PT2114925E

PT2114925E - Análogos de azetidina de inibidores de nucleosidase e fosforilase

Info

Publication number: PT2114925E
Application number: PT07866894T
Authority: PT
Inventors: Vern L Schramm; Gary Brian Evans; Richard Hubert Furneaux; Peter Charles Tyler; Ben William Greatrex
Original assignee: Einstein Coll Med; Ind Res Ltd
Priority date: 2006-12-22
Filing date: 2007-12-21
Publication date: 2012-05-29
Also published as: JP2010513477A; EP2114925B8; US8283345B2; US20100168141A1; CA2674525A1; WO2008079028A1; HK1138276A1; ATE553105T1; DK2114925T3; AU2007338953A1; CN101600711A; ES2385759T3; EP2114925B1; NZ577682A; KR20090101278A; EP2114925A4; CY1112889T1; EP2114925A1

Description

DESCRIÇÃO

"ANÁLOGOS DE AZETIDINA DE INIBIDORES DE NUCLEOSIDASE E FOSFORILASE"

CAMPO TÉCNICO

Esta invenção refere-se a determinados análogos de azetidina de inibidores de nucleosidase e nucleósido- fosforilase, à utilização destes compostos como produtos farmacêuticos, a composições farmacêuticas contendo os compostos, a compostos para o tratamento de determinadas doenças, a processos para preparar os compostos e intermediários úteis na preparação dos compostos.

ANTECEDENTES

Investigação recente na área dos inibidores de nucleósido de purina-fosforilase (PNP) , metiltioadenosina-fosforilase (MTAP), 5'-metiltioadenosina-nucleosidase (MTAN) e nucleósido- hidrolase resultou na concepção de uma classe de compostos conhecidos como as Imucilinas, algumas das quais são potentes inibidores de uma ou mais das enzimas acima. As Imucilinas são análogos de nucleósidos em que a parte "açúcar" da molécula foi substituída por uma unidade "imino açúcar". A PNP catalisa a dissociação fosforolítica de ribo- e desoxirribonucleósidos de guanina e hipoxantina para dar o 1 correspondente açúcar-l-fosfato e guanina, hipoxantina ou outras bases de purina.

Os humanos deficientes em PNP sofrem de uma imunodeficiência de células T especifica devido a uma acumulação de dGTP que impede a estimulação de linfócitos T. Os inibidores de PNP são portanto imunossupressores e são activos contra malignidades de células T e distúrbios proliferativos de células T.

Os documentos US 5985848, US 6066722 e US 6228741 descrevem compostos conhecidos como Imucilinas que são inibidores de PNP e purina-fosforribosiltransferases (PPRT). Estas Imucilinas são úteis para tratar infecções parasitárias, malignidades de células T, doenças auto-imunes e distúrbios inflamatórios. Estas também são úteis para imunossupressão no transplante de órgãos.

Os documentos US 6693193 e US 7022852 descrevem um processo para preparar determinados compostos de Imucilina, proporcionando outra via útil para a síntese desta classe de compostos. O documento US 7109331 divulga outras Imucilinas que são inibidores de PNP e PPRT. A parte imino açúcar de uma molécula de Imucilina tem o átomo de azoto localizado entre C-l e C-4 de modo a formar um composto 1,4-didesoxi-l,4-imino-D-ribitol. A localização do átomo de azoto no anel de ribitol pode ser importante para ligação às enzimas. Além disso, a localização da ligação entre a unidade imino açúcar e o análogo da base de nucleósido pode ser crítica para a actividade enzimática inibidora. Os compostos descritos acima têm essa ligação em C-l do anel de imino açúcar. 2

Foi desenvolvida outra classe relacionada de compostos inibidores de nucleósido-fosforilase e nucleosidase, conhecidos como DAD-Me-Imucilinas. A localização do átomo de azoto no anel de imino açúcar desta classe de compostos varia e/ou a unidade imino açúcar está ligada ao análogo da base de nucleósido através de uma ponte metileno. DAD-Me-Imucilinas são descritas no documento US 10/524995.

Algumas das Imucilinas também foram identificadas como potentes inibidores de MTAP e MTAN. Estas são o objecto do documento US 10/395636. As MTAP e MTAN actuam na via de biossíntese de poliamina, na recuperação de purina em mamíferos e nas vias de detecção de quórum em bactérias. A MTAP catalisa a fosforólise reversível de MTA em adenina e 5-metiltio-a-D-ribose-l-fosfato (MTR-1P). A MTAN catalisa a hidrólise reversível de MTA em adenina e 5-metiltio-a-D-ribose e a hidrólise reversível de S-adenosil-L-homocisteína (SAH) em adenina e S-ribosil-homocisteína (SRH). A adenina formada é subsequentemente reciclada e convertida em nucleótidos. A única fonte de adenina livre na célula humana é uma consequência da acção destas enzimas. O MTR-1P é subsequentemente convertido em metionina por acções enzimáticas consecutivas. A MTA é um produto secundário da reacção envolvendo a transferência de um grupo aminopropilo de S-adenosilmetionina descarboxilada para a putrescina durante a formação de espermidina. A reacção é catalisada pela espermidina-sintase. Do mesmo modo, a espermina-sintase catalisa a conversão de espermidina em espermina, com a produção concomitante de MTA como um produto secundário. A espermidina-sintase é muito sensível à inibição de produto por acumulação de MTA. Por conseguinte, a inibição de MTAP ou MTAN limita fortemente a 3 biossíntese de poliamina e a via de recuperação para a adenina nas células. A MTA também é o produto secundário da síntese bacteriana de lactonas de homosserina aciladas a partir de S-adenosilmetionina (SAM) e proteínas transportadoras de acil-acilo nas quais a lactonização subsequente provoca a libertação de MTA e da lactona de homosserina acilada. A lactona de homosserina acilada é uma molécula de detecção de quórum bacteriano em bactérias que está envolvida na virulência bacteriana contra tecidos humanos. A via de lactona de homosserina sofrerá inibição de retorno pela acumulação de MTA. A deficiência de MTAP devido a uma supressão genética tem sido descrita em muitas malignidades. A perda da função da enzima MTAP nestas células é conhecida como sendo devida a supressões homozigóticas no cromossoma 9 dos MTAP e gene supressor de tumor pl6/MTSl proximamente relacionados. Como a ausência de pl6/MTS1 é provavelmente responsável pelo tumor, a carência de actividade MTAP é uma consequência da supressão genética e não é ocasionadora de cancro. No entanto, a ausência de MTAP altera o metabolismo de purinas nestas células, pelo que estas são principalmente dependentes da via de novo para o fornecimento de purinas.

Espera-se também que os inibidores de MTAP sejam muito eficazes contra infecções parasitárias, tal como a malária que infecta glóbulos vermelhos (RBC), porque essas infecções carecem da via de novo para a biossíntese de purinas. Os parasitas protozoários dependem totalmente das purinas produzidas pela via de recuperação para o seu crescimento e propagação. Por conseguinte, os inibidores de MTAP matarão estes parasitas sem 4 ter qualquer efeito negativo nas RBC do hospedeiro, porque as RBC são células terminalmente diferenciadas e não sintetizam purinas, produzem poliaminas ou reproduzem-se.

Foi demonstrado que a MT A induz apoptose em células cancerosas em divisão, mas tem o efeito antiapoptótico, oposto em células normais em divisão, tal como hepatócitos (E. Ansorena et al., Hepatology, 2002, 35: 274-280). A administração de MTA em circunstâncias em que a sua degradação pela MTAP está inibida por um inibidor de MTAP levará a níveis mais elevados de MTA em circulação e no tecido e, consequentemente, a um efeito melhorado no tratamento de cancro.

Por conseguinte, os inibidores de MTAP e MTAN podem ser utilizados no tratamento de doenças, tais como cancro, infecções bacterianas ou infecções parasitárias protozoárias, onde é conveniente inibir a MTAP ou MTAN. Tais tratamentos são descritos nos documentos US 10/395636 e US 10/524995.

As Imucilinas e DAD-Me-Imucilinas também são úteis como inibidores de hidrolases de nucleósidos. Estas enzimas catalisam a hidrólise de nucleósidos. Estas não estão presentes em mamíferos, mas são necessárias para a recuperação de nucleósidos em alguns parasitas protozoários. Determinados parasitas protozoários utilizam nucleósido-fosforilases em vez de, ou além de, nucleósido-hidrolases para este efeito. É expectável que os inibidores de hidrolases e fosforilases de nucleósidos interfiram com o metabolismo do parasita e, portanto, sejam proveitosamente utilizados contra parasitas protozoários.

Foi descrita a estrutura cristalina de raios X de um dos compostos inibidores (DAD-Me-Imucilina-H) ligado à PNP de 5

Mycobacterium tuberculosis (A. Lewandowicz, W. Shi, G.B. Evans, P.C. Tiler, R.H. Furneaux, L.A. Basso, D.S. Santos, S.C. Almo e V.L. Schramm, Biochemistry, 42 (2003) 6057-6066.)· O complexo deste inibidor com PNP tem ligações de hidrogénio favoráveis com quase todos os sítios doador-aceitador de ligação de hidrogénio no complexo. Até mesmo uma ligeira alteração estrutural pode romper este padrão de ligações de hidrogénio favorável, como demonstrado por mapeamento energético de interacções análogas de estado transição com PNP humanos e de Plasmodium falciparum (A. Lewandowicz, E.A.T. Ringia, L.-M. Ting, K. Kim, P.C. Tiler, G.B. Evans, O.V. Zubkova, S. Mee, G.F. Painter, D.H. Lenz, R.H. Furneaux e V.L. Schramm, J. Biol Chem., 280 (2005) 30320-30328).

Foi anteriormente considerado que, face à importância da ligação de hidrogénio e à localização das unidades químicas no sítio doador-aceitador, um inibidor destas enzimas provavelmente necessitaria que a unidade imino açúcar tivesse um anel de 5 membros e tivesse quiralidade em determinadas localizações. No entanto, na procura contínua de novos e melhores inibidores de nucleósido-fosforilase e nucleosidase, as requerentes determinaram que os análogos de azetidina de Imucilinas e DAD-Me-Imucilinas, que têm um anel de 4 membros como o análogo imino-açúcar, alguns dos quais são aquirais, são surpreendentemente inibidores potentes de pelo menos um de PNP, PPRT, MTAP e MTAN. Não seria esperado que o anel de 4 membros de azetidina orientasse os substituintes funcionais, tal como os grupos hidroxilo, em orientações suficientemente próximas para participarem eficazmente em redes de ligações de hidrogénio consideradas responsáveis pela inibição potente observada para as Imucilinas e DAD-Me-Imucilinas. 6

Por conseguinte, é um objectivo da presente invenção proporcionar novos inibidores de PNP, PPRT, MTAP, MTAN e/ou nucleósido-hidrolases ou, pelo menos, proporcionar uma escolha útil.

Kato et al. (Nucleosides and Nucleotides 18(4&5), 1999, 657-658) descrevem análogos de nucleósidos que incorporam adenina ou guanina ligada a uma unidade azetidina.

Nishiyama et al. (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 5(19), 1995, 2273-2276) também descrevem análogos de nucleósidos que incorporam adenina ou guanina ligada a uma unidade azetidina.

REVELAÇÕES DA INVENÇÃO

Num primeiro aspecto a invenção proporciona um composto de fórmula (I):

(D em que: W e X são, cada, independentemente seleccionados de hidrogénio, CH2OH, CH2OQ e CH2SQ; 7 independentemente seleccionados de Y e Z são, cada, hidrogénio, halogéneo, CH2OH, CH2OQ, CH2SQ, SQ, OQ e Q; Q é um grupo alquilo, aralquilo ou arilo cada um dos quais pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, halogéneo, metoxilo, amino ou carboxilo; R1 é um radical da fórmula (II)

(II) ou R1 é um radical da fórmula (III)

B

G (III) A é seleccionado de N, CH e CR2, em que R2 é seleccionado de halogéneo, alquilo, aralquilo, arilo, OH, NH2, NHR3, NR3R4 e SR5, em que R3, R4 e R5 são, cada, grupos alquilo, aralquilo ou arilo opcionalmente substituídos com hidroxilo ou halogéneo e em que R2 está opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo quando R2 é alquilo, aralquilo ou arilo; B é seleccionado de hidroxilo, NH2, NHR6, SH, hidrogénio e halogéneo, em que R6 é um grupo alquilo, aralquilo ou arilo opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo; D é seleccionado de hidroxilo, NH2, NHR7, hidrogénio, halogéneo e SCH3, em que R7 é um grupo alquilo, aralquilo ou arilo opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo; E é seleccionado de N e CH; G é um grupo alquilo C1-4 saturado ou insaturado opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo; ou um seu tautómero, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou um seu éster.

De um modo preferido, Z é seleccionado de hidrogénio, halogéneo, CH2OH, CH2OQ e CH2SQ. De um modo mais preferido, Z é CH2OH. Alternativamente é preferido que Z seja CH2SQ. Noutra forma de realização preferida, Z é Q. É preferido que G seja CH2. R1 pode ser um radical da fórmula (II) ou, alternativamente, pode ser um radical de fórmula (III). 9

Os compostos preferidos da invenção incluem aqueles em que um de Y e Z é CH2OQ e o outro é hidrogénio.

Outros compostos preferidos da invenção incluem aqueles em que um de Y e Z é CH2SQ e o outro é hidrogénio. B é, de um modo preferido, hidroxilo ou NH2. A é, de um modo preferido, CH ou N. D é, de um modo preferido, H ou NH2. Também é preferido que E seja N. É preferido que quando qualquer um de Y, Z, B e D é halogéneo, cada halogéneo seja independentemente cloro ou flúor.

Os compostos preferidos da invenção incluem: i. meso-Ί-((2,4-cis-2,4-bis(hidroximetil)azetidin-1-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; ii. (±) 7-( (2,4-tran,s-2, 4-bis (hidroximetil) azetidin-1- il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; iii. (+) 7-((2,4-trans-2,4-bis(hidroximetil)azetidin-1- il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; iv. (-) 7-((2,A-trans-2,4-bis(hidroximetil)azetidin-1-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; v. 7-((3,3-bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; vi. (±) 7-((2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; 10 vii . 7 - ( ( (2f?) -2- (hidroximetil) azetidin-l-il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; viii. 7-(((25)-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; ix· 7-((3-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2 d]pirimidin-4(5H)-ona; x. 7-((3-hidroxi-3-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xi. (±) 7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l- il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xii. (+) 7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l- il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xiii· (-) 7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l- il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xiv. (±) 7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-1 il) metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xv. (+) 7-((2,3-irans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-1- il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xvi. (-) 7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-1 il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; 11 xvii. meso-2-amino-7- ((2,4-cis-2, 4- bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xviii. (±) 2-amino-7-((2,A-trans-2, 4- bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xix. ( + ) 2-amino-7-((2,A-trans-2, 4- bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2— d]pirimidin-4(5H)-ona; xx. (-) 2-amino-7-((2,A-trans-2, 4-bis(hidroximetil)azetidin 1-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxi. 2-amino-7-((3,3-bis(hidroximetil)azetidin-1-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxii. (±) 2-amino-7-((2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxiii . 2-amino-7- ( ( (2J7) -2- (hidroximetil) azetidin-l-il) me til)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxiv. 2-amino-7-(((2S)-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil) 3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxv. 2-amino-7-((3-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxvi. 2-amino-7-((3-hidroxi-3-(hidroximetil)azetidin-l-il) metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; 12 xxvii. (±) 2-amino-7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-ii)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxviii. (-) 2-amino-7-((2,3-traas-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-ii)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxix. (+) 2-amino-7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxx. (±) 2-amino-7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxxi. (+) 2-amino-7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxxii. (-) 2-amino-7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxxiii. (1-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil) 3-(metiltiometil)azetidin-3-il)metanol ; xxxiv. 1-((4-amino-SH-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-3 (metiltiometil)azetidin-3-ol; xxxv. (±)-(2,4-trans-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2 —d]pirimidin 7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; 13 xxxvi. (+)-(2,A-trans-1-((4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; xxxvii . (-)-(2, 4-t.zrans-l- ( (4-amino-5H-pirrolo [3,2 — d]pydmidin-7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; xxxviii. meso-(2,4-cis-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2— d]pirimidin-7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; xxxix. 7-(((2RS)-2-(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; xl. 7-(((2R)—2—(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; xli. 7-(((2S)-2-(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; xlii. 7-((3-(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; e xliii. (±) 2,3-trans-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin 7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xliv. ( + ) 2,3-trans-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xlv. (-) 2,3-trans-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7 il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. 14 xlvi. (±) 2,3-cis-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xlvii. (+) 2,3-cis-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xlviii. (-) 2,3-cis-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol.

De acordo com outro aspecto da invenção é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da fórmula (I).

De um modo preferido, a composição farmacêutica compreende um dos compostos preferidos da invenção acima.

Noutro aspecto da invenção é proporcionado um composto de fórmula (I) para o tratamento ou prevenção de doenças ou estados nos quais é desejável inibir a PNP. As doenças ou condições incluem cancro, infecções bacterianas e parasitárias, e doenças mediadas por células T tais como psoriase, lúpus, artrite e outras doenças auto-imunes. Este aspecto da invenção também inclui a utilização dos compostos para imunossupressão no transplante de órqãos. De um modo preferido, o composto é um dos compostos preferidos da invenção acima.

As infecções parasitárias incluem aquelas provocadas por parasitas protozoários, tais como aqueles dos qéneros Giardia, Trichomonas, Leishmaniose, Trypanosoma, Crithidia, Herpetomonas, Leptomonas, Histomonas, Eimeria, Isopora e Plasmodium. 0 composto da invenção pode ser vantajosamente utilizado com qualquer parasita contendo uma ou mais nucleósido-hidrolases 15 inibidas por uma quantidade eficaz de um composto da invenção que proporciona uma concentração eficaz do composto na localização da enzima.

Noutro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) para o tratamento ou prevenção de doenças ou estados nos quais é desejável inibir a MTAP. As doenças incluem cancro, por exemplo tumores da próstata e da cabeça e pescoço.

Noutro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula (I) para o tratamento ou prevenção de doenças ou estados nos quais é desejável inibir a MTAN. As doenças incluem infecções bacterianas.

Noutro aspecto a invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) para o fabrico de um medicamento para o tratamento de uma ou mais destas doenças ou estados.

Num outro aspecto da invenção é proporcionado um método de preparação de um composto de fórmula (I).

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1 mostra os sítios catalíticos da PNP humana com Imucilina-H e DADMe-Imucilina-H.

Figura 2 mostra os sítios catalíticos da MTAN de S. pneumoniae e MTAN de E. coli com MT-imucilina-A. 16

DESCRIÇÃO DETALHADA

Definições 0 termo "alquilo" pretende incluir grupos alquilo de cadeia linear e ramificada. A mesma terminologia aplica-se à unidade não aromática de um radical aralquilo. Os exemplos de grupos alquilo incluem: grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo iso-propilo, grupo n-butilo, grupo iso-butilo, grupo sec-butilo, grupo t-butilo, grupo n-pentilo, grupo 1,1-dimetilpropilo, grupo 1,2-dimetilpropilo, grupo 2, 2-dimetilpropilo, grupo 1-etilpropilo, grupo 2-etilpropilo, grupo n-hexilo e grupo l-metil-2-etilpropilo. 0 termo pretende incluir grupos alquilo saturados e insaturados. 0 termo "arilo" significa um radical aromático possuindo 6 a 18 átomos de carbono e inclui radicais heteroaromáticos. Os exemplos incluem grupos monociclicos, bem como grupos fundidos, tais como grupos biciclicos e grupos triciclicos. Alguns exemplos incluem grupo fenilo, grupo indenilo, grupo 1-naftilo, grupo 2-naftilo, grupo azulenilo, grupo heptalenilo, grupo bifenilo, grupo indacenilo, grupo acenaftilo, grupo fluorenilo, grupo fenalenilo, grupo fenantrenilo, grupo antracenilo, grupo ciclopentaciclooctenilo e grupo benzociclooctenilo, grupo piridilo, grupo pirrolilo, grupo piridazinilo, grupo pirimidinilo, grupo pirazinilo, grupo triazolilo, grupo tetrazolilo, grupo benzotriazolilo, grupo pirazolilo, grupo imidazolilo, grupo benzimidazolilo, grupo indolilo, grupo isoindolilo, grupo indolizinilo, grupo purinilo, grupo indazolilo, grupo furilo, grupo piranilo, grupo benzofurilo, grupo isobenzofurilo, grupo tienilo, grupo tiazolilo, grupo 17 isotiazolilo, grupo benzotiazolilo, grupo oxazolilo e grupo isoxazolilo. 0 termo "halogéneo" inclui flúor, cloro, bromo e iodo.

Os compostos são úteis para o tratamento de certas doenças e distúrbios em humanos e outros animais. Assim, o termo "doente" como aqui utilizado inclui doentes humanos e outros animais. A expressão "sais farmaceuticamente aceitáveis" destina-se a aplicar-se a sais não tóxicos derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos, incluindo, por exemplo, os seguintes sais de ácido: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, canforsulfonato, dodecilsulfato, gluco-heptanoato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, ciclopentanopropionato, digluconato, etanossulfonato, formato, fumarato, glicerofosfato, glicolato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloridrato, bromidrato, iodidrato, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, p-toluenossulfonato, salicilato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato e undecanoato.

Como aqui utilizado, a expressão "grupo de saída sulfonato" significa um alquil- ou aril-sulfonato, tais como metanossulfonato ou benzenossulfonato, ou uma sua forma substituída tal como bromobenzenossulfonato, trifluorometanossulfonato ou p-toluenossulfonato. 18

Como aqui utilizado, a expressão "grupo de protecção" significa um grupo que protege selectivamente um grupo funcional orgânico, mascarando temporariamente a química desse grupo funcional e permitindo que outros sítios na molécula sejam manipulados sem afectar o grupo funcional. Os grupos de protecção adequados são conhecidos dos especialistas na técnica e são descritos, por exemplo, em Protective Groups in Organic Synthesis (3a Ed.), T. W. Greene e P. G. M. Wuts, John Wiley & Sons Inc (1999).

Descrição dos Compostos Inibidores É bem conhecido que os substratos para enzimas, tais como PNP, MT AP e MTA, são tipicamente compostos quirais e, além disso, que apenas uma das formas enantioméricas interage fortemente com a enzima. A Figura 1 mostra um mapa de contacto dos sítios catalíticos da PNP humana e das MTAN de S. pneumoniae e E. coli. Com base na estrutura cristalina de raios X da PNP humana, sabe-se que a ligação de Imucilinas nos sítios catalíticos envolve ligações de hidrogénio favoráveis com ambos os hidroxilos 2' e 3' do imino açúcar. No caso da MTAN de E. coli com MT-Imucilina A ligada no sítio catalítico, as Metl73 e

Glul74 formam ambas ligações extremamente favoráveis de 2,7 Angstrom como o grupo 2'-hidroxilo e a Glul74 forma uma ligação extremamente favorável de 2,7 Angstrom com o grupo 3'-hidroxilo. No sítio catalítico da MTAN de S. pneumonia formam-se ligações de hidrogénio semelhantes entre a Glul74 e os grupos 2'- e 3'-hidroxilo. Do mesmo modo para a PNP humana e complexos com DADMe-Imucilina-H, sabe-se que o contacto com o 19 3'-hidroxilo envolve uma ligação de 2,9 Angstrom com a Tyr88. Esperar-se-ia que a perda destas interacções nos compostos de azetidina de fórmula (I) originasse perda da ligação. No entanto, surpreendentemente, as requerentes determinaram que determinados destes compostos de azetidina, os quais não têm quaisquer grupos hidroxilo correspondentes aos grupos 2'- e 3'-hidroxilo importantes, continuam a ligar-se com afinidade nanomolar a picomolar.

Também foi anteriormente considerado que a estrutura tridimensional do anel de imino açúcar de 5 membros das Imucilinas era importante para localizar os grupos hidroxilo no sitio catalítico numa proximidade suficiente de outros grupos para permitir a ligação através de interacções por ligação de hidrogénio. Foi anteriormente considerado que os análogos de anel de azetidina de 4 membros não satisfariam estes requisitos estéricos necessários para actividade inibidora.

Por conseguinte, é surpreendente e inesperado que os compostos de azetidina da invenção sejam inibidores de PNP, MT AP, MT AN e/ou nucleósido-hidrolases. Os compostos da invenção representam, portanto, uma nova classe de inibidores de PNP, MTAP, MTAN e/ou nucleósido-hidrolases. Como tal, estes são úteis no tratamento de doenças e estados, tais como cancro, infecções bacterianas, infecções parasitárias, doenças mediadas por células T e outras doenças auto-imunes, e para imunossupressão no transplante de órgãos. Cancro significa qualquer tipo de cancro, incluindo, mas não estando limitado a cancros da cabeça, pescoço, bexiga, intestino, pele, cérebro, SNC, mama, cérvix, rim, laringe, fígado, esófago, ovários, pâncreas, próstata, pulmão, estômago, testículos, tiróide, útero, bem como melanoma, 20 leucemia, linfoma, osteossarcoma, doença de Hodgkin, glioma sarcoma e cancros colorrectal, endócrino, gastrointestinal.

Aspectos Gerais

Os compostos da invenção são úteis na forma de base livre e na forma de sais.

Entender-se-á gue a representação de um composto de fórmula (I), em que B e/ou D é um grupo hidroxilo, é da forma tautomérica tipo enol de uma amida correspondente, e este existirá largamente na forma de amida. A utilização da representação tautomérica de tipo enol é somente para permitir que menos fórmulas estruturais representem os compostos da invenção.

Analogamente, entender-se-á que a representação de um composto de fórmula (I), em que B é um grupo tiol, é da forma tautomérica tipo tioenol de uma tioamida correspondente, e este existirá largamente na forma de tioamida. A utilização da representação tautomérica de tipo tioenol é somente para permitir que menos fórmulas estruturais representem os compostos da invenção.

Os compostos activos podem ser administrados a um doente por uma variedade de vias, incluindo por via oral, parentérica, inalação por pulverização, tópica, rectal, nasal, bucal ou através de um reservatório implantado. A quantidade de composto a ser administrada variará muito de acordo com a natureza do doente e a natureza e extensão do distúrbio a ser tratado. Tipicamente, a dosagem para um adulto humano será na gama 21 inferior a 1 até 1000 miligrama, de um modo preferido, 0,1 a 100 miligrama. A dosagem especifica necessária para qualquer doente particular dependerá de uma variedade de factores, incluindo a idade, peso corporal, saúde geral, género, etc., do doente.

Para administração oral, os compostos podem ser formulados em preparações sólidas ou liquidas, por exemplo, comprimidos, cápsulas, pós, soluções, suspensões e dispersões. Tais preparações são bem conhecidas na técnica, assim como o são outros regimes de dosagem oral que não estão aqui listados. Na forma de comprimido, os compostos podem ser transformados em comprimidos com bases convencionais para comprimidos, tais como lactose, sacarose e amido de milho, em conjunto com um aglutinante, um desintegrante e um lubrificante. O aglutinante pode ser, por exemplo, amido de milho ou gelatina, o desintegrante pode ser amido de batata ou ácido alginico, e o lubrificante pode ser estearato de magnésio. Para administração oral na forma de cápsulas pode ser utilizados diluentes, tais como lactose e amido de milho seco. Podem ser adicionados outros componentes, tais como corantes, edulcorantes ou aromatizantes.

Quando são necessárias suspensões aquosas para utilização oral, o ingrediente activo pode ser combinado com veículos, tais como água e etanol, e podem ser utilizados emulsionantes, agentes de suspensão e/ou tensioactivos. Também podem ser adicionados corantes, edulcorantes ou aromatizantes.

Os compostos também podem ser administrados por injecção num diluente fisiologicamente aceitável, tais como água ou soro fisiológico. O diluente pode compreender um ou mais ingredientes 22 adicionais, tais como etanol, propilenoglicol, um óleo ou um tensioactivo farmaceuticamente aceitável.

Os compostos também pode ser administrados por via tópica. Os veículos para administração tópica dos compostos incluem óleo mineral, vaselina líquida, vaselina branca, propilenoglicol, polioxietileno, composto de polioxipropileno, cera emulsionante e água. Os compostos podem estar presentes como ingredientes em loções ou cremes, para administração tópica na pele ou membranas da mucosa. Tais cremes podem conter os compostos activos suspensos ou dissolvidos em um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. Os veículos adequados incluem óleo mineral, monoestearato de sorbitano, polissorbato 60, cera de éster cetílico, álcool cetearílico, 2-octildodecanol, álcool benzílico e água.

Os compostos podem ser ainda administrados por meio de sistemas de libertação prolongada. Por exemplo, estes podem ser incorporados num comprimido ou cápsula de dissolução lenta. Síntese dos Compostos Inibidores

Estes compostos podem ser preparados utilizando métodos correntes para sintetizar azetidinas apropriadas, seguida de acoplamento à purina ou 9-desazapurina desejada através de unidades de ligação. Os esquemas 1-5 nos Exemplos mostram métodos de preparação indicativos. 23

EXEMPLOS

Os exemplos seguintes ilustram adicionalmente a invenção.

Geral

Todos os reagentes foram utilizados como fornecidos; os solventes anidros foram obtidos comercialmente. As reacções sensíveis ao ar foram realizadas sob árgon, salvo indicação em contrário. As soluções orgânicas foram secas sobre MgSCd e os solventes foram evaporados sob pressão reduzida. Os solventes de cromatografia foram destilados antes da utilização. A cromatografia em camada fina (TLC) foi realizada sobre folhas de vidro ou alumínio revestidas com sílica 60 F254. Os compostos orgânicos foram visualizados sob luz uv ou utilizando uma formulação para pulverização ou imersão de sulfato de cério(IV) (0,2%, p/v) e molibdato de amónio (5%) em ácido sulfúrico (2M), uma de I2 (0,2%) e Kl (7%) em H2SO4 (M) ou, para compostos contendo azoto, p-(N,N- dimetilamino)benzaldeído (1%) em HC1 (37%)-MeOH, 1:3 (100 mL) (reagente de Erlich). A cromatografia em coluna flash foi realizada sobre sílica C60 40/60 Sorbsil, sílica gel 60 (40-60 pm) Scharlau ou Merck. Os pontos de fusão foram registados num microscópio de placa quente Reichert e não estão corrigidos. As rotações ópticas foram registadas num polarímetro Perkin-Elmer 241 com um comprimento de percurso de 1 dm e estão em unidades de 10-1 deg cm2 g_1; as concentrações são em g/100 mL.

Os espectros de RMN foram registados num espectrómetro Bruker AC300E. Os espectros de 2H a 300 MHz foram medidos em CDCI3, CD3OD ou CD3CN (referência interna Me4Si, δ 0) e os

espectros de 13C a 75,5 ou 100,6 MHz em CDCI3 (referência, linha central do solvente, δ 77,0), CD3OD (referência, linha central do solvente δ 49,0) ou CD3CN (referência, linha central do solvente δ 118, 7, CN) . As atribuições das ressonâncias de 3Η e 13C basearam-se em espectros 2D (3Η—3H DQF-COSY, 1H-13C HSQC) , e as experiências de DEPT deram dados inequívocos sobre o número de protões ligados a cada átomo de carbono. As atribuições das ressonâncias de 13C foram coerentes com as multiplicidades observadas. As constantes de acoplamento (J) são indicadas em Hz. Os espectros de infravermelho foram registados num IV com Transformadas de Fourier Perkin-Elmer 1750 utilizando películas finas em pastilhas de NaCl (película fina). Apenas são indicadas as absorções características. os dados de ES dos espectros de massa de alta resolução (HRMS) foram recolhidos num espectrómetro de massa Waters 2790-Micromass LCT a trabalhar a uma resolução de 5000 de largura total a meia altura. Os espectros de ionização por electropulverização (ES+) de iões positivos foram calibrados em relação ao PEG com brometo de tetraoctilamónio como a massa de referência interna. Os espectros de ES de iões negativos foram calibrados em relação a poli-DL-alanina com Leu-encefalina como a massa de referência interna. Os HRMS de bombardeamento com átomos rápidos (FAB+) de iões positivos foram medidos num instrumento VG 7070 numa matriz de glicerol e os HRMS de impacto electrónico (EI + ) de iões positivos foram medidos num instrumento VG 70SE. As microanálises foram realizadas pelo Campbell Microanalytical Laboratory, University of Otago. 25

Esquema 1 HO—| EtOzC—I—C02Et a, b

EtOzC

HO

Et02C K^NBn c, d

HOzC 2 63% ^NBn 3 75% pdNR H0_uHK ">" MeS—| w. s^pNR ^ %^,NR A" 4 R =Bn 63% . / S 5R =H.HCI68% . 7 R = Bn 78% ^ 13 Rb Boc 15% - 8 R = H.HCI 84% ^ 14 R = H.HCI 90% ^-6R=Boc 51% ' v 9 R = Boc 74% f.g NR2 HO- S~10 R1 =OMsR =Boc 65% ^>11 R1 =SMe R =Boc 44% ' V12 R1 =SMe R =H.HCI 94%

Reagentes: (a) Tf20, base de Hunigs, acetonitrilo -10°C^20°C. (b) Benzilamina, base de Hunigs, acetonitrilo, -10°C^70°C. (c) NaOH, MeOH, 50°C. (d) Água, refluxo, (e) LAH, THF, temp. ambiente (f) óxido de dibutil-estanho, tolueno, refluxo, (g) MsCl, tolueno, temp. ambiente (h) NaSMe, DMF, temp. ambiente (i) HC1, MeOH, temp. ambiente (j) Pd/C, H2(g), MeOH, temp. ambiente (k) Boc20, Et3N, MeOH, temp. ambiente (I) BoC2, Et3N, MeOH, temp. ambiente (m) MsCl, base de Hunigs, CH2C12. 1—Benzilazetidina-3,3—dimetanol (4). Foi adicionado L1AIH4 (1,0 M em THF, 65 mL, 65 mmol), gota a gota, a uma solução de l-benzilazetidina-3,3-dicarboxilato de dietilo (1,0 g, 3,43 mmol) em THF (20 mL) . A suspensão resultante foi agitada de um dia para o outro, à temperatura ambiente, desactivada com água (0,25 mL) , NaOH aq. a 15% (0,25 mL) e água (0,75 mL) , filtrada através de celite e concentrada in vacuo. A cromatografia (NH3 7 N em MeOH/CH2Cl2 =5:95 10:90) do resíduo resultante proporcionou 4 (450 mg, 63%) como um óleo. RMN de ΤΗ (CDC13) : δ 7,33 - 7,20 (m, 5H) , 3,74 (s, 4H) , 3,65 (s, 2H) , 3,12 (s, 4H) . 26 RMN de 13C (CDC13) : δ 137, 4, 129, 02, 128,8, 127, 7, 66, 8, 63,3, 58.7, 41,0. HRMS para Ci2H17N02 [M+] calculada, 207, 1259; encontrada, 207,1259.

Cloridrato de azetidina-3,3-dimetanol (5). Foi adicionado Pd(OH)2 (20% sobre C, 150 mg, 1,9 mmol) a uma solução de 4 (400 mg, 1,9 mmol) em MeOH (4 mL) e deixado agitar sob uma atmosfera de hidrogénio de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A reacção foi filtrada através de Celite® e concentrada in vacuo. A cromatografia (1,4-dioxano/NH4OH = 50:50) do residuo resultante proporcionou 5 como um óleo incolor, o qual foi convertido no seu sal de HC1 (200 mg, 68%) para caracterização. RMN de 3H (D20) : δ 3,97 (s, 4H) , 3,69 (s, 4H) . RMN de 13C (D20) : δ 62, 4, 49, 8. 3,3-Bis(hidroximetil)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (6) . Foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (2,9 g, 16,40 mmol) em porções a uma solução de 5 (961 mg, 8,2 mmol) em MeOH (20 mL) à temperatura ambiente. Após 1 h, a reacção foi concentrada in vacuo. A cromatograf ia (MeOH/CH2Cl2 = 5:95 -► 10:90) do resíduo resultante proporcionou 6 (900 mg, 51%) como um xarope. RMN de 3H (CDC13) : δ 3,81 (s, 4H) , 3,67 (s, 4H), 1,43 (s, 9H) . RMN de 13C (CDCI3) : δ 157, 2, 80,3, 66,2, 54, 1, 39, 8, 28.8. HRMS para C10H19NO4 [MH+] calculada, 218, 1392; encontrada, 218,1391. l-Benzilazetidina-3-metanol (7) . Foi adicionado L1AIH4 (2,3 M em THF, 10 mL, 23 mmol), gota a gota, a uma suspensão de 3 (obtido por saponificação e descarboxilação de 2) (2,2 g, 11,50 mmol) em THF (30 mL) à temperatura ambiente e a reacção resultante foi deixada agitar durante 16 h. A reacção foi desactivada com água (0,7 mL) , NaOH aq. a 15% (0,7 mL) e água 27 (2,1 mL), agitada durante 30 min., filtrada através de Celite® e concentrada in vacuo. A cromatografia (NH3 7 N em

MeOH/CH2Cl2 = 5:95 -► 10:90) do residuo resultante proporcionou 7 (1,6 g, 78%). RMN de 3H (CDC13) : δ 7,30-7,17 (m, 5H) , 3,63 (d, 6,2 Hz, 2H), 3,55 (s, 2H) , 3,31 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 3,00 J = 6, 1 Hz, 2H), 2,56 (m, 1H) . RMN de 13C (CDC13) : δ 138,2,

128,9, 128, 7, 127,5, 64, 6, 63, 9, 57, 3, 33,1. HRMS para CnH15NO

[M+] calculada, 177,1154; encontrada, 177,1150.

Cloridrato de azetidina-3-metanol (8) . Foi adicionado Pd(0H)2 (20% sobre C, 600 mg, 7,90 mmol) em porções a uma

suspensão, mantida sob agitação, de 7 (1,4 g, 7,90 mmol) em MeOH (20 mL, 494 mmol) sob uma atmosfera de hidrogénio. Após 24 h, a reacção foi filtrada através de Celite® e concentrada in vacuo. O residuo resultante foi convertido no sal de HC1 para proporcionar 8 (820 mg, 84%) como um xarope, 0 qual foi caracterizado sem mais purificação. RMN de 3H (D20): δ 4,20 (t, J= 9,8 Hz, 2H), 3,98 (m, 2H) , 3,75 (d, J= 5,4, 2H) , 3,11 (m, 1H) . RMN de 13C (D20) : δ 61, 7, 48,8, 48, 8, 33,6. HRMS para C4H9NO [M+ ] calculada, 87, 0684; encontrada, 87, 0683. 3-(Hidroximetil)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (9).

Foi adicionada Et3N (1 mL, 7,1 mmol), gota a gota, a uma solução, mantida sob agitação, de 8 (500 mg, 4,0 mmol) em MeOH (5 mL) .

Após 5 min, foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (846 mg, 5,0 mmol) e a reacção agitada durante 16 h e, em seguida, concentrada in vacuo. A cromatografia

(MeOH/CH2C12 = 5:95 - 10:80) do residuo resultante proporcionou 9 como um óleo incolor (560 mg, 74%). RMN de 1H (CDC13) : δ 3,97 (t, J = 8,5 Hz, 2H) , 3,71 (m, 4H) , 2,69 (m, 1H) , 1,43 (s, 9H) . RMN de 13C (CDC13) : δ 156,9, 79, 8, 64, 5, 51, 7, 30,9, 28, 7. HRMS para C19H17NO3 [M+ ] calculada, 187,1208; encontrada, 187, 1207. 28 3-(Hidroximetil)-3-[(metanossulfoniloxi)metil]azetidina-1-carboxilato de terc-butilo (10). Foi adicionado óxido de dibutil-estanho (1,24 g, 5,0 mmol) a uma suspensão, mantida sob agitação, de 6 (900 mg, 4,1 mmol) em tolueno (10 mL) e aquecida a refluxo durante 1 h. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e, em seguida, foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (0,39 mL, 5,0 mmol), gota a gota, à solução transparente e a reacção resultante deixada em repouso durante 16 h. A cromatograf ia (MeOH/CH2Cl2 = 5:95) da solução em bruto proporcionou 10 como um óleo (800 mg, 2709 pmol, 65%) . RMN de 3Η (CDCls) : δ 4, 40 (s, 2H), 3, 78 (s, 2H ), 3,73 (s, 4H: ) , 3,07 (s, 3H), 1,44 (s, 9 H) . RMN de 13C (CDC13) : δ 156,8, 80,4, 70,5, 63,6, 53,6, 38,9, 37,6, 28, 7. HRMS para CiiH2iN06S [MH+ ] calculada, 207,1259; encontrada, 207,1259. 3-(Hidroximetil)-3-[(metanossulfoniloxi)metil]azetidina-1-carboxilato de terc-butilo (11) . Foi adicionado tiometóxido de sódio (285 mg, 4,1 mmol) em porções a uma solução, mantida sob agitação, de 10 (800 mg, 2,7 mmol) em DMF (5 mL) à temperatura ambiente. Após 3 h, a reacção foi diluída com tolueno (100 mL) , lavada com água (25 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) , seca (MgS04) e concentrada in vacuo. A cromatograf ia (MeOH/CH2Cl2 = 5:95) do resíduo em bruto proporcionou 11 como um óleo (450 mg, 67%) . RMN de 3H (CDC13) : δ

3,75 (s, 2H), 3,74 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 3,66 (d, J = 8,8 Hz, 2 H) , 2,87 (s, 2H), 2, 16 (s, 3H), 1,44 (s, 9H) . RMN de 13 C (CDC1 3) : δ 156,9, 80, 0, 65, 8, 56,1, 40,1, 39,9, 28, 7, 17,5. HRMS para CuH2iN03S [MH+] calculada, 247, 1242; encontrada, 247, 1246.

Cloridrato de 3-(metiltiometil)azetidin-3-metanol (12). Foi adicionado HC1 (aq. a 30%, 1,5 mL, 49 mmol), gota a gota, a uma solução de 11 (430 mg, 17 mmol) em MeOH (4,5 mL) . A solução 29 resultante foi deixada à temperatura ambiente durante lhe concentrada in vacuo para proporcionar 12 como um xarope (300 mg, 94%) o qual foi utilizado no passo seguinte sem purificação ou caracterização. 3-(Metiltiometil)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (13). Foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (0,53 mL, 6,8 mmol), gota a gota, a uma solução, mantida sob agitação, de 9 (530 mg, 2,8 mmol) e base de Hunig (0, 986 mL, 5,6 mmol) em CH2CI2 (10 mL) e deixada de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A reacção foi então diluída com CH2CI2 (100 mL) e lavada com água (25 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) , seca (MgS04) e concentrada in vacuo. Foi adicionado tiometóxido de sódio (218 mg, 3109 pmol) em porções a uma solução do resíduo, presumivelmente 3-(metanossulfoniloximetil)azetidina-l-carboxilato de terc- butilo (550 mg, 73%), em DMF (5 mL) e agitado à temperatura ambiente de um dia para o outro. A reacção foi diluída com tolueno (100 mL) e lavada com água (25 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) , seca (MgS04) e concentrada in vacuo. A cromatograf ia (MeOH/CH2Cl2 = 5:95) do resíduo resultante proporcionou 13 como um óleo (120 mg, 27%). RMN de ΤΗ (CDC13) : δ 3,98 (m, 2H) , 3,54 (m, 2H) , 2,65 (s 1, 3H) , 2,03 (s, 3H), 1,37 (s, 9H) . RMN de 13C (CDC13) : δ 155,3, 78,3, 53, 1, 37, 4, 27,4, 14,5.

Cloridrato de 3-(metiltiometil)azetidina (14). Foi adicionado HC1 (30% aq., 1,5 mL, 49 mmol), gota a gota, a uma solução de 13 (120 mg, 0,55 mmol) em MeOH (4,5 mL) . A solução resultante foi deixada à temperatura ambiente durante lhe concentrada in vacuo para proporcionar 14 (76 mg, 90%) como um 30 xarope, o qual foi utilizado no passo seguinte sem purificação ou caracterização.

Esquema 2

Reagentes: (a) NaCNBH3, MeOH, temp. ambiente, (b) HC1, MeOH, refluxo. 1-[(7-Benziloximetil-4-terc-butoxi-9-desazapurin-9-il)metil]azetidina-3,3-dimetanol (16). Foi adicionado 7-benziloximeti1-6-terc-butoxi-9-desazapurina-9-carbaldeido (15) (219 mg, 645 ymol) a uma suspensão de 5.HC1 (90 mg, 586 ymol) em metanol (5 mL) e a suspensão resultante agitada durante 5 min. Foi então adicionado NaBH3CN (55,2 mg, 879 pmol) e a reacção resultante agitada de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A reacção em bruto foi absorvida sobre sílica e concentrada in vacuo. A cromatograf ia (MeOH/CH2Cl2 =10:90 -> 20:80) do resíduo resultante proporcionou 16 como um xarope (180 mg, 70%). RMN de XH (CDC13) 8,42 (s, 1H) , 7,81 (s, 1H) , 7,23-7,14 (m, 5H) , 5,74 (s, 2H) , 4,54 (s 1, 2H) , 4,51 (s, 2H) , 4,16 (s 1, 4H) , 3,67 (s 1, 4H) , 1,66 (s, 9H) . RMN de 13C (CDC13) 156,8, 150, 8, 149,4, 137, 5, 135, 8, 128, 7, 128,1, 127, 8, 117, 2, 31 104,6, 84,3, 78,1, 70,0, 62,4, 57,2, 48,5, 42,5, 28,9. HRMS para C24H32N4O4 [MH+] calculada, 441,2502; encontrada, 441,2509. 1-[(9-Desaza-hipoxantin-9-il)metil]azetidina-3,3-dimetanol (18) . Foi adicionado HC1 conc. (1,5 mL, 49 inmol) a uma solução de 16 (98 mg, 222 pmol) em MeOH (1,5 mL) e a solução resultante aquecida a refluxo durante 2,5 h. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada in vacuo. A cromatografia (CH2Cl2/MeOH/NH4OH = 50:40:10) proporcionou 18 como um xarope (52 mg, 88% de rendimento) , o qual foi convertido no sal de HC1 para caracterização. RMN de 1H (D20) : δ 8,00 (s, 1H) , 7,70 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 4,04 (q, J= 10,9 Hz, 4H) , 3,68 (s, 2H) , 3,50 (s, 2H) . RMN de 13C (D20) : δ 155, 3, 114,3, 143, 4, 131, 7, 118,1, 105, 02, 62,3, 61, 6, 55, 8, 47, 4, 41,3. HRMS para Ci2H16N403 [MH+ ] calculada, 265, 1301; encontrada, 265, 1308. Anal. (Ci2Hi6N403.3HCl) C, Η, N. 1-[(7-Benziloximetil-6-terc-butoxi-9-desazapurin-9-il)metil]azetidina-3-metanol (17). Foi adicionado 7-benziloximeti1-6-terc-butoxi-9-desazapurina-9-carbaldeido (15) (272 mg, 0,80 mmol) a uma suspensão, mantida sob agitação, de 8 (90 mg, 0,73 mmol) em MeOH (5 mL) e agitado durante 5 min. Foi então adicionado NaBH3CN (68,6 mg, 1,1 mmol) e a reacção resultante agitada de um dia para o outro, à temperatura ambiente. A reacção em bruto foi absorvida sobre sílica e concentrada in vacuo. A cromatograf ia (MeOH/CH2Cl2 = 5:95 -*· 20:80) do resíduo resultante proporcionou 17 como um xarope (135 mg, 45%). RMN de ΧΗ (CDCI3) : δ 8,35 (s, 1H) , 7, 72 (s, 1H) 7,20-7, 08 (m, 5H) , 5, 68 (s, 2H), 4,44 (s, 2H) , 4, 43 (S, 2 H) 4, 17 (t, J = 10,0 Hz, 2h; ) , 4,06 (t, J = 6,3 Hz, 2H) , 3,64 (d J = 2, 9 Hz, 2H) , 2, , 90 (m, 1H) , 1,60 (s, 9H) . RMN de 13C (CDCI3) δ 156, 7, 150,9, 149, 7, 137, 4, 135,5, 128, 8, 128, 1, 127, 8, 117,2, 32 104,8, 84,2, 78,1, 70,8, 60,4, 55,4, 48,2, 31,4, 28,9. HRMS para C23H30N4O3 [MH+ ] calculada, 411,2396; encontrada, 411,2409. l-[(9-Desaza-hipoxantin-9-il)metil]azetidina-3-metanol (19).

Composto 17 (95 mg, 231 pmol) foi dissolvido em HC1 conc. (5 mL, 1,63 mmol) e aquecido a refluxo durante 2 h e a reacção foi então concentrada in vacuo. A cromatografia (CH2Cl2/MeOH/NH4OH = 5:4:1) do resíduo resultante proporcionou 19 como um sólido branco (28 mg, 48%). RMN de XH (D20) δ 7,82 (1H, S) , 7, 28 (2H, s), 4,70 (1H, s), 3, 71 (2H, s) , 3,54 (d, J = 6,3Hz, 2H) , 3,48 (t, J = 8,5 Hz, 2H) , 3,17 (t, J = 7,8 Hz, 2H) , 2,61 (septeto, J = 7,1 Hz, 1H). RMN de 13C (D20) δ 157,4, 144, 7, 144 ,06, 129,1, 117,8, 109,52, 63, 2, 55,3, 55, 3, 49,6, 31,3 . HRMS para C11H16N4O3 [MH+ ] calculada, 235,1196; encontrada, 235, 1194. Anal. (CiiH16N403) C, Η, N.

Esquema 3

a

R 21 R= CH2OH 33% 22 R= H 52% 4-Dioxano, H20, 95 °C. 1,

12 R= CH2OH 20 14 R = H

Reagentes: (a) HCHO, NaOAc, 33

Cloridrato de 1-[(9-desazaadenin-9-il)metil]-3- metiltiometilazetidina-3-metanol (21). Foi adicionado NaOAc (134 mg, 1633 pmol) a uma solução de 12.HC1 (300 mg, 1,6 mmol) em água (4 mL) e 1,4-dioxano (2 mL) e a suspensão resultante agitada à temperatura ambiente durante 5 min. Foi então adicionada solução de formaldeido (0,131 mL, 1,6 mmol), gota a gota, seguida de 9-desazaadenina (20) (241 mg, 1,8 mmol) e a suspensão resultante aquecida até 95 °C (temp. do banho) . Após 2 h, a reacção em bruto foi absorvida sobre silica e concentrada in vacuo. A cromatograf ia (NH40H/Me0H/CH2Cl2 = 2:48:50) do resíduo resultante proporcionou 21 como um xarope (180 mg, 33,4%). RMN de 3Η (D20) δ 7,8 8 (s 1, 1H) , 7,29 (s 1, 1H) , 3 ,81 (s, 2H) , 3,46 (s, 2H), 3,37 (dd, J = 17,5, 9,8 Hz, 4H) , 2, 46 (s, 2H) , 2, 55 (m, 2H), 1,83 (s, 3H). RMN de 13C (D20) δ 150, 5, 150 ,2, 145,2, 130,5, 113,8, 106,2, 64,2, 57,8, 48,3, 39,8, 38,6, 16,5. HRMS para C13H19N5OS [MH+] calculada, 294, 1388; encontrada, 294, 1388. Anal. (Ci3H19N5OS) C, Η, N. 1-[(9-Desazaadenin-9-il)metil]-3-metiltiometilazetidina (22) . Foi adicionado NaOAc (0,048 g, 0,586 mmol) a uma solução de 14.HC1 (0,09g, 0,586 mmol) em água (2 mL) e agitado durante 15 min. Foram consecutivamente adicionados solução de formaldeido (0,047 mL, 0,586 mmol), 9-desazaadenina (20) (86 mg, 0,644 mmol) e 1,4-dioxano (1 mL) e a suspensão resultante agitada a 95 °C durante 3 h. A reacção em bruto foi absorvida sobre silica e concentrada in vacuo. A cromatografia (NH4OH/MeOH/CH2Cl2 = 2:48:50) do resíduo resultante proporcionou produto contaminado com acetato de amónio. Outra cromatografia utilizando Amberlyst 15 (H20 -* NH40H aq. a 2%) proporcionou 22 como um xarope (80 mg, 52%). RMN de 3Η (D20) : δ 8,06 (s, 1H) , 7,34 (s, 1H), 3,71 (s, 2H), 3,40 (m, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,55 (m, 3H) , 1,93 (s, 3H) . RMN de 13C (D20) : δ 152,5, 151,4, 147,2, 34

129,8, 115,6, 112,4, 60,2, 60,2, 52,4, 39,1, 31,7, 15,7. HRMS para Ci2H17N5S [MH+] calculada, 264, 1283; encontrada, 264, 1288. Anal. (C12H17N5S, 2/3H20) C, Η, N.

Esquema 4

Cl

Br Br EtO^ „OEt

O

o O 24

Bn N R1- a°í-<vXR2 23

25 R1 = H, R2 = COzEt 26 R1 = C02Et, R2 = H H H ( BnO~-^ N- OMe + V 4 jj N

HO

Bn N R1

Boc N ,R1

Hd ~ R2 27 R1 = H, R2 = CH2OH 28 R1 = CH2OH, R2 = H

34 R1 = H, R2 = CH2OH 35 R1 = CH2OH, R2 = H R2 29 R1 = H, R2 = CH2OH 31 R1 = H, R2 = CH2OH0'

30 R1 = CH2OH, R2 = H 32 R1 = CH2OH, R2 = H

OH

36 R1 = H, R2 = CH2OH 37 R1 = CH2OH, Rz = H

Reagentes: a) i) Br2, hV; ii) EtOH, H2S04; b) BnNH2, CeHg; c) LIA1H4, Et20; d) H2, Pd (OH) 2/C, Boc2C; e) i) HC1 Me0H/H20; f) NaBH2CN, EtOH; g) HC1 conc., refluxo. meso-2,4-cis-2,4-Bis(hidroximetil)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (29). 2,4-cis-l-Benzil-2,4- bis(hidroximetil)azetidina (27) (Guanti, G.; Riva, R. Tetrahedron-Asymmetry 2001, 12(4), 605-618) (1,16 g, 5,60 mmol) 35 foi dissolvida em EtOH (10 mL) e foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (2,44 g, 11,2 mmol) seguido de Pd(OH)2 a 20%/C (200 mg). A atmosfera foi substituída por hidrogénio pela aplicação sucessiva de vácuo e, em seguida, foi adaptado um balão de hidrogénio ao recipiente reaccional. A mistura reaccional foi deixada agitar de um dia para o outro, em seguida a suspensão foi filtrada através de Celite®, os voláteis removidos sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash sobre sílica (60:40 a 100:0 AcOEt/hexano) para dar 29 como um óleo incolor (915 mg, 75%); RMN de 1H (300 MHz, CDCls) δ 4,27-4,16 (m, 2H) , 4, 20-3, 05 (s 1, 2H) , 3,77 (d 1, J = 11,4 Hz, 2H), 3,61 (dd 1, J = 11,4, 5,4 Hz, 2H) , 2,18 (ddd, J = 11,4, 8,7, 8,7 Hz, 1H) , 1,98 (ddd, J= 11,4 6,7, 6,7 Hz, 1H), 1,43 (s, 9H); RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ 157, 4, 80, 8, 64, 5, 60,3, 28,2, 19, 7; ESI-HRMS para Ci0Hi9NiO4Nai [M+Na+] calculada, 240,1212; encontrada, 240,1218; Anal. C10H19N1O4 .(0,2 H20) C, Η, N.

Cloridrato de meso-2,4-cis-2,4-bis(hidroximetil)azetidina (31). Uma solução de 29 (480 mg, 2,20 mmol) em MeOH/HCl conc. 2:1 (10 mL) foi agitada durante 20 min e, em seguida, concentrada sob pressão reduzida. O produto foi seco azeotropicamente pela adição e evaporação de acetonitrilo várias vezes dando 31 como um sólido incolor higroscópico após secagem sob alto vácuo (344 mg, 100%); RMN de 3H (300 MHz, D20) δ 4,62-4,50 (m, 2H), 3,83 (d, J= 4,8 Hz, 4H) , 2,50 (dt, J= 12,0, 9,0 Hz, 1H) , 2,37 (dt, J= 12,0, 9,0 Hz, 1H) ; RMN de 13C (75 MHz, D20) δ 60, 9, 58,2, 22,5. (±)2,4-trans-2,4-Bis(hidroximetil)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (30) . A uma solução, mantida sob agitação, de (±) IV-benzil-2, A-trans-2, 4-bis (hidroximetil) azetidina (28) 36 (Guanti, G.; Riva, R. Tetrahedron-Asymmetry 2001, 12(4), 605-618) (570 mg, 2,75 mmol) em EtOH (10 mL) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (1,2 g, 5,5 mmol) e, em seguida, Pd(0H)2 a 20%/C (400 mg). A atmosfera foi substituída por hidrogénio por aplicações sucessivas de vácuo e foi adaptado um balão de hidrogénio ao recipiente reaccional. A mistura reaccional foi agitada de um dia para o outro e, em seguida, filtrada através de Celite®. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografia flash sobre sílica (AcOEt) para dar 30 como um óleo incolor (490 mg, 82%); RMN de 3Η (300 MHz, CDC13) δ 4,58-4,23 (m, 3H), 3,93-3,62

(m, 4H) , 2,32 (s 1, 1H), 2,15-1,85 (m 1, 2H), 1,47 (s, 9H) ; RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ 156,5, 81, 4, 67, 0, 64, 8, 61, 7, 61,5, 28,3, 20, 8; ESI-HRMS para Ci0H19N1O4Nai [M+Na] calculada, 240,1212; encontrada, 240,1213.

Cloridrato de (±) 2,4-trans-2,4-bis(hidroximetil)azetidina (32). Uma solução de 30 (480 mg, 2,20 mmol) em MeOH/HCl conc. 2:1 (10 mL) foi agitada durante 20 min e, em seguida, concentrada sob pressão reduzida. O produto foi seco azeotropicamente pela adição e evaporação de acetonitrilo várias vezes dando 32 como um sólido incolor higroscópico (339 mg, 99%); RMN de 1H, (300 MHz, D20) δ 4, 50-4, 39 (m, 2H) , 3,91-3,87 (m, 4H) , 2,44 (t, J= 8,1 Hz, 2H) ; RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ 61, 0, 59, 0, 22,3.

Cloridrato de meso-2,4-cis-l-[(7-benziloximetil-9-desaza-6-metoxi-purin-9-il)metil]azetidina-2,4-dimetanol (34). A uma solução, mantida sob agitação, de aldeído 33 (277 mg, 0,93 mmol) em EtOH (3 mL) à temperatura ambiente foi adicionado 31.HC1 (143 mg, 0,93 mmol) seguido, após 5 min, de NaBH3CN (88 mg, 0,48 mmol). A reacção foi deixada agitar de um dia para o outro, 37 após o que todo o aldeído de partida tinha dissolvido. A mistura reaccional foi absorvida sobre sílica gel, os voláteis removidos sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografia flash (CHCl3/MeOH = 95:5 a 80:20) para dar cristais incolores, os quais foram retomados em água, adicionado HC1 conc., em seguida, concentrados sob pressão reduzida até à secura para proporcionar 34 (70 mg, 54%); RMN de 3H (300 MHz, D20) δ 8,61 (s, 1H) , 8,02 (s, 1H), 7,25-7, 07 (m, 5H), 5,90 (s, 2H) , 4,68 (s, 2H) , 4,58 (s, 2H), 4,54-4,43 (m, 2H), 4,24 (s, 3H), 3,72 (dd, J= 13,2, 5,7 Hz, 2H), 3,61 (dd, J= 13,2, 3,2 Hz, 2H) , 2,47 (dt, J= 12,1, 9,0 Hz, 1H), 2,28 (dt, J= 9,6, 9,0 Hz, 1H) ; RMN de 13C (75 MHz, D20) δ 159,4, 148,4, 142,5, 139,9, 137,0, 128,8, 128,6, 128,2, 116,7, 102,6, 78,7, 72,0, 66,6, 60,2, 56,5, 47,3, 20,4; ESI-HRMS para C2iH27N404 [M+H+] calculada, 399,2032; encontrada, 399,2046.

Cloridrato de meso-[(9-desaza-hipoxantin-9- il)metil]azetidina-2,4-dimetanol (36). Uma solução de 34 (114 mg, 0,26 mmol) em HC1 conc. (3 mL) foi aquecida sob refluxo durante 3 h e, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o HC1 residual removido pela adição e evaporação de acetonitrilo várias vezes. O resíduo foi absorvido sobre sílica e purificado por cromatografia flash (2-propanol/H20/NH40H = 9:1:1) para dar uma goma incolor. Esta foi convertida no seu sal de cloridrato para caracterização pela adição e evaporação de HC1 conc. produzindo 36 como um sólido incolor (53 mg, 67%) após trituração com 2-propanol; pureza por HPLC 99,5% (220 nm) ; RMN de (300 MHz, D20) δ 8,21-8,15 (m, 1H), 7, 75-7, 72 (m, 1H) , 4,57 (s, 2H) , 4,50 (dddd, J= 9,0, 9,0, 5,5, 3,6 Hz, 2H), 3,69 (13,3, 5,5 Hz, 2H) , 3,58 (dd, J= 13,3, 3,6 Hz, 2H), 2, 48-2,36 (m,1H) , 2,28 (dt, J= 12,1, 9,0, Hz, 1H); 38 RMN de 13C (75 MHz, D20, base livre) δ 155, 9, 144, 2, 142,9, 130,2, 117,5, 111,5, 64, 5, 62, 7, 49,1, 24, 0; ESI-HRMS para C12H17N4O3 [M+H+ ] calculada, 265,1301; encontrada, 265,1316; Anal. c12h16n4o3 . (2,6 H20) c, h, n.

Cloridrato de (±) 2,4-trans-1-[(7-benziloximetil-9-desaza- 6-metoxi-purin-9-il)metil]azetidina-2,4-dimetanol (35). A uma solução, mantida sob agitação, de aldeído 33 (210 mg, 0,70 mmol) em EtOH (7 mL) à temperatura ambiente foi adicionado 32.HC1 (100 mg, 0,65 mmol) seguido, após 5 min, de NaBHsCN (67 mg, 1,0 mmol) . A reacção foi deixada agitar de um dia para o outro, após o que a maioria do aldeído de partida tinha-se dissolvido. A mistura reaccional foi absorvida sobre sílica gel sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografia flash (CHCls/MeOH = 95:5 a 80:20) para dar cristais incolores, os quais foram retomados em água, adicionado HC1 conc., em seguida a mistura concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 35

como um sólido incolor higroscópico (235 mg, 83%); RMN de 3H (300 MH z, D20) 5 8,7 8 (s, 1H) , 8 ,13 (s, 1H ) , 7,20-7 ,04 (m, 5H) 5,86 u 3, 2H), 4,62 (s, 2H), 4,< 52-· 4, 47 (m r 3H), 4, 27 (s, 3H) 4,26 -4, 04 (m, 2H) , 3,57 (d 1, J = 10 ,5 : Hz , 1H) , 3, 30 (d 1 J = 10, 5 Hz, 1H) , 2, 46 (t , J = 8 ,1 Hz, 2 H) f RMN de 13C (75 MHz D20) δ 160,0, 147,4, 140, 2, 140, 1, 136, 9 f J r 1 28,9, 1 28, 7, 1 .28,3 116, 8, 102,3, OO OO r- 72,1, 68 ,4, 65 0, 60, 2, OO OO LO 57 , 0, 42,2 20,8; ESI-HRMS para C21H27N4O4 [M+H+] calculada, 399,2032; encontrada, 399,2014.

Cloridrato de (±) 2,4-trans-((9-desaza-hipoxantin-9- il)metil]azetidina-2,4-dimetanol (37). Uma solução de azetidina 35 (60 mg, 0,13 mmol) foi aquecida até refluxo em HC1 conc. (5 mL). Após 3 h, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash sucessiva sobre 39 sílica (2-propanol/H20/NH4OH 9:1:1, em seguida CHCl3/Me0H/H20/NH40H 65:35:7:1). 0 produto isolado foi dissolvido em HC1 1 M (2 mL) e novamente concentrado in vacuo para dar 37 como uma goma incolor higroscópica (35 mg, 84%); pureza por HPLC 96% (290 nm); RMN de 3H (300 MHz, D20) δ 8,57 (s, 1H) , 7,72 (s, 1H), 4,65 (d, J= 6,9 Hz, 2H) , 4, 60-4, 48 (m, 2H) , 4,21 (dd, J= 14,2, 6,4 Hz, 1H), 14,2, 3,0 Hz, 1H) , 3,52 (dd, J = 13,2, 4,6 Hz, 1H), 3,22 (dd, J= 13,2, 3,4 Hz, 1H), 2,54-2,37 (m, 2H); RMN de 13C (75 MHz, D20) δ 154,2, 144,7, 137,7, 132,4, 118,6, 104,1, 67, 8, 64, 7, O o to 00 00 42,5, 2 0,6; ESI-HRMS para

Ci2Hi7N4C>3 [M+H+] calculada, 265, 1301; encontrada, 265, 1316.

Esquema 5

O

38 a

Br“V- o

39 Bn i N Et02C—<^> 40

Reagentes: a) Br2, PBr3; b) BnNH2, Et3N, CH3CN; c) LiAlH4, Et20; d) H2, Pd (OH) 2/C, Boc20; e) i) HC1 Me0H/H20; ii) NaBH3CN,

EtOH; f) HC1 conc., refluxo. 2,4-Dibromobutanoato de etilo (39). (Wasserman, Η. H. et al. J Org Chem. 1981, 46 (15), 2991-2999). A uma mistura de γ-butirolactona (38) (22,4 g, 0,26 mol) e tribrometo de fósforo 40 (0,5 g, 1,8 mmol) aquecida a 110 °C, foi lentamente adicionado bromo (41,6 g, 0,26 mol) ao longo de 30 minutos. O progresso da reacção foi seguido pelo desaparecimento da cor do bromo da mistura reaccional. A reacção foi mantida a esta temperatura durante mais 15 minutos, em seguida, arrefecida em gelo e foi cuidadosamente adicionado etanol (100 mL) . A mistura reaccional foi então acidificada com ácido sulfúrico (1 mL) e aquecida a refluxo durante 2 horas e, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente e neutralizada com NaHCC>3 sólido até não libertar mais CO2. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e, em seguida, diluída com água e CH2CI2. As camadas foram separadas e, em seguida, a camada aquosa extraída com CH2CI2. As camadas orgânicas combinadas foram secas e, em seguida, concentradas sob pressão reduzida dando um óleo castanho pálido que foi destilado para dar 39 como um óleo incolor (40,9 g, 57%); p.e. 62°C, 0,3 mmHg; RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 4,49 (dd, J = 7,9, 6,2 Hz, 1H) , 4,30-4,20 (m, 2H) , 3,54 (t, J= 6,2 Hz, 2H), 2,56-2,46 (m, 2H), 1,31 (t, J= 6,9 Hz, 3H). (±)l-Benzilazetidina-2-carboxilato de etilo (40).

(Wasserman, Η. H. et ai. J Org Chem. 1981, 46(15), 2991-2999). A mistura de (±) 2,4-dibromobutanoato de etilo (39) (15 g, 54,8 mmol), trietilamina (16,6 g, 164 mmol) e benzilamina (5,87 g, 54,8 mmol) foi aquecida a refluxo durante 3 horas, em seguida concentrada sob pressão reduzida para dar uma suspensão sólida. Foi então adicionada água (150 mL) e a mistura extraída com éter (2 x 100 mL). A fase orgânica foi seca e, em seguida, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash sobre sílica (hexanos, em seguida, acetato de etilo/hexanos 1:3) para dar 40 como um óleo amarelo pálido (6,3 g, 53%); RMN de 1H (300 MHz, CDC13) δ 7,37-7,27 (m, 5H) , 4,16-4,03 (m, 2H), 3,82 (d, J= 12,6 Hz, 1H), 3,73 (dd, J= 8,4, 41 OO 4 Hz, n? t—1 3,61 (d, J = 12,8 Hz, 1H) , 3,34 (ddd, J = 7,4, 7,4 2, 0 Hz, 1H) , 2, 95 (ddd, J = 7,4, 7,4, 7,4 Hz, 1H), 2,44-2,31 (m 1Η), 2,27-2,16 (m, 1H) , 1,20 (t, J= 7,2 Hz, 3H) ; RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ 172,5, 1 37, 1 , 129,0, 128, 7, 1 28, 2, 127, 1 , 64, 5, 62, 4, 60,5, 50, 8, 21,5, 14, 0. (±)2-Hidroximetilazetidina-l-carboxilato de terc-butilo (41). (Abreo, Μ. A. et al. J Med Chem. 1996, 39 (4), 817-825). A uma solução, mantida sob agitação, de (±) l-benzilazetidina-2-carboxilato de etilo (40) (3,67 g, 16,7 mmol) em éter dietilico seco (50 mL) arrefecida a 4 °C foi lentamente adicionada uma solução de hidreto de alumínio e lítio em éter dietilico (1,0 M, 16 mL, 16,0 mmol). A reacção foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 1 hora e, em seguida, cuidadosamente desactivada com acetato de etilo, seguido de NaOH 2 M (4 mL) . A mistura reaccional foi deixada agitar durante 1 hora e, em seguida, os aluminatos foram removidos por filtração e o filtrado concentrado sob pressão reduzida para dar um óleo incolor. O óleo foi dissolvido em etanol (20 mL) e, em seguida, foram adicionados dicarbonato de di-terc-butilo (5,24 g, 24 mmol) e Pd(OH)2 a 20%/C (500 mg). A atmosfera foi substituída por hidrogénio pela aplicação sucessiva de vácuo e, em seguida, foi adaptado um balão de hidrogénio à reacção que foi deixada agitar de um dia para o outro. A atmosfera de hidrogénio foi substituído por Ar e, em seguida, a suspensão foi filtrada através de Celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia flash para dar 41 como um óleo incolor (850 mg, 28%); Rf 0,50 (2:1

AcOEt/hexano) ; RMN de (300 MHz, CDC13) δ 4, 52-4,38 (m, 1H) , 3, 94-3,63 (m, 4H) , 2,25-2,12 (m, 1H) , 2,02-1,87 (m, 1H) , 1,46 (s, 9H). 42 (±) (1-((5-(Benziloximetil)-4-metoxi-5H-pirrolo[3,2-d] pirimidin-7-il)metil)azetidin-2-il)metanol (42). A uma solução, mantida sob agitação, de azetidina 41 (162 mg, 0,86 mmol) dissolvida em metanol (2 mL) foi adicionado HC1 conc. (1 mL) . A mistura reaccional foi agitada durante 20 minutos e, em seguida, concentrada sob pressão reduzida. O HC1 residual foi removido pela adição e evaporação de acetonitrilo várias vezes. O intermediário sal de cloridrato tipo goma foi retomado em etanol (10 mL) e adicionado aldeído 33 (19 7 mg, 0,66 mmol) seguido de cianoboro-hidreto de sódio (63 mg, 0,99 mmol). A mistura reaccional foi deixada agitar de um dia para o outro e, em seguida, acidificada a pH 1 utilizando HC1 conc. Nesta altura foi libertada uma pequena quantidade de HCN. A mistura reaccional foi absorvida sobre sílica sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografia flash (CHCl3/MeOH/NEt3 90:10:0,5) para dar 42 como um sólido incolor (170 mg, 69%) ; p.f. 214-216 °C; RMN de ΤΗ (300 MHz, CDCI3) δ 8,52 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,31-7, 20 (m, 5H), 5, 70 (s, 2H), 4,45 (s, 2H) , 4,09 (s, 3H), 3,97 (d, J = 13,5 Hz, 1H) , 3, 80 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 3,68 1H) , 3,55-3,46 (m, 1H) , 3,45-3,42 (m, 2H) , 3,34 (ddd, , 6,9, 2,5 Hz, 1H), 3,01 (ddd, J = 8,7, 8, 7, 7,3 Hz, 1H) , 00 (m, 1H), 1,90 (dddd, J = 10,1, 8,1, 8,1, 2,4 Hz, 1H) ; RMN de 13C (75 MHz, CDC13) δ 156,2, 149,9, 149,8, 136, 7, 131,5, 128.3, 127, 8, 127, 5, 115, 8, 114, 0, 76,8, 70,0, 66,6, 64, 0, 53,5, 51.3, 50,6, 18,7; HRMS calculado para (M+H+, ESI) C20H25N4O3: 369,1927; encontrada: 369,1948. (±) 7-((2-(Hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo [3,2-d]pirimidin-4-ol (43). Uma solução de azetidina 42 (68 mg, 0,18 mmol) foi aquecida a refluxo em HC1 conc. (3 mL) durante 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e, em seguida, seca azeotropicamente pela adição e evaporação de 43 acetonitrilo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica (CHCl3/Me0H/H20/NH40H 65:35:7:1) para dar 21 como um sólido amorfo branco (33 mg, 76%); p.f. 213-216 °C; pureza por HPLC 98,9%, 220 nm (Synergi™ Polar-RP, 0:100 a 100:0 de

MeOH/0,1% de TFA em H20 ao longo de 30 minutos); RMN de 3H (300 MHz, 60 : 40 CD4OD/D2O) δ 8,03 (s, 1H) , 7 ,60 (s, 1H), 4, 23 (d, J = 13,8 Hz, 1H) , 4, 08 (d, J = 13,5 Hz, ih ; ), 4,10-3,98 (m , 1H) , 3,65-3,49 (m, 4H), 2,27-2,11 (m, 2H] ) ; RMN de 13C (75 MHz, 60 : 40 CD4OD/D2O) δ 156,1, 144,9, 143,6, 130,8, 118,7, 109,9, 68,3, 63, 4, 51,1, 49, 4, 20, 0; HRMS calculado para (M+H, ESI) C11H15N4O2: 235,1195; encontrada: 235,1196.

Ensaios de Inibição Enzimática

Para os ensaios com PNP, as concentrações de inosina e inibidor foram determinadas espectrofotometricamente utilizando um £260 de 7,1 ιηΝΓ1 cm-1 (pH 6) [Dawson et ai., Data for Biochemical Research, 3a ed., 1986, Clarendon Press, Oxford, U.K. ] e um ε26ΐ de 9,54 mM-1 cm-1 (pH 7) [Lim, M.-I.; Ren, Y.-Y.; Otter, B.A.; Klein, R.S., J. Org. Chem. 1983, 48, 780-788], respectivamente. Para os ensaios com MTAN/MTAP, as concentrações de metiltioadenosina e inibidor foram determinadas utilizando um ε260 de 14,9 ιηΝΓ1 cirT1 (pH 6) [Dawson et al, como acima] e um 8275 de 8,5 ιηΝΓ1 cirT1 (pH 7), [J. Org. Chem. 1983, 48, 780-788] respectivamente. As actividades de PNP e MTAN/MTAP foram seguidas por ensaios acoplados com xantina-oxidase, como anteriormente descrito [Biochemistry, 2006, 45, 12929-12941; Biochemistry, 1998, 37, 8615-8621]. Em todos os casos, a concentração de inibidor foi, pelo menos, 10 vezes maior do que a concentração de enzima, como necessário para análise simples da inibição da ligação forte de início lento [Morrison, J.F.; 44

Walsh, C.T. Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 1988, 61, 201-301]. As constantes de Michaelis utilizadas no ajuste de dados foram como se segue: 40 μΜ, 34 μΜ e 5 μΜ para a inosina com PNPs humana, bovina e de P. falciparum, respectivamente; 5 μΜ, 0,43 μΜ e 23 μΜ para a MTA com MT AP humana, MTAN de E. coli e MTAN de S. pneumoniae, respectivamente.

Dados Biológicos

Quadro 1. Constantes de inibição para a interacçao de Imucilinas com uma variedade de PNP.a Composto PNP humana (nM) PNP bovina (nM) PNP de P. falciparum (nM) O H 11 /N"'fi NH ii(-v_ H0 Λ HO—1 18 K± = 0,229 ± 0, 015 K± = 0,665 ± 0,06 K±* = 0,236 ± 0,003 K± > 10000 0 H jí /ΝΊι NH μη_ VA j 19 K± = 6,3 ± 1,1 K± = 4,8 ± 0,3 K± > 10000 0 H J -pjíj HO—* 36 K±=12, 9±0,3 Ki=16±3 K±=12 9 0±3 0 45 (continuação)

Quadro 1. Constantes de inibição para a interacçao de Imucilinas com uma variedade de PNP.a Composto PNP humana (nM) PNP bovina (nM) PNP de P. falciparum (nM) 0 IH 11 /nV^nh ηοΊΙ VA J X /N HO—: (±>-37 Ki=280±40 K± = 360 ± 40 Ni=580±30 (±>-43 N±=l, 8±0,3 Ni* = 0,260 ± 0,02 K±=l, 8±0,2 Ni=191±ll a K±* é a constante de dissociação para E + I —«— EI*. Nos casos em que é apenas indicada a K±, não foi observada inibição de inicio lento.

Quadro 2. Constantes de inibição para a interacçao de Imucilinas de Azetidina com MTAP e MTAN.a Composto MTAP Humana (nM) MT AN de E. coli (nM) MTAN de S. pneumoniae (nM) nh2 Η 1 (νΊ\ν Mes-m p»*1 HO—1 21 Ni=140±7 N±=0, 84±0 , 09 Ni=150±12 nh2 Η I <N y N MeS—i 22 Ni = 2, 0±0 , 1 Ni = 0,45 ± 0,05 Ni=8 4±6 46

Quadro 2. Constantes de inibição para a interacção de Imucilinas de Azetidina com MTAP e MTAN.a

Composto MTAP Humana MT AN de E. (nM) COli (nM) MT AN de S. pneumoniae (nM) a K±* é a constante de dissociação para E + I EI*. Nos casos em que é apenas indicada a Kír não foi observada inibição de inicio lento.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

Os análogos de azetidina de Imucilinas e DAD-Me-Imucilinas da invenção são inibidores potenciais ou efectivos de pelo menos uma de PNP, PPRT, MTAP e MT AN, o que significa que são úteis como possíveis agentes terapêuticos para o tratamento de doenças ou condições, tais como cancro, infecção bacteriana, infecção parasitária ou uma doença mediada por células T.

Lisboa, 21 de Maio de 2012 47

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I): w Y z

NR1 X (I) em que: W e X sao, cada, independentemente seleccionados de hidrogénio, CH2OH, CH2OQ e CH2SQ; Y e Z são, cada, independentemente seleccionados de hidrogénio, halogéneo, CH2OH, CH2OQ, CH2SQ, SQ, OQ e Q; Q é um grupo alquilo, aralquilo ou arilo cada um dos quais pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de hidroxilo, halogéneo, metoxilo, amino ou carboxilo; R1 é um radical da fórmula (II) B H

G (ll) 1 ou R1 é um radical da fórmula (III)

A é seleccionado de N, CH e CR2, em que R2 é seleccionado de halogéneo, alquilo, aralquilo, arilo, OH, NH2, NHR3, NR3R4 e SR5, em que R3, R4 e R5 são, cada, grupos alquilo, aralquilo ou arilo opcionalmente substituídos com hidroxilo ou halogéneo, e em que R2 está opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo quando R2 é alquilo, aralquilo ou arilo; B é seleccionado de hidroxilo, NH2, NHR6, SH, hidrogénio e halogéneo, em que R6 é um grupo alquilo, aralquilo ou arilo opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo; D é seleccionado de hidroxilo, NH2, NHR7, hidrogénio, halogéneo e SCH3, em que R7 é um grupo alquilo, aralquilo ou arilo opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo; E é seleccionado de N e CH; 2 G é um grupo alquilo Ci_4 saturado ou insaturado opcionalmente substituído com hidroxilo ou halogéneo; ou um seu tautómero, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou um seu éster.
2. Composto como reivindicado na reivindicação 1, em que W é CH2OH ou ch2sq.
3. Composto como reivindicado na reivindicação 2, em que X é CH2OH ou CH2SQ.
4. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 em que Z é seleccionado de hidrogénio, halogéneo, CH2OH, CH2OQ e CH2SQ.
5. Composto como reivindicado na reivindicação 4, em que Y ou Z é CH2OH, CH2SQ ou CH2OQ.
6. Composto como reivindicado na reivindicação 4, em que um ou ambos de Y ou Z é Q ou CH2OH.
7. Composto como reivindicado na reivindicação 1, em que W e X são ambos hidrogénio.
8. Composto como reivindicado na reivindicação 7, em que um ou ambos de Y ou Z é CH2OH ou CH2SQ.
9. Composto como reivindicado na reivindicação 1, em que Y e Z são ambos hidrogénio ou em que um ou ambos de Y ou Z é CH2OH. 3
10 . Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que G é i ch2.
11 . Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações anteriores, em que R1 é um radical da fórmula (II) .
12. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que E é N e B é hidroxilo ou NH2.
13. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que E é N e A é CH ou N.
14. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em que E é N e D é H ou NH2
• 15. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, em que, quando ' qualquer um de Y, Z, B e D é halogéneo, cada halogéneo é independentemente cloro ou flúor.
16. Composto como reivindicado na reivindicação 1, o qual é: i. meso-l-((2,4-eis-2,4-bis(hidroximetil)azetidin-1-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; ii. (±) 7-((2,4-trans-2, 4-bis(hidroximetil)azetidin-1- il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; iii. (+) 7-((2,4-trans-2,4-bis(hidroximetil)azetidin-1- il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; iv. (-) 7-((2,4-trans-2,4-bis(hidroximetil)azetidin-1- il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; 4 ν. 7-((3,3-bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; vi. (±) 7-((2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; vii. Ί-(((2R)-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; viii. 7-(((2S)-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; ix. 7-((3-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2 d]pirimidin-4(5H)-ona; x. 7-((3-hidroxi-3-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xi . (±) 7-((2,3-cis,-3-hidroxi-2-(hidroximetil) azetidin-l- il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xii. (+) 7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l- il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xiii. (-) 7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l- il) metil) -3H-pirrolo[3,2-djpirimidin-4(5H)-ona; xiv. (±) 7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-1 il) metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xv. (+) 7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l- il) metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xvi. (-) 7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-1 il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xvii. meso-2-amino-7-((2,4-cis-2,4- bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xviii. (±) 2-amino-7-((2,A-trans-2,4- bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; 5 xix. ( + ) 2-amino-7-((2,A-trans-2, 4- bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xx. (-) 2-amino-7-((2,4-trans-2,4-bis(hidroximetil)azetidin 1-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxi. 2-amino-7-((3,3-bis(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxii. (±) 2-amino-7-((2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxiii· 2-amino-7-(((2R)-2-(hidroximetil)azetidin-l-il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxiv. 2-amino-7-(((2S)-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil) 3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxv. 2-amino-7-((3-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxvi. 2-amino-7-((3-hidroxi-3-(hidroximetil)azetidin-l-il) metil) -3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxvii. (±) 2-amino-7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxviii. (-) 2-amino-7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxix. (+) 2-amino-7-((2,3-trans-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxx. (±) 2-amino-7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxxi. (+) 2-amino-7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; 6 xxxii. (-) 2-amino-7-((2,3-cis-3-hidroxi-2-(hidroximetil)azetidin-l-il)metil)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona; xxxiii. (1-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil) 3-(metiltiometil)azetidin-3-il)metanol; xxxiv. 1-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-3 (metiltiometil)azetidin-3-ol; xxxv. (±)-(2,A-trans-1-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin 7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; xxxvi. (+)-(2,A-trans-1-((4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; xxxvii. (-)-(2,A-trans-1-((4-amino-5H-pirrolo[3,2— d]pirimidin-7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; xxxviii. meso-(2,4-cis-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-4-(metiltiometil)azetidin-2-il)metanol; xxxix. 7-(((2RS)-2-(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; xl. 7-(((2R)—2—(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; xli. 7-(((2S)-2-(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; xlii. 7-((3-(metiltiometil)azetidin-l-il)metil)-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina; e xliii. (±) 2,3-trans-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin 7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xliv. (+) 2,3-trans-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xlv. (-) 2,3-trans-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7 il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. 7 xlvi. (±) 2, 3-cis-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xlvii. (+) 2,3-cis-l-((4-amino-5H-pirrol)o[3,2-d]pirimidin-7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol. xlviii. (-) 2,3-cis-l-((4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin- 7-il)metil)-2-(metiltiometil)azetidin-3-ol.
17. Composição farmacêutica compreendendo um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 16 e um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente eficaz.
18. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 16 para utilização como um medicamento.
19. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 16 para o tratamento, prevenção ou redução do risco de uma doença ou estado nos quais é desejável inibir a PNP, MTAP ou MTAN.
20. Utilização de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 16 no fabrico de um medicamento para o tratamento, prevenção ou redução do risco de uma doença ou estado nos quais é desejável inibir a PNP, MTAP ou MTAN.
21. Composto ou utilização como reivindicado na reivindicação 19 ou reivindicação 20, em que a doença ou estado é cancro, infecção bacteriana, infecção parasitária ou uma doença mediada por células T. Lisboa, 21 de Maio de 2012