PT2319533T

PT2319533T - Agente indutor de imunidade e método para detetar cancro

Info

Publication number: PT2319533T
Application number: PT97945133T
Authority: PT
Inventors: Okano Fumiyoshi; Shimizu Masaki; Saito Takanori
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2008-07-10
Filing date: 2009-07-10
Publication date: 2017-07-20
Also published as: CA2730088C; MX2011000116A; CN102089001B; CA2730088A1; WO2010005069A1; RU2011104704A; EP2319533B1; DK2319533T3; ES2633468T3; US8901082B2; JP5703562B2; BRPI0910513B8; AU2009270182B2; CN102089001A; BRPI0910513A2; JPWO2010005069A1; EP2319533A1; EP2319533A4; PL2319533T3; US20110130343A1

Description

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DESCRIÇÃO

AGENTE INDUTOR DE IMUNIDADE E MÉTODO PARA DETETAR CANCRO

CAMPO DA TÉCNICA

A presente invenção refere-se a um agente indutor de imunidade inovador útil como um agente terapêutico e/ou profilático para cancro. Além disso, a presente invenção refere-se a um método inovador de deteção de cancro. ANTECEDENTES DA TÉCNICA 0 cancro é a causa de morte mais comum entre todas as causas de morte, a as terapias realizadas para o mesmo atualmente são principalmente tratamentos cirúrgicos em combinação com radioterapia e quimioterapia. Embora tenham sido desenvolvidos novos métodos cirúrgicos e tenham sido feitas constatações de novos agentes anticancro nos últimos anos, os resultados de tratamento de cancros não foram verdadeiramente aprimorados até hoje exceto em relação a alguns cancros. Nos últimos anos, Em virtude do desenvolvimento em biologia molecular e imunologia de cancro, os antígenos de cancro reconhecidos por células T citotóxicas reativas com cancros, assim como os genes codificadores dos antígenos de cancro, foram identificados, e as expectativas para imunoterapias específicas de antígeno se elevaram (Literatura de Não Patente 1).

Em imunoterapia, para reduzir efeitos colaterais, é necessário que o péptido, polipéptido ou proteína

reconhecidos como o antígeno quase não existam em células normais e existam especificamente em células cancerígenas. Em 1991, Boon et al. do Ludwig Institute na Bélgica isolou um antígeno de melanoma humano MAGE 1, que é reconhecido por células T positivas de CD8, Por um método de clonagem de expressão de cDNA com a utilização de uma linhagem celular cancerígena autóloga e células T reativas um cancro (Literatura de Não Patente 2). Depois disso, o método SEREX fcr^o í yooob l (identificações serolõgicas de antígenos por clonagem de expressão recombinante), em que os antígenos de tumor reconhecidos por anticorpos produzidos no corpo vivo de um paciente com cancro em resposta ao cancro do próprio paciente são identificados por aplicação de um método de clonagem de expressão genética, foi relatado (Literatura de Não Patente 3; Literatura de Patente 1), e diversos antígenos de cancro foram isolados por esse método (Literaturas de Não Patente 4 a 9). Com a utilização de uma parte dos mesmos como alvo, testes clínicos para imunoterapia para cancro foram iniciados.

Por outro lado, assim como em humanos, diversos tumores tal como cancro da glândula mamária, leucemia e linfoma são conhecidos em cães e gatos, e os mesmos também têm altos índices nas estatísticas de doenças em cães e gatos. Contudo, atualmente, nenhum agente terapêutico e profilático existe que seja eficaz para cancros em cães e gatos. A maioria dos tumores em cães e gatos são percebidos pelos donos apenas depois que os mesmos cresceram, e em muitos casos, jã é tarde demais para visitar um hospital para receber excisão cirúrgica do tumor ou administração de um fãrmaco humano (uma preparação anticancro ou similares), de modo que esses cães e gatos frequentemente morrem logo após o tratamento. Em tais circunstâncias, se agentes terapêuticos e agentes profiláticos para cancro eficazes para cães e gatos tornam-se disponíveis, estima-se que seus usos para cancros caninos sejam desenvolvidos.

Visto que a deteção de cancro leva a bons resultados de tratamento, é necessário um método para detetar cancro que pode ser facilmente realizado testando-se soro, urina ou similares sem sobrecarga física e económica para os pacientes com cancro. Recentemente, os métodos em que produtos de tumor tais como marcadores de tumor são medidos foram amplamente utilizados como métodos diagnósticos com a utilização de sangue ou urina. Exemplos dos produtos de

tirzáIMOádBI tumor incluem antígenos relacionados um tumor, enzimas, proteínas específicas, metabõlitos, genes tumorais, produtos de genes tumorais, e genes supressores de tumor, e, em alguns cancros, um antígeno carcinoembriónico CEA, glicoproteínas CA19-9 e CA125, um antígeno específico de próstata PSA, calcitonina que é uma hormona de péptido produzido 11a tiroide, e similares são utilizados como marcadores de tumor no diagnóstico de cancro (Literatura de Não Patente 10) . Contudo, na maioria dos tipos de cancros, Não há marcadores de tumor úteis para diagnóstico de cancro. Além disso, visto que a maioria dos marcadores de tumor atualmente conhecidos existem apenas em quantidades muito pequenas (por exemplo, na ordem de pg/ml) no fluido corporal, sua deteção exige um método de medição altamente sensível ou uma técnica especial. Em tais circunstâncias, se for fornecido um método de deteção de cancro inovador pelo qual vários cancros podem ser detetados através de operações simples, estima-se desenvolver sua utilização para diagnóstico de vários cancros. CD179b é conhecido por ser parte da cadeia leve substituta de imunoglobulina e por ser expresso nas superfícies de membrana de células precursoras de células B (células pré-B e células pró-B). 0 mesmo desaparece na diferenciação de células B e não é expresso em células B maduras. Contudo, CD179b é conhecido por ser expresso em células de leucemia (leucemia de célula pré-B) produzidas por cancerização de células pré-B (Literaturas de Não Patente 10 e 11) . Além disso, CD179b é conhecido por ser expresso também em células de linfoma (linfoma de célula pré-B) produzidas por cancerização de células pré-B, e ter capacidade para ser utilizado como um marcador diagnóstico para linfoma de célula pré-B (Literatura de Não Patente 12) . Contudo, sua expressão não foi relatada para células de leucemia além das células de leucemia de célula pré-B, linfomas além do linfoma de célula pré-B, células de cancro

tirzáIMOádBI da mama e similares. Além disso, não houve relato que sugerisse que o estímulo de imunidade contra CD179b tenha sido útil para terapia e/ou profilaxia de cancro. Um anticorpo anti-CD44 que tem homologia ao CD1179b e a utilização do anticorpo para tratar ou diagnosticar células cancerígenas que expressam CD44 são revelados na Literatura de Patente 2. Um polipéptido que tem homologia ao CD179b é relatado ser regulado de modo ascendente em lipossarcoma, sarcoma sinovial e sarcoma de tecido mole na Literatura de Patente 3. LITERATURAS DE TÉCNICA ANTERIOR Literatura de Patente

Literatura de Patente 1: US 5698396 B Literatura de Patente 2: WO 2004/024750 Literatura de Patente 3: WO 2004/048938 Literaturas de Não Patente

Literatura de Não Patente 1: Tsuyoshi Akiyoshi, "Cancer and Chemotherapy", 1997, Volume 24, páginas 551 a 519 Literatura de Não Patente 2: Bruggen P. et ai., Science, 254: 1.643 a 1.647 (1991)

Literatura de Não Patente 3: Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 92: 11.810 a 11.813 (1995)

Literatura de Não Patente 4: Int. J. Cancer, 72: 965 a 971 (1997)

Literatura de Não Patente 5: Cancer Res., 58: 1.034 a 1.041 (1998)

Literatura de Não Patente 6: Int. J. Cancer, 29: 652 a 658 (1998)

Literatura de Não Patente 7: Int. J. Oncol., 14: 7 03 a 708 (1999)

Literatura de Não Patente 8: Cancer Res., 56: 4766 a 4772 (1996)

Literatura de Não Patente 9: Hum. Mol. Genet 6: 33 a 39 (1997)

Literatura de Não Patente 10: Adv. Immunol., 63: 1 a 41 fcrQúO í yooob l (1996)

Literatura de Não Patente 11: Blood, 92: 4.317 a 4.324 (1998)

Literatura de Não Patente 12: Modem Pathology, 17: 423 a 429 (2004)

REVELAÇÃO DA INVENÇÃO

PROBLEMAS A SEREM SOLUCIONADOS PELA INVENÇÃO A presente invenção pretende revelar um polipéptido inovador útil como um agente para terapia e/ou profilaxia e/ou similares de cancro, que fornece, desse modo a utilização do polipéptido para um agente indutor de imunidade. A presente invenção também pretende fornecer um método de deteção de cancro, Que é útil para diagnóstico de cancro.

MEIOS PARA SOLUCIONAR OS PROBLEMAS

Os presentes inventores estudaram intensamente para obter, através do método SEREX com a utilização de soro de um paciente canino a partir do qual uma biblioteca de cDNA derivada de tecido cancerígeno de mama canino foi preparada, sendo que o cDNA codifica uma proteína que se liga a anticorpos existentes no soro derivado do corpo vivo portador de tumor, e, com base no cDNA, polipéptidos CD179b caninos que têm as sequências de aminoácidos mostradas nos IDs de número ímpar das SEQ ID Nos: 5 a 95 (isto é, SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 11, 13, 15 91 e 93) na LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS foram preparados. Além disso, com base em um gene homólogo de humano dos genes obtidos, um polipéptido de CD 179b humano que tem a sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO: 3 foi preparado, e, de modo similar, com base em um gene homólogo de bovino, um polipéptido de CD179b bovino que tem a sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO:95 foi preparado. Depois, os presentes inventores constataram que esses polipéptidos de CD179b são especifícamente expressos em células de cancro da mama, leucemia e linfoma. Além disso, os presentes inventores constataram que,

tirzáIMOádBI através da administração desses CD179b a um corpo vivo, imunócitos contra CD179b podem ser induzidos no corpo vivo, e um tumor no corpo vivo que expressa CD17 9b pode ser regredido. Além disso, os presentes inventores constataram que um vetor recombinante que compreende um polinucleótido codificador de um polipéptido de CD179b ou um fragmento do mesmo, de modo que o último possa ser expresso, induz um efeito antitumor contra cancro que expressa CD179b no corpo vivo.

Ademais, os presentes inventores constataram que um polipéptido parcial em uma proteína de CD179b tem uma capacidade de ser apresentado por células apresentadoras de antígeno, o que permite a ativação e cultivo de células T citotóxicas específicas para o pêptido (atividade indutora de imunidade) e, portanto, que o pêptido seja útil para terapia e/ou profilaxia de cancro, e, além disso, essas células apresentadoras de antígeno em contato com o pêptido e células T em contacto com as células apresentadoras de antígeno são úteis para a terapia e/ou profilaxia de cancro. Ademais, os presentes inventores constataram que, visto que um polipéptido recombinante preparado com base na sequência de aminoácidos da proteína de CD179b acima reage especificamente apenas com soro de um corpo vivo portador de tumor, o cancro pode ser detetado com o mesmo. Com base nas constatações acima, os presentes inventores completaram a presente invenção.

Assim, a presente invenção fornece: - agentes, células apresentadoras de antígeno isoladas e células T isoladas para utilização num método para terapia e/ou profilaxia de cancro da mama e/ou leucemia; - métodos para detetar cancro da mama e/ou leucemia; - reagentes para utilização em um método in vivo para detetar um cancro da mama e/ou leucemia; e - utilização in vitro de um reagente para detetar um cancro da mama e/ou leucemia,

tirzáIMOádBI todos conforme definido nas reivindicações.

EFEITO DA INVENÇÃO

Através da presente invenção, um agente indutor de imunidade inovador útil para terapia e/ou profilaxia e/ou similares de cancro da mama e/ou leucemia é fornecido. Conforme particularmente descrito em Exemplos mencionados posteriormente, com a administração do polipéptido utilizado na presente invenção a um animal portador de tumor, imunócitos podem ser induzidos no corpo do animal portador de tumor, e um cancro da mama e/ou leucemia que jã ocorreu pode ser reduzido ou regredido.

Ademais, através da presente invenção, um método inovador de deteção de cancro da mama e/ou leucemia é fornecido. Visto que a medição de expressão do polipéptido numa amostra através do método da presente invenção permite a deteção de cancros pequenos invisíveis e cancros que existem em partes profundas de um corpo, o método também é útil para a deteção antecipada de cancros em exames médicos e similares. Se o método da presente invenção for utilizado no acompanhamento de pacientes depois da terapia para cancro, a recorrência do cancro pode ser detetada em seu estágio prematuro. Além disso, o método da presente invenção torna possível avaliar o estágio da progressão de cancro tal como crescimento tumoral, a invasão tumoral aos tecidos circundantes, e metástase do cancro para os nódulos linfáticos e órgãos distantes.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 é um diagrama que mostra os padrões de expressão do gene codificador da proteína de CD179b em tecidos normais e linhagens celulares tumorais. 0 numeral de referência 1 representa o padrão de expressão do gene codificador da proteína de GDI79b; e o numeral de referência 2 representa o padrão de expressão do gene GAPDH. Na Figura 1, o numeral de referência 1 no ordenado representa o padrão de expressão do gene identificado

tirzáIMOádBI conforme descrito acima, e o numeral de referência 2 representa o padrão de expressão do gene GAPDH como o controlo para comparação.

Na Figura 2, os numerais de referência 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10 na abscissa indicam as habilidades de produção de IFN-γ de células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A0201 devido ao estímulo de células T2 pulsadas com os péptidos de SEQ NOs:108, 109, 110, 113, 114, 115, 116 e 117, respetivamente. 0 numeral de referência 11 indica o resultado para o péptido de SEQ ID NO: 118 utilizado como o controlo negativo (péptido que tem uma sequência fora do escopo da presente invenção).

Na Figura 3, os numerais de referência 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 e 19 na abscissa indicam as atividades citotóxicas de células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A0201 contra células Namalwa, sendo que as células foram estimuladas com a utilização de SEQ ID NOs :108, 109, 110, 113, 114, 115, 116 e 117, respetivamente. 0 numeral de referência 20 indica a atividade citotóxica de células T positivas de CD8 induzidas com a utilização do péptido do controlo negativo (SEQ ID NO: 118).

Na Figura 4, os numerais de referência 21, 22, 23, 24 e 25 na abscissa indicam as habilidades de produção de IFN-Y de células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A24 devido ao estímulo das células JTK-LCL pulsadas com os péptidos de SEQ NOs:110, 111, 112, 115 e 116, respetivamente. 0 numeral de referência 26 indica o resultado para o péptido de SEQ ID NO:118 utilizado como o controlo negativo.

Na Figura 5, os numerais de referência 27, 28, 29, 30 e 31 indicam as atividades citotóxicas de células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A24 estimuladas com os péptidos de SEQ ID NO:110, 111, 112, 115 e 116, respetivamente, contra células JTK-LCL. 0 numeral de referência 32 indica a atividade citotóxica de células T

tirzáIMOádBI positivas de CD8 induzidas com a utilização do péptido do controlo negativo (SEQ ID NO:118). MELHOR MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO <Polipéptido>

Exemplos do polipéptido contidos no agente indutor de imunidade da presente invenção como um ingrediente eficaz incluem um ou mais polipéptidos (ou polipéptidos) selecionados a partir dos polipéptidos de (a) , (b) e (c) abaixo: (a) um polipéptido que consiste em aminoãcidos em qualquer uma das sequências de aminoãcidos mostradas nos IDs de número ímpar das SEQ ID Nos:3 a 95 (isto é, SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 93 e 95) e tem uma atividade indutora de imunidade; (b) um polipéptido que consiste na sequência de aminoãcidos mostrada no SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110. SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO :112, SEQ ID NO: 113. SEQ ID NO: 114. SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116 OU SEQ ID NO: 117; e c) um polipéptido que compreende como uma sequência parcial do mesmo uma sequência de aminoãcidos conforme mostrado no SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO :110, SEQ ID NO :111, SEQ ID NO :112, SEQ ID NO :113, SEQ ID NO :114, SEQ ID NO :115. SEQ ID NO :116 OU SEQ ID NO :117, sendo que o referido polipéptido tem de 8 a 12 resíduos de aminoácido.

Conforme é utilizado no presente documento, o termo "polipéptido" significa uma molécula formada por uma pluralidade de aminoãcidos ligados juntos por ligações de péptido, e inclui não apenas moléculas de polipéptido que têm grandes números de aminoãcidos constituindo as mesmas, mas também moléculas de peso molecular baixo que têm pequenos números de aminoãcidos (oligopéptidos), e moléculas de comprimento completo. Na presente invenção, as proteínas constituídas pelos comprimentos totais de SEQ ID

tirzáIMOádBI NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15 93 e 95 também são incluídas no mesmo.

Conforme é utilizado no presente documento, o termo "que tem uma sequência de aminoácidos" significa que resíduos de aminoácido são dispostos em uma ordem específica. Como tal, por exemplo, "um polipéptido que tem a sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID N0:3" significa um polipéptido que tem a sequência de aminoácidos de Leu Leu Arg Pro . . . (recorte) . . . Ala Glu Cys Ser mostrada no SEQ ID NO: 3, sendo que o polipéptido tem um tamanho de 176 resíduos de aminoácido. Ademais, por exemplo, "polipéptido que tem a sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO: 3" pode também ser abreviada como "polipéptido de SEQ ID N0:3". Isso também se aplica ao termo "que tem uma sequência de base".

Conforme é utilizado no presente documento, o termo "atividade indutora de imunidade" significa uma habilidade de induzir imunócitos que secretam citocinas tais como interferão num corpo vivo.

Um polipéptido ter ou não uma atividade indutora de imunidade pode ser confirmado com a utilização de, por exemplo, o conhecido ensaio de ELISPOT. Mais particularmente, por exemplo, conforme descrito nos Exemplos abaixo, as células tais como células mononucleares de sangue periférico são obtidas a partir de um corpo vivo ao qual um polipéptido foi administrado e cuja atividade indutora de imunidade deve ser avaliada, sendo que, depois, essas células são cocultivadas com o polipéptido, seguido pela medição da quantidade (ou quantidades) de uma citocina (ou citocinas) e/ou uma quimiocina (ou quimiocinas) tal como IFN-v e/ou interleucina (IL) produzidas pelas células com a utilização de um anticorpo/anticorpos específicos, o que mede o número de imunócitos nas células, Permitindo a avaliação da atividade indutora de imunidade.

Alternativamente, conforme descrito nos Exemplos

tirzáIMOádBI mencionados posteriormente, quando um polipéptido recombinante preparado com base na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95 é administrado a um animal portador de tumor, o tumor pode ser reduzido ou regredido por sua atividade indutora de imunidade. Assim, a atividade indutora de imunidade acima pode ser avaliada também como uma habilidade de suprimir o crescimento de células cancerígenas que expressam o polipéptido de SEQ ID NO:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 OU 95, ou para causar a redução ou desaparecimento de um tecido cancerígeno (tumor) (doravante no presente documento denominada "atividade antitumoral"). A atividade antitumoral de um polipéptido pode ser confirmada, por exemplo, pela observação do facto de o tumor ser ou não reduzido ou regredido quando o polipéptido foi administrado a um corpo vivo portador de tumor, conforme descrito mais particularmente nos Exemplos abaixo.

Alternativamente, A atividade antitumoral de um polipéptido pode ser avaliada também através da observação do facto de as células T estimuladas com o polipéptido (isto é, células T colocadas em contacto com células apresentadoras de antígeno que apresentam o polipéptido) mostrarem ou não atividade citotóxica contra células tumorais in vitro. 0 contacto entre as células T e as células apresentadoras de antígeno pode ser realizado por cocultivo de ambas em um meio líquido, conforme mencionado abaixo. A medição da atividade citotóxica pode ser realizada, por exemplo, por um método conhecido denominado ensaio de liberação de Cr51 descrito em Int. J. Cancer, 58: p317, 1994.

Em casos em que o polipéptido é utilizado para terapia e./ou profilaxia de cancro, a avaliação da atividade indutora de imunidade é preferencialmente realizada com a utilização da atividade antitumoral como um índice, embora o índice não seja restrito.

tirzáIMOádBI

A sequência de aminoãcidos mostrada em cada um das SEQ ID Nos: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 e 95 na LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS é a sequência de aminoãcidos de um polipéptido que se liga a um anticorpo especificamente que existe no soro derivado de um cão portador de tumor no método SEREX com a utilização de soro do paciente canino a partir do qual uma biblioteca de cDNA derivada de cancro da glândula mamária foi preparada, ou a sequência de aminoãcidos de CD179b isolada como um fator homólogo a humano (homólogo) do polipéptido (consultar o Exemplo 1 abaixo). 0 polipéptido (a) é um polipéptido que consiste em qualquer uma das sequências de aminoãcidos mostradas no SEQ ID NO:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 e 95 na LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS e tem uma atividade indutora de imunidade. Conforme conhecido na técnica, um polipéptido que tem não menos do que cerca de 7 resíduos de aminoácido pode exercer sua antigenicidade e imunogenicidade. Assim, um polipéptido que tem a sequência de aminoãcidos mostrada no SEQ ID NO:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 9 5 pode ter uma atividade indutora de imunidade, de modo que o mesmo possa ser utilizado para a preparação do agente indutor de imunidade da presente invenção.

Como um princípio de indução imunolõgica através da administração de um polipéptido antigénico de cancro, o processo a seguir é conhecido: o polipéptido é incorporado em uma célula apresentadora de antígeno e, depois, degradado em fragmentos menores por peptidases na célula, Seguido pela apresentação dos fragmentos sobre a superfície da célula. Depois, os fragmentos são reconhecidos por uma célula T citotóxica ou similares, que mata seletivamente células que apresentam o antígeno. Q tamanho do polipéptido apresentado sobre a superfície da célula apresentadora de antígeno é relativamente pequeno e de aproximadamente 7 a 30 aminoãcidos.

Em alguns casos, esses polipéptidos relativamente

tirzáIMOádBI pequenos são apresentados diretamente sobre a superfície das células apresentadoras de antígeno sem incorporação dos mesmos nas células apresentadoras de antígeno.

Ademais, visto que um polipéptido incorporado numa célula apresentadora de antígeno é clivado em locais aleatórios por peptidases na célula para render vários fragmentos de polipéptido, que depois são apresentados sobre a superfície da célula apresentadora de antígeno, a administração de um polipéptido grande tal como a região inteira de SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95 inevitavelmente causa a produção de fragmentos de polipéptido através da degradação do mesmo na célula apresentadora de antígeno, sendo que os fragmentos são eficazes para indução imunológica através da célula apresentadora de antígeno. Portanto, também para indução imunológica através de células apresentadoras de antígeno, um polipéptido grande pode ser utilizado, e o polipéptido pode ser composto da região inteira de SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95.

Ademais, os polipéptidos da presente invenção podem ser verificados com um meio de verificação pelo qual péptidos de epítopo que têm motivos de ligação de vários tipos de HLA e compostos de 8 a 12, preferencialmente, 9 a 10 aminoácidos podem ser buscados, por exemplo, HLA Peptide Binding Predictions (http : //bimas . dcrt. nih. gov/molbio/hla_bind,/index. html) em Bioinformatics & Molecular Analysis Selection (BIMAS), para selecionar péptidos que podem ser péptidos de epítopo. Mais particularmente, um polipéptido composto da sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15,

..., 93 ou 95 é preferível, e, no polipéptido de SEQ ID NO:3, os polipéptidos mostrados no SEQ ID NOs:108 a 117 são mais preferenciais.

0 polipéptido (b) é o polipéptido que consiste na sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO :100, SEQ ID

tirzáIMOádBI NO: 10S , SEQ ID NQ:11Q, SEQ ID NO:lll, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO :113, SEQ ID NO :114. SEQ ID NO :115, SEQ ID NO :116 OU SEQ ID NO:117 e tem uma atividade indutora de imunidade. O polipéptido (c) compreende o polipéptido (b) como uma sequência parcial do mesmo e tem uma atividade indutora de imunidade. Isto é, o polipéptido (c) tem outro aminoácido (ou aminoãcidos) ou polipéptido (ou polipéptidos) adicionado a uma extremidade ou ambas as extremidades do polipéptido (b), sendo que o referido polipéptido tem até 12 resíduos de aminoácido e tem uma atividade indutora de imunidade. Tal polipéptido pode também ser utilizado para preparação do agente indutor de imunidade da presente invenção.

Os polipéptidos descritos acima podem ser sintetizados, por exemplo, por um método de síntese química tal como o método de Fmoc (método de fluorenilmetiloxicarbonil) ou o método de tBoc (método de t-butiloxicarbonil). Ademais, os mesmos podem ser sintetizados por métodos convencionais com a utilização de vários tipos de sintetizadores de péptido comercialmente disponíveis. Ademais, o polipéptido de interesse pode ser obtido com a utilização de técnicas de engenharia genética conhecidas, preparando-se um polinucleótido codificador do polipéptido acima e incorporando-se o polinucleótido em um vetor de expressão, que depois é transfetado para uma célula hospedeira, seguido pela permissão para que o polipéptido seja produzido na célula hospedeira. 0 polinucleótido codificador do polipéptido acima pode ser facilmente preparado por uma técnica de engenharia genética conhecida ou um método convencional com a utilização de um sintetizador de ácido nucleico comercialmente disponível. Por exemplo, DNA que tem a sequência de base mostrada no SEQ ID NO:4 pode ser preparado realizando-se PCR com a utilização de uma biblioteca de cDNA ou DNA cromossómico canino como um

tirzáIMOádBI

modelo, e um par de iniciadores projetados de modo que a sequência de base mostrada no SEQ ID NO:4 possa ser amplificada com o mesmo. No caso de DNA que tem a sequência de base de SEQ ID NO: 1, isso pode ser preparado de modo similar com a utilização de uma biblioteca de cDNA ou DNA cromossómico humano como o modelo. As condições de reação para o PCR podem ser definidas adequadamente, e exemplos das mesmas incluem, mas sem limitação, repetir o processo de reação de 94 °C por 30 segundos (desnaturação) , 55 °C por 30 segundos a 1 minuto (recozimento) e 72 °C por 2 minutos (extensão), por exemplo, por 30 ciclos, seguido pela reação a 72 °C por 7 minutos. Métodos, condições e similares de PCR são descritos, por exemplo, em Ausubel et al. , Short Protocols in Molecular Biology, 3- edição, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995) , John Wiley & Sons (em particular, Capítulo 15). Ademais, o DNA desejado pode ser isolado preparando-se um iniciador (ou iniciadores) ou sonda (ou sondas) adequados com base nas informações das sequências de base e das sequências de aminoãcidos mostradas no SEQ ID NO: até 95 na LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS no presente relatório descritivo, e selecionando-se uma biblioteca de cDNA humano, canino, bovino ou similares com a utilização da sonda (ou sondas) ou iniciador (ou iniciadores) . A biblioteca de cDNA é preferencialmente, preparada a partir de uma célula, Órgão ou tecido que expressa a proteína de SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95. As operações descritas acima tal como preparação da sonda (ou sondas) ou iniciador (ou iniciadores), construção de uma biblioteca de cDNA, seleção da biblioteca de cDNA e clonagem do gene de interesse são conhecidas por aqueles indivíduos versados na técnica, e podem ser realizadas de acordo com os métodos descritos, por exemplo, em Sambrook et al., Molecular Cloning, Segunda Edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989); e Ausubel et al. fcr^o í yooob l (descrito acima). A partir do DNA obtido desse modo, o DNA codificador do polipéptido (a) pode ser obtido. Ademais, visto que os codões que codificam cada aminoãcido são conhecidos, uma sequência de base de um polinucleótido codificador de uma sequência de aminoãcidos específica pode ser facilmente especificada. Como tal, as sequências de base de polinucleótidos codificadores do polipéptido (b) e o polipéptido (c) podem também ser facilmente especificadas, de modo que tais polinucleótidos possam ser também facilmente sintetizados com a utilização de um sintetizador de ácido nucleico comercialmente disponível de acordo com um método convencional.

As células hospedeiras não são restringidas contanto que as mesmas possam expressar o polipéptido descrito acima e os exemplos das mesmas incluem, mas sem limitação, células procarióticas tais como E. coli; e células eucarióticas tal como células cultivadas de mamífero, o que inclui células de rim de macaco COS 1, Células de ovário de hamster chinês CHO, uma linhagem celular de rim embriónica humana HEK293 e uma linhagem celular de pele embriónica de murganho NIH3T3; levedura em desenvolvimento; levedura de fissão; células de bicho-da-seda; e células de ovo de Xenopus laevis .

Em casos em que células procarióticas são utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão que tem a origem a qual permite sua replicação em uma célula procariótica, promotor, local de ligação de ribossoma, local de múltiplas clonagens, terminador, gene resistente a fármaco, gene complementar de nutriente e/ou similares é utilizado. Exemplos do vetor de expressão para E. coli incluem o sistema de pUC, pBluescriptII, sistema de expressão de pET e sistema de expressão de pGEX. Incorporando-se um DNA codificador do polipéptido acima num vetor de expressão e transformando-se células procarióticas hospedeiras com o vetor, Seguido pelo cultivo dos

tirzáIMOádBI transformantes resultantes, o polipéptido codificado pelo DNA pode ser expresso nas células procarióticas hospedeiras. Nesse processo, o polipéptido pode também ser expresso como uma proteína de fusão com outra proteína (por exemplo, proteína fluorescente verde (GFP) ou glutationa S-transferase (GST)).

Em casos em que células eucarióticas são utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão para células eucarióticas que tem um promotor, local de junção, local de adição de poli(A) e/ou similares é utilizado como o vetor de expressão. Exemplos de tal vetor de expressão incluem pKAl pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, vetor EBV, pRS, pcDNA3, pMSG e pYES2. Do mesmo modo conforme descrito acima, incorporando-se um DNA codificador do polipéptido acima em tal vetor de expressão e transformando-se células eucarióticas hospedeiras com o vetor, seguido pelo cultivo dos transformantes resultantes, o polipéptido codificado pelo DNA pode ser expresso nas células eucarióticas hospedeiras. Em casos em que pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, pEGFP-Cl ou similares é utilizado como o vetor de expressão, o polipéptido acima pode ser expresso como uma proteína de fusão à qual uma etiqueta tal como etiqueta His (por exemplo, (His)6 a (His)io), etiqueta FLAG, etiqueta myc, etiqueta HA ou GFP foi adicionada.

Para a introdução do vetor de expressão nas células hospedeiras, métodos conhecidos tais como a eletroporação, o método de fosfato de cálcio, 0 método de lipossoma, o método dextrano DEAE e microinjeção podem ser utilizados.

Isolamento e purificação do polipéptido de interesse a partir das células hospedeiras podem ser realizados por uma combinação de operações de separação conhecidas. Exemplos das operações de separação conhecidas incluem, mas sem limitação, o tratamento com um desnaturante tal como ureia, ou um tensioativo; Tratamento por ultrassonificação;

tirzáIMOádBI digestão de enzima; relargagem ou precipitação fracionada de solvente; diálise; centrifugação; ultrafiltração; filtração de gel; SDS-PAGE; focalização isoelétrica; cromatografia por troca de iões; cromatografia hidrofóbica; cromatografia por afinidade; e cromatografia de fase inversa.

Os polipéptidos obtidos pelo método acima incluem, conforme mencionado acima, aqueles na forma de uma proteína de fusão com outra proteína arbitrária. Exemplos dos mesmos incluem proteínas de fusão com glutationa S-transferase (GST) e com uma etiqueta His. Tal polipéptido na forma de uma proteína de fusão também é descrito no presente documento. Ademais, em alguns casos, um polipéptido expresso numa célula transformada é modificado de vários modos na célula depois da tradução do mesmo. Tal polipéptido modificado depois da tradução do mesmo também é incluído no escopo da presente invenção contanto que o mesmo tenha uma atividade indutora de imunidade. Exemplos de tal modificação pós-tradução incluem eliminação de metionina terminal-N, acetilação de terminal-N, glicosilação, degradação limitada por uma protease intracelular, miristoilação, isoprenilação e fosforilação. <Agente Indutor de Imunidade>

Conforme descrito concretamente nos Exemplos a seguir, o polipéptido descrito acima que tem uma atividade indutora de imunidade pode causar regressão de um tumor que já ocorreu quando administrado a um animal portador de tumor. Portanto, o agente indutor de imunidade da presente invenção pode ser utilizado como um agente terapêutico e/ou profilático para cancro da mama e/ou leucemia.

Os termos "cancro" e "tumor" utilizados no presente relatório descritivo significam um neoplasma maligno e são utilizados intercambiavelmente.

Nesse caso, cancros a serem tratados são aqueles que expressam o gene CD179b, tais cancros expressam o gene

tirzáIMOádBI codificador do polipéptido de SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95, e são Exemplos de cancro da mama de mama e/ou leucemia de outros cancros descritos no presente documento incluem, cancros de mama (cancro da mama de glândula mamária, cancro da mama de glândula mamária combinado, tumor misto maligno da glândula mamária, adenocarcinoma papilar intraductal e similares), leucemias (leucemia linfocítica crónica e similares), linfomas (linfoma gastrointestinal, linfoma de órgão digestivo, Linfoma de célula pequena/'média e similares) . 0 polipéptido descrito acima, ou um vetor recombinante que compreende um polinucleótido codificador do polipéptido e que tem capacidade para expressar o polipéptido in vivo pode ser utilizado como um método terapêutico para indução imunológica. Ademais, pode ser utilizado como um método terapêutico com o propósito (ou propósitos) de terapia e/ou profilaxia de cancro da mama animal, e pode também ser utilizado como um método terapêutico que compreende adicionalmente um imunoestimulador. 0 animal paciente é um mamífero tal como um primata, animal de estimação, animal doméstico ou animal de desporto, preferencialmente, humano, cão ou gato. A rota de administração do agente indutor de imunidade da presente invenção a um corpo vivo pode ser administração oral ou administração parenteral e, preferencialmente, é administração parenteral tal como administração intramuscular, administração subcutânea, administração intravenosa ou administração intra-arterial. Em casos em que o agente indutor de imunidade é utilizado para terapia de cancro da mama, o mesmo pode ser administrado a um nódulo linfático regional nas proximidades do tumor a ser tratado, conforme descrito nos Exemplos abaixo, a fim de estimular sua atividade anticancro. A dose pode ser qualquer dose contanto que a dose seja eficaz para a indução imunológica, e, por exemplo, em casos em que o fcr^o i yooob l agente é utilizado para terapia e/ou profilaxia de cancro da mama, a dose pode ser uma eficaz para terapia e/ou profilaxia do cancro da mama. Ademais, a dose pode variar dependendo do peso corporal, sexo (macho ou fêmea), sintomas e similares. A dose eficaz para terapia e/ou profilaxia de cancro da mama é adequadamente selecionada dependendo do tamanho do tumor, o sintoma e similares, e geralmente, 0,0001 pg a 1.000 pg, preferencialmente, 0,001 pg a 1.000 pg por animal paciente por dia, que podem ser administrados uma vez ou diversas vezes. 0 agente é, preferencialmente, administrado diversas vezes, durante diversos dias até diversos meses.

Conforme mostrado concretamente nos Exemplos abaixo, o agente indutor de imunidade da presente invenção pode causar redução ou regressão de um tumor que já ocorreu. Portanto, visto que o agente pode exercer sua atividade anticancro também contra um pequeno número de células cancerígenas no estágio prematuro, o desenvolvimento ou recorrência de cancro da mama pode ser evitado com a utilização do agente antes do desenvolvimento do cancro da mama ou depois da terapia para o cancro da mama. Isto é, o agente indutor de imunidade da presente invenção é eficaz tanto para terapia quanto para profilaxia de cancro da mama. 0 agente indutor de imunidade da presente invenção pode conter apenas um polipéptido ou pode ser formulado misturando-se conforme adequado com um aditivo tal como um transportador farmaceuticamente aceitável, diluente ou veículo adequado para cada modo de administração. Os métodos de formulação e aditivos que podem ser utilizados são bem conhecidos no campo da formulação de farmacêuticos, e qualquer um dos métodos e aditivos pode ser utilizado. Os exemplos específicos dos aditivos incluem, mas sem limitação, diluentes tais como soluções de tampão fisiológico; veículos tais como sacarose, lactose, amido de

tirzáIMOádBI milho, fosfato de cálcio, sorbitol e glicina; ligantes tais como xarope, gelatina, goma-arábica, sorbitol, Cloreto polivinílico e tragacanto; e lubrificantes tais como estearato de magnésio, polietileno glicol, talco e sílica. Exemplos da formulação incluem preparações orais tais como tabletes, cápsulas, grânulos, põs e xaropes,· e preparações parenterais tais como inalantes, soluções de injeção, supositórios e soluções. Essas formulações podem ser preparadas por métodos de produção comumente conhecidos. 0 agente indutor de imunidade da presente invenção pode ser utilizado em combinação com um imunoestimulador com capacidade para estimular a resposta imunológica num corpo vivo. 0 imunoestimulador pode estar contido no agente indutor de imunidade da presente invenção ou administrado como uma composição separada a um paciente em combinação com o agente indutor de imunidade da presente invenção.

Aqui, o paciente é um animal, especialmente um mamífero, preferencialmente, humano, cão ou gato.

Exemplos do imunoestimulador incluem adjuvantes. Adjuvantes podem estimular a resposta imunológica através do fornecimento de um reservatório de antígeno (de modo extracelular ou dentro de macrõfagos), ativação de macrófagos e estimulação de conjuntos específicos de linfócitos que, desse modo, estimulam a resposta imunológica e, portanto, a reação anticancro. Portanto, especialmente em casos em que o agente indutor de imunidade da presente invenção é utilizado para terapia e/ou profilaxia de cancro da mama, o agente indutor de imunidade compreende preferencialmente um adjuvante, adicionalmente ao polipéptido descrito acima como um ingrediente eficaz. Muitos tipos de adjuvantes são bem conhecidos na técnica, e qualquer desses adjuvantes podem ser utilizados. Exemplos específicos dos adjuvantes incluem MPL (SmithKline Beecham) e homólogos do lipossacãrido Salmonella minnesota Re 595 obtido depois de purificação e hidrólise de ácido do tr^o í yooob l lipossacárido; QS21 (SmithKline Beecham), saponina QA-21 pura purificada a partir de um extrato de Quillja saponaria; DQS21 descrito no documento W096/33739 (SmithKline Beecham); QS-7, QS-17, QS-18 e QS-L1 (So et al. , "Molecules and cells", 1997, Volume 7, páginas 178 a 186); Adjuvante incompleto de Freund; Adjuvante completo de Freund; vitamina E; Montanide; alum; oligonucleotides CpG (por exemplo, Kreig et al., Nature, Volume 374, páginas 546 a 549); poli-I:C e derivados do mesmo (por exemplo, poli ICLC); e várias emulsões de óleo em água preparadas a partir de óleos biodegradáveis tais como esqualeno e/ou tocoferol. De entre esses, 0 adjuvante incompleto de Freund; montanide; poli-I:C e derivados do mesmo; e oligonucleótidos CpG são preferenciais. A razão de mistura entre o adjuvante descrito acima e o polipéptido é tipicamente de cerca de 1:10 a 10:1, preferencialmente, cerca de 1:5 a 5:1, mais preferencialmente, cerca de 1:1. Contudo, o adjuvante não é limitado aos exemplos descritos acima, e os adjuvantes conhecidas na técnica diferentes daqueles descritos acima (por exemplo, Coding, "Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 2- edição", 1986) podem ser utilizados quando o agente indutor de imunidade da presente invenção for administrado. Os métodos de preparação para misturas ou emulsões de um polipéptido e um adjuvante são bastante conhecidos pelos indivíduos versados na técnica de vacinação.

Ademais, adicionalmente aos adjuvantes descritos acima, os fatores que estimulam a resposta imunológica do sujeito podem ser utilizados como o imunoestimulador descrito acima. Por exemplo, várias citocinas que tem uma propriedade de estimular linfócitos e/ou células apresentadoras de antígeno podem ser utilizadas como o imunoestimulador em combinação com o agente indutor de imunidade da presente invenção. Inúmeras citocinas com capacidade para estimular a resposta imunológica são

tirzáIMOádBI conhecidas por aqueles indivíduos versados na técnica e exemplos das mesmas incluem, mas sem limitação, interleucina-12 (IL-12), GM-CSF, IL-18, interferão-a, interferão-β, interferão, Interferão-γ e ligante Flt3, que foram mostrados para estimular a ação profilática de vacinas. Tais fatores podem também ser utilizados como o imunoestimulador descrito acima e podem estar contidos no agente indutor de imunidade da presente invenção, ou podem ser preparados como uma composição separada para ser utilizada em combinação com o agente indutor de imunidade da presente invenção a ser administrado a um paciente cCélulas apresentadoras de antígeno

Conforme concretamente descrito nos Exemplos abaixo, colocando-se o polipêptido descrito acima na presente invenção em contacto com células apresentadoras de antígeno in vitro, as células apresentadoras de antígeno podem ser produzidas para apresentarem o polipêptido. Isto é, os polipéptidos (a) a (c) descritos acima podem ser utilizados como agentes para tratar células apresentadoras de antígeno. Exemplos das células apresentadoras de antígeno incluem células dendrrticas e células 33, e células dendríticas e células B que têm moléculas MHC classe I são preferencialmente empregadas. Os agentes para tratar células apresentadoras de antígeno significam agentes para pulsar células apresentadoras de antígeno, e, visto que células apresentadoras de antígeno pulsadas podem ter uma habilidade para estimular linfócitos de sangue periférico, as células podem ser utilizadas como uma vacina. Várias moléculas MHC classe I foram identificadas e bem conhecidas. As moléculas MHC em humanos são denominadas HLA. Exemplos de moléculas de HLA classe I incluem HLA-A, HLA-B e HLA-C, mais especificamente, HLA-A1, HLA-A0201, HLA-A02 04, HLA-AQ205, HLA-A0206, HLA-A0207, HLA-All, HLA- A24, HLA.-A31, HLA-A6801, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B2705, HLA- B37, HLA-Cw0401 e HLA-Cw0602.

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As células dendríticas ou células B que têm moléculas MHC classe I podem ser preparadas a partir de sangue periférico por um método bem conhecido. Por exemplo, células dendríticas específicas de tumor podem ser induzidas por células dendríticas indutoras de medula óssea, sangue de cordão umbilical ou sangue periférico de paciente com a utilização do fator estimulante de colónia de macrófago e granulócito (GM-CSF) e IL-3 (ou IL-4) e, depois, adicionando-se um péptido relacionado a tumor ao sistema de cultura.

Administrando-se uma quantidade eficaz de tais células dendríticas, uma resposta desejada para terapia de um cancro da mama pode ser induzida. Como as células a serem utilizadas, medula óssea ou sangue de corda umbilical doado por um indivíduo saudável, ou medula óssea, sangue periférico ou similares do próprio paciente podem ser utilizados. Quando as células autólogas do paciente são utilizadas, a alta segurança pode ser alcançada e espera-se que efeitos colaterais sejam evitados. 0 sangue periférico ou medula óssea podem ser uma amostra fresca, amostra armazenada fria ou amostra congelada. Quanto ao sangue periférico, sangue inteiro pode ser cultivado ou apenas os componentes de leucócito podem ser separados e cultivados, e o último é eficiente e, portanto, preferível. Ademais, dentre os componentes de leucócito, células mononucleares podem ser separadas. Em casos em que as células são originadas a partir da medula óssea ou sangue de corda umbilical, as células inteiras que constituem a medula óssea podem ser cultivadas, ou células mononucleares podem ser separadas das mesmas e cultivadas. 0 sangue periférico, os componentes de leucócito do mesmo e células de medula óssea contêm células mononucleares, células-tronco hematopoiéticas e células dendríticas imaturas, a partir das quais células dendríticas são originadas, e também células positivas de CD4 e similares. Quanto à citocina a

tirzáIMOádBI ser utilizada, o método de produção da mesma não é restringido e citocina de ocorrência natural ou

recombinante ou similares podem ser empregadas contanto que sua segurança e atividade fisiológica foram confirmadas. Preferentemente, uma preparação com qualidade assegurada para utilização medicinal é utilizada numa quantidade mínima necessária. A concentração da citocina (ou citocinas) a ser adicionada não é restringida, contanto que as células dendríticas sejam induzidas e, geralmente, a concentração total da citocina (ou citocinas) é preferencialmente cerca de 10 a 1.000 ng/ml, mais preferencialmente, cerca de 20 a 500 ng/ml. A cultura pode ser realizada com a utilização de um meio bem conhecido geralmente utilizado para cultura de leucócitos. A temperatura de cultivo não é restringida, contanto que a proliferação dos leucócitos seja alcançada, e cerca de 37 °C, isto é, s temperatura do corpo de humanos é mais preferencial. 0 ambiente atmosférico durante a cultura não é restringido, contanto que a proliferação dos leucócitos seja alcançada e, preferencialmente, é permitido que 50 de C02 flua. 0 período de cultivo não é restringido, contanto que um número necessário das células seja induzido com o mesmo e, geralmente, é de 3 dias a 2 semanas. Em relação aos aparelhos utilizados para a separação e cultivo das células, aparelhos adequados, preferencialmente, aqueles cuja segurança quando aplicados a usos medicinais foi confirmada, e cujas operações são estáveis e simples, podem ser empregados. Em particular, quanto ao aparelho de cultivo celular, não apenas os vasos em geral tais como uma placa de Petri, frasco e garrafa, mas também um vaso tipo camada, vaso de múltiplos estágios, garrafa de rolete, garrafa tipo giratória, vaso de cultivo tipo bolsa, coluna de fibra oca e similares podem ser utilizados.

Colocando-se o péptido descrito acima em contacto com as células apresentadoras de antígeno in vitro pode ser

tirzáIMOádBI realizado através de um método bem conhecido. Por exemplo, pode ser realizado pelo cultivo das células apresentadoras de antígeno em um meio de cultura que contém o polipéptido descrito acima. A concentração do péptido no meio não é restringida e, geralmente, é cerca de 1 pg/ml a 100 pg/ml, preferencialmente, cerca de 5 pg/ml a 20 pg/ml. A densidade celular durante o cultivo não é restringida e, geralmente, é cerca de 103 células/ml a 107 células/ml, preferencialmente, cerca de 5 x !04 células/ml a 5 x 106 células/ml. O cultivo pode ser realizado de acordo com um método convencional e, preferencialmente, é realizado a 37 °C em atmosfera de 50 de CQ. O comprimento máximo do péptido que pode ser apresentado sobre a superfície das células apresentadoras de antígeno, geralmente, é de cerca de 30 resíduos de aminoãcido. Portanto, em casos em que as células apresentadoras de antígeno são colocadas em contacto com o polipéptido in vitro, o polipéptido pode ser preparado de modo que seu comprimento não é mais do que cerca de 30 resíduos de aminoãcido, embora o comprimento não seja restringido.

Cultivando-se as células apresentadoras de antígeno na coexistência do polipéptido descrito acima, o polipéptido é incorporado em moléculas de MHC das células apresentadoras de antígeno e apresentado sobre a superfície das células apresentadoras de antígeno. Portanto, com a utilização do polipéptido descrito acima, as células apresentadoras de antígeno isoladas que contêm o complexo entre o polipéptido e as moléculas de MHC podem ser preparadas. Tais células apresentadoras de antígeno podem apresentar o polipéptido contra células T in vivo ou in vitro e, desse modo, induzir e permitir a proliferação de células T citotóxicas específicas do polipéptido.

Colocando-se as células apresentadoras de antígeno preparadas conforme descrito acima que têm o complexo entre o polipéptido descrito acima e as moléculas de MHC em

tirzáIMOádBI contacto com células T in vitro, células T citotóxicas específicas do polipéptido podem ser induzidas e permitidas proliferar. Isso pode ser realizado cocultivando-se as células apresentadoras de antígeno e células T descritas acima num meio líquido. Por exemplo, é possível alcançar o mesmo suspendendo-se as células apresentadoras de antígeno num meio líquido, colocando-se a suspensão em vasos tais como cavidades de uma microplaca, adicionando-se aos mesmos células T e, depois, cultivando-se as células. A razão de mistura das células apresentadoras de antígeno em relação às células T no cocultivo não é restringida e, geralmente, é cerca de 1:1 a 1:100, preferencialmente, cerca de 1:5 a 1:20 em termos da razão entre os números de células. A densidade das células apresentadoras de antígeno a serem suspensas no meio líquido não é restringida e, geralmente, é cerca de 100 a 10.000.000 células/ml, preferencialmente, cerca de 10.000 a 1.000.000 células/ml. Preferencialmente, o cocultivo é realizado a 37 °C em atmosfera de 50 de C02 de acordo com um método convencional. 0 tempo de cultivo não é restringido e, geralmente, é de 2 dias a 3 semanas, preferencialmente, cerca de 4 dias a 2 semanas. Preferencialmente, o cocultivo é realizado na presença de uma ou mais interleucinas tais como IL-2, IL-6, IL-7 e/ou IL-12. Nesse caso, a concentração de IL-2 e IL-7, geralmente, é de cerca de 5 U/ml a 20 U/ml, Geralmente, a concentração de IL-6 é cerca de 500 U/ml a 2.000 U/ml, e a concentração de IL-12 geralmente é de cerca de 5 ng/ml a 20 ng/ml, mas as concentrações das interleucinas não são restringidas às mesmas. Aqui, i!U" indica a unidade de atividade. 0 cocultivo acima pode ser repetido uma vez a diversas vezes adicionando-se células apresentadoras de antígeno frescas. Por exemplo, a operação de descarte do sobrenadante de cultura depois do cocultivo e adicionando-se uma suspensão fresca de células apresentadoras de antígeno para conduzir adicionalmente o cocultivo pode ser

tirzáIMOádBI repetida uma vez a diversas vezes. As condições de cada cocultivo podem ser as mesmas conforme descrito acima.

Através do cocultivo descrito acima, as células T citotóxicas específicas para o polipéptido são induzida e permite-se que as mesmas proliferem. Portanto, com a utilização do polipéptido descrito acima, as células T isoladas podem ser preparadas, as quais se ligam seletivamente ao complexo entre o polipéptido e a molécula de MHC.

Conforme descrito nos Exemplos abaixo, os genes codificadores dos polipéptidos das SEQ ID Nos:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 e 95 são expressos especif icamente em células de cancro da mama de mama, células de leucemia e células de linfoma. Portanto, acredita-se que, nessas espécies de cancro da mama, números significativamente maiores dos polipéptidos das SEQ ID Nos:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 e 95 existam em comparação com células normais.

Quando células T citotóxicas preparadas conforme descrito acima são administradas a um corpo vivo, enquanto uma parte dos polipéptidos que existe em células cancerígenas são apresentados pelas moléculas de MHC sobre as superfícies das células cancerígenas, as células T citotóxicas podem danificar as células cancerígenas com a utilização do polipéptidos apresentados como marcadores. Visto que células apresentadoras de antígeno que apresentam os polipéptidos descritos acima podem induzir e permitir a proliferação de células T citotóxicas específica dos polipéptidos também in vivo, células cancerígenas podem ser danificadas também administrando-se as células apresentadoras de antígeno a um corpo vivo. Isto é, as células T citotóxicas e as células apresentadoras de antígeno preparadas com a utilização do polipéptido também são eficazes como agentes terapêuticos e/ou profiláticos para cancro da mama, de modo similar ao agente indutor de imunidade da presente invenção.

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Em casos em que as células apresentadoras de antígeno isoladas ou células T isoladas descritas acima são administradas a um corpo vivo, Preferencialmente, as mesmas são preparadas tratando-se células apresentadoras de antígeno ou células T colhidas a partir do paciente a ser tratado com o polipéptido (a) a (c) conforme descrito acima a fim de evitar a resposta imunolõgica no corpo vivo que ataca essas células como corpos estranhos.

Preferencialmente, o agente terapêutico e/ou profilático para cancro da mama que compreende como um ingrediente eficaz as células apresentadoras de antígeno ou células T é administrado através de uma rota de administração parenteral tal como administração intravenosa ou intra-arterial. A dose é selecionada adequadamente dependendo do sintoma, do propósito da administração e similares e geralmente é 1 célula a 10.000.000.000.000 células, preferencialmente, 1.000.000 células a 1.000.000.000 células, sendo que a dose é preferencialmente administrada uma vez por diversos dias a uma vez por diversos meses. A formulação pode ser, por exemplo, as células suspensas em salina tamponada fisiológica, e a formulação pode ser utilizada em combinação com outra preparação (ou preparações) anticancro e/ou citocina (citocinas). Ademais, um ou mais aditivos conhecidos no campo da formulação de farmacêuticos podem também ser adicionados. <Vacina de Gene>

Também pela expressão do polinucleótido codificador do polipéptido (a) a (c) no corpo do animal paciente, a produção de anticorpo e células T citotóxicas pode ser induzida no corpo vivo, e um efeito comparável com o obtido no caso de administração de um polipéptido pode ser obtida. Isto é, o agente indutor de imunidade da presente invenção pode ser um que compreenda, como um ingrediente eficaz, um vetor recombinante que tem um polinucleótido codificador do tr^o í yooob l polinucleótido (a) a (c), sendo que o vetor recombinante tem capacidade para expressar o polipéptido num corpo vivo. Tal vetor recombinante com capacidade para expressar um polipéptido antigénico também é denominado vacina de gene. 0 vetor utilizado para a produção de uma vacina de gene não é restringido, contanto que o mesmo seja um vetor com capacidade para expressar um polipéptido numa célula do animal paciente (preferencialmente, numa célula de mamífero) , e possa ser um vetor plasmidial ou um vetor virai, e qualquer vetor conhecido no campo de vacinas de gene pode ser utilizado. 0 polinucleótido tal como DNA ou RNA codificador do polipéptido descrito acima pode ser facilmente preparado, conforme mencionado acima, por um método convencional. A incorporação do polinucleótido no vetor pode ser realizado com a utilização de um método conhecido por aqueles indivíduos versados na técnica.

Preferencialmente, a rota de administração da vacina de gene é uma rota parenteral tal como administração intramuscular, subcutânea, intravenosa ou intra-arterial, e a dose pode ser selecionada adequadamente dependendo do tipo do antígeno e similares e, geralmente, é cerca de 0,1 pg a 100 mg, preferencialmente, cerca de 1 pg a 10 mg em termos do peso da vacina de gene por 1 kg de peso corporal. Métodos com a utilização de um vetor virai incluem aqueles em que um polinucleótido codificador do polipéptido descrito acima é incorporado num vírus RNA ou vírus DNA, tais como um retrovirus, adenovirus, vírus adeno-associado, vírus da herpes, vírus vaccinia, vírus pox, poliovirus ou vírus Sindbis e, depois, o animal paciente é infetado com o vírus resultante. Dentre esses métodos, aqueles com a utilização de um retrovirus, adenovirus, vírus adeno-associado, vírus vaccinia ou similares são especialmente preferenciais.

Exemplos de outros métodos incluem um método em que um plasmídeo de expressão é administrado diretamente de modo tr^o í yooob l intramuscular (método de vacina de DNA), 0 método de lipossoma, método de lipofectin, método de microinjeção, método de fosfato de cálcio e método de eletroporação, e o método de vacina de DNA e método de lipossoma são especialmente preferenciais.

Os métodos para de facto produzir o gene codificador do polipéptido descrito acima utilizado na presente invenção que atuam como um farmacêutico incluem o método in vivo em que o gene é diretamente transfetado no corpo, e o método ex vivo em que um tipo de célula é colhido a partir do animal paciente e o gene e transfetado nas células ex vivo, seguido pela devolução das células ao corpo (Nikkei Science, 1994, abril, páginas 20 a 45; The Pharmaceutical Monthly, 1994, Vol. 36, η- 1, páginas 23 a 48; Experimental Medicine, Edição Extra, 1994, Volume 12, n- 15; E referências citadas nesses artigos e similares) . 0 método in vivo é mais preferencial.

Em casos em que o gene é administrado pelo método in vivo, o gene pode ser administrado através de uma rota de administração apropriada dependendo da doença a ser tratada, sintoma e assim por diante. 0 mesmo pode ser administrado, por exemplo, por administração intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intramuscular ou similares, ou pode ser administrado diretamente na área afetada em que um tumor existe. Em casos em que o gene é administrado pelo método in vivo, o gene pode ser formulado numa preparação tal como uma solução e, em geral, o mesmo é formulado numa solução de injeção ou similares que contêm DNA codificador do péptido descrito acima da presente invenção como um ingrediente eficaz. Um transportador (ou transportadores) comummente utilizados podem ser adicionados aos mesmos conforme exigido. No caso de um lipossoma ou lipossoma de fusão de membrana (lipossoma de vírus Sendai (HVJ)ou similares) que contêm o DNA, o lipossoma pode ser formulado em uma preparação de lipossoma tal como uma suspensão,

tirzáIMOádBI

Preparação congelada ou preparação congelada concentrada de modo centrífugo.

Na presente invenção, "a sequência de base mostrada no SEQ ID N0:1'! inclui não apenas a sequência de base expressamente descrita no SEQ ID N0:1, mas também a sequência complementar à mesma. Portanto, "um polinucleótido que tem a sequência de base mostrada no SEQ ID NO:1" inclui um polinucleótido de filamento único que tem a sequência de base expressamente escrita no SEQ ID NO:1, um polinucleótido de filamento único que tem a sequência de base complementar ao mesmo, e um polinucleótido de filamento duplo composto desses polinucleótidos de filamento único. Quando o polinucleótido codificador do polipéptido utilizado na presente invenção é preparado, qualquer uma de entre essas sequências de base deve ser selecionada adequadamente, e aqueles indivíduos versados na técnica podem facilmente realizar a seleção. cDeteção de Cancro>

Em um método da presente invenção para deteção de cancro da mama de mama e/ou leucemia, expressão do polipéptido utilizado na presente invenção é medida com a utilização de uma amostra separada a partir de um corpo vivo. 0 método para medir a expressão de um polipéptido com a utilização da amostra inclui um método em que um anticorpo contra o polipéptido, sendo que anticorpo é contido na amostra, é medido por imunoensaio (Método 1); um método em que o polipéptido por si contido na amostra é medido por imunoensaio (Método 2); e um método em que mRNA contido na amostra que codifica o polipéptido é medido (Método 3) . No método da presente invenção, a expressão do polipéptido pode ser medida por qualquer desses três métodos. Na presente invenção, o termo "medição" inclui deteção, quantificação e semiquantificaçâo.

Aqui, CD179b foi identificado como um polipéptido que se liga a um anticorpo (anticorpo específico de cancro da tr^o í yooob l mama) que existe especificamente no soro derivado de um cão portador de tumor, pelo método SEREX com a utilização de soro a partir de um paciente canino a partir do qual uma biblioteca de cDNA derivada de cancro da mama de mama canino foi preparada (consultar o Exemplo 1) . Isto é, no corpo vivo de um cão portador de tumor, um anticorpo contra CD179b é especificamente induzido. Portanto, medindo-se também um anticorpo contra CD179b em um corpo vivo portador de tumor, um CD17 9b que expressa cancro da mama pode ser detetado (consultar o Exemplo 7) . Ademais, um cancro da mama canino pode ser detetado também medindo-se CD179b como um antígeno através do Método 2 acima. Ademais, visto que, conforme descrito nos Exemplos abaixo, mRNA codificador do polipéptido antígeno é significativamente mais altamente expresso no cancro da mama, especialmente em células de cancro da mama de mama e de leucemia, do que em tecidos normais (consultar o Exemplo 1) , um cancro da mama canino pode ser detetado também medindo-se o mRNA. Conforme mencionado acima, CD 179b é conhecido por ser expresso sobre as superfícies de membrana de células precursoras de células B (células pré-B) e, portanto, relata-se que CD179b é expresso em células de leucemia (leucemia de célula pré-B) derivadas por cancerização de células pré-B, mas o facto de que células de leucemia diferentes das células de leucemia de célula pré-B e células de cancro da mama de mama mostrarem a expressão de CD179b foi constatado primeiro na presente invenção. Consequentemente, a deteção de leucemia além das células de leucemia de célula pré-B e cancro da mama de mama se tornou possível investigando-se a expressão de CD179b.

No Método 1 acima, a medição do anticorpo específico de cancro da mama que pode existir na amostra pode ser facilmente realizada por imunoensaio com a utilização de uma substância antigénica que reage imunologicamente com o anticorpo. 0 imunoensaio por si é um método convencional

tirzáIMOádBI bem conhecido conforme explicado em detalhes abaixo. Como a substância antigénica que pode ser utilizada no imunoensaio, o polipéptido (a) a (c) pode ser utilizado. Visto que anticorpos têm reatividade cruzada, uma molécula pode ser ligada a um anticorpo que é induzido contra outro imunogénio, contanto que a molécula tenha qualquer estrutura na mesma que é similar ao epítopo do imunogénio. Por exemplo, os polipéptidos que tem alta homologia de sequência de aminoácidos entre si frequentemente têm epítopos com estruturas similares e, em tais casos, ambos os polipéptidos podem ter a mesma antigenicidade. Conforme concretamente descrito nos Exemplos abaixo, o polipéptido derivado de humano de SEQ ID NO: 3 reage imunologicamente com o anticorpo induzido no corpo de um cão portador de tumor. Portanto, no Método 1 da presente invenção, qualquer fator homólogo de mamífero pode ser utilizado como um antígeno no imunoensaio.

As substâncias antigénicas que têm um peso molecular grande e uma estrutura complexa, tal como proteínas, Geralmente têm uma pluralidade de locais com diferentes estruturas em sua superfície. Portanto, tal substância antigénica induz uma pluralidade de tipos de anticorpos que reconhecem respetivamente cada um dos locais num corpo vivo. Isto é, um anticorpo induzido num corpo vivo contra uma substância antigénica tal como uma proteína é um anticorpo policlonal, isto é uma mistura de uma pluralidade de tipos de anticorpos. Pode ser observado que, 11a presente invenção, o termo "anticorpo policlonal" significa um anticorpo que existe no soro derivado de um corpo vivo que tem uma substância antigénica no mesmo e é induzido no corpo vivo contra a substância antigénica. A medição do anticorpo numa amostra pode facilmente ser realizada pelo imunoensaio com a utilização do polipéptido descrito acima como um antígeno. Os imunoensaios por si são conhecidos na técnica e incluem,

tirzáIMOádBI quando classificados com base no modo de reação, o método de sanduíche, método de competição, método de aglutinação, técnica Western blot e similares. Quando classificados com base na identificação, os imunoensaios incluem radioimunoensaio, Imunoensaio de fluorescência, imunoensaio de enzima, imunoensaio de biotina e similares, e o imunoensaio do anticorpo descrito acima pode ser realizado por qualquer um desses imunoensaios. Embora não restringido, preferencialmente, o ELISA sanduíche e o método de aglutinação podem ser utilizados como um imunoensaio do anticorpo acima na presente invenção, visto que esses métodos são simples e não exigem um aparelho de larga escala. Em casos em que uma enzima é utilizada como uma identificação de um anticorpo, a enzima utilizada não é particularmente restringida contanto que a mesma satisfaça tais condições de que o número de rotatividade seja alto, de que a enzima seja estável mesmo quando a mesma está ligada a um anticorpo, e de que a mesma colore especificamente seu substrato e similares. Por exemplo, enzimas utilizadas num imunoensaio de enzima comum tal como peroxidase, β-galactosidase, Fosfatase alcalina, glucose oxidase, acetilcolinesterase, Glucose-6-fosfato desidrogenase, e malato desidrogenase podem ser utilizadas. Inibidores de enzima, coenzimas e similares podem também ser utilizados. A ligação dessas enzimas com um anticorpo pode ser realizada por um método conhecido com a utilização de um agente de reticulação tal como um composto de maleimida. Como um substrato, substâncias conhecidas podem ser utilizadas dependendo do tipo da enzima utilizada. Por exemplo, em casos em que peroxidase é utilizada como a enzima, 3,3,,5,5,_tet.rametilbenzidina pode ser utilizada; e em casos em que a fosfatase alcalina é utilizada como a enzima, para-nitrofenol ou similares podem ser utilizados. Como o radioisótopo, aqueles utilizados em um radioimunoensaio comum tal como i23I ou 3H podem ser

tirzáIMOádBI utilizados. Como a matriz fluorescente, uma utilizada numa técnica de anticorpo fluorescente comum, tal como isotiocianato de fluoresceína (FITC), isotiocianato de tetrametilrodamina (TRITC) ou similares podem ser utilizados.

Esses imunoensaios por si são conhecido na técnica e, portanto, não é necessário explicar esses imunoensaios no presente relatório descritivo. Resumidamente, em imunoensaios sanduíche, por exemplo, o polipéptido mencionado acima utilizado como um antígeno é imobilizado em um fase de sólido e, depois, reagido com uma amostra tal como um soro. Depois de lavar a fase de sólido, o resultante é reagido com um anticorpo secundário apropriado. Depois de lavar a fase de sólido, o anticorpo secundário ligado à fase de sólido é medido. No método para detetar cancro da mama de acordo com a presente invenção, é preferível imobilizar um polipéptido antígeno numa fase de sólido, devido ao facto de a imobilização numa fase de sólido tornar possível remover facilmente o anticorpo secundário não ligado. Como o anticorpo secundário, por exemplo, anticorpo IgG anticão pode ser utilizado em casos em que a amostra é obtida a partir de cães. 0 anticorpo secundário ligado a uma fase de sólido pode ser medido através da identificação do anticorpo secundário com uma substância de identificação exemplificada acima. A quantidade medida desse modo do anticorpo secundário corresponde à quantidade do anticorpo mencionado acima numa amostra de soro. Em casos em que uma enzima é utilizada como a substância de identificação, a quantidade do anticorpo pode ser medida adicionando-se um substrato que é decomposto pela atividade enzimãtica para desenvolver uma cor e, depois, medir oticamente uma quantidade de substrato decomposto. Em casos em que um radioisótopo é utilizado como a substância de identificação, a quantidade de radiação do radioisótopo pode ser medida com um contador de

tirzáIMOádBI cinti 1 açao ou. similares .

No Método 2 da presente invenção, o polipéptido mostrado no SEQ ID NO:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95 é medido, sendo que o polipéptido pode estar contido na amostra obtida a partir de um corpo vivo. Conforme explicado acima, a abundância do anticorpo específico de cancro da mama que reage imunologicamente com o polipéptido mostrado no SEQ ID NO:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95 ou um fator homólogo do mesmo é significativamente alto em pacientes com cancro da mama, o que indica que a produção do polipéptido ou de um fator homólogo do mesmo, que é o antígeno do anticorpo específico de cancro da mama, é significativamente alta nos pacientes com cancro da mama. Portanto, de modo similar ao Método 1 acima, cancros num corpo vivo podem ser detetados medindo-se o polipéptido mostrado no SEQ ID NO:3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95 ou um fator homólogo do mesmo. A medição do polipéptido numa amostra pode facilmente ser realizada por um imunoensaio conhecido. Especificamente, por exemplo, o polipéptido que tem a sequência de aminoãcidos mostrada no ID de número ímpar das SEQ ID Nos: 3 a 95 ou um fator homólogo do mesmo que pode existir numa amostra pode ser medido preparando-se um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que reage imunologicamente com o polipéptido que tem a sequência de aminoãcidos mostrada no ID de número ímpar das SEQ ID Nos: 3 a 9 5 o um fator homólogo do mesmo e, depois, realizando-se um imunoensaio com a utilização do anticorpo ou fragmento preparado do mesmo. 0 imunoensaio por si é um método convencional conhecido conforme descrito acima. 0 termo "fragmento de ligação de antígeno" no presente documento significa um fragmento de anticorpo tal como o fragmento Fab ou o fragmento F(ab')2 contido num anticorpo molécula, que tem uma capacidade de ligação a um antígeno. Embora o anticorpo possa ser um anticorpo policlonal ou

tirzáIMOádBI anticorpo monoclonal, um anticorpo monoclonal é preferível para imunoensaios e similares, devido ao facto de que uma alta reprodutibilidade é alcançada com o mesmo. Métodos para preparar um anticorpo policlonal ou monoclonal com a utilização de um polipéptido como um imunogénio são conhecidos, e a preparação pode ser facilmente realizada por um método convencional. Por exemplo, anticorpos contra o polipéptido podem ser induzidos por imunização de um animal com um imunogénio, o polipéptido conjugado a uma proteína transportadora tal como hemocianina de lapa californiana (KLH) ou caseína, junto com um adjuvante. Depois, as células produtoras de anticorpo tal como células de baço ou linfócitos são colhidas a partir do animal imunizado e fundidas com células de mieloma para preparar hibridomas. Dentre os hibridomas, um produtor de um anticorpo que se liga ao polipéptido mostrado no SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95 ou um fator homólogo do mesmo é selecionado e proliferado e, depois o anticorpo monoclonal cujo antígeno correspondente é a proteína mencionada acima pode ser colhido a partir do sobrenadante de cultura. 0 método descrito acima é um método convencional bem conhecido.

No Método 3 da presente invenção, é medido o CD179b codificador de mRNA que pode estar contido numa amostra obtida a partir de um vivo . Conforme concretamente descrito nos Exemplos abaixo, o nível de expressão de CD179b codificador de mRNA é significativamente alto em cancro da mama, especialmente, células de cancro da mama de mama e leucemia. Portanto, cancros num corpo vivo podem ser detetados medindo-se o mRNA numa amostra.

No método de deteção da presente invenção, é determinado se o corpo vivo do paciente sofre de cancro da mama de mama e/ou leucemia ou não ou similares com base no nível de expressão do polipéptido medido conforme descrito acima. Embora a deteção de cancro da mama possa ser

tirzáIMOádBI alcançada simplesmente medindo-se a expressão do polipéptido no corpo vivo do paciente, é preferível obter o valor de referência normal determinando-se o nível de expressão do polipéptido (a quantidade do anticorpo, polipéptido ou mRNA) numa ou mais amostras a partir de indivíduos saudáveis para comparar o valor medido no corpo vivo do paciente com o valor de referência normal, com o propósito de aumentar a precisão de deteção. A fim de além aumentar adicionalmente a precisão de deteção, o valor de referência de cancro da mama pode ser obtido determinando-se o nível de expressão do polipéptido em amostras obtidas a partir de muitos pacientes que se revelaram como portadores de cancro da mama para comparar o valor medido do corpo vivo do paciente tanto com o valor de referência normal quanto com o valores de referência de cancro da mama. Os valores de referência mencionados acima podem ser determinados expressando-se o nível de expressão do polipéptido em cada amostra em valores e calculando-se o valor médio do mesmo. Os valores de referência normal e de cancro da mama podem ser determinados previamente medindo-se o nível de expressão do polipéptido em muitos sujeitos saudáveis e com cancro da mama. Portanto, quando o valor medido é comparado com os valores de referência no método da presente invenção, os valores de referência podem ser aqueles predeterminados. 0 método de deteção da presente invenção pode ser realizado em combinação com a deteção com a utilização de outros antígenos de cancro da mama e/ou marcadores de cancro da mama de modo que a precisão de deteção de cancros possa ser mais aprimorada.

Através do método de deteção da presente invenção, cancro da mama de mama e/ou leucemias num corpo vivo pode ser detetado. 0 método da presente invenção pode detetar mesmo um tumor pequeno invisível ou um tumor que existe numa parte profunda de um corpo e, portanto, o método é

tirzáIMOádBI útil para deteção prematura de cancro da mama. Ademais, aplicando-se o método de deteção da presente invenção a pacientes no período seguinte depois da terapia para cancro da mama, o cancro da mama recorrente, se existir, pode ser detetado em seu estágio prematuro.

Se mais células cancerígenas que expressam o polipéptido prescrito a ser medido 11a presente invenção proliferarem num corpo vivo de portador de tumor, os mais polipéptidos e mRNAs codificadores dos mesmos se acumulam no corpo, o que causa a quantidade aumentada dos anticorpos contra os polipéptidos mencionados acima no soro. Por outro lado, quanto mais as células cancerígenas diminuem, mais os polipéptidos e mRNAs codificadores dos mesmos acumulados diminuem no corpo vivo, o que causa a quantidade diminuída dos anticorpos contra os polipéptidos mencionados acima no soro. Portanto, se o nível de expressão do polipéptido prescrito for alto, pode ser determinado que o crescimento tumoral e/ou metástase de cancro da mama ocorreu, isto é, o estágio de progressão de cancro da mama está avançado.

Ademais, conforme mostrado no Exemplo abaixo, quando comparado entre os mesmos tipos de tumores, um maligno produz quantidade significativamente maior dos anticorpos do que um benigno. Portanto, se o nível de expressão dos polipéptidos prescritos for alto, pode ser determinado que o grau de malignidade de cancro da mama é alta. Isto é, o grau de malignidade de cancro da mama pode também ser detetado pelo método da presente invenção.

Além disso, o efeito da terapia para cancro da mama pode ser monitorado com base no aumento ou diminuição no nível de expressão dos polipéptidos prescritos. Portanto, observando-se o nível de expressão dos polipéptidos mencionados acima num indivíduo durante ou depois da terapia para cancro da mama, um indício para avaliar o quanto o agente anticancro administrado foi eficaz, ou se uma porção tumoral ainda existe no paciente depois da

tirzáIMOádBI extirpação tumoral pode ser obtido, assim como um indício para contatar metãstase e/ou recorrência o mais cedo possível pode ser obtido durante o acompanhamento. 0 tratamento apropriado de cancro da mama resulta na diminuição do nível de expressão dos polipéptidos em comparação com o estado de portador de tumor antes da terapia. Em tal caso, pode ser avaliado que o efeito da terapia que foi (está sendo) realizada no corpo vivo é/foi bom. Em casos em que o nível de expressão dos polipéptidos aumenta ou é mantido, ou diminui uma vez e depois aumenta, pode ser avaliado que o efeito da terapia não é bom o suficiente. Isso pode ser uma base útil para a seleção de um método terapêutico, tal como decisão para mudar o método terapêutico ou para mudar a dose de um agente anticancro.

Cancros a serem detetados pelo método da presente invenção são aqueles que expressam CD179b (excluindo-se tumores de célula pré-B), e exemplos dos mesmos incluem cancro da mama de glândula mamária, cancro da mama de glândula mamária combinado, tumor misto maligno da glândula mamária, adenocarcinoma papilar intraductal e/ou leucemias (preferencialmente, leucemia linfocítica crónica que exclui aquelas do tipo de célula pré-B). Os corpos vivos aos quais o método da presente invenção se aplicam são mamíferos, preferencialmente, humanos, cães e gatos. A amostra a ser submetida ao método da presente invenção inclui fluidos corporais tais como sangue, soro, plasma, ascites e efusão pleural; tecidos e células. Em particular, soro, plasma, ascites e efusão pleural podem ser preferencialmente utilizados no Método 1 e Método 2 acima. Uma amostra de tecido e amostra de célula são preferenciais no caso do Método 3 acima em que mRNA é medido. 0 polipéptido utilizado como um antígeno para o imunoensaio no Método 1 pode ser fornecido como um reagente para detetar cancro da mama de mama e/ou leucemia. 0

tirzáIMOádBI reagente pode consistir apenas no polipéptido mencionado acima, ou pode conter vários aditivos úteis para estabilizar o polipéptido e similares. 0 reagente pode também ser fornecido na forma de ser imobilizado em uma fase de sólido tal como uma placa ou membrana. 0 anticorpo ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo que reage imunologicamente com o polipéptido de SEQ ID MO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, ..., 93 ou 95 o um fator homólogo do mesmo, que é utilizado para medir o polipéptido ou o fator homólogo do mesmo por imunoensaio no Método 2, pode também ser fornecido como um reagente para detetar cancro da mama. 0 reagente pode também consistir apenas do anticorpo mencionado acima ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou pode conter vários aditivos úteis para estabilizar o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo e similares. 0 anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo pode também estar na forma de ser conjugado com um metal tal como manganês ou ferro. Visto que tal anticorpo conjugado com metal ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo se acumula em um local em que uma grande quantidade de proteína de antígeno existe quando administrado a um corpo, a existência de células cancerígenas que produzem a proteína de antígeno pode ser detetada medindo-se o metal por MRI ou similares.

Além disso, o polinucleótido descrito acima para deteção de cancro da mama utilizado para medir mRNA no Método 3 pode também ser fornecido como um reagente para detetar cancro da mama. 0 reagente para detetar cancro da mama pode também consistir apenas do polinucleótido, ou pode conter vários aditivos úteis para estabilizar o polinucleótido e similares. Preferencialmente, o polinucleótido para deteção de cancro da mama contido no reagente é um iniciador o uma sonda.

EXEMPLOS A presente invenção será descrita agora mais

tirzáIMOádBI concretamente através dos Exemplos.

Exemplo 1: Aquisição de Proteína de Antígeno de Cancro Inovadora através do Método SEREX

(1) Preparação de Biblioteca de cDNA A partir de um tecido cancerígeno de glândula mamária removido por cirurgia, RNA total foi extraído pelo método de ácido, guanidina, fenol, clorofórmio, e RNA poli(A)+ foi purificado com a utilização do Kit de purificação de mRNA 01igotex-dT30 (fabricado por Takara Shuzo Co., Ltd.) de acordo com o protocolo descrito nas instruções anexas.

Com a utilização do mRNA (5 pg) obtido, uma biblioteca de fago de cDNA derivada de cancro da mama de glândula mamária canino foi sintetizada. A preparação da biblioteca de fago de cDNA foi realizada com a utilização de Kit de Síntese de cDNA, Kit de Síntese de ZAP-cDNA e Kit de Clonagem de ZAP-cDNA Gigapack III Gold (fabricado por STRATAGENE) de acordo com os protocolos anexados aos kits. 0 tamanho da biblioteca de fago de cDNA preparada foi 2,99 x 10° pfu/ml. (2) Exame da Biblioteca de cDNA com Soro

Com a utilização da biblioteca de fago de cDNA derivado de cancro da mama de glândula mamária canino preparada conforme descrito acima, o rastreio imunológico foi realizado. Mais particularmente, E. coli (XLl-Blue MRF') hospedeiro foi infetado com a biblioteca de modo que 2340 clones foram incluídos em uma placa de agarose NZY de Φ90 x 15 mm, seguido pelo cultivo a 42 °C por 3 a 4 horas para permitir a formação de placas. A placa foi coberta com uma membrana de nitrocelulose (Hybond C Extra; Fabricada por GE Healthcare BioScience) impregnada com IPTG (isopropil-B-D-tiogalactósido) a 37 °C por 4 horas, para permitir a indução e expressão de proteínas, desse modo, transferindo as proteínas para a membrana. Posteriormente, a membrana foi recuperada e encharcada em TBS (10 mM de Tris-HCl, 150 mM de NaCl pH 7,5) suplementado com 0,50 de

tirzáIMOádBI leite seco desnatado, seguido pela agitação a 4 °C durante uma noite para suprimir reações não específicas. Permitiu-se que esse filtro reagisse com soro de paciente canino diluído 500 vezes em temperatura ambiente por 2 a 3 horas.

Como o soro de paciente canino soro descrito acima, um total de 3 amostras de soro foram utilizadas as quais foram colhidas a partir de cada cão do qual o cancro da mama de glândula mamária acima foi removido e outro paciente canino com cancro da mama de glândula mamária. Esses soros foram armazenados a -80 °C e pré-tratados e pré-tratados imediatamente antes do utilização. 0 pré-tratamento dos soros foi realizado pelos seguinte método. Isto é, E. coli (XLl-BLue MRF') hospedeiro foi infetado com fago de Expressão ZAP λ em que nenhum gene exógeno foi inserido e cultivado numa placa NZY a 37 °C durante a noite. Subsequentemente, 0,2 M de tampão de NaHC03 (pH 8,3) que contém 0,5 M de NaCl foi adicionado à placa, e a placa foi deixada descansar a 4 °C por 15 horas, seguido pela recuperação do sobrenadante como um extrato de E. coli/fago. Posteriormente, o extrato de E. coli/fago recuperado foi passado através de uma coluna de NHS (fabricada pela GE Healthcare BioScience) para imobilizar as proteínas derivadas do E. coli/fago. 0 soro do paciente canino foi passado através dessa coluna imobilizada por proteína e foi permitido reagir com as proteínas, desse modo, remover anticorpos que adsorvem à E. coli e ao fago do soro. A fração de soro passada através da coluna sem ser adsorvida foi diluída 500 vezes com TBS suplementado com 0,50 de leite seco desnatado, e a diluição resultahe foi utilizada como um material para o rastreio imunolõgico. A membrana à qual o soro tratado desse modo e as proteínas de fusão descritas acima foram blotadas foi lavada com TBS-T (0,050 de Tween 20/TBS) 4 vezes, ese permitiu que IgG anticão de cabra (IgG-h+I anticão de Cabra conjugado com HRP; fabricado por BETHYL Laboratories, Inc.) tr^o í yooob l que foi diluído 5000 vezes com TBS suplementado com 0,50 de leite seco desnatado, como um anticorpo secundário, Reagisse à temperatura ambiente por 1 hora. A deteção foi realizada por uma reação de coloração enzimãtica com a utilização da solução de reação NBT/BCIP (fabricada por Roche), e colónias cujas posições eram idênticas àquelas de locais positivos da reação de coloração da reação de coloração foram colhidas a partir da placa de agarose NZY de Φ90 x 15 mm e dissolvidas em 500 μΐ de tampão SM (100 mM de NaCl, 10 mM de MgClS04, 50 mM de Tris-HCl, 0,010 de gelatina, pH 7,5). 0 segundo e terceiro rastreios foram realizados repetindo-se o mesmo método conforme descrito acima até as colónias positivas na reação de coloração se tornarem colónias únicas, desse modo, isolando-se 45 clones positivos depois do rastreio de 92.820 clones de fago reativos com IgG no soro. (3) Busca de Homologia de Genes de Antígeno Isolados

Para submeter os 45 clones positivos isolados pelo método acima método à análise de sequência, uma operação para converter o vetor de fago a um vetor de plasmídeo foi realizada. Mais particularmente, 200 μΐ de uma solução preparada de modo que o E. coli (XLl-Blue MRF') hospedeiro fosse contido a uma absorbância OD600 de 1,0; 250 μΐ da solução de fago purificada e 1 μΐ de fago auxiliar ExAssist (fabricado por STRATAGENE) forma misturados e permitiu-se que a mistura resultante reagisse a 37 °C por 15 minutos, seguido pela adição de 3 ml de caldo de LB ao mesmo e cultivo do resultante a 37 °C por 2,5 a 3 horas. Isso foi imediatamente seguido por 20 minutos de incubação em um banho de água a 70 °C e centrifugação a 1000 xg por 15 minutos, depois disso o sobrenadante foi colhido como uma solução de famegídeo. Subsequentemente, 200 μΐ de uma solução preparada de modo que o E. coli (SOLR) hospedeiro de famegídeo fosse contido a uma absorbância OD500 de 1,0 e 10 μΐ da solução de famegídeo purificado foram misturados,

tirzáIMOádBI e permitiu-se que a mistura resultante reagisse a 37 °C por 15 minutos, seguido por chapeamento de uma alíquota de 50 μΐ do resultante em meio ágar de LB suplementado com ampicilina (50 pg/ml de concentração final) e cultivo a 37 °C durante uma noite. As colónias únicas do SOLR transformado foram colhidas e cultivadas em meio de LB suplementado com ampicilina (50 pg/ml de concentração final) a 37 °C, seguido pela purificação de DNAs de plasmídeo que têm insertos de interesse com a utilização de Kit Miniprep de plasmídeo QIAGEN (fabricado por QIAGEN).

Cada plasmídeo purificado foi submetido à análise da sequência de comprimento completo do inserto pelo método de caminhada de iniciador com a utilização do iniciador T3 mostrado no SEQ ID NO:96 e do iniciador T7 mostrado no SEQ ID NO:97. Através dessa análise de sequência, as sequências genéticas mostradas nos IDs de número par das SEQ ID Nos:4 a 92 foram obtidas. Com a utilização das sequências de base e das sequências de aminoácidos (IDs de número ímpar das SEQ ID Nos: 5 a 93) desses genes, a busca de homo log ia contra genes conhecidos foi realizada com a utilização de um programa de busca de homologia BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/), e, como resultado, foi revelado que todos os 45 genes obtidos foram aqueles codificadores de CD179b. As homologias dentre os 45 genes foram 94 a 99% em termos das sequências de base e 96 a 99% em termos das sequências de aminoácidos. As homologias entre esses genes e o gene codificador de um fator homólogo a humano foram 62 a 82% em termos das sequências de base e 69 a 80% em termos das sequências de aminoácidos, na região traduzida para uma proteína. A sequência de base do fator homólogo a humano é mostrada no SEQ ID NO: 1, e as sequências de aminoácidos do fator homólogo a humano são mostradas no SEQ ID NOs:2 e 3. Ademais, as homologias entre esses genes e o gene codificador de um fator homólogo de bovino foram de 68 a 82% em termos das sequências de base e fcrQúO í yooob l 56 a 770 em termos das sequências de aminoãcidos, a região traduzida para uma proteína. A sequência de base do fator homólogo de bovino é mostrada no SEQ ID NO :94, e a sequência de aminoãcidos do fator homólogo de bovino é mostrada no SEQ ID NO:95. A homologia entre o gene codificador do fator homólogo a humano e o gene codificador do fator homólogo de bovino foi 620 em termos das sequências de base e 720 em termos das sequências d aminoãcidos, na região traduzida para uma proteína. (4) Análise de Expressão em Vários Tecidos

As expressões dos genes obtidas pelo método acima em tecidos normais de canino e humano e várias linhagens celulares foram investigadas pelo método RT-PCR (Transcrição Reversa -PCR). A reação de transcrição reversa reação foi realizada conforme a seguir. Isto é, de 50 a 100 mg de cada tecido ou células de 5 a 10 x 10b de cada linhagem celular, o RNA total foi extraído com a utilização do reagente TRIZOL (fabricado por INVITROGEN) de acordo com o protocolo descrito nas instruções anexas. Com a utilização do RNA total, o cDNA foi sintetizado pelo Sistema de Síntese de Primeiro Filamento Sobrescrito para RT-PCR (fabricado por INVITROGEN) de acordo com o protocolo descrito nas instruções anexas. Como os cDNAs de tecidos normais humanos (cérebro, hipocampo, testículos, cólon e placenta), cDNA de Fundo Génico (fabricado por INVITROGEN), cDNA de QUICK-Clone (fabricado por CLONETECH) e Biblioteca de cDNA de Inserto Grande (fabricado por CLONETECH) foram utilizados. A reação de PCR foi realizada conforme a seguir, com a utilização de iniciadores específicos para os genes caninos obtidos (mostrados no SEQ ID NOs:98 e 99) e seu gene homólogo de humano (mostrado no SEQ ID NOs:lGO e 101). Isto é, os reagentes e um tampão anexo foram misturados de modo que concentrações/quantidades de 0,25 μΐ de uma amostra preparada pela reação de transcrição reversa, 2 μΜ de cada um dos iniciadores acima, 0,2 mM de fcrQúO í yooob l cada um dos dNTPs e 0,65 U ExTaq polimerase (fabricado por Takara Shuzo Co., Ltd.) foram alcançados num volume total de 25 μΐ, e a reação foi realizada com 30 ciclos de 94 °C por 3 0 segundos, 60 °C por 3 0 segundos e 72 °C por 3 0 segundos com a utilização de um Thermal Cycler (fabricado por BIO RAD). Os iniciadores descritos acima específicos para os genes que têm as sequências de base mostradas no SEQ ID NOs: 98 e 99 foram para amplificação das posições 32 a 341 na sequência de base mostrada no SEQ ID N0:4, e para amplificação da região comum para todos os genes de GDI79b canino mostrados nos IDs de número par das SEQ ID Nos: 4 a 92. Ademais, os iniciadores específicos para genes que têm as sequências de base mostradas no SEQ ID NOs :100 e 101 foram para a amplificação das posições 216 a 738 na sequência de base mostrada no SEQ ID NO: 1. Como controlo para comparação, iniciadores específicos para GAPDH (mostrados no SEQ ID NOs:102 e 103) foram utilizados ao mesmo tempo. Como um resultado, conforme mostrado na Figura 1, os genes caninos obtidos não mostraram expressão em tecidos caninos normais, mas mostraram forte expressão em tecidos de cancro da mama de mama canino. Em termos de expressão do gene homólogo de humano, a medula óssea foi o único tecido normal humano em que sua expressão foi confirmada, mas, em células cancerígenas humanas, sua expressão foi detetada em linhagens celulares de leucemia linhagens celulares de cancro da mama de mama, de modo que a expressão específica de CD179b nas linhagens celulares de leucemia e nas linhagens celulares de cancro da mama foi confirmada.

Na Figura 1, o numeral de referência 1 no ordenado representa o padrão de expressão do gene identificado conforme descrito acima, e o numeral de referência 2 representa o padrão de expressão do gene GAPDH como o controlo para comparação.

Exemplo 2: Preparação de Proteína de Antígeno de Cancro

tirzáIMOádBI

Inovadora de Humano e Canino (1) Preparação de Proteína Recombinante

Com base no gene de SEQ ID NO: 4 obtido no Exemplo 1, uma proteína recombinante foi preparada pelo seguinte método. Isto é, reagentes e um tampão anexo foram misturados de modo que as concentrações/quantidades de 1 μΐ do vetor preparado a partir da solução de fagémido obtida no Exemplo 1 e submetidos à análise de sequência, 0,4 μΜ de cada dos tipos de iniciadores que tem locais de restrição Ndel e Kpnl (descritos no SEQ ID N0s:lQ4 e 105), 0,2 mM de dNTP, e 1,25 U de PrimeSTAR HS polimerase (fabricado por Takara Shuzo Co. , Ltd.) foram alcançados num volume total de 50 μΐ, e PCR foi realizado com 30 ciclos de 98 °C por 10 segundos e 68 °C por 40 segundos com a utilização de um Thermal Cycler (fabricado por BIO RAD) . Os dois tipos de iniciadores descritos acima foram aqueles para a amplificação da região codificadora dos aminoácidos 5- a 120£ na sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO: 5. Depois do PCR, o DNA amplificado foi submetido à eletroforese com a utilização de 2® de gel de agaree, e um fragmento de DNA de cerca de 350 bp foi purificado com a utilização de Kit de Extração de Gel QIAquick (fabricado por QIAGEN). 0 fragmento de DNA purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (fabricado por Invitrogen). E. coli foi transformado com o produto de ligação resultante, e os plasmídeos foram recuperados depois disso, seguido pela confirmação, por sequenciamento, de que a sequência do fragmento de gene amplificado corresponde à sequência de interesse. 0 plasmídeo que tem a sequência que corresponde à sequência de interesse foi tratado com enzimas de restrição Ndel e Kpnl e purificado com a utilização do Kit de Extração de Gel QIAquick, seguido pela inserção da sequência genética de interesse num vetor de expressão para E. colir pET30b (fabricado por Novagen) que foi tratado com

tirzáIMOádBI as enzimas de restrição Ndel e Kpnl. 0 utilização desse vetor permite a produção de uma proteína recombinante de fusão de etiqueta His. E. coli para expressão, BL21 (DE3) foi transformado com esse plasmídeo e a expressão da proteína de interesse foi induzida em E. coli com 1 mM de IPTG.

Por outro lado, com base no gene de SEQ ID NO: 1, uma proteína recombinante do gene homólogo de humano foi preparada pelo seguinte método. Os reagentes e um tampão anexado foram misturados de modo que concentrações/quantidades de 1 μΐ do cDNA preparado no Exemplo 1 cuja expressão poderia ser confirmada pelo método RT-PCR em cDNAs a partir de vários tecidos/células, 0,4 μΜ de cada um dos dois tipos de iniciadores que têm locais de restrição EcoRI e Sail (descritos no SEQ ID NOs:106 e 107), 0,2 mM de dNTP, e 1,2 5 U de PrimeSTAR HS polimerase (fabricado por Takara Shuzo Co., Ltd.) foram alcançados num volume total de 50 μΐ, e PCR foi realizado com 30 ciclos de 98 °C por 10 segundos e 68 °C por 40 segundos com a utilização de um Thermal Cycler (fabricado por BIO RAD). Os dois tipos descritos acima de iniciadores foram aqueles para amplificação do comprimento total da sequência de aminoãcidos mostrada no SEQ ID NO: 3. Depois do PCR, o DNA amplificado foi submetido à eletroforese com a utilização de 2% de gel de agarose, e um fragmento de DNA de cerca de 540 bp foi purificado com a utilização de Kit de Extração de Gel QIAquick (fabricado por QIAGEN). 0 fragmento de DNA purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (fabricado por Invitrogen). E. coli foi transformado com o produto de ligação resultante, e os plasmídeos foram recuperados depois disso, seguido pela confirmação, por sequenciamento, de que a sequência do fragmento de gene amplificado corresponde à sequência de interesse. 0 plasmídeo que tem a sequência que correspondeu à sequência de interesse foi tratado com enzimas de

tirzáIMOádBI restrição EeoRI e SalI e purificado com a utilização do Kit de Extração de Gel QIAquick, seguido pela inserção da sequência genética de interesse num vetor de expressão para E. coli, pET3Ga (fabricado por Novagen) que foi tratado com enzimas de restrição EcoRI e Sail. A utilização desse vetor permite a produção de uma proteína recombinante de fusão de etiqueta His. E. coli para expressão, BL21 (DE3) foi transformado com esse plasmídeo e a expressão da proteína de interesse foi induzida em E. coli com 1 mM de IPTG. (2) Purificação de Proteína Recombinante

As células de E. coli recombinant.es obtidas acima que expressam SEQ ID N0:1 e SEQ ID NO:4, respetivamente, foram cultivadas em meio de LB suplementado com 3 0 pg/rrtl de canamicina a 37 °C até que a absorbância a 600 nm alcançou cerca de 0,7; e depois isopropil-i3-D-l-tiogalactopiranósido foi adicionado ao mesmo de modo que sua concentração final deveria ser 1 mM, seguido pelo cultivo das mesmas a 30 °C por 20 horas. Subsequentemente, as células foram colhidas por centrifugação a 4.800 rpm por 10 minutos. 0 pélete das células foi suspenso em salina tamponada com fosfato e submetido adicionalmente à centrifugação a 4.800 rpm por 10 minutos para lavar as células.

As células foram suspensas em salina tamponada com fosfato e submetidas a sonicação em gelo. A solução de E. coli foi centrifugada a 7.000 rpm por 20 minutos para obter o sobrenadante como a fração solúvel e o precipitado como a fração insolúvel. A fração insolúvel foi suspensa em 4% de solução de Triton-X100 e centrifugada a 7.000 rpm por 20 minutos. Essa operação foi repetida duas vezes e uma operação de remoção de proteases foi realizada. 0 resíduo foi suspenso em 2 0 mM de tampão de fosfato (pH 8,0) que contém 6 M de cloridrato de guanidina, e a suspensão resultante foi deixada repousar a 4 °C por 20 horas para desnaturar as proteínas. Posteriormente, a

tirzáIMOádBI suspensão foi centrifugada a 7.000 rpm por 20 minutos, e a fração solúvel obtida foi colocada numa coluna quelada de níquel preparada por um método convencional (transportador: Sepharose Quelante (marca registrada) Fast Flow (GE Health Gare); volume de coluna: 5 ml; tampão de equilíbrio: 20 mM de tampão de fosfato (pH 8,0) que contém 6 M de cloridrato de guanidina). A fração que foi não adsorvida na coluna foi lavada com 10 volumes de coluna de 2 0 mM de tampão de fosfato (pH 8,0) que contém 6 M de cloridrato de guanidina e 20 mM de tampão de fosfato (pH 8,0) que contém 10 mM de imidazol, e a eluição foi imediatamente realizada com um gradiente de densidade de quatro etapas de 50 mM a 500 mM de imidazol para obter uma fração purificada que foi utilizada depois disso como um material para testes de administração.

Para 1 ml de um tampão de reação (20 mM de Tris-HCl, 50 mM de NaCl, 2 mM de CaCl2; pH 7,4), 200 μΐ da preparação purificada obtida pelo método descrito acima foi aliquotada, e 2 μΐ de enteroquínase (fabricado por Novagen) foi então adicionado ao mesmo, seguido pelo repouso em temperatura ambiente durante uma noite para clivar a etiqueta His. 0 produto resultante foi purificado com a utilização de Kit Enterokinase Cleavage Capture (fabricado por Novagen) de acordo com o protocolo anexado ao kit. Subsequentemente, o tampão contido em 1,2 ml da preparação purificada obtida pelo método descrito acima foi substituído por tampão de fosfato fisiológico (fabricado por Nissui Pharmaceutical) por ultrafiltragem com a utilização de NANOSEP 10K OMEGA (fabricado por PALL), e a solução resultante foi filtrada assepticamente com a utilização de HT Tuffryn Acrodisc 0,22 pm (fabricado por PALL) e utilizada nos experimentos seguintes.

Exemplo 3: Teste de Administração de Proteína Recombinante para cão Portador de Cancro (1) Ensaio Antitumor

tirzáIMOádBI O efeito antitumor da proteína recombinante que foi purificada conforme descrito acima foi avaliado em um cão portador de tumor (cancro da mama de mama) que tem um tumor epidérmico.

Uma quantidade igual de adjuvante incompleto de Freund (fabricado por Wako Pure Chemicals) foi misturado com 100 pg (0,5 ml) do polipéptido recombinante purificado conforme descrito acima, para preparar um agente terapêutico para cancro da mama. Isso foi administrado a um nó linfático regional nas proximidades do tumor um total de 3 vezes, realizando-se as administrações subsequentes 3 dias e 7 dias depois da primeira administração. Como um resultado, o tumor com um tamanho de cerca de 55 mm3 no momento de administração do agente terapêutico para cancro da mama foi reduzido em tamanho para 30 mm3 10 dias depois da primeira administração; para 16 mm3 20 dias depois da primeira administração; e para 10 mm3 30 dias depois da primeira administração.

Ademais, para outro paciente canino que sofre de cancro da mama de glândula mamária, uma mistura de 100 pg (0,5 ml) do polipéptido descrito acima derivado de cão e 0,5 ml de adjuvante incompleto de Freund foi administrado da mesma maneira conforme descrito acima um total de 3 vezes. Ademais, simultaneamente com as respetivas administrações, 100 pg de interleucina canina 12 foi administrado subcutaneamente. Como resultado, o tumor com um tamanho de cerca de 155 mm3 no momento de administração do agente terapêutico para cancro da mama regrediu completamente 24 dias depois da primeira administração. (2) Ensaio de Indutibilidade Imunológica

Sangue do paciente canino em que o efeito antitumor foi obtido no teste de administração no (1) descrito acima foi colhido antes da administração do agente terapêutico para cancro da mama, e 10 dias e 30 dias depois da primeira administração. As células monocelulares de sangue

tirzáIMOádBI periférico foram isoladas de acordo com um método convencional, e pelo ensaio de ELISPOT para ΙΡΝγ com a utilização das mesmas, a indutibilidade imunológica de cada proteína recombinante administrada foi testada.

Em uma placa de 96 cavidades fabricada por Millipore (Multiscreen-IP, MAIPS 4510), 100 μΐ/cavidade de 70S de etanol foi colocado e a placa foi deixada em repouso por 5 minutos, seguido pela remoção do etanol por aspiração. A placa foi lavada com água estéril e 300 ul/cavidade de 200 mM de Bicarbonato de Sódio (pH 8,2) foi colocado na mesma. Depois de deixar a mesma em repouso por 5 minutos,

Bicarbonato de Sódio foi removido por aspiração e, depois, a placa foi lavada. Subsequentemente, 0,5 μΐ/cavidade de anticorpo monoclonal γ interferão anticão (fabricado por R&D, clone 142529, MAB781) misturado com 200 mM de

Bicarbonato de Sódio foi colocado em cavidades, e a placa foi incubada a 37 °C durante uma noite para imobilizar o anticorpo primário. Depois da remoção do anticorpo primário por aspiração, 300 μΐ/cavidade de uma solução de bloqueio (10 de BSA-50 de sacarose-200 mM de Bicarbonato dé>ódio (pH 8,2)) foi adicionado às cavidades, e a placa foi incubada a 4 °C durante uma noite para bloquear a placa. Depois da remoção da solução de bloqueio por aspiração, 300 μΐ/cavidade de 100 de soro bovino fetal que contém mio RPMI (fabricado por Invitrogen) foi colocado nas cavidades, e a placa foi deixada em repouso por 5 minutos, seguido pela remoção do meio por aspiração. Subsequentemente, 5 x 10b células/cavidade das células mononucleares de sangue periférico canino suspensa em 100 de soro bovino fèal que contém meio RPMI foram colocadas na placa, e 10 μΐ/cavidade do polipéptido derivado de canino ou polipéptido derivado de humano utilizado em cada administração foi adicionado às mesmas, seguido pelo cultivo das células nas condições de 37 °C e 50 de CQ por 24 horas, para permitir imunócitos que podem existir nas células mononucleares de sangue

tirzáIMOádBI periférico para produzir interferão γ. Depois da cultura, o meio foi removido, e as cavidades foram lavadas 6 vezes com uma solução de lavagem (0,10 de Tween 20-2Q0mM de Bicarbonato de Sódio (pH 8,2)). Em cada cavidade, 100 μΐ de anticorpo policlonal anticão de coelho 1000 vezes diluído com a solução de bloqueio descrita acima foi colocado, e a placa foi incubada a 4 °C durante uma noite. Depois de lavar as cavidades 3 vezes com a solução de lavagem descrita acima, 100 μΐ de anticorpo anticoelho com identificação HRP 1.000 vezes diluído com a solução de bloqueio descrita acima foi colocado em cada cavidade, e permitiu-se que a reação prosseguisse a 37 °C por 2 horas. Depois de lavar as cavidades 3 vezes com a solução de lavagem descrita acima, o resultante foi colorido com Konica Immunostain (fabricado por Konica), e as cavidades foram lavadas com água para interromper a reação. Posteriormente, a membrana foi seca, e o número de manchas que apareceram foi contado com a utilização de KS ELISPOT (fabricado por Carl Zeiss, Inc.). Como resultado, nas células mononucleares de sangue periférico amostradas antes da administração do polipéptido, Nenhuma mancha foi detetada. Por outro lado, no paciente canino depois da administração do polipéptido, 18 a 87 manchas foram detetadas nas células mononucleares de sangue periférico amostradas 10 dias e 30 dias, respetivamente, depois da administração. A partir dos resultados acima, confirmou-se que imunócitos que reagem especificamente com a proteína recombinante administrada e produzem interferão γ foram induzidos no paciente canino para o qual a proteína recombinante foi administrada, e acredita-se que o efeito antitumor descrito no (1) descrito acima tenha sido exercido por imunorreações em que esses imunócitos foram principalmente envolvidos.

Exemplo 4: Indução de Células T positivas de CD8 Reativas

tirzáIMOádBI com Epítopos de Péptido derivado de CD179b (1) Previsão de Motivos de Péptido que se Ligam a HLA-A0201 e HLA-A24

As informações na sequência de aminoãcidos da proteína de CD179b humana foram obtidas a partir do GenBank. Para previsão de HLA-A0201 e HLA-A24 os motivos de ligação, A sequência de aminoãcidos da proteína de CD179b humana foi analisada empregando-se um programa de previsão com base em computador com a utilização de um software BIMAS conhecido (disponível em http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla__bind/) . Como resultado, 8 tipos de péptidos mostrados no SEQ ID NOs: 108 a 110 e SEQ ID NOs:113 a 117, que foram estimados terem capacidade para se ligarem à molécula HLA-A0201; e 5 tipos de péptidos mostrados no SEQ ID NOs:110 a 112, SEQ ID NO: 115 e SEQ ID NO :116, que foram estimados terem capacidade para se ligarem à molécula HLA-A24; foram selecionados. (2) Indução de Células T positivas de CD8 reativas a Epítopo de Péptido A partir de um indivíduo saudável positivo de HLA-A0201, o sangue periférico foi isolado, e o sangue periférico foi sobreposto em meio de separação de Linfõcito (OrganonpTeknika, Durham, NC) , seguido pela centrifugação do mesmo a 1.500 rpm a temperatura ambiente por 20 minutos. Uma fração que contém PBMC foi recuperada e lavada 3 vezes (ou mais) com tampão frio de fosfato para obter células mononucleares de sangue periférico (PBMCs). Os PBMCs obtidos foram suspensos em 20 ml de meio AIM-V (fabricado por Life Technologies, Inc., Grand Island, NY), e permitiu-se que os mesmos aderissem a um frasco de cultura (fabricado por Falcon) a 37 °C em 5§ de CQ por 2 horas. As células que foram não aderidas foram utilizadas para a preparação de células T, e as células aderidas foram utilizadas para a preparação de células dendríticas.

As células aderidas foram cultivadas em meio AIM-V na fcr^o i yooob l presença de IL-4 (1.000 U/ml) e GM-CSF (1.000 U/ml). Seis dias depois, o meio foi substituído por meio AIM-V suplementado com IL-4 (1.000 U/ml), GM-CSF (1.000 U/ml), IL-6 (1.000 U/ml, Genzyme, Cambridge, MA), IL-Ιβ (10 ng/ml, Genzyme, Cambridge, MA) e TNF-a (10 ng/ml, Genzyme, Cambridge, MA) , e a cultura foi continuada por outros 2 dias. A população de células obtidas que não foram aderidas foi utilizada como as células dendríticas.

As células dendríticas preparadas foram suspendas em meio AIM-V a uma densidade celular de 1 x 106 células/ml, e o péptido mostrado no SEQ ID NOs:108 a 110 ou SEQ ID NOs: 113 a 117, que são sequências selecionadas no (1) acima e estimadas terem capacidade para ligação à molécula HLA-A201, foram adicionadas à suspensão resultante em uma concentração de 10 pg/ml, seguido pelo cultivo com a utilização de uma placa de 96 cavidades nas condições de 37 °C, 5% de C02 por 4 horas. Posteriormente, as células foram irradiadas com X-ray (3.000 rad) , lavadas com meio AIM-V, suspensas em meio AIM-V que contém 10% de soro AB humano (Nabi, Miami, FL) , IL-6 (1.000 U/ml) e IL-12 (10 ng/ml, Genzyme, Cambridge, MA) , e colocadas em cavidades de uma placa de 24 cavidades em uma população de 1 x 105 células/cavidade. A população de células T preparada foi adicionada às cavidades numa população de 1 x 10° células/cavidade, e as células foram cultivadas a 37 °C sob 5% de C02. Sete dias depois, cada sobrenadante de cultura foi descartada, e as células foram tratadas com cada um dos péptidos obtidos da mesma forma conforme descrito acima. Depois da irradiação com raios X, as células dendríticas foram suspensas em meio AIM-V que contém 10% de soro AB humano (Nabi, Miami, FL) , IL-7 (10 U/ml, Genzyme, Cambridge, MA) e IL-2 (10 U/ml, Genzyme, Cambridge, MA) (densidade celular: 1 x 105células/ml), e as células foram colocadas nas cavidades de uma placa de 24 cavidades em uma população celular de 1 x 105 células/cavidade e

tirzáIMOádBI adicionalmente cultivadas. As mesmas operações foram repetidas de 4 a 6 vezes em intervalos de 7 dias e, depois, as células T estimuladas foram recuperadas, depois que a indução de células T positivas de CD8 foi confirmada por citometria de fluxo.

Também para os péptidos mostrados no SEQ ID NOs:110, 111, 112, 115 e 116, que foram estimados ter capacidade

para ligação à molécula HLA-A24, a indução de células T

positivas de CD8 reativas a epítopo de péptido foi tentaram usar células dendríticas e uma população de célula T induzida a partir de sangue periférico de um indivíduo saudável positivo de HLA-A24.

Como um controlo negativo, um péptido fora do escopo da presente invenção (SEQ ID NO:118) foi utilizado.

Exemplo 5: Determinação de Epítopos de Antígeno de Célula T Citotóxica derivada de CD179b que estimulam células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A0201 (1) Habilidade de Produção de IFN-γ A fim de examinar a especificidade de cada uma das células T, cujo cultivo foi confirmado dentre as células T induzidas conforme descrito acima, para epítopos de péptido, 5 x 10J células T foram adicionadas a 5 x 104 células T2 (Salter RD et al., Immunogenetics, 21:235 a 246 (1985), compradas em ATCC) que foram pulsadas com cada péptido e expressa a molécula HLA-A0201 (cultivada em meio AIM-V suplementado com cada péptido a uma concentração de 10 pg/ml, a 3 7 °C abaixo de 50 de CQ para 4 horas) , e as células foram cultivadas em meio AIM-V que contém 100 de soro AB humano numa placa de 96 cavidades por 24 horas. 0 sobrenadante depois do cultivo foi recuperado e a quantidade de produção de IFN-γ foi medida por ELISA. Como resultado, a produção de IFN-γ foi confirmada nos sobrenadantes de cultura nas cavidades de células T2 pulsadas com os péptidos das SEQ ID Nos :108 a 110 e SEQ ID NOs: 113 a 117, quando comparado com os sobrenadantes de

tirzáIMOádBI cultura nas cavidades de células T2 que não foram pulsadas com a péptido (Figura 2) . A partir destes resultados, foi revelado que os péptidos descritos acima são péptidos de epítopo de célula T que tem uma capacidade para estimular especificamente e permitir a proliferação das células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A0201, Induzindo, desse modo, a produção de IFN-γ.

Na Figura 2, os numerais de referência 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10 na abscissa indicam as habilidades de produção de IFN-y das células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A0201 devido ao estímulo das células T2 pulsadas com os péptidos das SEQ ID Nos:108, 109, 110, 113, 114, 115, 116 e 117, respetivamente. 0 numeral de referência 11 indica o resultado para o péptido de SEQ ID NO: 118 utilizado como o controlo negativo. (2) Ensaio de Citotoxicidade

Subsequentemente, foi examinado se os péptidos das SEQ ID Nos: 108 a 110 e SEQ ID NOs: 113 a 117 utilizados na presente invenção estão presentes nas moléculas HLA-A020! em células tumorais que são positivas de HLA-A02Q1 e expressam CD179b, e se as células T positivas de CD8 estimuladas por esses péptidos podem danificar as células tumorais que são positivas de HLA-A0201 e expressam CD179b. Em um tubo centrífugo de 50 ml, 106 células de uma linhagem celular de leucemia de célula B, as células Namalwa (compradas de ATCC), cuja expressão de CD179b foi confirmada, foram colhidas, e 100 pCi de crómio 51 foi adicionado às mesmas, seguido pela incubação a 37 °C por 2 horas. Posteriormente, as células foram lavadas 3 vezes com meio RPMI (fabricado por Gibco) que contém 100 de sro bovino fetal (fabricado por Gibco), e colocado em cavidades de uma placa de fundo V de 96 cavidades em uma quantidade de 103 células/cavidade. Ademais, a cada cavidade, 5 x 104 de células T suspensas em meio RPMI que contém 100 de soro fetal bovino, sendo que as células foram estimuladas por

tirzáIMOádBI cada péptido, e positivas de HLA-A0201, reativas de epítopo de péptido e positivas de CD8, foram adicionadas, seguido por cultura a 37 °C em 50 de CQ por 4 horas. Posteriormente, medindo-se a quantidade de crómio 51 no sobrenadante de cultura que foi libertado das células tumorais danificadas, a atividade citotóxica das células T positivas de CD8 estimuladas por cada péptido foi calculada. Como resultado, foi revelado que as células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A0201 estimuladas pelo péptido têm uma atividade citotóxica contra células Namalwa (Figura 3) . As células T positivas de CD8 induzidas com a utilização do controlo negativo péptido (SEQ ID NO: 118) não mostraram uma atividade citotóxica. Portanto, foi provado que cada um dos péptidos utilizados na presente invenção (SEQ ID NOs:108 a 110 e SEQ ID N0s:113 a 117) é apresentado nas moléculas HLA-A02Q1 nas células tumorais que são positivas de HLA-A0201 e expressam CD179b, e que o péptido tem uma habilidade para induzir células T citotõxicas positivas de CD8 que podem danificar tais células tumorais. A atividade citotóxica foi determinada, conforme descrito acima, misturando-se 105 células T positivas de CD8 estimuladas e induzidas com cada um dos péptidos utilizados na presente invenção e 10J células da linhagem celular de leucemia de célula B Namalwa que foram produzidas para incorporar crómio 51; cultivando-se a mistura resultante por 4 horas; medindo-se a quantidade de crómio 51 libertado para o meio de cultura depois do cultivo; e calculando-se a atividade citotóxica das células T positivas de CD8 contra as células Namalwa de acordo com a seguinte equação*. * Equação: Atividade citotóxica (0 ) = a quantidadede crómio 51 libertado das células Namalwa na adição das células T positivas de CD8/a quantidade de crómio 51 libertado das células alvo na adição de 1 N de ácido

tirzáIMOádBI clorídrico x 100.

Na Figura 3, numerais de referência 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 e 19 na abscissa indicam as atividades citotóxicas das células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A0201 contra as células Namalwa, sendo que as células T foram estimuladas com a utilização de SEQ ID NOs:108, 109, 110, 113, 114, 115, 116 e 117, respetivamente. O numeral de referência 20 indica a atividade citotóxica de células T positivas de CD8 induzida com a utilização do péptido do controlo negativo (SEQ ID NO: 118).

Exemplo 6: Determinação de Epítopos de Antígeno de Célula T Citotóxica derivada de CD179b que estimulam células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A24 (1) Habilidade de Produção de IFN-γ A fim de examinar a especificidade das células T positivas de CD8 reativas a epítopo de péptido induzida no Exemplo 3(2) para epítopos de péptido da mesma forma que no Exemplo 5(1), 5 x 10J células das células T descritas acima foram adicionadas a 5 x 104 células JTK-LCL que expressam moléculas HLA-A24 (compradas de RIKEN), sendo que as células JTK-LCL foram pulsadas com a utilização do péptido das SEQ ID Nos: 110, 111, 112, 115 ou 116 (cultivadas em meio AIM-V suplementado com cada péptido a uma concentração de 10 pg/ml, a 37 °C abaixo de 50 de CQ para 4 horas), e as células foram cultivadas em meio AIM-V que contém 100 de soro AB humano numa placa de 96 cavidades por 24 horas. 0 sobrenadante depois do cultivo foi recuperado e a quantidade de produção de IFN-γ foi medida por ELISA. Como resultado, a produção de IFN-γ foi confirmada nos sobrenadantes de cultura nas cavidades de células JTK-LCL pulsadas com os péptidos das SEQ ID Nos :110, 111, 112, 115 e 116, quando comparados com os sobrenadantes de cultura nas cavidades de células JTK-LCL que foram não pulsadas com um péptido (Figura 4) . A partir destes resultados, foi revelado que os péptidos descritos acima são péptidos de

tirzáIMOádBI epítopo de célula T que tem uma capacidade para estimular especificamente e permitir a proliferação das células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A24, Induzindo, desse modo, a produção de IFN-γ.

Na Figura 4, numerais de referência 21, 22, 23, 24 e 25 na abscissa indicam as habilidades de produção de IFN-γ das células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A24 devido ao estímulo das células JTK-LCL pulsadas com os péptidos das SEQ ID Nos:110, 111, 112, 115 e 116, respetivamente. 0 numeral de referência 26 indica o resultado para o péptido de SEQ ID NO :118 utilizado como o controlo negativo. (2) Ensaio de Citotoxicidade

Subsequentemente, foi examinado se os péptidos das SEQ ID Nos: 110, 111, 112, 115 e 116 utilizados na presente invenção são apresentados nas moléculas HLA-A24 em células que são positivas de HLA-A24 e expressam CD17 9b, e se as células T positivas de CD8 estimuladas por esses péptidos podem danificar as células tumorais que são positivas de HLA-A24 e expressam CD179b da mesma forma que no Exemplo 5(2) . Em um tubo centrífugo de 50 ml, 106 células JTK-LCL que são positivas de HLA-A24 e expressam CD179b, foram colhidas, e 100 pCi de crómio 51 foi adicionado às mesmas, seguido pela incubação a 37 °C por 2 horas. Posteriormente, as células foram lavadas 3 vezes com meio RPMI que contêm 100 de soro de bovino fetal, e colocadas nas cavidd.es de uma placa de fundo V de 96 cavidades em uma quantidade de 103 células/cavidade. Ademais, para cada cavidade, 5xl04 células T suspensas em meio RPMI que contém 100 desoro de bovino fetal, sendo que as células foram estimuladas com cada péptido, e positivas de HLA-A24, reativas de epítopo de péptido e positivas de CD8, foram adicionadas, seguido por cultura a 37 °C em 50 de C0 por 4 horas.

Posteriormente, com a medição da quantidade de crómio 51 no sobrenadante de cultura que foram liberadas das células

tirzáIMOádBI danificadas, a atividade citotõxica das células T positivas de CD8 estimuladas por cada péptido foi calculada. Como um resultado, foi revelado que as células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A24 estimuladas pelo péptido têm uma atividade citotõxica contra células JTK-LCL (Figura 5) . Portanto, foi provado que cada um dos péptidos utilizados na presente invenção (SEQ ID NOs:110, 111, 112, 115 e 116) é apresentado nas moléculas HLA-A24 em células que são positivas de HLA-A24 e expressam CD179b, e que o péptido tem uma habilidade para induzir células T citotóxicas positivas de CD8 que podem danificar tais células. As células T positivas de CD8 induzidas com a utilização do controlo negativo péptido (SEQ ID NO: 118) não mostraram uma atividade citotõxica.

Na Figura 5, numerais de referência 27, 28, 29, 30 e 31 indicam as atividades citotóxicas das células T positivas de CD8 e positivas de HLA-A24 estimuladas com os péptidos de SEQ ID NO: 110, 111, 112, 115 e 116, respetivamente, contra células JTK-LCL. 0 numeral de referência 32 indica a atividade citotõxica de células T positivas de CD8 induzidas com a utilização do péptido do controlo negativo (SEQ ID NO:118).

Exemplo 7: Deteção de Cancro com a Utilização de Proteína Recombinante (1) Deteção de Cancro Canino A partir de 153 pacientes caninos cujo tumor maligno foi confirmado e 264 cães saudáveis, o sangue foi colhido, e soros foram separados a partir do mesmo. Com a utilização de proteína de antígeno de cancro da mama derivado de cão preparado no Exemplo 2 (o 52 ao 12 O2 aminoãcidos na sequência de aminoãcidos mostrada no SEQ ID NO:5) e anticorpo IgG anticão, o título de anticorpo IgG nos soros que reage especificamente com o polipéptido foi medido por ELISA. A imobilização do polipéptido preparado numa fase de fcr^o í yooob l sólido foi realizada colocando-se 100 μΐ/cavidade da solução de proteína recombinante diluída para 100 ug/rnl com salina tamponada com fosfato numa placa Amino de Imobilizador de 96 cavidades (fabricada por Nunc), seguido pelo repouso da placa a 4 °C durante uma noite. 0 bloqueio foi realizado adicionando-se 100 μΐ/cavidade de uma solução que foi preparada dissolvendo-se 4 g de pó Block Ace (fabricado por DS Pharma Biomedical Co., Ltd.) em 100 ml de água purificada, nas cavidades, e agitando-se a placa a temperatura ambiente por 1 hora. 0 soro 1.000 vezes diluído com a solução de bloqueio foi adicionado às cavidades em uma quantidade de 100 μΐ/cavidade, e a placa foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas para permitir que a reação prossiga. As cavidades foram lavadas 3 vezes com salina tamponada com fosfato que contém 0,05% de Tween 20 (fabricado por Wako Pure Chemical Industries,

Ltd.)(doravante no presente documento denominado PBS-T), e 100 μΐ/cavidade de anticorpo IhH de cão modificado de HRP (IgGh+I anticão de cabra conjugado com HRP: fabricado por BETHYL Laboratories) 3000 vezes diluído com a solução de bloqueio foi adicionado ao mesmo, seguido pelo agito da placa à temperatura ambiente por 1 hora para permitir que a reação prossiga. Depois de lavar as cavidades 3 vezes com PBS-T, 100 μΐ/cavidade de um TMB de substrato de HRP (TMB Turbo de 1 etapa (tetrametilbenzidina), PIERCE) foi adicionado, e a reação de substrato de enzima foi permitida prosseguir à temperatura ambiente por 30 minutos.

Posteriormente, 100 μΐ/cavidade de 0,5 M de solução de ácido sulfúrico (fabricado por Sigma-Aldrich Japan) foi adicionado às cavidades para interromper a reação, e a absorbância a 450 nm foi medida com a utilização de um leitor de microplaca. Como um controlo, um caso em que a mesma operação foi realizada do mesmo modo conforme descrito acima exceto se a proteína recombinante preparada não tiver sido imobilizada, ou exceto se o cão portador de

tirzáIMOádBI tumor soro não foi reagido, foi projetado para comparação.

Como a espécie de cancro da mama a ser utilizada para a deteção de cancro da mama acima, 112 amostras de cancro da mama, 31 amostras de linfoma e 10 amostras de leucemia que foram definitivamente diagnosticadas como malignas por diagnóstico patológico foram utilizadas.

Esses soros derivados dos corpos vivos dos cães portadores de tumor mostraram anticorpo significativamente alto contra a proteína recombinante. Foi revelado que, diagnosticando-se uma amostra que mostra duas vezes o valor médio das amostras de caninos saudáveis como malignas, 61 amostras (540 ) de cancro da mama, 21 amostras (710 )de linfoma e 7 amostras (700 ) de leucemia pode ser diagnosticado de modo bem-sucedido como malignas. Quando o teste foi realizado de modo similar com a utilização de soros de 30 pacientes caninos que têm um tumor de glândula mamária que foi diagnosticado definitivamente e como benigno, o número de amostras que mostra duas vezes o valor médio das amostras de caninos saudáveis foi 0.

Da mesma forma, com a utilização da proteína de antígeno de cancro derivada de humano no Exemplo 2 (a sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO:3) e o anticorpo IgG anticão, o título de IgG anticorpo que especificamente reage com o polipéptido em cada uma das amostras de soro de cão portador de tumor descritas acima foi medido por ELISA. Como um resultado, foi revelado que 56 amostras (500 ) de cancro da mama, 18 amostras (80 ) de linfoma e 5 amostras (500 ) de leucemia poderiam ser avaliadas como malignas.

Quando a deteção foi realizada do mesmo modo conforme descrito acima com a utilização de efusão pleural e ascites colhidas de pacientes caninos com cancro terminal, valores similares aos resultados obtidos pelo método de deteção com a utilização de soro poderiam ser detetados, e o diagnóstico do cancro foi possível. fcrQúO í yooob l (2) Deteção de Cancro Humano

Da mesma forma, com a utilização da proteína de antígeno de cancro derivado de humano (a sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO:3) utilizada na deteção acima e anticorpo IgG antihumano, o título de anticorpo IgG num indivíduo saudável que reage especificamente com o polipéptido foi medido. 0 anticorpo secundário a ser utilizado foi um anticorpo IgG antihumano modificado por HRP (fabricado por IgG(H+L) anti-humano de cabra HRP conjugado: fabricado por Zymed Laboratories) 10.000 diluído com a solução de bloqueio. Como um controlo positivo, albumina de ovo branco que foi preparada a 50 ug/ml com salina tamponada com fosfato e imobilizada na fase de sólido foi utilizada. Como resultado, no caso da albumina de ovo branco, Sete indivíduos saudáveis mostraram uma absorbância de 0,45 a 450 nm em média, o que foi alto. Por outro lado, no caso do polipéptido descrito acima, a absorbância foi 0, o que significa que a reação não foi detetada.

Ademais, do mesmo modo conforme descrito acima, com a utilização de 17 amostras de soros derivadas de pacientes que sofrem de cancro da mama maligno (compradas de Promeddx), o título de anticorpo IgG em cada soro que reage especificamente com a proteína de antígeno derivada de humano (sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO:3) foi de modo similar medido. Como um resultado, no caso do polipéptido descrito acima, os 17 pacientes com cancro da mama mostraram uma absorbância de 0,28 a 450 nm em média, o que foi alto. Portanto, foi revelado que cancro pode ser detetado pelo presente método também em humanos. APLICABILIDADE INDUSTRIAL A presente invenção é útil para terapia de cancro da mama e/ou leucemia visto que a mesma fornece um agente indutor de imunidade que contém um polipéptido que exerce uma atividade antitumoral contra um tumor (ou tumores) de fcrQúO í yooob l cancro (ou cancros) tal como cancro da mama e/ou leucemia. Ademais, a presente invenção é útil para o diagnóstico de cancro da mama e/ou leucemia visto que a mesma fornece um método inovador de deteção para cancro da mama e/ou leucemia.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Toray Industries, Inc. <120> Indutores de imunidade e Método de deteção de cancros <130> 09062 <160> 118 <170> Patentln versão 3.1 <210> 1 <211> 901

< 212 > DNA <213> Homo sapiens <220>

<221> CDS <222 > (119) . . (760) <223 > <220> <221> sig_jpeptide <222 > (119) . . (229) <223 > <400> 1

fcl’A'dIMOádBI ggccacatgg actggggtgc aatgggacag ctgctgccag cgagagggac cagggcacca 60 ctctctaggg agcccacact gcaagtcagg ccacaaggac ctctgaccct gagggccg 118 atg agg cca gqg aca ggc cag gqg ggc ctt gag gcc cct gqt gag cca 166

Met Arg Pro Gly Thr Gly Gin Gly Gly Leu Glu Ala Pro Gly Glu Pro 1 5 10 15 ggc ccc aac ctc agg cag cgc tgg ccc ctg ctg ctg ctg gqt ctg gcc 214

Gly Pro Asn Leu Arg Gin Arg Trp Pro Leu Leu Leu Leu Glv Leu Ala 20 25 30' gtg gta acc cat ggc ctg ctg cgc cca aca get gea teg cag age agg 262

Vai Vai Thr Mis Gly Leu Leu Arg Pro Thr Ala Ala Ser Gin Ser Arg 35 40' 45 gcc ctg ggc cct gga gcc cct gqa gga age age egg tcc age ctg agg 310

Ala Leu Gly Pro Gly Ala Pro Gly Gly Ser Ser Arg Ser Ser Leu Arg 50 55 60 age cgg tgg ggc agg ttc: ctg etc: cag cgc: ggc tcc tgg act gqc ccc 358

Ser Arg Trp Gly Arg Phe Leu Leu Gin Arg Gly Ser Trp Thr Gly Pro

65 70 75 SO agg tgc tgg ccc: egg gqg ttt caa tcc: aag cat aac tea gtg aeg cat 406

Arg Cys Trp Pro Arq Gly Phe Gin Ser Lys Mis Asn Ser Vai Thr l-lis 85' 90 95 gtg ttt ggc age gqg acc cag ctc acc gtt tta agt cag ccc aag gcc 454 vai Phe Gly sèr Gly Thr Glh Leu Thr vai Leu sèr Glh Pro Lys Àla 100 105 110 acc ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccg tcc tet gag gag ctc caa gcc 502

Thr Pro Ser vai Thr Leu Phe Prò PrÕ Ser ser Glu Glu Leu Gin Àla 115 120 125 aac aag get aca ctg gtg tgt ctc atg aat gac ttt tat ccg gga ate 550

Asn Lys Àla Thr Leu Vai Cys Leu Met Asn Âsp Phe Tyr Prò Gly Tie 130 135 140 ttg acg gtg acc tgg aag gea gat ggt acc ccc ate acc cag ggc gtq 598

Leu Thr vai Thr Trp Lys Ala Asp Gly Thr Pro lie Thr Gin Gly vai 145 150 155 160 gag atg acc acg ccc tcc aaa cag age aac aac aag tac gcg gcc age 646

Glu Met Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser 165 ’ 170 175 age tac ctg age ctg acg ccc gag cag tgg agg tcc cgc aga age tac 694

Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Arg Ser Arg Arg Ser Tyr 180 185 190 aqc tqc can qtc atq cac qaa qaq aqc acc qtq qaq aaq acq qtq qcc 742 sèr Cys Gin Vai Met His Glu Gly Ser Thr VaT Glu Lys Thr Vai Ala 195 200 205 cct gea gaa tgt tea tag qttcccaqcc ccqaccccae ccaaagqqgc 790

Pro Ala Glu Cys Ser 210 ctggagctgc aggatcccag gggaagggtc tctctctgca tcccaagcca tccagccctt 850 ctccctgtac ccagtaaacc ctaaataaat accctctttg tcaaccagaa a 901

<210> 2 <211> 213 <212> PRT

tirzáIMOádBI <213> Homo sapiens <400> 2

Met Arg Pro Gly Thr Gly Gin Gly Glv Leu Gl u Ala Pro Gly Glu Pro 1 5 '10 15

Gly Pro Asn Leu Arq Gln Arq Trp Pro Leu Leu Leu Leu Glv Leu Ala 20 25 30

Val Vai Thr His Gly Leu Leu Arq Pro Thr Ala Ala Ser Gin Ser Arq 35 40' 45

Ala Leu Gly Pro Gly Ala Pro Gly Gly Ser Ser Arq Ser Ser Leu Arg 50 55 60

Ser Arg Trp Gly Arg Phe Leu Leu Gin Arg Gly Ser Trp Thr Gly Pro 65 70 75 80

Arq Cys Trp Pro Arg Gly Phe Gin Ser Lys Hi s Asn Ser val Thr His 85 90 95

Val Phe Gly Ser Gly Thr Gln Leu Thr val Leu Ser Gl n Pro Lys Ala 100 105 110

Thr Pro Ser val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin Ala 115 120 125

Asn Lys Ala Thr Leu val Cys Leu Met Asn Asp Phe Tyr Pro Gly lie 130 135 140

Leu Thr Val Thr Trp Lys Ala Asp Gly Thr Pro lie Thr Gin Gly val 145 150 155 160

Glu Met Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser 165 170 175

Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Arg Ser Arq Arg Ser Tyr 180 185 " 190

Ser Cys Gin val Met His Glu Gly Ser Thr val Glu Lys Thr val Ala 195 200 205

Pro Ala Glu Cys Ser 210

tirzáIMOádBI

< 210 > 3 <211> 176 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3

Leu Leu Arq Pro Thr Ala Ala Ser Gin Ser Arg Ala Leu Gly Pro Gly 1 ' 5 10 15

Ala Pro Gly Gly Ser ser Arg ser ser Leu Arg ser Arg Trp Gly Arq 20 25 30

Phe Leu Leu Gin Arg Gly Ser Trp Thr Gly Pro Arg cys Trp Pro Arg 35 40 45

Gly Phe Gin ser Lvs His Asn ser vai Thr His vai Phe Gly Ser Gly 50 ' 55 60

Thr Gin Leu Thr vai Leu Ser Gin Pro Lys Ala Thr Pro Ser vai Thr 65 70 75 S0

Leu Phe Pro Pro Ser ser Glu Glu Leu Gin Ala. Asn Lys Ala Thr Leu 85 90 95 vai Cys Leu Met Asn Asp Phe Tyr Pro Gly lie Leu Thr vai Thr Trp 100 105 110

Lys Ala Asp Gly Thr Pro lie Thr Gin Glv Vai Glu Met Thr Thr Pro 115 120 125

Ser Lys Gln ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu Ser Leu 130 135 140

Thr Pro Glu Gin Trp Arg ser Arg Arg ser Tyr ser cys Gin vai Met 145 150 155 160

His Glu Glv Ser Thr vai Glu Lys Thr vai Ala Pro Ala Gl u Cys Ser 165 170 175 <210> 4 <211> 513

< 212 > ADN

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (364) <223 > <400> 4 c agg get cct ctt ttc ggc gqa ggc acc cac ctg acc gtc etc ggt cag 49

Arg Ala Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Vai Leu Gly Glíí 15 10 15 ccc aag gee tee ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag 97

Pro Lys Ala Ser Pro Ser vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gl u 20 25 30 etc ggc gee aac aag gee acc ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac 145

Leu Gly Ala Asn Lvs Ala Thr Leu vat Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr 35 ' 40 45 ccc age ggc gtg aeg gtg gee tgg aag qca gac ggc age ccc gtc acc 193

Pro Ser Glv vat Thr vat Ala Trp Lys Ãla Asp Gly Ser Pro vai Thr 50 55 60 cag gqc gtg gag acc acc aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac 241

Gin Gly Vat Glu Thr Thr Lvs Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 65 70 ’ 75 80 geg gee age age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa tet cac 289

Alá Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His 85 90 95 age age ttc age tgc ctg gtc acg cac gag ggg age acc gtg gag aag 337

Ser Ser Phe Ser Cvs Leu vai Thr His Glu Gly Ser Thr vat Glu Lys 100 105 110 aag gtq gee ccc gea gag tgc tet tag gttcccgacg gccccgccca 384

Lys Vat Ãla Pro Ala Glu Cys Ser 115 120 ccgaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct tgcctcccat ctgggtcatc 444 ccgcccttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcagaaaa 504 aaaaaaaaa 513

<210> 5 <211> 120 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 5 tr^o í yooob l

Arq Ala Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu Gly Gin 1 5 10 15

Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 20 25 30

Leu Gly Ala Asn Lvs Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr 35 ' 40 45

Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Thr 50 55 60

Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln ser Asn Asn Lys Tyr 65 70 75 80

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser Hi s 85 90 95

Ser ser Phe Ser cys Leu val Thr His Glu Gly Ser Thr val Glu Lys 100 105 110

Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 115 120

<21G> 6 <211> 659 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222> (2)., (484) <223 > <400> 6 c tcg ggg qtc ccg gat cga ttc tct acc tcc aqg tea ggc tac aca gee 49

Ser ciy vai Pro Asp Arg Phe Ser Thr ser Arg ser Gly Tyr Thr Ala 15 10 15 ace ctg acc ate tct ggg etc cag get gag gac gaa ggt gat tat tac 97

Thr Leu Thr Tie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr 20 25 30 tgc tea aea tgg gac aac gat etc aaa ggc agt gtt ttc ggc ggg ggc 145

Cys Ser Thr Trp Ãsp Asn Ãsp Leu Lys Gly Ser Vai Phe Gly Gly Gly 35 40 45 acc cat ctg acc gtc ctc gqt cag ccc aag gee tcc ccc tcg gtc aca 193

Thr Hi 5 Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai Thr 50 55 60 etc ttc ccg ccc tcc tct gag gaa ctc ggc gee aac aag gee acc ctg 241

Leu Phe Pro Pro Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu 65 70 75 80 gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc agt ggc gtq acg gtg gee tgg 289 val cvs Leu ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly vai Thr vai Ãla Trp 85 90 95 aag gea gac gac age ccc gtc acc cag ggc gtq gag acc acc aag ccc 337

Lys Ala Asp GÍy Ser Pro Vai Thr Gin Gly val Glu Thr Thr Lys Pro 100 105 110 tcc aag cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg age ctg 385

Ser Lvs Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser Ser Tyr Leu Ser Leu 115 120 125 acg cct gac aag tgg aaa tct cac age age ttc age tgc ctg gtc aca 433

Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser ser Phe Ser cys Leu val Thr 130 135 140 cac gag ggg age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc gea gag tgc tct 481

His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Lys VaT Ala Pro Ala Glu Cys Ser 145 150 155 160 tag gttcccgacg cccccgccca cctaaggggg cccggagcct caggacctcc 534 aggaggatct tgcctcctat ctgggtcatc ccgcccttct ccccacaccc aggcagcact 594 caataaagtg ttctttgttc aatctgaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 654 aaaaa 659

< 210 > 7 <211> 160 <212> PRT <213> CãllÍS f 3.ΪΏ2.2. ίβ.Σ'Ι. s <400> 7

tirzáIMOádBI

Ser Gly vai Pro Asp Arg Phe Ser rhr ser Arg ser Gly ryr Thr Ala 15 10 15

Thr Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr 20 25 30

Cvs Ser Thr Trp Asp Asn Asp Leu Lys Gly Ser Vai Phe Gly Gly Gly 35 40 ' 45

Thr Hi s Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai Thr 50 55 60

Leu Phe Pro Pro ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu 65 70 75 80

Val Cys Leu Tie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr Vai Ala Trp 85 90 95

Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro 100 105 110

Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu 115 120 125

Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr 130 135 140

His Glu Gly ser Thr val Glu Lys Lys val Ala Pro Ala Glu cys ser 145 150 155 160

<210> 8 <211> 634 <212> DNA <213> Canis familiaris < 2 2 0 >

<221> CDS <222> (2)., (496) < 2 2 3 > <400> 8 g gac act gaa cgg ccc tct gqg ate cct gac ege ttc tet ggc tcc agt 49

Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser 1 5 10 15 tea gqg aac aca cac ace ctq ace ate aqa gqg get cqg qcc gaq gac 97

Ser Gly Asn Thr H‘i s Thr Leu Thr ile Arq Gly Ala Arq Ã1 a Glu Asp 20 25 30 gag get gac tat tac tgc gag tea gea gtc agt act gat ate ggc gtg 145

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ser Ala Vai Ser Thr Asp Ile Gly Vai 35 40 45 ttc ggc gga ggc acc cac ctg acc qtc etc ggt cag ccc agg gee tcc 193

Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Arg Ala ser 50 55 60 ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tct qag gag etc ggc gee aac 241

Pro Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn 65 70 75 80 aag gee acc ctg gtq tgc etc ate age gac ttc tac ccc age ggt gtg 289

Lys Ala Thr Leu vai cys Leu lie ser Asp Phe Tvr Pro Ser Gly vai 85 90 95 aeg gtg gee tgg aaq gea gac ggc age ccc qtc acc cag ggc gtg gag 337

Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly vai Glu 100 105 110 acc acc aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac geg gee age age 385

Thr Thr Lys Pro ser Lys Glh Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser 115 120 125 tac ctg age ctg aeg cct gac aag tgg aaa tct cac age age ttc age 433

Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser 130 135 140 tgc ctg gtc acg cac gag gqg age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc 481 cys Leu vai Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lys Lys vat Ala Pro 145 150 155 160 gea gag tgc tct tag gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct 536

Ala Glu Cys ser caggacctcc aggaggatct tgcctcccat ctgggtcatc ccgctcttct ccccgcaccc 596 aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcaaaa 634

< 210 > 9 <211> 164 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 9

tirzáIMOádBI

Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser 15 10 15

Ser Gly Asn Thr His Thr Leu Thr lie Arg Gly Ala Arg Ala Glu Asp 20 25 ' 30

Glu Ala Asp Tyr Tyr cys Glu ser Ala vai ser Thr Asp lie Gly vai 35 40 45

Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Arg Ala Ser 50 55 60

Pro Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn 65 70 75 80

Lys Ala Thr Leu vai cys Leu lie ser Asp Phe Tyr Pro ser Gly vai 85 90 95

Thr Vai Ala Trp Lvs Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly Vai Glu 100 105 110

Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser 115 120 125

Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser 130 135 140

Cys Leu Vai Thr His Glu Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala Pro 145 150 155 160

Ala Glu cys ser

<210> 10 <211> 635 < 212 > DNA <213> Canis familíaris <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (490) <223 > <400> 10

fcl’C'dIMOádBI c cga cct gca ggg gta ccc gat cga ttc tct ggg tcc aag tea ggc ggg 49

Arg Pro Ala Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Glv Gly 1 5 10 15' tea gee ate ctg acc ate tet ggg cte eag cet gag gae gaa tgt gat 97

Ser Ala lie Leu Thr lie 5er Gly Leu Gin Pro Glu Asp Glu Cys Asp 20 25 30 tat tac: tgt teg tct tgg gat aag ggt etc age agg tce gtg ttc: ggc: 145

Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Lys Gly Leu Ser Arg Ser Vai Phe Gly 35 40 '45 gga ggc acc cac ctg acc gtc ctc ggt cag ccc aag gee tcc ccc teg 193

Gly Glv Thr His Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser 50' 55 60 gtc aca ctc ttc ccg ccc tcc tct gag gag ctc ggc gee aac aag gee 241

Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ãla Asn Lys Ala 65 70 75 80 acc ctg gtg tgc etc ate age gae ttc tac ccc age ggc gtg acg gtg 289

Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser Àsp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr Vai 85 90 95 gee tgg aag gca gae gqc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc acc 337

Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly Vat Glu Thr Thr 100 105 110 aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg 385

Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lvs Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu 115 120 ' 125 age ctg acg cct gae aag tgg aaa tct cac age age ttc age tgc ctg 433

Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu 130 135 140 gtc acg cac gag gqg age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc gca gag 481 vai Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lys Lvs vai Ala Pro Ala Glu 145 150 ‘ 155 160 tgc tct tag gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct 530

Cys ser caggacctcc aggaggatct tgcctcccat ctgggtcatc ccgcccttct ccccgcaccc 590 aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcagaaaa aaaaa 635

<210> 11 < 211> 162 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 11

tirzáIMOádBI

Arg Pro Ala Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Gly 15 10 15

Ser Ala lie Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gin Pro Glu Asp Glu Cys Asp 20 25 30

Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Lys Gly Leu Ser Arg Ser Vai Phe Gly 35 40 45

Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala ser Pro ser 50 55 60 val Thr Leu Phe Pro Pro ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala 65 70 75 80

Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Val Thr Val 85 90 95

Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr 100 105 110

Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu 115 120 125 ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys ser His ser ser Phe ser cys Leu 130 135 140 val Thr His Glu Gly ser Thr val Glu Lys Lys val Ala Pro Ala Glu 145 150 155 160

Cys Ser

<210> 12 <211> 583 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (445) <223 > <400> 12

tirzáIMOádBI c aaa gcc gcc etc acc ate aca gga gee cag cct gag gac gag get gac 49

Lys Ala Ala Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Pro Glu Ãsp Glu Ala Asp 15 10 15 tac tac tgt get ctg gga tta agt agt agt agt age cat agt gtg ttc 97

Tyr Tyr Cys Àla Leu Gíy Leu Ser Ser Ser Ser Ser His Ser Vai Phe 20 25 30 ggc gqa gqc acc cat ctg acc gtc etc ggt cag ccc aag gee tcc ccc 145

Gly Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala ser Pro 35 40 45 teg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag etc gqc gcc aac aag 193

Ser vai Thr Leu Phe Pro Pro ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys 50 55 60 gee acc ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc agt ggc gtg acg 241

Ala Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly VaT Thr 65 70 75 80 gtg gee tgg aag gea gac ggc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc 289

Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Glií Gly VaT Glu Thr 85 90 95 acc aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac geg gcc age age tac 337

Thr Lys Pro ser Lys Gin ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ãla Ser ser Tyr 100 105 110 ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tqc 385

Leu sèr Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys ser His sèr ser Phe ser cys 115 120 125 ctg gtc aca cac gag ggg age acc gtq gag aag aag gtg gcc ccc gea 433

Leu Vai Thr His Glu Giy Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vat Ala Pro Ala 130 135 140 gag tgc tet tag gttcecgacg cccccgccca cctaaggggg cccggagcct 485

Glu Cys Ser 145 caggacctcc aggaggatct tgcctcctat ctgggtcatc ccgcccttct ccccacaccc 545 aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcagaa 583

<210> 13 <211> 147 <212> PRT <213> Canis familiams <400> 13

Lys Ala Ala Leu Thr lie Thr Gly Ala Gin Pro Glu Asp Glu Ala Asp 15 10 15

Tyr Tyr Cys Ala Leu Gly Leu Ser Ser Ser Ser Ser His Ser Vai Phe 20 25 30

Glv Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro 35 40 45

fcK'dIMOádBI

Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys 50 55 60

Ala Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr 65 70 75 80 vai Ala Trp Lvs Ala Asp Gly Ser Pro vai Thr Gin Gly vai Glu Thr 85 30 95

Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr 100 105 110

Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser Mis Ser ser Phe Ser cys 115 120 125

Leu Val Thr His Glu Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala Pro Ala 130 135 140

Glu Cys Ser 145 <210> 14 <211> 796

< 212 > DMA <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (643) <223 > < 4 0 0 > 14

tirzáIMOádBI g ctg act cag ccg gcc tea qtg tet ggg tcc ctg gqc cag agg ate acc 43

Leu Thr Gin Pro Ala Ser VaT Ser Gív Ser Leu Glv Gin Arg Tie Thr 15 10 15 ate tee tgc act gga age age tcc aac att gga ggt aat aat gtg ggt 97 ile ser cys Thr Gly ser ser ser Asn ile Gly Glv Asn Asn vai Gly 20 25 30 tgg tac cag cag ctc cca gga aga gqc ccc aga act gtc ate ttt act 145

Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Arg Gly Pro Arg Thr Vai lie Phe Thr 35 40 45 aca cat agt cga ccc teg gqg gtq tcc gat cga ttc tet gcc tcc aag 193

Thr His Ser Arg Pro Ser Gly Vai Ser Asp Arg Phe Ser Ala Ser Lys 50 55 60 tet gqc age aca gee acc ctg acc ate tet gqg etc cag get gag gat 241

Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr ile Ser Gly Leu Gin Ala Glu Ãsp 65 70 75 80 gag get gat tat tac tgc tea aeg tgg gat gat agt etc agt get get 289

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala Ala 85 90 95 gtg ttc gqc gga gqc acc cac ctg acc gtc ctc ggt cag ccc aag gcc 337 vai Phe Glv Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala 100 105 110 tee ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag ctc gqc gcc 385

Ser Pro Ser vai Thr teu Phe Pro Pro Ser ser Glu Glu Leu GÍy Ã1a 115 120 125 aac aag gee acc ctg gtq tgc etc ate age gac ttc tac ccc age gqc 433

Asn Lys Ala Thr Leu Vat Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser GÍy 130 135 140 gtq acg gtq gcc tgg aag gea gac gqc age ccc gtc acc cag gqc gtg 481

Vai Thr Vai Àla Trp Lvs Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly VaT 145 l'50 155 160 gag acc acc aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac gcg gcc age 529

Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser 165 170 175 age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc 577

Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Ãsp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe 180 185 190 age tgc ctg gtc acg cac gag ggg age acc gtg gag aag aag gtg gcc 625

Ser Cys Leu Vai Thr His Glu cTy Ser Thr VaT Glu Lys Lys VaT Ala 195 200 205 ccc gea gag tgc tet tag gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg 673

Pro Ala GIu Cvs Ser 210 cccggagcct caggacctcc aggaggatct tgcctcccat ctgggtcatc ccgcccttct 733 ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcaaaaaa aaaaaaaaaa 793 aaa 796

< 210 > 15 <211> 213 <212> PRT

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <400> 15

Leu Thr Gin Pro Ala ser vai ser Gly Ser Leu Gly Gin Arq lie Thr 1 5 10 15 lie Ser cys Thr Gly Ser ser Ser Asn lie Gly Gly Asn Asn vai Gly 20 25 30

Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Arg Gly Pro Arg Thr vai lie Phe Thr 35 ' 40 45

Thr His Ser Arg Pro Ser Gly vai ser Asp Arg Phe Ser Ala ser Lys 50 55 60

Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp 65 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala Ala 85 30 95 vai Phe Gly Gly Gly Thr uis Leu Thr vai Leu Glv Gln Pro Lys Ala 100 105 ' 110

Ser Pro Ser vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala 115 120 125

Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly 130 135 140

Vai Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gln Gly Vai 145 150 ' 155 160

Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser 165 170 175

Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe 180 185 190

Ser Cys Leu Vai Thr His Glu Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala 195 200 205

Pro Ala Glu Cys Ser 210

tirzáIMOádBI

< 210 > 16 <211> 1306 <212> ADN <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (646) <223 > <400> 16 c tcc tat gtg ctg aca cag ctg cca tcc atg act gtg acc ctg aag cag 49

Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Leu Pro Ser Met Thr Vai Thr Leu Lys Gin 15 10 15 acg gcc cgc ate acc tgt gag gga gac age att gqa age aaa aga gtt 97

Thr Ala Arg lie Thr cys Glu Gly Asp Ser lie Gly Ser Lys Arg vai 20 25 30 tac tgg tac caa cag aac ctg gqc cag gtc cct cta ctg att ate tat 145

Tvr Trp Tyr Gin Gin Asn Leu Gly Gin Vai Pro Leu Leú lie Ile Tyr 35 40 45 gat gat gcc acc agg ccg tea agg ate cct gac c:ga ttc tcc gqc: gcc 193

Asp Asp Ala Thr Arg Pro Ser Arg lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 aac teg ggg gac aca gee acc ctg acc ate age ggg gee ctg gee gag 241

Asn ser Gly Àsp Thr Ãla Thr Leu Thr ile Ser Gly Ãla Leú Àla Glu 65 70 75 80 gac gag get gac tat tac tgt cag gtg tgg gac agt gat agt aag act 289 Àsp Glu Ãla Àsp Tyr Tyr Cys Gin Vai Trp Àsp Ser Àsp Ser Lys Thr 85 90 95 gqt gta ttc gqc gga gqc acc cac ctg acc gtc etc ggt cag ccc aag 337

Gly val Phe Giv Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys 1GÕ 105 110 gcc tcc ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag etc gqc 385

Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly 115 120 125 gee aac aag gee acc ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc age 433

Ala Asn Lys Ala Thr Leu val cys Leu ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser

tirzáIMOádBI 130 135 140 ggt gtg acg gtg gcc tgg aag gca gac ggc age ccc gtc acc cag gac 481

Gly Val Thr Vai Ala Trp Lvs Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly 145 150 ' 155 160 gtg gag acc acc aag ccc tcc aag cag age aac aac aag tac gcg gcc 529

VaT Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ãlã Ala 165 170 175 age age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa tet cac age age 577

Ser Ser Tvr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser 180 185 190 ttc age tgc ctg gtc acg cac gag ggg age acc gtg gag aag aag gtg 625

Phe Ser Cys Leu val Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lys Lys val 195 200 205 gee ccc gca gag tgc tet tag gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg 676

Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210 cccggagcct caggacctcc aggaggatct tgcctcccat ctgggtcatc ccgctcttct 736 ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcagaaaa aaaaaaaaaa 796 aaaaaactcg agccggctgg agtctgggat gcagaacatg agcatccata cgaagacgac 856 cagcggctac tccggtggcc tgaacttggc ctacgggggc ctcacgagcc ccggcctcaa 916 ctacggccag agctccttcc agtccggctt tggccctggc ggttccttca gccgcagcag 976 ctcctccaag gccgtggttg tgaagaagat cgagactcgc gatgggaagc tggtgtctga 1036 gtcgtctgac gtcctgccca agtgaacggc cagcgcgggc ccccccagcc tccttgctct 1096 tgtggcccca tgaagccttc gggggaagga gctgtgcagg ggagcctcgc gtacgagaga 1156 cccgcctaag gctcagcccc ggtccccagc ctacccttag ggggagtcta ctgccctggg 1216 taccccttct tgtccgtgcc cccgaccgaa agccaattca agtgtctttt cccaaataaa 1276 gccgctgcca gtcccaaaaa aaaaaaaaaa 1306

<210> 17 <211> 214 <212> PRT <213> Canis familíaris <400> 17

tirzáIMOádBI

Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Leu Pro Ser Met Thr Vai Thr Leu Lys Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Glu Gly Asp Ser lie Gly Ser Lys Arg Vai 20 25 30

Tyr Trp Tyr Gin Gin Asn Leu Gly Gin Vai Pro Leu Leu lie lie Tyr 35 40 45

Asp Asp Ala Thr Arg Pro Ser Arg lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60‘

Asn Ser Gly Asp Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Val Trp Asp Ser Asp Ser Lys Thr 85 90 95

Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser 130 135 140

Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser 180 185 190

Phe Ser Cys Leu val Thr His Glu Gly Ser Thr val Glu Lys Lys val 195 200 205

Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210

<210> 18 <211> 859 <212> DNA <213> Canis familiaris

tirzáIMOádBI < 2 2 0 >

<221> CDS <222 > (2) . . (718) <223 > <400> 18

tirzáIMOádBI g acc tcc aac atg gcc tgg tcc cct etc etc etc aca etc ctt get tee 49

Thr ser Asn Met Ala Trp ser Pro Leu Leu Leu Thr Leu Leu Ãla ser 15 10 15 tgc aca gqa tcc tgg gcc cag tet gtq eta act cag ccg acc teg gtg 97

Cvs Thr Gly Ser Trp Ala Gin Ser Vai Leu Thr Gin Prò Thr Ser Vai 20 25 30 teg gqg tee ctt gqc cag agg gtc acc ate tee tgc tet gqc age teg 145

Ser Gly Ser Leu Glv Gin Arg Vai Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser 35 ' 40 45 acc aac ate ggt tet gtt ggt geg act tgg tac caa cac etc cca gqa 193

Thr Asn ile Gly Ser vai Gly Ala Thr Trp Tyr Gin His Leu Pro Gly 50 55 60 aag gee cct aga etc etc etc tac aca cat gqg gaa egg ccg tea gqg 241

Lys Ala Pro Arg Leu Leu Leu Tyr Thr His Gly Glu Arg Pro Ser Gly 65 70 75 80 ate cct gac egg ttt tee ggc tee gag tet gcc aac teg gac acc ctg 289 lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Glu Ser Ala Asn Ser Asp Thr Leu 85 90 95 acc ate act gqa ctt cag get gag gac gag get gat tac tac tgc cag 337

Thr lie Thr cTy Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ãla Asp Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110 tee ttt gat age aeg ctt gag act get gtq ttc gqc gqc gqc act cac 385

Ser Phe Asp ser Thr Leu Glu Thr Ala val Phe Gly Giy Gly Thr His 115 120 125 ctg acc gtc ctt ggt cag ccc aag gcc tcc ccc teg gtc aca etc ttc 433

Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe 130 135 140 ccg ccc tcc tet gag gag etc gqc gcc aac aag gcc acc ctg gtq tgc 4S1

Pro Pro Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu val cys 145 150 155 160 etc ate age gac ttc tac ccc age gqc gtq aeg gtq gcc tgg aag gca 529

Leu lie Ser Ãsp Phe Tyr Pro Ser Glv val Thr val Ala Trp Lys Ala 165 ' 170 175 gac gqc age ccc gtc acc cag gqc gtq gag acc acc aag ccc tcc aag 577

Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 180 185 190 cag age aac aac aag tac geg gcc age age tac ctg age ctg aeg cct 625

Gin ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 195 " 200 205 gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc aeg cac gag 673

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His Glu 210 215 220 gqg age acc gtg gag aag aag gtq gcc ccc gca gag tgc tet tag 718

Gly Ser Thr val Glú Lys Lys val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 235 gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatet 778 tgcctcccat ctgggtcatc ccgctcttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg 838 ttctttgttc aatcagaaaa a 859 <210> 19

tirzáIMOádBI < 211> 238

<212> PRT <213> Canis familíaris <400> 19

tirzáIMOádBI

Thr Ser Asn Met Ala Trp Ser Pro Leu Leu Leu Thr Leu Leu Ala Ser 15 10 15

Cys Thr Gly Ser Trp Ala Gin Ser Vai Leu Thr Gin Pro Thr Ser Vai 20 25 30

Ser Gly Ser Leu Gly Gin Arg Vai Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser 35 ' 40 45

Thr Asn Ile Gly Ser Vai Gly Ala Thr Trp Tyr Gin His Leu Pro Gly 50 55 60

Lys Ala Pro Arg Leu Leu Leu Tyr Thr His Gly Glu Arg Pro Ser Gly 65 70 75 80 lie Pro Asp Arq Phe Ser Gly Ser Glu Ser Ala Asn Ser Asp Thr Leu 85 90 95

Thr lie Thr Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin 100 105 110

Ser Phe Asp Ser Thr Leu Glu Thr Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr His 115 120 125

Leu Thr val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser val Thr Leu Phe 130 135 140

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu val Cys 145 150 155 160

Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala 165 170 175

Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 180 185 190

Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 195 200 ' 205

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His Glu 210 215 220

Gly Ser Thr val Glu Lys Lys val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 235

<210> 20 <211> 875 < 212 > DNA

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (715) <223 > <400> 20 c tc:c aac: atg gcc tgg tcc cct ctc ctc: ctc aca ctc ctt gtt tac tgc 49

Ser Asn Met Ala Trp ser Pro Leu Leu Leu Thr Leu Leu vai Tyr cys 1 5 10 15 aca ggg tcc tgg gcc cag tct gta ctg act cat ccg acc tea gtg teg 97

Thr Gly Ser Trp Ãla Gin Ser Vai Leu Thr His Pro Thr Ser Vai Ser 20 25 30 ggg tcc ctt gqc cag agg gtc acc att tcc tgc tcc gga age acg aac 145

Gly Ser Leu Gly Gin Arg Vai Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Asn 35 40 45 aac ate ggt act gtt ggt gcg ggc tgg tac caa cag ttc cca gga aag 193

Asn lie Gly Thr Vai Gly Ala Glv Trp Tyr Gin Gin Phe Pro Gly Lys 50 55 ' 60

tirzáIMOádBI gcc cct aaa etc etc att tac agt gat ggg aat cga ceg tea ggg gtc 241

Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr ser Asp Gly Asn Arg Pro ser Gly vai 65 70 75 80 cct gac egg ttt tee ggc tee aag tea ggc aac tea gcc acc ctg acc 289

Pro Asp Arg Phe ser Gly ser Lys ser Gly Asn ser Ala Thr Leu Thr 85 90 95 ate att gga ett cag get gag gac gag get gat tac tac tqt cag tet 337 lie lie Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tvr Tyr cys Gin ser 100 105 ' 110 qtt gat ccc aeg ett gat gat cat gtq ttc ggc gga gqc acc cat ctg 385 val Asp Pro Thr Leu Gly Gly His vat Phe Gly Gly Gly Thr His Leu 115 120 125 acc gtc etc ggt caq ccc aag gcc tee cct teg gtc aca etc ttc ccg 433

Thr val Leu Gly Glh Pro Lys Ala ser Pro ser val Thr Leu Phe Pro 130 135 140 ccc tee tet gag gag ett ggc gcc aac aag gcc acc ctg gtq tgc etc 481

Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 145 150 ' 155 160 ate age gac ttc tac ccc age ggc gtq aca gtq gcc tgg aag gca gac 529 lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Val Thr Vat Ala Trp Lys Ãla Asp 165 170 175 ggc age ccc ate acc cag gqt gtq gag acc acc aag ccc tee aag cag 577

Gty Ser Pro lie Thr Gin Gly Vat Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin 180 ' 185 190 age aac aac aag tac geg gcc age age tac ctg age ctg aeg cct gac 625

Ser Asn Asn Lvs Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Àsp 195 ' 200 ' 205 aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc aeg cac gag ggg 673

Lys Trp Lys ser His ser ser Phe ser cys Leu val Thr His Glu Gty 210 215 220 age acc gtq gag aag aag gtg gcc ccc gca gag tgc tet tag 715 ser Thr val Glu Lys Lys vat Ãla Pro Ala Glu cys ser 225 230 235 gttcctgatg tcccccgccc accaaagggg gctcagagcc tcaggacctc caggaggatc 775 ttgcctccca tctgggtcat cccagccttt ccccttaaac ccaggcaaca ttcaataaag 835 tgttctttct tcaatcagaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 875

<210> 21 <211> 237 <212> PRT <213> Canis familiaris < 4 0 0 > 21

tirzáIMOádBI

Ser Asn Met Ala Trp ser Pro Leu Leu Leu Thr Leu Leu vai Tyr cys 1 5 10 15

Thr Gly Ser Trp Ala Gin ser vai Leu Thr Hi s Pro Thr ser vai ser 20 25 30

Gly Ser Leu Gly Gin Arg vai Thr lie Ser cys Ser Gly Ser Thr Asn 35 40 45

Asn lie Gly Thr vai Gly Ala Gly Trp Tyr Gin Gin Phe Pro Glv Lys 50 55 60

Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr ser Asp Gly Asn Arg Pro Ser Gly vai 65 70 75 80

Pro Asp Arg Phe ser Gly ser Lys ser Gly Asn ser Ala Thr Leu Thr 85 90 95 lie lie Glv Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr cys Gin ser 100 105 110

Vai Asp Pro Thr Leu Gly Gly His vai Phe Gly Gly Gly Thr Hi s Leu 115 120 125

Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala ser Pro Ser vai Thr Leu Phe Pro 130 135 140

Pro Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu vai cys Leu 145 150 155 160 lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly vai Thr vai Ala Trp Lys Ala Asp 165 170 175

Gly Ser Pro lie Thr Gin Gly vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin 180 185 190

Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp 195 200 205

Lys Trp Lys Ser His Ser ser Phe Ser cys Leu vai Thr His Glu Gly 210 215 220

Ser Thr vai Glu Lys Lvs vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 235 <210> 22

tirzáIMOádBI <211> 862

< 212 > DNA <213> Canis familíaris <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (721) <223 > <400> 22 g atg ate ttc acc atg gee tgg tee cct etc etc etc ggc etc ett get 49

Met lie Phe Thr Met Ala Trp Ser Pro Leu Leu Leu Gly Leu Leu Ala IS 10 15 cac tgc aca ggg tee tgg gee cag tet atg ctg act cag ccg gee tea 97

His cys Thr Gly ser Trp Ala Gin ser Met Leu Thr Gin Pro Ala ser 20 25 30 gtg tet ggg tee ctg ggc cag aag gtc acc ate tee tgc act gga age 145

VaT Ser Gly Ser Leu Gly Glή Lys Val Thr lie Ser Cys Thr Gly Ser 35 40 45

tirzáIMOádBI age tee aac ate gqt get tat tat gtg age tgg tac caa cag tcc cca 193

Ser Ser Asn Ile Gly Ala Tyr Tyr Vat Ser Trp Tyr Gin Gin Ser Pro 50 55 60 gga aaa ggc cct aga acc gtc ate tat gqt gat aat tac ega cct tea 241

Gly Lys Gly Pro Arg Thr vai ile Tyr Gly Asp Asn Tyr Arg Pro Ser 65 70 75 80 ggg gtc ccc gat ega ttc tet ggc tee aag tea ggc agt tea gee acc 289

Gly val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ãla Thr 85 90 95 ctg acc ate tet ggg etc cag get gag gac gag get gaa tat tac tgc 337

Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys 100 105 110 tta tea tgg gat aat agt etc aga ggt gqt gtg ttc gee gga ggc acc 385

Leu Ser Trp Asp Asn Ser Leu Arg Gly Gly Vat Phe Gty GÍy GÍy Thr 115 120 125 cac ctg acc gtc etc gqt cag ccc aag gee tec ccc teg gtc aca etc 433

His Leii Thr val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser val Thr Leu 130 ' 135 140 ttc ccg ccc tec tet gag gag etc ggc gee aac aag gee acc ctg gtg 481

Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu val 145 150 155 160 tgc etc ate age gac ttc tac ccc age gqt gtg aeg gtg gee tgg aag 529

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Ala Asp gTv Ser Pro Val Thr Gln Gty Vat Glu Thr Thr Lvs Pro Ser 180 185 190 aag cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg age ctg aeg 625

Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr 195 ‘ 200 205 cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc aeg cac 673

Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu val Thr His 210 215 220 qaq qgq age acc qtq qaq aaq aaq qtq gee ccc gca gag tqc tet taq 721

Glu Gly Ser Thr Vat Glu Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 235 gttcccgacg gccccgceca ccgaaggggg cccggagcct eaggacctcc aggaggatet 781 tgcctcccat ctgggtcatc ccgctcttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg 841 ttctttgttc aatcagaaaa a 862

< 210 > 2 3 <211> 239 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 23

tirzáIMOádBI

Met lie Phe Thr Met Ala Trp ser Pro Leu Leu Leu Gly Leu Leu Ala 15 10 15

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Val Ser Gly Ser Leu Gly Gin Lys Val Thr lie Ser Cys Thr Glv Ser B5 40 45

Ser Ser Asn lie Gly Ala Tyr Tyr Val Ser Trp Tvr Gin Gin Ser Pro SO 55 60

Gly Lys Gly Pro Arg Thr Val lie Tyr Gly Asp Asn Tyr Arg Pro Ser 65 70 75 80

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Thr 85 90 95

Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys 100 105 110

Leu ser Trp Asp Asn ser Leu Arg Gly Gly val Phe Gly Gly Gly Thr 115 120 125

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Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Glv Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val 145 150 ' 155 160

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Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tvr Leu Ser Leu Thr 195 200 ' 205

Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His 210 215 220

Glu Gly Ser Thr val Glu Lys Lys val Ala Pro Ala Glu cvs ser 225 ’ 230 235

< 210 > 24 <211> 884 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

< 2 21> CDS tr^o í yooob l <222 > (2)..(736) <223 > <400> 24 g aag aca gga tcc gtq atg acc tcc acc atq gga tgg ttc cct ctq etc 49

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Leu Thr Leu Leu Ala His Cys Thr Gly Ser Trp Ala Gin Ser Val Leu 20 25 30 act cag ecg gee tea gtg tet ggg tcc ctg ggc cag agg gtc acc ate 145

Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Leu Gly Gin Arg Val Thr lie 35 40' 45 tcc tgc act gga acc age tcc aat ate ggt aca gat tat gtg ggc tgg 193

Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asπ lie Gly Thr Asp Tyr Val Gly Trp 50 55 60 tac caa cag etc cca gga aga ggc ccc aga acc etc ate tet gat act 241

Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Arg Gly Pro Arg Thr Leu lie Ser Asp Thr 65 70 75 80 agt ege ega ccc teg ggg gtc cct gat ega ttc tet ggc tee agg tea 289

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Gly Thr Thr Ãla lie LeD Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu 100 105 110 get gat tat tac tgc tea gca tat gac age agt etc gqt gga act ate 385 Ãla Àsp Tyr Tyr Cys Ser Ãla Tyr Àsp Ser Sêr Leu Gly Gly Thr lie 115 120 125 ttc ggc gga ggc act ttc ctg acc gtc etc gqt cag ccc aag gee tcc 433

Phe Gly Gly Gly Thr Phe Leu Thr val Leu Gly Gin Pro Lys Ãla Ser 130 135 140 ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tec tet gag gag etc ggc gee aac 481

Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn 145 150 155 ' 160 aag gee acc ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc age ggc gtg 529

Lvs Ala Thr Leu Val Cvs Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Val 165 ' 170 175 aeg gtg gee tgg aag gca gac ggc age ccc gtc acc cag ggc gtq gag 577

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Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lvs Tyr Ala Ala Ser Ser 195 200 205 tac ctg age ctg aeg cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age 673

Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser 210 215 ' 220 tgc ctg gtc aeg cac gag ggg age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc 721

Cys Leu Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro 225 230 235 ' ' 240 gca gag tgc tet tag gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct 776

Ala Glu Cys Ser caggacctcc aggaggatet tgcctcccat ctgggtcatc ccgcecttct ccccgcaccc 836 aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcaaaaaa aaaaaaaa 884 <210> 25 <211> 244

tirzáIMOádBI

<212> PRT <213> Canis familiaris <400> 25

Lvs Thr Gly Ser vai Met Thr ser Thr Met Gl v Trp Phe Pro Leu Leu l' 5 10 ' 15

Leu Thr Leu Leu Ala His cys Thr Gly Ser Trp Ala Gin ser vai Leu 20 25 30

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Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn lie Gly Thr Asp Tyr Vai Gly Trp 50 55 60

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Ser Arg Arq Pro Ser Gly Vai Pro Asp Arq Phe Ser Gly Ser Arq Ser 85 90' 95'

Gly Thr Thr Ala lie Leu Thr ile Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu 100 105 110

Ala Asp Tyr Tyr cys Ser Ala Tyr Asp Ser ser Leu Gly Gly Thr ile 115 ' 120 125 phe Gly Gly Gly Thr Phe Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala ser 130 135 140

Pro Ser vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Glv Ala Asn 145 150 155 ' 160

Lvs Ala Thr Leu vai cys Leu ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly vai 165 170 175

Thr val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro vai Thr Gin Glv vai Glu 180 185 190

Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser 195 200 205

Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser 210 215 220

Cvs Leu Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro 225 230 235 240

Ala Glu Cys Ser <210> 26

tirzáÍLlOJOtSI <211> 729

< 212 > ADN <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (574) <223 > <400> 26 c tcc aac att gqa gqt aat cat gta gqt tgg tac caa caa ttt cca gqa 49

Ser Asn lie Gly Gly Asn His Val Gly Trp Tyr Gin Gin Phe Pro Gly 15 10 15 aga ggc ccc aga act gcc ate tat age aca aat gtt cga ccc teg gqg 97

Arg Gly Pro Arg Thr Vai lie Tyr Ser Thr Asn Vai Arq Pro Ser gTv 20 25 ' 30 gtg ccc gat cga ttc tet ggc tcc aag tet gac aac aca gqc acc ctg 145 vai Pro Ãsp Arg phe ser Gly ser lvs ser Asp Asn Thr Gly Thr Leu 35 40 ' 45 acc ate tet qqa etc cag get gag gat gag get gat tat tat tgc gca 193

Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr cys Ala 50 55 60 aeg tgg gat gat agt etc agt gtt tet ctg ttc ggc gga ggc acc cac 241

Thr Trp Asp Asp Ser teu Ser vai ser Leu Phe Gly G1v Gly Thr His 65 70 75 80 ctg acc gtc etc ggt cag ccc aag gcc tcc ccc teg gtc aca etc ttc 289

Leu Thr Val Leu Glv Gin Pro Lyi Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe 85 90 95 ccg ccc tcc tet gag gaq etc ggc gcc aac aag gcc acc ctg gtg tgc 337

Pro Pro Ser ser Glú Glú Leu Gly Ãla Asn Lys Ãla Thr Leu val cys 100 105 110 etc ate age gac ttc tac ccc age gqc gtg aeg gtg gcc tgg aag gca 385

Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Val Thr Val Ãla Trp Lys Ãla 115 120 125 gac ggc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc acc aag ccc tcc aag 433

Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 130 135 140 cag acc aac aac aag tac geg gcc age age tac ctg age ctg aeg cct 481

Gin Thr Asn Asn Lys Tyr Ãla Ala ser sêr Tvr Leu ser Leu Thr pro 145 150 155 160 gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc aeg cac gag 529 Ãsp Lys Trp Lys Ser His Ser sêr Phe sêr cys Lett val Thr His Glu 165 170 175 gqg age acc gtg gag aag aag gtg gcc ccc gca gag tgc tet tag 574

Gly Ser Thr Vat Glu Lys Lys Vat Ala Pro Ala Glu Cys Ser 180 ‘ 185 190 gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatet 634 tgcctcccat ctgggtcatc ccgcccttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg 694 ttctttgttc aatcagaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 729 <210> 27

tirzáIMOádBI < 211> 190

<212> PRT <213> Canis familíaris <400> 27

Ser Asn lie Gly Gly Asn His Vai Gly Trp Tyr Gin Gin Phe Pro Gly 1 ' 5 10 15

Arg Gly Pro Arg Thr Vai lie Tyr Ser Thr Asn Vai Arg Pro Ser Gly 20 25 30

Vai Pro Asp Arg Phe ser Gly ser Lys ser Asp Asn Thr Gly Thr Leu 35 40 45

Thr He Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cvs Ala 50 55 60

Thr Trp Asp Asp ser Leu ser vai ser Leu Phe Gly Gly Gly Thr His 65 70 75 80

Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai Thr Leu Phe 85 90 95

Pro Pro ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu vai cys 100 105 110

Leu lie ser Asp phe Tyr pro ser Gly vai Thr vai Ala Trp Lys Ala 115 ' 120 125

Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 130 135 140

Gin Thr Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu ser Leu Thr Pro 145 150 155 160

Asp Lys Trp Lvs ser His ser ser Phe ser cys Leu vai Thr His Glu 165 170 ' 175

Gly Ser Thr vai Glu Lys Lys vai Ala Pro Ala Glu cys ser 180 185 190

< 210 > 2 8 <211> 1176 <212> DNA <213> Canis faiuiiianis <22Q>

<221> CDS fcr^o i yooob l <222 > (2)..(730) <223 > <400> 28 a gqa tcc gtq atq acc tcc acc atq ggc tgg tcc cct etc ate etc ace 49

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1 5 10 IS etc ttc get cac tgc gca ggg tcc tgg gee cag tet gtc ctg act eag 97

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Pro Ála Ser val ser Gly Ser Leu Gly Gin Ard val Thr lie Ser evs 35 40 ' 45 act gqa age age tcc aat gtt gqt ttt gqc gat tat gtq gqc tgg tac 193

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tirzáIMOádBI 50 55 60 cag cag etc cca gga aga ggc ccc aga acc etc ttc tac cgt get act 241

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65 70 ' 75 SO gqc ega ccc teg ggg gtc cct gat ega ttc tet gee tee agg tea gqc 289

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Thr Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Pro Glu Asp Glu Ala 100 105 110 gat tat tac tgc tea tee tat gac tet act etc ttt tet gtq ttc gqc 385

Asp Tyr Tyr cys Ser ser Tyr Ãsp Ser Thr Leu Phe Ser val Phe Gly 115 120 125 gga ggc acc tac ctg acc gtc etc gqt cag ccc aag gee tee ccc teg 433

Glv Gly Thr Tyr Leu Thr Val Leu Gtv Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser 130 135 ' 140 gtc aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag etc gqc gee aac aag gee 481

Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala 145 150 155 160 acc ctg gtc tgc etc ate age gac ttc tac ccc age ggc gtg aeg gtq 529

Thr Leu val cys Leu lie ser Asp Phe Tyr pro ser Gly val Thr val 165 170 175 gee tgq aaq gca gac ggc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc acc 577

Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr 180 185 190 aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg 625

Lys Pro Ser Lvs Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ãla Ala Ser Ser Tyr Leu 195 ' 200 205 age ctg aeg cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg 673

Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser ser Phe Ser cys Leu 210 215 220 gtc aeg cac gag ggg age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc gca gag 721

Val Thr His Glu Gly Ser Thr Vat Glu Lys Lys Vat Ala Pro Ala Glu 225 230 235 240 tgc tet tag gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct 770 cys ser caggacctcc aggaggatet tgcctcccat ctgggtcatc ccgcccttct ccccgcaccc 830 aggcagcact caataaagtg ttccaatttc aagegaetta aatgcatatg gttttttttt 890 tttgatgtga tacagctgtg tttacttcaa cctccaggga atcctaaggg cccagagact 950 ccccttgtgc tgtaagattg tgtccctgaa acaagtcacc tccagccttc cagaggggtg 1010 ggctgcctgg aggcagtggc acgggcctgg getetetaga atgtgtactg agcaggggca 1070 ggaggcccaa agggccaccc atgcetccag gagcctccgc aggagggage agagtctgta 1130 gaggctcaeg gagaggctgg aagatcactg gaacagcagc aagcca 1176

<210> 29 <211> 242 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 2 9

tirzáIMOádBI

Gly Ser vai Met Thr ser Thr Met Gly Trp ser Pro Leu lie Leu Thr 15 10 15

Leu Phe Ala His cys Ala Gly Ser Trp Ala Gin Ser Vai Leu Thr Gin 20 ' ' 25 30

Pro Ala Ser Vai Ser Gly Ser Leu Gly Gin Arg Vai Thr Ile Ser Cys 35 40 45

Thr Gly Ser ser ser Asn vai Gly Phe Gly Asp Tyr vai Gly Trp Tvr 50 55 60

Gin Gin Leu Pro Gly Arg Gly Pro Arg Thr Leu Phe Tyr Arg Ala Thr 65 70 75 80

Gly Arg Pro Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Arg Ser Gly 85 90 95

Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gin Pro Glu Asp Glu Ala 100 105 110

Asp Tyr Tyr cys Ser ser Tyr Asp Ser Thr Leu Phe Ser vai Phe Gly 115 120 125

Gly Gly Thr Tyr Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala ser Pro Ser 130 135 140

Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala 145 150 155 160

Thr Leu Vai Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr Vai 165 170 175

Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro vai Thr Gin Gly vai Glu Thr Thr 180 185 190

Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu 195 200 205

Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu 210 215 220 vai Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lys Lys vai Ala Pro Ala Glu 225 230 235 240

Cys Ser

<210> 30 <211> 762 <212> ADN <213> Canis familiaris <220>

fcK'dIMOádBI

<221> CDS <222 > (1) . . (609) <223 > <400> 30 ggc cag agg gtc acc ate tee tgc act gga age ccc aat gtt gqt tat 48

Gly Gin Arg Vai Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Pro Asn Vai Gly Tyr 1 5 10 15 gqc aat tac gtq gqc tgg tac cag cag etc cca gga aca gqc ccc aga 96

Gly Asn Tvr vai Gly Trp Tvr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Gly Pro Arg 20 ' 25 30 acc etc att tat ggt aag aat cac cga ccc gcg gqg gtc cct gat cga 144

Thr Leu lie Tyr Gly Lys Asn His Arq Pro Ala Gly Vai Pro Asp Arg 35 40 " 45 ttc tet ggc tee act tea ggc agt tea gee aca ctg acc ate tet gqg 192

Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Ser Âla Thr Leú Thr lie Ser Glv 50 55 60 etc. cag get. gag gat gaa gea gat tat tac tgc tea tee tat gac ate 240

Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Ile 65 70 75 S0 agt etc ggt ggt gtt gtg ttc ggc gga gqc acc cat ctg acc gtc etc 2S8

Ser Leu G!y Gly Vai Vai Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Vai Leu 85 90 95 gqt cag cc:c: aag gee tee: ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tcc tet 336

Glv Gin Pro Lvs Ala Ser Pro Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 100 105 110 gag gag etc ggc gee aac aag gee acc ctg gtg tgc etc ate age gac 384

Glu Glu Leu Gly Ãla Asn Lys Âla Thr Leu Vai Cys Leu Ile Ser Àsp 115 120 125 ttc tac ccc agt ggc gtq acg gtg gee tgg aag gea gac ggc age ccc 432

Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr VaT Ala Trp Lys Ãla Asp Gly Ser Pro 130 135 140 gtc acc cag gqc gtq gag acc acc aag ccc tee aag cag age aac aac 480

Vai Thr Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 145 150 155 ' 160 aag tac gcg gee age age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa 528

Lys Tvr Ãla Âla Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys 165 170 175 tet cac age age ttc: age tgc ctg gtc aca cac gag gqg age acc gtg 576

Ser His Ser Ser Phe Ser Cvs Leu Vai Thr His Glu Gly Ser Thr Vat ISO 185 190 gag aag aag gtq gee ccc gea gag tgc tet tag gttcccgacg cccccgccca 629

Glu Lys Lvs Vat Âla Pro Âla Glu Cys Ser 195 200 cctaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct tgcctcctat ctgggtcatc 689 ccgcccttcL ccccacaccc aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aatcagaaaa 749 aaaaaaaaaa aaa 762

<210> 31 <211> 202 <212> PRT <213> Canis familiaris

tirzáIMOádBI <400> 31

Gly Gin Arg vai Thr ile Ser cys Thr Gly Ser Pro Asn vai Gly Tyr 1 5 10‘ 15

Gly Asn Tyr vai Gly Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Gly Pro Arg 20 25 30

Thr Leu lie Tyr Gly Lys Asn His Arg Pro Ala Gly Vai Pro Asp Arg 35 40 45

Phe Ser Gly Ser Thr ser Gly Ser ser Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly 50 55 60

Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr cys Ser ser Tyr Asp lie 65 70 75 80

Ser Leu Gly Gly vai vai Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu 85 ' 90 95

Glv Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 100 105 110

Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lvs Ala Thr Leu vai cys Leu lie Ser Asp 115 ' 120 125

Phe Tyr Pro Ser Gly vai Thr vai Ala Trp Lvs Ala Asp Gly Ser Pro 130 135 ' 140

Vai Thr Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 145 150 155 160

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tvr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys 165 ’ 170 175

Ser His Ser ser Phe Ser cvs Leu vai Thr His Glu Glv Ser Thr vai 180 ' 185 ' 190

Glu Lys Lvs vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 200

< 210 > 32 <211> 826 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

< 2 21> CDS <222 > (1) . . (678) <223 >

tirzáIMOádBI <400> 32 ctt gtc age etc ctg get etc tgc aca ggt tet gtg gee tcc tat gtq 48

Leu Vai Ser Leu Leu Ala Leu Cys Thr Gly Ser Vai Ala Ser Tyr Vai 15 10 15 ctg aca cag eeq ccq tee atg agt gtg acc ctg agq cag acg gee ege 96 L.eu Thr Gin prõ Pró ser Met ser vai Thr Leu Arg Gin Thr Ãla Arq 20 2S 30 ate acc tgt gag gga gac age att gga gat aaa aga att tac tag tac 144 lie Thr Cys Glu G!y Asp sir He Gly Asp Lys Arg Vai Tyr Trp Tyr 35 40 45 cag cag aaa ctg gac cgg ggc ccg atg ttg att att tat gat ggt acc 192

Gin Gin Lvs Leu Glv Arg Gly Pro Met Leu lie lie Tyr Asp Gly Thr 50 S5' 60 tac aqg ccg tea ggg ate cct gac cga ttc ttc ggc gee aat teg ggg 240

Tyr Arq Prõ Ser Gly lie Pro Àsp Arq Phe Phe Gly Ala Asn Ser Gly 65 ‘ 70 ' 75 80' age aca gee acc ctg acc ate age gag gee ctg gee gag gac gag get 288

Ser Thr Ala Thr Leu Thr lie sir Gly Ala Leu Ala Glu Asp Glu Ala 85 90 95 gac tat tac tgc cag gtg tgg gac aat ggt gaa att att ttc ggc gga 336

Asp !yr Tvr cys Gin Vai Trp Asp Asn Gly Glu lie Ile Phe Gly Gly 100 105 110 ggc acc cqt ctq acc gtc etc ggt cag ccc aag gee tcc cct teg gtc 384

Gly Thr Arg Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai 115 120 125 aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag ctt ggc gee aac aag gee acc 432

Thr Leu Phe Pro Pro ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr 130 135 140 ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc age ggc gtg aca gtg gee 480

Leu val Cvs Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Glv Vai Thr Vai Ala 145 150 155 160 tgg aag gea gac ggc age ccc ate acc caq ggt gtq gag acc acc aag 528

Trp lvs Ala Asp Gly ser pro lie Thr Gift Glv val Glu Thr Thr Lys 165 170 ' 175 ccc tee aag cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg age 576

Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Alã Ala Ser Ser Tyr Leu Ser 180 185 190 ctg acg cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc 624

Leu Thr Pro Àsp Lys Trp Lys ser His ser sir Phe ser cys Leu val 195 ' 200 205 acg cac gag gqq age acc qtg qag aag aaa gtq gee ccc qca qaq tqc 672

Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu lvs Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys 210 215 ' 220 tet tag gttcctgatg tcccccgccc accaaagggg gctcagagcc tcaggacctc 728

Ser 225 caggaggatc ttgcctccca tctgggtcat cccagccttt ccccttaaac ccaggcaaca 788 ttcaataaag tgttctttct tcaatcagaa ggggceeg 826

<210> 33 <211> 225 <212> PRT <213> Cernis found. 1 doil'ds <400> 33

tirzáIMOádBI

Leu Vai Ser Leu Leu Ala Leu Cys Thr Gly Ser Vai Ala Ser Tyr Vai 15 10 15

Leu Thr Gin Pro Pro Ser Met Ser Vai Thr Leu Arg Gin Thr Ala Arg 20 25 ' 30 lie Thr Cys Glu Gly Asp Ser lie Gly Asp Lys Arg Vai Tyr Trp Tyr 35 40 ' 45

Gin Gin Lys Leu Gly Arq Gly Pro Met Leu lie lie Tyr Asp Gly Thr 50 ~ 55 60

Tvr Arg Pro Ser Gly lie Pro Asp Arg Phe Phe Gly Ala Asn Ser Glv 65 ’70 75 80'

Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu Asp Glu Ala 85 90 95

Asp Tyr Tyr Cys Gin Vai Trp Asp Asn Gly Glu lie Ile Phe Gly Gly 100 105 110

Gly Thr Arg Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai 115 12Ó 125

Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Glv Ala Asn Lys Ala Thr 130 135 ' 140

Leu Vai Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr Vai Ala 145 150 155 160

Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro lie Thr Gin Glv Vai Glu Thr Thr Lys 165 170 ‘ 175

Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tvr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser 180 185 190

Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai 195 ' 200 205

Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lys Lys vai Ala Pro Ala Glu Cys 210 215 220

Ser 225

<210> 34 <211> 796 <212> ADN <213> Canis familiaris <220>

fcK'dIMOádBI

<221> CDS <222 > (2) . . (643) <223 > <400> 34 g ctg act cag ccg gcc tea gtg tet ggg tcc ctg ggc cag agg gtc. acc 49

Leu Thr Gin Pro Ala Ser Vai Ser Gly Ser Leu Glv Gin Arg Vai Thr 1 5 10 ' ' 15 ate tee tgc act gga age agt tcc aac att gga agt aat gat gtg gat 97

Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ser Asn Asp Vai Gly 20 25 30 tgg tac cag cag etc cca gqa aga ggc ccc aaa act gtc gtc tet aat 145

Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Arg Gly Pro Lvs Thr vai Vai Ser Asn 35 40 ' 45 aca aat att cgg ccc teg ggg gtg ccx gat cga ttc tet gcc tcc: aag 193

Thr Asn lie Arg Pro Ser Gly Vai Pro Ãsp Arg Phe Ser Ala Ser Lys 50 55 60 tet ggc age aca gee acc ctg acc ate tet ggc etc cag get gag gat 241

Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gin Ãla Glu Asp

65 70 75 SO gag get gat tat tac tgc tea aeg tgg gat aat agt etc agt act tac 289

Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Trp Asp Asn Ser Leu Ser Thr Tyr 85 90 95 atg ttc ggc tet gqa acc caa ctg acc gtc ctt gat cag ccc aag gcc 337

Met Phe Gly Ser Gly Thr Gin Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Àla 100 105 110 tee ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag etc ggc gcc 385

Ser Pro Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala 115 120 125 aac aag gee acc ctg gtg tgc etc ate: age gac ttc tac ccc: age ggc 433

Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly 130 135 140 gtg acg gtg gee tgg aag gea gac ggc age ccc ate acc cag gac gtg 481

Vai Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Glv Ser Pro lie Thr Gin Gly Vai 145 150 ' 155 160 gag acc acc aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac gcg gcc age 529

Glu Thr Thr Lvs Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser 165 170 175 age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc 577

Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Ãsp Lys Trp Lvs Ser His Ser Ser Phe 180 1S5 ' 190 age tgc ctg gtc acg cac gag ggg age act gtg gag aag aag gtg gcc 625

Ser Cys Leu Vai Thr His Glu Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala 195 200 205 ccc gea gag tgc: tet tag gtteccgatg ccccccgccc: accgaagggg 673

Pro Ala Glu Cys Ser 210 gctcggagcc tcaggacctc caggaggatc ttgcctccca tctgggtctt cccagccctt 733 ttccccacac tcaggcaaca ctcaataaag tgtcctttat tcaatcagaa aaaaaaaaaa 793 aaa 796 < 210 > 3 5

tirzáIMOádBI <211> 213

<212> PRT <213> Canis familíaris <400> 35

Leu Thr Gin Pro Ala Ser Vai Ser Gly Ser Leu Gly Gin Arg Vai Thr 15 10 15 lie Ser Cys Thr Gly Ser Ser ser Asn lie Gly Ser Asn Asp vai Gly 20 25 30

Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Arg Gly Pro Lys Thr vai vai ser Asn 35 40 45

Thr Asn lie Arg Pro Ser Gly Vai Pro Asp Arq Phe Ser Ala Ser Lys 50 55 '60

Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp 65 ' 70 75 80

Glu Ala Asp Tyr Tvr Cys Ser Thr Trp Asp Asn Ser Leu Ser Thr Tyr 85 90 95

Met Phe Glv ser Gly Thr Gin Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala 100 105 110

Ser Pro ser vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala 115 120 125

Asm Lys Ala Thr Leu vai cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly 130 135 140 vai Thr vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro lie Thr Gin Gly vai 145 150 155 160

Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin ser Asn Asn Lys Tvr Ala Ala ser 165 170 ' 175

Ser Tyr Leu ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser ser Phe 180 185 190

Ser cys Leu vai Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lvs Lys vai Ala 195 200 205

Pro Ala Glu Cys Ser 210 <210> 36 <211> 930

tirzáIMOádBI

< 212 > DNA <213> Canis familiaris <220>

< 2 21> CDS <222 > (1) . . (774) <223 > <400> 36 atg aag agg gtg aga aat att gaa aag att ata ata aat cag gtg gat 48

Met Lys Arg vai Arg Asn lie Glu Lys lie lie lie Asn Gin VaT Asp 15 10 15

tirzáIMOádBI gtq atg acc tcc acc atg ggc tqg ttc cct etc ate etc acc etc etc 96 vaí Met Thr ser Thr Met Gly Trp Phe Pro Leu lie Leu Thr Leu Leu 20 25 30 get tac tgc gea ggg tee tgg gee cag tet gtq ctg act cag ccg gee 144

Ala His Cys Ala Glv Ser Trp Ala Gin Ser Vai Leu Thr Gin Pro Ala 35 ' 40 45 tea gtq tet ggg tee ctg ggc cag agg gtc acc ate tee tgc act gqa 192

Ser Vai Ser Gly Ser Leu Gly Gin Arg Vai Thr Ile Ser Cys Thr Gly 50 55 60 age age tcc aat gtt ggt tat ggc aat tat gtq ggc tgg tac cag cag 240

Ser Ser Ser Asr Vai Gly Tyr Gly Asn Tyr VaT Gly Trp Tyr Gin Glή 65 70 ‘ 75 80 etc cca gqa aca age ccc aga aac etc ate tat gat act agt age ega 288

Leu Pro Gly Thr ser Pro Arg Asn Leu lie Tyr Asp Thr ser ser Arg 85 90 95 ccc teg gqg gtc cct gat ega ttc tet ggc tee agg tea ggc age aca 336

Pro Ser Gly Vai Pro Àsp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Ser Thr 100 105 110 gea acc ctg acc ate tet gqg etc cag get gag gat gaa gee gat tat 384

Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Ãsp Glu Ala Asp Tyr 115 120 125 tac tgc tea tcc tat gac aga agt etc agt ggt get gtg ttc gqc gqa 432

Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Arg Ser Leu Ser Gly Ala Vat Phe Gly Gly 130 135 140 ggc acc cac ctg acc gtc etc ggt cag ccc aag gee tcc ccc teg gtc 480

Gly Thr His Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val 145 150 155 160 aca etc ttc ccg ccc tcc tet gag gag etc gqc gee aac aag gee acc 528

Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ãla Asn Lys Ãla Thr 165 170 ' 175 ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc age gqc gtg aeg gtq gee 576

Leu VaT Cys Leu He Ser Asp Phe Tyr Pro Ser cTy VaT Thr VaT Ala 180 185 190 tgg aag gca gac ggc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc acc aag 624

Trp Lys Ala Asp cTy Ser Pro val Thr Gin GTy VaT Glu Thr Thr Lys 195 200 205 ccc tcc aag cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg age 672

Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser 210 215 220 ctg aeg cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc 720

Leu Thr Pro Ãsp Lys Trp Lys ser His sèr sér Phe ser cys Leu val 225 230 235 240 acq cac qaq qqq aqc acc qtq qaq aaq aag qtq qcc ccc qca qaq tgc 768

Thr His Glu GTy Ser Thr VaT Glu Lys Lys VaT Ala Pro Ala Glu Cys 245 250 255 tet tag qttcccgacg gccccgccca ccgaagggqg cccggagcct caggacctcc 824

Ser aggaggatet tgcctcccat ctgggtcatc ccgcccttct ccccgcaccc aggcagcact 884 caataaagtg ttctttgttc aatcagaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 930

<210> 37 <211> 257 <212> PRT fcr^o í yooob l <213> Cóluís fcttniUciii'is <400> 37

tirzáIMOádBI

Met Lys Arg vai Arg Asn lie Glu Lys lie lie lie Asπ Gin val Asp 1 5 10 15

Val Met Thr 5er Thr Met Gly Trp Phe Pro Leu lie Leu Thr Leu Leu 20 25 30

Ala His Cys Ala Gly Ser Trp Ala Gin Ser val Leu Thr Gin Pro Ala 35 40 45

Ser Val Ser Gly Ser Leu Gly Gin Arg Val Thr lie Ser Cvs Thr Gly 50 55 60

Ser Ser Ser Asn Val Gly Tyr Gly Asn Tyr Val Gly Trp Tyr Gin Gin 65 70 75 80

Leu Pro Gly Thr Ser Pro Arg Asn Leu lie Tyr Asp Thr Ser Ser Arg 85 90 95

Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Glv Ser Thr 100 105 110

Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr 115 120 125

Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Arg Ser Leu Ser Glv Ala Val Phe Gly Gly 130 135 '140

Gly Thr His Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lvs Ala Ser Pro Ser Val 145 150 155 160 lhr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Glv Ala Asn Lvs Ala Thr 165 170 175

Leu val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly val Thr val Ala 180 185 190

Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys 195 200 205

Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tvr Leu Ser 210 215 220

Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser Hi s Ser Ser Phe Ser Cvs Leu Val 225 230 235 240

Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys 245 250 255

Ser

tirzáIMOádBI

< 210 > 3 8 <211> 843 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (9) . . (692) <223 > <400> 38

fcl’A'dIMOádBI gcaaacat atg tac aaa att eta gag tct acg tac att gtg aaa aga tea 50

Met Tyr Lys lie Leu Glu Ser Thr Tvr lie Vat Lys Arg Ser 1 5 ' 10 ate act gtc cct cag cca cca ttt gtg aqt gtg acc ctg agq gac acg 98 lie Thr Val Pro Gin Pro Pro Phe Val Ser Vat Thr Leu Arg Asp Thr 15 20 25 30 gcc cac ate acc tgt gqg gqa gac aac att gqa agt aaa tat gtt caa 146 Ãla His lie Thr Cys Gly Glv Asp Asn lie cty Ser Lys Tvr Val Gin 35 ' 40 ’ 45 tgg ate caa cag aat cca ggt cag gcc ccc gtg gtg att ate tat aga 194

Trp lie Gin Gin Asn Pro cty Gin Ala Pro Vat Vat lie lie Tyr Arg 50 '55 60 gat acc aag agg ccg aca tgg ate cct gag ega ttc tct ggc gcc aac 242 Àsp Thr Lys Arg pro Thr Trp lie Pro Glu Arg Phe Ser Gty Ala Asn 65 70 75 tea gqg aac acg get acc ctg acc ate agt gqg gtc ctg gcc gag gac 290

Ser Gty Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gtv Val Leu Ala Glu Asp 80 85 " 90 gag get gac tat tac tgc cag gtg aca gac agt ggt cct cag act aat 338

Glu Ãla Asp Tyr Tyr Cys Gin Vat Thr Asp Ser Gty Pro Gin Thr Asn 95 ' 100 105 110 gtt ttc ggc gga ggc acc cat ctg acc gtc etc agt cag ccc aag gcc 386

Val Phe Gly Gty Gty Thr His Leu Thr Val Leu Ser Gin Pro Lys Ala 115 120 125 tcc ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tcc tct gag gag etc ggc gcc 434

Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala 130 135 140 aac aag gcc acc ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc agt ggc 482

Asn Lys Ala Thr Leu Vat Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gty 145 150 155 gtg acg gtg gcc tgg aag gca gac ggc age ccc gtc acc cag ggc gtg 530

Vat Thr Vat Àla Trp Lys Ala Asp Gty Ser Pro Val Thr Gin GÍy Vat 160 165 170 gag acc acc aag ccc tcc aag cag age aac aac aag tac geg gcc age 578

Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lvs Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser 175 180 ' 185 190 age tac ctg agt: ctg acg cct gac: aag tgg aaa tct cac: age age ttc: 626

Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe 195 200 205 age tqc ctg gtc aca cac gag gqq age acc gtq gag aaq aag gtg qcc 674

Ser cys Leu val Thr His Glu Gty ser Thr val Glu Lys Lvs vat Ãla 210 215 220 ccc gca gag tgc tct tag gttcccgacg cccccgccca cctaaggggg 722

Pro Ala Glu Cys Ser 225 cccggagcct caggacctcc aggaggatet tgcctcctat ctgggtcatc ccgcccttct 782 ccccacaccc aggcagcact caataaattg ttctttgttc aatcagaaaa aaggggggcc 842 c 843

<210> 39 <211> 227 <212> PRT

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <400> 39

Met Tyr Lys 11 e Leu Glu Ser Thr Tyr lie Vai Lys Arg Ser lie Thr 1 5 10 ‘ 15

Vai Pro Gin Pro Pro Phe Vai Ser Vai Thr Leu Arg Asp Thr Ala His 20 25 30 lie Thr Cys Gly Glv Asp Asn lie Gly Ser Lys Tyr Vai Gin Trp lie 35 40 45

Gin Gin Asn Pro Gly Gin Ala Pro Vai Vai lie Ile Tyr Arg Asp Thr 50 55 60

Lys Arg Pro Thr Trp lie Pro Glu Arq Phe Ser Gly Ala Asn Ser Gly 65 ' 70 ' 75 80

Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Vai Leu Ala Glu Asp Glu Ala 85 90 95

Asp Tyr Tyr Cys Gin vai Thr Asp Ser Gly Pro Gin Thr Asn vai Phe 100 105 110

Gly Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Ser Gin Pro Lys Ala Ser Pro 115 120 125

Ser vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys 130 135 140

Ala Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr 145 150 155 160

Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly Vai Glu Thr 165 170 175

Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr 180 185 190

Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys 195 200 205

Leu Val Thr His Glu Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala Pro Ala 210 215 220

Glu Cys Ser 225

tirzáIMOádBI

< 210 > 4 0 <211> 858 <212> ADN <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (2) . . (712) <223 > <400> 40

tirzáIMOádBI c tcc aac atg gcc tgg tcc cct etc etc etc aca etc ctt get tac tgc 49

Ser Asn Met Ala rrp ser Pro Leu leu Leu Thr Leu Leu Ala Tyr cys 15 10 15 aca ggg tcc tgg gcc cag tet gtg ctg act cag ccg acc tea gtg teg 97

Thr Gly Ser Trp Ãla Glh Ser Vai Leú Thr Glh Pro Thr Ser Vai Ser 20 25 30 ggg tcc ctt gqc cag agg gtc acc ate tcc tgc tet gqa age acg aac 145

Gly Ser Leu Gly Gin Arg vai Thr lie Ser cys Ser Gly Ser Thr Asn 35 40 45 aac ate ggt att gtt gat gcg age tgg tac caa cag etc cca gqa aag 193

Asn lie Gly T.le Vai Gly Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Lys 50 55 60 gee cct aaa etc etc gtq tac agt gtt ggg gat ega ccg tea ggg gtc 241 Ãla Pro Lys Leu Leu Vaf Tyr sér Vai Gly Ãsp Arg Prò Ser Gly Vai 65 70 75 80 cct gac egg ttt tee gqc tee aac: tet gqc: aac: tea gcc: acc c:tg acc 289

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Asn ser Gly Asn ser Ala Thr Leu Thr 85 90 95 ate act ggg ctt cag get gag gac gag get gat tat tac tgc cag tcc 337 lie Thr cly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser 100 105 110 ttt qat acc acg ctt ggt get gtq ttc ggc gga ggc acc cac ctg acc 385

Phe Ãsp Thr Thr Leu Gly Ãla vat Phe Gly gTv cly Thr His Leii Thr 115 120 ' 125 gtc etc: ggt cag ecc aag gcc tcc: cct: teg gtc aca etc ttc: c:c:g ccc 433

Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 130 135 140 tcc tet gag gag etc ggc gcc aac aag gcc acc ctg gtq tgc etc ate 481

Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu vat cys Leu Tie 145 150 155 160 age gac ttc tac ccc age gqc gtg acg gtg gcc tgg aag gca gac gqc 529

Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vat Thr Vat Ala Trp Lys Ala Asp sty 165 170 175 age ccc: gtc acc: cag gqc: gtq gag act: ac:c aag cc:c tcc aag c:aq age 577

Ser Pro val Thr Gin Gty vat Glu Thr Thr Lys Pro ser Lys Gin ser 180 185 190 aac aac aag tac gcg gcc age age tac ctg age ctg acg cct gac aag 625

Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys 195 200 205 tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc acg cac gag ggg age 673

Trp Lys Ser His Ser sir Phe Ser Cys Leu Val Thr His Glu Gly Ser 210 215 220 acc gtg gag aag aag gtg gcc ccc gca gag tgc tet tag gttcccgacg 722

Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 ' 230 235 gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatet tgcctcccat 782 ctgggtcatc ccgcccttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg ttctttgttc 842 aatcagaaaa aaaaaa 858 < 210 > 41 <211> 236

tirzáIMOádBI

<212> PRT <213> Canis familiaris <400> 41 fcr^o í yooob l

Ser Asn Met Ala Trp Ser Pro Leu Leu Leu Thr Leu Leu Ala Tyr cys 1 5 10 15

Thr Gly Ser Trp Ala Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Thr Ser Val Ser 20 25 30

Gly Ser Leu Gly Gin Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Thr Asn 35 40 45

Asn lie Gly lie Val Gly Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Lys 50 55 60

Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Ser Val Gly Asp Arg Pro Ser Gly Val 65 ' 70 75 80

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Ser Ala Thr Leu Thr 85 90 95 lie Thr Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cvs Gin Ser 100 105 110

Phe Asp Thr Thr Leu Gly Ala val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr 115 120 125 val Leu Gly Gin Pro Lys Ala ser Pro ser val Thr Leu Phe Pro Pro 130 135 140 ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu val cys Leu lie 145 150 155 160

Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly 165 ' 170 175

Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser 180 185 190

Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys 195 200 205

Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His Glu Gly Ser 210 215 220

Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 235

<210> 42 <211> 514 < 212 > DNA

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <220>

<221> CDS <222 > (1)..(381) <223 > <400> 42 atg ttc gag get gtg tea eag tgt get gtg ttc gqc gga gqc acc cac 48

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Asp Lys Trp Lys ser His ser ser Phe ser cys Leu vai Thr His Glu 100 105 110 gqg age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc gea gag tgc tet tag 381 GTy ser Thr vaT Glu Lys Lys VaT Ala Pro Ala Glu cys ser 115 ' 120 125 gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct 441 tgcctcccat ctgggtcatc ccgcccttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg 501 ttctttgttc aat 514

<210> 43 <211> 126 <212> PRT <213> Canis fiavciiHanis <400> 43

fcK'dIMOádBI

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Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe 20 25 30

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys 35 40 45

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Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 85 90 95

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser ser Phe Ser cys Leu val Thr His Glu 100 105 110

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<210> 44 <211> 514 < 212 > DMA <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (381) <223 > <400> 44

tirzáIMOádBI atg ttc gag get gtg tea cag tgt get gtq ttc gqc qga ggc acc eae 48

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Leu ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly vat Thr vat Ala Trp Lys Ala 50 55 60 gac gqc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc acc aag ccc tcc aag 240

Asp Gty Ser Pro Vai Thr Gin Gly Vat Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 65 70 75 80 cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg age ctg acg cct 288

Gin Ser Asn Asn Lys Tvr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 85 90 95 gac aag tgg aaa tet eae age age ttc age tgc ctg gtc acg eae gag 336

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Glu 100 105 110 ggg age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc gea gag tgc tet tag 381

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tirzáIMOádBI

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< 210 > 4 6 <211> 561 <212> DNA <213> CãllÍS f 3.ΪΏ2.2. ίβ.Σ'Ι. s <220>

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<210> 47 <211> 141 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 47

fcK'dIMOádBI

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<210> 48 <211> 514 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (381) <223 > <400> 48

tirzáIMOádBI atg ttc gag get gtg tea cag tgt get gtg ttc gqc gga ggc acc cac 48

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Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser vai Thr Leu Phe 20 25 30 ccg ccc tee tet gag gag etc ggc gee aac aag gee acc ctg gtq tgc 144

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys 35 40 45 etc ate age gac ttc tac ccc age ggc gtg acg gtg gee tgg aag gea 192

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Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Glu 100 105 110 ggg age acc gtq gag aag aag gtg gee ccc gea gag tgc tet tag 381

Glv Ser Thr vat Glu Lys Lys vat Ala Pro Ala Glu Cys Ser 115 120 125 gttcccgacg gccccgccca cctaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct 441 tgcctcccat ctgggtcatc ccgctcttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg 501 ttctttgttc aat 514

<210> 49 <211> 126 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0 > 4 9

Met Phe Glu Ala vai ser Gin cys Ala vai Phe Gly Gly Gly Thr His 15 10 15

fcK'dIMOádBI

Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai Thr Leu Phe 20 25 30

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<210> 50 <211> 514 <212> DNA <213> CãllÍS f 3.ΪΏ2.2. ίβ.Σ'Ι. s <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (381) <223 > <400> 50

tirzáIMOádBI atg ttc gag get gtg tea cag tgt get gtg ttc ggc gga ggc acc cac 48

Met Phe Glu Ala Vai Ser Gin Cys Ala Vai Phe Gly Gly Gly Thr His 15 10 15 ctg acc gtc etc gat cag ccc aag gee tee ccc teg gtc aca etc ttc 96

Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Vai Thr Leu Phe 20 25 30 ccg ccc tee tet gag gag etc ggc gee aac aag gee acc ctg gtg tgc 144

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys 35 40 45 etc ate age gac ttc tac ccc age ggc gtq acg gtg gee tgg aag gea 192

Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr Vat Ala Trp Lys Ala 50 55 60 gac ggc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc acc aag ccc tcc aag 240 Ãsp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly Vat Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 65 70 75 80 cag age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg age ctg acg cct 288

Gin Ser Asn Asn Lvs Tyr Ãla Ãla Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 85 90 95 gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc acg cac gag 336

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Glu 100 105 ' 110 ggg aqc acc gtg gag aag aaq gtg gee ccc gea gaq tgc tet tag 381

Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 115 120 125 gttcccgacg gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct 441 tgcctcccat ctgggtcatc ccgctcttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg 501 ttctttgttc aat 514

< 210 > 51 <211> 126 <212> PRT <213> CãllÍS f 3.ΪΏ2.2. ίβ.Σ'Ι. s <400> 51

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Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe 20 ' 25 30

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys 35 40 45

Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly val Thr val Ala Trp Lys Ala 50 55 60

Asp Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 65 70 75 80

Gin ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 85 90 95

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His Glu 100 10S 110

Gly Ser Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 115 120 125

<210> 52 <211> 697 <212> DNA <213> Canis familiaris < 2 2 0 >

<221> CDS <222> (1)., (564) < 2 2 3 > <400> 52 atg gqc aca cat gat gac tac caa tea egg tta gaa ttt caa cca cct 48

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Glu Trp Trp Ala xhr Leu Arg Asn Asp Arg Glu Lys Leu Glu Asp Gly 20 25 ' 30 act etc aga ate cca egg tgg cac atg aac aaa tac eta gtc aeg aca 144

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tirzáIMOádBI gtc ccc gta gag cca gcc agt etc aaa gag gtq gcc agg aag att ccg 192

Vai Pro Vai Glu Pro Ala Ser Leu Lvs Glu Vai Àla Arg Lys lie Pro 50 55 60 ate cat gat gaa tgt ggt gtq ttc ggc gga ggc acc cac ctg acc gtc 240 lie His Asp Glu Cys Gly Vai Phe Glv Gly Gly Thr His Leu Thr Vai 65 70 ' 75 80 ctc ggt cag ccc aag gcc tcc ccc teg gtc aca ctc ttc ccg ccc tcc 288

Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser 85 90 95 tet gag gag etc ggc gcc aac aag gcc acc ctg gtq tgc etc ate age 336

Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser 100 105 110 gac ttc tac ccc age ggt gtq acq qtg gcc tgg aag gea gac ggc age 384

Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr VaT Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser 115 120 125 ccc gtc acc cag ggc gtq gag acc acc aag ccc tcc aag cag age aac 432

Pro Vai Thr Gin Glv VaT Glu Thr Thr Lvs Pro Ser Lys Gin Ser Asn 130 135 ' 140 aac aag tac gcg gcc age age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg 480

Asn Lys Tvr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp 145 ' 150 155 160 aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc acg cac gag ggg age acc 528

Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Glu Glv Ser Thr 165 ' 170 ' 175 gtq gag aag aag gtq gee ccc gea gag tgc tet tag gttcccgacg 574

Val Gl ij Lys Lys Vai Ala Pro Ala Glu Cvs Ser 180 185 gccccgccca ccgaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct tgcctcccat 634 ctgggtcatc ccgcccttct ccccgcaccc aggcagcact caataaagtg ttctttgttc 694 aat 697

<210> 53 <211> 187 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 53

tirzáIMOádBI

Met Gly Thr His Gly Asp Tyr Gin Ser Arg Leu Glu Phe Gin Pro Pro 1 5 10 15

Glu Trp Trp Ala Thr Leu Arg Asn Asp Arg Glu Lys Leu Glu Asp Gly 20 25 50

Thr Leu Arg lie Pro Arq Trp His Met Asn Lys Tvr Leu Vai Thr Thr 35 40 ' 45 val Pro vai Glu Pro Ala ser Leu Lys Glu vai Ala Arg Lys lie Pro 50 55 60 lie His Asp Glu Cys Gly val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val 65 ' 70 75 80

Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser 85 90 95

Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu val cvs Leu lie Ser 100 105 ' 110

Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser 115 120 125

Pro val Thr Gin Gly val Glu Thr Thr Lys Pro ser Lys Gin ser Asn 130 135 140

Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp 145 ' 150 155 160

Lys Ser His Ser ser Phe Ser cys Leu val Thr His Glu Gly Ser Thr 165 170 175

Val Glu Lys Lvs Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 180 185

<210> 54 <211> 634 < 212 > DNA <213> Canis familiaris <220>

<221> CDS <222 > (1) .. (501) <223 >

tirzáIMOádBI <400> 54 atg gaa atg aaa ttc ctg gac ccc agt ggc tat gcc ctc ate acc caa 48

Met Glu Met Lys Phe Leu Asp Pro Ser Gly Tyr Ala Leu lie Thr Gin 15 10 15 ccc ccc ttc aac ccg acc agt acc cgt gac aag ggg get gcc ctt tgg 96

Pro Pro Phe Asn Prõ Thr Ser Thr Arg Asp Lys Gly Ãla Ala Leu Trp 20 25 ' 30 gcc tcc ega gea get gea ggg ttt gtg etc gag get gtq tea cag tgt 144

Ala Ser Arg Ala Ala Ala Gly Phe vai Leu Glu Ala vai Ser Glfi Cys 35 40 45 att gtg ttc ggc gga ggc acc cat ctg acc gtc ctc ggt cag ccc aag 192 lie vaí Phe Glv Gly Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro Lvs 50 55 60 gcc tcc cct teg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tet gag gag ctt ggc 240

Ala Ser Pro Ser vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser GlD Glu Leu Gly 65 70 75 80 gcc aac aag gcc acc ctg gtg tgc etc ate age gac ttc tac ccc age 288

Ala Asn Lys Ala Thr Leu vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser 8S 90 ' 95 ggc gtg aca gtq gcc tgg aag gea gac ggc age ccc ate acc cag gqt 336

Gly val Thr vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro lie Thr Gin Gly 100 105 110 gtg gag acc acc aag ccc tee aag cag age aac aac aag tac gcg gcc 384 val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 115 120 125 age age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa tet cac age age 432

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser 130 135 140 ttc age tgc ctg gtc acg cac gag ggg age acc gtg gag aag aag gtg 480

Phe Ser Cys Leu Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Lys Val 145 150 155 160 gcc ccc gea gag tgc tet tag gttcctgatg tcccccgccc accaaagggg 531

Ala Pro Ala Glu Cys Ser 165 gctcagagcc tcaggacctc caggaggatc ttgcctccca tctgggtcat cccagccttt 591 ccccttaaac ccaggcaaca ttcaataaag tgttctttct tea 634

< 210 > 55 <211> 166 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 55

fcK'dIMOádBI

Met Glu Met Lys Phe Leu Asp Pro Ser Gly Tyr Ala Leu lie Thr Gln 1 5 10 15

Pro Pro Pile Asn Pro Thr ser Thr Arg Asp Lys Gly Ala Ala Leu Trp 20 25 30

Ala ser Arg Ala Ala Ala Gly Phe val Leu Glu Ala val ser Gin cys 35 ' 40 45 lie val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr val Leu Gly Gin Pro Lys 50 55 60

Ala ser Pro ser val Thr Leu Phe Pro Pro ser ser Glu Glu Leu Gly

65 70 75 SO

Ala Asn Lys Ala Thr Leu val cys Leu lie ser Asp Phe Tyr Pro ser 85 90 95

Gly val Thr val Ala Trp Lvs Ala Asp Gly ser Pro lie Thr Gin Gly 100 105 ' 110

Val Glu Thr Thr Lys Pro ser Lys Glu ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 115 120 125

Ser ser Tyr Leu ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys ser His ser ser 130 135 140

Phe ser cys Leu val Thr His Glu Gly ser Thr val Glu Lys lvs val 145 150 155 ' 160

Ala Pro Ala Glu Cvs Ser 165

< 210 > 56 <211> 551 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

< 2 21> CDS <222> (39) . . (419) <223 > <400> 56

tirzáIMOádBI gqtcatqqat atqacacaqc tqtaccccca caccaaqa atq aqq caq ttq ctq aca 56

Met Arg Glh Leli Lei: Thr 1 5 caa caa aea tct gcc ttg acc cgc tgt cct tcc ate ccc aca ggt cag 104

Gin Gin Thr Ser Ala Leu Thr Arg cys Pro Ser lie Pro Thr Gly Gin 10 15 20 ccc aag gcc tcc ccc teg gtc aca etc ttc ccg ccc tcc tct gag gag 152

Pro Lvs Ala ser Pro Ser vai Thr Leu Fhe Pro Pro Ser ser Glu Glu 25 30 35 ctc ggc gcc aac: aag gcc acc ctg gtq tgc ctc ate age gac: ttc tac 200

Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu vai cys Leu lie 5er Asp Phe Tyr 40 45 50 ccc agt ggc gtq acg gtq get: tgg aag gea gac: gqc age ccc gtc acc 248

Pro Ser Glv val Thr vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro vai Thr 55 60 65 70 cag ggc: gtq gag acc acc aag ccc tcc aag cag age aac aac aag tac 296

Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Glfi Ser Asn Asn Lys Tyr 75 80 85 gcg gcc age age tac ctg age ctg acg cct gac aag tgg aaa tct cac 344

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His

90 95 1ÕQ age age ttc age tqc ctg gtc aca cac gag ggq age acc gtq gag aag 392

Ser Ser Phe Ser cys Leu vai Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lys 105 110 115 aag gtq gcc ccc gea gag tgc tct tag gttcccgacg cccccgccca 439

Lys val Ala Pro Ala Glu Cys ser 120 125 cctaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct tgcctcctat ctgggtcatc 499 ccgcccttct tcccacaccc aggcagcact caataaagtg ttctttgttc aa 551

< 210 > 57 <211> 126 <212> PRT <213> Canis familiaris <4GG> 57

Met Arg Gin Leu Leu Thr Gin Gin Thr Ser Ala Leu Thr Arg Cys Pro 15 10 15

Ser lie Pro Thr Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser val Thr Leu Phe 20 25 30

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys 35 40 45

fcK'dIMOádBI

Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Vai Thr Vai Ala Trp Lys Ala 50 ' 55 60

Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 65 70 75 ' 80

Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 85 90 95

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Glu 100 105 110

Gly ser Thr vai Glu Lys Lys vai Ala Pro Ala Glu cys ser 115 120 125

<210> 58 <211> 864 < 212 > DNA <213> Canis familíaris <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (702) <223 > <400> 58 atg gcc tgg acc ctt ctt etc ctt gga ttc ctg get cac tgc aca ggt 48

Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His cys Thr Gly 1 5 10 15 tcc gtq gcc tcc tat gtg ctg act cag tea ccc tea gtg tea gtg acc 96

Ser Vai Ala Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ser Vai Ser Vai Thr 20 25 30 ctg gga cag acg gcc age ate acc tgt agg gga aac age att gga agg 144

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<221> CDS <222 > (1) . . (705) <223 > <400> 62 atg gcc tgg acc ctt ctt etc ctt gqa ttc ctg get cac tgc aca ggt 48

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<210> 64 <211> 861 <212> DNA

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (699) <223 > <400> 64 atg gcc tgg acc ctt ctt etc ctt gqa ttc ctg get cac tgc aca ggt 48

Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His Cys Thr Gly 15 10 15 tcc gtg gcc tcc tat gtg ctg act cag tea ccc tea gtg tea gtg acc 96

Ser vai Ala Ser Tyr vai Leu Thr Gin Ser Pro Ser vai Ser vai Thr 20 25 30 ctg gga cag acg gcc age ate acc tgt agg gqa aac age att gga agg 144

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<221> CDS <222 > (1) . . (699) <223 > <400> 66 atg gcc tgg acc ctt ctt etc ctt gga ttc ctg get cac tgc aca ggt 48

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Gin Thr Asn Asp Glu Àla Ãsp Tyr Tyr Cys Glή vai Trp Glu lie Ser 100 105 110 gtg tgt tgg gta ttc ggt gaa gag acc cag ctg acc gtc etc gqt cag 384 vai Cys Trp vai Phe Glv Glu Gly Thr Gin Leu Thr vai Leu Gly Gin 115 12Ô 125 ccc aag tee tee ccc ttg gtc aca etc ttc ccg ccc tee tct gag gag 432

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<210> 67 <211> 232 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 67

tirzáIMOádBI

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<210> 68 <211> 867 <212> DNA <213> Canis familiaris

tirzáIMOádBI < 2 2 0 >

<221> CDS <222 > (1) . . (705) <223 > <400> 68 atg gcc tgg acc ctt ctt etc ctt gga ttc ctg get cac tgc aca ggt 48

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tirzáIMOádBI 50 55 60 att ate tat aat gat aac age cag ccc tea ggg ate cct gag cga ttc 240 lie lie Tyr Asn Asp Asn Ser Gin Pro Ser Glv lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75' ‘ 80 tet ggg acc aac tea ggg age aeg gee ace ctg acc ate agt gag gee 288

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Glu Lys Lys VaT Ala Pro Ãla Glu Cys Ser 225 230 tggagccttc ctcacccaga caccccttcc ccagttcacc ttgtgcccct gaaaacccac 785 cctggaccag ctcagaccag gcaggtxact catcctccct gtttctactt. gtgctxaata 845 aagactttat catttatcac tg 867

<21G> 69 <211> 234 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 69

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Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His Cys Thr Gly 15 10 15

Ser Vai Ala Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ser Vai Ser Vai Thr 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Ala Ser lie Thr Cys Arg Gly Asn Ser lie Gly Arg 35 40 - 45

Lys Asp Vai His Trp Tvr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Leu Leu 50 55 60 lie lie Tyr Asn Asp Asn Ser Gin Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 ' 70 75 80

Ser Gly Thr Asn Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Glu Ala 85 90 95 G1n Thr Asn Asp GIu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Glu Met His Thr Pro 100 105 ' 110

Glu Ser Gin Cys Trp Vai Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu Thr vai Leu 115 120 125

Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140

Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu TIe Ser Asp 145 150 155 160

Phe Tyr Pro Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Thr 165 ' 170 ' .175 lie lie Gin Gly vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn ISO 185 190

Lys Tyr Thr Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys 195 200 205

Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Gin Gly Ser Thr Vai 210 215 220

Glu Lys Lys vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230

<210> 70 <211> 861 <212> DNA <213> Csnis fã.iui.J.j.cH'd.s

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Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ãla His cys Thr Gly 1 5 10 '15 tcc gtg gcc tcc tat gtg ctg act cag tea ccc tea gtg tea gtg acc 96

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Leu Gly Gin Thr Ala ser ile Thr cvs Arg Gly Asn ser lie Gly Arg 35 40 45 aaa gat gtt cat tgg tac cag cag aag ccg ggc caa gcc ccc ctg ctg 192

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Ser Gly Thr Asn ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr ile Ser Glu Ala 85 90 95 caa acc aac gat gag get gac tat tac tgc cag cat tac cac cat gac 336

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Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu vai Cys Leu ile Ser Asp Phe Tyr 145 ' 150 155 160 ccc agt ggc ctg aaa gtg get tgg aaq qca qat gqc aqc acc ate ate 528

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< 210 > 71 <211> 232 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 71

tirzáIMOádBI

Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His Cys Thr Gly 1 5 10 15

Ser Vai Ala Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ser Vai Ser Vai Thr 20 25 30

Leu Glv Gin Thr Ala Ser lie Thr Cys Arg Gly Asn Ser lie Glv Arg 35 40 45

Lys Asp vai His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Leu Leu 50 55 60 lie lie Tyr Asn Asp Asn Ser Gin Pro Ser Gly lie Pro Gl u Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Thr Asn Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Glu Ala 85 90 95

Gin Thr Asn Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin His Tyr His His Asp 100 105 ' 110

Tyr Cys Trp Vai Phe Gly Glu Gly Thr Gln Leu Thr Vai Leu Glv Gin 115 120 125

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Lys Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230

< 210 > 72 <211> 861 <212> DNA

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (699) <223 > <400> 72 atg gcc tgg acc ctt ctt etc ctt gaa ttc ctg get cac tgc aca ggt 48

Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His Cys Thr Gly 15 10 15

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< 210 > 7 3 <211> 232 <212> PRT <213> CãllÍS f 3.ΪΏ2.2. ίβ.Σ'Ι. s <400> 73

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Ser Gly Thr Asn Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Glu Ala 85 90 95

Gin Thr Asn Asp Glu Ala Asp Tyr Tvr Cys Gin vai His Gly Gly Gly 100 1Ò5 110

Gly Cys Trp vai Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu Thr vai Leu Gly Gin 115 120 125

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Pro Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Thr lie Ile 165 170 175

Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lvs Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 ' 185 190

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Ser Ser Phe Ser Cvs Leu vai Thr His Gin Gly Ser Thr vai Glu Lys 210 ' 215 220

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<210> 74 <211> 861 <212> ADN <213> Canis familiaris

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<221> CDS <222 > (1) . . (699) <223 > <400> 74

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Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leii Ala His Cys Thr Gly 1 S 10 15 tcc gtq gcc tcc tat gtg ctg act cag tea ccc tea gtq tea gtq acc 96

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Gin Thr Asn Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Lys His Arg Gly Ala 100 105 110 gqt tgt tgg gta ttc gqt gaa gqg acc cag ctg acc gtc etc gqt cag 384

Gly Cys Trp vai Phe Gly Glu GÍy Thr Gin Leu Thr vai Leu Gly Gin 115 120 125 ccc aag tee tee ccc ttg gtc aca etc ttc ccg ccc tcc tet gag gag 432

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Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr 145 ' ISO 155 160 CCC agt ggc Ctg aaa gtq get tgg aag gea gat ggc age acc ate ate 528

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<21G> 75 <211> 232 <212> PRT <213> Canis familiaris

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Ser Vai Ala Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ser Vai Ser Vai Thr 20 25 30

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Gly Cys Trp Vai Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu Thr Vai Leu Gly Gin 115 120 125

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Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Gin Gly Ser Thr Vai Glu Lys 210 215 220

Lys Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230

<210> 76 <211> 858 <212> ADN

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (696) <223 > <400> 7 6

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Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His Cys Thr Gly 1 5 '10 15 tcc gtq gcc tcc tat gtg ctg act cag tea ccc tea gtq tea gtg acc 96

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Ser Gly Thr Asn Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Glu Ala 85 ' 90 95 caa acc aac gat gag get gac tat tac tgc cag gtg tcc ctt ggg tet 336

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<210> 77 <211> 231 <212> PRT <213> Canis familiaris

tirzáIMOádBI <400> 77

Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His Cys Thr Gly 1 5 '10 15

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Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Thr ISO 185 190

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Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Gin Gly Ser Thr Va! Glu Lys Lys 210 ' 215 220

Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 <210> 78 <211> 858

tirzáIMOádBI

< 212 > DNA <213> Canis familiaris <220>

< 2 21> CDS <222 > (1) . . (696) <223 > <400> 78

tirzáIMOádBI atg gcc tgg acc ctt ctt etc ctt gga ttc ctg get cac tgc aca ggt 48

Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His cys Thr Gly 1 5 10 15 tcc gtg gcc tcc tat gtg ctg act cag tea ccc tea gtg tea gtg acc 96

Ser Vat Ala Ser Tyr Vat Leu Thr Gin Ser Pro Ser Vat Ser Vai Thr 20 25 30 ctg gga cag acg gcc age ate acc tgt agg qga aac age att gga agg 144

Leu Gly Gin Thr Ala Ser lie Thr Cys Arg Gly Asn Ser lie Gly Arg 35 40 ' 45 aaa gat gtt cat tgg tac cag cag aag ccg ggc caa gcc ccc ctg ctg 192

Lys Asp Val His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Leu Leu 50 55 60 att ate tat aat gat aac age cag ccc tea ggg ate cct gag cga ttc 240 lie lie Tyr Asn Asp Asn Ser Gin Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80 tet ggg acc aac tea ggg age acg gee acc ctg acc ate agt gag gee 288 ser Gly Thr Asn Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Glu Ala 85 90 95 caa acc aac gat gag get gac tat tac tgc cag gta ttg atg gga ggg 336

Gin Thr Asn Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Val Leu Met Gly Gly 100 105 110 tgt tgg gta ttc ggt gaa ggg acc cag ctg acc gtc ctc ggt cag ccc 384

Cys Trp Val Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro 115 120 125 aag tcc tcc ccc ttg gtc aca ctc ttc ccg ccc tcc tet gag gag ctc 432

Lys Ser Ser Pro Leu Val Thr Leu Phe Prõ Pro Ser Ser Glu Glu Leu 130 135 140 ggc gcc aac aag get acc ctg gtg tgc ctc ate age gac ttc tac ccc 480

Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val cys Leu lie ser Asp Phe Tyr Pro 145 ’ 150 155 160 agt ggc ctg aaa gtg get tgg aag gea gat ggc age acc ate ate cag 528

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Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His Gin Glv Ser Thr Val Glu Lvs Lys 210 215 220 gtg gee cct gea gag tgc tet tag gtccctgaga attcctgaga tggagccttc 726

Val Ala Pro Ala Glu Cys ser 225 230 ctcacccaga caccccttcc ccagttcacc ttgtgcccct gaaaacccac cctggaccag 786 ctcagaccag gcaggtcact catcctccct gtttctactt gtgctcaata aagactttat 846 catttatcac tg 858

< 210 > 7 9 <211> 231 <212> PRT <213> Canis familiaris

tirzáIMOádBI <400> 79

Met Ala Trp Thr Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Ala His Cys Thr Gly 15 10 15

Ser Vai Ala Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ser Vai Ser Vai Thr 20 25 30

Leu Gly Gin Thr Ala Ser Ile Thr Cys Arg Gly Asn Ser lie Gly Arg 35 40 45

Lys Asp Vai His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Leu Leu 50 55 ' 60 lie lie Tyr Asn Asp Asn Ser Gin Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Thr Asn Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Glu Ala 85 90 95

Gin Thr Asn Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Vai Leu Met Gly Gly 100 ' 105 110

Cys Trp Vai Phe Gly Glu Glv Thr Gin Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro 115 120 125

Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 130 135 140

Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro 145 150 155 160

Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Thr Ile Ile Gin 165 170 175

Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Thr 180 185 190

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Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Gin Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys 210 215 220

Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230

<210> 80 <211> 834 < 212 > ADN

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (672) <223 > <400> 80 atg tcc tct ctt gca ggt tcc atg get gee aac aag ctg act caa tee 48

Met Ser Ser Leu Ala Gly Ser Met Ãla Ala Asn Lys Leu Thr Gin Ser 15 10 15 ctg ttt atg tea gtg gee ctg gga cag atg gee agg ate acc tgt ggg 96

Leu Phe Met Ser Vai Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly 20 25 30 aga gac aac tct gga aga aaa agt get cac tgg tac cag cag aag cca 144

Arg Asp Asn ser Gly Arg Lys ser Ala His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40 45 age cag get ccc gtg atg ctt ate gat gat gat tgc ttc cag ccc tea 192

Ser Gin Ala Pro Vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin pro Ser 50 55 60 gga ttc tct gag caa ttc tea ggc act aac teg ggg aac aca gee acc 240

Gly Phe Ser Glu Gin Phe Ser Gl’y Thr Asn Ser Gly Asn Thr Ãla Thr 65 70 75 80 ctg acc att agt ggg ccc cca gcg agg acg cag gtc agg tat gee cag 288

Leu Thr lie Ser Gly Pro Pro Ãlà Arg Thr Gin Vai Arg Tvr Ala Glh 85 90 ' 95 ccc agg act cca ggg gca gag act tgt tgg gta ttc ggt gaa ggg acc 336

Pro Gly Ala Pro Gly Ala Gly Thr Cys Trp Vai Phe Glv Glu Glv Thr 100 105 ' 110 cag ctg acc gtc etc ggt cag ccc aag tee tee ccc ttg gtc aca etc 384

Gin Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu 115 120 125 ttc ccg ccc tee tct gag gag etc ggc gee aac aag get acc ctg gtg 432

Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai 130 135 140 tgc etc ate age gac ttc tac ccc agt ggc ctg aaa gtq get tgg aag 480

Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lys 145 150 155 160 gca gat gqc age acc ate ate cag ggc gtg gaa acc acc aag ccc tcc 528

Ala Asp Gly 5er Thr lie lie Glh Glv Vai Glu Thr Thr Lvs Pro Ser 165 ' 170 ' 175 aag cag age aac aac aag tac acg gee age age tac ctg age ctg acg 576

Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala ser ser Tyr Leu ser Leu Thr ISO 185 190 cct gac aag tgg aaa tct cac age age ttc age tgc ctg gtc acg cac 624

Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His 195 200 ' 205 cag ggg age acc gtg gaq aag aaq qtq qcc cct gca gag tqc tct tag 672

Gin Gly ser Thr VaT Glu Lys Lys Vai Ãla Pro Ala Glu Cys Ser

tirzáIMOádBI 210 215 220 gtccctgaga attcctgaga tggagccttc ctcacccaga caccccttcc ccagttcacc 732 ttgtgcccct gaaaacccac cctggaccag ctcagaccag gcaggtcact catcctccct 792 gtttctactt gtgctcaata aagactttat catttatcac tg 834

<210> 81 <211> 223 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 81

tirzáIMOádBI

Met ser ser Leu Ala Gly ser Met Ala Ala Asn Lys Leu Thr Gin ser 15 10 15

Leu Phe Met Ser Vai Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg Ile Thr Cvs Glv 20 25 30

Arg Asp Asn Ser Gly Arg Lys Ser Ala His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40 45

Ser Gin Ala Pro Vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser 50 55 60

Gly Phe ser Glu Gin Phe ser Gly Thr Asn ser Gly Asn Thr Ala Thr

65 70 75 ' SO

Leu Thr lie ser Gly Pro Pro Ala Arg Thr Gin vai Arg Tyr Ala Gin 85 90 95

Pro Glv Ala Pro Gly Ala Gly Thr cys Trp vai Phe Gly Glu Gly Thr 100 105 110

Gin Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu 115 120 125

Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai 130 135 140

Cvs Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lys 145 150 155 160

Ala Asp Gly ser Thr lie lie Gin Glv vai Glu Thr Thr Lys Pro ser 165 ' 170 175

Lys Gin ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala ser ser Tyr Leu ser Leu Thr 180 185 190

Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His 195 200 205

Gin Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 210 215 220

<210> 82 <211> 780 < 212 > DNA <213> Canis familíaris <220>

<221> CDS fcr^o í yooob l <222 > (1)..(618) <223 > <400> 82 atg tea gtq gee etg gga cag atg gee agg ate ace tgt gqg aga gac 48

Met Ser Val Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly Arg Asp 15 10 15 aac tet gga aga aaa agt get cac tgg tac cag cag aag cca age cag 96

Asn Ser Gly Arg Lys Ser Ala His Trp Tvr Gin Gin Lys Pro Ser Gin 20 25 ' 30 get ccc gtg atg ett ate gat gat gat tgc ttc cag ccc tea gga ttc 144

Ala Pro Val Met Leg lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45 tet gag caa ttc tea ggc act aac teg ggg aac aca gee acc etg acc 192

Ser Glu Gin Phe Ser Gly Thr Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr 50 55 60 att aaa gaa atg gac gca ttc etg gaa acc tee ttc tat tgc tgg atg 240 lie Lys Glu Met Asp Ala Phe Leu Glu Thr Ser Phe Tyr Cys Trp Met 65 70 75 80 tgg cag cct gaa tea cag tgt tgg gta ttc ggt gaa ggg acc cag etg 288

Trp Gin Pro Glu Ser Gin Cys Trp Val Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu 85 90 95 acc gtc etc ggt cag ccc aag tee tee ccc ttg gtc aca etc ttc ccg 336

Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Val Thr Leu Phe Pro 100 105 110 ccc tee tet gag gag etc ggc gee aac aag get acc etg gtq tgc etc 384

Pro Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lvs Ala Thr Leu val cys Leu 115 ' 120 125 ate age gac ttc tac ccc agt ggc etg aaa gtg get tgg aag gca gat 432

He Ser Asp Phe Tyr Pro ser Gly Leu Lys val Ala Trp Lys Ãla Asp 130 135 140 ggc age acc ate ate cag gqc gtg gaa acc acc aag ccc tee aag cag 480

Gly ser Thr lie lie Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin 145 150 155 ' 160 age aac aac aag tac aeg gee age age tac etg age etg aeg cct gac 528

Ser Asn Asn Lvs Tyr Thr Ala Ser Ser Tvr Leu Ser Leu Thr Pro Asp 165 170 175 aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc etg gtc aeg cac cag ggg 576

Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His Gin Gly 180 185 190 age acc gtq gag aag aag gtg gee cct gca gag tgc tet tag 618 ser Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 200 205 gtccctgaga attcctgaga tggageette ctcacccaga caccccttcc ccagttcacc 678 ttgtgcccct gaaaacccac cctggaccag ctcagaccag gcaggtcact catcctccct 738 gtttctactt gtgctcaata aagactttat catttatcac tg 780

<210> 83 <211> 205 <212> PRT <213> Canis familiaris

tirzáIMOádBI < 4 0 0 > 83

Met Ser Vai Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly Arg Asp 1 5 10 15

Asn Ser Gly Arg Lvs Ser Ala His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ser Gin 20 ' 25 ‘ 30

Ala Pro Vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45

Ser Glu Gin Phe Ser Gly Thr Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr 50 55 60 lie Lvs Glu Met Asp Ala Phe Leu Glu Thr Ser Phe Tyr Cys Trp Met 65 ' 70 75 80

Trp Gin Pro Glu Ser Gin Cys Trp Vai Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu 85 90 95

Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu Phe Pro 100 105 110

Pro Ser Ser Glu Glu Leu Glv Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cvs Leu 115 ' 120 125

Ile Ser Asp Phe Tvr Pro Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lys Ala Asp 130 ' 135 140

Gly Ser Thr lie lie Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin 145 150 155 ' 160

Ser Asn Asn Lvs Tvr Thr Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp 165 170 175

Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Gin Gly 180 185 190

Ser Thr Vai Glu Lvs Lvs Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 ' ' 200 205

<210> 84 <211> 786 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>

fcK'dIMOádBI

<221> CDS <222 > (1) . . (624) <223 > <400> 84 atg tea gtq gee ctg gqa cag atg gee agg ate acc tgt gqg aga gac 48

Met Ser VaT Ãla Leu Gíy Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly Arg Asp 15 10 15 aac tet gaa aga aaa agt get cac tgg tae cag cag aag cca age eag 96

Asn Ser Gly Arg Lys Ser Ala His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ser Gin 20 25 ' 30 get ccc gtq atg ctt ate gat gat gat tgc ttc cag ccc tea gqa ttc 144

Ala Pro vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45 tet gag eaa ttc tea ggc act aac teg gqg aac aca gee acc ctg acc 192

Ser Glu Gin Phe Ser Gly Thr Asn Ser Gly Asn Thr Ãla Thr Leu Thr 50 55 60 att agt gtq tea aac att gac gac acg ctt tae ata tat aga acg gaa 240 lie Ser VaT Ser Asn lie Asp Asp Thr Leu Tyr lie Tyr Arg Thr Glu 65 70 75 ' 80 gtg age aac att cct gaa tea cag tgt tgg gta ttc gat gaa gqg acc 288 vai Ser Asn lie Pro Glu Ser Gin Cys Trp vai Phe Gly Glu gTv Thr 85 90 95 cag ctg acc gtc etc ggt cag ccc aag tee tee ccc ttg gtc aca etc 336

Gin Leu Thr Vai Leu GTy Gin Pro Lvs Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu 100 1Õ5 110 ttc ccg ccc tee tet gag gag etc ggc gee aac aag get acc ctg gtg 384

Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu VaT 115 120 125 tgc etc ate age gac ttc tae ccc agt ggc ctg aaa gtq get tgg aag 432

Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser cTy Leu Lys Vai Ala Trp Lys 130 135 140 gea gat ggc age acc ate ate cag ggc gtg gaa acc acc aag ccc tcc 480

Ala Asp Gly Ser Thr lie lie Gin gTv VaT Glu Thr Thr Lys Pro Ser 145 150 155 160 aag cag age aac aac aag tae acg gee age age tae ctg age ctg acg 528

Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr 165 170 175 cct gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc acg cac 576

Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu vai Thr His 180 185 190 cag gqg age acc gtq gag aag aag gtg gee cct gea gag tgc tet tag 624

Gin Gly Ser Thr vat Glu Lys Lys vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 200 205 gtccctgaga attcctgaga tggagccttc ctcacccaga caccccttcc ccagttcacc 684 ttgtgcccct gaaaacccac cctggaccag ctcagaccag gcaggtcact catcctccct 744 gtttctactt gtgctcaata aagactttat catttatcac tg 786

<210> 85 <211> 207 <212> PRT

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <400> 85

Met Ser Vai Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cvs Glv Arg Asp 1 5 10 '15

Asn Ser Gly Arg Lys Ser Ala His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ser Gin 20 ‘ 25 30

Ala Pro vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45

Ser Glu Gin Phe Ser Gly Thr Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr 50 55 60 ile Ser vai Ser Asn lie Asp Asp Thr Leu Tyr ile Tyr Arq Thr Glu 65 70 75 ' 80

Vai Ser Asn lie Pro Glu Ser Gin Cys Trp Vai Phe Gly Glu Gly Thr 85 90 95

Gin Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu 100 105 110

Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai 115 120 125

Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lys 130 135 140

Ala Asp Gly Ser Thr lie IIe Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser 145 150 155 ‘ 160

Lys Gin Ser Asn Asn Lvs Tyr Thr Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr 165 170 175

Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His 180 185 190

Gin Gly Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 200 205

<210> 86 <211> 783 <212> DNA <213> Canis familiaris

tirzáIMOádBI < 2 2 0 >

<221> CDS <222 > (1) .. (621) <223 > <400> 86 atg tea gtg gee ctg gga cag atg get agg ate ate tgt ggg aga gat 48

Met Ser Vai Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly Arg Asp 15 10 15 aac tet gga aga aaa agt get cac tgg tac cag cag aag cca age cag 96

Asn Ser Glv Arg Lys Ser Àla His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ser Gin 20 25 30 get ccc gtg atg ctt ate gat gat gat tgc ttc cag ccc tea gga ttc 144

Ala Pro Vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45 tet gag caa ttc tea gqc act aac teg ggg aac aca gee acc ctg acc 192

Ser Glu Gin Phe Ser cly Thr Asn ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr 50 55 60 att agt gga cac cgt gea gaa cca gag gea gaa cat ttc tet ctg tgg 240 lie Ser Gly His Arg Ala Glu Pro Glu Ala Glu His Phe Ser Leu Trp 65 ' 70 75 80 cca tgc aag tea gat cct ggt tgt tgg gta ttc gqt gaa ggg acc cag 288

Pro Cys Lys Ser Asp Pro Gly Cys Trp vai Phe Gly Glu Gly Thr Gl ií 85 90 95 ctg acc gtc etc ggt cag ccc aag tee tee ccc ttg gtc aca etc ttc 336 teu Thr vai teu Gly Gin Pro Lys Ser ser Pro teu vai Thr Leu Phe 100 ‘ 105 110 ccg ccc tee tet gag gag etc ggc gee aac aag get acc ctg gtq tgc 384

Pro Pro Ser ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu vai cys 115 12Ô 125 etc ate age gac ttc tac ccc agt ggc ctg aaa gtg get tgg aag gea 432

Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 5er Gly Leu Lys vai Ala Trp lvs Ala 130 135 140 gat ggc age acc ate ate cag gqc gtg gaa acc acc aag ccc tcc aag 480

Asp Gly Ser Thr Tie Tie Gin Gly Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 145 150 155 160 cag age aac aac aag tac aeg gee age age tac ctg age ctg acg cct 528

Gin ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala ser ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 165 ‘ 170 175 gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc acg cac cag 576

Asp Lys Trp Lys Ser His sèr ser Phe ser cys Leu vai Thr His Gin 180 185 190 gqg age acc gtg gag aag aag gtg gee cct gea gag tgc tet tag 621

Gly Ser Thr vat Glu Lys Lys vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 200 205 gtccctgaga attcctgaga tggagccttc ctcacccaga caccccttec ccagttcacc 681 ttgtgcccct gaaaacccac cctggaccag ctcagaccag gcaggtcact catcctccct 741 gtttctactt gtgctcaata aagactttat catttatcac tg 783 <210> 87

tirzáIMOádBI < 211> 206

<212> PRT <213> Canis familíaris <400> 87

Met Ser Vai Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly Arg Asp 1 5 10' ' 15

Asn ser Gly Arg Lys Ser Ala uis Trp Tyr Gin Gin Lys Pro ser Gin 20 25 30

Ala Pro Vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45

Ser Glu Gin Phe Ser Gly Thr Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr 50 55 60 lie Ser Gly His Arg Ala Glu Pro Glu Ala Glu His Phe Ser Leu Trp 65 70 75 80 pro cys L.ys ser Asp Pro Gly Cvs Trp vai Phe Gly Glu Gly Thr Gin 85 ' 90 95

Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu Phe 100 105 110

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys 115 120 125

Leu ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Glv Leu Lys val Ala Trp Lvs Ala 130 135 ' 140

Asp Gly Ser Thr lie lie Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys 145 150 155 160

Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 165 ‘ 170 175

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser ser Phe Ser cys Leu val Thr His Gin 180 185 190

Gly Ser Thr Val Glu Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 200 205 <210> 88

tirzáIMOádBI < 211> 780

< 212 > DNA <213> Canis familíaris <220>

<221> CDS <222 > (1) . . (618) <223 > <400> 88

tirzáIMOádBI atg tea gtg gee ctg gga cag atg gee agg ate acc tgt ggg aga gac 48

Met Ser Vai Àla Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly Arg Asp 1 5 10' 15' aac tet gga aga aaa agt get cac tgg tac cag cag aag cca age cag 96

Asn Ser Gly Arg Lys Ser Ala His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ser Gin 20' 25 30 get ccc gtg atg ett ate gat gat gat tgc ttc cag ccc tea gqa ttc 144

Ala Pro Vat Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45 tet gag caa ttc tea ggc act aac teg ggg aac aca gee acc ctg acc 192

Ser Gl u Gin Phe Ser Gly Thr Asn Ser Gly Asn rhr Ala Thr Leú Thr 50 55 60 att agt cag ate cca ccc tac tet gaa gtg act ege ttc act egg gee 240 lie Ser Gin lie Pro Pro Tvr Ser Glu Vat Thr Arg Phe Thr Arg Ala 65 70 75 ‘ 80 tgg gca gac act age tgt tgt tgg gta ttc gqt gaa ggg acc cag ctg 2S8

Trp Ala Asp Thr Ser Cys Cys Trp Val Phe cty Glu Gty Thr Gin Leu 85 90 95 acc gtc etc gqt cag ccc aag tee tee ccc ttg gtc aca etc ttc ccg 336

Thr Val Leu Gty Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leii Val Thr Leu Phe Pro 100 105 110 ccc tee tet gag gag etc ggc gee aac aag get acc ctg gtg tgc etc 3S4

Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lvs Ala Thr Leu Val Cys Leu 115 ‘ 120 125 ate age gac ttc tac ccc agt ggc ctg aaa gtg get tgg aag gca gat 432 lie Ser Asp Phe Tvr Pro Ser Gly Leu Lys Vat Ala Trp Lys Ala Asp 130 ' 135 140 ggc age acc ate ate cag gqc gtg gaa acc acc aag ccc tee aag cag 480

Gly Ser Thr lie lie Gin Gty Vat Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin 145 150 155 160 age aac aac aag tac aeg gee age age tac ctg age ctg aeg cct gac 528

Ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala Ser Ser Tvr Leu Ser Leu Thr Pro Asp 165 170 175 aag tgg aaa tet cac aqc age ttc age tgc ctg gtc aeg cac cag ggg 576

Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Val Thr His Gin Gty ISO 185 190 age acc gtg gag aag aag gtg gee cct gca gag tgc tet tag 618

Ser Thr Vat Glu Lys Lys Vat Ala Pro Ala Glu Cys Ser 195 200 205 gtccctgaga attcctgaga tggageette ctcacccaga caccccttcc ccagttcacc 678 ttgtgcccct gaaaacccac cctggaccag ctcagaccag gcaggtcact catcctccct 738 gtttctactt gtgctcaata aagactttat catttatcac tg 780

<210> 89 <211> 205 <212> PRT <213> Canis familiaris < 4 0 0 > 8 9

tirzáIMOádBI

Met Ser vai Ala Leu Gly Gin Met Ala Arg lie Thr Cys Gly Arg Asp 15 10 15

Asn Ser Gly Arq Lys Ser Ala His Trp Tyr Gin Gin Lvs Pro Ser Gin 20" 25 ' 30

Ala Pro Vai Met Leu lie Asp Asp Asp Cys Phe Gin Pro Ser Gly Phe 35 40 45

Ser Glu Gin Phe Ser Gly Thr Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr 50 55 60 lie Ser Gin lie Pro Pro Tyr Ser Glu vai Thr Arg Phe Thr Arg Ala 65 70 ' 75 80

Trp Ala Asp Thr Ser Cys Cys Trp vai Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu 85 90 95

Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu Phe Pro 100 105 110

Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu 115 120 125

Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Ser Gly Leu Lys Vai Ala Trp Lvs Ala Asp 130 135 140

Gly ser Thr lie lie Gin Glv vai Glu Thr Thr Lys Pro ser Lys Gin 145 150 155 160

Ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala ser ser Tyr Leu ser Leu Thr Pro Asp 165 170 175

Lys Trp Lys ser His ser ser Phe ser cys Leu vai Thr His Gin Gly 180 185 190

Ser Thr Vai Glu Lys Lys Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 135 200 205 <210> 90 <211> 851

< 212 > DNA <213> Canis familiaris <220>

< 2 21> CDS <222> (24) . . (719) <223 >

tirzáIMOádBI <400> 90 agcagaatca gggtgcctcc acc atg gcc tgg acc cac etc etc ctg age etc 53

Met Ala Trp Thr His Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 ctg get etc tgc aca ggt tet gtq gee tcc tat gtg ctg aca cag ctg 101

Leu Ala Leu Cvs Thr Glv Ser Vai Ala Ser Tyr Vai Leu Thr Glh Leu 15 ' 20 25 cca tcc aaa aat gtq acc ctg aag cag ccg gcc cac ate acc tgt gqg 149

Pro Ser Lys Asn Vai Thr Leu Lys Gin Pro Ala His lie Thr Cys Gly 30 35 40 gqa gac aac att gqa agt aaa agt gtt cac tgg tac cag cag aag ctg 197

Gly Àsp Asn lie Gly Ser Lys Ser Vai His Trp Tyr Glri Gin Lys Leu 45 '50 ' 55 ggc cag gcc cct gta ctg att ate tat tat gat age age agg ccg aca 245

Gly Gin Ala Pro vai Leu lie lie Tyr Tyr Asp Ser Ser Arq Pro Thr 60 65 70 gqg ate cct gag cga ttc tcc ggc gcc aac teg gqg aac acg gcc acc 293

Gly lie Pro Gl u Arq Phe Ser Gly Ala Asn Ser Gly Asn Thr Ãla Thr 75 “ 80 85 90 ctg acc ate age gqg gee ctg gee gag gac gag get gac tat tac tgc 341

Leu Thr rle Ser Gly Ala Leu Ala Glu Asp Gl u Ãla Asp Tyr Tyr Cys 95 100 105 cag gtq tgg gac age agt get ett gtg ttc ggc gga ggc acc cat ctg 389

Gin val Trp Asp Ser Ser Ala Leu val Phe Gly Gly Gly Thr His Leu 110 115 120 acc gtc etc ggt cag ccc aag gee tee ccc teg gtc aca etc ttc ccg 437

Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro 125 130 135 ccc tee tet gag gag etc ggc gcc aac aag gcc acc ctg gtq tgc etc 485

Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu val Cys Leu 140 145 150 ate age gac ttc tac ccc agt ggc gtg acg gtq gcc tgg aag gea gac 533 lie Ser Ãsp Phe Tyr Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp 155 160 165 170 ggc age ccc gtc acc cag ggc gtg gag acc acc aag ccc tcc aag cag 581

Gly Ser Pro Val Thr Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin 175 180 185 age aac aac aag tac geg gee age age tac ctg age ctg acg cct gac 629

Ser Asn Asn Lvs Tyr Ala Ala sér Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp 190 ' 195 ' 200 aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc aca cac gag ggg 677

Lys Trp Lys ser His ser ser Phe sêr cys Leu Val Thr His Glu Gly 205 210 215 age acc gtg gag aag aag gtg gee ccc gea gag tgc tet tag 719

Ser Thr val Glu Lys Lys val Ala Pro Ala Glu cys ser 220 225 2'30 gttcccgacg cccccgceca cctaaggggg cccggagcct caggacctcc aggaggatct 779 tgcctcctat ctgggtcatc ccgcccttct ccccacaccc aggcageaet caataaagtg 839 ttctttgttc aa 851

<210> 91 <211> 231 <212> PRT

tirzáIMOádBI <213> Canis faiuilianis <400> 91

Met Ala Trp Thr His Leu Leu Leu Ser Leu Leu Ala Leu Cys Thr Glv 1 5 10 15

Ser vai Ala ser Tyr vai Leu Thr Gin Leu Pro Ser Lys Asn vai Thr 20 25 30

Leu Lys Gin Pro Ala His lie Thr Cys Gly Gly Asp Asn Tie Gly Ser 35 40 45

Lys Ser vai His Trp Tyr Gin Gin Lys Leu Gly Gin Ala Pro vai Leu 50 55 60

Tie Tie Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Pro Thr Glv Tie Pro Glu Arg Phe

65 70 75 SO

Ser Gly Ala Asn ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr ile Ser Gly Ala 85 ' 90 95

Leu Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Vai Trp Asp Ser Ser 100 105 110

Ala Leu vai Phe Glv Glv Gly Thr His Leu Thr vai Leu Gly Gin Pro 115 ‘ 120 125

Lys Ala Ser Pro Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 130 135 140

Gly Ala Asn Lvs Ala Thr Leu vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 145 ' 150 155 160

Ser Gly Vai Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Thr Gin 165 170 175

Gly vai Glu Thr Thr Lvs Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 180 ' 185 190

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser His Ser 195 200 205

Ser Phe Ser Cys Leu vai Thr His Glu Gly Ser Thr vai Glu Lys Lys 210 215 220

Vai Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 <210> 92

tirzáIMOádBI <211> 881

< 212 > DNA <213> Canis familíaris <220>

<221> CDS <222 > (18) . . (719) <223 > <400> 92 atcagggtgc ctccacc atg gcc tgg acc cac etc etc ctg age etc ctg 50

Met Ala Trp Thr His Leu Leu Leu Ser Leu Leu 15 10 get etc tgc aca ggt tet gtg gee tee tat gtg ctg aca cag ctg cca 98

Ala Leu Cys Thr Gly Ser Vat Ala Ser Tyr VaT Leu Thr Gin Leu Pro 15 20 25 tcc aaa aat gtg acc ctg aag cag ccg gcc cac ate acc tgt ggg gqa 146

Ser Lys Asn vai Thr Leu Lys Gin Pro Ala His lie Thr Cys Gly Gly 30 35 40 gac aac att gga agt aaa agt gtt cac tgg tac cag cag aag ctg gge 194

Asp Asn lie Gly Ser Lys Ser Vai His Trp Tyr Gin Gin Lys Leu Gly 45 50 55 cag gcc cct gta ctg att ate tat tat gat age age agg ccg aca ggg 242

Gin Ala Pro Vai Leu lie lie Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Pro Thr Gly 60 65 70 75 ate cct gag cga ttc tcc gge gcc aac teg ggg aac acg gcc acc ctg 290 lie Pro Glu Arg Phe Ser Glv Ala Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu 80 ' 85 90 acc ate age ggg gee ctg gee gag gac gag get gac tat tac tgc cag 338

Thr lie Ser Gly Ala Leu Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin

tirzáIMOádBI 9S 100 105 gtg tgg gac age agt ggt cat tgt tgg gta ttc ggt gaa gqg acc cag 386

Vat Trp Asp Ser Ser Gly His Cys Trp Vai Phe Gly Glu Gly Thr Gin 110 ' 115 ' 120 ctg acc gtc ctc ggt cag ccc aag tcc tcc ccc ttg gtc aca ctc ttc 434

Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Vai Thr Leu Phe 125 130 135 ccg ccc tcc tet gag gag ctc ggc gee aac aag get acc ctg gtg tgc 482

Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ála Thr Leu Vai Cys 140 145 150 155 etc ate age gac ttc tac ccc agt ggc ctg aaa gtq get tgg aag gea 530

Leu lie ser Asp Phe Tyr Pro ser Gly Leu Lys vai Ala Trp Lys Ala 160 165 170 qat ggc age acc ate ate caq qgc gtg gaa acc acc aaq ccc tcc aag 578 Ãsp Gly sèr Thr rle lie Gin Gly vai Glu Thr Thr Lys Pro ser Lys 175 ' 180 185 cag age aac aac aag tac aeg gee age age tac ctg age ctg acg cct 626

Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Thr Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro 190 195 200 gac aag tgg aaa tet cac age age ttc age tgc ctg gtc acg cac cag 674

Asp Lys Trp Lys Ser His Ser Ser Phe Ser Cys Leu Vai Thr His Gin 205 210 215 qgg age acc gtg gag aaq aaq qtg gee cct qca qaq tgc tet tag 719

Glv sèr Thr Vai Glu Lys Lys VaT Ala Pro Ala Glu Cys Ser 220 225 230 gtccctgaga attcctgaga tggagccttc ctcacccaga caccccttcc ccagttcacc 779 ttgtgcccct gaaaacccac cctggaccag ctcagaccag gcaggtcact catcctccct 839 gtttctactt gtgctcaata aagactttat catttatcac tg 881

<210> 93 <211> 233 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 93

tirzáIMOádBI

Met Ala Trp Thr His Leu Leu Leu Ser Leu Leu Ala Leu Cys Thr Gly 15 10 15

Ser Val Ala Ser Tyr Val Leu Thr Gin Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr 20 25 30

Leu Lys Gin Pro Ala His lie Thr cys Gly Glv Asp Asn lie Glv Ser 35 40 45

Lys Ser Val His Trp Tyr Gin Gin Lys Leu Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60 lie lie Tyr Tvr Asp Ser Ser Arg Pro Thr Gly lie Pro Glu Arg Phe

65 70 75 ' SO

Ser Gly Ala Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Ala 85 ‘ 90 95'

Leu Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tvr Tyr Cys Gin Val Trp Asp Ser Ser 100 105 110

Gly His Cys Trp val Phe Gly Glu Gly Thr Gin Leu Thr val Leu Gly 115 120 125

Gin Pro Lys Ser Ser Pro Leu Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 130 135 140

Glu Leu Gly Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe 145 150 155 160

Tyr Pro Ser Gly Leu Lys val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Thr lie 165 ' 170 175 lie Gin Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys 180 185 190

Tyr Thr Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Lys Trp Lys Ser 195 200 205

His Ser Ser Phe Ser Cys Leu val Thr His Gin Glv Ser Thr val Glu 210 215 220

Lys Lys Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser 225 230 <210> 94 <211> 935 <212> DNA <213> Bos taurus

tirzáIMOádBI < 2 2 0 >

<221> CDS <222 > (55) . . (762) <223 > <400> 94 ggctctgctc agctgtgggg ccacagacgg caggacgccc tgaccatgtc cacc atg 57

Met 1 gcc tgg tcc cct ctg etc etc acc ctg gtc get etc tgc aca gqa tcc 105

Ala Trp Ser Pro Leu Leu Leu Thr Leu vai Ala Leu Cys Thr Gly Ser 5 10 15 tgg gcc cag get gtq ctg act cag ccg tcc tcc gtg tcc ggc tcc ctg 153

Trp Ala Gin Ala vai Leu Thr Glή Prõ Ser Ser vaí Ser Gly Ser Leu 20 25 30 ggc cag agg gtc tcc ate acc tgc tet gqa age age acg aat ate gqc 201

Gly Gin Arg vai Ser lie Thr Cvs Ser Gly Ser Ser Thr Asn lie Gly 35 40 ' 45 att tat gqt gta aac tgg tac caa cag gtc cca gqa teg ggc etc aaa 249 lie Tyr Gly vai Asn Trp Tyr Gin Glh vai Pro Gly Ser Gly Leu Lys 50 55 60 65 acc ate ate tat gaa gat aag tat cga ccc teg ggg gtc ccc gac cga 297

tirzáIMOádBI

Thr lie lie Tyr Glu Asp Lys Tyr Arg Pro Ser Gly vai Pro Asp Arg 70 75 80 ttc tcc gqc tcc aag tct ggc aac aca gcc acc cta acc ate aac teg 345

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ãla Thr Leu Thr ile Asn Ser 85 90 95 etc cag get gag gac gag geg gat tat ttc tgt gca get ggt gac tac 393

Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Gly Asp Tyr 100 105 ' 110 agt gtc aat act gcc gtt ttc gqc ggc gag acc aca ctg acc gtc ctg 441

Ser val Asn Thr Ala val Phe Gly Gly Gly Thr Thr Leu Thr val Leu IIS 120 125 ggt cag ccc aag tcc cca ccc teg gtc acc ctg ttc ccg ccc tcc aeg 489

Glv Gin Pro Lys Ser Pro Pro Ser val Thr Leii Phe Pro Pro Ser Thr 130 135 140 145 gag gag etc aac ggc aac aag gcc acc ctg gtg tgt etc ate age gac 537

Glu Glu Leu Asn Gly Asn Lys Ala Thr Leu val Cys Leu lie Ser Asp ISO 155 160 ttc tac ccg ggt age gtg acc gtg gtc tgg aag gca gac ggc age acc 585

Phe Tyr Pro Gly Ser Val Thr Val Val Trp Lys Ãla Asp Gly Ser Thr 165 170 175 ate acc ege aac gtq gag acc acc egg gcc tcc aaa cag age aac age 633 lie Thr Arg Asn Val Glu Thr Thr Arg Ala Ser Lys Gin Ser Asn Ser 180 185 190 aag tac geg gcc age age tac ctg age ctg aeg age age gac tgg aaa 681

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Ser Ser Asp Trp Lys 195 200 205 teg aaa ggc agt tac age tgc gag gtc aeg cac gag gqg age acc gtg 729

Ser Lys Gly Ser Tyr Ser Cys Glu val Thr His Glu Gly Ser Thr vat 210 215 220 225 aeg aag aca gtg aag ccc tea gag tgt tct tag ggccctggac ccccaccctc 782

Thr Lys Thr val Lys Pro Ser Glu Cys Ser 230 235 gggggccctc tggcccacac cccctccccc acctctccat ggacccctga gcccctaccc 842 aggtcgcctc acaccagggg cctctcctcc ctccctgttc ctgcttctcc tgaataaaga 902 ccttctcatt tatcaacaaa aaaaaaaaaa aaa 935 <210> 95 <211> 235 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 95

tirzáIMOádBI

Met Ala Trp Ser Pro Leu Leu Leu Thr Leu Vai Ala Leu Cys Thr Gly 1 5 10 15

Ser Trp Ala Gin Ala vai Leu Thr Gin Pro Ser Ser vai Ser Gly Ser 20 25 30

Leu Gly Gin Arq vai Ser ile Thr Cys Ser Gly Ser Ser Thr Asn ile 35 40 45

Gly ile Tyr Gly vai Asn Trp Tyr Gin Gin vai Pro Gly Ser Gly Leu 50 55 60

Lys Thr lie lie Tyr Glu Asp Lys Tyr Arg Pro ser Gly vai Pro Asp

65 70 75 SO

Arg Phe ser Gly ser Lys ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Asn 85 90 95 ser Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe cys Ala Ala Gly Asp 100 105 ' 110

Tyr Ser Vai Asn Thr Ala Vai Phe Gly Gly Gly Thr Thr Leu Thr Vai 115 120 125

Leu Gly Gin Pro Lys Ser Pro Pro Ser Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser 130 135 140

Thr Glu Glu Leu Asn Gly Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cvs Leu Ile Ser 145 150 155 ' 160

Asp Phe Tyr Pro Gly Ser Vai Thr Vai Vai Trp Lys Ala Asp Gly Ser 165 170 175

Thr ile Thr Arg Asn vai Glu Thr Thr Arg Ala ser Lvs Gin ser Asn 180 185 190 ser Lys Tyr Ala Ala ser ser Tyr Leu ser Leu Thr ser ser Asp Trp 195 200 205

Lys ser Lys Gly ser Tyr ser cys Glu vai Thr His Glu Gly ser Thr 210 215 220

Vai Thr Lys Thr Vai Lys Pro Ser Glu Cys Ser 225 230 235

< 210 > 96 <211> 20 <212> DNA

tirzáIMOádBI <213> Artificial <220> <223> T3 iniciador <400> 96 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> 97 <211> 19 < 212 > DMA <213> Artificial <220> <223> T7 iniciador <400> 97 taatacgact cactatagg 19 <210> 98 < 211> 18 < 212 > DNA <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 98 ctgaccgtcc tcggtcag 18 < 210 > 9 9 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial tirzáIMOádBI < 2 2 0 > <223> Iniciador <400> 99 ccttcttctc cacggtgc 18 <210> 100 < 211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 100 tggtaaccca tggcctgc 18 <210> 101 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 101 accgtcttct ccacggtg 18 <210> 102 <211> 18 < 212 > DMA <213> Artificial <220> <223> GAPDH iniciador

tirzáIMOádBI <400> 102 gggctgcttt taactctg 18 <210> 103 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> GAPDH iniciador <400> 103 ccaggaaatg agcttgac 18 <210> 104 <211> 24 < 212 > DNA <213> Artificial < 2 2 0 > <223> Iniciador <400> 104 catatgttcg gcggaggcac ccac 24 <210> 105 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 105

tirzáIMOádBI ggtaccagag cactctgcgg gggc 24 <210> 106 <211> 23 < 212 > DMA <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 106 gaattcctgc tgcgcccaac age 23 <210> 107 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Iniciador <400> 107 gtcgacctat gaacattctg cagg 24

<210> 108 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108

Leu Leu Arg Pro Thr Ala Ala Ser Gin Ser 15 10 <210> 109

tirzáIMOádBI

< 211 > 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109

Ala Leu Gly Pro Gly Ala Pro Gly Gly 1 5

<210> 110 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110

Ser Leu Arg Ser Arg Trp Gly Arg Phe Leu 15 10

<210> 111 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111

Ser Lys His Asn Ser Vai Thr His Vai Phe 1 5 10 <210> 112

< 211 > 9 <212> PRT <213> Homo sapiens

tirzáIMOádBI <400> 112

Lys His Asn Ser vai Thr His vai Phe 1 5

<210> 113 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113

Ser Vai Thr His Vai Phe Glv Ser Glv Thr 1 5 10

<210> 114 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114

Vai Thr His Vai Phe Glv Ser Gly Thr 1 5

<210> 115 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115

Vai Phe Gly Ser Gly Thr Gin Leu Thr 1 5 <210> 116

tirzáIMOádBI

< 211 > 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 116

Gly Ser Gly Thr Gin Leu Thr Vai Leu 1 5 <210> 117

< 211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117

Gin Leu Thr vai lie Ser Gin Pro Lys Ala 15 10

<210> 118 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118

Ala Tyr Met Arg Glu His Asn Gin Leu 1 5 fcr^o i yooob l

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não ê parte integi'ante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 5698396 B [0007] • WO 2004024750 A [0007] • WO 2004048938 A [0007] • WO 9633739 A [0049]

Documentos de não patente citados na descrição • TSUYOSHI AKIYOSHI. Cancer and Chemotherapy, 1997, volume 24, páginas 551 a 519 [0008] • BRUGGEN P. et al. Science, 1991, volume 254, 1643 a 1647 [0008] • Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 1995, • Int. J. Cancer, 1997, volume 72, páginas 965 a 971 [0008] ® Cancer Res., 1998, volume 58, páginas 1034 a 1041 [0008] ® Int. J. Cancer, 1998, volume 29, páginas 652 a 658 [0008] ® Int. J. Oncol., 1999, volume 14, páginas 703 a 708 [0008] ® Cancer Res., 1996, volume 56, páginas 4.766 a 4.772 [0008] ® Hum. Mol. Genet, 1997, volume 6, páginas 33 a 3 9 [0008] • Adv. Immunol., 1996, volume 63, páginas 1 a 41 [0008] • Blood, 1998, volume 92, páginas 4.317 a 4.324 [0008] • Modem Pathology, 2004, volume 17, páginas 423 a 42 9 tr^o í yooob l [0008] • Jut. J. Cancer, 1994, volume 58, página 317 [0022] • Short Protocols in Molecular Biology. AUBUBEL et al. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 1995 [0032] • Molecular Cloning. SAMBROOK et al. Current Protocols in Molecular Biology. 1989 [0032] • SO et al. Molecules and cells, 1997, volume 7, páginas 178 a 186 [0049] • KREIG et al. Nature, volume 374, páginas 546 a 549 [0049] • NIKKEI. Science, abril 1994, páginas 20 a 45 [0067] ® The Pharmaceutical Monthly, 1994, volume 36 (1), páginas 23 a 48 [0067] • Experimental Medicine. 1994, volume 12 [0067] • SALTER RD et al. Immunogene tics, 1985, volume 21, páginas 235 a 246 [0122]

Claims

fcrQúO í yooob l REIVINDICAÇÕES

1. Agente para utilização num método para terapia e/ou profilaxia de cancro da mama e/ou leucemia, em que o referido agente compreende como um ingrediente eficaz pelo menos um polipéptido selecionado a partir dos polipéptidos (a) a (c) abaixo, sendo que o referido polipéptido que tem uma atividade/atividades indutora(s) de imunidade, ou como um ingrediente (ou ingredientes) eficaz um vetor (ou vetores) recombinante que compreende um polinucleótido (ou polinucleótidos) codificador do referido polipéptido (ou polipéptidos) e tem capacidade para expressar o referido polipéptido (ou polipéptidos) in vivo: (a) um polipéptido que consiste em qualquer uma das sequências de aminoácidos mostradas nos IDs de número ímpar de SEQ ID Nos:3 a 95; (b) um polipéptido que consiste na sequência de aminoácidos mostrada no SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO :109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID N0:111, SEQ ID N0:112, SEQ ID NO :113, SEQ ID NO :114, SEQ ID NO :115, SEQ ID NO :116 OU SEQ ID NO:117; e c) um polipéptido que compreende como uma sequência parcial do mesmo uma sequência de aminoácidos conforme mostrado no SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO :109, SEQ ID NO :110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID N0:112, SEQ ID N0:113, SEQ ID NO :114, SEQ ID NO :115, SEQ ID NO :116 OU SEQ ID NO :117, sendo que o referido polipéptido tem de 8 a 12 resíduos de aminoácido,
2. Agente para utilização, de acordo com a reivindicação 1, que compreende mais de um dos referidos polipéptidos como ingredientes eficazes.
3. Agente para utilização, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, que compreende adicionalmente um imunoestimulador. tirzáIMOádBI
4. Agente para utilização, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o método compreende administrar a um paciente o polipéptido ou vetor recombinante.
5. Célula apresentadora de antígeno isolada para utilização num método para terapia e/ou profilaxia de cancro da mama e/ou leucemia, sendo que a referida célula apresentadora de antígeno compreende um complexo entre um polipéptido que tem uma atividade indutora de imunidade, conforme definido na reivindicação 1, e uma molécula de HLA, opcionalmente, em que a célula apresentadora de antígeno é uma célula dendrítica ou uma célula B.
6. Célula T isolada que se liga seletivamente a um complexo entre um polipéptido que tem uma atividade indutora de imunidade, conforme definido na reivindicação 1, e uma molécula de HLA para utilização num método de terapia e/ou profilaxia de cancro da mama e/ou leucemia.
7. Célula apresentadora de antígeno para utilização, conforme definido na reivindicação 5 ou célula T para utilização, conforme definido na reivindicação 6, em que o método compreende administrar a um paciente a célula apresentadora de antígeno e/ou a célula T.
8. Método para detetar cancro da mama e/ou leucemia, sendo que o método é aplicado a uma amostra separada a partir de um corpo vivo e compreende: (1) medir a expressão de pelo menos um dos polipéptidos (a) abaixo: (a) um polipéptido produzido no corpo vivo e que tem uma reatividade para se ligar, por reação de anticorpo com antígeno, a um anticorpo, contra um polipéptido que consiste em qualquer uma das sequências de aminoãcidos tirzáIMOádBI mostradas nos IDs de número ímpar das SEQ ID Nos: 3 a 95 (ou (2) investigação de expressão do gene CD179b que tem uma região codificadora que tem qualquer uma das sequências de ácido nucleico mostradas no SEQ ID N0:1 e os IDs de número par das SEQ ID Nos:4 a 94 numa amostra derivada de um paciente com cancro, e a comparação da mesma com o nível de expressão do gene numa amostra derivada de um indivíduo saudável.
9. Método, de acordo com a reivindicação 8, em que a medição de expressão do referido polipéptido (ou polipéptidos) é realizada ao medir um anticorpo/anticorpos que pode estar contido na amostra por imunoensaio, sendo que o anticorpo (ou anticorpos) foi induzido no corpo vivo contra o referido polipéptido (ou polipéptidos) a ser medido.
10. Reagente para utilização num método in vivo para detetar um cancro da mama e/ou leucemia, sendo que o referido reagente compreende um polipéptido que é submetido à reação de anticorpo com antígeno com um anticorpo induzido num corpo vivo contra o polipéptido abaixo: (a) um polipéptido que consiste em qualquer uma das sequências de aminoãcidos mostradas nos IDs de número ímpar das SEQ ID Nos:3 a 95.
11. Utilização in vitro de um reagente para detetar um cancro da mama e/ou leucemia, sendo que o referido reagente compreende um polipéptido (a) abaixo: (a) um polipéptido que consiste em aminoãcidos em qualquer uma das sequências de aminoãcidos mostradas nos IDs de número ímpar das SEQ ID Nos:3 a 95.