PL88968B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania mie¬ szaniny izomerów nowych pepstatyn przy uzyciudrobnou¬ strojów, wytwarzajacych pepstatyne. Stwierdzono, zepep- statyna jest skutecznym srodkiem przeciwko owrzodze- niom zoladkowym. Jako drobnoustroje, wytwarzajace pe¬ pstatyne, zidentyfikowano Streptomyces testaceus Hama- da i Okami, oznaczony jako Streptomyces testaceus ATCC nr 21469. Pepstatyna jest pentapeptydem, zawierajacym po stronie grupy aminowej N-zacylowany kwas izowale- rianowy i po stronie grupy karboksylowej - wolny kwas karboksylowy (J. Antibiotics, 23, 259-262, 1970, ibid., 23, 263-265, 1970).Pepstatyne mozna otrzymywac przez hodowle szczepu, •wytwarzajacego pepstatyne w odzywczym srodowisku, zawierajacym peptony i inne substancje dostarczajace azo¬ tu, oraz przez ekstrakcje z rozczynu hodowlanego i oczysz¬ czenie. Pepstatyne mozna równiez otrzymywac w postaci jej soli z metalami amidów lub estrów, jak to opisal Umezwa i wspólpracownicy w japonskim opisie patento¬ wym nr 659 783. Przeprowadzono badania inhibitorów pepsyny w rozczynie hodowli powyzszych szczepów, wy¬ twarzajacych pepstatyne. Na podstawiedoswiadczen,pro¬ wadzonych w róznych warunkach, stwierdzono wiecej, niz dwie substancjepodobnedo pepstatynyitak,jak pepstaty¬ na, wykazujace dzialanie antypepsynowe. Substancje te równia sie jednak od pepstatyny na chromatogramie cien¬ kowarstwowym na silikazelu oraz grupa kwasu tluszczo¬ wego pepstatyny w chromatografii gazowej, po hydrolizie w srodowisku kwasnym.Jedna z nowych pepstatyn, nazwanych pepstatyna B, mozna krystalizowac z roztworu metanolu jako jej ester metylowy w postaci drobnych igiel. Pepstatyna B topi sie w temperaturze okolo 254-255°C, jej sklad elementarny C-60,4, N-9,74, i H-9,38%, wartosci obliczone dla C„H67N50,: C-60,6, H-9,40 i H-9,28%, skrecalnosc optycz¬ na (a)"D = 95,5 (C = 0,5, kwas octowy). Podobnie, jak pepstatyna, daje ona niebieskie zabarwienie w reakcji Rydona Smitha oraz czerwone zabarwienie w reakcji z chlorkiem zelazowym hydroksyloaminy. Ester metylowy pepstatyny B jest umiarkowanie rozpuszczalny w dwume- tyloformamidzie, sulfotlenku dwumetylu i kwasie octo¬ wym oraz znacznie rozpuszczalny w wodzie, chloroformie, benzenie, octanie etylu i eterze. Jest on lepiej rozpuszczal¬ ny w metanolu, niz ester metylowy pepstatyny (5-10 mg/cm3).Produkty hydrolizy w srodowisku kwasnym estru mety¬ lowego pepstatyny B, prowadzonej, przy uzyciu 20%- owego kwasu solnego w ciagu 16 godzin w temperaturze 105°C, ekstrahowano eterem i badano metoda chromato¬ grafii gazowej i dwumiarowej chromatografii cienkowars¬ twowej. W ekstrakcie eterowym stwierdzono obecnosc kwasu n-kapronowego. W warstwie wodnej, oprócz kwasu 3-hydroksy-4-amino-6-metyloheksanokarboksylowego stwierdzono obecnosc waliny i alaniny w stosunku 2:1. Na tej podstawiemozna oszacowac, ze pepstatyna B zbudowa¬ na jest z podstawionej grupy kwasu tluszczowego pepsta¬ tyny o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R oznacza reszte n-kaproilowa wprzypadkupepstatyny B, a R oznacza reszte izo-kaproilowa w przypadku pepstaty¬ ny C, a R1 oznacza atom wodoru, nizsza grupe alkilowalub 88 96888 968 3 atom metalu alkalicznego i kwasu n-kapronowego.W chromatografii cienkowarstwowej na silikazelu przy uzyciu ukladu rozpuszczalników chloroform : metanól- i kwas octowy = 95 :-4 : 1, na podstawie barwnej reakcji Rydona-Smitha okresla siedla estru metylowego pepstaty¬ ny B wartosc R( = o,39 i dla estru metylowego pepstatyny Rr = 0,35. Dzialanie antypepsynowe estru metylowego pe¬ pstatyny B jest takie same, jak estru metylowego pepsta¬ tyny.Stwierdzono, ze szczep, wytwarzajacy pepstatyne, moze produkowac pepstatyne B, której grupa kwasu tluszczo¬ wego podstawiona jest dokwasukapronowego zczesteczki pepstatyny. Na tej podstawiemozna spodziewac sie wyste¬ powania wiekszej ilosci substancji podobnych do pepsta¬ tyny, rózniacych siegrupakwasu tluszczowego. Inna peps- tatyna, nazwana pepstatyna C, zawiera kwas izokaprono- wy, której ester metylowy wykazuje wartosc Rf = 0,39, taka sama, jak dla pepstatyny B. Ester metylowy innej jeszcze pepstatyny wykazuje wartosc Rf = 0,42. Tensklad¬ nik o dzialaniu antypepsynowym otrzymuje sie w postaci drobnych igiel; w produktach hydrolizy w srodowisku kwasnym tej substancji stwierdza sie w chromatografii gazowej wystepowanie tych samych aminokwasów ipieciu kwasów tluszczowych C5-C16.Wymienione nowe pepstatyny mozna okreslic jako peps¬ tatyny, zawierajace kwasy tluszczowe C5-C,6, takie, jak kwas n-kapronowy lub kwas izokapronowy, inne niz kwas izowalerianowy pepstatyny.Wedlug wynalazku, nowe pepstatyny wytwarza sie na¬ stepujacymi sposobami: Szczep, produkujacy pepstatyne, zaszczepia sie do odzywczego srodowiska, zawierajacego kazeine, smietanke z mleka i lub odzywke z ziarna sojowe¬ go jako zródlo azotu i w ciagu 3-10 dni poddaje sie inkubacji w zwyczajnych warunkach aerobowych, do chwili uzyskania maksymalnego dzialania antypepsyno- wego rozczynu hodowlanego. Aktywny skladnik mozna ekstrahowac n-butanolem z rozczynu hodowlanego lub jego przesaczu albo metanolem z masy grzybniowej. Uzy¬ skany w ten sposób ekstrakt zateza sie do syropu lub do zóltych osadów. Syrop wkrapla sie do 5-20 objetosci wody w celu utworzenia osadu, który odsacza sie i po wysuszeniu otrzymuje sie nowe pepstatyny w stanie surowym. Surowa pepstatyne rozpuszcza sie w nizszymalkoholu iestryfikuje sie w ciagu kilku godzin w temperaturze pokojowej lub wyzszej przy uzyciu malych ilosci katalizatora estryfikacji takiego, jak kwas solny, kwas siarkowy, kwas p-tolueno- sulfonowy, chlorek tionylu, pieciochlorek fosforu, lub POCl3 itp, W wyniku estryfikacji surowych pepstatyn otrzymuje sie mieszanine ich estrów metylowych, przy " czym glówna czesc estru metylowego pepstatyny mozna wydzielic przez krystalizacje z roztworu metanolu. Na podstawie badania tej krystalicznej frakcji metoda chro¬ matografii cienkowarstwowej stwierdza sie, zeester mety¬ lowy oryginalnej pepstatyny i nowych pepstatyn wystepu¬ je w stosunku 1:1. Tegodrugiego estru wiecej znajdzie sie w lugu macierzystym i mozna go zatezyc nastepujacym sposobem. Krysztaly krystalizuje sie ponownie z roztworu metanolu i oddziela sie od nich lug macierzysty. W lugu tym nie ma juz prawie estru metylowego oryginalnej peps¬ tatyny i mozna z niego krystalizowac oczyszczony ester metylowy nowych pepstatyn w postaci drobnych igiel.Sposób wedlug wynalazku obejmuje otrzymywanie al¬ kalicznych soli nowych pepstatyn na drodze hydrolizy w srodowisku alkalicznym estrówtychpepstatynz alkoho¬ lem oraz otrzymywanie wolnych nowych pepstatyn, uzy- 4 skiwanych przez zobojetnienie powyzszych alkalicznych produktów hydrolizy. Hydrolize w srodowisku alkalicz¬ nym mozna przeprowadzic sposobem opisanym w opisie patentowym, dotyczacym oryginalnej pepstatyny, tj. w ja- ponskim opisie patentowym nr 659 783. Alkaliczne sole nowych pepstatyn, a konkretnie sól sodowa pepstatyny B jest bialym, bezpostaciowym proszkiem, rozkladajacym sie w temperaturze 250-255°C i wykazujacym 50%-owe zahamowanie pepsyny (ID)50 przy 0,055 y. W przeciwiens- twie do pepstatyny, pepstatyna B w postaci wolnego zwiazku jest bialym, bezpostaciowym proszkiem, który otrzymuje sie przez krystalizacje z metanolu i wody w sto¬ sunku 2:1. Rozklada sie ona w temperaturze okolo 210- 220°C. Skrecalnosc wlasciwa (a)20D-85° (C = 1,0 metanol), a ID50 pepsyny wynosi 0,05y. Widmo w podczerwieni dla pepstatyny B przedstawiono na fig. 2. Rozpuszcza sie ona rlatwo w metanolu, 100 mg/ml, tj. dziesieciokrotnie lepiej od oryginalnej pepstatyny. Ponadto, pepstatyna B rozpu¬ szcza sie w wodnym roztworze butanolu, w etanolu, alko- holu izopropylowym, dwumetyloformamidzie, sulfotlenku dwumetylu, kwasie octowym lub pirydynie, jest nieznacz¬ nie ropzuszczalna w wodnym roztworze acetonu, lecz trud¬ no rozpuszcza sie wodwodnionym acetonie, odwodnionym butanolu, chloroformie, benzenie, eterze i wodzie.Nizej podane przyklady ilustruja wynalazek, nie ograni¬ czajac jego zakresu.Przyklad I. Wytwarzajacy pepstatyne szczep Strepto- myces testaceus zaszczepia sie do 2900 1 sterylizowanej pozywki, zawierajacej 5,5% glikozy, 2,0% oleju sojowego, 4,5% smietanki z mleka, 5,0% kazeiny mleka, 0,15% K2HPO„ 0,35% NaCl i 0,15% MgS04. 7H20 (pH = 6,45).Pozywke poddaje sie inkubacji w ciagu 112 godzin.w tem¬ peraturze 23-24°C, mieszajac i napowietrzajac. Rozczyn zawiera skladnik antypepsynowy w ilosci równowaznej stezeniu pepstatyny 2260 /cm3. Dodajac rozcienczonego kwasu siarkowego, pH rozczynu doprowadza, sie do 2,5 orza dodaje sie 3600 1 metanolu. Mieszanine miesza sie w ciagu 40 minut w temperaturze 15-20°C, dodaje sie 4% 40 srodka, ulatwiajacego saczenie, przesacza*sie i przemywa.Do 6300 1 uzyskanego w ten sposób eluatu metanolowego dodaje sie lugu, az do pH = 10, metanol odparowuje siepod próznia i otrzymuje sie 1900 1 wodnej pozostalosci. Do tej pozostalosci dodaje sie 800 1 n-butanolu i pH mieszaniny doprowadza sie do 7,0. Mieszanine miesza sie w ciagu 30 minut w temperaturze 20°C i oddziela sie 960 1 ekstraktu butanolowego. pH tego ekstraktu doprowadza sie do war¬ tosci 3,0 i zateza sie go pod próznia do 55 1 syropu. Syrop ten wkrapla sie, mieszajac, w ciagu 60minut, do 8001 wody i wytracony osad odsacza sie. Osad przemywa sie woda, liofilizuje i otrzymuje sie 7990 g zóltego proszku surowych nowych pepstatyn. Proszek ten zawiera 64% skladnika antypepsynowego, równowaznego pepstatynie. 6080 g tego surowego produktu rozpuszcza sie w 33 55 1 metanolu i w celu odbarwienia dodaje 1,25 kg wegla aktywnego. Do 381 odbarwionego roztworu metanolowego dodaje sie 125 cm3stezonego kwasu siarkowego i miesza sie go w ciagu 2,5 godziny w temperaturze 60°C. Mieszanine reakcyjna zobojetnia sie 0,63 1 trójetyloaminy i miesza sie 60 w ciagu 120 minut w temperaturze 50-60°C. Otrzymuje sie bialy, krystaliczny osad, który przemywa sie woda i meta¬ nolem, i suszy pod próznia. Uzyskuje sie 3230 g estrów metylowych nowej pepstatyny o dzialaniu antypepsyno¬ wym (ID)50 przy y 0,056. Temperatura rozkladu: 250-251°C 65 i (a),0D- 90°C (C = 1,0, kwas octowy). Proszek ten zawiera88 968 powyzej 80% estrów metylowych pepstatyny B i C o Rf = 0,39 (chromatografia cienkowarstwowa).Przykladu. 3100 g estru metylowego nowej pepstatyny (uzyskanej wedlug przykladu I) rozpuszcza sie w 130 1 mieszaniny 90% metanolu, zawierajacej 0,2 n wodorotle¬ nek sodowy i hydrolizuje sie w ciagu 2 godzin w temperatu¬ rze 60°C. Z mieszaniny reakcyjnej odparowuje sie pod próznia i uzyskuje sie szlamowaty koncentrat. Koncentrat rozpuszcza sie w 201 wody nasyconej n-butanolem, dodaje sie 151 wody i rozcienczonym kwasem siarkowym ustala sie pH = 3,0. Mieszanine miesza sie w ciagu 60 minut i uzyskany osad odsacza sie, i prze¬ mywa woda. Przemyty osad suszy sie pod próznia i otrzymuje sie 2500 g proszku o temperaturze Wkladu 205-210° (a£° -84° (c= 1,0, metanol), ID50 (50%-owe zahamowanie pepsyny) przy y 0,055. Krzywa miareczkowania wskazuje zazycie 9,7 cm3 0,1 n NaOH na 700 mg próbki.Przyklad III. 100 g estrówmetylowych nowej pepstaty¬ ny (uzyskanej wedlug przykladu I) rozpuszcza sie w 4 1 absolutnego metanolu i odbarwia sie20gwegla aktywne¬ go. Roztwór metanolowy pozostawia sie na nociotrzymuje w pierwszym rzucie 24 g bialych krysztalów. 4,3 1 metano¬ lowego lugu macierzystego zateza sie do objetosci 1,3 1, miesza sie w ciagu 60 minut w temperaturze 60°C w celu przeprowadzenia krystalizacji. Mieszanine pozostawia sie na noc i w drugim rzucie uzyskuje sie 5,5 g bialych krysztalów. Krysztaly tego drugiego rzutu rozpuszcza sie w 1,5 1 goracego metanolu i poddaje dzialaniu wegla aktywnego. Metanolowy roztwór pozostawia sie na noc i otrzymuje sie 12,0 g bialych krysztalów trzsciego rzutu.Fizykochemiczne wlasnosci uzyskanych w ten sposób' substancji krystalicznych: Krysztaly pierwszego rzutu: temperatura rozkladu 250- 251°C (a)20D - 90,5° (C = 0,5, kwas octowy), ID50 przy y 0,05 substancja o Rf 0,35: substancja o Rf 0,39 = 1 : 1 do 1 : 2 (chromatografia cienkowarstwowa), chloroform : meta¬ nol : kwas octowy = 95 : 4 : 1).Krysztaly drugiego rzutu: temperatura rozkladu 253- 254°C,(a)20D-91,5°(C = 0,5, kwas octowy), ID50 przy y 0,05, glównie substancja o Rf 0,39 i slady substancji o Rf 0,42 (chromatografia cienkowarstwowa, chloroform : metanol- : kwas octowy = 95 : 4 : 1).Krysztaly trzeciego rzutu: temperatura rozkladu 254- 255°C, (a)2UD - 95,5° (C = 0,5, kwas octowy, ID50 przy y 0,05, glównie substancja o Rf 0,39 (pepstatyny B) i sladysubstan¬ cji o Rf 0,42 (chromatografia cienkowarstwowa, chloro¬ form : metanol : kwas octowy = 95 : 4 : 1), widmo w pod¬ czerwieni przedstawiono na fig. 1, wartosci oznaczone: C-60,14, H-9,38 i N-9,74%, umiarkowana rozpuszczalnosc w sulfotlenku dwumetylu, dwumetyloformamidzie i kwa¬ sie octowym, mala rozpuszczalnosc w metanolu (5-10 mg/cm3), lecz lepsza, nize estru metylowego pepstatyny.Przyklad IV. Wytwarzajacy pepstatyne szczep zasz¬ czepia sie do 130 1 sterylizowanej pozywki, zawierajacej 6,0% glikozy, 2,0% gliceryny, 4,0% smietanki z mleka, 4,5% kazeiny mleka, 0,1% K2HP04, 0,3% NaCl i 0,1% MgS04.7H20 (pH = 6,8) i poddaje sie inkubacjiw ciagu 137 godzin w warunkach, opisanych w przykladzie I. Do 1251 rozczynu hodowlanego, zawierajacego skladnik antypep- synowy w ilosci równowaznej 170 g pepstatyny, dodaje sie 60 1 n-butanolu i mieszanine miesza sie w ciagu 40 minut w temperaturze pokojowej. Nastepnie, warstwe butanolo- wa, warstwe wodna i warstwe stala (mase grzybniowa) 6 rozdziela sie przez odwirowanie. Warstwe butanolowa przemywa sie woda i zateza sie po próznia do 1,51 syropu.Us"tala sie pH syropu na wartosc 3,0, dodaje sie 7,51 n-he- ksanu i miesza w celu uzyskania zóltawo-brazowego osa- du. Mieszanine miesza sie jeszcze w ciagu 60 minut, osad odsacza sie, przemywa i suszy pod próznia, i otrzymuje sie 164 g surowej nowej pepstatyny o dzialaniu antypepsyno- wym ID50 przy y 0,075. 150 g nowej pepstatyny rozpuszcza sie w 1,5 1 90%- io owego metanolu w temperaturze 40-50°C i odbarwia sie 150 g wegla aktywnego. Do 1,6 1 odbarwionego roztworu metanolowego dodaje sie w temperaturze pokojowej 1,0 # 1 wody i uzyskuje sie zelowaty osad. Osad przesacza sie, przemywa 50%-owym metanolem i poliofilizacji otrzymu- je sie 94 g lekko zóltawego proszku, wykazujacegoprzeciw pepsynie ID60 przy 7 0,062. Proszek ten rozpuszcza sie w 90%-owym ^etanolu, dwukrotnie zadaje sie weglem aktywnym tak, jak to powyzej opisano, i uzyskuje sie 45 g bialego proszku nowej pepstatyny. ID50 przy y 0,055, temperatura rozkladu 198 do 205°C, (a)2nD = -79° (C = 1,0, metanol), na cMromatogramie cienkowarstwowym okresla sie R, 0,35 - pepstatyna, Rf 0,39 -pepstatyna B i pepstatyna C oraz Rf 0,42, a proporcje substancji o R( 0,35, 0,39 i 0,42 wynosily 1 : 3 : 0,1.Przyklad V. Wytwarzajacy pepstatyne szczep zaszcze¬ pia sie do 1301 sterylizowanej pozywki, zawierajacej 6,0% - glikozy, 2,0% gliceryny, 1,5% smietanki mleka, 1,5% kaze¬ iny mleka, 5,7% pozywki z ziarna sojowej, 0,1% K2HP04, 0,3% HaCl i MgSO,. 7H20 (pH = 5,5) i poddaje sie inkuba- cji w ciagu 137 godzin w warunkach, opisanych w przykla¬ dzie I. 110 g rozczynu hodowlanego, zawierajacego sklad¬ nik antypepsynowy w ilosci równowaznej 132 g pepstaty¬ ny, przesacza sie z dodatkiem 7 kg srodka, ulatwiajacego saczenie. Dodajac rozcienczonego kwasu siarkowego, ustala sie pH = 2,0 i mieszanine rozdziela sie na 33 kg (masa na mokro) masy grzybniowej i 75 1 przesaczu. Do masy grzybniowej dodaje sie 83 1 absolutnego metanolu i uzyskana szlamowata mieszanine miesza sie w ciagu 40 ' minut. Nastepnie, mieszanine przesacza sie, placek filtra- 40 cyjny przemywa sie dwukrotnie 401 70%-owego metanolu i otrzymuje sie 1401 wodnego, metanolowego eluatu. Do 75 1 przesaczu hodowli dodaje sie 35 1 n-butanolu, miesza sie go w ciagu 15 minut i po rozdzieleniu otrzymuje sie 37 1 warstwy butanolowej i 731 warstwy wodnej. 1401 wodne- 45 go, metanolowego eluatu, uzyskanego z masy grzybniowej, zateza sie pod próznia do 27 1 wodnego roztworu i miesza sie z 37 1 butanolowgo ekstraktu uzyskanego z przesaczu hodowli. Mieszanine te odwirowuje sie w celu usuniecia warstwy wodnej i otrzymujesie 351 ekstraktu butanolowe- 50 go. Ustala sie pH tego ekstraktu 3,0 i zateza sie go pod próznia do 1,0 1 syropu. Syrop wkrapla sie do 15 1 wody i miesza sie w ciagu 60 minut, az do wytracenia osadu. Osad odsacza sie, przemywa woda i powysuszeniuw temperatu¬ rze 60-70°C otrzymuje sie 158 g zóltawego proszku nowej 55 pepstatyny o ID50 przeciw pepsynie przy y 0,072.Takuzyskany proszek estryfikuje sie metanolem sposo¬ bem, podanym w przykladzie I i uzyskuje sie 62 g bialego, krystalicznego proszku estru metylowego pepstatyny.IDB0 przy y 0,05, temperatura rozkladu 250-252°C (a)"D - 90,6° 60 (C = 0,5, kwas octowy), na chromatogramie cienkowars¬ twowym stwierdza sie wystepowanie glównie estru mety¬ lowego nowej pepstatyny o Rf 0,39 i sladowych ilosci estru metylowego pepstatyny. g tego estru metylowego nowej pepstatynyhydrolizu- 65 je sie w ciagu 2 godzin w temperaturze 60°C przy uzyciu88 968 450cm3 90%-owego roztworu metanolu, zawierajacego 0,2 nNaOH. Dodajac rozcienczonego kwasu solnego, ustala sie pH mieszaniny reakcyjnej na 8,5 i zateza sie do objetosci 150 cm', przy czym wytraca sie osad. Osad odsacza sie, przemywa metanolem i po wysuszeniu pod próznia otrzy¬ muje sie 17,9 g bialego proszku soli sodowej nowej pepsta- tyny o ID50 przy y 0,05, temperatura rozkladu 245-249°C, (a)20D-84° (C = 1,0, metanol), podczas miareczkowania zuzywa sie 10,1 cm10,1 n kwasu solnego napróbke 700 mg.Przyklad VI. 4,0 g nowej pepstatyny w postaci wolnego kwasu, uzyskanej wedlug przykladu II, rozpuszcza sie, ogrzewajac w 100 cm3 absolutnego etanolu i dodaje sie 0,2 cm3 stezonego kwasu siarkowego. Te mieszanine ogrzewa siew ciagu 6 godzin na lazni z wrzaca woda i zateza sie pod próznia do objetosci 50 cm3. Utworzony osad odsacza sie, przemywa woda, suszy i otrzymuje sie 1,6 g proszjcu.Proszek ten krystalizuje sie ze 100 cm3 roztworu absolutne¬ go metanolu i uzyskuje sie 1,15 g bialego, krystalicznego proszku estru metylowegonowej pepstatyny (estru metylo¬ wego pepstatyny B) o ID50 przy 0,054, temperatura rozkla¬ du 250-252°C i (a)20n- 90°C (C = 0,5, kwas octowy).Przyklad VII. 3,0 g nowej pepstatyny, uzyskanej we¬ dlug przykladu II, rozpuszcza sie, ogrzewajac w 100 cm3 absolutnego alkoholu n-propylowego, dodaje sie 0,2 cm3 stezonego kwasu siarkowego i estryfikuje sie w ciagu 6 godzin w temperaturze 80°C. Mieszanine reakcyjna zateza sie pod próznia do objetosci 20 cm3 i wytracony osad odsacza sie, przemywa alkoholem n-propylowym : po wy¬ suszeniu otrzymuje sie900 mg bialego proszku. Proszekten krystalizuje sie z 40,0 cm3 roztworu absolutnego alkoholu propylowego i uzyskuje sie 48,0 mg bialego proszku estru n-propylowego pepstatyny B o ID51) przy 0,073, temperatu¬ ra rozkladu 218-220°C (a)20t) - 89,5° (C = 0,5, kwas octowy).Przyklad VIII. 3,0 g nowej pepstatyny, uzyskanej we¬ dlug przykladu II, rozpuszcza sie w 100 cm3 goracego, absolutnego n-butanolu i dodaje sie 0,2 cm3 stezonego 8 kwasu siarkowego. Estryfikacje prowadz-i sie w ciagu 6 godzin w temperaturze 80°C, po czym mieszaninezateza sie pod próznia do objetoaci 2,0 cm3. Uzyskany osad odsacza sie, przemywa n-butanolem i po wysuszeniu otrzymuje sie 800,0 mg bialego proszku. Proszek ten krystalizuje sie 15,0 cm3 roztworu n-butanolu i uzyskuje sie 340 mg bialego proszku estru n-butylowego nowej pepstatyny B o ID50przy 0,084, temperatura rozkladu 205-207T i (arn-80°C (C = 0,5, kwas octowy). PL

Claims (2)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania mieszaninyizomerów nowych pep- statyn, zawierajacej pepstatyne B i pepstatyne C w formie wolnego kwasu, estru z nizszym alkilem lub soli z metalem alkalicznym o wzorze przedstawionym na rysunku, w któ¬ rym R oznacza reszte n-kaproilowa wprzypadku pepstaty¬ ny B, a R oznacza reszte izo-kaproilowa w przypadku pepstatyny C, a R1 oznacza atom wodoru, nizsza grupe alkilowa lub atom metalu alkalicznego, znamienny tym, ze hoduje sie szczep, wytwarzajacy pepstatyne taki, jak Streptomyces testaceus ATCC nr 21469 w srodowisku odzywczym, zawierajacym zródla przyswajalnego wegla i azotu w warunkach tlenowych, przy czym zródlo azotu nie zawiera peptonów, ale zawiera glównie kazeine, odtlu¬ szczone mleko i/lub meczke sojowa, przez co wytwarza sie duze ilosci pepstatyny B i C i male ilosci pepstatyny, odzyskuje sie pepstatyny ze srodowiska hodowlanego przez ekstrakcje przy pomocy nizszego alkoholu, po czym zateza sie, estryfikuje sie pepstatyny przy pomocy nizszego alkoholu w znany sposób, oddziela sie jako mieszanine izomerów nizsze estry alkilowe pepstatyny znanymi meto¬ dami per se takimi, jak powtórne wytracenie i powtórna krystalizacje, i jezeli to pozadaner hydrolizuje sie estry alkilowe nowych pepstatyn w znany sposób do odpowied¬ nich soli metali alkalicznych lub do wolnego kwasu. CH, CH, CH. CH-CH, CH. . I CH-CH, CH-CHj CH-CH3 CH2OH CH3 CHzOH R-NH-CH-C0-NH-CH-CO-NH-CH-CH-CH2-C0-NH-CH-C0-MH-CH-CH-CHz-C00R' Uzvr88 968 FIG. 1 NOWY ESTER METYLOWY PEPSTATYNY (KBr) 3 4 5 6 7 8 9 10 12 W 16 4000 3500 3000 2500 2000 1800 1600 1400 1200 1000800 600 LICZBA FALOWA CM"' FIG.

2. NOWA PEPSTATYNA (WOLNA) (KBr) 4000 3500 3000 2500 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 LICZBA FALOWA CM"' PL