PL62548B1 - - Google Patents

Description

Opublikowano: 30.IIL1971 62548 KI. 30 h, 2/04 MKP A 61 k, 17/00 UKD Wspóltwórcy wynalazku: Jan Kruk, Halina Figurska, Helena Gawle, Je¬ rzy Gebski, Teresa Czarcinska Wlasciciel patentu: Tarchominskie Zaklady Farmaceutyczne „Polfa", Warszawa (Polska) Sposób otrzymywania czynnika Iipotropowego z trzustki poinsulinowej Przedmiotem wynalazku jest nowy sposób otrzymywania czynnika Iipotropowego z trzustki poinsulinowej.Czynnik lipotropowy znany jako lipocaic, lipo- caina, lipotropina jest fizjologicznym regulatorem przemiany tluszczowej w ustroju ludzkim i zwie¬ rzecym.Znane sposoby otrzymywania tego zwiazku zo¬ staly opisane przez Dragstedta i wsp. w Am.J. Physiol. t. 117, 175, (1936) oraz J. A. Molnara i wsp. z Acad. Rep. Populare Romine w Studii Cercetari Biochim 6 (3) 375—82, (1963), polegaja na ekstrakcji rozdrobnionej trzustki zakwaszo¬ nym alkoholem, a nastepnie jego odparowanie i odtluszczenie suchej pozostalosci, bedacej czynni¬ kiem lipotropowym.Znane sa tez sposoby polegajace na ekstrakcji swiezej trzustki zwierzecej za pomoca wody w srodowisku kwasnym jak np. sposób Entemana i in. opublikowany w J. biol. Chem. t. 155, 573, (1944) polegajacy na ekstrakcji trzustki rozcien¬ czonym kwasem solnym i wysalaniu substancji z ekstraktu przy uzyciu siarczanu amonowego.Sposób opisany przez N. Rukina — w Miasnaja Ind. ZSRR 36 Nr 6,38, (1965) polega na ekstrakcji wodnej trzustki przy wartosci pH = 3,5 — 4,0, a nastepnie frakcjonowanym wytracaniu z roz¬ tworu substancji czynnej alkoholem etylowym.Sposób Bosshardta i in. opisany w Amer. J.Physiol. 166, 433—5 (1951) polega na ekstrakcji 10 15 20 25 30 woda, wysuszonej i odtluszczonej trzustki poinsu¬ linowej. a nastepnie wytracaniu substancji czyn¬ nej z roztworów wodnych przy uzyciu acetonu.Znany jest równiez sposób opisany w opisie pa¬ tentowym nr 40872. Sposób ten polega na ekstrak¬ cji trzustki poinsulinowej za pomoca wody w tem¬ peraturze podwyzszonej, korzystnie w 70—100°C, w srodowisku obojetnym lub slabo alkalicznym uzyskanym w wyniku stosowania wodorotlenku sodowego, a nastepnie zageszczaniu ekstraktu, frakcjonowanym wytracaniu substancji czynnej za pomoca alkoholu, suszeniu i dalszemu oczyszcza¬ niu w wyniku zastosowania ekstrakcji kwasem octowym lodowatym, wytracaniu eterem etylowym, rozpuszczaniu w wodzie i ostatecznym wytracaniu etanolem.Sposób wedlug patentu 40872 jest uciazliwy i pracochlonny glównie z powodu stosowania nie¬ bezpiecznych rozpuszczalników organicznych do których zaliczyc nalezy eter, aceton i alkohol, jak równiez trudnego ich oddzielania przy niemozli¬ wosci regeneracji acetonu i eteru.Uzyskany w efekcie stosowania patentu 40872, produkt gotowy posiada niska jakosc, gdyz za¬ wiera okolo 50% popiolu oraz zaledwie 6% azotu organicznego, a proces technologiczny jest malo wydajny, gdyz zapewnia uzyskiwanie substancji z wydajnoscia 0,4—0,5%, w stosunku do uzytej Ikanki poinsulinowej.Mala efektywnosc omawianego sposobu wedlug 6254862548 patentu wynika z niekorzystnie dobranych wa¬ runków ekstrakcji, w czasie której, dla zobojetnia¬ nia zawartej w trzustce duzej ilosci kwasu fo¬ sforowego, wprowadza sie wodorotlenek sodowy tworzacy z kwasem fosforowym rozpuszczalne fo¬ sforany, a z kwasami tluszczowymi zawartymi w trzustce — mydla sodowe, przechodzace do eks¬ traktu i powodujace jego trwale zanieczyszczenie.Sposób wedlug wynalazku usjiwa omówione nie¬ dogodnosci. Poprawia zdecydowanie zarówno ja¬ kosc produktu jak i wydajnosc metody.W sposobie wedlug wynalazku do zobojetniania substratu zastosowano tlenek magnezowy uwal¬ niajacy ekstrakt od uciazliwych zanieczyszczen mi¬ neralnych i organicznych wskutek wiazania kwasu fosforowego w nierozpuszczalne fosforany, a kwa¬ sów tluszczowych w nierozpuszczalne mydla ma¬ gnezowe, dajace sie latwo oddzielic w czasie fil¬ tracji substratu.Jednoczesnie stwierdzono, ze zastosowanie wpro¬ cesie ekstrakcji trzustki powoduje lagodna hydro¬ lize zdenaturowanego bialka tkanki trzustki po¬ insulinowej, przyczyniajac sie do latwiejszego prze¬ chodzenia do ekstraktu czynnika lipotropowego i pewnej ilosci aminokwasów.Sposobem wedlug wynalazku otrzymuje sie go¬ towy produkt, z wydajnoscia 4—8%, w stosunku do ilosci wsadowej trzustki poinsulinowej, oraz o jakosci wyrazajacej sie zawartoscia popiolu oko¬ lo 10% i azotu organicznego powyzej 11%, majacy postac bialo-kremowego proszku.Istote wynalazku, w procesie otrzymywania czyn¬ nika lipotropowego, stanowi zastosowanie na eta¬ pie ekstrakcji, tlenku magnezowego w celu zo¬ bojetnienia substratu najkorzystniej do wartosci pH = 7,0—7,5 przy równoczesnym dodatku trzust¬ ki zwierzecej w ilosci 4—10% wagowych w sto¬ sunku do uzytej tkanki poinsulinowej.Proces wedlug wynalazku prowadzi sie najko¬ rzystniej w temperaturze 35—50°C w ciagu 2—8 godzin. Uzyskany w wyniku zageszczenia ekstrak¬ tu koncentrat, oczyszcza sie i suszy w suszarce, naj¬ korzystniej rozpylowej, lub wytraca 3—4 krotna objetoscia rozpuszczalnika organicznego, mieszaja¬ cego sie z woda, oziebionego do temperatury okolo 0°C odsacza, przemywa i suszy.Przyklad I. 50 kg trzustki poinsulinowej uwolnionej od alkoholu, laduje sie do reaktora z plaszczem grzejno chlodzacym i mieszadlem, do¬ daje 150 1 wody dejonizowanej i miesza w ciagu kilku minut.Nastepnie zobojetnia sie przygotowana zawie¬ sine dodatkiem okolo 1 kg tlenku magnezowego dla uzyskania wartosci pH = 7,0—7,5 po czym dodaje sie trzustke w ilosci 2 kg i ciagle miesza¬ jac, mieszanine podgrzewa sie do 40°C. W tych warunkach ekstrakcje prowadzi sie w czasie 2 go¬ dzin, a po jej zakonczeniu podgrzewa mieszanine do 50°C i nie korygujac wartosci pH przenosi do worków dla oddzielenia ekstraktów. Otrzymany przesacz zageszcza sie w prózniowych aparatach wyparnych, w temperaturze 30—40°C, do 1/5 obje¬ tosci poczatkowej.Uzyskany koncentrat z dodatkiem srodka kon¬ serwujacego lezakuje przez kilkanascie godzin w temperaturze okolo 0°C, po czym filtruje sie go przez ziemie okrzemkowa. Koncentrat koloru slom¬ kowego przenosi sie na suszarnie rozpylowa w celu uwolnienia substancji z roztworu przez od- 5 parowanie wody.Otrzymuje sie bialo-kremowy proszek o zawar¬ tosci okolo 10% popiolu, powyzej 11% azotu orga¬ nicznego, z wydajnoscia 2 kg z szarzy.Przyklad II. 50 kg trzustki poinsulinowej, 10 z której usunieto jak najwiecej alkoholu, laduje sie do reaktora z plaszczem grzejno-chlodzacym i mieszadlem, dodaje 200 1 wody dejonizowanej i miesza w ciagu kilku minut.Nastepnie zobojetnia sie przygotowana zawiesine 15 dodatkiem okolo 1 kg tlenku magnezowego dla uzyskania wartosci pH = 7,0—7,5, po czym do¬ daje sie trzustke zwierzeca w ilosci 5 kg i ciagle mieszajac, zawartosc podgrzewa sie do okolo 50°C.W tych warunkach ekstrakcje prowadzi sie w 20 ciagu okolo 8 godzin, a po jej zakonczeniu sub- strat przenosi sie do worków dla oddzielenia eks¬ traktu. Otrzymany przesacz zageszcza sie w próz¬ niowych aparatach wyparnych w temperaturze okolo 35°C do 1/10 objetosci poczatkowej. 25 Uzyskany koncentrat, z dodatkiem srodka kon¬ serwujacego, lezakuje przez kilkanascie godzin w temperaturze okolo 0°C, po czym filtruje sie go przez ziemie okrzemkowa.Do przesaczu dodaje sie wegla aktywnego typu 80 H-ekstra w ilosci uzaleznionej od suchej pozosta¬ losci w 1 ml koncentratu, w granicach 0.5—1,0 kg a w przypadku uzyskania nieklarownego roz¬ tworu podgrzewa sie. Po 2 godzinach zawiesine saczy sie przez azbest lub ziemie okrzemkowa. 35 Substancje zawarta w koncentracie wydziela sie przez suszenie na suszarce, najkorzystniej rozpy¬ lowej, lub wytracanie 4-krotna objetoscia 96° etanolu-metanolu lub acetonu schlodzonego do oko¬ lo 0°C. 40 Plyn znad osadu dekantuje sie a bialo-kre¬ mowy osad przemywa alkoholem, acetonem i su¬ szy. Otrzymuje sie bialo-kremowy proszek o za¬ wartosci okolo 10% popiolu, powyzej 11% azotu organicznego i z wydajnoscia 1—2 kg z szarzy. 45 PL

Claims (4)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymywania czynnika lipotropowego z trzustki poinsulinowej przez ekstrakcje trzustki woda w temperaturze podwyzszonej i w srodowis- 50 ku obojetnym lub slabo alkalicznym, a nastepnie zageszczenie, oczyszczenie i wysuszenie otrzyma¬ nego ekstraktu lub wytracenie z niego substancji czynnej, znamienny tym, ze w pierwszym etapie procesu mieszanine trzustki poinsulinowej z woda 55 alkalizuje sie tlenkiem magnezu, korzystnie do uzyskania wartosci pH = 7,0—7,5, po czym do uzyskanego substratu dodaje sie trzustke zwie¬ rzeca w ilosci 4—10% wagowych w stosunku do ilosci uzytej trzustki poinsulinowej. 6o
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze ekstrakcje prowadzi sie w temperaturze 35—50°C w ciagu 2—8 godzin.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2 znamienny tym, ze oczyszczony koncentrat wodny suszy sie w su- 65 szarce rozpylowej.62548 5 6
4. 4. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2 znamienny tym, temperatury okolo 0°C, po czym wytracony z roz- ze zageszczony ekstrakt po oczyszczeniu zalewa tworu czynnik lipotropowy odsacza sie, przemywa sie 3—4 krotna objetoscia rozpuszczalnika orga- i suszy. nicznego mieszajacego sie z woda, oziebionego do PL