PL51049B1 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: Opublikowano 24.VII.1964(P105 300) 30.VI.1966 51049 KI. 53 g, 3/01 MKP A23k UKD *\lb Wspóltwórcy wynalazku i Roman Majchrzak, Warszawa (Polska), Zygmunt wlasciciele patentu: Nawrocki, Warszawa (Polska), Bozena Roczniak, Olsztyn (Polska) Sposób otrzymywania pasz o wysokiej zawartosci witaminy B12 Podstawa otrzymywania krystalicznej witaminy B12 dla celów farmaceutycznych wzglednie jej kon¬ centratów paszowych sa kierowane procesy biosyn¬ tezy. Procesy te polegaja na hodowli aktywnych mikroorganizmów, przy czym bardzo waznym za¬ gadnieniem jest uzyskanie mozliwie wysokich ste¬ zen witaminy B12 w nagromadzonych kulturach, co osiaga sie przez odjpowiedni dobór pozywek pro¬ dukcyjnych, mikroorganizmów i warunków ho¬ dowli.Znane sposoby produkcji witaminy B12 polegaja na wykorzystaniu wywaru melasowego lub zbozo¬ wego przy uzyciu do biosyntezy Bacillus megathe- rium lub Streptomyces olivaceus.Poza wywarem z gorzelni proponuje sie jako po¬ zywki wywary po kwasie cytrynowym, glukono- wym i itakonowym, które zadaje sie lizatami od¬ padowej grzybni po fermentacji cytrynowej lub po antybiotykach i po uzupelnieniu srodowiska sze¬ regiem zwiazków organicznych i nieorganicznych fermentuje sie calosc bakteriami propionowymi.Jeszcze inny sposób biosyntezy witaminy B12 po¬ lega na prowadzeniu procesu w warunkach bez¬ tlenowych przy uzyciu termofilnych bakterii me¬ tanowych.Wada wymienionych sposobów sa niskie wydaj¬ nosci witamin Bu wynoszace 3—5 mg/litr, (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2.816.568), a wyjatkowo 8—10 mg/litr, (opis paten¬ towy nr 42.378) stosowanie czesto drobnoustrojów 10 15 20 25 tlenowych, zlozony cykl produkcyjny, kosztowna aparatura. Wysokie wydajnosci do 10 mg/litr otrzy¬ mano w hodowlach bakterii propionowych przy uzyciu drogich surowców i stosowaniu dlugiego, 20 dniowego okresu fermentacji.Sposób wedlug wynalazku pozwala na otrzyma¬ nie znacznie wyzszych wydajnosci witaminy B^ wynoszacych 20—30 mg/litr lub 1,5 mg/g suchej masy przez zastosowanie odpowiedniej pozywki za¬ wierajacej wywar ziemniaczany, przez dobór mi¬ kroorganizmów i warunków fermentacji. Wedlug wynalazku fermentacje mozna prowadzic sposobem periodycznym (6—7 dni) lub pólciaglym (2—3 dni) lub ciaglym.Cykl produkcyjny prowadzony wedlug tego spo¬ sobu jest krótki, prosty, moze byc prowadzony w warunkach niesterylnych, nie wymaga inwestycji, a jedynie niewielkich adaptacji w gorzelniach rol¬ niczych. W rezultacie procesu z wywaru ziemnia¬ czanego, który jest pasza nietrwala o niskiej za¬ wartosci suchej masy i azotu, oraz bez witaminy B12, otrzymuje sie „uszlachetniony wywar", który stanowi pasze trwala, o dwukrotnie zwiekszonej zawartosci suchej masy i róznych formach zwia¬ zanego azotu, oraz o wysokiej zawartosci witami¬ ny B12 (20—30 mg/l).Podstawowa pozywke stanowi ziemniaczany wy¬ war gorzelniczy uzupelniony tanimi skladnikami pokarmowymi jak mleczan amonu, glikoza, melasa, kielki slodowe lub zarodki zbozowe wzglednie ich 510493 51049 4 wyciagi oraz sole kobaltu. Do biosyntezy zastoso¬ wano bakterie propionowe z gatunku Propionib. freudenreichii, Propionib. petersonii, Propionib. shermamii lub mieszanine tych gatunków, przy czym sklad pozywki i warunki hodowli zostaly ustalone w oparciu o fizjologie tych organizmów, szczególnie zdolnosc wykorzystywania mleczanów i azotu amonowego. Ustalony sklad pozywki zapew¬ nia bujny wzrost bakterii propionowych (ponad 70 miliardów komórek w mililitrze) i wysoka wy¬ dajnosc biosyntezy (20—30 mg korynoidów na litr).Poza pozywka i mikroorganizmami istotnym ele¬ mentem sposobu sa warunki fermentacji. Ponie¬ waz wzrost bakterii propionowych zostaje hamo¬ wany w kwasnym srodowisku, dlatego sposób we¬ dlug wynalazku uwzglednia stale lub periodyczne zobojetnianie pozywki dla utrzymania pH w gra¬ nicach 6,5^7,4. Do neutralizacji stosuje sie amo¬ niak, wode amoniakalna, weglan amonu lub mocz¬ nik. Ten sposób zobojetniania srodowiska oparty o fizjologie bakterii propionowych pozwala na do¬ datkowe wzbogacenie wywaru w rózne formy zwia¬ zanego azotu.Koncowy produkt tak kierowanej fermentacji moze byc wykorzystany bezposrednio w zywieniu zwierzat jalko pasza o duzej zawartosci witaminy B12 i azotu lub jako dodatek do pasz wprowadza¬ ny w ilosci 1—3 litrów na 1 tone paszy lub odwi¬ rowuje sie mase bakteryjna, która stanowic moze po wysuszeniu pólprodukt do otrzymania czystej, krystalicznej witaminy B12 lub jej koncentratów dla celów farmaceutycznych, lub stanowic moze su¬ rowy preparat witaminy B12 dla celów paszo¬ wych o zawartosci 1—1,5 mg witaminy B12 na 1 g suchej masy bakterii, a pozostalosc wykorzystuje sie jako cenna pasze o wysokiej zawartosci azotu i zwiekszonej ilosci witaminy B12 w stosunku do wywaru dotychczasowego, nie uszlachetnionego.Wywarem uszlachetnionym bedzie zarówno wywar z zawiesina bakterii propionowych, jak i przesacz po ich odwirowaniu.Stosowanie sposobu wedlug wynalazku w gorzel¬ niach rolniczych daje jako produkt uboczny wywar uszlachetniony o zwiekszonej trwalosci, wysokiej zawartosci witaminy B12 i zwiazanego azotu.Stosowanie w zywieniu zwierzat „uszlachetnione¬ go wywaru", produkowanego wedlug wynalazku, daje wiec mozliwosc szybkiego i taniego podnie¬ sienia produktywnosci i zdrowotnosci zwierzat uzytkowych.Przyklad: Na 1 litr wywaru ziemniaczanego dodaje sie 12 g mleczanu amonu, 14 g melasu, 50 g glikozy, 100 ml 10-cio procentowego wyciagu z kielków slodowych i 15 mg CuS04-7H20. Po wyjalowieniu pozywke szczepi sie swieza hodowla Propionibacterium petersonii w ilosci 50 ml kultu¬ ry macierzystej. Fermentacje prowadzi sie w tem¬ peraturze 28° w ciagu 6 dni, utrzymujac wartosc pH w granicach 6,5—7,4 za pomoca jalowego roz¬ tworu weglanu amonu. Na 24 godziny przed kon¬ cem fermentacji dodaje sie 5 mg 5,6Hdwumetylo- benzymidazolu, celem przeksztalcenia analogów w witamine B12. Ta droga otrzymuje sie w 1 litrze pozywki do 20 mg korynoidów oznaczanych meto¬ da E.coli, zawierajacych okolo 75% witaminy B12 oznaczanej metoda Ochromonas mahlamensis. 1 litr przefermentowanej pozywki zawiera ponad 8,5 g suchej masy komórkowej.Na opisanej pozywce mozna skrócic czas fermen¬ tacji i zwiekszyc wydajnosc stosujac hodowle pól- ciagla. W tym celu w odstepach 2 lub 3-dniowych odbiera sie polowe przefermentowanej pozywki do dalszego wykorzystania, a pozostala polowe uzu¬ pelnia sie brakujacymi skladnikami. Tak prowa¬ dzony proces umozliwia prowadzenie fermentacji w warunkach niesterylnych, skrócenie czasu pro¬ dukcji do 2—3 dni i zwiekszenie wydajnosci do 30 mg korynoidów w 1 litrze co daje przeszlo 20 mg czystej witaminy B12. PL

Claims (2)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymywania pasz o wysokiej zawarto¬ sci witaminy B12 wytwarzanej przez bakterie propionowe P. petersonii lub P. freudenreichii lub P. shermanii lub ich mieszaniny w proce¬ sie fermentacji, znamienny tym, ze proces fer¬ mentacji prowadzi sie na pozywce zawierajacej wywar ziemniaczany uzupelniony mleczanem amonu, melasem, glikoza oraz kielkami slodo¬ wymi lub zarodkami zbozowymi lub ich wy¬ ciagami.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze do srodowiska w procesie fermentacji wpro¬ wadza sie ciagle lub okresowo amoniak, wode amoniakalna, weglan amonu lub mocznik w celu utrzymania wartosci pH w granicach 6,5—7,4. 10 15 20 25 30 35 40 ZG „Ruch" W-wa, zam. 71-66, naklad 240 egz. PL