um diluente, um excipiente, ou semelhantes farmaceuticamente aceitáveis. Métodos para preparar um agente e aditivos que podem ser utilizados são bem conhecidos no campo de preparação médica, e quaisquer métodos e aditivos podem ser empregues. Exemplos específicos de aditivos incluem, mas não são limitados a: diluentes, tais como soluções de tampão fisiológicas; excipientes, tais como açúcar, lactose, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol, e glicina; ligantes, tais como xarope, gelatina, goma-arábica, sorbitol, cloreto de polivinilo, e tragacanto; e lubrificantes, tais como estereato de magnésio, polietilenoglicol, talco, e sílica. Exemplos de formas de preparações incluem agentes orais, tais como comprimidos, cápsulas, grânulos, pós, e soluções de xarope, e agentes parentéricos, tais como inalantes, preparações para injeção, supositórios, e fármacos líquidos. Tais agentes podem ser preparados por métodos comuns. 0 agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção pode ser utilizado em combinação com um agente imunopotenciador capaz de potenciar uma resposta imunológica in vivo. 0 agente imunopotenciador pode ser incorporado no agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção, ou pode ser administrado a um paciente como outra composição em combinação com o agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção. 0 termo "paciente" utilizado no presente documento refere-se a um animal, um animal mamífero em particular, e é preferivelmente um humano, cão, ou gato.

Um exemplo do agente imunopotenciador é um adjuvante. Um adjuvante proporciona um reservatório de antigénios (fora da célula ou no macrófago), ele ativa o macrófago, e estimula linfócitos num dado tecido. Assim, um adjuvante pode potenciar uma resposta imunológica e melhorar os efeitos antitumorais. Quando o agente de indução da imunidade para utilização na presente invenção é utilizado para tratamento e/ou prevenção de cancro, consequentemente, é particularmente preferível que o agente de indução de imunidade compreenda adicionalmente um adjuvante além do polipéptido como um ingrediente ativo. Vários tipos de adjuvantes são bem conhecidos na técnica, e quaisquer tais adjuvantes podem ser utilizados. Exemplos específicos dos mesmos incluem: MPL (SmithKline Beecham); um equivalente obtido através de purificação e hidrólise ácida de um lipopolissacarídeo de Salmonella minnesota Re 595; QS21 (SmithKline Beecham); uma saponina pura QA-21 purificada a partir do extrato de Quillja saponaria; DQS21 divulgado no pedido de PCT (WO 96/33739, SmithKline Beecham); QS-7, QS-17, QS-18, e QS-L1 (So et al. , Molecules and Cells, 1997, 7: 178-186); adjuvante incompleto de Freund; adjuvante completo de Freund; vitamina E; Montanide; alúmen; oligonucleótido CpG (por exemplo, Kreig et al. , Nature, 1995, 374: 546-549); poli IC e um derivado do mesmo (por exemplo, poli ICLC) ; e várias emulsões de água em óleo preparadas a partir de óleo biodegradável, tal como esqualeno e/ou tocoferol. Adjuvante incompleto de Freund, Montanide, poli IC, um derivado do mesmo, e oligonucleótido CpG são particularmente preferíveis. A proporção do adjuvante misturado com um polipéptido é tipicamente cerca de 1:10 a 10:1, preferivelmente cerca de 1:5 a 5:1, e adicionalmente preferível cerca de 1:1. Deverá ser notado que adjuvantes não são limitados àqueles exemplificados acima, e outros adjuvantes conhecidos na técnica também podem ser utilizados no momento da administração do agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção (por exemplo, Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, vol. 2, 1986) . Um método para preparar uma mistura de polipéptido e adjuvante ou uma emulsão é bem conhecido para um perito na especialidade no campo da imunização.

Como o agente imunopotenciador, fatores que estimulam uma resposta imunológica de interesse podem ser utilizados em adição aos adjuvantes anteriormente mencionados. Por exemplo, várias citocinas que estimulam linfócitos ou células apresentadoras de antigénio podem ser utilizadas como o agente imunipotenciador em combinação com o agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção. Muitas citocinas que podem potenciar respostas imunológicas são conhecidas na técnica. Exemplos das mesmas incluem, mas não estão limitados a, interleucina-12 (IL-12), GM-CSF, IL-18, interferão a, interferão β, interferão ω, interferão γ, e ligando Flt3 que são conhecidas por potenciar os efeitos protetivos de uma vacina. Tal fator pode ser utilizado como o agente imunopotenciador e pode ser administrado a um paciente sob a forma de uma mistura do mesmo com o agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção ou em combinação com o agente de indução de imunidade para utilização na presente invenção como outra composição. <Célula apresentadora de antigénio>

Adicionalmente, os polipéptidos supramencionados podem ser colocados em contacto com células apresentadoras de antigénio in vitro para apresentar os tais polipéptidos às células apresentadoras de antigénio. Especificamente, os polipéptidos (a) a (c) podem ser utilizados como agentes para o tratamento das células apresentadoras de antigénio. Exemplos de células apresentadoras de antigénio incluem células dendriticas, células B, e macrófagos, e células dendriticas ou células B tendo moléculas de MHC de classe I são preferivelmente utilizadas. Uma variedade de moléculas de MHC de classe I foi identificada e é bem conhecida. Moléculas de MHC humanas são referidas como "HLA". Exemplos de moléculas HLA de classe I incluem HLA-A, HLA-B, e HLA-C. Exemplos específicos incluem HLA-A1, HLA-A0201, HLA-A0204, HLA-A0205, HLA-A0206, HLA-A0207, HLA-A11, HLA-A24, HLA-A31, HLA-A6801, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B2705, HLA-B37, HLA-Cw0401, e HLA-CwO 602. Células dendríticas ou células B tendo moléculas de MHC de classe I podem ser preparadas a partir do sangue periférico através de uma técnica bem conhecida. Por exemplo, células dendríticas são induzidas a partir da medula óssea, sangue umbilical, ou sangue periférico de um paciente com a utilização dos fatores de estimulação de colónias de macrófagos-granulócitos (GM-CFS) e IL-3 (ou IL-4), e péptido associados com tumor são adicionados ao sistema de cultura. Assim, células dendríticas específicas de tumor podem ser induzidas. A administração de uma quantidade eficaz de tais células dendríticas permite a indução de uma resposta desejável para o tratamento do cancro. Exemplos de células que podem ser utilizadas incluem a medula óssea e o sangue umbilical proporcionados por um indivíduo saudável e a medula óssea e o sangue periférico de um paciente. Quando são utilizadas as próprias células autólogas do paciente, um nível de segurança é elevado, e efeitos secundários graves podem ser evitados. O sangue periférico ou medula óssea podem ser uma amostra recente, armazenada hipotermicamente, ou criopreservada. O sangue periférico pode ser preparado através da cultura do sangue total ou através da cultura de componentes leucocitários separados, com os últimos sendo preferidos desde o ponto de vista da eficiência. Além disso, células mononucleares podem ser isoladas a partir dos componentes leucocitários. Quando a amostra é preparada a partir da medula óssea ou sangue umbilical, as células inteiras que constituem a medula óssea podem ser cultivadas, ou células mononucleares podem ser separadas das mesmas e cultivadas. O sangue periférico, o componente leucocitário do mesmo, e as células da medula óssea compreendem células mononucleares, células estaminais hematopoiéticas, células dendríticas imaturas, ou células CD4+ a partir das quais se original as células dendríticas. As citocinas podem ser de um tipo de ocorrência natural ou recombinação génica, e métodos para produzir as mesmas não são limitados, desde que a segurança e atividades fisiológicas das mesmas tenham sido verificadas. Preferivelmente, o requisito mínimo de amostras com qualidades médicas verificadas é utilizado. A concentração de citocina adicionada não é particularmente limitada, desde que as células dendríticas sejam induzidas. Em geral, a concentração total de citocinas de aproximadamente 10 a 1.000 ng/ml é preferível, e cerca de 20 a 500 ng/ml é adicionalmente preferível. A cultura pode ser levada a cabo com a utilização de um meio bem conhecido que é geralmente utilizado para a cultura de leucócitos. Uma temperatura de cultura não é particularmente limitada, desde que os leucócitos possam ser multiplicados, e a temperatura do corpo humano (isto é, aproximadamente 37 °C) é a mais preferível. Um ambiente gasoso durante a cultura não é particularmente limitado, desde que os leucócitos possam ser multiplicados. O arejamento com CO2 a 5% é preferível. Além disso, uma duração de cultura não é particularmente limitada, desde que um número necessário de células seja induzido. É geralmente 3 dias a 2 semanas. Um aparelho adequado pode ser utilizado para a separação ou cultura celular, e é preferível que tal aparelho tenha a segurança médica aprovada e operabilidade estável e simples. Em particular, os aparelhos de cultura celular não são limitados a recipientes comuns, tais como placas de Petri, balões, e garrafas, e recipientes laminados ou multiestágio, garrafas rotatórias, garrafas giratórias, aparelhos de cultura do tipo bolsa, colunas de fibra ocas, ou semelhantes também podem ser utilizadas.

Os polipéptidos supramencionados podem ser colocados em contacto com células apresentadoras de antigénio in vitro através de uma técnica bem conhecida. Por exemplo, células apresentadoras de antigénio podem ser cultivadas numa solução de cultura contendo os tais polipéptidos. A concentração de péptidos num meio não é particularmente limitada. Em geral, é cerca de 1 a 100 pg/ml, e preferivelmente cerca de 5 a 20 pg/ml. A densidade celular durante a cultura não é particularmente limitada, e é geralmente cerca de 103 a 107 células/ml, e preferivelmente cerca de 5 x 104 a 5 x 106 células/ml. É preferível que a cultura seja levada a cabo a 37 °C em CO2 a 5% de acordo com uma técnica convencional. Um comprimento de péptido que pode ser apresentado na superfície das células apresentadoras de antigénio é geralmente, no máximo, cerca de 30 resíduos de aminoácidos. Quando as células apresentadoras de antigénio são colocadas em contacto com os polipéptidos in vitro, consequentemente, o comprimento do polipéptido pode ser ajustado para cerca de 30 resíduos de aminoácido ou menos, embora o comprimento não seja particularmente limitado ao mesmo.

Ao cultivar células apresentadoras de antigénio na presença dos polipéptidos, os péptidos são incorporados em moléculas de MHC das células apresentadoras de antigénio e apresentados na superfície das mesmas. Assim, as células apresentadoras de antigénio isoladas contendo o complexo de polipéptidos e moléculas de MHC podem ser preparadas com a utilização de tais polipéptidos. Tais células apresentadoras de antigénio podem apresentar os polipéptidos a células T in vivo ou in vitro, induzir células T citotóxicas específicas para os polipéptidos, e multiplicar tais células T.

As assim preparadas células apresentadoras de antigénio contendo o complexo de polipéptidos e moléculas MHC podem ser colocadas em contacto com as células T in vitro, de forma que as células T citotóxicas específicas para tais polipéptidos podem ser induzidas e multiplicadas.

Pode ser alcançado através da cultura das células apresentadoras de antigénio juntamente com as células T num meio líquido. Por exemplo, a cultura pode ser levada a cabo através da suspensão das células apresentadoras de antigénio num meio líquido, introdução da suspensão resultante num recipiente tal como poços de uma microplaca, e adição de células T à mesma. A proporção de mistura de células apresentadoras de antigénio para células T no momento da co-cultura não é particularmente limitada, e é geralmente cerca de 1:1 a 1:10, e preferivelmente cerca de 1:5 a 1:20 em termos da contagem celular. Também, a densidade de células apresentadoras de antigénio suspensas num meio líquido não é particularmente limitada, e é geralmente cerca de 100 a 107 células/ml, e preferivelmente cerca de 104 a 106 células/ml. A co-cultura é preferivelmente levada a cabo de acordo com uma técnica convencional a 37 °C em CO2 a 5%. Uma duração de cultura não é particularmente limitada, e é geralmente 2 dias a 3 semanas, e preferivelmente cerca de 4 dias a 2 semanas. É preferível que a co-cultura seja levada a cabo na presença de um tipo único ou uma pluralidade de tipos de interleucinas, tais como IL-2, IL-6, IL-7 e IL-12. Num tal caso, a concentração de IL-2 ou IL-7 é geralmente cerca de 5 U/ml a 20 U/ml, a concentração de IL-6 é geralmente cerca de 500 U/ml a 2.000 U/ml, e a concentração de IL-12 é geralmente cerca de 5 ng/ml a 20 ng/ml, embora a concentração não seja limitada às mesmas. A unidade "U" utilizada no presente documento indica uma unidade de atividade. A co-cultura pode ser repetida uma vez ou várias vezes com a adição de células apresentadoras de antigénio novas. Por exemplo, o sobrenadante da cultura após co-cultura é descartado, a co-cultura é adicionalmente levada a cabo com a adição de uma suspensão de células apresentadoras de antigénio novas, e tal procedimento pode ser repetido uma vez ou várias vezes. As condições de co- cultura podem ser conforme descrito acima.

As células T citotóxicas específicas para os polipéptidos são induzidas e multiplicadas através da co-cultura. Assim, as células T isoladas que se ligam seletivamente ao complexo de polipéptidos e moléculas MHC podem ser preparadas com a utilização dos péptidos anteriores.

Conforme descrito nos Exemplos abaixo, genes que codificam polipéptidos de um número de SEQ ID par entre SEQ ID NOs: 2 a 30 são expressos especificamente nas células de cancro da mama, nas células de leucemia, e células de linfoma. Consequentemente, considera-se que um número significativamente maior de polipéptidos de números de SEQ ID pares entre SEQ ID NOs: 2 a 30 estão presentes em tais células cancerosas do que em células normais. Quando alguns polipéptidos nas células cancerosas são apresentados às moléculas MHC na superfície das células cancerosas e as células T citotóxicas preparadas conforme descrito acima são administradas a um corpo vivo, as células T citotóxicas podem perturbar as células cancerosas utilizando o mesmo que um marcador. Uma vez que as células apresentadoras de antigénio que apresentam os polipéptidos são capazes de induzir e multiplicar células T citotóxicas específicas para os polipéptidos in vivo, a administração das células apresentadoras de antigénio num corpo humano pode também perturbar as células cancerosas. Isto é, as células T citotóxicas preparadas com a utilização dos polipéptidos ou células apresentadoras de antigénio são úteis como o agente terapêutico e/ou preventivo para o cancro com o agente de indução da imunidade para utilização na presente invenção.

Quando as células apresentadoras de antigénio isoladas ou células T isoladas são administradas a um corpo humano, é preferível que as tais células isoladas sejam preparadas a partir das células apresentadoras de antigénio ou células T amostradas a partir de um paciente que recebe o tratamento com a utilização dos polipéptidos (a) a (c) de forma a evitar uma resposta imunológica que reconhece tais células como matéria estranha e ataca as tais células in vi vo. A via de administração de um agente terapêutico e/ou preventivo para o cancro compreendendo, como um ingrediente ativo, as células apresentadoras de antigénio ou células T isoladas é preferivelmente a via parentérica, tal como administração intravenosa ou intra-arterial. Uma dosagem é adequadamente selecionada de acordo com o sintoma, o propósito da administração, e outras condições, e no geral, 1 a 1013 células, e preferivelmente 106 a 109 células são utilizadas para administração, e tais células são preferivelmente administradas uma vez cada vários dias ou vários meses. Uma preparação pode ser, por exemplo, uma suspensão de células numa solução salina tamponada fisiológica, e pode ser utilizada em combinação com outros agentes antitumorais ou citocinas. Também, Um ou mais aditivos bem conhecidos no campo da preparação médica podem ser adicionados. <Vacina baseada em genes>

Os polinucleótidos que codificam os polipéptidos (a) a (c) podem ser expressos no corpo de um animal alvo, de forma que a produção de anticorpos ou células T citotóxicas possa ser induzida no corpo, e efeitos equivalentes àqueles alcançados através da administração do polipéptido possam ser obtidos. Especificamente, o agente de indução de imunidade para utilização de acordo com a presente invenção pode compreender polinucleótidos que codificam os polipéptidos (a) a (c) e compreendem, como um ingrediente ativo, um vetor recombinante capaz de expressar tal polipéptido in vivo. Tal vetor recombinante capaz de expressar um polipéptido de antigénio é também referido como uma "vacina baseada em gene".

Um vetor utilizado para preparar uma vacina baseada em gene não é particularmente limitado, desde que possa expressar polipéptidos de interesse nas células animais alvo (preferivelmente células animais mamíferas). Pode ser um plasmídeo ou vetor virai, e qualquer vetor conhecido no campo das vacinas baseadas em gene pode ser utilizado. Polinucleót idos, tais como ADN ou ARN que codificam os polipéptidos, podem ser facilmente preparados de acordo com uma técnica convencional conforme descrito acima. Também, os polinucleótidos podem ser incorporados num vetor através de um método bem conhecido na técnica.

Preferivelmente, uma vacina com base em gene é administrada por via parentérica (por exemplo, intramuscular, subcutânea, intravenosa, ou administração intra-arterial), e a dosagem pode ser adequadamente selecionada de acordo com um tipo de antigénio ou outras condições. Uma dosagem é geralmente cerca de 0,1 pg a 100 mg, e preferivelmente cerca de 1 pg a 10 mg, em termos de peso da vacina com base em gene por kg do peso corporal.

Exemplos de métodos que envolvem a utilização de vetores virais incluem métodos nos quais o polinucléotido que codifica o polipéptido anterior é incorporado no vírus de ARN ou vírus de ADN, tal como um retrovirus, lentivírus, adenovirus, vírus adeno associado, herpesvirus, vírus vaccinia, poxvirus, poliovirus, ou vírus Sindbis, e o animal alvo está infetado com o mesmo. Métodos envolvendo a utilização de retrovirus, adenovirus, vírus adeno associado, ou vírus vaccinia são particularmente preferíveis.

Exemplos de outros métodos incluem um método no qual um plasmídeo de expressão é diretamente administrado no músculo (o método da vacina de ADN) , o método de lipossomas, o método da Lipofectina, microinjeção, o método de fosfato de cálcio, e eletroporação, com o método de vacina de ADN e o método de lipossomas sendo particularmente preferíveis. 0 gene que codifica o polipéptido utilizado na presente invenção é, na realidade, permitido funcionar como um produto farmacêutico através do método in vivo no qual o gene é introduzido diretamente no corpo ou o método ex vivo no qual uma dada célula é amostradas a partir de um animal alvo, o gene é introduzido na célula ex vivo, e a célula é depois devolvida ao corpo (Nikkei Science (a versão Japonesa de Scientific American), april de 1994, pp. 20-45, Japão; Gekkan Yakuji (o Pharmaceuticals Monthly), 1994, vol. 36, N° 1, pp. 23-48, Japão; Jikken Igaku Zoukan (um número extra de Experimental Medicine), 1994, vol. 12, N° 15, Japão; e documentos citados dos mesmos). O método in vivo é mais preferível.

Quando um agente farmacêutico é administrado através do método in vivo, o agente pode ser administrado através de uma via adequada de acordo com doenças, sintomas, e outras condições do alvo do tratamento. Por exemplo, a administração pode ser levada a cabo por via intravenosa, intra-arterial, subcutânea, ou intramuscular. Quando o agente é administrado através do método in vivo, por exemplo, o agente pode estar sob a forma de um fármaco liquido. Em geral, o agente está sob a forma de uma preparação para injeção contendo ADN que codifica o péptido para utilização na presente invenção como um ingrediente ativo, e portadores comuns podem ser adicionados de acordo com a necessidade. Também, o lipossoma ou lipossoma de fusão da membrana (por exemplo, o lipossoma do vírus hemaglutinante do Japão (HVJ)) compreendendo o ADN pode estar sob a forma de uma preparação de lipossoma tal como uma suspensão, criogénio, ou criogénio condensado por centrifugação.

Na presente divulgação, o termo "a sequência de aminoácidos mostrada pela SEQ ID NO: 1" refere-se não apenas à sequência de nucleótidos que é realmente mostrada pela SEQ ID NO: 1 mas também uma sequência complementar à mesma. Consequentemente, o termo "um polinucleótido tendo a sequência de nucleótidos mostrada pela SEQ ID NO: 1" refere-se a um polinucleótido de cadeia simples tendo a sequência de nucleótidos que é realmente mostrada pela SEQ ID NO: 1, um polinucleót ido de cadeia simples que compreende uma sequência de nucleótidos complementar à mesma, e um polinucleótido de cadeia dupla compreendido por tais polinucleótidos de cadeia simples. Quando se prepara um polinucleótido que codifica o polipéptido utilizado na presente invenção, uma sequência de nucleótidos adequada deve ser selecionada. Um perito na especialidade elegeria prontamente tal sequência adequada.

Exemplos

Doravante, a presente invenção é descrita em maior detalhe com referência aos Exemplos, embora o âmbito técnico da presente invenção não seja limitado aos exemplos concretos abaixo.

Exemplo 1: Aquisição de uma nova proteína de antigénio de cancro através do método SEREX (1) Preparação de biblioteca de ADNc ARN total foi extraído a partir do tecido testicular de um cão saudável através do método de guanidinio ácido-fenol-clorof órmio, e poli (A) ARN foi purificado com a utilização do Kit de purificação de ARNn Oligotex-dT30 (Takara Shuzo Co., Ltd.) de acordo com os protocolos incluídos no kit. A biblioteca de fago de ADNc de testículo caninos foi sintetizada utilizando o ARNm obtido (5 yg) . A biblioteca de fago de ADNc foi preparada utilizando o Kit cDNA Synthesis, o Kit ZAP-cDNA Synthesis, e o Kit ZAP-cDNA GigapacklII Gold Cloning (STRATAGENE) de acordo com os protocolos incluídos nos kits. 0 tamanho da biblioteca de fago de ADNc foi 7,73 x 105 pfu/ml. (2) Rastreio de biblioteca de ADNc com a utilização de soro 0 imunorrastreio foi levado a cabo utilizando a biblioteca de fago de ADNc de testículos caninos preparada acima. Especificamente, células de E. coli hospedeira (XL1-Blue MRF' ) foram infetadas com a biblioteca de fago em 2.210 clones por uma placa de agarose NZY (Φ90 x 15 mm), cultivadas a 42 °C durante 3 a 4 horas para formar placas, a placa foi coberta com a membrana de nitrocelulose (Hybond C Extra: GE Healthcare Bio-Science) infiltrada com IPTG (isopropil-p-D-tiogalactósido) a 37 °C durante 4 horas para induzir e expressar proteínas, e as proteínas foram transferidas para a membrana. Depois disso, a membrana foi recuperada, imersa em TBS contendo leite desnatado em pó a 0,5% (Tris-HCl a 10 mM, NaCl a 150 mM, pH 7,5), e agitada a 4 °C durante a noite para bloquear uma reação não específica. Foi permitido ao filtro reagir com o soro diluído 500 vezes de um cão clinicamente afetado à temperatura ambiente durante 2 a 3 horas.

Tal como o soro do cão clinicamente afetado, o soro amostrado a partir de um cão com cancro da mama foi utilizado. As amostras de soro foram armazenadas a -80 °C e pré-tratadas imediatamente antes da utilização. As amostras de soro foram pré-tratadas da seguinte forma. Especificamente, células de E. coli hospedeira (XLl-BLue MRF') foram infetadas com os fagos λ ZAP Express nos quais nenhuns genes exógenos tinham sido introduzidos, e a cultura foi depois levada a cabo no meio da placa NZY a 37 °C durante a noite. Subsequentemente, tampão de NaHCCt a 0,2 M (pH 8,3) contendo NaCl a 0,5 M foi adicionado à placa, a placa foi deixada em repouso a 4 °C durante 15 horas, e o sobrenadante foi recuperado como um extrato de fago/E. coli. Subsequentemente, foi permitido ao extrato de fago/£b coli recuperado fluir através da coluna-NHS (GE Healthcare Bio-Science), e proteínas derivadas de fagos/E. coli foram aí imobilizadas. Foi permitido ao soro de um cão clinicamente afetado fluir através da coluna imobilizada com proteína para reagir com ela, e anticorpos que se absorveram a E. coli e fagos foram removidos a partir do soro. A fração de soro que fluiu através da coluna foi diluída 500 vezes com TBS contendo leite desnatado em pó a 0,5%, e o produto resultante foi utilizado como amostra de imunorrastreio. A membrana sobre a qual o dito soro tratado e proteína de fusão acima mencionada foram transferidos foi lavada 4 vezes com TBS-T (Tween 20 a 0,05%/TBS), o anticorpo de cabra anti-IgG de cão (conjugado HRP de cabra anti-IgG de cão-h+1: BETHYL Laboratories), que foi diluído 5.000 vezes com TBS contendo leite desnatado em pó a 0,5% como o anticorpo secundário, foi deixado a reagir com o mesmo à temperatura ambiente durante 1 hora, a deteção foi levada a cabo através da reação de desenvolvimento de cor enzimática utilizando a solução de reação NBT/BCIP (Roche), colónias que correspondem à região positiva para o desenvolvimento de cor foram removidas a partir da placa de agarose NZY (Φ90 x 15 mm), e as colónias removidas foram dissolvidas em 500 μΐ de tampão SM (NaCl a 100 mM, MgCISCh a 10 mM, Tris-HC1 a 50 mM, gelatina a 0,01%, pH 7,5) . Os rastreios secundário e terciário foram repetidos até que as colónias positivas para desenvolvimento de cor representaram clones únicos da mesma forma que descrito acima e 5 clones positivos foram isolados como um resultado do rastreio de 30.940 clones de fagos que reagem com IgG no soro. (3) Pesquisa de homologia de gene de antigénio isolado

De forma a submeter os 5 clones positivos isolados da forma acima descrita a análise de sequência de nucleótidos, vetores de fago foram convertidos em vetores de plasmídeo. Especif icamente, 200 μΐ de uma solução de E. coli hospedeira (XLl-Blue MRF') ajustados a DCtoo de 1,0 foram misturados com 250 μΐ da solução de fago purificado e 1 μΐ de fago adjuvante ExAssist (STRATAGENE), o produto resultante foi submetido à reação a 37°C durante 15 minutos, 3 ml de meio LB foram adicionados, a cultura foi levada a cabo a 37 °C durante 2,5 a 3 horas, o produto da cultura foi incubado num banho de água a 70 °C durante 20 minutos imediatamente após, o produto resultante foi centrifugado a 4 °C e 1.000 x g durante 15 minutos, e o sobrenadante foi recuperado como uma solução de fagemideo. Subsequentemente, 200 μΐ de uma solução E. coli (SOLR) hospedeira de fagemideo ajustados a DCtoo de 1,0 foram misturados com 10 μΐ da solução de fago purificada, o produto resultante foi submetido à reação a 37°C durante 15 minutos, 50 μΐ do mesmo foram semeados em meio de agar LB contendo ampicilina (concentração final: 50 pg/ml), e a cultura foi levada a cabo a 37 °C durante a noite. Uma única colónia da SOLR transformada foi recolhida e cultivada em in meio de agar LB contendo ampicilina (concentração final: 50 pg/ml) a 37 °C, e ADN de plasmideo tendo um inserto de interesse foi purificado utilizando o Kit Miniprep plasmid QIAGEN (QIAGEN). O plasmideo purificado foi submetido a análise da sequência de comprimento completo do inserto através de primer walking utilizando o iniciador T3 de SEQ ID NO: 31 e o iniciador T7 de SEQ ID NO: 32. As sequências génicas mostradas por SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 11, e 13 foram obtidas através da análise de sequência. As sequências de nucleótidos dos genes e as sequências de aminoácidos dos mesmos (SEQ ID NOs: 6, 8, 10, 12, e 14) foram utilizadas para realizar pesquisa de homologia com os genes conhecidos com a utilização de um programa de pesquisa de homologia, BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). Como um resultado, descobriu-se que todos os 5 genes obtidos codificavam CAPRIN-1. A identidade de sequência entre os 5 genes foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 100% e a identidade de sequência de aminoácidos de 99% em regiões para serem traduzidas em proteínas. A identidade de sequência do gene com um gene codificando um homólogo humano foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 94% e a identidade de sequência de aminoácidos de 98% em regiões para serem traduzidas em proteínas. As sequências de nucleótidos dos homólogos humanos são mostradas por SEQ ID NOs: 1 e 3 e as sequências de aminoácidos dos mesmos são mostradas por SEQ ID NOs: 2 e 4. A identidade de sequência do gene canino obtido com um gene codificando um homólogo bovino foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 94% e a identidade de sequência de aminoácidos de 97% em regiões para serem traduzidas em proteínas. A sequência de nucleótidos do homólogo bovino é mostrada por SEQ ID NO: 15 e a sequência de aminoácidos do mesmo é mostrada por SEQ ID NO: 16. A identidade de sequência entre o gene codificando o homólogo humano e o gene codificando o homólogo bovino foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 94% e a identidade de sequência de aminoácidos de 93% a 97% em regiões para serem traduzidas em proteínas. A identidade de sequência do gene canino obtido com um gene codificando um homólogo de cavalo foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 93% e a identidade de sequência de aminoácidos de 97% em regiões para serem traduzidas em proteínas. A sequência de nucleótidos do homólogo de cavalo é mostrada por SEQ ID NO: 17 e a sequência de aminoácidos do mesmo é mostrada por SEQ ID NO: 18. A identidade de sequência entre o gene codificando o homólogo humano e o gene codificando o homólogo de cavalo foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 94% e a identidade de sequência de aminoácidos de 93% a 97% em regiões para serem traduzidas em proteínas. A identidade de sequência do gene canino obtido com um gene codificando um homólogo de ratinho foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 87% a 89% e a identidade de sequência de aminoácidos de 95% a 97% em regiões para serem traduzidas em proteínas. As sequências de nucleótidos dos homólogos de ratinho são mostradas por SEQ ID NOs: 19, 21, 23, 25, e 27 e as sequências de aminoácidos dos mesmos são mostradas por SEQ ID NOs: 20, 22, 24, 26, e 28. A identidade de sequência entre um gene codificando um homólogo humano e um gene codificando um homólogo de ratinho foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 8 9% a 91% e a identidade de sequência de aminoácidos de 95% a 96% em regiões para serem traduzidas em proteínas. A identidade de sequência do gene canino obtido com um gene codificando um homólogo de galinha foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 82% e a identidade de sequência de aminoácidos de 87% em regiões para serem traduzidas em proteínas. A sequência de nucleótidos do homólogo de galinha é mostrada por SEQ ID NO: 29 e a sequência de aminoácidos do mesmo é mostrada por SEQ ID NO: 30. A identidade de sequência entre um gene codificando um homólogo humano e um gene codificando um homólogo de galinha foi conforme se segue: a identidade de sequência de nucleótidos de 81% a 82% e a identidade de sequência de aminoácidos de 86% em regiões para serem traduzidas em proteínas. (4) Análise de expressão génica em tecido A expressão dos genes obtidos da forma descrita acima em tecidos normais humanos e caninos e várias estirpes celulares foi examinada através de PCR de transcrição reversa (RT-PCR). A transcrição reversa foi levada a cabo da seguinte forma. Especificamente, ARN total foi extraído a partir 50 a 100 mg de amostras de tecido e 5 a lOx 106 estirpes celulares com a utilização do reagente TRIzol (Invitrogen) de acordo com o protocolo incluído no mesmo. ADNc foi sintetizado com a utilização do ARN total extraído utilizando o Sistema Superscript First-Strand Synthesis durante RT-PCR (Invitrogen) de acordo com o protocolo incluído no mesmo. A PCR foi levada a cabo utilizando iniciadores específicos para os genes obtidos (mostrados por SEQ ID NOs: 33 e 34) da seguinte forma. Especificamente, reagentes (0,25 μΐ da amostra preparada através de transcrição reversa, 2 mM cada dos iniciadores, 0,2 μΜ cada dos dNTPs, e 0,65 U de polimerase ExTaq (Takara Shuzo Co. , Ltd.)) foram misturados com um tampão acompanhante para serem ajustados para corresponder ao volume total de 25 μΐ. O produto resultante foi submetido à reação de 30 ciclos a 94 °C durante 30 segundos, 60 °C durante 30 segundos e 72 °C durante 30 segundos, utilizando o Thermal Cycler (Bio Rad) . Os iniciadores específicos de gene acima foram utilizados para amplificar uma região dos nucleótidos 206 a 632 da sequência de nucleótidos mostrada pela SEQ ID NO: 5 (isto é, o gene CAPRIN-1 canino) e uma região dos nucleótidos 698 a 1124 da sequência de nucleótidos mostrada pela SEQ ID NO: 1 (ou seja, o gene CAPRIN-1 humano). Para comparação, os iniciadores específicos de GAPDH (conforme mostrado pelas SEQ ID NOs: 35 e 36) foram utilizados simultaneamente. Como um resultado, foi observada uma expressão potente num tecido testicular de cães normais e expressão foi observada em tecido de cancro da mama e de adenocarcinoma canino, mostrado na Fig. 1. Além disso, a expressão do homólogo humano do gene obtido foi também examinada, e a expressão do mesmo foi observada apenas nos testículos, no caso de tecido normal, tal como no caso do gene CAPRIN-1 canino. Contudo, a sua expressão foi detetada numa ampla variedade de linhas celulares de cancro, tais como cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro pulmonar e linhas celulares de cancro do esófago, e, em particular, a sua expressão foi observada em muitas linhas celulares de cancro da mama. Os resultados demonstram que a expressão de CAPRIN-1 não é observada em tecidos normais além do tecido testicular, no entanto, CAPRIN-1 é expresso em várias células de cancro, e linhas celulares de cancro da mama, em particular.

Na Fig. 1, o Número de referência 1 no eixo vertical mostra o padrão de expressão do gene identificado acima e o Número de referência 2 mostra o padrão de expressão do gene GAPDH de controlo. (5) Coloração imunohistoquímica (5)-1: Expressão de CAPRIN-1 em tecido normal canino e de ratinho

Ratinhos (Balb/c, do sexo feminino) e cães (cães beagle, do sexo feminino) foram sangrados sob anestesia com éter e sob anestesia com quetamina/isoflurano, a cavidade abdominal foi aberta, e órgãos (estômago, fígado, globo ocular, timo, músculo, medula óssea, útero, intestino delgado, esófago, coração, rim, glândula salivar, intestino grosso, glândula mamária, cérebro, pulmão, pele, glândula adrenal, ovário, pâncreas, baço e bexiga) foram independentemente transferidos para uma placa de 10 cm contendo PBS. Os órgãos foram cortados em PBS e imobilizados com tampão de fosfato a 0,1 M contendo paraformaldeido (PFA) a 4% (pH 7,4) sob condições de refluxo durante a noite. Uma solução de refluxo foi descartada, as superfícies dos tecidos dos órgãos foram lavadas com PBS, uma solução de PBS contendo sacarose a 10% foi introduzida num tubo de centrífuga de 50 ml, e os tecidos foram aí introduzidos e agitados a 4 °C durante 2 horas utilizando um rotor. O produto resultante foi transferido para uma solução de PBS contendo sacarose a 20%, foi deixado em repouso a 4 °C até que os tecidos assentaram, e em seguida foi transferido para uma solução de PBS contendo sacarose a 30% e deixado em repouso a 4 °C, até o tecidos assentarem. Os tecidos foram removidos e as regiões necessárias foram excisadas com um bisturi cirúrgico. Subsequentemente, o composto OCT (Tissue Tek) foi aplicado sobre a superfície dos tecidos, e os tecidos foram então colocados no Cryomold. Após o Cryomold ter sido colocado em gelo seco e rapidamente congelado, os tecidos foram cortados com uma espessura de 10 pm a 20 pm, utilizando o criostato (LEICA), e os cortes de tecido em lâminas de vidro foram secos ao ar com um secador de cabelo durante 30 minutos para preparar lâminas de vidro com cortes de tecido sobre as mesmas. Subsequentemente, as lâminas de vidro foram introduzidas num frasco de coloração com PBS-T (solução salina fisiológica contendo Tween 20 a 0,05%), PBS-T foi substituído com PBS-T novo a cada 5 minutos, e este procedimento foi repetido três vezes.

Humidade extra em torno dos cortes foi removida utilizando Kimwipes, os cortes foram rodeados com Dakopen (DAKO), um reagente de bloqueio de Ig de ratinho MOM (VECTASTAIN) foi colocado sobre o tecido de ratinho como uma solução de bloqueio, uma solução de PBS-T contendo soro fetal de bovino a 10% foi colocada sobre o tecido canino como uma solução de bloqueio, e foram deixados em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, uma solução ajustada para compreender um anticorpo monoclonal contra CAPRIN-1 tendo a região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 78 e a região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 79 a 10 pg/ml com uma solução de bloqueio, a qual reage com a superfície da célula cancerosa preparada no Exemplo de Referência 1, foi aplicada sobre os mesmos, e o produto resultante foi deixado em repouso numa câmara húmida a 4 °C durante a noite. Depois de as lâminas de vidro serem lavadas 3 vezes com PBS-T, durante 10 minutos, o anticorpo anti-IgG marcado com biotina MOM (VECTASTAIN) diluído 250 vezes com uma solução de bloqueio foi adicionado e foram, em seguida, deixadas em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Após as lâminas serem lavadas 3 vezes com PBS-T durante 10 minutos, um reagente ABC de avidina-biotina (VECTASTAIN) foi aplicado sobre as mesmas, e as lâminas foram deixadas em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 5 minutos. Após as lâminas serem lavadas 3 vezes com PBS-T durante 10 minutos, uma solução de desenvolvimento de cor DAB (10 mg de DAB + 10 μΐ de H2O2 a 30%/Tris-HCl a 0,05 M, pH 7,6, 50 ml) foi aplicada sobre as mesmas, e as lâminas foram deixadas em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. As lâminas foram lavadas com água destilada, um reagente de hematoxilina (DAKO) foi aplicado sobre as mesmas, e as lâminas foram deixadas em repouso à temperatura ambiente durante 1 minuto, seguidas de lavagem com água destilada. As lâminas de vidro foram mergulhadas sucessivamente em soluções de etanol a 70%, 80%, 90%, 95%, e 100% durante 1 minuto cada e, em seguida, deixadas repousar durante a noite em xileno. As lâminas de vidro foram removidas, montadas com Meio de Montagem Glycergel (DAKO), e, em seguida, observadas. Como resultado, foi observada uma fraca expressão de CAPRIN-1 em células dos tecidos da glândula salivar, rim, cólon e gástrico; no entanto, a expressão do mesmo não foi observada nas superfícies das células, e não foi observada expressão em tecidos derivados a partir de outros órgãos. (5)-2: Expressão de CAPRIN-1 em tecido de cancro da mama canino

Os 108 espécimes de tecido de cancro da mama de cães, os quais tinham sido diagnosticados com cancro da mama maligno através de diagnóstico patológico, foram utilizados para preparar lâminas compreendendo cortes congelados sobre as mesmas e para levar a cabo a coloração imunohistoquímica com a utilização de um anticorpo monoclonal contra CAPRIN-1, tendo a região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 78 e a região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 79 da mesma forma conforme descrito acima. Como resultado, a expressão de CAPRIN-1 foi observada em 100 dos 108 espécimes (92,5%), e verificou-se que a expressão de CAPRIN-1 foi particularmente potente na superfície das células cancerosas com um elevado grau de atipia. (5) -3: Expressão de CAPRIN-1 em tecido de cancro da mama humano A coloração imunohistoquímica foi realizada em 188 espécimes de tecido de cancro da mama na matriz parafinada de tecido de cancro da mama humano (BIOMAX) . A matriz de tecido de cancro da mama humano foi tratada a 60 °C durante 3 horas, a matriz foi introduzida num frasco de coloração preenchido com xileno, o xileno foi substituído por xileno novo a cada 5 minutos e este procedimento foi repetido três vezes. Subsequentemente, os procedimentos semelhantes foram repetidos com a utilização de etanol e PBS-T, em vez de xileno. A matriz de tecido de cancro da mama humano foi introduzida num frasco de coloração preenchido com tampão de citrato a 10 mM, contendo Tween 20 a 0,05% (pH 6,0), a matriz foi tratada a 125 °C durante 5 minutos, e a matriz foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante pelo menos 40 minutos. Humidade extra em torno dos cortes foi removida utilizando Kimwipes, o tecido foi rodeado com Dakopen, e uma quantidade adequada de Peroxidase Block (DAKO) foi adicionada ao mesmo, gota a gota. Depois de a matriz ter sido deixada em repouso à temperatura ambiente durante 5 minutos, a matriz foi introduzida num frasco de coloração preenchido com PBS-T, PBS-T foi substituído com PBS-T novo a cada 5 minutos e este procedimento foi repetido 3 vezes. Uma solução de PBS-T contendo FBS a 10% foi aplicada sobre a mesma como uma solução de bloqueio, e foi deixada em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, uma solução ajustada para compreender um anticorpo monoclonal contra CAPRIN-1 tendo a região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 78 e a região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 79 a 10 pg/ml com uma solução de PBS-T solução contendo FBS a 5%, a qual reage com a superfície da célula cancerosa preparada no Exemplo de Referência 1, foi aplicada sobre a mesma, e a matriz foi deixada em repouso numa câmara húmida a 4 °C durante a noite. Depois de a matriz ser lavada 3 vezes com PBS-T durante 10 minutos, uma quantidade adequada do Polímero Marcado com Peroxidase Conjugado (DAKO) foi adicionada à mesma, gota a gota, e a matriz foi então deixada em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Depois de a matriz ser lavada 3 vezes com PBS-T, durante 10 minutos, uma solução de desenvolvimento de cor DAB (DAKO) foi aplicada sobre a mesma, a matriz foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante cerca de 10 minutos, e a solução de desenvolvimento de cor foi descartada. A matriz foi lavada 3 vezes com PBS-T durante 10 minutos, lavada com água destilada, mergulhada sucessivamente em soluções de etanol a 70%, 80%, 90%, 95% e 100% durante 1 minuto cada, e em seguida deixou-se repousar em xileno durante a noite. As lâminas de vidro foram removidas, montadas com Meio de Montagem Glycergel (DAKO), e, em seguida, observadas. Como resultado, observou-se uma potente expressão de CAPRIN-1 em 138 dos 188 espécimes totais de tecido de cancro da mama (73%) . (5)-4: Expressão de CAPRIN-1 em tumor cerebral maligno humano A coloração imunohistoquímica foi realizada em 247 espécimes de tecido de tumor cerebral maligno na matriz parafinada de tecido de tumor cerebral maligno humano (BIOMAX), com um anticorpo monoclonal contra CAPRIN-1 tendo a região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 78 e a região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 79 da mesma forma como em (5)-3 acima. Como um resultado, observou-se uma potente expressão de CAPRIN-1 em 227 dos 247 espécimes totais de tecido de tumor cerebral maligno (92%) . (5)-5: Expressão de CAPRIN-1 em gânglio linfático com metástases de cancro da mama humano A coloração imunohistoquímica foi realizada em 150 espécimes de tecido de gânglio linfático com metástases de cancro da mama na matriz parafinada de tecido de gânglio linfático com metástases de cancro da mama humano (BIOMAX), com um anticorpo monoclonal contra CAPRIN-1 tendo a região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 78 e a região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 79 da mesma forma como em (5)-3 acima. Como um resultado, observou-se uma potente expressão de CAPRIN-1 em 136 dos 150 espécimes totais de tecido de gânglio linfático com metástases de cancro da mama (90%) . Verificou-se que a expressão de CAPRIN-1 foi potente em tecido canceroso com metástases a partir de cancro da mama.

Exemplo de Referência 1: Preparação de anticorpo monoclonal contra CAPRIN-1 100 pg da proteína de antigénio de SEQ ID NO: 2 preparada no Exemplo 2 (CAPRIN-1 humano) foram misturados com a quantidade equivalente do adjuvante MPL+TDM (Sigma Corporation), e a mistura foi utilizada como uma solução de antigénio por ratinho. A solução de antigénio foi administrada por via intraperitoneal a ratinhos Balb/c de 6 semanas de idade (Japan SLC, Inc.), e a solução foi administrada mais 3 vezes cada semana. O baço foi removido 3 dias depois da imunização final foi interposto entre duas lâminas de vidro esterilizadas, triturado, lavado com PBS(-) (Nissui), e centrifugado a 1.500 rpm durante 10 minutos, e o sobrenadante foi removido. Este procedimento foi repetido 3 vezes para obter células de baço. As células de baço obtidas foram misturadas com as células de mieloma de ratinho SP2/0 (adquiridas a partir de ATCC) a 10:1, uma solução de PEG preparada pela mistura de 200 μΐ de meio RPMI 1640 contendo FBS a 10% com 800 μΐ de PEG1500 (Boehringer) aquecida a 37 °C foi adicionada às mesmas, e o produto resultante foi deixado a repousar durante 5 minutos para realizar a fusão celular. O produto resultante foi centrifugado a 1.700 rpm durante 5 minutos, o sobrenadante foi removido, as células foram suspensas em 150 ml de meio RPMI 1640 contendo FBS a 15% ao qual foram adicionados equivalentes a 2% de uma solução HAT (Gibco) (meio de seleção HAT), e 100 μΐ de cada das mesmas foram semeados por poço de 15 placas de 96 poços (Nunc) . A cultura foi levada a cabo durante 7 dias a 37 °C em CO2 a 5% para obter hibridomas resultantes da fusão de células de baço com as células de mieloma.

Os hibridomas foram selecionados utilizando a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas resultante para a proteína CAPRIN-1 como o indicador. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada à placa de 96 poços em quantidades de 100 ml por poço, e a placa foi deixada em repouso a 4 °C durante 18 horas. Os poços foram lavados 3 vezes com PBS-T, uma solução de albumina sérica bovina (BSA) a 0,5% (Sigma Corporation) foi adicionada em quantidades de 400 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, os poços foram lavados 3 vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço, os sobrenadantes da cultura dos hibridomas obtidos acima foram adicionados em quantidades de 100 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois de os poços serem lavados 3 vezes com PBS-T, o anticorpo anti-IgG (H+L) de ratinho marcado com HRP (Invitrogen) diluído 5.000 vezes com PBS foi adicionado em quantidades de 100 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 1 hora. Depois de os poços serem lavados 3 vezes com PBS-T, uma solução de substrato TMB (Thermo) foi adicionada em quantidades de 100 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso durante 15 a 30 minutos para realizar a reação de desenvolvimento de cor. Após o desenvolvimento de cor, ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado em quantidades de 100 μΐ por poço para terminar a reação, e a absorvancia a 450 nm e aquela a 595 nm foram analisadas utilizando um espectrómetro de absorção. Como um resultado, uma pluralidade de hibridomas que produzem anticorpos com elevados valores de absorvancia foram selecionados.

Os hibridomas selecionados foram adicionados a uma placa de 96 poços em quantidades de 0,5 células por poço, e cultivados. Uma semana mais tarde, observou-se que alguns hibridomas formavam colónias únicas nos poços. As células nos tais poços foram adicionalmente cultivadas, e os hibridomas foram selecionados utilizando a afinidade de ligação dos anticorpos produzidos a partir dos hibridomas clonados para a proteína CAPRIN-1 como o indicador. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços em quantidades de 100 μΐ por poço e a placa foi deixada em repouso a 4 °C durante 18 horas. Depois de os poços serem lavados 3 vezes com PBS-T, uma solução de BSA a 0,5% foi adicionada em quantidades de 400 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida, os poços foram lavados 3 vezes com 400 μΐ de PBS-T por poço, os sobrenadantes da cultura dos hibridomas obtidos acima foram adicionados em quantidades de 100 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois de os poços serem lavados 3 vezes com PBS-T, o anticorpo anti-IgG (H+L) de ratinho marcado com HRP (Invitrogen) diluído 5.000 vezes com PBS foi adicionado em quantidades de 100 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 1 hora. Depois de os poços serem lavados 3 vezes com PBS-T, uma solução de substrato TMB (Thermo) foi adicionada em quantidades de 100 μΐ por poço, e a placa foi deixada em repouso durante 15 a 30 minutos para realizar a reação de desenvolvimento de cor. Após o desenvolvimento de cor, ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado em quantidades de 100 μΐ por poço para terminar a reação, e a absorvancia a 450 nm e aquela a 595 nm foram analisadas utilizando um espectrómetro de absorção. Como um resultado, uma pluralidade de estirpes de hibridomas que produzem anticorpos monoclonais que mostram reatividade com a proteína CAPRIN-1 foram obtidos, os sobrenadantes de cultura de hibridomas foram purificados utilizando um portador de proteína G para obter 150 anticorpos monoclonais que se ligam à proteína CAPRIN-1.

Subsequentemente, anticorpos monoclonais que têm reatividade com as superfícies das células de cancro da mama que expressam CAPRIN-1 foram selecionados de entre os anticorpos monoclonais acima. Especificamente, 106 células de linha celular de cancro da mama humano, MDA-MB-231V, foram centrifugadas num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml, 100 μΐ dos sobrenadantes de hibridomas preparados acima foram adicionados ao mesmo, e os produtos resultantes foram deixados em repouso em gelo durante 1 hora. Depois de a placa ser lavada com PBS, o anticorpo de cabra anti-IgG de ratinho marcado com FITC (Invitrogen) diluído 500 vezes com PBS contendo soro bovino fetal a 0,1% foi adicionado, e a placa foi deixada em repouso em gelo durante 1 hora. Depois de a placa ser lavada com PBS, a intensidade de fluorescência foi medida utilizando o FACSCalibur (Becton Dickinson). Separadamente, como um controlo, o mesmo procedimento foi levado a cabo exceto pela adição de um meio em vez dos anticorpos. Como um resultado, 11 anticorpos monoclonais exibindo uma intensidade de fluorescência mais forte do que o controlo; isto é, 11 anticorpos monoclonais que reagem com as superfícies das células de cancro da mama foram selecionados. A sequência de região variável de cadeia pesada de um de tais anticorpos monoclonais é mostrada por SEQ ID NO: 78 e aquela da região variável de cadeia leve do mesmo é mostrada por SEQ ID NO: 79.

Exemplo 2: Preparação de proteínas de antigénio de cancro novas humanas e caninas (1) Preparação de proteína recombinante

Uma proteína recombinante foi preparada utilizando o gene de SEQ ID NO: 5 obtida no Exemplo 1 da forma descrita abaixo. Reagentes (o vetor (1 μΐ) preparado a partir da solução de fagemídeo obtida no Exemplo I e submetido a análise de sequência, 0,41 μΜ cada de dois tipos de iniciadores contendo sítios de restrição NdeI e ΚρηI (SEQ ID NOs: 37 e 38), 0,2 mM de dNTPs, e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara Shuzo Co., Ltd.)) foram misturados com o tampão acompanhante para serem ajustados para corresponder ao volume total de 50 μΐ. O produto resultante foi submetido à reação de 30 ciclos a 98 °C durante 10 segundos e 68 °C durante 1,5 minutos utilizando o Thermal Cycler (BIO RAD). Os dois tipos de iniciadores acima foram utilizados para amplificar uma região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento completo de SEQ ID NO: 6. Depois da realização de PCR, o ADN amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1%, e um fragmento de ADN de cerca de 1,4 kpb foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). O fragmento de ADN purificado foi ligado ao vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen). O produto resultante foi transformado em E. coli, o plasmídeo foi recuperado, e o fragmento de gene amplificado foi confirmado como correspondendo a sequência de interesse através de sequenciação. O plasmídeo, que se verificou corresponder à sequência de interesse, foi tratado com as enzimas de restrição NdeI e ΚρηI, o produto resultante foi purificado com o QIAquick Gel Extraction Kit, e a sequência génica de interesse foi inserida num vetor de expressão de E. coli (pET30b, Novagen) tratado com as enzimas de restrição NdeI e ΚρηI. A utilização deste vetor permite a produção de uma proteína fundida com o marcador His. O plasmídeo foi transformado em E. coli BL21 (DE3) e induzido com IPTG a 1 mM para expressar a proteína de interesse em E. coli.

Separadamente, uma proteína recombinante do gene homólogo canino foi preparada utilizando o gene de SEQ ID NO: 7 da forma descrita abaixo. Reagentes (ADNc (1 μΐ) , a expressão do qual foi confirmada através de RT-PCR entre o ADNc celular ou tecidual preparado no Exemplo 1, 0,4 μΜ cada de dois tipos de iniciadores contendo sítios de restrição NdeI e Kpnl (SEQ ID NOs: 39 e 40), 0,2 mM de dNTPs, e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara Shuzo Co., Ltd.)) foram misturados com um tampão acompanhante para serem ajustados para corresponder ao volume total de 50 μΐ. O produto resultante foi submetido à reação de 30 ciclos a 98 °C durante 10 segundos e 68 °C durante 2,5 minutos, utilizando o Thermal Cycler (BIO RAD) . Os dois tipos de iniciadores acima foram utilizados para amplificar uma região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento completo de SEQ ID NO: 8. Depois da realização de PCR, o ADN amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1%, e um fragmento de ADN de cerca de 2,2 kpb foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). O fragmento de ADN purificado foi ligado ao vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen). O produto resultante foi transformado em E. coli, o plasmídeo foi recuperado, e o fragmento de gene amplificado foi confirmado como correspondendo a sequência de interesse através de sequenciação. O plasmídeo, que se verificou corresponder à sequência de interesse, foi tratado com as enzimas de restrição NdeI e Kpnl, o produto resultante foi purificado com o QIAquick Gel Extraction Kit, e a sequência génica de interesse foi inserida num vetor de expressão de E. coli (pET30b, Novagen) tratado com as enzimas de restrição NdeI e Kpnl. A utilização deste vetor permite a produção de uma proteína fundida com a etiqueta His. O plasmídeo foi transformado em E. coli BL21 (DE3) e induzido com IPTG a 1 mM para expressar a proteína de interesse em E. coli.

Uma proteína recombinante do gene homólogo humano foi preparada utilizando o gene de SEQ ID NO: 1 da forma descrita abaixo. Reagentes (ADNc (1 μΐ), a expressão do qual foi confirmada através de RT-PCR entre o ADNc celular ou tecidual preparado no Exemplo 1, 0,4 μΜ cada de dois tipos de iniciadores contendo sítios de restrição Nde I e Kpnl (SEQ ID NOs: 41 e 42), 0,2 mM de dNTPs, e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara Shuzo Co. , Ltd.)) foram misturados com um tampão acompanhante para serem ajustados para corresponder ao volume total de 50 μΐ. O produto resultante foi submetido à reação de 30 ciclos a 98 °C durante 10 segundos e 68 °C durante 2,5 minutos, utilizando o Thermal Cycler (BIO RAD) . Os dois tipos de iniciadores acima foram utilizados para amplificar uma região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento completo de SEQ ID NO: 2. Depois da realização de PCR, o ADN amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1%, e um fragmento de ADN de cerca de 2,1 kpb foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). O fragmento de ADN purificado foi ligado ao vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen). O produto resultante foi transformado em E. coli, o plasmídeo foi recuperado, e o fragmento de gene amplificado foi confirmado como correspondendo a sequência de interesse através de sequenciação. O plasmídeo, que se verificou corresponder à sequência de interesse, foi tratado com as enzimas de restrição Saci e XhoI, o produto resultante foi purificado com o QIAquick Gel Extraction Kit, e a sequência génica de interesse foi insertada num vetor de expressão de E. coli (pET30a, Novagen) tratado com as enzimas de restrição Saci e XhoI, A utilização deste vetor permite a produção de uma proteína fundida com a etiqueta His. O plasmídeo foi transformado em E. coli BL21 (DE3) e induzido com IPTG a 1 mM para expressar a proteína de interesse em E. coli. (2) Purificação de proteína recombinante Células de E. coli recombinantes expressando o gene de SEQ ID NO: 1, 5, ou 7 obtidas acima foram cultivadas em meio LB contendo canamicina a 30 pg/ml a 37 °C até que a absorvancia a 600 nm se tornou em torno a 0,7, isopropil-β-D-l-tiogalactopiranósido foi adicionado até uma concentração final de 1 mM, e a cultura foi levada a cabo a 37 °C durante 4 horas. Depois disso, as células foram centrifugadas a 4.800 rpm durante 10 minutos e colhidas. O sedimento celular foi suspenso em solução salina fisiológica tamponada com fosfato, o produto resultante foi centrifugado a 4.800 rpm durante 10 minutos adicionais, e as células foram depois lavadas.

As células foram suspensas em solução salina fisiológica tamponada com fosfato e ultrassonicamente interrompida em gelo. A solução de células de E. coli ultrassonicamente interrompida foi centrifugada a 6.000 rpm durante 20 minutos, o sobrenadante resultante foi designado como uma fração solúvel, e o precipitado foi designado como uma fração insolúvel. A fração solúvel foi adicionada a uma coluna quelante de níquel preparada de acordo com uma técnica convencional (portador: Chelating Sepharose™ Fast Flow (GE Health Care); volume da coluna: 5 ml; tampão de equilíbrio: tampão de cloridrato a 50 mM, pH 8,0) . Uma fração não adsorvida foi removida por lavagem com 10 volumes de coluna de tampão de cloridrato a 50 mM (pH 8,0) e tampão de fosfato a 20 mM contendo imidazol a 20 mM (pH 8,0), seguido por eluição com 6 volumes de leito de tampão fosfato a 20 mM contendo imidazol a 100 mM (pH 8,0) imediatamente a seguir. A fração eluida com tampão de fosfato a 20 mM contendo imidazol a 100 mM (pH 8,0), na qual a eluição da proteína de interesse foi confirmada através da coloração de Coomassie, foi adicionada a uma coluna de forte permuta aniónica (portador: Q Sepharose™ Fast Flow (GE Health Care); volume da coluna: 5 ml; tampão de fosfato a 20 mM (pH 8,0) como um tampão de equilíbrio). Uma fração não adsorvida foi removida por lavagem com 10 volumes de coluna de tampão de fosfato a 20 mM (pH 7,0) e tampão de fosfato a 20 mM contendo cloreto de sódio a 200 mM (pH 7,0), seguido por eluição com 5 volumes de leito de tampão fosfato a 20 mM contendo cloreto de sódio a 400 mM (pH 7,0) imediatamente a seguir. As frações purificadas de proteínas cada uma compreendendo as sequências de aminoácidos mostradas por SEQ ID NOs: 2, 6, e 8 foram obtidas e depois designadas como materiais para teste de administração.

Uma fração (200 μΐ) das amostras purificadas obtidas pelo método descrito acima foi dispensada em 1 ml de um tampão de reação (Tris-HCl a 20 mM, NaCl a 50 mM, CaCl2 a 2 mM, pH 7,4), 2 μΐ de enterocinase (Novagen) foram adicionados, o produto resultante foi deixado em repouso à temperatura ambiente durante a noite, a reação foi deixada prosseguir, uma etiqueta His foi clivada, e a purificação foi depois levada a cabo utilizando o Enterokinase Cleavage Capture Kit (Novagen) de acordo com os protocolos anexos. Subsequentemente, 1,2 ml da amostra purificada obtida através do método descrito acima foram submetidos à substituição de tampão com solução salina tamponada com fosfato (Nissui) através de ultrafiltração utilizando Nanosep 10K Omega (Pall), a filtração asséptica foi levada a cabo através de HT Tuffryn Acrodisc (tamanho de poro: 0,22 pm, Pall), e o produto resultante foi utilizado para a experiência que se segue.

Exemplo 3: Teste de administração de proteína recombinante a um cão portador de cancro (1) Avaliação antitumoral

Um cão portador de cancro (cancro da mama) tendo um tumor da epiderme foi submetido à avaliação dos efeitos antitumorais da proteína recombinante purificada acima. O polipéptido recombinante tendo a sequência de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6 purificado da forma descrita acima (100 pg, 0,5 ml) foi misturado com a quantidade equivalente do adjuvante de Freund equivalente (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) para preparar um agente terapêutico contra cancro. O agente resultante foi administrado num total de 3 vezes ao gânglio linfático regional na vizinhança do tumor, como uma administração inicial, e 3 dias e 7 dias depois. Como um resultado, um tumor de cerca de 8 6 mm3 de tamanho, quando o agente terapêutico contra cancro foi administrado, diminuiu para 55 mm3, 30 mm3, e 20 mm3, 10 dias, 20 dias, e 30 dias depois da administração inicial, respetivamente.

Uma mistura de 0,5 ml do polipéptido recombinante tendo a sequência de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 2 e 0,5 ml do adjuvante incompleto de Freund foram administrados a outro cão tendo cancro da mama num total de 3 vezes da mesma forma que descrito acima. Também, 100 pg de interleucina 12 canina foram administrados juntamente com o agente por via subcutânea. Como um resultado, um tumor de cerca de 123 mm3 de tamanho, quando o agente terapêutico contra cancro foi administrado, regrediu completamente 45 dias depois da administração inicial do agente terapêutico contra o cancro.

Adicionalmente, uma mistura de 0,5 ml do polipéptido recombinante tendo a sequência de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 8 e 0,5 ml do adjuvante incompleto de Freund foram administrados a outro cão tendo cancro da mama num total de 3 vezes da mesma forma que descrito acima. Também, 100 pg de interleucina 12 canina foram administrados juntamente com o agente por via subcutânea. Como um resultado, um tumor de cerca de 96 mm3 de tamanho, quando o agente terapêutico contra cancro foi administrado, regrediu completamente 27 dias depois da administração inicial do agente terapêutico contra o cancro. (2) Avaliação da capacidade de indução da imunidade

As amostras de sangue dos cães clinicamente afetados aos quais o polipéptido recombinante tendo a sequência de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 2, e SEQ ID NO: 8 tinha sido administrado no teste de administração realizados em (1) acima foram obtidas antes da administração e 10 dias e 30 dias depois da administração inicial, células mononucleares do sangue periférico foram separadas de acordo com uma técnica convencional, e a capacidade das proteínas recombinantes para indução da imunidade foi avaliada através do ensaio ELISpot de IFNy utilizando as células mononucleares do sangue periférico.

Etanol a 70% foi adicionado a uma placa de 96 poços (MultiScreen-IP, MAIPS4510, Millipore) em quantidades de 100 μΐ/poço, a placa foi deixada em repouso durante 5 minutos, o etanol foi removido por aspiração, a placa foi lavada com água esterilizada, bicarbonato de sódio a 200 mM (pH 8,2) foi adicionado em quantidades de 300 μΐ/poço, a placa foi deixada em repouso durante 5 minutos, bicarbonato de sódio foi removido por aspiração, e a placa foi lavada. Subsequentemente, o anticorpo monoclonal anti-interferão γ canino (clonel42529, MAB781, R&D) adicionado a bicarbonato de sódio a 200 mM foi adicionado à placa em quantidades de 0,5 pg/poço, a incubação foi levada a cabo a 37 °C durante a noite, e o anticorpo primário foi submetido a fase sólida. Depois de o anticorpo primário na solução ter sido removido por aspiração, uma solução de bloqueio (BSA a 1% -sacarose a 5% - bicarbonato de sódio a 200 mM, pH 8,2) foi adicionada em quantidades de 300 μΐ/poço, e a incubação foi levada a cabo a 4 °C durante a noite para bloquear a placa. Depois de a solução de bloqueio ter sido removido por aspiração, meio RPMI contendo soro bovino fetal a 10% (Invitrogen) foi adicionado em quantidades de 300 μΐ/poço, a placa foi deixada em repouso durante 5 minutos, e o meio foi removido por aspiração. Depois disso, células mononucleares de sangue periférico caninas suspensas em meio RPMI contendo soro bovino fetal a 10% foram adicionadas à placa em quantidades de 5 x 105 células/poço, o polipéptido derivado de cão ou polipéptido derivado de humano utilizados para administração foram-lhes adicionados em quantidades de 10 μΐ/poço, e a cultura foi levada a cabo a 37 °C em CO2 a 5% durante 24 horas para produzir interferão γ a partir de imunócitos entre células mononucleares de sangue periférico. Depois de a cultura ser realizada, o meio foi removido, e os poços foram lavados 6 vezes com uma solução de lavagem (Tween 20 a 0,1% bicarbonato de sódio a 200 mM, pH 8,2) . Os anticorpos policlonais de coelho anti-cão diluídos 1.000 vezes com a solução de bloqueio foram adicionados à placa em quantidades de 100 μΐ/poço e depois incubadas a 4 °C durante a noite. Depois de os poços serem lavados 3 vezes com a solução de lavagem, os anticorpos anti-coelho marcados com HRP diluídos 1.000 vezes com a solução de bloqueio foram adicionados à placa em quantidades de 100 μΐ/poço, e foi permitido à reação proceder a 37 °C durante 2 horas. Depois de os poços serem lavados 3 vezes com a solução de lavagem, desenvolveu-se uma cor com o auxílio de uma imunocoloração Konica (Konica), e os poços foram lavados com água para terminar a reação. Depois da reação ter sido terminada, a membrana foi seca, e o número de pontos que se desenvolveram foi contado utilizando o KS Elispot (Carl Zeiss) . Como um resultado, não foram detetados pontos nas células mononucleares do sangue periférico de cães clinicamente afetados antes da administração de polipéptidos. No caso depois da administração de polipéptidos, no entanto, 13 a 82 pontos foram detetados nas células mononucleares do sangue periférico obtidas a partir de cães clinicamente afetados aos quais o polipéptido recombinante tendo a sequência de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 6 foi administrado, 10 e 30 dias depois da administração. No caso de cães clinicamente afetados aos quais o polipéptido recombinante tendo a sequência de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 2 foi administrado, 53 e 189 pontos foram detetados nas células mononucleares do sangue periférico 10 e 30 dias depois da administração. No caso de cães clinicamente afetados aos quais o polipéptido recombinante tendo a sequência de aminoácidos mostrada por SEQ ID NO: 8 foi administrado, 32 e 117 pontos foram detetados nas células mononucleares do sangue periférico 10 e 30 dias depois da administração.

Os resultados acima demonstram que imunócitos que produzem interferão γ, especificamente em resposta às proteínas recombinantes que foram administradas, são induzidos em cães clinicamente afetados aos quais o polipéptido recombinante tinha sido administrado. Os resultados também demonstram que as reações imunes nas quais os imunócitos desempenham um papel central, produzem os efeitos antitumorais descritos em (1) acima.

Exemplo 4: Efeitos antitumorais de vacinas de ADN

Um plasmídeo recombinante foi preparado utilizando o gene de SEQ ID NO: 19 da seguinte forma. Reagentes (ADNc (1 μΐ) extraído da mesma forma que no Exemplo 1 (4) a partir da linha celular de cancro colorrectal de ratinho (CT26, adquirida a partir de ATCC) na qual se tinha observado a expressão de CAPRIN-1, 0,4 μΜ cada de dois tipos de iniciadores (mostrados por SEQ ID NOs: 80 e 81), 0,2 mM de dNTPs, e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS)) foram misturados com um tampão acompanhante para serem ajustados para corresponder ao volume total de 50 μΐ. O produto resultante foi submetido a PCR de 30 ciclos a 98 °C durante 10 segundos, 55 °C durante 15 segundos, e 72 °C durante 4 minutos, utilizando um Thermal Cycler. Os dois tipos de iniciadores acima foram utilizados para amplificar uma região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento completo de SEQ ID NO: 20. Depois de a PCR ter sido realizada, o ADN amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1%, e um fragmento de ADN de cerca de 2.100 pb foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit. O fragmento de ADN purificado foi ligado ao vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen). O produto resultante foi transformado em E. coli, o plasmideo foi recuperado, a sequência do fragmento foi analisada, e um plasmideo tendo um fragmento génico amplificado correspondendo com a sequência de interesse foi obtido. O plasmideo foi tratado com a enzima de restrição EcoRI, o produto resultante foi purificado com o QIAquick Gel Extraction Kit, e a sequência génica de interesse foi inserida num vetor de expressão mamífero (pcDNA3.1, Invitrogen) tratado com a enzima de restrição EcoRI de acordo com uma técnica convencional. 50 pg de partículas de ouro (Bio Rad) , 100 μΐ de espermidina (SIGMA) , e 100 μΐ de CaCl2 a 1 M foram adicionados a 100 pg de ADN plasmídico preparado acima, a mistura foi agitada por um vórtex, e o produto resultante foi deixado em repouso à temperatura ambiente durante 10 minutos (doravante referido como "partículas de ouro-ADN"). Depois da mistura ser centrifugada a 3.000 rpm durante 1 minuto, o sobrenadante foi descartado, e as partículas foram lavadas 3 vezes com a etanol a 100%. Etanol a 100% (6 ml) foi adicionado às partículas de ouro-ADN, o produto resultante foi cuidadosamente agitado por um vórtex, e as partículas de ouro-ADN foram introduzidas em tubagem Tefzel (Bio Rad) e precipitadas na parede. Etanol na tubagem Tefzel à qual as partículas de ouro-ADN se tinham aderido foi seco ao ar, e o tubo seco foi cortado num comprimento adequado para aplicações de biobalistica.

As células CT26 foram transplantadas subcutaneamente nas regiões dorsais de 20 ratinhos Balb/c (Japan SLC, Inc.) em quantidades de 106 células/ratinho e deixadas crescer até um diâmetro de tumoral de aproximadamente 7 mm. Depois disso, o tubo preparado acima foi fixo na biobalistica, as células foram administradas por via percutânea nas cavidades abdominais de ratos rapados a uma pressão de 400 psi, utilizando um gás de hélio puro (a quantidade de ADN plasmidico inoculado é de 2 pg/ratinho), e os efeitos antitumorais foram avaliados.

Como resultado, os tumores tornaram-se aumentados em 10 ratinhos de controlo aos que plasmideos vazios sem genes CAPRIN-1 tinham sido administrados, e todos os 10 ratinhos morreram 63 dias após o transplante do tumor. No caso de 10 ratinhos aos quais os plasmideos compreendendo os genes CAPRIN-1 neles inseridos tinham sido administrados, no entanto, os tumores regrediram completamente em 25 dias após o transplante do tumor, e todos os ratinhos permaneceram vivos 63 dias após o transplante do tumor, quando todos os ratinhos de controlo morreram.

Exemplo 5: Indução de células T CD8+ reativas a epitopos de péptidos (1) Previsão de motivo peptidico de ligação a HLA-A0201 e motivo peptidico de ligação a HLA-A24 A informação de sequência de aminoácidos do polipéptido CAPRIN-1 humano foi obtida a partir do GenBank. A fim de prever um motivo peptidico de ligação a HLA-A0201 e um motivo peptidico de ligação a HLA-A24, a sequência de aminoácidos do polipéptido CAPRIN-1 humano foi analisada por meio de um programa de computador de predição usando softwares BIMAS conhecidos (disponíveis em http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/), 29 tipos de péptidos mostrados por SEQ ID NO: 43 a SEQ ID NO: 71 previstos como sendo capazes de se ligarem às moléculas de HLA-A0201 e 5 tipos de péptidos mostrados por SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 previstos como sendo capazes de se ligarem às moléculas de HLA-A24 foram selecionados. (2) Indução de células T CD8+ reativas a epitopos de péptidos 0 sangue periférico foi separado a partir de um indivíduo saudável positivo para HLA-A0201, sobreposto no meio de separação de linfócitos (Organonp Teknika, Durham, NC) , e centrifugado a 1.500 rpm à temperatura ambiente durante 20 minutos. Uma fração contendo PBMC foi recuperada e lavada 3 (ou mais) vezes em tampão de fosfato frio para obtenção de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs). As PBMCs obtidas foram suspensas em 20 ml de meio AIM-V (Life Technologies) e aderidas a um balão de cultura (Falcon) a 37 °C em CO2 a 5% durante 2 horas. As células não aderidas foram usadas para a preparação de células T, e as células aderidas foram usadas para a preparação de células dendríticas.

As células aderidas foram cultivadas em meio AIM-V na presença de IL-4 (1.000 U/ml) e GM-CSF (1000 U/ml) . O meio foi substituído por outro meio AIM-V, ao qual IL-4 (1.000 U/ml), GM-CSF (1.000 U/ml), IL-6 (1.000 U/ml, Genzyme, Cambridge, MA), IL-Ιβ (10 ng/ml, Genzyme, Cambridge, MA) e TNF-a (10 ng/ml, Genzyme, Cambridge, MA) foram adicionados 6 dias mais tarde, a cultura foi levada a cabo durante um período adicional de 2 dias, e a população de células não aderidas obtida foi usada como células dendríticas.

As células dendríticas preparadas foram suspensas em meio AIM-V numa densidade celular de 1 x 106 células/ml, os péptidos mostrados pelas SEQ ID NO: 43 a SEQ ID NO: 71 previstos como sendo capazes de se ligarem às moléculas HLA-A0201 selecionados em (1) acima foram-lhe adicionados a 10 yg/ml, e a cultura foi realizada utilizando uma placa de 96 poços a 37 °C em CO2 a 5% durante 4 horas. Depois de a cultura ser realizada, as células foram irradiadas com raios X (3.000 rad), lavadas com meio AIM-V, suspensas em meio AIM-V contendo soro AB humano a 10% (Nabi, Miami, FL), IL-6 (1.000 U/ml) e IL-12 (10 ng/ml, Genzyme, Cambridge, MA) , e adicionadas a uma placa de 24 poços em quantidades de 1 x 105 células/poço. Além disso, a população de células T preparada foi adicionada em quantidades de 1 x 106 células/poço e cultivadas a 37 °C em CO2 a 5%. Os sobrenadantes da cultura foram descartados 7 dias mais tarde, as células dendriticas tratadas com péptidos obtidos da maneira acima descrita e depois irradiadas com raios X foram suspensas em meio AIM-V contendo soro AB humano a 10% (Nabi, Miami, FL), IL-7 (10 U/ml, Genzyme, Cambridge, MA), e IL-2 (10 U/ml, Genzyme, Cambridge, MA) (densidade celular: 1 x 105 células/ml), as células foram adicionadas a um placa de 24 poços em quantidades de 1 x 105 células/poço, e a cultura foi adicionalmente realizada. Depois de este procedimento ser repetido 4 a 6 vezes a cada 7 dias, as células T estimuladas foram recuperadas, e a indução de células T CD8+ foi confirmada por citometria de fluxo.

Em relação aos péptidos de SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 previstos como sendo capazes de se ligarem a moléculas de HLA-A24, a indução de células T CD8+ reativas a epítopos de péptidos também foi tentada do mesmo modo como descrito acima, com a utilização de células dendriticas e população de células T induzida a partir do sangue periférico de um indivíduo saudável positivo para HLA-A24.

Como controlo negativo, um péptido tendo uma sequência fora do âmbito da presente invenção (SEQ ID NO: 77) foi utilizado.

Exemplo 6: Determinação de epítopo de antigénio de células T citotóxicas (1) Capacidade de produção de IFN-γ A fim de determinar a especificidade das células T que se observou crescerem para epítopos peptídicos, entre as células T induzidas no Exemplo 5(2), a 5 x 103 células T foram adicionadas a 5xl04 células T2 expressando moléculas de HLA-A0201 (Salter, RD et al. , Immunogenetics, 21:235- 246, 1985, as células T2 foram adquiridas a partir de ATCC) pulsadas com os péptidos previstos somo sendo capazes de se ligarem às moléculas de HLA-A0201 (os péptidos foram adicionados a meio AIM-V a 10 pg/ml e cultivados a 37 °C em CO2 a 5% durante 4 horas) , e o produto resultante foi cultivado numa placa de 96 poços em meio AIM-V contendo soro AB humano a 10% durante 24 horas. Os sobrenadantes foram recolhidos após a cultura, e a quantidade de IFN-γ produzida foi medida através de ELISA. Como um resultado, a produção de IFN-γ foi observada mais nos sobrenadantes de cultura obtidos a partir dos poços em que as células T2 pulsadas com os péptidos de SEQ ID NO: 43 a SEQ ID NO: 71 foram utilizados, do que nos sobrenadantes de cultura obtidos a partir dos poços em que as células T2 não pulsadas com péptidos foram usadas (Fig. 2). Os resultados demonstram que os péptidos acima são péptidos de epítopo de célula T capaz de estimular especificamente a proliferação de células T CD8+ HLA-A0201+ para induzir a produção de IFN-γ.

Da mesma maneira descrita acima, a especificidade das células T CD8+ reativas a epítopos de péptidos induzidas com a utilização dos péptidos de SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 no Exemplo 5(2) para os epítopos peptídicos foi determinada da seguinte maneira. Especificamente, o nível de produção de IFN-γ pelas células T contra as células JTK-LCL pulsadas com péptido que expressam moléculas de HLA-A24 (as células JTK-LCL foram adquiridas a partir de RIKEN, Japão) foi medido através de ELISA. Como resultado, a produção de IFN-γ foi observada mais nos sobrenadantes de cultura obtidos a partir dos poços em que as células JTK-LCL pulsadas com os péptidos de SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 foram utilizadas, do que nos sobrenadantes de cultura obtidos a partir dos poços em que células JTK-LCL não pulsadas com péptidos foram utilizadas (Fig. 3) . Os resultados demonstram que os péptidos de SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 são péptidos de epítopos de células T capazes de estimular especificamente a proliferação de células T CD8+ HLA-A24+ para induzir a produção de IFN-γ. (2) Avaliação de citotoxicidade

Subsequentemente, se os péptidos de SEQ ID NO: 43 a SEQ ID NO: 71 utilizados na presente invenção foram ou não apresentados nas moléculas HLA-A0201 nas células tumorais HLA-A0201+ que expressam o polipéptido CAPRIN-1 humano e se as células T CD8+ estimuladas com os péptidos são ou não capazes de destruir as células tumorais HLA-A0201+ que expressam o polipéptido CAPRIN-1 humano foi examinado. 106 células de células de glioma humano U-87MG (adquiridas a partir de ATCC), que foram verificadas como expressando o polipéptido CAPRIN-1 humano, foram recolhidas num tubo de centrífuga de 50 ml, 100 pCi de crómio-51 foram adicionados, e a incubação foi levada a cabo a 37 °C durante 2 horas. Depois disso, as células foram lavadas 3 vezes com meio RPMI (Gibco) contendo soro de bovino fetal a 10% (doravante referido como "FBS", Gibco) e adicionado a uma placa de 96 poços de fundo em V, em quantidades de 103 células/poço. Além disso, 5 x 104 HLA-A0201+ e células CD8+ reativas a epítopos de péptidos estimuladas com os péptidos em suspensão em meio RPMI contendo FBS a 10% foram adicionadas, e a cultura foi levada a cabo a 37 °C em CO2 a 5% durante 4 horas. Após a cultura, a quantidade de crómio-51 no sobrenadante de cultura libertado das células tumorais perturbadas foi medido para determinar a atividade citotóxica das células T CD8+ estimuladas com péptido. Como resultado, verificou-se que as células T CD8+ HLA-A0201+ estimuladas com péptido tinham atividade citotóxica contra as células U-87MG (Fig. 4) . Pelo contrário, as células T CD8+ induzidas com a utilização de um péptido de controlo negativo (SEQ ID NO: 77) não apresentaram qualquer atividade citotóxica. Assim, verificou-se que os péptidos utilizados na presente invenção (isto é, os péptidos de SEQ ID NO: 43 a SEQ ID NO: 71) são apresentados sobre as moléculas HLA-A0201 nas células tumorais HLA-A0201+ que expressam o polipéptido CAPRIN-1 humano. Além disso, também se verificou que os péptidos são capazes de induzir células T citotóxicas CD8+ que poderiam perturbar a tais células tumorais.

Subsequentemente, se os péptidos de SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 foram ou não apresentados sobre as moléculas de HLA-A24 nas células tumorais HLA-A24+ que expressam o polipéptido CAPRIN-1 humano e as células T CD8+ estimuladas com os péptidos foram ou não capazes de perturbar as células tumorais HLA-A24+ que expressam o polipéptido CAPRIN-1 humano foi examinado do mesmo modo como descrito acima. Crómio-51 foi incorporado nas células JTK-LCL HLA-A24+ que expressam o polipéptido CAPRIN-1 humano, HLA-A24+ e células T CD8+ reativas a epítopos de péptidos foram adicionadas, a cultura foi realizada, e a quantidade de crómio-51 no sobrenadante da cultura libertado a partir das células perturbadas foi medido. Como resultado, verificou-se que as células T CD8+ HLA-A24+ estimuladas com os péptidos de SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 têm atividade citotóxica contra as células JTK-LCL (Fig. 5). Assim, verificou-se que os péptidos de SEQ ID NO: 72 a SEQ ID NO: 76 foram apresentados sobre as moléculas de HLA-A24 nas células HLA-A24+ que expressam o polipéptido CAPRIN-1 humano, e verificou-se que os péptidos são capazes de induzir células T CD8+ citotóxicas, capazes de perturbar tais células. As células T CD8+ induzida com a utilização de um péptido de controlo negativo (SEQ ID NO: 77) não exibiram citotoxicidade. A fim de determinar a atividade citotóxica, 5 x 104 células T CD8+ estimuladas e induzidas pelos péptidos utilizados na presente invenção, foram misturadas com 103 células JTK-LCL ou U-87MG nas quais crómio-51 tinha sido incorporado, cultivado durante 4 horas, e a quantidade de crómio-51 libertada para o meio de cultura foi depois medido. A atividade citotóxica utilizada no presente documento significa a atividade citotóxica das células T CD8+ contra as células U-87MG ou as células JTK-LCL (isto é, células alvo), determinada de acordo com a seguinte equação* .

Equação*: Atividade citotóxica (%) = quantidade de crómio-51 libertado a partir de células JTK-LCL ou U-87MG após adição de células T CD8+/quantidade de crómio-51 libertado a partir das células alvo após a adição de ácido clorídrico a 1 N X 100 Aplicabilidade Industrial A presente invenção é industrialmente útil para o propósito de tratamento e prevenção do cancro.

Esta descrição refere-se à divulgação da descrição e/ou desenhos do pedido de patente Japonesa N.° 2008-

202065, ao qual o presente pedido reivindica a prioridade. Texto Livre de Listagem de Sequências SEQ ID NO: 31: iniciador T3 SEQ ID NO: 32: iniciador T7 SEQ ID NOs: 33 a 34: iniciadores SEQ ID NOs: 35 a 36: iniciadores GAPDH SEQ ID NOs: 37 a 42 e 80 a 81: iniciadores LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> TORAY INDUSTRIES, INC. <120> Composição Farmacêutica para o Tratamento e Prevenção de Cancro

<130> PH-4050-PCT <150> JP 2008-202065 <151> 05-08-2008 <160> 81 <17Ο> Patentln versão 3.1

<210> 1 <211> 5562 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0>

<221> CDS <222> (190) . . (2319) <223> <4 0 0> 1 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgecc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 160 gcgcgcacg atg ccc tcg gcc acc age cac age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 1 5 10 tcc gga ccg cca ccg ceg teg ggt tee tee ggg agt gag gcg gcc gcg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gcc ggg gcc gcc gcg ccg get tet cag cac ccc gea acc ggc acc 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggg gtg ate gac 375

Gly Ala Vai Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Vai lie Asp 50 55 60 aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ctt gat gat tac 423

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt aat caa gat cag ctg gat 471

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp 80 85 90 gcc gtt tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gea aaa 519

Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gca eta agt caa gat att cag aaa aca 567

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ett atg aga gaa gaa get gaa 615 lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ett gag eta cag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 759

Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag eta gta gac cct gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855

Tyr Glu His Ala Ser Tie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac cag aat 951

Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea gca cct gca gtt gaa gac 999

Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa get gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 285 agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag get gca 1191

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gca 1239

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta caa gac ett atg gca caa atg 1287

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ctg gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ett gat cct gcc att gta tet gca cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tet gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tet aga ett get cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa geg aca 1479

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tcc aca agt gag ggg tac aca gca tet caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag caa ega cca cag aag gaa 1575

Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca ate tet tta aat aca gac cag act 1623

Pro lie Asp Gin He Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea tec ett cct get geg tet cag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin 480 485 490 get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tec atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gcc cca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 S20 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gcc agt tat aac cag age ttt tet agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ett cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tec cca gac cag tec cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959

Gly Ser Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat tac aat 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Fhe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac ege cct tea ttc tct aac act cca aac agt ggt tat aca cag tct 2151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tct ggc tat caa egg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag ega ggc tct ggg cag agt gga cca egg gga gcc 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 690 695 cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa 2295

Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin 690 695 700 atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt ttaategeca 2349 Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct 2409 ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2469 tgtcagcttt ctattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca tgttctgtcc 2529 taagegteat ettgageett gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2589 aacaatatac tttacagggt gataataatc tccatagtta tttgaagtgg cttgaaaaag 2649 gcaagattga cttttatgac attggataaa atctacaaat cagccctcga gttattcaat 2709 gataactgac aaactaaatt atttccctag aaaggaagat gaaaggagtg gagtgtggtt 2769 tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cagttaaatt ggagcactga acgttcagat 2829 gcataccaaa ttatgcatgg gtcctaatca cacatataag gctggctacc agctttgaca 2889 cagcactgtt catctggcca aacaactgtg gttaaaaaca catgtaaaat gctttttaac 2949 agctgatact gtataagaca aagccaagat gcaaaattag gctttgattg gcactttttg 3009 aaaaatatgc aacaaatatg ggatgtaatc cggatggccg cttctgtact taatgtgaaa 3069 tatttagata cctttttgaa cacttaacag tttctttgag acaatgactt ttgtaaggat 3129 tggtactatc tatcattcct tatgacatgt acattgtctg tcactaatcc ttggattttg 3189 ctgtattgtc acctaaattg gtacaggtac tgatgaaaat ctctagtgga taatcataac 3249 actctcggtc acatgttttt ccttcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309 aaatgcctgc tgctaccacc cttttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369 ttagattgat ttccctgttt cagggaaatc acggacagta gtttcagttc tgatggtata 3429 agcaaaacaa ataaaacgtt tataaaagtt gtatcttgaa acactggtgt tcaacagcta 3489 gcagcttatg tgattcaccc catgccacgt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549 gcaacatttc tctagtactt gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609 ctccgtttct cctggaggca tttatattca gtgataattc cttcccttag atgcataggg 3669 agagtctcta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg acttagcctt atgtactctg 3729 ttggaatttg tgctagcagt ttgagcacta gttctgtgtg cctaggaagt taatgctgct 3789 tattgtctca ttctgacttc atggagaatt aateecacct ttaagcaaag gctactaagt 3849 taatggtatt ttctgtgcag aaattaaatt ttattttcag catttagccc aggaattctt 3909 ccagtaggtg ctcagetatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaac 3969 tggagttttt gctggttttg taacctacca aaatggatag gctgttgaac attccacatt 4029 caaaagtttt gtagggtggt gggaaatggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaat 4089 aaaataagtt cttgactttt ctcatgtgtg gttgtggtac atcatattgg aagggttaac 4149 ctgttacttt ggcaaatgag tatttttttg ctagcacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209 catctgcctg ggatgtacca caaccatatg ttacctgtat cttaggggaa tggataaaat 4269 atttgtggtt tactgggtaa tccctagatg atgtatgctt gcagtcctat ataaaactaa 4329 atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389 ttcacacagt gacctetgaa tcagtttcag agaagggatg ggggagaaaa tgccttctag 4449 gttttgaact tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaatgt gtaaaggtgt tcatagtttg 4509 actgtttcta tgtatgtttt ttcaaagaat tgttcctttt tttgaactat aatttttctt 4569 tttttggtta ttttaccatc acagtttaaa tgtatatctt ttatgtctct actcagacca 4629 tatttttaaa ggggtgcctc attatggggc agagaacttt teaataagtc tcattaagat 4689 ctgaatcttg gttctaagca ttctgtataa tatgtgattg cttgtcctag ctgcagaagg 4749 ccttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gtcacacatg 4809 tcactgtagc ctcttggtgt agcaagctca catacaaaat acttttgtat atgcataata 4869 taaaCcatct catgtggata tgaaacttct tttttaaaae ttaaaaaggt agaatgttat 4929 tgattacctt gattagggca gttttatttc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4989 aaagtttttt ttcaatcatt gtaccttgat attaaaacaa atatccttta agtatttcta 5049 atcagttagc ttctacagtt cttttgtctc cttttatatg cagctcttac gtgggagact 5109 tttccactta aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactgaggt 5169 gatgagttaa caactagttg agcagtcagc ttcctaagtg ttttaggaca tttgttcatt 5229 atattttccg tcatataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa ttcaaaccct 5289 tcattttatg tttaagctcc tgaatctgca ttccacttgg gttgttttta agcattctaa 5349 attttagttg attataagtt agatttcaca gaatcagtat tgcccttgat cttgtccttt 5409 ttatggagtt aacggggagg aagacccctc aggaaaacga aagtaaattg ttaaggctea 5469 tcttcatacc tttttccatt ttgaatccta caaaaatact gcaaaagact agtgaatgtt 5529 taaaattaca ctagattaaa taatatgaaa gtc 5562

<210> 2 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 Ô0

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 160 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin Val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320

Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 . 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn 690 695 700

Thr Gin Gin Val Asn 705

<210> 3 <211> 3553 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0>

<221> CDS <222> (190) .. (2279) <223> <400> 3 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee ace age cac age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tee ggg agt gag geg gee geg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ccg get tet cag cac ccc gca ace ggc ace 327

Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val He Asp 50 55 60 aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ett gat gat tac 423

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag ctg gat 471

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp 80 85 90 gcc gtt tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519

Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gca eta agt caa gat att cag aaa aca 567

Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 903

Set Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta caa gac ett atg gca caa atg 1287

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ett gat cct gee att gta tet gca cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tet gaa 1431

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tec aca agt gag ggg tac aca gca tet caa 1527

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea tec ett cct get geg tet cag cct caa gta ttt cag 1671

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tec atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gee cca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gee agt tat aac eag age ttt tet agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tet cgt gga ggc tcc cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac agt ggt tat aca cag tet 2151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tet ggc tat caa egg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gcc 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca ega ggt aat att ttg tgg tgg tga tcctagctcc taagtggagc 2294

Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 ttctgttctg geettggaag agctgttaat agtctgcatg ttaggaatac atttatcctt 2354 tccagacttg ttgctaggga ttaaatgaaa tgctctgttt ctaaaactta atcttggacc 2414 caaattttaa tttttgaatg atttaatttt ccctgttact atataaactg tcttgaaaac 2474 tagaacatat tctcttctca gaaaaagtgt ttttccaact gaaaattatt tttcaggtcc 2534 taaaacctgc taaatgtttt taggaagtac ttactgaaac atttttgtaa gacatttttg 2594 gaatgagatt gaacatttat ataaatttat tattcctctt tcattttttt gaaacatgcc 2654 tattatattt tagggccaga caccctttaa tggeeggata agccatagtt aacatttaga 2714 gaaccattta gaagtgatag aactaatgga atttgcaatg ccttttggac ctctattagt 2774 gatataaata tcaagttatt tctgactttt aaacaaaact cccaaattcc taacttattg 2834 agetataett aaaaaaaatt acaggtttag agagtttttt gtttttcttt tactgttgga 2894 aaactacttc ccattttggc aggaagttaa cctatttaác aattagaget agcatttcat 2954 gtagtctgaa attctaaatg gttctctgat ttgagggagg ttaaacatca aacaggtttc 3014 ctctattggc cataacatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactttgat 3074 ttgaatacta gtagaaactg gccaggaaaa aggtacattt ttctaaaaat taatggatca 3134 cttgggaatt actgacttga ctagaagtat caaaggatgt ttgcatgtga atgtgggtta 3194 tgttctttcc cáccttgtag catattcgat gaaagttgag ttaactgata gctaaaaatc 3254 tgttttaaca gcatgtaaaa agttatttta tctgttaaaa gtcattatac agttttgaat 3314 gttatgtagt ttctttttaa cagtttaggt aataaggtct gttttcattc tggtgctttt 3374 attaattttg atagtatgat gttacttact actgaaatgt aagctagagt gtacactaga 3434 atgtaagctc catgagagca ggtaccttgt ctgtcttctc tgctgtatct attcccaacg 3434 cttgatgatg gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tatttgttga atgaatgaa 3553

<210> 4 <211> 694 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin He Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin Val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320

Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 66S 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Asn lie Leu Trp Trp 690

<210> 5 <211> 1605 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0>

<221> CDS <222> (46) .. (1392) <223> <400> 5 gtcacaaata acttggagtt tgcaaaagaa ttacagagga gtttc atg gca tta agt 57

Met Ala Leu Ser 1 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 105

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 5 10 15 20 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 153

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu Glu Leu 25 30 35 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 201

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 40 45 50 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 249

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 55 60 65 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 297

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 70 75 80 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tec att cac ctg tgg gac 345

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 85 90 95 100 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 393

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 105 110 115 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 441

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 120 125 ' 130 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 489

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 135 140 145 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag eet gag eca gca 537

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 150 155 160 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 585

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 165 170 175 180 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 633

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 185 190 195 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 681

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 200 205 210 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 729

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 215 220 225 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 777

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg val Gin 230 235 240 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 825

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 245 250 255 260 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tet gca 873

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala 265 270 275 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 921

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 280 285 290 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 969

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 295 300 305 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1017

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Sex Ser Thr Ser Glu 310 315 320 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag 1065

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro’Ser His Ala Thr Glu 325 330 335 340 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1113

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 345 350 - 355 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tet 1161

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 360 365 370 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1209

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Set 375 380 385 gga ate aat gta aat gea get cca ttc eaa tec atg caa aeg gtg tte 1257

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 390 395 400 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1305

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 405 410 415 420 caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1353

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 425 430 435 cct cac caa gta gaa caa aca gag gga tgc ege aaa tga acactcagca 1402

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 440 445 agtgaattaa tctgattcac aggàttatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta 1462 ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg 1522 taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg 1582 gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1605

<210> 6 <211> 448 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 6

Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg 15 10 15

Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr 20 25 30

Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val 35 40 45

Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro He Leu Ser Glu 50 55 60

Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu 65 70 75 80

Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie 85 90 95

His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr 100 105 HO

Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn 115 120 125

Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu 130 135 140

Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu 145 150 155 160

Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr 165 170 175

Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly 180 185 190

Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val 195 200 205

Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu 210 215 220

Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg 225 230 235 240

Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 245 250 255

He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala 260 265 270 lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro 275 280 285

Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro 290 295 300

Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser 305 310 315 320

Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser 325 330 335

His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin 340 345 350

Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu 355 360 365

Pro Ala Ala Ser Girt Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro 370 375 380

Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met 385 390 395 400

Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro 405 410 415

Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser 420 425 430

Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 435 440 445

<210> 7 <211> 4154 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0>

<221> CDS <222> (1) . . (2154) <223> <400> 7 atg ccg teg gee acc age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccc ccg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin

35 40 4S cac ccc geg acc ggc acc ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240

He Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 768

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 816

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Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 912

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008 val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala' Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tet gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 ' 415 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He Asp Gin He Gin Ala Thr He Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tot 1488

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 ' gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 . 540 caa caa aat cag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tee cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tet cgt ggt ggt tee cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tet cag ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr, Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700 aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ; ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2274 gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag 2334 gaaactattt ttattctgca tgttcttcct aagegteate ttgagccttg cacatgatac 2394 tcagattcct cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc 2454 atagttattt gaagtggctt ggaaaaagca agattaaett ctgacattgg ataaaaatca 2514 acaaàteage cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg 2574 agaaggagtg gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt 2634 ggagcactaa acgtttagat gcataccaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg 2694 gctaccagct ttgacacagc actattcatc ctctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca 2754 catgtaaatt gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt 2814 gggctttgat tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc 2874 cgcttctgta cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaac agtttcttct 2934 gacaatgact tttgtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt 2994 cactaatcct cagatcttgc tgtattgtca cctaaattgg tacaggtact gatgaaaata 3054 tctaatggat aatcataaca ctcttggtca catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta 3114 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa 3174 gcaccagtat gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc 3234 agttctgatg gtataagcaa aacaaataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca 3294 ctggtgttca acagctagca gcttatgtgg ttcaccccat gcattgttag tgtttcagat 3354 tttatggtta tctccagcag ctgtttctgt agtacttgca tttatctttt gtctaaccct 3414 aatattctca cggaggcatt tatattcaaa gtggtgatcc cttcacttag acgcataggg 3474 agagtcacaa gtttgatgaa gaggacagtg tagtaattta tatgctgttg gaatttgtgc 3534 tagcagtttg agcactagtt ctgtgtgcct atgaacttaa tgctgcttgt catattccac 3594 tttgacttca tggagaatta atcccatcta ctcagcaaag gctatactaa tactaagtta 3654 atggtatttt ctgtgcagaa attgaatttt gttttattag catttagcta aggaattttt 3714 ccagtaggtg ctcagctact aaagaaaaac aaaaacaaga cacaaaacta ttctcaaaca 3774 ttcattgtta gacaactgga gtttttgctg gttttgtaac ctactaaaat ggataggctg 3834 ttgaacattc cacattcaaa agttttttgt agggtggtgg ggaagggggg gtgtcttcaa 3894 tgtttatttt aaaataaaat aagttcttga cttttctcat gtgtggttgt ggtacatcat 3954 attggaaggg ttatctgttt acttttgcaa atgagtattt ctcttgctag cacctcccgt 4014 tgtgcgcttt aaatgacatc tgcctgggat gtaccacaac catatgttag ctgtatttta 4074 tggggaatag ataaaatatt cgtggtttat tgggtaatcc ctagatgtgt atgcttacaa 4134 tcctatatat aaaactaaat 4154

<210> 8 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 8

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Ksn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 ' 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Ásp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

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Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 3Θ5 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

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Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715

<210> 9 <211> 4939 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2109) <223> <4Ο0> 9 atg ccg teg gee ace age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 qgg qcg gcg ggg gcg gcg ggg gcc ggg gcg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc gcg acc ggc ace ggc get gtc cag ace gag gcc atg aag cag 192

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Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gcc gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336

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Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tee att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leg Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 816

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Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

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Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Pbe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

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Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gee cca ega ggt aat att ttg tgg tgg tga 2109

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 695 700 tcctagctcc taagtggagc ttctgttctg geettggaag agctgttcca tagtetgeat 2169 gtaggttaca tgttaggaat acatttatca ttaccagact tgttgctagg gattaaatga 2229 aatgctctgt ttctaaaact tctcttgaac ccaaatttaa ttttttgaat gactttccct 2289 gttactatat aaattgtctt gaaaactaga acatttctcc tcctcagaaa aagtgttttt 2349 ccaactgcaa attatttttc aggtcctaaa acctgctaaa tgtttttagg aagtacttac 2409 tgaaacattt ttgtaagaca tttttggaat gagattgaac atttatataa atttattatt 2469 attcctcttt catttttgaa catgcatatt atattttagg gtcagaaatc ctttaatggc 2529 caaataagcc atagttacat ttagagaacc atttagaagt gatagaacta actgaaattt 2589 caatgccttt ggatcattaa tagcgatata aatttcaaat tgtttctgac ttttaaataa 2649 aacatccaaa atcctaacta acttcctgaa ctatatttaa aaattacagg tttaaggagt 2709 ttctggtttt ttttctctta ccataggaaa actgtttcct gtttggccag gaagtcaacc 2769 tgtgtaataa ttagaagtag catttcatat gatctgaagt tctaaatggt tctctgattt 2829 aagggaagtt aaattgaata ggtttcctct agttattggc cataacatgt ataaaatgta 2889 tattaaggag gaatacaaag tactttgatt tcaatgctag tagaaactgg ccagcaaaaa 2949 ggtgcatttt atttttaaat taatggatca cttgggaatt actgacttga agtatcaaag 3009 gatatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc tttctcacct tgtagcatat tctatgaaag 3069 ttgagttgac tggtagctaa aaatctgttt taacagcatg taaaaagtta Ctttatctgt 3129 tacaagtcat tatacaattt tgaatgttat gtagtttctt tttaacagtt taggtaacaa 3189 ggtctgtttt tcattctggt gcttttatta attttgatag tatgatgtta cttactactg 3249 aaatgtaagc tagagtgtac actagaatgt aagctccatg agagcaggta ccttgtctgt 3309 cttcactgct gtatctattt ccaacgcctg atgacagtgc ctgacacata gtaggcactc 3369 aataaatact tgttgaatga atgaatgaat gagtactggt ggaatactcc attagctcta 3429 ctcttctttt agctagagaa catgagcaaa tttgcgcatg acaacttcca ggacaggtga 3489 acactgaaga attgacctet taaacctaat aatgtggtga caagctgccc acatgcttct 3549 tgacttcaga tgaaaatctg cttgaaggca aagcaaataa tatttgaaag aaaaaccaaa 3609 tgccattttt gtcttctagg tcgtggaggg cccccaagac ccaacagagg gatgccgcaa 3669 atgaaeactc agcaagtgaa ttaatctgat tcacaggatt atgtttaaac gccaaaaaca 3729 cactggccag tgtaccataa tatgttacca gaagagttat tatctatttg ttctcccttt 3789 caggaaactt attgtaaagg gactgttttc atcccataaa gacaggacta caattgtcag 3849 ctttatatta cctggatatg gaaggaaact atttttattc tgcatgttct tcctaagcgt 3909 catettgagc ctfcgcacatg atactcagat tcctcaccct tgcttaggag taaaacataa 3969 tacactttac agggtgatat ctccatagtt atttgaagtg gcttggaaaa ageaagatta 4029 acttctgaca ttggataaaa atcaacaaat cagccetaga gttattcaaa tggtaattga 4089 caaaaactaa aatatttccc ttcgagaagg agtggaatgt ggtttggcag aacaactgca 4149 tttcacagct tttccggtta aattggagca ctaaacgttt agatgcatac caaattatgc 4209 atgggccctt aatataaaag getggctacc agetttgaca cagcactatt catcctctgg 4269 ccaaacaact gtggttaaac aacacatgta aattgctttt taacagctga tactataata 4329 agacaaagcc aaaatgcaaa aattgggctt tgattggcac tttttgaaaa atatgcaaca -4389 aatatgggat gtaatctgga tggccgcttc tgtacttaat gtgaagtatt tagatacctt 4449 tttgaacact taacagtttc ttctgacaat gacttttgta aggattggta ctatctatca 4509 ttccttataa tgtacattgt ctgtcactaa tcctcagatc ttgctgtatt gtcacctaaa 4569 ttggtacagg tactgatgaa aatatctaat ggataatcat aacactcttg gtcacatgtt 4629 tttcctgcag cctgaaggtt tttaaaagaa aaagatatca aatgcctgct gctaccaccc 4689 ttttaaattg ctatcttttg aaaagcacca gtatgtgttt tagattgatt tccctatttt 4749 agggaaatga cagacagtag tttcagttct gatggtataa gcaaaacaaa taaaacatgt 4809 ttataaaagt tgtatcttga aacactggtg ttcaacagct agcagcttat gtggttcacc 4869 ccatgcattg ttagtgtttc agattttatg gttatctcca gcagctgttt ctgtagtact 4929 tgcatttatc 4939

<210> 10 <211> 702 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 10

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 t =... T ft 1.. Tld Vil ftl .. 71 \7=1 ΟΙίλ ftl ΤΊ Car Λβη Τ'..*- DKe a =.-, 0,= ,- w J >J vaw a * wm V *+V** * Jf J- fc uwfc 245 250 255

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Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn He Leu Trp Trp 690 695 700

<210> 11 <211> 3306 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2040) <223> <4 0 0> 11 atg ccg teg gee acc age etc age gga age ggc age aag teg teg gge 48

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc ace ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag 192

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Atg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 Π0 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 816

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 30S 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 .330 335 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 300 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tet gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1246

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tct aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt get ccc egg gac tac tct ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gga tgc ege aaa tga acactcagca agtgaattaa tctgattcac 2070 Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lys 675 aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag 2130 agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc 2190 cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt 2250 ttattctgca tgttcttcct aagegteate ttgagccttg cacatgatac tcagattcct 2310 cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc atagttattt 2370 gaagtggctt ggaaaaagca agattaaett ctgacattgg ataaaaatca acaaatcagc 2430 cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg agaaggagtg 2490 gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt ggagcactaa 2550 acgtttagat gcataccaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg gctaecagct 2610 ttgacacagc actattcatc ctctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca catgtaaatt 2670 gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt gggctttgat 2730 tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc cgcttctgta 2790 cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaac agtttcttct gacaatgact 2850 tttgtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt cactaatcct 2910 cagatcttgc tgtattgtca cctaaattgg tacaggtact gatgaaaata tetaatggat 2970 aatcataaca ctcttggtca catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta aaagaaaaag 3030 atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgetat cttttgaaaa gcaccagtat 3090 gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc agttctgatg 3150 gtataagcaa aacaaataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca ctggtgttca 3210 acagctagca gcttatgtgg ttcaccccat gcattgttag tgtttcagat tttatggtta 3270 tctccagcag ctgtttctgt agtaettgea tttatc 3306

<210> 12 <211> 679 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 12

Net Pro Ser Ala Thr Set Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 lie Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu

165 170 17S

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Axg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu val val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr He Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lys 67 5

<210> 13 <211> 2281 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2154) <223> <4 0 0> 13 atg ccg teg gee ace age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc ace ggc get gtc cag ace gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag. aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 612

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gcc att gta tet gca 1200

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tec aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tct 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tct I486

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tct agt cag 1680

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tee cgt 1872

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 . 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tct aac act cca aac 1968

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tct ggg cag 2064

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro

690 695 TOO aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154

Asri Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ttaccagaag agttattatc tatttggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2274 tgteage 2281

<210> 14 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 14

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Lçy Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Glv lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 <210> 15 <211> 3386 <212> ADN <213> Bos taurus <22 0>

<221> CDS <222> (82) . . (2208) <223> <4 0 0> 15 cgcgtctcgc cccgtccace gattgactcg ccgctcttgt ccttcctccc gctctttctt 60 ctctcccctt acggtttcaa g atg cct teg gee acc age cac age gga age 111

Mat Pro Ser Ala Thi Ser His Ser Gly Ser 15 10 ggc age aag teg tee gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tee ggg aat 159

Gly Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Asn 15 20 25 gag geg ggg gee ggg gee gee geg ccg get tee caa cac ccc atg acc 207

Glu Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr 30 35 40 ggc acc ggg get gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggg gtg 255

Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val 45 50 55 ate gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggc aag ett gat 303 lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp 60 65 70 gat tat cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag 351

Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin 75 80 85 90 ctg gat gee gtg tet aag tac cag gaa gtc aca aat aac ttg gag ttt 399

Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe 95 100 105 gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta age caa gat att cag 447

Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin 110 115 120 aaa aca ata aag aag aca gca cgt egg gag cag ett atg aga gag gaa 495

Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu 125 130 135 get gaa cag aaa cgt tta aaa aca gta ett gag ctg cag tat gtt ttg 543

Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu 140 145 150 gac aaa eta gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg aag caa ggt ttg 591

Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu 155 160 165 170 aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gag gag ttg teg ttg tta gat gag 639

Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu 175 , 180 185 ttc tac aaa tta gca gac cct gaa ega gac atg age ttg agg ttg aat 687

Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn 190 195 200 gag cag tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ttg ctg gaa gga 735

Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly 205 210 215 aag gaa aaa cct gta tgt gga aca act tat aaa get eta aag gaa att 783

Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie 220 225 230 gtt gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac 831

Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His 235 240 245 250 cag aat ggt ctg tgt gag gaa gag gag gca gee tea gca cct aca gtt 879

Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val 255 260 265 gaa gac cag gca get gaa get gaa cct gag cca gtg gaa gaa tat act 927

Glu Asp Gin Ala Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr 270 275 280 gaa caa aat gag gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga caa ttt atg 975

Glu Gin Asn Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met 285 290 295 gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag gta gat gat tgg 1023

Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp 300 305 310 aca gtt gaa aca gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag 1071

Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin 315 320 325 330 get gca tet cct tea gta cca gaa ccc cac tet ttg acc cca gtg get 1119

Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala 335 340 345 caa gcc gat ccc etc gtg aga aga cag ega gta cag gac ett atg gca 1167

Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala 350 355 360 caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt 1215

Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe 365 370 375 gaa aac cag aca ett gat cct gee att gta tet gca cag ccg atg aat 1263

Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn 380 385 390 cca gca cag aac atg gac ata ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat 1311

Pro Ala Gin Asn Met Asp lie Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His 395 400 405 410 tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt tet gta cag cca gaa 1359

Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Fro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu 415 420 425 get aca cag gtt cct ttg gtt tea tec aca agt gag gga tat aca gca 1407

Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala 430 435 440 tet caa ccc ttg tac caa cct tet cat get act gac caa ega cca caa 1455

Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin 445 450 455 aag gaa ccg att gat cag att cag geg aeg ate tet tta aat aca gac 1503

Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp 460 465 470 cag act aca gca tea tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg 1551

Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val 475 480 485 490 ttc cag get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta 1599

Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val 495 500 505 aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gta ttc aat atg aat gee 1647

Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala 510 515 520 cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag 1695

Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin 525 530 535 tac cag gee agt tac aac cag age ttt tee agt cag cct cac caa gta 1743

Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val 540 545 550 gaa caa aca gag ett cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act 1791

Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr 555 560 565 570 tat cat ggt tet cag gac cag ccc cat caa gtg act ggt aac cac cag 1839

Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin 575 580 585 cag cct cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat 1887

Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr 590 595 600 tac aac agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggt tcc cgt ggt get aga ggc 1935

Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly 605 610 615 ttg atg aat gga tac aga gga cct get aat gga ttc aga gga gga tat 1983

Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr 620 625 630 gat ggt tac ege cct tea ttc tct act aac act oca aac agt ggt tat 2031

Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 635 640 645 650 aca caa tct caa ttc agt get ccc egg gac tac tct ggc tat cag egg 2079

Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 655 660 665 gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tct ggg cag agt gga cca 2127

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 670 675 6S0 egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg 2175

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 685 690 695 atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt 2228

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 700 705 ttaatcgcca aaaacaçact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc 2288 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2348 ggactacaat tgtcagcttt atattaectg gatatggaag gaaactattt ttactctgca 2408 tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc 2468 ttaggagtaa aacataatat actttaatgg ggtgatatct ccatagttat ttgaagtggc 2528 ttggataaag caagactgac ttctgacatt ggataaaatc tacaaatcag ccctagagtc 2588 attcagtggt aactgacaaa actaaaatat ttcccttgaa aggaagatgg aaggagtgga 2648 gtgtggtttg gcagaacaac tgcatttcac agcttttcca cttaaattgg agcactgaac 2708 atttagatgc ataccgaatt atgcatgggc cctaatcaca cagacaaggc tggtgccagc 2763 ettaggettg acacggcagt gttcaccctc tggccagacg actgtggttc aagacacatg 2828 taaattgctt tttaacagct gatactgtat aagacaaagc caaaatgcaa aattaggett 2888 tgattggcac ttttcgaaaa atatgcaaca attaagggat ataatctgga tggccgcttc 2948 tgtacttaat gtgaaatatt tagatacctt tcaaacactt aacagtttct ttgacaatga 3008 gttttgtaag gattggtagt aaatatcatt ccttatgaeg tacattgtct gtcactaatc 3068 ettggatett gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa tetaatggat 3128 aatcataaca ctcttggtta catgtttttc ctgcagcctg aaagttttta taagaaaaag 3188 acatcaaatg cctgctgctg ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa gcaccagtat 3248 gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacagt cagtagtttc acttctgatg 3308 gtataagcaa acaaataaaa catgtttata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3368 aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3386 <210> 16 <211> 708 <212> PRT <213> Bos taurus <4 0 0> 16

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Asn Glu Ala Gly Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Ala Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Vai Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Asn Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Asp Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Ile Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro He Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro val Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyx Gin Ala Ser Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser 645 650 655

Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn 660 665 670

Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly 675 680 685

Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr 690 695 700

Gin Gin Val Asn 705

<210> 17 <211> 3150 <212> ADN <213> Equus caballus <22 0>

<221> CDS <222> (1) . . (1917) <223> <4 0 0> 17 atg gag ggc aag etc gat gat tac caa gag ega atg aac aaa gga gaa 48

Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 15 10 15 agg ett aat cag gat cag ctg gat get gtg tet aag tac cag gaa gtc 96

Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu val 20 25 30 aca aat aac ttg gag ttt geg aaa gaa ttg cag agg agt ttc atg geg 144

Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 35 40 45 ttg agt cag gat att cag aaa aca ata aag aag aeg gca cgt egg gag 192

Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60 cag ett atg aga gaa gaa get gaa cag aaa cgt tta aaa act gta ett 240

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu 65 70 75 80 gag ctg cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gaa gaa gtg ega act 288

Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr 85 90 95 gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga gtg cca ata etc tet gaa gaa gag 336

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110 ttg teg ctg ttg gat gag ttc tac aag tta gca gac cct gta egg gac 384

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Val Arg Asp 115 120 125 atg age ttg agg ttg aat gag cag tat gag cat gee tee att cac ctg 432

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala ser He His Leu 130 135 140 tgg gac ttg ctg gaa ggg aag gaa aaa tct gtc tgt gga aca acc tat 480

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160 aaa get ctg agg gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tcc aac tac ttt 528

Lys Ala Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Fhe 165 170 175 gac age acc cac aac cac cag aat ggg etc tgt gag gag gaa gag get 576

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 180 185 190 acc tea get cca aca get gaa gac cag gga get gaa get gaa cct gag 624

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205 cca gca gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat 672

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220 gta aat aga cag ttt atg gca gaa geg cag ttc agt ggt gag aag gag 720

Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240 cag gtg gat gag tgg aca gtc gag aeg gtc gag gtg gta aat tea etc 768

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 245 250 255 cag cag caa cct cag get gca tct cct tea gta ccg gag ccc cac tct 816

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser 260 265 270 ttg act cca gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta 864

Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg val 275 280 285 cag gac ett atg geg caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat 912

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp 290 295 300 tea atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ett gat cct gee att gta tct 960

Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser 305 310 315 320 gca cag cct atg aat cca gca cag aat atg gac atg ccc cag ctg gtt 1008

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val 325 330 335 tgc cct cca gtt cat get gaa tct aga ett get caa cct aat caa gtt 1056

Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 340 345 350 cct gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tec aca agt 1104

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365 gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag cct tct cat get aca 1152

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380 gag caa ega ccg caa aag gaa ccg act gac cag ate cag gca aca ate 1200

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 395 400 tct tta aat aca gac cag act aca gca tea tea tee ett cct get get 1248

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415 tct cag cct cag gtg ttc cag get ggg aca age aaa cct tta cac age 1296

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430 agt ggg ate aat gta aat gca geg cca ttc cag tee atg caa aeg gtg 1344

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445 ttc aac atg aat gee cog gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta 1392

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460 aaa cag caa aat cag tac cag gee age tat aac cag age ttt tee agt 1440

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480 ccg cct cac caa gta gag cag aca gag ett ccg caa gag cag ett cag 1488

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495 aeg gtg gtt ggt act tac cat get tee caa gac cag ccc cat caa gtg 1536

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Ala Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val 500 505 510 acc ggt aac cac cag cag cct ccc cag cag aac act ggg ttt cca cgt 1584

Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 515 520 525 age agt cag ccc tat tac aac agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tee 1632

Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540 cgt ggt get aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga 1680

Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 545 550 555 560 ttc aga gga gga tat gat ggt tac ege cct teg ttc tct aac act cca 1728

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575 aac age ggt tac aca cag tct cag ttc agt get ccc egg gac tac tct 1776

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 580 585 590 ggc tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tct ggg 1824

Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 595 600 605 cag agt gga ccc egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 1872

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620 ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 1917

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 625 630 635 tctgattcac aggdttatct ttaatcgcca aaacacactg gccagtgtac cataatatgt 1977 taccagaaga gttattatct atttgttctc cctttcagga aacttattgt aaagggactg 2037 ttttcatccc ataaagacag gactacagtt gtcagcttta tattacctgg atatggaagg 2097 aaactatttt tactctgcat gttctgtcct aagcgtcatc ttgagccttg cacatgatac 2157 tcagattcct ttcccttgct taggagtaaa acataatata ctttatgggg tgataatatc 2217 tccatagtta tttgaagtgg cttggaaaaa gcaagattga cttttgacat tggataaaat 2277 ctacaaatca geeetagagt ttcatggtca ttcacaaaac taaaatattt cccttgaaag 2337 gaagatggaa ggactggagt gtggtttggc agaacaactg catttcacag cttttcctat 2397 taaattggag cactgaatgt taaatgcata ccaaattatg catgggccct taatcacaca 2457 tacatggcta ccagctttga cacagcacta ttcatcctct ggccaaacga ctgtggttaa 2517 aaacacgtgt aaattgcttt ttaacagctg atactgtaaa agacaaagct aaaatgcaaa 2577 attaggcttt cattggcact tttcgaaaaa tatgcaacaa atttgggatg taatctggat 2637 ggccacttct gtacttaatg tgaagtattt agataccttt ttgaacactt aacagtttct 2697 tcgacaatga cttttgtaag gattggtagt atatatcatt ccttatgaca tacattgtct 2757 gttgctaatc cttggatctt gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa 2817 tctctcatgg ataaacctaa cactcttcgt cacatgtttt tcctgcagcc tgaaggtttt 2877 taaaaggaaa agatatcaaa tgcctgctgc taccaccctt ttaaattgct atcttttgaa 2937 aagcaccagt atgtgttttt agattgattt ccctatttta gggaaatgac agtcagtagt 2997 ttcagttctg atggtataag caaagcaaat aaaacgtgtt tataaaagtt gtatcttgaa 3057 acactggtgt tcaacagcta gcagcttctg tggttcaccc cctgccttgt tagtgttacc 3117 catttatggt tatctccagc agcaatttct eta 3150

<210> 18 <211> 638 <212> PRT <213> Equus caballus <4 0 0> 18

Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 15 10 15

Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val 20 25 30

Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 35 40 45

Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu 65 70' 75 80

Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr 85 90 95

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Val Arg Asp 115 120 125

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 130 135 140

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160

Lys Ala Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175

Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 180 185 190

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220

Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 245 250 255

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser 260 265 270

Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 275 280 285

Gin Asp Leu Met Als. Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp 290 295 300

Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 305 310 315 320

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val 325 330 335

Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 340 345 350

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin He Gin Ala Thr He 365 390 39S 400

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430

Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480

Pro Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Ala Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val 500 505 510

Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 515 520 525

Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540

Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 545 550 555 560

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 500 585 590

Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 595 600 605

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 625 630 635

<210> 19 <211> 6181 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (179) . . (2302) <223> <4 0 0> 19 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagegcacg tctctgttct eaaegeagca 120 ccacccttgc ceccctcggc tgcccactee agaegtccag cggctccgcg cgcgcacg 178 atg ccc teg gee acc age cac age gga age gge age aaa teg teg gga 226

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag geg geg gee ggg gca 274

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get geg ccg get tet cag cat ccg gca acc gge acc gge gee gtc cag 322

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala val Gin 35 40 45 acc gag gee atg aag cag att etc gge gta ate gac aag aaa ett egg 370

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60 aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat tac cag gaa cga atg 418

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80 aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg gat gcc gta tet aag 466

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala val Ser Lys 85 90 95 tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110 agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125 gca cgt egg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gcc 802

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850

Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220 gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240 tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag gac cag gta get gaa 994

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270 get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285 tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc age 1090

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Tht Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get geg tee cct tea gtc 1186

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag tea gat cca ett gtg 1234

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350 aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa atg caa ggg ccc tat 1282

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365 aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa aat cag aeg ett gat 1330

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ett gee 1426

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415 caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee aca cag gtt cct ttg 1474

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430 gtt tea tee aca agt gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag 1522

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445 cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tee tea 1618 lie Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tee ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc cag get ggg aca agt 1666

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Set 485 490 495 aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat gca get cca ttc cag 1714

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510 tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat 1762

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac cag gee act tat aac 1810

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540 cag agt ttt tee agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ett caa 1858

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Tbr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575 cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac 1954

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590 act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta 2002

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605 tet ega gga ggg tet cgt ggt gcc aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620 ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea 2098

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640 ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag tet cag ttc act get 2146

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc 2194

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt cgt 2242

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685 gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag 2290

Gly Gly Pro Pro Arg Fro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700 caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact 2342

Gin Val Asn 705 ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg 2402 aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt 2462 acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagegteat 2522 ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat 2582 tatataetta tggggtgata atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg 2642 caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt 2702 aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta 2762 gcaaaactgc atttcatagc tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac 2822 caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca 2882 ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tctttagtag 2942 tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa 3002 atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat 3062 ttagatacct ttggaacact taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc 3122 ctgtttgtca ttcctcaeea taattgcatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat 3182 tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca 3242 cttttggtca catgttttct cctgeagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg 3302 cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga 3362 "ttcatttccc tgttttaggg aaatgaeagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa 3422 taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa 3482 agtaattcaa cccatgcatt gctagtgtca cagectttgg ttatgtctag tagctgtttc 3542 tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctttcctc 3602 aaggagacac ttatgttcaa agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag 3662 tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta 3722 gcagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc cattccattt 3782 tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg 3842 tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg 3902 gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttoatcatta gacaactgga gtttttgctg 3962 gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta 4022 gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg 4082 acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc 4142 aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac 4202 cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat 4262 aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa 4322 ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca 4382 cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac 4442 ttgtttattt tttaagttgc ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct 4502 accattgeag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc 4562 actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc 4622 ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta 4682 ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa 4742 aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccccccc 4 802 ctcccccagg tagcatgcca ttgatgaett tttgcttagg gccattttat taccagggcc 4862 ttaatattec taaaaagatg attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatet 4922 tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt 4982 ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca 5042 tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga 5102 atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac 5162 ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc 5222 tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta 5282 acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa 5342 acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag 5402 caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga 5462 agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact 5522 gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc 5582 gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta 5642 tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga 5702 aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag 5762 tggtgaaaaa attecccctc aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca 5822 tggtteaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact 5882 tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag 5942 agtcaagaga cctgtattcc agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct 6002 ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaaC atttggaagc 6062 tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag 6122 tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaas aaaaaaaaa 6181

<210> 20 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr 115 120 .125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 265

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe He Gin Asp Ser Met. Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

Gin Val Asn 705

<210> 21 <211> 6141 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) . . (2262) <223> <400> 21 eccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gee ace age cac age gga age ggc 171

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ccg get tet cag cat ccg gca ace ggc 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 aec ggc gee gtc cag ace gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie 45 50 55 gac aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa ega atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu $0 65 90 ÇJaC ÇjCC Çjiâ tCt cleCf tclC CêLy ÇfôS ÇtC SiCct aât clcsl. tty yây ttt yCe 453

Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt cgg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555

Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 160 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gee tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa. 795

Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag 939

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag 987

Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu 270 275 280 caa agt gag gtt gaa tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get 1131

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cct tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cct 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 385 390 395 acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser 400 405 410 gaa tet aga ett gee caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee 1419

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag ggg tat aca gca tet 1467

Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser 430 435 440 cag ccc ttg tac cag cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa 1515

Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tcc tea tcc ett cct get get tct cag cct caa gtg ttc 1611

Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe 490 485 490 cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca ttc cag tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa 1803

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ett caa caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac 1851

Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr 560 565 570 cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899

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Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp 620 625 630 635 ggt tac ege cct tea ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag 2091

Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin 640 645 650 tct cag ttc act get ccc egg gac tac tct ggt tac cag egg gat gga 2139

Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly 655 660 665 tat cag cag aat ttc aag ega ggc tct ggg cag agt gga cca egg gga 2187

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg 2235

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

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Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

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Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro He Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 ' 185 190

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Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

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Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

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Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

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Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

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Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

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<210> 23 <211> 6114 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) . . (2235) <223> <400> 23 cccaccgege gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gcc acc age cac age gga age ggc 171

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Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gcc tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

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Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin 560 565 570 gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca 1899

Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro 575 580 585 cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta tct ega gga ggg 1947

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Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr 640 645 650 tct ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tct 2139

Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser 655 660 665 ggg cag agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca 2187

Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro 670 675 680 aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2235

Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 685 690 695 tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2295 ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2355 gttttcatcc cataaagaca ggactgeaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag 2415 gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata 2475 caatactcag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata 2535 atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct 2595 tggataaaat ctacaateag ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat 2655 tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatagc 2715 tttççcatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt 2775 actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa 2Θ35 acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tetttagtag tggatactgt gtaagacaaa 2895 gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa atatgeatea aatatggggg 2955 ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact 3015 taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcctcacca 3075 taattgeatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata 3135 ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct 3195 cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaecctttt 3255 aaattgetat ctttagaaaa gcaeeggtat gtgttttaga ttcattteee tgttttaggg 3315 aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag 3375 ttgtatettg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgcatt 3435 gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt tcatttatct 3495 tttgtcaaat ttaaeectgt ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa 3555 agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag 3615 cagtgactta gccatatgtt etgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct 3675 gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc cattccattt tatgtcatgg agaaataatt 3735 ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact 3795 tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg gtatcagcta ctcaaaacaa 3855 ttctcagata ttcatc.atta gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac 3915 tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa 3975 gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta 4035 tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc 4095 tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt 4155 attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat aatecctaga tggtgtgtta 4215 cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt 4275 attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa 4335 agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc 4395 ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct accattgcag ttctagtgag 4455 ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa 4515 agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct 4575 tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa 4635 ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa 4695 ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgcccccec ctcccccagg tagcatgcca 4755

I ttgatgactt tttgettagg gccattttat taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg 4815 attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct 4875 tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatat 4935 atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt 4995 cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat 5055 atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt 5115 agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac 5175 ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc 5235 tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat 5295 ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata 5355 caecctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg 5415 tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt 5475 gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag 5535 tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa 5595 tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatttggg 5655 tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccctc 5715 aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa 5775 tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataattcagc 5835 tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc 5895 agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag 5955 ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg 6015 tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg 6075 ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6114

<210> 24 <211> 698 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr Xle Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Vai Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Asp 180 185 190 t“i_« t —». t Λ1 .. z'·' 1 m * w υΐ « A 1 · nu vjj.u niy Λώ>ρ Lutsi» gcl u«u λιy ii«u λ^ιι *jiu v7j.11 j-^j. vj.u n_Lo ni& 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ser Asp Pro Leu Vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe He Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met 370 375 380

Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val 385 390 395 400

His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro 405 410 415

Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr 420 425 430

Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro 435 440 445

Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr 450 455 460

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Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn 485 490 495

Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn 500 505 510

Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser 515 520 525

Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin 530 535 540

Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly 545 550 555 560

Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His 565 570 575

Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro 580 585 590

Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg 595 600 605

Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly 610 615 620

Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 625 630 635 640

Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 645 650 655

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 660 665 670

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 675 680 685

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 690 695

<210> 25 <211> 3548 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (179) .. (2257) <223> <400> 25 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc ccecctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcaeg 178 atg ccc teg gee aec age cac age gga age ggc age aaa teg teg gga 226

Met Pro Sat Ala Tht Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag geg geg gee ggg gca 274

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get geg ccg get tet cag cat ccg gca ace ggc ace ggc gee gtc cag 322

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45 acc gag gcc atg aag cag átt etc ggc gta ate gac aag aaa ett egg 370

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Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125 gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro He Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

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Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 . 235 240 tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get geg tee cct tea gtc 1186

Val Val Asri Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag tea gat cca ett gtg 1234

Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 ' 440 445 cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 45S 460 att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tee tea 1618

He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tee ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc cag get ggg aca agt 1666

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495 aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat gca get cca ttc cag 1714

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510 tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat 1762

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac cag gee act tat aac 1810

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540 cag agt ttt tec agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ett caa 1858

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605 tet ega gga ggg tet cgt ggt gee aça ggc ttg atg aat gga tac agg 2050

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gcc cca ega ggt aat 2242

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc ttctgttctg geettggaag 2297 He Leu Trp Trp 690 aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata catttatctt ttccagactt 2357 gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt catcttgaat ccaaatttta 2417 atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag aacattttct ctgcctcaga 2477 aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt teaggtetta aaacctgcta aatgttttta 2537 ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa egagettgaa catttatata 2597 aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat atttaggctg agaagccctt 2657 caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat ttagaattga cataactaat 2717 ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa ataccaacat atttctgatg 2777 tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat taaaatttag aatgacaagc 2B37 ttaagaggct ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa aataatttct tacatgggca 2897 gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg taatctgatg ttctaaatgg 2957 ttctcttatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca gtttttggct ggccatgaca 3017 tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt aatttgaatg etagtggcaa 3077 ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg gtcatctggg aaaaatactg 3137 aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc ttctatccca c'cttgtagca 3197 tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct gtttcaacag catgtaaaaa 3257 gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg ttctgtagtt tctttttaac 3317 agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt attaattttg atagtatgat 3377 gtcacttcct attgaaatgt sagctagcgt gtaccttaga atgtgagctc catgagagca 3437 ggtaccttgt ttgtettcac tgctgtatct attcccaacg cctcatgaca gtgcctggca 3497 catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa aaaaaaaaaa a 3548

<210> 26 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin Hi? Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

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Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

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Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 2Θ0 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

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Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

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Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

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Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

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Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 lie Leu Trp Trp 690

<210> 27 <211> 3508 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) .. (2217) <223> <400> 27 cccacegcgc gcgegcgtag cegcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc teg gcc acc age cac age gga age ggc 171

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 1 5 10 age aaa teg teg gga ccg ccg ccg ccg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

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Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa cga atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu SO 85 90 gat gec gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 , 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat 603

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Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 385 390 395 ace cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tee tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc 1611

Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe 480 485 430 cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca ttc cag tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac cag agt ttt tee agt cag cct cac caa gtg gaa 1803

Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr 590 595 600 aac agt cgt ggg gta tet ega gga ggg tet cgt ggt gee aga ggc ttg 1995

Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu 605 610 615 atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043

Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin 640 645 650 tet cag ttc act get ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga 2139

Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly 655 660 665 tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga 2187

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee cca ega ggt aat ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc 2237

Ala Pro Arg Gly Asn He Leu Trp Trp 685 690 ttctgttctg geettggaag aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata 2297 catttatctt ttccagactt gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt 2357 catcttgaat ccaaatttta atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag 2417 aacattttct ctgcctcaga aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt teaggtetta 2477 aaacctgcta aatgttttta ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa 2537 egagettgaa catttatata aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat 2S97 atttaggctg agaagecctt caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat 2657 ttagaattga cataactaat ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa 2717 ataccaacat atttctgatg tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat 2777 taaaatttag aatgacaagc ttaagagget ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa 2837 aataatttct tacatgggca gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg 2897 taatctgatg ttctaaatgg ttetettatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca 2957 gtttttggct ggccatgaca tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt 3017 aatttgaatg ctagtggcaa ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg 3077 gtcatctggg aaaaàtactg aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc 3137 ttctatccca ccttgtagca tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct 3197 gtttcaacag catgtaaaaa gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg 3257 ttctgtagtt tctttttaac agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt 3317 attaattttg atagtatgat gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga 3377 atgtgagctc catgagagca ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg 3437 cctcatgaca gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa 3497 aaaaaaaaaa a 3508

<210> 28 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly IS 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr '115 / 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 115

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280' 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Fro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Fro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 , 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser'Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685

Ile Leu Trp Trp 690

<210> 29 <211> 2109 <212> ADN <213> Gallus gallus <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2109) <223> <400> 29 atg ccc teg get acc aac ggc acc atg geg age age age ggg aag geg 48

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 1 5 10 15 ggc ccg ggc ggc aac gag cag gee ecg geg geg gca geg geg gee ccg 96

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30 cag geg teg ggc ggc age ate acc teg gtt cag acc gag gee atg aag 144

Gin Ala Ser Gly Gly Ser lie Thr Ser Val Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45 cag ate ttg gga gtg ate gac aaa aag etc ege aac etc gag aag aaa 192

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60 aag age aaa ett gac gat tac cag gaa ega atg aac aag ggg gaa cgt 240

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 eta aat caa gat caa ctg gat gca gtg tea aaa tac cag gaa gtg aca 288

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95 aat aac ctg gaa ttc get aaa gaa ctg cag agg age ttt atg gca ctg 336

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110 age caa gat ate cag aaa aca ata aaa aag aeg get ege agg gag cag 384

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125 ctg atg aga gaa gag get gag cag aag cgt tta aag act gtg eta gag 432

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu 130 135 140 ctg cag ttc att ttg gac aag ttg ggt gac gat gaa gtg ege agt gac 480

Leu Gin Phe lie Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 160 ttg aaa caa gga tea aat gga gta ccg gta ctg aca gag gag gaa ctg 528

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175 aca atg ctg gat gaa ttt tac aag eta gtt tac cct gaa agg gac atg 576

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190 aac atg agg ttg aat gag cag tat gag caa gca tet gtt cac ctg tgg 624

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Val His Leu Trp 195 200 205 gac tta ctg gaa ggg aag gaa aaa ccc gtt tgt gga aca acc tat aaa 672

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220 gcc ctg aag gag gtt gtt gaa cgt att ett caa act agt tac ttt gat 720

Ala Leu Lys Glu Val Val Glu Arg lie Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240 age acc cat aac cat cag aac ggg tta tgt gag gaa gaa gag gca gca 768

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255 ccc aca cct gca gta gaa gac act gta gca gaa get gag cct gat cca 816

Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270 gca gaa gaa ttt act gaa cct act gaa gtt gaa teg act gag tat gta 864

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 280 285 aac aga caa ttc atg gca gag act cag ttc age agt agt gag aag gaa 912

Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 290 295 300 cag gta gat gag tgg aca gtt gaa aeg gtt gag gtt gta aat tea ctg 960

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320 cag caa caa aca caa get aca tet cct cca gtt cct gaa cct cat aca 1008

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335 etc act act gtg get caa gca gat cct ett gtt aga aga cag aga gta 1056

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350 cag gac ett atg gcc cag atg cag ggt cca tat aac ttc atg cag gac 1104

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365 tct atg ctg gag ttt gag aac cag aca ctt gat cct gcc att gta tct 1152

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Tbr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 370 375 380 gca cag ccc atg aat cca gca cag aat ttg gac atg ccg caa atg gtc 1200

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400 tgc cct cca gtt cat act gag tea aga ctt gcc cag cct aat caa gtt 1248

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 410 415 cct gtg caa cca gaa get aeg cag gtt ccc ttg gtt tea tct aca agt 1296

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430 gag gga tat aca gcc tcc cag ccc atg tat cag cct tct cat acc aca 1344

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445 gag caa egg cca cag aag gaa tcc att gac cag att cag get tea atg 1392

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser He Asp Gin lie Gin Ala Ser Met 450 455 460 tea ctg aat gca gac cag acc ccg tea tea tea tea ctt ccc act gca 1440

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480 tcc cag ccg caa gtt ttc caa get gga tct age aaa cct ttg cat age 1488

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 485 490 495 age gga ate aat gtt aat gca get cca ttc caa tcc atg caa aca gta 1536

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510 ttc aac atg aat gca cct gtt cct cct gtt aat gag cca gaa gcc ctt 1584

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525 aag caa caa aat cag tac cag gcc agt tac aac cag agt ttc tcc aat 1632

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540 cag cca cac caa gta gaa caa tea gat ctt cag caa gaa cag etc cag 1680

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560 aca gtg gtt ggt act tac cat ggt tct ccg gac cag acc cat caa gtg 1728

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575 gca gga aac cac cag caa cct ccc cag cag aat act gga ttt cca ege 1776

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590 aac agt cag cct tat tac aac agt egg gga gtg tct cgt ggt gga tea 1824

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605 cgt ggg act cgt gga ttg atg aat ggt tac agg gga cct gca aat gga 1872

Arg Gly Thr Arg GXy Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620 ttt aga gga gga tat gat ggc tac cgt cct tea ttt tee aac act ccg 1920

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640 aac agt ggt tac aeg cag ccc caa ttt aat get cct ega gat tat tea 1968

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655 aac tac cag egg gat gga tat cag cag aac ttc aaa cgt ggt tet gga 2016

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670 caa agt ggg cct egg gga get cct ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 2064

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 635 680 685 cca aac aga ggg atg cct caa atg aac get cag caa gtg aat taa 2109

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700

<210> 30 <211> 702 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 30

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 1 S 10 15

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30

Gin Ala Ser Gly Gly Ser He Thr Ser val Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr 85 90 95

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu 130 135 140

Leu Gin Phe lie Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 160

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Val His Leu Trp 195 200 205

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220

Ala Leu Lys Glu Val Val Glu Arg lie Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255

Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 280 285

Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 290 295 300

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 305 310 315 320

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser 370 375 380

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Val 305 390 395 400

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 410 415

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser Ile Asp Gin lie Gin Ala Ser Met 450 455 460

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 485 490 495

Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 565 590

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700 <210> 31 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador T3 <400> 31 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> 32 <211> 19 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador T7 <400> 32 taatacgact cactatagg 19 <210> 33 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 33 aaggtttgaa tggagtgc 18 <210> 34 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 34 tgctcctttt caccactg 18 <210> 35 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador GAPDH <400> 35 gggctgcttt taactctg 18 <210> 36 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador GAPDH <400> 36 ccaggaaatg agcttgac 18 <210> 37 <211> 27 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 37 catatggcat taagtcaaga tattcag 27 <210> 38 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 38 ggtacctttg cggcatccct ctg 23 <210> 39 <211> 21 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 39 catatgccgt cggccaccag c 21 <210> 40 <211> 22 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 40 ggtaccattc acttgctgag tg 22 <210> 41 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 41 gagctcatgc cctcggccac cag 23 <210> 42 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 42 ctcgagttaa ttcacttgct gag 23

<210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43

Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie 15 10

<210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie 1 5

<210> 45 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val 1 5 10

<210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu 15 10

<210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47

Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 15 10

<210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 1 5

<210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 49

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 1 5

<210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50

Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 15 10

<210> 51 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51

Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val 1 5

<210> 52 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52

Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val 15 10 <210> 53 <211> 9

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53

Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr 1 5

<210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met 1 5

<210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55

Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu 15 10

<211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56

Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 15 10

<210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 1 5

<210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58

Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met 1 5

<210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59

Phe Met Ala Glu Thr Gin phe Thr Ser 1 5

<210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 0

Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val 1 5

<210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val 15 10

<210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62

Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val 1 5

<210> 63 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63

Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 1 5

<210> 64 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 15 10

<210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val 1 5

<210> 66 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 6

Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 1 5 10

<210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67

Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 1 5

<210> 68 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 15 10

<210> 69 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 9

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val 15 10

<210> 70 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val 1 5

<210> 71 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <4Ο0> 71

Gln‘Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val 15 10

<210> 72 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72

Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 1 5

<210> 73 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73

Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp 15 10

<210> 74 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74

Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser 15 10 <210> 75

<211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 1 5

<210> 76 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76

Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe 15 10

<210> 77 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77

Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Met His Glu 15 10

<210> 78 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 78

Pro Arg Ala Ser Leu Gly Val Ser Glu Thr Leu Leu Cys Thr Ser Gly 1 5 10 .15

Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly 20 25 30

Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe lie Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr 35 40 45

Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 50 55 60

Asp Asn Ser Gin Ser lie Leu Tyr Leu Gin Met Asn Thr Leu Arg Ala 65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Asn Trp Ala Phe Asp 85 90 95

Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys 100 105

<210> 79 <211> 94 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 79

Ser Gly Asp Arg Vai Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Ile Ser 15 10 15

Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu 20 25 30

Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Ile Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe 35 40 45

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Vai 50 55 60

Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp 65 70 75 80

Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gin 85 90 <210> 80 <211> 24 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 80 atgccctcgg ccaccagcca cage 24 <210> 81 <211> 24 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> iniciador <400> 81 ttaattcact tgctgagtgt teat 24

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 5698396 A [0003] • US 20080075722 A [0006] • WO 2005100998 A [0006] • WO 2008088583 A [0007] • WO 2005116051 A [0007] • WO 0208307 A [0007] • WO 9633739 PCT [0050] • JP 2008202065 A [0124] [0126]

Documentos de não patente citados na descrição • TSUYOSHI AKIYOSHI. Gan to Kagaku Ryouhou. Cancer and Chemotherapy Publishers Inc, 1997, vol. 24, 551-519 [0002] • BRUGGEN P. et al. Science, vol. 254, 1643-1647 [0003] • Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1995, vol. 92, 11810-11813 [0003] • Int. J. Cancer, 1997, vol. 72, 965-971 [0003] • Cancer Res., 1998, vol. 58, 1034-1041 [0003] • Int. J. Cancer, 1998, vol. 29, 652-658 [0003] • Int. J. Oncol., 1999, vol. 14, 703-708 [0003] • Cancer Res., 1996, vol. 56, 4766-4772 [0003] • Hum. Mol. Genet., 1997, vol. 6, 33-39 [0003] • J. Biol. Chem., 1995, vol. 270, 20717-20723 [0005] [0006] • J. Immunol., 2004, vol. 172, 2389-2400 [0005] [0006] • Int. J. Cancer, 1994, vol. 58, 317 [0022] • KARLIN ; ALTSCHUL. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, vol. 87, 2264-2268 [0030] • ALTSCHUL et al. Nucleic Acids Res., 1997, vol. 25, 3389- 3402 [0030] • Seikagaku Jikken Kouza. Tanpakrushitsu no Kagaku. 1981 [0033] • Current Protocols in Molecular Biology. SAMBROOK et al. Molecular Cloning. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, vol. 2 [0033] • A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. AUSUBEL et al. Short Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 1995, vol. 3 [0033] [0034] • SAMBROOK et al. Current Protocols in Molecular Biology. Molecular Cloning, 1989, vol. 2 [0034] • SO et al. Molecules and Cells, 1997, vol. 7, 178-186 [0050] • KREIG et al. Nature, 1995, vol. 374, 546-549 [0050] • GODING. Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 1986, vol. 2 [0050] • Nikkei Science, April 1994, 20-45 [0067] • Gekkan Yakuji, 1994, vol. 36 (1), 23-48 [0067] • Jikken Igaku Zoukan, 1994, vol. 12 (15 [0067] • SALTER RD et al. Immunogene tics, 1985, vol. 21, 235-246 [0117]

Lisboa, 15 de Junho de 2015

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Um agente para utilização como um agente de indução de imunidade num método de tratamento médico ou veterinário, o agente compreendendo, como um ingrediente ativo, pelo menos um polipéptido que tem atividade de indução da imunidade e que é selecionado a partir dos seguintes polipéptidos (a), (b) , e (c) , ou um vetor recombinante que compreende um polinucleótido que codifica o dito polipéptido e é capaz de expressar o dito polipéptido in vivo: (a) um polipéptido tendo a sequência de aminoácidos mostrada por qualquer das SEQ ID NOs: 43 a 7 6 na Listagem de Sequências; (b) um polipéptido tendo 85% ou mais de identidade de sequência com o polipéptido (a); e (c) um polipéptido de até 12 aminoácidos que compreende o polipéptido (a) como uma sequência parcial do mesmo.
2. 0 agente para utilização de acordo com a reivindicação 1, que compreende, como um ingrediente ativo, um de uma pluralidade dos ditos polipéptidos.
3. 0 agente para utilização de acordo com a reivindicação 2, que é: para utilização através do tratamento de uma célula apresentadora de antigénio com o agente in vitro e administração a um paciente da célula apresentadora de antigénio; ou para utilização através do tratamento de uma célula apresentadora de antigénio com o agente in vitro, contactando a célula apresentadora de antigénio com células T in vitro, e administrando a um paciente células T isoladas que se ligam seletivamente à célula apresentadora de antigénio; ou para utilização através da administração do agente ao paciente.
4. 0 agente para utilização de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, que é para utilização no tratamento ou prevenção de cancro animal.
5. 0 agente para utilização de acordo com a reivindicação 4, em que o cancro é cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, linfoma, cancro pulmonar, cancro esofágico ou cancro coloretal.
6. 0 agente para utilização de acordo com a reivindicação 4 ou reivindicação 5, em que o animal é um ser humano, cão ou gato.
7. 0 agente para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, que compreende adicionalmente um agente imunopotenciador.
8. 0 agente para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que o agente imunopotenciador é pelo menos um adjuvante ou citocina selecionada a partir do grupo que consiste em adjuvante incompleto de Freund, Montanide, poli IC e um derivado do mesmo, oligonucleótido CpG, interleucina 12, interleucina 18, interferão a, interferão β, interferão ω, interferão γ e ligando Flt3.
9. Utilização de pelo menos um polipéptido tendo atividade de indução da imunidade ou vetor recombinante conforme definido na reivindicação 1 ou reivindicação 2 no fabrico de um medicamento para indução da imunidade.
10. Utilização de acordo com a reivindicação 9, em que o medicamento é para utilização conforme definido em qualquer uma das reivindicações 3 a 6.
11. Utilização de acordo com a reivindicação 9 ou a reivindicação 10, em que o medicamento compreende adicionalmente um agente imunopotenciador.
12. Utilização de acordo com a reivindicação 11, em que o agente imunopotenciador é pelo menos um adjuvante ou citocina selecionada a partir do grupo que consiste em adjuvante incompleto de Freund, Montanide, poli IC e um derivado do mesmo, oligonucleótido CpG, interleucina 12, interleucina 18, interferão a, interferão β, interferão ω, interferão γ e ligando Flt3.
13. Uma célula apresentadora de antigénio isolada que compreende um complexo do polipéptido que tem atividade de indução da imunidade denotado na reivindicação 1 e uma molécula de HLA.
14. Uma célula T isolada, que se liga seletivamente a um complexo do polipéptido que tem atividade de indução da imunidade denotado na reivindicação 1 e uma molécula de HLA.
15. A célula apresentadora de antigénio da reivindicação 13 ou célula T isolada da reivindicação 14, para utilização na indução de imunidade num método de tratamento médico ou veterinário.
16. A célula apresentadora de antigénio ou célula T isolada para utilização de acordo com a reivindicação 15, que é para utilização conforme definido em qualquer uma das reivindicações 4 a 6.
17. Utilização da célula apresentadora de antigénio da reivindicação 13 ou célula T isolada da reivindicação 14 no fabrico de um medicamento para indução da imunidade.
18. Utilização de acordo com a reivindicação 17, em que o medicamento é para utilização conforme definido em qualquer uma das reivindicações 4 a 6. Lisboa, 15 de Junho de 2015