PT1697306E - Moduladores selectivos de receptores activados por proliferadores de peroxissoma - Google Patents

Description

ΡΕ1697306 1 DESCRIÇÃO "MODULADORES SELECTIVOS DE RECEPTORES ACTIVADOS POR PROLIFERADORES DE PEROXISSOMA"

AREA DA INVENÇÃO A presente invenção relaciona-se com um composto modulador selectivo de receptores activados por prolife-radores de peroxisoma (SPPARM), mais especificamente, um composto agonista parcial de PPAR gama, que é útil para tratamento e/ou prevenção de distúrbios modulados por um PPAR.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Os receptores activados por proliferadores de peroxisoma (PPAR) são membros da família genética de receptores nucleares que são activados por ácidos gordos e metabolitos de ácidos gordos. Os PPAR pertencem ao subconjunto de receptores nucleares que funcionam como heterodímeros com o receptor de ácido 9-cis retinóico (RXR). Encontram-se três subtipos, designados como PPARa, PPARy e PPARô, em espécies desde o Xenopus até aos seres humanos. 0 PPARa é o principal sub-tipo no fígado e tem 2 ΡΕ1697306 facilitado a análise do mecanismo pelo qual os prolife-radores de peroxissoma exercem os seus efeitos pleiotró-picos. O PPARa é activado por alguns ácidos gordos de cadeia média e longa e está envolvido na estimulação da β-oxidação de ácidos gordos. O PPARa também está envolvido com a actividade de fibratos e ácidos gordos em roedores e nos seres humanos. Os derivados de ácido fibrico, tais como clofibrato, fenofibrato, bezafibrato, ciprofibrato, beclo-fibrato e etofibrato, assim como gemfibrozil, produzem uma substancial redução nos triglicéridos no plasma, conjuntamente com uma redução moderada de lipoproteina de baixa densidade (LDL) de colesterol e são utilizados em particular para o tratamento de hipertrigliceridemia. 0 PPARy é o principal sub-tipo no tecido adiposo e está envolvido na activação da diferenciação de adipócitos. O PPARy não está envolvido na estimulação da proliferação de peroxissoma no fígado. Existem dois isómeros de PPARy: PPARyl e PPARy2, que diferem apenas por o PPARy2 conter mais 28 aminoácidos presentes no terminal amino. As sequências de DNA para os receptores PPARy estão descritas em Elbrecht et al., BBRC 224; 431-437 (1996). Apesar dos proliferadores de peroxissoma, incluindo os fibratos e os ácidos gordos, activarem a actividade transcricional dos PPAR, apenas os derivados J2 da prosta-glandina, foram identificados como ligandos naturais para o PPARy, e que também se ligam, com elevada afinidade, aos agentes anti-diabéticos tiazolidinodionas. As funções fisiológicas do PPARa e PPARg no metabolismo de lípidos e 3 ΡΕ1697306 carbohidratos foram revelados e reconheceu-se que eram os receptores dos fármacos fibrato e glitazona, respecti- vamente.

Os receptores PPARa e PPARy têm sido implicados em diabetes mellitus, doença cardiovascular, obesidade e doença gastrointestinal, tal como doença inflamatória do intestino e outras doenças relacionadas com inflamação. Tais doenças relacionadas com inflamação incluem, mas não se limitam a, doença de Alzheimer, doença de Crohn, artrite reumatóide, psoriase e lesão isquémica de reperfusão. Em contraste, o PPARô (também referido como PPARP e NUC1) não é indicado como sendo receptor de qualquer classe de moléculas de fármaco, e o seu papel na fisologia dos mamiferos tem permanecido indefinido. O gene receptor nuclear humano PPARô (hPPARô) foi clonado a partir de uma livraria de cDNA de célula de osteosarcoma humano e foi totalmente descrito em A. Schmidt et al., Molecular Endocrinology, 6:1634-1641 (1992). A diabetes é uma doença em que a capacidade de um mamífero para regular os niveis de glucose no sangue está comprometida, porque o mamífero possui uma capacidade reduzida para converter a glucose em glicogénio, para armazenamento nas células de músculo e de fígado. No diabetes de Tipo I, esta capacidade reduzida para armazenar glucose é causada por uma redução da produção de insulina. A "diabetes de Tipo II" ou "diabetes mellitus não dependente de insulina" (NIDDM), é a forma de diabetes 4 ΡΕ1697306 devida a uma profunda resistência ao efeito estimulador ou regulador da insulina, sobre a glucose e metabolismo dos lipidos, nos principais tecidos sensíveis à insulina, o músculo, fígado e tecido adiposo. Esta resistência de resposta à insulina, resulta em insuficiente mobilização, oxidação e armazenamento da glucose no músculo e repressão inadequada da insulina à lipólise no tecido adiposo e produção e secreção de glucose no fígado. Quando estas células pedem sensibilidade à insulina, o corpo tenta compensar produzindo níveis anormalmente elevados de insulina, o que resulta em hiperinsulémia. A hiperinsulémia está associada com hipertensão e elevado peso corporal. Dado que a insulina está envolvida na promoção da absorção celular de glucose, aminoácidos e triglicéridos a partir do sangue, por células sensíveis à insulina, a insensibilidade à insulina pode resultar em níveis elevados de triglicéridos e LDL (conhecido como "mau" colesterol), que são factores de risco na doenças cardiovasculares. A constelação de sintomas, que inclui hiperinsulémia combinado com hipertensão, elevado peso corporal, triglicéridos elevados e LDL elevado, é conhecido como Síndroma X. A hiperlipidémia é uma condição caracterizda por um aumento anormal de lipidos no soro, tais como colesterol, triglicéridos e fosfolípidos. Estes lipidos não circulam livremente em solução no plasma, mas estão ligados a proteínas e são transportados como complexos macromole-culares chamados lipoproteínas. Uma forma de hiperlipidemia é a hipercolesterolemia, caracterizada pela existência de 5 ΡΕ1697306 níveis elevados de colesterol LDL. O tratamento inicial para a hipercolesterolemia é, frequentemente, uma dieta com baixo teor de gorduras associada a exercício físico adequado. A intervenção com fármacos inicia-se se os objectivos de diminuição do LDL não são atingidos apenas com dieta e exercício. É desejável diminuir os níveis elevados de colesterol LDL e aumentar os níveis de colesterol HDL. Verificou-se que, na generalidade dos casos, que níveis elevados de HDL estão associados com uma diminuição de risco de doença cardíaca coronária (CHD) . Ver Gordon et al., Am. J. Med., 62, 707-714 (1977); Stampfer et al., N. England J. Med., 325, 373-381 (1991) e Kannel et al., Ann. Internai. Med., 90, 85-91 (1979). Um exemplo de um agente que eleva o HDL é o ácido nicotínico, mas as quantidades necessárias para se conseguir a elevação do HDL estão associadas a efeitos indesejados, como o rubor facial.

Existem diversos tratamentos disponíveis actual-mente para o tratamento de diabetes mellitus, mas esses tratamentos ainda são insatisfatórios e têm limitações. Apesar de o exercício físico e a redução de ingestão de calorias melhorarem a condição do diabético, a cumplicidade com esta aproximação pode ser fraca devido a estilo de vida sedentário e consumo excessivo de comida, em particular de comida com elevado teor de gordura. Consequentemente, o tratamento com hipoglicémicos, tais como as sulfonilureias (e.g., clorpropamida, tolbutamida, tolazamida e aceto-hexa-mida) e biguanidas (e.g., fenformina e metformina) tornam-se frequentemente necessários conforme a doença vai 6 ΡΕ1697306 progredindo. As sulfonilureias estimulam as células β do pâncreas para segregarem mais insulina, conforme a doença vai progredindo. Todavia, a resposta das células β poderá acabar por falhar e é necessário o tratamento com injecções de insulina. Adicionalmente, tanto o tratamento com sulfo-nilureia como a injecção de insulina possuem o efeito lateral, potencialmente fatal, de coma hipoglicémico, devendo, por isso, os pacientes que utilizam estes tratamentos, controlar cuidadosamente a dosagem.

Está bem estabelecido que uma melhoria do controlo glicémico em pacientes com diabetes (Tipo I e Tipo II) é acompanhado por uma diminuição de complicações microvasculares (DCCT e UKPDS). Devido à dificuldade de se manter um controlo glicémico adequado, ao longo do tempo, em pacientes com diabetes de Tipo II, a utilização de sensibilizantes à insulina, na terapia de diabetes de tipo II, tem aumentado. Também existem cada vez mais provas que o agonista PPARy, sensibilizador à insulina, pode ter benefícios no tratamento de diabetes de Tipo II, para além dos efeitos de melhoria do controlo glicémico.

Na última década, emergiu uma classe de compostos, conhecidos como tiazolidinodionas (TDZ) (e.g., U.S. Pat. N° s. 5 089 514, 4 342 771, 4 367 234, 4 340 605 e 5 306 726), como agentes antidiabéticos eficazes, que se demonstrou aumentarem a sensibilidade de tecidos sensíveis à insulina, tais como o músculo esquelético, fígado e tecido adiposo. O aumento de sensibilidade à insulina, em 7 ΡΕ1697306 vez da quantidade de insulina no sangue, reduz a probabilidade de como hipoglicémico. Apesar de se demonstrar que as tiazolidinodionas aumentam a sensibilidade à insulina por ligação a receptores PPARy, este tratamento também produz efeitos laterais indesejados, tais como aumento de peso e edema e, para a troglitazona, toxicidade hepática. A actividade de agonistas parciais dos PPARg, pode tornar-se uma vantagem distinta, dado que alguns estudos mostraram que os agonistas parciais dos PPARy, incluindo moduladores ppar selectivos (SPPARM) possuem melhores perfis de efeitos laterais, em comparação com os agonistas totais, especialmente no que se relaciona com aumento de peso e edema. Ver Rocchi, S. et ai., Molecular Cell, 8:737-747 (2001); Berger, J.P. et al., Mol. Endocrinol. 17:662-676 (2003); Shimaya, A. et al., Metabolism 49:411-417 (2000); Chakrabarti, R., et al., Diabetes 52 (Supl. 1) p601 (Resumo) (2003); Kawai, T. et al., Metabolism, 48:1102-1107 (1999); e Wulff, E. et al., Diabetes 52 (Supl. 1) p 594 (Resumo) (2003).

Também têm sido relatados como moduladores de PPAR, compostos que não são TZD. Adams et al. (WO 97/28115, WO 97/28135 e Patente U.S. N°. 5 895 051) revela acetil-fenóis que são úteis como compostos anti-obesidade e antidiabéticos. Leibowitz et al. (WO 97/28149) revela compostos que são agonistas do PPARô, úteis para tratamento doenças cardiovasculares e estados relacionados. Brooks et al. (WO 02/100813) revela compostos moduladores da PPAR que ΡΕ1697306 são úteis para tratamento de diabetes de tipo II e de outras doenças e condições mediadas por PPAR. Ferritto et al. (WO 2004/000789) revela compostos de amido de ligação a moduladores PPAR. O documento WO-03051821 revela derivados substituídos de ácido fenilpropiónico como agonistas dos PPAR.

Perante o exposto, um objectivo da presente invenção consiste em proporcionar agentes farmacêuticos que modulam os receptores PPAR para prevenir, tratar e/ou aleviar estas doenças ou condições, diminuindo um ou mais dos efeitos laterais não desejados associados com os tratamentos actuais.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Uma forma de realização da presente invenção consiste num composto composto modulador selectivo de receptores activados por proliferadores de peroxisoma (SPPARM), ou um composto posssuindo actividade agonista PPARg parcial, possuindo a fórmula estrutural 1,

I 9 ΡΕ1697306 ou um seu sal, solvato, hidrato ou estereoisómero farma-ceuticamente aceitável, em que R1 e R2 são, cada um independentemente, metilo ou etilo.

Os compostos da presente invenção no tratamento e/ou prevenção de doenças ou condições relacionadas com hiperglicémia, dislipidemia, diabetes de Tipo II, diabetes de Tipo I, hipertrigliceridemia, síndroma X, resistência à insulina, falha cardíaca, dislipidemia diabética, hiperli-pidemia, hipercolesterolemia, hipertensão, obesidade, anorexia, bulimia, anorexia nervosa, doença cardiovascular e outras doenças em que a resistência à insulina seja um componente.

Numa forma de realização, a presente invenção também se relaciona com uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção, ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, e um veículo farmaceuticamente aceitável. O âmbito desta invenção também inclui uma composição farmacêutica contendo outros agentes terapêuticos, assim como um composto da presente invenção, ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a presente invenção relaciona-se com a utilização de um composto da presente 10 ΡΕ1697306 invenção, ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, para a manufactura de um medicamento para tratamento de condições moduladas por PPAR.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Os compostos da presente invenção dirigem-se aos agonistas dos receptores activados por proliferadores de peroxisoma (PPAR). Os compostos da presente invenção relacionam-se, mais especificamente, com um composto modulador selectivo de receptores activados por proliferadores de peroxisoma (SPPARM), ou um composto possuindo actividade agonista parcial de PPARy, que é útil para tratamento e/ou prevenção de distúrbios modulados por um PPAR, tal como diabetes de Tipo II, hiperglicémia, disli-pidemia, diabetes de Tipo I, hipertrigliceridemia, síndroma X, resistência à insulina, falha cardíaca, dislipidemia diabética, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipertensão, obesidade, anorexia bulímica, anorexia nervosa, doença cardiovascular e outras doenças relacionadas.

Uma forma de realização da presente invenção é um composto modulador selectivo de receptores activados por proliferadores de peroxisoma (SPPARM), ou um composto possuindo actividade agonista parcial de PPARy, possuindo uma fórmula estrutural I 11 ΡΕ1697306

I ou um sal, solvato, hidrato ou estereoisómero farmaceu-ticamente aceitável seu derivado, em que R1 e R2 são cada um deles, independentemente, metilo ou etilo.

Uma forma de realização preferida da presente invenção consiste num composto possuindo a fórmula estrutural II,

ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, em que R1 e R2 são cada um deles, independentemente, metilo ou etilo.

Outra forma de realização preferida da presente invenção é um composto de ácido (2S)-3-(4 — {[2-(4-metoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxij-fenil)-2-metoxipropiónico, possuindo a fórmula estrutural III, 12 ΡΕ1697306

ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável. A forma de realização mais preferida da presente invenção, é um composto de ácido 3-(4-{ [2-(4-etoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxi}-fenil)-2-metoxi-propiónico, possuindo a fórmula estrutural IV,

ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável .

Uma forma de realização ainda mais preferida da presente invenção, é um composto de ácido (s)—3—(4—{[2—(4— etoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxi}-fenil)-2-metoxi-propiónico, possuindo a fórmula estrutural V, 13 ΡΕ1697306

V ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável.

Também se encontra englobada na presente invenção uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto da presente invenção ou um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuti-camente aceitável.

Também está englobada na presente invenção uma composição farmacêutica compreendendo: (1) um composto da presente invenção ou um seu sal, solvato, hidrato ou estereoisómero, farmaceuticamente aceitável; (2) um segundo agente terapêutico seleccionado do grupo que consiste em sensibilizadores à insulina, sulfonilureias, biguanidas, megli-tinidas, tiazolidinodionas, inibidores da α-glucosidase, secretágogos da insulina, insulina, agentes anti-hiperlipidémicos, 14 ΡΕ1697306 agentes para elevar o HDL no plasma, inibidores da HMG-CoA redutase, estatinas, inibidores de CoA:colesterol aciltrans-ferase, compostos anti-obesidade, agentes anti-hipercolesterolémicos, fibratos, vitaminas e aspirina; e (3) opcionalmente, um veiculo farmaceuticamente aceitável.

Também está englobada na presente invenção a utilização de um composto da presente invenção para a manufactura de um medicamento para tratar e/ou evitar uma doença ou condição num mamífero, seleccionada do grupo que consiste em hiperglicémia, dislipidemia, diabetes de Tipo II, diabetes de Tipo I, hipertrigliceridemia, síndroma X, resistência à insulina, falha cardíaca, dislipidemia diabética, hiperlipidemia, hipercolesteremia, hipertensão, obesidade, anorexia bulímica, anorexia nervosa, doença cardiovascular e outras doenças em que um componente seja a resistência à insulina.

Também é englobada pela presente invenção a utilização de um composto da presente invenção, ou de um seu sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitavel, para a manufactura de um medicamento para tratamento de uma condição modulada pou um PPAR.

Também está englobada na presente invenção, a utilização de um composto da presente invenção ou de um seu 15 ΡΕ1697306 sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, na manufactura de um medicamento para o tratamento de biabetes.

Os termos utilizados para descrever a presente invenção possuem os significados que se seguem, a menos que indicado de outro modo. 0 termo "halo" refere-se a F, Cl, Br ou I. 0 termo "ingrediente activo" significa o composto genéricamente descrito pela Fórmula I, assim como os sais, solvatos e pró-fármacos de tais compostos. O termo "farmaceuticamente aceitável" significa que o veiculo, diluentes, excipientes e sal devem ser compatíveis com os outros ingredientes da composição e não serem prejudiciais para o seu receptor. As composições farmacêuticas da presente invenção são preparadas segundo procedimentos conhecidos na arte, utilizando ingredientes bem conhecidos e facilmente acessíveis. "Prevenir" refere-se à redução da probabilidade de o receptor incorrer em, ou desenvolver qualquer uma das condições patológicas aqui descritas. "Tratar" refere-se a mediar uma doença ou condição e prevenir ou mitigar a sua progressão ou melhorar os sintomas associados com a doença ou condição. 16 ΡΕ1697306 "Quantidade farmaceuticamente eficaz" significa a quantidade de um composto da presente invenção ou de um seu sal, solvato, hidrato ou pró-fármaco que permitirá a resposta biológica ou médica de um tecido, sistema ou mamífero. Tal quantidade pode ser administrada profilacticamente a um paciente que se julgue susceptível ao desenvolvimento de uma doença ou condição. Tal quantidade, quando administrada profilacticamente a um paciente, também pode ser eficaz para prevenir ou minorar a gravidade da condição mediada. Tal quantidade pretende incluir uma quantidade que seja suficiente para modular um receptor PPAR, tal como um receptor PPARa, PPARy ou PPARa/γ, para mediar uma doença ou condição. As condições mediadas por receptores PPAR incluem, por exemplo, diabetes mellitus, doença cardiovascular, Síndroma X, obesidade e doença gastrointestinal. Outras condições associadas com a modulação de um receptor PPAR incluem condições relacionadas com inflamação, que incluem, por exemplo, IDB (doença inflamatória do intestino), artrite reumatóide, psoríase, doença de Alzheimer, doença de Chron e lesão isquémica de repefusão (síncope e enfarte do miocárdio).

Um "mamífero" é um animal individual que é membro da classe taxonómica Mammalia. A classe Mammalia inclui seres humanos, macacos, chimpanzés, gorilas, gado bovino, porcos, cavalos, ovelhas, cães, gatos, ratinhos ou ratos. A administração ao ser humano é a mais preferida. 17 ΡΕ1697306 O ser humano a quem os compostos e composições da presente invenção são administrados, sofre de uma doença ou condição em que os niveis de controlo de glucose no sangue não são adequadamente controlados sem intervenção médica, mas em que existe insulina endógena presente no sangue humano. A diabetes mellitus não dependente de insulina (NIDDM) é uma doença ou condição crónica caracterizada pela presença de insulina no sangue, mesmo a níveis acima do normal, mas com resistência ou falta de sensibilidade à insulina nos tecidos.

Os técnicos da matéria reconhecerão que existem estereocentros nos compostos da presente invenção. Assim, a presente invenção inclui todos os estereoisómeros e isómeros geométricos possíveis dos compostos aqui reivindicados, incluindo compostos racémicos e os isómeros ópticamente activos.

Os compostos da presente invenção contêm um ou mais centros quirais e existem em diferentes formas ópticamente activas. Quando os compostos da presente invenção contêm um centro quiral, os compostos existem em duas formas enantioméricas e a presente invenção inclui ambos os enantiómeros e misturas de enantiómeros, como as misturas racémicas. A resolução do produto final, um intermediário ou um material de partida, pode ser efectauda por qualquer método adequado conhecido na arte, por exemplo, por formação de sais diastereoisoméricos que podem ser separados por cristalização; formação de derivados ou 18 ΡΕ1697306 complexos diastereoisoméricos que podem ser separados por cristalização e cromatografia gás-líquido ou líquida; reacção selactiva de um enantiómero com um reagente específico para o enantiómero, tal como esterificação enzimática; e cromatografia gás-líquido ou líquida num ambiente quiral, tal como num suporte quiral, por exemplo silica ligada a um ligando quiral, ou em presença de um solvente quiral. Ver também Stereochemistry of Carbon Compounds por E.L. Eliel (Mcgraw Hill, 1962) e Tables of ResolvingAgents por S.H. Wilen. Será tomado em consideração que quando o enantiómero desejado é convertido noutra entidade química por um dos procedimentos de separação descritos acima, é necessário um passo adicional para libertar a forna enantiomérica desejada. Alternativamente, os enantiómeros específicos podem ser sintetizados por síntese assimétrica utilizando reagentes, substratos, catalisadores ou solventes opticamente activos, ou por conversão de um enantiómero no outro por transformação assimétrica.

Quando um composto da presente invenção possui mais do que um substituinte quiral, ele pode existir em formas diastereoisoméricas. Os pares diastereoisoméricos podem ser separados por métodos conhecidos pelos técnicos da matéria, por exemplo cromatografia ou cristalização, e os enantiómeros individuais em cada par podem ser separados como descrito acima. A presente invenção inclui todos os diastereoisómeros de compostos de fórmula I e suas misturas. 19 ΡΕ1697306

Certos compostos da presente invenção podem existir em formas conformacionais deferentes, que podem ser separáveis. A assimetria torcional devida a uma rotação restringida por uma ligação simples assimétrica devida, por exemplo, ao impedimento estérico ou rigidez do anel, podem permitir a separação de conformeros diferentes. A presente invenção inclui todos os isómeros conformacionais de compostos de fórmula I e suas misturas.

Certos compostos da presente invenção podem existir em forma zwiteriónica, e a presente invenção inclui todas as formas zwiteriónica de compostos de fórmula I e suas misturas.

Certos compostos da presente invenção e seus sais podem existir em mais do que uma forma cristalina. Os polimorfos de compostos de fórmula I, fazem parte da presente invenção e podem ser preparados por cristalização de um composto de fórmula I sob condições diferentes, tal como por utilização de solventes diferentes ou de misturas diferentes de solventes para a recristalização; cristalização a diferentes temperaturas; e diversos modos de arrefecimento, desde um arrefecimento muito rápido a um muito lento durante a cristalização. Os polimorfos também podem ser obtidos por aquecimento ou fusão de um composto de fórmula I, seguido por arrefecimento gradual ou rápido. A presença de polimorfos pode ser determinada por espectroscopia de RMN com sonda sólida, espectroscopia de 20 ΡΕ1697306 IR, calorimetris de varrimento diferencial, difracção de raios X pelo pó ou outras técnicas disponíveis.

Certos compostos da presente invenção e seus sais podem existir em mais do que uma forma cristalina, o que inclui cada uma dessas formas cristalinas e suas misturas.

Certos compostos da presente invenção e seus sais também podem existir na forma de solvatos, por exemplo, hidratos e, consequentemente, a presente invenção inclui cada um desses solvatos e suas misturas. "Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a sais de compostos de fórmula I, que são substancialmente não tóxicos para os mamíferos. Sais farmaceuticamente aceitáveis típicos incluem os sais preparados por reacção dos compostos da presente invenção com um ácido mineral, orgânico, uma base orgânica ou uma base inorgânica. Tais sais são conhecidos como sais de adição de base, respecti-vamente. Deve reconhecer-se que o contra-ião particular formando parte de qualquer sal da presente invenção não é de natureza crítica, desde que o sal na sua globalidade seja farmaceuticamente aceitável e o contra-ião não atribua qualidades indesejadas ao sal, na sua globalidade.

Em virtuda da sua entidade ácida, um composto da presente invenção forma sais com bases farmaceuticamente aceitáveis. Alguns exemplos de sais de adição de base incluem sais metálicos, como os de alumínio; sais de metais 21 ΡΕ1697306 alcalinos, como os de lítio, sódio ou potássio; e sais de metais alcalino terrosos, como os de cálcio, magnésio, amónio ou sais com amónio substituído. Exemplos de sais com amónio substituído incluem, por exemplo, aqueles com alquilaminas inferiores, tais como trimetilamina e tri-etilamina; hidroxialquilaminas, tais como 2-hidroxietil-amina, bis-(2-hidroxietil)-amina ou tri-(2-hidroxietil)-amina; cicloalquilaminas, tais como biciclohexilamina ou dibenzilpiperidina, N-benzil-b-fenetilamina, dehidroabie-tilamina, N,N'-bisdi-hidro-abietilamina, glucamina, metil-glucamina de N-piperazina; bases do tipo piridina, tais como piridina, colidina, quinina ou quinolina; e sais de aminoácidos básicos, tais como lisina e arginina.

Exemplos de bases inorgânicas incluem, sem limitação, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, carbonato de potássio, carbonato de sódio, bicarbonato de sódio, bicarbonato de potássio, hidróxido de cálcio ou carbonato de cálcio.

Os compostos da presente invenção que são substituídos com um grupo básico, podem existir como sais com ácidos farmaceuticamente aceitáveis. A presente invenção inclui tais sais. Exemplos de tais sais incluem cloridratos, bromidratos, sulfatos, metanossulfatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartaratos [e.g., (+)-tartaratos, (-)-tartaratos ou suas misturas, incluindo misturas racémicas], succinatos, benzoatos e sais com aminoácidos, como o ácido glutâmico. Esses sais podem 22 ΡΕ1697306 ser preparados por métodos conhecidos pelos técnicos da matéria.

Certos compostos da presente invenção e seus sais também podem existir na forma de solvatos, por exemplo, hidratos e, consequentemente, a presente invenção inclui cada um desses solvatos e suas misturas.

Os compostos da presente invenção, que se liqam a, e activam os PPAR, diminuem um ou mais de: qlucose, insulina, triglicéridos, ácidos gordos e/ou colesterol, são consequentemente, úteis para o tratamento e/ou prevenção de hiperglicemia, dislipidemia e, em particular, de diabetes de Tipo II, assim como outras doenças incluindo síndroma X, diabetes de Tipo I, hipertrigliceridemia, resistência à insulina, dislipidemia diabética, hiperlipidemia, hiperco-lesteremia, falha cardíaca, coagulopatia, hipertensão e doenças cardiovasculares, especialmente arterioesclerose. Além disso, estes compostos são indicados como sendo úteis na regulação do apetite e ingestão de comida em sujeitos sofrendo de distúrbios tais como obesidade, anorexia bulímica e anorexia nervosa.

Os compostos e composições da presente invenção também são úteis para tratamento de distúrbios agudos ou transitórios de sensibilidade à insulina, que por vezes ocorrem após cirurgia, trauma ou enfarte do miocárdio. Os compostos e composições da presente invenção também são úteis para diminuição dos níveis de triglicéridos no soro. 23 ΡΕ1697306 O nível elevado de3 triglicéridos, causado seja por predisposição genética, seja por uma dieta rica em gorduras, é um risco para o desenvolvimento de doença cardíaca, síncope e distúrbios e doenças do sistema circulatório. Qualquer médico com conhecimentos normais saberá como identificar os seres humanos que podem beneficiar com a administração dos compostos e composições da presente invenção.

Os compostos da presente invenção são ainda úteis para o tratamento e/ou profilaxia de hiuperglicemia num ser humano ou num mamífero não humano.

Os compostos da presente invenção são úteis como substâncias terapêuticas para prevenção ou tratamento de síndroma X, diabetes mellitus e distúrbios e doenças endó-crinas relacionadas, num ser humano ou num mamífero não humano. A presente invenção também se relaciona com a utilização de um composto de fórmula I, como descrito acima, para a manufactura de um medicamento para tratamento de uma conição ou doença mediada por PPARa, PPAARy, agonista parcial de PPARy ou agonista duplo de PPARa/γ num mamífero.

Pode ser utilizada uma quantidade terapeutica-mente eficaz de um composto da presente invenção para a preparação de um medicamento útil para tratamento de 24 ΡΕ1697306 síndroma X, diabetes, obesidade, diminuição dos níveis de triglicéridos, elevação dos níveis delipoproteína de alta densidade e para tratar, prevenir ou reduzir o risco de desenvolvimento de arterioesclerose, e para prevenir ou reduzir o risco de episódios de doença aterosclerótica primária ou subsequente em mamíferos, particularmente em seres humanos.

Adicionalmente, pode ser utilizada uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, conjuntamente com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais agentes activos seleccionados entre agentes anti-hiperlipidémicos, agente para aumento de HDL no plasma, agentes anti-hipercolesterolémicos, fibratos, vitaminas, aspirina, secretágogos de insulina ou insulina, para a preparação de um medicamento útil para os tratamentos acima descritos.

As composições contendo o composto da presente invenção ou os seus sais podem, vantajosamente, ser proporcionados como forma de dosagem unitária, contendo cada dose, preferencialmente, de 1 a 500 mg. Deve entender-se que a quantidade de compostos da presente invenção que será administrada, é determinada por um médico, considerando todas as circunstâncias relevantes. O sindrona X inclui o síndroma pré-diabético de resistência à insulina, e as complicações que daí resultam, tais como resistência à insulina, diabetes não dependente 25 ΡΕ1697306 de insulina, dislipidemia, hiperglicemia, obesidade, coagulopatia, hipertensão e outras complicações associadas à biabetes. Os compostos aqui mencionados são úteis no tratamento e/ou profilaxia de qualquer uma ou de qualquer combinação das seguintes: síndroma pré biabético de resistência à insulina, complicações daí resultantes, resistência à insulina, diabtes de Tipo II ou não dependente de insulina, dislipidemia, hiperglicémia, obesidade e as complicações associadas com diabetes, incluindo doença cardiovascular, especialmente arterioesclerose.

Os compostos da presente invenção podem ser utilizados eficazmente sós ou em combinação com um ou mais agentes activos adicionais, dependendo da terapia alvo desejada. A terapia de combinação inclui a administração de uma composição farmacêutica de dosagemsimples, que contem um composto da presente invenção e um ou mais agentes activos adicionais, assim como a administração de um composto da presente invenção e de cada um dos agentes activos na sua própria dosagem farmacêutica separada. Por exemplo, um composto da presente invenção ou um seu derivado e um secretágogo da insulina, tais como bigua-nidas, meglitinidas, tiazolidinodiona, sulfonilureias, insulina ou inibidores da α-glucosidase, podem ser administrados ao paciente em conjunto, numa composição de dosagem oral única, como um comprimido ou uma cápsula, ou cada um dos agentes pode ser administrado de dosagens orais separadas. Quando são utilizadas as dosagens separadas, um composto da presente invenção e um ou mais agentes activos 26 ΡΕ1697306 adicionais podem ser administrados essencialmente ao mesmo tempo, i.e., concorrentemente, ou escalonados no tempo, i.e., sequencialmente; deve enterder-se que a terapia de combinação inclui todos estes regimes.

Um exemplo de tratamento ou prevenção de combinação de arterioesclerose, podem envolver a administração de um composto da presente invenção, ou de sais seus derivados, em combinação com um ou mais agentes terapêuticos activos secundários: agentes anti-hiperlipidémicos, agentes para aumentar o nível de hdl no plasma; agentes anti-hipercolesterolémicos, fibratos, vitaminas ou aspirina. Como notado acima, os compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação com um ou mais agentes activos adicionais.

Outro exemplo de terapia de combinação pode ser observado no tratamento de diabetes e distúrbios relacionados, em que os compostos da presente invenção, ou sais seus derivados, podem ser eficazmente utilizados em combinação com terapêuticos activos secundários, tais como sulfonilureias, biguanidas, meglitinidas, tiazolidine-dionas, inibidores da α-glucosidase, outros secretágogos da insulina, insulina, assim como com os agentes activos discutidos acima para o tratamento de arterioesclerose.

Os exemplos de agentes terapêuticos secundários são sensibilizadores à insulina, agonistas PPARy, glita-zonas, troglitazona, poiglitazona, englitazona, MCC-555, 27 ΡΕ1697306 BRL 49653, biguanidas, metformina, fenformina, insulina, miméticos da insulina, sulfonilureias, tolbutamida, glipizide, inibidores da alga-glucosidase, acarbose, agntes diminuidores do colesterol, inibidores da HMG-CoA redutase, lovastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, atrovastatina, rivastatina, outras estatinas, sequestratos, colestiramina, colestipol, derivados dialquilaminoalquilo de um dextrano com ligaçãoes cruzadas, álcool nicotilico, ácido nicotinico: um sal de um ácido nicotinico, agonistas de PPARa, derivados de ácido fenofibrico, gemfibrozil, clofibrato, fenofibrato, benzafibrato, inibidores da absorção do colesterol, beta-sitosterol, inibidores da acril CoA:colesterol acetiltransferase, melinamida, probucol, agonistas PPARô, compostos anti-obesidade, fenfluramina, dexfenfluramina, fentiramina, sulbitramina, orlistat, inibidores do neuropéptido Y5, agonistas do receptor β3 adrenérgico einibidoresdos transportadores de ácido bilear ileal.

Os compostos da presente invenção e os sais, solvatos e hidratos farmaceuticamente aceitáveis seus derivados possuem propriedades farmacológicas valiosas, e podem ser utilizados em composições farmacêuticas contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção ou sais, esteres ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis seus derivados, em combinação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Os excipientes são substâncias inertes, tais como, sem limitação, veículos, diluentes, agentes de volume, agentes 28 ΡΕ1697306 aromatizantes, edulcurantes, lubrificantes, solubilizantes, agentes de suspensão, agentes molhantes, ligantes, agentes desintegrantes, material de encapsulação e outros adjuvantes convencionais. O excipiente apropriado depende da via de administração escolhida. As composições farmacêuticas tipicas contêm de 1 a 99 por cento em peso de ingrediente activo, sendo este um composto da presente invenção. A Formulação farmacêutica está, preferencialmente, em forma de dosagem unitária. Uma "forma de dosagem unitária" é uma unidade fisicamente discreta contendo uma dose unitária adequada para administração a sujeitos humanos ou outros mamíferos. Uma forma de dosagem unitária pode ser, por exemplo, uma cápsula ou comprimido ou um número de cápsulas ou comprimidos. Uma "dose unitária" é uma quantidade predeterminada de composto activo da presente invenção, calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. A quantidade de ingrediente activo numa dose unitária pode ser variada ou ajustada entre 0,1 a 1000 mg ou mais, de acordo com o tratamento particular envolvido. O regime de dosagem utilizando os compostos da presente invenção é seleccionado por um técnico com conhecimentos vulgares na arte médica ou veterinária, considerando diversos factores, tais como, sem limitação, a espécie, idade, peso, sexo, estado médico do receptor, a gravidade da condição a ser tratada, a via de administra- 29 ΡΕ1697306 ção, o nível de função metabólica e excretora do receptor, a forma de dosagem empregue ou o composto particular e sal seu derivado utilizado.

Os compostos da presente invenção são, preferencialmente, administrados numa dose diária única, ou a dose diária total pode ser administrada em doses divididas, duas, três ou mais vezes por dia. Quando a administração se efectua via formas transdérmicas, a administração é contínua.

As vias de administração adequadas para as composições farmacêuticas da presnte invenção incluem, por exemplo, administração oral, gotas oculares, rectal, trans-mucosa, tópica ou intestinal; administração parentérica (bólus ou infusão), incluindo injecção intramuscular, subcutânea, intramedular, assim como injecção intretecal, intraventricular directa, intravenosa, intraperitoneal, intranasal ou intraocular. Os compostos da presente invenção também podem ser administrados num sistema dirigido de libertação de fármacos, tal como num lipossoma revestido com anticorpo especifico de células endoteliais.

Os compostos da presente invenção podem, para administração oral, ser facilmente formulados combinando os compostos activos com veículos farmaceuticamente aceitáveis conhecidos na arte. Tais veículos permitem que os compostos da presente invenção sejam formulados como comprimidos, pílulas, pós, saquetas, grânulos, drageias, cápsulas, 30 ΡΕ1697306 líquidos, elixires, tinturas, geles, emulsões, xaropes, pastas ou suspensões para ingestão oral pelo paciente a ser tratado. As preparações farmacêuticas para utilização oral podem ser obtidas por combinação do composto activo com um excipiente sólido, opcionalmente moendo a mistura resultante, e processando a mistura de grânulos, após adição dos auxiliares necessários, se desejado, para se obterem núcleos de comprimidos ou de drageias.

Para administração oralna forma de comprimido ou cápsula, o ingrediente activo pode ser combinado com um veículo oral, não tóxico, farmaceuticamente aceitável, tal como, sem limitação, lactose, amido, sacarose, glucose, metilcelulose, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, sulfato de cálcio, carbonato de sódio, manitol ou sorbitol; conjuntamente com, opcionalmente, agentes desintegrantes, tais como, sem limitação, polivinilpirrolidona com ligações cruzadas, milho, amido, metilcelulose, agar, bentonite, goma de xantano, ácido algínico ou um seu sal, como o alginato de sódio; e, opcionalmente, agentes ligantes, por exemplo, sem limitação, gelatina, acácia, açúcares naturais, beta-lactose, edulcorantes de milho, gomas naturais e sintéticas, acácia, tragacanto, alginato de sódio, carboxi-metil-celulose, polietilenoglicol ou ceras; e, opcionalmente, agentes lubrificantes, por exemplo, sem limitação, estearato de magnésio, estearato de sódio, ácido esteárico, oleato de sódio, benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de sódio ou talco. Quando a forma unitária de dosagem é uma cápsula, pode conter, além dos materiais do tipo acima, um veiculo líquido, tal como um óleo gordo. 31 ΡΕ1697306

As formas sólidas incluem pós, comprimidos e cápsulas, Um veiculo sólido pode ser uma ou mais substâncias que podem também actuar como agentes aromatizantes, lubrificantes, solubilizantes, de suspensão, ligantes, desintegrantes do comprimido e material de encapsulação.

Nos pós, o veiculo é um sólido finamente dividido, que se encontra misturado com o ingrediente activo finamente dividido. Nos comprimidos, o ingrediente activo está misturado com um veiculo possuindo as propriedades de ligação adequadas, em proporções adequadas e compactado na forma e tamanho desejados.

Podem estar presentes diversos outros materiais, como revestimento ou para modificar a forma física da unidade de dosagem. Por exemplo, os comprimidos podem ser revestidos com goma-laca, açúcar ou ambos. Um xarope ou elixir pode conter, além do ingrediente activo, sacarose como agente edulcorante, metil e propilparabenos como preservantes, um corante e um aromatizante, como aroma cereja ou de laranja.

Os líquidos estéreis incluem suspensões, emulsões, xaropes e elixires. O ingrediente activo pode ser dissolvido ou suspenso num veículo farmaceuticamente aceitável, tal como água estéril, solvente orgânico estéril ou numa mistura de ambos, água estéril e solvente orgânico estéril. 32 ΡΕ1697306 O ingrediente activo também pode ser dissolvido num solvente orgânico adequado, por exemplo, propile-noglicol aquoso. Podem ser obtidas outras composições, dispersando o ingrediente activo finamente dividido em amido aquoso, solução de carboximetilcelulose sódica ou num óleo adequado.

Os núcleos das drageias são cobertos com revestimentos adequados.Para esta finalidade, podem ser utilizadas soluções concentradas de açúcar, que podem, opcionalmente, conter goma arábica, talco, polivinilpirro-lidona, gel de carbopol, polietilenoglicol e/ou dióxido de titânio, soluções de lacas e solventes orgânicos adequados adequados ou misturas de solventes. Podem ser adicionados corantes ou pigmentos aos revestimentos dos comprimidos ou drageias, para identificação ou para caracterizar diferentes combinaçõesde doses de composto activo.

As preparações farmacêuticas que podem ser utilizadas oralmente, incluem cápsulas de encaixe em gelatina, assim como cápsulas moles, seladas, de gelatina e um plastificante, como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de encaixe podem conter os ingredientes activos em mistura com agentes de volume, como a lactose, ligantes, como os amidos, e/ou lubrificantes, como o talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes. Nas cápsulas moles, o s compostos activos podem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos gordos, 33 ΡΕ1697306 parafina líquida ou polietilenoglicóis líquidos. Adicionalmente, podem ser utilizados estabilizantes.

Todas as formulações para administração oral devem estar em dosagens adequadas para tal administração. As composições particularmente adequadas para administração oral são formas de dosagem unitária tais como comprimidos e cápsulas.

Para administração parentérica, os compostos da presente invenção ou sais seus derivados, podem ser combinados com meios aquosos ou orgânicos estéreis, para formar soluções ou suspensões injectáveis. As formulações para injecção podem ser apresentadas em forma de dose unitária, tal como em ampolas, ou em recipientes multi-dose, com adição de preservantes. As composições podem tomar formas tais como as de suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquoso e podem conter agentes de formulação, tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou de dispersão. As formas farmacêuticas adequadas para utilização injectável incluem soluções ou dispersões aquosas estéreis e pós estéreis para preparação extemporânea de soluções ou dispersões estéreis injectáveis . Em todos os casos a forma tem de ser estéril e tem de ser fluida para permitir a injecção. Deve ser estável nas condições de manufactura e de armazenamento e deve ser preservada contra qualquer contaminação. O veículo pode ser um solvente ou um meio de dispersão contendo, por exemplo, água, preferencialmente em tampões fisiológicamente compa- 34 ΡΕ1697306 tíveis, tais como solução de Hank, solução de Ringer ou tampão salino fisiológico, etanol, poliol (e.g., glicerol, propilenoglicol e polietilenoglicol liquido) misturas adequadas destes, e óleos vegetais. Estas preparações contêm um preservante para evitar o crescimento de micro-organismos nas condições vulgares de armazenamento e utilização.

As soluções injectáveis preparadas desta forma podem então ser administradas intravenosamente, intrape-ritonealmente, subcutâneamente ou intramuscularmente, sendo a administração intramuscular a preferida em seres humanos.

Para administração através da mucosas, são utilizados na formulação penetrantes adequados à barreira a ser permeada. Tais penetrantes são, na generalidade, conhecidos na arte. Os compostos activos também podem ser administrados intranasalmente como, por exemplo, gotas liquidas ou pulverizadas.

Para administração bucal, as composições podem tomar a forma de comprimidos ou lozangos formulados de forma convencional.

Para administração por inalação, os compostos para utilização de acordo com a presente invenção, são convenientemente fornecidos na forma de um inalador de pó seco ou numa apresentação de pulverizador de aerossol a partir de uma embalagem pressurizada ou de um nebulizador, 35 ΡΕ1697306 com utilização de um propelente adequado, e.g., diclo-rodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoro-etano, dióxido de carbono ou de outro gás adequado. No caso do aerossol pressurizado, a dose unitária pode ser determinada proporcionando uma válvula libertando uma quantidade medida. As cápsulas e cartuxos de gelatina para utilização num inalador ou insuflador podem ser formuladas contendo uma mistura em pó de composto e uma base em pó adequada, tal como lactose ou amido.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser manufacturadas de forma conhecida, e.g., por meio de processos de mistura, dissolução, granulação, fabrico de drageias, pulverização, emulsionação, encapsulação, aprisionamento ou lifilização.

No fabrico das composições da presente invenção, o ingrediente activo será geralmente misturado com um veiculo, ou diluído por um veiculo, ou englobado por um veiculo, que pode ter a forma de uma cápsula, saqueta, papel ou outro recipiente. Quando o veiculo serve como diluente, ele pode ser sólido, sólido liofilizado ou pasta, material semi-sólido ou liquido que actue como um veiculo, ou pode tomar a forma de comprimidos, pílulas, pós, lozangos, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossoles (como um sólido ou num meio líquido), ou pomadas contendo, por exemplo, até 10% em peso de composto activo. Os compostos da presente invenção, são, preferencialmente, formulados antes da administração. ΡΕ1697306 36

Ensaios Biológicos

Ensaios de Ligação por Deslocamento Competitivo

Realizaram-se os ensaios utilizando tecnologia de ensaio de cintilação de proximidade (SPA), receptores PPAR e os correspondentes ligandos radiomarcados. Produziram-se os PPARa e PPARy, conjuntamente com os seus homólogos heterodiméricos.receptor a do retinóide X, utilizando um sistema de expressão por baculovírus. Utilizaram-se oligo-nucleótidos biotinilados contendo elementos de resposta PPAR (PPRE) para se ligarem aos correspondentes dimeros receptores em pérolas SPA de silicato de itrio revestidas com streptavidina. Marcaram-se os ligandos específicos para PPARy e PPARa com trítio e utilizaram-se nos ensaios adequados correspondentes. Calcularam-se os valores de IC50 (concentração de composto que provoca uma inibição de 50%) para cada composto concorrente, depois da dedução da ligação não específica (medida em presença de 10 μΜ de ligando não marcado). Avaliaram-se os compostos utilizando uma curva de dose resposta com 11 pontos, com concentrações situadas entre 0,169 nM e 10 μΜ. Os valores apresentados representam médias de uma a sete experiências separadas.

Ensaios de Co-transfecção (CTF)

Expressou-se a constituição de PPARy ou PPARa, 37 ΡΕ1697306 utilizando plasmideos contendo o promotor citomegalovirus. Os plasmideos transcritores para os ensaios CTF de PPARy contêm PPRE dos seguintes genes: acil CoA oxidase; apoli-poproteína Al (ApoAl); ou enoil-CoA hidratase/3-hidro-xiacil-CoA desidrogenase (HD), mais o promotor timidina quinase (TK), a jusante do relator de luciferase cDNA. Também foi utilizado um sistema quimérico de galactosidase bacteriana PPARy (GAL4). Nos ensaios de CTF realizados para a PPARa, o sistema quimérico GAL4 é o padrão. Todos os ensaios foram realizados em células CV-1. Os compostos foram testados em diluição logarítmica, em duplicado, de 0,1 nM a 10 μΜ. Determinaram-se as percentagens de eficácia em relação a moléculas de referência, reflectindo o valor da eficácia o valor mais elevado de actividade agonista conseguida no ensaio CTF, para cada composto. Os valores da concentração média eficaz (EC5o), modelados por uma curva de concentração-resposta, são determinados por computador. Não foram calculados valores de EC50 se a eficácia dos compostos foi <20%. Os valores relatados representam médias de duas a nove experiências separadas.

Ensaios de Recrutamento de Co-factor

Efectuou-se um ensaio em sistema de dois híbridos de mamífero, com formato CTF, em células CV-1. Utilizaram-se os plasmideos seguintes: um vector de expressão de mamífero codificando uma fusão do domínio de ligação GAL4 DNA com o domínio de ligação do ligando PPARy; um vector de 38 ΡΕ1697306 expressão de mamífero codificando uma fusão do domínio de transactivação VP16 com o domínio de interacção de receptor nuclear dos respectivos co-activadores: proteína de ligação CREB (CBP) coactivador-1 do receptor gama activado por proliferador de peroxissoma (PGC-1), co-integrador 2 de activação de sinal (ASC-2), complexo proteico activador doreceptor da hormona tiróide TRAP 220) e péptido C33; e um plasmídeo repórter (locais de ligação GAL4 multimeri-zados/promotor TK mínimo, conduzindo uma cDNA luciferase) . As células foram transfectadas em formato lote e tratadas com composto (diluição logarítmica de 0,1 nM a 10 mM) ou com veículo durante 24 horas. Subsequentemente, as células foram lisadas e mediu-se a actividade da luciferase. A actividade da luciferase serve como terminal de interacção entre o co-activador e o receptor. Os dados são apresentados como % de eficácia em relação a um agonista total da PPARy e representa as medias de quatro a seis experiências separadas.

Alojaram-se ratinhos (Harlan Laboratories, India-napolis, IN) macho, diabéticos (db/db) com cinco semanas de idade, em jaulas de plástico (n=6/jaula; cada jaula mede aproximadamente 10X20X8", com cama de aparas de choupo) com acesso livre a água (sistema de água canalizada em pequenas quantidades) e comida (Purina 5008). Após duas semanas de aclimatação (com sete semanas de idade), retirou-se uma amostra de sangue no dia 0, às 10.00-12.00 (luzes acesas às 6.00 h) e distribuíram-se por grupos de tratamento (n= 5 ou 39 ΡΕ1697306 6), com base nos valores iniciais de glucose. Os tratamentos com composto ou apenas com veículo foram administrados diariamente por gavagem oral, aproximadamente às 7.30 h. Mediu-se o peso corporal no início (dia 0) e no fim (dia 7 ou dia 14) dos estudos. O sangue foi recolhido em tubos heparinizados, a partir da cauda de animais sem eatarem em jejum, duas a três horas após a última dose. Determinaram-se então o hematócrito e os níveis de glucose e triglicéridos. Os valores apresentados para os níveis de glucose e triglicéridos representam a % de normalização, em comparação com os valores de lean littermates, tomados como 100%, ou a normalização da glucose calculada com base num nivel normal de glucose de 250 mg/dl. O significado estatístico entre os grupos experimentais foi avaliado utilizando um teste t de Student de dupla amostragem.

As tabelas que se seguem mostram os dados in vitro para o composto da presente invenção, ácido (2S)—3— (4-{ [2-(4-metoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxi}-fenil)-2-metoxi-propiónico, possuindo a fórmula estrutural III,

III ΡΕ1697306 40

Tabela 1: Ligação e Ensaios de CTF IC50 (a) o LO O 1—1 Ef. (a) ECso (a) Ef. (y) ECso (γ) 113 52 43 1305 60 1893

Tabela 2: Ensaios de Co-factor de Recrutamento

Ef . ECso Ef. ECso Ef. ECso Ef . EC50 Ef. EC50 CBP CBP PGC1 PGC1 TRAP TRAP ASC2 ASC2 C33 C33 220 220 15 1917 23 2065 7 Ef. 15 1378 13 3013 <20

Tabela 3: Ensaios dos Elementos de Resposta

Ef. Gla4 ECso Gla4 Ef. HD ECso HD Ef. LPL ECso LPL 30 1977 54 1136 86 1419 IC50 e EC50 em nM; CTF (Ef.) em % de eficácia.

Tal como mostrado nas tabelas acima, o composto de fórmula III, surpreendentemente, possui uma elevada afinidade agonista parcial para o PPARy, com actividade PPARa. Como mostrado na Tabela 1, este composto liga-se com elevada afinidade ao PPARy (IC50 = 52 nM) e ao PPARa com afinidade relativamente inferior (IC5o = 113). O composto de fórmula III possui uma actividade agonista parcial para o PPARy, como demonstrado pelos ensaios de 41 ΡΕ1697306 recrutamento por co-transfecção e co-factor. Como mostrado nas Tabelas 1 e 3, a eficácia para o PPARy (% de eficácia em comparação com um agonista total do PPARy, calculado como 100%) conseguida com este composto situa-se entre 30 e 86%. Adicionalmente, a capacidade deste composto para recrutar factores específicos para o PPARy situa-se entre 7 e 24%, em comparação com um agonista total do PPARy (calculado como 100% de recrutamento: Tabela 2), tornando assim, o composto de fórmula III um agonista parcial do PPARy. 0 composto também demonstra actividade agonista para o PPARa, como mostrado na Tabela 1 (43% de eficácia, 1305 nM EC50) .

Para se conhecer a eficácia anti-diabética e o perfil de efeitos laterais dos compostos de fórmula III, administrou-se a ratinhos diabéticos (db/db) composto de fórmula III a 1, 3, 10 e 30 mg/kg/dia, durante 14 dias, por gavagem oral. Mediram-se os níveis de glucose no plasma e hematócrito, assim como o peso corporal, antes do início do estudo (dia 0) e no fim do estudo (dia 14) O composto de fórmula III exibiu uma excelente eficácia anti-diabética, reduzindo os níveis de glucose no plasma, com todas as doses experimentadas (glucose: 42,7, 68,3, 96,1 e 109,3% de normalização). Surpreendentemente, a redução dependente da dose nos níveis de hematócrito, indicativo de uma expansão de volume de plasma, não é observado após administração do composto de fórmula III. Dado que a eficácia anti-diabética, conjuntamente com a possibilidade de expansão de volume plasmático são características vulgares dos agonistas totais do PPARy [Armstrong e King (2004), 42 ΡΕ1697306

Mudaliar et al. (2003), Nesto et al. (2004], estes dados sugerem que os compostos de fórmula III podem representar uma terapia melhorada para o tratamento de diabetes de tipo 2, em comparação com os agonistas PPARy comercializados.

As tabelas que se seguem mostram os dados in vitro para o composto da presente invenção, ácido (S)-3-(4-{[2-(4-etoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxij-fenil)-2-metoxi-propiónico, possuindo a fórmula estrutural V,

V

Tabela 1: Ligação e Ensaios de CTF ic50 (a) H O Cn O Ef. (a) EC50 (ct) Ef. (y) ec50 (y) 360 30 39 1814 60 1012

Tabela 2: Ensaios de Co-factor de Recrutamento

Ef . EC50 Ef. EC50 Ef. EC50 Ef . EC50 Ef. EC50 CBP CBP PGC1 PGC1 TRAP TRAP ASC2 ASC2 C33 C33 220 220 18 2638 24 2597 16 3063 33 2868 43 2893 43 ΡΕ1697306

Tabela 3: Ensaios dos Elementos de Resposta

Ef . ECso Ef. HD ECso Ef. ECso Ef. EC50 Gla4 Gla4 HD LPL LPL ApoAl ApoAl 39 1907 58 1041 86 1419 39 335 IC50 e EC50 em nM; CTF (Ef.) em % de eficácia.

Como mostrado nas tabelas acima, o composto de fórmula V, surpreendentemente, possui uma elevada afinidade agonista parcial para o PPARy, com actividade PPARa. Como mostrado na Tabela 1, este composto liga-se com elevada afinidade ao PPARy (IC50 = 30 nM) e ao PPARa com afinidade relativamente inferior (IC50 = 360) . O composto de fórmula V possui uma actividade agonista parcial para o PPARy, como demonstrado pelos ensaios de recrutamento por co-transfecção e co-factor. Como mostrado nas Tabelas 1 e 3, a eficácia para o PPARy (% de eficácia em comparação com um agonista total do PPARy, calculado como 100%) conseguida com este composto situa-se entre 39 e 80%. Adicionalmente, a capacidade deste composto para recrutar factores específicos para o PPARy situa-se entre 16 e 43%, em comparação com um agonista total do PPARy (calculado como 100% de recrutamento: Tabela 2), tornando assim, o composto de fórmula v um agonista parcial do PPARy. O composto também exibe actividade agonista para o PPARa, como mostrado na Tabela 1 (39% de eficácia, 1814 nM EC50) .

Para se conhecer a eficácia anti-diabética e o 44 ΡΕ1697306 perfil de efeitos laterais dos compostos de fórmula V, administrou-se a ratinhos diabéticos (db/db) e com tendência (db?/+), administrou-se composto de fórmula V a 3, 10, 30 e 100 mg/kg/dia, durante 7 dias, por gavagem oral. Mediram-se os niveis de glucose no plasma, triglicéridos e hematócrito, assim como o peso corporal, antes do inicio do estudo (dia 0) e no fim do estudo (dia 7) Os compostos de fórmula V exibiram uma excelente eficácia anti-diabética, reduzindo significativamente os niveis de glucose e triglicéridos no plasma, com todas as dose experimentadas (glucose: 61,2, 87,5, 105,6, 110,3% de normalização; triglicéridos: 108,1, 108,1, 121,1, 130,6% de normalização). O tratamento com o composto de fórmula V, inesperadamente, não mostrou alterações estatisticamente significativas de aumento de peso corporal ou nos niveis do hematócrito, em qualquer dose administrada. Sabe-se que, devido à eficácia anti-diabética, os agonistas totais PPARy são acompanhados por aumento significativo de peso e expansão do volume plasmático, indicando os dados aqui apresentados, que os compostos de fórmula V podem proporcionar uma terapia melhorada para o tratamento de diabetes de tipo 2, em comparação com os agonistas PPARy disponíveis ou comercializados. O esquema reaccional mostrado abaixo, ilustra gerericamente uma via de síntese para preparação dos compostos da presente invenção. Os exemplos detalhados são proporcionados abaixo. ΡΕ1697306 45

Esquema Reaccional Geral

% .NHg

1) ODCC , HQBT 3} O- írssamma Q-teociar^»· NaOH, MeOH R- *.......................................... hidráfee

Exemplo 1 Ácido (2S)—3—(4—{[2-(4-metoxi-fenil)-etilcarba-moil]-metoxi}-fenil)-2-metoxipropiónico

ΡΕ1697306 46

Esquema Reaccional

1) ODCC{2 «q>; HOBT (I eq) 2) 0"Trissmms 0“Esoeranato <2eq)

Passo 1: Síntese do composto (b)

Dissolve-se o composto (a) em acetonitrilo (0,1 M), trata-se com ester de 2-bromo-2-metil-propiónico terc- butílico e 2,5 eq. de carbonato de césio. Agita-se a reacção a 80°C durante cerca de 24 horas, filtra-se e concentra-se. Purifica-se o produto crú por cromatografia em coluna de sílica gel (10% de acetato de etilo/hexano). 47 ΡΕ1697306 Síntese do composto (c)

Dissolve-se o composto (b) obtido no Passo 1 em diclorometano (DCM) e trata-se com 2 eq. de PS-carbodiimida e 1 eq. de HOBT, seguidos por 1,1 eq. de 2-(4-etoxi-fenil)-etilamina. Agita-se a reacção à temperatura ambiente, com agitação orbital, durante cerca de 10 horas. Filtra-se o reagente suportado e lava-se duas vezes com DCM. Dissolve-se o produto crú em DCM e adicionam-se PS-trisamina (2 eq.) e PS-isocianato (1 eq.). Agita-se a reacção à temperatura ambiente durante 2 horas, com agitação orbital. Filtra-se o removedor suportado e lava-se duas vezes com DCM. Remove-se o solvente e o produto crú é utilizado no passo de hidrólise.

Passo 4: Síntese de composto (e)

Dissolve-se em MeOH o composto (d) obtido no Passo 3 e trata-se com 10 eq. de solução aquosa 1M de NaOH. Agita-se a reacção à temperatura ambiente até a análise por HPLC indicar que a hidrólise está completa. Adiciona-se HCl 1M (1M em água) até pH=3 e remove-se o solvente sob vácuo. Dilui-se o resíduo em CH2CI2/H2O e filtra-se através de um cartucho ChemElute. Concentra-se o eluente e purifica-se por HPLC-MS para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. MS (ES) para C2iH25N06 [M-H] + : 386; ponto de fusão 97-98°C. ΡΕ1697306 48

Exemplo 2 (S)-3-(4-hidroxi-

Sal sódico do ácido (R) e fenil)-2-metoxi-propiónico

OMe (d) σ'" Enzima 0 . (S) U Chino Clec CR ij"" tolueno/KhkPQi OMe Passo 4 (e) NaOAc/MeOH Passo 4

1) Quimotripsina 2) NaOAc/MeOH , Passo 5

0‘Na+

0'Na+

Passos 1, 2 e 3: Síntese de composto (d)

Ester metílico do ácido (+/-)-3-(4-hidroxi-fe-nil)-2-metoxi-propiónico

Arrefece-se terc-butóxido de potássio (1,6 M em 49 ΡΕ1697306 tetra-hidrofurano, 1163 mL, 1,86 moles), sob azoto, num banho de gelo seco/acetona até -40°C. Adiciona-se uma mistura de 4-benziloxibenzaldeido (358,9 g, 1,69 moles) e acetato de metilmetoxi (184,3 mL, 1,86 moles) em tetra-hidrofurano, ao longo de 30 a 60 min. Agita-se a reacção a -40°C durante cerca de 1 a 2 h para se obter o composto (b). Adiciona-se lentamente ao intermediário (b) uma solução de anidrido trifluoroacético (710,3 g, 3,38 moles) em tetra-hidrofurano (1600 mL) ao longo de 25 min. e deixa-se a reacção aquecer até uma temperatura não superior a 15°C. Agita-se a reacção de um dia para o outro para proporcionar o composto (c).

Suspende-se paládio sobre carbono (5%, 125,4 g) em tetra-hidrofurano (500 mL) . Adiciona-se a mistura reac-cional contendo o composto (c) (cerca de 4500 mL) e lava-se com tetra-hidrofurano (1000 mL) . Coloca-se a reacção num agitador de Parr, sob 25 psig hidrogénio e à temperatura ambiente. A reacção é hidrogenada durante 26 h a cerca de 19 - 32°C. Filtra-se a mistura através de Hyflo Supercel® e lava-se o agitador de Parr com tetra-hidrofurano (2000 mL) . Concentra-se a solução orgânica in vacuo até ao menor volume possível. Adiciona-se tolueno (2500 mL) e lava-se cuidadosamente a solução com NaHC03 a 10% (280 g em 2800 mL de água). Separam-se as camadas e lava-se a fase orgânica com água (2800 mL) . Concentra-se a fase orgânica in vacuo para proporcionar cerca de 271,8 g (76%) de composto (d), 50 ΡΕ1697306 ester metílico do ácido (+/-)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico, como um óleo.

Passo 4: Síntese de composto (£)

Sal sódico do ácido (S)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico

Ajusta-se o pH de uma solução 0,75 M de KH2P04 para 7,4 - 7,8 com NaOH 5 M. Adiciona-se enzima quiral CLEC CR, com agitação moderada, seguida pela adição do composto (d) (10,0 g, 46,6 mmol) em tolueno (100 mL) . A hidrólise enzimática é efectuada à temperatura ambiente e vai-se adicionando NaOH 1 M conforme necessário para manter o pH acima de 6,5. Para-se a hidrólise quando a concentração da camada aquosa indicar que a conversão está a 35 - 42%, geralmente em cerca de 4 - 36 h, dependendo da actividade da enzima.(ver condições de HPLC abaixo). Filtra-se a enzima da solução e lava-se com solução tampão de KH2P04 (1-2 mL) . Separam-se as fases orgânica e aquosa. Ajusta-se o pH da porção aquosa para 1,9-2,1 com HC1 4M, mantendo-se a temperatura a 20-25°C. Extrai-se a porção aquosa com acetato de isopropilo. Separam-se as camadas. Mede-se o volume da porção de acetato de isopropilo e calcula-se a concentração de composto (e) . Concentra-se a fase com o acetato de isopropilo, in vacuo, até 70-80 mg/mL. Mede-se o volume e calcula-se, antes da cristalização, o número de 51 ΡΕ1697306 moles de composto (e). Adiciona-se, à temperatura ambiente e com agitação moderada, acetato de sódio dissolvido em metanol (11% p/v) à solução de acetato de isopropilo com composto (e), de modo a que seja conseguida uma relação molar de acetato de sódio para o composto (e) de 1.3. Observa-se turvação e formação de cristais em 5 - 10 min. Se não, semeia-se a solução com composto (f) . Quando a turvação e a formação de cristais são evidentes, diminui-se a velocidade de agitação e continua-se a agitação durante 12 h à temperatura ambiente. Filtram-se os cristais, lavam-se com acetato de isopropilo (15 mL) à temperatura ambiente e secam-se sob vacuo a 45°C para se obter o composto (f) (3,1-3,6 g), sal sódico do ácido (S)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico. Se o ensaio quiral ee indicar ee<97%, o material é ressuspenso/recristalizado com 15 volumes de solução v/v de 99% de isopropanol/água, em refluxo.

Condições de HPLC: Coluna: Zorbax RX C-8, 4,6 mm x 25 cm; Fase Móvel: 70% de H3P04 a 0,l%/30% de aceto-nitrilo; Débito: 1 mL/min.; Comprimento de onda: 230 nm; Temperatura: ambiente; Tempos de Retenção: composto (e) = 4,3 - 4,6 min., composto (d) = 9,3 - 9,7 min., acetato de isopropilo = 9,9 - 10,3, tolueno: aprox. 50 min.

Passo 5: Síntese de composto (h)

Sal sódico do ácido (R)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico 52 ΡΕ1697306

Concentrou-se a camada orgânica da hidrólise enzimática (Passo 4), contendo o composto (g), até um óleo. Determinou-se, por HPLC, que a concentração de ester metilico de ácido (R)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico no óleo era de 0,40 g/g de óleo e calculou-se a quantidade total de substrato. Lavou-se o óleo contendo o ester metilico de ácido (R)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico (1399 g, 6,65 moles, corrigido quanto à concentração) com uma combinação de éter terc-butil metilico (11520 mL, 8,2 vol), água (5120 mL, 3,6 vol) e tampão de KH2P04 0, 75 M (2560 mL, 1,8 vol) com o pH ajustado para 7,5 com NaOH 5 N. Tomou-se a camada orgânica resultante para a reacção de hidrólise por adição de tampão de KH2P04 0,75 M (11560 mL, 8,3 vol) com o pH ajustado para 7,5 com NaOH 5 N e de tripsina (25,6 g, 1,8% em peso). Agitou-se a mistura reaccional a 20 - 25°C durante 49 h com agitação rápida, não permitindo qualquer contacto entre as pás do agitador e a parede do recipiente, para minimizar a destruição da enzima. Filtrou-se a solução do produto através de Hyflo Supercel® e lavou-se o bolo de filtrado com tampão de KH2P04 0,75 M (1280 mL, 0,9 vol) com o pH ajustado para 7,5 com NaOH 5 N. Adicionou-se mais éter terc-butil metilico (1280 mL, 0,9 vol) à solução de produto para tornar a separação entre as fases orgânica e aquosa mais distinta.Separou-se a fase aquosa da fase orgânica e diminuiu-se o pH para 2,0 com HC1 4 N (3000 mL, 2,1 vol). 53 ΡΕ1697306

Filtrou-se a porção aquosa através de Hyflo Supercel® para remoção de partículas de matéria enzimática e lavou-se o bolo de filtrado com tampão de KH2P04 0, 75 M (1280 mL, 0,9 vol) com o pH ajustado para 7,5 com NaOH 5 N. Extraiu-se o produto a partir da porção aquosa, com acetato de isopropilo (46800 mL, 33,4 vol.) e concentrou-se o volume de acetato de isopropilo até 4,6 vol (6500 mL) via destilação sob vácuo (45°C/25"Hg). Adicionou-se uma mistura de acetato de sódio (258,5 g, 3,1 moles) em metanol (2176 mL, 1,6 vol) à solução do produto a 20-25°C, ao longo de 15 min. Semeou-se a solução turva com composto (h), agitou-se a 20-25°C durante 9 - 10 h e filtrou-se. Lavou-se o sólido com acetato de isopropilo (1280 mL, 0,9 vol), recolheu-se e secou-se num forno com vácuo a 45°C, de um dia para o outro, para proporcionar o composto (h) (521, 69 g), sal sódico do ácido (R)—3 —(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propió-nico, como um sólido branco com ee = 97,8%.

Exemplo 3 Ácido (R)—3 —(4—{[2-(4-etoxi-fenil)-etilcarba moil]-metoxi}-fenil)-2-metoxipropiónico °°2Η

ÕMe ΡΕ1697306 54

Esquema Reaccional

Passo 1: Síntese de composto (b) Éster metílico do ácido (R)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico

Dissolveu-se o composto (a), sal sódico do ácido (R)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico (Exemplo 2, Passo 5) (5,00 g, 22,9 mmol) em metanol (125 mL) e tratou- se com ácido metanossulfónico (7,44 mL, 114,6 mmol). Agitou-se a reacção durante 1 hora, à temperatura ambiente. 55 ΡΕ1697306

Concentrou-se a reacção in vacuo e tomou-se o resíduo resultante em éter dietílico. Lavou-se a porção orgânica com água (2x) e solução saturada de NaHC03, secou-se (Na2S04), filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar 4,00 g (83%) de um sólido quase branco. O material foi utilizado sem purificação adicional. XH RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7.06 (dd, J = 2,2, 6,4 Hz, 3H), 6,72 (dd, J = 2,2, 6,4 Hz, 2H), 5,38 (s largo, 1H), 3,95 (dd, J = 5,3, 7,1 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 2,95 (m, 2H); EM ("electrospray"), 209,2 (ES-).

Passo 2: Síntese do composto (c)

Ester metílico do ácido(R)-3-(4-terc-butoxicarbo-nilmetoxi-fenil)-2-metoxi-propiónico

Dissolveu-se o composto (b) (5,4 g, 25,69 mmol)

obtido no Passo 1, em acetonitrilo (50 mL), tratou-se bromoacetato de terc-butilo (5,01 g, 25,69 mmol), K2CO3 (7,10 g, 51,37 mmol), iodeto de tetrabutilamónio (0,95 g, 2,57 mmol) e aqueceu-se até 70°C, com agitação rápida, durante 3 h. Filtrou-se a reacção, lavou-se com acetonitrilo e concentrou-se in vacuo. Tomou-se o resíduo resultante em acetato de etilo e lavou-se sequencialmente com água, solução saturada de NaHC03, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a fase orgânica (Na2S04), filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar 8,5 g que foram utilizadas sem purificação adicional. XH RMN 56 ΡΕ1697306 (400 MHz, CDCls) δ 7.12 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,81 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 4,48 (s, 2H), 3,92 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,34 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 1,48 (s, 9H).

Passo 3: Síntese de composto (d)

Ester metílico do ácido (R)-3-(4-carboximetoxi-fenil)-2-metoxi-propiónico

Dissolveu-se o composto(c) (8,5 g, 26,20 mmol), obtido no Passo 2, em diclorometano (190 mL)/ácido trifluoroacético (45 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 4 h. Concentrou-se a reacção in vácuo e dissolveu-se o residuo resultante em acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água (3X) . Extraíu-se o produto para solução saturada de NaHC03 (3X) . Separaram-se as camadas, acidificou-se cuidadosamente a porção aquosa com HC1 5N até pH 3-4. Extraiu-se o aquoso com acetato de etilo (3X), certificando-se que o pH se mantinha a cerca de 3-4 e adicionando mais HC1 5N, se necessário.Secaram-se as porções organicas combinadas Na2SC>4, filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar 6,75 g (96%) de um sólido branco, que foi utilizado sem purificação adicional. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 9,5 (s largo, 1H), 7,15 (d, J = 8, 7 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,65 (s, 2H), 3,94 (dd, J = 5,3, 7,9 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,34 (s, 3H) , 2,96 (m, 2H) ; EM ("electrospray"), 267, 2 (ES-) . 57 ΡΕ1697306

Passo 4: Síntese de composto (e)

Ester metílico do ácido (R)-3-(4—{[2-4-etoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxi}-fenil)-2-metoxipropiónico Método 1: Dissolveu-se o composto (d) (6,4 g, 23,85 mmol), obtido no Passo 3, em diclorometano (150 mL) e tratou-se com hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino) fosfónio (BOP) (15,83 g, 35,78 mmol), hidroxibenzotriazole (4,94 g, 35,78 mmol) e trietilamina (6,66 mL, 47,71 mmol). Arrefeceu-se a reacção em banho de gelo e adicionou-se 2-(4-metoxifenil)etilamina (4,34 g, 26,24 mmol). Removeu-se o banho de gelo e agitou-se a mistura durante cerca de 18 h, à temperatura ambiente. Diluiu-se a reacção com diclorometano e lavou-se sequencialmente com água (2X), HC1 IN (2x), solução saturada de NaHC03 e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a porção orgânica (Na2S04), filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar 17 g de um óleo laranja. Purificou-se o produto em bruto por cromatografia em silica gel, eluindo com acetato de etilo/hexano 1:1, para dar 9,0 g (91%) de um sólido branco. RMN (400 MHz, CDC13) δ 7,15 (d, J = 6, 8 Hz, 2H), 7, 04 (dd, J = 1 ,8, 6, • 6 Hz, 2H), 6,80 (m, 4H), 6, ,60 (s largo, 1H), 4,43 (s, 2H), 4,01 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 3 ,94 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,56 (q, J = 6, 5 Hz, 2H) , , 3,34 (s, 3H), 2,99- -2,95 (m, 2H) , 2,76 (t, J = 7, 0 Hz, 2H) , , 1,41 (t, J = 7,0 Hz :, 3H) . 58 ΡΕ1697306 Método 2: Dissolve-se o composto (d) em acetato de etilo, sob azoto. Adiciona-se 1,1'-carbonildiimidazole (1,27 eq.) e agita-se a reacção à temperatura ambiente durante 1 h. Arrefece-se a reacção num banho de gelo e adiciona-se lentamente 2-(4-metoxifenil)etilamina (1,21 eq.) . Deixa-se a temperatura subir até à ambiente, com agitação, de um dia para o outro. Lava-se a reacção, sequencialmente, com HC1 IN, solução saturada de NaHC03 e água. Concentra-se a porção orgânica in vacuo. Redissolve-se o resíduo resultante em tetra-hidrofurano. Concentra-se a solução in vacuo para remover o acetato de etilo e dar um sólido (93%) . Se necessário, o material é purificado como descrito no Método 1.

Passo 5: Síntese de composto (f)

Acido (R)—3—(4—{[4-etoxi-fenil)-etilcarbamoil]- metoxi}-fenil)-2-metoxi-propiónico

Dissolveu-se o composto (e) (14,0 g, 33,70 mmol), obtido no Passo 4, em tetra-hidrof urano (240 mL) e arre-feceu-se num banho de gelo. Adicionou-se hidróxido de lítio 1,61 g, 67, 39 mmol) em água (95 mL) e deixou-se a mistura com agitação à temperatura ambiente, durante cerca de 2 h. Removeu-se o tetra-hidrofurano in vacuo, adicionou-se éter dietílico e extraiu-se a porção aquosa. Separaram-se as camadas e extraíu-se a camada aquosa com mais éter dietílico. Separou-se a camada e acidificou-se cuidadosamente com HC1 IN. Filtrou-se o precipitado branco resultante e tomou-se em diclorometano. Secou-se a solução (Na2S04), 59 ΡΕ1697306 filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar 12,4 g (92%). RMN (400 MHz, CDC13) δ 7,18 (dd, J = 1,7, 6,5 Hz, 2H) , 7,04 (dd, J = 1,7, 6,5 Hz, 2H) , 6,81 (m, 4H), 6,66 (m largo, 1H), 4,42 (s, 2H), 4,0 (m, 3H), 3,55 (q, J = 7,0 Hz,

2H) , 3,40 (s, 3H) , 3, 10 (m, 1H), 3, 01 (m, 1H) , 2, 76 (t , J = 7,0 Hz, 2H), 1,40 (t ·, J = 7,0 Hz , 3H) . XH RMN (400 MHz, DMSO -d6) δ 12, . 68 (s, 1H), 8 ,04 (t largo, J = = 5, 7 Hz, 1H), 7, 11 (dd, J = 1.7 , 6, 5 Hz, 2H), 7, 07 (dd, J = i, 7, 6, 5 Hz, 2H), 6,81 (m, 4H) , 4, 38 (s, 2H) , 3 ,95 (q, J = 7, 0 Hz, 2H), 3,87 (q, J = 4,8 Hz, 1H), 3 ,30 (m, 3H), 3 ,20 (s, 3H), 2, 88 (m, 1H), 2,81 (m, 1H) , 2,65 (t, J = = 7,0 Hz , 2H), 1,31 (t, J =7,0 Hz, 3H). LCMS - pureza 100%. Massa do ião 400,6 (ES-) e 402,5 (ES+). ee = 97.8%, tempo de retenção = 6,71 min., como determinado por HPLC quiral sob as condições seguintes: coluna: 46 X 15 cm, Chiralpak AD-H; eluente: álcool isopropílico/heptano/ácido trifluoroacético, 50:50:0,1; débito: 0,6 mL/min.; UV: 270 nm.

Exemplo 4 Ácido(S)-3-(4—{[2-(4-etoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxi}-fenil)-2-metoxipropiónico

60 ΡΕ1697306

Preparou-se o composto em epígrafe, essencialmente seguindo os procedimentos descritos no Exemplo 3, a partir de sal sódico do ácido (s)-3-(4-hidroxi-fenil)-2-metoxi-propiónico. Utilizaram-se as modificações que se seguem, tal como mostrado no esquema reaccional abaixo: utilizou-se tolueno no Passo 3 e utilizou-se o Método 2 (Exemplo 3, Passo 4) no Passo 4, com 1,1'-carbonildiimida-zole em acetato de etilo.

Esquema Reaccional

.CQ>H

Et<

OMe 61 ΡΕ1697306 ee = 98,0%, tempo de retenção = 5,59 min., como determinado por HPLC quiral sob as condições seguintes: coluna: 46 X 15 cm, Chiralpak AD-H; eluente: álcool isopropilico/hepta-no/ácido trifluoroacético, 50:50:0,1; débito: 0,6 mL/min.; UV: 270 nm. Massa do ião 400,5 (ES-) e 402,4 (ES+); RMN (CDC13) δ 7,17 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 6,79 (m, 4H), 6,61 (m largo, 1H), 4,42 (s, 2H), 4,01 (m, 3H), 3,55 (q, J = 6,6 Hz, 2H), 3,41 (s, 3H), 3,10 (dd, J = 14,2, 4,6 Hz, 1H), 2,99 (dd, J = 14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,76 (f, J = 6,9 Hz, 2H), 1,41 (t, J = 6,9 Hz, 3H).

Lisboa, 9 de Outubro de 2007

Claims (10)

1. ΡΕ1697306 1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto possuindo a fórmula estrutural I,

   ou um sal, solvato, hidrato ou estereoisómero farmaceu-ticamente aceitável, seu derivado, em que R1 e R1 são, cada um independentemente, metilo ou etilo.

   ou um sal, solvato, hidrato ou estereoisómero farmaceutica-mente aceitável, seu derivado, em que R1 e R1 são, cada um independentemente, metilo ou etilo. 1 Composto da Reivindicação 1, possuindo a fórmula estrutural II,
2. 2 ΡΕ1697306
3. 3. Composto da Reivindicação 2, em que o composto é ácido (2S)-3-(4-{[2-(4-metoxi-fenil)-etilcarba-moil]-metoxi}fenil)-2-metoxi-propiónico, de fórmula estrutural III,

   ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, seu derivado.
4. 4. Composto da Reivindicação 1, em que o composto é ácido 3-(4-{[2-(4-etoxi-fenil)-etilcarbamoil]-metoxi }-fenil)-2-metoxi-propiónico, de fórmula estrutural IV,

   ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, seu derivado.
5. 5. Composto da Reivindicação 4, em que o composto é ácido (S)-3-(4—{[2-(4-etoxi-fenil)-etilcarba- 3 ΡΕ1697306 moil]-metoxi}fenil)-2-metoxi-propiónico, de fórmula estrutural V,

   V ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, seu derivado.
6. 6. Composição farmacêutica, compreendendo um veiculo farmaceuticamente aceitável e um composto de qualquer uma das Reivindicações 1-5 ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, seu derivado.
7. 7. Composição farmacêutica, contendo: 1) um composto de qualquer uma das Reivindicações 1-5, ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, seu derivado; 2) um segundo agente terapêutico seleccionado do grupo que consiste em sensibilizadores à insulina, sulfo-nilureias, biguanidas, meglitinidas, tiazolidino-dionas, inibidores da α-glucosidase, secretágogos da insulina, insulina, agentes anti-hiperlipidémi-cos, agentes para elevar o HDL no plasma, inibidores da HMG-CoA redutase, estatinas, inibidores de CoA:colesterol aciltransferase, compostos anti- 4 ΡΕ1697306 obesidade, agentes anti-hipercolesterolémicos, fi-bratos, vitaminas e aspirina; e 3) opcionalmente, um veiculo farmaceuticamente aceitável .
8. 8. Utilização de um composto de qualquer uma das Reivindicações 1-5, ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável, seu derivado, para a manufactura de um medicamento para o tratamento de uma condição modulada por um PPAR.
9. 9. Utilização, de acordo com a Reivindicação 8, para a manufactura de um medicamento para o tratamento de diabetes.
10. 10. Utilização, de acordo com a Reivindicação 8, para tratamento de uma doença seleccionada de hipeglicemia, dislipidemia, diabetes de Tipo II, diabetes de Tipo I, hi-pertrigliceridemia, síndroma X, resistência à insulina, falha cardíaca, dislipidemia diabética, hiperlipidemia, hi-percolesteremia, hipertensão, obesidade, anorexia bulímica, anorexia nervosa, doença cardiovascular e outras doenças em que a resistência à insulina seja um dos componentes. Lisboa, 9 de Outubro de 2007