PL212067B1 - Zastosowanie sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych, zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae - Google Patents
Zastosowanie sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych, zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny FlaviviridaeInfo
- Publication number
- PL212067B1 PL212067B1 PL381650A PL38165007A PL212067B1 PL 212067 B1 PL212067 B1 PL 212067B1 PL 381650 A PL381650 A PL 381650A PL 38165007 A PL38165007 A PL 38165007A PL 212067 B1 PL212067 B1 PL 212067B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- inhibitor
- heteroaryl
- virus
- alkyl
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 7
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 title claims description 6
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 title claims description 4
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 title 1
- -1 glycosyl heteroaryl sulfoxides Chemical class 0.000 claims description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims description 5
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 claims description 5
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 claims description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OLRJXMHANKMLTD-UHFFFAOYSA-N silyl Chemical compound [SiH3] OLRJXMHANKMLTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000003918 triazines Chemical class 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 33
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 18
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 17
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 229930182475 S-glycoside Natural products 0.000 description 4
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 150000003569 thioglycosides Chemical class 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical class C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 2
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 2
- BAZVFQBTJPBRTJ-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-5-nitropyridine Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)N=C1 BAZVFQBTJPBRTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 3-chloroperbenzoic acid Chemical compound OOC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 NHQDETIJWKXCTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229940121672 Glycosylation inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000711557 Hepacivirus Species 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011999 immunoperoxidase monolayer assay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie sulfidu i sulfotlenku glikozylowo heteroarylowego jako związków przeciwwirusowych zwłaszcza przeciwko wirusom zapalenia wątroby typu C z rodziny Flaviviridae.
Wirus zapalenia wątroby typu C (wzw c) został zidentyfikowany w 1989 r. i należy do szczególnie groźnych patogenów, powodując zakażenie milionów ludzi na świecie. (Choo, Q.L. i wsp., Science 244, 359. 1989). Wirus należy do rodziny Flaviviridae, małych wirusów, zawierających jednoniciowe RNA o dodatniej polarności jako materiał genetyczny. Jest on głównym patogenem powodującym wirusowe zapalenie wątroby prowadzące często do groźnych powikłań. W przypadku wirusa zapalenia wątroby typu C (wzw C, HCV) u około 80% zakażonych następuje ostre chroniczne zapalenie wątroby, co może stać się przyczyną marskości wątroby lub pierwotnego raka wątroby. Niesłychanie szybki wzrost liczby zakażeń wirusem HCV może doprowadzić do tego, że pod koniec obecnej dekady wirus HCV stanie się główną przyczyną śmiertelności spowodowanej przez wirusy i może stanowić znacznie ważniejsze zagrożenie niż zakażenia wywołane wirusem HIV. Możliwości leczenia wirusowego zapalenia wątroby są w obecnej chwili niewielkie, a skuteczność terapii bardzo niska. Stosowany jest najczęściej interferon α, sam lub w połączeniu z rybawiryną (analog guanozyny). Trwała odpowiedź na tego typu leczenie następuje u 10-20% chorych przy leczeniu samym interferonem, a przy leczeniu skojarzonym - u ok. 30% pacjentów (Mc Hutchison. J.G. i wsp., New England J. Med. 339, 1485, 1998). Zarówno interferon, jak i rybawiryną dają przy tym silne efekty uboczne, co czasami eliminuje możliwość ich stosowania. Terapia taka jest ponadto bardzo kosztowna i wymaga hospitalizacji, co ogranicza możliwości jej szerokiego stosowania.
Dla stworzenia nowych metod leczenia muszą powstać preparaty selektywnie hamujące adsorbcję wirusa, replikację jego materiału genetycznego oraz dojrzewanie cząstek wirusowych.
W wyniku badań stwierdzono nieoczekiwanie, że sulfidy glikozylowo heteroarylowe oraz sulfotlenki glikozylowo heteroarylowe stanowią nową klasę połączeń hamujących namnażanie się wirusa w komórkach ssaczych.
Wynalazek dotyczy zastosowania sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae. gdzie sulfidy o wzorze I i sulfotlenki o wzorze II zawierają jako podstawniki w części cukrowej estry kwasów karboksylowych (R=acyl) lub etery alkilowe (R=alkil) lub etery sililowe (R=SiR3, gdzie R=alkil, aryl), do wytwarzania środków przeciw wirusowych, w szczególności w stosunku do wirusa zapalenia wątroby typu C.
Jako podstawnik heteroarylowy stosuje się pochodne pirydyny, imidazolu, triazyny zawierające podstawniki elektronoakceptorowe.
Natomiast jako podstawnik glikozylowy stosuje się monosacharydy, disacharydy z wolnymi grupami hydroksylowymi lub podstawionymi rodnikiem acylowym, alkilowym, sililowym. Dążąc do poznania pierwszych etapów rozwoju wirusa, tj. jego adsorbcji na powierzchni komórki stosowano jako model badawczy pokrewnego wirusa zwierzęcego należącego do rodzaju Pestivirus w rodzinie Flaviviridae - wirusa klasycznej świńskiej gorączki (CSFV). Stosowanie modelu zastępczego jest konieczne, ponieważ wirus zapalenia wątroby typu C nie namnaża się w hodowlach in vitro, a jedynym modelem zwierzęcym są małpy człekokształtne.
Kolejnym etapem była ekspresja genów glikoprotein E0 i E2 w systemie bakulowirusowym i badanie wpływu wybranych inhibitorów na powstawanie tych glikoprotein. Badania nad uczestniczącymi w adsorpcji glikoproteinami otoczkowymi HCV i CSFV doprowadziły do racjonalnego zaprojektowania selektywnych terapeutyków blokujących wejście wirusa do komórki gospodarza, a co za tym idzie jego namnażanie. Metodykę pracy i uzyskane wyniki przedstawiono na poniższych przykładach.
P r z y k ł a d 1.
Dawkę podawanego związku określono za pomocą testu cytotoksycznego z czerwienią obojętną. Na płytkę zawierającą komórki SK6 dodawano badany inhibitor zmieniając w szerokim zakresie jego ilość. Płytki inkubowano przez 48 godzin w temperaturze 37°C. Po dodaniu czerwieni obojętnej kontynuowano inkubację przez 3 godziny. Następnie dodano 1% wodno-alkoholowy roztwór kwasu octowego i oznaczono spektrofotometrycznie ilość uwolnionej czerwieni obojętnej mierząc absorbancję przy długości fali 490 nm. Wyniki przedstawiono w Tabeli 1 (kolumna 2 i 3).
Po ustaleniu optymalnej dawki inhibitora, czyli takiej, przy której przeżywalność komórek SK6 jest większa niż 50%, badano wpływ inhibitora na namnażanie się wirusa w tych komórkach. W tym celu do jednej płytki M-12 zawierającej komórki SK6 dodawano różne, ustalone wcześniej dawki
PL 212 067 B1 potencjalnego inhibitora, a po 30 minutach dodawano wirusa CSFV. Ma to na celu sprawdzenie, czy inhibitor blokuje wnikanie wirusa do komórki. Drugą płytkę M-12 z komórkami SK6 zakażano wirusem, a po 1,5 h (po tym czasie wirus jest już w komórkach) dodawano inhibitora, w celu sprawdzenia jak inhibitor wpływa na namnażanie się wirusa. Hodowle prowadzono przez 48 h, a po tym czasie przeprowadzano test IPMA (ImmunoPeroxidase Monolayer Assay) za pomocą surowicy poliklonalnej anty E0. Komórki zakażone CSFV są zabarwione na czerwono i widoczne gołym okiem, więc w ten sposób można porównać ilość i wielkość pseudołysinek w porównaniu z kontrolami (1 - komórki SK6 bez wirusa CSFV i bez inhibitora, 2 - komórki SK6 zakażone wirusem CSFV, ale bez dodatku inhibitora). Wyniki przedstawiono w Tabeli 2 (kolumna 4 i 5). Analiza danych wskazuje, że inhibitory GP-1, GP-4, GP-5, GP-6, GP-7 wykazywały hamowanie namnażanie się wirusa CSFV w komórkach nerki świńskiej SK6. W celu określenia ilości nowopowstałych cząstek wirusa CSFV pod wpływem działania różnych dawek inhibitorów, wykonano miareczkowanie supernatantów zebranych znad komórek SK6 z płytek po zakażeniu wirusem CSFV. Przykładowo w Tabeli 1 podano wyniki dla inhibitora GP7.
T a b e l a 1 Inhibitor GP7
| Dawka | Przeżywalność | Inh. + Wirus | Wirus + Inh. |
| 60 μg/ml | 86% | Brak pseudołysinek | Brak pseudołysinek |
| 50 μg/ml | 89% | Brak pseudołysinek | Brak pseudołysinek |
| 20 μg/ml | 95% | Pojedyncze pseudołysinki | Pojedyncze pseudołysinki |
| 10 μg/ml | 100% | Liczne pseudołysinki | Liczne pseudołysinki |
P r z y k ł a d 2
Badanie wpływu syntetycznych inhibitorów N-glikozylacji na ekspresję genów glikoprotein E0 i E2 CSFV w systemie bakulowirusowym.
W tym celu przeprowadzono następujące doświadczenia:
1. Ustalenie dawki podawanego inhibitora za pomocą testu cytotoksycznego z 0,4% Trypan Blue.
2. Badanie wpływu inhibitora na ekspresję genów glikoprotein E0 i E2 CSFV w systemie Bakulowirusowym.
T a b e l a 2
WYNIKI - KOMÓRKI SSACZE:
| 1. Nazwa inhibitora | 2. Dawka | 3. Przeżywalność | 4. Inhibitor + wirus | 5. Wirus + inhibitor |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| GP-1 | 50 μg/ml | 68% | — | — |
| 40 μg/ml | 86% | — | — | |
| 20 μg/ml | 100% | +++ | +++ | |
| GP-2 | 15 μg/ml | +++ | +++ | |
| 10 μg/ml | 97% | +++ | +++ | |
| 5 μg/ml | 99% | +++ | +++ | |
| GP-3 | 140 μg/ml | 90% | + | + |
| 130 μg/ml | 90% | + | + | |
| 120 μg/ml | 93% | ++ | + | |
| 110 μ9/π! | 95% | ++ | ++ | |
| GP-4 | 80 μg/ml | 53% | --- | + |
| 60 μg/ml | 87% | ++ | ++ | |
| 50 μg/ml | 93% | ++ | ++ | |
| 300 μg/ml | 95% | ++ | ++ |
PL 212 067 B1 cd. tabeli 2
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| GP-5 | 6 μg/ml | 95% | --- | — |
| 5 μg/ml | 98% | --- | + | |
| 3 μg/ml | 100% | +++ | +++ | |
| GP-6 | 12 μg/ml | --- | — | |
| 10 μg/ml | 94% | --- | + | |
| 5 μg/ml | 94% | ++ | ++ | |
| GP-7 | 150 μg/ml | 57% | ... | — |
| 140 μg/ml | 60% | ... | — | |
| 120 μg/ml | 89% | ... | — | |
| 100 μg/ml | 100% | — | — |
--- brak pozytywnych komórek (całkowite zahamowanie namnażania się wirusa CSFV lub brak ekspresji glikoprotein otoczkowych) + mała ilość pozytywnych komórek [%] (dobre zahamowanie namnażania się wirusa CSFV) ++ średnia ilość pozytywnych komórek [%] (średnie zahamowanie namnażania się wirusa CSFV) +++ duża ilość pozytywnych komórek (podobnie jak na kontroli) [%] (brak zahamowania namnażania się wirusa CSFV)
W serii doświadczeń ustalono dawki podawanego inhibitora za pomocą testu cytotoksycznego z 0,4% Trypan Blue. Test cytotoksyczny z 0,4% Trypan Blue służy do pomiaru przeżywalnoś ci komórek. Po inkubacji z Trypan Blue komórki martwe barwią się na kolor niebieski, a komórki żywe pozostają niezabarwione, dzięki czemu przy użyciu homocytometru (komory Thoma) możliwe jest określenie przeżywalności korzystając ze wzoru:
Ilość żywych komórek (niezabarwione) Ilość wszystkich komórek (żywe + martwe)
Przeżywalność (%)
W tym celu komórki owadzie po zadaniu inhibitorem inkubowano przez 48 godzin w temperaturze 27°C. Po odpłukaniu pożywką przeniesiono komórki do probówek Eppendorfa, pobrano 50 ul zawiesiny, wprowadzono do probówki Eppendorfa, dodano 50 ul roztworu Tryptan Blue, inkubowano przez 5 minut, nakroplono na komorę Thoma i policzono komórki.
Po ustaleniu optymalnej dawki inhibitora, czyli takiej, przy której przeżywalność komórek Sf9 jest większa niż 50%, badano wpływ inhibitora na namnażanie się bakulowirusów zawierających gen glikoproteiny E0 lub E2 w tych komórkach postępując podobnie jak w przypadku komórek nerki świńskiej SK6, które zakażano wirusem CSFV. W tym celu do jednej płytki M-12 zawierającej komórki Sf9 dodawano różne, ustalone wcześniej dawki potencjalnego inhibitora, a po 30 minutach dodawano bakulowirusa E0 lub E2. Miało to na celu sprawdzenie, czy inhibitor blokuje wnikanie bakulowirusa do komórki. Drugą płytkę M-12 z komórkami Sf9 zakażano bakulowirusem E0 lub E2, a po 1.5 h (po tym czasie bakulowirus jest już w komórkach) dodawano inhibitora, w celu sprawdzenia jak inhibitor wpływa na namnażanie się bakulowirusa. Hodowle prowadzono przez 48 h, a po tym czasie przeprowadzano test IPMA za pomocą surowicy poliklonalnej anty E0 lub E2. Komórki zakażone bakulowirusem są zabarwione na czerwono, więc w ten sposób można porównać ilość i wielkość komórek pozytywnych w porównaniu z kontrolami (1 - komórki Sf9 bez bakulowirusa E0 lub E2 i bez inhibitora, 2 - komórki Sf9 zakażone bakulowirusem E0 lub E2, ale bez dodatku inhibitora). Wyniki przedstawiono w Tabeli 3.
PL 212 067 B1
T a b e l a 3.
WYNIKI - KOMÓRKI OWADZIE:
| Nazwa inhibitora | Dawka | Przeżywalność | Inhibitor + bakulowirus | Bakulowirus + inhibitor |
| GP-1 | 60 μg/ml | 75% | + | + |
| 40 μg/ml | 87% | ++ | ++ | |
| 20 μg/ml | 98% | +++ | +++ | |
| 10 μg/ml | 100% | +++ | +++ | |
| GP-4 | 80 μg/ml | 58% | + | + |
| 60 μg/ml | 60% | ++ | ++ | |
| 40 μg/ml | 71% | ++ | ++ | |
| 20 μg/ml | 75% | +++ | +++ | |
| GP-5 | 8 μg/ml | 66% | +++ | +++ |
| 6 μg/ml | 90% | +++ | +++ | |
| 4 μg/ml | 98% | +++ | +++ | |
| 3 μg/ml | 100% | +++ | +++ | |
| GP-6 | 15 μg/ml | 53% | --- | --- |
| 12 μg/ml | 81% | + | + | |
| 10 μg/ml | 90% | ++ | ++ | |
| 5 μg/ml | 95% | +++ | +++ | |
| GP-7 | 120 μg/ml | 56% | --- | --- |
| 100 μg/ml | 60% | + | + | |
| 80 μg/ml | 98% | ++ | ++ | |
| 60 μg/ml | 100% | +++ | +++ |
--- brak pozytywnych komórek (całkowite zahamowanie namnażania się bakulowirusa lub brak ekspresji glikoprotein otoczkowych) + mała ilość pozytywnych komórek [%] (dobre zahamowanie namnażania się bakulowirusa) ++ średnia ilość pozytywnych komórek [%] (średnie zahamowanie namnażania się bakulowirusa) +++ duża ilość pozytywnych komórek (podobnie jak na kontroli) [%] (brak zahamowania namnażania się bakulowirusa)
Analiza danych wskazuje, że inhibitory GP-6, GP-7 wykazywały hamowanie namnażania się bakulowirusa E0 lub E2 w komórkach owadzich Sf9.
PL 212 067 B1
| GP 1 | Sulfotlenek 4’-nitrofenylo-2,3.4,6-tetra- O-acetylo-P-D-glukopiranozylowy | AcO-' | A >Ac OAc 1 | // \ | A | |
| GP2 | Sulfotlenek 4'-nitrofenylo-2,3.4.6-tetra- O-benzylo-p-D-glukopiranozylowy | BnO^ ΒιτΟ-, | A)Bn AA ()Bn 2 | jr | A | Ni Λ |
| GP3 | Sulfotlenek fenylo-2,3,4,6-tetra-O- acetylo-P-D-glukopiranozylowy | Ac(A AcO | .OAc Aro- | ./ \ | Λ / | |
| OAc 3 | ||||||
| GP 4 | Sulfotlenek fenylo-2,3,4,6-tetra-O- benzylo-P-D-glukopiranozylowy | BnO''' Bn( i | <>Hn < O _ \ ^O II \ \ s- O Bn 4 | // \_ | ||
| GP5 | Sulfotlenek (5 '-nitro-2’ -pirydylo)- 2.3.4.6-tetra-O-acetylo-P-D- galaktopiranozylowy | AcO AcO A- | „OAc O ll OAc 5 | j/ V | -no2 | |
| GP6 | Sulfotlenek (5'-nitro-2' -pirydylo)-per-O- acetylo-P-D-laktozylowy | AcO ^,OAc | AeO^ / A \ | -O A- | 0 II s-- | -NO, |
| OAc | 6 | OAc | ||||
| GP 7 | S ulfid (5 -nitro-2 ’-pirydylo) per-O-acetylo-β- D-laktozylowy | AcO OAc OAc | AcO.^ 7 | A) \ \ --ΛΖ OAc | „s- | <fT~NO. (4=7 |
Sposób otrzymywania sulfotlenków przedstawiono na poniższych przykładach.
Przepis ogólny
Tioglikozyd (0,01 mola) rozpuszczono w chlorku metylenu (100 ml) i ochłodzono do 0°C po czym dodano 60% kwas m-chloronadbenzoesowy (2,87g, 0,01 mola) i mieszano w temperaturze pokojowej kontrolując przebieg reakcji metodą tle. Przerywano reakcję nie czekając na całkowite przereagowanie tioglikozydu, aby ograniczyć ilość powstającego sulfonu. Mieszaninę poreakcyjną odmywano wodą (3 x 50 ml), suszono bezwodnym siarczanem magnezu i po odsączeniu środka suszącego zatężano na wyparce rotacyjnej. Surowy produkt oczyszczano metodą chromatografii kolumnowej stosując układ rozpuszczalników toluen:octan etylu 4:1.
PL 212 067 B1
| Produkt | Czas reakcji [min] | Wydajność [%] | |
| GP-1 | 60 | 78* | 81** |
| GP-2 | 40 | 51* | |
| GP-3 | 30 | 77* | |
| GP-4 | 30 | 78* | |
| GP-5 | 40 | 48* | 51** |
| GP-6 | 120 | 59* | 68** |
* wydajność liczona na wyjś ciowy tioglikozyd ** wydajność liczona na przereagowany tioglikozyd
2.3.4.6- tetra-O-acetylo-e-D-glukopiranozylo-(4-nitrofenylo) sulfotlenek, (GP-1) 1H NMR (mieszanina diastereoizomerycznych sulfotlenków) δ (ppm): 1.94, 1.98, 2.03, 2.13 (4s, 4xCH3CO), 3.74 (ddd, J=2.4 Hz, J=4.2 Hz, J=10.0 Hz, H-5), 3.98-4.21 (m, H-6a, H-6b), 4.50 (d, J1,2=9.5 Hz, H-1, 4.93 (dd~t, J=9.5 Hz, H-2), 5.19-5.36 (m, H-3, H-4), 7.95 (d, J=9.0 Hz, Ph), 8.41 (d, J=9.0 Hz, Ph)
2.03 (s, 4xCH3CO), 3.65 (ddd, J=2.2 Hz, J=5.4 Hz, J=9.8 Hz, H-5), 3.98-4.21 (m, H-6a, H-6b). 4.42 (d, J=9.8 Hz, H-1), 4.99 (dd~t, J=9.5 Hz, H-2), 5.19-5.36 (m, H-3, H-4), 7.86 (d, 1=9.0 Hz, H-Ph), 8.41 (d, J=9.0 Hz, Ph)
2.3.4.6- tetra-0-benzylo-e-D-glukopiranozylo-(4-nitrofenyIo) sulfotlenek, (GP-2) 1H NMR δ (ppm): 3.43 (ddd, J=2.0 Hz, J=5.1 Hz, J=9.8 Hz, H-5), 3.43 (dd, J=2.0 Hz. J=11.2 Hz,
H-6b), 3.49 (dd, J=5.1 Hz, J=11.2 Hz, H-6a), 3.60 (dd~t, J=9.3 Hz, H-4), 3.81 (dd~t, J=9.0 Hz, H-3).
4.01 (d, J=9.8 Hz, H-1), 4.10 (dd~t, 1=9.8 Hz, H-2), 4.24 i 4.31 (qAB, J=11.7 Hz, CH2Ph), 4.57 i 4.81 (qAB, J=10.7 Hz, CH2Ph), 4.94 (s, CH2Ph), 4.96 i 5.00 (qAB, J=10.5 Hz, CH2Ph), 7.14-7.38 (m, Ph), 7.79 (d, J=9.0 Hz, Ph), 8.25 (d, J=9.0 Hz, Ph)
2.3.4.6- tetra-O-acetylo-e-D-glukopiranozylo-fenylo sulfotlenek, (GP-3) 1H NMR (mieszanina diastereoizomerycznych sulfotlenków) δ (ppm): 1.71, 2.00, 2.01, (3s. 4xCH3CO), 3.62 (ddd, J=2.4 Hz, J=5.6 Hz, J=10.0 Hz, H-5), 4.03 (dd, J=2.4 Hz, J=12,4 Hz, H-6b), 4.14 (m, H-6a), 4.21 (d, J12=9.5 Hz, H-1), 5.01 (dd~t, J=9.5 Hz, H-2), 5.21-5.38 (m, H-3, H-4), 7.52-7.75 (m, Ph)
1.91, 1.96, 2.01, 2.08 (4s, 4xCH3CO), 3.72 (ddd, 3=2.9 Hz, J=3.9 Hz, J=10.0 Hz, H-5), 4.08-4.19 (m, H-6a, H-6b), 4.46 (m, H-1), 4.96 (m, H-2), 5.21-5.38 (m, H-3, H-4), 7.52-7.75 (m, Ph)
2.3.4.6- tetra-O-benzylo-e-D-glukopiranozylo-fenylo sulfotlenek, (GP-4) 1H NMR (mieszanina diastereoizomerycznych sulfotlenków) δ (ppm): 3.32 (ddd, J=2.4 Hz, J=4.6 Hz, J=9.8 Hz, H-5), 3.47-3.82 (m, H-3, H-4, H-6a, H-6b), 3.98 (d, 1=9.8 Hz, H-1), 4.01 (dd-t. J=9.8 Hz, H-2), 4.22 i 4.33 (qAB, J=12.0 Hz, CH2Ph), 4.57 i 4.64 (qAB, J=10.7 Hz, CH2Ph), 4.78-5.05 (m, CH2Ph), 7.15-7.70 (m, Ph)
3.47-3.82 (m, H-3, H-4, H-5, H-6a, H-6b), 4.45 (s, CH2Ph), 4.49 (d, 1=8.6 Hz, H-1), 4.78-5.05 (m, H-2, CH2Ph), 7.15-7.70 (m, Ph)
2.3.4.6- tetra-O-acetylo-e-D-galaktopiranozylo-(5-nitro-2-pirydylo) sulfotlenek, (GP-5) 1H NMR (mieszanina diastereoizomerycznych sulfotlenków) δ (ppm): 1.70, 1.81, 1.96, 2.13 (4s, 4xCH3CO), 3.78-4.24 (m, H-5, H-6a, H-6b), 5.03 (d, J1,2=10.2 Hz, H-1), 5.11 (dd, J=3.5 Hz, J=9.9 Hz, H-3), 5.41 (m, H-4), 5.81 (dd~t, J=9.9 Hz H-2), 8.14 (d, J=9.0 Hz, H-3pir), 8.73 (dd, J=2.0 Hz, J=8.8 Hz, H-4pir), 9.50 (d, J=1.8 Hz, H-6pir).
2.02, 2.04, 2.17, 2.18 (4s, 4xCH3CO), 3.78-4.24 (m, H-5, H-6a, H-6b), 4.63 (d, J1,2=10.2 Hz, H-1), 5.21 (dd, 1=3.5 Hz, 1=9.9 Hz, H-3), 5.41 (m, H-4), 5.76 (dd~t, J=10.1 Hz H-2), 8.27 (d, 1=8.7 Hz, H-3pir), 8.73 (dd, 1=2.0 Hz, J=8.8 Hz. H-4pir), 9.43 (d, 1=1.8 Hz, H-6pir).
2.3.4.6- tetra-O-acetylo-e-D-galaktopiranozylo-(1->4)-2,3,6-tn-O-acetylo-1-tio-e-D-glukopiranozylo-(5-nitro-2-pirydylo) sulfotlenek, (GP-6) 1H NMR (mieszanina diastereoizomerycznych sulfotlenków) δ (ppm): 1.56, 1.96, 2.02, 2.04, 2.06, 2.08, 2.14 (7s, 7xCH3CO), 3.72-4.18 (m, H-4, H-5, H-5', H-6a, H-6a' H-6b'), 4.49 (d, J, 2=7.8 Hz, H-1'), 4.54 (dd, J=2.4 Hz, 1=11.0 Hz, H-6b), 4.95 (dd, J=3.4 Hz, J=10.5 Hz, H-3'), 5.03 (d, J=9.7 Hz, H-1), 5.09 (dd, J=7.8 Hz, J=10.3 Hz. H-2'), 5.22 (dd~t, J=8.5 Hz, H-3), 5.34 (m, H-4), 5.48 (dd~t, J=9.5 Hz H-2), 8.10 (d, J=8.7 Hz, H-3pir), 8.71 (dd, J=2.4 Hz, J=8.7 Hz, H-4pir), 9.48 (d, 1=2.4 Hz, H-6pir).
PL 212 067 B1
1.87, 1.95, 1.97, 2.08, 2.09, 2.14, 2.15 (7s, 7xCH3CO), 3.45 (ddd, J=1.7 Hz, J= 4.8 Hz, J=9.8 Hz, H-5), 3.79 (dd~t, J=9.8 Hz, H-4), 3.81-4.16 (m, H-5', H-6a, H-6a', H-6b'), 4.27 (dd, 1=1.7 Hz, J=12.2 Hz, H6b), 4.48 (d, J1,2=7.8 Hz, H-1'), 4.61 (d, 1=10.0 Hz, H-1), 4.95 (dd, J=3.4 Hz, 1=10.5 Hz, H-3'), 5.07 (dd, J=7.8 Hz, 1=10.5 Hz, H-2'), 5.30-5.39 (m, H-3. H-4'), 5.48 (dd~t, J=9.8 Hz H-2), 8.18 (d, J=8.4 Hz, H-3pir), 8.73 (dd, 1=2.4 Hz, J=8.4 Hz, H-4pir), 9.42 (d, 1=2.4 Hz, H-6pir).
(5-nitro-2-pirydylo) 2,3,4,6-tetra-O-acetylo-e-D-galaktopiranozylo-(1--4)-2,3,6-tri-O-acetylo-1-tio-p-D-glukopiranozyd, (GP-7)
Tiocukier (0.01 mola) rozpuszczono w acetonie (100 ml), dodano 2-chloro-5-nitropirydynę (1.58 g, 0.01 mola) oraz węglan potasu (2.76 g, 0.02 mola) i mieszano w temperaturze pokojowej kontrolując przebieg reakcji metodą tle. Po 60 minutach zakończono reakcję, odsączano osad soli nieorganicznych, a przesącz zatężano. Surowy produkt poddawano oczyszczaniu metodą chromatografii kolumnowej stosując układ rozpuszczalników toluen:octan etylu 10:1. Uzyskano produkt w postaci krzepnącego oleju z 83% wyd. [α] = 40.8° (CHCl3, c 0.2).
1H NMR δ (ppm): 1.97, 2.03, 2.04, 2.07, 2.08, 2.17 (6s, 7xCH3CO), 3.80-4.19 (m, H-4, H-5, H-5', H-6a, H-6a' H-6b'), 4.46 (dd, J=1.5 Hz, J=12.0 Hz, H-6b), 4.50 (d, 1,2=7.8 Hz, H-1‘), 4.97 (dd, J=3.4 Hz, J=10.5 Hz, H-3'), 5.13 (dd, J=7.8 Hz. J=10.6 Hz, H-2'), 5.17 (dd, J=9.3 Hz, 1=10.5 Hz, H-2), 5.32-5.40 (m, H-3, H-4'), 5.88 (d, J=10.5 Hz, H-1), 7.34 (d, J=9.0 Hz, H-3pir), 8.26 (dd, J=2.7 Hz, 1=9.0 Hz, H-4pir), 9.26 (d, J=2.7 Hz, H-6pir).
Claims (3)
1. Zastosowanie sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae, gdzie sulfidy o wzorze I i sulfotlenki o wzorze II zawierają jako podstawniki w części cukrowej estry kwasów karboksylowych (R=acyl) lub etery alkilowe (R=alkil) lub etery sililowe (R=SiR3, gdzie R=alki, aryl), do wytwarzania środków przeciwwirusowych, w szczególności w stosunku do wirusa zapalenia wątroby typu C.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym jako podstawnik heteroarylowy stosuje się pochodne pirydyny, imidazolu, triazyny zawierające podstawniki elektronoakceptorowe.
3. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym jako podstawnik glikozylowy stosuje się monosacharydy, disacharydy z wolnymi grupami hydroksylowymi lub podstawionymi rodnikiem acylowym, alkilowym, sililowym.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL381650A PL212067B1 (pl) | 2007-01-31 | 2007-01-31 | Zastosowanie sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych, zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL381650A PL212067B1 (pl) | 2007-01-31 | 2007-01-31 | Zastosowanie sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych, zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL381650A1 PL381650A1 (pl) | 2008-08-04 |
| PL212067B1 true PL212067B1 (pl) | 2012-08-31 |
Family
ID=43035901
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL381650A PL212067B1 (pl) | 2007-01-31 | 2007-01-31 | Zastosowanie sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych, zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL212067B1 (pl) |
-
2007
- 2007-01-31 PL PL381650A patent/PL212067B1/pl not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL381650A1 (pl) | 2008-08-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101646960B1 (ko) | 신규한 황산화된 올리고사카라이드 유도체 | |
| KR20100102089A (ko) | 2'-불소-4'-치환-뉴클레오시드, 제조 방법 및 용도 | |
| JPWO2002036602A1 (ja) | 新規ピラゾール誘導体及びそれらを含有する糖尿病治療薬 | |
| JPH03504969A (ja) | ピリミジン誘導体 | |
| CN105829334B (zh) | 尿嘧啶核苷酸类似物及其制备方法和应用 | |
| MXPA04012802A (es) | Ester 2'-c-metil-3'-o-l-valina de ribofuranosil-citidina para el tratamiento de infecciones por flaviviridae. | |
| EP2578587B1 (en) | Pyrazole derivatives | |
| TWI418563B (zh) | α－選擇性醣基化反應之方法 | |
| Fernández-Herrera et al. | Synthesis and selective anticancer activity of steroidal glycoconjugates | |
| Shamroukh et al. | Anticancer evaluation of some newly synthesized N-nicotinonitrile derivative | |
| EP2460810B1 (en) | Novel flavanone derivative | |
| Liu et al. | Argusides B and C, two new cytotoxic triterpene glycosides from the sea cucumber Bohadschia argus Jaeger | |
| CN114948974B (zh) | 肝素五糖化合物在制备脓毒症药物中的应用 | |
| DK169240B1 (da) | Fluorsubstituerede 4'-demethylepipodophyllotoxinderivater, fremgangsmåde til deres fremstilling samt farmaceutiske præparater indeholdende samme | |
| KR20120050441A (ko) | 호흡기 질환 치료를 위한 약용 탄수화물 | |
| PL212067B1 (pl) | Zastosowanie sulfidów i sulfotlenków glikozylowo heteroarylowych jako związków przeciwwirusowych, zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae | |
| Aoki et al. | Myrmekiosides A and B, novel mono-O-alkyl-diglycosylglycerols reversing tumor cell morphology of ras-transformed cells from a marine sponge of Myrmekioderma sp | |
| CN104610272B (zh) | 环状黄酮或异黄酮类化合物及其用途 | |
| CN107304221B (zh) | 三萜衍生物及其抗埃博拉病毒的用途 | |
| CN103275157B (zh) | 一枝蒿酮酸含杂环和糖的酰胺类衍生物及制备方法和用途 | |
| Tevyashova et al. | Reaction of the antitumor antibiotic olivomycin I with aryl diazonium salts. Synthesis, cytotoxic and antiretroviral potency of 5-aryldiazenyl-6-O-deglycosyl derivatives of olivomycin I | |
| PL211936B1 (pl) | Pochodne urydyny jako związki przeciwwirusowe, zwłaszcza przeciwko wirusom z rodziny Flaviviridae | |
| CN103755762B (zh) | 果同尼皂苷f及其衍生物的中间体、制备方法和用途及果同尼皂苷f衍生物 | |
| CN103275166B (zh) | 地黄叶中两个三萜内酯类化合物在制备抗肿瘤类药物中的应用 | |
| CN107142298A (zh) | 一种细胞周期阻滞剂6bar在人肺癌细胞中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20100131 |