PL42378B1 - - Google Patents

Description

Opublikowano dnia 26 wrzesnia 1959 r. c Jy y*iy< ^ ^ POLSKIEJ RZECZYPOSPOLITEJ LUDOWEJ OPIS PATENTOWY Nr 42378 KI. 30 h, 2/20 Jerzy Paiuelkieiuicz Poznan, Polska Karol ZodroiLJ Poznan, Polska Sposób otrzymywania witaminy BJ2 na drodze mikrobiologiczne! Patent trwa od dnia 3 sierpnia 1956 r.Wynalazek dotyczy sposobu otrzymywania wi¬ taminy B12 na drodze mikrobiologicznej. Z chwi¬ la kiedy stwierdzono, ze witamina B12 prócz dzialania leczniczego w anemii zlosliwej dziala równiez wzrostowo na rózne zwierzeta ho¬ dowlane, wzroslo ogromnie zapotrzebowanie na te substancje. Dodatek do paszy, zwlaszcza po¬ chodzenia roslinnego, witaminy B,2 powoduje lepsze wykorzystanie paszy oraz szybszy wzrost zwierzat nie spasanych.Koncentrat witaminy B12 oraz krystaliczna witamine B12 mozna otrzymac z dosyc duza wy¬ dajnoscia z produktów pofermentacyjnych fa¬ brykacji streptomycyny, chlorotetracykliny i in¬ nych antybiotyków.Okazalo sie tez, ze bogatym zródlem wita¬ miny B12 sa scieki miejskie.Znane dotychczas sposoby nie pozwalaja jednak na otrzymanie witaminy B12 w wyso¬ kich stezeniach. Tak na przyklad w specjalnych kulturach Streptomyces olivaceus wydajnosci witaminy B12 sa rzedu 3 mg na jeden litr po¬ zywki. (Pfeifer V.P.,Vojnovich Ci Heger E.N., Ind. Eng. Chem. Tom 46, str. 843 rok 1954), a naj¬ wyzsza wydajnosc o jakiej jest wzmianka w li¬ teraturze wynosi 8 mg witaminy B12 na litr po¬ zywki (Perlman D., Brown W. H. i Lee S. B., Ind. Eng. Chem. Tom 44 strona 1996 — rok 1952).Niskie stezenia witaminy B12 przy równoczes¬ nie wysokich stezeniach substancji balastowych, podrazaja koszty produkcji koncentratów jak i krystalicznej witaminy B12.Stwierdzono, ze przez odpowiednie prowadze¬ nie hodowli bakterii kwasu propinowego mozna uzyskac wysokie wydajnosci witaminy B12, rze¬ du 10 mg na jeden litr hodowli, o czystosci 1—2 mg witaminy B12 na 1 gram suchej masy.Sposób wedlug wynalazku polega na wyho¬ dowaniu hodowli matki i odwirowaniu z niej komórek bakteryjnych, którymi zaszczepia siewlasciwa pozywke produkcyjna. Objetosc ho¬ dowli matki powinna wynosic co najmniej 10°/o objetosci pozywki produkcyjnej. Kwasy powsta¬ jace w czasie hodowli nalezy przy tym zobo¬ jetnic, najlepiej roztworami wodorotlenków al¬ kaliów lub weglanów potasowców tak, azeby pH pozywki produkcyjnej wynosilo stale 5,5 — 7, przy czym hodowle produkcyjna dokarmia sie okresowo gliceryna lub cukrami (glukoza, lakto¬ za itp.). Jako pozywke stosuje sie kwasowe i enzymatyczne hydrolizaty bialek, zwlaszcza kazeiny lub innych bialek, np. z grzybni pro¬ mieniowców, bialek zwierzecych itp., ponadto sole magnezu, kobaltu i zelaza, fosforany, kwas pantotenowy lub jego sole i biotyne. Kwas pantetonowy lub biotyne mozna zastapic na¬ turalnymi ekstraktami zawierajacymi te sub¬ stancje, np. ekstraktem drozdzowym, wyciaga¬ mi roslinnymi itp. Do pozywki o wyzej wymie¬ nionym skladzie dodaje sie, zwlaszcza w kon¬ cowym okresie prowadzenia hodowli, 5,6 -dwu- metylobenzimidazolu, w celu biosyntetycznego przeprowadzenia nieczynnej biologicznie ani klinicznie witaminy B12P w witamine B12 czyn¬ na biologicznie i klinicznie.Sposób prowadzenia hodowli przy zastosowa¬ niu tego zwiazku zostal juz opisany w paten¬ cie nr 38116.Przyklad. Pozywke o skladzie Kwasowy hydrolizat kazeiny . . 2 g N Trypsynowy hydrolizat kazeiny . 2 gN NaH2P04-H20 1,8 g K8P04 . . . . . 1,8 g MgCl2 • 6 H20 0,4 g FeS04\7H20 10 mg CoS04 • 7 H20 8 mg Pantotenian wapniowy ..... 4 mg Biotyna 0,3 mg Gliceryna 25 g Woda . . . 1000 ml i objetosc 200 ml zaszczepiono zawiesina bakterii propionowych, cnzygotowana przez rozmnozenie wyzej wymienionych bakterii w ho¬ dowlach probówkowych. Po 2—4 dniach hodo¬ wania hodowli — matki w temperaturze 28-^30°C odwirowano bakterie i przeniesiono do swiezej pozywki o objetosci 1000 ml. Kulture produk¬ cyjna hodowano w ciagu 20 dni w tempera¬ turze 30°C. W czasie trwania hodowli dodawa¬ no stopniowo do podloza hodowli weglanu sodo¬ wego w taki sposób, aby pH pozywki nie.spadlo ponizej 5,5 i nie przekraczalo wartosci 7,0.Równoczesnie w odstepach kilkudniowych do¬ dawano gliceryne (lub glukoze). W sumie zu¬ zyto okolo 30 g gliceryny (lub glukozy). Po 15-stu dniach hodowli dodano 10 mg 5,6-dwumetylo- benzimidazolu.W procesie prowadzonym w opisany sposób otrzymuje sie z 1 litra hodowli 6—10 g masy bakteryjnej, zawierajacej 9—10 mg czystej wita¬ miny B12. PL

Claims (5)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymania witaminy B12 na drodze mikrobiologicznej, znamienny tym, ze do po¬ zywki zawierajacej kwasowe i enzymatyczne hydrolizaty bialek, np. kazeiny, dodaje sia w ilosci co najmniej 10% objetosci hodowli produkcyjnej, komórki bakteryjne pochodza¬ ce z wyhodowanej oddzielnie hodowli—matki, a proces technologiczny prowadzi sie tak, aby w czasie hodowli pH pozywki wynosilo 5,5 — 7, przy czym hodowle produkcyjna do¬ karmia sie okresowo gliceryna lub cukrami.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze powstajacy W czasie hodowli nadmiar kwa¬ su zobojetnia sie roztworami wodorotlenków lub weglanów, zwlaszcza potasowców.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1—2, znamienny tym, ze do pozywki produkcyjnej dodaje sie, zwlaszcza w koncowym okresie prowadzenia hodowli, 5,6-dwumetylobenzimidazol.
4. 4. Sposób wedlug zastrz. 1—3, znamienny tym, ze do pozywki dodaje sie kwasu pantetono- wego lub biotyny lub naturalnych ekstraktów, zawierajacych te substancje, np. ekstraktu drozdzowego, ekstraktu roslinnego itp.
5. 5. Sposób wedlug zastrz. 1—4, znamienny tym, ze do pozywki dodaje sie soli mineralnych. Jerzy Pawelkiewicz Karol Zodrow Zastepca: Kolegium Rzeczników Patentowych. Witr ]«dnoraz. CWD, zam. PL/Kc. Czest. zam. 2100 5. 8. 59. 10'J eg2. Al piim. ki, 3, PL