PL199745B1 - Peptyd, gen kodujący ten peptyd, reagent diagnostyczny i zestaw diagnostyczny do wykrywania riketsjozy oraz szczepionka obejmująca ten peptyd - Google Patents
Peptyd, gen kodujący ten peptyd, reagent diagnostyczny i zestaw diagnostyczny do wykrywania riketsjozy oraz szczepionka obejmująca ten peptydInfo
- Publication number
- PL199745B1 PL199745B1 PL343554A PL34355499A PL199745B1 PL 199745 B1 PL199745 B1 PL 199745B1 PL 343554 A PL343554 A PL 343554A PL 34355499 A PL34355499 A PL 34355499A PL 199745 B1 PL199745 B1 PL 199745B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- peptide
- detection
- helvetica
- diagnostic reagent
- diagnostic
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 208000034712 Rickettsia Infections Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 206010061495 Rickettsiosis Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 241001495405 Rickettsia helvetica Species 0.000 claims abstract description 15
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 15
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 9
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 claims description 9
- 208000033220 Rickettsial disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 claims description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 abstract description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 241000606697 Rickettsia prowazekii Species 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 208000031726 Spotted Fever Group Rickettsiosis Diseases 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 201000004284 spotted fever Diseases 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001480843 Ixodes ricinus Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000606695 Rickettsia rickettsii Species 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 3
- 206010039766 scrub typhus Diseases 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- KDELTXNPUXUBMU-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid boric acid Chemical compound OB(O)O.OB(O)O.OB(O)O.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KDELTXNPUXUBMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 2
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 241000606693 Orientia tsutsugamushi Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 241000606699 Rickettsia conorii Species 0.000 description 2
- 206010039207 Rocky Mountain Spotted Fever Diseases 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 208000028104 epidemic louse-borne typhus Diseases 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 206010061393 typhus Diseases 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 4-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=C(Cl)C2=C1 LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 Ala-Ala amino acids Chemical class 0.000 description 1
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GHNDBBVSWOWYII-LPEHRKFASA-N Arg-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O GHNDBBVSWOWYII-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- MYRLSKYSMXNLLA-LAEOZQHASA-N Asn-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MYRLSKYSMXNLLA-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- 241000020089 Atacta Species 0.000 description 1
- 101100228200 Caenorhabditis elegans gly-5 gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000020446 Cardiac disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241001185363 Chlamydiae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000031912 Endemic Flea-Borne Typhus Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- LURCIJSJAKFCRO-QWRGUYRKSA-N Gly-Asn-Tyr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LURCIJSJAKFCRO-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 1
- 241000496319 Leptotrombidium Species 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 101710169972 Menin Proteins 0.000 description 1
- 102100030550 Menin Human genes 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028282 Murine typhus Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 101150063378 OMP gene Proteins 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000003846 Ricinus Nutrition 0.000 description 1
- 241000322381 Ricinus <louse> Species 0.000 description 1
- 241000147135 Rickettsia felis Species 0.000 description 1
- 241001495400 Rickettsia slovaca Species 0.000 description 1
- 241000606714 Rickettsia sp. Species 0.000 description 1
- 241000606726 Rickettsia typhi Species 0.000 description 1
- 201000000860 Secondary syphilis Diseases 0.000 description 1
- 208000032023 Signs and Symptoms Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241001185310 Symbiotes <prokaryote> Species 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N Val-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 108010056243 alanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000037771 disease arising from reactivation of latent virus Diseases 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 1
- 244000000056 intracellular parasite Species 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229940046939 rickettsia prowazekii Drugs 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/29—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Richettsiales (O)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Wynalazek dotyczy nowego peptydu, odczynnika diagnostycznego i zestawu do wykrywania ri- kesjozy, bardziej szczegó lowo do wykrywania przenoszonej przez kleszcze Rickettsia helvetica. Nowy peptyd obejmuje sekwencj e aminokwasow a AAPSGSNVEWRNPDNGNYGYVTPNKTYR z bia lka b lony zewn etrznej 17 kDa. Wynalazek dotyczy te z szczepionki przeciwko riketsjozie obejmuj acej ten peptyd. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest peptyd, gen kodujący ten peptyd, reagent diagnostyczny i zestaw diagnostyczny do wykrywania riketsjozy oraz szczepionka obejmująca ten peptyd przeznaczona do zapobiegania riketsjozie.
Filogenetycznie, życie na ziemi można podzielić na trzy podstawowe grupy albo królestwa, eukariota, eubakterie i archea. Rośliny i organizmy wyższe należą do eukariota, podczas gdy na archea składają się bakterie zaadaptowane do skrajnych warunków otoczenia takich jak gorące źródła, skrajne warunki zasolenia, albo konieczność wykorzystania metanu jako źródła węgla w ich procesach katabolicznych. Pozostała większość bakterii i tak zwanych niebiesko-zielonych alg należy do eubakteria. Kilka z nich (tj. Rickettsiae i Chlamydiae) jest tak wyspecjalizowanych, że są wewnątrzkomórkowymi pasożytami. Stwierdzono w badaniach ewolucji genetycznej, że w dawnych prehistorycznych czasach najbliżsi krewni Rickettsiae rozwinęli się tak, iż stali się pasożytami albo symbiontami żyjącymi wewnątrz innych komórek jako organelle takie jak mitochondria.
Do niedawna uważano, że rodzaj Rickettsiae składa się z trzech grup ściśle wewnątrzkomórkowych bakterii, mianowicie grupy duru (TG), gorączki plamistej (SFG) i duru powodującego chorobę tsutsugamushi (STG). Klasyfikacja na gatunki jest oparta na rozmieszczeniu geograficznym, przenoszących stawonogach, rozmieszczeniu wewnątrzkomórkowym, strukturze osłonek, warunkach hodowli i namnaż ania na embrionach kurczą t i wzorcach serologicznych.
TG obejmują gatunki R. prowazekii i R. typhi. Członkowie TG są przede wszystkim znajdowani w cytoplazmie. Inną typową cechą jest krzyż owa reaktywność serologiczna w teście aglutynacji Weil-Felix z Proteus OX19. Riketsje TG występują rozproszone na całym świecie i są przenoszone na ludzi przez wszy i pchły. Riketsje SFG są przede wszystkim przenoszone przez kleszcze i jak dotąd opisano około 20 różnych gatunków SFG.
Określanie gatunków jako SFG oparto na ich serotypie oznaczanym przez test wiązania dopełniacza, test neutralizacji toksyny u myszy, test krzyżowej odporności u świnek morskich albo test mikroimmunoflourescencji (MIF). Jednakże, różnicowanie serologiczne ostatnio wyizolowanych szczepów jest trudne, ze względu na znaczącą krzyżową reaktywność pomiędzy rozpoznanymi riketsjami SFG.
Trzecia grupa Rickettsiae, grupa duru powodującego chorobę tsutsugamushi składa się jedynie z jednego opisanego gatunku, Orientia tsutsugamushi. Bakterie te występują naturalnie w południowej i poł udniowo-wschodniej Azji i są przenoszone przez larwy roztocza (Leptotrombidium spp.). Ponadto, stwierdzono różnice w strukturze otoczki komórkowej i sekwencji rybosomalnej w porównaniu z innymi grupami.
Wykazano, że siedliskiem riketsji wywołujących gorączkę plamistą są europejskie kleszcze, takie jak R. helvetica w Szwajcarii, R. slovaca w Rosji i R. conorii we Francji.
Stąd oczywiste jest kliniczne znaczenie zakażeń riketsjami, co jest ostatnio podkreślane. Wiele badań wykazało, że objawy i oznaki chorób wywołanych przez riketsje mogą się znacznie różnić.
Jest to udowodnione np. dla nieplamistej gorączki Gór Skalistych, dla której objawy kliniczne są bardzo podobne do występujących w chorobie z Lyme, lecz dla której badania serologiczne wykazały zakażenie R. rickettsii. Innym przykładem, jest badanie nowego czynnika riketsji, „ELB, dla którego ostatecznym rozpoznaniem klinicznym jest dur mysi. Nasilone badania wykazały, że „czynnik ELB jest odrębnym gatunkiem riketsji o proponowanej nazwie R. felis.
Leczenie takich zakażeń jest obecnie prawie wyłącznie skuteczne dzięki antybiotykom i lekom chemioterapeutycznym. Najpopularniejszym problemem związanym z leczeniem antybiotykami jest zaburzenie ekologiczne normalnej flory. Drugim, nawet jeszcze bardziej poważnym problemem, związanym z leczeniem zakażeń bakteryjnych powodowanych przez wolno rosnące bakterie wewnątrzkomórkowe, jest uzyskanie tak wysokiego stężenia leku przez czas wystarczająco długi do zabicia bakterii w stacjonarnej fazie wzrostu.
Obecnymi sposobami leczenia zakażeń riketsjami są terapie antybiotykowe z chloramfenikolem, tetracyklinami i czasami rifampicyliną. Diagnozę zakażenia riketsjami można postawić przez hodowlę organizmów albo przez diagnostykę płynów organizmu od zakażonego osobnika, przy czym drugi sposób jest preferowany ze względu na to, że hodowla riketsji jest zwykle bardzo trudna i niebezpieczna.
Opisane są odczynniki diagnostyczne dla skrajnie patogennych riketsji, nie występujących w Europie, takich jak R. prowazekii (tyfus plamisty przenoszony przez wszy), R. rickettsii (gorączka plamista Gór Skalistych) i Orientia tsutsugamushi (choroba tsutsugamushi). Patrz, na przykład publiPL 199 745 B1 kacja US 7429936, opisująca rekombinowane białko do diagnostyki R. rickettsii. Białko to można również stosować do szczepienia ludzi przeciwko gorączce plamistej Gór Skalistych.
Twórcy niniejszego wynalazku w publikacji Journal of Clinical Microbiology, Jan 1997, str. 243-247 opisali, że 1,7% skandynawskich kleszczy Ixodes ricinus jest pozytywnych w stosunku do DNA riketsji. Wiadomo, że kleszcze są najpopularniejszym rezerwuarem tych bakterii wśród stawonogów oraz nosicielami dla riketsji SFG. Ponadto, nie wiadomo o tym, aby Rickettsiae były czynnikiem endemicznym albo epidemicznym dla ludzi albo zwierząt w Skandynawii.
Gen 16S rRNA z wyizolowanych szczepów został zamplifikowany i zsekwencjonowany, a sekwencja o wielkości 1,380 bp tego genu była porównywana z sekwencjami znanymi dla wcześniej opisanych gatunków riketsji. Wynik wykazywał 100% homologii z R. helvetica.
Gatunki z rodzaju Rickettsia są blisko spokrewnione i genetyczne różnice pomiędzy ich genami 16S rRNA są jedynie rzędu 2%. Na przykład, 11 nukleotydów różni ten izolat od R. conorii, gatunku endemicznego dla południowej Europy i filogenetycznie są one najbliżej spokrewnione z riketsji wywołującej gorączkę plamistą, a ponadto jest to jedyna riketsja znaleziona jak dotąd w I. ricinus. Porównując z R. prowazekii, która jest mniej spokrewniona i należy do grupy duru, szczep ten różni się 25 pozycjami nukleotydowymi.
Wzorzec RFLP dla genu syntetazy cytrynianowej ułatwia rozróżnianie pomiędzy riketsjami. Uzyskany wzorzec RFLP dla nowego szczepu porównywano do tych ze znanych szczepów, i jest on najbardziej podobny do wzorca uzyskiwanego dla SFG, natomiast znaczącą różny od wzorca opisanego dla R. helvetica. Zgodnie z wynikami sekwencjonowania nukleotydów, wykryty gatunek Rickettsia sp. powinien zostać zaklasyfikowany jako riketsja gorączki plamistej (SFG). Ponadto, wzorzec RFLP sugeruje, że szczep powinien zaklasyfikowany jako podtyp R. helvetica.
Twórcy niniejszego wynalazku wskazują, że riketsja znaleziona w kleszczach J. ricinus jest patogenna dla ludzi. Tak więc, istnieje potrzeba diagnostyki i leczenia riketsjozy w Skandynawii.
Celem niniejszego wynalazku było umożliwienie postawienia prawidłowej diagnozy zakażenia wywołanego przez riketsje w Skandynawii, a ponadto dostarczenie skutecznego leczenia zakażonych osobników. Cel ten został osiągnięty w przedstawionych rozwiązaniach według niniejszego wynalazku.
Tak więc, wynalazek dotyczy peptydu zawierającego sekwencję aminokwasową przedstawioną na liście sekwencji jako Id. Sekw. nr 1. Korzystny peptyd jest otrzymany ze źródeł naturalnych albo wytworzony metodami syntetycznymi albo rekombinacyjnymi.
Gen kodujący peptyd według wynalazku obejmujący wszystkie jego warianty wynikające z degeneracji kodu genetycznego również wchodzi w zakres wynalazku.
Ponadto wynalazek dotyczy reagenta diagnostycznego obejmującego peptyd według wynalazku, który jest przeznaczony do wykrywania riketsjozy, korzystnie do wykrywania zakażenia spowodowanego przez Rickettsia helvetica, która wyraża peptyd według wynalazku.
Wynalazek dotyczy również zestawu diagnostycznego, który obejmuje reagent diagnostyczny według wynalazku, który korzystnie jest w postaci roztworu albo jest związany z fazą stałą.
W korzystnym wykonaniu zestaw diagnostyczny obejmuje znakowane przeciwciał o anty Ig przeznaczone do wykrywania ssaczych przeciwciał IgA, IgG albo IgM skierowanych przeciwko antygenowi R. helvetica.
Zestaw według wynalazku można przykładowo stosować w testach typu ELISA, EIA, RIA, IRMA itd.
Korzystny zestaw diagnostyczny przeznaczony jest do wykrywania komórkowej reakcji odpornościowej wobec antygenu R. helvetica. W tym przypadku, zestaw taki może zostać wytworzony przykładowo jako tradycyjny test typu Immuno Spot.
Wynalazek dotyczy również szczepionki obejmującej peptyd według wynalazku, ewentualnie zmieszany lub połączony z adjuwantem, która przeznaczona jest do zapobiegania riketsjozie.
Szczepionkę podaje się, osobnikowi, który tego potrzebuje w odpowiednim adjuwancie w ilości farmakologicznie skutecznej do wywołania odpowiedzi odpornościowej u danego osobnika, która uchroni go przed riketsjozą.
Typowym klinicznym obrazem riketsjozy jest wysoka gorączka, ból głowy i wysypka. Zależnie od tego, który gatunek riketsji wywołuje chorobę obraz kliniczny może również obejmować powiększenie węzłów chłonnych, bóle mięśniowe, bóle stawów i różne postaci zaburzeń neurologicznych, nerkowych i sercowych. Objawy choroby mogą się wahać od łagodnych do znacznych, a czas ich trwania wynosi 2-3 tygodnie. To, że choroba występuje tak rzadko oraz różnorodność objawów komplikuje postawienie właściwej diagnozy. Podobne objawy choroby mogą występować w trakcie trwania innych, nie wywołanych przez riketsje bakteryjnych i wirusowych zakażeń takich jak, posocznica menin4
PL 199 745 B1 gokokowa, odrą, paradur, bakteryjne zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych, kiła wtórna, krętkowica, gorączka nawrotna, mononukleoza zakaźna i różyczka. Jeżeli czas na to pozwala należy rozważyć wszystkie choroby gorączkowe.
Riketsjozy maja również skłonność do stawania się zakażeniami powolnymi, hipotezę tę potwierdzono dla R. prowazekii, za odkrycie czego Henri Nicolle został nagrodzony w 1928 roku Nagrodą Nobla w dziedzinie fizjologii i medycyny. Podobne zakażenia powolne są postulowane dla innych gatunków riketsji (Woddword, 1953, 1997). Takie tlące się zakażenia mogą nawet po wielu latach prowadzić do poważnych następstw. Istnieje tendencja aby izolaty riketsji o nieznanej patogenności uważać za niepatogenne dla ludzi. Jednak w ostatnich latach udowodniono, że wiele takich niepatogennych riketsji powoduje różne choroby, przez co uznano je za patogenne. Hipoteza twórców wynalazku jest taka, że nawet jeżeli pierwotne zakażenie jest łagodne, przez co rzadko lub w ogóle nie zostaje rozpoznane, a ciągle postępuje w kierunku utajonego zakażenia to powoduje poważne następstwa. Dlatego zakażenia takie, jak i organizmy je powodujące powinny być pilnie poddane badaniom.
Testy serologiczne są najprostszymi testami do przeprowadzenia, gdyż surowica może być szybko przesłana do odpowiedniego laboratorium referencyjnego. Im bardziej swoistą reakcję immunogenną można przeprowadzić tym bardziej będzie swoisty przeprowadzony test oraz wystąpi mniej reakcji krzyżowych. Właściwości immunogenne bakterii wynikają przede wszystkim z prezentacji struktur na powierzchni organizmu. Dostępne są dwie grupy takich struktur. 1: Jednymi są białka zewnątrzbłonowe, OMP, i 2: Innymi są LPS (lipopolisacharydy), ponieważ riketsje są bakteriami Gramujemnymi. Podejście oparte o LPS stosowane przez niemal stulecie w teście Weil-Felix jest bardzo nieswoiste. Według wynalazku stosuje się białko OMP wielkości 17 kDa. Gen kodujący to białko amplifikowano parą swoistych starterów w standardowej reakcji PCR. Amplifikowany produkt PCR zsekwencjonowano przez zastosowanie metody terminacji łańcucha z wykorzystaniem dideoksynukleotydów zwanej też metodą Sangera, a wynik pokazano na Id. Sekw. nr 2. Sekwencję poddano translacji na aminokwasy i wybrano swoisty peptyd, odpowiadający 28 aminokwasom od pary zasad 277 do 360. Ten antygenowy peptyd obejmujący 28 aminokwasów można wytworzyć przez oczyszczenie z hodowli gatunków blisko spokrewnionych z Rickettsia helvetica, wyrażających ten peptyd w białku OMP 17 kDa, z rekombinowanych drobnoustrojów z wektorem zawierają cym wprowadzoną sekwencję obejmującą pary zasad 277-360 według Id. Sekw. nr 2 albo jej odmiany, albo za pomocą syntezy chemicznej.
Wynalazek zostanie poniżej dokładniej zilustrowany przez nieograniczające go przykłady, w odniesieniu do załączonej listy sekwencji i figury.
P r z y k ł a d 1: Amplifikacja i sekwencjonowanie genu riketsji
Skonstruowano następującą parę starterów:
17up 5'AAAATTCTAAAAACCAT
17LOW 5'TCAATTCACAACTTGCC
Z kolekcji wolno żyjących kleszczy I. ricinus wyizolowano całkowity DNA po dodaniu 300 μΐ buforu TE o niskiej zawartości soli (10 mM Tris pH 7,4, 1 mM EDTA, 10 mM NaCl), 20 μl 20% soli sodowej siarczanu dodecylu (SDS) i 5 μl 10 mg/ml proteinazy K (Boehringer Mannheim). Mieszaninę inkubowano w 55°C przez godzinę i podgrzano do 95°C przez 10 minut. Przeprowadzono dwukrotną ekstrakcję nasyconym fenolem, raz mieszaniną fenolu z chloroformem, a na koniec raz chloroformem. DNA wytrącono przez dodanie 1/10 objętości 4 M octanu sodu i 3 objętości 99% etanolu przez noc i zebrano przez odwirowanie przy 20000 obrotów na minutę w mikrowirówce. Osad płukano 70% etanolem i suszono pod próżnią, następnie rozpuszczano w 50 μl wody destylowanej i stosowano jako matrycę do PCR.
Amplifikacja PCR.
Startery opisane powyżej zastosowano w warunkach cyklu termicznego 93°C przez 5 minut (93°C, 30 sekund; 52°C, 60 sekund; 72°C, 30 sekund) powtórzonego 35 razy, co dało fragment wielkości około 530 bp, pokrywający kompletny gen, kodujący białko błony zewnętrznej 17 kDa oraz regiony flankujące.
Ogólne warunki chemiczne amplifikacji PCR obejmowały mieszaninę 1U polimerazy DNA Taq (Boehringer Mannheim), 2,5 μ 10x buforu dostarczonego z enzymem, 1 μ 25 mM MgCl2, 2,5 μ 2 mM dNTP, 5 pmoli każdego ze starterów, 1 μl matrycy DNA i podwójnie destylowana woda do 25 μ. Reakcję przeprowadzono w urządzeniu Perkin Elmer 9600 Thermocycler, zaś amplifikowany produkt analizowano na 1,5% żelu agarozowym (Kodak) w 0,5x buforze Tris-boran EDTA (TBE). Jako kontrolę pozyPL 199 745 B1 tywną PCR zastosowano oczyszczony DNA Rickettsia prowazekii. Jako negatywną kontrolę PCR zastosowano bufor traktowany w ten sam sposób jakby zawierał kleszcze.
Główną część sekwencji kodującej tego genu pokazano na Id. Sekw. nr 2 i uzyskano przez bezpośrednie sekwencjonowanie DNA na fazie stałej. Przeprowadzono unieruchomienie biotynylowanych produktów PCR, a następnie rozdzielono nici i przygotowano matrycę, przy użyciu perełek superparamagnetycznych, Dynabeads M-280 Streptavidin (Dynal, Oslo, Norwegia). Sekwencję nukleotydową genu OMP wielkości 17 kDa oznaczono w obu kierunkach przez automatyczne sekwencjonowanie DNA w fazie stałej, przy użyciu systemu ALF (Automated Laser Fluorescence, Pharmacia Biotech, Uppsala, Szwecja).
Sekwencjonowanie przeprowadzono również ręcznie z użyciem 35S-dATP (Amersham) i Sequenacell (USAB, Ohio) według instrukcji producenta.
P r z y k ł a d 2: Konstruowanie antygenowego peptydu riketsji
Teoretyczne obliczenie domen antygenowych przeprowadzono stosując algorytm JamesonWolf w oprogramowaniu DNA Star-Data. Algorytm ten daje wskaźnik antygenowości przez kombinację wartości hydrofilowości (Hoop-Woood H (<2>0,5<1>0<-1>-0,5<-2>)), prawdopodobieństwo powierzchniowe (Emini S (<1>1,0<0>)), giętkość (Karplans-Schultz F (<1>1,0<0>)) i przewidywanie struktury drugorzędowej według Chou-Fasman (CF (1=2, t=1, 0) oraz Garnier-Robson (GR (1=2, t = 1, 0,3) następującym wzorem:
A = 0,3H + 1,15S + 0,15F + 0,2CF + 0,2GR
Wykorzystując powyższą metodę obliczeń uzyskano wykres, patrz fig. 1, który wskazywał domniemane miejsca antygenowe w miejscach reszt ocenionych najwyżej. Funkcja rozszerzająca szczyt dodawała kaskadę 20%, 40%, 60%, 80%, 100%, 80%, 60%, 40%, 20% dziewięciu reszt otaczających każde lokalne maksimum.
Na wykresie wskaźnika antygenowości, sekwencja peptydowa według wynalazku odpowiadała regionowi aminokwasów 93-120, z trzema wysokimi szczytami wyrażającymi najwyższą antygenowość. Peptyd ten o 28 aminokwasach ujawniono na Id. Sekw. nr 1.
Metodą potwierdzającą wizualizację antygenowości jest badanie metodą Western blot. 5 μΐ oczyszczonych drobnoustrojów rozpuszczono w roztworze Laemmliego (4% SDS, 10% 2-merkaptoetanol, 0,5% błękit bromofenolowy, 0,125 M Tris-HCl (pH 6,8), 25% gliceryna) w temperaturze pokojowej, po czym przeprowadzono SDS-PAGE na 7,5% żelu rozdzielającym i 3,9 żelu kondensującym. Żel rozwinięto w komorze Mini-Protein II (Bio-Rad) przy 10 mA w łaźni lodowej, po czym prążki białka wizualizowano przez barwienie błękitem Coomassie. W celu określenia ciężaru cząsteczkowego prążków w trakcie elektroforezy zastosowano standard z wysokiego zakresu ciężarów cząsteczkowych (Bio-Rad). Inny, identyczny żel przeniesiono na nitrocelulozę w urządzeniu Trans-blot (Bio-Rad) stosując 50 V, przez godzinę w łaźni lodowej. Nieswoiste miejsca wiązania zablokowano przez noc 5% odtłuszczonym mlekiem w proszku w TBS (10 mM Tris-HCl (pH 7,5), 250 mM NaCl, 0,01% Merthiolate). Po trzech 10-minutowych płukaniach w TBS, na filtr nitrocelulozowy nałożono surowicę uzyskaną od oznaczonego od pacjenta, rozcieńczoną 1/100 w 3% odtłuszczonym mleku w proszku w TBS i wytrząsano przez 2 godziny. Reagujące przeciwciała wykrywano przy użyciu rozcieńczenia 1/200 przeciwciał przeciwko ludzkim łańcuchom gamma (Bio Merieux, Marcy lEtoile, Francja) w 3% odtłuszczonym mleku w proszku w TBS. Po trzech dalszych płukaniach w TBS, związaną peroksydazę wykrywano roztworem zawierającym 0,015% 4-chloro-1-naftol, 0,015% nadtlenek wodoru i 16% metanol w TBS. Gdy tylko prążki stały się widoczne, reakcję przerwano przez wielokrotne płukanie w wodzie destylowanej. W jej wyniku pojawił się prążek o ciężarze odpowiadającym 17 kDa.
P r z y k ł a d 3: Zastosowanie diagnostyczne peptydu według wynalazku
Reagent diagnostyczny obejmujący antygenową część OMP można zastosować do wykrywania/diagnozowania/oceny ilościowej reakcji odpornościowej u ludzi i innych ssaków po kontakcie z bakterią blisko spokrewnioną z R. helvetica, która wyraża białko obejmujące peptyd według wynalazku. Diagnostykę można przeprowadzać różnymi sposobami, przykładowo: immunofluorescencją pośrednią, enzymatycznym testem immunologicznym, radioaktywnym testem immunologicznym, immunodyfuzją, badaniem metodą Western blot (patrz, przykład 2).
Dwa aminokwasy Ala-Ala na początku peptydu według wynalazku ułatwiają jego sprzęganie z fazą stałą. Te dwa aminokwasy hydrofobowe zmniejszają wiązanie nieswoiste, a w ten sposób, polepszają wrażliwość testów diagnostycznych.
PL 199 745 B1
Surowica od zakażonego pacjenta dawała wyraźną reakcję serologiczną z zestawem diagnostycznym według wynalazku, co wskazuje, że R. helvetica spowodowała zakażenie. Wynik potwierdzono przez PCR i immunohistochemię.
Wykazano również, że surowica od tego samego pacjenta reaguje z peptydem według wynalazku w doświadczeniach immunodyfuzyjnych.
Możliwe jest również badanie reakcji komórkowej wykorzystując, przykładowo, test typu Immuno-spot.
P r z y k ł a d 4: Zastosowanie terapeutyczne peptydu według wynalazku
Antygenową część OMP można również zastosować zmieszaną albo sprzęgniętą z adiuwantem (przykładowo, Freunda albo I-scom) w celu zastosowania jako szczepionka. Szczepionkę można zastosować profilaktycznie albo terapeutycznie.
Lista sekwencji
Informacja dla Id. Sekw. nr 2:
Długość: 454 bp
| Rodzaj: DNA | |||||||||||
| Ala Ala Pro | Ser | Gly 5 | Ser | Asn | Val | Glu | Trp 10 | Arg | Asn | Pro Asp | Asn 15 |
| Gly Asn Tyr | Gly | Tyr 20 | Val | Thr | Pro | Asn | Lys 25 | Thr | Tyr | Arg | |
| Informacja | dla | Id. | Sekw | . nr | 1: |
Długość: 28 aminokwasów
| Rodzaj: aminokwas | ||||||||||||
| ATG | ATA CTA TTA | TCT | AAA | ATT | ATG | ATT | ATA 30 | GCT | CTT | GCA | GCT | TCT |
| ATG | TTA CAA GCC | TGT 60 | AAC | GGT | CCG | GGT | GGT | ATG | AAT | AAA | CAA | GGT 90 |
| ACA | GGA ACA CTT | CTT | GGC | GGT | GCC | GGC | GGT | GCA | TTA | CTT | GGT | TCT |
120
| CAA | TTT | GGT | AAA | GGT AAA 150 | GGG | CAA | CTT | GTC GGA | GTA | GGT | GTA | GGT 180 |
| GCA | TTA | CTT | GGA | GCA GTT | CTT | GGC | GGG | CAA ATC 210 | GTT | GCA | GGT | ATG |
| GAT | GAG | CAG | GAT | AGA AGA 240 | CTT | GCA | GAG | CTT ACC | TCA | CAG | AGA | GCT 270 |
| TTA | GAA | GCA | GCT | CCT AGC | GGT | AGT | AAC | GTA GAG 300 | TGG | CGT | AAT | CCG |
| GAT | AAC | GGC | AAT | TAC GGT 330 | TAC | GTA | ACA | CCT AAT | AAA | ACT | TAT | AGA 360 |
| AAT | AGC | ACT | GGT | CAA TAT | TGC | CGT | GAG | TAC ACT 390 | CAA | ACA | GTT | GTA |
| ATA | GGC | GGA | ΆΆΑ | CAA CAA | AAA | GCA | TAC | GGT AAT | GCA | TGC | CGC | CAA |
420 450
CCT G
Claims (10)
- Zastrzeżenia patentowe1. Peptyd, zawierają cy sekwencję aminokwasową przedstawioną na Id. Sekw. nr 1.
- 2. Peptyd według zastrz. 1, znamienny tym, że jest otrzymany ze ź ródeł naturalnych albo wytworzony metodami syntetycznymi albo rekombinacyjnymi.
- 3. Gen kodują cy peptyd okreś lony w zastrz. 1 albo 2, obejmują cy wszystkie jego warianty wynikające z degeneracji kodu genetycznego.
- 4. Reagent diagnostyczny obejmujący peptyd okreś lony w zastrz. 1 albo 2, przeznaczony do wykrywania riketsjozy.
- 5. Reagent diagnostyczny według zastrz. 4, znamienny tym, że przeznaczony jest do wykrywania zakażenia spowodowanego Rickettsia helvetica, która wyraża peptyd określony w zastrz. 1.
- 6. Zestaw diagnostyczny, znamienny tym, że obejmuje reagent diagnostyczny okreś lony w zastrz. 4-5.
- 7. Zestaw diagnostyczny według zastrz. 6, znamienny tym, ż e reagent jest w postaci roztworu albo związany jest z fazą stałą.
- 8. Zestaw diagnostyczny według zastrz. 6-7, znamienny tym, ż e obejmuje znakowane przeciwciało anty Ig przeznaczone do wykrywania ssaczych przeciwciał IgA, IgG albo IgM skierowanych przeciwko antygenowi R. helvetica.
- 9. Zestaw diagnostyczny wedł ug zastrz. 6-7, znamienny tym, ż e przeznaczony jest do wykrywania komórkowej reakcji odpornościowej wobec antygenu R. helvetica.
- 10. Szczepionka obejmująca peptyd określony w zastrz. 1 albo 2, ewentualnie zmieszany lub połączony z adiuwantem przeznaczona do zapobiegania riketsjozie.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9800504A SE515216C2 (sv) | 1998-02-20 | 1998-02-20 | Ny peptid, diagnostiskt reagens och kit för detektion av rickettsioser |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL343554A1 PL343554A1 (en) | 2001-08-27 |
| PL199745B1 true PL199745B1 (pl) | 2008-10-31 |
Family
ID=20410241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL343554A PL199745B1 (pl) | 1998-02-20 | 1999-02-19 | Peptyd, gen kodujący ten peptyd, reagent diagnostyczny i zestaw diagnostyczny do wykrywania riketsjozy oraz szczepionka obejmująca ten peptyd |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1054895B1 (pl) |
| AT (1) | ATE346091T1 (pl) |
| AU (1) | AU3283199A (pl) |
| DE (1) | DE69934098T2 (pl) |
| DK (1) | DK1054895T3 (pl) |
| EE (1) | EE05139B1 (pl) |
| NO (1) | NO20004168L (pl) |
| PL (1) | PL199745B1 (pl) |
| SE (1) | SE515216C2 (pl) |
| WO (1) | WO1999042479A1 (pl) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO329958B1 (no) * | 1999-09-17 | 2011-01-31 | Pfizer Canada Inc | Anvendelse av en immunogen mengde av OspA-lipoprotein fra Piscirickettsia salmonis, OspA-antigen, og immunogene promiskuose TCE i et OspA-kimaert fusjonsprotein, for fremstilling av medikamenter, og immunologisk in vitro-fremgangsmate for deteksjon av humoralt antistoff mot OspA eller P. salmonis. |
| FR2802213B1 (fr) * | 1999-12-14 | 2003-11-28 | Univ Aix Marseille Ii | Bacterie "rickettsia pulicis" methode d'isolement en culture et de diagnostic serologique |
| WO2006133434A2 (en) * | 2005-06-08 | 2006-12-14 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Membranolytic polypeptides and methods of use |
| WO2007113009A2 (en) * | 2006-04-04 | 2007-10-11 | Medica Medizinische Laboratorien Dr.F. Käppeli Ag | Ompa polypeptides of rickettsia helvetica, polynucleotides encoding therefor and use in the detection of rickettsia helvetica |
| WO2013036187A1 (en) * | 2011-09-07 | 2013-03-14 | Alpha Biotech Ab | Determination of bacterial infections of the genus rickettsia and possibly borrelia, in patients exhibiting symptoms of disease and being blood donors |
| SE1950251A1 (en) * | 2019-02-27 | 2020-08-28 | Alpha Biotech Ab | Rickettsia assay |
| CN114231513B (zh) * | 2022-02-23 | 2022-05-10 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种可抑制蛋白酶体psmb5亚基活性的短肽及其在抗立克次体感染中的应用 |
-
1998
- 1998-02-20 SE SE9800504A patent/SE515216C2/sv unknown
-
1999
- 1999-02-19 AU AU32831/99A patent/AU3283199A/en not_active Abandoned
- 1999-02-19 EP EP99934287A patent/EP1054895B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-19 WO PCT/SE1999/000230 patent/WO1999042479A1/en not_active Ceased
- 1999-02-19 DK DK99934287T patent/DK1054895T3/da active
- 1999-02-19 AT AT99934287T patent/ATE346091T1/de active
- 1999-02-19 EE EEP200000478A patent/EE05139B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-02-19 DE DE69934098T patent/DE69934098T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-19 PL PL343554A patent/PL199745B1/pl unknown
-
2000
- 2000-08-21 NO NO20004168A patent/NO20004168L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EE05139B1 (et) | 2009-02-16 |
| DE69934098D1 (de) | 2007-01-04 |
| AU3283199A (en) | 1999-09-06 |
| NO20004168D0 (no) | 2000-08-21 |
| PL343554A1 (en) | 2001-08-27 |
| ATE346091T1 (de) | 2006-12-15 |
| EP1054895A1 (en) | 2000-11-29 |
| SE515216C2 (sv) | 2001-07-02 |
| EE200000478A (et) | 2002-02-15 |
| NO20004168L (no) | 2000-08-21 |
| DE69934098T2 (de) | 2007-06-06 |
| SE9800504D0 (sv) | 1998-02-20 |
| DK1054895T3 (da) | 2007-04-02 |
| WO1999042479A1 (en) | 1999-08-26 |
| SE9800504L (sv) | 1999-08-21 |
| EP1054895B1 (en) | 2006-11-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2092560T5 (es) | Proteinas inmunologicamente activas de borrelia burgdorferi, estuches de ensayo relacionados y vacuna. | |
| Oaks et al. | Antigenic and genetic relatedness of eight Rickettsia tsutsugamushi antigens | |
| JPH08510120A (ja) | ヘリコバクター感染に対する免疫性組成物、該組成物に用いられるポリペプチドおよび該ポリペプチドをコードする核酸配列 | |
| US7416852B2 (en) | Identification of Porphyromonas gingivalis virulence polynucleotides for diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases | |
| WO2001004317A1 (en) | Ompa gene for an outer membrane protein of riemerella anatipestifer and methods of use | |
| WO1999000413A1 (en) | Surface antigens and proteins useful in compositions for the diagnosis and prevention of lyme disease | |
| US5977339A (en) | Methods and compositions for diagnosing lyme disease | |
| PL199745B1 (pl) | Peptyd, gen kodujący ten peptyd, reagent diagnostyczny i zestaw diagnostyczny do wykrywania riketsjozy oraz szczepionka obejmująca ten peptyd | |
| JP2001517091A (ja) | Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉについての抗原性組成物および検出方法 | |
| US8216594B2 (en) | Proteins with repetitive Bacterial-Ig-like (Big) domains present in Leptospira species | |
| Xu et al. | Characterization of and application of monoclonal antibodies against Rickettsia africae, a newly recognized species of spotted fever group rickettsia | |
| EP0575348A1 (en) | FLAGELLA-LESS $i(BORRELIA) | |
| ES2203704T3 (es) | Proteinas de membrana de leptospira. | |
| WO1994020536A1 (en) | Methods, compositions, and kits for diagnosing lyme disease | |
| MX2010009516A (es) | Secuencias novedosas de brachyspira, composiciones inmunogenicas, metodos para la preparacion y usos de las mismas. | |
| WO1998030699A1 (fr) | Polynucleotide codant pour un polypeptide de 27 kd de mycobacteries appartenant au complexe de mycobacterium tuberculosis, application au diagnostic et a la prevention de la tuberculose | |
| US20090068218A1 (en) | Antigens for Vaccination Against and Detection of Mycoplasma Suis | |
| EP0915977A1 (en) | B. burgdorferi polypeptides expressed in vivo | |
| IE990173A1 (en) | Vaccine against Lyme Disease |