PT101002A - Tieno {2,3-b}pirazina-2,3(1h,4h)-dionas, composicoes farmaceuticas que as contem e seu uso no tratamento de perturbacoes do sistema nervoso central - Google Patents

Description

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74 474 2003ptl0 0 presente invento refere-se a compostos de tieno[2,3b]pirazino-2,3(1H, 4H)-diona ou suas formas tautoméricas terapeuticamente activos, a um processo de preparação dos mesmos, a composições farmacêuticas compreendendo os compostos, e a um processo de tratamento com eles. A neurotransmissão mediada pela interacção com ácido glutâmico é considerada uma abordagem útil no tratamento de doenças neurológicas e psiquiátricas. Assim, antagonistas conhecidos dos aminoácidos excitatórios mostraram propriedades anti-epilépticas e relaxantes musculares potentes (A. Jones et al.. Neurosci. Lett. 53r 321 (1985)) bem como actividade ansiolítica (D.A. Bennet et al.. Life Sei. 39, 2355 (1986)).

Tem sido sugerido que a acumulação de aminoácidos excitatórios e neurotóxicos extracelulares, seguida por hiper-estimulação de neurónios, pode explicar as degenerações neuronais observadas em doenças neurológicas como coreia de Huntington, doença de Parkinson, epilepsia, demência senil, e deficiências de carácter mental e motor observadas após condições de isquemia do cérebro, anoxia e hipoglicémia (E.G. McGeer et al.. Nature. 263. 517 (1976) e R. Simon et al. f Science. 226. 850 (1984)).

Os aminoácidos excitatórios exercem as suas acções por via de receptores específicos localizados pós-sinapticamente e pré--sinapticamente. Estes receptores estão presentemente convenientemente subdivididos em quatro grupos com base em evidências electrofisiológicas e neuroquímicas: receptores AMPA, metabotrópicos, cainato e NMDA. O ácido L-glutâmico e o ácido aspártico activam provavelmente todos os tipos anteriores de receptores de aminoácidos excitatórios e possivelmente também outros tipos.

Verificou-se recentemente que a glicina era essencial para as respostas induzidas por agonistas de receptores NMDA em 74 474 2003ptl0 -2-

neurónios cultivados (J.W. Johnson et al. . Nature 325. 529 (1987)). Em contraste à condutância de cloretos activados por glicina nos neurónios da espinal-medula, esta resposta não era sensível à estricnina (D.W. Bonhaus et al.. Eurooean J. Pharmacol. 142. 489 (1987)).

Crê-se que a glicina potência a acção do NMDA através de um local modulatório alostericamente acoplado ao complexo ionoforo NMDA (T. Honoré et al., Eurooean J. Pharmacol. 172. 239 (1989)). A D-serina e a D-alanina exercem uma forte actividade agonista neste local (J.B. Monahan et al.f J. Neurochem. 53. 370 (1989)), enquanto o 1-aminociclopropanocarboxilato (P. Skolnick et al.. Life Sei. 45. 1647 (1989), V. Nadler et al♦. Eurooean J. Pharmacol. 157. 115, (1988), R. Trullas et al.. Pharmacol. Biochem. Behav.. 34. 313 (1989)) e a D-ciclo-serina (W.F. Hood et al.. Neurosci. Lett. 98. 91 (1989)) actuam como agonistas parciais. O 1-amino-ciclobutanocarboxilato (W.F. Hood et al. . European J. Pharmacol. 161. 281 (1989)), o 1-amino-ciclopentanocarboxilato (L.D. Snell et al. . European J. Pharmacol. 151. 165 (1988)), a 3-amino-l-hidroxi-2-pirrolidona (HA-966) (E.J. Fletcher et al.. Eurooean J. Pharmacol. 151. 161 (1988) ), o 5-cloro-indolo-2-carboxilato (J.E. Huettner, Science 243. 1611 (1989)) e a 6-ciano-7-nitroquinoxalina-2,3-diona (CNQX) (R.A.J. Lester et al.. Mol. Pharmacol. 35. 565 (1989)) são todos antagonistas fracos, enquanto que o ácido 7-cloro-quinurénico (7-Cl-Kyn) (R. Sircar et al. . Brain Res. 504. 325 (1989) ) e o 6,7-dicloro-3-hidroxiquinoxalina-2-carboxilato (M. Kessler et al.f Brain Res. 489. 377 (1989)) são antagonistas bastante fortes da glicina no local da glicina. No entanto, todos os compostos anteriormente descritos actuam de forma não selectiva neste local desde que tenham afinidade igual ou superior para outros alvos.

Verificámos agora que novos derivados de tieno[2,3-b]--pirazina-2,3-(lH, 4H)-diona são antagonistas potentes e selectivos no local de ligação da glicina no complexo receptor 74 474 2003ptl0 -3-

NMDA O presente invento proporciona portanto compostos de fórmula (I) ou suas formas tautoméricas:

2 R

na qual R1 representa hidrogénio, alquilo linear ou ramificado, alcenilo C2_6, cicloalquilo C3_8, halogéneo, nitro, ciano, fenilo, alcoxi C-^.g, alquiltio carboxi, alquiloxicarbonilo C]__g, trifluorometilo, dialquilamino ou alquilo C1_6 substituído com ciano, carboxi, alcoxicarbonilo Οχ—3 * e R^ representa hidrogénio, alquilo C-^g linear ou ramificado, alcenilo C2_6, cicloalquilo C3_8, halogéneo, ciano, fenilo, alcoxi C-^g, alquiltio C1_g, trif luorometilo, ou alquilo ci-6 substituído com ciano, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. '

Estes sais incluem sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis, sais de metais ou sais de amónio opcionalmente alquilados farmaceuticamente aceitáveis, tais como sais de ácido clorídrico, bromídrico, iodico, fosfórico, sulfúrico, trifluoroacético, tricloroacético, oxálico, maleico, pirúvico, malónico, succínico, cítrico, mandélico, benzóico, cinâmico, metanossulfónico, etanossulfónico, pícrico e similares, e incluem ácidos relacionados com os sais farmaceuticamente aceitáveis listados no Journal of Pharmaceutical Science. 66, 2 (1977) e aqui incorporados como referência, ou sais de lítio, sódio, potássio, magnésio e similares.

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Os substituintes R1 preferidos incluem hidrogénio, halogéneo e alquilo e os substituintes preferidos incluem hidrogénio, halogéneo, alquilo e cicloalquilo C3_8.

Os exemplos ilustrativos de compostos abrangidos pelo presente invento incluem: (a) Tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (b) 7-Metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (c) 7-Etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (d) 7-Propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (e) 7-Isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (f) 7-Isobutiltieno[2,3-b]piraz ina-2,3(1H,4H)-diona, (g) 7-t-Butiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (h) 7-Ciclopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (i) 7-Ciclo-hexiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (j) 7-Feniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (k) 6,7-Dimetiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (l) 7-Etil-6-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (m) 6-Eti1-7-propi1tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (n) 6-Bromotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (o) 7-Bromotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (p) 6-Clorotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 74 474 2003ptl0 £/ffl emj' -Ιί (q) (r) (S) (t) (U) (v) CS?* 6,7-Dibromotieno [2,3-b]pirazina-2,3 (111,411) -diona, -5- 6,7-Diclorotieno[2 # 3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7-Cianotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-cianotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7-Ciano-6-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (x) 6-Bromo-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (y) 6-Nitro-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (z) 6-Dimetilamino-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)--diona, (aa) 6-Feniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (ab) 6-Isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (ac) 6-Etoxicarbonil-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)--diona, (ad) 6-Carboxi-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (ae) 6-Iodo-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (af) 6-Fluoro-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (ag) 7-Ciano-6-(metiltio)tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (ah) 6-Bromo-7-etiltieno[2,3-b]piraz ina-2,3(1H,4H)-diona, (ai) 6-Cloro-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, -6- -6- $ 74 474 2003ptl0 (aj) (ak) (al) (am) (an) (ao) (ap) (aq) (ar) (as) (at) (au) (av) (ax) (ay) (az) (ba) 6-Iodo-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Etoxicarbonil-7-etiltieno [2,3-b]pirazina-2,3 (111,411) --diona, 6-Carboxi-7-etiltieno[2,3-b]piraz ina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Etoxicarbonil-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)--diona, 6-Carboxi-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromo-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromo-7-isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromo-7-isobutiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-isobutiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromo-7-t-butiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-t-butiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromo-7-ciclopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-ciclopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromo-7-ciclo-hexiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-ciclo-hexiltieno[2,3-b]piraz ina-2,3(1H,4H)-diona, (bb) 7-Metoxi-6-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, -7- <4 -7- <4 Λ) 74 474 2003ptl0 (bc) 6-Cloro-7-metoxitieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bd) 6-Bromo-7-feniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (be) 6-Cloro-7-feniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bf) 6-Cloro-7-dimetilaminometiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)--diona, (bg) 7-Metil-6-trifluorometiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)--diona, (bh) 7-Ciano-6-metoxitieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,411)-diona, (bi) 6-Bromo-7-cianometiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bj) 6-Cloro-7-cianometiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bk) 7-Cianoetil-6-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bl) 6-(1-Butenil)tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bm) 6-Ciclo-hexil-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bn) 6-Ciclopentil-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bo) 6-(2-Cianoetil)-7-meti1tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)--diona, (bp) 6-(2-Carboxieti1)-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)--diona, (bq) 6-Trifluorometiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (br) 6-Meti1-7-propeniltieno[2,3-b]piraz ina-2,3(1H,4H)-dion (bs) 7-Viniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 74 474 2003ptl0 -8- / V~ ' /

Ú- (bt) 7-Metoxitieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, (bu) 7-(Metiltio)tieno[2,3-b Jpiraz ina-2,3(1H,4H)-diona, (bv) 7-Trifluorometi1tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 0 invento refere-se também a processos de preparação dos compostos acima mencionados. Este processo envolve intermediários (IV) os quais podem ser preparados pelos processos seguintes: a) Reacção de um composto de fórmula (II)

(II) na qual R1 representa hidrogénio, alquilo incluindo cadeias ramificadas, alcenilo C2_g/ cicloalquilo C3_8, fenilo, ciano, cianoalquilo ou alcoxicarbonilo; e R2 representa hidrogénio, alquilo Clm.6 incluindo cadeias ramificadas, cicloalquilo C3_8, fenilo ou trifluorometilo com enxofre elementar e um composto de fórmula (ili) ,co2r (III)

NC na qual R·* representa metilo ou etilo num solvente adequado, preferivelmente metanol, etanol ou dimetilformamida na presença de uma base, preferivelmente dimetilamina, trietilamina ou mor-folina para formar um composto de fórmula (IV)

(IV) 2003ptl0 -9-

na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II) e R3 representa metilo ou etilo. b) Reacção de um composto de fórmula (V) 1 (V)

,R

R na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II) e X representa um grupo que se despede, preferivelmente cloro, bromo ou iodo com hidrossulfito de sódio hidratado e um composto de fórmula (III) na presença de uma base secundária (através de um intermediário α-mercaptocetona ou a-mer-captoaldeído) para formar um composto de fórmula (IV) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II), e R3 representa metilo ou etilo. c) Reacção de um composto de fórmula (II) com um composto de fórmula (III) para formar um composto de fórmula (VI) 3

na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II) e R3 tem o significado definido para a fórmula (III) (condensação de Knoevenagel-Cope, ver por exemplo A.C. Cope, J. Amer. Chem. Soc. 59. 2327 (1937); A.C. Cope et al. . J. Amer. Chem. Soc. 63. 3452 (1941)); e reacção de um composto de fórmula (VI) com enxofre elementar no álcool apropriado na presença de dimetilamina ou morfolina para formar um composto de fórmula (IV) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II) e R3 representa metilo ou etilo.

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Os princípios sintéticos para a preparação de compostos de fórmula (IV) foram revistos por K. Gewald em Chemia 34 (3)f 101--110 (1980). 0 intermediário (IV) pode reagir com (I) através dos seguintes processos: d) Reacção de um composto de fórmula (IV) com dicarbonato de di--terc-butilo em piridina na presença de 4-dimetilaminopiridina para formar um composto de fórmula (VII)

CO-R C00C(CHa) 3'3 (VII) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II), R3 é metilo ou etilo; e R4 é hidrogénio ou terc--butoxicarbonilo.

Hidrólise do composto (VII) com hidróxido alcalino aquoso em tetra-hidrofurano e acidificação com um ácido mineral ou ácido acético para formar um composto de fórmula (VIII) 2 COOH E\__/ CCTV-»' COOC(CH-) 3'3 (VIII) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II).

Reacção de um composto de fórmula (VIII) com difenilfosforilazida e álcool t-butílico na presença de trietilamina para formar um composto de fórmula (IX)

(IX)

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Cb na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II).

Reacção de um composto de fórmula (IX) com oxalato de dietilo em ácido acético à temperatura de refluxo para formar um composto de fórmula (I) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II). e) Hidrólise de um composto de fórmula (IV) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II) com a excepção de R1 não ser hidrogénio nem alcoxicarbonilo para formar um composto de fórmula (X)

na qual rI e R2 têm os significados definidos anteriormente.

Descarboxilação de um composto de fórmula (X) a 60-70°C numa mistura de ácido clorídrico e propanol para formar um composto de fórmula (XI)

(XI) na qual R1 e R2 têm os significados definidos anteriormente.

Reacção de um composto de fórmula (XI) com oxalilcloreto de etilo num solvente adequado na presença de uma base; p. ex., tetra-hidrofurano e piridina com 4-dimetilaminopiridina como co--catalisador, para formar um composto de fórmula (XII) C00C.H, P°

H 1 R' (XII) -12- 74 474 2003ptl0 ^(ζ '\Γν.......τ-Ί na qual R·*· e R2 têm os significados definidos anteriormente.

Nitração de um composto de fórmula (XII) para formar um composto de fórmula (XIII) N02 COOC2h5

(XIII) na qual R1 e R2 têm os significados anteriormente descritos.

Reacção de um composto de fórmula (XIII) com p.ex., pó de zinco em ácido acético a 80% ou ditionito de sódio em dioxano aquoso, para formar um composto de fórmula (I) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (II) com a excepção de R1 não ser hidrogénio nem alcoxicarbonilo.

Os intermediários de fórmula (XI) podem ser preparados, alternativamente, pelo processo seguinte, e subsequentemente convertidos num composto de fórmula (I). f) Reacção de um composto de fórmula (II) na qual R·*· representa alcoxicarbonilo e r2 representa alquilo incluindo cadeias ramificadas, fenilo ou trifluorometilo com ácido cianoacético para formar um composto de fórmula (XIV) 3

na qual R2 tem o significado apresentado acima e R3 é metilo ou etilo.

Reacção de um composto de fórmula (XIV) com enxofre elementar num álcool apropriado e dietilamina como base, seguida 74 474 2003ptl0

-13- por acidificação com ácido clorídrico para formar um composto de fórmula (XI) na qual R1 representa alcoxicarbonilo representa alquilo C^.g incluindo cadeias ramificadas, fenilo ou trifluorometilo.

Reacção do composto de fórmula (XI) por via dos intermediários (XII) e (XIII) (processo e) para formar um composto de fórmula (I) na qual R1 representa alcoxicarbonilo cl-2 e r2 representa alquilo incluindo cadeias ramificadas, fenilo ou trifluorometilo.

Podem-se fazer reagir intermediários comercialmente disponíveis ou intermediários preparados por procedimentos comuns, de fórmula (XV), pelo processo seguinte: g) Reacção de um composto de fórmula (XV) 2 NH2

R (XV) na qual R1 e R2 representam, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo, alcenilo, fenilo, trifluorometilo, dialquilamino, alcoxi, alquiltio, ciano ou cianoalquilo e R3 representa metilo ou etilo com dicarbonato de di-terc-butilo em piridina na presença de 4-dimetilaminopiridina para formar um composto de fórmula (XVI)

R

4 S

(XVI) na qual R1, R2 e R3 têm os significados definidos para a fórmula (XV), e R4 é hidrogénio, ou terc-butoxicarbonilo. 74 474 2003ptl0

14- w.

Hidrólise do composto (XVI) com hidróxido alcalino aquoso em tetra-hidrofurano e acidificação com um ácido mineral ou ácido acético para formar um composto de fórmula (XVII) 2 4 \ B *— COOC ( CHg ) 3 / Rv / ^-COOH (XVII) 1/" R e R4 têm os significados definidos para a fórmula de um composto de fórmula (XVII) com (XV).

Reacçao difenilfosforilazida e álcool t-butílico na presença de trietilamina para formar um composto de fórmula (IX) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (XV).

Reacção do composto (IX) com oxalato de dietilo em ácido acético à temperatura de refluxo para formar um composto de fórmula (I) na qual R1 e R2 têm os significados definidos para a fórmula (XV).

As modificações químicas dos composto de fórmula (I) podem envolver os processos seguintes: h) Hidrólise de um composto de fórmula (XVIII)

(XVIII) na qual R2 representa alquilo incluindo cadeias ramificadas, fenilo ou trifluorometilo; é R5 representa metilo ou etilo, com hidróxido de sódio em tetra-hidrofurano aquoso seguida por acidificação com ácido clorídrico para formar um composto de fórmula (XIX) jj

... '! 74 474 2003ptl0 -15-

R

O

OH

O

s NH^O (XIX) na qual R2 representa alquilo C-^.g incluindo cadeias ramificadas, fenilo ou trifluorometilo, seguida por descarboxilação em quinolina a 150°c na presença de bronze de cobre para formar um composto de fórmula (I) na qual RÍ representa hidrogénio e R2 representa alquilo incluindo cadeias ramificadas, fenilo ou trifluorometilo. i) Nitração de um composto de fórmula (I) na qual R1 é hidrogénio e R2 é alquilo incluindo cadeias ramificadas, cicloalquilo, fenilo, ciano ou trifluorometilo para formar um composto de fórmula (I) na qual R·*· é nitro e R2 é hidrogénio, alquilo incluindo cadeias ramificadas, cicloalquilo, fenilo, ciano ou trifluorometilo. j) Halogenação de um composto de fórmula (I) na qual R1 é hidrogénio ou halogéneo e R2 é hidrogénio, alquilo C^g incluindo cadeias ramificadas, cicloalquilo, fenilo, ciano, cianoalquilo ou trifluorometilo para formar um composto de fórmula (I) , na qual R1 é halogéneo e R2 é hidrogénio, halogéneo, alquilo C1-6 incluindo cadeias ramificadas, cicloalquilo, fenilo, ciano, cianoalquilo ou trifluorometilo.

Os compostos do presente invento foram testados em relação à afinidade para um ou mais dos diferentes tipos de receptores de aminoácidos excitatórios e estudados em experiências de ligação de radioligandos simples. Em essência, o processo envolve a incubação de um ligando radiomarcado seleccionado, particular, e a substância específica particular a ser investigada com homogeneizados de cérebro que contêm o receptor. A medição da ocupação dos receptores é feita por determinação da radioactividade específica ligada ao homogeneizado. -16- -16- fíl·. 74 474 2003ptl0

Verificou-se agora que os compostos heterocíclicos do invento possuem afinidade para o local da glicina do complexo receptor NMDA e são antagonistas em relação a este tipo de receptores. Isto irá torná-los úteis no tratamento de quaisquer das numerosas indicações causadas por hiperactividade dos aminoácidos excitatórios. A actividade de ligação ao local da glicina destes compostos do presente invento pode ser ilustrada pela determinação da sua capacidade para deslocar glicina marcada radioactivamente do local da glicina. A actividade de deslocamento dos compostos pode ser mostrada pela determinação do valor de IC50 o qual representa a concentração (μΜ) que provoca um deslocamento de 50% da ligação específica da [3H]-glicina.

Em sumário, a influência de análogos do ácido glutâmico sobre efeitos secundários de interacções do receptor de glutamato, tais como sobre a abertura do canal actuada pelo ligando ("ligand-gated") e tradução do sinal mediada pela proteína G, pode ser estudada in vitro utilizando fatias de cérebro, homogeneizados de cérebro ou linhas clonais que expressam subtipos de receptores de glutamato. Estas experiências proporcionarão informação quanto às eficácias (agonista/antagonista) das substâncias de teste.

As propriedades antagonistas de glicina dos compostos são demonstradas pela sua capacidade para contra-actuar convulsões induzidas por infusão i.c.v. de NMDA. Os antagonistas de glicina são administrados por co-infusão com o NMDA e o seu efeito anti--convulsivo é medido por determinação a) do valor TV50 que representa a dose (jug/kg) do antagonista de glicina que tem que ser administrada por infusão, por minuto, de modo a aumentar o tempo para o início dos ataques clónicos em 50%, b) o valor ED50 que representa a dose (jug/kg) do antagonista de glicina que tem que ser administrada por infusão, por minuto, de modo a proteger 50% dos animais contra ataques clónicos durante 150 segundos

74 474 2003ptl0 -17 após o início da infusão i.c.v.

Ligação de [3H]-glicina in vitro a membranas de cérebro de ratazana (Teste 1) A preparação da membrana e o ensaio de ligação específica da [3H]-glicina é baseada na metodologia descrita por Haring et al.. (1991) J. Neurochem. 57. 323-332 e Yoneda et al.. (1991) J. Neurochem. 55. 237-244.

Todos os passos são realizados a 4°C. Os tampões são preparados frescos todas as semanas a partir de água destilada, desionizada e filtrada através de membranas estéreis de 0,2 μιη para eliminar produtos artificiais devidos a contaminação microbiana. As membranas sinápticas em bruto (P2) são preparadas a partir de prosencéfalos de ratazanas recentemente dissecados de ratazanas Wistar macho e lavados 4 vezes com tampão de baixa força iónica. No dia de ensaio estas preparações são adicionalmente lavadas com tampão contendo uma baixa concentração (0,08% g/g) de Triton X-100, e depois mais duas vezes na ausência deste detergente. O procedimento é dirigido à ruptura das visículas das membranas sinápticas e remoção de aminoácidos endógenos. A ligação de radioligando específica é medida por incubação das membranas (400-600 jug/ml de proteína) com [3H]-glicina 50 nM na presença ou ausência de glicina não marcada 1 mM a 4°C durante 30 min. Separam-se os ligandos livres dos ligandos ligados por centrifugação. Cada pelota é enxaguada 2X e a radioactividade ligada é medida por contagem de cintilação líquida. As substâncias de teste são substituídas por glicina não marcada no ensaio.

Convulsões induzidas por infusão i.c.v. de NMDA (Teste 2 & 3)

Administra-se por co-infusão i.c.v. de 58,84 μg/ml (1 nmol em 2,5 μΐ) de NMDA (sigma) dissolvido em NaCl a 0,9% e de um antagonista de glicina a uma velocidade de 5 μΐ/min. A infusão é 74 474 2003ptl0 *!?» ////- C.

/ /*___________ -18- ·" <3 realizada através de uma cânula colocada um 1 mm posterior e 1 mm lateral em relação ao ponto de Bregma. A cânula é injectada 4,3 mm dentro do crânio de ratinhos NMRI macho pesando 25 g (gama de 23-27 g). A posição e o comprimento da cânula dentro do crânio é fixa por uma placa posicionada a 4,3 mm da ponta da cânula. A infusão é interrompida após o aparecimento de ataques clónicos em todas as extremidades ou 150 segundos após o tempo de início da infusão. São testadas pelo menos 5 doses de cada antagonista de glicina utilizando 8 ratinhos por dose.

Os resultados dos testes obtidos no teste de alguns compostos do presente invento são mostrados na seguinte tabela 1. TABELA 1

Composto do Teste 1 Teste 2 Teste 3 exemplo IC50 μΜ TV50 (MgAg) ed50 (w/kg) 2 1 7,0 46,4 6 1,27 44 70 10 00 H <*, O 9,4 104 25 0,85 76 152 38 0,18 34,8 70

Os compostos do invento, juntamente com um adjuvante, transportador ou diluente convencional e, se desejado, na forma de um seu sal farmaceuticamente aceitável, podem ser colocados na forma de composições farmacêuticas e suas dosagens unitárias, e nessa forma podem ser empregues como sólidos, tais como comprimidos ou cápsulas de enchimento, ou como líquidos, tais como soluções, suspensões, emulsões, elixires ou cápsulas cheias com os mesmos, todos para uso oral, na forma de supositórios para administração rectal; ou na forma de soluções injectáveis estéreis para uso parentérico (incluindo sub-cutâneo). Estas composições farmacêuticas e suas formas de dosagem unitária podem compreender ingredientes convencionais em proporções convencionais, com ou sem compostos ou princípios activos -19- 74 474 2003ptl0 /? y //' r-. adicionais, e estas formas de dosagem unitária podem conter qualquer quantidade eficaz e adequada, para o alívio de perturbações do sistema nervoso central, do ingrediente activo, comensurada com a gama de dosagem diária que se pretende empregar. Os comprimidos contendo um (1) a duzentos (200) miligrama por comprimido, são portanto formas de dosagem unitária representativas adequadas.

Os compostos deste invento podem portanto ser usados para a formulação de preparações farmacêuticas, p.ex., para administração oral e parentérica a mamíferos, incluindo serês humanos, de acordo com processos convencionais da farmácia galénica.

Os excipientes convencionais são aquelas substâncias transportadoras orgânicas ou inorgânicas adequadas para aplicação parentérica ou oral que não reajam prejudicialmente com o composto activo.

Exemplos destes transportadores são a água, soluções salinas, álcoois, polietilenoglicois, óleo de rícino poli-hidroxietoxilado, gelatina, lactose, amilose, estearato de magnésio, talco, ácido silícico, monoglicéridos e diglicéridos de ácidos gordos, ésteres pentaeritritol de ácidos gordos, hidroximetilcelulose e polivinilpirrolidona.

As preparações farmacêuticas podem ser esterilizadas e misturadas, se desejado, com agentes auxiliares, tais como lubrificantes, conservantes, estabilizantes, agentes molhantes, emulsionantes, sal para influenciar a pressão osmótica, tampões e/ou substâncias corantes e similares, que não reajam prejudicialmente com o composto activo.

Para aplicação parentérica, são particularmente adequadas soluções ou suspensões injectáveis, preferivelmente soluções aquosas com o composto activo dissolvido em óleo de rícino poli--hidroxilado. 74 474 2003ptl0 -20- sY·· Y i/'' ώ

As ampolas são formas de dosagem unitária adequadas.

Para aplicação oral, são particularmente adequados comprimidos, drageias, ou cápsulas possuindo talco e/ou um hidrato de carbono transportador ou ligante ou similar, sendo preferencialmente o transportador a lactose e/ou amido de milho e/ou amido de batata. Pode-se utilizar um xarope, elixir ou similar quando se puder empregar um veículo edulcorante. Geralmente, como para gamas mais largas, os compostos do invento são distribuídos numa forma de dosagem unitária compreendendo 0,05-100 mg de um transportador farmaceuticamente aceitável por dosagem unitária.

Um comprimido típico que pode ser preparado por técnicas de compressão convencionais contém: 2.0 mg 67,8 mg Ph. Eur. 31,4 mg 1.0 mg 0,25 mg Ph. Eur.

Composto activo

Lactosum

AvicelR

AmberliteR IRP 88 Estearato de magnésio

Devido ao seu elevado grau de efeito como antagonistas de glicina, os compostos do invento são extremamente úteis no tratamento de perturbações ou desordens do sistema nervoso central, quando administrados numa quantidade eficaz para o seu alívio, melhoria ou eliminação. A importante actividade no SNC dos compostos do invento inclui tanto actividades anticonvulsivas como hipnóticas, nootrópicas e ansiolíticas em conjunto com a sua baixa toxicidade, apresentando conjuntamente um índice terapêutico muito favorável. Os compostos do invento podem portanto ser administrados a um paciente, p. ex., um corpo mamífero vivo, incluindo seres humanos, com necessidade dos mesmos, para o tratamento, alívio, melhoria ou eliminação de uma indicação, associada com o sistema nervoso central e com os chamados receptores NMDA, o qual requeira este tratamento psicofarmacêutico, p.ex. especialmente convulsões, ansiedade, epilepsia e isquemia, se desejado na forma de um seu sal 74 474 2003ptl0

,, y -21- farmaceuticamente aceitável, em geral concorrentemente, simultaneamente ou em conjunto com um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável, especialmente e preferivelmente na forma de uma sua composição farmacêutica, quer por via oral, rectal ou parentérica (incluindo subcutânea), numa quantidade psicofarmaceuticamente eficaz para o alívio de uma perturbação no sistema nervoso central, p.ex., uma quantidade anticonvulsante e/ou ansiolítica, e em qualquer caso uma quantidade que seja eficaz para o alívio de uma perturbação deste tipo no sistema nervoso central devida à afinidade do seu receptor NMDA. As gamas de dosagem adequadas são 1-200 miligrama diariamente, dependendo como é normal, do modo exacto de administração, da forma em que é administrado, da indicação para a qual se dirige a administração, do paciente envolvido e do peso corporal do paciente envolvido, e dependendo da preferência e da experiência do médico ou veterinário assistente. 0 invento será agora descrito em maior detalhe com referência aos exemplos seguintes. -22- -22- ttJjL .2" 74 474 2003ptl0 EXEMPLO 1 ΤΐβηοΓ2.3-blplrazina-2,3(1H. 4H)-diona

Processo A: 3-t-Butoxicarbonilaminotiofeno-2-carboxilato de metilo

Agitou-se uma mistura de 3-aminotiofeno-2-carboxilato de metilo (25,0 g, 159 mmol) em 250 ml de piridina sob azoto num banho de gelo, enquanto se adicionou dicarbonato de di-terc-butilo (38,17 g, 174,9 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (19,43 g, 159 mmol). Manteve-se a mistura em agitação a 0°C durante 1 hora e deixou-se à temperatura ambiente durante 64 horas. Evaporou-se a mistura até á secura sob pressão reduzida e adicionou-se 300 ml de metanol. Piltrou-se a mistura, lavou-se com metanol e adicionou-se 300 ml de água ao filtrado. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água, e secou-se para dar 29,8 g (73%) de 3-t-butoxicarbonil-aminotiofeno-2-carboxilato de metilo. P.f. 88-89eC. ^-H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,50 (s, 9H), 3,82 (s, 2H), 7,75 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 9,31 (s, 1H).

Processo B: Ácido 3-t-butoxicarbonilaminotiofeno-2-carboxílico

Aqueceu-se 3-t-butoxicarbonilaminotiofeno-2-carboxilato de metilo (15,0 g, 58,3 mmol) numa mistura de hidróxido de sódio IN (116,6 ml) e tetra-hidrofurano (60 ml), a 50°C durante 16 horas. Evaporou-se a mistura até um volume de aproximadamente 60 ml, e acidificou-se (pH=2) com ácido clorídrico sob arrefecimento num banho de gelo. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água, e secou-se para dar 13,8 g (97%) de ácido 3-t-butoxi-carbonilaminotiofeno-2-carboxílico. P.f. 168-169°C. P.f. da Lit. 168-169°C fJ. Chem. Res. (S), 296, 1985). 1H-RMN (DMSO-dg, S): 1,49 (S, 9H), 7,76 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 9,45 (s, 1H), 13,45 (s, 1H). -23- 74 474 2003ptl0 ,-. // //.. ..= C‘ - ?//'

Processo C:

Tiofeno-2f3-dicarbamato de di-t-butilo

Agitou-se uma mistura de ácido 3-t-butoxicarbonilamino-tiofeno-2-carboxílico (10,0 g, 41,1 mmol), difenilfosforilazida (14,14 g, 51,37 mmol) e trietilamina (5,85 ml, 42,2 mmol) em álcool t-butílico (1000 ml), sob refluxo durante 10 horas. Evaporou-se a mistura e dissolveu-se o resíduo em cloreto de metileno (300 ml). Lavou-se a solução sucessivamente com ácido cítrico aquoso a 5%, água, NaHC03 aquoso saturado, seguido pór evaporação para dar 5,9 g de uma substância que foi purificada por recristalização em heptano-cloreto de metileno para dar tiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo. P.f. 168-170°C. P.f. da lit.: 165-167°C (J. Chem. Res. (S), 296, 1985).

Processo D:

Tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Manteve-se ao refluxo uma mistura de tiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo (1,53 g, 4,87 mmol), oxalato de dietilo (15 ml) e ácido acético (15 ml) durante 48 horas. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se para dar 0,64 g (78%) do composto do título. P.f. >340“C. 1H-RMN (DMSO-dg, δ): 6,74 (d, 1H), 7,13 (d, 1H), 12,00 (S, 1H), 12,28 (S, 1H).

Análise: calculada para CgE^^C^S: C, 42,85; H, 2,40; N, 16,66; S, 19,06%. Determinada: C, 42,81; H, 2,48; N, 16,35; S, 18,75%. EXEMPLO 2 7-Metiltienor2.3-blPÍrazina-2,3(lH, 4H)-diona

Fez-se reagir 3-amino-4-metiltiofeno-2-carboxilato de metilo (24,5 g, 143 mmol) com dicarbonato de di-terc-butilo 74 474 2003ptl0 -24-

seguindo o procedimento esboçado no exemplo 1 (Processo A). Rendimento de 20,5 g (53%) de 4-metil-3-t-butoxicarbonil-aminotiofeno-2-carboxilato de metilo. ^H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,45

Realizou-se a hidrólise do 4-metil-3-t-butoxicarbonil-aminotiofeno-2-carboxilato de metilo (I8,9g, 69,7 mmol) seguindo 0 procedimento esboçado no exemplo 1 (processo B). Rendimento de 14,12 g (79%) de ácido 4-metil-3-t-butoxicarbonilaminotiofeno-2--carboxílico. P.f. 179-180°C. 1H-RMN (DMSO-dg, δ)ϊ 1,44 (s, 9H), 2,08 (S, 3H), 7,43 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 12,90 (s, 1H).

Realizou-se a reacção do ácido 4-metil-3-t-butoxi-carbonilaminotiofeno-2-carboxílico (21 g, 81,6 mmol) com difenilfosforilazida seguindo o procedimento esboçado no exemplo 1 (processo C). Rendimento de 25,3 g de 4-metiltiofeno-2,3--dicarbamato de di-t-butilo oleoso, bruto, possuindo ^-H-RMN (DMSO-dg, 6): 1,45 (S, 18H), 1,96 (s, 3H), 6,58 (s, 1H) , 8,06 (S, 1H), 9,23 (s, 1H).

Manteve-se ao refluxo o último composto (25,2g) numa mistura de oxalato de dietilo (200 ml) e ácido acético (200 ml) durante 18 horas. Arrefeceu-se a mistura e adicionou-se 250 ml de água. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se para dar 6 g (40%) do composto do título. P.f. >320°C. 1H-RMN (DMSO-dg, 6): 2,17 (S, 3H), 6,75 (S, 1H), 11,90 (s, 1H), 12,25 (s, 1H).

Análise: calculada para 07^Ν2θ23 .H20: C, 41,99; H, 4,03? N, 13,99? S, 16,01%. Determinada: C, 41,82? H, 4,20? N, 13,52? S, 15,68%. EXEMPLO 3 6-Bromo-7-metiltienor2.3-blpirazina-2.3flH. 4H1-diona

Processo E:

Suspendeu-se hidrato de 7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 74 474 2003ptl0 -25-

4H)-diona (0,1 g, 0,5 mmol) em 10 ml de ácido acético e arrefeceu-se a 10°C. Adicionou-se gota a gota uma solução de bromo (0,08 g, 0,5 mmol) em 2 ml de ácido acético, e continuou--se a agitação durante 2 horas à temperatura ambiente. Verteu-se a mistura reaccional para água gelada (120 ml), retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se. Rendimento de 0,123 g (94%) do composto do título. P.f. >280°C. 1H-KMN (DMSO-dg, 5): 2,13 (s, 3H), 12,00 (s, 1H), 12,18 (s, 1H).

Análise: calculada para C7H5N2Br02S.H20: C, 30,12; H, 2,53; N, 10,04; Br, 28,63; S, 11,49%. Determinada: C, 30,26; H, 2,59; N, 9,99; Br, 28,53; S, 11,68%. EXEMPLO 4 6-Nitro-7-metiltienoΓ2.3-b]pirazina-2 f3(1H. 4H)-diona Processo F:

Suspendeu-se hidrato de 7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (91,1 mg, 0,46 mmol) em 1 ml de anidrido acético e arrefeceu-se a 0°C. Adicionou-se gota a gota uma mistura de ácido nítrico fumante (48 mg, 0,75 mmol) em 1 ml de ácido acético. Agitou-se a mistura a 0-5°C durante 3 horas e verteu-se para 90 ml de água gelada. Retirou-se o precipitado por filtração, secou-se e recristalizou-se em acetonitrilo para dar 35 mg (38%) do composto do título. P.f. 260-262°C (dec.). 1H-RMN (DMSO-dg, á): 2,60 (S, 3H), 12,15 (s, 1H), 12,68 (s, 1H). EXEMPLO 5 6-Cloro-7-metiltienor2.3-b)pirazina-2.3(1H. 4ΙΠ-diona Processo G:

Suspendeu-se hidrato de 7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (1/46 g, 7,29 mmol) em 160 ml de ácido acético e adicionou-se cloreto de sulfurilo (0,65 ml, 8 mmol). Continuou-

74 474 2003ptl0 -se a agitação durante 4 horas, retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com ácido acético e secou-se. Recristalizou--se o material em bruto (1,26 g) refluxando-o em ácido acético (400 ml) e reprecipitando-o com água (400 ml). Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se a 80°C sob pressão reduzida (3947 Pa (30 Torr)). Rendimento de 0/92 g (58%) do composto do título. P.f. >300"C. -^H-RMN (DMSO-dg, δ): 2,15 (S, 3H), 12,00 (S, 1H), 12,12 (S, 1H).

Análise: calculada para C7H5N2C102S: C, 38,81; H, 2,33; N, 12,93; Cl, 16,36%; Determinada: C, 39,03; H, 2,55; N, 12,49; Cl, 16,28%; EXEMPLO 6 7-Ciano-6-metiltieno [ 2,3-b~) pirazina-2.3 (1H. 4H) -diona Processo H: 3-bis(t-Butoxicarbonil)amino-4-ciano-5-metiltiofeno-2-carboxi-lato de metilo

Arrefeceu-se uma mistura agitada de 3-amino-4-ciano-5--metiltiofeno-2-carboxilato de metilo (7,5 g, 38,2 mmol) (K. Saito, S. Kampe, Synthesis. 1056, 1982) e piridina (75 ml), num banho de gelo, enquanto se adicionaram dicarbonato de di-terc--butilo (17,2 g, 74,44 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (4,67 g, 38,22 mmol). Removeu-se o banho de gelo e continuou-se a agitação durante 120 horas à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura reaccional e lavou-se com piridina. Evaporou-se o filtrado até á secura e adicionou-se 225 ml de metanol sob agitação. Filtrou-se a mistura resultante e lavou-se o precipitado com metanol e rejeitou-se. Agitou-se o filtrado e adicionou-se 200 ml de água. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se. Rendimento de 9,4 g (62%) de 3-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciano-5-metiltiofeno-2--carboxilato de metilo. P.f. 97-l02°C. 1H-RMN (DMSO-d6, δ): 1,38 (s, 18H), 2,70 (s, 3H), 3,83 (s, 3H). -27- -27- íW C -1-. - 74 474 2003ptl0

Fez-se reagir o último composto (7,93 g, 20 mmol) com NaOH IN (60 ml, 60 mmol) em tetra-hidrofurano seguindo o procedimento esboçado no exemplo 1 (processo B). Rendimento de 5,3 g (94%) de ácido 3-t-butoxicarbonilamino-4-ciano-5-metiltiofeno-2-carbo-xílico. 1H-RMN (CDCI3, δ): 1,52 (s, 9H), 2,6 (s, 3H), 8,72 (s, 1H).

Fez-se reagir o ácido anterior (5,2 g, 18,9 mmol) com difenilfosforilazida em t-butanol seguindo o procedimento esboçado no exemplo 1 (processo C). Rendimento de 5,5 g de 4--ciano-5-metiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo em bruto. ^-H-RMN (DMSO-d6, 6): 1,45 (s, 18H), 2,48 (s, 3H), 8,38 (S, 1H), 9,95 (s, 1H).

Manteve-se em refluxo o último composto (3,0 g, 8,5 mmol) numa mistura de oxalato de dietilo (26 ml) e ácido acético (26 ml) durante 2 horas numa atmosfera de azoto. Deixou-se arrefecer a mistura reaccional e retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água, éter, e secou-se. Rendimento de 0,63 g (36%) do composto do título. P.f. >300°C. ^-RMN (DMSO-d6, 5): 2,55 (s, 3H), 12,30 (s largo, 2H).

Análise: calculada para CgHg^C^S: C, 46,37; H, 2,43; N, 20,28, S, 15,47%. Determinada: C, 46,04; H, 2,53; N, 20,01; S, 15,32%. EXEMPLO 7 6-Etoxicarbonil-7-propiltieno Γ2,3-b1oirazina-2,3(1H, 4H)-diona Processo I:

Hidrocloreto de 2-amino-4-propiltiofeno-5-carboxilato de etilo

Manteve-se em refluxo uma mistura de butirilacetato de etilo (100 g, 632 mmol), ácido cianoacético ( 54,84 g, 645 mmol), ácido 3-aminopropanóico (3,4 g, 38,2 mmol), piperidina (1,28 mm), acetato de amónio (7,7 g, 100 mmol) e ácido acético -28- -28- 74 474 2003ptl0 <? e; r';7Í— (14,67 ml) em 550 ml de benzeno seco e destilou-se a mistura azeotrópica com uma ratoeira Dean-Stark. Após o refluxo durante 24 horas, recolheu-se 10,5 ml de água e adicionaram-se ainda 3,3 g de acetato de amónio e 2,83 ml de piperidina. Manteve-se a mistura reaccional em refluxo durante um período de tempo total de 84 horas e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida. Fraccionou-se o resíduo in vacuo e recolheu-se a fracção de destilação a 80-56°C (79-184 Pa (0,6-1,4 Torr)) (77,5 g). O refraccionamento deu 53,5 g (47%) de 4-ciano-3-propil-3--butenoato de (E,Z)-etilo (80-86*C, (66-92 Pa (0,5-0,7 Torr)).

Agitou-se uma mistura de 4-ciano-3-propil-3-butenoato de (E,Z)-etilo (53 g, 225 mmol) e enxofre (7,21 g, 225 mmol) em 150 ml de etanol e adicionou-se, gota a gota, dietilamina (30 ml). Agitou-se a mistura durante 4 horas a 25°C, e arrefeceu-se num banho de gelo, e adicionou-se 180 ml de ácido clorídrico conc. Extractou-se a solução resultante com éter (3 x 25 ml) e evaporou-se a fase aquosa até cerca de metade do volume sob pressão reduzida. Arrefeceu-se a mistura aquosa a 0°C, retirou--se o precipitado por filtração, lavou-se com álcool gelado e secou-se. Rendimento de 18,6 g (33%) de hidrocloreto de 2-amino--4-propiltiofeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 126-128°C. -^H-RMN (DMSO-dg, 6): 0,89 (t, 3H), 1,20 (t, 3H), 1,50 (hex, 2H), 2,75 (t, 3H), 4,12 (q, 2H), 5,87 (s, 1H), 6,86 (s largo, 3H).

Processo J: 2-Etoxalilamino-4-propiltiofeno-5-carboxilato de etilo.

Dissolveu-se o hidrocloreto anterior (18,0 g, 72,1 mmol) em 230 ml de piridina e agitou-se numa atmosfera de azoto seca. Arrefeceu-se a mistura agitada a 0°C e adicionou-se 4-dimetil-aminopiridina (0,88 g, 7,2 mmol) seguido pela adição, gota a gota, de uma solução de oxalilcloreto de etilo (12,07 g, 108 mmol) em 50 ml de tetra-hidrofurano seco. Quando se completou a adição (1 hora), removeu-se o banho de gelo e continuou-se a agitação durante 16 horas. Verteu-se a mistura reaccional para água gelada, retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se 2003ptl0 -29-

com água e secou-se. Rendimento de 19 g (84%) de 2-etoxalilamino-4-propiltifeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 93--94 °C. 1H-RMN (DMS0-d6, 6): 0,90 (t, 3H), 1,38 (t, 3H), 1,42 (t, 3H), 1,56 (hex, 2H), 2,88 (t, 2H), 4,24 (q, 2H), 4,33 (q, 2H), 6,96 (S, 1H), 12,48 (S, 1H).

Processo K: 2-Etoxalilamino-3-nitro-4-propiltiofeno-5-carboxilato de etilo.

Agitou-se uma mistura de 2-etoxalilamino-4-propiltiofeno-5--carboxilato de etilo (9,0 g, 28,7 mmol) em 52 ml de anidrido acético e 58 ml de cloreto de metileno numa atmosfera de azoto seca e arrefeceu-se a -10°C. Adicionou-se gota a gota, durante 0,5 horas, uma mistura de ácido nítrico (1,78 ml, d=l,52) em 40 ml de ácido acético. Agitou-se a mistura reaccional a 0-5"C durante 16 horas e verteu-se para água gelada. Separou-se a fase orgânica e neutralizou-se cuidadosamente com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado. Lavou-se a fase orgânica neutra com água, secou-se (Na2S04) e evaporou-se o solvente. Dissolveu-se o resíduo em metanol e adicionou-se água para favorecer a precipitação. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com metanol aquoso frio e secou-se. Rendimento de 4,77 g (46%) de 2-etoxalilamino-3-nitro-4-propiltiofeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 73-75°C. 1H-RMN (DMS0-d6, 5): 0,98 (t, 3H), 1,39 (t, 3H), 1,45 (t, 3H), 1,55 (hex, 2H), 3,20 (t, 2H), 4,31 (q, 2H), 4,38 (q, 2H), 12,02 (s, 1H).

Processo L: 6-Etoxicarbonil-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Agitou-se uma suspensão de 2-etoxalilamino-3-nitro-4--propiltiofeno-5-carboxilato de etilo (4,2 g, 11,7 mmol) e pó de zinco (3,83 g, 58,6 mmol) em 57 ml de ácido acético aquoso a 80%, sob uma atmosfera de azoto num banho de água durante 1 hora. Decantou-se a mistura reaccional do zinco residual e verteu-se para água gelada. Retirou-se o precipitado por 74 474 2003ptl0

-30-

Sf '

filtração, lavou**se com água e secou-se. A recristalização em etanol (300 ml) produziu 1,67 g (62%) do composto do título. P.f. 305-307 °C. 1H-RMN (DMS0-d6, 5): 0,93 (t, 3Ή), 1,28 (t, 3H), 1,49 (hex, 2H), 2,96 (t, 3H), 4,26 (q, 2H), 12,06 (s, 1H) 12,54 (S, 1H).

Análise: calculada para c12Hi4N2°4S! C, 51,05; H, 5,00; N, 9,92, S, 11,36%. Determinada C, 50,85; H, 5,19; N, 9,89; S, 11,37%. EXEMPLO 8 6-Carboxi-7-propiltienof2.3-blPÍrazina-2.3(1H. 4m-diona Processo M:

Aqueceu-se a 50-60°C durante 8 horas uma mistura de 6--etoxicarbonil-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona (1,5 g, 5,3 xnmol) e NaOH (0,85 g, 21 mmol) em tetra-hidrofurano aquoso a 50% (20 ml). Arrefeceu-se a mistura reaccional a 0°C e acidificou-se (pH=2,5) com ácido clorídrico. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se. Moeu-se a massa cristalina e agitou-se numa mistura 1:1 de etanol e éter. Retirou-se o precipitado por filtração e secou-se para dar 1,0 g (75%) dO composto do título. P.f. 269-271 °C. ^-H-RMN (DMSO--d6, S): 0,95 (t, 3H), 1,47 (hex, 2H), 2,97 (t, 2H), 12,00 (s, 1H), 12,48 (s, 1H), 12,92 (S, 1H).

Análise: calculada para C10H12N2°4S: C, 47,24; H, 3,96; N, 11,02, S, 12,61%. Determinada: C, 46,97; H, 4,08; N, 10,67; S, 12,71%. EXEMPLO 9 7-Propiltienor2,3-blpirazina-2,3flH. 4H)-diona Processo N:

Agitou-se uma suspensão de 6-carboxi-7-propiltieno[2,3-b]- -31- ->·>· -31- ->·>·

74 474 2003ptl0 pirazina-2,3(111, 4H)-diona (5,0 g, 19,7 mmol) e bronze de cobre (0,62 g) em 25 ml de quinolina e aqueceu-se gradualmente a 150°C numa atmosfera de azoto. Quando a libertação de dióxido de carbono diminuiu, removeu-se o catalisador da mistura reaccional quente por filtração e lavou-se com 20 ml de DMF. Agitou-se o filtrado e arrefeceu-se até à temperatura ambiente e realizou-se a precipitação por adição de éter. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com éter e secou-se para dar 3,44 g (81%) do composto do título. P.f. 277-279eC. 1H-RMN (DMSO-dg, S): 0,92 (t, 3H), 1,54 (hex, 2H), 2,55 (t, 2H), 6,74 (s, 1H), 11,90 (s, 1H), 12,22 (s, 1H).

Análise: calculada para CgH10N2°2·0'25 H20: C, 50,33; H, 4,93; N, 13,04, S, 14,92%. Determinada: C, 50,51; H, 4,83; N, 12,90; S, 14,69%. EXEMPLO 10 6- Cloro-7-propiltieno[2.3-b]pirazina-2.3(1H. 4ΗΪ-diona

Realizou-se a cloração de um quarto de hidrato de 7- propil-tieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (0,2 g, 0,93 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 5 (processo G). Rendimento de 135 mg (58%) do composto do título. P.f. 285--287°C. ^H-RMN (DMSO-dg, 6): 0,90 (t, 3H), 1,45 (hex, 2H), 2,61 (t, 3H), 12,05 (S, 1H), 12,18 (s, 1H).

Análise: calculada para C9H9N2C102S: C, 44,18; H, 3,71; N, 11,45, S, 13,10%. Determinada: C, 43,88; H, 3,85; N, 11,01; S, 12,92%. EXEMPLO 11 6- Bromo-7-propiltieno Γ2.3-b)PÍrazina-2.3(1H. 4H)-diona

Realizou-se a bromação de um quarto do hidrato de 7- propil-tieno[2,3-b]pirazina-2/3(lH, 4H)-diona (0,2 g, 0,93 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 5 (processo

74 474 2003ptl0 -32- E). Rendimento de 105 mg (39%) do composto do título. P.f. 269--271°C. ^-RMN (DMSO-dg, δ): 0,91 (t, 3H), 1,47 (hex, 2H), 2,60 (t, 3H) , 12,00 (s, 1H), 12,15 (s, 1H).

Análise: calculada para CgHg^BrC^S: C, 37,38; H, 3,14? N, 3,69%. Determinada: C, 37,27; H, 3,20; N, 9,64%. EXEMPLO 12 6-Bromotieno Γ2.3-blPÍrazina-2.3(1H. 4H)-diona

Fez-se reagir tieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (0,10 g, 0,59 mmol) com bromo (0,095 g, 0,59 mmol) em ácido acético seguindo o procedimento esboçado no exemplo 3 (processo E). Rendimento de 0,132 g (91%) do composto do título. P.f. >300CC. 1H-RMN (DMS0-d6, S): 6,87 (s, 1H), 12,05 (s, 2H). EXEMPLO 13 6-Etoxicarbonil-7-metiltienor2,3-blpirazina-2,3(1H. 4H)-diona

Fez-se reagir hidrocloreto de 2-amino-4-metiltiofeno-5--carboxilato de etilo (60 g, 270,6 mmol) (K. Gewald et al. . Journ. f. prakt. Chemie. B. 315 (1973) p. 539) com oxalilcloreto de etilo (45,4 ml, 406 mmol) em piridina contendo 4-dimetil-aminopiridina (3,31 g, 27,1 mmol) e trietilamina (38,5 ml, 276 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 7 (processo J). Rendimento de 72,1 g (93,4%) de 2-etoxalilamino-4-metil-tiofeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 141-142"C. 1H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,27 (t, 3H), 1,32 (t, 3H), 2,44 (s, 3H), 4,23 (q, 2H), 4,34 (q, 2H), 6,93 (s, 1H), 12,5 (s, 1H).

Nitrou-se o último composto (50 g, 175 mmol), seguindo o procedimento esboçado no exemplo 7 (processo K). Após evaporação do cloreto de metileno in vacuo. verteu-se a mistura reaccional sobre gelo moído. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou--se com água e recristalizou-se em etanol para dar 29,5 g (51%) 74 474 2003ptl0 -33-

de 2-etoxalilamino-3-nitro-4-metiltiofeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 118—120°C. ^-H-RMN (DMS0-d6/ δ): 1,31 (t, 3H), 1,34

Fez-se reagir o composto anterior (0#50 g, 1,51 mmol) com pó de zinco (1,04 g, 15,9 mmol) em ácido acético aquoso a 80% seguindo o procedimento esboçado no exemplo 7 (processo L). Rendimento de 128 mg (33%) do composto do título. P.f. >300°C. 1H-RMN (DMSO-dg, 5): 1,26 (t, 3H), 2,47 (s, 3H), 4,23 (q, 2H) 12,0 (s, 1H), 12,52 (s, 1H). EXEMPLO 14 6-Carboxi-7-metiltienor2.3-b]pirazina-2.3(1H. 4H)-diona

Agueceu-se 6-etoxicarbonil-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3--(1H, 4H)-diona (60 mg, 0,236 mmol) em NaOH 1M (0,944 ml) a 50°C sob agitação durante 8 horas. Filtrou-se a mistura e acidificou--se com HC1 2M (1,0 ml) sob arrefecimento num banho de gelo. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se para dar 29 mg (54%) do composto do título. P.f. 289-—294°C. 1H-RMN (DMSO-dg, S): 2,45 (s, 3H), 11,96 (s, 1H), 12,45 (s, 1H), 12,96 (s, 1H). EXEMPLO 15 6-Isopropiltienor2.3-blpirazina-2.3(1H. 4H)-diona 2-amino-5-isopropiltiofeno-3-carboxilato de metilo

Dissolveu-se cianoacetato de metilo (158 g, 2 mol) em 250 ml de dimetilformamida e adicionou-se enxofre (64 g, 2 mol). Adicionou-se gota a gota trietilamina (108 g, 2 mol) a menos de 30°C, seguido por isovaleraldeído (172 g, 2 mol), mantendo a temperatura abaixo de 50°C. Agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente, após o que se adicionaram 500 ml de água. Isolou-se o óleo negro que precipitou, extractou-se a fase aquosa duas vezes com tolueno, lavaram-se as fases orgânicas 74 474 2003ptl0

-34- combinadas duas vezes com água e evaporaram-se in vacuo para dar 350 g de óleo escuro. Dissolveu-se esta substância em 100 ml de tolueno contendo 5% de acetato de etilo e filtrou-se através de uma coluna curta de sílica gel (350 g) para remover o material polimérico. Na eluição com o mesmo solvente, rejeitaram-se os primeiros 200 ml, e evaporaram-se e destilaram-se os 1500 ml seguintes. A fracção de destilação a 135-140°c (13 Pa (0,1 Torr)) rendeu 208 g (48%) de 2-amino-5-isopropiltiofeno-3-car-boxilato de metilo. 1H-RMN (CDC13, 5): 1,25 (d, 6H), 2,9 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 5,8 (largo, 2H), 6,6 (s, 1H). Ácido 2-amino-5-isopropiltiofeno-3-carboxílico

Dissolveu-se 2-amino-5-isopropiltiofeno-3-carboxilato de metilo (59,8 g, 0,3 mol) em 210 ml de etanol aquoso a 50% contendo 24,6 g (0,6 mol) de hidróxido de sódio e manteve-se em refluxo durante a noite. Evaporou-se o etanol in vacuo. e extractou-se a solução aquosa duas vezes com clorofórmio. Acidificou-se a fase aquosa ajustando o pH a 4,5 com ácido clorídrico. Isolou-se o precipitado, dissolveu-se em 150 ml de etanol, e tratou-se com 4 g de carvão activado (Norit SU18). Filtrou-se a mistura e concentrou-se até 100 ml. Adicionou-se água (500 ml) e retirou-se o precipitado por filtração para dar 39 g (70%) de ácido 2-amino-5-isopropiltiofeno-3-carboxílico que funde com decomposição a 115°C. 1H-RMN (CDC13, 5): 1,2 (d, 6H), 2,9 (m, 1H), 5,8 (largo, 2H), 6,65 (s, 1H).

Hidrocloreto de 2-amino-5-isopropiltiofeno

Aqueceu-se ácido clorídrico concentrado (125 ml) até 60eC com agitação, e adicionou-se gota a gota uma solução de ácido 2--amino-5-isopropiltiofeno-3-carboxílico (18,52 g, 0,1 mol) em 200 ml de n-propanol enquanto se aumentou gradualmente a temperatura até 80°C. Observou-se uma lenta libertação de dióxido de carbono com diminuição após 2 horas. Evaporou-se a mistura in vacuo. e fraccionou-se cinco vezes com 200 ml de propanol para remover a água. Dissolveu-se o resíduo em 25 ml de propanol, e re-precipitou-se pela adição de 300 ml de tetra- 74 474 2003ptl0

-35- -hidrofurano. Após agitação durante a noite, retirou-se o precipitado por filtração para dar 9,23 g (52%) de hidrocloreto de 2-amino-5-isopropiltiofeno que funde com destruição a 152--153 °C. 1H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,2 (d, 6H), 3,2 (m, 1H), 6,7 (d, 1H), 6,8 (d, 1H). 2-Etoxalilamino-5-isopropiltiofeno

Agitou-se a -5°C uma mistura de hidrocloreto de 2-amino-5--isopropiltiofeno (5,3 g, 30 mmol), trietilamina (6,13 g, 60 mmol), 4-dimetilaminopiridina (0,37 g, 3 mmol) e 60 ml de piridina seca. Adicionou-se gota a gota uma solução de oxalilcloreto de etilo (4,28 g, 3,5 mmol) em 25 ml de tetra--hidrofurano e continuou-se a agitação durante 2 horas. Evaporou-se a mistura e agitou-se o resíduo numa mistura de tolueno e água enquanto se ajustou o pH a 1,5 com ácido clorídrico. Lavaram-se os extractos orgânicos combinados com bicarbonato saturado seguido por água e evaporaram-se para dar 6,9 g (96%) de 2-etoxalilamino-5-isopropiltiofeno em bruto na forma de um óleo viscoso castanho. ^-RMN (CDC13, δ): 1,3 (d, 6H), 1,4 (t, 3H), 3,1 (m, 1H), 4,4 (q, 2H), 6,6 (d, 1H), 6,8 (d, 1H). 2-Etoxalilamino-5-isopropil-3-nitrotiofeno

Dissolveu-se 2-etoxalilamino-5-isopropiltiofeno (6,9 g, 28,5 mol) em 50 ml de anidrido acético, arrefeceu-se a -10°C, e tratou-se com uma solução de ácido nítrico fumante (1,8 g, 28,5 mmol) em 15 ml de ácido acético. Após 20 minutos, evaporou-se a mistura in vacuo para dar 8,4 g de produto bruto que se purificou por cromatografia sobre sílica gel (tolueno:acetona 95:5), para dar 4,8 g (57%) de 2-etoxalilamino-5-isopropil-3--nitrotiofeno. 1H-RMN (CDCI3, δ): 1,3 (d, 6H), 1,5 (t, 3H), 3,1 (m, 1H), 4,5 (q, 2H), 12,0 (s, 1H). 6-Isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Dissolveu-se 2-etoxalilamino-5-isopropil-3-nitrotiofeno (1 74 474 2003ptl0 -36

g, 3,5 mmol) em 10 ml de dioxano a 50 °C, adicionou-se 6 ml de água, e tratou-se a solução com 12,2 g (70 mmol) de ditionito de sódio dissolvido em 50 ml de água quente (50°C) durante um período de 30 minutos. Arrefeceu-se a mistura e extractou-se com 4 x 25 ml de acetato de etilo. Lavaram-se as fases orgânicas combinadas com água, secaram-se (MgS04), e concentraram-se a 15 ml, pelo que se separarou um precipitado de cristais que se retiraram por filtração e se secaram para dar 65 mg (8%) do composto do título, que funde depois dos 300°c. 1H-EMN (DMSO-dg, 5): 1,2 (d, 6H), 3,1 (m, 1H), 6,5 (S, 1H), 11,8 (largo, 1H), 12,2 (largo, 1H).

Análise: calculada para CgH10N202s·0'25 H20: C, 50,34; H, 4,93; N, 13,05; S, 14,93%. Determinada: C, 50,60; H, 4,95; N, 13,00; S, 15,40%. EXEMPLO 16 6-Feniltienor2.3-blpirazina-2.3(lH. 4H)-diona 2-Etoxali1amino-5-feni1tiofeno

Agitou-se uma mistura de hidrocloreto de 2-amino-5-fenil-tiofeno (2,11 g, 10 mmol) (J. orakt. Chern.. 315. 539 (1973)), trietilamina (1,4 ml, 10 mmol), 4-dimetilaminopiridina (0,12 g, 1 mmol) e 70 ml de piridina seca, e arrefeceu-se a 5°C. Adicionou-se gota a gota uma solução de oxalilcloreto de etilo (2,05 g, 15 mmol) em 8 ml de tetra-hidrofurano durante 15 min., e após 45 min evaporou-se a mistura reaccional in vacuo. Dissolveu-se o resíduo em 10 ml de etanol e adicionou-se 100 ml de água em pequenas porções. Retirou-se o precipitado por filtração e secou-se para dar 2,76 g (100%) de 2-etoxalilamino-5-feniltiofeno. 1H-RMN (DMSO-dg, 6): 1,3 (t, 3H), 5,3 (q, 2H), 7,05 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,33 (d, 1H), 7,4 (t, 2H), 7,6 (d, 2H), 12,3 (s, 1H).

74 474 2003ptl0 -37- 2-Etoxalilamino-5-feni1-3-nitrotiofeno

Dissolveu-se 2-etoxalilamino-5-feniltiofeno (2,75 g, 10 mmol) em 20 ml de anidrido acético, arrefeceu-se a -15°C, e tratou-se com uma solução de 0,63 ml (10 mmol) de ácido nítrico fumante dissolvido em 5 ml de ácido acético, durante um período de 30 minutos. Após 10 minutos a esta temperatura, evaporaram-se os solventes, e removeram-se os vestígios de ácido acético por fraccionamento com tolueno. Suspendeu-se o resíduo sólido em 50 ml de etanol, e adicionou-se lentamente 50 ml de água. Agitou-se a mistura durante a noite, e isolou-se o precipitado pôr filtração para dar 2,62 g (82%) de 2-etoxalilamino-5-fenil-3--nitrotiofeno, que funde a 139-144°C. 1H-RMN (DMSO-dç, 5): 1,3 (t, 3H), 4,4 (q, 2H), 6,9 (t, 1H), 7,0 (t, 2H), 7,8 (d, 2H) , 8,0 (S, 1H). 6-Feniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Suspendeu-se 2-etoxalilamino-5-fenil-3-nitrotiofeno (641 mg, 2 mmol) em 35 ml de ácido acético a 80%, e adicionou-se 1,31 g (20 mmol) de pó de zinco de uma só vez com agitação. Após 2 horas, adicionou-se lentamente 70 ml de água à suspensão, e isolou-se o precipitado por filtração (483 mg). Purificou-se este produto bruto por suspensão em 20 ml de cloreto de metileno, filtração e subsequente cristalização dissolvendo-o em 50 ml de ácido acético ebuliente e adicionando lentamente 30 ml de água. 0 rendimento foi de 87 mg (17,8%) do composto do título na forma de cristais, que fundem acima de 300°C. -^H-RMN (DMSO--d6, δ): 7,05 (S, 1H), 7,3 (t, 1H), 7,4 (t, 2H) , 7,6 (d, 2H) , 11,9-12,5 (largo, 2H). EXEMPLO 17 7-Ciano-6-fmetiltio^tienor2.3-b!pirazina-2.3f1H. 4m-diona 3-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciano-5-(metiltio)tiofeno-2--carboxilato de etilo

Arrefeceu-se a 0°C, sob azoto, uma mistura agitada de 74 474 2003ptl0

-38- /y/r 3-amino-4-ciano-5-(metiltio)tiofeno-2-carboxilato de etilo (15 g, 62 mmol), piridina (150 ml) e 4-dimetilaminopiridina (7,5 g, 62 mmol) e adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (27,6 g, 124 mmol). Manteve-se a mistura agitada a 0°C durante 3 horas e deixou-se à temperatura ambiente durante 16 horas. Evaporou-se a mistura reaccional até à secura sob pressão reduzida e submeteu--se a cromatografia flash sobre sílica gel 60 eluindo com tolueno. Triturou-se o resíduo com éter de petróleo e filtrou-se para dar 18 g (67%) de 3-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciano-5--(metiltio)tiofeno-2-carboxilato de etilo. P.f. 90-94°C. -’-Η-ΕΜΝ (CDC13, í): 1,35 (t, 3H), 1,45 (s, 18H), 2,70 (s, 3H), 4,33 (q, 2H) . Ácido 4-ciano-5-metiltio-3-(t-butoxicarbonilamino)tiofeno-2- -carboxílico

Aqueceu-se a 50°C durante 16 horas uma mistura de 3-bis(t--butoxicarbonil)amino-4-ciano-5-(metiltio)tiofeno-2-carboxilato de etilo (10 g, 22 mmol), tetra-hidrofurano (250 ml) e hidróxido de sódio 4N (25 ml). Evaporou-se a mistura, e adicionou-se água (50 ml) seguida por acidificação com ácido acético (pH=4) a 0°c. Retirou-se o precipitado por filtração e secou-se para dar 7,05 g (99%) do ácido 4-ciano-5-metiltio-3-(t-butoxicarbonilamino)-tiofeno-2-carboxílico. ^-H-RMN (DMSO-dg, <S): 1,45 (s, 9H), 2,70 (s, 3H), 9,20 (S, 1H). 4-Ciano-5-(metiltio)tiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Realizou-se a reacção de ácido 4-ciano-5-metiltio-3-(t--butoxicarbonilamino)tiofeno-2-carboxílico (9,2 g, 29 mmol), difenilfosforilazida (10,0 g, 36,5 mmol) e trietilamina (4 ml, 29 mmol) em álcool t-butílico (675 ml) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 1 (processo C). Purificou-se o produto bruto por cromatografia flash sobre sílica gel 60 eluindo com tolueno graduado para diclorometano. A recristalização em tolueno/éter de petróleo deu 3,0 g de 4-ciano-5-(metiltio)tiofeno-2,3- -dicarbamato de di-t-butilo. P.f. 156-157°C. 1H-RMN (CDC13, S): 1,50 (S, 18H), 2,55 (S, 3H), 6,55 (s, 1H), 8,30 (S, 1H). -39- 0 74 474 2003ptl0 7-Ciano-6-(metiltio)tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Realizou-se a reacção de 4-ciano-5-(metiltio)tiofeno-2,3--dicarbamato de di-t-butilo (1,0 g, 2,6 mmol) e oxalato de dietilo (12 ml, 88 mmol) em ácido acético (15 ml) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 1 (processo D). Rendimento de 0,45 g (72%) do composto do título. P.f. >225°C. em (70 eV): m/z 239 (69%, M+), 224 (8), 211 (4), 196 (100), 162 (3), 136 (10), 109 (50), 94 (20), 82 (27), 70 (27). EXEMPLO 18 6-Etoxicarbonil-7-etiltienof2.3-b]pirazina-2.3(1H. 4H^-diona

Hidrocloreto de 2-amino-4-etiltiofeno-5-carboxilato de etilo

Fez-se reagir propionilacetato de etilo (270,5 g, 1,876 mol) com ácido cianoacético (162,8 g, 1,914 mol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 7 (processo I). 0 fraccionamento (184 Pa (1,4 Torr), 70-80°C) deu 161,6 g (52%) de 4-ciano-3-etil-3-butenoato de (E,Z)-etilo na forma de um óleo ligeiramente azul.

Agitou-se sob azoto uma mistura de 4-ciano-3-etil-3--butenoato de (E,Z)-etilo bruto (160 g, 0,957 mol) e enxofre elementar (30,68 g, 0,957 mol) em 300 ml de etanol absoluto e adicionou-se 193 ml de dietilamina. Agitou-se a mistura reaccional durante 3,5 horas a 25°C, arrefeceu-se num banho de gelo e adicionou-se 235 ml de ácido clorídrico concentrado. Filtrou-se a solução ligeiramente turva e evaporou-se o filtrado até cerca de um terço do volume sob pressão reduzida. Arrefeceu--se a mistura, retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água gelada e ressuspendeu-se em éter. Isolou-se o precipitado e secou-se para dar 77,2 g (34%) de hidrocloreto de 2-amino-4-etiltiofeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 154-156°C. l-H-RMN (DMSO-dg, S): 1,08 (t, 3H), 1,22 (t, 3H), 2,76 (q, 2H), 4,12 (q, 2H), 5,86 (s, 1H), 6,94 (s largo, 3H).

SfS) -40-

SfS) -40- Ó. -' 74 474 2003ptl0 2-Etoxalilamino-4-etiltiofeno-5-carboxilato de etilo

Dissolveu-se o hidrocloreto anterior (69,6 g, 295 mmol) numa mistura de piridina (47,2 ml), tetra-hidrofurano seco (700 ml) e trietilamina (40,7 ml) e agitou-se a -10"C. Adicionou-se gota a gota oxalilcloreto de etilo (48,93 ml, 438 mmol) seguido pela adição de 4-dimetilaminopiridina (3,54 g, 29 mmol). Quando se completou a adição (1 h), removeu-se a fonte de arrefecimento e continuou-se a agitação durante 16 h. Evaporou-se a mistura reaccional até cerca de 0,5 1 e verteu-se para água gelada. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água“e secou-se. Rendimento de 87 g (98%) de 2-etoxalilamino-4-etil-tiofeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 103-105eC. ^H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,17 (t, 3H), 1,29 (t, 3H), 1,33 (t, 3H), 2,90 (q, 2H), 4,25 (q, 2H), 4,36 (q, 2H), 7,02 (S, 1H), 12,50 (s largo, 3H). 2-Etoxalilamino-3-nitro-4-etiltiofeno-5-carboxilato de etilo

Realizou-se a nitração do 2-etoxalilamino-4-etiltiofeno-5--carboxilato de etilo seguindo o procedimento esboçado no exemplo 7 (processo K). Rendimento de 37,3 g (38%) de 2--etoxalilamino-3-nitro-4-etiltiofeno-5-carboxilato de etilo. P.f. 70-730 C. -^H-RMN (DMSO-dg, S): 1,18 (t, 3H), 1,33 (t, 3H), 1,37 (t, 3H), 3,25 (q, 2H), 4,37 (q, 2H), 4,40 (q, 2H), 12,05 (S largo, 1H). 6-Etoxicarbonil-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Realizou-se a redução do 2-etoxalilamino-3-nitro-4-etiltio-feno-5-carboxilato de etilo (37,2 g, 108 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 7 (processo L) com a excepção de o tempo de reacção ter sido de 3 h. A recristalização em álcool produziu 25 g (87%) do composto do título. P.f. >300°C. l-H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,08 (t, 3H), 1,30 (t, 3H), 3,00 (q, 2H), 4,15 (q, 2H), 12,01 (s, 1H), 12,55 (s, 1H). 2003ptl0 -41- -41- EXEMPLO 19 6-Carboxi-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Aqueceu-se a 50-60°C durante 16 h, uma mistura de 6-etoxi-carbonil-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (24,5 g, 91 rarnol) e hidróxido de sódio (10,96 g, 274 mmol) em tetra--hidrofurano aquoso a 50% (340 ml). Arrefeceu-se a mistura reaccional a 0°C e acidificou-se (pH=2) com ácido clorídrico. Adicionou-se água (300 ml), retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se. Realizou-se ‘a purificação por dissolução em solução de hidróxido de sódio 2 M, extracção com diclorometano e precipitação da fase aquosa com ácido clorídrico. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou--se com água e secou-se para dar 14,2 g (65%) do composto do título. P.f. 230-232°C. 1H-RMN (DMSO-d6, δ): 1,09 (t, 3H) , 3,03 (q, 2H), 11,90 (s, 1H), 12,50 (s largo, 1H), 12,92 (s largo, 1H).

Análise: calculada para c9H8N204S.3/4 H20: C, 42,60; H, 3,77? N, 11,04; S, 12,63%. Determinada: C, 42,71; H, 3,63; N, 11,31? S, 12,73%. EXEMPLO 20 7-Etiltienor2.3-blPÍrazina-2.3(lH. 4H)-diona

Realizou-se a descarboxilação de 6-carboxi-7-etiltieno[2, 3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (13,5 g, 56,2 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 9 (processo N). Recristalizou--se o produto em bruto em ácido acético (225 ml) para dar 6,0 g (54%) do composto do título. P.f. >300“C. 1H-RMN (DMSO-dg, 5): 1,15 (t, 3H), 2,58 (q, 2H), 6,77 (s, 1H), 11,90 (s, 1H), 12,25 (S, 1H).

Análise: calculada para C8H8N202S: C, 48,97; H, 4,11; N, 14,28%. Determinada: C, 48,90; H, 4,13? N, 14,27%. -42- // / 74 474 2003ptl0 EXEMPT.O 21 6-Cloro-7-etiltienoΓ2.3-b!pirazina-2.3f 1H. 4m-diona

Agitou-se uma solução de 7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (1,0 g, 5#l mmol) em 250 ml de ácido acético numa atmosfera de azoto seco e adicionou-se gota a gota cloreto de sulfurilo (0,41 g, 5,1 mmol). Continuou-se a agitação durante 1 h, retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se a 100°C sob pressão reduzida (3947 Pa (30 Torr)). Rendimento de 0,77 g (65%) do composto do título. P.f. 282-284 °C. ^H-RMN (DMS0-d6, S)i 1,05 (t, 3H), 2,65 (q, 2H), 12,02 (S, 1H), 12,19 (S, 1H).

Análise: calculada para C8H7N2C102S: C, 41,66; H, 3,06; N, 12,14; Cl, 15,37; S, 13,90%. Determinada: C, 41,60; H, 3,07; N, 12,07; Cl, 15,29? S, 13,93%. EXEMPLO 22 6-Bromo-7-etiltieno|'2,3-blPÍrazina-2,3flH. 4tn-diona

Agitou-se uma suspensão de 7-etiltieno[2,3-b]pirazina--2,3(1H, 4H)-diona (1,0 g, 5,1 mmol) e acetato de sódio (0,84 g, 10,2 mmol) em 225 ml de ácido acético, a 10-15°C sob uma atmosfera de azoto seca. Adicionou-se uma solução de bromo (0,26 ml, 5,1 mmol) em 2 ml de ácido acético durante 0,5 h. Continuou--se a agitação durante mais 0,5 h à temperatura ambiente e verteu-se a mistura reaccional para água gelada. Descolorou-se a mistura avermelhada por adição de uma pequena quantidade de ditionito de sódio aquoso. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água, ressuspendeu-se em álcool, filtrou-se e lavou-se com éter. A secagem a 60 °C in vacuo produziu 720 mg (51%) do composto do título. P.f. 295-297°C. ^H--RMN (DMSO-dg, S)l 1,04 (t, 3H), 2,62 (q, 2H), 12,01 (s, 1H), 12,19 (s, 1H).

Análise: calculada para CgH7N2Br02S: C, 34,92; H, 2,56; N, 10,18; Br, 29,04; S, 11,65%. Determinada: u u

11,69%. 74 474 2003ptl0 -43- C, 35,14? H, 2,58? N, 10,06; Br, 29,15; S, EXEMPLO 23 7-lsopropiltienor2.3-blpirazina-2.3flH. 4in-diona Processo O; 2-Ciano-4-metil-2-pentenoato de (E,Z)-etilo

Manteve-se em refluxo uma mistura de cianoacetato de etilo (53,1 g, 470 mmol), isopropilmetilcetona (67,0 g, 778 mmol), tolueno (60 ml), acetato de amónio (4,6 g, 60 mmol) e ácido acético glacial (7,1 g, 118 mmol), durante 6 horas com remoção azeotrópica de água por uso de uma ratoeira Dean-Stark. Após a reacção estar completa, adicionou-se éter (200 ml) e extractou--se a solução com solução de cloreto de sódio 1M (2 x 160 ml). Separou-se a fase orgânica, secou-se (MgSO^) e concentrou-se in vacuo para dar 2-ciano-4-metil-2-pentenoato de (E,z)-etilo em bruto (80 g, 94%), 1H-RMN (CDC13, 5): 1,1 (dd, 6H), 1,35 (t, 3H), 2,2 (s, 1,2H), 2,3 (s, 1,8H), 3,35 (m, 0,6H), 4,05 (m, 0,4H), 4,3 (q, 2H). 2-Amino-4-isopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo

Agitaram-se 2-ciano-4-metil-2-pentenoato de (E,Z)-etilo (80 g, 442 mmol), enxofre (16 g, 500 mmol), dietilamina (50 ml, 479 mmol) e etanol (275 ml) a 55°C durante 4 h. Concentrou-se a mistura in vacuo e submeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo com tolueno. Recristalizou-se o produto em tolueno/éter de petróleo (1:3) para dar 50 g (53%) de 2-amino-4-isopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo. P.f. 61--61,5°C. ^H-RMN (CDC13, S)i 1,2 (d, 6H), 1,35 (t, 3H), 3,45 (m, 1H), 5,9 (s, 1H), 6,1 (s largo, 2H). 74 474 2003ptl0

-44- // .¾ 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-isopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo

Arrefeceu-se a 0°C sob azoto, uma mistura agitada de 2--amino-4-isopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo (11,7 g, 55 mmol), piridina (140 ml) e 4-dimetilaminopiridina (6,6 g, 55 mmol), e adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (37 ml, 165 mmol). Manteve-se a mistura agitada a 0°C durante 3 h e deixou--se à temperatura ambiente durante 16 h, seguidas por 2 h a 60°C. Concentrou-se a mistura in vacuo e submeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo cõm tolueno graduado para tolueno/acetato de etilo (1:3). Rendimento de 22,5 g (99%) de 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-isopropil-tiofeno-3-carboxilato de etilo na forma de um óleo. ^-H-RMN (CDC13, δ): 1,2 (d, 6H), 1,35 (t, 3H), 1,4 (s, 18H), 3,5 (m, 1H), 4,25 (q, 2H), 6,85 (s, 1H). Ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-isopropiltiofeno-3-carboxílico

Agitou-se uma solução de 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4--isopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo (22,5 g, 55 mmol) em metanol (425 ml) e adicionou-se uma solução de hidróxido de potássio (14,5 g, 259 ml) em água (145 ml). Aqueceu-se a mistura a 80°C durante 16 h, arrefeceu-se a 0eC e acidificou-se (pH=5) com ácido acético glacial. Retirou-se o precipitado por filtração e recristalizou-se em acetato de etilo/éter de petróleo para dar 12,4 g (80%) de ácido 2-t-butoxicarbonilamino--4-isopropiltiofeno-3-carboxílico. P.f. 205-206eC. ^-H-RMN (CDC13, δ): 1,25 (d, 6H), 1,55 (s, 9H), 3,6 (m, 1H), 6,45 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 10,2 (s, 1H). 4-Isopropiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-terc-butilo

Aqueceu-se ao refluxo, durante 64 h, uma mistura de ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-isopropiltiofeno-3-carboxílico (4,0 g, 14,0 mmol) em 2-metil-2-propanol (125 ml), trietilamina (1,8 g, 18,2 mmol) e difenilfosforilazida (4,25 g, 15,4 mmol). Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo e retomou-se o 74 474 2003ptl0 45

resíduo em diclorometano o qual se lavou sucessivamente com uma solução de ácido cítrico a 5%, água e uma solução aquosa de bicarbonato de sódio. Secou-se a fase orgânica (MgSO^) e concentrou-se in vacuo para dar 1,4 g (28%) de 4-isopropil-tiofeno-2/3-dicarbamato de di-terc-butilo. 1H-RMN (CDClj , S): 1,15 (d, 6H), 1,5 (s, 18H), 2,75 (m, 1H), 6,0 (s largo, 1H), 6,5 (s, 1H), 7,65 (s largo, 1H). 7-Isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Manteve-se em refluxo, durante 2 h, uma mistura de 4-isO-propiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-terc-butilo (1,42 g, 3,98 mmol), oxalato de dietilo (25 ml, 183 mmol) e ácido acético glacial (25 ml). Arrefeceu-se a mistura reaccional sobre gelo durante 2 h e retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se duas vezes com água e finalmente com éter. Rendimento de 580 mg (69%) do composto do título. P.f. >250°C. ^-H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,15 (d, 6H), 3,1 (m, 1H), 6,75 (s, 1H), 11,9 (s largo, 2H). EM (70 eV): m/z 210 (100%, M+), 195 (97), 182 (42), 167 (52), 154 (12), 139 (29), 122 (13), 97 (19). EXEMPLO 24 6-Cloro-7-isopropiltienor2,3-blPÍrazina-2,3(1H. 4H)-diona

Realizou-se a cloração do 7-isopropiltieno[2,3-b]pirazina--2,3(1H, 4H)-diona (200 mg, 0,96 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 5 (processo 6). Rendimento de 128 mg (55%) do composto do título. P.f. >250°C. 1H-RMN (DMSO-d6, $): 1,25 (d, 6H), 3,25 (m, 1H), 11,7 (s, 1H), 12,2 (s, 1H). EM (70 eV): m/z 246 (36%, M+), 244 (100%, M+), 231 (35), 229 (98), 218 (14), 216 (39), 203 (12), 201 (35), 181 (16), 173 (29), 166 (19), 148 (18), 137 (22), 110 (25), 86 (39). 74 474 2003ptl0 c

46 EXEMPLO 25 7-Ciclopropiltieno Γ2.3-blpirazina-2.3(1H. 4H)-diona 2-ciano-3-ciclopropil-2-butenoato de (E,Z)-etilo

Realizou-se a reacção de cianoacetato de etilo (75,3 g, 666 mmol) e metilciclopropilcetona (560 g, 666 mmol) durante 3 h seguindo o procedimento esboçado no exemplo 23 (processo 0) para dar 2-ciano-3-ciclopropil-2-butenoato de (E,Z)-etilo em bruto (119 g, 99,5%). 2-amino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo

Agitou-se a 55"C, durante 16 h, uma mistura de 2-ciano-3--ciclopropil-2-butenoato de (E,Z)-etilo (59,1 g, 330 mmol), enxofre (12,8 g, 400 mmol), dietilamina (35 ml, 336 mmol) e etanol (200 ml). Concentrou-se a mistura in vacuo e submeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo com tolueno. Recristalizou-se o produto em bruto em tolueno/éter de petróleo (1:2) para dar 28,4 g (20,5%) de 2-amino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo. P.f. 63-67°C. l-H-RMN (CDCI3, S): 0,5 (m, 2H), 0,8 (m, 2H), 1,35 (t, 3H), 2,15 (m, 1H), 4,3 (q, 2H), 5,7 (s, 1H), 6,05 (s largo, 2H). 2-t-butoxicarbonilamino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciclopropiltiofeno-3- -carboxilato de etilo

Arrefeceu-se a 0°C sob azoto, uma mistura agitada de 2--amino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo (5,28 g, 25 mmol), piridina (60 ml) e 4-dimetilaminopiridina (1,0 g, 8,2 mmol), e adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (11 g, 50 mmol). Manteve-se a mistura agitada a 0°c durante 6 h e deixou--se à temperatura ambiente durante 16 h, seguidas por lha 50°C. Concentrou-se a mistura in vacuo para dar uma mistura de 2-t-butoxicarbonilamino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciclopropiltiofeno-3- 74 474 2003ptl0 fí, -47- r;--; ///<·

-carboxilato de etilo a qual se separou por cromatografia flash utilizando sílica gel 60 e eluindo com tolueno graduado para tolueno/acetato de etilo (1:3). Rendimento de 2,7 g (35%) (mono--boc), 4,5 g (45%) (di-boc). ^-H-RMN (mono-boc) (CDC13, 6): 0,55 (Kl, 2H), 0,85 (m, 2H) , 1,4 (t, 3H) , 1,55 (s, 9H) , 2,2 (m, 1H) , 4,35 (q, 2H), 6,2 (s, 1H), 10,4 (s, 1H). 1H-RMN (di-boc) (CDC13, δ): 0,6 (rn, 2H), 0,9 (m, 2H), 1,35 (t, 3H), 1,4 (s, 18H), 4,3 (q, 2H), 6,65 (s, 1H). Ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxílico A uma mistura agitada de 2-t-butoxicarbonilamino-4-ciclo-propiltiofeno-3-carboxilato de etilo (2,7 g, 8,7 mmol) e 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxilato de etilo (4,5 g, 10,9 mmol) em metanol (150 ml), adicionou-se uma solução de hidróxido de potássio (5,3 g, 95 mmol) em água (55 ml). Após aquecimento a 60°C durante 6 h, concentrou-se a mistura in vacuo e retomou-se o resíduo em água (50 ml) seguido por acidificação (pH=5) com ácido acético sob arrefecimento com gelo. Retirou-se o precipitado por filtração e recristalizou-se em acetato de etilo/éter de petróleo para dar (4,2 g, 70%) de ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxíli-CO. P.f. 175-176°C. 1H-RMN (CDCI3, δ): 0,6 (m, 2H), 0,9 (m, 2H), 1,55 (S, 9H), 2,35 (m, 1H), 6,2 (s, 1H), 10,15 (s, 1H) . 4-ciclopropiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Aqueceu-se ao refluxo, durante 84 h, uma mistura de ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-ciclopropiltiofeno-3-carboxílico (2,6 g, 9,1 mmol) em 2-metil-2-propanol (100 ml), trietilamina (1,2 g, 11,9 mmol) e difenilfosforilazida (2,8 g, 10,1 mmol). Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo e retomou-se o resíduo em diclorometano o qual se lavou sucessivamente com solução de ácido cítrico a 5%, água e uma solução aquosa de bicarbonato de sódio. Secou-se a fase orgânica (MgS04) e concentrou-se in vacuo para dar 1,7 g (52%) de 4-ciclo-propiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo. 1H-RMN (CDC13, 5): 0,55 (m, 2H), 0,85 (m, 2H), 1,52 (s, 9H), 1,55 (s, 9H), 1,60 (s, 74 474 /Γ· / ' 2003ptl0 -48- - 1H), 6,3 (s largo, 1H), 6,35 (s, 1H), 8,15 (s largo, 1H). 7-Ciclopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Manteve-se em refluxo, durante 12 h, uma mistura de 4--ciclopropiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo (1,66 g, 4,7 mmol), oxalato de dietilo (20 ml, 146 mmol) e ácido acético glacial (20 ml). Concentrou-se a mistura in vacuo e recristalizou-se o resíduo em ácido acético glacial para dar 460 mg (72%) do composto do título. P.f. >250°C. ^H-RMN (DMSO-dg, 5): 0,6 (m, 2H) , 0,85 (m, 2H) , 2,0 (m, 1H) , 6,55 (s, 1H) , 12‘,0 (S, 1H), 12,2 (S, 1H). EXEMPLO 26 6-Cloro-7-ciclopropiltienor2,3-bloirazina-2.3(1H. 4ΗΪ-diona

Realizou-se a cloração da 7-ciclopropiltieno[2, 3-b]- pirazina-2,3(1H, 4H)-diona (290 mg, 1,4 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 5 (processo G). Rendimento de 120 mg (35%) do composto do título. P.f. >260°C. ^-H-RMN (DMSO--d6, δ): 0,75 (rn, 2H), 0,95 (m, 2H), 1,65 (m, 1H), 11,8 (S largo, 2H). EM (70 eV): m/z 242 (100%, M+), 227 (4), 214 (5), 207 (25), 199 (12), 185 (10), 179 (47), 151 (35), 136 (28). EXEMPLO 27 7-Isobutiltienof2.3-b]pirazina-2,3(1H. 4H)-diona 2-Ciano-3,5-dimetil-2-hexenoato de (E,Z)-etilo

Realizou-se a reacção de cianoacetato de etilo (169,7 g, 1,5 mmol) e isobutilmetilcetona (150 g, 1,5 mol) durante 4 h seguindo o procedimento esboçado no exemplo 23 (processo 0) para dar 2-ciano-3,5-dimetil-2-hexenoato de (E,Z)-etilo em bruto (260 g, 89%). 1H-RMN (CDC13, δ): 1,0 (m, 6H), 1,45 (m, 3H), 2,0 (m, 1H), 2,3 (s, 1,2H), 2,4 (S, 1,8H), 2,5 (d, 1,2H), 2,75 (d, 0,8H), 4,25 (m, 2H).

74 474 2003ptl0 -49- 2-Ãmino-4—isobutiltiofeno—3—carboxilato de etilo

Agitou-se a 60°C, durante 16 h, uma mistura de 2-ciano-3,5--dimetil-2-hexenoato de (E, Z)-etilo em bruto (260 g, 1,33 mol), enxofre (50 g, 1,56 mol), dietilamina (140 ml, 1,35 mol) e etanol (600 ml). Concentrou-se a mistura reaccional in vácuo para dar uma mistura de 2-amino-4-isobutiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-amino-5-isopropil-4-metiltiofeno-3-carboxilato de etilo. Submeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo com diclorometano/éter de petróleo 1:1 graduado para diclorometano/éter de petróleo 4:1. Concentrou-Se in vacuo a fracção que continha o 2-amino-4-isobutiltiofeno-3--carboxilato de etilo. Adicionou-se éter de petróleo e retirou--se o precipitado por filtração para dar 66,5 g (22%). P.f. 62-64 °C. 1H-RMN (CDCI3, δ): 0,9 (d, 6H), 1,35 (t, 3H), 1,85 (m, 1H), 2,55 (d, 2H), 4,3 (q, 2H), 5,8 (s, 1H), 6,05 (s largo, 2H). 2-t-Butoxicarbonilamino-4-isobutiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-isobutiltiofeno-3-carboxilato de etilo A uma mistura agitada de 2-amino-4-isobutiltiofeno-3--carboxilato de etilo (66,5 g, 292,5 mmol), piridina (750 ml) e 4-dimetilaminopiridina (35,7 g, 292,5 mmol) arrefecida a -20°c sob azoto, adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (127,6 g, 585 mmol). Continuou-se a agitação a 0°c durante 4 h e à temperatura ambiente durante 16 h, seguidas por 3 h a 70°C. Concentrou-se a mistura in vacuo. Retomou-se o resíduo em éter, filtrou-se e lavou-se sucessivamente com solução de ácido cítrico a 5%, água, solução de hidróxido de sódio IN e duas vezes com água. Secou-se a fase de éter (Na2S04) e concentrou-se in vacuo para dar uma mistura de 2-t-Butoxicarbonilamino-4-iso-butiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxi-carbonil)amino-4-isobutiltiofeno-3-carboxilato de etilo em bruto, a qual se utilizou no passo seguinte sem purificação adicional. 74 474 2003ptl0

-50- Ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-isobutiltiofeno-3-carboxílico

Agitou-se uma solução de 2-t-butoxicarbonilamino-4-iso-butiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxi-carbonil)amino-4-isobutiltiofeno-3-carboxilato de etilo em bruto em metanol (1200 ml) e adicionou-se uma solução de hidróxido de potássio (44,8 g, 800 mmol) em água (450 ml). Aqueceu-se a mistura a 80"C durante 6h e deixou-se à temperatura ambiente durante a noite. Diluiu-se a mistura reaccional com água e ajustou-se o pH a pH=4-5 com ácido acético glacial sob arrefecimento com gelo. Extractou-se o produto com éter, e após secagem com Na2S04 concentrou-se a fase de éter in vacuo. Suspendeu-se o resíduo em éter de petróleo e isolou-se o ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-isobutiltiofeno-3-carboxílico (75,2 g) por filtração. P.f. 154-155eC. ^-H-RMN (CDC13, δ): 0,95 (d, 6H), 1,55 (S, 9H), 1,9 (m, 1H), 2,7 (d, 2H), 6,35 (s, 1H), 9,3 (s largo, 1H), 10,2 (s, 1H). 4-Isobutiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Agitou-se uma mistura de ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4--isobutiltiofeno-3-carboxílico (29,9 g, 100 mmol), tolueno (500 ml), trietilamina (10,2 g, 100 mmol) e difenilfosforilazida, à temperatura ambiente durante 16 h, aqueceu-se a 50eC durante 4 h, seguidas por refluxo durante 16 h. Concentrou-e a mistura in vacuo. adicionou-se 2-metil-2-propanol (500 ml) e manteve-se ao refluxo a mistura resultante durante 120 h. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo e submeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo com diclorometano/éter de petróleo 1:1 para dar 6,2 g (17%) de 4-isobutiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo na forma de um óleo. 1H-RMN (CDC13, 6): 0,9 (d, 6H), 1,5 (s, 18H), 1,8 (m, 1H), 2,3 (d, 2H), 5,9 (s largo, 1H), 6,45 (s, 1H), 7,7 (s largo, 1H). 7-Isobutiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Manteve-se em refluxo durante 20h uma mistura de 4--isobutiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo (3,70 g, 10 /// .j y a\ ê/l

74 474 2003ptl0 -51-mmol), oxalato de dietilo (30 ml, 220 mmol) e ácido acético glacial (30 ml). Concentrou-se a mistura e recristalizou-se o resíduo em ácido acético aquoso para dar 1,4 g (62,5%) do composto do título. P.f. >270°C. ^H-RMN (DMSO-dg, δ): 0,9 (d, 6H), 1,75 (m, 1H), 2,45 (d, 2H), 6,75 (s, 1H), 11,9 (S, 1H) , 12,2 (s largo, 1H). EXEMPLO 28 6-Cloro-7-isobutiltieno Γ2.3-blPÍrazina-2.3 f1H, 4H)-diona

Realizou-se a cloroção da 7-isobutiltieno[2,3-b]pirazina--2,3(1H, 4H)-diona (500 mg, 2,23 mmol) seguindo o procedimento esboçado no exemplo 5 (processo G). Rendimento de 280 mg (48,5%) do composto do título. P.f. >270°C. ^-RMN (DMSO-dg, 6): 0,9 (d, 6H), 1,8 (m, 1H), 2,55 (d, 2H), 11,9 (s largo, 2H). EXEMPLO 29 7-Ciclo-hexiltienor2.3-blpirazina-2.3(lH. 4Hl-diona 2-Amino-4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato de etilo

Agitou-se uma mistura de ciclo-hexilmetilcetona (63 g, 500 mmol). cianoacetato de etilo (56,5 g, 500 mmol), enxofre (16 g, 500 mmol) e etanol (100 ml) com arrefecimento em gelo e adicionou-se dietilamina (50 ml). Agueceu-se então a mistura sob agitação a 60°C durante 40 h e concentrou-se in vacuo. Adicionou-se água (250 ml) e extractou-se o produto com acetato de etilo (3 x 250 ml). Secaram-se as fases orgânicas combinadas (Na2SO^) e concentraram-se in vacuo para dar um óleo que se submeteu a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo com tolueno. A evaporação e trituração com éter de petróleo deram 2-amino-4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato de etilo cristalino (30 g, 24%). P.f. 96-98°c. ^-h-rmn (cdc13, 6): 1,3 (m, 7H), 1,8 (m, 4H), 1,95 (m, 2H), 3,05 (m, 1H), 4,3 (q, 2H), 5,85 (s, 1H), 6,1 (s largo, 2H). 74 474 2003ptl0

-/· -52

2-t-Butoxicarbonilamino-4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciclo-hexiltiofeno-3--carboxilato de etilo

Agitou-se uma mistura de 2-amino-4-ciclo-hexiltiofeno-3--carboxilato de etilo (24,2 g, 95,5 mmol), piridina (250 ml) e 4-dimetilaminopiridina (11,7 g, 95,5 mmol) e arrefeceu-se a -10eC sob azoto e adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (41,5 g, 190 mmol). Continuou-se a agitação a 0°C durante 4 h, à temperatura ambiente durante 16 h seguidas por 2 h a 60°C. Concentrou-se a mistura in vacuo e sgbmeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo com éter de petróleo/diclorometano (19:1) graduado para diclorometano, para dar uma mistura de 2-t-butoxi-carbonilamino-4-ciclo-hexil-tiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxicarbonil)amino--4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato de etilo em bruto (7,4 g). 2-t-Butoxicarbonilamino-4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato A uma solução de 2-t-Butoxicarbonilamino-4-ciclo--hexiltiofeno-3-carboxilato de etilo e 2-bis(t-butoxicarbonil )amino-4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato de etilo em bruto (7,4 g) em metanol (120 ml), adicionou-se hidróxido de potássio (5,5 g, 83 mmol) em água (40 ml). Aqueceu-se a mistura a 60°C durante 5 h e deixou-se à temperatura ambiente durante a noite. Diluiu-se a mistura reaccional com água (100 ml) e ajustou-se o pH a pH 5 com ácido acético glacial sob arrefecimento com gelo. Retirou-se o precipitado por filtração e lavou-se com água para dar 6,6 g (96%) de 2-t-butoxi-carbonilamino-4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato. P.f. 168-169 ° C. 1H-RMN (CDC13, δ): 1,3 (m, 5H), 1,5 (S, 9H), 1/75 (m, 4H), 2,0 (m, 2H), 3,2 (m, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,65 (s largo, 1H), 10,3 (s, 1H). 4-Ciclo-hexiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Aqueceu-se ao refluxo durante 16 h uma mistura de 2-t--butoxicarbonilamino-4-ciclo-hexiltiofeno-3-carboxilato (7,5 g, 74 474 2003ptl0 j*' J/ -53-

23 mmol) em 2-metil-2-propanol (400 ml), trietilamina (2,33 g, 23 mmol) e difenilfosforilazida. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo e submeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica gel 60 e eluindo com tolueno para dar 400 mg (4%) de 4-ciclo-hexiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t--butilo na forma de um óleo. 7-Ciclo-hexiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Manteve-se em refluxo durante 16 h uma mistura de 4-ciclo--hexiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo (400 mg, 1 mmol), oxalato de dietilo (5 ml, 37 mmol) e ácido acético glacial (5 ml). Retirou-se o precipitado por filtração e lavou-se com ácido acético glacial para dar 60 mg (24%) do composto do título. P.f. >270 °C. ^-RMN (DMSO-d6, δ)ϊ 1,1-1,9 (m, 10H), 2,75 (m, 1H), 6,7 (s, 1H), 11,9 (s, 1H), 12,25 (s, 1H). EXEMPLO 30 7-Feniltienor2.3-blpirazina-2.3flH. 4H)-diona 2-bis(t-Butoxicarbonil)amino-4-feniltiofeno-3-carboxilato de etilo

Dissolveu-se 2-amino-4-feniltiofeno-3-carboxilato de etilo fGewald et al.. J. Prakt. Chem. 99. (1966) 94, Cpd.15), (3,71 g, 15 mmol) em 30 ml de piridina seca, seguido pela adição de 4--dimetilaminopiridina (1,83 g, 15 mmol) e dicarbonato de di-terc-butilo (9,82 g, 45 mmol) a 25eC. Observou-se a esta temperatura uma libertação vigorosa de dióxido de carbono, acompanhada pela formação de um precipitado volumoso. Após dez minutos a libertação de gás tinha diminuído, e aqueceu-se a mistura reaccional a 55eC, à qual a libertação de gás começou novamente e o precipitado formado se dissolveu. Após 1 hora, adicionou-se mais 1,64 g de dicarbonato de di-terc-butilo, e continuou-se o aquecimento durante duas horas. Removeu-se o solvente in vacuo dissolveu-se o resíduo em cloreto de metileno, o qual se lavou duas vezes com ácido clorídrico IN e duas vezes χ',· 74 474 2003ptl0 Μ -54-

com solução de bicarbonato diluída, e se evaporou. Cromatografou-se o resíduo oleoso sobre sílica-gel (5% de acetato de etilo em tolueno). Rendimento de 4,80 g (71%) de bis(t-butoxicarbonil)amino-4-feniltiofeno-3-carboxilato de etilo na forma de um óleo viscoso que cristalizou com repouso. P.f. 86-92°C. l-H-RMN (CDCI3, S): 1,2 (t, 3H), 1,5 (s, 18H), 4,1 (q, 2H), 7,1 (s, 1H), 7,4 (m, 5H).

Análise: calculada para C23H29N06S: C, 61,73? H, 6,53; N, 3,13%. Determinada: C, 61,71? H, 6,63? N, 2,93%. Ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-feniltiofeno-3-carboxílico

Aqueceu-se ao refluxo durante 3 h uma mistura de bis(t--butoxicarbonil)amino-4-feniltiofeno-3-carboxilato de etilo (4,37 g, 9,76 mmol), 40 ml de etanol, 20 ml de água e 2,19 g de hidróxido de potássio. Arrefeceu-se a mistura e acidificou-se com 2,9 ml de ácido acético. Isolou-se o precipitado para dar 2,70 g (87%) de ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-feniltiofeno-3--carboxílico. P.f. 183°C (dec.). ^-RMN (DMSO-d6, 5): 1,5 (s, 9H), 6,7 (S, 1H), 7,3 (m, 5H), 11,5 (s largo, 1H). 4-Feniltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Dissolveu-se ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-feniltiofeno--3-carboxílico (2,6 g, 8 mmol) em 5 ml de tetra-hidrofurano e 1,05 ml (10,4 mmol) de trietilamina, e adicionou-se difenilfosforilazida (2,42 g, 8,8 mmol). Formou-se um precipitado pesado, e após 1 hora a 25°C, adicionou-se 80 ml de terc-butanol seco e aqueceu-se a mistura a 90°C durante oito dias. Evaporou-se a mistura reaccional escura, dissolveu-se em cloreto de metileno, lavou-se duas vezes com hidróxido de sódio IN, duas vezes com ácido clorídrico IN e duas vezes com água. 0 tratamento da fase orgânica com carvão vegetal e a evaporação renderam 1,9 g de óleo escuro o qual não foi mais purificado, mas foi utilizado para o passo seguinte. ^-H-RMN (CDC13, 6): 1,5 (S, 3H), 6,8 (S, 1H), 7,4 (m, 5H).

74 474 2003ptl0 -55- 7-Feniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Dissolveu-se 4-feniltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo (0/9 g do óleo em bruto do passo anterior) numa mistura de 7 ml de ácido acético e 7 ml de oxalato de dietilo e aqueceu-se ao refluxo durante três horas. Enquanto ainda estava quente, adicionou-se 7 ml de água, e agitou-se a mistura durante a noite à temperatura ambiente para precipitar 0,27 g do composto do título em bruto. Três cristalizações em ácido acético combinado com carvão vegetal (Norit SU 18) e uma em etanol/ácido acético (1:1) produziram 65 mg do composto do título puro, p.f. > 300°C. ^-H-RMN (DMSO-dg, δ): 7,1 (s, 1H), 7,4 (m, 5H), 11,5 (s largo, 1H), 12,5 (s largo, 1H). EM: 244.

Análise: calculada para Cl2H8N2°2S: C, 59,01; H, 3,30; N, 11,47%. Determinada: C, 59,12; H, 3,57; N, 10,97%. EXEMPLO 31 6,7-Dimetiltienor2,3-b~|pirazina-2,3(1H, 4H)-diona 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4,5-dimetiltiofeno-3-carboxilato de etilo

Dissolveu-se 2-amino-4,5-dimetiltiofeno-3-carboxilato de etilo (J.orakt. Chem. 99 (1966) 94, Cpd.2), (7 g, 35 mmol) em 70 ml de piridina. Adicionaram-se 4-dimetilaminopiridina (4,3 g, 35 mmol) e dicarbonato de di-terc-butilo (22,9 g, 105 mmol), e manteve-se a mistura a 25°C até a libertação de gás diminuir (aprox. 15 min.). Nesta altura formou-se um precipitado pesado, aqueceu-se a mistura a 55°C durante duas horas, após o que a libertação de gás começou novamente e o precipitado se dissolveu gradualmente. Adicionou-se outra porção de dicarbonato de di-terc-butilo (7,6 g, 35 mmol), e aqueceu-se a mistura durante 45 min., arrefeceu-se e evaporou-se in vacuo. Dissolveu-se o resíduo em cloreto de metileno, lavou-se com ácido clorídrico IN, hidróxido de sódio IN e água, secou-se e evaporou-se para y 74 474 2003ptl0

-56- <£?// dar 13,56 g (97%) de 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4,5-di-metiltiofeno-3-carboxilato de etilo na forma de uma massa cristalina. P.f. 70-78°C. ^-H-RMN (CDC13, S): 1,3 (t, 3H), 1,4 (S, 18H), 2,2 (S, 3H), 2,3 (S, 3H), 4,2 (q, 2H).

Análise: calculada para CigH29N06S:

Cf 57,12; H, 7,32; N, 3,51%. Determinada: C, 56,91; H, 7,49; N, 3,54%. Ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4,5-dimetiltiofeno-3-carboxílico

Hidrolisou-se 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4,5-dimetiltio-feno-3-carboxilato de etilo (13,6 g, 34 mmol) mantendo-o em refluxo em 70 ml de água e 140 ml de metanol com 7,63 g de hidróxido de potássio. A adição de 8,1 ml de ácido acético e a agitação durante a noite fizeram precipitar 8,27 g (90%) de ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4,5-dimetiltiofeno-3-carboxílico. P.f. 185 °C (dec.). 1H-RMN (DMSO-dg, δ): 1,5 (s, 9H), 2,15 (S, 3H), 2,2 (S, 3H), 10,4 (s, 1H), 13,1 (s largo, 1H).

Análise: calculada para C12H17N04S: C, 53,12; H, 6,32; N, 5,16%. Determinada: C, 53,09; H, 6,53; N, 5,20%. 4.5- Dimetiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Dissolveu-se ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4,5-dimetiltiof eno-3-carboxí lico (6,78 g, 25 mmol) em 7,5 ml de tetra--hidrofurano e 3,29 g (32,5 mmol) de trietilamina. Adicionou-se difenilfosforilazida (3,29 g, 27,5 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente após o que se formou um precipitado pesado. Após 15 min., adicionou-se 250 ml de t-butanol, e agitou-se a mistura em refluxo durante dez dias. Evaporou-se o solvente, dissolveu-se o resíduo em cloreto de metileno, lavou-se com solução de ácido cítrico a 5% e bicarbonato de sódio saturado, tratou-se com carvão vegetal e evaporou-se para dar 10,5 g de 4.5- dimetiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo em bruto na /X.’, -57- 74 474 2003ptl0 forma de um óleo negro, o qual não foi adicionalmente purificado mas sim adicionalmente processado no passo seguinte. -^H-RMN (CDC13# δ)ζ 1,5 (S, 18H), 1,9 (S, 3H), 2,2 (s, 3H). 6,7-Dimetiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Dissolveu-se o 4,5-Dimetiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t--butilo em bruto (9,7 g) em 70 ml de ácido acético e 70 ml de oxalato de dietilo e aqueceu-se ao refluxo durante três horas. Adicionou-se 70 ml de água à solução quente para precipitar o produto. Após 24 horas de agitação à temperatura ambiente isolou-se o composto do titulo por filtração, recristalizou-se em etanol/ácido acético (65:35) para dar 1,5 g (41%) de cristais. P.f. > 300°C. EM: 196. 1H-RMN (DMSO-d6, δ): 2,0 (s, 3H), 2,2 (s, 3H), 11,8 (s, 1H), 12,1 (s, 1H).

Análise: calculada para CgHg^C^S: C, 48,97; H, 4,11; N, 14,28%. Determinada: C, 48,98; H, 4,15; N, 14,14%. EXEMPLO 32 7-Etil-6-metiltienor2,3-blpirazina-2.3flH, 4H)-diona 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-etil-5-metiltiofeno-3-carboxilato de etilo

Fez-se reagir 2-amino-4-etil-5-metiltiofeno-3-carboxilato de etilo (Gewald et al.. J. Prakt. Chem. 99. (1966) 94), (29,9 g, 0,14 mol) com um total de 137,6 g (0,63 mol) de dicarbonato de di-terc-butilo adicionado em três porções como se descreveu no exemplo 30, passo ma. 0 tratamento descrito rendeu 66,6 g de 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-etil-5-metiltiofeno-3-carboxilato de etilo em bruto na forma de uma massa semi-sólida que não foi mais purificada. ^H-RMN (CDC13, δ)ζ 1,1 (t, 3H), 1,3 (t, 3H), 1,4 (s, 18H), 2,3 (s, 3H), 2,7 (q, 2H), 4,2 (q, 2H). 74 474 2003ptl0 58

Ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-etil-5-metiltiofeno-3-carboxí-lico

Hidrolisou-se 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-etil-5-metil--tiofeno-3-carboxilato de etilo (66,5 g) como se descreveu no exemplo 30, passo dois. Rendimento de 35,6 g de ácido 2-t--butoxicarbonilamino-4-etil-5-metiltiofeno-3-carboxílico na forma de cristais que fundem a 196-197°C. ^H-RMN (DMSO-d6, S): 1,0 (t, 3H), 1,5 (S, 9H), 2,2 (S, 3H), 2,7 (q, 2H), 10,5 (s, 1H), 13,1 (s, 1H).

Análise: calculada para C^H^gNO^S: C, 54,72; H, 6,71; N, 4,91%. Determinada: C, 54,81; H, 6,90; N, 4,72%. 4-Etil-5-metiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Dissolveu-se ácido 2-t-butoxicarbonilamino-4-etil-5-me-tiltiofeno-3-carboxílico (34,2 g, 0,12 mol) em 35 ml de tetra-hidrofurano e 15,8 ml (21,6 g, 0,156 mol) de trietilamina e adicionou-se difenilfosforilazida (36,3 g, 0,132 mol), após o que a temperatura subiu para 47°C. Após 30 min. à temperatura ambiente, adicionou-se 1200 ml de t-butanol, e manteve-se a mistura em refluxo durante sete dias. Evaporou-se a mistura escura, dissolveu-se em cloreto de metileno, lavou-se com ácido cítrico a 5% e bicarbonato de sódio saturado, tratou-se com carvão vegetal e evaporou-se para dar 55,8 g de um óleo escuro de 4-etil-5-metiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo em bruto que não foi mais purificado. 7-Etil-6-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Dissolveu-se 4,5 g de 4-etil-5-metiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo em bruto numa mistura de 30 ml de ácido acético e 30 ml de oxalato de dietilo, e manteve-se em refluxo durante seis horas. Com arrefecimento até à temperatura ambiente, isolou-se o precipitado cristalino (900 mg). A recristalização em ácido acético quente combinado com carvão vegetal (Norit SU -59- 74 474 2003ptl0 18) rendeu 660 mg do composto do título, p.f. > 300°C. EM: 210. ^H-RMN (DMSO-dg, S): 1,0 (t, 3H), 2,2 (s, 3H), 2,6 (q, 2H), 11,9 (s largo, 1H), 12,1 (s largo, 1H).

Análise: calculada para Ο9Η10Ν2θ2.0,25Η2θ: C, 50,86; H, 4,90; N, 13,05%. Determinada: C, 50,86; H, 4,84,* N, 12,89%. EXEMPLO 33 6-Etil-7-n-propiltieno Γ2,3-blpirazina-2.3(1H. 4ΕΠ-diona 2-Amino-5-etil-4-propiltiofeno-3-carboxilato de etilo

Agitou-se uma mistura de 4-heptanona (97,1 g, 0,85 mol), cianoacetato de etilo (96,2 g, 0,85 mol) e enxofre (27,3 g, 0,85 mol) em 150 ml de etanol, e adicionou-se gota a gota dietilamina (62,2 g, 0,85 mol) a uma temperatura inferior a 35°C. Agitou-se a mistura durante 24 horas a 40°C, arrefeceu-se, e adicionaram--se 500 ml de tolueno e 500 ml de água gelada. Após ajustamento do pH a 3,0 com ácido clorídrico, removeram-se algum polímero e enxofre não regido, por filtração. Lavou-se a fase orgânica com salmoura, bicarbonato de sódio saturado e água, secou-se e tratou-se com carvão vegetal, e evaporou-se. Destilou-se o óleo escuro residual (77 g, 37%) in vacuo (p.e.g χ! 110°C) para dar 55,8 g de 2-amino-5-etil-4-propiltiofeno-3-carboxilato de etilo na forma de um óleo amarelo. %-RMN (CDC13, S): 0,9 (t, 3H), 1,2 (t, 3H), 1,35 (t, 3H), 1,5 (m, 2H), 2,6 (m, 4H), 4,3 (q, 2H) , 5,9 (s largo, 2H). 2-bis(t-Butoxicarbonil)amino-5-etil-4-propiltiofeno-3-carboxila-to de etilo

Fez-se reagir 2-amino-5-etil-4-pròpiltiofeno-3-carboxilato de etilo (33,8 g, 0,14 mol) com dicarbonato de di-terc-butilo (91,7 g, 0,42 mol) como se descreveu no exemplo 30 (passo um). O tratamento descrito, omitindo a purificação cromatográfica, rendeu 60,7 g (98%) de 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-5-etil-4- / -60- / -60- /;/ , · /_- - 74 474 2003ptl0 -propiltiofeno-3-carboxilato de etilo em bruto. 1H-RMN (CDC13/ δ): 0,9 (t, 3H), 1,2 (tf 3H), 1,3 (t, 3H), 1,4 (s, 18H), 1,5 (m, 2H), 2,7 (m, 4H), 4,3 (q, 3H). Ácido 2-t-butoxicarbonilamino-5-etil-4-propiltiofeno-3-carboxí-lico

Hidrolisou-se o 2-bis(t-butoxicarbonil)amino-5-etil-4-pro-piltiofeno-3-carboxilato de etilo (60 g de óleo em bruto) como se descreveu no exemplo 30 (passo dois). Antes do tratamento removeu-se algum material insolúvel (0,5 g) por filtração; e fez-se precipitar o ácido 2-t-butoxicarbonilamino-5-etil-4-pro-piltiofeno-3-carboxílico por adição de 34 ml de ácido acético e 250 ml de água, e isolou-se por filtração (32,36 g, 75,5%). P.f. 148-151°C (dec.). ^-H-RMN (CDC13, δ): 0,9 (t, 3H), 1,2 (t, 3H), 1,5 (m, 2H), 1,55 (s, 9H), 2,7 (m, 4H), 10,2 (s, 1H).

Análise: calculada para C15H23N04S: C, 57,48; H, 7,40; N, 4,47%. Determinada: C, 57,59; H, 7,41; N, 4,44%. 5- Etil-4-propiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo

Fez-se reagir o ácido 2-t-butoxicarbonilamino-5-etil-4--propiltiofeno-3-carboxílico (31,3 g, 0,1 mol) com trietilamina e difenilfosforilazida como se descreveu no exemplo 32 (passo três). Realizou-se o tratamento por extracção com tolueno , após o que foi possível a remoção de algum polímero escuro por filtração. A evaporação rendeu 28,8 g (74,8%) de 5-etil-4--propiltiofeno-2,3-dicarbamato de di-t-butilo em bruto na forma de um óleo escuro que se usou no passo seguinte sem purificação adicional. 6- Etil-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Manteve-se em refluxo o 5-etil-4-propiltiofeno-2,3--dicarbamato de di-t-butilo em bruto (28,5 g) durante dois dias numa mistura de 150 ml de ácido acético e 150 ml de oxalato de -61- -61- a 74 474 2003ptl0 dietilo. 0 arrefecimento e a filtração renderam 4,76 g de cristais. (Obteve-se uma colheita adicional de cristais em bruto com adição de 200 ml de água, levando o rendimento bruto a 51%). A recristalização em etanol rendeu o composto do título na forma de cristais brancos. P.f. 295-298°C. 1H-RMN (DMSO-dg, 5): 0,9 (t, 3H), 1,1 (t, 3H), 1,4 (hex, 2H), 2,5 (t, 2H), 2,7 (q, 2H), 11,8 (S, 1H), 12,2 (S, 1H).

Análise: calculada para C, 55,44? H, 5,92; N, 11,76%. Determinada: C, 55,63; H, 6,06; N, 11,67%. EXEMPLO 34 6.7-Dibromotieno Γ2,3-b)oirazina-2.3(1H. 4H1-diona

Suspendeu-se tieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (2,00 g, 11,89 mmol) em 30 ml de bromo e agitou-se durante 48 h à temperatura ambiente. Evaporou-se a mistura até à secura sob pressão reduzida e adicionou-se 60 ml de éter. Retirou-se o precipitado por filtração e lavou-se com éter, ácido acético e água, e secou-se. Recristalizou-se o material em bruto (2,84 g) em ácido acético. Retirou-se o precipitado por filtração e lavou-se com ácido acético e água para dar 2,33 g (57%) do composto do título. P.f. > 300°C. ^H-RMN (DMSO-dg, S)i 12,0 (s, 1H), 12,23 (s, 1H).

Análise: calculada para Cgl^^B^C^S.I^O:

Br, 46,46%. Determinada: Br, 46,23%. EXEMPLO 35 6,7-Diclorotienof2.3-blPÍrazina—2.3(1H. 4H)-diona

Suspendeu-se tieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (3,00 g, 17,8 mmol) em 30 ml de cloreto de sulfurilo com arrefecimento num banho de gelo. Manteve-se a mistura agitada a 0-3°C durante 1 h e à temperatura ambiente durante 20 h. Evaporou-se a mistura 7 ) 74 474 2003ptl0 -62- c

até à secura sob pressão reduzida e adicionou-se 75 ml de éter. Retirou-se o precipitado por filtração e lavou-se com éter, secou-se e suspendeu-se em 75 ml de água. Retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com água e secou-se para dar 1,86 g de uma substância que se purificou por recristalizações em DMF-água para dar o composto do título. P.f. > 300°c. ^H-RMN (DMSO-d6, 5): 12,0-12,5 (s largo, 2H). EXEMPLO 36 6-Nitrotieno Γ 2.3-blPÍrazina-2,3(1H. 4ΗΪ-diona

Fez-se reagir tieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (1,00 g, 5,95 mmol) com ácido nítrico fumante (0,374 ml, 8,9 mmol) em anidrido acético, seguindo o procedimento esboçado no exemplo 4 (processo F). Recristalizou-se o produto em bruto (655 mg) em ácido acético para dar 325 mg (26%) do composto do título. P.f. > 300"C. 1H-RMN (DMS0-d6, 5): 7,58 (s, 1H), 12,1 (s, 1H), 12,62 (S, 1H) EXEMPLO 37 6-Iodo-7-metiltienor2,3-blPÍrazina-2,3f1H. 4ΗΪ-diona

Suspendeu-se hidrato de 7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(lH, 4H)-diona (1,0 g, 5,0 mmol) em 60 ml de ácido acético e adicionou-se dicloro-iodato de benziltrimetilamónio a 95% (2,1 g, 5,75 mmol) e cloreto de zinco (1,64 g, 12,0 mmol). Agitou-se a mistura durante 4,5 horas à temperatura ambiente, retirou-se o precipitado por filtração, lavou-se com ácido acético e água, e secou-se. Recristalizou-se o composto em bruto (1,13 g) em ácido acético/água e duas vezes em etanol para dar 0,38 g (24%) do composto do título. Decomp. acima de 240°C. ^H-RMN (DMSO-dg, 5): 2,12 (S, 3H), 11,98 (S, 1H), 12,22 (s, 1H).

Análise: calculada para C7H5N2I02S.l/2 H20: C, 26,51; H, 1,91; N, 8,83; S, 10,11%. Determinada: C, 26,56; H, 2,20; N, 9,27; S, 10,12%.

EXEMPLO 38 74 474 2003ptl0 7-Bromotienof2.3-b1pirazina-2.3(lH. 4H^-diona

Dissolveu-se hidrato de 6,7-dibromotieno[2,3-b]pirazina--2,3 (1H, 4H)-diona (0,50 g, lf45 mmol) em 113 ml de ácido acético a 97% a 100°C e adicionou-se 0,11 g (1,68 mmol) de pó de zinco numa só porção. Após agitação durante 24 h, adicionou-se mais 0,11 g (1,68 mmol) de pó de zinco e continuou-se a agitação a 100°C durante 24 h. Filtrou-se a mistura reaccional e evaporou-se até à secura sob pressão reduzida e adicionou-se 10 ml de água. Retirou-se o precipitado por filtração e lavou-se com água e secou-se. Recristalizou-se o material em bruto (0,215 g) em ácido acético para dar 0,104 g (29%) do composto do título. P.f. 295-296°C. ^-RMN (DMS0-d6, 6): 7,3 (S, 1H), 11,9 (s, 1H), 12,35 (s, 1H).

Análise: calculada para CgEkj^BrC^S: c, 29,17; H, 1,22; N, 11,34; Br, 32,34; s, 12,98%. Determinada: C, 29,40; H, 1,38; N, 11,16; Br, 32,33; S, 12,84%. EXEMPLO 39 7-Cianotienor2.3-b)pirazina-2.3(lH. 4H)-diona 3-bis(t-Butoxicarbonil)amino-4-cianotiofeno-2-carboxilato de metilo A uma solução agitada de 3-amino-4-cianotiofeno-2--carboxilato de metilo (23,4 g, 128,5 mmol) em piridina (500 ml) e 4-dimetilaminopiridina (15,9 g, 130 mmol) arrefecida a 0°C sob azoto, adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (60 g, 275 mmol). Após 16 h a 0°C, concentrou-se a mistura in vacuo e submeteu-se o resíduo a cromatografia flash utilizando sílica-gel 60 e eluindo com tolueno graduado para tolueno/éter (19:1). Rendimento de 44,1 g (89%) na forma de um produto cristalino. 1H-RMN (CDC13, δ): 1,5 (s, 18H), 3,9 (s, 1H), 8,05 (s, 1H). 74 474 2003ptl0

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Ácido 3-bis (t-butoxicarbonil) amino-4-cianotiofeno-2-carboxílico

Aqueceu-se a 50 °C durante 3 h uma mistura de 3-bis(t--butoxicarbonil)amino-4-cianotiofeno-2-carboxilato de etilo (38 g, 99,5 mmol) em metanol (160 ml) e hidróxido de potássio 2N (50 ml). Evaporou-se o metanol e acidificou-se a mistura (pH=5) com ácido acético. Extractou-se a mistura com éter, secou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com éter de petróleo e retirou-se a fracção cristalina por filtração para dar 32 g (87%) de ácido 3-bis(t-butoxicarbonil)amino-4-ciano-tiofeno-2-carboxílico. P.f. 159-160°C. 1H-RMN (CDC13, S)z ly45 (s, 18H), 8,1 (s, 1H), 8,5 (s largo, 1H).

Carbonitrilo de 4-bis(t-butoxicarbonil)amino-5-t-butoxicarbonil-amino-3-tiofeno

Aqueceu-se ao refluxo durante 17 h, uma mistura de ácido 3--bis(t-butoxicarbonil)amino-4-cianotiofeno-2-carboxílico (18,4 g, 50 mmol) em 2-metil-2-propanol (400 ml), trietilamina (6,0 g, 59 mmol) e difenilfosforilazida (15,5 g, 55 mmol). Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo. e retomou-se o resíduo em diclorometano que se lavou com uma solução de ácido cítrico a 5% seguido por água e por uma solução de bicarbonato de sódio. Secou-se a fase orgânica (Na2S04) e concentrou-se in vacuo para dar 21,7 g (99%) de carbonitrilo de 4-bis(t-butoxicarbonil )amino-5-t-butoxicarbonilamino-3-tiofeno na forma de um óleo. ^I-RMN (CDCI3, δ): 1,5 (s, 18H), 1,55 (s, 9H), 7,25 (s largo, 1H), 7,45 (s, 1H). 7-Cianotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona

Manteve-se em refluxo durante 6 H, uma mistura de carbonitrilo de 4-bis(t-butoxicarbonil)amino-5-t-butoxicarbo-nilamino-3-tiofeno (15,4 g, 35 mmol), oxalato de dietilo (100 ml, 739 mmol) e ácido acético glacial (100 ml). Retirou-se o produto cristalino por filtração e lavou-se com éter para dar 3,25 g (48%) do composto do título. P.f. > 250°C. l-H-RMN (DMSO--d6, 6): 8,15 (s, 1H), 12,4 (s largo, 1H), 12,5 (s largo, 1H). -65- 74 474 2003ptl0 EXEMPLO 40 6-Cloro-7-cianotienoΓ2.3-blpirazina-2,3(1H. 4H)-diona

Realizou-se a cloração de 7-cianotieno[2,3-b]pirazina--2,3(111, 4H)-diona (386 mg, 2 mmol) em ácido acético (50 ml) com cloreto de sulfurilo (250 μΐ, 3,1 mmol), seguindo o procedimento esboçado no exemplo 5 (processo G) para dar 170 mg (37%) do composto do título. P.f. > 250°C. 1H-RMN (DMSO-dg, í): 12,25 (s largo, 1H), 12,8 (s largo, 1H).

Lisboa, ^ ^92

Por NOVO NORDISK A/S =0 AGENTE OFICIAL=

Claims (8)

1. 74 474 2003ptl0

   REIVINDICAÇÕES 1 - Composto caracterizado por possuir a fórmula (I), ou uma sua forma tautomérica 2 R R

   (I) na qual R1 representa hidrogénio, alquilo C1-6 linear ou ramificado, alcenilo C2_g, cicloalquilo C3_g, halogéneo, nitro, ciano, fenilo, alcoxi C2_6, alquiltio C1_q, carboxi, alquiloxicarbonilo cl-6^ trifluorometilo, dialquilamino C^-j, ou alquilo C-^g substituído com ciano, carboxi, alcoxicarbonilo C1-3; e R2 representa hidrogénio, alquilo C-^g linear ou ramificado, alcenilo c2_g, cicloalquilo C3_g, halogéneo, ciano, fenilo, alcoxi C1_6, alquiltio C-^g, trifluorometilo, ou alquilo substituído com ciano, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. 2 - Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser hidrogénio, halogéneo ou alquilo C1_6, e R2 ser hidrogénio, halogéneo, alquilo Cj.g ou cicloalquilo C3_g.
3. 3 - Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser seleccionado de entre os seguintes: Tieno[2,3-b]pir az ina-2,3(1H,4H)-diona,
4. 7-Metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromo-7-metiltieno [2-, 3-b] pirazina-2,3 (1H, 4H) -diona,
5. 6-Nitro-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona,
6. 6- Cloro-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona,
7. 7- Ciano-6-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Etoxicarbonil-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Carboxi-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona,
8. 7- Propiltieno[2,3-b]piraz ina-2,3(1H,4H)-diona,

   74 474 2003ptl0 -2- € 4Γ 6-Cloro-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H, 4H)-diona, 6-Bromo-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Bromotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Etoxicarbonil-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Carboxi-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Feniltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7- Ciano-6-(metiltio)tieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Etoxicarbonil-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Carboxi-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7- Etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Bromo-7-etiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7- Isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Cloro-7-isopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7- Ciclopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Cloro-7-ciclopropiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7- Isobutiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Cloro-7-isobutiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7- Ciclo-hexiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7-Feniltieno[2,3-b]piraz ina-2,3(1H,4H)-diona, 6.7- Dimetiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7-Etil-6-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Eti1-7-propiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6.7- Dibromotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6.7- Diclorotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Nitrotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6- Iodo-7-metiltieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7- Bromotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 7-Cianotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, 6-Cloro-7-cianotieno[2,3-b]pirazina-2,3(1H,4H)-diona, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 4 - Composição farmacêutica para uso no tratamento de uma perturbação do sistema nervoso central, caracterizada por compreender uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, juntamente com um transportador ou diluente farmaceuticamente -3- 74 474 2003ptl0 aceitável. 5 - Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por estar na forma de uma unidade de dosagem oral contendo cerca de 1-200 mg do composto activo. 6 - Composto de acordo com a reivindicações 1, caracterizado por se destinar ao uso no tratamento de uma perturbação do sistema nervoso central. 7 - Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por se destinar ao uso no tratamento de uma perturbação do sistema nervoso central. Lisboa, a ϋϋΐ 199? Por NOVO NORDISK A/S