PT1309922E

PT1309922E - Sistema e método para caracterização e sequenciação de polímeros

Info

Publication number: PT1309922E
Application number: PT01949789T
Authority: PT
Inventors: Dimitrios Sideris
Original assignee: Deltadot Ltd
Priority date: 2000-08-08
Filing date: 2001-07-20
Publication date: 2007-01-31
Also published as: EP1309922A2; NZ523887A; US7425251B2; WO2002013122A3; EP1309922B1; CA2417144A1; US20040014231A1; ATE344497T1; BR0113076A; WO2002013122A2; DK1309922T3; KR20030064741A; JP2004505642A; JP4845329B2; IL154181A0; GB0019499D0; DE60124262T2; AU2001270904A1; ES2273862T3; ZA200300792B

Description

ΕΡ 1 309 922 /PT

DESCRIÇÃO "Sistema e método para caracterização e sequenciação de polímeros" 0 presente invento refere-se a um sistema e método para caracterização, em particular sequenciação, de amostras poliméricas, em particular, mas não exclusivamente, tal como são medidas electroforeticamente. A técnica do presente

. TM

invento é a técnica de caracterizaçao MITSO

As técnicas de separação electroforética são técnicas de separação em que os componentes de um rolhão de amostra são separados numa coluna de separação pelas diferenças nas velocidades de migração dos componentes da amostra com a aplicação de um campo eléctrico ao longo do percurso, onde para detectar a separação electroforética se podem utilizar absorção, fluorescência, electroquímica, condutividade, radioactividade e espectrometria de massa.

Como exemplo, as amostras de ADN são vulgarmente caracterizadas por sequenciação de Sanger. Embora a sequenciação de Sanger seja de utilização comum, a técnica está limitada num certo número de aspectos, quanto mais não seja porque as bandas de ADN têm de ser marcadas de acordo com a terminação de par de bases. É um objectivo do presente invento proporcionar um sistema e um método melhorados para caracterização, em particular sequenciação, de amostras poliméricas, tais como amostras de ADN, que possam ser utilizados com componentes de amostra tanto marcados como não marcados.

Deste modo, o presente invento proporciona um sistema para caracterização, em particular sequenciação, de amostras poliméricas, compreendendo: um gerador de mapa espaço-tempo para gerar um mapa espaço-tempo de pontos representativos dos picos de sinal de sinais detectados numa pluralidade de posições espaçadas à medida que estas são percorridas pelos componentes migrantes de uma pluralidade de rolhões de amostra fornecidos separadamente; e um pesquisador de vértices para identificar vértices a partir do mapa espaço-tempo, sendo identificado um vértice único para os componentes de cada rolhão de amostra fornecido separadamente 2

ΕΡ 1 309 922 /PT e as velocidades dos componentes das amostras sendo determináveis a partir dos pontos no mapa espaço-tempo. A utilização de um mapa espaço-tempo para identificar a mobilidade de componentes num electroforegrama é ensinada na US 5 114 551A.

Preferivelmente, o sistema compreende adicionalmente um classificador de velocidade para determinação das velocidades nominais associadas aos picos de sinal nos sinais e agrupamento desses picos de sinal em conjuntos de acordo com a velocidade nominal.

Preferivelmente, o gerador de mapa espaço-tempo está configurado para utilizar, na geração do mapa espaço-tempo, um componente de tempo corrigido de acordo com uma função da variação de corrente eléctrica.

Mais preferivelmente, a correcção é de acordo com a função tc = .fl0/l(t')dt' no intervalo de 0 a t, onde t é o tempo medido, tc é o tempo corrigido, I é a corrente medida e I0 é a corrente de referência.

Preferivelmente, o gerador de mapa espaço-tempo é um gerador de mapa espaço-tempo equifase para gerar um mapa espaço-tempo equifase de pontos equifase.

Mais preferivelmente, o gerador de mapa espaço-tempo equifase está configurado para transformar cada conjunto de dados num conjunto de declives locais e para determinar os mínimos locais como sendo as derivadas locais mínimas absolutas.

Numa concretização os componentes estão não marcados.

Noutra concretização os componentes estão marcados.

Preferivelmente, os componentes são migrados através de um canal.

Mais preferivelmente, o canal compreende um canal de separação através do qual os componentes são conduzidos electroforeticamente. 3

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Preferivelmente, os rolhões de amostra compreendem respectivamente bandas de ADN possuindo uma das terminações de par de bases. O presente invento abrange também um equipamento para electroforese incluindo o sistema anteriormente descrito. O presente invento proporciona também um método para caracterização, em particular sequenciação, de amostras poliméricas, compreendendo os passos de: geração de um mapa espaço-tempo de pontos representativos dos picos de sinal de sinais detectados numa pluralidade de posições espaçadas à medida que estas são percorridas pelos componentes migrantes de uma pluralidade de rolhões de amostra fornecidos separadamente; e identificação de vértices a partir do mapa espaço-tempo, sendo identificado um vértice único para os componentes de cada rolhão de amostra fornecido separadamente e as velocidades dos componentes das amostras sendo determináveis a partir dos pontos no mapa espaço-tempo.

Preferivelmente, o método compreende adicionalmente os passos de determinação das velocidades nominais associadas aos picos de sinal nos sinais e agrupamento desses picos de sinal em conjuntos de acordo com a velocidade nominal.

Preferivelmente, para gerar o mapa espaço-tempo, utiliza-se um componente de tempo corrigido de acordo com uma função da variação de corrente eléctrica.

Mais preferivelmente, a correcção é de acordo com a função tc = JI0/I(t')dt' no intervalo de 0 a t, onde t é o tempo medido, tc é o tempo corrigido, I é a corrente medida e IQ é a corrente de referência.

Preferivelmente, o mapa espaço-tempo é um mapa espaço-tempo equifase de pontos equifase.

Mais preferivelmente, os pontos equifase são determinados por transformação de cada conjunto de dados num conjunto de declives locais e determinação dos mínimos locais como as derivadas locais mínimas absolutas.

Numa concretização os componentes estão nao marcados. 4

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Noutra concretização os componentes estão marcados.

Preferivelmente, os componentes são migrados através de um canal.

Mais preferivelmente, o canal compreende um canal de separação através do qual os componentes são conduzidos electroforeticamente.

Numa concretização os rolhões de amostra são fornecidos com intervalos de tempo espaçados.

Noutra concretização os rolhões de amostra são fornecidos em posições espaçadas.

Preferivelmente, os rolhões de amostra são fornecidos substancialmente ao mesmo tempo.

Preferivelmente, os rolhões de amostra compreendem respectivamente bandas de ADN possuindo uma das terminações de par de bases.

Apenas como exemplo, será agora a seguir descrita uma concretização preferida do presente invento por referência aos desenhos apensos, nos quais: A Figura 1 ilustra o chip detector de um equipamento de electroforese de acordo com uma concretização preferida do presente invento; A Figura 2 ilustra o sistema de análise do equipamento da Figura 1; A Figura 3 ilustra uma representação tridimensional dos sinais intensidade-tempo de um componente de um rolhão de amostra conforme são detectados nas posições zlr Z2, Z3 espaçadas ao longo do canal de separação do equipamento da Figura 1; A Figura 4 ilustra os sinais intensidade-tempo de três componentes de um rolhão de amostra conforme são detectados nas posições zi, Z2, z3 espaçados ao longo do canal de separação do equipamento da Figura 1; 5

ΕΡ 1 309 922 /PT A Figura 5 ilustra um mapa espaço-tempo conforme é gerado a partir dos sinais intensidade-tempo da Figura 4; A Figura 6 ilustra o espectro de velocidade conforme é determinado a partir dos vértices do mapa espaço-tempo da Figura 5; e A Figura 7 ilustra um mapa espaço-tempo conforme gerado a partir dos sinais intensidade-tempo a partir de quatro rolhões de amostra de ADN injectados separadamente compreendendo bandas de ADN possuindo diferentes terminações de pares de bases.

As Figuras 1 e 2 ilustram um equipamento de electroforese de acordo com uma concretização preferida do presente invento. O equipamento de electroforese inclui um chip detector 2 conforme microfabricado num chip de substrato, e um sistema de análise 3 para análise dos sinais de detecção gerados pelo chip detector 2. 0 chip detector 2 inclui um canal de separação 4, nesta concretização um canal em meandros cheio com gel, através do qual os componentes de um ou mais rolhões de amostra são, em utilização, conduzidos por uma voltagem electroforética aplicada. 0 canal de separação 4 tem um comprimento suficiente para permitir a separação dos componentes dos rolhões de amostra. Preferivelmente, o canal de separação 4 tem uma largura de 25 a 100 ym e um comprimento de 20 a 300 mm. Nesta concretização, o canal de separação 4 inclui uma pluralidade de portas de injecção de amostra espaçadas da primeira à quarta 6, 8, 10, 12 através das quais os rolhões de amostra, incluindo uma pluralidade de componentes, nesta concretização bandas de ADN possuindo as terminações de par de bases respectivas A, T, G e C, são injectados separadamente para o interior do canal de separação 4. O chip detector 2 inclui adicionalmente uma fonte de luz 14, nesta concretização uma fonte de luz UV, disposta ao longo do comprimento de um lado do canal de separação 4, e um detector 16 disposto ao longo do comprimento do outro lado do canal de separação 4 para detectar a luz transmitida através do canal de separação 4, a presença dos componentes migrantes 6

ΕΡ 1 309 922 /PT sendo detectada pela alteração na intensidade de luz detectada, causada por absorção da luz incidente. Detectando assim os componentes da amostra, os componentes da amostra não necessitam de estar obrigatoriamente marcados. Nesta concretização, o detector 16 compreende um arranjo detector de pixels (PDA, "pixel detector array") que inclui uma pluralidade de pixels proporcionando elementos de detecção para detectar a luz transmitida numa pluralidade de posições 7,i, z2, z3 espaçadas ao longo do comprimento do canal de separação 4 e produzindo uma pluralidade de sinais Si, S2, S3. Para facilidade de descrição, o detector 16 é ilustrado incluindo três elementos de detecção em três posições ζχ, z2, z3. Contudo, será entendido que na prática o detector 16 compreende uma pluralidade de elementos de detecção numa pluralidade de posições zi, z2, z3, ..., zn, que produzem cada um sinais de saída Si, S2, S3, ..., Sn. Numa concretização alternativa, o detector 16 poderia ser constituído por uma pluralidade de detectores em separado cada um proporcionando um elemento de detecção. Noutra concretização alternativa, podiam-se utilizar componentes da amostra marcados, tais como componentes da amostra incluindo marcadores fluorescentes ou radioactivos, marcadores que seriam detectados pelo detector 16. O sistema de análise 3 compreende um colector de dados 18 para recepção dos sinais Si, S2, S3 gerados pelo detector 16 e armazenamento desses sinais Si, S2, S3 como conjuntos de dados, um classificador de velocidade 19 para determinação das velocidades nominais vi, v2, v3 dos componentes da amostra associados com cada um dos picos de sinal SPi, SP2, SP3 de cada um dos sinais Si, S2, S3 e agrupamento destes picos de sinal SPi, SP2, SP3 em conjuntos de acordo com a velocidade nominal, um gerador de mapa espaço-tempo equifase 20 para gerar um mapa espaço-tempo equifase de pontos equifase a partir dos picos de sinal SPi, SP2, SP3 dos sinais Si, S2, S3, e um pesquisador de vértices 22 para identificar os vértices dos pontos equifase dos conjuntos agrupados dos picos de sinal SPi, SP2, SP3. Nesta concretização, o classificador de velocidade 19 é proporcionado de modo a ser operável antes do gerador de mapa espaço-tempo equifase 20. Em concretizações alternativas, o classificador de velocidade 19 podia ser proporcionado de modo a ser operável após o 7 ΕΡ 1 309 922 /PT gerador de mapa espaço-tempo 20 ou o pesquisador de vértices 22. A Figura 3 é incluída apenas para efeitos de ilustração e ilustra os sinais Sx, S2, S3 como incluindo apenas um único pico SPi a partir de um único componente de um único rolhão de amostra. Na realidade, porém, os sinais Si, S2, S3 incluem cada um uma pluralidade de picos de sinal SPi_n, SPi_n, SPi_n. A Figura 4 ilustra os sinais Si, S2, S3 como incluindo três picos de sinal SPi, SP2, SP3 a partir de três componentes de um único rolhão de amostra. O classificador de velocidade 19 está configurado para determinar as velocidades nominais vi, v2, v3 dos componentes da amostra associados a cada um dos picos de sinal SPi, SP2, SP3 em cada um dos sinais Si, S2, S3 e depois agrupar esses picos de sinal SPi, SP2, SP3 em conjuntos de acordo com a velocidade nominal. As velocidades nominais νχ, V2, V3 podem ser calculadas na medida em que as posições ζχ, Z2, Z3 dos elementos de detector são fixas e o tempo decorrido t é determinável a partir dos sinais Sx, S2, S3, onde as velocidades nominais podem ser expressas como νχ_η = zx_n/t. Agrupando os sinais dos picos SPx, SP2, SP3 em conjuntos de acordo com a velocidade nominal, e deste modo com o componente da amostra, a análise subsequente é facilitada na medida em que os valores dos pontos associados a cada componente de amostra podem ser ajustados sem requerer a utilização de técnicas complexas de extracção de dados. A classificação de velocidade está abrangida na nossa WO 96/35946 anterior. O gerador de mapa espaço-tempo equifase 20 está configurado para determinar os mínimos locais dos picos de sinal SPx, SP2, SP3 nos sinais Sx, S2, S3 detectados nas posições de detecção ζχ, Z2, Z3 e gera um mapa equifase M em dimensões espaço-tempo a partir dos mínimos locais determinados. A Figura 5 ilustra o mapa espaço-tempo M gerado a partir dos mínimos locais extraídos a partir dos picos de sinal SPx, SP2, SP3 dos sinais Sx, S2, S3. 8

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Nesta concretização, cada electroforegrama é transformado num conjunto de declives locais, onde uma sequência de declive triangular define um sinal e o extremo local é a derivada local mínima absoluta.

Nesta concretização, também o componente de tempo dos sinais detectados Si, S2, S3 é corrigido em função da variação de corrente eléctrica integrada. Devido à variação de vários factores na detecção electroforética, a temperatura sendo um dos mais significativos, as características do meio de separação, nesta concretização um gel, são alteradas. Em primeiro lugar, a resistividade do gel modifica-se, conduzindo a variações na diferença de potencial entre os eléctrodos e num dado ponto no gel, e a flutuações na corrente eléctrica. Em segundo lugar, as propriedades de permeação do gel modificam-se, afectando a mobilidade dos componentes submetidos a electroforese. Monitorizando a corrente eléctrica, o componente de tempo do mapa espaço-tempo M pode ser corrigido conforme aqui depois se apresenta. Especificamente, o componente de tempo é uma curva em função da variação de corrente eléctrica integrada. A velocidade de um componente de amostra é: v = dz/dt (1)

Para uma transformação do componente de tempo medido num componente de tempo corrigido t -> tc, segue-se que dt -> dtc e v -► vc. Assim: vc/v = dt/dtc (2) A transformação v -*· vc pode ser definida como: vc/v = I (t) /I0 (3) onde I é a corrente medida e IQ é a corrente de referência que corresponde à moldura onde todas as velocidades e componentes de tempo são projectados. A partir das equações (2) e (3), segue-se que: dtc = IQ/I(t)dt -► tc = JI0/I(t')dt' para 0 a t (4) 9

ΕΡ 1 309 922 /PT A justificação para a transformação de velocidade (3) é que a velocidade é aproximadamente proporcional ao campo eléctrico aplicado que, por sua vez, é proporcional à corrente eléctrica no canal de separação 4. Verificou-se que este factor de correcção funciona bem para pequenas alterações de corrente, com o integral da equação (4) proporcionando uma transformação temporal exacta.

Nesta concretização, o pesquisador de vértices 22 é configurado pela utilização de matrizes rotacionais, para identificar os vértices V dos pontos equifase dos conjuntos agrupados de picos de sinal SP]., SP2, SP3 conforme determinado pelo gerador de mapa espaço-tempo equifase 20, onde os componentes de cada rolhão de amostra injectado possuem um vértice comum V devido a estarem temporal e/ou espacialmente separados na dimensão espaço-tempo. Todos os componentes da amostra injectados num único rolhão de amostra são identificados de modo único por um único vértice V em coordenadas espaço-tempo, permitindo assim a identificação dos componentes da amostra a partir de cada uma de uma pluralidade de rolhões de amostra fornecidos separadamente. A Figura 5 ilustra o vértice V conforme determinado a partir do mapa espaço-tempo M gerado. Este mapa espaço-tempo inclui apenas um único vértice V na medida em que todos os componentes foram fornecidos num único rolhão de amostra.

Utilizando cada vértice V como uma restrição para extrair o espectro de velocidade dos componentes da amostra, a resolução é aproximadamente proporcional a Vn, onde n é o número de componentes. Deste modo, a velocidade de um componente é calculada utilizando as velocidades de todos os outros componentes a partir do mesmo rolhão de amostra, e assim, à medida que o número de componentes numa amostra aumenta, a resolução das análises aumenta correspondentemente. Esta parametrização espacial, que resulta na formação de múltiplos vértices na forma de regiões de intensidade melhorada em coordenadas espaço-tempo, é particularmente adequada para os casos de injecções de múltiplas amostras e correlação de múltiplas colunas. O poder desta técnica tem sido demonstrado em amostras de ADN que incluem grandes números de fragmentos (>100) possuindo comprimentos com diferença de um par de bases, proporcionando deste modo uma técnica de sequenciação com um alcance dinâmico grandemente alargado. 10

ΕΡ 1 309 922 /PT A partir da determinação dos vértices V no mapa espaço-tempo M, consegue-se uma resolução elevada dos dados de electroforese, permitindo a determinação exacta das velocidades dos componentes da amostra conforme ilustrado na Figura 6.

Descreve-se agora a seguir a utilização do equipamento de electroforese anteriormente descrito para sequenciar amostras de ADN possuindo as terminações de pares de bases A, T, G e C.

Em utilização, introduzem-se quatro rolhões de amostra compreendendo bandas de ADN possuindo comprimento diferente e uma das terminações de par de bases A, T, G e C separadamente nas portas 6, 8, 10, 12 do canal de separação 4, e conduzem-se electroforeticamente ao longo deste. Num modo de utilização, os rolhões de amostra são introduzidos simultaneamente nas portas 6, 8, 10, 12 que estão separadas espacialmente ao longo do canal de separação 4. Noutro modo de utilização, os rolhões de amostra são introduzidos sequencialmente numa das portas 6, 8, 10, 12 de modo a serem espaçadas no tempo. Os sinais Si, S2, S3,..., Sn detectados pelo detector 16 à medida que as bandas de ADN percorrem os elementos de detecção nas posições de detecção ζχ, z2, z3,..., zn são recolhidos pelo colector de dados 18. O classificador de velocidade 19 determina então as velocidades nominais νχ, v2, v3,..., vn dos componentes da amostra associados com cada um dos picos de sinal SPx, SP2, SP3, ..., SPn dos sinais Sx, S2, S3,..., Sn e agrupa aqueles picos de sinal SPx, SP2, SP3,..., SPn em conjuntos de acordo com a velocidade nominal. O gerador de mapa espaço-tempo equifase 20 determina então os mínimos locais dos picos de sinal SPx, SP2, SP3,..., SPn dos sinais Sx, S2, S3,..., Sn, e gera um mapa espaço-tempo equifase Μ. O pesquisador de vértices 22 identifica então os vértices VA, VT, VG, Vc dos mínimos locais determinados para cada um dos conjuntos agrupados de picos de sinal SPx, SP2, SP3,..., SPn. Nesta concretização, o mapa espaço-tempo M inclui quatro vértices VA, VT, VG, Vc uma vez que quatro rolhões de amostra foram injectados separadamente no canal de separação 4, cada um sendo atribuível a bandas de ADN possuindo uma das terminações de par de bases A, T, G e C. Deste modo, a amostra de ADN pode então ser sequenciada, 11 ΕΡ 1 309 922 /PT com os comprimentos das bandas de ADN sendo determinados a partir das velocidades de migração.

Finalmente, será entendido que o presente invento foi descrito na sua concretização preferida e que pode ser modificado de muitas formas diferentes sem sair do âmbito do invento conforme definido pelas reivindicações apensas.

Lisboa,

Claims

ΕΡ 1 309 922 /PT 1/4 REIVINDICAÇÕES 1. Sistema (3) para caracterizaçao, em particular sequenciação, de amostras poliméricas, compreendendo: um gerador de mapa espaço-tempo (20) para gerar um mapa espaço-tempo de pontos representativos dos picos de sinal de sinais detectados numa pluralidade de posições espaçadas à medida que estas são percorridas pelos componentes migrantes de uma pluralidade de rolhões de amostra fornecidos separadamente; e um pesquisador de vértices (22) para identificar vértices a partir do mapa espaço-tempo, sendo identificado um vértice único para os componentes de cada rolhão de amostra fornecido separadamente e sendo as velocidades dos componentes das amostras determináveis a partir dos pontos no mapa espaço-tempo.
2. Sistema de acordo com a reivindicação 1, compreendendo adicionalmente um classificador de velocidade (19) para determinação das velocidades nominais associadas aos picos de sinal nos sinais e agrupamento desses picos de sinal em conjuntos de acordo com a velocidade nominal.
3. Sistema de acordo com a reivindicação 1 ou 2, onde o gerador de mapa espaço-tempo está configurado para utilizar, na geração do mapa espaço-tempo, um componente de tempo corrigido, de acordo com uma função da variação de corrente eléctrica.
4. Sistema de acordo com a reivindicação 3, onde a correcção é de acordo com a função tc = JI0/I(t')dt' no intervalo de 0 a t, onde t é o tempo medido, tc é o tempo corrigido, I é a corrente medida e IQ é a corrente de referência.
5. Sistema de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, onde o gerador de mapa espaço-tempo é um gerador de mapa espaço-tempo equifase para gerar um mapa espaço-tempo equifase de pontos equifase.
6. Sistema de acordo com a reivindicação 5, onde o gerador de mapa espaço-tempo equifase está configurado para ΕΡ 1 309 922 /PT 2/4 transformar cada conjunto de dados num conjunto de declives locais e para determinar os minimos locais como sendo as derivadas locais mínimas absolutas.
7. Sistema de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 6, onde os componentes não estão marcados.
8. Sistema de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 6, onde os componentes estão marcados.
9. Sistema de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 8, onde os componentes são migrados através de um canal (4) .
10. Sistema de acordo com a reivindicação 9, em que o canal compreende um canal de separação através do qual os componentes são conduzidos electroforeticamente.
11. Sistema de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 10, onde os rolhões de amostra compreendem respectivamente bandas de ADN possuindo uma das terminações de par de bases.
12. Método para caracterização, em particular sequenciação, de amostras poliméricas, compreendendo os passos de: geração de um mapa espaço-tempo (20) de pontos representativos dos picos de sinal de sinais detectados numa pluralidade de posições espaçadas à medida que estas são percorridas pelos componentes migrantes de uma pluralidade de rolhões de amostra fornecidos separadamente; e identificação de vértices a partir do mapa espaço-tempo, sendo identificado um vértice único para os componentes de cada rolhão de amostra fornecido separadamente e sendo as velocidades dos componentes das amostras determináveis a partir dos pontos no mapa espaço-tempo.
13. Método de acordo com a reivindicação 12, compreendendo adicionalmente os passos de determinação das velocidades nominais associadas aos picos de sinal nos sinais e de agrupamento desses picos de sinal em conjuntos de acordo com a velocidade nominal. ΕΡ 1 309 922 /PT 3/4
14. Método de acordo com a reivindicação 12 ou 13, onde, para gerar o mapa espaço-tempo, se utiliza um componente de tempo corrigido de acordo com uma função da variação de corrente eléctrica.
15. Método de acordo com a reivindicação 14, onde a correcção é de acordo com a função tc = JI0/I(t')dt' no intervalo de 0 a t, onde t é o tempo medido, tc é o tempo corrigido, I é a corrente medida e IQ é a corrente de referência.
16. Método de acordo com qualquer das reivindicações 12 15, onde o mapa espaço-tempo é um mapa espaço-tempo equifase de pontos equifase.
17. Método de acordo com reivindicação 16, onde os pontos equifase são determinados por transformação de cada conjunto de dados num conjunto de declives locais e determinação dos mínimos locais como as derivadas locais mínimas absolutas.
18. Método de acordo com qualquer das reivindicações 12 a 17, onde os componentes não estão marcados.
19. Método de acordo com qualquer das reivindicações 12 a 17, onde os componentes estão marcados.
20. Método de acordo com qualquer das reivindicações 12 19, onde os componentes são migrados através de um canal (4).
21. Método de acordo com a reivindicação 20, onde o canal compreende um canal de separação através do qual os componentes são conduzidos electroforeticamente.
22. Método de acordo com qualquer das reivindicações 12 21, onde os rolhões de amostra são fornecidos com intervalos de tempo espaçados.
23. Método de acordo com qualquer das reivindicações 12 a 21, onde os rolhões de amostra são fornecidos em posições espaçadas. ΕΡ 1 309 922 /PT 4/4
24. Método de acordo com a reivindicação 23, onde os rolhões de amostra são fornecidos substancialmente ao mesmo tempo.
25. Método de acordo com qualquer das reivindicações 12 a 24, onde os rolhões de amostra compreendem respectivamente bandas de ADN possuindo uma das terminações de par de bases.
26. Equipamento de electroforese incluindo o sistema de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 11. Lisboa,