PT1789053E - Método de cicatrização de feridas utilizando antagonistas dos receptores de adenosina a2b - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "Método de cicatrização de feridas utilizando antagonistas dos receptores de adenosina Ά2Β"

Campo da invenção A presente invenção refere-se a antagonistas dos receptores de adenosina A2B para utilização em métodos de cicatrização de feridas. A invenção também se refere a composições farmacêuticas contendo estes compostos para utilização no aumento da cicatrização de feridas.

Anterioridade A adenosina é um dos nucleósidos de ocorrência natural, que exerce os seus efeitos biológicos interactuando com uma familia de receptores de adenosina conhecidos como Ai, A2A, A2B e A3, em que todos modulam importantes processos fisiológicos. Por exemplo, os receptores de adenosina A 2A modulam a vasodilatação coronária, os receptores A2B foram implicados na activação de mastócitos, na asma, na vasodilatação, na regulação do crescimento celular, na função intestinal e na modulação da neurossecreção (Veja-se Adenosine A2B Receptors as Therapeutical Targets, Drug Dev. Res,45:198; Feoktistov et al., Trends Pharmacol. Sei. 19:148-153), e os receptores de adenosina A3 modulam processos de proliferação celular.

Os receptores de adenosina A2B são ubíquos, e regulam múltiplas actividades biológicas. Por exemplo, a adenosina liga-se a receptores A2B em células endoteliais, desse modo estimulando a angiogénese. A adenosina também regula o crescimento de populações celulares de músculo liso em vasos sanguíneos. A adenosina estimula os receptores A2B em mastócitos, desse modo modulando reacções de hipersensibilidade do Tipo I. A adenosina também estimula a actividade gastro-secretória por activação com A2B no intestino.

Como discutido acima, a ligação de receptores A2B estimula a angiogénese por promoção do crescimento de células endoteliais. Há muito foi sugerido que como esta actividade é necessária na cicatrização de feridas, os agonistas do receptor A2B seriam úteis na cicatrização de feridas. 2 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

Surpreendentemente, foi agora verificado que antagonistas de A2b são também eficazes em aplicações na cicatrização de feridas.

Deste modo, pretende-se aumentar a cicatrização de feridas através da administração de compostos que são potentes antagonistas de A2b (i.e., compostos que inibem o receptor de adenosina A2b) , completa ou parcialmente selectivos para o receptor A2B.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Num aspecto, a invenção proporciona a utilização de um antagonista do receptor A2B possuindo a estrutura de Fórmula I ou Fórmula II:

em que: R1 e R2 são independentemente seleccionados entre hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído ou um grupo -D-E, em que D é uma ligação covalente ou alquileno, e E é alcoxi opcionalmente substituído, cicloalquilo opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído, heteroarilo opcionalmente substituído, heterociclilo opcionalmente substituído, alcenilo opcionalmente substituído ou alcinilo opcionalmente substituído, com a condição de que quando D é uma ligação covalente E não possa ser alcoxi; R3 é hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído ou cicloalquilo opcionalmente substituído; X é arileno ou heteroarileno opcionalmente substituídos; Y é uma ligação covalente ou alquileno em que um átomo de carbono pode ser opcionalmente substituído por -0-, -Ξου -NH-, e está opcionalmente substituído com hidroxi, alcoxi, amino opcionalmente substituído ou -COR, em que R é hidroxi, alcoxi ou amino; 3 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ com a condição de que quando a substituição opcional é hidroxi ou amino a referida substituição não possa estar presente num átomo de carbono adjacente a um heteroátomo; e Z é hidrogénio, arilo monociclico opcionalmente substituído ou heteroarilo monociclico opcionalmente substituído; com a condição de que (a) Z é hidrogénio apenas quando Y é uma ligação covalente e X é 1,4-pirazoleno opcionalmente substituído ligado ao anel de purina através de um átomo de carbono; e (b) quando X é arileno opcionalmente substituído, Z é um heteroarilo monociclico opcionalmente substituído outro que não imidazolo opcionalmente substituído, para a preparação de uma composição farmacêutica para acelerar a cicatrização de feridas num mamífero.

As concretizações preferidas deste aspecto da invenção estão estabelecidas nas reivindicações 2 a 34. 0 antagonista do receptor A2B pode ser administrado topicamente e pode ser administrado directamente na ferida. A ferida a tratar pode ser provocada por meios mecânicos, químicos ou térmicos e pode tomar a forma de uma contusão, de uma incisão ou de uma laceração. A ferida pode ser o resultado de uma incisão cirúrgica ou pode estar associada a uma doença ou desordem, tal como a diabetes. Em particular, a ferida pode ser uma úlcera diabética.

Em ainda outro aspecto da invenção, são proporcionadas formulações farmacêuticas para utilização no aumento da cicatrização de feridas e adequadas para entrega tópica, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista do receptor A2B possuindo a estrutura das Fórmulas I ou II acima, e pelo menos um transportador farmaceuticamente aceitável. Numa concretização a composição farmacêutica pode ser um unguento, uma loção, um creme, uma microemulsão, um gel, um óleo ou uma solução. Em outra concretização a composição farmacêutica é adequada para entrega sistémica. A formulação pode conter um ou adicionais e/ou aditivos tais ma is como agentes activos solubilizantes, 4 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ potenciadores da permeação cutânea, opacificantes, conservantes (e.g., antioxidantes) , agentes gelificantes, agentes tamponantes, tensioactivos, emulsionantes, emolientes, agentes espessantes, estabilizantes, humectantes, corantes e fragrâncias.

Um grupo preferido de compostos de Fórmula I e II são aqueles em que R1 e R2 são independentemente hidrogénio, alquilo inferior opcionalmente substituído ou um grupo -D-E, em que D é uma ligação covalente ou alquileno, e E é fenilo opcionalmente substituído, cicloalquilo opcionalmente substituído, alcenilo opcionalmente substituído ou alcinilo opcionalmente substituído, particularmente aqueles em que R3 é hidrogénio.

Dentro deste grupo, uma primeira classe de compostos inclui aqueles em que X é fenileno opcionalmente substituído e Y é uma ligação covalente ou alquileno inferior em que um átomo de carbono pode ser opcionalmente substituido por -0-, -S- ou -NH-. Num subgrupo desta categoria, R1 e R2 são independentemente alquilo inferior opcionalmente substituido com cicloalquilo e ainda numa outra subcategoria, R1 e R2 são n-propilo, Y é -0CH2- e Z é oxadiazolo opcionalmente substituido, particularmente [1,2,4]oxadiazol-3-ilo opcionalmente substituido, especialmente [1,2,4]oxadiazol-3-ilo substituido com fenilo opcionalmente substituido ou piridilo opcionalmente substituido.

Uma segunda classe de compostos dentro deste grupo inclui aqueles em que X é pirazoleno opcionalmente substituido. Dentro desta classe, pode ser definida uma subclasse em que Y é uma ligação covalente, alquileno inferior opcionalmente substituido com hidroxi, alcoxi, amino opcionalmente substituido ou -COR, em que R é hidroxi, alcoxi ou amino; e Z é hidrogénio, fenilo opcionalmente substituido, oxadiazolilo opcionalmente substituido, isoxazolilo opcionalmente substituido ou piridilo opcionalmente substituido.

Pode também ser encontrada uma subclasse especifica em que X é 1,4-pirazoleno opcionalmente substituido e Z é fenilo opcionalmente substituido. Em algumas concretizações dentro desta subclasse, R1 é alquilo inferior opcionalmente 5 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ substituído com cicloalquilo, R2 é hidrogénio e Y é -CH2- ou -CH(CH3)-. Em outras concretizações dentro desta subclasse, R1 e R2 são independentemente metilo, etilo, n-propilo ou ciclopropilmetilo, e Y é metileno ou etileno que podem estar opcionalmente substituídos com hidroxi, alcoxi, amino opcionalmente substituído ou -COR, em que R é hidroxi, alcoxi ou amino.

Pode ser encontrada outra subclasse específica em que Z é oxadiazolo opcionalmente substituído, Y é -CH2- ou -CH(CH3)-, e R1 é alquilo inferior opcionalmente substituído com cicloalquilo e R2 é H ou R1 e R2 são independentemente alquilo inferior opcionalmente substituído com cicloalquilo. Ainda podem ser definidas outras subclasses específicas em que R1 e R2 são independentemente alquilo inferior opcionalmente substituído com cicloalquilo, e Y é -CH2-, -CH(CH3)- ou uma ligação covalente, e Z é hidrogénio, isoxazolilo opcionalmente substituído ou piridilo.

Presentemente, os compostos preferidos para utilização na invenção incluem, mas não se lhes limitando: l-propil-8- (1 — { [3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-propil-8-[l-benzilpirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-butil-8-(1—{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-propil-8-[1-(feniletil)pirazol-4-il]-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 8- (1-{[5-(4-clorofenil) (1,2,4-oxadiazol-3-il)]metil}pirazol-4-il)-1-propil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 8- (1-{[5-(4-clorofenil) (1,2,4-oxadiazol-3-il)]metil}pirazol-4-il)-1-butil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1,3-dipropil-8-pirazol-4-il-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 6 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 1 metil 3 sec butil-8-pirazol-4-il-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-ciclopropilmetil-3-metil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)- metil]pirazol-4-il}-1,3r7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1.3- dimetil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 3-metil-l-propil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)metil]pirazol-4 il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 3-etil-l-propil-8-{l-[(3-trifluorometilfenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1.3- dipropil-8-(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1.3- dipropil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-etil-3-metil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7 tri-hidropurino-2,6-diona; 1.3- dipropil-8-{1-[(2-metoxifenil)metil]pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1.3- dipropil-8-(1-{[3-(trifluorometil)fenil]etil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1.3- dipropil-8-{1-[(4-carboxifenil)metil]pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ácido 2-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurin-8-il) pirazolil]-2-fenilacético; 8-{4-[5-(2-metoxifenil)[1,2,4]oxadiazol-3-ilmetoxi]fenil}-1,3 dipropil-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 8-{4-[5-(3-metoxifenil)[1,2,4]oxadiazol-3-ilmetoxi]fenil}-1,3 dipropil-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 7 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 8-{4-[5-(4-fluorofenil)[1,2,4]oxadiazol-3-ilmetoxi]fenil}-l,3 dipropil-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1-(ciclopropilmetil)-8-[1-(2-piridilmetil)pirazol-4-il]-1,3,7 tri-hidropurino-2,6-diona; l-n-butil-8-[1-(6-trifluorometilpiridin-3-ilmetil)pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 8-(l-{[3-(4-clorofenil) (1,2,4-oxadiazol-5-il)]metil}pirazol-4 il)-1,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurino-2, 6-diona; 1.3- dipropil-8-[1-({5-[4-(trifluorometil)fenil]isoxazol-3-il}metil)pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2, 6-diona; 1.3- dipropil-8-[1-(2-piridilmetil)pirazol-4-il]-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ácido 3-{[4-(2,6-dioxo-1,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurin-8-il)pirazolil]metil}benzóico; 1.3- dipropil-8-(1-{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}-pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1.3- dipropil-8-{1-[(3-(1H-1,2,3,4-tetrazol-5-il)fenil)metil]-pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ácido 6-{[4-(2,6-dioxo-l,3-propil-l,3,7-tri-hidropurin-8-il) pirazolil]metil}piridino-2-carboxilico; 3 etil-l-propil-8-[l - (2-piridilmetil)pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2, 6-diona; 8 - (1—{[5 - (4-clorofenil)isoxazol-3-il]metil}pirazol-4-il)-3-etil-l-propil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 8 - (1—{ [3 - (4-clorofenil) (1,2,4-oxadiazol-5-il)]metil}pirazol-4 il)-3-etil-l-propil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 3-etil-l-propil-8- (l-{ [6-(trifluorometil) (3- piridil)]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 8 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 1-(ciclopropilmetil)-3-etil-8-(1—{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)-l,3,7-tri-hidropurino-2, 6-diona; e 3-etil-l-(2-metilpropil)-8-(1-{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições e Parâmetros Gerais

Como se utilizam no presente fascículo, as seguintes palavras e frases são entendidas genericamente com os significados apresentados adiante, excepto na medida em que o contexto em que são utilizadas indique o contrário. 0 termo "alquilo" refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto saturada mono-radicalar ramificada ou não ramificada possuindo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 átomos de carbono. Este termo é exemplificado por grupos tais como metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, t-butilo, n-hexilo, n-decilo, tetradecilo. O termo "alquilo substituído" refere-se a: 1) um grupo alquilo como acima definido, possuindo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes, preferivelmente 1 a 3 substituintes, seleccionados do grupo que consiste em alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -S02- alquilo, -S02-arilo restrito de outro substituintes podem substituídos com 1, e -S02-heteroarilo. A menos que modo pela definição, todos os opcionalmente estar adicionalmente 2 ou 3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, 9 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ ciano e -S(0)nR/ onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2; ou 2) um grupo alquilo como acima definido que é interrompido por 1-10 átomos independentemente seleccionados entre oxigénio, enxofre e NRa-, onde Ra é seleccionado entre hidrogénio, alquilo, cicloalquilo, alcenilo, cicloalcenilo, alcinilo, arilo, heteroarilo e heterociclilo. Todos os substituintes podem estar opcionalmente adicionalmente substituídos com alquilo, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano ou -S(0)nR, em que R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2; ou 3) um grupo alquilo como acima definido que simultaneamente possui 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes como acima definido e é também interrompido por 1-10 átomos como acima definido. A expressão "alquilo inferior" refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto saturada mono-radicalar ramificada ou não ramificada possuindo 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono.

Esta expressão é exemplificada por grupos tais como metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, t-butilo, n-hexilo. A expressão "alquilo inferior substituído" refere-se a alquilo inferior como acima definido possuindo 1 a 5 substituintes, preferivelmente 1, 2 ou 3 substituintes, como definido para alquilo substituído ou um grupo alquilo inferior como acima definido que é interrompido por 1, 2, 3, 4 ou 5 átomos como definido para alquilo substituído ou um grupo alquilo inferior como acima definido que simultaneamente possui 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes como acima definido e é também interrompido por 1, 2, 3, 4 ou 5 átomos como acima definido. O termo "alquileno" refere-se a um di-radical de uma cadeia de hidrocarboneto saturada ramificada ou não ramificada, possuindo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 átomos de carbono, preferivelmente 1-10 átomos de carbono, mais preferivelmente 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono. Este termo é exemplificado por grupos tais como metileno (-CH2-) , etileno 10 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ (-CH2CH2-), os isómeros de propileno (e.g., -CH2CH2CH2- e -CH (CH3) CH2-) e similares. A expressão "alquileno inferior" refere-se a um di-radical de uma cadeia de hidrocarboneto saturada ramificada ou não ramificada, preferivelmente possuindo 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono. A expressão "alquileno inferior" refere-se a um di-radical de um hidrocarboneto saturado de cadeia ramificada ou não ramificada, preferivelmente possuindo 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono. A expressão "alquileno substituído" refere-se a: (1) um grupo alquileno como acima definido possuindo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -SO2- alquilo, -SC>2-arilo restrito de outro substituintes podem substituídos com 1, e -SC>2-heteroarilo. A menos que modo pela definição, todos os opcionalmente estar adicionalmente 2 ou 3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2; ou (2) um grupo alquileno como acima definido que é interrompido por 1-20 átomos independentemente seleccionados entre oxigénio, enxofre e NRa-, onde Ra é seleccionado entre hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, cicloalquilo, cicloalcenilo, arilo, heteroarilo e heterociclilo ou grupos seleccionados entre carbonilo, carboxiéster, carboxiamida e sulfonilo; ou 11 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ (3) um grupo alquileno como acima definido que simultaneamente possui 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes como acima definido e é também interrompido por 1-20 átomos como acima definido. São exemplos de alquilenos substituídos, clorometileno (-CH(Cl)-), aminoetileno (-CH (NH2) CH2-) , metilaminoetileno (-CH(NHMe)CH2-) , isómeros de 2-carboxipropileno (-CH2CH (C02H) CH02-) , etoxietilo (-CH2CH20-CH2CH2-) , etilmetilaminoetilo (-CH2CH2N (CH3) CH2CH2-) , l-etoxi-2-(2-etoxi-etoxi) etano (-CH2CH20-CH2CH2-0CH2CH2-0CH2CH2-) . O termo "aralquilo" refere-se a um grupo arilo covalentemente ligado a um grupo alquileno, onde arilo e alquileno são como aqui definido. "Aralquilo opcionalmente substituído" refere-se a um grupo arilo opcionalmente substituído covalentemente ligado a um grupo alquileno opcionalmente substituído. Estes grupos aralquilo são exemplificados por benzilo, feniletilo, 3-(4- metoxifenil)propilo. O termo "alcoxi" refere-se ao grupo R-O-, onde R é alquilo opcionalmente substituído ou cicloalquilo opcionalmente substituído ou R é o grupo -Y-Z, em que Y é alquileno opcionalmente substituído e Z é alcenilo opcionalmente substituído, alcinilo opcionalmente substituído; ou cicloalcenilo opcionalmente substituído, onde alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo e cicloalcenilo são como aqui definido. Os grupos alcoxi preferidos são alquilo-O- opcionalmente substituído e incluem, a título de exemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, iso-propoxi, n-butoxi, terc-butoxi, sec-butoxi, n-pentoxi, n-hexoxi, 1,2-dimetilbutoxi, trifluorometoxi. O termo "alquiltio" refere-se ao grupo R-S-, onde R é como definido para alcoxi. O termo "alcenilo" refere-se a um mono-radical de um grupo hidrocarboneto insaturado ramificado ou não ramificado preferivelmente possuindo de 2 a 20 átomos de carbono, mais preferivelmente 2 a 10 átomos de carbono e ainda mais preferivelmente 2 a 6 átomos de carbono e possuindo 1-6, preferivelmente 1, ligações duplas (vinilo). Os grupos alcenilo preferidos incluem etenilo ou vinilo (-CH=CH2) , 12 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 1-propileno ou alilo (-CH2CH=CH2) , isopropileno (-C (CH3) =CH2) , biciclo[2,2,1]hepteno. Na eventualidade de o alcenilo estar ligado a azoto, a ligação dupla não pode ser alfa em relação ao azoto. A expressão "alcenilo inferior" refere-se a alcenilo como acima definido possuindo de 2 a 6 átomos de carbono. A expressão "alcenilo substituído" refere-se a um grupo alcenilo como acima definido possuindo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes, e preferivelmente 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, aminocarbonilo, alcoxi-carbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -SC>2-alquilo, -S02-arilo e -S02-heteroarilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1, 2 ou 3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. O termo "alcinilo" refere-se a um mono-radical de um hidrocarboneto insaturado, preferivelmente possuindo de 2 a 20 átomos de carbono, mais preferivelmente 2 a 10 átomos de carbono e ainda mais preferivelmente 2 a 6 átomos de carbono e possuindo pelo menos 1 e preferivelmente 1-6 locais de insaturação acetileno (ligação tripla). Os grupos alcinilo preferidos incluem etinilo, (-C=CH), propargilo (ou prop-l-in-3-ilo, -CH2CsCH). Na eventualidade de o alcinilo estar ligado a azoto, a ligação tripla não pode ser alfa em relação ao azoto. A expressão "alcinilo substituído" refere-se a um grupo alcinilo como acima definido possuindo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes, e preferivelmente 1, 2 ou 3 substituintes, 13 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -S02-alquilo, -SC>2-arilo e -S02-heteroarilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1, 2 ou 3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. O termo "aminocarbonilo" refere-se ao grupo -C(0)NRR onde cada R é independentemente hidrogénio, alquilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo ou onde ambos os grupos R estão unidos para formar um grupo heterocíclico (e.g., morfolino). A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1-3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S (0) nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2 . O termo "acilamino" refere-se ao grupo -NRC(0)R onde cada R é independentemente hidrogénio, alquilo, arilo, heteroarilo ou heterociclilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1-3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. 0 termo "aciloxi" refere-se aos grupos -O (0)C-alquilo, -0 (0)C-cicloalquilo, -0 (0)C-arilo, -0 (0)C-heteroarilo, e -0(0)C-heterociclilo. A menos que restrito de outro modo pela 14 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ definição, todos os substituintes podem estar opcionalmente adicionalmente substituídos com alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano ou -S(0)nR/ onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. O termo "arilo" refere-se a um grupo carbocíclico aromático de 6 a 20 átomos de carbono possuindo um único anel (e.g., fenilo) ou múltiplos anéis (e.g., bifenilo) ou múltiplos anéis condensados (fundidos) (e.g., naftilo ou antrilo). Os arilos preferidos incluem fenilo e naftilo. O termo "arileno" refere-se a um di-radical de um grupo arilo como acima definido. Este termo é exemplificado por grupos tais como 1,4-fenileno, 1,3-fenileno, 1,2-fenileno e 1,4'-bifenileno. A menos que restrito de outro modo pela definição para o substituinte arilo ou arileno, estes grupos arilo ou arileno podem opcionalmente estar substituído com 1 a 5 substituintes, preferivelmente 1 a 3 substituintes, seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -SC>2-alquilo, -SC>2-arilo e -S02-heteroarilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1- 3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. O termo "ariloxi" refere-se ao grupo arilo-O- em que o grupo arilo é como acima definido, e inclui grupos arilo opcionalmente substituídos também como definido acima. O termo "ariltio" refere-se ao grupo R-S-, onde R é como definido para arilo. 15 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ο termo "amino" refere-se ao grupo -NH2. A expressão "amino substituído" refere-se ao grupo -NRR onde cada R é independentemente seleccionado do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo, cicloalquilo, carboxialquilo (por exemplo, benziloxicarbonilo), arilo, heteroarilo e heterociclilo desde que ambos os grupos R não sejam hidrogénio ou um grupo -Y-Z, em que Y é alquileno opcionalmente substituído e Z é alcenilo, cicloalcenilo ou alcinilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1-3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S (0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. O termo "carboxialquilo" refere-se aos grupos -C(0)0-alquilo ou -C(O)O-cicloalquilo, onde alquilo e cicloalquilo, são como aqui definido, e podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano ou -S (O) nR, em que R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2 . O termo "cicloalquilo" refere-se a grupos carbocíclicos de 3 a 20 átomos de carbono possuindo um único anel cíclico ou múltiplos anéis condensados. Estes grupos cicloalquilo incluem, a título de exemplo, estruturas de anel único tais como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-octilo ou estruturas de múltiplos anéis tais como adamantanilo, biciclo[2,2,1]heptano, 1,3,3-trimetilbiciclo[2,2,1]hept-2-ilo, (2,3,3-trimetilbiciclo[2,2,1]hept-2-ilo) ou grupos carbocíclicos aos quais está fundido um grupo arilo, por exemplo indano. A expressão "cicloalquilo substituído" refere-se a grupos cicloalquilo possuindo 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes, e preferivelmente 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, 16 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -S02-alquilo, -S02-arilo e -S02-heteroarilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1, 2 ou 3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, haloqéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR/ onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2.

Os termos "haloqéneo" ou "halo" referem-se a fluoro, bromo, cloro e iodo. O termo "acilo" denota o grupo -C(0)R, em que R é hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, cicloalquilo opcionalmente substituído, heterociclilo opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído. O termo "heteroarilo" refere-se a um radical derivado de um grupo cíclico aromático (i.e., completamente insaturado) possuindo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 átomos de carbono e 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos seleccionados entre oxigénio, azoto e enxofre em pelo menos um anel. Estes grupos heteroarilo podem ter um único anel (e.g., piridilo ou furilo) ou múltiplos anéis condensados (e.g., indolizinilo, benzotiazolilo ou benzotienilo). Os exemplos de heteroarilos incluem, mas não se lhes limitando, [1,2,4]oxadiazolo, [1,3,4]oxadiazolo, [1,2,4]tiadiazolo, [1,3,4]tiadiazolo, pirrolo, imidazolo, pirazolo, piridino, pirazino, pirimidino, piridazino, indolizino, isoindolo, indolo, indazolo, purino, quinolizino, isoquinolino, quinolino, ftalazino, naftilpiridino, quinoxalino, quinazolino, cinolino, pteridino, carbazolo, carbolino, fenantridino, acridino, fenantrolino, isotiazolo, fenazino, isoxazolo, fenoxazino, fenotiazino, imidazolidino, imidazolino, assim como derivados N-óxido e N-alcoxi de azoto contendo compostos heteroarilo, por exemplo derivados piridino-N-óxido. 17 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ο termo "heteroarileno" refere-se a um di-radical de um grupo heteroarilo como acima definido. Este termo é exemplificado por grupos tais como 2,5-imidazolono, 3,5-[1,2,4]oxadiazolono, 2,4-oxazoleno, 1,4-pirazoleno. Por exemplo, 1,4-pirazoleno é:

onde A representa o ponto de fixação. A menos que restrito de outro modo pela definição para o substituinte heteroarilo ou heteroarileno, estes grupos heteroarilo ou heterarileno podem opcionalmente estar substituídos com 1 a 5 substituintes, preferivelmente 1 a 3 substituintes seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -S02-alquilo, -S02-arilo e -S02-heteroarilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1-3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. O termo "heteroaralquilo" refere-se a um grupo heteroarilo covalentemente ligado a um grupo alquileno, onde heteroarilo e alquileno são como aqui definido. "Heteroaralquilo opcionalmente substituído" refere-se a um grupo heteroarilo opcionalmente substituído covalentemente ligado a um grupo alquileno opcionalmente substituído. Estes grupos heteroaralquilo são exemplificados por 3-piridilmetilo, quinolin-8-iletilo, 4-metoxitiazol-2-ilpropilo. 18 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ο termo "heteroariloxi" refere-se ao grupo heteroarilo-O-. O termo "heterociclilo" refere-se a um grupo mono-radicalar saturado ou parcialmente insaturado possuindo um único anel ou múltiplos anéis condensados, possuindo de 1 a 40 átomos de carbono e de 1 a 10 heteroátomos, preferivelmente 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos, seleccionados entre azoto, enxofre, fósforo e/ou oxigénio no anel. Os grupos heterociclicos podem possuir um único anel ou múltiplos anéis condensados, e incluem tetra-hidrofuranilo, morfolino, piperidinilo, piperazino, di-hidropiridino. A menos que restrito de outro modo pela definição para o substituinte heterociclico, estes grupos heterociclicos podem estar opcionalmente substituídos com 1, 2, 3, 4 ou 5, e preferivelmente 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalcenilo, acilo, acilamino, aciloxi, amino, aminocarbonilo, alcoxicarbonilamino, azido, ciano, halogéneo, hidroxi, ceto, tiocarbonilo, carboxi, carboxialquilo, ariltio, heteroariltio, heterocicliltio, tiol, alquiltio, arilo, ariloxi, heteroarilo, aminossulfonilo, aminocarbonilamino, heteroariloxi, heterociclilo, heterociclo-oxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquilo, -SO-arilo, -SO-heteroarilo, -S02-alquilo, -S02-arilo e -S02-heteroarilo. A menos que restrito de outro modo pela definição, todos os substituintes podem opcionalmente estar adicionalmente substituídos com 1-3 substituintes seleccionados entre alquilo, carboxi, carboxialquilo, aminocarbonilo, hidroxi, alcoxi, halogéneo, CF3, amino, amino substituído, ciano e -S(0)nR, onde R é alquilo, arilo ou heteroarilo e n é 0, 1 ou 2. 0 termo "tiol" refere-se ao grupo -SH. A expressão "alquiltio substituído" refere-se ao grupo -S-alquilo substituído. O termo "heteroariltiol" refere-se ao grupo -S-heteroarilo em que o grupo heteroarilo é como acima definido incluindo grupos heteroarilo opcionalmente substituídos como também definido acima. 19 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ο termo "sulfóxido" refere-se ao grupo -S(0)R, em que R é alquilo, arilo ou heteroarilo. "Sulfóxido substituído" refere-se ao grupo -S(0)R, em que R é alquilo substituído, arilo substituído ou heteroarilo substituído, como aqui definido. 0 termo "sulfono" refere-se ao grupo -S(0)2R/ em que R é alquilo, arilo ou heteroarilo. "Sulfono substituído" refere-se ao grupo -S(0)2R/ em que R é alquilo substituído, arilo substituído ou heteroarilo substituído, como aqui definido. 0 termo "ceto" refere-se ao grupo -C(0)-. 0 termo "tiocarbonilo" refere-se ao grupo -C(S)-. 0 termo "carboxi" refere-se ao grupo -C(0)-0H. "Opcional" ou "opcionalmente" significam que o evento ou circunstância subsequentemente descritos podem ou não ocorrer, e que a descrição inclui os casos em que os referidos evento ou circunstância ocorrem e os casos em que não ocorrem.

Na expressão "composto de Fórmula I e Fórmula II" pretende-se abranger os compostos utilizados na invenção conforme divulgada, e os sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos, hidratos e polimorfos desses compostos. Adicionalmente, os compostos utilizados na invenção podem possuir um ou mais centros assimétricos, e podem ser produzidos na forma de uma mistura racémica ou na forma de enantiómeros ou diastereoisómeros individuais. 0 número de estereoisómeros presentes em qualquer composto de Fórmula I determinado depende do número de centros assimétricos presentes (existem 2n estereoisómeros possíveis, onde n é o número de centros assimétricos). Os estereoisómeros individuais podem ser obtidos por resolução de uma mistura racémica ou não racémica de um intermediário numa etapa apropriada da síntese ou por resolução do composto de Fórmula I por meios convencionais. Os estereoisómeros individuais (incluindo enantiómeros e diastereoisómeros individuais) assim como misturas racémicas e não racémicas de estereoisómeros, estão abrangidos no âmbito da presente 20 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ invenção, pretendendo-se que todos estejam representados pelas estruturas do presente fascículo a menos que de outro modo especificamente indicado.

Os "isómeros" são compostos diferentes que possuem a mesma fórmula molecular.

Os "estereoisómeros" são isómeros que diferem apenas no modo como os átomos estão disposto no espaço.

Os "enantiómeros" são um par de estereoisómeros que são imagens no espelho não sobreponíveis um do outro. Uma mistura 1:1 de um par de enantiómeros é uma mistura "racémica". O sinal "(±)" é utilizado para designar uma mistura racémica onde apropriado.

Os "diastereoisómeros" são estereoisómeros que possuem pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens no espelho um do outro. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema R-S de Cahn-Ingold-Prelog. Quando o composto é um enantiómero puro a estereoquímica em cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Os compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida são designados por (+) ou (-) dependendo da direcção (dextro- ou levo-rotatória) para que rodam o plano da luz polarizada ao comprimento de onda da linha D do sódio. "Administração tópica" será definida como a entrega do agente terapêutico na superfície da ferida e epitélio adj acente. "Administração parentérica" é a entrega sistémica do agente terapêutico através de injecção ao paciente. A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade de um composto de Fórmula I que é suficiente para efectuar o tratamento, como se define adiante, quando administrada a um mamífero com necessidade desse tratamento. A quantidade terapeuticamente eficaz variará dependendo da actividade específica do agente terapêutico que 21 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ se está a utilizar, do tipo de ferida (mecânica ou térmica, de espessura total ou parcial, etc.), da dimensão da ferida, da profundidade da ferida (se de espessura total), da ausência ou presença de infecção, do tempo decorrido desde a inflicção da lesão e da idade, condição fisica, existência de outros estados de doença e estado nutricional do paciente.

Adicionalmente, outra medicação que o paciente possa estar a receber irá determinar a quantidade terapeuticamente eficaz do agente terapêutico a administrar.

Os termos "tratamento" ou "tratar" significam qualquer tratamento de uma doença num mamifero, incluindo: (i) prevenção da doença, ou seja, fazer com que os sintomas clinicos da doença não se desenvolvam; (ii) inibição da doença, ou seja, paragem do desenvolvimento de sintomas clinicos; e/ou (iii) alivio da doença, ou seja, provocar a regressão de sintomas clinicos.

Em muitos casos, os compostos utilizados na presente invenção são capazes de formar sais de ácidos e/ou bases em virtude da presença de grupos amino e/ou carboxilo ou grupos seus similares. A expressão "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a sais que retêm a eficácia biológica e as propriedades dos compostos de Fórmula I, e que não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis. Os sais de adição de bases farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados a partir de bases inorgânicas e orgânicas. Os sais derivados de bases inorgânicas, incluem, a título de exemplo apenas, sais de sódio, potássio, lítio, amónio, cálcio e magnésio. Os sais derivados de bases orgânicas incluem, mas não se lhes limitando, sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, tais como alquilaminas, dialquilaminas, trialquilaminas, alquilaminas substituídas, di(alquil substituído)aminas, tri(alquil substituído)aminas, alcenilaminas, dialcenilaminas, trialcenilaminas, alcenilaminas substituídas, di(alcenil substituído)aminas, tri(alcenil substituído)aminas, cicloalquilaminas, di(cicloalquil)aminas, tri(cicloalquil)aminas, cicloalquilaminas substituídas, cicloalquilaminas dissubstituídas, cicloalquilaminas trissubstituídas, cicloalcenilaminas, di(cicloalcenil)aminas, 22 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ tri(cicloalcenil)aminas, cicloalcenilaminas substituídas, cicloalcenilaminas dissubstituídas, cicloalcenilaminas trissubstituídas, arilaminas, diarilaminas, triarilaminas, heteroarilaminas, di-heteroarilaminas, tri-heteroarilaminas, aminas heterocíclicas, aminas di-heterocíclicas, aminas tri-heterocíclicas, di- e tri-aminas mistas onde pelo menos dois dos substituintes na amina são diferentes e são seleccionados do grupo que consiste em alquilo, alquilo substituído, alcenilo, alcenilo substituído, cicloalquilo, cicloalquilo substituído, cicloalcenilo, cicloalcenilo substituído, arilo, heteroarilo, heterocíclico, e similares. Estão também incluídas aminas onde os dois ou três substituintes, juntamente com o azoto do amino, formam um grupo heterocíclico ou heteroarilo.

Os exemplos específicos de aminas adequadas incluem, a título de exemplo apenas, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, tri(isopropil)amina, tri(n-propil)amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glucosamina, N-alquilglucaminas, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, morfolina, N-etilpiperidina, e similares.

Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados a partir de ácidos inorgânicos e orgânicos. Os sais derivados de ácidos inorgânicos incluem os de ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e similares. Os sais derivados de ácidos orgânicos incluem os de ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p- toluenossulfónico e ácido salicílico. meios para

Como aqui se utiliza, "transportador farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotónicos e retardadores da absorção. A utilização destes meios e agentes para substâncias 23 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ farmaceuticamente activas é bem conhecida na especialidade. Excepto na medida em que qualquer meio ou aqente convencionais sejam incompatíveis com o ingrediente activo, a sua utilização nas composições terapêuticas está contemplada. Ingredientes activos suplementares podem também ser incorporados nas composições.

Nomenclatura A denominação e a numeração dos compostos utilizados na invenção estão ilustradas por um composto representativo de Fórmula I em que R1 é n-propilo, R2 é n-propilo, R3 é hidrogénio, X é fenileno, Y é -0-(CH2) e Z é 5-(2-metoxifenil) [1,2,4] oxadiazol-3-ilo,

que é denominado: 8-{4-[5-(2-metoxifenil)[1,2,4]oxadiazol-3-ilmetoxi]fenil}-1,3-dipropil-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona. A utilização da invenção A presente invenção refere-se a um antagonista do receptor de adenosina A2B possuindo a estrutura de Fórmula I ou II em métodos de aumento da cicatrização de feridas. A ferida a tratar pode ser provocada por meios mecânicos, químicos ou térmicos. A ferida pode ser uma contusão, uma incisão ou uma laceração. A ferida pode também ser o resultado de uma incisão cirúrgica. Alternativamente, a ferida pode estar associada a uma doença ou desordem, tal como a diabetes onde a ferida pode tomar a forma de uma úlcera diabética. 0 antagonista do receptor de adenosina A2B pode ser administrado topicamente ou sistemicamente mas será geralmente administrado topicamente no local da ferida. Esta administração tópica pode ser na forma de uma dose única ou na forma de doses repetidas dadas em múltiplos e designados intervalos. Será prontamente notado pelos peritos na 24 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ especialidade que ο regime de dosagem preferido irá variar com o tipo e com a gravidade da lesão a tratar.

Quando administrada sistemicamente, uma quantidade terapeuticamente eficaz do antagonista do receptor de adenosina A2b é entregue pela via parentérica, i.e. por injecção subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intraperitoneal. 0 tratamento da ferida por injecção parentérica pode envolver uma administração única, múltiplas administrações ou administração continua do agente terapêutico, dependendo de vários factores, incluindo o tipo, a gravidade e a localização da lesão.

As formulações farmacêuticas

Numa concretização preferida, o antagonista do receptor de adenosina A2B é incorporado numa formulação farmacêutica contendo um transportador farmaceuticamente aceitável que é genericamente adequado para administração tópica do fármaco e compreendendo qualquer destes materiais conhecidos na especialidade. Os transportadores adequados são bem conhecidos dos peritos na especialidade e a selecção do transportador irá depender da forma da formulação farmacêutica pretendida, e.g., na forma de um unguento, uma loção, um creme, uma espuma, uma microemulsão, um gel, um óleo, uma solução, um spray, um bálsamo, e pode ser constituído por materiais de ocorrência natural ou sintéticos. Entenda-se que o transportador seleccionado não deverá afectar adversamente o antagonista do receptor de adenosina A2B ou outros componentes da formulação farmacêutica.

Os transportadores adequados para estes tipos de formulações incluem, mas não se lhes limitando, veículos incluindo creme de Shephard's”, Aquaphor” e loção Cetaphil™. Outros transportadores preferidos incluem bases de unguento, e.g., polietilenoglicol-1000 (PEG-1000), cremes convencionais tais como creme HEB, géis, assim como vaselina. Os exemplos de transportadores adequados para utilização na invenção incluem água, álcoois e outros solventes orgânicos não tóxicos, glicerina, parafina, silicone, vaselina, lanolina, ácidos gordos, óleos vegetais, parabenos, ceras. São particularmente aqui preferidas formulações que são unguentos, loções, cremes, microemulsões e géis incolores, inodoros. 25 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

Os unguentos são preparações semi-sólidas que são tipicamente baseadas em vaselina ou outros derivados de petróleo. A base de unguento especifica a utilizar, como será notado pelos peritos na especialidade, é uma que vá proporcionar a entrega óptima do fármaco, e, preferivelmente, vá proporcionar também outras caracteristicas desejadas, e.g., emolientes. Tal como com outros transportadores ou veículos, uma base de unguento deverá ser inerte, estável, não irritante e não sensibilizante. Como explicado em Remington's Pharmaceutic Sciences, 20th Ed. (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 2000), as bases de unguento podem ser agrupadas em quatro classes: bases oleaginosas; bases emulsionáveis; bases de emulsão; e bases solúveis em água. As bases de unguento oleaginosas incluem, por exemplo, óleos vegetais, gorduras obtidas de animais e hidrocarbonetos semi-sólidos obtidos do petróleo. As bases de unguento emulsionáveis, também conhecidas como bases de unguento absorventes, contêm pouca ou nenhuma água e incluem, por exemplo, sulfato de hidroxiestearina, lanolina anidra e vaselina hidrófila. As bases de unguento de emulsão são emulsões de água-em-óleo (A/O) ou emulsões de óleo-em-água (O/A), e incluem, por exemplo, álcool cetílico, monoestearato de glicerilo, lanolina e ácido esteárico. As bases de unguento solúveis em água preferidas são preparadas a partir de polietilenoglicóis (PEG) de vários pesos moleculares; novamente, pode fazer-se referência a Remington's, supra, para mais informação.

As loções são preparações para serem aplicadas na superfície da pele sem fricção, e são tipicamente preparações líquidas ou semi-líquidas em que partículas sólidas, incluindo o agente activo, estão presentes numa base de água ou álcool. As loções são usualmente suspensões de sólidos, e preferivelmente, para os presentes fins, compreendem uma emulsão oleosa líquida do tipo óleo-em-água. As loções são formulações aqui preferidas para o tratamento de grandes áreas corporais, devido à facilidade de aplicação de uma composição mais fluida. É geralmente necessário que a matéria insolúvel numa loção esteja finamente dividida. As loções conterão tipicamente agentes de suspensão para produzir melhores dispersões assim como compostos úteis para localizar e manter o agente activo em contacto com a pele, e.g., metilcelulose, 26 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ carboximetilcelulose sódica. Uma formulação de loção particularmente preferida para utilização em conjunto com a presente invenção contém propilenoglicol misturado com uma vaselina hidrófila tal como a que se pode obter com a marca registada Aquaphor™ de Beiersdorf, Inc. (Norwalk, Conn.)·

Os cremes contendo o agente activo são, como é conhecido na especialidade, emulsões viscosas liquidas ou semi-sólidas, de óleo-em-água ou de água-em-óleo. As bases de cremes são laváveis com água, e contêm uma fase oleosa, um emulsionante, e uma fase aquosa. A fase oleosa é geralmente constituída por vaselina e um álcool gordo tal como álcool cetilico ou estearilico; a fase aquosa usualmente, embora não necessariamente, excede a fase oleosa em volume, e geralmente contém um humectante. 0 emulsionante numa formulação de creme, como explicado em Remington's, supra, é geralmente um tensioactivo não iónico, aniónico, catiónico ou anfotérico.

As microemulsões são dispersões termodinamicamente estáveis, isotropicamente limpas de dois líquidos imisciveis, tais como óleo e água, estabilizadas por um filme interfacial de moléculas de tensioactivo (Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (New York: Mareei Dekker, 1992), volume 9). Para a preparação de microemulsões, são necessários um tensioactivo (emulsionante), um co-tensioactivo (co-emulsionante), uma fase oleosa e uma fase de água. Os tensioactivos adequados incluem quaisquer tensioactivos que sejam úteis na preparação de emulsões, e.g., emulsionantes que são tipicamente utilizados na preparação de cremes. 0 co-tensioactivo (ou "co-emulsionante") é geralmente seleccionado entre o grupo de derivados de poliglicerol, derivados de glicerol e álcoois gordos. As combinações preferidas de emulsionante/co-emulsionante são geralmente, embora não necessariamente, seleccionadas do grupo que consiste em: monoestearato de glicerilo e estearato de polioxietileno; polietilenoglicol e palmitoestearato de etilenoglicol; e triglicéricos caprílicos e cápricos e macrogolglicéridos de oleoílo. A fase de água inclui não apenas água mas também, tipicamente, tampões, glucose, propilenoglicol, polietilenoglicóis, preferivelmente polietilenoglicóis de menor peso molecular (e.g., PEG 300 e PEG 400), e/ou glicerol, enquanto a fase oleosa compreenderá geralmente, por exemplo, ésteres de ácidos gordos, óleos 27 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ vegetais modificados, óleos de silicone, misturas de mono-, di- e triglicéricos, mono- e di-ésteres de PEG (e.g., glicéridos de oleoilmacrogol), etc.

As formulações de gel são sistemas semi-sólidos gue consistem em suspensões de particulas inorgânicas peguenas (sistemas de duas fases) ou moléculas orgânicas grandes distribuídas de modo substancialmente uniforme em todo um líquido transportador (géis de fase única) . Os géis de fase única podem ser preparados, por exemplo, combinando o agente activo, um líquido transportador e um agente gelificante adequado tal como goma adragante (2 a 5%) , alginato de sódio (2-10%), gelatina (2-15%), metilcelulose (3-5%), carboximetilcelulose sódica (2-5%), carbómero (0,3-5%) ou poli (álcool vinílico) (10-20%) conjuntamente e misturando até ser produzido um produto semi-sólido característico. Outros agentes gelificantes adequados incluem metil-hidroxicelulose, polioxietileno-polioxipropileno, hidroxietilcelulose e gelatina. Embora os géis normalmente empreguem líquidos transportadores aquosos, podem também ser utilizados álcoois e óleos como líquido transportador. Vários aditivos, conhecidos dos peritos na especialidade, podem ser incluídos nas formulações tópicas da invenção. Os exemplos de aditivos incluem, mas não se lhes limitando, solubilizantes, potenciadores da permeação cutânea, opacificantes, conservantes (e.g., antioxidantes), agentes gelificantes, agentes tamponantes, tensioactivos (particularmente tensioactivos não iónicos e anfotéricos), emulsionantes, emolientes, agentes espessantes, estabilizantes, humectantes, corantes e fragrâncias. A inclusão de solubilizantes e/ou potenciadores da permeação cutânea é particularmente preferida, juntamente com emulsionantes, emolientes e conservantes.

Os exemplos de solubilizantes incluem, mas não se lhes limitando, os seguintes: éteres hidrófilos tais como monoetiléter de dietilenoglicol (etoxidiglicol, disponível comercialmente como Transcutol”) e oleato de monoetiléter de dietilenoglicol (disponível comercialmente como Softcutol”) ; derivados de polietileno e óleo de rícino tais como óleo de rícino polioxi 35, óleo de rícino hidrogenado polioxi 40, 28 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ etc.; polietilenoglicol, particularmente polietilenoglicóis de menor peso molecular tais como PEG 300 e PEG 400, e derivados de polietilenoglicol tais como glicéridos caprilicos/cápricos de PEG-8 (disponíveis comercialmente como Labrasol”) ; alquilmetilsulfóxidos tais como DMSO; pirrolidonas tais como 2-pirrolidona e N-metil-2-pirrolidona; e DMA. Muitos solubilizantes podem também actuar como potenciadores da absorção. Pode ser incorporado um único solubilizante na formulação ou pode ser incorporada uma mistura de solubilizantes.

Os emulsionantes e co-emulsionantes adequados incluem, sem limitação, os emulsionantes e co-emulsionantes descritos em relação às formulações de microemulsões. Os emolientes incluem, por exemplo, propilenoglicol, glicerol, miristato de isopropilo e propionato de miristiléter de polipropilenoglicol-2 (PPG-2).

Outros agentes activos podem também ser incluídos na formulação, e.g., agentes anti-inflamatórios, analgésicos, agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos, antibióticos, vitaminas, antioxidantes e agentes protectores solares vulgarmente encontrados em formulações de protectores solares incluindo, mas não se lhes limitando, antranilatos, benzofenonas (particularmente benzofenona-3), derivados de cânfora, cinamatos (e.g., metoxicinamato de octilo), dibenzoilmetanos (e.g., butilmetoxidibenzoílmetano), ácido p-aminobenzóico (PABA) e seus derivados e salicilatos (e.g., salicilato de octilo).

Nas formulações tópicas preferidas da invenção, o agente activo está presente numa quantidade na gama de 0,25% em peso a 75% em peso da formulação, preferivelmente na gama de 0,25% em peso a 30% em peso da formulação, mais preferivelmente na gama de 0,5% em peso a 15% em peso da formulação, e o mais preferivelmente na gama de 1,0% em peso a 10% em peso da formulação.

Também, a formulação farmacêutica pode ser esterilizada ou misturada com agentes auxiliares, e.g., conservantes, estabilizantes, agentes molhantes, tampões ou sais para influenciar a pressão osmótica. As soluções estéreis 29 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ injectáveis são preparadas incorporando o composto de Fórmula I ou Fórmula II na quantidade requerida no solvente apropriado com vários outros ingredientes conforme enumerado acima, conforme requerido, seguindo-se esterilização por filtração. Geralmente, as dispersões são preparadas incorporando os vários ingredientes activos esterilizados num veiculo estéril que contém o meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários dos enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções estéreis injectáveis, os métodos de preparação preferidos são as técnicas de secagem a vácuo e criodessecagem que produzem um pó do ingrediente activo mais quaisquer ingredientes adicionais desejados a partir da sua solução previamente esterilizada por filtração.

Os antagonistas dos receptores de adenosina A2B

Quaisquer antagonistas de receptores de adenosina A2B possuindo a estrutura de Fórmula I ou II podem ser utilizados de acordo com a invenção. São conhecidos na especialidade numerosos métodos para determinar de um composto especifico possui essa actividade. Por exemplo, um artigo de revisão de Feoktistov e Baggioni, (Pharmacological Reviews 49, 381-402 (1997)) relata a afinidade de ligação de oito agonistas e oito antagonistas de receptores de adenosina para todos os quatro subtipos de receptores de adenosina. As referências ai citadas proporcionam descrições detalhadas dos procedimentos utilizados. (Robeva A.S., Woodward R.L., Jin X. e Gao Z., Linden J. Drug Dev. Res 39:243-252 (1996); Jacobson K.A. e

Suzuki F. Drug Dev. Res. 39, 289-300, (1996); Feoktistov, L e

Baggioni, L, Molecular Pharmacology 43, 909-914 (1993)). Os métodos eficazes para a determinação da afinidade de ligação de um composto para com um receptor utilizam um agonista ou antagonista radiomarcado e a correlação da ligação desse composto a uma fracção de membrana que se sabe conter esse receptor; por exemplo, para determinar se um composto é um antagonista de A2B, a fracção de membrana conterá o receptor de adenosina A2B. Outro procedimento particularmente eficaz para determinar se um composto é um antagonista de A2B é relatado na Patente U.S. 5,854,081.

Os compostos selectivos para o subtipo de receptores A2b são portanto preferidos para a presente invenção. Os compostos 30 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ que antagonizam outros receptores em adição ao receptor A2b são também adequados para utilização na presente invenção.

Parâmetros da Reacção de Síntese

As expressões "solvente", "solvente orgânico inerte" ou "solvente inerte" significam um solvente inerte sob as condições da reacção descritas em conjunto com ele [incluindo, por exemplo, benzeno, tolueno, acetonitrilo, tetra-hidrofurano ("THF"), dimetilformamida ("DMF"), clorofórmio, cloreto de metileno (ou diclorometano) , éter dietilico, metanol, piridina]. A menos que especificado em contrário, os solventes utilizados nas reacções aqui descritas são solventes orgânicos inertes, e as reacções são realizadas sob um gás inerte, preferivelmente azoto. 0 termo "q.s." significa a adição de uma quantidade suficiente para se atingir uma função estipulada, e.g., para levar uma solução a um volume pretendido (i.e., 100%).

Síntese dos Compostos de Fórmula I e II

Um método preferido de preparação de compostos de Fórmula I ou II onde R3 é hidrogénio está apresentado no Esquema Reaccional I.

ESQUEMA. REACCIONAL I

R1 (?) (D o

Fórmula I

Passo 1 - Preparação de Fórmula (2) 0 composto de Fórmula (2) é preparado a partir do composto de Fórmula (1) através de um passo de redução. Podem 31 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ utilizar-se as técnicas convencionais de redução, por exemplo utilizando ditionito de sódio em solução aquosa de amónia; preferivelmente, a redução é realizada com hidrogénio e um catalisador metálico. A reacção é realizada num solvente inerte, por exemplo metanol, na presença de um catalisador, por exemplo catalisador de paládio a 10% sobre carbono, sob uma atmosfera de hidrogénio, preferivelmente sob pressão, por exemplo a 30 psi, durante 2 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (2) é isolado por meios convencionais para proporcionar um composto de Fórmula (2).

Passo 2 - Preparação de Fórmula (3) O composto de Fórmula (2) é então feito reagir com um ácido carboxilico com a fórmula Z-Y-X-CO2H na presença de uma carbodiimida, por exemplo cloridrato de 1-(3- dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. A reacção é conduzida num solvente prótico, por exemplo metanol, etanol, propanol, preferivelmente metanol, a uma temperatura de 20-30°C, preferivelmente à temperatura ambiente, durante 12-48 horas, preferivelmente 16 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (3) é isolado convencionalmente, por exemplo por remoção do solvente sob pressão reduzida, e lavagem do produto. Alternativamente, o passo seguinte pode ser realizado sem qualquer purificação adicional.

Preparação Alternativa de um Composto de Fórmula (3)

Alternativamente, o ácido carboxilico com a fórmula Z-Y-X-C02H é primeiro convertido num halogeneto ácido com a fórmula Z-Y-X-C(0)L, onde L é cloro ou bromo, por reacção com um agente halogenante, por exemplo cloreto de tionilo ou brometo de tionilo, preferivelmente cloreto de tionilo. Alternativamente, podem utilizar-se cloreto de oxalilo, pentacloreto de fósforo ou oxicloreto de fósforo. A reacção é preferivelmente conduzida na ausência de um solvente, utilizando excesso de agente halogenante, por exemplo a uma temperatura de 60-80°C, preferivelmente a 70°C, durante 1-8 horas, preferivelmente 4 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de fórmula Z-Y-X-C(0)L é isolado convencionalmente, por exemplo por remoção do excesso de agente halogenante sob pressão reduzida. 32 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ο produto é então feito reagir com um composto de Fórmula (2) num solvente inerte, por exemplo acetonitrilo, na presença de uma base terciária, por exemplo trietilamina. A reacção é conduzida a uma temperatura inicial de 0°C, e depois é deixada aquecer para 20-30°C, preferivelmente à temperatura ambiente, durante 12-48 horas, preferivelmente 16 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (3) é isolado convencionalmente, por exemplo por diluição da mistura reaccional com água, remoção do produto por filtração e lavagem do produto com água seguida de éter.

Passo 3 - Preparação de Fórmula I 0 composto de Fórmula (3) é então convertido num composto de Fórmula I através de uma reacção de ciclização. A reacção é conduzida num solvente prótico, por exemplo metanol, etanol e propanol, preferivelmente metanol, na presença de uma base, por exemplo hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, metóxido de sódio, etóxido de sódio, t-butóxido de potássio, preferivelmente hidróxido de sódio aquoso, a uma temperatura de 50-80°C, preferivelmente 80°C, durante 1-8 horas, preferivelmente 3 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula I é isolado convencionalmente, por exemplo por remoção do solvente sob pressão reduzida, acidificação do resíduo com um ácido aquoso, remoção do produto por filtração, e depois lavagem e secagem do produto. 0 composto de Fórmula (1) pode ser preparado por vários métodos. Um método preferido é apresentado no Esquema Reaccional II. 33 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

ESQUEMA REACCIONAL II

Passo 1 - Preparação de Fórmula (5) 0 composto de Fórmula (4) está comercialmente disponível ou é preparado por meios bem conhecidos na especialidade. É feito reagir com cianoacetato de etilo num solvente prótico, por exemplo etanol, na presença de uma base forte, por exemplo etóxido de sódio. A reacção é realizada à temperatura de refluxo, durante 4 a 24 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o composto de Fórmula (5) assim produzido é isolado convencionalmente.

Passos 2 e 3 - Preparação de Fórmula (7) 0 composto de Fórmula (5) é feito reagir com o dimetilacetal de N,N-dimetilformamida num solvente polar, por exemplo N,N-dimetilformamida. A reacção é realizada a 40°C, durante 1 hora. Quando a reacção está substancialmente completa, o composto de Fórmula (6) assim produzido é feito reagir com um composto de fórmula R1Hal, onde Hal é cloro, bromo ou iodo, na presença de uma base, por exemplo carbonato de potássio. A reacção é realizada a 80°C, durante 4-24 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (7) é isolado convencionalmente, por exemplo por evaporação dos solventes sob pressão reduzida, e o resíduo é utilizado na reacção seguinte sem purificação adicional.

Passo 4 - Preparação de Fórmula (8)

0 composto de Fórmula (7) é feito reagir com amónia aquosa num solvente polar, por exemplo suspenso em metanol. A 34 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ reacção é realizada à temperatura ambiente, durante 1-3 dias. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (8) é isolado convencionalmente, por exemplo por cromatografia sobre uma coluna de silica-gel, eluindo, por exemplo, com uma mistura de diclorometano/metanol.

Passo 5 - Preparação de Fórmula (1) 0 composto de Fórmula (8) é então misturado com nitrito de sódio num solvente ácido aquoso, preferivelmente ácido acético e água, por exemplo ácido acético a 50%/água. A reacção é realizada a uma temperatura de 50-90°C, preferivelmente 70°C, durante 1 hora. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (1) é isolado por meios convencionais.

Alternativamente, a reacção pode ser conduzida num solvente aquoso, por exemplo dimetilformamida e água, e a reacção ser com um ácido forte, por exemplo ácido clorídrico.

Um composto de Fórmula (8) pode ser preparado a partir de um composto de Fórmula (10) utilizando um método similar, como apresentado no Esquema Reaccional IIA.

ESQUEMA REACCIONAL IIA

Passos 2 e 3 - Preparação de Fórmula (7) 0 composto de Fórmula (10) é feito reagir com o dimetilacetal de N, N-dimetilformamida num solvente polar, por exemplo N,N-dimetilformamida. A reacção é realizada a 40°C, durante 1 hora. Quando a reacção está substancialmente 35 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ completa, ο composto de Fórmula (6a) assim produzido é feito reagir com um composto de fórmula R2Hal, onde Hal é cloro, bromo ou iodo, na presença de uma base, por exemplo carbonato de potássio. A reacção é realizada a 80°C, durante 4-24 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (7) é isolado convencionalmente, por exemplo por evaporação dos solventes sob pressão reduzida, e o residuo é utilizado na reacção seguinte sem purificação adicional.

Passo 4 - Preparação de Fórmula (8) 0 composto de Fórmula (7) é feito reagir com amónia aquosa num solvente polar, por exemplo suspendo em metanol. A reacção é realizada à temperatura ambiente, durante 1-3 dias. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (8) é isolado convencionalmente, por exemplo por cromatografia sobre uma coluna de silica-gel, eluindo, por exemplo, com uma mistura de diclorometano/metanol. 0 composto de Fórmula (3) pode também ser preparado por vários métodos. Um método preferido está apresentado no Esquema Reaccional III.

ESQUEMA. REACCIONAL III

Passo 1 - Preparação de Fórmula (10) 0 composto comercialmente disponível 6-aminouracilo é primeiro sililado, por exemplo por reacção com excesso de hexametildissilazano como solvente na presença de um catalisador, por exemplo sulfato de amónio. A reacção é realizada próximo da temperatura de refluxo, durante 1- 36 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 10 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o composto sililado assim produzido é isolado convencionalmente, e depois é feito reagir com um composto de fórmula R1Hal, onde Hal é cloro, bromo ou iodo, preferivelmente na ausência de um solvente. A reacção é realizada em refluxo, durante 4-48 horas, preferivelmente 12-16 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (10) é isolado por meios convencionais.

Passo 2 - Preparação de Fórmula (11) O composto de Fórmula (10) é então dissolvido num ácido aquoso, por exemplo ácido acético aquoso, e é feito reagir com nitrito de sódio. A reacção é realizada a uma temperatura de 20-50°C, preferivelmente 30°C, ao longo de 30 minutos. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (11) é isolado por meios convencionais, por exemplo por filtração.

Passo 3 - Preparação de Fórmula (12) O composto de Fórmula (11) é então reduzido a um derivado diamino. Em geral, o composto de Fórmula (11) é dissolvido em amónia aquosa, e depois adiciona-se um agente redutor, por exemplo hidrossulfito de sódio. A reacção é conduzida a uma temperatura de 70°C. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (12) é isolado convencionalmente, por exemplo por filtração da mistura reaccional arrefecida.

Passo 4 - Preparação de Fórmula (13) O composto de Fórmula (12) é então feito reagir com um ácido carboxilico com a fórmula Z-Y-X-CCqH na presença de uma carbodiimida, por exemplo cloridrato de 1- (3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. A reacção é conduzida a uma temperatura de 20-30°C, durante 12-48 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (13) é isolado convencionalmente, por exemplo por filtração da mistura reaccional arrefecida.

Alternativamente, o ácido carboxilico com a fórmula Z-Y-X-CO2H é convertido num halogeneto ácido com a fórmula Z-Y-X-C (O) L, onde L é cloro ou bromo, por reacção com um 37 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ agente halogenante, por exemplo cloreto de tionilo ou brometo de tionilo; alternativamente, podem utilizar-se pentacloreto de fósforo ou oxicloreto de fósforo. A reacção é preferivelmente conduzida na ausência de um solvente, utilizando excesso de agente halogenante, por exemplo a uma temperatura de 60-80°C, preferivelmente 70°C, durante 1-8 horas, preferivelmente 4 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de fórmula Z-Y-X-C(0)L é isolado convencionalmente, por exemplo por remoção do excesso de agente halogenante sob pressão reduzida. 0 produto com a fórmula Z-Y-X-C(0)L é então feito reagir com um composto de Fórmula (12) num solvente inerte, por exemplo acetonitrilo, na presença de uma base terciária, por exemplo trietilamina. A reacção é conduzida a uma temperatura inicial de 0°C, e depois é deixada aguecer para 20-30°C, preferivelmente à temperatura ambiente, durante 12-48 horas, preferivelmente 16 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (13) é isolado convencionalmente, por exemplo por diluição da mistura reaccional com água, remoção do produto por filtração, e lavagem do produto com água seguida de éter.

Passo 5 - Preparação de Fórmula (3) 0 composto de Fórmula (13) é feito reagir com um composto de fórmula R2Hal, onde Hal é cloro, bromo ou iodo, na presença de uma base, por exemplo carbonato de potássio. A reacção é realizada à temperatura ambiente, durante 4-24 horas, preferivelmente 16 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (3) é isolado convencionalmente, por exemplo por evaporação dos solventes sob pressão reduzida, e o residuo pode ser purificado convencionalmente ou pode ser utilizado na reacção seguinte sem purificação adicional.

Outro método de preparação de um composto de Fórmula (3) é apresentado no Esquema Reaccional IV. 38 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

ESQUEMA REACCIONAL IV

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Passo 1 - Preparação de Fórmula (14) 0 composto de Fórmula (5) é misturado com nitrito de sódio num solvente ácido aquoso, preferivelmente ácido acético e água, por exemplo ácido acético a 50%/água. A reacção é realizada a uma temperatura de 50-90°C, preferivelmente 70°C, durante 1 hora. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (14) é isolado por meios convencionais.

Alternativamente, a reacção pode ser conduzida num solvente aquoso, por exemplo dimetilformamida e água, e a reacção é com um ácido forte, por exemplo ácido clorídrico.

Passo 2 - Preparação de Fórmula (15) 0 composto de Fórmula (14) é então reduzido a um derivado diamino. Em geral, o composto de Fórmula (14) é dissolvido em amónia aquosa, e depois adiciona-se um agente redutor, por exemplo hidrossulfito de sódio. A reacção é conduzida a uma temperatura de 70°C. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (15) é isolado convencionalmente, por exemplo por filtração da mistura reaccional arrefecida.

Passo 3 - Preparação de Fórmula (16) O composto de Fórmula (15) é então feito reagir com um ácido carboxílico com a fórmula Z-Y-X-CO2H na presença de uma 39 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ carbodiimida, por exemplo cloridrato de 1—(3 — dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. A reacção é conduzida a uma temperatura de 20-30°C, durante 12-48 horas, num solvente inerte, por exemplo metanol. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (16) é isolado convencionalmente, por exemplo por filtração da mistura reaccional arrefecida.

Alternativamente, o ácido carboxilico com a fórmula Z-Y-X-CO2H é convertido num halogeneto ácido com a fórmula Z-Y-X-C(0)L, onde L é cloro ou bromo, por reacção com um agente halogenante, por exemplo cloreto de tionilo ou brometo de tionilo; alternativamente, podem-se utilizar pentacloreto de fósforo ou oxicloreto de fósforo. A reacção é preferivelmente conduzida na ausência de um solvente, utilizando excesso de agente halogenante, por exemplo a uma temperatura de 60-80°C, preferivelmente 70°C, durante 1-8 horas, preferivelmente 4 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de fórmula Z-Y-X-C(0)L é isolado convencionalmente, por exemplo por remoção do excesso de agente halogenante sob pressão reduzida. 0 produto com a fórmula Z-Y-X-C(0)L é então feito reagir com um composto de Fórmula (15) num solvente inerte, por exemplo acetonitrilo, na presença de uma base terciária, por exemplo trietilamina. A reacção é conduzida a uma temperatura inicial de 0°C, e depois é deixada aquecer para 20-30°C, preferivelmente à temperatura ambiente, durante 12-48 horas, preferivelmente 16 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (16) é isolado convencionalmente, por exemplo por diluição da mistura reaccional com água, remoção do produto por filtração, e lavagem do produto com água seguida de éter.

Passo 4 - Preparação de Fórmula (3) O composto de Fórmula (16) é feito reagir com um composto de fórmula í^Hal, onde Hal é cloro, bromo ou iodo, na presença de uma base, por exemplo carbonato de potássio. A reacção é realizada a 80°C, durante 4-24 horas, preferivelmente 16 horas. Quando a reacção está substancialmente completa, o produto de Fórmula (3) é isolado convencionalmente, por exemplo por evaporação dos solventes sob pressão reduzida, e o 40 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ resíduo pode ser purificado convencionalmente ou pode ser utilizado na reacção seguinte sem purificação adicional.

Um exemplo de uma síntese de um composto de Z-Y-X-CO2H em que X é pirazol-1,4-ilo, Y é metileno e Z é 3-trifluorometilfenilo, é apresentado no Esquema Reaccional V.

ESQUEMA REACCIONAL V

Pirazolo-4-carboxilato de etilo é feito reagir com 1-(bromometil)-3-(trifluorometil)benzeno em acetona na presença de carbonato de potássio. O produto, 1—{[3— (trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxilato de etilo, é então hidrolizado com hidróxido de potássio em metanol, para proporcionar o ácido 1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}-pirazolo-4-carboxílico.

Utilidade, Teste e Administração

Utilidade Geral

Os compostos possuindo a estrutura de Fórmula I ou II e as composições farmacêuticas da invenção são eficazes no aumento da cicatrização de feridas.

Teste O teste da actividade é conduzido como descrito nas patentes e pedidos de patente referidos acima, e nos Exemplos que se seguem, e por métodos evidentes para os peritos na especialidade. 41 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

Os exemplos que se seguem são incluídos para demonstrar as concretizações preferidas da invenção. Os peritos na especialidade deverão notar que as técnicas divulgadas nos exemplos que se seguem representam técnicas que o inventor verificou funcionarem bem na prática da invenção, e assim podem ser consideradas como constituindo modos preferidos para a sua prática. EXEMPLO 1

Preparação de um Composto de Fórmula (5) A. Preparação de um Composto de Fórmula (5) em que R2 é Etilo

Preparou-se uma solução de etóxido de sódio a partir de sódio (4,8 g, 226 mmol) e etanol seco (150 ml). A esta solução adicionou-se amino-N-etilamida (10 g, 113 mmol) e cianoacetato de etilo (12,8 g, 113 mMol). Agitou-se esta mistura reaccional em refluxo durante 6 horas, arrefeceu-se, e removeu-se o solvente da mistura reaccional sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em água (50 ml) , e ajustou-se o pH a 7 com ácido clorídrico. Deixou-se a mistura em repouso durante a noite a 0°C, e removeu-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se ao ar, para proporcionar 6-amino-1-etil-l, 3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (5). 1H-RMN (DMSO-d6) δ 10,29 (s, 1H), 6,79 (s, 2H), 4,51 (s, 1H) , 3,74-3,79 (m, 2H) , 1,07 (t, 3H, J = 7,03 Hz); MS m/z 155,98 (M+) , 177, 99 (M+ +Na) B. Preparação de um Composto de Fórmula (5) em que R2 é Metilo

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo IA, mas substituindo a amino-N-etilamida por amino-N-metilamida, preparou-se 6-amino-l-metil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona. 42 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ C. Preparação de um Composto de Fórmula (5) variando R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo IA, mas substituindo a amino-N-etilamida por outros compostos de Fórmula (4), preparam-se outros compostos de Fórmula (5). EXEMPLO 2

Preparação de um Composto de Fórmula (6) A. Preparação de vim Composto de Fórmula (6) em que R2 é Etilo o

Aqueceu-se a 40°C durante 90 minutos uma suspensão de 6-amino-l-etil-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona (0,77 g, 5 mmol) em N,N-dimetilacetamida anidra (25 ml) e dimetilacetal de N,N-dimetilacetamida (2,7 ml, 20 mmol). Removeu-se então o solvente sob pressão reduzida, e triturou-se o resíduo com etanol, filtrou-se e lavou-se com etanol, para proporcionar a 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-1-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (6). 1H-RMN (DMSO-d6) δ 10,62 (s, 1H) , 8,08 (s, 1H) , 4,99 (s, 1H) , 3, 88-3, 95 (m, 2H) , 3,13 (s, 3H) , 2,99 (s, 3H) , 1,07 (t, 3H, J = 7,03 Hz); MS m/z 210,86 (M+) , 232,87 (M+ +Na) B. Preparação de um Composto de Fórmula (6) em que R2 é Metilo

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 2A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por 6-amino-l-metil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, preparou-se a 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-1-metil-l, 3-di-hidropirimidino-2,4-diona. C. Preparação de um Composto de Fórmula (6) variando R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 2A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona 43 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ por outros compostos de Fórmula (5), preparam-se outros compostos de Fórmula (6). EXEMPLO 3

Preparação de um Composto de Fórmula (7) A. Preparação de um Composto de Fórmula (7) em que R1 é n-Propilo e R2 é Etilo

Agitou-se a 80 °C durante 5 horas uma mistura de uma solução de 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-1-etil-l, 3-di-hidropirimidino-2,4-diona (1,5 g, 7,1 mmol) em dimetilformamida (25 ml), carbonato de potássio (1,5 g, 11 mmol) e iodeto de n-propilo (1,54 g, 11 mmol). Arrefeceu-se a mistura reaccional à temperatura ambiente, filtrou-se, evaporaram-se os solventes e utilizou-se o produto de Fórmula (7), 6-[2-(dimetilamino)-1- azavinil]-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, tal e qual, na reacção seguinte. B. Preparação de um Composto de Fórmula (7), variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 3A, mas substituindo a 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-1-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (6), prepararam-se os seguintes compostos de Fórmula (7): 6-(2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-metil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-metil-3-ciclopropilmetil-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-etil-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-metil-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; e 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-etil-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona. 44 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ C. Preparação de um Composto de Fórmula (7), variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 3A, mas substituindo a 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-1-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (6), prepararam-se outros compostos de Fórmula (7). EXEMPLO 4

Preparação de um Composto de Fórmula (8) A. Preparação de um Composto de Fórmula (8) em que R1 é n-Propilo e R2 é Etilo o

NHj

Dissolveu-se uma solução de 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona (2,1 g) numa mistura de metanol (10 ml) e solução aquosa de amónia a 28% (20 ml), e agitou-se durante 72 horas à temperatura ambiente. Removeu-se então o solvente sob pressão reduzida, e purificou-se o residuo por cromatografia numa coluna de sílica-gel, eluindo com uma mistura de diclorometano/metanol (15/1), para proporcionar 6-amino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (8). 1H-RMN (DMS0-d6) δ 6,80 (s, 2H) , 4,64 (s, 1H) , 3,79-3, 84 (m, 2H) , 3, 63-3, 67 (m, 2H) , 1,41-1,51 (m, 2H) , 1,09 (t, 3H, J = 7,03 Hz), 0,80 (t, 3H, J = 7,42 Hz); MS m/z 197,82 (M+) B. Preparação de um Composto de Fórmula (8), variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 4A, mas substituindo a 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-etil-3-propil-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (7), prepararam-se os seguintes compostos de Fórmula (8): 6-amino-l-metil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 45 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 6-amino-l-metil-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 6-amino-l-etil-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 6-amino-l-metil-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; e 6-amino-l-etil-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona. C. Preparação de um Composto de Fórmula (7) variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 4A, mas substituindo a 6-[2-(dimetilamino)-1-azavinil]-l-etil-3-propil-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (7), preparam-se outros compostos de Fórmula (8). EXEMPLO 5

Preparação de um Composto de Fórmula (1) A. Preparação de um Composto de Fórmula (1) em que R1 é n-Propilo e R2 é Etilo

A uma solução de 6-amino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona (1,4 g, 7,1 mmol) numa mistura de ácido acético a 50%/água (35 ml) adicionou-se nitrito de sódio (2 g, 28,4 mmol) em porções ao longo de um período de 10 minutos. Agitou-se a mistura a 70°C durante 1 hora, depois concentrou-se a mistura reaccional para um volume pequeno sob pressão reduzida. Removeu-se o sólido por filtração, e lavou-se com água, para proporcionar 6-amino-l-etil-5-nitroso-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (1). MS m/z 227,05 (M+) , 249, 08 (M+ +Na) 46 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Β. Preparação de vim Composto de Fórmula (1), variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 5A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona por outros compostos de Fórmula (8), prepararam-se os seguintes compostos de Fórmula (1): 6-amino-l-metil-5-nitroso-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 6-ammo-l-metil-3-ciclopropilmetil-5-nitroso-l, 3-di-hidro-pirimidino-2,4-diona; 6-amino-l-etil-3-ciclopropilmetil-5-nitroso-l,3-di-hidro-pirimidino-2,4-diona; 6-amino-l-metil-3-(2-metilpropil)-5-nitroso-l,3-di-hidro-pirimidino-2,4-diona; e 6-amino-l-etil-3-(2-metilpropil)-5-nitroso-l,3-di-hidro-pirimidino-2,4-diona. C. Preparação de um Composto de Fórmula (1) variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 5A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona por outros compostos de Fórmula (8), preparam-se outros compostos de Fórmula (1). EXEMPLO 6

Preparação de um Composto de Fórmula (2) A. Preparação de um Composto de Fórmula (2) em que R1 é n-Propilo e R2 é Etilo

A uma solução de 6-amino-l-etil-5-nitroso-3-propil-l, 3-di-hidropirimidino-2,4-diona (300 mg) em metanol (10 ml) adicionou-se catalisador de paládio a 10% sobre carbono (50 mg), e hidrogenou-se a mistura sob hidrogénio a 30 psi durante 2 horas. Filtrou-se a mistura através de celite, e 47 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ removeu-se ο solvente do filtrado sob pressão reduzida, para proporcionar 5, 6-diamino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino- 2,4-diona, um composto de Fórmula (2). MS m/z 213,03 (M+) , 235, 06 (M+ +Na) B. Preparação de um Composto de Fórmula (2), variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 6A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-5-nitroso-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (1), prepararam-se os seguintes compostos de Fórmula (2): 5.6- diamino-l-metil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; 5.6- diamino-l-metil-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona; 5.6- diamino-l-etil-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona; 5.6- amino-l-metil-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona; e 5.6- diammo-l-etil-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona. C. Preparação de um Composto de Fórmula (2) variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 6A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-5-nitroso-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (1), preparam-se outros compostos de Fórmula (2). EXEMPLO 7

Preparação de um Composto de Fórmula (3) A. Preparação de um Composto de Fórmula (3) em que R1 é n-Propilo, R2 é Etilo, X é 1,4-Pirazolilo, Y é Metileno e Z é 3-Trifluorometilfenilo

A uma mistura de 5,6-diamino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona (100 mg, 0,47 mmol) e ácido 1—{[3— 48 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ (trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxílico (0,151 g, 0,56 mmol) em metanol (10 ml) adicionou-se cloridrato de 1—(3 — dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,135 g, 0,7 mmol), e agitou-se a mistura reaccional durante a noite à temperatura ambiente. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, e purificou-se o resíduo utilizando Bistag, eluindo com metanol a 10%/cloreto de metileno, para proporcionar a N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il)) (1- { [3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida. 1H-RMN (DMSO-d6) δ 8,59 (s, 1H) , 8,02 (s, 1H) , 7,59-7,71 (m, 4H) , 6,71 (s, 2H) , 5,51 (s, 2H) , 3,91-3,96 (m, 2H) , 3,70-3,75 (m, 2H), 1,47-1,55 (m, 2H),1,14 (t, 3H, J = 7,03 Hz), 0,85 (t, 3H, J = 7,42 Hz).

B. Preparação de um Composto de Fórmula (3) , variando R1, R2, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 7A, mas opcionalmente substituindo a 5,6-diamino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (2), e opcionalmente substituindo o ácido 1 — { [3 — (trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxílico por outros compostos de fórmula Z-Y-X-C02H, prepararam-se os seguintes compostos de Fórmula (3): N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)-carboxamida; N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}-pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}-pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-etil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(1—{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; 49 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ν-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(1—{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-[6-amino-3-(ciclopropilmetil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di- hidropirimidin-5-il)][l-benzilpirazol-4-il]carboxamida; N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(1—{[3-cianofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; [l-(2-(lH-l,2,3,4-tetrazol-5-il)etil)pirazol-4-il]-N-[6-amino-3-(ciclopropilmetil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)]carboxamida; N-[6-amino-3-(ciclopropilmetil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)](1—{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]-metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-[6-amino-3-propil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidropirimidin-5-i1)](1—{(2-piridil)]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][l-benzilpirazol-4-il]carboxamida; N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][1—{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il]carboxamida; N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][1—{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il]carboxamida; N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}-pirazol-4-il]carboxamida; e N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)](l-{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]-metil}pirazol-4-il)carboxamida. C. Preparação de um Composto de Fórmula (2) variando R1 e R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 7A, mas opcionalmente substituindo a 5, 6-diamino-l-etil-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (2), e opcionalmente substituindo o ácido 1—{[3 — (trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxílico por outros 50 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ compostos de fórmula Z-Y-X-CCóH, preparam-se outros compostos de Fórmula (3). EXEMPLO 8

Preparação de um Composto de Fórmula I A. Preparação de um Composto de Fórmula I em que R1 é n-Propilo, R2 é Etilo, X é 1,4-Pirazolilo, Y é Metileno e Z é 3-Trifluorometilfenilo

Agitou-se a 100°C durante 2 horas, uma mistura de N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))-(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-3-il)carboxamida (80 mg, 0,17 mmol) , hidróxido de sódio aquoso a 10% (5 ml) e metanol (5 ml) . Arrefeceu-se a mistura, removeu-se o metanol sob pressão reduzida, e diluiu-se o resíduo com água e acidificou-se com ácido clorídrico. Removeu-se o precipitado por filtração, lavou-se com água, depois com metanol, para proporcionar 3-metil-l-propil-8-(1-{[3-(trifluorornetil)fenil]-metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona, um composto de Fórmula I. ^-RMN (DMSO-d6) δ 8,57 (s, 1H) , 8,15 (s, 1H) , 7, 60-7,75 (m, 4H) , 5,54 (s, 2H) , 4,05-4,50 (m, 2H) , 3,87-3,91 (m, 2H) , 1,55-1,64 (m, 2H) , 1,25 (t, 3H, J = 7,03 Hz), 0,90 (t, 3H, J = 7,42 Hz); MS m/z 447,2 (M+) .

B. Preparação de um Composto de Fórmula I, variando R1^!*.2, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 8A, mas substituindo a N- ( 6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-3-il) carboxamida por outros compostos de Fórmula (3), prepararam-se os seguintes compostos de Fórmula I: l-ciclopropilmetil-3-metil-8-[1-(fenilmetil)pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 51 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ l-ciclopropilmetil-3-metil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)-metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-ciclopropilmetil-3-etil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)metil]-pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-ciclopropilmetil-3-metil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-ciclopropilmetil-3-etil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-ciclopropilmetil-3-etil-8-(1-{[6-(trifluorometil)(3- piridil)]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 3-({4-[1-(ciclopropilmetil)-3-meti1-2,6-dioxo-l, 3, 7-tri-hidropurin-8-il]pirazolil}metil)benzenocarbonitrilo; 8-[1-(2-(1H-1,2,3,4-tetrazol-5-il)etil)pirazol-4-il]-3-metil-1-ciclopropilmetil-l,3,7-tri-hidropurino-2, 6-diona; 1-(2-metilpropil)-3-metil-8-[l-benzilpirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1-(2-metilpropil)-3-etil-8-{l-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1-(2-metilpropil)-3-metil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)metil]-pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 1-(2-metilpropil)-3-metil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; 3-etil-l-(2-metilpropil)-8-(l-{[6-(trifluorometil)(3- piridil)]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; l-etil-3-metil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; e 3-etil-l-propil-8-[1-(2-piridilmetil)pirazol-4-il]-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona.

C. Preparação de um Composto de Fórmula I, variando R1,R2, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 8A, mas substituindo a N- (6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di- hidropirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol- 52 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 3-il) carboxamida por outros compostos de Fórmula (3), preparam-se outros compostos de Fórmula I. EXEMPLO 9

Preparação de um Composto de Fórmula (10) A. Preparação de um Composto de Fórmula (10) em que R1 é n-Propilo o

NHj

Manteve-se uma mistura de 6-aminouracilo (5,08 mg, 40 mmol), hexametildissilazano (50 ml) e sulfato de amónio (260 mg, 1,96 mmol) em refluxo durante 12 horas. Após arrefecimento, removeu-se o sólido por filtração, e removeu-se o solvente do filtrado sob pressão reduzida para proporcionar o derivado trimetilsililado de 6-aminouracilo.

Dissolveu-se o produto em tolueno (1,5 ml) e iodopropano (7,8 ml, 80 mmol) e aqueceu-se num banho de óleo a 120°C durante 2 horas. Arrefeceu-se então a mistura reaccional a 0°C, e adicionou-se lentamente bicarbonato de sódio aquoso saturado. Removeu-se o precipitado resultante por filtração, e lavou-se sequencialmente com água, tolueno e éter, para proporcionar a 6-amino-3,-propil-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (10), que se utilizou na reacção seguinte sem purificação adicional. 1H-RMN (DMSO-d6) δ 10,34 (s, 1H) , 6,16 (s, 2H) , 4,54 (s, 1H) , 3, 57-3, 62 (m, 2H) , 1,41-1,51 (m, 2H) , 0,80 (t, 3H, J = 7,43 Hz). B. Preparação de um Composto de Fórmula (10), variando R1

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 9A, mas substituindo o iodopropano por outros halogenetos de alquilo de fórmula R1Hal, preparam-se outros compostos de Fórmula (10), incluindo: 6-amino-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona; e 53 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 6-amino-3-(2-metilpropil)-1, 3-di-hidropirimidino-2,4-diona. EXEMPLO 10

Preparação de um Composto de Fórmula (11) A. Preparação de vim Composto de Fórmula (11) em crue R1 é n-Propilo o

NO A uma solução de 6-amino-3-propil-l,3-di-hidropirimidino- 2,4-diona (5,6 g) numa mistura de ácido acético a 50%/água (160 ml) a 70°C adicionou-se nitrito de sódio (4,5 g) em porções ao longo de um periodo de 15 minutos. Agitou-se a mistura a 70°C durante 45 minutos, depois concentrou-se a mistura reaccional para um volume pequeno sob pressão reduzida. Removeu-se o sólido por filtração, e lavou-se com água, para proporcionar 6-amino-5-nitroso-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (11). 1H-RMN (DMSO-d6) δ 11,42 (s, 1H), 7,98 (s, 1H) , 3,77-3,81 (m, 2H) , 3,33 (s, 1H) , 1,55-1, 64 (m, 2H) , 0,89 (t, 3H, J = 7,43 Hz); MS m/z 198,78 (M+) , 220,78 (M+ +Na) B. Preparação de um Composto de Fórmula (11), variando R1

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 10A, mas substituindo a 6-amino-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (10), preparam-se outros compostos de Fórmula (11), incluindo: 6-amino-5-nitroso-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona; e 6-amino-5-nitroso-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona. 54 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ EXEMPLO 11

Preparação de um Composto de Fórmula (12) A. Preparação de um Composto de Fórmula (12) em q~ue R1 é n-Propilo

A uma solução de 6-amino-5-nitroso-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona (5,4 g, 27 mmol) em amónia aquosa a 12,5% (135 ml) a 70°C adicionou-se ditionito de sódio (Na2S204, 9,45 g 54 mmol) em porções ao longo de 15 minutos, e agitou-se a mistura durante 20 minutos. Concentrou-se a solução sob pressão reduzida, arrefeceu-se a 5°C, removeu-se o precipitado por filtração, e lavou-se com água fria, para proporcionar a 5.6- diamino-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (12). 1H-RMN (DMS0-d6) δ 0,81 (t, 3H, J = 7,43 Hz), 1,43-1,52 (m, 2H) , 3, 63-3, 67 (m, 2H) , 5,56 (s, 2H) ; MS m/z 184, 95 (M+) , 206, 96 (M+ +Na) B. Preparação de um Composto de Fórmula (12), variando R1

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 11A, mas substituindo a 6-amino-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4- diona por outros compostos de Fórmula (11), preparam-se outros compostos de Fórmula (12), incluindo: 5.6- diamino-3-ciclopropilmetil-l,3-di-hidropirimidino-2,4- diona; e 5.6- diamino-3-(2-metilpropil)-1,3-di-hidropirimidino-2,4- diona. 55 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ EXEMPLO 12

Preparação de um Composto de Fórmula (13) A. Preparação de um Composto de Fórmula (13) em que R1 é n-Propilo, X é 1,4-Pirazolilo, Y é Metileno e Z é 3-Trifluorometilfenilo

A uma mistura de 5,6-diamino-3-propil-l, 3-di-hidropirimidino-2,4-diona (2,3 g, 126 mmol) e ácido 1 — {[3 — (trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxílico (3,79 g, 14 mmol) em metanol (50 ml) adicionou-se cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,67 g, 14 mmol), e agitou-se a mistura reaccional durante 3 dias à temperatura ambiente (embora seja aceitável menos tempo). Removeu-se o precipitado por filtração, e lavou-se sequencialmente com água e metanol. Secou-se o produto sob vácuo para proporcionar a N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamide, um composto de Fórmula (13). 1H-RMN (DMS0-d6) δ 10,44 (s, 1H) , 8,56 (s, 1H) , 8,37 (s, 1H) , 8,00 (s, 1H) , 7,56-7,71 (m, 3H) , 6,02 (s, 1H) , 5,49 (s, 2H) , 3, 62-3, 66 (m, 2H) , 1,44-1,53 (m, 2H) , 0,82 (t, , 3H, J = 7,43 Hz); MS m/z 458, 92 (M+ +Na) . B. Preparação Alternativa de um Composto de Fórmula (13) em que R1 é n-Propilo, X é 1,4 Pirazolilo, Y é Metileno e Z é 3-Trifluorometilfenilo

Aqueceu-se a 70°C durante 4 horas, uma solução de ácido 1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxílico (1 g, 3,7 mmol) em cloreto de tionilo (1 ml). Removeu-se o excesso de cloreto de tionilo por destilação, e tratou-se o residuo com cloreto de metileno/hexanos. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, e dissolveu-se o residuo em acetonitrilo. Adicionou-se esta solução a uma suspensão de 5,6-diamino-3-propil-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona (2,3 g, 126 mmol) e 56 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ trietilamina (1 ml) em acetonitrilo (20 ml) a 0°C, e agitou-se durante 16 horas. Extinguiu-se a reacção com água (5 ml), acidificou-se com ácido clorídrico, agitou-se durante 30 minutos, e removeu-se o precipitado por filtração. Lavou-se o produto com éter, para proporcionar a N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)-fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida, um composto de Fórmula (13).

C. Preparação de um Composto de Fórmula (13), variando R1, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 12A ou 12B, mas opcionalmente substituindo a 6-amino-3-propil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (12), e opcionalmente substituindo o ácido 1 — { [3 — (trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxílico por outros compostos de fórmula Z-Y-X-CO2H, preparam-se outros compostos de Fórmula (13), incluindo: N-(6-amino-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-(2-metilpropil)(1,3-di-hidropirimidin-5-il)) (1—{ [3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-(2-metilpropil)(1,3-di-hidropirimidin-5-il)) (1-{ [3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-[ 1-benzil]pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidropirimidin-5-il)) (1-[1-benzil]pirazol-4-il)carboxamida; 57 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ν-(6-amino-2,4-dioxo-3-(2-metilpropil)(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-[1-benzil]pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{ [3-cianofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[3-cianofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-(2-metilpropil)(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[3-cianofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-({l-(2-(lH-l,2,3,4-tetrazol-5-il)etil)pirazol-4-il}carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidropirimidin-5-il)) (1—{ [l-(2-(lH-l,2,3,4-tetrazol-5-il)etil)pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-(2-metilpropil)(1,3-di-hidropirimidin-5-il)) (1-{ [l-(2-(lH-l,2,3,4-tetrazol-5-il)etil)pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N- (6-amino-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)carboxamida; e N-(6-amino-2,4-dioxo-3-(2-metilpropil)(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)carboxamida. 58 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ EXEMPLO 13

Preparação de um Composto de Fórmula (3) A. Preparação de um Composto de Fórmula (3) em que R1 é n—Propilo, R2 é Etilo, X é 1,4—Pirazolilo, Y é Metileno, e Z é 3-Trifluorometilfenilo

Agitou-se à temperatura ambiente, durante a noite, uma mistura de uma solução de N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il)) (1- { [3-(trifluorometil)feniljmetil}-pirazol-3-il)carboxamida (872 mg, 2 mmol) em dimetilformamida (10 ml) , carbonato de potássio (552 mg, 4 mmol) e iodeto de etilo (0,24 ml, 3 mmol). Filtrou-se a mistura reaccional, e evaporou-se o solvente do filtrado sob pressão reduzida. Agitou-se o resíduo com água durante duas horas à temperatura ambiente, e removeu-se o precipitado por filtração, lavou-se com água, e depois dissolveu-se em metanol. Removeu-se então o solvente sob pressão reduzida para proporcionar a N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida, um composto de Fórmula (3). 1H-RMN (DMSO-d6) : δ 8,58 (s,lH), 8,39 (s, 1H) , 8,01 (s, 1H) , 7,72 - 7,50 (m, 4H) , 6,71 (s, 2H) , 5,51 (s, 2H) , 4,0 - 3,82 (m, 2H) , 3,77 - 3, 65 (m, 2H) , 1, 60 -1,50 (m, 2H) , 1,13 (t, 3H, J = 6,8 Hz), 0,84 (t, 3H, J = 7,2 Hz); MS m/z462, 9 (M-) B. Preparação de um Composto de Fórmula (13) , variando R1, X, Y e z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 13A, mas substituindo N-(6-amino-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-3-il)carboxamida por outros compostos de Fórmula (13), preparam-se outros compostos de Fórmula (3), incluindo: 59 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ν-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5 il))(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(l-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}-pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-1-etil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(l-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}-pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-1-metil-2,4-dioxo-3-etil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-1-metil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(l-{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-(6-amino-1-etil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(l-{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-[6-amino-3-(ciclopropilmetil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di- hidropirimidin-5-il)][l-benzilpirazol-4-il]carboxamida; N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-ciclopropilmetil(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(1—{[3-cianofenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida; [1-(2-(lH-l,2,3,4-tetrazol-5-il)etil)pirazol-4-il]-N-[6-amino 3-(ciclopropilmetil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)]carboxamida; N-[6-amino-3-(ciclopropilmetil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro pirimidin-5-il)](1—{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]-metil}pirazol-4-il)carboxamida; N-[6-amino-3-propil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidropirimidin-5 il)](1—{(2-piridil)]metil}pirazol-4-il)carboxamida; 60 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Ν-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][l-benzilpirazol-4-il]carboxamida; N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][1—{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il]carboxamida; N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][1—{[3-fluorofenil]metil}pirazol-4-il]carboxamida; N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)][1-{[3-(trifluorometil)feniljmetil}-pirazol-4-il]carboxamida; e N-[6-amino-3-(2-metilpropil)-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)](1-{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]-metil}pirazol-4-il)carboxamida. EXEMPLO 14

Preparação de um Composto de Fórmula I A. Preparação de um Composto de Fórmula I em que R1 é n-Propilo, R2 é Etilo, X é 1,4-Pirazolilo, Y é Metileno, e Z é 3-Trifluorometilfenilo

Agitou-se a 100°C durante 18 horas, uma mistura de N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))-(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-3-il)carboxamida (850 mg, 2,34 mmol) , hidróxido de sódio aquoso a 10% (10 ml) e metanol (10 ml). Arrefeceu-se a mistura, removeu-se o metanol sob pressão reduzida, e acidificou-se a mistura remanescente com ácido clorídrico a pH 2. Removeu-se o precipitado por filtração, lavou-se com mistura água/metanol, para proporcionar 3-etil-l-propil-8-(l-{[3-(trifluorometil)- 61 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ fenil]metil}pirazol-4-il)-l,3,7-tri-hidropurino-2, 6-diona, um composto de Fórmula I. 1H-RMN (DMS0-d6) δ 8,57 (s, 1H) , 8,15 (s, 1H) , 7, 60-7,75 (m, 4H) , 5,54 (s, 2H) , 4,05-4,50 (m, 2H) , 3,87-3,91 (m, 2H) , 1,55-1,64 (m, 2H) , 1,25 (t, 3H, J = 7,03 Hz), 0,90 (t, 3H, J = 7,42 Hz); MS m/z 447,2 (M+)

B. Preparação de um Composto de Fórmula L variando R1, R2, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 14A, mas substituindo a N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(l-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-3-il)carboxamida por outros compostos de Fórmula (3), preparam-se outros compostos de Fórmula I, incluindo os enumerados no Exemplo 8. EXEMPLO 15

Preparação de um Composto de Fórmula (14) A. Preparação de um Composto de Fórmula (14) em que R2 é Etilo

HO

‘NHj A uma solução de 6-amino-l-etil-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona (5,0 g, 32,3 mmol) numa mistura de ácido acético a 50%/água (50 ml) a 70°C adicionou-se nitrito de sódio (4,45 g, 64,5 mmol) em porções ao longo de um periodo de 30 minutos. Agitou-se a mistura a 70°C durante mais 30 minutos.

Arrefeceu-se a mistura reaccional e removeu-se o precipitado por filtração, e lavou-se com água, depois com metanol, para proporcionar 6-amino-l-etil-5-nitroso-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona, um composto de Fórmula (14). 1H-RMN (DMSO-d6) : δ 11,52 (s, 1H), 9,16 (s, 1H), 3,83 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 1,11 (t, 3H, J = 7,0 Hz). MS m/z 184,8 (M+) , 206, 80 (M+ +Na) 62 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Β. Preparação de um Composto de Fórmula (14), variando R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 15A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por 6-amino-l-metil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, preparou-se a 6-amino-l-metil-5-nitroso-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona. C. Preparação de um Composto de Fórmula (14), variando R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 15A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (5) , preparam-se outros compostos de Fórmula (14). EXEMPLO 16

Preparação de um Composto de Fórmula (15) A. Preparação de um Composto de Fórmula (15) em que R2 é Etilo

A uma solução de 6-amino-l-etil-5-nitroso-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona (3,9 g, 21,2 mmol) em amónia aquosa a 14,5% (50 ml) a 50°C adicionou-se ditionito de sódio (Na2S204, 7,37 g, 42,4 mmol) em porções ao longo de 15 minutos, e agitou-se a mistura durante 20 minutos. Concentrou-se a solução sob pressão reduzida para um volume de 30 ml, arrefeceu-se a 5°C, removeu-se o precipitado por filtração, e lavou-se com água fria, para proporcionar a 5,6-diamino-l-etil-1,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, um composto de Fórmula (15). 1H-RMN (DMS0-d6) : δ 10,58 (s, 1H), 6,18 (s, 2H) , 3,83 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 2,82 (s, 2H) , 1,10 (t, 3H, J = 7,2 Hz). 63 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ Β. Preparação de vim Composto de Fórmula (15), variando R2

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 16A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-5-nitroso-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona por 6-amino-l-metil-5-nitroso-l,3-di-hidropirimidino- 2.4- diona, preparou-se a 5,6-diamino-l-metil-l, 3-di-hidropirimidino-2,4-diona. 2

C. Preparação de um Composto de Fórmula (15), variando R

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 16A, mas substituindo a 6-amino-l-etil-5-nitroso-l, 3-di-hidropirimidino- 2,4-diona por outros compostos de Fórmula (14), preparam-se outros compostos de Fórmula (15). EXEMPLO 17

Preparação de um Composto de Fórmula (16) A. Preparação de um Composto de Fórmula (16) em que R2 é Etilo, X é 1,4-Pirazolilo, Y é Metileno e Z é 3-Trifluorometilfenilo

A uma mistura de 5,6-diamimo-l-etil-l,3-di- hidropirimidino-2,4-diona (2 g, 11,76 mmol) e ácido 1—{ [3 — (trifluorometil)fenil]metil}pirazolo-4-carboxílico (3,5 g, 12,94 mmol) em metanol (50 ml) adicionou-se cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,47 g, 12,94 mmol), e agitou-se a mistura reaccional durante 16 horas à temperatura ambiente. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, e lavou-se o residuo com água e metanol. Secou-se o produto sob vácuo para proporcionar a N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)fenil]-metil}pirazol-4-il)carboxamida, um composto de Fórmula (16). 1H-RMN (DMSO-d6): δ 10,60 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,01 (s, 1H) , 7,72-7,50 (m, 4H) , 6,69 (s, 2H) , 5,50 (s, 2H) , 3,87 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 1,11 (t, 3H, 7,2 Hz); MS m/z 421 (M~) 64 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

Β. Preparação de um Composto de Fórmula (16)r variando R2, X, Y, e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 17A, mas substituindo a 5,6-diamino-l-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por 5,6-diamino-l-metil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona, preparou-se a N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida.

C. Preparação de um Composto de Fórmula (16), variando R2, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 17A, mas substituindo a 5,6-diamino-l-etil-l,3-di-hidropirimidino-2,4-diona por outros compostos de Fórmula (15), preparam-se outros compostos de Fórmula (16). EXEMPLO 18

Preparação de um Composto de Fórmula (3) A. Preparação de um Composto de Fórmula (3) em que R1 é n-Propilo, R2 é Etilo, X é 1,4-Pirazolilo, Y é Metileno, e Z é 3-Trifluorometilfenilo

Agitou-se à temperatura ambiente, durante a noite, uma mistura de uma solução de N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(l-{[3-(trifluorometil)fenil]metiljpirazol-3-il) carboxamida (1,5 g, 3,55 mmol) em dimetilformamida (30 ml), carbonato de potássio (980 mg, 7,1 mmol) e iodeto de propilo (724 mg, 4,26 mmol). Adicionou-se água, e removeu-se o precipitado por filtração, para proporcionar a N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida, um composto de Fórmula (3), que se utilizou na reacção seguinte sem purificação adicional. 65 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 1H-RMN (DMS0-d6) : δ 8,58 (s, 1Η), 8,39 (s, 1H), 8,01 (s, 1H) , 7,72 - 7,50 (m, 4H) , 6,71 (s, 2H) , 5,51 (s, 2H) , 4,0 - 3,82 (m, 2H) , 3, 77 - 3, 65 (m, 2H) , 1, 60 -1,50 (m, 2H) , 1,13 (t, 3H, J = 6,8 Hz), 0,84 (t, 3H, J = 7,2 Hz); MS m/z462,9 (M")

B. Preparação de um Composto de Fórmula (3), variando R1, R2, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 18A, mas substituindo a N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-3-il)carboxamida por N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo(1,3-di-hidro-pirimidin-5-il)), preparou-se a N-(6-amino-l-metil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1-{[3-(trifluorometil)-fenil]metil}pirazol-4-il)carboxamida.

C. Preparação de um Composto de Fórmula (3) , variando R1, R2, X, Y e Z

Similarmente, seguindo o procedimento do Exemplo 18A, mas opcionalmente substituindo a N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo(1,3-di-hidropirimidin-5-il))(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}-pirazol-3-il)carboxamida por outros compostos de Fórmula (16), e opcionalmente substituindo o iodeto de propilo por outros compostos de fórmula í^Hal, preparam-se outros compostos de Fórmula (3). EXEMPLO 19

Preparação de um Composto de Fórmula I A. Preparação de um Composto de Fórmula I em que R1 é n-Propilo, R2 é Etilo, X é 1,4-Pirazolilo, Y é Metileno, e Z é 3-Trifluorometilfenilo

Agitou-se a 80°C, durante 3 horas, uma mistura de N-(6-amino-l-etil-2,4-dioxo-3-propil(1,3-di-hidropirimidin-5-il))-(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-3-il)carboxamida 66 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ (300 mg, 464 mmol), hidróxido de sódio aquoso a 20% (5 ml), e metanol (10 ml). Arrefeceu-se a mistura, removeu-se o metanol sob pressão reduzida, e acidificou-se a mistura remanescente com ácido clorídrico até pH 2. Removeu-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e metanol, para proporcionar a 3-etil-l-propil-8-(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona, um composto de Fórmula I. 1H-RMN (DMSO-d6) δ 8,57 (s, 1H) , 8,15 (s, 1H) , 7, 60-7,75 (m, 4H) , 5,54 (s, 2H) , 4,05-4,50 (m, 2H) , 3,87-3,91 (m, 2H) , 1,55-1,64 (m, 2H) , 1,25 (t, 3H, J = 7,03 Hz), 0,90 (t, 3H, J = 7,42 Hz); MS m/z 447,2 (M+) EXEMPLO 20

CARACTERIZAÇÃO DE ANTAGONISTAS DE A2B Ligação de radioligandos para o receptor de adenosina A2B ADNc de receptor de adenosina A2B humano foi estavelmente transfectado em células HEK-293 (referidas como células HEK-A2B) . Lavaram-se monocamadas de células HEK-A2B com PBS uma vez e colheram-se num tampão contendo HEPES 10 mM (pH 7,4), EDTA 10 mM e inibidores de protease. Homogeneizaram-se estas células em Polytron durante 1 minuto na regulação 4 e centrifugaram-se a 29 000 g durante 15 minutos a 4°C. Lavaram-se as peletes de células uma vez com um tampão contendo HEPES 10 mM (pH 7,4), EDTA 1 mM e inibidores de protease, e ressuspenderam-se no mesmo tampão suplementado com 10% de sacarose. Mantiveram-se alíquotas congeladas a -80°C.

Iniciaram-se ensaios de competição misturando 3H-ZM214385 14 nM (Tocris Cookson) com várias concentrações de compostos de teste e 50 yg de proteínas de membrana em tampão TE (Tris 50 mM e EDTA 1 mM) suplementado com 1 Unidade/mL de adenosina-desaminase. Incubaram-se os ensaios durante 90 minutos, pararam-se por filtração utilizando um Packard Harvester e lavaram-se quatro vezes com tampão TM gelado (Tris 10 mM, MgCl2 1 mM, pH 7,4) . A ligação não específica foi determinada na presença de ZM214385 10 μΜ. As afinidades dos compostos (i.e. valores de Ki) foram calculadas utilizando software GraphPad. 67 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

Ligação de radioligandos para outros receptores de adenosina ADNc de receptor de adenosina Ai, A2a, A3 humano foram estavelmente transfectados em células CHO ou HEK-293 (referidas como CHO-Αχ, HEK-A2A, CHO-A3) . Prepararam-se membranas destas células utilizando o mesmo protocolo que se descreveu acima. Iniciaram-se ensaios de competição misturando 3H-CPX 0,5 nM (para CHO-Αχ) , 3H-ZM214385 2 nM (HEK-A2a) ou 125I-AB-MECA 0,1 nM (CHO-A3) com várias concentrações de compostos de teste e as respectivas membranas em tampão TE (Tris 50 mM e EDTA 1 mM para CHO-Αχ e HEK-A2a) ou tampão TEM (Tris 50 mM, EDTA 1 mM e MgCl2 10 mM para CHO-A3) suplementado com 1 Unidade/mL de adenosina-desaminase. Incubaram-se os ensaios durante 90 minutos, pararam-se por filtração utilizando Packard Harvester e lavaram-se quatro vezes com tampão TM gelado (Tris 10 mM, MgCl2 1 mM , pH 7,4) . A ligação não especifica foi determinada na presença de CPX 1 μΜ (CHO-Αχ) , ZM214385 1 μΜ (HEK-A2a) e IB-MECA 1 μΜ (CHO-A3) . As afinidades dos compostos (i.e. valores de Ki) foram calculadas utilizando software GraphPad”.

Medições de AMPc

Colheram-se monocamadas de células transfectadas em PBS contendo EDTA 5 mM. Lavaram-se as células uma vez com DMEM e ressuspenderam-se em DMEM contendo 1 Unidade/mL de adenosina-desaminase a uma densidade de 100 000-500 000 células/ml. Misturaram-se 100 μΐ da suspensão celular com 25 μΐ contendo vários agonistas e/ou antagonistas e manteve-se a reacção a 37 °C durante 15 minutos. No final de 15 minutos, adicionaram-se 125 μΐ de HC1 0,2 N para parar a reacção. Centrifugaram-se as células durante 10 minutos a 1000 rpm. Removeram-se 100 μΐ do sobrenadante e acetilaram-se. As concentrações de AMPc nos sobrenadantes foram medidas utilizando o ensaio directo de AMPc da Assay Design. Os receptores de adenosina A2a e A2b estão acoplados a proteínas Gs e assim agonistas para o receptor de adenosina A2a (tal como CGS21680) ou para o receptor de adenosina A2B (tal como NECA) aumentam as acumulações de AMPc enquanto os antagonistas para estes receptores previnem o aumento de acumulações de AMPc induzidas pelos agonistas. Os receptores de adenosina Αχ e A3 estão acoplados a proteínas Gi e assim os agonistas para o receptor de adenosina Αχ (tais como CPA) ou 68 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ para ο receptor de adenosina A3 (tais como IB-MECA) inibem o aumento de acumulações de AMPc induzidas por forscolina. Os antagonistas para os receptores Ai e A3 previnem a inibição em acumulações de AMPc. EXEMPLO 21

EFEITO DO ANTAGONISTA DE A2B SOBRE A CICATRIZAÇÃO DE FERIDAS

EM MODELOS DE RATINHO

Utilizaram-se grupos de ratinhos machos derivados de ICR (pesando 24 ±2 g) de 5 cada. Durante o periodo de teste, os animais foram alojados individualmente em cada gaiola. Sob anestesia com hexobarbital (90 mg/kg, IP), raparam-se a região do ombro e das costas de cada animal. Aplicou-se uma agulha de punção (Dl 12 mm) para remover a pele incluindo o panniculus carnosus e tecidos aderentes. A área da ferida, traçada sobre folhas de plástico transparentes foi medida nos dias 1, 3, 5, 7, 9 e 11, utilizando um analisador Image Analyzer (Life

Science Resources Vista, Versão 3.0). Administraram-se as substâncias de teste topicamente imediatamente após o ferimento uma vez por dia durante um total de 10 dias consecutivos. Determinaram-se o encerramento da ferida (%) e o tempo de semi-encerramento da ferida (CT50) por regressão linear utilizando Graph-Pad Prism™ (Graph Pad Software EUA) e aplicou-se o teste t de Student desemparelhado para a comparação entre os grupos tratado e de veiculo em cada ponto de tempo de medição nos dias 3, 5, 7, 9 e 11. As diferenças são consideradas de significância estatística ao nivel P<0,05. A Tabela 1 apresenta os resultados do teste obtidos para o composto 3-etil-l-propil-8-(l-{[3-(trifluorometil)fenil]-metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona utilizando o modelo de ratinho discutido acima. A Tabela 2 apresenta os resultados do teste obtidos utilizando 1,3-dipropil-8-(l-{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona. Em cada caso, o veículo utilizado para comparação era carboximetilcelulose a 1,5% em solução salina tamponada com fosfato a pH 7,4 69 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ

Tabela 1 TRATAMENTO DOSE PERCENTAGEM DE ENCERRAMENTO DA FERIDA CT50 DIAS Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 Dia 6 Dia 7 Dia 8 Dia 9 Dia 10 Dia 11 Veiculo 20 μΐ/ ratinho X 0 21, 7 31,5 44,1 48,0 52, 8 60,1 68,8 73,2 77, 7 80,3 5,9 SEM 3,2 3, 0 2,1 3,1 2, 9 2,7 1,6 1,5 0,8 1,6 0,3 3-etil-l-propil-8-(1-{[3-(trifluoro-metil)fenil]metil}-pirazol-4-il)-1,3, 7-tri-hiclro-purino-2,6-diona 2 pg/ ratinho X 0 35, 6* 46,5* 57,4* 62,4 68,3* 73,3* 78,8* 82,2* 89,2* 91, 6* 4,4* SEM 4,1 3,5 2,5 1,3 1,3 1,0 12 1,5 2,8 2,4 0,2 0,5 pg/ ratinho X 0 43,2* 51,2* 56, 0* 58, 8* 64,3* 72,5* 78,2* 82,5* 83,1* 87,1* 4,3* SEM 3,1 3,4 1,8 2,0 1,1 0,9 1,6 1,2 1,3 0,8 0,2 A percentagem de encerramento da ferida e o tempo de semi-encerramento (CF50) foram determinados e utifizou-se o teste t de Student desemparefhado para a comparação dos resultados obtidos entre grupos tratados e de veículo (n = 5 cada). *p<0,05, estatisticamente significativo.

Tabela 2 TRATAMENTO DOSE PERCENTAGEM DE FECHO DA FERIDA CT50 DIAS Dia 3 Dia 5 Dia 7 Dia 9 Dia 11 Veículo 20 μΐ/ ratinho X 28, 4 44,3 54,2 66,4 72,4 6, 8 SEM 2,2 2,1 2,9 2,2 0,7 0,2 1,3-dipropil-8-(1-{[6-trifluorometil)(3-piridil)]-metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona 0,5 pg/ ratinho X 41,9* 53,5* 65, 8* 77,1* 85,3* 5,5* SEM 1,4 2,7 1,9 1,7 1,1 0,1 A percentagem de encerramento da ferida e o tempo de semi-encerramento (CT50) foram determinados e utilizou-se o teste t de Student desemparelhado para a comparação dos resultados obtidos entre grupos tratados e de veiculo (n = 5 cada). *p<0,05, estatisticamente significativo. EXEMPLO 22

EFEITO DE ANTAGONISTA DE A2B SOBRE A CICATRIZAÇÃO DE FERIDAS

NO MODELO DE PORCO A pele do porco cicatriza quase como a pele humana e portanto o teste com este animal proporciona um paradigma óptimo para estudar os mecanismos de reparação cutânea. Neste Exemplo, foi testado o efeito de um antagonista de A2b sobre a cicatrização de feridas em três porcos. Utilizou-se PDGF (REGRANEX® (becaplermina) Gel a 0,01%, Ortho-McNeil Pharmaceutical, Inc., Raritan, NJ) como controlo positivo. 0 veiculo para a entrega do fármaco foi gel de metilcelulose a 1,5% (gel KY) . As feridas de controlo receberam apenas o 70 ΕΡ 1 789 053/ΡΤ veículo. Testaram-se 3 dosagens diferentes do antagonista de A2b 3-etil-l-propil-8-(1—{[3-(trifluorometil)fenil]metilIpirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona, 1 yg/40 μΐ, 4 pg/40 μΐ e 20 pg/40 μΐ. Método: Utilizaram-se três porcos Yorkshire (~75- 90 lbs.). No dia da cirurgia, criaram-se uma série de excisões de espessura completa ao longo da região paravertebral de um lado do porco. Sacrificaram-se os porcos no final de 10 dias e removeram-se todas as feridas para exames histológicos e imuno-histoquimicos.

Efeitos sobre a estimulação geral de cicatrização no interior da derme (Tecido de Granulação) O antagonista do receptor de adenosina A2b estimulou o tecido de granulação total de uma maneira dependente da dose. Existe uma diferença estatística entre a formulação de placebo e a dose mais elevada 20 pg/40 μΐ (p = 0,035), entre a dose mais baixa 1 pg/40 μΐ e a dose mais elevada 20 pg/40 μΐ (p = 0,047) e entre a formulação de placebo e o controlo positivo de PDGF (p =0,034). Assim, os nossos resultados indicam que a dosagem tópica com um antagonista do receptor de adenosina A2b produz uma resposta biológica desejável no modelo porcino.

Lisboa, 2012-08-02

Claims (36)

1. ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 1/9 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um antagonista do receptor A2B possuindo a estrutura de Fórmula I ou Fórmula II:

   X-Y-Z

   X-Y-Z Fórmula II em que: e Rz são independentemente seleccionados entre hidrogénio, R1 - °2 alquilo opcionalmente substituído ou um grupo -D-E, em que D é uma ligação covalente ou alquileno, e E é alcoxi opcionalmente substituído, cicloalquilo opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído, heteroarilo opcionalmente substituído, heterociclilo opcionalmente substituído, alcenilo opcionalmente substituído ou alcinilo opcionalmente substituído, com a condição de que quando D é uma ligação covalente E não possa ser alcoxi; ou R3 é hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído cicloalquilo opcionalmente substituído; X é arileno ou heteroarileno opcionalmente substituídos; de ou Y é uma ligação covalente ou alquileno em que um átomo carbono pode ser opcionalmente substituído por -0-, -S- -NH-, e está opcionalmente substituído com hidroxi, alcoxi, amino opcionalmente substituído ou -COR, em que R é hidroxi, alcoxi ou amino; com a condição de que quando a substituição opcional é hidroxi ou amino a referida substituição não possa estar presente num átomo de carbono adjacente a um heteroátomo; e Z é hidrogénio, arilo monocíclico opcionalmente substituído ou heteroarilo monocíclico opcionalmente substituído; com a condição de que (a) Z é hidrogénio apenas quando Y é uma ligação covalente e X é 1,4-pirazoleno opcionalmente substituído ligado ao anel de purina através de um átomo de carbono; e ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 2/9 (b) quando X é arileno opcionalmente substituído, Z é um heteroarilo monocíclico opcionalmente substituído outro que não imidazolo opcionalmente substituído, para a preparação de uma composição farmacêutica para acelerar a cicatrização de feridas num mamífero.
2. 2. Utilização da reivindicação 1, em que: r1 e R2 são independentemente hidrogénio, alquilo Ci-6 opcionalmente substituído ou um grupo -D-E, em que D é uma ligação covalente ou alquileno, e E é fenilo opcionalmente substituído, cicloalquilo opcionalmente substituído, alcenilo opcionalmente substituído ou alcinilo opcionalmente substituído, e R3 é hidrogénio.
3. 3. Utilização da reivindicação 2, em que: X é fenileno opcionalmente substituído; e Y é uma ligação covalente ou alquileno Ci_6 em que um átomo de carbono pode ser opcionalmente substituído por -0-, -S- ou -NH- . 1 2 ~
4. 4. Utilização da reivindicação 3, em que R e R são independentemente alquilo Ci-6 opcionalmente substituído com cicloalquilo.
5. 5. Utilização da reivindicação 4, em que R e R sao n-propilo, Y é -0CH2- e Z é oxadiazolo opcionalmente substituído.
6. 6. Utilização da reivindicação 5, em que (i) Z é 5-(2-metoxifenil)-(1,2,4-oxadiazol-3-il), nomeadamente 8-{4-[5-(2-metoxifenil)[1,2,4]oxadiazol-3-ilmetoxi]fenil}-1,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (ii) Z é 5-(3-metoxifenil)-(1,2,4-oxadiazol-3-il), nomeadamente 8-{4-[5-(3-metoxifenil)[1,2,4]oxadiazol-3-ilmetoxi]fenil}-1,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou (iii) Z é 5-(4-fluorofenil)-(1,2,4-oxadiazol-3-il), nomeadamente 8-{4-[5-(4-fluorofenil) [1,2,4]oxadiazol-3- ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 3/9 ilmetoxi]fenil}-1, 3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6- diona.
7. 7. Utilização da reivindicação 2, em que: X é pirazoleno opcionalmente substituído, Y é uma ligação covalente, alquileno Ci-6 opcionalmente substituído com hidroxi, alcoxi, amino opcionalmente substituído ou -COR, em que R é hidroxi, alcoxi ou amino; e Z é hidrogénio, fenilo opcionalmente substituído, oxadiazolilo opcionalmente substituído, isoxazolilo opcionalmente substituído ou piridilo opcionalmente substituído.
8. 8. Utilização da reivindicação 7, em que X é 1,4-pirazoleno opcionalmente substituído.
9. 9. Utilização da reivindicação 8, em que Z é fenilo opcionalmente substituído ou piridilo opcionalmente substituído.
10. 10. Utilização da reivindicação 9, em que R1 é alquilo Ci_6 opcionalmente substituído com cicloalquilo, R2 é hidrogénio e Y é -CH2- ou -CH(CH3)-.
11. 11. Utilização da reivindicação 10, em que (i) R1 é n-propilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH2- e Z é 3-trifluorometilfenilo, nomeadamente l-propil-8-(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (ii) R1 é n-propilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH2- e Z é fenilo, nomeadamente l-propil-8-[l-benzilpirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (iii) R1 é n-butilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH2- e Z é 3-fluorofenilo, nomeadamente l-butil-8-(1-{[3-fluorofenil]-metil}pirazol-4-il)-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (iv) R1 é n-propilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH(CH3)- e Z é fenilo, nomeadamente l-propil-8-[1-(1-feniletil)pirazol-4 — i1]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (v) R1 é ciclopropilmetilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH2- e Z é 2-piridilo, nomeadamente 1-(ciclopropilmetil)-8-[1- ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 4/9 (2-piridilmetil)pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou (vi) R1 é n-butilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH2- e Z é 6- trifluorometilpiridin-3-ilo, nomeadamente l-n-butil-8-[1-((6-trifluorometil)piridin-3-ilmetil)pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona.
12. 12. Utilização da reivindicação 9, em que R e R são independentemente metilo, etilo, n-propilo ou ciclopropilmetilo, e Y é metileno ou etileno que podem opcionalmente estar substituídos com hidroxi, alcoxi, amino opcionalmente substituído, ou -COR, em que R é hidroxi, alcoxi ou amino.
13. 13. Utilização da reivindicação 12, em que (i) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 3-(1,2,3,4-tetrazol-5-il)fenilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8-{1-[(3-(lH-l,2,3,4-tetrazol-5-il)fenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (ii) R1 é n-propilo, R2 é etilo, Y é -CH2- e Z é 3-trifluoro-metilfenilo, nomeadamente 3-etil-l-propil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)metil]pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (iii) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH(CH3)- e Z é 3-trifluoro-metilfenilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8-(1-{1-[3-(trifluorometil)fenil]etil]pirazol-4-il)-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (iv) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 4-carboxifenilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8-{1-[(4-carboxifenil)metil]-pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (v) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 3-carboxifenilo, nomeadamente ácido 3-{[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurin-8-il)-pirazolil]metilJbenzóico; (vi) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH(CC>2H)- e Z é fenilo, nomeadamente ácido 2-[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurin-8-il)pirazolil]-2-fenilacético; (vii) R1 é ciclopropilmetilo, R2 é metilo, Y é -CH2- e Z é 3-trifluorometilfenilo, l-ciclopropilmetil-3-metil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)metil]pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 5/9 (viii) R1 e R2 são metilo, Y é -CH2- e Z é 3-fluorofenilo, nomeadamente 1,3-dimetil-8-{1-[(3-fluorofenil)metil]-pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (ix) R1 é n-propilo, R2 é metilo, Y é -CH2- e Z é 3- trifluorometilfenilo, nomeadamente 3-metil-l-propil-8-{1-[(3-trifluorometilfenil)metil]pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (x) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 3-(trifluoro-metil)fenilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8-(1-{[3-(trifluorometil)fenil]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (xi) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 3-fluorofenilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8-{1—[(3-fluorofenil)metil]-pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (xii) R1 é etilo, R2 é metilo, Y é -CH2- e Z é 3-fluorofenilo, nomeadamente l-etil-3-metil-8-{1—[(3-fluorofenil)-metil]pirazol-4-il}-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou (xiii) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 2-metoxifenilo, 1,3-dipropil-8-{1-[(2-metoxifenil)metil]pirazol-4-il}-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona.
14. 14. Utilização da reivindicação 8, em que Z é oxadiazolo opcionalmente substituído.
15. 15. Utilização da reivindicação 14, em que R1 é alquilo Ci-6 opcionalmente substituído com cicloalquilo, R e H e Y e -ch2- ou -CH (CH3) - .
16. 16. Utilização da reivindicação 15, em que (i) R1 é n-propilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH2- e Z é 5 —(4 — clorofenil) [ 1,2,4]oxadiazol-3-ilo, nomeadamente 8— (1—{[5 — (4-clorofenil)(1,2,4-oxadiazol-3-il)]metil}pirazol-4-il)-1-propil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou (ii) R1 é n-butilo, X é 1,4-pirazoleno, Y é -CH2- e Z é 5-(4-clorofenil) [ 1,2,4]oxadiazol-3-ilo, nomeadamente 8-(1-([5-(4-clorofenil)(1,2,4-oxadiazol-3-il)]metil}pirazol-4-il)-1-butil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona. ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 6/9
17. 17. Utilização da reivindicação 14, em que R1 e R2 são independentemente alquilo Ci-β opcionalmente substituído com cicloalquilo e Y é -CH2- ou -CH(CH3)-.
18. 18. Utilização da reivindicação 17, em que (i) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 3 — (4 — clorofenil) [ 1,2,4]oxadiazol-5-ilo, nomeadamente 8— (1—{[3 — (4-clorofenil)(1,2,4-oxadiazol-5-il)]metil)pirazol-4-il]-1,3-dipropil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou (ii) R1 é n-propilo, R2 é etilo, Y é -0¾- e Z é 3-(4-clorofenil) [ 1,2,4]oxadiazol-5-ilo, nomeadamente 8— (1—{[3 — (4-clorofenil)(1,2,4-oxadiazol-5-il)]metil}pirazol-4-il)-3-etil-l-propil-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona.
19. 19. Utilização da reivindicação 8, em que Z é hidrogénio.
20. 20. Utilização da reivindicação 19, em que R1 e R2 são independentemente alquilo C1-6 opcionalmente substituído com cicloalquilo e Y é uma ligação covalente.
21. 21. Utilização da reivindicação 20, em que (i) R1 e R2 são n-propilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8- pirazol-4-il-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou (ii) R2 é sec-butilo e R1 é metilo, nomeadamente l-metil-3-sec-butil-8-pirazol-4-il-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona.
22. 22. Utilização da reivindicação 8, em que Z é isoxazolilo opcionalmente substituído.
23. 23. Utilização da reivindicação 22, em que R1 e R2 são independentemente alquilo C1-6 opcionalmente substituído com cicloalquilo e Y é -CH2-, -CH(CH3)- ou uma ligação covalente.
24. 24. Utilização da reivindicação 23, em que (i) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 5- (4- trifluorometilfenil)isoxazol-3-ilo, nomeadamente 1,3- dipropil-8-[1-({5-[4-(trifluorometil)fenil]isoxazol-3-il}metil)pirazol-4-il]-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 7/9 (ii) R1 é n-propilo, R2 é etilo, Y é -CH2- e Z é 5 — (4 — clorofenil)-isoxazol-3-ilo, nomeadamente 8 — (1 — {[5—(4 — clorofenil)isoxazol-3-il]metil}pirazol-4-il)-3-etil-l-propil-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona.
25. 25. Utilização da reivindicação 8, em que Z é piridilo opcionalmente substituído.
26. 26. Utilização da reivindicação 25, em que R1 e R2 são independentemente alquilo Ci-6 opcionalmente substituído com cicloalquilo e Y é -CH2-, -CH(CH3)- ou uma ligação covalente.
27. 27. Utilização da reivindicação 26, em que (i) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é pirid-2-ilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8-[1-(2-piridilmetil)pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (ii) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 6-trifuorometil-pirid-3-ilo, nomeadamente 1,3-dipropil-8-(l-{[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)-l,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (iii) R1 e R2 são n-propilo, Y é -CH2- e Z é 6-carboxipirid-2-ilo, nomeadamente ácido 6-{[4-(2,6-dioxo-l,3-dipropil-1,3,7-tri-hidropurin-8-il)pirazolil]metil}piridino-2-carboxilico; (iv) R1 é n-propilo, R2 é etilo, Y é -CH2- e Z é 2-piridilo, nomeadamente 3-etil-l-propil-8-[1-(2-piridilmetil) -pirazol-4-il]-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; (v) R1 é n-propilo, R2 é etilo, Y é -CH2- e Z é 6-(trifluoro-metil)pirid-3-ilo, nomeadamente 3-etil-l-propil-8-(1- {[6-(trifluorometil)(3-piridil)]metil}pirazol-4-il)-1,3,6-tri-hidropurino-2,6-diona; (vi) R1 é ciclopropilmetilo, R2 é etilo, Y é -CH2- e Z é 6-(trifluorometil)pirid-3-ilo, nomeadamente 1-(ciclo-propilmetil)-3-etil-8-(l-{[6-(trifluorometil)(3- piridil)]metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona; ou (vii) R1 é 2-metilpropilo, R2 é etilo, Y é -CH2- e Z é 6- (trifluorometil)pirid-3-ilo, nomeadamente 3-etil-l-(2- ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 8/9 metilpropil)-8- (1—{ [6-(trifluorometil) (3-piridil)]-metil}pirazol-4-il)-1,3,7-tri-hidropurino-2,6-diona.
28. 28. Utilização da reivindicação 1, em que o mamifero é o ser humano ou é um animal domesticado.
29. 29. Utilização da reivindicação 1, em que a composição farmacêutica se destina a administração tópica, administração sistémica ou administração directamente na ferida.
30. 30. Utilização da reivindicação 1, em que a ferida é causada por traumatismo mecânico, quimico ou térmico.
31. 31. Utilização da reivindicação 30, em que a ferida é o resultado de uma incisão cirúrgica.
32. 32. Utilização da reivindicação 30, em que a ferida é seleccionada do grupo que consiste em contusões, queimaduras, incisões e lacerações.
33. 33. Utilização da reivindicação 1, em que a ferida está associada a uma doença ou desordem.
34. 34. Utilização da reivindicação 33, em que a ferida é uma úlcera diabética.
35. 35. Composição farmacêutica para utilização no aumento da cicatrização de feridas e adequada para entrega tópica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista do receptor A2B possuindo a estrutura de Fórmula I ou Fórmula II:

    Fórmula I Fórmula II em que R1 e R2 são independentemente seleccionados entre hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído ou um grupo -D-E, em que D é uma ligação covalente ou alquileno, e E é alcoxi opcionalmente substituído, cicloalquilo opcionalmente substituído, arilo ΕΡ 1 789 053/ΡΤ 9/9 opcionalmente substituído, heteroarilo opcionalmente substituído, heterociclilo opcionalmente substituído, alcemlo opcionalmente substituído ou alcinilo opcionalmente substituído, com a condição de que quando D é uma ligação covalente E não possa ser alcoxi; R3 é hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído ou cicloalquilo opcionalmente substituído; X é arileno ou heteroarileno opcionalmente substituídos; Y é uma ligação covalente ou alquileno em que um átomo de carbono pode ser opcionalmente substituído por -0-, -S- ou -NH-, e está opcionalmente substituído com hidroxi, alcoxi, amino opcionalmente substituído ou -COR, em que R é hidroxi, alcoxi ou amino; com a condição de que quando a substituição opcional é hidroxi ou amino a referida substituição não possa estar presente num átomo de carbono adjacente a um heteroátomo; e Z é hidrogénio, arilo monocíclico opcionalmente substituído ou heteroarilo monocíclico opcionalmente substituído; com a condição de que (a) Z é hidrogénio apenas quando Y é uma ligação covalente e X é 1,4-pirazoleno opcionalmente substituído ligado ao anel de purina através de um átomo de carbono; e (b) quando X é arileno opcionalmente substituído, Z é um heteroarilo monocíclico opcionalmente substituído outro que não imidazolo opcionalmente substituído, e um transportador farmaceuticamente aceitável.
36. 36. Composição farmacêutica para utilização no aumento da cicatrização de feridas e adequada para entrega tópica de acordo com a reivindicação 35 que é um unguento, um creme ou um gel. Lisboa, 2012-08-02