PT1073648E

PT1073648E - Derivados de epotilona modificados em 12, 13

Info

Publication number: PT1073648E
Application number: PT99916383T
Authority: PT
Inventors: Gregory D Vite; Soong-Hoon Kim; Gerhard Hofle
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1998-04-21
Filing date: 1999-04-05
Publication date: 2006-12-29
Also published as: JP2002512239A; WO1999054319A1; AU3382799A; AR015774A1; EP1073648A4; CY1109593T1; ES2327803T3; CN1298398A; JP4476483B2; US6380395B1; WO1999054318A1; DE69941083D1; AU3471699A; EP1073647A1; TR200003036T2; ES2400049T3; PT1073647E; EP1073648B1; EP1073647A4; CY1105836T1

Description

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Descrição “Derivados de epotilona modificados em 12,13” A presente invenção diz respeito a compostos de fórmula estrutural

Ri í π em que o símbolo Q representa um grupo de fórmula estrutural

o substituinte G é seleccionado entre o conjunto constituído por grupos alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído,

| heterociclo, ^ ; o símbolo W representa um átomo de 0 ou um grupo de fórmula geral NRi6; o símbolo X representa um átomo de 0 ou S ou um grupo de fórmula geral CHRi7 ou H,Ris; o substituinte Y é seleccionado entre o conjunto constituído por átomos de 0 ou grupos Η, Η; H, OR22; OR23, OR23; NOR24; H, NOR25; H, NR26R27; NHNR28R29; H, NHNR30R31 ou CHR32; em que o grupo representado por OR23, OR23 pode ser um grupo cetal cíclico; os substituintes Bi e B2 são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos de fórmula geral OR33, OCOR34, OCONR35R36, NR37R38 e NR39CONR40R41 ; o substituinte D é seleccionado entre o conjunto constituído por grupos NR42R43 e heterociclo; o substituinte M é seleccionado entre o conjunto constituído por átomos de S e grupos C=0, S=0, SO2 e NR44; 2 os substituintes Ri, R2, R3 e R4 são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo inferior; os substituintes R5, Rs, R9, Rio e Rn são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo e heterociclo substituído; os substituintes Rn, Ris, R22 e R23 são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo e alquilo substituído; os substituintes R24, R25, R26, R28, R30, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R39, R40Í R41, R42, R51, R52 e R53 são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo, alquilo substituído, arilo e arilo substituído; os substituintes R42, Rn, R27, R29, R31, R38, R43 e R44 são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo, alquilo substituído, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, RsiC=0, R520C=0, R53SO2, hidroxi, O-alquilo e O-alquilo substituído; no caso de o símbolo X representar um átomo de 0, então o símbolo R16 não representa um grupo RsiC=0, Rs20C=0 e Rs3S02; e a qualquer um dos seus sais, solvatos ou hidratos.

Estes compostos podem ser utilizados em composições farmacêuticas, especialmente nas aplicáveis ao tratamento do cancro.

As epotilonas são compostos macrólidos com utilidade no campo farmacêutico. Por exemplo, concluiu-se que as epotilonas A e B que satisfazem as fórmulas estruturais:

Epotilona A R = H

Epotilona B R = Me exercem efeitos estabilizadores dos microtúbulos semelhantes aos do TAXOL e consequentemente que possuem actividade citotóxica 3 contra células de proliferação rápida, tais como as células de tumores ou de outras doenças celulares hiperproliferativas; veja-se Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, 35, n° 13/14.

Seguidamente, apresentar-se-ão as definições de diversos termos utilizados para a descrição da presente invenção. Estas definições são aplicáveis aos termos utilizados ao longo da presente memória descritiva, quer individualmente quer enquanto parte constituinte de um grupo maior, salvo quando haja limitações de qualquer outro tipo em casos específicos. 0 termo “alquilo” designa grupos hidrocarbonados insubstituídos de cadeia linear ou ramificada que possuem entre 1 e 20 átomos de carbono e de preferência entre 1 e 7 átomos de carbono. A expressão “alquilo inferior” designa grupos alquilo insubstituídos com 1 a 4 átomos de carbono. O termo “alquilo substituído” designa um grupo alquilo substituído, por exemplo, por um a quatro substituintes, tais como, halo, fenilo, fenilo substituído, heterociclo, trifluorometilo, trifluorometoxi, hidroxi, alcoxi, cicloalcoxi, heterocicloxi, oxo, alcanoílo, ariloxi, alcanoiloxi, amino, alquilamino, aril-amino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, aminas dissubstituídas em que os dois substituintes amino são seleccionados entre grupos alquilo, arilo ou aralquilo, alcanoilamino, aroil-amino, aralcanoilamino, alcanoilamino substituído, arilamino substituído, aralcanoilamino substituído, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, alquiltiono, aril-tiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquil-sulfonilo, sulfonamido (v.g., SO2NH2), sulfonamido substituído, nitro, ciano, carboxi, carbamilo (v.g., CONH2), carbamilo substituído (v.g., CONH-alquilo, CONH-arilo, CONH-aralquilo ou os casos em que há dois substituintes no átomo de azoto seleccionados entre grupos alquilo, arilo ou aralquilo), alcoxicarbonilo, arilo, arilo substituído, guanidino e heterociclos, tais como indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo e semelhantes. Nos casos anteriores em que se indica 4 que o substituinte também é substituído, então sê-lo-á com átomos de halogénio ou grupos alquilo, alcoxi, arilo ou aralquilo. 0 termo “halogénio” ou “halo” designa átomos de flúor, cloro, bromo e iodo. 0 termo “arilo” designa grupos hidrocarbonados aromáticos monocíclicos ou bicíclicos que possuem entre 6 e 12 átomos de carbono na porção do anel, tais como os grupos fenilo, naftilo, bifenilo e difenilo, cada um dos quais pode ser substituído. 0 termo “aralquilo” designa um grupo arilo ligado directamente através de um grupo alquilo, tal como benzilo. 0 termo “arilo substituído” designa um grupo arilo substituído, por exemplo, um a quatro substituintes, tais como alquilo, alquilo substituído, halo, trifluorometoxi, trifluorometilo, hidroxi, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloxi, alcanoílo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, hetero-cicloamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, ciclo-alquiltio, heterociclotio, ureído, nitro, ciano, carboxi, carboxi-alquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido, ariloxi e semelhantes. 0 substituinte pode ainda ser substituído por grupos halo, hidroxi, alquilo, alcoxi, arilo, arilo substituído, alquilo substituído ou aralquilo. 0 termo “cicloalquilo” designa sistemas de anéis hidrocarbonados cíclicos, saturados e facultativamente substituídos que possuem, de preferência, entre 1 e 3 anéis e entre 3 e 7 átomos de carbono por anel, os quais podem ser ainda fundidos com um anel carbocíclico(C3-C7) insaturado. Como grupos exemplificativos refere-se ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, ciclo-octilo, ciclodecilo, ciclododecilo e adamantilo. Como substituintes exemplificativos refere-se um ou vários grupos alquilo, conforme descritos antes, ou um ou vários dos grupos que foram descritos anteriormente como substituintes de alquilo.

Os termos “heterocíclico” e “heterociclo” designam um grupo cíclico facultativamente substituído, totalmente saturado ou insaturado e aromático ou não aromático, o qual é, por exemplo, 5 um sistema de anéis monociclico com 4 a 7 membros, biciclico com 7 a 11 membros ou triciclico com 10 a 15 membros que possui pelo menos um heteroátomo pelo menos num anel que possui átomos de carbono. Cada um dos anéis do grupo heterocíclico que contém um heteroátomo pode possuir 1, 2 ou 3 heteroátomos seleccionados entre átomos de azoto, átomos de oxigénio e átomos de enxofre, em que os heteroátomos de azoto e enxofre podem ainda ser facultativamente oxidados e os heteroátomos de azoto podem ainda ser facultativamente quaternizados. O grupo heterocíclico pode estar ligado a qualquer heteroátomo ou átomo de carbono.

Como exemplos de grupos heterocíclicos monocíclicos refere-se os seleccionados entre pirrolidinilo, pirrolilo, indolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotia-zolidinilo, furilo, tetra-hidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo, oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, 2-oxazepinilo, azepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, N-oxo-piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, tetra-hidrotiopiranil--sulfona, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiomorfolinil-sulfóxido, tiomorfolinil-sulfona, 1,3-dioxolano, tetra-hidro-1,1-dioxotienilo, dioxanilo, isotiazolidinilo, tietanilo, tiiranilo, triazinilo, triazolilo e semelhantes.

Como exemplos de grupos heterocíclicos bicíclicos refere-se os seleccionados entre benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzotienilo, quinuclidinilo, quinolinilo, quinolinil-N-óxido, tetra-hidro-isoquinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, cromonilo, coumarinilo, cinolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo [ 2,3-c]piridinilo, furo[3,1-b]piridinilo] ou furo[2,3-b]-piridinilo), di-hidroisoindolilo, di-hidroquinazolinilo (tal como 3,4-di-hidro-4-oxo-quinazolinilo) , benzisotiazolilo, benzisoxazolilo, benzodiazinilo, benzofurazanilo, benzotiopiranilo, benzotriazolilo, 6 benzpirazolilo, di-hidrobenzofurilo, di-hidrobenzotienilo, di--hidrobenzotiopiranilo, di-hidrobenzotiopiranil-sulfona, di--hidro-benzopiranilo, indolinilo, isocromanilo, isoindolinilo, naftiridinilo, ftalazinilo, piperonilo, purinilo, piridopiridilo, quinazolinilo, tetra-hidroquinolinilo, tienofurilo, tienopiridilo, tienotienilo e semelhantes.

Como substituintes exemplificativos refere-se um ou vários grupos alquilo, conforme descritos antes, ou um ou vários dos grupos que foram descritos anteriormente como substituintes de alquilo. Também se refere os heterociclos mais pequenos, tais como os epóxidos e as aziridinas. 0 termo “heteroátomos” deverá designar os átomos de oxigénio, enxofre e azoto.

Os compostos de fórmulas estruturais I e II podem formar sais como metais alcalinos, tais como sódio, potássio e litio, com metais alcalino-terrosos, tais como cálcio e magnésio, com bases orgânicas, tais como diciclo-hexilamina, tributilamina, piridina, e com aminoácidos, tais como arginina, lisina e semelhantes. Tais sais podem ser obtidos, por exemplo, através da permuta dos protões do ácido carboxilico dos compostos de fórmulas estruturais I e II, no caso de conterem um ácido carboxilico, com o ião desejado, num meio em que o sal precipite ou num meio aquoso, seguindo-se a evaporação. Conforme é do conhecimento dos especialistas na matéria, também é possível formar outros sais.

Os compostos de fórmulas estruturais I e II formam sais com diversos ácidos orgânicos e inorgânicos. Tais sais compreendem aqueles que se formam com ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido metano-sulfónico, ácido hidroxietano-sulfónico, ácido sulfúrico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido maleico, ácido benzeno-sulfónico, ácido tolueno-sulfónico e vários outros (v.g., nitratos, fosfatos, boratos, tartratos, citratos, succinatos, benzoatos, ascorbatos, salicilatos e semelhantes). Tais sais são obtidos fazendo reagir um composto de uma das fórmulas estruturais I e II com uma quantidade equivalente do ácido num meio no qual o sal precipite ou num meio aquoso, seguindo-se a evaporação. 7

Além disso, também se formam iões simétricos (“sais internos”) . Os compostos de fórmulas estruturais I e II também podem apresentar-se sob a forma de pró-fármacos. Qualquer composto que seja convertido em vivo para proporcionar o agente bioactivo (isto é, o composto de uma das fórmulas estruturais I e II) é um pró--fármaco de acordo com o âmbito e o espirito da invenção.

Por exemplo, os compostos de fórmulas estruturais I e II podem formar um radical éster carboxilato. De uma forma conveniente, os ésteres carboxilato são obtidos por esterificação de qualquer uma das funcionalidades ácido carboxílico existentes na(s) estrutura(s) do anel descrito. Há várias formas de pró-fármacos que são bem conhecidas na especialidade. Para consulta de exemplos de tais derivados pró--fármacos, veja-se: a) Design of Prodrugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) e

Methods in Enzymology, Vol. 4_2, págs. 309-396, editado por K.

Widder, et al. (Academic Press, 1985); b) A Textbook of Drug Design and Development, editado por Krosgaard--Larsen e H. Bundgaard, Capitulo 5, “Design and Application of Prodrugs”, por H. Bundgaard, págs. 113-191 (1991); c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8_, 1-38 (1992); d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988) e e) N. Kakeya, et al., Chem Phar Buli, 32, 692 (1984).

Faz-se ainda observar que os solvatos (v.g., hidratos) dos compostos de fórmulas estruturais I e II também estão abrangidos no âmbito da presente invenção. De um modo geral, os métodos para a preparação de solvatos são conhecidos na especialidade.

Os compostos de fórmulas estruturais I e II são agentes estabilizadores dos microtúbulos. Sendo assim, são úteis para o tratamento de uma grande variedade de cancros, incluindo (mas sem que isso constitua qualquer limitação) os seguintes: - carcinomas, incluindo os da bexiga, mama, cólon, rim, fígado, pulmão, ovário, pâncreas, estômago, cérvix, tiróide e pele, incluindo o carcinoma das células escamosas; - tumores hematopoiéticos de linhagem linfóide, incluindo leucemia, leucemia linfocitica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma das células B, linfoma das células T, linfoma de Hodgkins, linfoma não Hodgkins, linfoma das células pilosas e linfoma de Burketts; - tumores hematopoiéticos de linhagem mielóide, incluindo as leucemias mielogénicas aguda e crónica e a leucemia promielocítica; tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma e rabdomiossarcoma; - outros tumores, incluindo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, neuroblastoma e glioma; - tumores dos sistemas nervosos central e periférico, incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma e schwanomas; - tumores de origem mesenquimal, incluindo fibrossarcoma, rabdo-miossarcoma e osteossarcoma e outros tumores, incluindo melanoma, xenoderma pigmentoso, ceratoacantoma, seminoma, cancro folicular da tiróide e teratocarcinoma .

Os compostos de fórmulas estruturais I e II também podem inibir a angiogénese tumoral, afectando assim o crescimento dos tumores. Tais propriedades anti-angiogénicas dos compostos de fórmulas estruturais I e II também podem ser úteis para o tratamento de determinadas formas de cegueira relacionadas com a vascularização retinal, de artrite, especialmente a artrite inflamatória, de esclerose múltipla, restenose e psoríase.

Os compostos de fórmulas estruturais I e II podem induzir ou inibir a apoptose que é um processo fisiológico de morte celular critico para o desenvolvimento normal e a homeostase. As alterações dos circuitos apoptóticos contribuem para a patogénese de uma grande variedade de doenças humanas. Os compostos de fórmulas estruturais I e II, enquanto moduladores da apoptose, irão ser úteis para o tratamento de diversas doenças humanas com aberrações ao nível da apoptose, incluindo o cancro (em particular, mas sem que isso constitua qualquer limitação, linfomas foliculares, carcinomas com mutações em p53, tumores da mama, da próstata e 9 dos ovários dependentes de hormonas e lesões pré-cancerosas, tais como polipose adenomatosa familiar), infecções virais (incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, virus do herpes, poxvirus, virus de Epstein-Barr, virus de Sindbis e adenovirus), doenças de natureza autoimunitária (incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, lúpus eritematoso sistémico, glomerulo-nefrite mediada por via imunitária, artrite reumatóide, psoríase, doenças intestinais inflamatórias e diabetes mellitus de natureza autoimunitária), distúrbios neurodegenerativos (incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, doença de Alzheimer, demência associada a SDNI (em inglês NIDS), doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, retinite pigmentosa, atrofia muscular espinal e degeneração cerebelar), SIDA, síndromas mielodisplásicas, anemia aplásica, lesão isquémica associada a enfartes do miocárdio, apoplexia e lesão de reperfusão, arritmia, aterosclerose, doenças hepáticas induzidas por toxinas ou por álcool, doenças hematológicas (incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação anemia crónica e anemia aplásica), doenças degenerativas do sistema músculo-esquelético (incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, osteoporose e artrite), rinossinusite sensível à aspirina, fibrose cística, esclerose múltipla, doenças renais e dor associada ao cancro.

Os compostos da presente invenção também são úteis em combinação com agentes e tratamentos anticancro e citotóxicos conhecidos, incluindo o tratamento por radiação. No caso de serem formulados em dose fixa, tais produtos combinados irão incorporar os compostos da presente invenção no intervalo de dosagem adiante descrito e o outro agente farmaceuticamente activo no intervalo de dosagem aprovado. Os compostos de fórmulas estruturais I e II podem ser utilizados sequencialmente com agentes e tratamentos anticancro e citotóxicos conhecidos, incluindo o tratamento por radiação, no caso de a utilização de uma formulação combinada ser inadequada. São especialmente úteis as combinações de fármacos citotóxicos em que o segundo fármaco escolhido actua numa fase 10 do ciclo celular, v.g., na fase S, diferente da dos compostos de fórmulas estruturais I e II da presente invenção, os quais exercem os seus efeitos na fase G2-M.

Os compostos da presente invenção podem existir sob a forma de múltiplos isómeros ópticos, isómeros geométricos ou estereoisómeros. A presente invenção abrange todos estes isómeros e suas misturas sob a forma racémica.

Os compostos da presente invenção podem ser formulados com um veiculo ou diluente farmacêutico para administração oral, intravenosa ou subcutânea. A composição farmacêutica pode ser formulada de um modo convencional, utilizando veículos, diluentes e aditivos sólidos ou líquidos que sejam adequados ao modo desejado de administração. Por via oral, os compostos podem ser administrados sob a forma de comprimidos, cápsulas, grânulos, pós e semelhantes. Os compostos são administrados num intervalo de dosagem compreendido entre cerca de 0,05 e 200 mg/kg/dia e de preferência inferior a 100 mg/kg/dia, numa dose única ou em 2 a 4 doses divididas. Métodos de preparação

Os compostos de fórmulas estruturais I e II são preparados de acordo com os esquemas seguintes. 11 11 Esquema 1

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Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0 e o símbolo Q representa um grupo aziridina (isto é, o símbolo M representa um grupo NR44) , podem ser preparados conforme ilustrado no esquema 1. Os compostos de fórmula estrutural IA podem ser obtidos por um processo de fermentação (veja-se, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, 35, n° 13/14) . É possível preparar um composto de fórmula estrutural 1B, em que o símbolo P4 representa um grupo protector de oxigénio, tal como um grupo trietilsililo, a partir de um composto de fórmula estrutural IA por métodos conhecidos (veja-se, por exemplo: Corey, E.J.; Venkateswarlu, A., J. Am. Chem. Soc. , (1972) 94, 6190). Os compostos de fórmulas estruturais 1C e 1D são preparados por tratamento com uma azida, tal como azida 12 de sódio, em solventes polares, tais como DMF. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 1E a partir de compostos de fórmulas estruturais 1C e 1D por meio da reacção de Staudinger (veja-se, por exemplo: Ittah, Y., et ai., J. Org. Chem., (1978) 43, 4271). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 1F, em que o símbolo R44 não representa um átomo de H, a partir de um composto de fórmula estrutural 1E, utilizando para tal métodos conhecidos na especialidade. A desprotecção de um composto de fórmula estrutural IF utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo P4 representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, proporciona um composto de fórmula estrutural I (1G), em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0, o símbolo Q representa um grupo aziridina (o símbolo M representa um grupo NR44) e os símbolos R4, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes.

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Em alternativa, é possível preparar um composto de fórmula estrutural 1E conforme se ilustra no esquema 2. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 2A, em que o símbolo Pi representa um grupo protector de oxigénio, tal como trietilsililo, a partir de um composto de fórmula estrutural 1B por reacção de cloreto de tungsténio (VI) e n-butil-lítio (veja-se, por exemplo: 13

Sharpless. K. B., et al., J. Am. Chem. Soe., (1972) 94, 6538) em THF. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 2B a partir de um composto de fórmula estrutural 2A por adição de um grupo N-tolueno-sulfonamido, de acordo com o método de Evans (isto é, Evans, D.A., et al., J. Orq. Chem., (1991) 56, 6744). Por desprotecção de um composto de fórmula estrutural 2B, utilizando iodeto de samário em THF/1,3-dimetil-3,4,5,6-tetra-hidro-2(1H)--pirimidinona, obtém-se um composto de fórmula estrutural 1E (veja-se, por exemplo: Vedejs, E., et al., J. Org. Chem., (1994) 59, 1602) . Além disso, é possível preparar um composto de fórmula estrutural 1B a partir de um composto de fórmula estrutural 2A por oxidação (veja-se, por exemplo: Balog, A., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., (1996) 35, 2801) .

Esquema 3

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Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0 e o símbolo Q representa um grupo tiirano (isto é, o símbolo M representa um átomo de S), podem ser preparados conforme se ilustra no esquema 3. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 4A a partir de um composto de fórmula estrutural 1B, utilizando para tal tiocianato de potássio numa solução alcoólica (veja-se, por exemplo: Culvenor, C.C.J., et al., J. Chem. Soc., 14 (1946) 1050). Por desprotecção de um composto de fórmula estrutural 4A, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, obtém-se um composto de fórmula estrutural I (4B), em que o símbolo o símbolo X representa um átomo de O, o símbolo W representa um átomo de O, 0 símbolo Q representa um grupo tiirano (isto é, 0 símbolo M representa um átomo de S) e os símbolos Ri, r2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes. A oxidação suave de um composto de fórmula estrutural 4A, utilizando uma quantidade estequiométrica ou em excesso de ácido 3-cloroperoxibenzóico, proporciona compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo M representa um grupo S=0 ou SO2, respectivamente.

Esquema 4

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Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de O, o símbolo W representa um átomo de 0 e o símbolo Q representa um grupo oxetano, podem ser preparados 15 conforme ilustrado no esquema 4. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 5A a partir de um composto de fórmula estrutural 1B, em que o símbolo R5 representa um grupo metilo, utilizando 2,2,6,6-tetrametilpiperidida de lítio e cloreto de dietil-alumínio em benzeno (veja-se, por exemplo: Paquette, L.A., et al., J. Org. Chem., (1990) 55, 1589). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 5B a partir de um composto de fórmula estrutural 5A por hidroboração e oxidação (veja-se, por exemplo: Uzarewicz, A., et al., Rocz. Chem., (1977) 51, 723). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 5C a partir de um composto de fórmula estrutural 5B por tratamento com cloreto de tolueno-sulfonilo (TsCl) em piridina. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 5D a partir de um composto de fórmula estrutural 5C por meio de uma reacção intramolecular de Williamson, de acordo com o método de Moulines (isto é, Moulines, B.J., Leclercq, D., Picard, P., Synthesis, (1981) 550). A desprotecção de um composto de fórmula estrutural 5D, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, proporciona um composto de fórmula estrutural I (5E), em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0, o símbolo Q representa um grupo oxetano e os símbolos Ri, R2, R3, FU e Rs possuem as significações definidas antes. 16 Esquema 5

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Em alternativa, os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo Q representa um grupo oxetano, podem ser preparados conforme ilustrado no esquema 5. É possível preparar compostos de fórmulas estruturais 6B e 6C a partir de um composto de fórmula estrutural 2A submetendo um composto carbonilado de fórmula estrutural 6A a uma reacção de Paterno-Buchi (veja-se, por exemplo: Arnold, D.R., et al., Org. Photochem. Synth. (1971) 1, 51). Por desprotecção dos compostos de fórmulas estruturais 6B e 6C, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, obtém-se um composto de fórmula estrutural I (6D e 6E) , em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0, o símbolo Q representa um grupo oxetano e os símbolos Ri, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes. 17

Esquema 6 17 Ri

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Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0 e o símbolo Q representa um grupo ciclobutano (isto é, o símbolo L representa um grupo de fórmula geral CR14R15), podem ser preparados conforme ilustrado no esquema 6. É possível preparar compostos de fórmulas estruturais 7B e 7C a partir de um composto de fórmula estrutural 2A por cicloadição [2+2] de um composto ceteno substituído de fórmula estrutural 7A (veja-se, por exemplo: Krapcho, A.P., J. Org. Chem., (1966) 31, 2030). Por desprotecção dos compostos de fórmulas estruturais 7B e 7C, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, obtém-se um composto de fórmula estrutural I (7D e 7E) , em que o símbolo X representa um átomo de O, o símbolo W representa 18 um átomo de 0, o símbolo Q representa um grupo ciclobutano e os símbolos Ri, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes.

Esquema 7

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Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0 e o símbolo Q representa um heterociclo anelar com 5 membros, podem ser preparados conforme ilustrado no esquema 7. É possível preparar compostos de fórmulas estruturais 8A e 8B a partir de um composto de fórmula estrutural 1B, em que o símbolo Rs representa um átomo de hidrogénio, por reacção de dietil-eterato de brometo de magnésio em diclorometano. É possível preparar compostos de fórmulas estruturais 8C e 8D a partir de compostos de fórmulas estruturais 8A e 8B por oxidação com clorocromato de piridínio em diclorometano (veja-se, por exemplo: White, J.D., et al., J. Org. Chem., (1995) 12, 3600). É possível preparar compostos de fórmulas estruturais 8F e 8G a partir de compostos de fórmulas estruturais 8C e 8D por adição de uma tioamida substituída de fórmula estrutural 8E (veja-se, por exemplo: Cauvin, P. Compt. Rend., (1973) 276C, 1453). Por desprotecção dos compostos de fórmulas estruturais 8F e 8G, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil--amónio em THF, obtém-se um composto de fórmula estrutural I (8H e 81), em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0, o símbolo Q representa um heterociclo com 5 membros e os símbolos Ri, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes. 20 Esquema 8 Ο 0V~Y 1 11 eh ο í yy y κχ~ 98 WV I 0?' 0 0 DPt Έ« r o-^"- X t/ 1 JL^.

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JOH _ . fórmula estrutural I, em que 0 símbolo X Os compostos cie iu 4_ '4_ ^ O, o símbolo W representa um átomo de O e representa um atomo ae v r- o símbolo Q representa um heterociclo com 6 membros, podem ser preparados conforme ilustrado no esquema 8. É possível preparar compostos de fórmulas estruturais 9B e 9C a partir de compostos de fórmulas estruturais 8C e 8D por reacção de dietil-zinco em THF com um aceitador de Michael de fórmula estrutural 9A, de acordo com o método de Hansen (isto é, Hansen, M.M., et al., Organometallics, (1987) 6, 2069). É possível preparar compostos de fórmulas estruturais 9D e 9E a partir de compostos de fórmulas 21 estruturais 9B e 9C por adição de hidroxilamina em etanol (veja-se, por exemplo: Chemistry of Heterocyclic Compounds, Wiley: Nova Iorque, 1974; Vol. 14, Partes 1-5). Por desprotecção de compostos de fórmulas estruturais 9D e 9E, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butilamónio em THF, obtém-se um composto de fórmula estrutural I (9F e 9G), em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0, o símbolo Q representa um heterociclo com 6 membros e os símbolos Ri, R2f r3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes. 21 Esquema 9 % li I . [ OP, è. O OP: ó

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Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0 e o símbolo G representa uma olefina dissubstituída em 1,2, podem ser preparados conforme ilustrado no esquema 10. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11C a partir de um composto de fórmula estrutural 11A e 11B, utilizando uma reacção convencional de olefinação à Wittig conhecida na especialidade (veja-se, por exemplo: Meng, D. et al., J. Org. Chem., (1996) 61, 7999). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11D a partir de um composto de fórmula estrutural 11C por adição de 24 um reagente metálico alilado, tal como brometo de alil-magnésio (Hoffmann, R.W. Angew. Chem. Int. Ed., Engl., (1982) 21, 555). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11E, em que o símbolo P2 representa um grupo trietilsililo, a partir de um composto de fórmula estrutural 11D por reacção de cloreto de trietilsililo em DMF de acordo com o método de Corey (veja-se, por exemplo: Corey, E.J.; Venkateswarlu, A., J. Am. Chem. Soc., (1972) 94, 6190). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11F a partir de um composto de fórmula estrutural 11E por reacção de ‘AD-mix-a‘ de acordo com o método de Sharpless (isto é, Sharpless, K.B. et al., J. Orq. Chem., (1992) 57, 2768). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11G a partir de um composto de fórmula estrutural 11F por clivagem oxidativa, utilizando tetracetato de chumbo em acetato de etilo (veja-se, por exemplo: C.A. Bunton em K.B. Wiberg, ed., Oxidation in Organic Chemistry, Parte A, Academic Press, Nova Iorque, 1965, pág. 367) . É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11H a partir de um composto de fórmula estrutural 111, utilizando para tal um agente redutor, tal como boro-hidreto de sódio em metanol. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 111 a partir de um composto de fórmula estrutural 11H por reacção de iodo, imidazole e trifenilfosfina em tolueno. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11J a partir de um composto de fórmula estrutural 111 por reacção de trifenilfosfina em aceto-nitrilo à temperatura de refluxo. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11K a partir de compostos de fórmulas estruturais 11J e 10G, recorrendo para tal à reacção convencional de olefinação à Wittig (veja-se, por exemplo: Bestmann, K.H. et al., Chem. Ber. (1979) 112, 1923). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11L a partir de um composto de fórmula estrutural 11K por desprotecção selectiva, utilizando AcOH em THF. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11M a partir de um composto de fórmula estrutural 11L por reacção de LiOH em t-butanol e água. É possível preparar um composto de fórmula estrutural IIP a partir de um composto de fórmula estrutural 25 11Μ, utilizando reagentes típicos de acoplamento por macrolactonação, tais como cloreto de 2, 4,6-triclorobenzoílo, trietilamina e 4--dimetilaminopiridina (veja-se, por exemplo: Inanaga, J. et al., Buli. Chem. Soc. Jpn., (1979) 52, 1989) . É possível preparar um composto de fórmula estrutural 11Q a partir de um composto de fórmula estrutural IIP por meio de uma reacção de acordo com o método de Yang (Yang, D. et al., J. Org. Chem., (1995) 60, 3887). É possível preparar um composto de fórmula estrutural I (UR), em que o símbolo X representa um átomo de O, o símbolo W representa um átomo de O, o símbolo G representa uma olefina dissubstituída em 1,2 e os símbolos Ri, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes, a partir de compostos de fórmulas estruturais IIP e 11Q, conforme descrito nos esquemas 1 a 9.

Esquema 11 Rã

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Os compostos de fórmula estrutural I, em que 0 símbolo X representa um átomo de O, o símbolo W representa um átomo de O e o símbolo G representa uma amina Ν,Ν-substituída, tal como descrito antes, podem ser preparados conforme ilustrado no esGuema E possível preparar um composto de fórmula estrutural a partir de um composto de fórmula estrutural 11R por adição de grupos protectores de oxigénio (Pi) , tais como t-butildimetils1·*-1·*·0'' Por métodos conhecidos na especialidade, seguindo-se a ozonolise em 26 diclorometano. Por aminação redutiva do composto de fórmula estrutural 12A com um composto de fórmula estrutural 12B, utilizando reagentes convencionais, tais como triacetoxiboro-hidreto de sódio em ácido acético/diclorometano, obtém-se um composto de fórmula estrutural 12C. A desprotecção de um composto de fórmula estrutural 12C, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo t-butildimetilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, proporciona um composto de fórmula estrutural I (12D), em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0, o símbolo G representa uma amina N,N-dissubstituída (isto é, o símbolo D representa um grupo de fórmula geral NR42R43) e os símbolos Ri, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes.

Esquema 12

O OH 0 O OPs ® ,jOPi

(Ver os esquemas 1 a 9} ISA

13B

J3tt 27

Os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0 e o símbolo G representa uma amida N,N-substituída, tal como definido antes, podem ser preparados conforme ilustrado no esquema 12. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 13A a partir de um composto de fórmula estrutural I, em que o símbolo G representa um grupo l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenilo, por protecção com cloreto de trietilsililo (o símbolo Pi representa um grupo trietilsililo) em DMF, recorrendo para tal a métodos conhecidos na especialidade, seguindo-se a ozonólise em diclorometano. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 13B a partir de um composto de fórmula estrutural 13C por reacção de bis-(trimetilsilil)-amida de sódio em THF e subsequente adição de clorotrimetilsilano para extinguir o enaolato de lítio intermediário (veja-se, por exemplo: House, H.O. et al., J. Org. Chem., (1971) 36, 2361). É possível preparar um composto de fórmula estrutural 13C a partir de um composto de fórmula estrutural 13B por ozonólise. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 13E a partir de compostos de fórmulas estruturais 13C e 13D, utilizando para tal agentes convencionais de acoplamento da ligação amida (isto é, DCC, BOP, EDC/HOBT, PiBrOP). A desprotecção de um composto de fórmula estrutural 13E, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, proporciona um composto de fórmula estrutural I (13F), em que o símbolo X representa um átomo de 0, o símbolo W representa um átomo de 0, o símbolo G representa uma amida N,N-dissubstituída e os símbolos Ri, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes. 28 Esquema 13

11R

14 A

148

O OH V

14C

Conforme se ilustra no esquema 13, os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo W representa um grupo de fórmula geral NR16, podem ser preparados a partir de compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo W representa um átomo de 0. E possível preparar um composto de fórmula estrutural 14A a partir de um composto de fórmula estrutural 11R por reacção de azida de sódio e tetraquis(trifenilfosfina)-paládio em THF/água. Por redução de um composto de fórmula estrutural 14A, utilizando para tal catalisador de Adam (Pt02> ou uma trialquilfosfina em etanol, obtém-se um composto de fórmula estrutural 14B. A ciclização intramolecular do composto de fórmula estrutural 14B, utilizando difenilfosforil-azida e bicarbonato de sódio ou 1-hidroxibenzo-triazole e 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida em DMF, proporciona um composto de fórmula estrutural I (14C), em que o símbolo W representa um grupo de fórmula geral NRie (o símbolo Ri6 representa um átomo de H). 29 Esquema 149-/^ B^riV0H -- 5 )¾ iγνγχo ÒH 5

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Ver os es5«eIlas 1 a 13

Os compostos de fórmula estrutural II podem ser preparados a partir de um composto de fórmula estrutural I, em que os símbolos Bi e B2 representam grupos hidroxilo, conforme ilustrado no esquema 14. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 15A a partir de compostos de fórmula estrutural I por adição de grupos formilo, utilizando para tal condições convencionais, tais como ácido fórmico, trietilamina e anidrido acético em diclorometano. A eliminação de um composto de fórmula estrutural 15A, utilizando para tal 1, 8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno em diclorometano, proporciona um composto de fórmula estrutural 15B. Por desprotecção de um composto de fórmula estrutural 15B, utilizando amónia em metanol, obtém-se um composto de fórmula estrutural II (15C) ·

Esquema 15

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Conforme se ilustra no esquema 15, os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de S ou di- 30 -hidrogénio, podem ser preparados a partir de compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de O. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 16A, em que o símbolo X representa um átomo de S, a partir de um composto de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de O, por reacção de cloreto de trietilsililo (Pi) por métodos conhecidos na especialidade, seguindo-se então a reacção do reagente de Lawesson em tolueno (veja-se, por exemplo: Nicolaou, K.C. et ai., J. Amer. Chem. Soc., (1990) 112, 6263). Por redução de um composto de fórmula estrutural I (16A), utilizando hidreto de trifenil-estanho e 2,2’-azobisisobutironitrilo em benzeno, e subsequente desprotecção por métodos convencionais, por exemplo, com ácido acético em THF (veja-se, por exemplo: Xicolaou, K.C. et al., Chem. Comm., (1995) 1583), obtém-se um composto de fórmula estrutural I (16B), em que o símbolo X representa di-hidrogénio.

Esquema 16

Ver os esquemas 1 a 13

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Em alternativa, conforme se ilustra no esquema 16, os compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa H,Ri8, podem ser preparados a partir de compostos de fórmula estrutural I, em que o símbolo X representa um átomo de 0. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 17A a partir de um composto de fórmula estrutural I por reacção de cloreto de trietilsililo em DMF, utilizando métodos convencionais conhecidos 31 na especialidade. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 17B a partir de um composto de fórmula estrutural 17A por reacção de hidreto de diisobutil-alumínio e depois anidrido acético, de acordo com o método de Dahanukar (isto é, Dahanukar, V.H. et al., J. Orq. Chem. (1996) 61, 8317). Por reacção de um composto de fórmula estrutural 17B com alquil-zinco (Ris^Zn em diclorometano, de acordo com o método de Rychnovsky (Rychnovsky, S.D. et al., J. Org. Chem. (1997) 62, 6460), obtém-se um composto de fórmula estrutural 17C. A desprotecção de um composto de fórmula estrutural 17C, utilizando, por exemplo, no caso de o símbolo Pi representar um grupo trietilsililo, ácido fluorídrico em acetonitrilo ou fluoreto de tetra-n-butil-amónio em THF, proporciona um composto de fórmula estrutural I (17D), em que o símbolo X representa H,Ri8 e os símbolos Ri, R2, R3, R4 e R5 possuem as significações definidas antes. 32

Esquema 17 32

tal como trietilsililo

O

R =s 4-nitrofenilo, fanilo e semelhantes

CP^ s: grupo protector de oxigénio, ÍSP

tal como TES Pí ssH

Os grupos hidroxilo de um composto de fórmula estrutural I, tal como IA (em que os símbolos Ri_4 representam grupos metilo e o símbolo R.6 representa um grupo 2-metil-4-tiazolilo) , podem ser facultativamente protegidos sob a forma, por exemplo, de éteres trietilsilílicos, recorrendo para tal a métodos conhecidos na especialidade. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 18B, em que o símbolo X representa um átomo de halogénio, a partir de um composto de fórmula estrutural 18A por tratamento com determinados sais halogeneto de metais, tais como brometo de magnésio. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 18C a partir de um composto de fórmula estrutural 18B por tratamento com um sal de azida metálica, tal como azida de lítio. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 18D 33 a partir de um composto de fórmula estrutural 18C por reacção à Mitsunobu, utilizando, por exemplo, trifenilfosfina e um ácido carboxilico, tal como ácido 4-nitrobenzóico. É possível preparar um composto de fórmula estrutural 18E a partir de um composto de fórmula estrutural 18D por hidrólise ou amoniólise do grupo éster, utilizando, por exemplo, uma solução de amónia em metanol. Facultativamente, é possível desproteger um composto de fórmula estrutural 18E, em gue o símbolo Pi representa um grupo protector de oxigénio, tal como um grupo trietilsililo, utilizando para tal ácido trifluoroacético em diclorometano, ou por outros métodos conhecidos na especialidade. Por redução do grupo azido e subsequente ciclização de um composto de fórmula estrutural 18E com um agente redutor, tal como uma triaril- ou trialquil-fosfina, obtém-se um composto de fórmula estrutural I, tal como 18F (em que os símbolos R1-4 representam grupos metilo e o símbolo 1¾ representa um grupo 2-metil-4-tiazolilo) .

Esquema 18

tal como TES

Em alternativa, é possível converter um composto de fórmula estrutural 18E, em que o símbolo Pi representa um grupo protector de oxigénio, num cloreto de alquil- ou aril-sulfonilo. Por redução do grupo azido e subsequente ciclização de um composto de fórmula estrutural 19A, utilizando um agente redutor, tal como uma triaril-ou trialquil-fosfina, ou utilizando hidrogénio e catalisador de 34

Lindlar (Pd, CaCc>3/Pb), obtém-se um composto de fórmula estrutural I, tal como 18F (em que os símbolos R1-4 representam grupos metilo e o símbolo R6 representa um grupo 2-metil-4-tiazolilo).

Esquema 19

?*) grupo protector de oxigénio 18F j tal como TES a® H

Em alternativa, é possível converter um composto de fórmula estrutural 18C, em que o símbolo Pi representa um grupo protector de oxigénio, num composto de fórmula estrutural 20A, em que o símbolo X representa um átomo de halogénio, por tratamento, por exemplo, com trifenilfosfina e um tetra-halogeneto de carbono. Por redução do grupo azido e subsequente ciclização de um composto de fórmula estrutural 20A, utilizando um agente redutor, tal como uma triaril- ou trialquil-fosfina, ou utilizando hidrogénio e catalisador de Lindlar (Pd, CaC03/Pb) , obtém-se um composto de fórmula estrutural I, tal como 18F (em que os símbolos R1-4 representam grupos metilo e o símbolo R6 representa um grupo 2--metil-4-tiazolilo).

Seguidamente descrever-se-á a determinação in vitro da actividade biológica dos compostos de fórmulas estruturais I e II.

Polimerização da tubulina in vitro

De acordo com o procedimento de Williams e Lee (veja-se Williams, R.C., Jr. e Lee, J.C. Preparation of tubulin from brain. 35

Methods in Enzymology 85, Pt. D: 376385, 1982), preparou-se tubulina do cérebro de vitela centrifugada duas vezes (2X) e guardou-se em azoto líquido antes da sua utilização. A quantificação do poder de polimerização da tubulina é possível de acordo com um procedimento modificado de Swindell et al. (veja-se Swindell, C.S., Krauss, N.E., Horwitz, S.B. e Ringel, I. Biologically active taxol analogues with deleted A-ring side chain substituents and variable C-2’configurations. J. Med. Chem. 34:1176-1184, 1991). Estas modificações têm como consequência, em parte, a expressão do poder de polimerização da tubulina sob a forma de uma concentração eficaz para qualquer composto em causa. De acordo com este método, adiciona-se concentrações diferentes de composto em tampão de polimerização (MES 0,1 M, EGTA 1 mM, MgCl2 0,5 mM, pH 6,6) a tubulina em tampão de polimerização a 37°C em cavidades de microcuvetes de um espectrofotómetro de UV de modelo DU 7400 da Beckman (Beckman Instruments). São utilizadas uma concentração final de proteína dos microtúbulos de 1,0 mg/mL e concentrações de composto geralmente de 2,5, 5,0 e 10 μΜ. Os declives iniciais da alteração da DO, medidos a cada 10 segundos, foram calculados pelo programa que acompanhava o instrumento depois de se ter definido manualmente os momentos inicial e final da região linear que abrange pelo menos 3 pontos temporais. Nestas condições, as variações lineares foram geralmente inferiores a 10-6, os declives estavam compreendidos entre 0,03 e 0,002 unidade de absorvência/ /minuto e a absorvência máxima foi de 0,15 unidade de absorvência. A concentração eficaz (CE0,oi) é definida como sendo a concentração interpolada capaz de induzir um declive inicial à taxa de 0,01 DO/minuto e é calculada de acordo com a equação: CEo,oi = concentração/declive. Os valores de CE0,oi são expressos sob a forma do valor médio com um desvio padrão obtido a partir de 3 concentrações diferentes. Os valores de CE0,oi para os compostos da presente invenção estão compreendidos no intervalo entre 0,01 μΜ e 1000 μΜ. 36

Citotoxicidade (in vitro)

Determinou-se a citotoxicidade em células HCT-116 de carcinoma do cólon humano por meio de um ensaio com MTS (3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-6-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfenil)-2H-tetrazólio, sal interno), conforme descrito por T.L. Riss et al. em “Comparison of MTT, XTT, and a novel tetrazolium compound MTS for in vitro proliferation and chemosensitivity assays”, Mol. Biol. Cell 3 (Supl.): 184a, 1992. Introduziu-se as células, à razão de 4 000 células/cavidade, em placas de microtitulação com 96 cavidades, ao fim de 24 horas adicionou-se os fármacos e depois efectuou-se a diluição sequencial. Manteve-se as células a incubar a 37°C durante 72 horas, período este ao fim do qual se adicionou o piqmento de tetrazólio, MTS, à razão de 333 μρ/ηΛ (concentração final) em combinação com o agente de acoplamento electrónico, o metossulfato de fenazina, à razão de 25 μΜ (concentração final). Há uma enzima desidrogenase nas células vivas que reduz o MTS até uma forma que absorve a luz a 492 nM, o que pode ser quantificado por via espectrofotométrica. Quanto maior a absorvência, tanto maior será o número de células vivas. Os resultados são expressos sob a forma de um valor CI5o, sendo esta a concentração de fármaco necessária para inibir a proliferação celular (isto é, absorvência a 450 nM) até 50% do valor das células de contraprova não tratadas. Os valores CI5o para os compostos da presente invenção estão compreendidos entre 0,01 e 1000 nM.

Como compostos preferidos refere-se os compostos de fórmulas estruturais I e II, em que o símbolo G representa um grupo de fórmula estrutural

o símbolo X representa um átomo de O ou S e o símbolo Y representa um átomo de O. 37 São mais preferíveis os compostos de fórmulas estruturais I e II em que o símbolo G representa um grupo de fórmula estrutural

Os exemplos seguintes ilustram a presente invenção.

Exemplo 1

[IS- [IR*, 3R* (E) , 7R*, 10S*, 11R*, 12R*, 16S*] ] -7, ll-Di-hidroxi-8, 8,10,12--tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4-oxa-17-aza-biciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A. [1R-[1R*,3S*(E),7S*,10R*,11S*,12S*,16S*]]-7,ll-Di-hidroxi-8,8,10,12--tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4,17-dioxa-biciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona [12,13-Epi Epotilona A] A uma solução de epotilona C (100 mg, 0,21 mmol) em CH3CN (2,5 mL) e Na2EDTA 0,0004 M (1,5 mL) , a 0°C, adicionou-se CF3COCH3 em excesso (1 mL) e depois 2KHS05 *KHS04 »K2S04 (peroximonossulf ato de potássio) (325 mg, 0,53 mmol) e NaHCC>3 (75 mg, 0,89 mmol). Agitou-se a mistura de reacção durante 35 minutos e depois tratou-se com sulfureto de dimetilo (0,50 mL) e água (3,75 mL) . Aqueceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente, extraiu-se com EtOAc (4 x 10 mL), secou-se sobre MgS04, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se o resíduo a cromatografia com EtOAc a 55%/hexano para se obter a epotilona A (59 mg, 57%) e o composto A (30 mg, 29%) com o aspecto de um sólido branco, m/z: 494 (M+H)+. 38 Β. [4S—[4R*, 7S*, 8R*,9R*,13S*,14S*,16R*(E)]]-13-Azido-4,8,14-tri- -hidroxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6-diona A uma solução de composto A (30 mg, 0,06 mmol) em EtOH (2,5 mL) adicionou-se NaN3 (24 mg, 0,36 mmol) e NH4C1 (2 mg, 0,04 mmol). Aqueceu-se a mistura de reacção a 60°C durante 2 dias. Concentrou-se a mistura de reacção e submeteu-se o resíduo a cromatografia com EtOAc a 60%/hexano para se obter o composto B (19 mg, 59%) com o aspecto de um óleo incolor, m/z: 537 (M+H)+. C. [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A uma solução de composto B (19 mg, 0,035 mmol) em THF (1,5 mL) adicionou-se PPh3 (12 mg, 0,047 mmol) e aqueceu-se a mistura de reacção a 60°C durante 14 horas. Concentrou-se a mistura de reacção e submeteu-se o resíduo a cromatografia com MeOH/EtOAc/Et3N (a 1:9:0,3) para se obter o composto em epígrafe (11 mg, 62%) com o aspecto de um sólido branco, m/z: 493 (M+H)+.

Exemplo 2

[IS—[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-l7-Formil-7,11-di--hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A uma solução de epotilona 1C (2 mg, 0,004 mmol) em acetona (0,2 mL) a 0°C adicionou-se 4-formil-2-metil~l, 3,4-tiadiazolina--5-tiona (1 mg, 0,006 mmol) e agitou-se a mistura de reacção 39 durante 1 hora (veja-se, por exemplo: Yazawa, H., Goto, S. Tetrahedron Lett., (1985) 26, 3703-3706). Concentrou-se a mistura de reacção e submeteu-se o resíduo a cromatografia com EtOAc a 65%/hexano para se obter o composto em epígrafe (0,8 mg, 38%) com o aspecto de uma película branca, m/z: 521 (M+H)+.

Exemplo 3

[IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-{l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--4-oxa-17-tiabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona

Dissolveu-se o composto IA (50 mg, 0,1 mmol) e tiocianato de amónio (25 mg, 0,33 mmol) em acetonitrilo (1,5 mL) e aqueceu-se, num recipiente fechado estanquemente, até 120°C durante 30 minutos. Separou-se a mistura de reacção por CLER (C18, tampão de 45% de acetonitrilo/55% de acetato de amónio, pH 6,8, com detecção UV a 254 nm) para se obter o composto em epígrafe (11 mg, 21%). m/z: 553 (M+H)+.

Exemplo 4

[1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-17-[Dimetilamino)--10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4--oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A uma solução de composto 1C (10 mg, 0,020 mmol) e N,N-di-metilglicina (2,3 mg, 0,022 mmol) em cloreto de metileno (0,20 mL) 40 adicionou-se uma quantidade catalítica de DMAP e depois acrescentou-se DCC (8,3 mg, 0,040 mmol), a °C. Aqueceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente e agitou-se durante 18 horas sob uma atmosfera de Ar. Purificou-se a mistura directamente por cromatografia intermitente (camada curta de S1O2, eluição em gradiente com 0% a 2% de metanol/clorofórmio) e depois purificou-se novamente por CLER de fase inversa (coluna ‘YMC S-50DS’ com 10 x 250 mm, A - 95% de água, 5% de MeCN, B = 95% de MeCN, 5% de água, 0%-100% de B/40 minutos/gradiente, caudal = 3 mL/minuto, tempo de retenção = 29 minutos) para se obter 3 mg do composto em epígrafe (26%), com o aspecto de um liofilizado branco, em conjunto com 4 mg do material de partida (40%). EMERBAR m/z 578,3287 (C30H47N3O6S, calculado 577,3186).

Exemplo 5

[IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--17-(3-metil-l-oxobutil)-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano--5,9-diona A uma solução de composto 1C (10 mg, 0,020 mmol) e trietilamina (10 L, 0,080 mmol) em cloreto de metileno (0,20 mL) adicionou-se cloreto de isovalerilo (3,0 μΕ, 0,024 mmol) a 0°C. Aqueceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente e agitou-se durante 1 hora sob uma atmosfera de Ar. Diluiu-se a mistura com cloreto de metileno (5 mL) e extinguiu-se com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) a 0°C. Recolheu-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se. Purificou-se o resíduo oleoso por cromatografia intermitente (SÍO2, 4,5 x 30 cm, eluição em gradiente de 25%-50% 41 de EtOAc-hexano) para se obter o composto em epígrafe (6 mg, 51%) com o aspecto de um sólido branco. EMERBAR m/z 577,3343 (C31H48N2O6S, calculado 576,3233).

Exemplo 6

[IS—[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazolil)-etenil]-17--(metilsulfonil)-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A uma solução de composto 1C (10 mg, 0,020 mmol) e piridina (8 μΕ, 0,10 mmol) em cloreto de metileno (0,20 mL) , sob uma atmosfera de Ar, adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (1,6 μΕ, 0,021 mmol) a -15°C. Manteve-se a mistura de reacção a -15°C e agitou-se durante 30 minutos. Diluiu-se a mistura com cloreto de metileno (5 mL) e extinguiu-se com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) a 0°C. Recolheu-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se. Purificou-se o resíduo oleoso por cromatografia intermitente (SÍO2, 4,5 x 30 cm, eluição em gradiente com 25%-50% de EtOAc-hexano) para se obter o composto em epígrafe (6 mg, 52%) com o aspecto de um sólido branco. EMERBAR m/z 571,2525 (C27H42N2O7S2, calculado 570,2433).

Exemplo 7

Me

Q OH O

U 42 [IS- [IR*, 3R* (E), 7R*, 10S*, 11R*, 12R*, 16S*] ] -N-Etil-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazolil)-etenil]--5,9-dioxo-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-17-carboxamida A uma solução de composto 1C (10 mg, 0,020 mmol) em EtOAc (0,20 mL) adicionou-se isocianato de etilo (1,9 μΕ, 0,024 mmol), a 0°C e sob uma atmosfera de Ar. Aqueceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente e agitou-se durante 30 minutos. Purificou-se a mistura directamente por cromatografia intermitente (SÍO2, 4,5 x 30 cm, eluição em gradiente com 0%-3% de metanol--clorofórmio) para se obter o composto em epígrafe (5,5 mg, 66%) com o aspecto de um sólido branco. EMERBAR m/z 564,3367 (C29H45N3O6S, calculado 563,3029).

Exemplo 8 \

[IS—[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12,17-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazolil)--etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A uma solução de composto 1C (10 mg, 0, 020 mmol) em THF (0,20 mL), sob uma atmosfera de Ar, adicionou-se esponja protónica (solução 0,05 M em THF, 4,2 μΕ, 0,021 mmol) e depois acrescentou-se sulfato de dimetilo (2,8 μΕ, 0,030 mmol) a -10°C. A seguir manteve-se a mistura de reacção sob agitação de um dia para o outro a 4°C. Purificou-se a mistura directamente por cromatografia intermitente (SÍO2, 4,5 x 30 cm, eluição em gradiente com 0%-3% de metanol-clorofórmio) para se obter o composto em epígrafe (5,0 mg, 40%) com o aspecto de um sólido branco. EMERBAR m/z 507, 2888 (C27H42N2O5S, calculado 506,2814). 43

Exemplo 9

Éster 1,1-dimetiletílico do ácido [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*, 12R*, 16S*]]-7,ll-Di-hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2--(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-5,9-dioxo-4-oxa-17-azabiciclo-[14.1.0]heptadecano-17-carboxílico

Adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (0,008 mmol, 1,8 mg) ao composto 1C (0,004 mmol, 2 mg) e trietilamina (0,0048 mmol, 0, 0007 mL) em THF (0,15 mL), à temperatura ambiente. Ao fim de 30 minutos, concentrou-se a mistura de reacção e purificou-se por cromatografia intermitente (50% EtOAc/hexano) para se obter o composto em epígrafe com o aspecto de um óleo límpido (1,8 mg). (M+H)+ 593.

Exemplo 10 (Exemplo de referência)

[IS-[IR*,3R*(E),10S*,11R*,12R*,16S*]]-ll-Hidroxi-8,8,10,12--tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4,18--dioxabiciclo[14.2.0]octadec-6 (E)-eno-5,9-diona 44 A. [1S-[1R*,3R*(E),10S*,11R*,12R*,16S*]]-ll-Hidroxi-8,8,10,12--tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4,17--dioxabiciclo[14.1.0]heptadec-6 (E)-eno-5,9-diona

Adicionou-se HCO2H (22,7 mmol, 0,85 mL) a uma solução de epotilona B (4,5 mmol, 2,3 g) , NEt3 (45,3 mmol, 6,3 mL) e N,N-di-metilaminopiridina (10 mmol, 1,2 g) em CH2CI2 (100 mL) à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura de reacção até -15°C e adicionou-se, gota a gota, (CH3C0)20 (22,7 mmol, 2,1 mL). Manteve-se a mistura de reacção a -15°C durante 15 minutos e depois à temperatura ambiente durante 30 minutos. Extinguiu-se a reacção com tampão a pH 7 (100 mL) e extraiu-se com CH2CI2 (3 x 100 mL) .

Lavou-se a fase orgânica combinada com HC1 IN (100 mL) e com uma solução saturada de NaHC03 (100 mL) , secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se para se obter o bis-formato de epotilona B com o aspecto de um sólido branco, o qual foi utilizado no passo subsequente sem mais purificação. Adicionou-se, gota a gota, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (44,7 mmol, 6,7 mL) ao bis-formato impuro em CH2CI2 (125 mL) , à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura de reacção durante 1 hora, extinguiu-se com tampão a pH 4 (200 mL) e extraiu-se com CH2CI2 (3 x 200 mL). Lavou-se a fase orgânica combinada com uma solução saturada de NaHC03 (200 mL) , secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se para se obter um óleo viscoso, o qual se retomou em MeOH (95 mL) e se tratou com NH3 (solução 2 M em MeOH, 21,9 mmol, 11 mL). Manteve-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 4 horas, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (60% de EtOAc/hexano até EtOAc puro) par se obter o composto A com o aspecto de um sólido branco (2,05 g, 92% em 3 passos). (M+H)+ 490. B. [1S-[1R*,3R*(E),10S*,11R*,12R*,16S*]]-11-Trietilsililoxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazolil)-etenil]--4,17-dioxabiciclo[14.1.0]heptadec-6 (E)-eno-5,9-diona

Adicionou-se Et3SiCl (10,8 mmol, 1,8 mL) a composto A (1,08 mmol, 529 mg), N,N-diisopropiletilamina (16,2 mmol, 2,8 mL) e N,N-di-metilaminopiridina (1,08 mmol, 132 mg) em CH2CI2 (10 mL) à temperatura 45 ambiente. Depois aqueceu-se a mistura de reacção a 45°C durante 12 horas, extinguiu-se com tampão a pH 4 (50 mL), extraiu-se com CH2CI2 (3 x 25 mL) , secou-se sobre Na2S04, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (hexano até 20% de EtOAc/hexano) para se obter o composto B com o aspecto de um sólido branco (590 mg). (M+H)+ 604. C. [7R,8S,9S,14S,16S(E)]-14-Hidroxi-13-hidroximetil-8—trietil-sililoxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-l-oxa-3 (E)-ciclo-hexadeceno-2,6-diona

Ao longo de 20 minutos adicionou-se, gota a gota, 2,2,6,6--tetrametilpiperidida de dietil-alumínio [1,5 mL de uma solução 0,28 M em benzeno, mantida a 0°C, 0,42 mmol; preparado pelo método de Paquette, L.A. et al. J. Org. Chem. 1990, 55, 1589; adição progressiva de n-BuLi (1,1 mmol ou 0,68 mL de solução 1,6 M em hexano) e cloreto de dietil-aluminio (1,1 mmol, 1,1 mL de uma solução 1,0 M em hexano) a 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (1,1 mmol, 0,15 mL) em benzeno (2,0 mL) a 0°C] a composto B (0,18 mmol, 109 mg) em benzeno (2,0 mL) , a 0°C. Extinguiu-se a mistura de reacção com uma solução saturada de NH4C1 (8 mL) , extraiu-se com CH2CI2 (3 x 10 mL), secou-se sobre Na2S04, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (25% de EtOAc/hexano) para se obter o álcool 13,14-alílico com o aspecto de um óleo limpido (70 mg, 64%) . (M+H)+ 604.

Adicionou-se, gota a gota, BH3»THF (0,35 mmol, 0,35 mL de uma solução 1,0 M em THF) ao intermediário de álcool 13,14-alílico em THF (4,0 mL) a -78°C. Agitou-se a mistura de reacção a -78°C durante 10 minutos e depois transferiu-se para um banho a 0°C. Ao fim de 4,6 horas, agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 10 minutos, diluiu-se com THF/EtOH (4,0 mL) e extinguiu-se por adição progressiva de tampão de fosfato a pH 7 (4,0 mL) e uma solução aquosa a 30% de H2O2 (4,0 mL). Agitou-se a mistura de reacção resultante à temperatura ambiente durante 17 horas, extraiu-se com CH2CI2 (3 x 10 mL) , secou-se sobre Na2S04, 46 concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (60%--75% de EtOAc/hexano) para se obter o composto C com o aspecto de um óleo límpido (51,2 mg, mistura a 2:1 de diastereómeros 13R/13S). (M+H)+ 622. D. [7R, 8S, 9S, 13R, 14S, 16S (E) ] -14-Hidroxi-13-p-tolueno-sulfoniloxi-metil-8-trietilsililoxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2-(2--metil-4-tiazolil)-etenil]-l-oxa-3(E)-ciclo-hexadeceno-2,6-diona

Adicionou-se cloreto de p-tolueno-sulfonilo (0,1 mmol, 19 mg) ao composto C (31 mg, 2:1 (trans:cis), 0,05 mmol) e a piridina (0,25 mmol, 0,02 mL) em CH2C12 (1,0 mL) à temperatura ambiente. Aqueceu-se a mistura de reacção a 35°C durante 16 horas e depois adicionou-se cloreto de p-tolueno-sulfonilo (0,1 mmol, 19 mg) e piridina (0,25 mmol, 0,02 mL). Ao fim de 4 horas, extinguiu-se a reacção com tampão a pH 4 (20 mL), extraiu-se com CH2C12 (3 x 10 mL) , secou-se sobre Na2SC>4, concentrou-se e purificou-se por cromatograf ia intermitente (entre 30% e 60% de EtOAc/hexano) paras e obter o tosilato com o aspecto de um óleo límpido (22,3 mg, 13R/13S = 2) e o material de partida que não reagiu (3,8 mg) . Separou-se os isómeros 13S e 13R (composto D) por cromatografia intermitente (Et20 puro). (M+H)+ 776 para os dois isómeros. E. [1S-[1R*,3R*(E),10S*,11R*,12R*,16S*]]-11-Trietilsililoxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--4,18-dioxabiciclo[14.2.0]octadec-6(E)-eno-5,9-diona

Adicionou-se NaH (60% em nujol, uma pitada, >0,053 mmol) ao composto D (41 mg, 0,053 mmol) em DMF (1,0 mL) , à temperatura ambiente. Ao fim de 20 minutos, extinguiu-se a reacção com uma solução saturada de NH4C1 (10 mL) , extraiu-se com CH2C12 (3 x 50 mL) , secou-se sobre Na2S04, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (entre 10% e 30% de EtOAc/hexano) para se obter o composto E, com o aspecto de um óleo límpido (11,3 mg). (M+H)+ 604. F. [1S-[1R*,3R*(E),10S*,11R*,12R*,16S*]]-ll-Hidroxi-8,8,10,12--tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4,18--dioxabiciclo[14.2.0]octadec-6 (E)-eno-5,9-diona

Adicionou-se ácido trifluoroacético (1 mL de uma solução a 20% em CH2CI2) ao composto E (0,011 mmol, 6,5 mg) em CH2CI2 (1 mL) a -20°C. Ao fim de 20 minutos, extinguiu-se a mistura de reacção com uma solução saturada de NaHC03 (1 mL) , extraiu-se com CH2CI2 (3 x 10 mL), secou-se sobre Na2S04, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (entre 20% e 60% de EtOAc/hexano com 1% de trietilamina) para se obter o composto em epígrafe, com o aspecto de um sólido branco (4,3 mg). (M+H)+ 490.

Exemplo 11 (Exemplo de referência)

[5S-[5R*(E),9R*,12S*,13R*,14R*]]-4,9,10,13,14,15,16,17-octa--hidro-9,13-di-hidroxi-2,10,10,12,14-pentametil-5-[l-metil-2-(2--metil-4-tiazolil)-etenil]-5H-oxaciclo-hexadecino[5,4-d]tiazole--7,11(8H,12H)-diona A. [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Bistrietil-sililoxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)- -etenil]-4,17-dioxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona

Adicionou-se EtaSiCl (4,15 mmol, 0,7 mL) a epotilona A (4,2 mmol, 205 mg), N,N-diisopropiletilamina (6,2 mmol, 1,1 mL) e imidazole (2,1 mmol, 141 mg) em DMF (5 mL) à temperatura ambiente. Depois aqueceu-se a mistura de reacção a 40°C durante 15,5 horas. Adicionou-se mais N,N-diisopropiletilamina (4,2 mmol, 0,720 mL) e EtsSiCl (2,1 mmol, 0,35 mL) e aqueceu-se a mistura de reacção a 60°C. Ao fim de 48 horas, concentrou-se a mistura de reacção e 48 purificou-se por cromatografia intermitente (entre 5% e 10% de EtOAc/hexano) para se obter o composto A com o aspecto de um óleo límpido (264 mg). (M+H)+ 722. B. [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,13S*,14S*,16R*(E)]-14-Bromo-13-hidroxi--4,8-bistrietilsililoxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2-(2--metil-4-tiazolil)-etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6-diona

Adicionou-se MgBr2»OEt2 (9,7 mmol, 2,5 g) ao composto A (6,45 mmol, 4,66 g) em CH2C12 (80 mL)a -78°C. Ao fim de 2 horas, aqueceu-se a mistura de reacção até 50°C e adicionou-se mais MgBr2»OEt2 (9,7 mmol, 2,5 g) . Aqueceu-se a mistura de reacção novamente até -30°C, manteve-se a esta temperatura durante 1 hora e depois aqueceu-se até -20°C, tendo sido acrescentado mais MgBr2»OEt2 (6,45 mmol, 1,7 g). Decorrida 1 hora, extinguiu-se a mistura de reacção com tampão fosfato a pH 7 (20 mL), extraiu-se com CH2CI2 (3 x 100 mL) , secou-se sobre Na2S04, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (30% de EtOAc/hexano) para se obter o composto B com o aspecto de um sólido branco (2, 95 g) . (M+H)+ 802. C. [4S-[4R*, 7S*, 8R*, 9R*, 13S*, 14S*, 16R* (E) ] —14—Bromo—4, 8-bistrietil-sililoxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6,13-triona

Adicionou-se clorocromato de piridínio (1,48 mmol, 320 mg) a composto B (0,37 mmol, 300 mg), piridina (3,7 mmol, 0,3 mL) e uma pequena quantidade de crivos moleculares de 4Â triturados em CH2C12 (3 mL) . Ao fim de 5 horas, diluiu-se a mistura de reacção com CH2C12 (50 mL) , filtrou-se através de uma camada curta de gel de sílica, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (5% de EtOAc/hexano) para se obter o composto C com o aspecto de um sólido branco (273 mg). (M+H)+ 800. 49 D. [5S-[5R*(E), 9R*,12S*,13R*,14R*]]-4,9,10,13,14,15,16,17-octa--hidro-9,13-bistrietilsililoxi-2,10,10,12,14-pentametil-5-[1--metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-5H-oxaciclo-hexadecino-[5,4-d]tiazole-7,11(8H,12H)-diona

Adicionou-se tioacetamida (0,03 mmol, 2,3 mg) ao composto C (0,015 mmol, 12 mg) e N,N- diisopropiletilamina (0,038 mmol, 0,006 mL) em etanol (0,3 mL) . Aqueceu-se a mistura de reacção a 80 °C durante 24 horas. Concentrou-se a mistura de reacção e purificou-se por cromatografia intermitente (50% a 75% de EtOAc/ /hexano) para se obter um intermediário de hidroxitiazolina (4,6 mg, 39%). (M+H)+ 795.

Adicionou-se progressivamente cloreto de metanossulfonilo (0,01 mmol, 0,0008 mL) e trietilamina (0,04 mmol, 0,006 mL) ao intermediário de hidroxitiazolina (0,005 mmol, 4,2 mg) em CH2C12 (0,175 mL) a 0°C. Depois removeu-se do banho de gelo o recipiente de reacção, agitou-se à temperatura ambiente durante 5 horas, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (18% de EtOAc/hexano) para se obter o composto D (1,2 mg). (M+H)+ 777. E. [5S-[5R*(E),9R*,12S*,13R*,14R*]]-4,9,10,13,14,15,16,17-octa--hidro-9,13-di-hidroxi-2,10,10,12,14-pentametil-5-[l-metil-2-(2--metil-4-tiazolil)-etenil]-5H-oxaciclo-hexadecino[5,4-d]tiazole--7,11(8H,12H)-diona

Adicionou-se ácido trifluoroacético (0,150 mL de uma solução a 40% em CH2C12) ao composto D (0,0036 mmol, 2,8 mg) em CH2C12 (0,150 mL) a 0°C. Ao fim de 20 minutos, concentrou-se a mistura de reacção e purificou-se por cromatografia intermitente (80% de EtOAc/hexano) para se obter o composto em epígrafe (1,8 mg). (M+H)+ 549. 50

Exemplo 12

[IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*1]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A. [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11S*,12R*,16S*]]—7,11—Bistrietil— sililoxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4,17-dioxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona

Adicionou-se EtsSiCl (25 mL, 149 mmol) a epotilona A (10,39 g, 21 mmol), N, iV-diisopropiletilamina (55 mL, 315 mmol) e imidazole (7,15 g, 105 mmol,) em DMF (75 mL) até 25°C. Depois aqueceu-se a mistura de reacção a 55°C durante 6,5 horas e concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Depois diluiu-se o resíduo com CH2CI2 (100 mL) , lavou-se os extractos orgânicos com NaCHCh (30 mL) , secou-se sobre Na2SC>4 e concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia intermitente (S1O2, 5,0 x 30 cm, eluição em gradiente com hexano até 15% de EtOAc/hexano) para se obter o composto A com o aspecto de um sólido branco [15,1 g, >95%. EM(IEP+): (M+H)+ 722. B. [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,13S*,14S*,16R*(E)]-14-Bromo-13-hidroxi--4,8-bistrietilsililoxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2-(2--metil-4-tiazolil)-etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6-diona A uma solução de composto A (2,0 g, 2,8 mmol) em CH3CI3 (30 mL) , a -20°C e sob uma atmosfera de Ar, adicionou-se MgBr2*OEt2 (3 x 1,1 g, total de 12 mmol) em três porções, de duas em duas horas, mantendo-se a temperatura interna entre -15°C e -5°C. Ao fim de 7 horas, extinguiu-se a mistura de reacção com tampão fosfato a 51 ρΗ 7 (40 mL) e salmoura (40 mL) , extraiu-se cuidadosamente com

EtOAc (3 x 10 mL) , secou-se (Na2SC>4) e concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia intermitente (SiC>2, 4,5 x 25 cm, eluição em gradiente com 10%-20% de EtOAc/ /hexano) para se obter o composto B com o aspecto de um sólido branco [1,0 g, 45% (67% com base em 0,6 g de material de partida recuperado; detectou-se < 2% do outro regioisómero C13-OH/C12-Br). EM (IEP+):(M+H)+ +802. C. [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,13S*,14R*,16R*(E)]—14—Azido—4,8—bis— trietilsililoxi—13—hidroxi—5,5,7,9-tetrametil-16-[1-metil-(2--metil-4-tiazolil)-etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6,diona A uma solução de composto B (0,17 g, 0,21 mmol) em DMF (2 mL) Ar adicionou-se azida de sódio (0,14 mg, 2,1 mmol) e depois aqueceu-se a suspensão resultante até 43°C. Ao fim de 36 horas removeu-se o solvente sob uma pressão hipobárica e purificou-se o resíduo directamente por cromatografia intermitente (SÍO2, 2,5 x 15 cm, eluição em gradiente com 10%-20% de EtOAc/hexano) para se obter o composto C (0,14 G, 88%) com o aspecto de uma espuma branca. EM (IEP+): (M+H)+765. D. [4S—[4R*,7S*,8R*,9R*,13R*,14R*,16R*(E)]—14—Azido—4,8—bistrietil— sililoxi—13—(4-nitrobenzoiloxi)-5,5,7,9-tetrametil-16-[1-metil--2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6-diona A uma solução de composto C (0,10 mg, 0,13 mmol) em THF, sob uma atmosfera de Ar, adicionou-se sequencialmente ácido 4--nitrobenzóico (55 mg, 0,33 mmol), trifenilfosfina (86 mg, 0,33 mmol) e azodicarboxilato de dietilo (52 mL, 0,33 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a 25°C durante 1,5 horas, concentrou-se sob uma pressão hipobárica e purificou-se o resíduo por cromatografia intermitente (SÍO2, 2,5 x 10 cm, eluição em gradiente com 10%-20% de EtOAc/hexano) para se obter o composto D (0,10 g, 85%) com o aspecto de uma espuma branca. EM (IEP)+: 914,6 (M+H)+. 52 E. [4S—[4R*, 7S*, 8R*, 9R*, 13R*, 14R*, 16R* (E) ] -14-Azido-4,8-bistrietil-sililoxi-13-hidroxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2 (2-metil-4--tiazolil)-etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6-diona

Tratou-se o composto D (0,10 mg, 0,11 mmol) com amónia 2,0 M em metanol (1 mL) a 25°C e sob uma atmosfera de Ar durante 4 horas. Removeu-se o solvente sob uma pressão hipobárica e purificou-se o residuo directamente por cromatografia intermitente (Si02, 1,5 x 10 cm, eluição em gradiente com 10%-30% de EtOAc/hexano) para se obter o composto E (50 mg, 60%) com o aspecto de uma espuma branca. EM (IEP)+: 763,3(M-H)~. F. [4S-[4R*, 7S*, 8R*,9R*,13R*,14R*,16R*(E)]]-14-Azido-4,8-13-tri--hidroxi-5,5,7,9-tetrametil-16-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-l-oxaciclo-hexadecano-2,6-diona

Tratou-se o composto E (15 mg, 0,20 mmol) com ácido trifluoro-acético a 20% em cloreto de metileno (0,2 mL) , a 0°C e sob uma atmosfera de Ar, durante 10 minutos. Concentrou-se a mistura de reacção sob uma corrente constante de azoto a 0°C e purificou-se o residuo directamente por cromatografia intermitente (Si02, 1 x 5 cm, eluição em gradiente com 0%-5% de MeOH/CHCÍ3) para se obter o composto F (9 mg, 86%) com o aspecto de uma película. EM (IEP) + : 537,3 (M-H)“. G. [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7-11-Di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazolil)-etenil]-4--oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A uma solução de composto F (9 mg, 17 mol) THF (0,2 mL) , sob uma atmosfera de Ar, adicionou-se trifenilfosfina (18 mg, 67 μιηοΐ) . Aqueceu-se a mistura de reacção até 45°C durante 4 horas e removeu-se o solvente sob um fluxo constante de azoto. Purificou-se o resíduo por cromatografia radial (1 mm de Si02, rotor GF, eluição em gradiente com 2%-10% de MeOH/CHCl3) para se obter o composto em epígrafe (4 mg, 50%) com o aspecto de uma película. 53

Exemplo 13 (Exemplo de referência)

[IS—[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16R*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A. [4S-[4R*, 7S*, 8R*, 9R*, 16R* (E) ] —4,8—di—hidroxi—5,5,7,9,13-penta-metil-16-[1-metil—2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-l-oxa-13(Z)— —ciclo—hexadeceno—2,6—diona [Epotilona D] A THF anidro (5 mL) , a -78°C e sob uma atmosfera de árgon, adicionou-se WCÍ6 (198 mg, 0,5 mmol) e depois nBuLi (0,625 mL de uma solução 1,6 M em hexano, 1,0 mmol) . Deixou-se a mistura de reacção aquecer até à temperatura ambiente ao longo de um período de 20 minutos. Removeu-se uma aliquota (0,50 mL, 0,05 mmol) do reagente de tungsténio, adicionou-se à epotilona B (9,0 mg, 0,018 mmol), sob uma atmosfera de árgon, agitou-se a mistura de reacção durante 15 minutos e depois extinguiu-se por adição de uma solução saturada de NaHC03 (1 mL) . Extraiu-se a mistura de reacção com EtOAc (3 mol). Secou-se os extractos combinados (Na2S04) e filtrou-se. Removeu-se os materiais voláteis sob uma pressão hipobárica. Submeteu-se o resíduo a cromatografia com 35% de EtOAc/hexano para se obter o composto A (7,0 mg, 0,014 mmol) com um rendimento de 80%. (M+H)+m/z: 492,3. B. [4S—[4R*,7S*,8R*,9R*,16R*(E)]]-4,8-Bistrietilsililoxi--5,5,7,9,13-pentametil-l6-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-l-oxa-13(Z)-ciclo-hexadeceno-2,6-diona [Bis-tietilsilil-Epotilona D] A uma solução de composto A (30 mg, 0,061 mmol) em CH2CI2 anidro (1,25 mL) , sob uma atmosfera de árgon, adicionou-se N,N--diisopropiletilamina (0,16 mL, 0,92 mmol, 15 eq.) e do cloreto 54 de trietilsililo (0,10 mL, 0,61 mL, 10 eq.). Agitou-se a mistura de reacção durante 18 horas. Arrefeceu-se a mistura de reacção até 0°C e depois adicionou-se 2,6-lutidina (0,021 mL, 0,18 mmol, 3 eq.), seguindo-se a adição de trifluorometano-sulfonato de trietilsililo (0,056 mL 0,24 mmol, 4 eq.). Agitou-se a mistura de reacção durante 0,5 hora, depois verteu-se sobre uma mistura a 1:1 de thO/solução saturada de NaHCCt (1 mL) e extraiu-se com CH2CI2 (3x1 mL) . Secou-se as camadas orgânicas combinadas (Na2S04) , filtrou-se e removeu-se os produtos voláteis. Submeteu-se o resíduo a cromatograf ia com 1% de Et20/CH2Cl2 para se obter 35 mg de composto B (rendimento de 80%) com o aspecto de um produto vítreo límpido, m/z: 720,5 (M+H)+. C. [IS—[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16R*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona A uma solução de dietil-zinco (0,24 mL de uma solução 1,0 M em heptano, 0,24 mmol, 5 eq.) em 1,2-dicloroetano (1,5 mL), a -15°C e sob uma atmosfera de árgon, adicionou-se cloroiodometano (0,035 mL, 0,48 mmol, 10 eq.) e agitou-se a mistura durante 10 minutos. Adicionou-se lentamente uma solução de composto B (35 mg, 0,048 mmol) em 1,2-diclotoetano (0,40 mL) e agitou-se a mistura de reacção durante 1,5 horas. Extinguiu-se a mistura de reacção por adição de uma solução saturada de NH4C1 (1,5 mL) e extraiu-se com CH2CI2 (3x2 mL) . Secou-se as camadas orgânicas combinadas (Na2S04) , filtrou-se e removeu-se os produtos voláteis sob uma pressão hipobárica. Adicionou-se ao resíduo ácido trifluoroacético a 15%/ /CH2CI2 (0,50 mL) e agitou-se a mistura de reacção durante 15 minutos. Removeu-se os produtos voláteis sob uma corrente de ar e submeteu-se o resíduo a cromatografia com 70% de EtOAc/hexano para se obter 2,2 mg de composto C (rendimento de 10% em dois passos) com o aspecto de uma película branca; m/z: 506,3 (M+H)+.

Em alternativa, adicionou-se hidróxido de sódio (0,3 mL de uma solução a 50% em H2O) a composto 1B (109 mg, 0,15 mmol), PhCH2 (CH3CH2) 3NCI (0,7 mg, 0, 002 mmol) e EtOH (0,03 mL) em CHBr3 55 (1,0 mL) . Aqueceu-se a mistura resultante a 40°C durante 2 horas. Diluiu-se a mistura de reacção castanha com H2O (30 mL) , extraiu-se com CH2CI2 (3 x 30 mL) , secou-se sobre Na2S04, concentrou-se e purificou-se por cromatografia intermitente (gradiente progressivo: 5% até 25% de Et20/hexano) para se obter um intermediário de di-bromociclopropano com o aspecto de um óleo castanho-claro (40 mg, rendimento de 30%). (M+H)+ 892,3.

Adicionou-se Bu3SnH (3,4 mmol, 0,91 mL) ao intermediário de dibromociclopropano (0,34 mmol, 305 mg) e 2,2-azobisisobutiro-nitrilo (0,034 mmol, 6 mg) em hexano (7,0 mL). Aqueceu-se a mistura de reacção a 70°C durante 5 horas. Concentrou-se a mistura de reacção e purificou-se por cromatografia intermitente (gradiente progressivo: hexano até 20% de Et20/hexano) para se obter um intermediário de ciclopropano reduzido com o aspecto de uma película límpida (228 mg, 91%). (M+H)+ 734,7.

Dissolveu-se o intermediário de ciclopropano anterior (0,31 mmol, 228 mg) em CF3C02H/CH2C12 (solução a 20% em volume, 10 mL) e agitou-se a -15°C durante 1,5 horas. Concentrou-se a mistura de reacção e purificou-se por cromatografia intermitente (70% de EtOAc/ /hexano) para se obter o composto C com o aspecto de um óleo límpido (111 mg, 71%). (M+H)+ 506,3. RMN-1]! (CDC13, 400 MHz) δ 7,04 (s, 1H) , 6, 64 (s, t—1 5, 16 (dd, O OD II •d , 3, 4 Hz, 1—1 4,17 (dd, II •o 5, 2 , 8 Hz, m 1—1 3, 79 -3, 83 (m, 1H), 3,23 (dq, , J=6, 7, 4, 5 Hz, 1H), 2,79 (s , 3H), 2, 52 (dd, J=15 ,1, 9 ,7 Hz, 1H) 2, , 41 (dd, J= =15,2, 2,9 Hz, 1H), 1, 98- -2 , 02 (m, 1H) , 2, 00 (s, 3H) , 1,63-1,73 (m, 1H) , 1, 40 -1,58 (m, - 5H) , 1, 36 (s, 3H) , 1,20- -1,33 (m, 1H), 1,11- -1,17 (m, 1H) , 1, 15 (d, J=6, 8 Hz f 3H) , 1,08 (s, 3H), 0,96 (d, J=7, 0 Hz, 3H), 0,94 (s, 3H) , 0,40- -0 ,54 (m, 1H) , 0,37 (dd, J=8,: 8, 4 , 1 Hz, 1H) , O 1 1—1 V 0 1 ,10) (m, 1H) . D. [IS—[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16R*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazolil)--etenil]-4-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona

Preparou-se uma suspensão de composto C (26 mg, 51 mmol) e azida de sódio (6,7 mg, 0,10 mmol) numa mistura de THF-H20 (a 56 2:1, 1,0 mL) e desgaseificou-se durante 15 minutos com azoto. Adicionou-se a esta mistura uma quantidade catalitica (12 mg, 10 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)-paládio(0), sob uma atmosfera de Ar. Aqueceu-se a mistura de reacção até 45°C durante 1 hora e arrefeceu-se até 25°C.

Tratou-se a solução homogénea amarela resultante directamente com uma solução 1,0 M de trimetilfosfina em THF (0,11 mL, 0,11 mmol) a 25°C e agitou-se a mistura de reacção durante 1 hora à temperatura ambiente.

Depois diluiu-se a mistura que continha aminoácidos, utilizando para tal MeCN-DMF (a 12:1, 1,9 mL) , arrefeceu-se até 0°C e tratou--se com hidrato de 1-hidroxibenzotriazole (7,0 mg, 51 mmol) e depois com cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (25 mg, 0,13 mmol). Aqueceu-se a mistura de reacção gradualmente até 25°C, agitou-se durante 3 horas, diluiu-se com H2O (5 mL) e extraiu-se com EtOAc (3x5 mL) . Lavou-se os extractos orgânicos com H2O (8 mL) , com uma solução aquosa saturada de NaHCCb (2 x 8 mL) e com uma solução aquosa saturada de NaCl (8 mL) . Secou-se os extractos orgânicos (Na2SC>4) e concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia radial (1 mm de SÍO2, rotor, 2% de MeOH-CHCl3) para se obter o composto em epígrafe (película, 3,0 mg, rendimento geral de 12%) em conjunto com uma quantidade mínima de um diastereómero (proporção de 5:1 determinada por ΚΜΝ-^) . (M+H) + 505,4.

Exemplo 14 C!

O OH O

[IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-17-Dicloro-7,11-di--hidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4--tiazolil)-etenil]-4-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona 57 A.[IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-Di-hidroxi--8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona

Preparou-se uma suspensão de epotilona B (5,06 g, 9,97 mmol) e azida de sódio (0, 777 g, 12,0 mmol) numa mistura de THF-H2O (a 5:1, 96 mL), desgaseificou-se durante 15 a 20 minutos com azoto e depois tratou-se com uma quantidade catalítica (1,2 g, 0,997 mmol) de tetraquis(trifenilfosfina)-paládio (0), sob uma atmosfera de Ar. Aqueceu-se a mistura de reacção até 45°C durante 20 minutos e arrefeceu-se até 25°C.

Tratou-se a solução homogénea amarela resultante directamente com uma solução 1,0 M de trimetilfosfina em THF (24,9 mL, 24,9 mmol) a 25°C e agitou-se a mistura de reacção durante 1 a 2 horas à temperatura ambiente.

Depois diluiu-se a mistura que continha aminoácidos, utilizando para tal MeCN-DMF (20:1, 450 mL) , arrefeceu-se até 0°C e tratou-se com hidrato de 1-hidroxibenzotriazole (1,35 g, 9,97 mmol) e depois com cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (4,78 g, 24,9 mmol). Aqueceu-se a mistura de reacção gradualmente até 25°C, agitou-se durante 12 horas e extraiu-se com EtOAc (4 x 200 mL) . Lavou-se os extractos orgânicos com H20 (400 mL) , com uma solução aquosa saturada de NaHCCh (400 mL) e com uma solução aquosa saturada de NaCl (400 mL) . Secou-se os extractos orgânicos (Na2S04) e concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia intermitente (Si02, 5, 0 x 25 cm, 2% de MeOH-CHCl3) e depois por CLER (coluna ‘YMC S-150DS’ com 50 x 500 mm, entre 38% e 95% de MeCN/H20, gradiente (40 minutos), caudal de 50 mL/minuto). Concentrou-se as fracções adequadas sob uma pressão hipobárica e liofilizou-se o resíduo a partir de uma solução aquosa de acetonitrilo para se obter o composto A (0,998 g, 20%) com o aspecto de um liofilizado branco. EM (IEP+): 507,2 (M+H)+; EM (IEP~) : 505, 4 (M-H)- . 58 B. [4S—[4R*, 7S*, 8R*,9R*,16R*(E)]]-4,8-di-hidroxi-5,5,7,9,13--pentametil-16-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-1-aza--13(Z)-ciclo-hexadeceno-2,6-diona

Adicionou-se cloreto de tungsténio (1,98 g, 5,00 mmol), de uma só vez, a THF previamente arrefecido (50 mL) a -78°C e agitou-se a mistura resultante durante 5 minutos. Adicionou-se n-BuLi (1,6 M em hexano, 6,25 mL, 10,0 mmol) à suspensão, que se manteve a -78°C durante 10 minutos e depois se aqueceu até à temperatura ambiente ao longo de 30 minutos. Depois de se manter 30 minutos à temperatura ambiente, adicionou-se à mistura de reacção o composto A (0,351 g, 0,690 mmol), com o auxilio de uma seringa. Decorridos 15 minutos, arrefeceu-se a mistura de reacção até 0°C, diluiu-se com acetato de etilo (10 mL) e extinguiu-se com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (15 mL). Extraiu-se a mistura de reacção com acetato de etilo (5 x 20 mL), secou-se sobre sulfato de sódio, concentrou-se e purificou-se por CLER de fase inversa (solvente A = 5:95, acetonitrilo:H2O, solvente B = 95:5, acetonitrilo:H2O; gradiente: 40%-100% de solvente B ao longo de 40 minutos; caudal: 40 mL/minuto, coluna ‘YMCODS S-15’ com 50 x 500 mm) para se obter o composto B (0,164 g, 36%) com o aspecto de um sólido branco. (M+H)+ 491,3. C. [4S-[4R*,7S*,8R*,9R*,16R*(E)]]-4,8-Bis(t-butildimetilsililoxi)--5,5,7,9,13-pentametil-l6-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-l-aza-13(Z)-ciclo-hexadeceno-2,6-diona A uma solução de composto B (19 mg, 0,039 mmol) em CH2C12 (1,5 mL) a 0°C adicionou-se lutidina (0,023 mL, 0,20 mmol) . A seguir adicionou-se trifluorometano-sulfonato de terc-butildimetil-sililo (0,045 mL, 0,20 mmol) ao longo de 2 horas. Verteu-se a mistura de reacção sobre uma solução saturada de NaHCCb (2 mL) e extraiu-se com CH2CI2 (3x2 mL) . Secou-se (Na2SC>4) os extractos orgânicos combinados, filtrou-se e concentrou-se. Submeteu-se o resíduo a cromatografia com 20% de EtOAc/hexano para se obter o composto C (19 mg, 68%) com o aspecto de um sólido branco. (M+H)+ 719. 59 D. 1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-17-Dicloro-7,ll-bis--(t-butildimetilsililoxi)-8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2- -(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4-azabiciclo[14.1.0]heptadecano--5,9-diona A uma solução de composto C (9,6 mg, 0,013 mmol) em CHCI3 (0,10 mL) adicionou-se cloreto de benziltrietil-amónio (0,00026 mmol, <1 mg), EtOH (0,002 mL) e uma solução (aq.) a 50% de NaOH (0,015 mL, 0,29 mmol). Agitou-se vigorosamente a mistura de reacção durante 2 horas e depois submeteu-se directamente a cromatografia (15% de EtOAc/hexano) para se obter o composto D (2,4 mg, 22%) com o aspecto de um óleo límpido. (M+H)+ 801. E. 1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-17-Dicloro-7,11-di--hidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4--tiazolil)-etenil]-4-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona

Ao composto D (2,2 mg, 0,0027 mmol) a -15°C adicionou-se ácido trifluoroacético a 20%/CH2Cl2 (0,20 mL) . Aqueceu-se a mistura de reacção até 0°C e agitou-se durante 2 horas. Removeu-se os produtos voláteis sob uma corrente de ar e submeteu-se o resíduo a cromatografia com 60% de EtOAc/hexano para se obter o composto em epígrafe (1,2 mg, 75%) com o aspecto de um sólido branco. (M+H) + 573.

Exemplo 15 (Exemplo de referência)

Os compostos a seguir indicados foram preparados pelos métodos descritos antes. éster fenílico do ácido [IS-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]--7, ll-di-hidroxi-8, 8,10,12-tetrametil-3- [l-metil-2- (2-metil-4--tiazolil)-etenil]-5,9-dioxo-4-oxa-l7-azabiciclo[14.1.0]hepta-decano-17-carboxílico, (M+H)+ 613; éster fenilmetílico do ácido [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]--7,ll-di-hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-meti1-4--tiazolil)-etenil]-5,9-dioxo-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]hepta-decano-17-carboxílico, (M+H)+ 627; [IS- [IR*, 3R* (E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7, n-di-hidroxi--N,N,8,8,10,12-hexametil-3-[1-meti1-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-5,9-dioxo-4-oxa-l7-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-17--sulfonamida, (M+H)+ 600; [IS-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--17-(2-tienilsulfonil)-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano--5,9-diona, (M+H)^ 639; [IS-[IR*, 3R*(E) , 7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-l7-[(l-metil-lH-imidazol-4-il)-sulfonil]--3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]-4-oxa-l7-azabiciclo-[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, (M+H)+ 637; [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--17-(propilsulfonil4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9--diona, (M+H)+ 599; [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-17-acetil-7, 11-di--hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-oxa-17azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, (M+H)+ 535; [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-17-benzoil-7,11-di--hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, (M+H)+ 597 [1S —[IR*,3R*(E),7R*,10 S *,1IR*,12R*,16 S *]]-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)-etenil]--17-(2-tienilcarbonil)-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano--5,9-diona, (M+H)+ 603; [IS-[IR*, 3R*(E),7R*,10S*11,R*,12R*,16S*] ]-7,ll-di-hidroxi-17--(metoxiacetil)-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tia-zolil)-etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, (M+H)+ 565; [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-17-(2-oxopropanoí1)--7,ll-di-hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4--tiazolil)-etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5, 9--diona, (M+H)+ 561 e 61 éster etílico do ácido [IS-[IR*,3R*(E),7R*,1 OS*,1IR*,12R*,16S*]]--7, ll-di-hidroxi-8, 8,10, 12-tetrametil-3- [ 1-meti 1-2- (2-meti1-4--tiazolil)-etenil]-5,9-dioxo-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]hepta-decano-17-carboxílico, (M+H)+ 565.

Lisboa,

Claims

Reivindicações Composto de fórmulas estruturais (3

X Bt Y X I II em que o símbolo Q representa um grupo de fórmula estrutural

o substituinte G é seleccionado entre o conjunto constituído por grupos alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído, B O

heterociclo, ; o símbolo W representa um átomo de 0 ou um grupo de fórmula geral NRi6; o símbolo X representa um átomo de 0 ou S ou um grupo de fórmula geral CHR17 ou H,Ris; o substituinte Y é seleccionado entre o conjunto constituído por átomos de 0 ou grupos Η, Η; H, OR22; OR23, OR23; NOR24; H, NOR25; H, NR26R27; NHNR28R29; H, NHNR30R31 ou CHR32; em que o grupo representado por OR23, OR23 pode ser um grupo cetal cíclico; os substituintes Bi e B2 são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos de fórmula geral OR33, OCOR34, OCONR35R36, NR37R38 e NR39CONR40R41; o substituinte D é seleccionado entre o conjunto constituído por grupos NR42R43 e heterociclo; o substituinte M é seleccionado entre o conjunto constituído por átomos de S e grupos C=0, S=0, SO2 e NR44; 2 os substituintes Ri, R2, R3 e R4 são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo inferior; os substituintes R5, R8, R9, Ri0 e Rn são seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo e heterociclo substituído; os substituintes R17, Rl8 r R22 e R23 sao seleccionados entre 0 conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo e alquilo substituído; os substituintes R24, R25 r R-26 r ^28/· R30 r R32r R33^ R34, R35 r R36r R37r R39r R40 /· R-Ur R42 r R51 r R52 e R53 são seleccionados entre 0 conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo, alquilo substituído, arilo e arilo substituído; os substituintes R42, R16/· R2 7 r R29? R3 1, R38, R43 e R44 sao seleccionados entre o conjunto constituído por átomos de H e grupos alquilo, alquilo substituído, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, R5iC=0, R520C=0, R53SO2, hidroxi, 0--alquilo e 0-alquilo substituído; no caso de o símbolo X representar um átomo de 0, então o símbolo Rn não representa um grupo R5iC=0, R520C=0 e R53SO2; e qualquer um dos seus sais, solvatos ou hidratos; em que o termo “alquilo” designa grupos hidrocarbonados insubstituídos de cadeia linear ou ramificada que possuem entre 1 e 20 átomos de carbono; o termo “alquilo inferior” designa grupos alquilo insubstituídos que possuem entre 1 e 4 átomos de carbono; o termo “alquilo substituído” designa um grupo alquilo substituído, por exemplo, por um a quatro substituintes, tais como, halo, fenilo, fenilo substituído, heterociclo, trifluorometilo, trifluorometoxi, hidroxi, alcoxi, cicloalcoxi, heterocicloxi, oxo, alcanoílo, ariloxi, alcanoiloxi, amino, alquilamino, arilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, aminas dissubstituídas em que os dois substituintes amino 3 são seleccionados entre grupos alquilo, arilo ou aralquilo, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino substituído, arilamino substituído, aralcanoilamino substituído, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, cicloalquiltio, hetero-ciclotio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquil-sulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo, sulfonamido, sulfonamido substituído, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo substituído, alcoxicarbonilo, arilo, arilo substituído, guanidino e heterociclos (nos casos anteriores em que se indica que o substituinte também é substituído, então sê-lo-á com átomos de halogénio ou grupos alquilo, alcoxi, arilo ou aralquilo); o termo “arilo” designa grupos hidrocarbonados aromáticos monocíclicos ou bicíclicos que possuem entre 6 e 12 átomos de carbono na porção do anel, os quais podem ser substituídos; o termo “aralquilo” designa um grupo arilo ligado directamente através de um grupo alquilo; o termo “arilo substituído” designa um grupo arilo substituído, por exemplo, por um a quatro substituintes seleccionados entre grupos alquilo, alquilo substituído, halo, trifluorometoxi, trifluorometilo, hidroxi, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloxi, alcanoílo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, dialquilamino, alcanoilamino, tiol, alquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, ureído, nitro, ciano, carboxi, carboxialquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido e ariloxi (o substituinte pode ainda ser substituído por grupos halo, hidroxi, alquilo, alcoxi, arilo, arilo substituído, alquilo substituído ou aralquilo); o termo “cicloalquilo” designa sistemas de anéis hidrocarbonados cíclicos, saturados e facultativamente substituídos que possuem entre 1 e 3 anéis e entre 3 e 7 átomos de carbono por anel, os quais podem ser ainda fundidos com um anel carbocíclico(C3-C7) insaturado (como substituintes refere-se um ou vários grupos 4 alquilo, conforme descritos antes, ou um ou vários dos grupos que foram descritos anteriormente como substituintes de alquilo); os termos “heterocíclico” e “heterociclo” designam um grupo cíclico facultativamente substituído, totalmente saturado ou insaturado e aromático ou não aromático, o qual é um sistema de anéis monocíclico com 4 a 7 membros, bicíclico com 7 a 11 membros ou tricíclico com 10 a 15 membros que possui pelo menos um heteroátomo pelo menos num anel que possui átomos de carbono, podendo cada um dos anéis do grupo heterocíclico que contém um heteroátomo possuir 1, 2 ou 3 heteroátomos seleccionados entre átomos de azoto, átomos de oxigénio e átomos de enxofre, em que os heteroátomos de azoto e enxofre podem ainda ser facultativamente oxidados e os heteroátomos de azoto podem ainda ser facultativamente quaternizados, o grupo heterocíclico pode estar ligado a qualquer heteroátomo ou átomo de carbono e o substituinte é seleccionado entre um ou vários grupos alquilo, conforme descritos antes, ou um ou vários dos grupos que foram descritos anteriormente como substituintes de alquilo ou epóxidos ou aziridinas.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo G representa um grupo de fórmula estrutural

o símbolo X representa um átomo de O ou de S e o símbolo Y representa um átomo de O.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado entre o conjunto constituído por [IS-[IR*, 3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-[1-meti1-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-oxa-l7-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona; 5 [IS-[1R*,3R*(E),7R*,1OS*,1IR*,12R*,16S*]]-17-formil-7,11-di--hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-4-tia-zolil)-etenil]-4-oxa-17-azabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona e [IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-di-hidroxi--8,8,10,12-tetrametil-3-{l-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)--etenil]-4-oxa-l7-tiabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona.
4. Composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3.
5. Utilização de um composto tal como definido numa qualquer das reivindicações 1 a 3 para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de cancro.

em que o método compreende os passos seguintes: (a) obter um composto de fórmula estrutural 18A

em que o símbolo Pi representa um átomo de hidrogénio; (b) substituir facultativamente o átomo de hidrogénio, representado pelo símbolo Pi, por um grupo protector de oxigénio; (c) fazer reagir o composto de fórmula estrutural 18A com um sal de halogeneto de metal para formar um composto de fórmula estrutural 18B, em que o símbolo X representa um átomo de halogénio 6

(d) fazer reagir o composto de fórmula estrutural 18B com um sal de azida de um metal para formar um composto de fórmula estrutural 18c

(e) submeter o composto de fórmula estrutural 18C a uma reacção de Mitsunobu para se formar um composto de fórmula estrutural 18D, em que o símbolo R representa um grupo 4-nitrofenilo ou fenilo

(f) efectuar a hidrólise ou amoniólise do grupo éster do composto de fórmula estrutural 18D para se formar um composto de fórmula estrutural 18E

(g) no caso de o símbolo Pi representar um grupo protector de oxigénio, desproteger facultativamente o composto de fórmula estrutural 18E e 7 (h) efectuar a redução e subsequente ciclização do composto de fórmula estrutural 18E com um agente redutor para se formar o composto de fórmula estrutural 18A.
7. Processo de acordo com a reivindicação 6, em que o produto do passo (f) é desprotegido antes da reacção subsequente.
8. Processo para a preparação de um composto de fórmula estrutural 18F

ISP - . em que o método compreende os passos seguintes: (a)converter um composto de fórmula estrutural 18E

em que o símbolo Pi representa um grupo protector de oxigénio, num composto de fórmula estrutural 19A, em que o símbolo R’ representa um grupo alquilo ou arilo, conforme definido na reivindicação 1;

(b) efectuar a redução e subsequente ciclização do composto de fórmula estrutural 19A com um agente redutor para se formar o composto de fórmula estrutural 18F e (c) desproteger facultativamente o composto de fórmula estrutural 18F para assim substituir o grupo protector de oxigénio, representado pelo símbolo Pi, por um átomo de hidrogénio. Processo para a preparaçao de um composto de fórmula estrutural 18F

181* em que o método compreende os passos seguintes: (a) tratar um composto de fórmula estrutural 18C

em que o símbolo Pi representa um grupo protector de oxigénio, com trifenilfosfina e um tetra-halogeneto de carbono para se formar um composto de fórmula estrutural 20A, em que o símbolo X representa um átomo de halogénio

(b) efectuar a redução e subsequente ciclização do composto de fórmula estrutural 20A com um agente redutor para se formar o composto de fórmula estrutural 18F e (c) desproteger facultativamente o composto de fórmula estrutural 18F para assim substituir o grupo protector de oxigénio, representado pelo símbolo Pi, por um átomo de hidrogénio. 9
10. Composto seleccionado entre o conjunto constituído por 9

em que como o símbolo Pi representa um grupo protector de oxigénio; o símbolo R representa um grupo 4-nitrofenilo ou fenilo; o símbolo R’ representa um grupo alquilo ou arilo, tal definido na reivindicação 1, e o símbolo X representa um átomo de halogénio. Lisboa,