PT1663235E - Novos bloqueadores dos canais do sódio de pirazinoílguanidina protegida - Google Patents

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Michael R Johnson
Jianzhong Zhang
Bruce F Molino
Bruce J Sargent
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Description

ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
DESCRIÇÃO "Novos bloqueadores dos canais do sódio de pirazinoílguanidina protegida" ANTERIORIDADE DA INVENÇÃO Campo da invenção A presente invenção refere-se a bloqueadores dos canais do sódio. A presente invenção também inclui uma variedade de métodos de tratamento utilizando estes bloqueadores dos canais do sódio da invenção.
Descrição da Anterioridade
As superfícies mucosas, na interface entre o ambiente e o corpo, desenvolveram um número de "defesas inatas", i.e., mecanismos de protecção. Uma forma principal destas defesas inatas é limpar estas superfícies com líquido. Tipicamente, a quantidade da camada de líquido sobre uma superfície mucosa reflecte o equilíbrio entre a secreção epitelial de líquido, frequentemente reflectindo a secreção de aniões (Cl- e/ou HCO3-) acoplados com a água (e um catião contra-ião) e a absorção epitelial de líquido, frequentemente reflectindo a absorção de Na+, acoplado com água e um contra-anião (Cl- e/ou HCO3-) . Muitas doenças das superfícies mucosas são causadas por muito pouco líquido protector sobre essas superfícies mucosas criado por um desequilíbrio entre a secreção (a menos) e a absorção (relativamente a mais). Os processos defeituosos de transporte de sais que caracterizam estas disfunções mucosas residem na camada epitelial da superfície mucosa.
Uma abordagem para reabastecer a camada de líquido protector sobre as superfícies mucosas é "reequilibrar" o sistema através do bloqueio do canal do Na+ e da absorção de líquido. A proteína epitelial que medeia o passo limitante da velocidade da absorção de líquido e Na+ é o canal do Na+ epitelial (ENaC). 0 ENaC está posicionado sobre a superfície apical do epitélio, i.e. a superfície da interface mucosa-ambiente. Portanto, para inibir a absorção de Na+ e líquido mediada por ENaC, um bloqueador de ENaC da classe da 2 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ amilorida (que bloqueia a partir do domínio extracelular de ENaC) tem que ser entregue na superfície mucosa e, o que é importante, ser mantido neste local, para se alcançar uma utilidade terapêutica. A presente invenção descreve doenças caracterizadas por muito pouco líquido sobre as superfícies mucosas e bloqueadores dos canais do sódio "tópicos" desenhados para exibir uma potência aumentada, uma absorção mucosa reduzida, e dissociação lenta ("libertação" ou separação) de ENaC necessária para a terapia destas doenças. A bronquite crónica (BC), incluindo a forma genética de bronquite crónica letal mais comum, fibrose quística (FQ), são doenças que reflectem a falha do corpo na limpeza do muco normalmente a partir dos pulmões, que ultimamente produz infecção crónica das vias aéreas. No pulmão normal, a defesa primária contra a infecção intrapulmonar crónica das vias aéreas (bronquite crónica) é mediada pela depuração contínua de muco das superfícies bronquiais das vias aéreas. Esta função na saúde remove eficazmente do pulmão toxinas e patogénios potencialmente nocivos. Dados recentes indicam que o problema inicial, i.e., o "defeito básico", tanto na BC como na FQ, é a falha da depuração do muco das superfícies das vias aéreas. A falha na depuração do muco reflecte um desequilíbrio entre a quantidade de líquido e a mucina nas superfícies das vias aéreas. Este "líquido da superfície das vias aéreas" (ASL, do inglês "Airway Surface Liquid")) é principalmente composto por sal e água em proporções similares às do plasma (i.e., isotónicas). As macromoléculas de mucina organizam-se numa "camada de muco" bem definida que normalmente aprisiona bactérias inaladas e é transportada para o exterior do pulmão através das acções dos cílios que batem numa solução aguada, de baixa viscosidade, denominada o "líquido periciliar" (PCL). No estado de doença, há um desequilíbrio nas quantidades de muco como o ASL nas superfícies das vias aéreas. Isto resulta numa redução relativa no ASL que leva à concentração de muco, à redução da actividade lubrificante do PCL, e à falha na depuração do muco por via da actividade ciliar para a boca. A redução na depuração mecânica de muco a partir do pulmão conduz à colonização bacteriana crónica de muco aderente às superfícies das vias aéreas. É a retenção crónica de bactérias, a insuficiência de substâncias antimicrobianas locais para matar bactérias aprisionadas no muco numa base 3 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ crónica, e as consequentes respostas inflamatórias crónicas do corpo a este tipo de infecção na superfície, que conduzem às síndromes de BC e FQ. A presente população afectada nos E.U.A. é de 12 000 000 de pacientes com a forma adquirida (principalmente a partir da exposição ao fumo de cigarros) de bronquite crónica e de aproximadamente 30 000 pacientes com a forma genética, de fibrose quística. Números aproximadamente iguais de ambas as populações estão presentes na Europa. Na Ásia existe pouca FQ mas a incidência de BC é elevada e, como no resto do mundo, está a aumentar.
Existe presentemente uma grande necessidade, não satisfeita, de produtos que tratem especificamente a BC e a FQ ao nível do defeito básico que causa estas doenças. As presentes terapias para a bronquite crónica e para a fibrose quística focam-se no tratamento dos sintomas e/ou dos efeitos tardios destas doenças. Assim, para a bronquite crónica, β-agonistas, esteróides inalados, agentes anticolinérgicos e teofilinas orais e inibidores de fosfodiesterase, estão todos em desenvolvimento. Contudo, nenhum destes fármacos trata efectivamente o problema fundamental da insuficiência da depuração de muco do pulmão. Similarmente, na fibrose quística é utilizado o mesmo espectro de agentes farmacológicos. Estas estratégias foram complementadas com estratégias mais recentes desenhadas para depurar o pulmão de FQ do ADN ("Pulmozyme"; Genentech) que foi depositado no pulmão por neutrófilos que tentaram futilmente matar as bactérias que crescem em massas de muco aderentes e através da utilização de antibióticos inalados ("TOBI") desenhados para aumentar os mecanismos de morte do próprio pulmão para livrar as placas de muco aderentes das bactérias. Um princípio geral do corpo é que se a lesão inicial não for tratada, neste caso a retenção/obstrução de muco, as infecções bacterianas tornam-se crónicas e crescentemente refractárias à terapia antimicrobiana. Assim, uma principal necessidade terapêutica não satisfeita, para ambas as doenças pulmonares BC e FQ, é de um meio eficaz para reidratação do muco das vias aéreas (i.e., restabelecimento/expansão do volume do ASL) e promoção da sua depuração, com bactérias, do pulmão. 4 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ US 3,313,813 refere-se a compostos (3-amino-5,6-pirazinoíl dissubstituído)guanidina que possuem propriedades diuréticas e natriuréticas. Estes compostos são divulgados como aumentando selectivamente a excreção de iões de sódio sem causar um aumento na excreção de iões de potássio. R.C. Boucher, em U.S. 6,264,975, descreve a utilização de bloqueadores dos canais do sódio de pirazinoílguanidina para hidratar superfícies mucosas. Estes compostos, tipificados pelos bem conhecidos diuréticos amilorida, benzamilo e fenamilo, são eficazes. Contudo, estes compostos sofrem da significativa desvantagem de que (1) são relativamente impotentes, o que é importante porque a massa de fármaco que pode ser inalada pelo pulmão é limitada; (2) são rapidamente absorvidos, o que limita a semivida do fármaco na superfície mucosa; e (3) são livremente dissociáveis do ENaC. A soma destas desvantagens concretizadas nestes bem conhecidos diuréticos produz compostos com potência e/ou semivida eficaz insuficientes sobre superfícies mucosas para terem benefício terapêutico para hidratar superfícies mucosas.
Claramente, o que é necessário são fármacos que sejam mais eficazes no restabelecimento da depuração de muco dos pulmões de pacientes com BC/FQ. 0 valor destas novas terapias será reflectido em melhorias na qualidade e na duração da vida para ambas as populações, de FQ e de BC.
Outras superfícies mucosas no corpo, e sobre o corpo, exibem diferenças subtis na fisiologia normal dos líquidos protectores da superfície nas suas superfícies mas a patofisiologia da doença reflecte um tema comum, i.e., muito pouco líquido protector da superfície. Por exemplo, na xerostomia (boca seca) a cavidade oral está desprovida de líquido devido a uma insuficiência das glândulas parótidas sublingual e submandibular na secreção de líquido apesar da absorção continuada de liquido mediada pelo transporte de Na+ (ENaC) da cavidade oral. Similar, a ceratoconjuntivite seca (olho seco) é causada pela insuficiência das glândulas lacrimais na secreção de líquido na face de absorção continuada de líquido dependente de Na+ em superfícies da conjuntiva. Na rinossinusite, existe um desequilíbrio, como na BC, entre a secreção de mucina e a depleção relativa de ASL. 5 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Finalmente, no tracto gastrointestinal, a insuficiência na secreção de Cl- (e líquido) no intestino delgado proximal, combinada com absorção aumentada de Na+ (e líquido) no íleo terminal conduz à síndrome de obstrução intestinal distai (DIOS). Em pacientes mais idosos a absorção excessiva de Na+ (e volume) no colon descendente produz obstipação e diverticulite.
Cinquenta milhões de americanos e centenas de milhões de outros em todo o mundo sofrem de pressão sanguínea elevada e da subsequente sequela que leva a insuficiência cardíaca congestiva e aumento da mortalidade. É a principal causa de morte no mundo ocidental e existe uma necessidade de novos medicamentos para tratar estas doenças. Assim, em adição, alguns dos novos bloqueadores dos canais do sódio da presente invenção podem ser desenhados para ter como alvo o rim e como tal podem ser utilizados como diuréticos para o tratamento de hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva (ICC) e outras doenças cardiovasculares. Estes novos agentes podem ser utilizados isoladamente ou em combinação com betabloqueadores, inibidores de ACE, inibidores de HMGCoA-redutase, bloqueadores dos canais do cálcio e outros agentes cardiovasculares.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO É um objecto da presente invenção proporcionar compostos que são mais potentes e/ou menos rapidamente absorvidos das superfícies mucosas e/ou que são menos reversíveis em comparação com compostos conhecidos. É outro aspecto da presente invenção proporcionar compostos que são mais potentes e/ou menos rapidamente absorvidos e/ou exibem menos reversibilidade, em comparação com compostos tais como amilorida, benzamilo e fenamilo.
Portanto, os compostos irão proporcionar uma semivida farmacodinâmica prolongada sobre superfícies mucosas em comparação com compostos conhecidos. É outro objecto da presente invenção proporcionar compostos que (1) são absorvidos menos rapidamente das superfícies mucosas, especialmente das superfícies das vias aéreas, em comparação com compostos conhecidos e; (2) quando 6 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ absorvidos a partir de superfícies mucosas após administração nas superfícies mucosas, são convertidos in vivo em seus derivados metabólicos que têm eficácia reduzida no bloqueio dos canais do sódio em comparação com o composto progenitor administrado. É um outro objecto da presente invenção proporcionar compostos que são mais potentes e/ou menos rapidamente absorvidos e/ou exibem menos reversibilidade, em comparação com compostos tais como amilorida, benzamilo e fenamilo. Portanto, estes compostos irão proporcionar uma semivida farmacodinâmica prolongada em superfícies mucosas em comparação com compostos anteriores. É outro objecto da presente invenção proporcionar compostos que têm como alvo o rim para utilização no tratamento de doenças cardiovasculares. É outro objecto da presente invenção proporcionar métodos de tratamento que tiram proveito das propriedades farmacológicas dos compostos acima descritos.
Em particular, é um objecto da presente invenção proporcionar métodos de tratamento que assentam na reidratação de superfícies mucosas.
Em particular, é um objecto da presente invenção proporcionar métodos de tratamento de doenças cardiovasculares.
Os objectos da presente invenção podem ser alcançados com uma classe de compostos de pirazinoílguanidina representados pela fórmula (I):
4 em que X é hidrogénio, halogéneo, trifluorometilo, alquilo Ci-C7, fenilo não substituído ou substituído com halogéneos, alquil Ci-C7-tio, fenil-alquil Ci-C7-tio, alquil Ci-C7-sulfonilo ou fenil-alquil Ci-C7-sulfonilo; 7 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Υ é hidrogénio, hidroxilo, mercapto, alcoxi Ci-C7, alquil Ci-C7-tio, halogéneo, alquilo Ci-C7, fenilo não substituído ou substituído com halogéneos ou -N(R2)2; R1 é hidrogénio ou alquilo Ci-C7; cada R2 é, independentemente, -R7, -(CH2)m-OR8, - (CH2) m-NR7R10, ~ (CH2) n (CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -(CH2)n-C(=0)NR7R10, - (CH2) n-Zg-R7, - (CH2) m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8)n- CH2OR8, - (CH2) n-C02R7 ou r\ —(CH2)n
R' O R3 e R4 são, cada um independentemente, hidrogénio, um grupo representado pela fórmula (A) , alquilo Ci-C7, hidroxi-alquilo C2-C7, fenilo, fenil-alquilo C2-C7, (halofenil)- alquilo Ci-C7, (alquilfenilalquilo)-C2-C7, (alcoxifenil) C2-C7-alquilo C2-C7, naftil-alquilo Ci-C7 ou piridil-alquilo Ci-C7, com a condição de que pelo menos um de R3 e R4 seja um grupo representado pela fórmula (A):
R \ (A) —(C(Rl)2)o— X—(C(Rl)2)p—(
(A em que cada Rl é, independentemente, -R7, - (CH2) n-0R8, -0-(CH2)m-0R8, - (CH2) n-NR7R10, -0- (CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -0- (CH2CH20) m-R8, -(CH2CH20)m-CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) ^CHzCHsNRV0, -(CH2)n- C (=0) NR7R10, -0-(CH2)m-C(=0)NR7R10, - (CH2) n- ( Z) g-R7, -0-(CH2)m- (Z)g-R7, -(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m-NR10- CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0-(CH2) m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glucose,
R7 OU —(CH2)n .0,
-O R7 R' cada o é, independentemente, um número inteiro de 0 a 10; cada p é um número inteiro de 0 a 10; com a condição de que a soma de o e p em cada cadeia contígua seja de 1 a 10; 8 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ cada χ é, independentemente, 0, NR10, C(=0), CHOH, C(=N-R10), CHNR7R10 ou representa uma ligação simples; em que cada R5 é, independentemente, Ligante- (CH2) n-CAP, Ligante- (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CAP, Ligante-(CH2CH20) m-CH2-CAP, Ligante- (CH2CH20) m-CH2CH2-CAP, Ligante- (CH2) n- (Z) g-CAP, Ligante-(CH2) η (Z) g- (CH2) m-CAP, Ligante- (CH2) n-NR13-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CAP, Ligante- (CH2) n- (CHOR8) mCH2-NR13- (Z) g-CAP, Ligante- (CH2) nNR13- (CH2) m (CHOR8) nCH2NR13- ( Z) g-CAP, Ligante- (CH2) m- (Z) g- (CH2) m-CAP,
Ligante-NH-C (=0) -NH- (CH2)m-CAP, Ligante- (CH2)m-C (=0)NR13-
(CH2) m—C (=0) NR10R10, Ligante- (CH2) m-C (=0) NR13- (CH2) m-CAP, Ligante-(CH2) m-C (=0) NR11R11, Ligante- (CH2) n- (Z) g- (CH2) m- (Z) g-CAP
Ligante-Zg- (CH2) m-Het- (CH2) m-CAP; cada Ligante é, independentemente, -0-, -(CH2)n-, -0(CH2)m-, -NR13-C(=0)-NR13, -NR13-C(=0)-(CH2)m-, -C (=0) NR13- (CH2) m-, — (CH2) n—Zg— (CH2) n, -s-, -so-, -so2-, -so2nr7-, -so2nr10- ou -Het-; cada CAP é, independentemente, tiazolidinodiona, oxazolidinodiona, heteroaril-C (=0) NR13R13, heteroaril-W, -CN, -0-C( = S)NR13R13, ZgR13, -CR10 (ZgR13) (ZgR13) , -C (=0) OAr, -C(=0)NR13Ar, imidazolina, tetrazole, tetrazoloamida, -S02NHR13, -S02NH-C (R13R13) - (Z) g-R13, um amino-açúcar ou oligossacárido ciclicos,
cada Ar é, independentemente, fenilo, fenilo substituído com halogéneos, em que os substituintes do fenilo substituído com halogéneos são 1-3 substituintes seleccionados, independentemente, do grupo que consiste em OH, 0CH3, NR13R13, Cl, Fe —CH3 ou heteroarilo; cada W é, independentemente, tiazolidinodiona, oxazolidinodiona, heteroaril-C (=0) NR13R13, -CN, -0-C (=S) NR13R13, -ZgR13, -CR10 (ZgR13) (ZgR13) , -C(=0)0Ar, -C(=0)NR13Ar, imidazolina, tetrazole, tetrazoloamida, -S02NHR13, -S02NH-C (R13R13) - (Z) g-R13, um açúcar ou oligossacárido cíclicos, um amino-açúcar ou oligossacárido ciclicos, 9 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ jjR13 tW ‘^V^X^CONR^R13 NR'3fti3 L-NR13 „ ou -R7, -OR7, 11 cada R6 é independentemente, - (CH2) m-OR8, -O- (CH2) m-OR8, ,-CH2OR8, -O- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CHzCHzOím-CHsCHzNRV0, -(CH2)n-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR ) n - (CH2CH20) m-R8, (CH2CH20) m-RB, -O- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10 - (CH2) n- (Z) g-R' CH2(CHOR8) (CHOR8) n"CH2OR8, C (=0)NR7R10
-OR -N(R7)2, -O- (CH2)m-NR7R10, - ( ch2 ) n-c (=0) NR7R10, -0- (CH2) m- ( Z ) g-R7, -0-(CH2)m- CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0-(CH2)m-C02R7í -O-glucose, - (CH2) n-NR10--0- (CH2)m-NRlu-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n--OSO3H, -O-glucuronida, ,10 —0-kCH2)
ou —(CH2)n-
R/ O em que, quando dois R8 são —OR11 e estão localizados mutuamente adjacentes num anel fenilo, as porções alquilo dos dois R6 podem estar ligadas para formar um grupo metilenodioxi; com a condição de que quando pelo menos dois -CH2OR8 estão localizados mutuamente adjacentes, os grupos R8 podem estar unidos para formar um 1,3-dioxano ou 1,3-dioxolano ciclico mono- ou di-substituído, cada R7 é, independentemente, hidrogénio alquilo C1-C7, fenilo ou fenilo substituído com halogéneos; cada R é, independentemente, hidrogénio, alquilo C1-C7, -C(=0)-Rn, glucuronida, 2-tetra-hidropiranilo ou
cada R9 é, independentemente, -C02R13, -CON(R13)2, -S02CH2R13 ou -C (=0) R13; cada R10 -C (=0) NR13R13 r independentemente, -H, -S02CH3, ~C(=0)R13 ou - (CH2) m- (CHOH) n-CH20H; co2r13, 10 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ cada Ζ é, independentemente, -CHOH, C(=0), (CH2)n-, CHNR13R13, C=NR13 ou NR13; cada R11 é, independentemente, alquilo Ci-C7; cada R12 é, independentemente, -SO2CH3, -CO2R13, -C (=0) NR13R13, -C (=0) R13 ou -CH2-(CHOH) n-CH20H; cada R13 é, independentemente, hidrogénio, R7, R10, -(CH2)m- NR13R13, -(CH2)m- NR1JR1JR , - (CH2) m- (CHOR8) m- (CH2) mNR13R13, -(CH2)m- + NR10R10, -(CH2)m-(CHOR8)m-(CH2)mNRBR13R13, _(CH2)n_
-V /
I
V -(CH2)n- λ Iy
N-V
/ \ I ISW 13 -(CH2)n- \ /
-V ou -(ch2)· Λ"Λ
Μ N w com a condição de que NR13R13 possa estar unido sobre si próprio para formar um anel compreendendo um dos seguintes: NR13 j -(CH2)m(CHOR)sm-(CH2)nR« , (CH2)m(CHOR)8m-(CH2)nR11 . /“\ SJ l\ V_/ 11 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 11 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ -(CH2UCHOR)8m-(CH2)nR11 R11 / \ Ν Ν \_/ cada Het é, independentemente, -NR13-, -S-, -SO- ou -SO2-, -0-, -S02NR13-, -NHSO2-, -NR13C0- ou -CONR13-; cada g é, independentemente, um número inteiro de 1 a 6; cada m é, independentemente, um número inteiro de 1 a 7; cada n é, independentemente, um número inteiro de 0 a 7; cada Q é, independentemente, C-R5, C-R6 ou um átomo de azoto, em que no máximo três Q num anel são átomos de azoto; cada V é, independentemente, - (CH2) m-NR7R10, - (CH2)m-NR7R7, - (CHzJm-N^R1^11, - (CH2) n- (CHOR8) m- (CH2) mNR7R10, - (CH2) n-NR10R10, - (CH2) n- (CHOR8) m- (CH2) mNR7R7, - (CH2) n- (CHOR8) m- (CH2) mN+R11R11R11, com a condição de que quando V está ligado directamente a um átomo de azoto, então V pode também ser, independentemente, R7, R10 OU (r11)2; em que, para cada um dos compostos acima, quando dois grupos -CH2OR8 estão localizados 1,2- ou 1,3- em relação um ao outro, os grupos R8 podem estar unidos para formar um 1,3-dioxano ou 1,3-dioxolano cíclico mono- ou di-substituído; em que qualquer dos compostos acima pode ser um seu sal farmaceuticamente aceitável, e em que os compostos acima são, inclusive de todos os seus enantiómeros, diastereómeros e misturas racémicas. A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas que contêm um composto aqui descrito acima. A presente invenção também proporciona um método para promover a hidratação de superfícies mucosas, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) numa superfície mucosa de um indivíduo. A presente invenção também proporciona um método para o restabelecimento da defesa mucosa, compreendendo: 12 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ a administração tópica de uma quantidade eficaz de composto representado pela fórmula (I) numa superfície mucosa de um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para o bloqueio de ENaC, compreendendo: o contacto dos canais do sódio com uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I). A presente invenção também proporciona um método para a promoção da depuração de muco em superfícies mucosas, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) numa superfície mucosa de um indivíduo. A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de bronquite crónica, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de fibrose quística, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de rinossinusite, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado por uma fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de desidratação nasal, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) nas passagens nasais de um indivíduo disso necessitado. 13 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Numa concretização específica, a desidratação nasal é devida a administração de oxigénio seco ao indivíduo. A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de sinusite, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de pneumonia, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para a prevenção de pneumonia induzida por ventiladores, compreendendo: a administração de um composto eficaz representado pela fórmula (I) a um indivíduo por meio de um ventilador. A presente invenção também proporciona um método para tratamento de asma, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento de discinesia ciliar primária, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento de otite média, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. 14 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ A presente invenção também proporciona um método para induzir expectoração para fins de diagnóstico, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento da doença pulmonar obstrutiva crónica, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento de enfisema, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento do olho seco, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) no olho do indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para promoção de hidratação ocular, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) no olho do indivíduo. A presente invenção também proporciona um método para a promoção de hidratação corneai, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) no olho do indivíduo. A presente invenção também proporciona um método para tratamento da doença de Sjõgren, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. 15 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ A presente invenção também proporciona um método para tratamento de secura vaginal, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) no tracto vaginal de um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento da pele seca, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) na pele de um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento da boca seca (xerostomia), compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de composto representado pela fórmula (I) na boca do indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento da síndrome de obstrução intestinal distai, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento de esofagite, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento de obstipação, compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. Numa concretização deste método o composto é administrado oralmente ou através de um supositório ou enema. 16 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ A presente invenção também proporciona um método para tratamento de diverticulite crónica compreendendo: a administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para tratamento de hipertensão, compreendendo a administração do composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para redução da pressão sanguínea, compreendendo a administração do composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para o tratamento de edema, compreendendo a administração do composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para promoção da diurese, compreendendo a administração do composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para promoção da natriurese, compreendendo a administração do composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado. A presente invenção também proporciona um método para promoção de salurese, compreendendo a administração do composto representado pela fórmula (I) a um indivíduo disso necessitado.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção é baseada na verificação de que os compostos de fórmula (I) são mais potentes e/ou menos rapidamente absorvidos das superfícies mucosas, especialmente superfícies das vias aéreas, e/ou menos reversíveis de 17 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ interacções com ENaC em comparação com compostos tais como amilorida, benzamilo e fenamilo. Portanto, os compostos de fórmula (I) possuem uma semivida mais longa em superfícies mucosas em comparação com estes compostos. A presente invenção é também baseada na verificação de que certos compostos abrangidos pela fórmula (I) são convertidos in vivo em seus derivados metabólicos que têm eficácia reduzida no bloqueio dos canais do sódio em comparação com o composto progenitor administrado, depois de serem absorvidos a partir das superfícies mucosas após a administração. Esta importante propriedade significa que os compostos terão uma menor tendência para causar efeitos secundários indesejáveis devido ao bloqueio dos canais do sódio localizados em localizações não alvo no corpo do beneficiário, e.g., nos rins. A presente invenção é também baseada na verificação de que certos compostos abrangidos pela fórmula (1) têm como alvo o rim e portanto podem ser utilizados como agentes cardiovasculares.
Nos compostos representados pela fórmula (I), X pode ser hidrogénio, halogéneo, trifluorometilo, alquilo Ci-C7, fenilo não substituído ou substituído com halogéneos, alquil Ci-C7-tio, fenil-alquil Ci-C7-tio, alquil Ci-C7-sulfonilo ou fenil-alquil Ci-C7-sulfonilo. É preferido o halogéneo.
Os exemplos de halogéneo incluem flúor, cloro, bromo e iodo. 0 cloro e o bromo são os halogéneos preferidos. 0 cloro é particularmente preferido. Esta descrição é aplicável ao termo "halogéneo" como utilizado ao longo de dosa a presente divulgação.
Como aqui se utiliza, a expressão "alquilo inferior" significa um grupo alquilo possuindo menos do que 8 átomos de carbono. Esta gama inclui todos os valores específicos de átomos de carbono e suas sub-gamas, tais como 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 átomos de carbono. 0 termo "alquilo" abrange todos os tipos destes grupos, e.g., grupos alquilo lineares, ramificados e cíclicos. Esta descrição é aplicável ao termo "alquilo inferior" como utilizado em toda a presente 18 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ divulgação. Os exemplos de grupos alquilo inferior adequados incluem metilo, etilo, propilo, ciclopropilo, butilo, isobutilo, etc.
Os substituintes para o grupo fenilo incluem halogéneos. São substituintes halogéneo particularmente preferidos o cloro e o bromo. Y pode ser hidrogénio, hidroxilo, mercapto, alcoxi inferior, alquil Ci-C7-tio, halogéneo, alquilo Ci-C7, arilo mononuclear ou -N(R2)2. A porção alquilo dos grupos alcoxi inferior é a mesma que se descreveu acima. Os exemplos de arilo mononuclear incluem grupos fenilo. 0 grupo fenilo pode ser não substituído ou substituído como descrito acima. A identidade preferida de Y é -N(R2)2. São particularmente preferidos os compostos em que cada R2 é hidrogénio. R1 pode ser hidrogénio ou alquilo Ci-C7. 0 hidrogénio é preferido para R1. , — (CH2) m-0R8 - (CH2CH20)m-R8 -(CH2)n-Zg-R7 ou r
Cada R2 pode ser, independentemente, -R7 - (CH2)m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20)m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, - (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7 c> R7 . -(CH2)n
R7
O
Hidrogénio e alquilo Ci~C7, particularmente alquilo Ci-C3, são preferidos para R2. 0 hidrogénio é particularmente preferido. R3 e R4 podem ser, independentemente, hidrogénio, um grupo representado pela fórmula (A) , alquilo Ci-C7, hidroxialquilo Ci-C7, fenilo, fenil-alquilo Ci-C7, (halofenil)-alquilo Ci~C7, (alquilfenilalquilo)-Ci-C7, (alcoxifenil Ci-C7)-alquilo Ci-C7, naftil-alquilo Ci-C7 ou piridil-alquilo Ci-C7, desde que pelo menos um de R3 e R4 seja um grupo representado pela fórmula (A).
Os compostos preferidos são aqueles em que um de R3 e R4 é hidrogénio e o outro é representado pela fórmula (A). 19 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Na fórmula (A), a porção - (C (RL) 2) Q-x- (C (RL) 2) p- define um grupo alquileno ligado ao anel aromático. As variáveis o e p podem ser, cada uma, um número inteiro de 0 a 10, com a condição de que a soma de o e p na cadeia seja de 1 a 10. Assim, o e p podem, cada um, ser 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. Preferivelmente, a soma deoepéde2a6. Numa concretização particularmente preferida, a soma de o e p é 4. 0 grupo de ligação na cadeia alquileno, x, pode ser, independentemente, 0, NR10, C(=0), CHOH, C(=N-R10), CHNR7R10 ou representar uma ligação simples;
Portanto, quando x representa uma ligação simples, a cadeia alquileno ligada ao anel é representada pela fórmula - (C (Rl) 2) o+p-/· em que a soma o+p é de 1 a 10.
Cada Rl pode ser, independentemente, -R7, -(CH2)n-OR8, -0-(CH2)m-OR8, -(CH2)n-NR7R10, -0-(CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -O- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -0- (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -O- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -(CH2)n-C(=0)NR7R10, -0-(CH2)m-C(=0)NR7R10, - (CH2) n- ( Z) g-R7, -0- (CH2) m- (Z) g-R7, -(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0-(CH2)m- C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glucose,
Os grupos RL preferidos incluem -H, -OH, -N(R7)2, especialmente quando cada R7 é hidrogénio.
Na cadeia alquileno na fórmula (A) , é preferido que quando um grupo RL ligado a um átomo de carbono é diferente de hidrogénio, então o outro RL ligado a esse átomo de carbono seja hidrogénio, i.e., a fórmula -CHRL-. É também preferido que no máximo dois grupos RL numa cadeia alquileno sejam diferentes de hidrogénio, e que os outros grupos RL na cadeia sejam hidrogénios. Ainda mais preferivelmente, apenas um grupo Rl numa cadeia alquileno é diferente de hidrogénio, e os outros grupos RL na cadeia são hidrogénios. Nestas concretizações, é preferível que x represente uma ligação simples. 20 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Em outra concretização particular da invenção, todos os grupos RL na cadeia alquileno são hidrogénio. Nestas concretizações, a cadeia alquileno é representada pela fórmula -(CH2)o-x-(CH2)p-, 20 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Cada R5 é, independentemente, Ligante- (CH2) n-CAP, Ligante-(CH2)n(CHOR8) (CHOR8) n-CAP, Ligante- (CH2CH20)m-CH2-CAP, Ligante-(CH2CH20)m-CH2CH2-CAP, Ligante- (CH2) n- (Z) g-CAP, Ligante- (CH2) n (Z) g- (CH2)m-CAP, Ligante- (CH2) n-NR13-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CAP, Ligante- (CH2) n- (CHOR8) mCH2-NR13- (Z) g-CAP, Ligante- (CH2) nNR13- (CH2) m (CHOR8) nCH2NR13- ( Z ) g-CAP, Ligante- (CH2) m- (Z) g- (CH2) m-CAP,
Ligante-NH-C (=0) -NH- (CH2)m-CAP, Ligante- (CH2) m-C (=0) NR13- (CH2)m-C (=O)NR10R10, Ligante - (CH2) m-C (=0) NR13- (CH2) m-CAP, Ligante- (CH2) m-C (=0)NR11R11, Ligante-(CH2) n-(Z)g-(CH2)m-(Z)g-CAP, Ligante-Zg-(CH2)m-Het- (CH2) m-CAP .
Cada Ligante é, independentemente, -0-, (CH2)n-, -0(CH2)m-, -NR13-C(=0)-NR13, -NR13-C (=0) - (CH2) m-, -C (=0) NR13- (CH2) m, -(CH2)n-
Zg-(CH2)n, -S-,-S0-,-S02-, S02NR7-, S02NR10- ou -Het-.
Cada CAP é, independentemente, tiazolidinodiona, oxazolidinodiona, heteroaril-C (=0) NR13R13, heteroaril-W, -CN, -0-C (=S) NR13R13, -ZgR13, -CR10(ZgR13) (ZgR13) , -C(=0)0Ar, C (=0) NR13Ar, imidazolina, tetrazole, tetrazoloamida, -S02NHR13, -S02NH-C (R13R13) - (Z) g-R13, um amino-açúcar ou oligossacárido cíclicos, NRn NRl3R13 ou
conri3r,}
fenilo substituído fenilo substituído independentemente 0CH3, NR13R13, Cl, F
Cada Ar é, independentemente, fenilo, com halogéneos, em que os substituintes do com halogéneos são 1-3 substituintes seleccionados do grupo que consiste em OH, e CH3, ou heteroarilo. 21 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Cada W é, independentemente, tiazolidinodiona, oxazolidinodiona, heteroaril-C (=0) NR13R13, -CN, -0-C (=S) NR13R13, -ZgR13, -CR10(ZgR13) (ZgR13), -C (=0) OAr, -C (=0) NR13Ar, imidazolina, tetrazole, tetrazoloamida, -S02NHR13, -S02NH-C (R13R13) - (Z) g-R13, um açúcar ou oligossacárido cíclicos, um amino-açúcar ou oligossacárido cíclicos,
Os exemplos de heteroarilo incluem grupos piridilo, pirazilo, tinazilo, furilo, furfurilo, tienilo, tetrazilo, tiazolidinodionilo e imidazoílo, pirrolilo, furanilo, tiofenilo, quinolilo, indolilo, adenilo, pirazolilo, tiazolilo, isoxazolilo, indolilo, benzimidazolilo, purinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, piridazilo, pirimidilo, pirazilo, 1,2,3-triazilo, 1,2,4-triazilo, 1,3,5-triazilo, cinolilo, ftalazilo, quinazolilo, quinoxalilo ou pterdilo.
Cada R6 é, independentemente, -R7, -0R7, -0R11, -N(R7)2, - (CH2) m-0R8, -0-(CH2)m-OR8, -(CH2)n-NR7R10, -0- (CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20)m-R8, -0-(CH2CH20)m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -0- (CH2) m-C (=0) NR7R10, -(CH2)n-(Z)g-R7, -0- (CH2) m- (Z) g-R7, - (CH2) n-NR10- CH2(CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m-NR10-CH2 (CHOR8) (CH0R8)n- CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0-(CH2)m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glucose,
em que, quando dois R6 são -0R11 e estão localizados adjacentes um ao outro num anel fenilo, as porções alquilo dos dois R6 podem estar mutuamente ligadas para formar um grupo metilenodioxi; com a condição de que quando pelo menos dois -CH2OR8 estão localizados adjacentes um ao outro, os grupos R8 possam estar unidos para formar um 1,3-dioxano ou 1,3-dioxolano cíclico mono- ou di-substituído. 22 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Em adição, um ou mais dos grupos R6 podem ser um dos grupos R5 que caem na lata definição de R6 acima estabelecida.
Quando dois R6 são -0R11 e estão localizados adjacentes um ao outro num anel fenilo, as porções alquilo dos dois grupos R6 podem estar mutuamente ligadas para formar um grupo metilenodioxi, i.e., um grupo com a fórmula -0-CH2-0-.
Como discutido acima, R6 pode ser hidrogénio. Portanto, 1, 2, 3 ou 4 grupos R6 podem ser diferentes de hidrogénio.
Preferivelmente no máximo 3 dos grupos R6 são diferentes de hidrogénio.
Cada g é, independentemente, um número inteiro de 1 a 6. Portanto, cada g pode ser 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.
Cada m é um número inteiro de 1 a 7. Portanto, cada m pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7.
Cada n é um número inteiro de 0 a 7. Portanto, cada n pode ser 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7.
Cada Q na fórmula (A) é C-R5, C-R6 ou um átomo de azoto, onde no máximo três Q num anel são átomos de azoto. Assim, pode haver 1, 2 ou 3 átomos de azoto num anel.
Preferivelmente, no máximo dois Q são átomos de azoto. Mais preferivelmente, no máximo um Q é um átomo de azoto. Numa concretização particular, o átomo de azoto está na posição 3 do anel. Em outra concretização da invenção, cada Q é C-R5 ou C-R6, i.e., não há átomos de azoto no anel.
Exemplos mais específicos de grupos adequados representados pela fórmula (A) estão apresentados nas fórmulas (B)-(E) adiante: q=Q/r5 — (CH2)o-x-(CH2)p—<X> (B) Q„Q\(R6)4 onde o, x, p, R5 e R6, são como definido acima; 23 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ — (CH2)n·
R5 (C) onde η é um número inteiro de 1 a 10 e Rb é como definido acima;
-(CH2)n—^ (D)
‘N onde n é um número inteiro de 1 a 10 e Rb é como definido acima; (E) -(CH2>^x-(CH2)p-^^>- r5 onde o, x, p e R5 são como definido acima.
Numa concretização preferida da invenção, Y é -NH2.
Noutra concretização preferida, R2 é hidrogénio.
Noutra concretização preferida, R1 é hidrogénio.
Noutra concretização preferida, X é cloro.
Noutra concretização preferida, R3 é hidrogénio.
Noutra concretização preferida, RL é hidrogénio.
Noutra concretização preferida, o é 4.
Noutra concretização preferida, p é 0.
Noutra concretização preferida, a soma de o e p é 4.
Noutra concretização preferida, x representa uma ligação simples.
Noutra concretização preferida, R6 é hidrogénio.
Noutra concretização preferida, no máximo um Q é um átomo de azoto. 24 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Noutra concretização preferida, nenhum Q é um átomo de azoto.
Numa concretização preferida da presente invenção: X é halogéneo; Y é -N (R7) 2; R1 é hidrogénio ou alquilo Ci-C3; R2 é -R7, -0R7, CH2OR7 ou -C02R7; R3 é um grupo representado pela fórmula (A); e R4 é hidrogénio, um grupo representado pela fórmula (A) ou alquilo Ci-C7;
Noutra concretização preferida da presente invenção: X é cloro ou bromo; Y é -N(R7)2; R2 é hidrogénio ou alquilo C1-C3; no máximo três R6 são diferentes de hidrogénio como descrito acima; no máximo três RL são diferentes de hidrogénio como descrito acima; e no máximo 2 Q são átomos de azoto.
Noutra concretização preferida da presente invenção: Y é -NH2;
Noutra concretização preferida da presente invenção: R4 é hidrogénio; no máximo um RL é diferente de hidrogénio como descrito acima; no máximo dois R6 são diferentes de hidrogénio como descrito acima; e no máximo 1 Q é um átomo de azoto.
Noutra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula: 25 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Noutra composto de
Noutra composto de
concretização preferida da presente invenção fórmula (1) é representado pela fórmula:
concretização preferida da presente invenção fórmula (1) é representado pela fórmula:
C1'NTN^ H,N
ιι'ΝΜε? O o o
Noutra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula: o
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula: 26 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
Em outra concretização preferida da presente invenção o 27 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ composto de fórmula (1) é representado pela fórmula 27 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
invenção o invenção o
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula
O NH
Cl-v^N. X
Λ Â H H
HaN N NH2
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula
invenção o
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
OH
O OH «vW»
O NH
NH OH Λ Η H H2N" 'N nh2 invenção o
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula
o nh2“ΊΧη h2n n nh2
OH OHO.. A U3H
Em outra concretização preferida da presente invenção o 28 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ composto de fórmula (1) é representado pela fórmula 28 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
H Ν'
• HC1
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula invenção o
ch3
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula invenção o 0 NHΎγΛ h2n n"^nh2
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula invenção o
o II • s-nh2
O
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula invenção o
Em outra concretização preferida da presente composto de fórmula (1) é representado pela fórmula invenção o 29 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Ο η2ϊ> α
ΌΗ
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
h2n n nh2
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
Em outra concretização preferida da presente invenção o composto de fórmula (1) é representado pela fórmula:
h2n n nh2 • 2HC1
Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados e utilizados sob a forma de base livre. Alternativamente, os compostos podem ser preparados e utilizados sob a forma de um sal farmaceuticamente aceitável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são sais que retêm ou melhoram a actividade biológica desejada do composto progenitor e não conferem efeitos toxicológicos indesejados. São exemplos destes sais 30 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ (a) sais de adição de ácido formados com ácidos inorgânicos, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico e similares; (b) sais formados com ácidos orgânicos tais como, por exemplo, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succinico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzóico, ácido tânico, ácido palmítico, ácido algínico, poli(ácido glutâmico), ácido naftalenossulfónico, ácido metanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido naftalenodissulfónico, poli(ácido galacturónico), ácido malónico, ácido sulfossalicílico, ácido glicólico, 2-hidroxi-3-naftoato, pamoato, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido ftálico, ácido mandélico, ácido láctico, e similares; e (c) sais formados a partir de aniões elementares como, por exemplo, de cloro, bromo e iodo.
Deverá notar-se que todos os enantiómeros, diastereómeros e misturas racémicas de compostos dentro do âmbito da fórmula (I) estão abrangidos pela presente invenção. Todas as misturas destes enantiómeros e diastereómeros estão dentro do âmbito da presente invenção.
Sem limitação a nenhuma teoria particular, crê-se que os compostos de fórmula (I) funcionam in vivo como bloqueadores dos canais do sódio. Através do bloqueio dos canais do sódio epiteliais presentes em superfícies mucosas os compostos de fórmula (I) reduzem a absorção de água pelas superfícies mucosas. Este efeito aumenta o volume de líquidos protectores sobre as superfícies mucosas, reequilibra o sistema, e desse modo trata a doença. A presente invenção também proporciona métodos de tratamento que tiram proveito das propriedades do composto de fórmula (I) discutidas acima. Assim, os indivíduos que podem ser tratados com os métodos da presente invenção incluem, mas não se lhes limitam, pacientes afectados com fibrose quística, discinesia ciliar primária, bronquite crónica, doença crónica obstrutiva das vias aéreas, pacientes ventilados artificialmente, pacientes com pneumonia aguda, etc. A presente invenção pode ser utilizada para obter uma amostra de 31 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ expectoração de um paciente por administração dos compostos activos a pelo menos um pulmão de um paciente, e depois induzindo ou recolhendo uma amostra de expectoração desse paciente. Tipicamente, a invenção será administrada a superfícies mucosas respiratórias através de aerossol (líquido ou pós secos) ou lavagem.
Os indivíduos que podem ser tratados com o método da presente invenção também incluem pacientes que estão administrados com oxigénio suplementar por via nasal (um regime que tende a secar as superfícies das vias aéreas); pacientes afectados com uma doença ou resposta alérgica (e.g., uma resposta alérgica ao pólen, ao pó, a pelos de animais ou a partículas, insectos ou partículas de insectos, etc.) que afecta as superfícies das vias aéreas nasais; pacientes afectados com uma infecção bacteriana e.g., infecções por estafilococos tais como infecções pode Staphylococcus aureus, infecções por Hemophilus influenza, infecções por Streptococcus pneumoniae, infecções por Pseudomonas aeuriginosa, etc.) das superfícies das vias aéreas nasais; pacientes afectados com uma doença inflamatória que afecta as superfícies das vias aéreas nasais; ou pacientes afectados com sinusite (em que o agente ou agentes activos são administrados para promover a drenagem de secreções mucosas congestionadas nos seios por administração de uma quantidade eficaz para promover a drenagem de fluido congestionado nos seios), ou combinadas, rinossinusite. A invenção pode ser administrada a superfícies rino-sinal por entrega tópica, incluindo aerossóis e gotas. A presente invenção pode ser utilizada para hidratar superfícies mucosas diferentes das superfícies das vias aéreas. Estas outras superfícies mucosas incluem superfícies gastrointestinais, superfícies orais, superfícies genito-uretrais, superfícies oculares ou superfícies do olho, do ouvido interno e do ouvido médio. Por exemplo, os compostos activos da presente invenção podem ser administrados por qualquer meio adequado, incluindo localmente/topicamente, oralmente ou rectalmente, numa quantidade eficaz. 32 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Os compostos da presente invenção são também úteis para o tratamento de uma variedade de funções relacionadas com o sistema cardiovascular. Assim, os compostos da presente invenção são úteis para utilização como agentes anti-hipertensores. Os compostos podem também ser utilizados para reduzir a pressão sanguínea e para tratar o edema. Em adição, os compostos da presente invenção são também úteis para promover a diurese, a natriurese e salurese. Os compostos podem ser utilizados isoladamente ou em combinação com betabloqueadores, inibidores de ACE, inibidores de HMGCoA-redutase, bloqueadores dos canais do cálcio e outros agentes cardiovasculares, para tratar a hipertensão, a insuficiência cardíaca congestiva e reduzir a mortalidade cardiovascular. A presente invenção refere-se primariamente ao tratamento de indivíduos humanos, mas pode também ser empregue para o tratamento de outros indivíduos mamíferos, tais como cães e gatos, para fins veterinários.
Como discutido acima, os compostos utilizados para preparar as composições da presente invenção podem estar na forma de uma base livre farmaceuticamente aceitável. Como a base livre do composto é geralmente menos solúvel em soluções aquosas do que o sal, as composições de bases livres são empregues para proporcionar mais libertação sustentada do agente activo aos pulmões. Um agente activo presente nos pulmões na forma de partículas que não se dissolveram em solução não está disponível para induzir uma resposta fisiológica, mas serve como um depósito de fármaco biodisponível que se dissolve gradualmente em solução.
Outro aspecto da presente invenção é uma composição farmacêutica, compreendendo um composto de fórmula (I) num transportador farmaceuticamente aceitável (e.g., uma solução transportadora aquosa). Em geral, o composto de fórmula (I) é incluído na composição numa quantidade eficaz para inibir a reabsorção de água pelas superfícies mucosas.
Os compostos da presente invenção podem também ser utilizados em conjunto com um agonista do receptor P2Y2 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (também por vezes aqui 33 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ referido como um "agente activo"). A composição pode ainda compreender um agonista do receptor P2Y2 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (também por vezes aqui referido como um "agente activo"). 0 agonista do receptor P2Y2 é tipicamente incluído numa quantidade eficaz para estimular a secreção de cloreto e água pelas superfícies das vias aéreas, particularmente as superfícies das vias aéreas nasais. Agonistas do receptor P2Y2 adequados estão descritos nas colunas 9-10 de U.S. 6,264,975, U.S. 5,656,256 e U.S. 5,292,498.
Broncodilatadores podem também ser utilizados em combinação com compostos da presente invenção. Estes broncodilatadores incluem, mas não se lhes limitam, agonistas β-adrenérgicos incluindo, mas não se lhes limitando, epinefrina, isoproterenol, fenoterol, albutereol, terbutalina, pirbuterol, bitolterol, metaproterenol, iosetarina, xinafoato de salmeterol, assim como agentes anticolinérgicos incluindo, mas não se lhes limitando, brometo de ipratrópio, assim como compostos tais como teofilina e aminofilina. Estes compostos podem ser administrados de acordo com técnicas conhecidas, antes ou em simultâneo com os compostos activos aqui descritos. Procedimentos adicionais úteis para a preparação encontram-se em USUSUS especialmente para a preparação de vários
Outro aspecto da presente invenção é uma formulação farmacêutica, compreendendo um composto activo como descrito acima num transportador farmaceuticamente aceitável (e.g., uma solução transportadora aquosa). Em geral, o composto activo é incluído na composição numa quantidade eficaz para tratar superfícies mucosas, tal como para inibição da reabsorção de água pelas superfícies mucosas, incluindo as vias aéreas e outras superfícies.
Os compostos activos aqui divulgados podem ser administrados a superfícies mucosas por qualquer meio adequado, incluindo topicamente, oralmente, rectalmente, vaginalmente, ocularmente e dermicamente, etc. Por exemplo, para o tratamento de obstipação, os compostos activos podem ser administrados oralmente ou rectalmente na superfície 34 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ mucosa gastrointestinal. 0 composto activo pode ser combinado com um transportador farmaceuticamente aceitável em qualquer forma adequada, tal como solução salina fisiológica estéril ou diluída ou solução tópica, sob a forma de gotículas, comprimidos ou similares para administração oral, sob a forma de um supositório para administração rectal ou genito-uretral, etc. Os excipientes podem ser incluídos na formulação para aumentar a solubilidade dos compostos activos, conforme desejado.
Os compostos activos aqui divulgados podem ser administrados às superfícies das vias aéreas de um paciente por qualquer meio adequado, incluindo sob a forma de um spray, uma nebulização ou gotículas dos compostos activos num transportador farmaceuticamente aceitável tal como soluções salinas fisiológicas ou diluídas ou água destilada. Por exemplo, os compostos activos podem ser preparados sob a forma de formulações e administrados como descrito na Patente U.S. 5,789,391 de Jacobus.
Os agentes activos em partículas, sólidos ou líquidos, preparados para a prática da presente invenção, podem incluir, como notado acima, partículas de dimensão respirável ou não respirável; ou seja, para partículas respiráveis, partículas com uma dimensão suficientemente pequena para passarem através da boca e da laringe por inalação e para os brônquios e alvéolos dos pulmões, e para partículas não respiráveis, partículas suficientemente grandes para serem retidas nas passagens das vias aéreas nasais em vez de passarem através da laringe e para os brônquios e alvéolos dos pulmões. Em geral, partículas variando de cerca de 1 a 5 mícrones de dimensão (mais particularmente, inferiores a cerca de 4,7 mícrones de dimensão) são respiráveis. Partículas de dimensão não respirável são superiores a cerca de 5 mícrones de dimensão, até à dimensão de gotículas visíveis. Assim, para administração nasal, pode ser utilizada uma dimensão de partícula na gama de 10-500 pm para assegurar a retenção na cavidade nasal.
No fabrico de uma formulação de acordo com a invenção, os agentes activos ou, os seus sais ou bases livres 35 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ fisiologicamente aceitáveis, são tipicamente misturados com, inter alia, um transportador aceitável. É evidente que o transportador tem que ser compatível com quaisquer outros ingredientes da formulação e não pode ser prejudicial para o paciente. 0 transportador tem que ser sólido ou líquido, ou ambos, e é preferivelmente formulado com o composto sob a forma de uma formulação de dose unitária, por exemplo, uma cápsula, que pode conter 0,5% a 99% em peso do composto activo. Podem ser incorporados nas formulações da invenção um ou mais compostos activos, formulações estas que podem ser preparadas por quaisquer técnicas de farmácia bem conhecidas consistindo essencialmente na mistura dos componentes.
As composições contendo partículas secas respiráveis ou não respiráveis de agente activo micronizado podem ser preparadas por moagem do agente activo seco com um almofariz e pilão, e depois passagem da composição micronizada através de um crivo de 400 mesh para quebrar ou separar aglomerados grandes. A composição de agente activo em partículas pode opcionalmente conter um dispersante que serve para facilitar a formulação de um aerossol. Um dispersante adequado é a lactose, que pode ser combinada com o agente activo em qualquer proporção adequada (e.g., uma proporção em peso de 1 para 1).
Os compostos activos aqui divulgados podem ser administrados a superfícies das vias aéreas incluindo as passagens nasais, os seios e os pulmões de um indivíduo por um meio adequado conhecido na especialidade, tal como por gotas nasais, nebulizações, etc. Numa concretização da invenção, os compostos activos da presente invenção são administrados por lavagem transbroncoscópica. Numa concretização preferida da invenção, os compostos activos da presente invenção são depositados em superfícies das vias aéreas pulmonares por administração de uma suspensão de aerossol de partículas respiráveis constituídas pelo composto activo, que o indivíduo inala. As partículas respiráveis podem ser líquidas ou sólidas. São conhecidos numerosos inaladores para 36 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ administração de partículas de aerossol aos pulmões de um indivíduo.
Podem ser empregues inaladores tais como os desenvolvidos por Inhale Therapeutical Systems, Paio Alto, Califórnia, EUA, incluindo, mas não se lhes limitando, os divulgados nas Patentes U.S. 5,740,794; 5,654,007; 5,458,135; 5,775,320; e 5,785,049. Inaladores tais como os desenvolvidos por Dura Pharmaceuticals, Inc., San Diego, Califórnia, EUA, podem também ser empregues, incluindo, mas não se lhes limitando, os divulgados nas Patentes U.S. 5,622,166; 5,577,497; 5,645,051; e 5,492,112. Adicionalmente, podem ser empregues inaladores como os desenvolvidos por Aradigm Corp., Hayward, Califórnia, EUA, incluindo, mas não se lhes limitando, os divulgados nas Patentes U.S. 5,826,570; 5,813,397; 5,819,726; e 5,655,516. Estes dispositivos são particularmente adequados como inaladores de partículas secas.
Aerossóis de partículas líquidas compreendendo o composto activo podem ser produzidos por quaisquer meios, tais como com um nebulizador de aerossol accionado por pressão ou um nebulizador ultra-sónico. Veja-se, e.g., a Patente U.S. 4,501,729. Os nebulizadores são dispositivos comercialmente disponíveis que transformam soluções ou suspensões do ingrediente activo numa nebulização de aerossol terapêutico quer por meio de aceleração de gás comprimido, tipicamente ar ou oxigénio, através de um orifício de venturi estreito ou por meio de agitação ultra-sónica. As formulações adequadas para utilização em nebulizadores consistem no ingrediente activo num transportador líquido, o ingrediente activo constituindo até 40% p/p da formulação, mas preferivelmente menos do que 20% p/p. O transportador é tipicamente água (e mais preferivelmente água estéril, isenta de pirogénios) ou solução alcoólica aquosa diluída. Os transportadores de perfluorocarboneto podem também ser utilizados. Os aditivos opcionais incluem conservantes, se a formulação não é feita estéril, por exemplo, hidroxibenzoato de metilo, antioxidantes, agentes aromatizantes, óleos voláteis, agentes tamponantes e tensioactivos. 37 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Os aerossóis de partículas sólidas compreendendo o composto activo podem do mesmo modo ser produzidos com qualquer gerador de medicamentos em partículas sólidas. Os geradores de aerossóis para administração de medicamentos em partículas sólidas a um indivíduo produzem partículas que são respiráveis, como explicado acima, e geram um volume de aerossol contendo doses medidas predeterminadas de medicamento a uma taxa adequada para administração humana. Um tipo ilustrativo de gerador de aerossol em partículas sólidas é um insuflador. As formulações adequadas para administração por insuflação incluem pós finamente cominuidos que podem ser entregues por meio de um insuflador ou tomados na cavidade nasal a forma de uma inspiração. No insuflador, o pó (e.g., uma sua dose medida eficaz para realizar os tratamentos aqui descritos) está contido em cápsulas ou cartuchos, tipicamente feitas de gelatina ou plástico, que são perfuradas ou abertas in situ e o pó é entregues pelo ar drenado através do dispositivo por inalação ou por meio de uma bomba operada manualmente. 0 pó empregue no insuflador consiste ou somente no ingrediente activo ou numa mistura de pós compreendendo o ingrediente activo, um diluente em pó adequado, tal como lactose, e um tensioactivo opcional. 0 ingrediente activo constitui tipicamente de 0,1 a 100% p/p da formulação. Um Segundo tipo de gerador de aerossol ilustrativo compreende um inalador de dose medida. Os inaladores de dose medida inaladores são dispensadores de aerossol pressurizados, tipicamente contendo uma formulação em suspensão ou solução de ingrediente activo num propulsor liquefeito. Durante a utilização, estes dispositivos descarregam a formulação através de uma válvula adaptada para distribuir um volume medido, tipicamente de 10 a 150 μΐ, para produzir um spray de partículas finas contendo o ingrediente activo. Os propulsores adequados incluem certos compostos de clorofluorocarboneto, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano e suas misturas. A formulação pode adicionalmente conter um ou mais co-solventes, por exemplo, etanol, tensioactivos, tais como ácido oleico ou trioleato de sorbitano, antioxidantes e agentes aromatizantes adequados. O aerossol, quer formado por partículas sólidas ou líquidas, pode ser produzido pelo gerador de aerossol a uma 38 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ velocidade de cerca de 10 a 150 litros por minuto, mais preferivelmente de 30 a 150 litros por minuto, e o mais preferivelmente de cerca de 60 litros por minuto. Os aerossóis contendo maiores quantidades de medicamento podem ser administrados mais rapidamente. A dosagem dos compostos activos aqui divulgados irá variar dependendo da condição a tratar e do estado do indivíduo, mas geralmente pode ser de cerca de 0,01, 0,03, 0,05, 0,1 a 1, 5, 10 ou 20 mg do agente farmacêutico, depositada nas superfícies das vias aéreas. A dose diária pode ser dividida entre uma ou múltiplas administrações de dose unitária. O objectivo é atingir uma concentração dos agentes farmacêuticos nas superfícies das vias aéreas do pulmão entre 10~9 - 104 M.
Em outra concretização, são administrados por administração de uma suspensão de aerossol de partículas respiráveis ou não respiráveis (preferivelmente partículas não respiráveis) constituída por composto activo, que o indivíduo inala através do nariz. As partículas respiráveis ou não respiráveis podem ser líquidas ou sólidas. A quantidade de agente activo incluído pode ser uma quantidade suficiente para atingir concentrações dissolvidas de agente activo sobre as superfícies das vias aéreas do indivíduo de cerca de 10 , 10 ou 10”7 a cerca de 10”3, 10”2, 10'1 moles/litro, e mais preferivelmente de cerca de 10“9 a cerca de 10“4 moles/litro. A dosagem de composto activo irá variar dependendo da condição a tratar e do estado do indivíduo, mas geralmente pode ser uma quantidade suficiente para atingir concentrações dissolvidas de composto activo nas superfícies das vias aéreas nasais do indivíduo de cerca de 10“9, 10~8, 10~7 a cerca de 10~3, 10~2 ou 10~4 moles/litro, e mais preferivelmente de cerca de 1CT7 a cerca de 10“4 moles/litro. Dependendo da solubilidade da formulação particular de composto activo administrada, a dose diária pode ser dividida entre uma ou várias administrações de dose unitária. A dose diária em peso pode variar de cerca de 0,01, 0,03, 0,1, 0,5 ou 1,0 a 10 ou 20 miligramas de partículas de agente activo para um indivíduo humano, dependendo da idade e da condição do indivíduo. Uma 39 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ dose unitária presentemente preferida é de cerca de 0,5 miligramas de agente activo dado num regime de 2-10 administrações por dia. A dosagem pode ser proporcionada sob a forma de uma unidade pré-embalada por quaisquer meios adequados (e.g., encapsulação numa cápsula de gelatina).
Numa concretização da invenção, a composição de agente activo em partículas pode conter simultaneamente uma base livre do agente activo e um sal farmaceuticamente aceitável para proporcionar tanto uma libertação inicial como libertação sustentada de agente activo para dissolução nas secreções de muco do nariz. Esta composição serve para proporcionar tanto um alívio inicial ao paciente, como um alívio sustentado ao longo do tempo. O alívio sustentado, por diminuir o número de administrações diárias necessárias, espera-se que aumente a aceitação pelo paciente do decurso dos tratamentos com o agente activo.
As formulações farmacêuticas adequadas para administração nas vias aéreas incluem formulações de soluções, emulsões, suspensões e extractos. Veja-se genericamente, J. Nairn, Solutions, Emulsions, Suspensions and Extracts, em Remington: The Science e Practice of Pharmacy, chap. 86 (19th ed. 1995) . As formulações farmacêuticas adequadas para administração nasal podem ser preparadas como descrito nas Patentes U.S. 4,389,393 de Schor; 5,707,644 de Illum; 4,294,829 de Suzuki; e 4,835,142 de Suzuki.
Nebulizações ou aerossóis de partículas líquidas compreendendo o composto activo podem ser produzidos por quaisquer meios adequados, tais como através de um simples spray nasal com o agente activo num transportador aquoso farmaceuticamente aceitável, tal como uma solução salina estéril ou água estéril. A administração pode ser com um nebulizador de aerossol accionado por pressão ou com um nebulizador ultra-sónico. Vejam-se e.g. as Patentes U.S. 4,501,729 e 5,656,256. As formulações adequadas para utilização numa gotícula nasal ou frasco de spray ou em nebulizadores, consistem no ingrediente activo num transportador líquido, o ingrediente activo constituindo até 40% p/p da formulação, mas preferivelmente menos do que 20% 40 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ ρ/ρ. Tipicamente, ο transportador é água (e mais preferivelmente água estéril, isenta de pirogénios) ou solução alcoólica aquosa diluída, preferivelmente preparada numa solução de 0,12% a 0,8% de cloreto de sódio. Os aditivos opcionais incluem conservantes se a formulação não for feita estéril, por exemplo, hidroxibenzoato de metilo antioxidantes, agentes aromatizantes, óleos voláteis, agentes tamponantes, agentes osmoticamente activos (e.g. manitol, xilitol, eritritol) e tensioactivos.
As composições contendo partículas secas respiráveis ou não respiráveis de agente activo micronizado podem ser preparadas por moagem do agente activo seco com um almofariz e pilão, e depois passagem da composição micronizada através de um crivo de 400 mesh para quebrar ou separar aglomerados grandes. A composição em partículas pode opcionalmente conter um dispersante que serve para facilitar a formação de um aerossol. Um dispersante adequado é lactose, que pode ser combinada com o agente activo em qualquer proporção adequada (e.g., uma proporção de 1 para 1 em peso).
Os compostos de fórmula (I) podem ser sintetizados de acordo com procedimentos conhecidos na especialidade. Um procedimento sintético representativo é mostrado no esquema abaixo:
O
(D
Estes procedimentos estão descritos, por exemplo, em E.J. Cragoe, "The Synthesis of Amiloride and Its Analogs" (Chapter 3) em Amiloride and Its Analogs, pp. 25-36. Outros métodos de preparação dos compostos estão descritos, por exemplo, em U.S. 3,313,813. Vejam-se em particular os Métodos A, B, C e D descritos em U.S. 3,313,813. Outros métodos úteis para a preparação destes compostos, especialmente para a preparação do novo fragmento HNR3R4, estão descritos, por exemplo, em 229929US, 233377US e 41 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 234105US. Os Esquemas 1 a 11 são representativos, mas não se lhes limitando, de procedimentos utilizados para preparar os bloqueadores dos canais do sódio aqui descritos.
Esquema 1: Síntese de PSA 17926:
CbzlIM
Br"
CbzHN
CNj k2co3, DMF 2
NaN3, NH4CI1 DMF CbzHN
Pd/C, H2 I MeOH, CH2C12
H2N N NH2
O SMe A N NH2 ,1JT Η,Ν' 'N NH2 . EtOH, TEA, 60 °C O NHnA Η H HCl (2) κα
0
5, PSA 17926 42 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 2: Síntese de PSA 17846:
MeNH2 MeOH NH, h’c'nAo ch3 10
11, PSA 17846 43 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 3: Síntese de PSA 19008:
15
(2) HCI EtOR DIPEA
16, PSA 19008 44 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Esquema 4: Síntese de PSA 17482:
20, P$A 17482 45 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 5: Síntese de PSA 23022:
CbzHN 2
(1) HCl/EtOH (3) HCl/H20 OMe (2) H,N MeOH OMe
22, PSA 23022 46 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 6: Sintese de PSA 16826:
46 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ OH
O
O 24
OH
O
CbzHN
25 N s
OHH2> Pd/C I EtOH/AcOH O Η,Ν
26
OH 0 SMe
EtOH/DIPEA SVVm,
h2n n" nh2 -HI
O
N OH 47 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 7: Síntese de PSA 16313:
O
CbzHN
o o' 23
Me9NH
CbzHN
2,0 M em THF Oo. NMe·; 28
H,N
NMc2
Pd/C, H2
EtOH
O
o^A 29 d) O SMeClWVANH2 h2n^n^nh2 'm
EtOH/DIPEA O NHcliNxAs h2n^n^nh2 ’HC1
(2) HCl/MeOH
NMe, 30, PSA 16313 48 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 8: Síntese de PSA 16437:
OH
31
SocHM
Nal, K2C03s DMF
BrCH2C02Me
BocHN
O OMe
BocHN 32 KOI! MeOH c 33
o
OH
Tis
EDO, HOAt, DMAP í'Pr2NEt, CH2C12/THF/CH3CN O HN"\
BocHN
N H
36, PSA 16437 49 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 9: Síntese de PSA 16314:
,OH
CbzHN
CbzHN nh2
37
NaOH/DMF O "Λλ-·· h l H,/Pd/C EtOH/THF o
39, PSA 16314 NH, 50 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Esquema 10: Sintese de PSA 16208:
OH
BocHN
31
Cs2C03/DMF
N
BocHN 40 TFA/CH2C12
9 SMe
ClwNJvI
EtOH/DIPEA Ύ T n^nh2 Λ-Αμο -Hl h2n n nh2
42, PSA 16208 51 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Esquema 11: Sintese de PSA 15143:
OH
CbzHN
O
CbzHN
EtOH/TEA OH OH X M^ X .OH
Η,/Pd/C
43EtOH OH OH
Ck MH H2N' 44
45, PSA 15143 52 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Podem ser utilizados vários ensaios para caracterizar os compostos da presente invenção. Os ensaios representativos estão discutidos adiante.
Medição in Vitro da Actividade e da Reversibilidade do Bloqueio dos Canais do Sódio
Um ensaio utilizado para determinar o mecanismo de acção e/ou a potência dos compostos da presente invenção envolve a determinação da inibição luminal por fármacos de correntes de sódio epiteliais das vias aéreas medidas sob corrente em curto-circuito (ISc) utilizando monocamadas epiteliais das vias aéreas em câmaras de Ussing. As células obtidas de vias aéreas recém-excisadas humanas, de cão, de ovelha ou de roedor, são semeadas sobre inserções porosas de 0,4 micrones de Snapwell™ (CoStar), são cultivadas em condições da interface ar-liquido (ALI) em meios hormonalmente definidos, e ensaiadas quanto à actividade de transporte de sódio (Isc) enquanto num banho de Bicarbonato de Krebs-Ringer (KBR) em câmaras de Ussing. Todas as adições de fármaco de teste são ao banho luminal com protocolos de adição de doses semi-logaritmicos (de 1 x 10-11 M a 3 x 10-5 M) , e é registada a alteração cumulativa de ISc (inibição). Todos os fármacos são preparados em sulfóxido de dimetilo como soluções-mãe numa concentração de 1 x 1CT2 M e armazenados a -20°C. São utilizadas por operação tipicamente oito preparações em paralelo; duas preparações por operação incorporam amilorida e/ou benzamilo como controlos positivos. Após a concentração máxima (5 x 1CT5 M) ser administrada, o banho luminal é trocado três vezes por solução KBR fresca isenta de fármaco, e a Isc resultante foi medida após cada lavagem com aproximadamente 5 minutos de duração. A reversibilidade é definida como a percentagem que retorna ao valor da linha de base para a corrente de sódio após a terceira lavagem. Todos os dados de voltagem controlada são recolhidos através de uma interface de computador e analisador fora de linha ("off-line") .
As relações de dose-efeito para todos os compostos são consideradas e analisadas com o programa Prism 3.0. Os valores de IC50, concentrações máximas eficazes, e reversibilidade são 53 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ calculados e comparados com amilorida e benzamilo como controlos positivos.
Ensaios Farmacológicos de Absorção (1) Ensaio de Desaparecimento Apical Células bronquiais (células de cão, humanas, de ovelha ou de roedor) são semeadas numa densidade de 0,25 x 106/cm2 sobre uma membrana porosa revestida de colagénio Transwell-Col com uma área de crescimento de 1,13 cm2 crescida numa interface ar-líquido em meios hormonalmente definidos que promovem um epitélio polarizado. De 12 a 20 dias após o desenvolvimento de uma interface ar-líquido (ALI) espera-se que as culturas estejam >90% ciliadas, e as mucinas irão acumular-se nas células. Para assegurar a integridade de preparações de células epiteliais primárias das vias aéreas, são medidas a resistência transepitelial (Rt) e as diferenças de potencial transepiteliais (PD), que são indicadores da integridade de natureza polarizada da cultura. Sistemas de células humanas são preferidos para os estudos de taxas de absorção a partir de superfícies apicais. O ensaio de desaparecimento é conduzido sob condições que imitam os filmes "finos" in vivo (~25 μΐ) e é iniciado pela adição de bloqueadores dos canais do sódio experimentais ou controlos positivos (amilorida, benzamilo, fenamilo) à superfície apical numa concentração inicial de 10 μΜ. É recolhida uma série de amostras (volume de 5 μΐ por amostra) em vários pontos de tempo, incluindo 0, 5, 20, 40, 90 e 240 minutos. As concentrações são determinadas por medição da fluorescência intrínseca de cada bloqueador dos canais de sódio utilizando um fluorómetro para microplacas Fluorocount ou HPLC. A análise quantitativa emprega uma curva padrão gerada a partir de materiais padrão de referência autênticos de concentração e pureza conhecidas. A análise dos dados da taxa de desaparecimento é realizada utilizando regressão não linear, decaimento exponential de uma fase (Prism V 3.0). 2. Ensaio por Microscopia Confocal da Assimilação de Congéneres de Amilorida
Virtualmente todas as moléculas semelhantes a amilorida fluorescem na gama dos ultravioleta. Esta propriedade destas 54 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ moléculas pode ser utilizada para medir directamente a assimilação celular utilizando microscopia confocal x-z. Concentrações equimolares de compostos experimentais e controlos positivos incluindo amilorida e compostos que demonstram uma rápida assimilação no compartimento celular (benzamilo e fenamilo) são colocadas sobre a superfície apical de culturas de vias aéreas sobre o suporte do microscópio confocal. Obtêm-se séries de imagens x-z ao longo do tempo e a magnitude da fluorescência que se acumula no compartimento celular é quantificado e representado como uma alteração da fluorescência versus tempo. 3. Ensaios In vitro de Metabolismo dos Compostos
As células epiteliais das vias aéreas têm a capacidade de metabolizar fármacos durante o processo de absorção transepitelial. Adicionalmente, embora menos provável, é possível que fármacos possam ser metabolizados em superfícies epitelial das vias aéreas por actividades de ectoenzimas específicas. Talvez mais provável como evento de ecto-superfície, os compostos podem ser metabolizados pelas secreções infectadas que ocupam os lúmenes das vias aéreas de pacientes com doença pulmonar, e.g. fibrose quística. Assim, é realizada uma série de ensaios para caracterizar o metabolismo dos compostos que resulta da interacção de compostos de teste com epitélios das vias aéreas humanas e/ou produtos luminais epiteliais das vias aéreas humanas.
Na primeira série de ensaios, a interacção de compostos de teste em KBR como estimulantes de "ASL" são aplicados na superfície apical de células epiteliais das vias aéreas humanas crescidas no sistema de inserção T-Col. Para a maioria dos compostos, o metabolismo (geração de novas espécies) é testado utilizando cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) para resolver espécies químicas e as propriedades fluorescência endógenas destes compostos para estimar as quantidades relativas de composto de teste e novos metabolitos. Para um ensaio típico, uma solução de teste (25 μΐ de KBR, contendo 10 μΜ de composto de teste) é colocada sobre a superfície luminal epitelial. Obtêm-se amostras sequenciais de 5 a 10 μΐ dos compartimentos luminal e serosal para análise por HPLC de (1) a massa de composto de teste que permeia do banho luminal para o serosal e (2) a potencial 55 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ formação de metabolitos a partir do composto progenitor. Em casos em que as propriedades de fluorescência da molécula de teste não são adequadas para estas caracterizações, são utilizados compostos radiomarcados para estes ensaios. A partir dos dados de HPLC, é quantificada a taxa de desaparecimento e/ou formação de novos compostos metabolitos na superfície luminal e o aparecimento de composto de teste e/ou novos metabolitos na solução basolateral. Os dados relacionados com a mobilidade cromatográfica de potenciais novos metabolitos com referência ao composto progenitor são também quantificados.
Para analisar o potencial metabolismo de compostos de teste para expectoração na FQ, foi recolhida uma mistura "representativa" de expectoração de FQ expelida obtida de 10 pacientes de FQ (com aprovação do IRB). A expectoração foi solubilizada numa mistura 1:5 de solução KBR com vórtex vigoroso, após o que a mistura foi dividida numa alíquota de expectoração "bruta" e uma alíquota sujeita a ultracentrifugação de modo que se obteve uma alíquota de "sobrenadante" (bruto = celular; sobrenadante = fase líquido). Estudos típicos do metabolismo de compostos por expectoração de FQ envolvem a adição de massas conhecidas de composto de teste a expectoração de FQ "bruta" e alíquotas de "sobrenadante" de expectoração de FQ incubadas a 37°C, seguida por amostragem sequencial de alíquotas de cada tipo de expectoração para caracterização da estabilidade/metabolismo do composto por análise por HPLC como descrito acima. Como acima, são então realizadas a análise de desaparecimento do composto, as taxas de formação de novos metabolitos, e as mobilidades em HPLC de novos metabolitos. 4. Efeitos Farmacológicos e Mecanismo de Acção do Fármaco em Animais 0 efeito dos compostos a aumentar a depuração mucociliar (MCC) pode ser medido utilizando um modelo in vivo descrito por Sabater et al., Journal of Applied Physiology, 1999, pp. 2191-2196. 56 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
EXEMPLOS
Tendo descrito de um modo geral a presente invenção, pode ser obtido entendimento adicional por referência a certos exemplos específicos que são proporcionados aqui para fins de ilustração apenas e não se pretende que sejam limitantes a menos que especificado em contrário.
Preparação de Bloqueadores dos Canais do Sódio
Materiais e métodos. Todos os reagentes e solventes foram adquiridos a Aldrich Chemical Corp. e utilizados sem outra purificação. Os espectros de RMN foram obtidos num Bruker WM 36 0 (½ RMN a 360 MHz e 13C RMN a 9 0 MHz) ou num Bruker AC 300 (3H RMN a 300 MHz e 13C RMN a 75 MHz) . A cromatografia flash foi realizada num sistema Flash Elute™ de Solução de Eluição (PO Box 5147, Charlottesville, Virgínia 22905) carregado com um cartucho de sílica-gel de 90 g (40M FSO-0110-040155, 32-63 pm) a 20 psi (N2) . A análise por GC foi realizada num Shimadzu GC-17 equipado com uma Coluna Capilar Heliflex (Alltech); Fase: AT-1, Comprimento: 10 metros, Dl: 0,53 mm, Filme: 0,25 micrómetros. Parâmetros de GC: Injector a 320°C, Detector a 320°C, fluxo de gás FID: H2 a 40 ml/min., Ar a 400 ml/min. Gás transportador: Razão de divisão de 16:1, fluxo de N2 a 15 ml/min., velocidade de N2 a 18 cm/s. O programa de temperaturas é de 70°C durante 0-3 min, 70-300°C de 3-10 min, 300°C de 10-15 min. A análise por HPLC foi realizada numa bomba Gilson 322 Pump, detector UV/Vis-156 a 360 nm, equipado com uma coluna Microsorb MV C8, 100 A, 25 cm. Fase Móvel: A = acetonitrilo com 0,1% de TFA, B = água com 0,1% de TFA. Programa do Gradiente: 95:5 B:A durante 1 min, depois até 20:80 B:A ao longo de 7 min, depois até 100% de A ao longo de 1 min, seguindo-se lavagem com 100% de A durante 11 min, caudal: 1 ml/min. 57 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo 1 Síntese de cloridrato de N- (3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-Ν'-(4-{4-[3-(lH-tetrazol-5-il)propoxi]fenil}butil)-guanidina (PSA 17926)
N"N
Éster benzílico de ácido {4-[ 4-(3-cianopropoxi)fenil]- butil}carbâmico (2).
Uma mistura de éster benzílico de ácido [4-(4- hidroxifenil)butil]carbâmico 1 (2,00 g, 6,70 mmol), 4- bromobutironitrilo (0,70 mL, 6,70 mmol), e carbonato de potássio (1,00 g, 7,4 mmol) em DMF (10 mL), foi agitada a 65°C durante 16 h. O solvente foi removido por evaporação rotativa e o resíduo foi tomado em acetato de etilo, lavado com água e salmoura, e concentrado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etilo/CH2Cl2 (1:9, v/v) para originar o produto desejado 2 sob a forma de um sólido branco (1,80 g, rendimento de 75%). XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 1,56 (m, 4H) , 2,15 (m, 2H), 2,55 (m, 4H) , 3,15 (m, 2H) , 4,00 (m, 2H) , 4,70 (s lg, 1H), 5,10 (s, 2H), 6,80 (d, 2H), 7,05 (d, 2H), 7,30 (m, 5H) . m/z (ESI): 367 [C22H26N2O3 + H]+. Éster benzílico de ácido (4-{4-[3-(lH-tetrazol-5-il)propoxi]fenil}butil)carbâmico (3).
Uma mistura de éster benzílico de ácido {4— [4— (3 — cianopropoxi)fenil]butil}carbâmico 2 (0,90 g, 2,5 mmol), azida de sódio (0,50 g, 7,5 mmol) e cloreto de amónio (0,40 g, 7,5 mmol) em DMF (7 mL), foi agitada a 120°C durante 16 h. Os materiais inorgânicos foram removidos por filtração em vácuo. O filtrado foi diluído com acetato de etilo e lavado com água e salmoura. A solução orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O resíduo foi tomado em acetato de etilo (5 mL) e diluído com hexanos (10 mL) . Os precipitados sólidos foram recolhidos por filtração com sucção e purificados por 58 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com metanol/diclorometano (1:50, v/v) para originar o produto desejado 3 sob a forma de um sólido branco (0,78 g, rendimento de 76%). λΕ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,51 (m, 4H), 2,20 (m, 2H), 2,50 (m, 2H), 3,10 (m, 4H) , 4,00 (m, 2H), 5,00 (s, 2H), 6,75 (d, 2H), 7,05 (d, 2H) , 7,30 (m, 5H) . m/z (ESI): 410 [C22H27N5O3 + H]+. 4-{4-[3-(lH-Tetrazol-5-il)propoxi]fenil}butilamina (4).
Uma solução de éster benzílico de ácido (4—{4—[3—(1H— tetrazol-5-il)propoxi]fenil}butil)carbâmico 3 (0,30 g, 0,73 mmol) em metanol (20 mL) e diclorometano (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite sob atmosfera de hidrogénio na presença de catalisador de paládio a 10% sobre carbono (0,1 g, 50% húmido). O catalisador foi removido por filtração com sucção, e o filtrado foi concentrado in vacuo para originar o produto desejado 4 sob a forma de um sólido branco (200 mg, rendimento de 99%) que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional, m/z (ESI): 276 [C14H2iN50 + H] + .
Cloridrato de N-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-IV'-(4-{4-[3-(lH-tetrazol-5-il)propoxi]fenil}butil)guanidina (5, PSA 17926).
Uma solução de 4-{4-[3-(lH-tetrazol-5-il)propoxi]fenil}-butilamina 4 (100 mg, 0,36 mmol) e trietilamina (0,15 mL, 0,39 mmol) em etanol absoluto (2 mL) foi agitada a 60°C durante 5 min, após o que foi adicionado iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (150 mg, 0,39 mmol) numa só porção. A mistura reaccional foi agitada a essa temperatura durante 4 h e depois foi arrefecida à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada por evaporação rotativa. O resíduo bruto foi lavado com água e filtrado. O bolo de filtração foi adicionalmente lavado com diclorometano. Formou-se uma pasta com o sólido amarelo escuro (140 mg, rendimento de 80%) assim obtido numa mistura de metanol e diclorometano (5/95, v/v). O sólido foi recolhido por filtração com sucção, e misturaram-se 40 mg deste sólido com HC1 aquoso a 3% (4 mL) . A mistura foi tratada com ultra-sons, agitada à temperatura ambiente durante 15 min e filtrada. O bolo de filtração foi seco sob alto vácuo para originar cloridrato de N- (3,5-diamino-6-cloropirazino-2- 59 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ carbonil)—Ν’—(4—{4—[3—(lH-tetrazol-5-il)propoxi]fenil}butil)-guanidina (5, PSA 17926) sob a forma de um sólido amarelo. Pf 125-127°C (decomposto). RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,70 (m, 4H) , 2,22 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 4,00 (m, 2H) , 6,70 (d, 2H), 7,09 (d, 2H) . m/z (ESI): 488 [C20H26CINHO2 + H] + .
Exemplo 2 Síntese de éster O-( 4-{4-[Ν'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]butil}fenílico) de ácido dimetiltio-carbâmico (PSA 17846)
2-[4-(4-Hidroxifenil)butil]isoindolo-1,3-diona (8).
Uma mistura de bromidrato de 4-(4-aminobutil)fenol 6 (8,2 g, 33,5 mmol), anidrido ftálico 7 (5,0 g, 33,8 mmol), e trietilamina (4,6 mL, 33,5 mmol) em clorofórmio (50 mL) foi agitada em refluxo durante 18 h, arrefecida à temperatura ambiente e concentrada por evaporação rotativa. O resíduo foi dissolvido em ácido acético (50 mL) e agitado a 100°C durante 3 h. O solvente foi evaporado e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com CH2Cl2/EtOAc/hexanos (8:1:1, v/v) para originar o produto desejado 8 sob a forma de um pó branco (4,1 g, rendimento de 41%). ΤΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,57 (m, 4H) , 2,46 (m, 2H), 3,58 (m, 2H) , 6,64 (d, 2H), 6,95 (d, 2H), 7,82 (m, 4H), 9,12 (s, 1H) . m/z (ESI): 296 [Ci8H17N03 + H] + . Éster O—{4—[4—(1,3-dioxo-l,3-di-hidroisoindol-2-il)butil]- fenílico} de ácido dimetiltiocarbâmico (9).
Uma suspensão de hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 0,44 g, 0,11 mmol) em DMF anidra (10 mL) foi arrefecida a 0°C e adicionada a uma solução de 2-[4-(4-hidroxifenil) - butil]isoindolo-1,3-diona 8 (2,95 g, 10 mmol) em DMF (15 mL). A mistura foi agitada a 0°C durante 30 min e depois à temperatura ambiente durante mais uma hora. Foi então adicionada uma solução de cloreto de ácido dimetiltiocarbâmico 60 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ (1,35 g, 11 mmol) em DMF (10 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente primeiro durante 16 h e depois a 50 °C durante 1 h, arrefecida de novo para a temperatura ambiente e a reacção foi extinta com metanol (10 mL) . A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com CH2Cl2/hexanos/EtOAc (10:1:0.2, v/v) para originar o produto desejado 9 sob a forma de um sólido amarelado (2,27 g, rendimento de 59%). ΤΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,72 (m, 4H) , 2,67 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,71 (m, 2H), 6,95 (d, 2H), 7,18 (d, 2H) , 7,70 (m, 2H) , 7,84 (m, 2H) . m/z (ESI): 383 [C21H22N2O3S + H] + . Éster O-[4-(4-aminobutil)fenílico] de ácido dimetiltio-carbâmico (10).
Uma mistura de éster O-{4-[4-(1,3-dioxo-l,3-di- hidroisoindol-2-il)butil]fenílico} de ácido dimetiltio-carbâmico 9 (0,30 g, 0,80 mmol) e metilamina (2M em metanol, 10 mL, 20 mmol) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. 0 solvente foi removido por evaporação rotativa e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel (Biotage) eluindo com clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado (10:1:0,1, v/v) para originar o éter 0-[4-(4-aminobutil)fenílico] de ácido dimetiltiocarbâmico (10) sob a forma de um óleo incolor límpido (118 mg, rendimento de 46%). ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,70 (m, 4H) , 2,70 (m, 4H) , 3,34 (s, 3H), 3,46 (s, 3H) , 6,96 (d, 2H) , 7,20 (d, 2H) . m/z (ESI) : 253 [C13H2oN2OS + H] + . Éster 0-(4-{4-[N'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-guanidino]butil}fenílico) de ácido dimetiltiocarbâmico (11, PSA 17846).
Uma solução de éster O-[4-(4-aminobutil)fenílico] de ácido dimetiltiocarbâmico 10 (115 mg, 0,45 mmol), trietilamina (0,30 mL, 2,2 mmol) e iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (175 mg, 0,45 mmol) em THF anidro (6 mL) foi agitada em refluxo durante 3 h e depois arrefecida à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada por evaporação rotativa. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel (Biotage) eluindo com clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado (15:1:0.1, v/v) para originar o produto desejado 61 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 11 sob a forma de um sólido amarelo (180 mg, rendimento de 86%). pf 102-105°C. RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,70 (m, 4H) , 2,65 (m, 2H), 3,20 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 3,40 (s, 3H), 6,95 (d, 2H), 7,20 (d, 2H) . m/z (ESI): 465 [Ctg^sClNsC^S + H] + .
Exemplo 3 Síntese de (2S)-(4-{4-[Ν'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]butil}benzenossulfonilamino) -3-metilbutiramida (PSA 19008).
Cloreto de 4-[4-(1,3-dioxo-l,3-di-hidroisoindol-2-il)butil]-benzenossulfonilo (13). 2-(4-Fenilbutil)isoindolo-1,3-diona 12 (1,9 g, 6,8 mmol) foi adicionada a ácido clorossulfónico (10 mL, 138 mmol) a 0°C e a mistura foi agitada durante 1 h à temperatura. Após armazenagem num refrigerador a -5°C durante a noite, a mistura reaccional foi vertida sobre gelo moído (100 g) e recolheram-se os precipitados por filtração com sucção e secaram-se sob alto vácuo para produzir o produto desejado 13 (2,48 g, rendimento de 99%). RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,70 (m, 4H) , 2,78 (m, 2H) , 3,70 (m, 2H) , 7,40 (d, 2H) 7,70 (d, 2H), 7,85 (d, 2H), 7,95 (d, 2H). (2S)-{4-[4-(l,3-Dioxo-l,3-di-hidroisoindol-2-il)butil]-benzenossulfonilamino}-3-metilbutiramida (14).
Cloreto de 4-[4-(1,3-dioxo-l,3-di-hidroisoindol-2- il)butil]benzenossulfonilo 13 (0,45 g, 1,19 mmol) foi dissolvido em DMF seca (5 mL) , e adicionado a uma solução de IV-metilmorf olina (3 mL) e (2S) -amino-3-met ilbut iramida (0,18 g, 1,19 mmol) em DMF (10 mL). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 66 h. O solvente foi removido por evaporação rotativa e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel eluindo com clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado (15:1:0,1, 62 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ v/v) para originar ο produto desejado 14 sob a forma de um pó branco (0,41 g, rendimento de 73%). ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-c^) δ 0,72 (d, 3H), 0,76 (d, 3H), 1,77 (m, 4H), 1,79 (m, 1H), 2,68 (m, 2H), 3,40 (m, 1H) , 3,60 (m, 2H) , 6,92 (s, 1H) , 7,21 (s, 1H), 7,34 (d, 2H) 7,50 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,82 (m, 4H). (2S)-[4-(4-Aminobutil)benzenossulfonilamino]-3-metilbutiramida (15) .
Uma mistura de (2S)-{4-[4-(l,3-dioxo-l,3-di-hidroiso-indol-2-il)butil]benzenossulfonilamino}-3-metilbutiramida 14 (0,40 g, 0,87 mmol) e metilamina (2 M em metanol, 20 mL, 40 mmol) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido por evaporação rotativa e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado (3:1:0,1, v/v) para originar a (2S)-[4-(4-aminobutil)benzenossulfonilamino]-3-metilbutiramida (15) sob a forma de um pó branco (156 mg, rendimento de 54%). XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,85 (d, 3H) , 0,87 (d, 3H) , 1,66 (m, 4H) , 1,90 (m, 1H), 2,69 (m, 4H) , 3,51 (d, 1H) , 7,35 (d, 2H) 7,75 (d, 2H) . m/z (ESI): 328 [C15H25N3O3S + H] + . (2Sj-(4-{4-[iV'-(3,5-Diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-guanidino]butil}benzenossulfonilamino)-3-metilbutiramida (16, PSA 19008).
Uma solução de (2S)-[4-(4-aminobutil)benzenossulfonilamino] -3-metilbutiramida 15 (156 mg, 0,47 mmol), diisopropil- etilamina (0,60 mL, 3,0 mmol) e iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (230 mg, 0,61 mmol) em etanol absoluto (8 mL) foi agitada a 70°C durante 5 h e depois foi arrefecida à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada por evaporação rotativa. O resíduo bruto foi lavado com água, filtrado e o produto sólido bruto foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado (5:1:0,1, v/v) para originar o produto desejado sob a forma de um sólido amarelo (137 mg, rendimento de 54%). Parte do sólido (86 mg) foi adicionalmente purificado por HPLC semi-preparativa (acetonitrilo/água/TFA a 0,1%) para originar a amostra analiticamente pura que foi então co-evaporada com HC1 aquoso a 5% para originar o sal cloridrato 16. pf 154- ΕΡ 1 663 235/ΡΤ ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 63 156° C (decomposto) . RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,8 0,86 (d, 3H) , 1, 70 (m, 4H) , 1,90 (m, 1H), 2,75 (m, (m, 2H), 3,52 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,75 (d, 2H) . 540 [C21H30CIN9O4S + H] + . [oí] D25 +5,2° (c 0,50, MeOH). (d , 3Η) , , 3,32 (ESI):
Exemplo 4 Síntese de 2-(4-{4-[IV -(3,5-diamino-6-cloropirazino-2- carbonil)guanidino]butil}fenoxi)-N-fenilacetamida (PSA 17482)
Éster benzílico de ácido [4-(4-fenilcarbamoílmetoxi- fenil)butil]carbâmico (18).
Uma mistura de ácido [4-(4-benziloxicarbonil-aminobutil)fenoxi]acético (300 mg, 0,84 mmol), anilina (0,15 mL, 1,70 mmol), DMAP (60 mg, 0,50 mmol) e EDC*HC1 (320 mg, 1,70 mmol) em CH2CI2 (30 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 66 h. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi submetido a cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com metanol/CH2Cl2 (1:99, v/v) para originar a amida desejada 18 sob a forma de um sólido branco (360 mg, rendimento de 99%) . 2H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,55 (m, 4H) , 2,60 (m, 2H), 3,20 (m, 2H), 4,58 (s, 2H), 4,70 (s lg, 1H) , 5,10 (s, 2H) , 6,88 (d, 2H), 7,15 (m, 3H) , 7,35 (m, 7H) , 7,58 (d, 2H) , 8,25 (s, 1H) . m/z (ESI): 433 [C26H28N2O4 + H] + . 2-[4-(4-Aminobutil)fenoxi]-N-fenilacetamida (19).
Uma solução de éster benzílico de ácido [4-(4-fenil-carbamoílmetoxifenil)butil]carbâmico 18 (0,30 g, 0,69 mmol) em etanol (10 mL) , THF (6 mL) e ácido acético (2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h sob atmosfera de hidrogénio na presença de catalisador de Pd/C a 10% (0,2 g, 50% em húmido). O catalisador foi removido por filtração com sucção e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com CH2Cl2/metanol/hidróxido de amónio concentrado (30:1:0, 64 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 30:1:0,3, ν/ν) para originar a amina desejada 19 sob a forma de um sólido branco (200 mg, rendimento de 97%) . ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,60 (m, 4H) , 2,55 (m, 2H) , 2,70 (m, 2H) , 4,60 (s, 2H), 6,88 (d, 2H), 7,15 (m, 3H) , 7,35 (m, 2H) , 7,58 (d, 2H), 8,25 (s, 1H) . m/z (ESI): 299 [C18H22N2O2 + H] + . 2-(4-{4-[Ν' -(3,5-Diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]-butil }fenoxi)-iV-fenilacetamida (20, PSA 17482).
Uma solução de 2-[4-(4-aminobutil)fenoxi]-N-fenil-acetamida 19 (100 mg, 0,35 mmol) e trietilamina (0,14 mL, 1,00 mmol) em etanol absoluto (2 mL) foi agitada a 60°C durante 30 min, após o que se adicionou iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (140 mg, 0,37 mmol) numa só porção. A mistura reaccional foi agitada a essa temperatura durante 4 h, arrefecida à temperatura ambiente e concentrada por evaporação rotativa. O resíduo bruto foi moído com água e filtrado. O bolo de filtração foi purificado por cromatografia flash em coluna de silica-gel eluindo com diclorometano/metanol/hidróxido de amónio concentrado (500:10:0, 500:10:1, 200:10:1, v/v) para originar a 2-(4-{4-[Ν' -(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]-butil}fenoxi)-N-fenilacetamida (20, PSA 17482) sob a forma de um sólido amarelo (120 mg, rendimento de 67%). pf 168-170°C. ΤΗ RMN (300 MHz, DMS0-d5) δ 1,55 (m, 4H) , 2,55 (m, 2H) , 3,16 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 6,60 (s lg, 2H), 6,90 (d, 2H), 7,08 (m, 2H), 7,15 (d, 2H), 7,30 (m, 5H) , 7,60 (d, 2H) , 9,00 (s lg, 1H), 10,00 (s lg, 1H) . m/z (ESI): 511 [C24H27C1N803 + H] + .
Exemplo 5 Síntese de N-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-N'-(4-{4-[3-(lH-imidazol-2-il)propoxi]fenil}butil)guanidina (PSA 23022)
4-{4-[3-(lH-Imidazol-2-il)propoxi]fenil}butilamina (21). 65 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Ο composto 2 (0,156 g, 0,425 mmol) foi dissolvido em etanol anidro (10 mL) . Borbulhou-se na solução HC1 gasoso anidro durante 3 min. O vaso reaccional foi selado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h, e depois foi concentrada até à secura sob vácuo. O resíduo resultante foi dissolvido em metanol anidro (5 mL) . À solução recém-formada foi adicionada 2,2-dimetoxietilamina (0,097 mL, 0,891 mmol) numa só porção. Após agitação à temperatura ambiente durante a noite, aumentou-se a temperatura até ao refluxo que se manteve durante mais 3 h antes de a mistura ter sido arrefecida até à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi tratado com solução aquosa de HC1 1,2 N a 80°C durante 2 horas. A mistura foi então arrefecida novamente até à temperatura ambiente e neutralizada a pH ~9 com K2CO3 em pó. A água foi completamente removida sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em metanol. A solução metanólica foi carregada sobre sílica-gel, e o produto foi eluído com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado/MeOH/CH2Cl2 (1,8:18:81,2, v/v) , originando o produto 21 (27 mg, rendimento global de 23%) sob a forma de um sólido esbranquiçado. 1R RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 1,60 (m, 4H) , 2,14 (m, 2H) , 2,56 (t, 2H) , 2,76 (t, 2H), 2,86 (t, 2H), 3,94 (t, 2H) , 6,79 (d, 2H) , 6,91 (s, 2H) , 7,08 (d, 2H) . m/z (A-PCI): 274 [C16H23N3O + H] + . N-(3,5-Diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-N'-(4-{4-[3-(lH-imidazol-2-il)propoxi]fenil}butil)guanidina (22, PSA 23022). O composto 21 (23 mg, 0,084 mmol) foi dissolvido numa mistura de etanol (3 mL) e base de Hunig (0,074 mL, 0,421 mmol) a 65°C ao longo de 15 min. Adicionou-se à solução iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (43 mg, 0,109 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura anterior durante mais 3 h antes de todo o líquido ser removido sob vácuo. O resíduo foi cromatografado sobre sílica-gel, eluindo com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado/metanol/diclorometano (1,5:15:63,5, v/v), para produzir o produto desejado 22 (34 mg, rendimento de 83%) sob a forma de um sólido amarelo, pf 123-126°C (decomposto), RMN (300 MHz, CD3OD): δ 1,62 (m, 4H), 2,14 (m, 2H) , 2,58 (t, 2H) , 2,88 (t, 2H) , 3,21(t, 2H) , 3, 94 (t, 2H), 6,77 (d, 2H) , 6,90 (s, 2H) , 7,06 (d, 2H) . m/z (APCI) : 486 [C22H28CIN9O2 + H] + . 66 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo 7 Síntese de cloridrato de 2-(4-{4-[Ν'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]-butil}fenoxi)-N,N-dimetil-acetamida (PSA 16313)
PSA16313 Éster benzílico de ácido [4-(4-dimetilcarbamoílmetoxi-fenil)butil]carbâmico (28).
Uma mistura do éster etilico de ácido [4-(4-benziloxi-carbonilaminobutil)fenoxi]acético 23 (0,50 g, 1,3 mmol) e dimetilamina (2,0 M em THF, 10 mL, 20 mmol) num tubo selado foi aquecida a 55°C durante 48 h. O solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo/CH2Cl2, 1:4, 1:3, v/v) para proporcionar éster benzílico de ácido [4-(4-dimetil carbamoí lmetoxif enil ) butil] carbâmico 28 (0,26 g, rendimento de 52%) sob a forma de um sólido branco. RMN (300 MHz, CDCI3) δ 1,55 (m, 4H), 2,55 (m, 2H), 2,90 (s, 3H) , 3,05 (s, 3H) , 3,20 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,08 (s, 2H) , 6,80 (d, 2H) , 7,05 (d, 2H), 7,35 (m, 5H). 2-[4-(4-Aminobutil)fenoxi]-N,N-dimetilacetamida (29). A uma solução desgaseifiçada de éster benzílico de ácido [4-(4-dimetilcarbamoílmetoxifenil)butil]carbâmico (28) (0,26 g, 0,68 mmol) em etanol (10 mL) adicionou-se paládio a 10% sobre carvão activado (0,1 g, 50% em húmido) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite sob hidrogénio atmosférico. O catalisador foi filtrado através de uma almofada de terra de diatomáceas e o solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, diclorometano/metanol/hidróxido de amónio concentrado, 100:5:1, v/v) para proporcionar 2—[4—(4— aminobutil)fenoxi]-N,N-dimetilacetamida 29 (100 mg, rendimento de 60%) sob a forma de um sólido branco. ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,55 (m, 4H) , 2,55 (m, 2H) , 2,66 (m, 2H) , 2,90 (s, 67 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 3Η) , 3,05 (s, 3Η), 4,70 (s, 2Η), 6,80 (d, 2Η), 7,05 (d, 2Η) . m/z (ESI): 251 [C14H22N202 + H] + .
Cloridrato de 2-(4-{4-[N'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2- carbonil)guanidino]butil}fenoxi)-N,N-dimetilacetamida (30, PSA 16313).
Uma solução de 2-[4-(4-aminobutil)fenoxi]-N, N- dimetilacetamida 29 (67 mg, 0,27 mmol) em etanol absoluto (1 mL) foi agitada a 65°C durante 30 min, após o que se adicionou iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-
carbonil)-2-metilisotioureia (110 mg, 0,29 mmol) numa só porção. A mistura reaccional foi agitada a essa temperatura durante 3 h e depois foi arrefecida à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada por evaporação rotativa. O resíduo bruto foi moído com água e filtrado. O bolo de filtração foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com diclorometano/metanol/hidróxido de amónio concentrado (200:10:0, 200:10:1, v/v) para originar 2-(4-{4-[IV'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil) guanidino] -butil }fenoxi)-A/·,N-dimetilacetamida sob a forma de um sólido amarelo (35 mg, rendimento de 28%). Este sólido foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a HC1 aquoso 4 N (4 gotas). A concentração in vacuo originou cloridrato de 2-(4-{4-[N-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]butil}fenoxi)-N, N-dimetilacetamida (30, PSA 16313). pf 130-132°C (decomposto). 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,69 (m, 4H), 2,60 (m, 2H), 2,95 (s, 3H), 3,10 (s, 3H) , 3,35 (m, 2H) , 4,75 (s, 2H) , 6,80 (d, 2H), 7,10 (d, 2H) . m/z (ESI): 463 [C2oH27C1N803 + H] + .
Exemplo 8 Síntese de dicloridrato de 2-(4-{4-[Ν'-(3,5-diamino-6-cloro-pirazino-2-carbonil)guanidino]butil}fenoxi)-N- (lH-imidazol-2-il)acetamida (PSA 16437)
[4-(4-terc-butoxicarbonil-
Ester metilico de ácido aminobutil)fenoxi]acético (32). 68 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Uma mistura de éster terc-butílico de ácido [ 4 —(4 — hidroxifenil)butil]carbâmico 31 (1,00 g, 3,78 mmol), carbonato de potássio (0,627 g, 4,54 mmol), iodeto de sódio (0,567 g, 3,78 mmol), e bromoacetato de metilo (0,40 mL, 4,21 mmol) em DMF anidra (8 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura reaccional foi então diluida com acetato de etilo (100 mL) e hexanos (20 mL), lavada com água (20 mL χ 4) e salmoura (30 mL) , e foi concentrada sob pressão reduzida para produzir o produto desejado 32 sob a forma de um óleo amarelo (1,28 g, rendimento de 100%) que se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional. XH RMN (300 MHz, CDCI3) δ 1.40 (s, 9H), 1,41-1,65 (m, 4H), 2,49-2,60 (m, 2H), 3,02-3,16 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 4,45 (s lg, 1H), 4,59 (s, 2H) , 6,79 (d, 2H), 7,05 (d, 2H) . m/z (ESI): 338 [C18H27NO5 + H]+. Ácido [ 4-(4-te-rc-butoxicarbonilaminobutil) fenoxi] acético (33). A uma solução de éster metílico de ácido [4-(4-terc-butoxicarbonilaminobutil)fenoxi]acético 32 (1,28 g, 3,78 mmol) em metanol (80 mL) foi adicionado hidróxido de potássio moído (2,50 g, 85%, 37,8 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. O solvente foi removido por evaporação rotativa. O resíduo foi tomado em água e acidificado a pH ~1 com HC1 aquoso 6N, e extractou-se com diclorometano. Os materiais orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2S04 e concentrados até à secura completa para produzir o produto desejado 33 sob a forma de um sólido branco (1,19 g, rendimento 97%). 1E RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,41 (s, 9H), 1,42-1,70 (m, 4H), 2,45-2,60 (m, 2H), 3,00-3,20 (m, 2H), 4,60 (s, 2H), 6,80 (d, 2H) , 7,08 (d, 2H) . m/z (ESI): 322 [C17H25N05 - ΗΓ. Éster terc-butílico do ácido (4-{4-[(lH-imidazol-2- ilcarbamoíl)metoxi]fenil}butil)carbâmico (34). O ácido [4-(4-terc-butoxicarbonilaminobutil)fenoxi]-acético 33 (1,19 g, 3,68 mmol) foi dissolvido em THF anidro (10 mL) , CH2CI2 (10 mL) e CH3CN (5 mL) . Adicionou-se à solução, sequencialmente, HOAt (200 mg, 1,47 mmol), DMAP (135 mg, 1,10 mmol) e diisopropiletilamina (3,2 mL, 18,40 mmol), seguindo-se a adição de EDOHC1 (1,03 g, 5,35 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min. Foi então adicionado sulfato de aminoimidazole (583 mg, 4.41 mmol) e continuou-se a agitação durante 48 h. os 69 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ solventes foram removidos por evaporação rotativa. 0 resíduo foi tomado em CH2CI2 (250 mL) , lavado com água e salmoura, e foi concentrado sob pressão reduzida. A cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com metanol/diclorometano (1:30, 1:20, v/v) originou a amida desejada sob a forma de um sólido branco (0,95 g, rendimento de 66%). ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,40 (s, 9H), 1,42-1,70 (m, 4H), 2,48-2,60 (m, 2H), 3,00-3,20 (m, 2H), 4,65 (s, 2H) , 6, 79-6, 89 (m, 4H) , 7,10 (d, 2H) . m/z (ESI) : 389 [C20H28N4O4 + H] + .
Dicloridrato de 2-[4-(4-aminobutil)fenoxi]-N-(lH-imidazol-2-il)acetamida (35). Éster terc-butilico de ácido (4-{4-[(lH-imidazol-2-il-carbamoí1)metoxi]fenil}butil)carbâmico 34 (950 mg, 2,45 mmol) foi tratado com HC1 (4 M em dioxano, 24 mL, 96 mmol) à temperatura ambiente durante 12 h. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e foi adicionalmente co-evaporada com diclorometano e metanol, e secou-se sob alto vácuo. O produto desejado foi obtido sob a forma de um sólido branco (779 mg, 98%) e foi utilizado directamente sem purificação adicional. ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,59-1, 74 (m, 4H) , 2,55-2,67 (m, 2H), 2,85-2, 98 (m, 2H) , 4,80 (s, 2H) , 7,00 (d, 2H) , 7,18 (d, 2H), 7,19 (s, 2H) . m/z (ESI): 289 [C15H20N4O2 + H] + .
Dicloridrato de 2-(4-{4-[N'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]butil}fenoxi)-N- (lH-imidazol-2-il)acetamida (36, PSA 16437).
Uma solução de dicloridrato de 2— [4— (4 — aminobutil)fenoxi]-N-(lH-imidazol-2-il)acetamida 35 (99 mg, 0,27 mmol) e diisopropiletilamina (0,27 mL, 1,53 mmol) em etanol absoluto (4 mL) e metanol anidro (3 mL) foi agitada a 70°C durante 30 min, após o que se adicionou iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (130 mg, 0,34 mmol) numa só porção. A mistura reaccional foi agitada durante 3 h e depois foi arrefecida à temperatura ambiente. Removeram-se os materiais insolúveis amarelos por filtração com sucção e o filtrado líquido foi concentrado por evaporação rotativa. O resíduo líquido foi purificado por cromatografia flash em coluna de sílica-gel eluindo com diclorometano/metanol/hidróxido de amónio concentrado (200:10:0, 200:10:1, 150:10:1 e 100:10:1, v/v) para originar 2-(4-{4-[IV'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil) guanidino] - 70 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ butil}fenoxi)-Ν' (lH-imidazol-2-il)acetamida sob a forma de um sólido amarelo (44 mg, rendimento de 29%). A base livre assim obtida foi dissolvida em metanol e tratada com 4 gotas de HC1 aquoso 4 N. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e adicionalmente foi seca sob vácuo para originar o composto final 36. pf 172-174°C. ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,61-1,77 (m, 4H), 2,58-2, 70 (m, 2H), 3,32-3, 40 (m, 2H), 4,80 (s, 2H) , 7,00 (d, 2H), 7,18 (d, 2H), 7,20 (s, 2H) . m/z (ESI]: 501 [C2lH25ClN10O3 + H]+.
Exemplo 9 Síntese de N-carbamoílmetil-2-(4-{4-[N'-(3,5-diamino-6-cloro-pirazino-2-carbonil)guanidino]butiljfenoxi)acetamida (PSA 16314) o
Éster benzílico de ácido (4-{4-[(carbamoílmetil- carbamoíl)metoxi]fenil]butil)carbâmico (37).
0 composto 1 (0,50 g, 1,77 mmol) foi dissolvido em DMF (10 mL). Adicionou-se à solução NaOH moído (0,107 g, 2.66 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. Adicionou-se 2-bromoacetamida (0,367 g, 2.66 mmol). A mistura reaccional foi adicionalmente agitada à temperatura ambiente durante a noite, extinta com água (2 mL) e submetida a partição entre água e diclorometano (50 mL de cada). A camada orgânica foi separada, lavada com água (2 x 50 mL) , seca sobre Na2SC>4 anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado sobre sílica-gel, eluindo com uma mistura de metanol/diclorometano (7:93, v/v), para produzir o produto desejado 37 (0,131 g, rendimento de 18%) sob a forma de um sólido branco. ΤΗ RMN (300 MHz, CDC13) : δ 1,58 (m, 4H), 2,60 (t, 2H), 3,20 (m, 2H), 4,04 (d, 2H), 4,54 (s, 2H), 4, 75 (lg, 2H), 5,12 (s, 2H), 5,43 (lg, 1H), 5,80 (lg, 1H) , 6,85 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,36 (m, 5H) . m/z (APCI): 414 [C22H27N305 + H]+. 71 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 2-[4-(4-Aminobutil)fenoxi]-N-carbamoilmetilacetamida (38) 0 composto 37 (130 mg, 0,314 mmol) foi dissolvido em EtOH e THF (14 mL, razão 1/1) . O vaso reaccional foi purgado com azoto antes e depois de ser adicionado o catalisador (100 mg, Pd/C a 10%, 50% em húmido). A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante a noite. Após purga com azoto, o catalisador foi filtrado sob vácuo e lavado com etanol (3x5 mL) . Os filtrados combinados foram concentrados sob vácuo. O residuo foi cromatografado sobre silica-gel, eluindo com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado/metanol/diclorometano (2:20:88, v/v), para produzir o produto desejado 38 (80 mg, rendimento de 91%) sob a forma de um sólido branco. ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD): δ 1,62 (m, 4H) , 2,60 (t, 2H), 2,75 (t, 2H) , 3,92 (s, 2H) , 4,54 (s, 2H), 6,92 (d, 2H), 7,14 (d, 2H). N-Carbamoilmeti1-2-(4-{4-[N'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidino]butil}fenoxi)acetamida (39, PSA 16314). O composto 38 (79 mg, 0,283 mmol) foi dissolvido numa mistura de etanol absoluto (5 mL) e base de Hunig (0,25 mL, 1,41 mmol) a 65°C ao longo de 10 min. Adicionou-se à solução iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (132 mg, 0,34 mmol) numa só porção. A mistura reaccional assim resultante foi agitada continuamente durante mais 2 h antes de ser arrefecida à temperatura ambiente e subsequentemente foi concentrada sob vácuo. O residuo resultante foi purificado por cromatografia eluindo com metanol/diclorometano/hidróxido de amónio concentrado (10/2/88, v/v) para produzir a base livre (93 mg, rendimento de 6 7%) sob a forma de um sólido amarelo. O sal de HC1 foi preparado utilizando o seguinte procedimento: 45 mg da base livre foram suspensos em etanol (2 mL) e tratados com HC1 concentrado (12 N, 0,5 mL) durante 10 min. Todo o liquido foi então completamente removido sob vácuo para produzir 39 (47 mg), pf 178-180 °C (decomposto). XH RMN (300 MHz, DMSO- d6) : δ 1, 61 (m, 4H), 2,58 (t, 2H), 3,32 (m, 2H), 3,70 (s, 2H) , 4, 48 (s, 2H), 6,93 (d, 2H) , 7,08 (lg, 1H), 7,13 (d, 2H), 7, 36 (ig, 1H) , 7,44 (lg, 2H) , 8,17 (t, 1H) , 8, - 74 (lg, 1H), 8, 90 (ig, 2H) , 9,18 (t, 1H) , 10,48 (lg, 1H) . . m/z (APCI): 492 [ C20H26CIN9O4 + H] . 72 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo 10 Síntese de N-[4-(4-cianometoxifenil)butil]-Ν'-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)guanidina (PSA 16208)
Éster terc-butílico de ácido [4-(4-cianometoxifenil)-butil]carbâmico (40).
Uma mistura de éster terc-butílico de ácido [4 —(4 — hidroxifenil)butil]carbâmico 31 (0,365 g, 1,37 mmol) e CS2CO3 (0,672 g, 2,06 mmol) em DMF anidra (8 mL) foi aquecida a 65°C durante 30 min. Adicionou-se então iodoacetonitrilo (0,276 g, 1,651 mmol) à mistura numa só porção. A mistura foi agitada a 65°C durante a noite, e depois foi arrefecida à temperatura ambiente. O sólido precipitado foi filtrado, e o filtrado foi submetido a partição entre água e diclorometano (50 mL de cada). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura (3 x 50 mL), seca sobre Na2S04 anidro e concentrada sob vácuo. O resíduo foi cromatografado sobre sílica-gel, eluindo com uma mistura de éter dietílico/diclorometano (6:94, v/v), para produzir o produto desejado 40 (0,109 g, rendimento de 38%) sob a forma de um óleo viscoso. XH RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 1,43 (s, 9H), 1,57 (m, 4H) , 2,60 (t, 2H) , 3, 15 (m, 2H), 4,49 (ig, 1H), 4,75 (s, 2H) , 6,91 (d, 2H), 7, 13 (d, 2H).
[4-(4-Aminobutil)fenoxi]acetonitrilo (41). O composto 40 (0,105 g, 0,345 mmol) foi dissolvido em diclorometano (10 mL) . Adicionou-se ácido trifluoroacético (2 mL) numa só porção. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, e depois foi concentrada sob vácuo até à secura. O resíduo bruto foi utilizado directamente sem purificação adicional. ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 1,60-1,75 (m, 4H) , 2,65 (t, 2H) , 2,92 (t, 2H) , 4,38 (s, 2H) , 6,96 (d, 2H) , 7,20 (d, 2H) . m/z (APCI): 205 [Ci2Hi6N20 + H] + . 73 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Ν- [4-(4-Cianometoxifenil)butil]-Ν’ -(3,5-diamino-6-cloro-pirazino-2-carbonil)guanidina (42, PSA 16208).
Uma mistura do composto 41 (0,070 g, 0,345 mmol) e base de Hunig (0,3 mL, 1,72 mmol) em etanol anidro foi aquecida a 65°C durante 20 min. Adicionou-se à solução iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-2-metilisotioureia (0,148 g, 0,379 mmol) numa só porção. Continuou-se o aquecimento durante mais 2 h. A mistura reaccional foi então concentrada sob vácuo. O resíduo foi cromatografado por cromatografia flash em coluna e adicionalmente purificado por TLC preparativa, eluindo com metanol/diclorometano/hidróxido de amónio concentrado (10/1/89, v/v), para produzir o produto desejado 42 (0,031 g, 22%) sob a forma de um sólido amarelo, pf 129-132°C. ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 1,72 (m, 4H) , 2,68 (t, 2H), 3,32 (m, 2H) , 4,92 (s, 2H) , 6,95 (d, 2H) , 7,22 (d, 2H) ; m/z (APCI): 417 [Ci8H2iClN802 + H] + .
Exemplo de Referência 11 Síntese de N-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)-N'-(4-{4-[3-(2,3-di-hidroxipropoxi)-2-hidroxipropoxi]fenil}butil)-guanidina (PSA 15143)
OH OH
PSA 15143 Éster benzílico de ácido ( 4-{4-[3-(2,3-Dihidroxipropoxi)-2-hidroxipropoxi]fenil}butil)carbâmico (43).
Uma solução contendo o composto 1 (2,0 g, 6,6 8 mmol), trietilamina (0,093 mL, 0,668 mmol) e etanol anidro (2,2 mL) foi aquecida a 70°C durante 1 h. Adicionou-se oxiranilmetanol (0,5 mL, 6,68 mmol) de hora a hora durante um total de 4 h (a quantidade total de oxiranilmetanol adicionado foi de 2,0 ml, 26,72 mmol). A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi cromatografado sobre sílica-gel com a eluição de uma mistura de metanol/diclorometano (3:97, v/v) para proporcionar 168 mg (rendimento de 4,6%) do produto desejado 43. m/z (APCI): 448 [C24H33NO7 + H]+. 74 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 3—{3—[4-(4-Aminobutilfenoxi]-2-hidroxipropoxi}propano-l,2-diol (44) .
Uma solução contendo o composto 43 (0,15 g, 0,34 mmol) em etanol (1,5 mL) foi purgada com azoto antes e depois de ser adicionado o catalisador (0,15 g, Pd/C a 10%, 50% em húmido). A mistura reaccional foi colocada sob atmosfera de hidrogenação durante 45 min. O catalisador foi filtrado sob vácuo através de terra de diatomáceas e lavado com etanol (3 x 2 mL). Os filtrados combinados foram concentrados sob vácuo. O resíduo foi cromatografado sobre sílica-gel, eluindo com metanol/diclorometano/amoníaco concentrado (25/2,5/73,5, v/v), para produzir o produto desejado 44 (0,053 g, rendimento de 51%) sob a forma de um óleo incolor viscoso. ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 1,52 (m, 4H) , 2,55 (t, 2H) , 2,65 (t, 2H) , 3,61 (m, 10H), 6,85 (d, 2H), 7,09 (d, 2H) . m/z (APCI): 314 [Ci6H27N05 + H]+. N-(3,5-Diamino-6-cloropirazino-2-carbonil)—N'—(4—{4—[3—(2,3— di-hidroxipropoxi)-2-hidroxipropoxi]fenil}butil)guanidina (45, PSA 15143). O composto 44 (50 mg, 0,159 mmol) foi dissolvido numa mistura de etanol absoluto (0,5 mL) e trietilamina (0,076 mL, 0,541 mmol) a 65°C ao longo de 15 min. Adicionou-se à solução iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazino-2-carbonil) -2-metilisotioureia (74 mg, 0,191 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura anterior durante um adicional de 50 min, arrefecida à temperatura ambiente e subsequentemente foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi cromatografado sobre sílica-gel, eluindo com metanol/diclorometano/hidróxido de amónio concentrado (10/1/40, v/v) para produzir o produto desejado 45 (53 mg, rendimento de 36%) sob a forma de um sólido amarelo, pf 73-82°C (decomposto). RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 1,70 (m, 4H) , 2,55 (m, 2H) , 3,22 (m, 2H) , 3,65 (m, 7H), 3,98 (m, 3H), 6,86 (d, 2H), 7,08 (d, 2H). m/z (APCI): 526 [C22H32C1N706 + H] + .
Exemplo 12 acima,
Utilizando os procedimentos estabelecidos preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida. 75 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
PSA17927 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de RMN a 300 MHz (DMS0-d6) Consistente Ponto de fusão 108-110°C dec Análise por HPLC 96,5% (percentagem de área), coluna dC18 de Polaridade, Detector @ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 527 [C2iH3iC1N804S + H]+
Exemplo 13
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoilguanidina protegida.
JLCL N CH3 OXc
NH O PSA18211 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de XH RMN a 30 0 MHz (DMS0-d6) Consistente Ponto de fusão 153-155°C dec Análise por HPLC 96,3% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector @ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 465 [C19H25C1N802S + H] + 76 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo 14
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida.
PSA18212 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de 1H RMN a 500 MHz (CD3OD) Consistente Ponto de fusão 115-116 °C Análise por HPLC 97,1% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector @ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 639 [C3oH35C1N806 + H] +
Exemplo de Referência 15 acima,
Utilizando os procedimentos estabelecidos preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida.
O o NH,
NH Λ
H H
I H2N N NH2 PSA18229 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de XH RMN a 300 MHz (CD3OD) Consistente Ponto de fusão 190-192 °C Análise por HPLC 97,9% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector @ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 476 [C20H26CIN9O3 + H] + 77 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo 16
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida.
o II
PSA18361 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de *H RMN a 300 MHz (CD3OD) Consistente Ponto de fusão 124-126 °C dec Análise por HPLC 95,2% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector 0 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 441 [Ci6H21C1N803S + H] +
Exemplo 17
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida.
O
PSA18592 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de RMN a 500 MHz (CD3OD) Consistente Ponto de fusão 189 °C dec Análise por HPLC 95,0% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector 0 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 503 [C2iH27C1N10O3 + H] + 78 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo de Referência 18
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida.
TESTE RE SULTADO/REFERÊNCΙΆ Descrição Sólido amarelo pálido Identificação: Espectro de RMN a 300 MHz (CD3OD) Consistente Ponto de fusão 195-197 °C Análise por HPLC 97,4% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector @ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 477 [C2oH25C1N804 + H] +
Exemplo 19
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoilguanidina protegida.
PSA19007 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de RMN a 300 MHz (CD3OD) Consistente Ponto de fusão 210-212 °C dec Análise por HPLC 95,5% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector @ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa APCI m/z 486 [C22H28CIN9O2 + H] + 79 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo 2 0
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida.
PSA 19912 TESTE RESULTADO/REFERENCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de 1H RMN a 300 MHz (CD3OD) Consistente Rotação Óptica [a]25D -7,8° (c 0,46, Metanol) Ponto de fusão 178-180 °C Análise por HPLC 97,0% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector Θ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 490 [C21H28CIN9O3 + H] +
Exemplo de Referência 21
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoilguanidina protegida.
PSA 24406 TESTE RESULTADO/REFERENCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de 1H RMN a 300 MHz (CD3OD) Consistente Rotação Óptica [oí]25d +0,5° (c 0,35, Metanol) Ponto de fusão 215°C dec Análise por HPLC 96,1% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector 0 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 462 [C2oH28C1N902 + H] + 80 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo de Referência 22
Utilizando os procedimentos estabelecidos acima, preparou-se a seguinte pirazinoílguanidina protegida.
NH,
H 2HC1 PSA 24407 TESTE RESULTADO/REFERÊNCIA Descrição Sólido amarelo Identificação: Espectro de RMN a 300 MHz (CD3OD) Consistente Rotação Óptica [a]25D +4,1° (c 0,30, Metanol) Ponto de fusão 230°C dec Análise por HPLC 95,3% (percentagem de área), Coluna dC18 de Polaridade, Detector @ 220 nm Testes Diversos: Espectro de Massa ESI m/z 463 [C2oH27C1N803 + H] + 81 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ
Exemplo 23
Actividade de Bloqueio dos canais do Sódio de Pirazinoíiguanidinas Protegidas Seleccionadas. PSA EC50 (nM) N.2 de vezes a Amilorida1 (PSA 4022=100) 15143 7±3 (n=3) 10 7±11 (n=3) 16208 11±4 (n=6) 52±21 (n=6) 16314 13±2 (n=4) 41 + 6 (n=4) 16313 15±4 (n=4) 41±7 (n=4) 16437 13±7 (n=7) 77±53 (n=7) 17482 16±4 (n=3) 39±6 (n=3) 17846 11±6 (n=4) 104±49 (n=4) 17926 25±9 (n=6) 29±12 (n=6) 17927 13±4 (n=3) 83±26 (n=3) 18211 10±4 (n=3) 112152 (n=2) 18212 21 ±11 (n=4) 32116 (n=4) 18229 15±6 (n=3) 49 + 15 (n=3) 18361 11±4 (n=3) 76 + 25 (n=3) 18592 8±4 (n=2) 136+58 (n=2) 18593 48±16 (n=6) 13 + 4 (n=4) 19007 18±13 (n=4) 42 + 17 (n=4) 19008 9±1 (n=4) 54+6 (n=4) 19912 26±8 (n=4) 32 + 10 (n=4) 23022 12±3 (n=4) 79 + 15 (n=4) 24406 8±3 (n=6) 107+38 (n=6) 24407 32±11 O \—1 II c 23 + 4 O \—1 II íU 24851 28±13 (n=8) 25110 (n=8) 1
Potência relativa para PSA 4022=100 utilizando EC50 de PSA 4022 na mesma operação 82 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ Métodos
Preparação do Animal: Ovelhas adultas (com pesos variando de 25 a 35 kg) foram imobilizadas numa posição vertical num arnês corporal especializado adaptado a um carrinho de compras modificado. As cabeças dos animais foram imobilizadas e foi induzida anestesia local da passagem nasal com lidocaina a 2%. Os animais foram então nasalmente intubados com um tubo endotraqueal de diâmetro interno de 7,5 mm (ETT) . 0 balão ("cuff") do ETT foi colocado imediatamente abaixo das cordas vocais e a sua posição foi verificada com um broncoscópio flexível. Após a intubação os animais foram deixados equilibrar durante aproximadamente 20 minutos antes do início das medições de depuração mucociliar.
Administração de Radio-aerossol: Aerossóis de 99mTc-alburnina sérica humana (3,1 mg/ml; contendo aproximadamente 20 mCi) foram gerados utilizando um nebulizador Raindrop que produz uma gotícula com um diâmetro aerodinâmico mediano de 3,6 pm. O nebulizador foi ligado a um sistema de dosimetria consistindo numa válvula solenoide e uma fonte de ar comprimido (20 psi) . A saída do nebulizador foi dirigida para um a conector em T de plástico; uma extremidade foi ligada ao tubo endotraqueal, a outra foi ligada a um respirador de pistão. O sistema foi activado durante um segundo no inicio do ciclo inspiratório do respirador. O respirador foi regulado para um volume tidal de 500 mL, uma razão inspiratória para expiratória de 1:1, e uma velocidade de 20 respirações por minuto para maximizar a deposição nas vias aéreas centrais. A ovelha respirou o aerossol radiomarcado durante 5 minutos. Utilizou-se uma câmara gama para medir a depuração de 99mTc-alburnina sérica humana das vias aéreas. A câmara foi posicionada acima do dorso do animal estando a ovelha numa posição vertical natural suportada num carrinho de modo a que o campo da imagem fosse perpendicular à coluna vertebral do animal. Colocaram-se marcadores radio-marcados externos na ovelha para assegurar o correcto alinhamento sob a câmara gama. Todas as imagens foram pontuadas num computador integrado com a câmara gama. Foi traçada uma região de interesse sobre a imagem correspondente ao pulmão direito da ovelha e registaram-se as contagens. As 83 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ contagens foram corrigidas quanto ao decaimento e expressas como percentagem da radioactividade presente na imagem da linha de base inicial. 0 pulmão esquerdo foi excluído da análise porque os seus contornos estão sobrepostos ao estômago e as contagens podem ser deglutidas e entrar no estômago sob a forma de muco radiomarcado.
Protocolo de Tratamento (Determinação da actividade em t-zero): Obteve-se uma imagem da deposição na linha de base imediatamente após a administração do radio-aerossol. No tempo zero, após aquisição da imagem da linha de base, o controlo de veículo (água destilada), o controlo positivo (amilorida), ou os compostos experimentais, foram aerossolizados a partir de um volume de 4 ml utilizando um nebulizador Pari LC JetPlus a animais com respiração livre. 0 nebulizador era accionado por ar comprimido com um caudal de 8 litros por minuto. 0 tempo para entregar a solução foi de 10 a 12 minutos. Os animais foram extubados imediatamente após a entrega da dose total para evitar falsas elevações nas contagens causadas por aspiração de excesso de radio-traçador pelo ETT. Obtiveram-se imagens em série do pulmão com intervalos de 15 minutos durante as primeiras 2 horas após a dosagem e de hora a hora durante as 6 horas seguintes após a dosagem durante um período total de observação de 8 horas. Um período de depuração ("washout") de pelo menos 7 dias separou as sessões de dosagem com diferentes agentes experimentais.
Protocolo de Tratamento (Determinação da Actividade a t-4 horas): Utilizou-se a variação seguinte do protocolo padrão para determinar a durabilidade da resposta após uma única exposição a controlo de veículo (água destilada), compostos de controlo positivo (amilorida ou benzamilo), ou agentes em investigação. No tempo zero, controlo de veículo (água destilada), controlo positivo (amilorida) ou compostos em investigação foram aerossolizados a partir de um volume de 4 ml utilizando um nebulizador Pari LC JetPlus a animais com respiração livre. O nebulizador era accionado por ar comprimido com um caudal de 8 litros por minuto. O tempo para entregar a solução foi de 10 a 12 minutos. Os animais foram imobilizados numa posição vertical num arnês corporal especializado durante 4 horas. No final do período de 4 horas os animais receberam uma dose única de 99mTc-alburnina sérica 84 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ humana aerossolizada (3,1 mg/ml; contendo aproximadamente 20 mCi) a partir de um Nebulizador Raindrop. Os animais foram extubados imediatamente após a entrega da dose total de radio-traçador. Obteve-se uma imagem da deposição na linha de base imediatamente após a administração do radio-aerossol. Obtiveram-se imagens em série do pulmão com intervalos de 15 minutos durante as primeiras 2 horas após a administração do radio-traçador (representando as horas 4 a 6 após a administração do fármaco) e de hora a hora durante as 2 horas seguintes após a dosagem durante um período total de observação de 4 horas. Um período de depuração ("washout") de pelo menos 7 dias separou as sessões de dosagem com diferentes agentes experimentais.
Estatística: Os dados foram analisados utilizando SYSTAT for Windows, versão 5. Os dados foram analisados utilizando um ANOVA de duas vias repetido (para avaliar os efeitos globais), seguido por um teste t emparelhado para identificar diferenças entre pares específicos. A significância foi aceite quando P era inferior ou igual a 0,05. Os valores do declive (calculados a partir dos dados recolhidos durante os 45 minutos iniciais após a dosagem na avaliação no t-zero) para curvas MCC médias foram calculados utilizando regressão linear dos mínimos quadrados para determinar diferenças nas velocidades iniciais durante a fase de depuração rápida.
Obviamente, são possíveis numerosas modificações e variações da presente invenção à luz dos ensinamentos anteriores. Deve portanto entender-se que dentro do âmbito das reivindicações anexas, a invenção pode ser colocada em prática de outra maneira que não a aqui especificamente descrita.
Lisboa, 2013-10-22

Claims (110)

  1. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 1/16 REIVINDICAÇÕES 1. Composto representado pela fórmula (I):
    (I) em que X é hidrogénio, halogéneo, trifluorometilo, alquilo Ci-C7, fenilo não substituído ou fenilo substituído com halogéneos, alquil Ci-C7-tio, fenil-alquil Ci-C7-tio, alquil Ci-C7-sulfonilo ou fenil-alquil Ci-C7-sulfonilo; Y é hidrogénio, hidroxilo, mercapto, alcoxi C7-C7, alquil Ci-C7-tio, halogéneo, alquilo Ci-C7, fenilo não substituído ou fenilo substituído com halogéneos ou -N(R2)2; R1 é hidrogénio ou alquilo Ci-C7; cada R2 é, independentemente, -R7, - (CH2) m-0R8, - (CH2) m-NR7R10, -(CH2)n(CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -(CH2CH20)m- CH2CH2NR7R10, _ (CH2) n—C (=0) NR7R10, - (CH2) n-Zg-R7, - (CH2) m-NR10- CH2 (CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7 ou R' —(CH2)„ .0.
    -O R3 e R4 são, cada um independentemente, hidrogénio, um grupo representado pela fórmula (A) , alquilo C2-C7, hidroxi-alquilo Ci-C7, fenilo, fenil-alquilo Ci-C7, (halofenil)-alquilo C2-C7, (alquilfenilalquilo)-Ci-C7, (alcoxifenil) -Ci-C7-alquilo C1-C7, naftil-alquilo C1-C7 ou piridil-alquilo C1-C7, com a condição de que pelo menos um de R3 e R4 seja um grupo representado pela fórmula (A): 0=Q . R5 -(C(Rl)2)0— x (C(RL)2)p- \\ Q—
    (A) em que cada RL é, independentemente, -R7, -(CH2)n-OR8, -0- (CH2)m-0R8, -(CH2)n-NR7R10, -0-(CH2)m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -0- (CH2CH20) m-R8, ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 2/16 - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -Ο- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -(CH2)n-C(=0)NR7R10, -0-(CH2)m-C(=0)NR7R10, - (CH2) n-( Z) g-R7, -0-(CH2)m- (Z)g-R7, - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -O-(CH2) m-NR10- CH2(CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -O-(CH2) m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glucose,
    R' .O,
    R7 ; -O cada o é, independentemente, um número inteiro de 0 a 10; cada p é um número inteiro de 0 a 10; com a condição de que a soma de o e p em cada cadeia contígua seja de 1 a 10; cada x é, independentemente, O, NR10, C(=0), CHOH, C(=N-R10), CHNR7R10 ou representa uma ligação simples; em que cada R5 é, independentemente, Ligante-(CH2) n-CAP, -Ligante- (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CAP, Ligante- (CH2CH20) m-CH2-CAP, Ligante-(CH2CH20)m-CH2CH2-CAP, Ligante-(CH2) n-(Z) g-CAP, Ligante-(CH2) n (Z) g- (CH2) m-CAP, Ligante- (CH2) n-NR13-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CAP, Ligante- (CH2) n- (CHOR8) mCH2-NR13- (Z) g-CAP, Ligante- (CH2) nNR13- (CH2) m (CHOR8) nCH2NR13- ( Z) g-CAP, Ligante- (CH2) m- (Z) g- (CH2) m-CAP, Ligante-NH-C (=0) -NH- (CH2)m-CAP, Ligante- (CH2)m-C (=0)NR13- (CH2)m-C (=O)NR10R10, Ligante- (CH2) m-C (=0) NR13- (CH2)m-CAP, Ligante- (CH2) m-C (=0) NR11R11, Ligante- (CH2) n- (Z) g- (CH2) m- (Z) g-CAP, Ligante-Zg- (CH2) m-Het- (CH2) m-CAP; cada Ligante é, independentemente, -O-, -(CH2)n-, -0(CH2)m-, -NR13-C(=0)-NR13-, -NR13-C(=0)-(CH2)m-, -C (=0) NR13- (CH2)m-, — (CH2) n—Zg— (CH2) n, -S-, -S0-, -S02-, -so2nr7-, -so2nr10- ou -Het-; cada CAP é, independentemente, tiazolidinodiona, oxazolidinodiona, heteroaril-C (=0) NR13R13, heteroaril-W, -CN, -0-C(=S)NR13R13, -C (=0) OAr, -C (=0) NR13Ar, imidazolina, tetrazole, tetrazoloamida, -S02NHR13, -S02NH-C (R13R13) - (Z) g-R13, um amino-açúcar ou oligossacárido cíclicos, o NRlJRIJ 'XV1 ou NR CONRIJR13 cada Ar é, independentemente que os substituintes do fenilo, fenilo substituído, em fenilo substituído são 1-3 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 3/16 substituintes seleccionados, independentemente, do grupo que consiste em OH, OCH3, NR13R13, Cl, F e CH3 ou heteroarilo; cada W é, independentemente, tiazolidinodiona, oxazolidinodiona, heteroaril-C (=0) NR13R13, -CN, -0-C (=S) NR13R13, -ZgR13, -CR10 (ZgR13) (ZgR13), -C(=0)0Ar, -C (=0) NR13Ar, imidazolina, tetrazole, tetrazoloamida, -S02NHR13, -S02NH-C (R13R13) - (Z) g-R13, um açúcar ou oligossacárido cíclicos, um amino-açúcar ou oligossacárido cíclicos, u NR13 nrI3r13 , OU XN—CONR^R13 NRU cada R6 é, independentemente, -R7, -0R7, -0R11, -N(R7)2, -(CH2)m-OR8, -0- (CH2) m-0R8, -(CH2)n-NR7R10, -0-(CH2) m-NR7R10, - (CH2)n(CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, -0-(CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20)m-R8, -0-(CH2CH20)m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -0-(CH2)m- C(=0)NR7R10, - (CH2) n- (Z) g-R7, -0- (CH2) m— (Z) g-R7, - (CH2) n-NR10- CH2(CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m-NR10-CH2 (CHOR8) (CH0R8)n- CH2OR8, - (CH2)n-C02R7, -0-(CH2)m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glucose,
    em que quando dois R6 são -0R11 e estão localizados mutuamente adjacentes num anel fenilo, as porções alquilo dos dois R6 podem estar ligadas mutuamente para formar um grupo metilenodioxi; cada R7 é, independentemente, hidrogénio, alquilo Ci-C7, fenilo ou fenilo substituído com halogéneos; cada R8 é, independentemente, hidrogénio, alquilo Ci-C7, -C(=0)-R13, glucuronida, 2-tetra-hidropiranilo ou
    cada R9 é, independentemente, -C02R13, -CON(R13)2, -S02CH2R13 ou -C (=0) R13; ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 4/16 cada R10 é, independentemente, -H, -SO2CH3, -C (=0) NR13R13, -C(=0)R13 ou - (CH2)m-(CHOH) n-CH2OH; cada Z é, independentemente, CHOH, C(=0), -(CH2)n-, - C=NR13 ou NR13; cada R11 é, independentemente, alquilo C1-C7; cada R12 é independentemente, -S02CH3, -C02R13, -C( = -C (-0) R13 ou -CH2-(CHOH) n-CH20H; cada R13 é, independentemente, hidrogénio, R7, R10, NR13R13, - (CH2)m-N+R13R13R13, - (CH2 ) m- (CHOR8 ) m (CH2 ) mNR13R13, NR10R10, - (CH2) m- (CHOR8) m- (CH2) mN+R13R13R13, -co2r13, chnr13r13, O) nr13r13, - ( ch2 ) m- - ( ch2 ) m-
    com a condição de que NR13R13 possa estar unido próprio para formar um anel compreendendo um dos segu sobre si intes: N NR13W/ \ * N N- w ÍCH2WCHOR)V(CH2)nR13 OU ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 5/16 (CH2)m(CHOR)em-(CH2)nR'1 / \ I * \_/ cada Het é independentemente, -NR13-, -S-, -SO- ou -SO2-, -0-, -S02NR13-, -NHSO2-, -NR13C0- ou -CONR13-; cada g é, independentemente, um número inteiro de 1 a 6; cada m é, independentemente, um número inteiro de 1 a 7; cada n é, independentemente, um número inteiro de 0 a 7; cada Q é, independentemente, C-R5, C-R6 ou um átomo de azoto, em que no máximo três Q num anel são átomos de azoto; cada V é, independentemente, - (CH2) m-NR1R10, - (CH2)m-NR1R1, - (CH2) m-N+R11R11R11, - (CH2) n- (CHOR2) m— (CH2) mNR1R10, - (CH2) n-NR10R10, - (CH2) n- (CHOR2) m- (CH2) mNR7R1, - (CH2) n- (CHOR2) m- (CH2) mN+R11R17R71, com a condição de que quando V está ligado directamente a um átomo de azoto, então V possa também ser, independentemente, R1, R10 ou (Rn)2; com a condição de que, quando quaisquer dois grupos -CH2OR2 estão localizados 1,2- ou 1,3- um em relação ao outro, os grupos R2 possam estar unidos para formar um 1,3-dioxano ou 1,3-dioxolano cíclico mono- ou di-substituído; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e inclusive de todos os seus enantiómeros, diastereómeros e misturas racémicas.
  2. 2 . Composto da Reivindicação 1, em que Y é -nh2,
  3. 3. Composto da Reivindicação 2, em que R2 é hidrogénio.
  4. 4. Composto da Reivindicação 3, em que R1 é hidrogénio.
  5. 5. Composto da Reivindicação 4, em que X é cloro.
  6. 6. Composto da Reivindicação 5, em que R3 é hidrogénio. 1 Composto da Reivindicação 6, em que cada RL é 2 hidrogénio.
  7. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 6/16
  8. 8. Composto da Reivindicação 7, em que o é 4.
  9. 9. Composto da Reivindicação 8, em que p é 0.
  10. 10. Composto da Reivindicação 9, em que x representa uma ligação simples.
  11. 11. Composto da Reivindicação 10, em que cada R6 é hidrogénio.
  12. 12. Composto da Reivindicação 11, em que no máximo um Q é um átomo de azoto.
  13. 13. Composto da Reivindicação 12, em que nenhum Q é um átomo de azoto.
  14. 14. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante-(CH2)n-CAP.
  15. 15. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -O- e CAP é tiazolidinodiona.
  16. 16. Composto da Reivindicação 15, que é representado pela fórmula:
  17. 17. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -O- e CAP é tetrazole. 17, que é representado
  18. 18. Composto da Reivindicação pela fórmula:
  19. 19. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -O- e CAP é N,N-dimetilsulfonamida. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 7/16
  20. 20. Composto da Reivindicação 19, que é representado pela fórmula: O NH H2N N NH2
    O II ii 'NMei O
  21. 21. Composto da Reivindicação 19, que é representado pela fórmula:
    O 11 / °X< O NH x αν"ν*·»1Β Η H h2n' qr 'nh2
  22. 22. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -O- e CAP é sulfonamida.
  23. 23. Composto da Reivindicação 22, que é representado pela fórmula: O NH Ck Jl. N N X A H H h2n' 'n nh2 O II h NH, O
  24. 24. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -O- e CAP é oxazolidinodiona.
  25. 25. Composto da Reivindicação 24, que é representado pela fórmula:
  26. 26. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -O- e CAP é -C (=0) N-R10Ar
  27. 27. Composto da Reivindicação 26, que é representado pela fórmula: ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 8/16 ΝΗ, Ο Ν' cYrVs Ο ΝΗ
    «νΛΛ-
  28. 28. Composto da Reivindicação 26, que é representado pela fórmula: O NH Η2Ν N NH2 Ο Ν'' N
  29. 29. Composto da Reivindicação 26, que é representado pela fórmula: NH, 1 O N^N O NH ck ,ν^ X. A
    N N NH2 H H2N"'n' "NH2
  30. 30. Composto da Reivindicação 26, que é representado pela fórmula: NH, O NH Η,Ν N NH·
  31. 31. Composto da Reivindicação 26, que é representado pela fórmula: N=\
  32. 32. Composto da Reivindicação 26, que é representado pela fórmula: ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 9/16
  33. 33. Composto da Reivindicação 26, que é representado pela fórmula: 0 ΙΓΝ--Λ °^hA} 0 ΙΓΝ Λ O O NH CU Λ, Λ. Ix H S h2n n nh2 H •2HCI
  34. 34. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -0- e CAP é imidazole.
  35. 35. Composto da Reivindicação 34, que é representado pela fórmula:
  36. 36. Composto da Reivindicação 14, em que Ligante é -0- e CAP é ciano.
  37. 37. Composto da Reivindicação 36, que é representado pela fórmula: 0 NH CU N^ 'NH2
  38. 38. Composto da Reivindicação 14, em que o CAP é -SCçNH- CR7R10-Z„-R7,
  39. 39. Composto da Reivindicação 38 que é representado pela fórmula:
    NHj ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 10/16
  40. 40. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) n(CH0R8) (CH0R: 3)n-CAP.
  41. 41. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2CH20) m-CH2-CAP .
  42. 42. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2CH20)m-CH2CH2-CAP.
  43. 43. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) n-(Z)g-CAP.
  44. 44. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) n(Z)g-(CH2)m-CAP.
  45. 45. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8)n-CAP.
  46. 46. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) n- (CHOR8) mCH2- NR10- -(Z)g-CAP.
  47. 47. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) nNR10- (CH2) m (CHOR8) i nCH2NR10- (Z) g-CAP.
  48. 48. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) m- (Z)g- (CH2)m- CAP.
  49. 49. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante-NH C (=0 )-NH- (CH2 )m-CAP.
  50. 50. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) m-C(=O)NR10-(CH2)m -C (=0) NR10R10.
  51. 51. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) m_C (=0) NR10- (CH2) m -CAP.
  52. 52. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) m-C (=0) NR11R11
  53. • 53. Composto da Reivindicação 13, em que R5 é Ligante (CH2) n-(Z)g-(CH2)m- (Z)g -CAP. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 11/16
  54. 54. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) n-CAP.
  55. 55. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) n(CH0R8) (CH0R: 3)n-CAP.
  56. 56. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2CH20)m-CH2-CAP.
  57. 57. Composto da Reivindicação 1, em que R3 é Ligante (CH2CH20) m-CH2CH2-CAP.
  58. 58. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) n-(Z)g-CAP.
  59. 59. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) n(Z)g-(CH2)m-CAP.
  60. 60. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CAP.
  61. 61. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) n- (CHOR8) mCH2- NR10- -(Z)g-CAP.
  62. 62. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) nNR10- (CH2) m (CHOR8) i nCH2NR10- (Z) g-CAP.
  63. 63. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) m-(Z)g-(CH2)m- CAP.
  64. 64. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante-NH C (=0 )-NH- (CH2)m-CAP.
  65. 65. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) m-C(=O)NR10-(CH2)m -C (=0) NR10R10.
  66. 66. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) m-C(=O)NR10-(CH2)m -CAP.
  67. 67. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante (CH2) m-C (=0) NR11R11 ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 12/16
  68. 68. Composto da Reivindicação 1, em que R5 é Ligante-(CH2) n- ( Z) g- (CH2) m- ( Z ) g-CAP .
  69. 69. Composto da Reivindicação 1, em que x é uma ligação simples.
  70. 70. Composto da Reivindicação 1, em que o heteroarilo é um piridilo, pirazilo, tinazilo, furilo, furfurilo, tienilo, tetrazilo, tiazolidinodionilo e imidazoilo, pirrolilo, furanilo, tiofenilo, quinolilo, indolilo, adenilo, pirazolilo, tiazolilo, isoxazolilo, indolilo, benzimidazolilo, purinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, piridazilo, pirimidilo, pirazilo, 1,2,3-triazilo, 1,2,4-triazilo, 1,3,5-triazilo, cinolilo, ftalazilo, quinazolilo, quinoxalilo ou pterdilo.
  71. 71. Composto da Reivindicação 1, em que a soma de o e p é 2 a 6.
  72. 72. Composto da Reivindicação 1, que está na forma de um sal farmaceuticamente aceitável.
  73. 73. Composição, compreendendo: o composto da Reivindicação 1; e um agonista do receptor P2Y2.
  74. 74. Composição, compreendendo: o composto da Reivindicação 1; e um broncodilatador.
  75. 75. Composição farmacêutica, compreendendo o composto da Reivindicação 1 e um transportador farmaceuticamente aceitável.
  76. 76. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração numa superfície mucosa de um indivíduo, para utilização na promoção da hidratação de superfícies mucosas.
  77. 77. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração numa superfície mucosa de um indivíduo disso necessitado, para utilização no restabelecimento da defensa mucosa. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 13/16
  78. 78. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de bronquite crónica.
  79. 79. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de fibrose quística.
  80. 80. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de sinusite.
  81. 81. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração no tracto vaginal de um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de secura vaginal.
  82. 82. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração no olho de um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de olho seco.
  83. 83. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração no olho de um indivíduo, para utilização na promoção de hidratação ocular.
  84. 84. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração no olho de um indivíduo, para utilização na promoção de hidratação corneai.
  85. 85. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração numa superfície mucosa de um indivíduo, para utilização na promoção de depuração do muco em superfícies mucosas.
  86. 86. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de doença de Sjõgren.
  87. 87. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de síndrome de obstrução intestinal distai. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 14/16
  88. 88. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração na pele de um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de pele seca.
  89. 89. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de esofagite.
  90. 90. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração na boca de um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de boca seca (xerostomia).
  91. 91. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração nas passagens nasais de um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de desidratação nasal.
  92. 92. Composto para utilização de acordo com a Reivindicação 91, em que a desidratação nasal é devida a administração de oxigénio seco ao indivíduo
  93. 93. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo num ventilador, para utilização na prevenção de pneumonia induzida pelo ventilador.
  94. 94. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de asma.
  95. 95. Composto da Reivindicação 1 destinado a administraçao a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de discinesia ciliar primária.
  96. 96. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de otite média.
  97. 97. Composto da Reivindicação 1 destinado a administraçao a um indivíduo disso necessitado, para utilização na indução de expectoração para fins de diagnóstico. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 15/16
  98. 98. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de doença pulmonar obstrutiva crónica.
  99. 99. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de enfisema.
  100. 100. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de pneumonia.
  101. 101. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de obstipação.
  102. 102. Composto para utilização de acordo com a Reivindicação 101, em que a composição é uma composição oral, um supositório ou um enema.
  103. 103. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de diverticulite crónica.
  104. 104. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de rinossinusite.
  105. 105. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de hipertensão.
  106. 106. Composto da Reivindicação 1 para a preparação de uma composição farmacêutica destinada a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização na redução da pressão sanguínea.
  107. 107. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização no tratamento de edema. ΕΡ 1 663 235/ΡΤ 16/16
  108. 108. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização na promoção de diurese.
  109. 109. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização na promoção de natriurese.
  110. 110. Composto da Reivindicação 1 destinado a administração a um indivíduo disso necessitado, para utilização na promoção de salurese. Lisboa, 2013-10-22
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