PL81997B1 - New 3-formylrifamycin sv derivatives[au4143172a] - Google Patents

Description

Sposób wytwarzania nowych 0-podstawionych oksymów 3-formyloryfamycyny SV Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych O-podstawionych oksymów 3-formyloryfa- mycyny SV o wzorze ogólnym 1, w którym R ozna¬ cza grupe alkilowa o co najmniej 2 atomach wegla, lub. grupy alkenylowa, alkinylowa, cykloalkilowa, alkpksyalkilowa, cykloalkoksyalfcilowa, hydroksyal- kilowa, karboksyalkilowa, karboalkoksyalkilowa, karbamyloalkilowa, cyjanoalkilowa, nitroalkilowa, arylooksyalkilowa,_ aryloalkoksyalkilowa, hetero- cyklooksyalkilowa, aminoalkilowa, nizsza jedno- lub dwualkiloaminoalkilowa, podstawiona * benzy¬ lowa, jedno- lub wieloarylowa podstawiona grupe alkilowa zawierajaca 2—8 atomów wegla, nizsza grupe alkilowa podstawiona jednym do trzech pierscieni heterocyklicznych zawierajacych co naj¬ mniej jeden heteroatom sposród atomów tlenu, azotu i siarki z wyjatkiem morfoliny, Ri oznacza atom wodoru lub grupe CH3CO, ewentualnie w po¬ staci 16, 17, 18, 19, 28, 29-szesciowodorowo pochod¬ nych 3-formyioryfamycyny SV.Grupy alkilowa, alkenylowa i alkinylowa zawie¬ raja zwykle najwyzej 20 atomów wegla i moga byc rozgalezione lub nie. Grupy alkenylowa i al¬ kinylowa moga zawierac jedno lub wiecej wiazan wielokrotnych.Grupy arylowa i aryloalkilowa oznaczaja grupy aromatyczne zawierajace od jednego do trzech pierscieni karbocyklicznych i moga byc niepodsta¬ wione lub podstawione w pierscieniu, jednym lub wiecej podstawnikami takimi jak nizsza grupa al- 10 15 20 25 30 kilowa o 1—r4 atomach wegla,. atom • chlorowca, grupa aminowa, jedno- lub dwualkiloaminpwa, chlorowcowana nizsza grupa alkilowa, grupa sul¬ fonowa, fluorosulfonowaj. sulfamidowa, cyjanowa, karboksylowa, -hydroksylowa, karboalkoksylowa, ni¬ trowa itp. Grupa cykloalkilowa sklada sie zazwy¬ czaj z trzech do osiemnastu atomów w£gla.Grupy heterocykliczne' oznaczaja jedno- lub wie¬ loczlonowe pierscienie heterocykliczne zawierajace co najmniej jeden heteroatom sposród atomów.tle* nu, azotu i siarki z wyjatkiem morfoliny o jle gru¬ pa heterocykliczna jest podstawiona nizsza grupa •alkilowa.Oksym 3-ryfamycyny SV oraz jego 0-metylo*0- -morfolinoetylo- pochodne zostaly opisane w opisie patentowym Stanów Zjedn. Ameryki nr 3 342 810, jednak pomimo, iz wykazuja wysoka aktywnosc przeciwbakteryjna nie przejawiaja praktycznie zad¬ nego dzialania na bakterie oporne na inne ryfa- mycyny, a w szczególnosci oporne na znana i sto¬ sowana w terapii 3-(4-metylo-l-piperazynyloimino- metylo)-ryfa;nycyne SV (ryfampicyna).Wiadomym jest, ze pewne szczepy bakteryjne wykazuja opornosc krzyzowa na antybiotykiy da¬ nej grupy, wobec czego trudno jest znalezc' anty¬ biotyk hamujacy wzrost opornego szczepu. Doty¬ czy to w pewnych przypadkach nawet antybio* tyków z innej grupy.Nieoczekiwanie okazalo sie, ze podstawiajac, atom wodoru w grupie oksyiminowej oksymu 8-formy- 81997i loryfamycyny • SV grupa alkilowa o co najmniej dwóch atomach wegla lub jakakolwiek inna po¬ zadana grupa mozna wytworzyc zwiazki hamujace nawet przy niskim stezeniu wzrost szczepu opor¬ nego na inne rafamycyny. W szczególnosci odkry¬ te zwiazki wykazuja dobre dzialanie hamujace Wzrost szczepu Staphylococtus aureus opornego na ryfampicyne.W typowych eksperymentach in vitro zwiazki z przykladów VI,. VIII, XIII, XVI, XXI, XXIII i XXV wykazuja dzialanie hamujace wzrost opor¬ nego na ryfampicyne szczepu Staphylococcus aure¬ us Tour w stezeniu od 1 do 5 ^ig/ml.Aktywnosc ta zwiazana jest z ogólna dobra sku¬ tecznoscia przeciw innym mikroorganizmom wraz¬ liwym na ryfamycyriy. Na ogól zwiazki wytwo¬ rzone sposobem wedlug wynalazku wykazuja zwiek¬ szona aktywnosc wobec drobnoustrojów Gram „+" i Gram „—", a w szczególnosci wykazuja wysoka' aktywnosc wobec Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Streptococcus homolyticus i Diplococcus pneumoniae. W tych przypadkach mi¬ nimalne stezenie hamujace wynosi od 0,001 do 0,5 ng/ml.Inna wazna cecha zwiazków wytworzonych spo¬ sobem wedlug wynalazku jest wplyw hamujacy odkrytych zwiazków na# DNA-polimerazy, charak¬ terystyczne dla ludzkich leukemocznych limfobla- stów krwi oraz na typowe nukleotydylowe tran- sferazy (polimerazy) wirusów nieuzytkowane przez normalne komórki.Wiadomo z badan nad przedstawicielami grup wirusów, ze wnosza one lub indukuja w komórce gospodarza polimerazy jako wazne czesci ich repli¬ kacji. Na przyklad wirusy picorna i poliowirusy indukuja RNA. zalezna RNA-polimeraze, a inne grupy takie jak leukemia-sarcoma wirusy wnosza RNA zalezna DNA-polimeraze. Obecnosc i wazna rola RNA zaleznych DNA-polimeraz-rewertowanych transkryptaz w onkogennych wirusach RNA zostala odkryta przez D. Baltimore'a (Nature 226, 1209, .1970 oraz H. M. Temida (Nature 226, 1211, 1970). Obec¬ ne odkrycie RNA zaleznych DNA-polimeraz w RNA nowotworowych wirusach gatunków zwie¬ rzat zostalo, potwierdzone takze przez innych auto¬ rów: Green i wspólpracownicy — „Mechanizm dzia¬ lania rakotwórczego RNA wirusów nowotworowych.RNA — zalezna DNA-polimeraza w wirusach sarco- ma atakujacych myszy luz szczury". Spiegelman i wspólpracownicy — „Charakterystyka wytwarza¬ nia RNA-kierowanego DNA-polimerazy w wirusach nowotworowych RNA". Nature London 227, 563, 1970. Hatanaka i wspólpracownicy. „Aktywnosc DNA polimerazy zwiazana z wirusami RNA — no¬ wotworów. RNA.tumor wiruses". Proc. Nat. Acad.ScL USA 67, 143, 1970. Scolnick i wspólpracownicy — „Syntezy DNA przy pomocy wirusów zawiera¬ jacych nowotwory" Proc. Nat. Acad. Sci. USA 67, 1034, 1970.Implikacje RNA wirusów w niektórych nowo¬ tworach zostaly równiez potwierdzone przez inne fakty: rewertowana transkryptaze znaleziono w cza¬ stkach ludzkiego mleka uzyskanego od kobiet ze znana historia raka piersi oraz z populacji hodo¬ wanych (Scholn i wspólpracownicy-Nature 231, 97, LMf 4 1971). Priori i wspólpracownicy (Nature, New Bio- logy 232, 16, 1971) izolowali wirusa ESP-1 zawie¬ rajacego rewertowana transkryptaze z komórek plynu oplucnej dzieci z limfoma, który z powo- a dzeniem hodowali w hodowlach tkankowych. Obec^ nosc w ludzkim raku piersi RNA homologicznego z wirusem RNA sutkowego' raka myszy wykazano na drodze hybrydacji molekularnej (R. *Axel « i wspólpracownicy-Nature 235, 32», 1972). Obecnie io. nie ma jeszcze efektywnych srodków przeciwwiru- sowych, poniewaz zarówno wirusy jak komórki wy¬ kazuja taki sammetabolizm. * Najkorzystniejszym w chemoterapii przeciwwiru- sowej byloby sporzadzenie leku dzialajacego spe- 15 cyficznie na wiralnie lub wirusowo transformowa¬ ne polimerazy, a nie dzialajace na polimerazy ko¬ mórek gospodarza kontrolujace ekspresje informa¬ cji genetycznej wirusów. Specyficzne' inhibitory wi¬ ralnie lub wirusowo transformowanych enzymów 20 komórkowych,. a w szczególnosci inhibitory' poli- meraz RNA wirusów nowotworowych moga odgry¬ wac duza role w poszukiwaniu leków przeciw leu¬ kemii oraz przeciw innym nowotworem.Dzialanie .hamujace* zwiazków wytworzonych 25 sposobem wedlug wynalazku testowano jia zmiane aktywnosci oczyszczonych enzymów: RNA.zaleznej DNA-polimerazy endogennego wirusa mysiej sarco- my oraz DNA zaleznej DNA-polimerazy. Dzialanie hamujace oznaczano wedlug metody podanej przez 30 C, Gurgo i wspólpracowników (Nature,.New Bio- logy 229, 111, 1971). Wyniki stosowania róznych leków okreslono poprzez, inkorporacje 3H-dTTP (trytowany trójfosforan dezoksyrybózydu tyminy)* w nierozpuszczalna frakcje. 35 Typowy sposób postepowania poiega na tym, ze wirus izoluje sie i oczyszcza z wirusa szczurzej sarcomy transformowanych komórek szczurzych (komórki 78A1) oraz transformowanych. komórek ' mysich (komórki MEH) wirusa mysiej sarcómy, 40 w sposób opisany przez Greena; i wspólpracowni¬ ków — Proc. Nat. Acad. Scii USA 67,. 385—393? 1970 oraz Rokutanda i. wspólpracowników — Na¬ ture 227, .1026—1028, 1970. Wirionowa . polimeraze oczyszcza sie 20—40 krotnie, na drodze inkubacji 45 oczyszczonych wirusów z 0,5%-NP-40 (nonidet P-40) w. mieszaninie 0,1 m NaCl, 0,01 m Tris buforu o wartosci pH 7,6 i 0,001 m EDTA w ciagu 5' mi¬ nut w temperaturze pokojowej i zonalnego wiro¬ wania w 15—30% gradiencie cukrowym w roztwo- • 50 rze 10 mM buforu fosforanowego o wartosci pH 7,4/ 2,5 mM MgCl2, 10 mM dwutiotreitolu oraz 5% gliceryny w czasie 24 godzin na wirówce Spinco* SW41 (38000 obrotów na minute). Sposród 22 zebra¬ nych frakcje 13—17 wykazujace aktywnosc enzyma- 55 tyczna laczy sie i przechowuje w temperaturze —70°C w 3% glicerynie.Inkubowanie enzymu prowadzi sie w ciagu 1 go¬ dziny w 100 ul mieszaniny reakcyjnej zawierajacej 40 mM Tris buforu o wartosci 8,0, 5 mM dwutio- 60 treitolu, 30 mM NaCl, 2,5 mM MgCL), 0,1 mM dATP, dGTP, dCTP oraz 10 uCi -H-dTTP (12—18 Ci/mmol) opisanej przez Greena i wspólpracowni¬ ków w Proc. Nat. Acad. Sci. USA 67, 385—393, 1970). Inkubacje przerywa sie przez dodanie 65 150 ul 1 n kwasu nadchlorowego* Radioaktywny81997 5 DNA przerabia sie w sposób opisany w powyzej cytowanych pracach stosujac jako nosnik 100 ^g DNA z przysadek cielecych. Aktywnosc endogennej RNA zaleznej DNA-polimerazy oznacza sie po do¬ daniu w trakcie próby 0,01% NP-40 do oczyszczo¬ nego wirusa w czasie analizy. Aktywnosc DNA- -polimerazy oczyszczonej wiralnej polimerazy mie¬ rzy sie wzgledem 2 ^g poli d(A-T) bez dodatku NP-40.Pochodne ryfamycyny rozpuszcza sie w dwumety- losulfotlenku (DMSO o stezeniu 5 mg/ml i prze¬ chowuje w temperaturze 4°C.Hamowanie aktywnosci endogennej DNA-polimera¬ zy RNA zaleznej oznacza sie dodajac do badanej mieszaniny 2 \il odpowiednio rozcienczonej w dwu- metylosulfotlenku pochodnej lub jako kontroli sa¬ mego dwumetylosulfotlenku przed dodaniem do rozbitego wirusa zawierajacego 15—30 [xg wiral- nych protein. Inkubacje enzymu prowadzi sie w czasie 60 minut w temperaturze 37°C. Hamo¬ wanie oczyszczonego enzymu oznacza sie na drodze preinkubacji 2 \il roztworu pochodnej lub dwume¬ tylosulfotlenku z 30 \il enzymu (1—2 [xg protein) w ciagu 10 minut w temperaturze 37°C, nastepnie dodaje sie 70 ul wyjsciowej mieszaniny i calosc inkubuje sie i przerabia w sposób opisany uprzed¬ nio.Na podstawie oznaczen opisanych w przykladach IV, V, VI, XIII, XIV i XVI zwiazków w stezeniach 2—100 iAg/ml lub mniej rozcienczonych, inkorpo¬ racja H3-dTTP mniejsza o 10% niz znaleziona w testach kontrolnych jasno obrazuje hamowanie mechanizmu karcinogenezy przez nowotworowe wi¬ rusy RNA zgodnie z ostatnimi wynikami badan biochemicznych.Efekt hamujacy rewertowanej transkryptazy po¬ twierdzono równiez przez test na polimerazie z wirusów szczurzej leukemii. RNA-polimeraze z wirusów szczurzej leukemii przygotowuje sie z Fritonux 100 w sposób opisany przez Galio i wspólpracowników w Nature, New Biology 232, 141, 1971. Wirus typu zarówno Rauschera jak Mo- loneya oczyszcza sie uprzednio na drodze wirowa¬ nia i oddzielenia frakcji cukrowej 1,16 g/ml gra¬ dientu stezen, po wstepnym niskoobrotowym wi¬ rowaniu w celu usuniecia szczatków komórkowych i przeprowadzenia 60% cukrozy przez 20% cukroze.Koncowe stezenie preparatów wirusowych wynosi 1011 czasteczek/ml. Jako standart w czasie stosuje sie endogenny 70 S RNA. Wykazano, ze stezenie 50 ng/ml lub mniejsze dziala w sposób hamujacy na aktywnosc enzymu.Na przyklad wytworzone wedlug przykladów V, VI i XIV zwiazki wykazuja dzialanie hamu¬ jace w 50% juz przy stezeniu wynoszacym 10—25 Hg/ml.Podobne rezultaty otrzymano stosujac polimerazy komórek nowotworowych pochodzenia ludzkiego.W tym przypadku, w celu wykazania dzialania selektywnego, wykonano oznaczenie dzialania ha¬ mujacego na polimerazach normalnych komórek.Niektóre sposród pochodnych ryfamycyn o wzorze ogólnym 1 opisano pod katem ich dzialania na dwie oczyszczone DNA-polimerazy wyodrebnione z: (1) normalnych ludzkich (PHA stymulowanych) 6 limfocytów krwi, (2) limfoblastów linii komórko¬ wej (otrzymanych z normalnych donorów) oraz 3 z ludzkich leukemicznych limfoblastów krwi.W badaniach stosowano syntetyczne i/albo natural- 5 ne wzorce. Typowy przyklad postepowania przed¬ stawiono ponizej.Leukemiczne limfoblasty izoluje sie z krwi ob¬ wodowej pacjentów chorych na ostra leukemie limfotyczna (ALL) na drodze leukoforezy. Komórki io myje sie i usuwa erytrocyty na drodze cofania hi- potonicznego. Normalne limfocyty otrzymane z krwi obwodowej zdrowych dawców stymuluje sie po usunieciu granulocytów na drodze chromatografii na kolumnach nylonowych fitchemagglutynina w (PHA) w czasie 72 godzin w celu zwiekszenia ak¬ tywnosci DNA-polimerazy (Galio i wspólpracowni¬ cy — Science 165, 400, 1968). Jednakze ze wzgledu na logistyczne problemy w uzyskaniu wystarczaja¬ cych ilosci tych komórek, w próbach wstepnych 20 uzywa sie „normalna" ludzka linie komórkowa ho¬ dowli tkankowych (1788) dostarczajaca gorzej oczyszczonych polimeraz DNA. Zwiazki bardziej interesujace bada sie dokladniej na lepiej oczysz¬ czonych enzymach z normalnych i leukemocznych 25 limfocytów krwi. Hodowle tkankowe otrzymano od Assotiatet Bimedic System, Inc.Komórkowe DNA-polimerazy ekstrahowane „ i oczyszczone otrzymuje sie z normalnych limfo¬ cytów (stymulowanych PHA) oraz leukemicznych 30 limfocytów krwi i limfoidalnych komórek 1788 na drodze homogenizacji w buforach hipotonicznych, a nastepnie w Tritonie X 100 i/albo na drodze solnej ekstrakcji frakcji ekstralyzomalnej. Po róz¬ nicowym wirowaniu ekstrakty komórkowe oczysz- 35 cza sie metoda chromatografii kolumnowej na DEAE celulozie, fosfocelulozie i sefadeksie G, 200.Oznaczanie DNA-polimerazy prowadzi sie w kon¬ cowej objetosci 100 \d testowanej mieszaniny za¬ wierajacej bufor Tris-HCl o wartosci pH 8,3 «o (50 mM); MgAc (6 mM), ditiotreitol 8,0 mM i NaCl (60 mM). Po dodaniu inhibitorów rozpuszczonych uprzednio w dwumetylosulfotlenku przeprowadza sie korekte pH. Koncowe stezenie dwumetylosulfo¬ tlenku powinno wynosic we wszystkich próbkach 45 kontrolnych 0,5%. W próbie tej stosuje sie steze¬ nie enzymu katalizujacego inkorporacje okolo 1,0 omola/godzine. W wiekszosci przypadków enzym preinkubuje sie w ciagu 5 minut z dodatkiem inhi¬ bitora, a nastepnie zapoczatkowuje sie reakcje do- 50 dajac wzorzec w postaci syntetycznego DNA (poli a/AT Miles Lab), jak tez hybrydy DNA. RNA/olige dT. poli rA, w stezeniu 5 pg/ml, lub tez wzorzec naturalny taki jak DNA z aktywowanego nasienia lososia w stezeniu 50 ng/ml i endogennego 70 S 55 wiralnego RNA, 10 /Ci ^H-metyloZ-TTP (New England Nuclear, 18,6 mCi [jimol, liofilizowanego i ponownie rozpuszczonego w 0,1 m HC1 bezpo¬ srednio przed uzyciem oraz dATP (^yiO-5 m z syn¬ tetycznym wzorcem) lub wszystkich trzech trój- 60 fosforanów dezoksynukleozydów (8X10~5 m z RNA lub DNA reakcji wzorcowej). W niektórych przy¬ padkach nie prowadzi sie preinkubacji i w tych eksperymentach inicjuje sie reakcje dodajac enzym mieszaniny zawierajacej juz inhibitor. Próbki po- $5 biera sie na poczatku procesu inkubacji i po cza-81997 7 8 sie 30 minut, a nastepnie przerywa sie eksperyment dodajac 2 ml 0,08 pirofosforanu sodowego. Produkt poddaje sie procesowi krystalizacji w zimnym 12,5% kwasie trójchlorooctowym stosujac jako no¬ snik 400 i*g slodowego RNA. Po odsaczeniu na miliporowatym filtrze, produkt przemywa sie dokladnie 5% kwasem trójfluorooctowym i 1 ml mieszaniny dwumetylosulfotlenku, etanolu i 0,1 m NaCl (0,5 :70 :29,5) suszy i oznacza w 2 ml BBS3 (Beckman) i 10 ml cieklego fluoru (New England Nuclear) na scyntylacyjnym liczniku cieczowym firmy Packard.W wybranych eksperymentach stezenia zwiazków z przykladów V, VI i XIV wynosily 5—10 ^g/ml i powodowaly 50% hamowanie polimerazy leuke- micznej wobec syntetycznego DNA. Reakcje stan¬ daryzowane syntetycznym wzorcem RNA (poly rA. rU) byly jeszcze czulsze. Typowe eksperymenty prowadzone z naturalnymi standartami na normal¬ nych lub nowotworowych polimerazach komórko¬ wych charakteryzuja sie wyzsza wrazliwoscia enzymatyczna wobec testowanych zwiazków.Nowe pochodne ryfamycyn hamuja tworzenie ognisk na mysich, szczurzych i ludzkich komór¬ kach przez szczepy Moloneya i Kirstena wirusa mysiej sarcomy, hamuja selektywnie produkcje wirusów przez juz transformowane mysie i ludz¬ kie komórki jak równiez sluza do wykrywania re- wertowanych komórek przy pomocy nieproduk¬ tywnego, transformowanego mysiego i szczurzego systemu komórkowego wirusa mysiej sarcomy.Zwiazki oksymowe wytworzone sposobem wedlug wynalazku wykazuja selektywna toksycznosc wo¬ bec transformowanych komórek pochodzacych od myszy, szczurów i ludzi w testach na zdolnosc tworzenia kolonii.Badania nad okresleniem efektywnosci zwiazków w hamowaniu tworzenia sie ognisk przez wirusa sarcomy Moloneya na kulturach tkankowych BALB/3T3 przeprowadza sie w nizej opisany spo¬ sób. Kultury komórkowe BALB/3T3 hoduje sie w 250 ml plastikowych naczyniach w pozywce wzrostowej skladajacej sie z pozywki Eagle'a i 10% bydlecej surowicy plodowej. Zliczanie wykonuje sie przy uzyciu licznika Coultera po zawieszeniu Jch w trypsynie — EDTA i rozcienczeniu pozywka wzrostowa. Jako homogenat nowotworowy uzywa sie wirusa Moloney'a mysiej sarcomy. Po cztero¬ krotnym pasazowaniu w szwajcarskiej wysokopa- sazowej linii komórek embrionalnych, oznacza sie ilosc jednostek tworzacych ogniska w komórkach BALB/3T3.W dalszych badaniach stosowano metode zmody¬ fikowana, przez Hartley'a i Rowe'a (Proc. Nat.Acad. Sci. USA 55, 780, 1966). Naczynia szczepi sie komórkami w ilosci 1—2X106 w 25 ml pozywki wzrostowej i inkubuje w temperaturze 37°C w cza¬ sie 24 godzin. Po usunieciu plynów, porcje wirusa z przewidziana uprzednio iloscia jednostek tworza¬ cych ogniska wprowadza sie do 0,5 ml pozywki wzrostowej i absorbuje jednowarstwowo komórki w ciagu 90 minut w temperaturze 37°C. Nastep¬ nie do badanej kultury dodaje sie zwykle 5—10 ^ig/ml pochodnej ryfamycyny (rozpuszczonej w dwu- metylosulfotlenku w stezeniu 1 mg/ml) w 25 ml pozywki wzrostowej i prowadzi sie dalsza inku¬ bacje. Jako próbe kontrolna dodaje sie do separo¬ wanej kultury sam dwumetylosulfotlenek w me¬ dium wzrostowym. Po trzech dniach inokulacji zmienia sie plyn, a ognisko transformowanych ko¬ mórek zlicza sie w dniu.Ta sama metoda bada sie wirusa serotypu New Jersey Vesicular stomatitis. Metody stosowane w hodowli i testowaniu tego wirusa zostaly opisane przez Hacketta i wspólpracowników w Virology 31, 114, 1967. Na podstawie przeprowadzonych ba¬ dan wykazano, ze zwiazki, których sposób wytwa¬ rzania jest przedmiotem wynalazku wykazuja dzia¬ lanie hamujace na wirusy wywolujace nowotwory u zwierzat.Sposób wytwarzania nowych 3-formyloryfamycyn wedlug wynalazku charakteryzuje sie tym, ze 3-for- myloryfamycyne SV, jej 25-dezacetylowa lub 16, 17, 18, 19, 28, 29-szesciowodorowa pochodna poddaje sie reakcji w rozpuszczalniku organicznym ze ste- chiometryczna iloscia O-podstawionej hydroksylo¬ aminy o wzorze ogólnym NH2-0-R w którym R ma znaczenie podane w dalszej czesci opisu.Mieszanine reakcyjna pozostawia sie w tempe¬ raturze pokojowej przez okres od 20 minut do kilku godzin i po odparowaniu rozpuszczalnika otrzymuje sie surowy produkt, który oczyszcza sie ogólnie znanymi metodami np. na drodze krysta¬ lizacji z nizszych alkoholi lub benzenu.Nowe zwiazki wytworzone wedlug wynalazku sa zwiazkami barwnymi, rozpuszczalnymi w wielu ogólnie dostepnych rozpuszczalnikach organicznych takich jak benzen, octan etylu, chloroform dioksan, czterohydrofuran itp.Ogólny sposób wytwarzania oksymów polega na nastepujacym postepowaniu. Do roztworu czterohy- drofuranowego 0,01 mola 3-formyloryfamycyny, jej 16, 17, 18, 19, 28, 29-szesciowodorowej pochodnej lub 25-dezacetylowej dodaje sie podczas mieszania w temperaturze pokojowej 0,01 mola O-podstawio¬ nej hydroksyloaminy. Po 20 minutach do trzech godzin przeprowadza sie analize chromatograficzna na plytce pokrytej zelem krzemionkowym i kon¬ troluje sie przebieg reakcji.Po stwierdzeniu calkowitego zaniku wyjsciowego zwiazku karbonylowego odparowuje sie z miesza¬ niny reakcyjnej rozpuszczalnik otrzymujac surowy produkt, który oczyszcza sie na drodze krystalizacji.W tablicy I podano wielkosci fizykochemiczne charakterystyczne dla zwiazków wytworzonych opisanym sposobem wedlug wynalazku. 10 15 20 19 30 35 40 45 5081997 9 10 Tablica 1 Przyklad nr l I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XIV XV XVI XVII XVIII XIX XX XXI XXII xixiii xxiv 1 xjxv XXVI Grupa 2 CH, C3H7 i-C3H7 C/.H9 C5HH Ofty C12H23 CoH19 CH2CH2OH CH(COOH)CH(CH3)2 CH(COOH)CH PL

Claims (4)

1. Zastrzezenie patentowe

2. Sposób wytwarzania O-podstawionych oksymów

3. -formyloryfamycyny SV o wzorze ogólnym 1, w 30 którym R oznacza grupe alkilowa o co najmniej 2 atomach wegla, grupe alkenylowa, alkinylowa, cykloalkilowa, alkoksyalkilowa, cykloalkoksyalkilo- wa, hydroksyalkilowa, karboksyalkilowa, karboal- koksyalkilowa, karbamyloalkilowa, cyjanbaflulowa, 35 nitroalkilowa, arylooksyalkilowa, aryloalkoksyalki- lowa, heterocyklooksyalkilowa, aminoalkilowa, gru¬ pe alkiloaminoalkilowa podstawiona.jedna lub dwie¬ ma nizszymi grupami alkilowymi, podstawiona grupe benzylowa, jedno lub wieloarylowa pod- 40 stawiona grupa alkilowa o 2—8 atomach weg¬ la, nizsza grupe alkilowa podstawiona 1—3 pier¬ scieniowa grupa heterocykliczna zawierajaca przy¬ najmniej jeden atom tlenu, azotu lub siarki, przy czym nie moze to byc grupa morfolinowa, a 45 Ri oznacza atom wodoru lub grupe acetylowa, ewentualnie w postaci 16, 17, 18, 19, 28, 29-szescio- wodorowej pochodnej tego oksymu 3-formyloryfa¬ mycyny SV, znamienny tym, ze 3-formyloryfamy- cyne SV, 25-dezacetylo-3-formyloryfamycyne SV, lub ich 16, 17, 18, 19, 28, 29-szesciowodorowe po¬ chodne poddaje sie reakcji z w przyblizeniu rów- nomolarna iloscia O-podstawionej hydroksyloaminy o wzorze ogólnym R-rONH2, w którym R posiada powyzej podane znaczenie.81997 Me Mt Me O tJtdri CH,CHaN Utóri Uiór3 ch,ch2n<3n-ch, ch2-c=ch2 C,H5 hlzór? CH3 CHS CH2(GH=C-CH2-CH2)-CH-C CH3 Uwr$ Cl Nar 4 Uzór5 CH,-< VCI Uzor 3 CH-C C3H7 A£ar 11 CH(CH2)

4. -CH3 C2H5 Uior 10 CH-CA I C2H5 tóór IZ CH, CH, CHrCH-C-CHrCHt-CH-C CH, Uzór 6 CH, /¦:-ó. PZG Bydg., zam. 424'76, nakt. 110- 20 Cena 10 zl PL PL