PT1631557E - «hidroxilamina ciclicas como compostos psicoactivos» - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "HIDROXILAMINA CÍCLICAS COMO COMPOSTOS PSICOACTIVOS"

Esta invenção refere-se a compostos psicoactivos apropriados para o tratamento da ansiedade e da depressão. Esta invenção refere-se, em particular, a novos compostos da hidroxilamina, tais como os derivados de anel-aberto de compostos do isoxazol e seus análogos, sua preparação, formulação farmacêutica destes e uso na medicina. Vários compostos psicoactivos são conhecidos para o uso no tratamento da ansiedade e da depressão. 0 diazepam (uma benzodiazepina) é bem conhecido, e extensamente usada como um ansiolitico e antidepressivo. Outros compostos psicoactivos conhecidos incluem determinados benzo[d] isoxazol com fusão tricíclica, com a estrutura apresentada abaixo na fórmula (A) , como divulgado na especificação da patente norte-americana n°. 5 707 988 (Boyd et al./British Technology Group Ltd.):

em que X' é O, S, C=0 ou NR' em que R' é hidrogénio, alquilo Ci-6, fenilo ou fenalquilo C7-12, 0 Ri' e R2' representa cada um hidrogénio ou representam juntos um grupo oxo e R3', R4' e R5' representa cada um hidrogénio ou Ri' representa hidrogénio e dois de R2', R3', R4' e R5' representam em conjunto a segunda ligação de uma ligação dupla que junta as posições 7 e 8, 8 e 9 ou 9 e 10 com o 2 dois restantes IV, IV, IV e R5' que representam o hidrogénio, ou um sal do mesmo.

Descobriu-se que, embora os compostos da fórmula (A) demonstrassem uma boa eficácia como agentes ansioliticos, a sua eficácia no tratamento da depressão fica aquém do ideal. Consequentemente, existe a necessidade de novos compostos que sejam eficazes no tratamento da ansiedade e da depressão, em particular, para o tratamento das patologias em que ambas as circunstâncias ocorrem. A presente invenção vai de encontro a essa necessidade.

Os compostos seguintes são conhecidos como intermediários sintéticos:

2-fenilpiperidina-l-ol [P5] 2-benzilpiperidina-l-ol [P6] 2-Fenilpiperidina-l-ol é mencionada nos seguintes trabalhos: • "Regiochemistry of mercury(n) oxide oxidation of unsymmetrical N,N-disubstituted hydroxylamines". Tetrahedron (1996), 52(47), 14917-28 (Ali et al.); • "Reaction of pyridine and quinoline N-oxides with phenylmagnesium bromide." Y. Org. Chem. (1965), 30(3), 910-13 (Kato et al.); • "Cyclic nitrones (I): dimeric 2,3,4,5- tetrahydropyridine N-oxides." Chem. Ber., vol. 89, 2159-67 (1956) (Thesing et al.). 3 2-benzilpiperidina-l-ol é mencionada nos seguintes trabalhos: • "Synthesis and cycloaddition of β-substituted 3,4,5,6-tetrahydropyridine 1-oxides." J. Chem. Res., Synop. (1994), (2), 54-5 (Ali et al.); • "Mercury(II) oxide oxidation of 2-substituted N- hydroxypiperidine: a solution to the regiochemical problem." Tet. Lett. (1993), 34(33), 5325-6 (Ali et al.) . Não existe, no entanto, nenhuma divulgação dos compostos para o uso farmacêutico.

Em conformidade, a presente invenção fornece num primeiro aspecto um composto da fórmula (I): R\/xn/r4

0) em que X representa 0 ou CH2; cada R3 e R4 independentemente representam hidrogénio ou Ci_6 alquilo; p representa 0 ou 1; e R representa um anel insaturado ou saturado, com cinco ou seis membros seleccionados de: ou

4 R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de: 4

em que R1 e o R2 juntos representam um grupo oxo, ou cada R1 e R2 representam hidrogénio, metoxilo ou etoxilo, ou R1 e R2 juntos com o átomo de carbono inter jacente representam um anel 1,3- dioxolano ou um anel 1,3- dioxano, ligado pela posição 2 e possuindo opcionalmente um ou mais grupos de metilo ou etilo; ou um tautómero do mesmo; ou um sal do mesmo; para utilização como produto farmacêutico.

No caso em que o R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de:

em que R1 e R2 juntos representam um grupo oxo, ou um acetal do mesmo, em que cada R1 e R2 representam metoxilo ou etoxilo, ou R1 e R2 juntos, com o átomo de carbono interjacente, representam um anel 1,3- dioxolano ou um anel 1,3- dioxano, ligado pela posição 2 e possuindo opcionalmente, um ou mais grupos de metilo ou etilo, então, de preferência, p representa 0. Preferencialmente, a invenção abrange compostos da fórmula (IA), (IB), (IC) (ID) , (IE) e (IF) : 5

(IC) I OH (IP)

(ff) (IH) : bem como as cetonas da formula (IG) e

(E)

e acetais das cetonas da formula (IG) ou (IH) com metanol ou etanol; ou com etano-1,2-diol ou propano-1,2-diol, opcionalmente, possuindo um ou mais grupos de metilo ou etilo. em que R1 e R2 juntos com o átomo de carbono interjacente representam um anel 1,3- dioxolano ou um anel 1,3- dioxano, carregando um ou mais grupos de metilo ou etilo, preferencialmente, um grupo metilo ou etilo é 6 posicionado adjacente a cada átomo de oxigénio no anel 1,3-dioxolano ou no anel 1,3- dioxano. Preferencialmente, estes devem estar numa orientação trans, dando um composto tal como:

Estes compostos podem ser hidrolisados in vivo para produzir o composto correspondente da fórmula (I), em que R1 e R2 juntos representam um grupo oxo. Os compostos que têm o anel 3-dioxolano ou 1,3-dioxano representam assim potenciais pró-medicamentos.

Contudo, preferencialmente, o R1 e o R2 juntos representam um grupo oxo.

No caso em que o R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de:

então, X é preferencialmente 0. A sintese é facilitada se o anel heterociclico demonstrar alguma simetria. É assim preferível que o R3 e o R4 sejam idênticos. De preferência, cada R3 e R4 representam hidrogénio. 7

Num segundo aspecto, a presente invenção fornece um composto da fórmula (II):

R

R *

em que cada R3 e R4 independentemente representam hidrogénio ou Ci-6 alquilo; p representa 0 ou 1; e R representa um anel insaturado ou saturado, com cinco ou seis membros seleccionados de:

ou R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de:

A; em que R1 e o R2 juntos representam um grupo oxo, ou cada R1 e R2 representam hidrogénio, metoxilo ou etoxilo, ou R1 e R2 juntos com o átomo de carbono inter jacente representam um anel 1,3- dioxolano ou um anel 1,3- dioxano, ligado pela posição 2 e possuindo opcionalmente um ou mais grupos de metilo ou etilo; ou um tautómero do mesmo; ou um sal do mesmo.

Uma concretização preferida adicional da presente invenção é um composto da fórmula (III) :

m em que R1 e R2 representam cada um hidrogénio ou, juntos, representam um grupo oxo; ou um sal do mesmo.

Nesta especificação, o termo "alquilo" inclui ambos os grupos de cadeia linear e ramificada, tal como grupos saturados e insaturados.

Quando o R1 e o R2 juntos representam um grupo oxo, certos compostos da invenção podem existir como tautómeros onde o grupo N-hidroxilo reagiu com o grupo carbonilo para formar um hemiacetal da fórmula (IV) ou (V):

Assim, os hemiacetais da fórmula (IV) e (V) são incluídos no âmbito da invenção. 9

Como indicado anteriormente, os compostos da invenção podem existir em forma de um sal, preferencialmente, um sal amina. Tais sais podem ser formados com um ácido inorgânico ou orgânico fisiologicamente aceitável. Os ácidos fisiologicamente aceitáveis incluem o ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, isetiónico, acético, fumárico, maleico, salicílico, p-toluenossulfónico, tartárico, cítrico, lactobiónico, fórmico, malónico, pantoténico, succínico, naftaleno-2-sulfónico, benzenossulfónico, metanossulfónico e etanossulfónico. 0 ácido clorídrico é preferido. No entanto, geralmente prefere-se usar uma base livre em vez do sal.

Os compostos da invenção possuem um centro quiral (indicado por *) no átomo de carbono adjacente do azoto do grupo de N-OH. Apreciar-se-á que os compostos da invenção podem ser resolvidos nas suas formas enantioméricas, ou existe como racemato. Dependendo da natureza dos substituintes, é também possível vários diastereoisómeros. No caso em que p representa 0 e R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de: p1 r*2

os compostos da invenção podem ser preparados pela reacção de um composto da fórmula (VI) ou (VIA) com um composto da fórmula (VII): 10

em que R1, R2 e X são tal como definidos relativamente à fórmula (I) . Apreciar-se-á que este será mais directo quando R1 e R2 juntos representam um grupo de oxo, ja que o composto de ligação dupla da fórmula (VI) ou (VIA) sera então activado pela presença do grupo carbonilo. Outros grupos de atracção de electrões facilitariam também a reacção. A reacção é realizada preferencialmente, combinando os compostos das fórmulas (VI) ou (VIA) e (VII) a uma temperatura numa escala desde a temperatura ambiente até 100°C, seguindo-se o aquecimento da mistura da reacção para uma temperatura numa escala desde 50 a 150 °C, preferencialmente, de 55 a 65 °C por diversas horas, num solvente apropriado. A pressão ambiente pode ser usada, mas a reacção é realizada de preferência a uma pressão ultra-alta num tubo selado. O composto da fórmula (VI) ou (VIA) pode ele próprio ser um solvente apropriado para a reacção; por exemplo, no caso em que R1 e R2 juntos representam um grupo de oxo, a 2 ciclohexenona e 2 ciclopentenona resultantes estão ambos prontamente disponíveis. O composto da fórmula (I) é assim produzido através da formação de um intermediário tricíclico da fórmula (VIII) ou (VIIIA):

11 que pode ser isolado ou deixado ficar in situ. A protonação do intermediário (VIII) ou (VIIIA), ou a uma reacção correspondente catalisada por base, conduz à formação do composto (I). A abertura do anel aparece presumivelmente por uma eliminação Elcb ("cb" que designa "base conjugada") , ou a reacção catalisada por ácido correspondente, preferencialmente a uma temperatura elevada. 0 composto da fórmula (VII) é preferencialmente formado in situ a partir de um composto da fórmula (IX):

N (IX)

H através da oxidação, preferencialmente uma oxidação catalisada por pertungstato. A nitrona (VII) tem tendência para polimerizar e, se necessitar de ser isolada, deve ser feito um exame para evitar a polimerização por armazenamento num frigorifico.

Nenhum dos compostos da invenção pode portanto ser preparados pela reacção de um reagente de Grignard da fórmula R (CH2)PMgHal com um composto da fórmula (VII) :

em que o Hal representa haleto e o R, R1, R2 e X são tal como definidos no que se refere à fórmula (I). Descobrimos que os reagentes de Grignard preparados usando um anião de cloreto são perfeitamente satisfatórios. 12 A reacção é preferencialmente realizada combinando o reagente de Grignard da fórmula R (CH2)pMgHal com o composto da fórmula (VII) a uma temperatura de -10 °C, e depois, mantendo a mistura da reacção a uma temperatura de 0 °C num solvente apropriado. O tetra-hidrofurano é um solvente apropriado para a reacção.

Apreciar-se-á que os compostos da fórmula (I) podem também ser preparados por modificações destes processos e por outros processos alternativos, evidentes para um especialista na técnica quimica.

Descobriu-se que os compostos da invenção são eficazes no tratamento da ansiedade e da depressão. São particularmente úteis para o tratamento da ansiogénese causada pela retirada das benzodiazepinas (porque exibem uma tolerância transversal com estas benzodiazepinas em comparação por exemplo, com o buspirona, que não o faz). Os compostos são também para usar no tratamento da ansiogénese causada pela cessação abrupta da administração drogas de abuso, tais como a nicotina, o álcool e a cocaína. O nível da dosagem dos compostos da fórmula (I) requeridos para alcançar uma actividade ansiolítica ou anti-depressiva eficaz pode variar consoante o mamífero tratado e dependerá de factores como o peso corporal, sua área de superfície, idade e estado de saúde geral do mesmo. Dependerá também da modalidade de administração. Os níveis de dosagem de 0.01 mg/kg a 100 mg/kg, particularmente de 1 mg/kg a 10 mg/kg, são apropriados. Conforme a natureza e a gravidade do estado em tratamento, as dosagens podem ser repetidas até 2 ou 3 vezes por dia, durante o período do 13 tratamento. Caso seja apropriado, podem ser administradas doses fora destes limites.

Os compostos da fórmula (I) podem ser administrados por vias oral, rectal, parentérica, subcutânea ou tópica.

Os compostos da fórmula (I) podem ser administrados sozinhos ou em conjunto com um veiculo farmacêutico aceitável, tal como um excipiente ou um diluente.

Consequentemente, a invenção fornece ainda uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula (I) associado a um veiculo farmaceuticamente aceitável. A composição pode ainda compreender mais agente(s) ou ingrediente(s) terapêutico(s) adicionais.

Os compostos e as composições da invenção podem convenientemente ser apresentados como forma de dosagem unitária, preparada com as técnicas bem conhecidas dos especialistas na técnica. Geralmente, a preparação de uma forma de dosagem unitária inclui a etapa associar um ou mais compostos com actividade terapêutica ao veiculo. 0(s) composto (s) activo(s) ou e/ou o(s) ingrediente (s) do veiculo devem estar, preferencialmente, na forma de um sólido finamente dividido ou de um liquido.

As composições apropriadas para a administração oral incluem unidades discretas, tais como comprimidos, cápsulas, ovais, comprimidos efervescentes ou losangos, cada uma contendo uma quantidade pré determinada do composto terapêutico. As soluções e as suspensões do composto terapêutico num liquido aquoso ou não aquoso são também apropriadas para a administração oral e incluem 14 xaropes, elixires e emulsões. 0 composto pode também ser apresentado como um bolus, um electuário ou pasta. A administração do composto pela via parentérica inclui a administração intravenosa, intraperitoneal, intramuscular e intra-articular. As composições apropriadas para a administração parentérica devem convenientemente incluir uma preparação aquosa estéril do composto activo, apropriada para a injecção ou para a perfusão.

As composições apropriadas para a administração tópica incluem loções, cremes e pastas. As composições da invenção podem também ser apresentadas na forma de um aerossol ou de um supositório.

Em conformidade, a presente invenção fornece também um método para prevenir ou aliviar os sintomas da ansiedade e/ou da depressão, método esse que compreende a administração, a um paciente que tenha a necessidade desse tratamento, particularmente um animal de sangue quente como um ser humano, de uma quantidade não tóxica, terapeuticamente eficaz, de um composto de um composto da fórmula (I) , ou de um sal do mesmo, ou uma composição que contenha esse composto. A invenção inclui também um composto da fórmula (I) para usar como medicamento, e o uso de um composto da fórmula (I), ou de um sal do mesmo, no fabrico de um medicamento para o tratamento da ansiedade e da depressão, particularmente para o tratamento da ansiogénese causada pela retirada das benzodiazepinas, ou causada pela cessação abrupta da administração de drogas de abuso, tais como a nicotina, o álcool e a cocaína. 15 A invenção será agora descrita fazendo referência aos seguintes exemplos.

EXEMPLOS

Exemplo 1 - Preparação de 2-(4-hidroxi-3-morfolinil)-2-ciclo-hexenona

Morfolina (10.97 g; 0.126 M) e tungstato de sódio hidratado (1.54 g; 4.67 mM) foram arrefecidos a 0 °C num balão de 250 ml. O peróxido de hidrogénio (32.5 ml (30%.aq); 0.286 mM) foram adicionados lentamente, mantendo a temperatura da reacção a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada durante mais 1,5 h e o excesso do peróxido do hidrogénio foi destruído, usando bissulfato de sódio. As 2-ciclohexenonas (12.1 ml; 0.12 5M) foram adicionadas lentamente ao balão, e a mistura de reacção foi agitada durante mais 48 horas. A mistura de reacção foi aquecida a 55 °C por 2 horas e depois a 65 °C por mais 2 horas adicionais. A mistura de reacção foi então vertida em cloreto de sódio aquoso e foi extraida com diclorometano (3 x 100 ml). A camada orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, separada e seca sobre sulfato de magnésio. A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, separada e seca sobre o magnésio. A remoção do solvente resultou num fino óleo castanho, que foi sujeite à destilação Kugelrohr entre 50 a 60°C sob vácuo, produzindo um óleo escuro (3.5 g; 14%) . O composto foi purificado por cromatografia numa coluna de silicone usando diclorometano (CH2C12): 16 acetonitrilo (CH3CN) eluente (5:1; 0.27). v max (cm-1) = 3435 (OH); 2958, 2941, 2916, 2901, 2874 (CH); 2777w; 1699s (C=0); 1476; 1101. Espectometria de massa: calculado =198.1130 (MH+); encontrado = 198.1130.

Exemplo 2 - Preparação dos 3-fenilmorfolino-4-ol

O Mn02 activado (0,65 g, 7,41 mmol) foi adicionado a uma solução de N-hidroximorfolina (0,25 g, 2,47 mmol) em diclorometano (15 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora. A mistura de reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite™ e da Na2S04. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto do fenilmagnésio (2.0 M no tetra-hidrofurano, 2.47 ml, 4.94 mmol) - a 10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C durante 0.5 horas e depois foi adicionada solução aquosa do cloreto de amónio saturada (15 ml) e o diclorometano (15 ml) . A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (2 x 20 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em Si02 eluída com 25% de éter dietílico nos hexanos para dar o composto do titulo (0,045 g, 11 %) sob a forma de um sólido cristalino branco.

Vmax (Nujol™ mull)/cm_1 3201 (br., O-H) , 1104 (s, C-O) . ÕH (300 MHz) : 7.22 (m, 5H) , 3.85 (d, 1 H, J= 10.5 Hz), 3.72-3.50 (m, 3H), 3.31 (t, 1 H, J=10.5 Hz), 3.12 (d, 1 H, J=10.5 Hz), 2.81 (td, 1 H, Jl = 11.2 Hz, J2 = 3.4 Hz). 17 5C (75.5 MHz): 138.1 (0), 128.6 (1), 127.9 (1), 72.45 (2), 72.16 (1), 66.78 (2), 57.67 (2) . HRMS (modo electrospray) = m/z =180.1026710 (MH+) (calc. 180.1019051) .

Exemplo 3 - Preparação dos 3-benzilmorfolin-4-ol [P2]

[P2] O Mn02 activado (1,29 g, 14,8 mmol) foi adicionado a uma solução de N-hidroximorfolina (0,50 g, 4,95 mmol) em diclorometano (25 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora. A mistura de reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite™ e da Na2S04. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto de benzilmagnésio (2.0 M em tetra-hidrofurano, 4.95 ml, 9.90 mmol) a -10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C durante 0.5 h e então foi adicionada uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada (25 ml) e diclorometano (25 ml). A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (2 x 30 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em Si02 eluída com 25% de éter dietílico nos hexanos para dar o composto do titulo (0,326 g, 34%) sob a forma de um sólido cristalino branco. vmax(Nujol™ mullj/cm’1 13203 (br., O-H) , 1107 (s, C-O) . 5H (300 MHz): 7.23 (m, 5H), 3.89 (d, 1 H, J = 11.7 Hz), 3.74-3.56 (m, 2H) , 3.44 (d, 1 H, J = 13.0 Hz), 3.23 (m, 2H), 2.87 (m, 2H), 2.39 (t, 1H, J = 10.5 Hz). 18 5C (75.5 MHz): 137.7 (0), 129.2 (1), 128.5 (1), 126.4 (1), 70.22 (2), 67.76 (1), 66.60 (2), 58.60 (2), 35.85 (1). HRMS (modo electrospray) = 194,1186060 (MH+) (calc. 194,1175552) .

Exemplo 4 - Preparação dos 3-ciclohexilmorfolino-4-ol

[P3] O Mn02 activado (1,29 g, 14,8 mmol) foi adicionado a uma solução de N-hidroximorfolina (0,50 g, 4,95 mmol) em diclorometano (25 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora. A mistura de reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite™ e da Na2S04. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto de benzilmagnésio (2.0 M em tetra-hidrofurano, 4.95 ml, 9.90 mmol) a -10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C por 0, h e então foi adicionada uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada (25 ml) e diclorometano (25 ml). A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (2 x 30 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em Si02 eluída com 50% de éter dietílico nos hexanos para dar o composto do titulo (0,220 g, 24%) sob a forma de um sólido cristalino branco.

Vmax(Nujol™ mullj/crrf1 3203 (br., O-H) , 1107 (s, C-O) . 5H (300 MHz): 3.84 (m, 1 H) , 3.55 (t, 1 H, J = 11.3 Hz), 3.17 (d, 1 H, J = 10.5 Hz), 2.79 (t, 1 H, J = 10.5 19

Hz), 2.46 (d, 1 H, J = 9.8 Hz), 2.06-1.45 (m, 6H), 1.35-0.82 (m, 6H) . 5C (75.5 MHz) : 70.83 (1), 67.42 (2), 66.29 (2), 58.84 (2), 36.71 (1), 30.14 (2), 27.64 (2), 26.96 (2), 26.75 (2). HRMS (modo electrospray) = 186,1496690 (MH+) (calc. 186,1488553) .

Exemplo 5 - Preparação dos 3-ciclopentilmorfolino-4-ol

[P4] O Mn02 activado (1,29 g, 14,8 mmol) foi adicionado a uma solução de N-hidroximorfolina (0,50 g, 4,95 mmol) em diclorometano (25 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora. A mistura de reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite™ e Na2S04. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto de ciclopentilmagnésio (2.0 M em éter dietilico, 4.95 ml, 9.90 mmol) a -10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C por 0.5 h e depois foi adicionada uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada (25 ml) e diclorometano (25 ml) . A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (2 x 30 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em SÍO2 eluída com 70% de éter dietilico nos hexanos para dar o composto do titulo (0,246 g, 29%) sob a forma de um sólido cristalino branco.

Vmax (Nuj ol™ mull)/cm 1 3233 (br., O-H) , 1118 (s, C-O) . 20 δΗ (300 ΜΗζ): 3.90 (t, 2Η, J= 9.9 Hz), 3.55 (t, 1 H, J= 10.7 Hz), 3.30 (t, 1 H, J= 10.3 Hz), 3.15 (d, 1 H, J = 11.1 Hz), 2.80 (t, 1 H, J = 10.4 Hz), 2.57 (m, 1 H), 2.19 (m, 1 H) , 1.89 (m, 1 H), 1.73-1.02 (m, 7H) 5C (75.5 MHz) : 69.31 (1), 67.91 (2), 65.65 (2), 57.83 (2), 39.91 (1), 30.80 (2), 28.19 (2), 24.89 (2). HRMS (modo electrospray) = 172,1327720 (MH+) (calc. 172,1332052).

Exemplo 6 - Preparação dos 2-fenilpiperidin-l-ol

O Mn02 activado (1.29 g, 14.8 mmol) foi adicionado a uma solução de N- hidroxipiperidina (0.50 g, 4.95 mmol) em diclorometano (25 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora.. A mistura de reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite™ e da Na2S04. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto de fenilmagnésio (2.0 M em tetra-hidrofurano, 4,95 ml, 9,90 mmol) a -10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C por 0,5 h horas e depois foi adicionada uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada (25 ml) e diclorometano (25 ml). A fase aquosa foi separada e extraida com diclorometano (2 x 30 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em S1O2 eluida com 30% de éter dietilico nos hexanos para dar o composto do titulo (0,330 g, 38%) sob a forma de um sólido cristalino branco. 21 vmax(Nujol™ mullj/cm 1 3204 (br., O-H) . δΗ (300 MHz): 7.30 (m, 5H), 3.34 (m, 2H), 2.59 (t, 1H, J = 11.0 Hz), 1.87-1.50 (m, 3H) , 1.36 (m, 1H) . 5C (75.5 MHz): 143.4 (0), 128.4 (1), 127.4 (1), 127.1 (1), 73.51 (1), 58.94 (2), 35.21 (2), 25.83 (2), 24.07 (2). HRMS (modo electrospray) = 178,1223660 (MH+) (calc. 178,1226406) .

Exemplo 7 - Preparação dos 2-benzilpiperidin-l-ol

[P6] O Mn02 activado (1.29 g, 14.8 mmol) foi adicionado a uma solução de N- hidroxipiperidina (0.50 g, 4.95 mmol) em diclorometano (25 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora.. A mistura de reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite™ e da Na2S04. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto de benzilmagnésio (2.0 M em tetra-hidrofurano, 4.95 ml, 9.90 mmol) a -10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C durante 0,5 h e depois foi adicionada uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada (25 ml) e diclorometano (25 ml). A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (2 x 30 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em SÍO2 eluída com 60% de éter dietílico nos hexanos para dar o composto do título (0,309 g, 33%) sob a forma de um sólido cristalino branco. vmax(Nujol™ mull)/cm1 3212 (br., O-H). 22 δΗ (300 ΜΗζ): 7.24 (m, 5Η), 3.65 (d, 1 Η, J = 10.5 Ηζ), 3.40 (d, 1 Η, J = 10.4 Ηζ), 2.66-2.48 (m, 2Η), 2.40 (t, 1 Η, J= 11.2 Ηζ), 1.79-1.48 (m, 4Η), 1.26-1.00 (m, 2Η). 5C (75.5 ΜΗζ): 139.3 (0), 129.6 (1), 128.2 (1), 126.0 (1), 69.28 (1), 59.78 (2), 39.95 (2), 30.62 (2), 25.92 (2), 23.53 (2). HRMS (modo electrospray) = 192,1377940 (ΜΗ+) (calc. 192,1382906) .

Exemplo 8 - Preparação dos 2-ciclohexilpiperidin-l-ol

O MnC>2 activado (1.29 g, 14.8 mmol) foi adicionado a uma solução de N- hidroxipiperidina (0.50 g, 4.95 mmol) em diclorometano (25 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora. A mistura de reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite™ e da Na2S04. O filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto de ciclo-hexilmagnésio (2.0 M em éter dietilico, 4.95 ml, 9.90 mmol) a -10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C por 0,5 h e depois foi adicionada uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada (25 ml) e diclorometano (25 ml) . A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (2 x 30 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em SÍO2 eluída com 40% de éter dietilico nos hexanos para dar o composto do titulo (0,241 g, 27%) sob a forma de um sólido cristalino branco. vmax(Nujol™ mullj/cm1 3195 (br., O-H) . 23 δΗ (300 ΜΗζ): 3.32 (d, 1 Η, J= 10.9 Hz), 2.49 (t, 1 Η, J= 11.7 Hz), 2.16 (d, 1 H, J = 10.4 Hz), 2.04 (t, 1 H, J = 12.2 Hz), 1.84-0.90 (m, 16H). 5C (75.5 MHz): 72.55 (1), 60.27 (2), 38.03 (1), 30.36 (2), 27.07 (2), 26.97 (2), 26.69 (2), 25.73 (2), 23.92 (2). HRMS (modo electrospray) = 184,1690950 (MH+) (calc. 184,1695908).

Exemplo 9 - 2,6-dimetil-3-fenilmorfolino-4-ol

9.1. Preparação de l-hidroxil-2,6-dimetilmorfolino O 2,6-Dimetilmorfolino (26.74 ml, 0.22 mmol) foi arrefecido a 0 °C o qual foi agitado, após a adição de gotas de peróxido de hidrogénio (32.2 ml, 27.5%, 0.26 mmol). A solução foi armazenada durante seis horas a 0 °C (perigo de reacção exotérmica). O produto foi extraído para o éter e a fase orgânica foi seca separadamente (sulfato de magnésio) e concentrada. Cromatografia em gel de sílica usando éter de petróleo (7:3) como eluente deu o produto (17%) como uma mistura de diastereoisómeros sin e anti, a qual foi usada imediatamente na preparação da nitrona. 9.2. Preparação de 2,6-dimetilo-3-fenilmorfolin-4-ol O Mn02 activado (0.50 g, 1.91 mmol) foi adicionado a uma solução de l-hidroxil--2,6-dimetilmorfolina (0.25 g, 5.72 mmol) em diclorometano (15 ml) a 0 °C e a mistura foi agitada durante uma hora. A mistura de reacção foi filtrada 24 através de um chumaço de Celite™ e da Na2S04. 0 filtrado foi adicionado gota a gota a uma solução de cloreto de fenilmagnésio (2.0 M em tetra-hidrofurano, 1,91 ml, 3,82 mmol) a -10 °C. A mistura de reacção foi agitada a 0 °C por 0.5 h horas e depois foi adicionada uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada (15 ml) e diclorometano (15 ml). A fase aquosa foi separada e extraida com diclorometano (2 x 20 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SC>4) e concentradas sob uma pressão reduzida. O produto em bruto foi sujeito a cromatografia relâmpago em SÍO2 eluida com 60% de éter dietilico nos hexanos para dar o composto do titulo (0,11 g, 28%) sob a forma de um sólido cristalino branco. vmax(Nujol™ mull)/cm_1 3325 (br., O-H) . 5H (300 MHz) : 7.59 (m, 2H) , 7.36 (m, 3H) , 4.22 (s, 1 H) , 4.00 (m, 2H), 2.86 (m, 2H) , 1.31 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.12 (d, 3H, J = 6.6 Hz). 5C (75.5 MHz): 5C (75.5 MHz): 132.2 (1), 127.9 (1), 127.8 (1), 70.72 (1), 69.92 (1), 56.57 (2), 19.05 (3), 18.36 (3). HRMS (modo electrospray) = 208,1332052 (MH+) (calc. 208,1329280).

Exemplo 10 - Actividade Ansiolitica - Teste da caixa branca e preta O efeito ansiolitico do composto do Exemplo 1 (Abio 09/01) foi comparado com o do medicamento ansioliticos comercializado, diazepam e do composto correspondente da fórmula (A), nomeadamente cis-1,2,3,4,5,6a,7,8, 9,10a, 10b dodeca-1,4-oxazino- [ 3',4':2,3] benzo[d] isoxazol-4-ona (doravante designado como Composto Comparativo A) . Neste modelo de teste, foi investigado o efeito de um estímulo de 25 stress no comportamento exploratório dos ratinhos que receberam um controlo ou uma quantidade terapêutica de um dos compostos indicados no quadro 1.

Quadro 1

Grupo N° de animais Substância Dose 1 10 Veiculo 0 2 10 Diazepam 1,25 mg/kg 3 10 Composto Comparativo A 0,1 mg/kg 4 10 Ex. 1 (Abio 09/01) 0,1 mg/kg A caixa branca e preta compreende uma caixa de plexiglas aberta no topo (45 x 27 x 27 cm de altura) posicionada num banco, 86,5 cm acima do nivel do chão numa sala escura e sossegada. A caixa de teste estava dividida em dois compartimentos (ratio 2:3) por uma divisória (60 cm de altura). Dois quintos (2/5) da caixa foram pintados de preto e iluminados com uma luz vermelha (4 x 15 W; 10 lux); o restante da caixa foi pintado de branco e iluminada com 60 W (400 lux). As luzes vermelhas e brancas foram posicionadas 17 cm acima da caixa. A divisória era preta do lado virado para o compartimento preto e branca do lado virado para o compartimento branco. Os compartimentos estavam ligados através de uma abertura de 7,5 cm x 7,5 cm ao centro do fundo da divisória. O chão do compartimento branco foi dividido em nove campos, e o chão do compartimento preto foi dividido em seis campos. A sala de teste foi separada em duas partes por uma cortina preta. 0 tratamento com o medicamento te lugar numa parte da sala, usando uma luz vermelha ténue; a outra parte da sala, sem luzes, continha o sistema de teste. 26

Neste sistema de teste, os animais normais mostram uma preferência pela exploração, medida através de um comportamento de elevação, cruzamento de linha e o tempo gasto na secção preta como consequência das propriedades aversivas da área branca com iluminação brilhante. A acção caracteristica dos agentes ansioliticos da série das benzodiazepinas consiste em desinibir o comportamento suprimido, causando uma redistribuição da actividade exploratória na secção branca. Os testes da caixa preta e branca foram validados nos ratinhos, que são a espécie mais apropriadas para este procedimento (Costall et al., Pharm. Bioch. & Behaviour, 32, 777-785 (1989)).

Ratinhos albinos machos Naive BKW de 30 a 35 g foram usados em todos os estudos. 10 ratinhos foram normalmente abrigados em cada gaiola e mantidos, no mínimo, durante duas semanas, sob ciclos de 12 horas de luz/escuridão onde as luzes eram desligadas às 07.00 horas. Os testes comportamentais foram conduzidos entre as 13:00 e as 18:00 h numa sala escura iluminada com uma luz vermelha. Os ratinhos foram retirados da sala de espera escura para a sala de teste num transporte fechado e foram deixados adaptar-se pelo menos durante uma hora ao novo ambiente. Cada animal recebeu um controlo ou um agente activo intraperitonalmente 40 minutos antes do teste. No início do teste, os ratinhos foram colocados na secção branca da caixa, virados para a parede oposta à divisória, e o seu comportamento foi gravado por vídeo remoto durante um período experimental de 5 minutos.

Os resultados são apresentados no quadro 2, em baixo, onde: TB = tempo dispendido na secção branca; FI = Potência inicial; PT = Total de passagens pela divisória; Atot = 27

Actividade exploratória total; Ctot = Número total de passagens Rtot = número total de elevações; RB/TB = elevações no compartimento branco/tempo no compartimento branco; CB/TB = Cruzamentos no compartimento branco/tempo no compartimento branco; RN/TN = elevações no compartimento preto/tempo no compartimento preto; CN/TN = Cruzamentos no compartimento preto/tempo no compartimento preto.

Quadro 2

Diazepam 1,25 mg/kg Ex,1 (Abio 09/01) 0,1 mg/kg Composto Comparativo A 0,1 mg/kg TB +33,2 +53,4 +52,1 FI +12,7 +11,5 +8,1 PT +1,5 +0,9 +4,1 Atot +46,7 +10,4 +53,7 Ctot +30,7 +7,5 +19,1 Rtot +21,2 +5 +23,9 RB/TB +0,06 +0,02 +0,04 RN/TN +0,09 +0,06 +0,13 CB/TB +0,08 -0,05 +0,01 CN/TN +0,1 0,08 +0,08

Exemplo 11- Actividade Ansiolitica- labirinto em cruz elevado em ratinhos

Um labirinto em cruz é construída em Perspex® e compreende quatro braços (2 abertos, 2 fechados), cada um com 50 cm de comprimento por 9,5 de largura e 40 de altura (apenas os braços fechados) ligados por um quadrado central (9,5 x 9,5). O braço aberto tem um pequeno bordo (3 mm) para ajudar a retenção do rato no braço. O instrumento foi colocado numa sala sob circunstâncias de iluminação fraca. Este modelo é baseado na observação da actividade espontânea dos roedores, colocados num ambiente adverso, 28 produzido pela altura e pelos grandes espaços. Os braços abertos evocam mais medos, e estes resultam numa menor exploração. Os medicamentos ansioliticos aumentam a actividade exploratória e o número das entradas nos braços abertos. Antes do inicio, e durante pelo menos uma hora, foi permitido aos ratos ambientarem-se. Os tratamentos com medicamentos foram dados IP num padrão pseudo-aleatório, cego, 40 minutos antes de testar o seu comportamento, como apropriado. Os ratos foram colocados no quadrado central do labirinto em X, virados para um braço aberto especifico, e o comportamento dos mesmos foi registado pelo vídeo remoto durante um período experimental de 5 minutos. Os parâmetros comportamentais foram subsequentemente avaliados pelos especialistas que reviram a cassete de vídeo e incluíram: as entradas em cada tipo do braço, o tempo dispendido em cada um, elevação, posturas esticadas em expectativa e a mergulhos de cabeça. Os resultados são apresentados no quadro 3, em baixo:

Quadro 3

Em braços abertos Veículo Diazepam Composto Comparativo A 0,125 mg/kg Ex. 1 (Abio 09/01) 0,125 mg/kg % de tempo dispendido 11 ± 4% 25 ± 5% 21 ± 11 % 39 ± 10% No. de entradas 1,8 ± 0,5 4 ± 0,6 3 ± 1,1 5,2 ± 1,4

Exemplo 12 - Actividade Antidepressiva O teste "défice de fuga" que deriva do paradigma clássico do "desamparo aprendido" foi usado, como descrito por Meloni et al. em Pharmacol. Biochem. Behav. 46, 423-6 (1993) e Gambarana et al. in Behav. Pharmacol. 6, 66-73

(1995) and Neuropsychopharmacol. 21, 247-57 (1999). A exposição a um stress inevitável induz a um comportamento 29 hiperactivo, que, após 24 horas, torna os ratos incapazes de reagir aos estímulos nocivos. Os ratos expostos a um stress inevitável fazem com que haja 0 a 5 escapatórias em 30 experiências, enquanto que os ratos naive realizam entre 26-30 escapatórias. Os antidepressívos clássicos previnem a ocorrência do défice de fuga após um tratamento crónico (15 dias).

Os ratos foram tratados intraperitonalmente (IP) por 15 dias, e depois submetidos a um stress inevitável (16 horas após a última dosagem) antes de serem sujeitos ao teste do escape (24 horas após a última dosagem). Os resultados são apresentados no quadro 4, em baixo:

Quadro 4

Tratamento N° de fugas Naive 24,2 ± 0,9 Veículo 1,7 O +1 Composto Comparativo A 3, 5 ± 0,9 Ex. 1 (Abio 09/01) 23,3 ± 1,3

Exemplos 10-12 - conclusões A partir destes resultados pode-se concluir que, embora os efeitos ansiolíticos do composto da presente invenção e composto comparativo da técnica anterior (sendo compostos da mesma classe) sejam os mesmos, o êxito do composto da presente invenção no teste da actividade antidepressiva é significativamente maior do que o do composto da técnica anterior. Nos resultados relatados aqui, o composto da invenção resulta em trazer o comportamento dos animais de volta ao nível dos animais naive (que não tinham sido sujeites a um stress inevitável). 30

Exemplo 13 - Actividade Antidepressiva Testes de desespero e de campos abertos

Os ratos tratados com o composto do exemplo 1 foram comparados aos ratos tratados com um antidepressivo clássico, clomipramina ou controlos no teste do desespero (natação forçada). Os mesmos grupos foram também testados para as mudanças induzidos por reserpina no comportamento em campos abertos. 13.1. Animais

Os ratos machos da estirpe Wistar (comprados a Charles River, Itália) com um peso entre os 220 e 240 g, foram usados durante toda as experiências 1. Pelo menos durante uma semana antes da experiência, os ratos foram abrigados em grupo de quatro numa gaiola com uma temperatura constante do 21 °C, e sob um ciclo de 12 horas de luminosidade/escuridão (luzes acesas entre as 08:00 e as 20:00 h), com alimentação e água disponíveis ad libitum. 13.2. Tratamentos e Medicamentos

Um grupo de animais recebeu um tratamento de cloridrato de clomipramina (50 e 100 mg/kg). Os medicamentos comprados na Sigma (EUA), foram diluidos de fresco em soro fisiológico e injectados intraperitonalmente (IP). Os ratos sujeites ao teste do desespero receberam três injecções 24, 5 e 1 hora antes do teste comportamental. O soro fisiológico (salino) foi injectado IP para controlar os animais. O composto do exemplo 1 (0.2 e 0.5 mg/kg) foi injectado IP num grupo de ratos. Uma injecção aguda IP de cloridrato de clomipramina (50 mg/kg) ou do composto do exemplo 1 (0.2 e 0.5 mg/kg) ou soro fisiológico foi dada nos animais sujeites às mudanças induzidas por reserpina no teste de campo aberto (a injecção foi feita em conjunto com 31 a última administração da reserpina, por exemplo 1 h antes do teste de campo aberto).

Todos os animais foram delicadamente manipulados por tratadores das instalações, evitando todo o stress ambiental ou físico. Os ratos, sujeitos aos medicamentos ou à administração de soro fisiológico, receberam uma injecção de um 1 ml do volume padrão da solução com uma agulha de aço inoxidável de calibre 23, de 31 milímetros de comprimento (para injecções IP) ou de 21 milímetros de comprimento (para injecções SC) . Os animais foram distribuídos aleatoriamente a qualquer dos grupos de tratamento e usados somente uma vez nas experiências comportamentais. 13.3. Testes Comportamentais

Para o teste de desespero, os ratos foram forçados, individualmente, a nadar dentro dos cilindros verticais de Plexiglas que continha 15 cm de água mantida a 25 °C (Nature 266:730 - 732, Porsolt et al., 1977). Após 15 minutos dentro de água, os ratos foram removidos e secos, durante 15 minutos, num recipiente aquecido, antes de retornarem às suas gaiolas. 24 horas depois, foram novamente colocados dentro dos cilindros e a duração total da imobilidade foi medida durante um teste de 5 minutos. Um rato foi julgado estar mobilizado sempre que remanescia passivamente flutuando na água numa posição ligeiramente corcunda mas erecta, só com a cabeça acima da superfície.

As mudanças induzidas por reserpina no comportamento em campo aberto foram estudadas de acordo com o método descrito no NauninSchmiedeberg's Arch. Farmacol. 293: 109-114 (Vetulani et al., 1976). A Reserpina (Sigma, EUA) foi 32 dissolvida em soro fisiológico e injectada diariamente, durante 14 dias a uma dose de 0.1 mg/kg subcutaneamente (SC),. No período de 1 hora após a última injecção de reserpina, os animais foram sujeites ao teste de campo aberto. Este teste consistiu na medição da ambulação e da elevação do rato numa área circular dividida em 17 secções iguais, iluminada por uma lâmpada suspendida ao centro. As áreas exploradas pelo rato com as patas anteriores foram gravadas pelo menos durante 5 minutos do teste. Os episódios de elevação para o centro ou para as paredes foram gravados também durante 5 minutos do teste. 13.4. Análise Estatística

Todos os dados foram analisados usando a análise do conceito de univariação aleatória da variância (ANOVA 1-via) e o teste post hoc de Dunnett para comparações múltiplas. Um valor P de 0.05 ou inferior foi considerado como indicativo de uma diferença significativa. Onde não houver indicação, a Análise unifactorial da variância não revelou um nível significativo da variação. A duração da imobilidade no teste do desespero (natação forçada) nos ratos injectados com o soro fisiológico como o placebo, com clomipramina 50 mg/kg ou com o composto do exemplo 1 (0.2 e 05 mg/kg) são mostrados na tabela 5

Quadro 5

Tratamento Duração da imobilidade Placebo (6) 167,60 ± 9,44 Clomipramina 50 mg/kg (4) 105,95 ± 9,13* Ex. 1(Abio 09/01), 0,2 mg/kg (6) 167,00111,11 Ex. 1(Abio 09/01),0,5 mg/kg (6) 109,83 1 9,12* 33

Os valores são médias ± S.E.M. Entre parêntesis é indicado o número de animais por cada grupo. *Significativamente diferente em comparação com controlos tratados com placebo (p < 0.05, Teste de Dunnett para comparações múltiplas). O número de unidades do pavimento e os episódios de elevação nos ratos injectados com o soro fisiológico como o placebo, com clomipramina 50 mg/kg ou com o composto do exemplo 1 (0.2 e 05 mg/kg). O número de unidades do pavimento e os episódios de elevação nos ratos injectados com o soro fisiológico como o placebo, com clomipramina 50 mg/kg ou com o composto do exemplo 1 (0.2 e 05 mg/kg) são mostrados na tabela 6.

Quadro 6

Tratamento No. Unidades de pavimento Episódios de elevação Reserpina + placebo (12) 131.3 ± 12.1 6.4 ± 0.2 Reserpina + clomipramina 50 mg/kg (7) 84.6 ± 8.1 * 2.4 ± 0.2* Ex. 1 (Abio 09/01), 0,2 mg/kg (12) 128.1 ± 11.9 5.9 ± 0.3 Ex. 1 (Abio 09/01), 0.5 mg/kg (12) 92.2 ± 11.1* 2.2 ± 0.5*

Os valores são médias ± S.E.M. Entre parêntesis é indicado o número de animais por cada grupo. A Análise unifactorial da variância revelou níveis não significativos de variação do tratamento para "número de unidades " [F(3,29) = 2,27 (p < 0,10)] e para "episódios de elevação" [F (3,29) = 2,10 (p < 0,10)] . 34 *Significativamente diferente em comparação com os controlos de reserpina + placebo (p < 0,05, Teste Dunnett para comparações múltiplas). 13.5. Conclusões e Resultados

Estes resultados mostram que os ratos tratados com o composto do exemplo í, de 0.5 mg/kg, exibem uma diminuição significativa do tempo de imobilização no teste do desespero, em comparação com o grupo de controlo. Este efeito era similar àquele verificado dos ratos tratados com o clomipramina 50 mg/kg. O desempenho de campo aberto no teste da reserpina revelou uma diminuição da ambulação (incorporando o número das unidades do pavimento) e da elevação (número dos episódios) para aqueles ratos que foram tratados com o composto do exemplo 1 em 0.5 mg/kg, em comparação com o grupo de controlo. Estes efeitos eram similares àqueles verificados nos ratos tratados com o clomipramina 50 mg/kg.

Exemplo 14 - Actividade Ansiolitica - Teste da caixa branca e preta

Foram conduzidos estudos adicionais que comparam o efeito do ansiolitico do composto do exemplo 1 e dos compostos dos exemplos 2 a 7 [compostos PI a P6] com aquele do medicamento ansiolitico comercializado, diazepam, e do composto correspondente da fórmula (A) (composto comparativo A).

No sistema do teste preto/branco (caixa P/B) os animais normais mostraram uma preferência em permanecer no compartimento menos adverso, medido pelo tempo dispendido na secção preta, assim como para a exploração, medido pelo 35 comportamento de elevação e pelos cruzamentos de linha, como consequência das propriedades adversas da iluminação brilhante. A acção característica dos agentes ansiolíticos consiste em causar a redistribuição da actividade exploratória e do tempo dispendido na secção branca.

Cada rato foi colocado no centro da área branca, com uma iluminação brilhante de costas para a abertura entre os compartimentos de P/B. 0 comportamento dos animais foi gravado por uma câmara de vídeo remota por 5 minutos. Subsequentemente, as gravações foram avaliadas na TV por dois operadores, ignorantes do tratamento com o medicamento. Os seguintes parâmetros comportamentais foram gravados: a) a latência do movimento inicial da área branca para a área preta: L (seg); b) o tempo gasto na área branca TW (seg) ; o tempo gasto na

área preta é calculado pela diferença: 5 - TW = TB (segundo); c) o número das transições entre os dois compartimentos T (No. /5 de min); d) a actividade total nos compartimentos branco e preto,

Atot (No./5min); e) a actividade total na área branca durante todo o tempo gasto na área branca: AtotW/TW (n° /seg); f) a actividade total na área preta durante todo o tempo gasto na área preta: AtotB/TB (n° /sec); g) o número total de elevações exploratórias: Rtot (n°. /5 min) ; h) o número total de cruzamentos da linha: Ctot (n°. /5 min) ; i) o número de elevações exploratórias na secção branca RW/TW (n° /seg) ; 36 j) o número de cruzamentos da linha na secção branca CW/TW (n° /seg). 0 tratamento foi: 1 Veículo 0 2 Diazepam 1.25 mg/kg 3 Composto Comparativo A 0.1 mg/kg 4 composto do exemplo 1, 0.1 mg/kg 5 PI 0.1 mg/kg 6 P2 0.1 mg/kg 7 P3 0.1 mg/kg 8 P4 0.1 mg/kg 9 P5 0.1 mg/kg 10 P6 0.1 mg/kg

Cada grupo era composto por 8 animais. Os resultados são apresentados nos seguintes quadros:

Parâmetro 1: Latência L (sec) Animais Média SD SE Veículo CMC 5,000 16,200 10,2320 4,576 Diazepam 1,25 mg/kg 8,000 13,750 6,8400 2,418 PI 0,1 mg/kg 8,000 20,125 15,5880 5,511 P2 0,1 mg/kg 8,000 19,625 8,4340 2,982 P5 0,1 mg/kg 8,000 20,625 8,2620 2,921 P6 0,1 mg/kg 8,000 14,500 6,6550 2,353 L: A comparação ANOVA não foi significativa

Parâmetro 2: Tempo dispendido na área branca (TW) (seg) Animais Média SD SE Veículo CMC 5 74,200 49,7770 22,261 Diazepam 1,25 mg/kg 8 97,750 61,9860 21,915 Pl 0,1 mg/kg 8 116,750 52,7140 18,637 P2 0,1 mg/kg 8 59,250 39,0340 13,801 P5 0,1 mg/kg 8 105,125 40,6360 14,367 P6 0,1 mg/kg 8 152,125 37,1580 13,137 TW: comparação ANOVA (S = significativo) 37 P-valor Veículo CMC, Diazepam 1,25 mg/kg , 3902 Veículo CMC, PI 0,1 mg/kg .1245 Veículo CMC, P2 0,1 mg/kg .5844 Veículo CMC, P5 0,1 mg/kg .2608 Veículo CMC, P6 0,1 mg/kg .0065 Diazepam 1,25 mg/kg, P 1 0,1 mg/kg .4290 Diazepam 1,25 mg/kg, P2 0,1 mg/kg .1134 Diazepam 1,25 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .7580 Diazepam 1,25 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .0277 P 1 0,1 mg/kg, P2 0,1 mg/kg .0203 PI 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .6275 P-valor PI 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .1447 P2 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .0609 P2 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .0004 P5 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .0551

Parâmetro 3: Transições /5 minutos (T)

Animais Média SD SE Veículo CMC 5.000 9.600 6.4650 2.891 Diazepam 1,25 mg/kg 8.000 13.375 9.3490 3.306 Pl 0,1 mg/kg 8.000 19.500 10.8630 3.841 P2 0,1 mg/kg 8.000 10.000 9.5320 3.370 P5 0,1 mg/kg 8.000 14.750 7.3050 2.583 P6 0,1 mg/kg 8.000 24.250 11.2220 3.968 38

T: Comparação ANOVA P-valor Veículo CMC, Diazepam 1.25 mg/kg .4885 Veículo CMC, PI 0.1 mg/kg .0743 Veículo CMC, P2 0.1 mg/kg . 9413 Veículo CMC, PS 0.1 mg/kg .3459 Veículo CMC, P6 0.1 mg/kg .0098 S Diazepam 1.25 mg/kg, PI 0.1 mg/kg .2033 Diazepam 1.25 mg/kg, P2 0.1 mg/kg .4801 Diazepam 1.25 mg/kg, PS 0.1 mg/kg .7730 Diazepam 1.25 mg/kg, P6 0.1 mg/kg .0271 s P 1 0.1 mg/kg, P2 0.1 mg/kg .0517 PI 0.1 mg/kg, PS 0.1 mg/kg .3219 Pl 0.1 mg/kg, P6 0.1 mg/kg .3219 P2 0.1 mg/kg, PS 0.1 mg/kg .3219 s P2 0.1 mg/kg, P6 0.1 mg/kg .0046 PS 0.1 mg/kg, P6 0.1 mg/kg .0517

Parâmetro 4: Actividade Total: Atot (No./5 min) Animais Média SD SE Veículo CMC 5.000 112.400 49.1710 21.990 Diazepam 1,25 mg/kg 8.000 213.125 90.5810 32.025 Pl 0,1 mg/kg 8.000 197.375 47.7670 16.888 P2 0,1 mg/kg 8.000 168.625 53.6020 18.951 P5 0,1 mg/kg 8.000 197.000 37.8490 13.382 P6 0,1 mg/kg 8.000 229.375 42.1660 14.908 1

Atot : Comparação ANOVA P-valor Veículo CMC, Diazepam 1,25 mg/kg .0035 S Veículo CMC, PI 0,1 mg/kg .0123 S Veículo CMC, P2 0,1 mg/kg .0902 Veículo CMC, P5 0,1 mg/kg .0126 S Veículo CMC, P6 0,1 mg/kg .0008 S Diazepam 1,25 mg/kg, P10,l mg/kg .5821 Diazepam 1,25 mg/kg, P2 0,1 mg/kg .1250 Diazepam 1,25 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .5732 Diazepam 1,25 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .5702 PI 0,1 mg/kg, P2 0,1 mg/kg .3173 PI 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .9895 P 10, 1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .2664 P2 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .3236 s P2 0,1 mg/kg, Ρβ 0,1 mg/kg .0386 P5 0,1 mg/kg, Ρβ 0,1 mg/kg .2610

Parâmetro 5: Actividade Total na área branca: AtotW/TW (No./sec) Animais Animais SD SE Veículo CMC 5.000 .475 .1800 .080 Diazepam 1,25 mg/kg 8.000 .723 .3030 .107 PI 0,1 mg/kg 8.000 .608 .2980 .105 P2 0,1 mg/kg 8.000 .519 .2530 .089 P5 0,1 mg/kg 8.000 .571 .1570 .055 Ρβ 0,1 mg/kg 8.000 .705 .1380 .049

AtotW/TW: Comparação ANOVA não foi significativa

Parâmetro 6: Actividade Total na área preta: AtotB/TB (No./sec) Animais Média SD SE Veículo CMC 5.000 .341 .1450 .065 Diazepam 1,25 mg/kg 8.000 .723 .3190 .113 PI 0,1 mg/kg 8.000 .652 .1380 .049 P2 0,1 mg/kg 8.000 .571 .1840 .065 P5 0,1 mg/kg 8.000 .708 .1530 .054 Ρβ 0,1 mg/kg 8.000 .835 .1750 .062 2

AtotB/TB: Comparação ANOVA P-valor Veículo CMC, Diazepam 1,25 mg/kg . 0017 S Veículo CMC, PI 0,1 mg/kg .0091 S Veículo CMC, P2 0,1 mg/kg .0496 S Veículo CMC, P5 0,1 mg/kg .0025 S Veículo CMC, P6 0,1 mg/kg <.0001 S Diazepam 1,25 mg/kg, PI 0,1 mg/kg .4832 Diazepam 1,25 mg/kg, P2 0,1 mg/kg . 1351 Diazepam 1,25 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .8796 Diazepam 1,25 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .2663 P 10,1 mg/kg, P2 0,1 mg/kg . 4183 PI 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .5817 P10,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg . 0740 P-valor P2 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg . 1774 P2 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .0115 S P5 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .2080

Parâmetro 7: Rtot (No./5 min) Animais Média SD SE Veículo CMC 5.000 22.600 19.6800 8.801 Diazepam 1.25 mg/kg 8.000 68.750 31.4950 11.135 PI 0,1 mg/kg 8.000 60.375 23.8860 8.445 P2 0,1 mg/kg 8.000 60.250 28.7090 10.150 P5 0,1 mg/kg 8.000 69.500 20.3960 7.211 P6 0,1 mg/kg 8.000 75.625 11.6120 4.105 3

Rtot: Comparação ANOVA P-valor Veículo CMC, Diazepam 1,25 mg/kg .0016 S Veículo CMC, PI 0,1 mg/kg .0083 S Veículo CMC, P2 0,1 mg/kg .0085 S Veículo CMC, P5 0,1 mg/kg .0013 S Veículo CMC, P6 0,1 mg/kg .0004 S Diazepam 1,25 mg/kg, P 1 0,1 mg/kg .4860 Diazepam 1,25 mg/kg, P2 0,1 mg/kg .4795 Diazepam 1,25 mg/kg, P5 0,1 mg/kg . 9501 Diazepam 1,25 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .5669 P 1 0,1 mg/kg, P2 0,1 mg/kg . 9917 PI 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg . 4480 PI 0.1 mg/kg, P6 0.1 mg/kg .2078 P2 0.1 mg/kg, P5 0.1 mg/kg . 4419 P2 0.1 mg/kg, P6 0.1 mg/kg .2042 P5 0.1 mg/kg, P6 0.1 mg/kg . 6098

Parâmetro 8: Ctot (No./5 min) Animais Média SD SE Veículo CMC 5.000 89.800 30.0870 13.455 Diazepam 1,25 mg/kg 8.000 144.375 60.4650 21.378 Pl 0,1 mg/kg 8.000 137.000 25.7570 9.107 P2 0,1 mg/kg 8.000 108.375 27.7950 9.827 P5 0,1 mg/kg 8.000 127.500 20.3890 7.209 P6 0,1 mg/kg 8.000 153.750 32.9490 11.649 4

Ctot: Comparação ANOVA P-valor Veículo CMC, Diazepam 1,25 mg/kg .0107 S Veículo CMC, PI 0,1 mg/kg .0258 S Veículo CMC, P2 0,1 mg/kg .3673 Veículo CMC, P5 0,1 mg/kg .0717 Veículo CMC, P6 0,1 mg/kg .0032 S Diazepam 1,25 mg/kg, P 1 0,1 mg/kg .6820 Diazepam 1,25 mg/kg, P2 0,1 mg/kg .0508 Diazepam 1,25 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .3506 Diazepam 1,25 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .6027 P 1 0,1 mg/kg, P2 0,1 mg/kg .1171 PI 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .5979 PI 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .3542 P2 0,1 mg/kg, P5 0,1 mg/kg .2909 s P2 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .0152 P5 0,1 mg/kg, P6 0,1 mg/kg .1497

Parâmetro 9: RW/TW (No./sec) Animais Média SD SE Veículo CMC 5.000 .083 .0810 .036 Diazepam 1,25 mg/kg 8.000 .124 .0930 .033 Pl 0,1 mg/kg 8.000 .155 .1060 .038 P2 0,1 mg/kg 8.000 .099 .0900 .032 P5 0,1 mg/kg 8.000 .123 .0870 .031 P6 0,1 mg/kg 8.000 .190 .0500 .018 5 RW/TW : Comparação ANOVA não foi significativa

Parâmetro 10: CW/TW (No./sec) Animais Média SD SE Veículo CMC 5.000 .391 .1150 .052 Diazepam 1,25 mg/kg 8.000 .599 .2330 .082 PI 0,1 mg/kg 8.000 .454 .1990 .071 P2 0,1 mg/kg 8.000 .420 .1790 .063 P5 0,1 mg/kg 8.000 .448 .0840 .030 P6 0,1 mg/kg 8.000 .515 .1040 .037 CW/TW : Comparação ANOVA não foi significativo

Lisboa, 19 de Março de 2007

Claims (13)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto da fórmula (I):

   em que X representa 0 ou CH2; cada R3 e R4 independentemente representam hidrogénio ou Ci-6 alquilo; p representa 0 ou 1; e R representa um anel insaturado ou saturado, com cinco ou seis membros seleccionados de:

   ou R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de:

   em que R1 e R2 juntos representam um grupo oxo, ou cada R1 e R2 representam hidrogénio, metoxilo ou etoxilo, ou R1 e R2 juntos com o átomo de carbono interjacente representam um anel 1,3- dioxolano ou um anel 1,3- dioxano, ligado pela posição 2 e possuindo opcionalmente um ou mais grupos de metilo ou etilo; ou um tautómero do mesmo; ou um sal do mesmo; para utilização como produto farmacêutico.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de: R1

   em que o R1 e o R2 juntos representam um grupo oxo, ou cada R1 e R2 representam metoxilo ou etoxilo ou R1 e R2 juntos com o átomo de carbono interjacente representam um anel 1,3- dioxolano ou um anel 1,3- dioxano, ligado pela posição 2 e possuindo opcionalmente um ou mais grupos de metilo ou etilo e p representa 0.
3. 3. Composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2 em que o R1 e o R2 juntos representam um grupo oxo

   e ο X é O.
4. 5. Composto de acordo com qualquer das reivindicações precedentes em que o R3 e o R1 são idênticos. 1 Composto de acordo com qualquer das reivindicações precedentes em que o R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de:
5. 6. Composto de acordo com qualquer das reivindicações precedentes em que cada R3 e R4 representam hidrogénio.
6. 7. Composto da formula (II):

   em que cada R3 e R4 independentemente representam hidrogénio ou Ci-6 alquilo; p representa 0 ou 1; e R representa um anel insaturado ou saturado, com cinco ou seis membros seleccionados de:

   ou R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de:

   em que R1 e o R2 juntos representam um grupo oxo, ou cada R1 e R2 representam hidrogénio, metoxilo ou etoxilo, ou R1 e R2 juntos com o átomo de carbono interjacente representam um anel 1,3- dioxolano ou um anel 1,3- dioxano, ligado pela posição 2 e possuindo opcionalmente um ou mais grupos de metilo ou etilo; ou um tautómero do mesmo; ou um sal do mesmo.
7. 8. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que o composto da fórmula (III) : R

   m em que R1 e R2 representam cada um hidrogénio ou, juntos, representam um grupo oxo; ou um sal do mesmo.
8. 9. Processo para a preparação do composto da fórmula (I) de acordo com a reivindicação 7 ou 8, em que o p representa 0 e R representa um anel insaturado, substituído em oxo, com cinco ou seis membros seleccionados de: ,2

   pela reacção do composto da formula (VI) ou (VIA) com um composto da fórmula (VII):

   em que ο X é 0 e R1 e R2 são definidos relativamente à fórmula (I).
9. 10. Processo de acordo com as reivindicações 9 em que R1 e R2 juntos representam um grupo oxo.
10. 11. Processo de acordo com a reivindicação 9 ou 10 em que o composto da fórmula (VII)) é £ormado ln sltu a Partir de um composto da fórmula (IX): H (K) através de oxidação. 12 Processo para a preps^-®1?^® composto da formula (I) de acordo com as reivindicações 7 ou 8 pela reacção do reagente de Grignard da formula R(CH2)pMgHal com um composto da formula (VII): X^R4 N+ I °' (VII) em que ο X é O, o Hal representa haleto e R, R1 e R2 são definidos relativamente à fórmula (I).
11. 13. Composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula (I), ou um sal do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8 em associação com um veiculo farmaceuticamente aceitável do mesmo.
12. 14. Uso de um composto da fórmula (I), ou um sal do mesmo, de acordo com as reivindicações de 1 a 8 na preparação de um medicamento para o tratamento da ansiedade ou depressão.
13. 15. Uso de acordo com a reivindicação 14 na preparação de um medicamento para o tratamento da ansiogénese causada pela retirada das benzodiazepinas, ou causado pela cessação abrupta da administração de drogas abusivas.

    Lisboa, 19 de Março de 2007