PL53904B1 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: Opublikowano: 31.X.1967 53904 KI. 12 q, 6/01 MKP C07c Atil/fZ UKD ;i^:; Wspóltwórcy wynalazku: Emil Taszner, Barbara Rzeszotarska, Lucja Lubiewska Wlasciciel patentu: Tarchominskie Zaklady Farmaceutyczne „Polfa", Warszawa (Polska) Sposób wytwarzania estrów N-chronionych peptydów Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania estrów N-chronionych peptydów poprzez nowe estry aktywne N-chronionych aminokwasów lub peptydów.W znanym sposobie otrzymywania peptydów po¬ przez aktywne estry p-nitrofenylowe produkt kon¬ cowy, obok poszukiwanego N-chronionego estru peptydu, zawiera ester p-nitrofenylowy N-chronio- nego aminokwasu uzyty zwykle w nadmiarze, jak równiez p-nitrofenol, który powstal w reakcji. Z ta¬ kiej mieszaniny bardzo trudno jest oddzielic poszu¬ kiwany ester N-chronionego peptydu od estru p- -nitrofenylowego N-chronionego aminokwasu i p- -nitrofenolu, przez co zarówno czystosc jak i wy¬ dajnosc koncowego produktu sa malo zadawala¬ jace.Stwierdzono, ze niedogodnosci te mozna ominac, jezeli zamiast estrów p-nitrofenylowyeh zastosuje sie estry pirydylowe N-chronionych aminokwasów.Stosujac estry pirydylowe mozna latwo oddzielic ester N-chronionego peptydu od nieprzereagowane- go estru pirydylowego i powstalej w reakcji hy- droksypirydyny przez wymycie tych ostatnich kwa¬ sami.Wedlug wynalazku N-chronione aminokwasy lub peptydy przeprowadza sie w estry pirydylowe przez aktywowanie ich grupy karboksylowej np. za po¬ moca dwucykloheksylokarbodwuimidu lub za po¬ moca mieszanych bezwodników i nastepne sprze¬ ganie z hydroksypirydyna. Estry takie, w literatu- 10 15 25 30 2 rze nieznane, sprzega sie z estrami aminokwasów lub peptydów w srodowisku rozpuszczalników or¬ ganicznych lub wodno-organicznych ewentualnie w obecnosci katalizatorów takich, jak kwasy orga¬ niczne np. kwas octowy lub katalizatorów bifunk- cjonalnych jak np. pirazol, przyspieszajacych ami- nolize. Otrzymuje sie estry N-chronionych pepty¬ dów z duza wydajnoscia i o wysokiej czystosci.Sposobem wedlug wynalazku N-chroniony ami¬ nokwas lub peptyd i 3-hydroksypirydyne rozpusz¬ cza sie w rozpuszczalniku organicznym, chlodzi do temperatury (K? i dodaje ekwimolarna ilosc dwu¬ cykloheksylokarbodwuimidu. Reakcje prowadzi sie w ciagu okolo pól godziny w temperaturze 0°C i w ciagu kilku godzin w temperaturze pokojowej, po czym odsacza sie dwucykloheksylomocznik, a prze¬ sacz przemywa nasyconym roztworem kwasnego weglanu sodu i kilkakrotnie woda. Po wysuszeniu, i odparowaniu rozpuszczalnika pod zmniejszonym cisnieniem! pozostaje ester w postaci oleju.Sposobem wedlug wynalazku omawiane estry mozna równiez otrzymac przez rozpuszczenie N- -chronionego aminokwasu lub peptydu w rozpusz¬ czalniku organicznym, oziebienie do temperatury —18°C i zadanie ekwimolarna iloscia trzeciorzedo¬ wej aminy i ekwimolarna iloscia chloromrówczanu etylu lub tlenochlorku fosforu. W tym ostatnim przypadku dodaje sie jeszcze 1 mol trzeciorzedo¬ wej aminy. Po 20 minutach dodaje sie 3-hydroksy¬ pirydyne i calosc pozostawia w lodówce na kilka- 53 904\ 53 904 nascie godzin, przy czym otrzymuje sie ester z dob¬ ra wydajnoscia.Otrzymane sposobem wedlug wynalazku estry 3-pirydylowe N-chronionych aminokwasów lub peptydów rozpuszcza sie w octanie etylu lub in¬ nym rozpuszczalniku organicznym lub organiczno- -wodnym, zadaje solami lub estrami aminokwasów lub peptydów i pozostawia, ewentualnie w obec¬ nosci katalizatorów, w temperaturze pokojowej na przeciag okolo 20 godzin. Po zakonczeniu reakcji produkt wymywa sie woda, In kwasem solnym, na¬ syconym roztworem kwasnego weglanu sodu i na- 10 stepnie kilkakrotnie woda. Po wysuszeniu srodkiem suszacym rozpuszczalnik odpedza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem. Otrzymuje sie krystaliczny peptyd, którego temperatura topnienia juz po jed¬ nej krystalizacji jest zgodna z danymi literaturo¬ wymi.Ponizej podane tablice ilustruja sposób wedlug wynalazku przy czym tablica 1 ilustruje sposób wytwarzania aktywnych estrów 3-pirydylowych N- -chronionych aminokwasów lub peptydów, a tabli¬ ca 2 ich nastepna aminolize estrami aminokwasów lub peptydów.Tablica 1 Estry N-chronionych aminokwasów lub peptydów z 3-hydroksypirydyna Lp 1 2 3 4 5 6 7 Hydroksy-zwi -:_zek 3-hydroksypirydyna a a a a a a a a jj a a a N-chronlony aminokwas lub peptyd Z-Gly-OH Z-DL-Phe-OH 99 Z-L-Ala-OH For-L-Phe-OH Z-Gly-DL-Phe-OH Z-DL-Leu-Gly-OH Metody otrzymywania estru DCCI a CICOOEt DCCI '•¦ ».« " Wydajnosc % 76 98 67 94 92 87 75 N obliczono % 9,79 7,43 7,43 9,33 10,36 9,66 10,51 N znaleziono % 9,48 9,78 7,55 7,75 7,30 7,37 9,30 9,65 10,65 10,70 9,57 9,65 10,10 10,45 Tablica 2 Sprzeganie (Aminoliza) aktywnych estrów 3-pirydylowych N-chronionych aminokwasów lub peptydów z estrami aminokwasów lub peptydów Lp. 1 2 3 4 5 6 7 8 Ester aktywny Z-Gly-3-CPy Z-L-Ala-3-OPy Z-DL-Phe-3-OPy For-L-Phe-3-OPy Z-Gly-Dl-Phe-3-OPy Z-DL-Leu-Gly-3-OPy Z-L-Phe-3-OPy Z-L-Ala-3-OPy Ester aminokwasu lub peptydu HCI..DL-Phe-GEt HCI .Gly-OEt HCI.Gly-OEt L-Phe-OBut HCI .Gly-OEt HCI .Gly-OEt HCI X-Phe-OET TosOH.L-Glu(OBz)2 Otrzymane peptydy Z-Gly-Phe-OEt Z-L-Ala-Gly-OEt Z-DL-Phe-Gly-OEt For-L-Phe-Phe-OBut Z-Gly-DL^Phe-Gly-CEt Z-DL-Leu-Gly-Gly-OEt Z-L-Phe-Phe-OEt Z-L-Ala-Glu(OBz)2 Wydajnosc peptydu % 80 88 87 45 50 73 97 96 Temperatura topnienia otrzymana °C 90 94,5—96 104,5—107,5 122—123 130,5 101 136-137 99—100 literaturowa °C 92 97,5—98 109 *) 132—134 102 140 104—105 *)analiza dla wzoru: C23H28O4N2 Wyjasnienie uzywanych w tablicach symboli: Z — oslona karbobenzoksy For — oslona formyIowa OET — ester etylowy OBut — ester trzeciorzedowy butylowy OBz — ester benzylowy 3-OPy — ester 3-pirydylowy Ala — reszta alaniny N obliczono N znaleziono 15 20 Glu Gly Leu Phe DCCI 7,C3Vo 7,03'% 7,15o/0 — — — — — CICOOEt — DL Tos — — reszta kwasu glutaminowego reszta glicyny reszta leucyny reszta fenyloalaniny dwucykloheksylokatfbodwuimid chloromrówczan etylu racemiczny tosyl53 904 Przyklad I. 1,12 g (5 miM) karbobenzoksy- -alaniny rozpuszcza sie w 10 ml octanu etylu doda¬ je 523 mg (5,5 mM) 3-hydroksypirydyny, chlodzi do temperatury (fC dodaje 1,03 g (5mM) dwucyklohek- sylokarbodwuimidu. Mieszanine reakcyjna utrzy¬ muje sie w ciagu pól godziny w temperaturze O^C i 17 godzin w temperaturze pokojowej. Po tym okresie dodaje sie pare kropel kwasu octowego i po paru minutach odsacza osad dwucykloheksylomocz- nika. Przesacz poddaje sie czesciowemu odparowa¬ niu pod zmniejszonym cisnieniem, dodaje octanu etylu i wymywa schlodzonym do temperatury 0D nasyconym roztworem kwasnego weglanu sodu i woda. Po wysuszeniu za pomoca bezwodnego siar¬ czanu sodu i odpedzeniu pod zmniejszonym cisnie¬ niem otrzymuje sie 94% estru w postaci oleju.Analiza zwiazku o wzorze: Ci6H1804N2: N obliczono 9,33% N znaleziono 9,30% 9,65°/« 7i50 mg (2,5 mM) uzyskanego estru 3^pirydylowe- go karbobenzoksyalaniny rozpuszcza sie w 5 ml octanu etylu, dodaje 382 mg (2,75 mM) chlorowo¬ dorku estru etylowego glicyny oraz 0,382 ml (2,75 mM) trójetyloaminy. Po 24 godzinach miesza¬ nine reakcyjna przemywa sie woda, In kwasem solnym, nasyconym roztworem kwasnego weglanu sodu i woda. Po wysuszeniu za pomoca siarczanu magnezu octan etylu odparowuje sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem. Otrzymuje sie 680 mg (88°/o) estru etylowego karbobenzoksyalanilo-glicyny.Temperatura topnienia surowego fcwiazku wyno¬ si $4,5—96°C. (Temperatura topnienia zwiazku we¬ dlug danych literaturowych wynosi 97,5—98°C Przyklad II. 900 mg (3 mM) Karbobenzoksy- jrfenyloalaniny rozpuszcza sie w 6 ml czterohydro- furanu, dodaje 0,42 ml (3 mM) trójetyloaminy, chlodzi sie do temperatury —18"C i dodaje 0,285 ml (3 mM) chloromrówczanu etylu. Po dwu¬ dziestu minutach dodaje sie 315 mg (3,3 mM) 3- -hydroksy-pirydyny i pozostawia przez noc w lo¬ dówce. Po odparowaniu czterohydrofuranu dodaje sie octanu etylu i przerabia jak w przykladzie I.Otrzymuje sie 67% estru w postaci oleju.Analiza zwiazku o wzorze C^H^,^^: N obliczono 7,43% N znaleziono 7,37% 7,300/0 940 mg (2,5 mM) estru 3-pirydylowego karbobenzo- ksyfenyloalaniny rozpuszcza sie w 5 ml octanu ety¬ lu, dodaje 362 mg (2,75 mM) chlorowodorku estru etylowego glicyny oraz 0,382 ml (2,75 mM) trójety¬ loaminy.Po 24 godzinach mieszanine reakcyjna przemywa sie woda, 1 n kwasem solnym, nasyconym roztwo¬ rem kwasnego weglanu sodu i woda. Po wysusze¬ niu za pomoca siarczanu magnezu octan etylu od¬ parowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem, a po¬ zostalosc krystalizuje z mieszaniny octan etylu/pet- rol. Otrzymuje sie 840 mg (87%) estru etylowego 5 karlboibenzoksy — fenyloalanylogiicyny o tempera¬ turze topnienia 104,5—107,5°C. (Temperatura topnie¬ nia zwiazku wedlug danych literaturowych 109f0C).Przyklad III. 356 mg (ImM) karbobenzoksy- -glicylo-fenyloalaniny rozpuszcza sie w 2 ml octanu io etylu, dodaje sie 105 mg (1,1 mM) 3-hydroksypiry- dyny, chlodzi do temperatury 0°C, i dodaje 206 mg (ImM) dwucykloheksylokarbodwuimidu. Mie¬ szanine reakcyjna utrzymuje sie w ciagu pól go¬ dziny w temperaturze 0°C, 17 godzin w tempera- 15 turze pokojowej i przerabia jak w przykladzie I.Otrzymuje sie 95% estru w postaci oleju.Analiza zwiazku o wzorze C^H^gNj N obliczono 9,66% N znaleziono 9,30% 20 9,55% 207 mg (0^5 mM) estru 3^pirydylowego karboben- zoksy-glicylofenyloalaniny rozpuszcza sie w 1 ml octanu etylu, dodaje 76 mg (0,55 mM) chlorowo¬ dorku estru etylowego glicyny i 0,077 ml (0,55 mM) 25 trójetyloaminy oraz 34 mg (0,5 mM) pirazolu.Po 20 godzinach reakcji w temperaturze pokojo¬ wej mieszanine poreakcyjna przemywa sie woda. 1 n kwasem solnym, nasyconym roztworem kwas¬ nego weglanu sodu i woda. Po wysuszeniu za po¬ moca siarczanu magnezu, octan etylu odparowuje 30 sie, a pozostalosc krystalizuje z mieszaniny octan etylu/petrol. Otrzymuje sie 166 mg trójpeptydu o temperaturze topnienia 130,5°C (temperatura top¬ nienia zwiazku wedlug danych literaturowych 132—134^C. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania estrów N-chronionych pep- 40 tydów poprzez estry aktywne N-chronionych ami¬ nokwasów lub peptydów, znamienny tym, ze N- -chronione aminokwasy lub peptydy przeprowadza sie w estry pirydylowe przez aktywowanie ich grupy karboksylowej np. za pomoca dwucyklohek- 45 sylokarbodwuimidu lub przez przeprowadzenie ich grupy karboksylowej w bezwodniki mieszane i na¬ stepne sprzeganie z hydroksypirydyna w srodowi¬ sku rozpuszczalnika organicznego, po czym otrzy¬ mane estry pirydylowe N-chronionych aminokwa- ^ sów lub peptydów poddaje sie w srodowisku roz¬ puszczalnika organicznego lub organiczno-wodnego reakcji z solami lub estrami aminokwasów lub peptydów, ewentualnie w obecnosci katalizatorów przyspieszajacych aminolize, a otrzymany produkt 55 po przemyciu poddaje krystalizacji. PL