PL90719B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania no¬ wych pochodnych antybiotyku pleuromutiliny lub pro¬ duktu jej uwodornienia o wzorze 1, w którym X oznacza grupe -CH2-CH3 albo -CH=CH2, Z oznacza atom wodoru albo grupe o wzorze 2 i p oznacza liczbe calkowita 1-12, 5 a Y oznacza grupe hydroksylowa albo atom chlorowca, oraz ich soli.Wytworzone wedlug wynalazku nowe pochodne pleuro¬ mutiliny lub produktu jej uwodornienia o wzorze 1 sa w wodzie nierozpuszczalne, jednakze w postaci ich soli sa 10 rozpuszczalne. Nierozpuszczalne w wodzie pochodne na¬ daja sie bardzo dobrze jako dodatki do mieszanek goto¬ wych srodków paszowych, poniewaz stanowia bardzo do¬ bra postac transportu antybiotyku pleuromutiliny lubjego produktuuwodornienia. 15 Zaleta stosowania nowych pochodnych antybiotyku pleuromutiliny lub produktu jej uwodornienia o wzorze 1 oraz ichsoli jako dodatkudo mieszanekgotowychsrodków paszowych polega na tym, ze uwolniony po rozczepieniu pochodnych w zywym organizmie antybiotyk pleuromuti- 20 lina lub produkt jej uwodornienia, w ilosciach zwykle przyjetych w mieszankach gotowych srodków paszowych, nie zostaje resorbowana i dlatego nie trzeba obawiac sie rozwoju kultur bakterii, które sa odporne na dzialanie antybiotyków, stosowanych dla czlowieka. 25 Wedlug wynalazku mozna otrzymac pochodna antybio¬ tyku pleuromutiliny lub produktu jej uwodornienia oraz ich sole, poddajac antybiotyk pleuromutiline lub produkt jej uwodornienia o wzorze 3, w którym X ma wyzej podane znaczenie, reakcji z halogenkami lub bezwodnikami kwa- 30 sów dwukarboksylowych o wzorze (COOH)-(CH2)p- (COOH), w którym p ma wyzej podaneznaczenie i przepro¬ wadzajac ewentualnie otrzymane zwiazki o wzorze 1 w ich sole.Wyzej opisane reakcje przeprowadza sie w znany sposób.Nowe zwiazki o wzorze 1 sa wprawdzie nierozpuszczal¬ ne w wodzie, jednak mozna je przeprowadzic w zwiazki rozpuszczalne w wodzie przez reakcje z zasadami.Reakcje zwiazków o wzorze 3 z wyzej wymienionymi halogenkami albo bezwodnikami kwasów dwukarboksy¬ lowych, np. bezwodnikiem kwasu bursztynowego, prze¬ prowadza sie w znany sposób, np. w zasadowym rozpusz¬ czalniku organicznym, jak np. pirydyna albo w mieszani¬ nie toluenu i trójetyloaminy, weglanu potasu i acetonualbo w mieszaninie benzenu i pirydyny albo dioksanu i pirydy¬ ny w temperaturze od temperaturypokojowej do tempera¬ tury wrzenia mieszaniny reakcjynej. Korzystnie reakcje przeprowadza sie w pirydynie w temperaturze okolo 100°C. Otrzymane przy tymzwiazki o wzorze 1 wyodrebnia sie w znany sposób, np. przez usuniecie rozpuszczalnika i oczyszcza wznany sposób, np. przez przekrystalizowanie.Stosowany do powyzszych reakcji jako zwiazek wyj¬ sciowy antybiotyk pleuromutiline (zwiazek o wzorze 3, X=-CH=CH2) otrzymuje sie hodujac w wodnych roztwo¬ rach pozywek, zawierajacych zródlo azotu i zródlo weglo¬ wodanów, drobnoustrójClitopilus passeckerianus (Pil.)Sing. (rodzinaTricholomataceae, rzadAgari- ca 1 es, klasa Basidiomycetes), zdeponowany pod nu¬ merem 3100 w US-Departament of Agricultura (Northern 9071990719 3 Utilisation Research and Development Division), Peoria, - 111,, lub jego warianty albo mutanty. Hodowle mozna przeprowadzic w ten sposób, ze wyzej podany drobnous¬ trój poddaje sie fermentacji w kulturze wstepnej, zawiera¬ jacej zródlo weglowodanów i azotu, ekstrakt slodowy, 5 a ponadto make fasolowa, ekstrakt drozdzowy, agar, pep¬ ton oraz sole mineralne i otrzymana przy tym papke fermentacyjna przenosi sie nastepnie dla dalszej hodowli do roztworu fermentacyjnego, który zawiera jako zródlo weglowodanów glikoze, a jako zródlo azotu produkt auto- 10 lizy drozdzy piwnych oraz sole mineralne.Po zakonczeniu fermentacji utworzona przytympleuro- mutiline wyodrebnia sie w znany sposób.Otrzymana w ten sposób pleuromutilina jest latwo roz¬ puszczalna w alkoholu, eterze, octanie butylu, acetonie, 15 metyloizobutyloketonie, czteroglikolu i chloroformie, trudno rozpuszczalna w wodzie, eterze naftowym i cyklo¬ heksanie. Jej temperatura topnienia wynosi 167° (krystali- A T zbwam/z mieszaniny H2O : C0H5OH = 4 : 1), skrecalnosc optyczna (a)oM = + 32° (10%-owy roztwór w chlorofor- 20 mie). Antybiotyk pleuromutilina ma charakterystyczne maksima w widmie ultrafioletowym w pasmach 205 um i 293 jim (w eterze), lub 209 \im i 290 firn (w 60%-owym etanolu), oraz charakterystyczne pasma adsorpcyjne w widmie podczerwonym 3400, 3000, 1235 i 1095 cm"1 2* (pastylki z bromku potasowego) i przy 3570, 3610, 1730, 1740 i 1630 cm'1 (w roztworze w chlorku metylenu).Przez katalityczne uwodornienie antybiotyku pleuro¬ mutiliny w znany sposób otrzymuje sie jej dwuhycrozwia- zek (zwiazek o wzorze 3,X=-CH2-CH3). 30 Otrzymane sposobem wedlug wynalazku pochodne an¬ tybiotyku pleuromutiliny oraz produktu jej uwodornienia 0 wzorze 1 stanowia, jak juz wyzej przedstawiono, wartos¬ ciowe dodatki do mieszanek srodków paszowych. Wielka zaleta przy stosowaniu pochodnych antybiotyku pleuro- 35 mutiliny, jakrówniez produktu jej uwodornienia polega na tym, ze nie sa one atakowane przez pozostale skladniki mieszanek gotowychsrodkówpaszowych, jak suchegrzyb¬ nie, w szczególnosci z produkcji penicyliny, maki z krwi i/lub substancje mineralne i/lub witaminy, a wszczegól- 40 nosci koncentraty bialkowe, np. maczka rybna.Zawartosc pochodnych antybiotyku pleuromutiliny lub produktu jej uwodornienia o wzorze 1 powinna wynosic na 1 kg mieszanki gotowych srodków paszowych dla drobiu 2,5 - 50 mg i dla swin 10 - 50 mg w przeliczeniu na ilosc 45 antybiotyku pleuromutiliny. Cieletom i wolom tucznym mieszanke gotowych srodków paszowych powinno sie po¬ dawac w takiej ilosci, aby zostalo przyjetych dziennie 25 - 70 mg substancji czynnej.Przy dodatku wiekszych ilosci pochodnych antybiotyku 50 pleuromutiliny albo produktu jej uwodornienia uzyskuje sie korzystne dzialanie przeciwko zoopatogenicznym drobnoustrojom, tak ze mozliwe jest stosowanie tych zwiazków w lecznictwie zwierzat.Nastepujace przyklady wyjasniaja wynalazek nie ogra- 55 niczajac jego zakresu.Przyklad 1. Wytwarzanie antybiotyku pleuromutili¬ ny. Kulture Clitopilus passeckerianus NRRL 3100 na po¬ zywce agarowej splukujesie wyjalowionym fizjologicznym roztworem soli kuchennej 1 3 ml otrzymanej zawiesiny 60 przeszczepia do 500 ml szerokoszyjnej kolby stozkowej, napelnionej 60 ml jalowego roztworu pozywki.Pozywka do skosów agarowych: maki fasolowej 10,0 g, KH2PO4 0,5 g, 1 %-owego roztworu FeCl3 1,0 ml, ekstraktu drozdzowego 0,1 g ekstraktu slodowego 50,0 g, peptonu 65 4 1,0 g, agaru 15,0 g, dopelnic woda destylowana do 1000 ml, pH naturalne.Roztwór pozywki fermentacyjnej: glikozy 50,0 g/l, N-autolizatu drozdzy piwnych 1,0 g/l, KH2PO4 1,0 g/l, MgS04 • 7H20 0,5 g/1, Ca(N03)2 o,5 g/1, NaCl 0,1 g/1, FeS04-7H20 0,05 g/l, dopelnic wodadestylowana do 1000 ml, pH przed sterylizacja 6,0.Po 120 godzinach fermentacji w temperaturze 24°C na wytrzasarce obrotowej o skoku 40 mm i 250 obrotach na minute, zawartosc 500 ml szerokoszyjnej kolby stozkowej nabiera konsystencji gestej brei. Z niej 10 ml stosuje sie do • zaszczepienia 21 szerokoszyjnej kolby stozkowej, opojem¬ nosci 21, napelnionej 200 ml powyzszego roztworu jalowej pozywki fermentacyjnej. Hodowle prowadzi sie w tych samych warunkach, jak przy prowadzeniu pierwszego eta¬ pu wstepnego. Po uplywie 48 godzin otrzymana papke fermentacyjna zaszczepia sie wypelniona 101 wyzej poda¬ nego jalowego roztworu pozywki fermentacyjnej kadz fer¬ mentacyjna typu New-Brunswick-Submers, wyposazona w uklad przegród. Fermentacje prowadzi sie w ciagu 120 godzin przy przeplywiepowietrza 0,51/1 roztworu pozywki na minute i szybkosci obrotowej mieszadla tarczowego 350 obrotów na minute.Nastepnie cala zawartosc kadzi fermentacyjnej odparo¬ wuje sie do sucha w wyparce prózniowej w temperaturze pokojowej i otrzymany placek miele na drobno.W ten sposób otrzymuje sie z uzytych 10 1 roztworu pozywki 200 g suchego proszku o zawartosci 5 gpleuromu¬ tiliny.Przyklad II.Produkt reakcji pleuromutiliny z bez¬ wodnikiem kwasu bursztynowego. 1 g bezwodnika kwasu bursztynowego ogrzewa sie z 3,7 g pleuromutiliny w bez¬ wodnej pirydynie w ciagu 5 godzin do temperatury 100°C.Po usunieciu rozpuszczalnika pod obnizonym cisnieniem pozostalosc przekrystalizowuje sie z benzenu. Otrzymuje sie 3- g bursztynianu pleuromutiliny. Zwiazek ma wzór sumaryczny C26H3808 (solwat benzenowy), temperatura topnienia wynosi 83° - 85°C. Wolny kwas ma silna sklon¬ nosc do tworzenia solwatów i tak przy elektrometrycznym miareczkowaniu w 50%-owym alkoholu otrzymuje sie jako ciezar równowaznikowy wartosc 545, przy teoretycz¬ nej wartosci 556.Z wolnego kwasu wytwarza sie sól sodowa przez rozpu- szczanienie go w eterze, wytrzasanie fazy organicznej z równowaznikowa iloscia 3%-owego roztworu wodnego NaHC03 i nastepnie zliofilizowanie fazy wodnej.Dalsza droga do wytworzenia soli sodowej z wolnego kwasu jest nastepujaca: kwas pobiera sie w alkoholu butylowym, roztwór zadaje sie równowaznikowa iloscia octanu sodowego w butanolu, zateza calosc pod zmniejszo¬ nym cisnieniem, ochladza i pobudza krystalizacje przez zaszczepienie lub zacieranie. Wytracona sól sodowa odsa¬ cza sie, przemywa najpierw butanolem, a nastepnie ete¬ rem. Otrzymuje sie bardzo dobrze rozpuszczalny wwodzie bursztynian pleuromutiliny.Przykladni. Produkt reakcji dwuwodoropleuromu- tiliny z bezwodnikiem kwasu bursztynowego. Otrzymana przez uwodornienie pleuromutiliny wedlug przykladu II dwuwodoropleuromutiline przeprowadza sie przez reak¬ cje z bezwodnikiem kwasu bursztynowego w bursztynian dwuhydropleuromutiliny.Produkt ten jest jednak równiez dostepny w ten sposób, ze najpierw pleuromutiline estryfikuje sie bezwodnikiem kwasu bursztynowego i otrzymany bursztynianpleuromu-90719 tiliny przeprowadza sie nad tlenkiem platyny w burszty- nian dwuhydropleuromutiliny.Przyklad IV dwuetyloaminoetanolowa jednobursz- tynianu pleuromutiliny. 380 g pleuromutiliny, 100 g bez¬ wodnika kwasu bursztanowego, 140 ml trójetyloaminy i 21 toluenuwytrzasa sie na wytrzasarce firmyJanke i Kun- kel, w ciagu 8 godzin, przechylajac najpierw kolbe lub butelke recznie az do rozpuszczenia sie skladników reak¬ cji. Bardzo szybko zaczyna sie wydzielac krystaliczny produktreakcji. Po odstaniuw ciagu nocy przenosisieosad do rozdzielacza, dodaje okolo 2,5 1 wody i 110 g NaHC03 i wytrzasa do momentu rozpuszczenia sie. Wtedy oddziela sie toluen i faze wodoroweglanowa przemywa jeden raz eterem. Teraz ekstrahuje sie dwukrotnie eterem, zakwa¬ szajac rozcienczonym kwasem fosforowym do pH 2, prze¬ mywa ekstrakt eterowy i osusza za pomoca Na2S(X Po przesaczeniu objetosc wynosi 3740 ml. Liczba kwasowa 2,65.Po dodaniu 116 ml dwuetyloaminoetanolu w 200 ml eteru wydziela sie lepki olej, który po zacieraniu lopatka krystalizuje. Mase mozna dobrze odsaczyc, po czym po przemyciu niewielka iloscia eteru suszy sie ja w suszarce prózniowej w niskiej temperaturze. Temperatura topnie¬ nia 122 - 126°C. PL

Claims (2)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowych pochodnych pleuromu- 5 tiliny lub produktu jej uwodornienia o wzorze 1, w którym X oznacza grupe -CH2-CII3 albo -CH=CH2, Z oznacza atom wodoru albo grupe o wzorze 2 i p oznacza liczbe calkowita 1 - 12 a Y oznacza grupe hydroksylowa albo atom chlorowca, oraz ich soli, znamienny tym, ze pleuro- 10 mutiline lub produkt jej uwodornienia o wzorze 3, w któ¬ rym X ma wyzej podane znaczenie, poddaje sie reakcji z halogenkami albo bezwodnikami kwasówdwukarboksy- lowych o wzorze (COOH)-(CH2)p-(COOH), w którym p ma wyzej podane znaczenie i otrzymane w ten sposób zwiazki 15 o wzorze 1 ewentualnie przeprowadza sie nastepnie w ich sole przez reakcje z zasadami.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze pleuro- mutiline poddaje sie reakcji z bezwodnikiem kwasu bursz- 20 tynowego. 3. *. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze dwuhy- dropleuromutiline poddaje sie reakcji z bezwodnikiem kwasu bursztynowego.90719 . ** v ¦ <*5fc -,*5fl» O II OCOCK-0-C-(CHJp-COY O -C-(CH2)p-COY WZÓR 2 OCOCH2OH WZÓR 3 Sklad wykonano w DSP, zam. .1230 Druk w UP PRL. naklad 125 + 20 cgz. Cena zl 10,- PL