PL46291B1 - - Google Patents

Description

Stwierdzono, ze w celu otrzymania dotych¬ czas nieznanego polipeptydu o wzorze 1 o dzia¬ laniu zwezajacym naczynia pochodna nonapep- tydu o wzorze 2, w którym R i R' oznaczaja grupy wprowadzone dla ochrony grup mer- kapto, a R" i R'" grupy wprowadzone dla ochrony grupy aminowej, przeksztalca sie przez redukcje metalem alkalicznym w cieklym amo¬ niaku w pochodna nonapeptydu o wzorze 3 i ten liniowy nonapeptyd przeprowadza sie przez utlenienie w wodnym roztworze w pro¬ dukt koncowy, o wzorze 1.Stwierdzono, ze zwiazek o wzorze 1 posiada równie silne dzialanie zwezajace naczynia jak naturalna wazopressyna (wzór 4), która tym odróznia sie od wyzej podanego wzoru 1, z-3 zamiast fenyloalaniny wbudowana jest tyrozyna.Nie przewidziano jednak, ze dzialanie prze- ciwmoczopedne zwiazku o wzorze 1 wynosi tyl¬ ko mniej wiecej 1/3 dzialania zwiazku o wzo¬ rze 4. Równiez dzialanie uterotoniczne zwiaz¬ ku o wzorze 1 wynosi tylko 2% slabego juz dzialania uterotonicznego wazopressyny.Zwiazek o wzorze 1 odróznia sie wiec od wa¬ zopressyny specyficznym dzialaniem zwezaja¬ cym naczynia. Te nieoczekiwane wlasciwosci zwiazku o wzorze 1 przedstawiaja znaczna ko¬ rzysc przy zwalczaniu szoków dla osiagniecia lo¬ kalnego niedokrwienia przy operacjach, szczegól¬ nie w ginekologii przy operacjach waginalnych, w otorinolaryngologii przy wycinaniu migda¬ lów i operacjach ucha, wycinaniu wola i ciez¬ szych krwawiacych operacjach urologicznych, jak równiez w dentystyce jako dodatek do srodków znieczulajacych lokalnie. Zwiazek o wzorze 1 wykazuje w stosunku do adrenaliny szczególne korzysci. (Podczas, gdy adrenalina powoduje z reguly znaczne podwyzszenie cis* nienia krwi i tetna zjawisko to nie wystepuje przy stosowaniu zwiazku o wzorze 1, przy co najmniej takim gamym lokalnym niedokrwie¬ niu.- Sposób wedlug wynalazku mozna przepro¬ wadzic nastepujaco: Azydek N-karbobenzoksy- L-glutarninylo^L-asparaginylo-S-benzylo - L-cy- steinylu [Bodssonnas i wspólpracownicy, Helv, chim. Acta 38 1491 (1955)] o wzorze 5 konden- suje sie z amidem L^prclilo-s-N-p-toluenosul- fonylo-L-lizyloglicyny o wzorze 6, który otrzy¬ muje sie przez odszczepienie grupy karbobenzo- ksylowej od amidu N^karbobenzolksy-L-pirolilo- e-N-p-toluenosulfonylo-L-lizyloglicyny [du Vig- neud i wspólpracownicy J. amer. chem. Soc. 78 5884 (1956)]. Otrzymamy heksapeptyd o wzorze 7 po odszczepieniu grupy karbobenzoksylowej kondensuje sie z azydkiem N-karbobenzoksy-S- benzylo-L-cysteinylo-L-fenyloalaniloi-L-fenyloala^ nilu o wzorze 8. Ten ostatni otrzymuje sie zna¬ na metoda przez kondensacje N-karbobenzoksy- S-benzylc^L-cysteinylo-L-fenyloalaniny [(Jaque- noud i Boissonnas, Helv. Chim. Acta 42 788 (1959)] z estrem metylowym L-fenyloalaniny *. nastepnie przeprowadzenie w azydek. Powstaly nonapeptyd o wzorze 2 traktuje sie metalem alkalicznym, przede wszysitkim sodem lub por tasem w cieklym amoniaku tak, ze tworzy sie liniowy nonapeptyd o wzorze 3. Ten przez utle¬ nienie najczesciej powietrzem, tlenem lub nad¬ tlenkiem wodoru w wodnym roztworze, prze¬ prowadza sie w biologicznie czynny polipeptyd o wzorze 1.Przyklad I. Amid N-karbobenzoksy-L- glutaminylo-L-asparaginylo^S-benzylo - Lrcystei- nylo-L-prolilo - e - N^p-toluenosulfonylo-L-lizy- loglicyny. 200 g amidu N-karbobenzoksy-L-prolilo-e-N-p- tolueno-sulfonylo-L-lizyloglicyny [du Yigneaud i. wspólprac, J. Amer. chem. Soc. 78 5884 (1956)] rozpuszcza sie w 1000 ml nasyconego bromo- wodorem bezwodnego kwasu octowego, pozo¬ stawia na 1 godzine w temperaturze 20°C i od¬ parowuje w prózni w temperaturze ponize 40°C. Pozostalosc starannie przemywa sie ete¬ rem dwuetylcwym po czym dodaje do roztworu 185 g azydku N-karbobenzoksy-L-glutaminylo- L-asparaginylo-S-benzylo-cy steinylu [Botissom- nas i wspólprac, Helv. chim. Acta 38 1491 (1955)] i 48 ml trójetyloaminy w 1500 ml dwu- rnetylofórmapmidu. iCalosc pozostawia sie na noc w temperaturze 20°C, a nastepnie mie¬ szanine wlewa do dwóch objetosci acetonu.Wytracony osad odsacza sie, przemywa woda f przekrystalizowuje z mieszaniny dwumetylo- formamidu i acekinu. Otrzymuje sie 190 £ N-karbobenzoksy^L-gllutaminylo-L-asparaginyiói- S-benzylo-L-cysiteinylo L-prolilo-e-N-p-tolueno- sulfonylo-L-lizylcglicyny. Temperatura topnic- 21 nia 165°C (rozklad) [a] — = —38° (c = 2, dwu- metyloformamid). b) Azydek N-karbobenzoksy-S-benzylo-L-cyste- inylio-L-fenyloaalnilo-L-fenyloalanilu.Do mieszaniny 111 g N-karbcbenzoksy-S-ben- zylo-L-fenyloalaniny [Jaauenoud i Boissonnas, Helv. Chim. Acta 42 788 (1959)]54 g chlorowo- dzianu estru metylowego L-fenyloalaniny i 35 ml trójetyloaminy w 1250 ml acetcnitrylu i 1000 ml pirydyny dodaje sie 57 g dwucykloheksylo- karbodwuimidu i-pozostawia na noc w tempe¬ raturze 20°C. Mieszanine reakcyjna przesacza sie i* przesacz odparowuje nastepnie w prózni.Pozostalosc przemywa isie eterem naftowym i przekrystalizowuje z goracego metanolu.Otrzymuje sie 110 g estru metylowego N-kar- bobenzoksy - S - benzylo-L-cysteinylo-L-fenylo- alanilo-L-fenyloalaniny (temperatura topnienia 163°C), który ogrzewa sie w ciagu 2 godzin w temperaturze 60°C w roztworze 3500 ml me¬ tanolu i 88 ml wodzianu hydrazyny. Osad od¬ sacza sie i starannie przemywa woda i meta¬ nolem. Otrzymuje sie 91 g nydrazydu N-karbo- benzoksy -S- benzylo - L -cysteinylo -L-feny¬ loalanilo -L-fenyloalanilu (temperatura topnie¬ nia 210°), który rozpuszcza sie w mieszaninie 1100 ml dwumetyloformamidu, 830 ml izopro- panolu i 69 ml 12-n wodnego roztworu kwasu solnego. Ochlodzony roztwór traktuje sie 30 ml 5-in roztworu azotynu sodowego i po 10 mi¬ nutach 4300 ml 0,2-n wodnego roztworu wegla¬ nu sodowego. Osad odsacza sie, przemywa wo¬ da i szybko suszy w prózni. Otrzymuje sie 90 g azydku, który przerabia sie natychmiast dalej, c} .. Amid N-karbobenzoksy -S-benzylo -L-cy- sleinylo -L-fenyloalanilo -L-fenyloalanilo -L- g Lutarninylo -L-asparaginylo -S-benzylo -L-cy- steinylo-L-iprolilo-e- NHp-toluenosulfonylo -L-li- » zyloglicyny. 50 g amidu N-karbobenzoiksy-L-glutaminylo- L-asparaginy -10 ^S-benzylo -L-cysteinylo -L- prolilo - e - N-p-toluenosulfonylo-L-lisyloglicy- ny rozpuszcza sie w 400 ml nasyconego bromo- wodorem bezwodnego kwasu octowego i pozo¬ stawia w ciagu 1 godziny w temperaturze 20°C.Po odparowaniu rozpuszczalnika w prózni w temperaturze ponizej 40°C pozostalosc przemy¬ wa sie starannie eterem dwuetylowym i trak¬ tuje roztworem 32 g azydku N-karbobenzóiksy- S-benzylo-L-cysteiriylo -L-fenyloalanilo -L-feny-loalanilu i 70 ml trójetyloaminy w 500 ml dwu- metyloformamidu. Calosc pozastawia sie na dwie doby w temperaturze 20°C, po czym zadaje sie dwiema objetosciami octanu etylu i przemywa starannie osad goracym metanolem. Otrzymu¬ je siie 45 g amidu N^karbobenzoksy -S-benzylo- Lrcysteinylo - L-fenyloalanilo - L-fenyloalanilo- L-glutaminylo -L-asparaginylo -S-benzylo -L- cysteinylo-L-prolilo - e - N-p-toluenosulfonylo- L-lizyloglicyny. Temperatura topnienia 222 21 °C [a]—=-50° (c = 1; dwumetyloiormamid).Obliczono dla C75 H91 Oi5 Nu S3 C 59,6% H 6,10/0 O 15,9% N 12,1% S 6,4o/0 Znaleziono C 59,4% H 6,4o/0 O 16,00/0 N ll,70/0 S 6,50/0 d) Amid L-cysteinylo -L-fenyloalanilo -L-feny¬ loalanilo -Lr-glutaminylo -L-asparaginylo -L- cysteinylo-L-irolilo-L-lizyloglicyny.Roztwór 10 g amidu N-karbobenzoksy-S-ben- zylo -L-cysteinylo -L-fenyloalanilo -L-feny¬ loalanilo -L-glutaminylo -L-asparaginylo -S- benzylo - L- cysteinylo_ L-prolilo-e-N-p-tolueno- sulfonylo -L-lizyloglicyny w 2500 ml suchego cieklego amoniaku zadaje sie mieszajac w tem¬ peraturze wrzenia roztworu taka iloscia meta¬ licznego sodu lub potasu, az wystapi trwale niebieskie zabarwienie. Po dodaniu 1,8 g chlor¬ ku amonowego roztwór odparowuje sie do su¬ chosci. Pozostalosc zawiera amid L-cysteinylo- L-fenyloalanilo -L-fenyloalanilo -Lnglutaminy- lo -L-asparaginylo -L-dysteinylo -L-prolilo -L- lizyloglicyny. e) Zwiazek polipeptydowy o wzorze 1.Pozostalosc zawierajaca amid L-cysteonylo-L- fenyloalanilo -]fenyloalanilo -L-glutaminylo- L-asparaginylo -i^-cysteinylo -L^prolilo, -L-lizy¬ loglicyny rozpuszcza sie w 20 1 0,01-n kwasu octowego i przy wartosci pH 6,5 — 3,0 utlenia za pomoca powietrza lub tlenu w ciagu godzi¬ ny. Roztwór, który zawiera substancje o wzo¬ rze 1 dopirowadza sie do wartosci pH 4,0 — 5,0 i po dodaniu 100 g chlorku sodowego odparo¬ wuje sie do suchosci, przy czym otrzymuje sie suchy trwamy proszek. Moze byc on przecho¬ wywany i przy uzyciu klarownie sie rozpusz¬ cza. Mozna jednak stosowac roztwór bezpo¬ srednio ewentualnie po rozcienczeniu woda lub roztworem kwasu solnego.Przyklad II. Postepuje sie jak w przy¬ kladzie I, z ta róznica, ze utlenianie prowadzi sie za pomoca 15 ml 1-n roztworu nadtlenku wodoru w wodzie przy wartosci pH 4,0 — 6,0 zamiast utleniiania za pomoca powietrza. PL

Claims (5)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowego polipeptydu o dzialaniu zwezajacym naczynia o wzorze 1, znamienny tym, ze pochodna nonapeptydu o wzorze 2, w którym Ri R' oznaczaja grupy wprowadzone dla ochrony grup merkapto, a R" i R"( grupy wprowadzone dla ochrony grup aminowych, przeksztalca sie przez re¬ dukcje metalem alkalicznym w cieklym amoniaku w Jiniowy nonapeptyd o wzorze 3, który nastepnie przeprowadza sie w pro¬ dukt koncowy o wzorze 1 przez utlenienie w wodnym roztworze.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze utlenienie nonapeptydu o wzorze 3 do polipeptydu o wzorze 1 paxwadzi sie za po¬ moca powietrza.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze utlenienie nonapeptydu o wzorze 3 do polipeptydu o wzorze 1 prowadzi sie za po¬ moca tlenu.

4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze utlenienie nonapeptydu o wzorze 3 do polipeptydu o wzorze 1 prowadzi sie za po¬ moca nadtlenku wodoru.

5. Sposób wedlug zastrz. * 1, znamienny tym, ze do redukcji w cieklym amoniaku jako metal alkaliczny stosuje sie potas. SANDOZ A.G. Zastepca: dr Andrzej Au rzecznik patentowyDo opisu patentowego nr 46291 C,H_ C,H. ,6 5 jt I NH, CH, CH, SCH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO I I SCH-CH-NH-CO-CH-NH-CO-CH-NH 2I I I N CONH. CONH, /\ CH, CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH -CONH; CH1 CH1 ^H*)| CH2NH2 JtfzOf / 3 C*^ 9sH5 NHR1' CH, CH, I I 2 I 2 * RSCH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO fl'SCH-CH-NH-CO- CH-NH-CO-CH-NH i 'II I CO CH2 (ay, N CONH, CONH, CH, CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH,-CONH, I 2 I I ' CH,^CH} (CHj)s CH, NHR" Wzór 2Do opisu patentowego nr 46291 f6H5 C.H, r« f HSCH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO ¦HSCH-CH-NH-CO-CH-NH-CO-CH-NH I I I C0 CK fCH ) i i2 V' /N CONH, CONH /\ * * CH2 CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH- CONH CH2—CH2 fCH2, I CHNH Wzór 3 WH f6H5 r ¦ r« S-CHz-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO I j S-CH2-CH-NH-CO-CH-NH-CO-CH-NH N <:0NH2 C0NH2 CH2 CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH2-C0NH2 CH—CH2 (CH2,3 CH2 NH2 Wzór 4Do opisu patentowego nr 46291 CHeCH-SCH-CH-NH-CO-CH-NH-CO-CH-NH-CO-OCH r Mr b O * *i j i < o C0NH2 C0NH2 WzOrS ^NHX CK CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CONhL I 2 I I 2 1 CH2—CH2 (XjH2)3 CH2NH-SOrCtH4CH} tJzót- 6 CAH CH-SCH-CH-NH-CO-CH-IMH-CO-CH-NH-CC-OCHCH 6 5 z 2I i I 2 6 5 M CONH, CONH, /\ CH, CH-CO-NH-CH-CO-MH-CH-CONH, II I * :h2—ch2 (ch2)3 C^NH-SÓ-C^CH^ A/zoa- 7 CO^OCM-C6M5 C6H5 C6M5 NH CH2 CH2 C6H5CH2—SCH-CH-CO-NH CH-CO-NH-CH-C0N3 Wzór 8 2042. RSW „Prasa", KWce. PL